WO2018021979A3 - Cassette d'expression d'adn portant un gène codant une chaîne légère d'entérokinase humaine, souche pichia pastoris comprenant ladite cassette d'adn, et son procédé de culture - Google Patents

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Abstract

L'invention concerne une cassette d'expression d'ADN constituée d'au moins la région promotrice d'une levure, après laquelle la séquence nucléotidique codant le signal de sécrétion est liée de manière fonctionnelle, la séquence nucléotidique codant un site approprié pour le traitement protéolytique de coupure du signal de sécrétion. En outre, la cassette d'expression d'ADN porte, après le signal de sécrétion, une séquence nucléotidique codant la chaîne légère de l'entérokinase humaine liée de manière fonctionnelle après le signal de sécrétion, comportant 6 histidines situées après l'extrémité C-terminale du gène de l'entérokinase. Ladite cassette d'expression d'ADN est intégrée dans le génome de la levure Pichia pastoris. L'invention concerne également le procédé de culture de ladite levure Pichia pastoris produisant l'entérokinase humaine recombinée. Le procédé de culture est basé sur la culture en deux phases dans le fermenteur : lors de la première phase, les cellules sont cultivées à un taux spécifique élevé de croissance de biomasse, lorsque la biomasse augmente de manière significative, et l'entérokinase ne s'accumule pas dans le milieu de culture. Cette première phase est immédiatement suivie par la seconde phase du procédé de culture : celle-ci est effectuée à un taux spécifique de croissance de biomasse plus faible, qui est représenté par une croissance minimale de la biomasse, mais en revanche, l'entérokinase est produite dans le milieu de culture et s'y accumule.
PCT/SK2017/050005 2016-07-29 2017-07-27 Cassette d'expression d'adn portant un gène codant une chaîne légère d'entérokinase humaine, souche pichia pastoris comprenant ladite cassette d'adn, et son procédé de culture WO2018021979A2 (fr)

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