WO2017097756A1 - Stereo-isomere de la bromadiolone,composition et appat rodonticide le comprenant et procede de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles - Google Patents

Stereo-isomere de la bromadiolone,composition et appat rodonticide le comprenant et procede de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles Download PDF

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WO2017097756A1
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bromadiolone
enantiomer
composition
configuration
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Hervé CARUEL
Etienne Benoit
Isabelle FOUREL
Virginie LATTARD
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Liphatech
Institut Enseignement Superieur Et Recherche En Alimentation Sante Animale Sciences Agronomiques Et Environnement (Vet Agro Sup)
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    • A01N25/004—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing a foodstuff as carrier or diluent, i.e. baits rodenticidal
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    • C07B2200/07—Optical isomers

Definitions

  • the present invention relates to a bromadiolone configuration stereoisomer, a composition and a rodenticide bait comprising such a bromadiolone configuration stereoisomer and a method for controlling deleterious target rodents.
  • the invention thus relates to the technical field of the fight against target rodent pest populations.
  • bromadiolone is a second generation anticoagulant acting at a single dose.
  • a bait comprising bromadiolone is also known, the proportion of bromadiolone in the bait being 50 ppm.
  • Such bait is likely to be consumed by animals other than harmful target rodents when made available to harmful target rodents. It can be consumed directly (primary consumption) by pets or pets. It can also be accidentally consumed by humans. Such consumption may produce poisoning in these pets, pets, or humans that can be lethal.
  • a fraction of the bromadiolone from these rodenticide baits can be ingested (secondary consumption) by animals - particularly by weakened target rodent predators - birds that have consumed such rodenticide bait or by dead rodenticide scavenging animals. have consumed such rodenticide bait.
  • This secondary consumption is likely to eventually lead to the death of these predatory animals or scavengers that may be animals - especially birds - belonging to protected species.
  • the invention therefore aims to overcome these disadvantages by proposing a configuration stereoisomer of bromadiolone, a composition and a rodenticide bait comprising such a stereoisomer of configuration of bromadiolone and a method of controlling harmful rodent rodents which are at the same time effective in controlling target rodent pest populations and which also limit the risk of poisoning non-target animals - especially domestic animals , pets or humans - accidentally consuming such rodenticide bait.
  • the aim of the invention is to overcome these drawbacks by proposing a configuration stereoisomer of bromadiolone, a composition and a rodenticide bait comprising such a bromadiolone configuration stereoisomer and a method for controlling harmful target rodents which are in At the same time, they are effective in controlling target rodent pest populations and also limit the risk of secondary poisoning of domestic animals (pets or farm animals) or wild animals-for example, foxes or rodent predatory birds. impaired harmful targets that have consumed rodenticide bait or dead target poisonous rodent scavengers.
  • the invention also aims at providing a configuration stereoisomer of bromadiolone, a composition and a rodenticide bait comprising such a bromadiolone configuration stereoisomer and a method for controlling harmful target rodents whose implementation is in accordance with the rules of good practice - especially with respect to the protection of birds, and especially raptors.
  • the invention also provides a bromadiolone configuration stereoisomer, a composition and a rodenticide bait comprising such a bromadiolone configuration stereoisomer and a method of controlling harmful target rodents that are environmentally friendly, human health and non-target animals-especially birds, especially raptors-.
  • the invention also aims at providing a configuration stereoisomer of bromadiolone, a composition and a rodenticide bait comprising such a bromadiolone configuration stereoisomer and a a method of controlling harmful target rodents that are likely to be used to control target rodents that are resistant to known baits for controlling target rodent pests.
  • the invention therefore aims to propose an alternative to known rodenticide baits.
  • the invention relates to a configuration stereoisomer, referred to as the enantiomer E 3 , of bromadiolone having, by chromatographic analysis, a bromadiolone composition comprising four stereoisomers of bromadiolone configuration carried out under the conditions described above. after, a retention time t 3 of value such that ti ⁇ t 2 ⁇ t 3 ⁇ t 4 ; l5 t t 2 and t 4 is the time of stereoisomers retention of configuration of the enantiomer of said separate bromadiolone E 3, said analysis being performed at a temperature of 27.3 ° C and under the following conditions:
  • liquid mobile phase a mixture formed of acetonitrile (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B), with a volume ratio A / B of 80/20; and with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 mL / min;
  • bromadiolone designates the compound 3- [3- (4'-bromo [1,1'-biphenyl] -4-yl) -3-hydroxy-1-phenylpropyl] -4-hydroxy-2H-1- benzopyran-2-one or 3- [3- [4- (4-bromophenyl) phenyl] -3-hydroxy-1-phenylpropyl] -2-hydroxychromen-4-one of formula (I) below:
  • Stepoisomers means isomers of the same semi-developed formula, but whose relative position of atoms differs in space.
  • configuration stereo-isomers denotes stereoisomers whose conversion of these configuration stereoisomers into one another requires a rupture / reformation of an interatomic covalent bond.
  • configuration stereoisomers refers to stereoisomers that are not conformational isomers (or “rotamers”), whose conversion from one to the other of the conformational isomers is accompanied only by a rotation of a part of the molecule along the axis of a bond ⁇ (sigma) formed by axial overlap of orbitals);
  • the term "quantity" means a molar amount, a mass quantity or a volume quantity. The proportions are therefore proportions of a molar amount relative to a molar amount, of a mass quantity relative to a mass quantity, or of a volume quantity referred to a volume quantity;
  • HPLC high pressure liquid chromatography
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • retention time designates the duration, measured at the peak of the chromatogram peak, during which a compound is retained on a chromatography column.
  • the invention therefore relates to said enantiomer E 3 in the isolated state and which has the property of being elutable, under the conditions of chromatography described above, the third compared to the four configuration stereoisomers of bromadiolone.
  • the inventors have observed that the analysis of bromadiolone by high pressure liquid chromatography under the conditions described above reveals four signals or peaks corresponding to four compounds of the same chemical formula developed and corresponding to the formula (I) of bromadiolone .
  • Two of the detected signals correspond to one of the diastereoisomers of bromadiolone, the other two signals corresponding to the other diastereoisomer of bromadiolone.
  • One of the two diastereoisomers of bromadiolone is a bromadiolone configuration stereoisomer in which carbons 1 and 3 of the 3-hydroxy-1-phenylpropyl group are of identical absolute configurations.
  • the other of the two diastereoisomers of bromadiolone is a bromadiolone configuration stereoisomer in which carbons 1 and 3 of the 3-hydroxy-1-phenylpropyl group are of distinct absolute configurations, said absolute configurations being determined according to the sequential rules. of priority and the nomenclature of Cahn, Ingold and Prelog (CIP).
  • bromadiolone preparations comprising variable proportions of the two diastereoisomers of bromadiolone, that the two compounds corresponding to the signal having a retention time (t 3 ) of a value of about 6, 3 min and the signal having a retention time (t 4 ) of a value of the order of 8.8 min correspond to the two enantiomers of one of the diastereoisomers of bromadiolone and that the two compounds corresponding to the signal exhibiting a retention time of a value of the order of 4.3 min and the signal having a retention time (t 2 ) of a value of the order of 5.0 min correspond to the two enantiomers of the other of the two diastereoisomers of bromadiolone.
  • said enantiomer E 3 may have a retention time (t 3 ) of between 6.0 min and 6.6 min. .
  • the retention time (t 4 ) of the other enantiomer, said E 3 enantiomer of a diastereoisomer, said diastereoisomer D 3 of bromadiolone is of a value between 6.0 min and 6.6 min.
  • Said enantiomer E 3 is eluted, under the chromatography conditions described above, in third position with respect to the four configuration stereoisomers of bromadiolone, said enantiomer E 4 being eluted, under the chromatography conditions described above, in fourth position.
  • the invention thus relates to said enantiomer E 3 of said diastereoisomer D 3 4 separated from said enantiomer E 4 of said diastereoisomer D 3 4 .
  • said enantiomer E 1 may have a retention time (t 1) of between 4, 1 min and 4.4 min and the retention time (t 2 ) of another configuration stereo-isomer, referred to as the enantiomer E 2 , of a diastereoisomer, said diastereoisomer D 1 2 of bromadiolone may have a value of between 4.8 min and 5.2 min.
  • Said enantiomer E 1 is eluted, under the chromatography conditions described above, in first position with respect to the four configuration stereoisomers of bromadiolone, said enantiomer E 2 being eluted, under the chromatography conditions described above, in second position.
  • the values of the retention times t 15 t 2 , t 3 and t 4 are likely to vary according to variations of the chromatographic conditions and in particular with the temperature of the chromatography column. However, in these chromatographic conditions, the order of elution of bromadiolone configuration stereoisomers remains unchanged.
  • Said enantiomer E 3 according to the invention is thus obtained in a form separate from said diastereoisomer D 1 2 and in a form separate from said enantiomer E 4 of said diastereoisomer D 3 4 .
  • Such separation by high pressure liquid chromatography is carried out for example on a chiral column LUX ® cellulose-one (00F-4458-B0, Phenomenex ®, Le Pecq, France). If necessary, it is possible to successively carry out several steps of high-pressure liquid chromatography on a chiral column in order to obtain the amount of said enantiomer E 3 sought at the desired purity.
  • the invention therefore also relates to a chromatographic process for the separation of bromadiolone configuration stereoisomers-in particular the E 3 and E 4 enantiomers of said diastereoisomer D 3 4 and the enantiomers E 1 and E 2 of said diastereoisomer D 1 2 - of the bromadiolone.
  • the invention thus relates to such a chromatographic process for obtaining said E 3 enantiomer according to the invention, in which:
  • a mixture of acetonitrile (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B) is chosen as a liquid mobile phase, with a volume ratio A / B of 80/20; ;
  • the separation is carried out at room temperature
  • a liquid composition containing said enantiomer E 3 in solution in acetonitrile is introduced at the top of the chromatography column, and then; the liquid mobile phase is passed at a flow rate of 0.25 ml / min into the chromatography column and following the liquid composition, and a fraction of the mobile phase comprising the said E 3 enantiomer is collected at the column outlet; , separately bromadiolone configuration stereoisomers distinct from said enantiomer E 3 , and with a retention time t 3 of value such that ti ⁇ t 2 ⁇ t 3 ⁇ t 4 ;
  • the invention also relates to a configuration stereoisomer of bromadiolone - in particular of said enantiomer E 3 - obtained by a process according to the invention.
  • the invention also relates to a composition comprising said E 3 enantiomer, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 .
  • the invention also relates to a composition comprising said E 3 enantiomer wherein the amount of said E 3 enantiomer in the composition is different from the amount of said E 4 enantiomer in the composition.
  • the invention therefore relates to a composition
  • a composition comprising a configuration stereoisomer, said enantiomer E 3 , of bromadiolone, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and another configuration stereoisomer, said enantiomer E 4 , bromadiolone distinct from said enantiomer E 3 ;
  • said enantiomer E 3 having, by chromatographic analysis of a bromadiolone composition comprising four stereoisomers of bromadiolone configuration carried out under the conditions described below, a retention time t 3 ;
  • said enantiomer E 4 having, by chromatographic analysis of a bromadiolone composition comprising four stereoisomers of configuration of bromadiolone carried out under these same conditions, a retention time t 4 ;
  • t 3 and t 4 being of values such that t i ⁇ t 2 ⁇ t 3 ⁇ t 4 ; ti and t 2 represent retention times of bromadiolone configuration stereoisomers distinct from said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 , said analysis being carried out at a temperature of 21.5 ° C and under the following conditions:
  • liquid mobile phase a mixture formed of acetonitrile (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B), with a volume ratio A / B of 80/20; and with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 mL / min;
  • the invention therefore relates to such a composition
  • a composition comprising said enantiomer E 3 , excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 , that is to say excluding a composition in which said E 3 enantiomer and said E 4 enantiomer are in an equimolar and non-optically active mixture.
  • said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 are not in equimolecular and racemic mixtures.
  • the said enantiomer E 3 and the said enantiomer E 4 are quantified by chromatographic analysis under the conditions evoked and by performing a detection of configuration stereoisomers by absorption photometry or by absorption spectrometry, by adjusting the concentration of bromadiolone in the bromadiolone solution and the volume injected according to the sensitivity of the detector and measuring the value of the area under the peak of each enantiomer E 3 and E 4 . It is also possible to assay said enantiomer E 4 and said enantiomer E 3 of any composition comprising bromadiolone by performing a mass spectrometric detection at the outlet of the separating column.
  • the amount of said enantiomer E 3 is greater than the amount of said enantiomer E 4 in the composition.
  • said diastereoisomer D 3 of bromadiolone is predominantly in the form of said enantiomer E 3 in the composition.
  • a composition according to the invention comprises diastereoisomer D 3 4 of bromadiolone predominantly in the form of said enantiomer E 3 .
  • the ratio of the amount of said enantiomer E 3 to the sum of the amounts of each enantiomer (E 3 and E 4 ) of said diastereoisomer D 3 4 is greater than 0.5 (greater than 50%);
  • the ratio of the concentration of said enantiomer S 3 of the sum of the concentrations of each enantiomer (E 3 and E 4) of said diastereoisomer 3 D 4 is greater than 0.5 (greater than 50%), and;
  • the proportion of said enantiomer E 3 in the composition is greater than the proportion of said enantiomer E 4 in the composition.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the sum of the amount of said enantiomer E 3 and the amount of said enantiomer E 4 in the composition is greater than 50%, in particular greater than 60%, in particular greater than 70%, more particularly greater than 80%, preferably greater than 90%, more preferably greater than 95%, particularly preferably greater than 98%, even more preferably greater than 99% or of the order of 100%.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this quantity to the sum of the amount of said enantiomer E 3 and the amount of said enantiomer E 4 in the composition is greater than 75%, preferably between 85% and 100%, more preferably between 90% and 98%.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the sum of the amount of said enantiomer E 3 and the amount of said enantiomer E 4 in the composition is between 98% and 100%.
  • the composition may also comprise an amount of said enantiomer E 4 such that the ratio of this amount to the sum of the amount of said enantiomer E 3 and the amount of said enantiomer E 4 in the composition is less than 50%, especially less than 25%. preferably between 0% and 25%, in particular less than 10%.
  • the bromadiolone is predominantly in the form of said enantiomer E 3 in the composition.
  • the composition therefore comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is greater than the ratio of the amount of said enantiomer E 4 to the amount of bromadiolone in the composition and greater than the ratio the amount of each enantiomer (enantiomer E 1 and enantiomer E 2 ) of said diastereoisomer ⁇ 1 2 on the amount of bromadiolone in the composition.
  • the ratio of the amount of said enantiomer E 3 to the amount of bromadiolone is greater than 0.25 (greater than 25%);
  • the ratio of the amount of said enantiomer E 3 to the sum of the amounts of the enantiomers E 3 and E 4 of said diastereoisomer D 3 4 and enantiomers E 1 and E 2 of said diastereoisomer ⁇ 1 2 is greater than 0.25 (greater than 25%);
  • the ratio of the concentration of said enantiomer E 3 in the composition to the concentration of bromadiolone in the composition is greater than 0.25 (greater than 25%);
  • the proportion of said enantiomer E 3 in the composition is greater than the proportion of each of the enantiomers E 1 and E 2 of said diastereoisomer D 1 2 in the composition and greater than the proportion of said enantiomer E 4 in the composition.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is greater than 25%, especially greater than 50%, in particular greater than 70%. more preferably greater than 80%, preferably greater than 90%, particularly preferably greater than 95%, more preferably greater than 98%, still more preferably greater than 99% or of the order of 100%.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is greater than 70%, preferably between 80%. % and 100%, more preferably between 90% and 100%.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is between 95% and 99%.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is greater than 95%.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is between 98% and 100% inclusive -bornes.
  • the composition comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is substantially of the order of 100%.
  • a composition according to the invention may be substantially free of said enantiomer E 4 , that is to say that said enantiomer E 4 may be present in the composition but only in the form of traces.
  • a composition according to the invention may also be substantially free of said diastereoisomer D 1 2 , that is to say that said diastereoisomer D 1 2 may be present in the composition but only in the form of traces.
  • a composition according to the invention may also be substantially free of each enantiomer of said diastereoisomer D 1 2 , that is to say that each enantiomer of said diastereoisomer D 1 2 may be present in the composition but only in the form of traces.
  • the composition is in the liquid state and comprises a liquid solvent for bromadiolone. It may be a bromadiolone solution in a bromadiolone solvent, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 . It may be a solution of bromadiolone in a bromadiolone solvent and wherein said diastereoisomer D 3 is predominantly in the form of said enantiomer E 3 .
  • the invention therefore also relates to a composition comprising said enantiomer E 3 according to the invention, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 , said composition being optically active.
  • the composition according to the invention comprising said enantiomer E 3 , excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 , is itself optically inactive.
  • the invention also relates to the use of a composition according to the invention for the preparation of a rodenticide bait for harmful target rodents.
  • the invention also relates to a rodenticide bait comprising a composition according to the invention, and at least one edible excipient for harmful target rodents.
  • a rodenticide bait according to the invention comprises:
  • At least one edible carrier for harmful target rodents at least one edible carrier for harmful target rodents
  • enantiomer E 3 a configuration stereo-isomer, referred to as the enantiomer E 3 , of bromadiolone, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and another configuration stereoisomer, referred to as the enantiomer E 4 , of the distinct bromadiolone said enantiomer E 3 ;
  • said enantiomer E 3 having, by chromatographic analysis of a bromadiolone composition comprising four stereoisomers of bromadiolone configuration carried out under the conditions described below, a retention time t 3 ;
  • said enantiomer E 4 having, by chromatographic analysis of a bromadiolone composition comprising four stereoisomers of bromadiolone configuration carried out under these same conditions, a retention time t;
  • t 3 and t 4 being of values such that t i ⁇ t 2 ⁇ t 3 ⁇ t 4 ; and t 2 representing retention times of bromadiolone configuration stereoisomers distinct from said E 3 enantiomer and said E 4 enantiomer, said analysis being carried out at the temperature of 21.5 ° C and under the following conditions:
  • liquid mobile phase a mixture formed of acetonitrile (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B), with a volume ratio A / B of 80/20; and with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 mL / min;
  • a rodenticide bait according to the invention comprises an edible excipient for harmful rodent targets and said enantiomer E 3 , excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 .
  • the inventors have observed that the two diastereoisomers (diastereoisomer D 1; 2 and diastereoisomer D 3 ) of bromadiolone do not have the same liver remanence in harmful target rodents and that said diastereoisomer D 3 is in fact the diastereoisomer of bromadiolone which is less persistent in the liver of target rodents, particularly harmful target rodents, in comparison with said diastereoisomer D 1; 2 . They observed that said D 3 diastereoisomer of a rodenticide composition or bait, when ingested by a harmful target rodent, disappears from the target harmful rodent's liver having consumed such a composition or rodenticide bait according to the invention. invention more rapidly than said diastereoisomer D 1 2 .
  • the inventors who managed to separate said E 3 enantiomer and said E 4 enantiomer and to isolate said E 3 enantiomer have also discovered, in a completely surprising and unpredictable manner, that: the remanence of said enantiomer E 3 according to the invention in the liver of harmful rodent females having consumed such a rodenticidal bait according to the invention is greater than the remanence of said enantiomer E 3 in the liver of rodents harmful target males, and that;
  • said enantiomer E 3 according to the invention makes it possible to produce rodenticide baits with acceptable rodenticidal efficacy with respect to female target rodent rodents making it possible to limit the number of harmful target rodent litters.
  • Such rodenticide bait according to the invention is also likely to be used to control populations of rodent harmful targets resistant to known rodenticide treatments.
  • a rodenticide bait according to the invention comprises a mass quantity of bromadiolone such that the ratio (mass proportion) of this mass quantity of bromadiolone to the mass quantity of the rodenticide bait is less than 200 ppm-that is to say say less than 200 mg bromadiolone per kilogram of rodenticide bait.
  • the mass proportion of bromadiolone relative to the rodenticide bait is greater than 1 ppm.
  • the mass proportion of bromadiolone relative to the amount of rodenticide bait is between 1 ppm and 200 ppm (1 mg to 200 mg of bromadiolone per kilogram of rodenticide bait), especially between 1 ppm and 100 ppm ( 1 mg to 100 mg bromadiolone per kilogram of rodenticide bait), preferably between 1 ppm and 50 ppm (1 mg to 50 mg bromadiolone per kilogram of rodenticide bait), more preferably between 1 ppm and 25 ppm (1 mg to 25 mg bromadiolone per kilogram of rodenticide bait).
  • a rodenticide bait according to the invention comprises an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the rodenticide bait is greater than 70%, more particularly greater than 80%, preferably greater than at 90%, particularly preferably greater than 95%, more preferably greater than 98%, still more preferably greater than 99% or of the order of 100%, and bromadiolone in a mass proportion of less than 200 ppm relative to 1 '. rodenticide bait.
  • the edible excipient for harmful target rodents is chosen to allow consumption of the rodenticide bait by harmful target rodents.
  • each edible excipient is non-lethal for harmful target rodents.
  • the edible carrier is not a rodenticide in itself.
  • the edible excipient comprises at least one food selected from the group consisting of cereal seeds-notably dehulled cereal seeds-cereal seed mills, cereal seed flours, flakes cereal seeds, cereal bran and non-cereal seeds, eg alfalfa seeds - in particular in the form of husks, in the form of milling, in the form of flour, in the form of flakes or of ses-.
  • the edible carrier may include any carrier that may be consumed by harmful target rodents.
  • the edible carrier comprises at least one food selected from the group consisting of plant foods and foods of animal origin.
  • the edible carrier comprises at least one food chosen to be able to stimulate the appetite of harmful target rodents.
  • this food is selected from the group consisting of seeds of one or more cereals, seeds of one or more of several cereals, milling of seeds of one or more cereals, flakes of seeds of one or more cereals, bran of one or more cereals and flours of seeds of one or more cereals.
  • cereals are selected from the group consisting of oats, wheat, barley, corn, soybeans and rice.
  • the food is selected from the group consisting of sweet foods.
  • these may be foods comprising at least one sugar selected from the group consisting of sucrose, lactose, fructose and glucose.
  • It may be a sugar syrup-for example, a sugar syrup obtained by hydrolysis of the starch-or a sugar syrup obtained by hydrolysis of sucrose (invert sugar syrup), or beet sugar syrup, or maple syrup or sugar cane syrup, or syrup obtained from a plant of the genus stevia.
  • the food is chosen from the group consisting of flakes and coconut albumen flour (copra).
  • the food is selected from the group consisting of nuts, hazelnuts and almonds-shredded and / or powdered.
  • the food is selected from the group consisting of vegetable fats, vegetable oils (for example rapeseed oil, soy fat, sunflower oil, cocoa butter, peanut oil, peanut butter, corn oil palm oil), animal fats and animal oils (butter, lard, fish oil).
  • vegetable oils for example rapeseed oil, soy fat, sunflower oil, cocoa butter, peanut oil, peanut butter, corn oil palm oil
  • animal fats and animal oils (butter, lard, fish oil).
  • the food is selected from the group consisting of proteins of plant origin and proteins of animal origin.
  • proteins of plant origin and proteins of animal origin.
  • the rodenticide bait is chosen from the group consisting of solid baits comprising bromadiolone and a solid edible excipient.
  • the rodenticide bait may be a solid in the divided state, for example in the form of pellets or granules.
  • the rodenticide bait may also be a solid in the form of a block or paste that can be consumed by the target harmful rodents or a solid material that may be eaten by the target harmful rodents.
  • the solid rodenticide bait according to the invention can be in the form of a rigid block, a semi-rigid block, a foam, a powder or a gel.
  • the rodenticide bait in the form of a powder, in the form of a foam or in the form of a gel is adapted to be able to soil the fur of the target rodent (s) harmful (s) ) and to be ingested by him (them) during his (their) grooming.
  • the rodenticide bait is chosen from the group consisting of liquid baits comprising bromadiolone and a liquid edible excipient.
  • the rodenticide bait is then a drink for harmful target rodents.
  • It may be a bromadiolone solution in a bromadiolone solvent, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 . It may also be a solution of bromadiolone in a bromadiolone solvent and in which the amount of said enantiomer E 3 is greater than the amount of said enantiomer E 4 . It may also be a bromadiolone solution in which said D 34 diastereoisomer is predominantly in the form of said E 3 enantiomer. It can also be a bromadiolone solution in a bromadiolone solvent and wherein the bromadiolone is predominantly in the form of said E 3 enantiomer. It can also be a suspension of bromadiolone in the solid state in a liquid medium. It may also be a bromadiolone emulsion in a liquid medium.
  • the invention therefore also relates to a rodenticide bait in which bromadiolone is optically active.
  • bromadiolone of the rodenticide bait according to the invention is optically inactive.
  • the rodenticide bait comprises at least one dye.
  • a dye makes it possible in particular to give said rodenticide bait a color easily detectable and identifiable by a person handling the rodenticide bait.
  • the rodenticide bait comprises at least one preservative able to ensure its conservation during storage.
  • the rodenticide bait includes at least one bittering type compound denatonium benzoate, also known as the "Bitrex ®" designed to reduce the risk of accidental consumption by non-target organisms.
  • the composition and the rodenticide bait according to the invention comprise exclusively bromadiolone -excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 - as a rodenticide substance.
  • the composition and the rodenticide bait according to the invention are free of any other anticoagulant substance for rodenticide use distinct from bromadiolone.
  • the composition and rodenticide bait may include any harmful substance other than a rodenticide, such as an insecticide and / or acaricide.
  • composition and the rodenticide bait according to the invention comprise bromadiolone, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and of said enantiomer E 4 , and at least one other substance distinct from bromadiolone as a rodenticide substance.
  • This other rodenticide substance distinct from bromadiolone may be another anticoagulant, particularly anti-vitamin K or non-anticonagulant, or another non-anticoagulant rodenticide.
  • the invention also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of rodenticide bait comprising is dispersed comprising:
  • enantiomer E 3 a configuration stereo-isomer, referred to as the enantiomer E 3 , of bromadiolone, excluding a racemic mixture of said enantiomer E 3 and another configuration stereoisomer, referred to as the enantiomer E 4 , of the distinct bromadiolone said enantiomer E 3 ;
  • said enantiomer E 3 having, by chromatographic analysis of a bromadiolone composition comprising four stereoisomers of bromadiolone configuration carried out under the conditions described below, a retention time t 3 ;
  • said enantiomer E 4 having, by chromatographic analysis of a bromadiolone composition comprising four stereoisomers of bromadiolone configuration carried out under these same conditions, a retention time t 4 ;
  • t 3 and t being of values such that ⁇ t 2 ⁇ t 3 ⁇ t; and t 2 represents retention times of bromadiolone configuration stereoisomers distinct from said E 3 enantiomer and said E 4 enantiomer, said analysis being carried out at a temperature of 21.5 ° C and under the following conditions:
  • the invention also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of rodenticide bait according to the invention is dispersed, said quantity of bait being sufficient to be rodenticide.
  • a quantity of rodenticidal bait comprising said E 3 enantiomer is dispersed, with the exclusion of a racemic mixture of said enantiomer E 3 and said enantiomer E 4 .
  • the amount of said enantiomer E 3 in the rodenticide bait may be greater than the amount of said enantiomer E 4 in the rodenticide bait.
  • the bromadiolone may be predominantly in the form of said enantiomer E 3 .
  • a rodenticide bait according to this variant of the invention is a deadly rodenticide bait in a single dose or "one-shot" in English.
  • the mass proportion of bromadiolone in the rodenticide bait is less than 200 ppm, especially between 2 ppm and 200 ppm, preferably between 2 ppm and 100 ppm, in particular between 2 ppm and 50 ppm, for example between 15 ppm and 50 ppm.
  • the periods of 24 hours are consecutive.
  • This other variant of the invention therefore also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of lethal rodenticide bait is dispersed for harmful target rodents consuming this rodenticide and non-lethal bait for rodents or non-animal animals over the long term. targets accidentally consuming this rodenticide bait.
  • This is called a "multi-dose” or "multi-feeding" control method.
  • the consumption of bait rodenticide by a rodenticide for a period of 24 hours is insufficient to cause the death of the rodent, while repeated consumption of rodenticide bait for at least two consecutive days can lead to the death of rodent harmful rodent.
  • This other variant of the invention therefore relates to a method for controlling a population of harmful target rodents in which harmful rodent rodents are provided with a quantity of rodenticide bait capable of being ingested by the target harmful rodents, said quantity of rodenticide.
  • rodenticide bait being sufficient to kill harmful target rodents consuming said rodenticide bait for several days.
  • the quantity of disseminated rodenticide bait, the mass proportion of bromadiolone relative to the rodenticide bait and the amount of said enantiomer E 3 in relation to the quantity are adapted.
  • said enantiomer E 4 so that consumption of the rodenticide bait is lethal to target rodent rodents consuming daily rodenticide bait for at least 2 periods of 24 hours - especially 3 to 7 periods -, said periods being consecutive.
  • the rodenticide bait comprising an amount of said enantiomer E 3 such that the ratio of this amount to the amount of bromadiolone in the composition is greater than 95% -particularly of in the order of 100% -, the mass proportion of bromadiolone relative to the rodenticide bait is between 2 ppm and 100 ppm, in particular between 2 ppm and 50 ppm, in particular between 2 ppm and 15 ppm, by example of the order of 10 ppm.
  • harmful target rodents are provided with a quantity of rodenticidal bait sufficient to satisfy daily the appetite of harmful target rodents, said rodenticidal bait comprising predominantly said enantiomer E 3 with respect to said diastereoisomer D 3 and compared to bromadiolone.
  • the amount of disseminated rodenticide bait, the amount of said enantiomer E 3 relative to the amount of said enantiomer E 4 and the mass proportion of bromadiolone relative to the rodenticide bait are adjusted to allow rodenticide bait consumption for several days by target rodent pests - including female rodent pests - while limiting:
  • the invention also relates to a configuration stereoisomer of bromadiolone, a process for obtaining such a configuration stereoisomer, a composition and a rodenticide bait comprising such a configuration stereo-isomer and a method for controlling rodents.
  • harmful targets characterized in combination by all or some of the features mentioned above or hereafter.
  • FIG. 1 represents a chromatographic analysis of a mixture of the configuration stereoisomers of the chiral bromadiolone configuration and of each configuration stereoisomer of bromadiolone on the same chiral column;
  • FIG. 2 is a graphical representation in histogram of the evolution of the hepatic concentration of the diastereoisomers of bromadiolone in rats fed with bromadiolone
  • FIG. 3 is a graphical representation in histogram of the concentration of bromadiolone configuration stereoisomers in the liver of male and female rats having consumed a bait comprising bromadiolone.
  • HPLC high pressure liquid chromatography
  • LUX ® cellulose-1 Phenomenex, Le Pecq, France
  • a chiral stationary phase consisting of particles of cellulose tris (3,5-dimethylphenylcarbamate), said particles having an average size of 3 ⁇ and having an average pore size of 1000 A.
  • a mobile phase a mixture of acetonitrile (A) and of water comprising 0.1% by volume of formic acid (B), with a volume ratio A / B of 80/20 and with a flow rate of 0.25 m
  • the concentration of the composition to be analyzed is 1 ⁇ g bromadiolone per milliliter of acetonitrile and the volume injected onto the column is 1 ⁇ l ⁇ .
  • Detection is performed by tandem mass spectrometry (MS / MS) in Electrospray Ionization (ESI) mode.
  • MS / MS tandem mass spectrometry
  • ESI Electrospray Ionization
  • the nebulizer gas temperature is 350 ° C and its flow rate is 8 L / min.
  • the nebulizer gas pressure is raised to 2700 hPa.
  • MRM Multiple Reaction Monitoring
  • the retention time values t 15 t 2 , t 3 and t 4 are likely to vary according to the chromatographic conditions. However, in any case, under these conditions (choice of these stationary and mobile phases), the order of elution of the configuration stereoisomers of bromadiolone remains unchanged. As an indication, the values of the retention times of each configuration stereoisomer of bromadiolone can vary with a variation of a few degrees Celsius of the temperature of the chromatography column.
  • the retention time O) may vary between 4.1 min and 4.4 min.
  • the retention time (t 2 ) can vary between 4.8 min and 5.2 min.
  • the retention time (t 3 ) can vary between 6.0 min and 6 min. , 6 min.
  • the retention time (t) can vary between 8.3 min and 9.0 min.
  • 0.525 g ( ⁇ 0.025 g) of rat liver are weighed accurately and placed in a 50 ml polypropylene tube. 10 mL of acetone was added and the suspension is subjected to homogenization using a homogenizer / disperser ® Ultra-Turrax for a period of about 30 sec. The rod of the homogenizer / disperser is rinsed with hot water and then twice with 20 ml of acetone in a polypropylene tube. The homogenate is centrifuged for 5 minutes at a centrifugation rate of 3000 rpm (rotation per minute). The supernatant is collected and decanted into a test tube. The sample is evaporated under a stream of nitrogen (N 2 ) at a temperature of 40 ° C to form a dry extract.
  • N 2 nitrogen
  • the cartridge is dried by vacuum suction connected at the bottom of the cartridge.
  • 1 mL of elution solution consisting of dichloromethane (CH 2 Cl 2 ) and of methanol (CH 3 OH) in a volume proportion of 90/10 is then deposited at the top of the cartridge and an eluate comprising bromadiolone is collected at the bottom of the cartridge.
  • the eluate solvent was evaporated under a stream of nitrogen (N 2 ) at a temperature of 40 ° C.
  • the sample is taken up in 0.5 mL of acetonitrile (NC-CH 3 ) and the bromadiolone-containing acetonitrile solution is filtered through a 0.2 ⁇ filter.
  • the gavage solution is administered (on day 0) so that the amount of bromadiolone ingested by each rat is of the order of 13 mg per kilogram of rat.
  • fed rats are treated daily by subcutaneous administration of a dose of vitamin K1 (as an antidote to bleeding) at a rate of 0.1U per 200 g of live rat weight.
  • Said diastereoisomer D 1 2 (vertical hatch column) has a remanence in the liver of rats that is higher than the remanence of said diastereoisomer D 3 (black column).
  • mice Male and female rats are provided with a quantity of rodenticide bait comprising 15 ppm of bromadiolone, including 4% of said diastereoisomer D 1 2 and 96% of said diastereoisomer D 3 .
  • rodenticide bait comprising 15 ppm of bromadiolone, including 4% of said diastereoisomer D 1 2 and 96% of said diastereoisomer D 3 .
  • each configuration stereoisomer of bromadiolone present in the liver of each male or female rat is extracted, analyzed and assayed.
  • the results are shown in FIG. 3 in which the black columns represent the percentage of configuration stereoisomers E 1 , E 2 , E 3 and E 4 of bromadiolone in male rats, and the horizontal hatched columns represent the percentage of stereoisomers of configuration E 1 , E 2 , E 3 and E 4 of bromadiolone in female rats.
  • the enantiomer E 3 according to the invention is more persistent in the liver of female rats than it is in the liver of male rats. Bait
  • the rodenticide according to the invention makes it possible to target mainly the females of a population of harmful target rodents.
  • a composition, a rodenticide bait and a method for controlling harmful target rodents are subject to infinite variations both in the formulation of the rodenticide bait and in the methods of implementing the method.

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Abstract

L'invention concerne un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone présentant par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 de valeur telle que t1 < t2 <t3 < t4; t1, t2 et t4 étant les temps de rétention des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3, ladite analyse étant réalisée à la température de 27,3°C.

Description

STEREO-ISOMERE DE LA BROMADIOLONE,COMPOSITION ET APPAT
RODONTICIDE LE COMPRENANT ET PROCEDE DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES
L'invention concerne un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre des populations de rongeurs cibles nuisibles.
Il est connu d'utiliser des poisons sous forme d'appâts rodonticides contre des rongeurs cibles nuisibles. On sait de EP 2 090 164 que la bromadiolone est un anticoagulant de deuxième génération agissant à simple dose. On connaît aussi un appât comprenant de la bromadiolone, la proportion de la bromadiolone dans l'appât étant de 50 ppm.
Un tel appât est susceptible d'être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu'il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez des humains un empoisonnement qui peut être létal.
En outre, une fraction de la bromadiolone de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide ou par des animaux charognards de rongeurs nuisibles morts d'avoir consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d'entraîner à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux- appartenant à des espèces protégées.
L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement d'animaux non-cibles -notamment des animaux domestiques, des animaux de compagnie ou des humains- consommant accidentellement un tel appât rodonticide.
L'invention vise à pallier ces inconvénients en proposant un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement secondaire d'animaux domestiques (animaux de compagnie ou d'élevage) ou sauvages -par exemple des renards ou des oiseaux- prédateurs de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé de l'appât rodonticide ou charognards de rongeurs cibles nuisibles morts empoisonnés.
L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dont la mise en œuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-.
L'invention vise aussi un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont respectueux de l'environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux, et en particulier des rapaces-.
L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles de pouvoir être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles résistants à des appâts connus de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles.
L'invention vise donc à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus.
Pour ce faire, l'invention concerne un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone présentant par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 de valeur telle que ti < t2 < t3 < t4 ; tl5 t2 et t4 étant les temps de rétention des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3, ladite analyse étant réalisée à la température de 27,3°C et dans les conditions suivantes :
- sur une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
- en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
- par injection dans la colonne de chromatographie d'un volume de 1 μL de composition de bromadiolone à une concentration de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile.
Dans tout le texte :
- le terme « bromadiolone » désigne le composé 3-[3-(4'-bromo[l, l'- biphényl]-4-yl)-3-hydroxy-l-phénylpropyl]-4-hydroxy-2H-l-benzopyran-2-one ou 3-[3-[4-(4-bromophényl)phényl]-3-hydroxy-l-phénylpropyl]-2- hydroxychromèn-4-one de formule (I) ci-après :
Figure imgf000005_0001
dans laquelle sont représentés les numéros des carbones 1 et 3 du groupement 3-hydroxy-l-phénylpropyle ;
- on désigne par « stéréo-isomères », des isomères de même formule semi-développée, mais dont la position relative des atomes diffère dans l'espace.
On désigne par « stéréo-isomères de configuration » les stéréo-isomères dont la conversion de l'un en l'autre de ces stéréo-isomères de configuration nécessite une rupture/reformation d'une liaison covalente interatomique. Ainsi, on désigne par « stéréo-isomères de configuration », les stéréo-isomères qui ne sont pas des isomères de conformation (ou « rotamères », dont la conversion de l'un en l'autre des isomères de conformation s'accompagne uniquement d'une rotation d'une partie de la molécule selon l'axe d'une liaison σ (sigma) formée par recouvrement axial d'orbitales) ;
- le terme « quantité » s'entend d'une quantité molaire, d'une quantité massique ou d'une quantité volumique. Les proportions sont donc des proportions d'une quantité molaire rapportée à une quantité molaire, d'une quantité massique rapportée à une quantité massique, ou d'une quantité volumique rapportée à une quantité volumique ;
- les expressions « chromatographie liquide à haute pression » ou « chromatographie liquide à haute performance » (« CLHP ») désignent la chromatographie « HPLC » ou « High Performance Liquid Chromatography », et ;
- l'expression « temps de rétention » désigne la durée, mesurée au sommet du pic de chromatogramme, pendant laquelle un composé est retenu sur une colonne de chromatographie.
L'invention concerne donc ledit énantiomère E3 à l'état isolé et qui présente la propriété de pouvoir être élué, dans les conditions de chromatographie décrites ci-dessus, le troisième par rapport aux quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone.
Les inventeurs ont observé que l'analyse de la bromadiolone par chromatographie liquide à haute pression dans les conditions décrites ci-dessus fait apparaître quatre signaux ou pics correspondant à quatre composés de même formule chimique développée et correspondant à la formule (I) de la bromadiolone. Deux des signaux détectés correspondent à l'un des diastéréoisomères de la bromadiolone, les deux autres signaux correspondant à l'autre diastéréoisomère de la bromadiolone. L'un des deux diastéréoisomères de la bromadiolone est un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 3-hydroxy-l-phénylpropyle sont de configurations absolues identiques. L'autre des deux diastéréoisomères de la bromadiolone est un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 3-hydroxy-l-phénylpropyle sont de configurations absolues distinctes, lesdites configurations absolues étant déterminées selon les règles séquentielles de priorité et la nomenclature de Cahn, Ingold et Prelog (CIP).
Ils ont déterminé, par l'analyse de préparations de bromadiolone comprenant des proportions variables des deux diastéréoisomères de la bromadiolone, que les deux composés correspondant au signal présentant un temps de rétention (t3) d'une valeur de l'ordre de 6,3 min et au signal présentant un temps de rétention (t4) d'une valeur de l'ordre de 8,8 min correspondent aux deux énantiomères de l'un des diastéréoisomères de la bromadiolone et que les deux composés correspondant au signal présentant un temps de rétention d'une valeur de l'ordre de 4,3 min et au signal présentant un temps de rétention (t2) d'une valeur de l'ordre de 5,0 min correspondent aux deux énantiomères de l'autre des deux diastéréoisomères de la bromadiolone.
Selon de légères variations dans les conditions de chromatographie -notamment des variations de température de la colonne de chromatographie- ledit énantiomère E3 peut présenter un temps de rétention (t3) d'une valeur comprise entre 6,0 min et 6,6 min. Le temps de rétention (t4) de l'autre énantiomère, dit énantiomère E3 d'un diastéréoisomère, dit diastéréoisomère D3 de la bromadiolone est d'une valeur comprise entre 6,0 min et 6,6 min. Ledit énantiomère E3 est élué, dans les conditions de chromatographie décrites ci-dessus, en troisième position par rapport aux quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone, ledit énantiomère E4 étant élué, dans les conditions de chromatographie décrites ci-dessus, en quatrième position. L'invention concerne donc ledit énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D3 4 séparé dudit énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D3 4 .
Selon de légères variations dans les conditions de chromatographie -notamment des variations de température de la colonne de chromatographie- ledit énantiomère E1 peut présenter un temps de rétention (ti) d'une valeur comprise entre 4, 1 min et 4,4 min et le temps de rétention (t2) d'un autre stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E2, d'un diastéréoisomère, dit diastéréoisomère D1 2 de la bromadiolone peut présenter une valeur comprise entre 4,8 min et 5,2 min. Ledit énantiomère E1 est élué, dans les conditions de chromatographie décrites ci-dessus, en première position par rapport aux quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone, ledit énantiomère E2 étant élué, dans les conditions de chromatographie décrites ci-dessus, en deuxième position.
Les valeurs des temps de rétention tl5 t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier selon des variations des conditions chromatographiques et notamment avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l'ordre d'élution des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone reste inchangé.
Ledit énantiomère E3 selon l'invention est donc obtenu sous une forme séparée dudit diastéréoisomère D1 2 et sous une forme séparée dudit énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D3 4. On réalise par exemple une telle séparation par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale LUX® Cellulose- 1 (00F-4458-B0, phenomenex®, Le Pecq, France). Le cas échéant, il est possible de réaliser successivement plusieurs étapes de chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale aux fins d'obtenir la quantité dudit énantiomère E3 recherchée à la pureté souhaitée. Il est aussi possible de réaliser une telle séparation par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale préparative, c'est-à-dire sur une colonne de chromatographie de plus grandes dimensions -notamment de diamètre intérieur supérieur à 2 mm- et dans laquelle la phase stationnaire présente une granulométrie supérieure à 3 μπι. On obtient ledit énantiomère E3 purifié et isolé des autres stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone par élimination de la phase mobile de la fraction collectée et contenant ledit énantiomère E3.
Il n'était pas connu antérieurement de pouvoir séparer les stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone et les énantiomères dudit diastéréoisomère D3 4. Dans ces conditions expérimentales, les énantiomères (E3 et E4) dudit diastéréoisomère D3 4 sont séparés et purifiés par chromatographie liquide à haute pression.
L'invention concerne donc aussi un procédé chromatographique de séparation des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone -notamment des énantiomères E3 et E4 dudit diastéréoisomère D3 4 et des énantiomères E1 et E2 dudit diastéréoisomère D1 2- de la bromadiolone. L'invention concerne donc un tel procédé chromatographique d'obtention dudit énantiomère E3 selon l'invention, dans lequel :
- on choisit une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 Â ;
- on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 ;
- on réalise la séparation à température ambiante ;
- on introduit en tête de la colonne de chromatographie une composition liquide contenant dudit énantiomère E3 en solution dans de l'acétonitrile, puis ; - on fait passer la phase mobile liquide avec un débit de 0,25 mL/min dans la colonne de chromatographie et à la suite de la composition liquide, et on collecte en sortie de colonne une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère E3, séparément des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3, et avec un temps de rétention t3 de valeur telle que ti < t2 < t3 < t4 ;
tl5 t2 et t4 étant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3, et ;
- on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère E3.
L'invention concerne aussi un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone -notamment dudit énantiomère E3- obtenu par un procédé selon l'invention.
L'invention concerne aussi une composition comprenant dudit énantiomère E3, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4. L'invention concerne aussi une composition comprenant dudit énantiomère E3 dans laquelle la quantité dudit énantiomère E3 dans la composition est différente de la quantité dudit énantiomère E4 dans la composition.
L'invention concerne donc une composition comprenant un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un autre stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, de la bromadiolone distinct dudit énantiomère E3 ;
o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 ;
o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t4 ;
t3 et t4 étant de valeurs telles que ti < t2 < t3 < t4 ; ti et t2 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée à la température de 21,5°C et dans les conditions suivantes :
- sur une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
- en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
- par injection dans la colonne de chromatographie d'un volume de 1 μL de composition de bromadiolone à une concentration de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile.
L'invention concerne donc une telle composition comprenant dudit énantiomère E3, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, c'est-à-dire à l'exclusion d'une composition dans laquelle ledit énantiomère E3 et ledit énantiomère E4 sont en mélange équimoléculaire et non optiquement actif. Dans une composition selon l'invention, ledit énantiomère E3 et ledit énantiomère E4 ne sont pas en mélange équimoléculaire et racémique. On quantifie ledit énantiomère E3 et ledit énantiomère E4 par analyse chromatographie dans les conditions suscitées et en réalisant une détection des stéréo-isomères de configuration par photométrie d'absorption ou par spectrométrie d'absorption, en ajustant la concentration de la bromadiolone dans la solution de bromadiolone et le volume injecté selon la sensibilité du détecteur et en mesurant la valeur de l'aire sous le pic de chaque énantiomère E3 et E4. Il est aussi possible de doser ledit énantiomère E4 et ledit énantiomère E3 de toute composition comprenant de la bromadiolone en réalisant une détection par spectrométrie de masse en sortie de colonne séparative.
Avantageusement et selon l'invention, la quantité dudit énantiomère E3 est supérieure à la quantité dudit énantiomère E4 dans la composition. Avantageusement, ledit diastéréoisomère D3 de la bromadiolone est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 dans la composition. Avantageusement, une composition selon l'invention comprend du diastéréoisomère D3 4 de la bromadiolone majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
Dans tout le texte, l'expression « ledit diastéréoisomère D34 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 » signifie que le rapport de la quantité (massique, molaire ou volumique) dudit énantiomère E3 sur la quantité (massique, molaire ou volumique correspondante) dudit diastéréoisomère D34 (sous toutes ses formes énantio mères) est supérieur à 50%.
Ainsi, en particulier dans une composition selon l'invention :
le rapport de la quantité dudit énantiomère E3 sur la somme des quantités de chaque énantiomère (E3 et E4) dudit diastéréoisomère D3 4 est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %) ;
le rapport de la concentration dudit énantiomère E3 sur la somme des concentrations de chaque énantiomère (E3 et E4) dudit diastéréoisomère D3 4 est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %), et ;
la proportion dudit énantiomère E3 dans la composition est supérieure à la proportion dudit énantiomère E4 dans la composition.
Avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E3 et de la quantité dudit énantiomère E4 dans la composition est supérieur à 50%, notamment supérieur à 60%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, plus préférentiellement supérieur à 95%, particulièrement préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%.
Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E3 et de la quantité dudit énantiomère E4 dans la composition est supérieur à 75 %, de préférence compris entre 85 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 98 %.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E3 et de la quantité dudit énantiomère E4 dans la composition est compris entre 98 % et 100 %.
La composition peut aussi comprendre une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E3 et de la quantité dudit énantiomère E4 dans la composition est inférieur à 50 %, notamment inférieur à 25 %, préférentiellement compris entre 0 % et 25 %, en particulier inférieur à 10 %.
Avantageusement et selon l'invention, la bromadiolone est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 dans la composition. La composition comprend donc une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère E4 sur la quantité de la bromadiolone dans la composition et supérieur au rapport de la quantité de chaque énantiomère (énantiomère E1 et énantiomère E2) dudit diastéréoisomère Ό1 2 sur la quantité de la bromadiolone dans la composition.
Ainsi, en particulier, dans une composition selon l'invention :
- le rapport de la quantité dudit énantiomère E3 sur la quantité de la bromadiolone est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ;
- le rapport de la quantité dudit énantiomère E3 sur la somme des quantités des énantiomères E3 et E4 dudit diastéréoisomère D3 4 et des énantiomères E1 et E2 dudit diastéréoisomère Ό1 2 est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ;
- le rapport de la concentration dudit énantiomère E3 dans la composition sur la concentration de la bromadiolone dans la composition est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ;
- la proportion dudit énantiomère E3 dans la composition est supérieure à la proportion de chacun des énantiomères Ei et E2 dudit diastéréoisomère D1 2 dans la composition et supérieure à la proportion dudit énantiomère E4 dans la composition.
Avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est supérieur à 25%, notamment supérieur à 50%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%.
Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est supérieur à 70 %, de préférence compris entre 80 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 100 %.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est compris entre 95 % et 99 %.
Dans un autre mode de réalisation particulier, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est supérieur à 95%.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est compris entre 98% et 100 % -bornes incluses-.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est sensiblement de l'ordre de 100 %.
Une composition selon l'invention peut être sensiblement exempte dudit énantiomère E4, c'est à dire que ledit énantiomère E4 peut être présent dans la composition mais seulement à l'état de traces. Une composition selon l'invention peut aussi être sensiblement exempte dudit diastéréoisomère D1 2, c'est à dire que ledit diastéréoisomère D1 2 peut être présent dans la composition mais seulement à l'état de traces. Une composition selon l'invention peut aussi être sensiblement exempte de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D1 2, c'est à dire que chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D1 2 peut être présent dans la composition mais seulement à l'état de traces.
Avantageusement et selon l'invention, la composition est à l'état liquide et comprend un solvant liquide de la bromadiolone. Il peut s'agir d'une solution de bromadiolone dans un solvant de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4. Il peut s'agir d'une solution de bromadiolone dans un solvant de la bromadiolone et dans laquelle ledit diastéréoisomère D3 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
II peut aussi s'agir d'un solide comprenant de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4. Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant de la bromadiolone et dans lequel ledit diastéréoisomère D3 4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3. Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant de la bromadiolone et dans lequel la bromadiolone est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3. L'invention concerne donc aussi une composition comprenant dudit énantiomère E3 selon l'invention, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, ladite composition étant optiquement active. Il n'est cependant pas exclu que la composition selon l'invention, comprenant dudit énantiomère E3, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, soit elle-même optiquement inactive.
L'invention concerne aussi l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un appât rodonticide pour des rongeurs cibles nuisibles.
L'invention concerne aussi un appât rodonticide comprenant une composition selon l'invention, et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles.
Un appât rodonticide selon l'invention comprend :
- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ;
- un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un autre stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, de la bromadiolone distinct dudit énantiomère E3 ;
o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 ;
o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t ;
t3 et t4 étant de valeurs telles que ti < t2 < t3 < t4 ; ^ et t2 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée à la température de 21,5°C et dans les conditions suivantes :
- sur une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
- en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
- par injection dans la colonne de chromatographie d'un volume de 1 μL de composition de bromadiolone à une concentration de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile.
Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles et dudit énantiomère E3, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4.
Les inventeurs ont observé que les deux diastéréoisomères (diastéréoisomère D1;2 et diastéréoisomère D3 ) de la bromadiolone n'ont pas la même rémanence hépatique chez des rongeurs cibles nuisibles et que ledit diastéréoisomère D3 est en fait le diastéréoisomère de la bromadiolone qui est moins rémanent dans le foie de rongeurs cibles, notamment de rongeurs cibles nuisibles, en comparaison dudit diastéréoisomère D1;2. Ils ont observé que ledit diastéréoisomère D3 4 d'une composition ou d'un appât rodonticide, lorsqu'il est ingéré par un rongeur cible nuisible, disparait du foie du rongeur cible nuisible ayant consommé une telle composition ou un tel appât rodonticide selon l'invention plus rapidement que ledit diastéréoisomère D1 2.
De plus, les inventeurs qui sont parvenus à séparer ledit énantiomère E3 et ledit énantiomère E4 et à isoler ledit énantiomère E3, ont aussi découvert, de façon totalement surprenante et imprévisible, que : la rémanence dudit énantiomère E3 selon l'invention dans le foie de rongeurs cibles nuisibles femelles ayant consommé un tel appât rodonticide selon l'invention est supérieure à la rémanence dudit énantiomère E3 dans le foie de rongeurs cibles nuisibles mâles, et que ;
- la rémanence dudit énantiomère E3 dans le foie de rongeurs cibles nuisibles femelles est suffisante pour être rodonticide pour les rongeurs cibles nuisibles femelles.
Ils ont aussi constaté qu'il est possible de contrôler une population de rongeurs cibles nuisibles en visant sélectivement les femelles de rongeurs cibles nuisibles, en limitant le nombre de portées de rongeurs cibles nuisibles. Ainsi, ledit énantiomère E3 selon l'invention permet la réalisation d'appâts rodonticides présentant une efficacité rodonticide acceptable vis-à-vis de de rongeurs cibles nuisibles femelles permettant de limiter le nombre de portées de rongeurs cibles nuisibles.
Un tel appât rodonticide selon l'invention est en outre susceptible de pouvoir être utilisé pour lutter contre des populations de rongeurs cibles nuisibles résistants à des traitements rodonticides connus.
Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend une quantité massique de bromadiolone telle que le rapport (proportion massique) de cette quantité massique de bromadiolone sur la quantité massique de l'appât rodonticide est inférieur à 200 ppm -c'est-à-dire inférieur à 200 mg de bromadiolone par kilogramme d'appât rodonticide-. Avantageusement, la proportion massique de la bromadiolone par rapport à l'appât rodonticide est supérieure à 1 ppm. Avantageusement, la proportion massique de la bromadiolone par rapport à la quantité d'appât rodonticide est comprise entre 1 ppm et 200 ppm (1 mg à 200 mg de bromadiolone par kilogramme d'appât rodonticide), notamment comprise entre 1 ppm et 100 ppm (1 mg à 100 mg de bromadiolone par kilogramme d'appât rodonticide), de préférence comprise entre 1 ppm et 50 ppm (1 mg à 50 mg de bromadiolone par kilogramme d'appât rodonticide), encore plus préférentiellement comprise entre 1 ppm et 25 ppm (1 mg à 25 mg de bromadiolone par kilogramme d'appât rodonticide).
Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans l'appât rodonticide est supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%, et de la bromadiolone en proportion massique inférieure à 200 ppm par rapport à 1 ' appât rodonticide .
Avantageusement et selon l'invention, l'excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles est choisi pour permettre une consommation de l'appât rodonticide par des rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement et selon l'invention, chaque excipient comestible est non létal pour des rongeurs cibles nuisibles. L'excipient comestible n'est pas rodonticide en lui-même.
Avantageusement et selon l'invention, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale -notamment des graines de céréale décortiquées-, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières, par exemple des graines de luzerne -notamment sous forme décortiquée, sous forme de mouture, sous forme de farine, sous forme de flocons ou de son-. L'excipient comestible peut comprendre tout support susceptible d'être consommé par des rongeurs cibles nuisibles.
Avantageusement, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des aliments d'origine végétale et des aliments d'origine animale. Avantageusement, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi pour pouvoir stimuler l'appétit des rongeurs cibles nuisibles. En particulier, cet aliment est choisi dans le groupe formé de graines d'une ou de plusieurs céréales, de graines décortiquées d'une ou de plusieurs céréales, des moutures de graines d'une ou de plusieurs céréales, des flocons de graines d'une ou de plusieurs céréales, du son d'une ou de plusieurs céréales et des farines de graines d'une ou de plusieurs céréales. À titre d'exemple, on choisit les céréales dans le groupe formé de l'avoine, du blé, de l'orge, du maïs, du soja et du riz.
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des aliments sucrés. Par exemple, il peut s'agir d'aliments comprenant au moins un sucre choisi dans le groupe formé du saccharose, du lactose, du fructose et du glucose. Il peut s'agir d'un sirop de sucre -par exemple, d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de l'amidon- ou d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de saccharose (sirop de sucre inverti), ou d'un sirop de sucre de betterave, ou d'un sirop d'érable ou d'un sirop de canne à sucre, ou d'un sirop obtenu à partir d'une plante du genre stevia.
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des flocons et de la farine de l'albumen de noix de coco (coprah). Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des noix, des noisettes et des amandes -râpées et/ou en poudre-.
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des graisses végétales, des huiles végétales (par exemple huile de colza, graisse de soja, huile de tournesol, beurre de cacao, huile d'arachides, beurre d'arachides, huile de maïs, huile de palme), des graisses animales et des huiles animales (beurre, saindoux, huile de poisson).
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des protéines d'origine végétale et des protéines d'origine animale. À titre d'exemple, on peut citer par exemple le lait en poudre -notamment le lait écrémé en poudre-, les œufs -notamment les œufs en poudre-, les hydrolysats de protéines d'origine animale et les hydrolysats de protéines d'origine végétale.
Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts solides comprenant de la bromadiolone et un excipient comestible solide. Avantageusement, l'appât rodonticide peut être un solide à l'état divisé, par exemple sous forme de boulettes ou de granulés. Avantageusement, l'appât rodonticide peut aussi être un solide sous forme de bloc ou de pâte susceptibles d'être consommés par les rongeurs cibles nuisibles ou d'un matériau solide susceptible d'être rongé par les rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement, l'appât rodonticide solide selon l'invention peut se présenter sous forme d'un bloc rigide, d'un bloc semi-rigide, d'une mousse, d'une poudre ou d'un gel.
Avantageusement, l'appât rodonticide se présentant sous forme d'une poudre, sous forme d'une mousse ou sous forme d'un gel est adapté pour pouvoir souiller la fourrure du(de) rongeur(s) cible(s) nuisible(s) et pour pouvoir être ingérée par celui(ceux)-ci lors de son(leur) toilettage.
Il peut s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant de la bromadiolone et dans lequel la quantité dudit énantiomère E3 est supérieure à la quantité dudit énantiomère E4. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant de la bromadiolone dans lequel ledit diastéréoisomère D3 4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant de la bromadiolone dans lequel la bromadiolone est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant de la bromadiolone et un excipient comestible liquide. L'appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles.
II peut s'agir d'une solution de bromadiolone dans un solvant de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4. Il peut aussi s'agir d'une solution de bromadiolone dans un solvant de la bromadiolone et dans laquelle la quantité dudit énantiomère E3 est supérieure à la quantité dudit énantiomère E4. Il peut aussi s'agir d'une solution de bromadiolone dans laquelle ledit diastéréoisomère D34 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3. Il peut aussi s'agir d'une solution de bromadiolone dans un solvant de la bromadiolone et dans laquelle la bromadiolone est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3. Il peut aussi s'agir d'une suspension de bromadiolone à l'état solide dans un milieu liquide. Il peut aussi s'agir d'une émulsion de bromadiolone dans un milieu liquide.
L'invention concerne donc aussi un appât rodonticide dans lequel la bromadiolone est optiquement active. Il n'est cependant pas exclu que la bromadiolone de l'appât rodonticide selon l'invention soit optiquement inactive.
Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un colorant. Un tel colorant permet en particulier de donner audit appât rodonticide une couleur aisément détectable et identifiable par une personne manipulant l'appât rodonticide.
Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un conservateur apte à assurer sa conservation lors de son stockage. Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un composé amérisant de type benzoate de dénatonium, aussi connu sous le nom de « Bitrex® » destiné à réduire les risques de consommation accidentelle par des organismes non cibles.
Avantageusement, dans une variante particulière, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention comprennent exclusivement de la bromadiolone -à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4- à titre de substance rodonticide. En particulier, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention sont exempts de toute autre substance anticoagulante à usage rodonticide distincte de la bromadiolone. Cependant, dans cette variante selon l'invention, la composition et l'appât rodonticide peuvent comprendre toute substance anti-nuisible autre qu'un rodonticide, telle qu'une substance insecticide et/ou acaricide.
Avantageusement, dans une autre variante particulière, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention comprennent de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, et au moins une autre substance distincte de la bromadiolone à titre de substance rodonticide. Cette autre substance rodonticide distincte de la bromadiolone peut être une autre substance anticoagulante -notamment du type anti-vitamine K ou non- ou une autre substance rodonticide non anticoagulante.
L'invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide comprenant :
- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et
- un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un autre stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, de la bromadiolone distinct dudit énantiomère E3 ;
o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 ;
o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t4 ;
t3 et t étant de valeurs telles que < t2 < t3 < t ; et t2 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée à la température de 21,5°C et dans les conditions suivantes :
■ sur une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ; ■ en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
■ par injection dans la colonne de chromatographie d'un volume de 1 μL· de composition de bromadiolone à une concentration de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile.
L'invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide selon l'invention, ladite quantité d'appât étant suffisante pour être rodonticide.
Avantageusement et selon l'invention, on dissémine une quantité d'appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E3, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4. Avantageusement, la quantité dudit énantiomère E3 dans l'appât rodonticide peut être supérieure à la quantité dudit énantiomère E4 dans l'appât rodonticide. Dans un tel procédé, avantageusement et selon l'invention, la bromadiolone peut être majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
Avantageusement et en variante selon l'invention, on choisit en combinaison :
- l'excipient comestible ;
- une quantité dudit énantiomère E3 distincte de la quantité dudit énantiomère E4 dans l'appât rodonticide ;
- une proportion dudit énantiomère E3 par rapport à la bromadiolone, et ; - une proportion massique de la bromadiolone dans l'appât rodonticide, et ;
- une quantité d'appât rodonticide disséminé ;
de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de la bromadiolone suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide au cours d'une période unique de 24 heures consécutives. Un appât rodonticide selon cette variante de l'invention est un appât rodonticide mortel en une seule prise ou « one-shot » en anglais. Avantageusement et selon cette variante de l'invention, la proportion massique de la bromadiolone dans l'appât rodonticide est inférieure à 200 ppm, notamment comprise entre 2 ppm et 200 ppm, de préférence comprise entre 2 ppm et 100 ppm, en particulier comprise entre 2 ppm et 50 ppm, par exemple comprise entre 15 ppm et 50 ppm.
Avantageusement et dans une autre variante selon l'invention, on choisit en combinaison :
- l'excipient comestible ;
- une quantité dudit énantiomère E3 distincte de la quantité dudit énantiomère E4 dans l'appât rodonticide ;
- une proportion dudit énantiomère E3 par rapport à la bromadiolone, et ;
- une proportion massique de la bromadiolone dans l'appât rodonticide, et ; - une quantité d'appât rodonticide disséminé ;
de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de la bromadiolone ;
o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles, c'est-à-dire généralement non létale pour les rongeurs cibles nuisibles, consommant dudit appât rodonticide pendant une période de 24 heures consécutives, et ;
o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide pendant plusieurs périodes de 24 heures.
Avantageusement et selon l'invention, les périodes de 24 heures sont consécutives.
Cette autre variante de l'invention vise donc aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant durablement cet appât rodonticide et non létale pour des rongeurs ou des animaux non cibles consommant accidentellement cet appât rodonticide. On parle alors d'un procédé de lutte « multi-doses » ou, en anglais, « multi- feeding ». Dans un tel procédé selon l'invention, la consommation d'appât rodonticide par un rongeur cible nuisible pendant une durée de 24 heures est insuffisante pour entraîner la mort dudit rongeur, alors qu'une consommation répétée d'appât rodonticide pendant au moins deux jours consécutifs permet d'entraîner la mort du rongeur cible nuisible.
Cette autre variante de l'invention vise donc un procédé de lutte contre une population de rongeurs cibles nuisibles dans lequel on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d'appât rodonticide susceptible d'être ingérée par les rongeurs cibles nuisibles, ladite quantité d'appât rodonticide étant suffisante pour tuer des rongeurs cibles nuisibles consommant ledit appât rodonticide pendant plusieurs jours.
Avantageusement, dans cette autre variante d'un procédé selon l'invention, on adapte la quantité d'appât rodonticide disséminé, la proportion massique de la bromadiolone par rapport à l'appât rodonticide et la quantité dudit énantiomère E3 par rapport à la quantité dudit énantiomère E4 pour que la consommation de l'appât rodonticide soit létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant quotidiennement de l'appât rodonticide pendant au moins 2 périodes de 24 heures -notamment de 3 à 7 périodes-, lesdites périodes étant consécutives.
Avantageusement, dans cette autre variante d'un procédé selon l'invention, l'appât rodonticide comprenant une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est supérieur à 95% -notamment de l'ordre de 100%-, la proportion massique de la bromadiolone par rapport à l'appât rodonticide est comprise entre 2 ppm et 100 ppm, notamment comprise entre 2 ppm et 50 ppm, en particulier comprise entre 2 ppm et 15 ppm, par exemple de l'ordre de 10 ppm.
Dans un procédé selon l'invention, on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d'appât rodonticide suffisante pour satisfaire quotidiennement l'appétit des rongeurs cibles nuisibles, ledit appât rodonticide comprenant majoritairement dudit énantiomère E3 par rapport audit diastéréoisomère D3 et par rapport à la bromadiolone. Dans un procédé selon l'invention, on adapte la quantité d'appât rodonticide disséminé, la quantité dudit énantiomère E3 par rapport à la quantité dudit énantiomère E4 et la proportion massique de la bromadiolone par rapport à l'appât rodonticide de façon à permettre une consommation d'appât rodonticide pendant plusieurs jours par des rongeurs cibles nuisibles -notamment des rongeurs cibles nuisibles femelles-, tout en limitant :
- les risques d'intoxication primaire de mammifères et oiseaux non cibles susceptibles de ne consommer qu'occasionnellement et accidentellement un tel appât rodonticide ;
- les risques d'intoxication secondaire, par exemple des prédateurs des rongeurs cibles, susceptibles de consommer des rongeurs -morts ou vifs- cibles ayant ingéré une quantité dudit appât.
Il n'est cependant pas exclut que certains rongeurs cibles nuisibles mâles puisse être empoisonnés dans le cas d'une consommation élevée et réitérée d'appât rodonticide selon l'invention.
L'invention concerne également un stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone, un procédé d'obtention de ce stéréo-isomère de configuration, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre les rongeurs cibles nuisibles caractérisés en combinaison par tout ou partie des caractéristiques mentionnées ci-dessus ou ci-après.
D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante et des exemples donnés à titre uniquement non limitatif et qui se réfèrent aux figures annexées, dans lesquelles :
- la figure 1 représente une analyse chromatographique d'un mélange des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone sur colonne chirale et de chaque stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone sur la même colonne chirale ;
- la figure 2 est une représentation graphique en histogramme de l'évolution de la concentration hépatique des diastéréoisomères de la bromadiolone chez des rats gavés avec de la bromadiolone ; - la figure 3 est une représentation graphique en histogramme de la concentration des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone dans le foie de rats mâles et de rats femelles ayant consommé un appât comprenant de la bromadiolone.
Séparation des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone
On réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone par chromatographie liquide à haute pression (HPLC) sur une colonne chirale LUX® Cellulose- 1 (phenomenex, Le Pecq, France) renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 A. On utilise, à titre de phase mobile, un mélange formé de d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de 0,25 mL/min dans la colonne de chromatographie. La concentration de la composition à analyser est de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile et le volume injecté sur la colonne est de 1 μL·. La détection est effectuée par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) en mode d'ionisation négative par électronébulisation (ESI, « ElectroSpray Ionization »). La température du gaz nébuliseur est de 350°C et son débit est de 8 L/min. La pression du gaz nébuliseur est portée à 2700 hPa. En particulier, on détecte les transitions MRM (« Multiple Reaction Monitoring » m/z 525,1→ 250,1 et m/z 525,1→ 181 correspondant à la bromadiolone. Un exemple de chromatogramme est présenté en figure 1.
Les valeurs des temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone sont de :
- pour l'énantiomère E1 dudit diastéréoisomère D1;2, ti = 4,3 min ;
- pour l'énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D1 2, t2 = 5,0 min ;
- pour l'énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D34, t3 = 6,3 min, et ; - pour l'énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D3 , t = 8,8 min. Les valeurs de temps de rétention tl5 t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier selon les conditions chromatographiques. Cependant, en tout état de cause, dans ces conditions (choix de ces phases stationnaire et mobile), l'ordre d'élution des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone reste inchangé. Â titre indicatif, les valeurs des temps de rétention de chaque stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone peuvent varier avec une variation de quelques degrés Celsius de la température de la colonne de chromatographie. Pour ledit énantiomère E1, le temps de rétention O ) peut varier entre 4, 1 min et 4,4 min. Pour ledit énantiomère E2, le temps de rétention (t2) peut varier entre 4,8 min et 5,2 min, Pour ledit énantiomère E3, le temps de rétention (t3) peut varier entre 6,0 min et 6,6 min. Pour ledit énantiomère E4, le temps de rétention (t ) peut varier entre 8,3 min et 9,0 min.
Extraction de la bromadiolone de foies de rats traités à la bromadiolone en vue de l'analyse des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone
Homogénéisation de l'échantillon de foie
On pèse avec précision de l'ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie de rat que l'on place dans un tube en polypropylène de 50 mL. On ajoute 10 mL d'acétone et on soumet la suspension à une homogénéisation au moyen d'un homogénéisateur/disperseur Ultra- Turrax® pendant une durée de l'ordre de 30 sec. On rince la tige de l'homogénéisateur/disperseur à l'eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d'acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l'homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation par minute). On collecte et on transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l'échantillon à une évaporation sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C de façon à former un extrait sec.
Élimination des lipides
Dans le tube contenant l'extrait sec, on ajoute 1 mL d'acétonitrile de façon à solubiliser l'extrait sec. On lave la solution d'acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d'hexane. L'extrait débarrassé des lipides est séché sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q). L'échantillon est homogénéisé sous vortex.
Extraction de la bromadiolone sur phase solide (« SPE, Solid Phase Extraction »)
On fait passer 1 mL de dichlorométhane (CH2C 2), puis 1 mL de méthanol (CH3OH), puis 1 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q) sur une cartouche Oasis HLB lcc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite l'extrait de foie débarrassé des lipides (lmL MeOH/H2O Milli-Q) et contenant la bromadiolone en tête de la cartouche préalablement. L'extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol (CH3OH) et d'eau ultra-pure (H2O) en proportion volumique de 90/10. On sèche la cartouche par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d'élution formée de dichlorométhane (CH2Ct2) et de méthanol (CH3OH) en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant la bromadiolone. On évapore le solvant de Γ éluat sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C. On reprend l'échantillon dans 0,5 mL d'acétonitrile (NC-CH3) et on filtre la solution d'acétonitrile contenant la bromadiolone sur filtre 0,2 μπι.
Rémanence hépatique des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone chez le rat
On administre par gavage ("per os") à des rats SD « Sprague Dawley » mâles et femelles, âgés de 8 semaines et pesant de l'ordre de 200 g, un mélange de diastéréoisomères (diastéréoisomère D1 2 et diastéréoisomère D3 4) de la bromadiolone en solution dans un mélange d'huile végétale et de DMSO à 5 . La proportion molaire dudit diastéréoisomère D1 2 est de 56% et la proportion molaire dudit diastéréoisomère D3 4 est de 44%.
On administre (à J0) de la solution de gavage de façon que la quantité de bromadiolone ingérée par chaque rat soit de l'ordre de 13 mg par kilogramme de rat. Pour éviter l'hémorragie, les rats gavés sont traités quotidiennement par administration par voie sous cutanée d'une dose de vitamine Kl (à titre d'antidote vis-à-vis de l'hémorragie) à raison de 0,1U pour 200g de poids de rat vif.
À Jl (J+l), J3 (J+3) et J7 (J+7) après le gavage, on euthanasie 4 rats préalablement anesthésiés à l'isoflurane, on prélève le foie des rats euthanasiés puis on extrait la bromadiolone du foie et on dose la quantité de chacun des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone par analyse par chromatographie liquide haute pression sur une colonne chirale comme décrit ci-dessus. On mesure l'aire sous les pics du chromatogramme obtenu et on quantifie chaque diastéréoisomère de la bromadiolone par comparaison avec une courbe d'étalonnage.
Les résultats sont représentés en figure 2. Ledit diastéréoisomère D1 2 (colonne à hachures verticales) présente une rémanence dans le foie des rats plus élevée que la rémanence dudit diastéréoisomère D3 (colonne noire).
Rémanence des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone dans le foie de rats mâles et femelles consommant un appât rodonticide comprenant de la bromadiolone
On met à disposition de rats mâles et femelles, une quantité d'appât rodonticide comprenant 15 ppm de bromadiolone, dont 4% dudit diastéréoisomère D1 2 et 96% dudit diastéréoisomère D3 . À la mort des rats, on extrait, on analyse et on dose chaque stéréo-isomère de configuration de la bromadiolone présent dans le foie de chaque rat mâle ou femelle. Les résultats sont représentés en figure 3 dans laquelle les colonnes noires représentent le pourcentage des stéréo-isomères de configuration E1, E2, E3 et E4 de la bromadiolone chez les rats mâles, et les colonnes à hachures horizontales représentent le pourcentage des stéréo-isomères de configuration E1, E2, E3 et E4 de la bromadiolone chez les rats femelles.
L'énantiomère E3 selon l'invention est plus rémanent dans le foie des rats femelles qu'il ne l'est dans le foie des rats mâles. Un appât rodonticide selon l'invention permet de cibler majoritairement les femelles d'une population de rongeurs cibles nuisibles.
Il va de soi que l'invention peut faire l'objet de nombreuses variantes de réalisation et applications. En particulier, une composition, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l'appât rodonticide que dans les modes de mise en œuvre du procédé.

Claims

REVENDICATIONS
1/ - Stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone présentant par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 de valeur telle que ti < t2 < t3 < t4 ;
tl5 t2 et t4 étant les temps de rétention des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3, ladite analyse étant réalisée à la température de 27,3°C et dans les conditions suivantes :
- sur une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
- en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
- par injection dans la colonne de chromatographie d'un volume de
1 μL de composition de bromadiolone à une concentration de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile.
21 - Composition comprenant un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un autre stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, de la bromadiolone distinct dudit énantiomère
E3 ;
o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 ; o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t4 ;
t3 et t étant de valeurs telles que ti < t2 < t3 < t ;
ti et t2 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée à la température de 21,5°C et dans les conditions suivantes :
- sur une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
- en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
- par injection dans la colonne de chromatographie d'un volume de 1 μL de composition de bromadiolone à une concentration de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile.
3/ - Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que la quantité dudit énantiomère E3 est supérieure à la quantité dudit énantiomère E4 dans la composition.
4/ - Composition selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce que la bromadiolone est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 dans la composition.
5/ - Composition selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est supérieur à 25%. 6/ - Composition selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la bromadiolone dans la composition est supérieur à 95%.
11 - Appât rodonticide comprenant une composition selon l'une des revendications 2 à 6, et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles.
8/ - Appât selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières.
91 - Appât selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisé en ce qu'il comprend une quantité massique de bromadiolone telle que le rapport de cette quantité massique de bromadiolone sur la quantité massique de l'appât rodonticide est inférieur à 200 ppm.
10/ - Procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles, dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide comprenant :
- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ;
- un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, de la bromadiolone, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un autre stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, de la bromadiolone distinct dudit énantiomère E3 ;
o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t3 ;
o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de bromadiolone comprenant quatre stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t4 ;
t3 et t4 étant de valeurs telles que ti < t2 < t3 < t4 ;
ti et t2 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée à la température de 21,5°C et dans les conditions suivantes :
■ sur une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
■ en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
■ par injection dans la colonne de chromatographie d'un volume de 1 μL· de composition de bromadiolone à une concentration de 1 μg de bromadiolone par millilitre d'acétonitrile.
11/ - Procédé chromatographique d'obtention dudit énantiomère E3 selon la revendication 1, dans lequel :
- on choisit une colonne de chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et renfermant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(3,5-diméthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 Â ;
- on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 ;
- on réalise la séparation à température ambiante ; - on introduit en tête de la colonne de chromatographie une composition liquide contenant dudit énantiomère E3 en solution dans de l'acétonitrile, puis ;
- on fait passer la phase mobile liquide avec un débit de 0,25 mL/min dans la colonne de chromatographie et à la suite de la composition liquide, et on collecte en sortie de colonne une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère E3, séparément des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3, et avec un temps de rétention t3 de valeur telle que < t2 < t3 < t4 ;
ti, t2 et t4 étant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration de la bromadiolone distincts dudit énantiomère E3, et ;
- on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère E3.
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