FR3044874A1 - Appat rodonticide comprenant du brodifacoum et procede de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne un appât rodonticide comprenant au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles et un stéréoisomère de configuration, dit énantiomère E4, du brodifacoum, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E4 et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E1, du brodifacoum distinct dudit énantiomère E4 ; ○ ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique du brodifacoum effectuée dans des conditions particulières et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t4 ; ○ ledit énantiomère E1 présentant, par analyse chromatographique du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention ti ; les temps de rétention ti et t4 étant de valeurs telles que t1 < t2 < t3 < t4 ; t2 et t3 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère E1 et dudit énantiomère E4.
Description
APPÂT RODONTICIDE COMPRENANT DU BRODIFACOUM ET PROCÉDÉ DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES L'invention concerne un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte -notamment de lutte sélective- contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention concerne aussi un procédé de séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum. L’invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre le développement de populations de rongeurs cibles nuisibles.
On sait de EP 0 147 052 que le stéréo-isomère « trans » du brodifacoum est métabolisé plus rapidement que le stéréo-isomère « cis » dans les tissus d’espèces non-cible et non-rongeurs et que ce stéréo-isomère « trans » du brodifacoum permet de diminuer les risques d’empoisonnement de ces espèces non-cible. En particulier EP 0 147 052 décrit un appât rodonticide comprenant du brodifacoum sous forme de stéréo-isomère « trans » dans une proportion de 50 ppm.
Un tel appât est susceptible d’être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu’il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez des humains un empoisonnement qui peut être létal.
En outre, une fraction du brodifacoum de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles et notamment de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d’entraîner à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux- appartenant à des espèces protégées. L’invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler des populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d’empoisonnement d’animaux non-cibles -notamment des animaux domestiques ou d’élevage, des animaux de compagnie ou des humains- consommant accidentellement un tel appât rodonticide. L’invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d’empoisonnement secondaire d’animaux -par exemple de renards ou d’oiseaux- sauvages prédateurs de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé de l’appât rodonticide ou d’animaux sauvages charognards de rongeurs cibles nuisibles morts empoisonnés. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dont la mise en œuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont respectueux de l’environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui ne nécessitent pas, pour contrôler une population de rongeur cibles nuisibles, d’utiliser un agent rodonticide à forte dose et qui sont respectueux de l’environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux-. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles d’être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles résistants à des appâts connus de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L’invention vise aussi à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus.
Pour ce faire, l'invention concerne un appât rodonticide comprenant : - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et d’un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère Ei, du brodifacoum distinct dudit énantiomère E4 ; o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t4 ; o ledit énantiomère Ei présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention ti ; les temps de rétention L et t4 étant de valeurs telles que t4 < t2 < t3 < t4 ; t2 et t3 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée : - sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 μιη et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ; - en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ; - par injection dans la colonne pour chromatographie d’un volume de 1 pL de composition de brodifacoum à une concentration de 1 pg de brodifacoum par millilitre d’acétonitrile.
Dans tout le texte : - le terme «brodifacoum» désigne le composé de formule 3-(4’- bromobiphényl-4-yl)-1 -(4-hydroxycoumarin-3-yl)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ou 4-hydroxy-3-(3-(4'-bromo-4-biphénylyl)-1,2,3,4-tétrahydro-1 -naphtyl) coumarine de formule (I) ci-après :
(i); dans laquelle sont représentés les numéros des carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ; - le terme « stéréo-isomères » désigne des isomères de même formule semi-développée, mais dont la position relative des atomes diffère dans l’espace. L’expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères dont la conversion de l’un en l’autre de ces stéréo-isomères de configuration nécessite une rupture/reformation d’une liaison covalente interatomique. Ainsi, l’expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères qui ne sont pas des isomères de conformation (ou « rotamères », dont la conversion de l’un en l’autre des isomères de conformation s’accompagne uniquement d’une rotation d’une partie de la molécule selon l’axe d’une liaison σ (sigma) formée par recouvrement axial d’orbitales) ; - le terme « diastéréoisomères » désigne des stéréo-isomères de configuration qui ne sont pas des énantiomères, c’est-à-dire des stéréo-isomères de configuration qui présentent le même enchaînement d'atomes, mais dont les structures ne sont ni superposables, ni image l'une de l'autre dans un miroir ; - le terme « quantité » s’entend d’une quantité molaire, d’une quantité massique ou d’une quantité volumique. Les proportions sont donc des proportions d’une quantité molaire rapportée à une quantité molaire, d’une quantité massique rapportée à une quantité massique, ou d’une quantité volumique rapportée à une quantité volumique ; - le terme « sensiblement » indique, de façon habituelle, qu'une caractéristique structurelle ou fonctionnelle ne doit pas être prise comme marquant une discontinuité abrupte, qui n'aurait pas de sens physique, mais couvre non seulement cette structure ou cette fonction, mais également des variations légères de cette structure ou de cette fonction qui produisent, dans le contexte technique considéré, un effet de même nature, sinon de même degré ; - les expressions « chromatographie liquide à haute pression » ou « chromatographie liquide à haute performance » (« CLHP ») désignent la chromatographie « HPLC » ou « High Performance Liquid Chromatography », et ; - l’expression « temps de rétention » désigne la durée mesurée au sommet du pic de chromatogramme pendant laquelle un composé est retenu sur la colonne de chromatographie.
Les inventeurs ont observé que l’analyse du brodifacoum par chromatographie liquide à haute pression dans les conditions décrites ci-dessus fait apparaître quatre signaux ou pics correspondant à quatre composés de même formule chimique développée et correspondant à la formule (I) du brodifacoum. Ils ont déterminé, par l’analyse de préparations de brodifacoum comprenant des proportions variables de diastéréoisomères du brodifacoum, que les deux composés correspondants au signal présentant un temps de rétention ti d’une valeur de l’ordre de 15,4 min et au signal présentant un temps de rétention t4 d’une valeur de l’ordre de 26,3 min sont les énantiomères, dit énantiomère E, et dit énantiomère E4, de l’un des deux diastéréoisomères, dit diastéréoisomère Di)4, du brodifacoum et que les deux composés correspondants au signal présentant un temps de rétention t2 d’une valeur de l’ordre de 17,2 min et au signal présentant un temps de rétention t3 d’une valeur de l’ordre de 19,9 min sont les énantiomères, dit énantiomère E2 et dit énantiomère E3 d’un autre diastéréoisomère, dit diastéréoisomère D23 du brodifacoum distinct dudit diastéréoisomère Di;4. L’un des deux diastéréoisomères du brodifacoum est un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène du brodifacoum sont de même configuration absolue et l’autre des deux diastéréoisomères du brodifacoum est un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène du brodifacoum sont de configurations absolues distinctes, les configurations absolues étant déterminées selon les règles séquentielles de priorité et la nomenclature de Cahn, Ingold et Prelog (CIP).
Les valeurs des temps de rétention t3, t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier, notamment avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l’ordre d’élution des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum reste inchangé.
Les inventeurs ont réalisé une telle séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale LUX® Cellulose-3 (00F-4492-B0, phenomenex, Le Pecq, France). Le cas échéant, il est possible de réaliser successivement plusieurs étapes de chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale aux fins d’obtenir la quantité dudit énantiomère E4 recherchée et la pureté souhaitée. Les inventeurs ont obtenu ledit énantiomère E4 purifié et séparé dudit énantiomère Ei et séparé de l’énantiomère E2 et de l’énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D23 du brodifacoum par élimination de la phase mobile de la fraction collectée et contenant ledit énantiomère E4. Π est possible de réaliser une telle séparation par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale préparative, c’est-à-dire sur une colonne chirale de plus grandes dimensions -notamment de diamètre intérieur supérieur à 2 mm- et dans laquelle la phase stationnaire présente une granulométrie supérieure à 3 pm.
Il n’était pas connu antérieurement de pouvoir séparer ledit énantiomère E4 dudit énantiomère Ej et des énantiomères (E2 et E3) du diastéréoisomère D2,3 du brodifacoum.
Les inventeurs qui sont parvenus à séparer ledit énantiomère E4 et ledit énantiomère Ei et à isoler ledit énantiomère E4, ont aussi découvert, de façon totalement surprenante et imprévisible, que : - la rémanence dudit énantiomère E4 dans le foie de rongeurs cibles nuisibles femelles ayant consommé un tel appât rodonticide selon l’invention est supérieure à la rémanence dudit énantiomère E4 dans le foie de rongeurs cibles nuisibles mâles ayant consommé un tel appât rodonticide, et que ; - la rémanence dudit énantiomère E4 dans le foie de rongeurs cibles nuisibles femelles est suffisante pour être rodonticide au moins pour les rongeurs cibles nuisibles femelles.
Ils ont aussi constaté qu’il est ainsi possible de contrôler une population de rongeurs cibles nuisibles en visant sélectivement les femelles de rongeurs cibles nuisibles, en limitant le nombre de portées de rongeurs cibles nuisibles.
Ainsi, ledit énantiomère E4 selon l’invention permet la réalisation d’appâts rodonticides présentant une efficacité rodonticide élevée vis-à-vis de rongeurs cibles nuisibles femelles et en limitant le nombre de portées de rongeurs cibles nuisibles tout en limitant la quantité résiduelle dudit énantiomère E4 selon l’invention dans le foie des rongeurs cibles nuisibles mâles.
Un tel appât rodonticide permet de limiter la quantité de brodifacoum résiduelle dans le foie de rongeurs cibles nuisibles mâles tout en maintenant dans le foie de rongeurs cibles nuisibles femelles une quantité de brodifacoum qui est rodonticide pour lesdites femelles de rongeurs cibles nuisibles. Un tel appât est donc moins toxique pour l’environnement et, en particulier pour des animaux -notamment par des oiseaux appartenant à des espèces protégées- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles et notamment de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide tout en conservant une activité anticoagulante suffisante, en particulier sur les femelles de rongeurs cibles nuisibles, pour que l’appât soit rodonticide.
Il n’est cependant pas exclut que certains rongeurs cibles nuisibles mâles puissent être empoisonnés par consommation élevée et réitérée d’appât rodonticide selon l’invention.
Un appât rodonticide selon l’invention comprend donc dudit énantiomère E4, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4, et dudit énantiomère E,, ledit énantiomère E4 étant l’énantiomère dudit diastéréoisomère D1;4 qui est le plus retenu (de temps de rétention de plus grande valeur) en chromatographie dans les conditions précitées des deux énantiomères dudit diastéréoisomère D14 et des deux énantiomères E2 et E3 dudit diastéréoisomère D2>3. L’invention concerne donc aussi un appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E4, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4, et dudit énantiomère E,, c'est-à-dire à l’exclusion d’un mélange dans lequel ledit énantiomère E4, et ledit énantiomère E, sont en mélange racémique équimoléculaire et non optiquement actif.
On dose ledit énantiomère E4 et ledit énantiomère E, de toute composition comprenant du brodifacoum après analyse et séparation par chromatographie liquide en utilisant une phase stationnaire chirale et une phase mobile liquide telles que décrites ci-dessus pour l’analyse des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum, en réalisant une détection quantitative des énantiomères en sortie de colonne séparative, par exemple par photométrie d’absorption, en ajustant la concentration en brodifacoum et le volume d’injection aux fins d’obtenir une détection optimale et en mesurant la valeur de l’aire sous le pic de chaque énantiomère E4 et Ei. Il est aussi possible de doser ledit énantiomère E4 et ledit énantiomère E, de toute composition comprenant du brodifacoum par spectrométrie de masse.
Selon l’invention, il est possible de réaliser un appât rodonticide comprenant des proportions prédéterminées de chacun des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum -notamment dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère Ei dudit diastéréoisomère D14 et des énantiomères E2 et E3 dudit diastéréoisomère D2,3- permettant d’optimiser l’efficacité rodonticide de cet appât rodonticide -notamment vis-à-vis des rongeurs cibles nuisibles femelles- et de limiter sa toxicité vis-à-vis de l’environnement.
Avantageusement et selon l’invention, ledit énantiomère E4 est présent dans l’appât rodonticide en quantité supérieure à la quantité dudit énantiomère Ei dans l’appât rodonticide. Avantageusement, ledit diastéréoisomère D14 du brodifacoum est donc majoritairement sous forme dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide. Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend du diastéréoisomère D14 du brodifacoum majoritairement sous forme dudit énantiomère E4.
Dans tout le texte, l’expression « ledit diastéréoisomère D|4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4 » signifie que le rapport de la quantité (massique, molaire ou volumique) dudit énantiomère E4 sur la quantité (massique, molaire ou volumique correspondante) dudit diastéréoisomère D] 4 (sous toutes ses formes énantiomères) est supérieur à 50%.
Ainsi, en particulier dans un appât rodonticide selon l’invention : - le rapport de la quantité dudit énantiomère E4 sur la somme des quantités dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère Ei est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %) ; - le rapport de la concentration dudit énantiomère E4 sur la somme de la concentration dudit énantiomère E4 et de la concentration dudit énantiomère Ei est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %), et ; - la proportion dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide est supérieure à la proportion de dudit énantiomère Ei dans l’appât rodonticide.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère Ei et de la quantité dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide est supérieur à 50%, notamment supérieur à 60%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, plus préférentiellement supérieur à 95%, particulièrement préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l’ordre de 100%.
Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère Ei et de la quantité dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide est supérieur à 75 %, de préférence compris entre 85 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 98 %.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère Ei et de la quantité dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide est compris entre 98 % et 100 %. L’appât rodonticide peut aussi comprendre une quantité dudit énantiomère Ei telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E, et de la quantité dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide est inférieur à 50 %, notamment inférieur à 25 %, préférentiellement compris entre 0 % et 25 %, en particulier inférieur à 10 %.
Avantageusement et selon l’invention, le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide. L’appât rodonticide comprend donc une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère Ej sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide, est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère E2 sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide et est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère E3 sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide.
Ainsi, en particulier, dans un appât rodonticide selon l’invention : le rapport de la quantité dudit énantiomère E4 sur la quantité du brodifacoum est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; le rapport de la quantité dudit énantiomère E4 sur la somme de la quantité dudit énantiomères Ei, de la quantité dudit énantiomères E4, et de la quantité de chacun des énantiomères E2 et E3 du diastéréoisomère D23 du brodifacoum est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; le rapport de la concentration dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide sur la concentration du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; la proportion dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide est supérieure à la proportion de l’énantiomère E, dans l’appât rodonticide et supérieure à la proportion de chacun des énantiomères E2 et E3 du diastéréoisomère D2 3 du brodifacoum dans l’appât rodonticide.
Les inventeurs ont aussi observé qu’un appât selon l’invention comprenant dudit énantiomère E4, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère E, dans lequel la quantité dudit énantiomère E4 est différente de la quantité dudit énantiomère Ei, en particulier dans lequel le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4 est susceptible de pouvoir être utilisé pour lutter contre des populations de rongeurs cibles nuisibles résistants à des traitements rodonticides connus.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 25%, notamment supérieur à 50%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l’ordre de 100%.
Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 70 %, de préférence compris entre 80 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 100 %.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est compris entre 95 % et 99 %.
Dans un autre mode de réalisation particulier, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 95%.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est compris entre 98% et 100 % -bornes incluses-.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est sensiblement de l’ordre de 100 %.
Un appât rodonticide selon l’invention peut être sensiblement exempt dudit énantiomère E1? c’est à dire que ledit énantiomère E, peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces. Un appât rodonticide selon l’invention peut aussi être sensiblement exempt dudit diastéréoisomère D2 3, c’est à dire que le diastéréoisomère D2 3 peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces. L’appât rodonticide selon l’invention peut aussi être sensiblement exempt de l’énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2 3, c’est à dire que l’énantiomère E2 peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces. L’appât rodonticide selon l’invention peut aussi être sensiblement exempt de l’énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3, c’est à dire que l’énantiomère E3 peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces.
Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât rodonticide est inférieur à 200 ppm -c’est-à-dire inférieur à 200 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide-. Avantageusement, il comprend une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât rodonticide est supérieur à 1 ppm. Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât rodonticide est compris entre 1 ppm et 200 ppm (1 mg à 200 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide), notamment compris entre 1 ppm et 100 ppm (1 mg à 100 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide), de préférence compris entre 1 ppm et 50 ppm (1 mg à 50 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide) en particulier compris entre 1 ppm et 25 ppm (1 mg à 25 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide).
Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l’ordre de 100%, et une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât rodonticide est inférieur à 200 ppm, notamment inférieur à 100 ppm, de préférence compris entre 15 ppm et 50 ppm.
Avantageusement et selon l’invention, l’excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles est choisi pour permettre une consommation de l’appât rodonticide par des rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement et selon l’invention, chaque excipient comestible est non létal pour des rongeurs cibles nuisibles. L’excipient comestible n’est pas rodonticide en lui-même.
Avantageusement et selon l’invention, l’excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale -notamment des graines de céréale décortiquées-, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières, par exemple des graines de luzerne -notamment sous forme décortiquée, sous forme de mouture, sous forme de farine, sous forme de flocons ou de son-. L’excipient comestible peut comprendre tout support susceptible d'être consommé par des rongeurs cibles nuisibles.
Avantageusement, l’excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des aliments d’origine végétale et des aliments d’origine animale. Avantageusement, l’excipient comestible comprend au moins un aliment choisi pour pouvoir stimuler l’appétit des rongeurs cibles nuisibles. En particulier, cet aliment est choisi dans le groupe formé de graines d’une ou de plusieurs céréales, de graines décortiquées d’une ou de plusieurs céréales, des moutures de graines d’une ou de plusieurs céréales, des flocons de graines d’une ou de plusieurs céréales, du son d’une ou de plusieurs céréales et des farines de graines d’une ou de plusieurs céréales. À titre d’exemple, on choisit les céréales dans le groupe formé de l'avoine, du blé, de l'orge, du maïs, du soja et du riz.
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des aliments sucrés. Par exemple, il peut s’agir d’aliments comprenant au moins un sucre choisi dans le groupe formé du saccharose, du lactose, du fructose et du glucose. Il peut s’agir d’un sirop de sucre -par exemple, d’un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de l'amidon- ou d’un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de saccharose (sirop de sucre inverti), ou d’un sirop de sucre de betterave, ou d’un sirop d'érable ou d’un sirop de canne à sucre, ou d’un sirop obtenu à partir d’une plante du genre stevia.
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des flocons et de la farine de l’albumen de noix de coco (coprah).
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des noix, des noisettes et des amandes -râpées et/ou en poudre-.
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des graisses végétales, des huiles végétales (par exemple huile de colza, graisse de soja, huile de tournesol, beurre de cacao, huile d'arachides, beurre d'arachides, huile de maïs, huile de palme), des graisses animales et des huiles animales (beurre, saindoux, huile de poisson).
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des protéines d’origine végétale et des protéines d’origine animale. À titre d’exemple, on peut citer par exemple le lait en poudre -notamment le lait écrémé en poudre-, les œufs -notamment les œufs en poudre-, les hydrolysats de protéines d’origine animale et les hydrolysats de protéines d’origine végétale.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts solides comprenant du brodifacoum et un excipient comestible solide. Avantageusement, l’appât rodonticide est un solide à l’état divisé, par exemple sous forme de boulettes ou de granulés. Avantageusement, l’appât rodonticide peut être un solide sous forme de bloc ou de pâte susceptibles d’être consommés par les rongeurs cibles nuisibles ou d’un matériau solide susceptible d’être rongé par les rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement, l’appât rodonticide solide selon l’invention peut se présenter sous forme d’un bloc rigide, d’un bloc semi-rigide, d’une mousse, d’une poudre ou d’un gel.
Avantageusement, l’appât rodonticide se présentant sous forme d’une poudre, sous forme d’une mousse ou sous forme d’un gel est adapté pour pouvoir souiller la fourrure du(de) rongeur(s) cible(s) nuisible(s) et pour pouvoir être ingérée par celui(ceux)-ci lors de son(leur) toilettage.
Il peut s’agir d’un appât rodonticide solide comprenant du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère E^ Il peut aussi s’agir d’un appât rodonticide solide comprenant du brodifacoum et dans lequel ledit diastéréoisomère D14 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4. Il peut aussi s’agir d’un appât rodonticide solide comprenant du brodifacoum dans lequel le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant du brodifacoum et un excipient comestible liquide. L’appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles. Il peut s’agir d’une solution de brodifacoum dans un solvant du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère E,. Il peut aussi s’agir d’une solution de brodifacoum dans un solvant du brodifacoum et dans ledit diastéréoisomère Dl4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4. Il peut aussi s’agir d’une solution de brodifacoum dans un solvant du brodifacoum et dans laquelle le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4.
Il peut aussi s’agir d’une suspension de brodifacoum à l’état solide dans un milieu liquide. Il peut aussi s’agir d’une émulsion de brodifacoum dans un milieu liquide. L’invention concerne aussi un appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E4, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère Ei, le brodifacoum de l’appât rodonticide étant optiquement actif. Il n’est cependant pas exclu que le brodifacoum de l’appât rodonticide selon l’invention, comprenant dudit énantiomère E4, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère E1? soit lui-même optiquement inactif.
Avantageusement, l’appât rodonticide comprend au moins un colorant. Un tel colorant permet en particulier de donner audit appât rodonticide une couleur aisément détectable et identifiable par une personne manipulant l’appât rodonticide.
Avantageusement, l’appât rodonticide comprend au moins un conservateur apte à assurer sa conservation lors de son stockage. Avantageusement, l’appât rodonticide comprend au moins un composé amérisant de type benzoate de dénatonium, aussi connu sous le nom de « Bitrex® » destiné à réduire les risques de consommation accidentelle par des organismes non cibles.
Avantageusement, dans une variante particulière, l’appât rodonticide selon l’invention comprend exclusivement du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère E1? à titre de substance rodonticide. En particulier, l’appât rodonticide selon l’invention est exempt de toute autre substance anticoagulante à usage rodonticide distincte du brodifacoum. Cependant, dans cette variante selon l’invention, l’appât rodonticide peut comprendre toute substance anti-nuisible autre qu’un rodonticide, telle qu’une substance insecticide et/ou acaricide.
Avantageusement, dans une autre variante particulière, l’appât rodonticide selon l’invention comprend du brodifacoum à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère E, et au moins une autre substance distincte du brodifacoum à titre de substance rodonticide. Cette autre substance rodonticide distincte du brodifacoum peut être une autre substance anticoagulante -notamment du type anti-vitamine K ou non-ou toute autre substance rodonticide non anticoagulante. L’invention concerne donc aussi un procédé chromatographique de séparation des stéréo-isomères de configuration -notamment dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4 d’un diastéréoisomère, dit diastéréoisomère Di 4, du brodifacoum et, le cas échéant, dudit énantiomère E2 et dudit énantiomère E3 d’un autre diastéréoisomère, dit diastéréoisomère D23-du brodifacoum. L’invention concerne en particulier un procédé chromatographique d’obtention dudit énantiomère E4. L’invention concerne donc un procédé chromatographique de séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum, dans lequel : - on choisit une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthyl-benzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ; - on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 ml7min ; - on réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum à température ambiante lors de laquelle ; - on introduit en tête de la colonne pour chromatographie une composition liquide comprenant dudit énantiomère E4, puis ; - on entraîne la composition liquide avec la phase mobile dans la colonne pour chromatographie dans des conditions propres à entraîner une séparation dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4, et on collecte une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère E4 avec un temps de rétention t4 de valeur telle que t4 < t2 < t3 < t4 ; t4, t2 et t3 représentant les temps de rétention des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère E4, séparément dudit énantiomère E,, et ; - on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère E4. L’invention vise aussi un stéréo-isomère de configuration -notamment ledit énantiomère E4- du brodifacoum obtenu par un procédé selon l’invention. L’invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles -notamment un procédé de lutte sélective contre des rongeurs cibles nuisibles femelles- dans lequel on dissémine une quantité d’appât rodonticide comprenant : - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et d’un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E1? du brodifacoum distinct dudit énantiomère E4 ; o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t4 ; o ledit énantiomère Ei présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention ti ; les temps de rétention E et t4 étant de valeurs telles que t4 < t2 < t3 < t4 ; t2 et t3 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée : - sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À; - en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mE/min ; - par injection dans la colonne pour chromatographie d’un volume de 1 pL de composition de brodifacoum à une concentration de 1 pg de brodifacoum par millilitre d’acétonitrile. L’invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d’appât rodonticide selon l’invention, ladite quantité d’appât disséminé étant suffisante pour être rodonticide.
Dans un tel procédé, avantageusement et selon l’invention, on dissémine un appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E4, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et dudit énantiomère Ei. Dans une variante d’un tel procédé, avantageusement et selon l’invention, on dissémine un appât rodonticide comprenant une quantité dudit énantiomère E4 supérieure à la quantité dudit énantiomère Ei. Ledit diastéréoisomère DL4 est donc majoritairement sous forme dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide. Dans une variante d’un tel procédé, avantageusement et selon l’invention, le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E^
Avantageusement et en variante selon l’invention, on choisit en combinaison : - l’excipient comestible ; - une quantité dudit énantiomère E4 distincte de la quantité dudit énantiomère Ei dans l’appât rodonticide ; - une proportion dudit énantiomère E4 par rapport au brodifacoum ; - une proportion massique de brodifacoum dans l’appât rodonticide, et ; - une quantité d’appât rodonticide disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité du brodifacoum suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide au cours d’une période unique de 24 heures consécutives.
Un appât rodonticide selon cette variante de l’invention est un appât rodonticide mortel en une seule prise ou « one-shot » en anglais. Avantageusement et selon cette variante de l’invention, la proportion massique du brodifacoum dans l’appât rodonticide est inférieure à 200 ppm, notamment comprise entre 2 ppm et 100 ppm, de préférence comprise entre 2 ppm et 50 ppm, plus préférentiellement comprise entre 2 ppm et 25 ppm, encore plus préférentiellement comprise entre 15 ppm et 25 ppm.
Avantageusement et dans une autre variante selon l’invention, on choisit en combinaison : - l’excipient comestible ; - une quantité dudit énantiomère E4 distincte de la quantité dudit énantiomère Ei dans l’appât rodonticide ; - une proportion dudit énantiomère E4 par rapport au brodifacoum ; - une proportion massique de brodifacoum dans l’appât rodonticide, et ; - une quantité d’appât rodonticide disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité du brodifacoum ; o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles, c’est-à-dire généralement non létale pour les rongeurs cibles nuisibles, consommant dudit appât rodonticide pendant une période de 24 heures consécutives, et ; o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide pendant plusieurs périodes de 24 heures.
Avantageusement et selon l’invention, lesdites périodes de 24 heures sont consécutives.
Cette autre variante de l’invention vise donc aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d’appât rodonticide létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant durablement cet appât rodonticide et généralement non létale pour les rongeurs ou des animaux non cibles consommant accidentellement cet appât rodonticide. On parle alors d’un procédé de lutte « multi-doses » ou, en anglais, « multi-feeding ». Dans un tel procédé selon l’invention, la consommation d’appât rodonticide par un rongeur cible nuisible pendant une durée de 24 heures peut être insuffisante pour entraîner la mort dudit rongeur, alors qu’une consommation répétée d’appât rodonticide pendant au moins deux jours consécutifs permet d’entraîner la mort du rongeur cible nuisible.
Avantageusement et dans cette autre variante selon l’invention la proportion massique de brodifacoum peut être comprise entre 2 ppm et 100 ppm -notamment comprise entre 2 ppm et 50 ppm, en particulier comprise entre 2 ppm et 15 ppm- par rapport à l’appât rodonticide.
Cette autre variante de l’invention vise donc un procédé de lutte contre une population de rongeurs cibles nuisibles dans lequel on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d’appât rodonticide susceptible d’être ingérée par les rongeurs cibles nuisibles, ladite quantité d’appât rodonticide étant suffisante pour tuer des rongeurs cibles nuisibles consommant ledit appât rodonticide pendant plusieurs jours.
Avantageusement, dans cette autre variante d’un procédé selon l’invention, on adapte la quantité d’appât rodonticide disséminé, la proportion massique du brodifacoum dans l’appât rodonticide, la proportion dudit énantiomère E4 par rapport à la proportion dudit énantiomère E,, et la proportion dudit énantiomère E4 dans le brodifacoum pour que la consommation de l’appât rodonticide soit létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant quotidiennement de l’appât rodonticide pendant au moins 2 périodes de 24 heures -notamment de 3 à 7 périodes-, lesdites périodes pouvant être consécutives.
Avantageusement, dans cette autre variante d’un procédé selon l’invention, la proportion dudit énantiomère E4 étant supérieure à 95% -notamment de l’ordre de 100%- par rapport au brodifacoum dans l’appât, la proportion massique du brodifacoum par rapport à l’appât rodonticide est comprise entre 2 ppm et 30 ppm -notamment de l’ordre de 15 ppm-. Dans un procédé selon l’invention, on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d’appât rodonticide suffisante pour satisfaire quotidiennement l’appétit des rongeurs cibles nuisibles, l’appât rodonticide comprenant majoritairement dudit énantiomère E4 par rapport audit diastéréoisomère Dl 4 et par rapport au brodifacoum.
Dans un procédé selon l’invention, on adapte la quantité d’appât rodonticide disséminé, la quantité dudit énantiomère E4 par rapport à la quantité dudit énantiomère Ei, la quantité dudit énantiomère E4 par rapport à la quantité du brodifacoum et la proportion massique du brodifacoum par rapport à l’appât rodonticide de façon à permettre une consommation d’appât rodonticide pendant plusieurs jours par des rongeurs cibles nuisibles, tout en limitant : - les risques d’intoxication primaire de mammifères et oiseaux non cibles susceptibles de ne consommer qu’occasionnellement et accidentellement un tel appât rodonticide ; - les risques d’intoxication secondaire, par exemple des prédateurs des rongeurs cibles, susceptibles de consommer des rongeurs -morts ou vifs- cibles ayant ingéré une quantité dudit appât. L'invention concerne également un appât rodonticide comprenant du brodifacoum, un procédé de lutte contre les rongeurs cibles nuisibles et un procédé de séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum caractérisés en combinaison par tout ou partie des caractéristiques mentionnées ci-dessus ou ci-après. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante et des exemples donnés à titre uniquement non limitatif et qui se réfèrent aux figures annexées, dans lesquelles : - la figure 1 est un chromatogramme représentatif de la séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum sur colonne chirale ; - la figure 2 est une représentation en histogramme de la rémanence dudit énantiomère E4 dans le foie de rats mâles et dans le foie de rats femelles.
Extraction du brodifacoum de foies de rats gavés avec du brodifacoum
Homogénéisation de l’échantillon de foie
On pèse avec précision de l’ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie de rat que l’on place dans un tube en polypropylène de 50 mL. On ajoute 10 mL d’acétone et on soumet la suspension à une homogénéisation au moyen d’un homogénéisateur/disperseur Ultra-Turrax® pendant une durée de l’ordre de 30 secondes. On rince la tige de l’homogénéisateur/disperseur à l’eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d’acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l’homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation par minute). On collecte et on transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l’échantillon à une évaporation sous un flux d’azote (N2) à la température de 40°C de façon à former un extrait sec. Élimination des lipides
Dans le tube contenant l’extrait sec, on ajoute 1 mL d’acétonitrile de façon à solubiliser l’extrait sec. On lave la solution d’acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d’hexane. L’extrait débarrassé des lipides est séché sous un flux d’azote (N2) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d’eau ultra-pure (Milli-Q). L’échantillon est homogénéisé sous vortex.
Extraction du brodifacoum sur phase solide (« SPE, Solid
Phase Extraction »)
On fait passer 1 mL de dichlorométhane (CH2Cf2), puis 1 mL de méthanol (CH3OH), puis 1 mL d’eau ultra-pure (Milli-Q) sur une cartouche Oasis HLB lcc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite en tête de la cartouche préalablement conditionnée l’extrait de foie débarrassé des lipides (lmL CH30H/H20 Milli-Q) et contenant le brodifacoum. L’extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol (CH3OH) et d’eau ultra-pure (H20) en proportion volumique de 90/10. On sèche la cartouche par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d’élution formée de dichlorométhane (CH2Cf2) et de méthanol (CH3OH) en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant le brodifacoum. On évapore le solvant de l’éluat sous un flux d’azote (N2) à la température de 40°C. On reprend l’échantillon dans avec 0,5 mL d’acétonitrile (NC-CH3) et on filtre la solution d’acétonitrile contenant le brodifacoum sur filtre de porosité 0,2 pm.
Analyse des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum
On sépare les énantiomères des diastéréoisomères du brodifacoum dans les extraits de foie. On réalise une telle séparation des énantiomères des diastéréoisomères du brodifacoum par chromatographie liquide à haute pression en utilisant une colonne chirale LUX® Cellulose-3 (00F-4492-BO, phenomenex, Le Pecq, France) à titre de phase stationnaire et un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 à titre de phase mobile avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min. On injecte sur la colonne 1 pL de l'extrait hépatique de foie préparé comme préalablement décrit. La détection est effectuée par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) en mode d’ionisation négative par électronébulisation (ESI, « ElectroSpray Ionization »). La température du gaz nébuliseur est de 350°C et son débit est de 8 L/min. La pression du gaz nébuliseur est portée à 2700 hPa. En particulier, on détecte les transitions MRM (« Multiple Reaction Monitoring » m/z 521,1 —> 78,9 et m/z 521,1 —> 135,1 correspondant aux signaux du brodifacoum. Le chromatogramme obtenu est représenté en figure 1 à titre d’exemple.
Les valeurs des temps de rétention de chacun des énantiomères du brodifacoum sont, dans les conditions décrites, de : - ti = 15,4 min pour ledit énantiomère Ej ; - t2 = 17,2 min pour l’énantiomère E2 du diastéréoisomère D23 ; - t3 = 19,9 min pour l’énantiomère E3 du diastéréoisomère D2 3, et ; - t4 = 26,3 min pour ledit énantiomère E4 selon l’invention.
Les valeurs des temps de rétention t|, t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier selon les conditions chromatographiques et avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l’ordre d’élution des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum reste inchangé. Â titre indicatif, pour une variation de température de quelques degrés Celsius, la valeur du temps de rétention (t|) dudit énantiomère Ei peut varier entre 15,0 min et 15,7 min, la valeur du temps de rétention (t2) de l’énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2 3 peut varier entre 16,9 min et 17,5 min, la valeur du temps de rétention (t3) de l’énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2 3 peut varier entre 18,8 min et 20,0 min et la valeur du temps de rétention (t4) dudit énantiomère E4 peut varier entre 26,0 min et 27,5 min. Rémanence hépatique des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum chez le rat
On administre par voie orale (« peros ») à des rats de laboratoire (rats Sprague Dawley, Charles River, Saint germain sur l’Arbresle, France) mâles et femelles, âgés de 8 semaines et pesant entre 180 et 200 g, une solution comprenant du brodifacoum dans un mélange d’huile végétale et de DMSO à 5 % de façon que la quantité de brodifacoum ingérée par chaque rat soit de l’ordre de 3,4 mg de brodifacoum par kilogramme de rat. Les rats gavés sont traités quotidiennement par administration par voie sous cutanée d’une dose de vitamine Kl à raison de 1U par rat de façon à maintenir les rats en vie pendant la durée de l'expérience.
Le rapport de la quantité dudit diastéréoisomère D2,3 sur la quantité de brodifacoum dans la solution de gavage comprenant du brodifacoum est de 70% et le rapport de la quantité dudit diastéréoisomère D, 4 sur la quantité de brodifacoum dans la solution de gavage comprenant du brodifacoum est de 30%. À 1 jour (J+l), 2 jours (J+2), 5 jours (J+5), 7 jours (J+7) et 9 jours (J+9) après le gavage, on euthanasie 3 rats mâles et trois rats femelles préalablement anesthésiés à l’isoflurane, on prélève le foie des rats euthanasiés puis on extrait du foie et on dose les quantités de chacun des énantiomères des diastéréoisomères du brodifacoum présents dans le foie des rats gavés. Les résultats obtenus sur les rats (mâles et femelles) sont donnés au tableau 1 ci-après dans lequel les valeurs de la concentration de chacun des énantiomères du brodifacoum dans le foie sont la moyenne des valeurs mesurées sur 3 rats et exprimées en nanogramme (ng) par gramme de foie. Ces résultats sont représentés en figure 2.
Tableau 1
Compte tenu des proportions respectives dudit diastéréoisomère D2,3 (70%) et dudit diastéréoisomère DL4 (30%) dans la solution de gavage, la proportion dudit énantiomère E4 selon l’invention dans la solution de gavage est de l’ordre de 15%.
La concentration dudit énantiomère E4 selon l’invention est plus faible, voire nulle, chez les mâles alors qu’elle reste élevée chez les femelles au moins jusqu’à J+9. Un appât rodonticide comprenant majoritairement dudit énantiomère E4 permet de viser spécifiquement des rongeurs cibles nuisibles femelles, de limiter le nombre de portées de rongeurs cibles nuisibles et de limiter la quantité résiduelle dudit énantiomère E4 selon l’invention dans le foie des rongeurs cibles nuisibles mâles susceptibles d’être consommé par des prédateurs ou charognards de ces rongeurs cibles nuisibles.
Il va de soi que l’invention peut faire l’objet de nombreuses variantes de réalisation et applications. En particulier, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l’appât rodonticide que dans les modes de mise en œuvre du procédé.
Claims (9)
- REVENDICATIONS 1/ - Appât rodonticide comprenant : - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4 et d’un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère Ei, du brodifacoum distinct dudit énantiomère E4 ; o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t4 ; o ledit énantiomère Ei présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention ti ; les temps de rétention E et t4 étant de valeurs telles que t4 < t2 < t3 < t4 ; t2 et t3 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée : - sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ; - en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ; - par injection dans la colonne pour chromatographie d’un volume de 1 pL de composition de brodifacoum à une concentration de 1 pg de brodifacoum par millilitre d’acétonitrile.
- 2/ - Appât selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit énantiomère E4 est présent dans l’appât rodonticide en quantité supérieure à la quantité dudit énantiomère Ei dans l’appât rodonticide.
- 3/ - Appât selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E4 dans l’appât rodonticide.
- 4/ - Appât selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu’il comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 25%.
- 5/ - Appât selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu’il comprend une quantité dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 95%.
- 6/ - Appât selon l’une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu’il comprend une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât est inférieur à 200 ppm.
- 7/ - Appât selon l’une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu’il comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières, par exemple des graines de luzerne.
- 8/ - Procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles, dans lequel on dissémine une quantité d’appât rodonticide comprenant : au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E4et d’un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E1? du brodifacoum distinct dudit énantiomère E4 ; o ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t4 ; o ledit énantiomère Ei présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention ti ; les temps de rétention E et t4 étant de valeurs telles que t4 < t2 < t3 < t4 ; t2 et t3 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4, ladite analyse étant effectuée : o sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À; o en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mE/min ; o par injection dans la colonne pour chromatographie d’un volume de 1 pL de composition de brodifacoum à une concentration de 1 pg de brodifacoum par millilitre d’acétonitrile.
- 9/ - Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu’on choisit en combinaison : - l’excipient comestible ; - une quantité dudit énantiomère E4 distincte de la quantité dudit énantiomère Ei dans l’appât rodonticide ; - une proportion dudit énantiomère E4 par rapport au brodifacoum ; - une proportion massique de brodifacoum dans l’appât rodonticide, et ; - une quantité d’appât rodonticide disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité du brodifacoum suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide au cours d’une période unique de 24 heures consécutives 10/ - Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu’on choisit en combinaison : - l’excipient comestible ; - une quantité dudit énantiomère E4 distincte de la quantité dudit énantiomère Ei dans l’appât rodonticide ; - une proportion dudit énantiomère E4 par rapport au brodifacoum ; - une proportion massique de brodifacoum dans l’appât rodonticide, et ; - une quantité d’appât rodonticide disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité du brodifacoum ; o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide pendant une période de 24 heures consécutives, et ; o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide pendant plusieurs périodes de 24 heures. 11/-Procédé chromatographique d’obtention dudit énantiomère E4 d’un appât rodonticide selon l’une des revendications 1 à 7, dans lequel : - on choisit une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ; - on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 ml7min ; - on réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum à température ambiante lors de laquelle ; - on introduit en tête de la colonne pour chromatographie une composition liquide comprenant dudit énantiomère E4, puis ; - on entraîne la composition liquide avec la phase mobile dans la colonne pour chromatographie dans des conditions propres à entraîner une séparation dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4, et on collecte une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère E4 avec un temps de rétention t4 de valeur telle que t4 < t2 < t3 < t4 ; t4, t2 et t3 représentant les temps de rétention des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère E4, séparément dudit énantiomère E,, et ; - on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère E4.
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2015
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| VAN HEERDEN P S ET AL: "Efficient Asymmetric Synthesis of the Four Diastereomers of Diphenacoum and Brodifacoum", TETRAHEDRON, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, AMSTERDAM, NL, vol. 53, no. 17, 1 April 1997 (1997-04-01), pages 6045 - 6056, XP004105831, ISSN: 0040-4020, DOI: 10.1016/S0040-4020(97)00254-8 * |
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