WO2017214822A1 - 一种用于单细胞凝胶电泳的加样板 - Google Patents
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Abstract
一种用于单细胞凝胶电泳的加样板，由加样板本体及纵向深入加样板本体的加样孔组成。该加样板为开封后一次性使用，无需按照传统的单细胞凝胶电泳的操作流程对载玻片进行清洗和泡酸、泡酒精，并且极大地降低图像的背景；借助加样孔的设计，可以将传统的单细胞凝胶电泳实验过程中的铺3层胶缩减为1层，减少所需的操作步骤，很好地节省了研究人员的时间并减轻了其负担；另外，该加样板还可以很好地防止脱胶现象的出现。综上，该加样板可以大幅降低实验人员进行单细胞凝胶电泳的复杂程度，节省实验时间，同时还可以产生背景更低的实验结果，提升实验的质量。
Description
一种用于单细胞凝胶电泳的加样板
技术领域
[0001] 本发明属生物技术领域， 具体的涉及一种用于单细胞凝胶电泳的加样板。
背景技术
[0002] 单细胞凝胶电泳 (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE)， 又称彗星试验 (comet assay), 是近年来发展起来的一种操作简便、 快速、 敏感性高的检测单个哺乳动 物细胞 DNA损伤和修复的技术。 该技术通过采用碱性电泳并结合浪化乙锭 （EB) 染色显示遇碱不稳定和明显断裂的 DNA。
[0003] 在碱性条件下， DNA双链打幵， 单链断裂的 DNA断片即可释放出来。 在碱性 条件下电泳， 带负电荷的 DNA向正极迁移， 断裂下来的 DNA单链断片则迁移得 更远。 断裂的 DNA碎片因携带负电荷向正极移动， 未断裂的 DNA在原位不动， 经荧光染料染色后， 核在原位形成一个明亮的头部， DNA碎片形成尾部， 似彗 星状。 此外， 碱性条件还可以促使 RNA降解， 从而防止 RNA的干扰， 因而能够 进行 DNA单、 双链损伤的检测， 灵敏度大为提高。 尾长和尾部荧光强度与 DNA 链的断裂频率呈正相关， 分析尾长、 密度、 面积等指标， 可知 DNA损伤的程度 。 该技术不仅可以检测 DNA单、 双链断裂， 还可用来检测碱性不稳定位点 (一些 只在碱性条件下才表现出来的 DNA损伤)、 DNA交联和不完全切除修复位点等。 技术问题
[0004] 单细胞凝胶电泳技术发展多年， 已形成稳定的实验流程和体系： 首先， 需要将 作为基底的载玻片进行清洗和酒精浸泡， 尽可能降低实验的背景； 其次， 需要 在载玻片上铺上三层浓度不同的琼脂糖凝胶， 而这其中只有一层是含有待测细 胞的； 接着， 对细胞样品进行裂解以及后续的电泳； 最后进行实验结果的拍照 和分析。 这些过程需要实验人员进行精细的操作和漫长的等待， 耗费较多的吋 间和人力物力， 且导致实验成功实施的难度加大。 许多实验人员都期盼着能解 决上述问题的单细胞凝胶电泳技术出现。
问题的解决方案
技术解决方案
[0005] 本发明提供一种用于单细胞凝胶电泳的加样板， 属于一次性使用的耗材， 可以 减少单细胞凝胶电泳的常规实验过程中的大量步骤， 减少人力物力财力的投入 ， 并提升实验的效率和稳定性。
[0006] 本发明是通过以下的技术方案实现的：
[0007] 一种用于单细胞凝胶电泳的加样板， 包括加样板本体， 所述加样板本体形状为 长方体， 所用材料为光学透明的聚苯乙烯 （PS) 。
[0008] 所述加样孔为圆柱形， 纵向深入加样板本体中， 具有幵口的上端和由孔底部覆 盖的下端。
[0009] 在一个实施例中， 所述加样孔的高度为 1毫米， 下端直径为 5毫米。
[0010] 在一个实施例中， 所述的单细胞凝胶电泳加样板本体的长度为 87.5毫米， 宽度 为 57.5毫米， 厚度为 0.5毫米。
[0011] 在一个实施例中， 靠近加样板本体长边和靠近宽边的加样孔与长边 /宽边的距 离为 0毫米。
[0012] 在一个实施例中， 所述加样板本体上设有的加样孔数为 96个， 并排布成 8列， 每列设置 12个孔。
发明的有益效果
有益效果
[0013] 借助本发明所提供的一种用于单细胞凝胶电泳的加样板， 实验人员可直接使用 ， 无需进行清洗和酒精浸泡等步骤； 在铺胶吋， 仅需铺一层胶即可进行后续的 检测； 在裂解和电泳吋， 该加样板能很好地固定凝胶， 防止其脱落。 综上， 本 发明可大幅减少单细胞凝胶电泳所需的步骤和吋间， 极大地减轻实验人员的负 担并节省宝贵的吋间和资金。 。
对附图的简要说明
附图说明
[0014] 图 1是本发明的整体示意图。
[0015] 图 2是所述加样孔的结构图。
[0016] 图 3是使用本发明与传统方法进行单细胞凝胶电泳的结果图。 其中， a.应用本
发明进行试验； b.应用传统方法进行实验。
实施该发明的最佳实施例
本发明的最佳实施方式
[0017] 以下结合附图， 对本发明做进一步说明。
[0018] 如图 1所示的单细胞凝胶电泳的加样板， 包括本体 10和加样孔 20。 所述加样板 本体形状为长方体， 所用材料为光学透明的聚苯乙烯 （PS) 。 如图 2所示， 所述 加样孔为圆柱形， 纵向深入加样板本体中， 具有幵口的上端和由孔底部覆盖的 下端。
[0019] 本实施方式中， 所述的单细胞凝胶电泳加样板本体的长度为 87.5毫米， 宽度为 5
7.5毫米， 厚度为 0.5毫米。
[0020] 本实施方式中， 靠近加样板本体长边和靠近宽边的加样孔与长边 /宽边的距离 为 0毫米。
[0021] 本实施方式中， 所述加样板本体上设有的加样孔数为 96个， 并排布成 8列， 每 列设置 12个孔。
[0022] 以下为本发明的一种实施方式：
[0023] 单细胞凝胶电泳的加样板实施例：
[0024] 分别通过常规的实验方法和利用单细胞凝胶电泳的加样板进行单细胞凝胶电泳
， 所有的试剂除特别标注来源的外， 均购自市场。
[0025] 一、 常规的单细胞凝胶电泳实验
[0026] 1、 玻片处理
[0027] ①将玻片放入肥皂或洗衣粉水中煮沸 20分钟。
[0028] ②用热水将肥皂等污物洗去， 再用自来水反复冲洗， 最后再用蒸馏水冲洗 3
〜5次。 必要吋再置 95%乙醇中浸泡 1小吋， 然后擦干或烘干备用。 新玻片常有 游离碱质， 因此应用清洁液或 10%盐酸浸泡 24小吋， 然后分别用自来水及蒸馏 水彻底洗涤。
[0029] ③用无水乙醇提前浸泡磨砂载玻片和盖玻片过夜， 以减少脱胶的问题。
[0030] 2、 凝胶制片
[0031] ①玻片经 45°C水浴后， 在磨砂面上滴加 50 μί 0.5%〜1.0%正常熔点琼脂糖， 完
成第一层胶的铺设。
[0032] ②取 300000/mL的细胞悬液， 以体积比为 1 : 9的比例与预热到 37°C的 0.5%低熔 点琼脂糖混匀， 取 50 μΐ加到第 1层胶上， 完成第二层胶的铺设。
[0033] ③以 0.5%低熔点琼脂糖覆盖中层细胞， 完成第三层胶的铺设。
[0034] 3、 细胞裂解： 将细胞 "三明治"载玻片浸入新配制的预冷 4°C的裂解液中， 保持 4°C 1-2 h。
[0035] 4、 DNA解旋
[0036] 细胞裂解后， 将载玻片置于水平电泳槽内， 用新配制的碱性电泳液盖过胶面约
2〜3mm， 加盖避光， 置于 4°C 20〜40min， 使 DNA充分解旋。
[0037] 5、 电泳
[0038] DNA解旋结束后， 通电电泳。 电泳条件为 25V和 300mA， 电泳 10〜30min。
[0039] 6、 中和、 染色与结果观察
[0040] 二、 利用单细胞凝胶电泳的加样板进行单细胞凝胶电泳
[0041] 1、 凝胶制片
[0042] 取 650000/mL的细胞悬液， 以体积比为 1 : 9的比例与预热到 37°C的 0.5%低熔点 琼脂糖混匀， 然后向单细胞凝胶电泳的加样板的每个加样孔中加入 2 的低熔点 琼脂糖细胞液， 用刮板将每个孔多余的琼脂糖细胞液刮到两孔之间的空白处， 使加样孔内的液面尽量保持平整， 然后将加样板置于 4°C 8-10 min以使琼脂糖凝 固。
[0043] 2、 细胞裂解： 将加样板浸入新配制的预冷 4°C的裂解液中， 保持 4°C l-2 h。
[0044] 3、 DNA解旋
[0045] 细胞裂解后， 将加样板置于水平电泳槽内， 用新配制的碱性电泳液盖过胶面约
2〜3mm， 加盖避光， 置于 4°C 20〜40min， 使 DNA充分解旋。
[0046] 4、 电泳
[0047] DNA解旋结束后， 通电电泳。 电泳条件为 25V和 300mA， 电泳 10〜30min。
[0048] 5、 中和、 染色与结果观察
[0049] 三、 两种实验方法所获得的结果
[0050] 两种实验方法的结果如附图 3a和图 3b所示， 可以看到， 利用单细胞凝胶电泳的
加样板几乎看不到任何背景光的存在， 而传统的载玻片则因清洗的干净程度不 同而有不同程度的背景光； 细胞的电泳结果方面则无明显差异。 由此可以说明 ， 利用单细胞凝胶电泳的加样板进行的单细胞凝胶电泳的效果与传统的单细胞 凝胶电泳实验操作相比， 操作简单， 节省吋间且获得的实验结果更好。
[0051] 以上显示和描述了本发明的基本原理、 主要特征和本发明的优点。 本行业的技 术人员应该了解， 本发明不受上述实施例的限制， 上述实施例和说明书中描述 的只是说明本发明的原理， 在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有 各种变化和改进， 这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。 本发明要 求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
工业实用性
[0052] 借助本发明所提供的一种用于单细胞凝胶电泳的加样板， 实验人员可直接使用 ， 无需进行清洗和酒精浸泡等步骤； 在铺胶吋， 仅需铺一层胶即可进行后续的 检测； 在裂解和电泳吋， 该加样板能很好地固定凝胶， 防止其脱落。 综上， 本 发明可大幅减少单细胞凝胶电泳所需的步骤和吋间， 极大地减轻实验人员的负 担并节省宝贵的吋间和资金。
Claims
[权利要求 1] 一种用于单细胞凝胶电泳的加样板， 包括加样板本体， 所述加样板本 体形状为长方体， 所用材料为光学透明的聚苯乙烯 （PS) 。
[权利要求 2] 所述加样孔为圆柱形， 纵向深入加样板本体中， 具有幵口的上端和由 孔底部覆盖的下端。
[权利要求 3] 根据权利要求 1所述的单细胞凝胶电泳的加样板， 其特征在于加样板 本体的长度为 87.5毫米， 宽度为 57.5毫米， 厚度为 0.5毫米。
[权利要求 4] 根据权利要求 1所述的单细胞凝胶电泳的加样板， 其特征在于靠近长 边和靠近宽边的加样孔与长边 /宽边的距离为 0毫米。
[权利要求 5] 根据权利要求 1所述的单细胞凝胶电泳的加样板， 其特征在于加样板 上设有的加样孔数为 96个， 并排布成 8列， 每列设置 12个孔。
[权利要求 6] 根据权利要求 2所述的加样孔， 其特征在于加样孔的高度为 0.1毫米， 下端直径为 5毫米。
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| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
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| NENP | Non-entry into the national phase |
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