WO2017043779A1 - 유방암 관련 stk32c 유전자 및 이의 용도 - Google Patents

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이창훈
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동국대학교 산학협력단
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    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
    • G01N2333/9121—Phosphotransferases in general with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. general tyrosine, serine or threonine kinases

Definitions

  • the present invention relates to a breast cancer-related STK32C (Serine threonine kinase 32C) gene and its use, and more particularly, to a composition for diagnosing, preventing or treating breast cancer using the STK32C gene.
  • STK32C Sesine threonine kinase 32C
  • the incidence of domestic breast cancer was the fourth to fifth carcinoma among female cancers in the 1990s. Since 2001, most cancers are known to be the most advanced cancers except for thyroid cancer, which is cured and has a good prognosis. For example, in Korean female cancer patients, the incidence of age standardization of carcinoma can be confirmed that the incidence of breast cancer increases most rapidly except for thyroid cancer, which is rapidly increasing due to the spread of diagnostic devices such as ultrasound. Therefore, the development of accurate diagnosis and treatment of breast cancer is needed.
  • cancer malignant tumor
  • surgical surgery is a method of removing most of the diseased tissue, such surgical surgery is inadequate to treat tumors in areas that are difficult to remove or to treat dispersible tumors.
  • radiation therapy is mainly used for acute inflammatory diseases, benign or malignant tumors, endocrine dysfunction and allergic diseases, etc., and is generally used effectively for malignant tumors consisting of rapidly dividing cells.
  • Disadvantages of radiotherapy include weakening or loss of function of normal tissues and skin disease at the treatment site after treatment, especially in children with long-term development, delayed intelligence development or bone development disorders.
  • chemotherapeutic agents generally include dose limiting toxicity (DLT), which should be noted when administering such drugs.
  • DLT dose limiting toxicity
  • mucositis has a dose limiting toxicity (DLT) to several anticancer agents (anti-metabolite cytotoxin 5-fluorouracil, mesotrexate and antitumor antibiotic doxorubicin).
  • DLT dose limiting toxicity
  • anticancer agents anti-metabolite cytotoxin 5-fluorouracil, mesotrexate and antitumor antibiotic doxorubicin.
  • Many of the side effects of chemotherapy are severe, requiring hospitalization or painkillers to treat pain.
  • side effects from chemotherapeutic agents and radiation therapy are emerging as important issues in the treatment of cancer patients.
  • the present invention has been made to solve the above problems, the present inventors have confirmed the breast cancer inhibition effect by inhibiting the expression of the STK32C (Serine threonine kinase 32C) gene and completed the present invention based on this.
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of breast cancer comprising STK32C (Serine threonine kinase 32C) expression or activity inhibitors as an active ingredient.
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • Another object of the present invention to provide a composition for diagnosing breast cancer, comprising an agent for measuring the expression or activity level of STK32C.
  • another object of the present invention is a) treating the test substance to cells expressing STK32C; b) measuring the level of expression or activity of STK32C in said cells; And c) selecting a test substance that inhibits the expression or activity of STK32C as a breast cancer treatment substance, as compared to a control which has not been treated with the test substance.
  • another object of the present invention is to a) measure the level of expression or activity of STK32C in a biological sample derived from the subject; And b) predicting or diagnosing breast cancer when the measured STK32C expression or activity is higher than a normal control group, to provide an information providing method for diagnosing breast cancer.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of breast cancer comprising STK32C (Serine threonine kinase 32C) expression or activity inhibitors as an active ingredient.
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • the expression inhibitor of STK32C may comprise one or more selected from the group consisting of antisense oligonucleotides, siRNA, shRNA, microRNA and ribozyme specifically binding to STK32C.
  • the STK32C activity inhibitor may comprise one or more selected from the group consisting of compounds, peptides, proteins, aptamers and antibodies that specifically bind to STK32C.
  • the composition may inhibit the phosphorylation of YB-1.
  • the present invention provides a composition for diagnosing breast cancer, comprising an agent for measuring the expression or activity level of STK32C.
  • the agent for measuring the expression or activity level of STK32C may comprise one or more selected from the group consisting of primers, probes, and antibodies that specifically bind to STK32C.
  • the present invention comprises the steps of: a) treating a test substance to a cell expressing STK32C; b) measuring the level of expression or activity of STK32C in said cells; And c) selecting a test substance that inhibits the expression or activity of STK32C as a breast cancer treatment substance, as compared to a control which has not been treated with the test substance.
  • the cells expressing STK32C may be selected from the group consisting of MCF-10A, MCF-7, MDA-MB-231 and SK-BR-3 breast cancer cells.
  • the step of measuring the level of expression or activity of STK32C may measure the degree of phosphorylation of YB-1 by STK32C.
  • the present invention comprises the steps of a) measuring the expression or activity of STK32C in a biological sample derived from the subject; And b) predicting or diagnosing breast cancer when the measured expression or activity of STK32C is higher than a normal control group, and provides information providing method for diagnosing breast cancer.
  • the present invention provides a method for treating breast cancer, comprising administering the STK32C expression or activity inhibitor to a subject.
  • the present invention provides the use of an inhibitor of expression or activity of STK32C for the manufacture of a therapeutic agent for breast cancer.
  • the present invention relates to a breast cancer-related STK32C (Serine threonine kinase 32C) gene and its use, confirmed the high expression of the STK32C gene in various breast cancer cells or tissues, and experimentally confirmed the change of breast cancer cells according to the STK32C gene expression difference .
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • YB-1 a substrate protein for inhibiting breast cancer by inhibiting expression of the STK32C gene
  • the STK32C gene is expected to be used as a target gene for the diagnosis or treatment of breast cancer.
  • Figure 3a is a result showing the change in proliferative capacity in MCF-7 cells (STK32C / MCF7) overexpressed the STK32C gene.
  • Figure 3b is a result showing the change in proliferative capacity in MDA-MB-231 cells (siSTK32C / MDA-MB-231) suppressed the expression of the STK32C gene.
  • Figure 3c is a result showing the change in proliferation capacity in the SK-BR-3 cells (siSTK32C / SK-BR-3) suppressed the expression of the STK32C gene.
  • Figure 4a is a result showing the change in the cell cycle in MCF-7 cells (STK32C) overexpressing the STK32C gene.
  • Figure 4b is a result showing the change in the cell cycle in MDA-MB-231 cells (siSTK32C) suppressed the expression of the STK32C gene.
  • Figure 4c is a result showing the change in the cell cycle in the SK-BR-3 cells (siSTK32C) suppressed the expression of the STK32C gene.
  • STK32C MCF-7 cells overexpressing the STK32C gene
  • MDA-MB-231, SK-BR which suppressed the expression of the STK32C gene Results are shown in -3 cells.
  • Figure 6a is a result of observing colony (Colony) formation of MCF-7 cells without overexpressing the STK32C gene through a microscope.
  • Figure 6b is a result of observing colony (Colony) formation of MCF-7 cells overexpressing the STK32C gene through a microscope.
  • MCF-7-STK32C MCF-7 cells
  • Figure 8a is a result of observing the colony (Colony) formation of the MDA-MB-231 cells did not inhibit the expression of the STK32C gene through a microscope.
  • Figure 8b is a result of observing the colony (Colony) formation of the MDA-MB-231 cells suppressed the expression of the STK32C gene through a microscope.
  • Figure 9 compares the number of colonies (Colony) of MCF-7 cells (MDA-MB-231-siSTK32C) suppressed the expression of the control (MDA-MB-231-mock) and STK32C gene in MDA-MB-231 cells One result.
  • 10A shows the results of comparing the expression of N-cadherin, Vimentin, and E-cadherin in Western blots in MCF-10A, MCF-7, and MDA-MB-231 cells.
  • 10B is a result of comparing the expression of N-cadherin, Vimentin, and E-cadherin by RT-PCR in MCF-10A, MCF-7, and MDA-MB-231 cells.
  • FIG. 11 shows the results of confirming the expression of N-cadherin, Vimentin, and E-cadherin in MCF-10A, MCF-7, and MDA-MB-231 cells through confocal microscopy.
  • Figure 12a is the result of confirming the movement of cancer cells in MCF-10 cells (pSTK32C) overexpressing the STK32C gene.
  • Figure 12b is the result of confirming the movement of cancer cells in MDA-MB-231 cells (STK32C siRNA) suppressed the expression of STK32C gene.
  • Figure 12c is the result of confirming the movement of cancer cells in SK-BR-3 cells (STK32C siRNA) suppressed the expression of STK32C gene.
  • Figure 13a is a result confirming the infiltration of cancer cells in MCF-10 cells (pSTK32C) overexpressing the STK32C gene.
  • Figure 13b is a result confirming the infiltration of cancer cells in MDA-MB-231 cells (STK32C siRNA) suppressed the expression of STK32C gene.
  • Figure 13c is a result confirming the infiltration of cancer cells in SK-BR-3 cells (STK32C siRNA) that suppressed the expression of the STK32C gene.
  • FIG. 14 is a result showing the volume change of cancer tissues over time in the mouse animal model (MDA-MB-231-luc / shSTK32C) injected with the MDA-MB-231 cell line suppressing the expression of the STK32C gene.
  • 15A is a result of visually confirming the volume change of cancerous tissues in a mouse animal model (MDA-MB-231-Luc / shCon) injected with the MDA-MB-231 cell line that did not inhibit the STK32C gene.
  • 15B is a result of visually confirming the change in the volume of cancer tissues in a mouse animal model (MDA-MB-231-luc / shSTK32C) injected with the MDA-MB-231 cell line which inhibited the expression of the STK32C gene.
  • 16A shows the results of confirming the expression of Ki67, a proliferation marker, in a mouse animal model (MDA-MB-231-Luc / shCon) injected with the MDA-MB-231 cell line that did not inhibit the STK32C gene.
  • FIG. 16B shows the results of confirming the expression of Ki67, a proliferation marker, in a mouse animal model (MDA-MB-231-luc / shSTK32C) injected with the MDA-MB-231 cell line which inhibited the expression of the STK32C gene.
  • Figure 17a is a result of confirming the metastasis to lung tissue in the mouse animal model (MDA-MB-231-Luc / shCon) injected with the MDA-MB-231 cell line that does not inhibit the STK32C gene through the evaluation of luciferase activity.
  • Figure 17b is the result of confirming the metastasis to lung tissue in the mouse animal model (MDA-MB-231-Luc / shSTK32C) injected with MDA-MB-231 cell line suppressing the expression of STK32C gene through luciferase activity evaluation.
  • Figure 18a is confirmed by H & E (Hematoxillin & Eosin) staining metastasis to lung tissue in the mouse animal model (MDA-MB-231-Luc / shCon) injected with MDA-MB-231 cell line that did not inhibit the STK32C gene to be.
  • H & E Hematoxillin & Eosin
  • Figure 18b is confirmed by H & E (Hematoxillin & Eosin) staining the transition to lung tissue in the mouse animal model (MDA-MB-231-luc / shSTK32C) injected with MDA-MB-231 cell line suppressing the expression of STK32C gene The result is.
  • H & E Hematoxillin & Eosin
  • Figure 19a is the result of immunoprecipitating STK32C with an antibody to discover the substrate protein of STK32C.
  • Figure 19b is the result of immunoprecipitation with the substrate protein YB-1 to verify the substrate protein of STK32C.
  • the present inventors confirmed the high expression of STK32C (Serine threonine kinase 32C) gene in various breast cancer cells or tissues, and the proliferation, cell cycle, colony formation, epithelial mesenchymal migration, and invasiveness of breast cancer cells according to the STK32C gene expression difference. It was confirmed. In addition, in the mouse animal model, the effect of inhibiting breast cancer by STK32C gene expression inhibition was confirmed, and based on this, the present invention was completed.
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of breast cancer, comprising an STK32C expression or activity inhibitor as an active ingredient.
  • prevention means any action that inhibits or delays the onset of breast cancer by administration of a pharmaceutical composition according to the present invention.
  • treatment means any action that improves or advantageously changes the symptoms for breast cancer by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention.
  • breast cancer which is a disease to be prevented or treated by the composition of the present invention, is a mass composed of cancer cells formed in the breast, and in general, breast cancer refers to a cancer occurring in the ducts and lobules of the breast.
  • the basic treatment for breast cancer is surgical resection of the lesion, and all patients need surgical resection unless there is metastasis to other organs.
  • chemotherapy, radiation therapy, anti-hormonal therapy, and the like are required as adjuvant therapy, and the composition of the present invention provides a breast cancer therapeutic agent targeting STK32C as part of gene target therapy.
  • STK32C Serine / threonine kinase 32C gene
  • STK32C Serine / threonine kinase 32C gene
  • the expression inhibitor of STK32C is from the group consisting of antisense oligonucleotides, siRNA, shRNA, microRNA and ribozymes that specifically bind to STK32C
  • STK32C activity inhibitor is a compound, peptide, protein, although it may include one or more selected from the group consisting of aptamers and antibodies, any agent capable of inhibiting the expression or activity of a gene may be included without limitation.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the active ingredient.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is commonly used in the formulation, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose , Polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like.
  • it may further include a lubricant, wetting agent, sweetener, flavoring agent, emulsifier, suspending agent, preservative and the like.
  • compositions of the present invention can be administered orally or parenterally (eg, applied intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) according to the desired method, and the dosage is determined by the condition and weight of the patient, Depending on the extent, drug form, route of administration, and time, it may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level refers to the type of disease, the severity, the activity of the drug, It may be determined according to the sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of release, the duration of treatment, factors including the drug used concurrently and other factors well known in the medical field.
  • the pharmaceutical compositions according to the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered as single or multiple doses. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the age, sex, condition, weight of the patient, the absorption of the active ingredient in the body, the inactivation rate and excretion rate, the type of disease, the drug used in general 0.001 to 150 mg, preferably 0.01 to 100 mg per 1 kg of body weight may be administered daily or every other day, or divided into 1 to 3 times a day.
  • the dose may be increased or decreased depending on the route of administration, the severity of obesity, sex, weight, age, etc., the above dosage does not limit the scope of the present invention by any method.
  • the present invention provides a method for treating breast cancer comprising administering the pharmaceutical composition to a subject.
  • subject means a subject in need of treatment for a disease, and more specifically, a mammal, such as a primate, mouse, dog, cat, horse and cow, which is human or non-human. .
  • the present invention provides a composition for diagnosing breast cancer comprising an agent for measuring the expression or activity level of STK32C (Serine threonine kinase 32C).
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • diagnosis refers to the act of identifying a pathological condition, ie the presence or characteristics of breast cancer, by administration of a composition according to the invention.
  • the agent for measuring the expression or activity level of STK32C may comprise one or more selected from the group consisting of primers, probes, proteins, and antibodies specifically binding to STK32C, but the expression or activity level of the gene Any agent capable of measuring can be included without limitation.
  • the present invention by confirming the high expression of the STK32C gene in a variety of breast cancer cells and tissues, confirmed the close relationship between the onset of breast cancer and the STK32C gene (see Example 1), based on this, as the STK32C gene is overexpressed breast cancer cells Proliferation, cell cycle, colony formation, epithelial mesenchymal migration, and invasion were promoted, and as the STK32C gene was inhibited, the opposite trend was observed (see Example 2).
  • mice animal model was used to confirm the breast cancer inhibition effect by the STK32C gene inhibition (see Example 3), YB-1 protein was identified as a substrate of the STK32C gene bar, through the regulation of the expression or activity of the STK32C gene It was specifically confirmed that breast cancer can be treated (see Example 4).
  • the present invention comprises the steps of a) culturing cells expressing STK32C without a test substance or test substance; b) measuring the level of expression or activity of STK32C in said cells; And c) selecting a test substance that inhibits the expression or activity of STK32C as a breast cancer treatment substance as compared to the group cultured without the test substance.
  • cells expressing STK32C may be selected from the group consisting of MCF-10A, MCF-7, and MDA-MB-231 breast cancer cells, but may be included without limitation as long as the cells can confirm the expression change of the STK32C gene. have.
  • the step of measuring the expression or activity level of STK32C polymerase reaction PCR
  • reverse transcription polymerase reaction RT-PCR
  • competitive reverse transcription polymerase reaction Competitive RT-PCR
  • Realtime RT-PCR RNase protection assay
  • Northern blotting DNA chip
  • Western blotting enzyme linked immunosorbent assay
  • radioimmunoassay RIA
  • radioimmunodiffusion Ouchterlony immunodiffusion
  • rocket immunoelectrophoresis immunoprecipitation assay, complement fixation assay, protein chip
  • It can be measured by one or more methods selected from the group consisting of in vitro kinase assay, and preferably can be measured by the degree of phosphorylation of YB-1 by STK32C, but is not limited thereto. no.
  • the invention comprises the steps of a) measuring the level of expression or activity of STK32C in a biological sample derived from the subject; And b) predicting or diagnosing breast cancer when the measured STK32C expression or activity is higher than a normal control group.
  • biological samples include solid tissue samples such as blood and other liquid samples of biological origin, biopsy samples, tissue cultures or cells derived therefrom. More specifically, tissues, extracts, cell lysates, whole blood, plasma, serum, saliva, ocular fluid, cerebrospinal fluid, sweat, urine, milk, ascites fluid, synovial fluid, peritoneal fluid, and the like, and the sample may be an animal, preferably a mammal. It can be obtained from animals, most preferably humans.
  • the sample may be pretreated prior to use in detection, and may include, for example, filtration, distillation, extraction, concentration, inactivation of interference components, addition of reagents, and the like.
  • nucleic acids and proteins can be separated from the sample and used for detection.
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • expression of the STK32C gene was confirmed in various breast cancer cells or tissues. Specifically, the expression of STK32C gene was confirmed by RT-PCR using STK32C primer in ER / PR positive, HER2 positive, and Triple negative (ER / PR / HER2 nagative) breast cancer cells.
  • Infiltrating duct carcinoma, metastaic carcinoma, sarcoma, intraductal papillary carcinoma, atypical medullary carcinoma, and metaplastic carcinoma was compared using a breast cancer tissue array.
  • the expression of the STK32C gene was low in normal mammary tissues (Normal breast), but high in various breast cancer tissues, and was particularly high in invasive ductal cancer.
  • Example 2-1 Identify the effect on the proliferation of breast cancer cells
  • MCF-7 cells and MDA-MB-231 cells having different expressions of the STK32C gene were used to confirm the proliferative change of breast cancer cells according to STK32 gene expression. Specifically, in MCF-7 cells with relatively low expression of STK32C gene, the STK32C gene was overexpressed, whereas in MDA-MB-231 cells with high expression of STK32C gene, the STK32C gene was gene silencing. The gene silencing was performed using siRNA shown in Table 1 below.
  • MCF-7 cells STK32C / MCF7 overexpressing STK32C gene increased breast cancer cell proliferation compared to the control group (FIG. 3A), while MDA- suppressed expression of STK32C gene.
  • MB-231, SK-BR-3 cells siSTK32C / MDA-MB-231) were confirmed to reduce the proliferation of breast cancer cells (Fig. 3b, 3c). The results indicate that the overexpression of the STK32C gene promotes the proliferation of breast cancer cells, and the proliferation is inhibited by the inhibition of STK32C gene expression.
  • Example 2-2 Identification of the effect on the cell cycle of breast cancer cells
  • cancer cells lose control of cell division and repeat only cell cycles related to division and proliferation.
  • the change in cell cycle according to expression of STK32C gene was confirmed. Specifically, after overexpressing or inhibiting the STK32C genes of MCF-7 cells and MDA-MB-231 cells in the same manner as in Example 2-1, each cell cycle (Sub-G1, G1, S, G2 / M ) And the distribution of As a control, MCF-7 and MDA-MB-231 cells before overexpressing or inhibiting the STK32C gene were used.
  • Example 2-3 Identify the effect on colony formation of breast cancer cells
  • MCF-7 cell line overexpressing the STK32C gene and MDA-MB-231 cell line which inhibited the expression of the STK32C gene were cultured in soft agarose medium, and then colony formation was confirmed under a microscope. Numbers were quantified and compared. As a control, MCF-7 and MDA-MB-231 cells before overexpressing or inhibiting the STK32C gene were used.
  • Example 2-4 Identify the effect on metastasis of breast cancer cells
  • epithelial-mesenchymal transition (ETM) is activated to promote cancer metastasis.
  • ETM epithelial-mesenchymal transition
  • metastatic epithelial metastasis according to the expression of the STK32C gene changes to metastasis of the cancer.
  • the impact was confirmed.
  • the mesenchymal markers N-cadherin and Vimentin and the epithelial marker E-cadherin Expression patterns were confirmed by Western blot and RT-PCR.
  • the expression pattern of the markers was again confirmed through confocal microscopy.
  • MCF-10A, MCF-7 and MDA-MB-231 cells before overexpressing or inhibiting the STK32C gene were used.
  • Example 2-5 Identification of the effect on invasiveness of breast cancer cells
  • MCF-10 cells overexpressing the STK32C gene and MDA-MB-231 cells suppressing the expression of the STK32C gene were used to confirm the change of invasiveness of breast cancer cells according to STK32 gene expression. Specifically, in MCF-10A cells, the STK32C gene was overexpressed, while in MDA-MB-231 cells, the gene silencing of the STK32C gene was performed, and the degree of breast cancer cell invasion was quantified and compared. As a control group, MCF-10A cells and MDA-MB-231 cells before overexpressing or inhibiting the STK32C gene were used.
  • the mobility and invasiveness of the MCF-10A (pSTK32C) overexpressing the STK32C gene was significantly increased by 2 to 4 times (FIG. 12A and FIG. 13A), while the expression of the STK32C gene was increased.
  • the MDA-MB-231 cell line (STK32C siRNA) and SK-BR-3 cells (STK32CsiRNA) that inhibited it was confirmed that the mobility and invasiveness was significantly reduced (Figs. 12B, 12C and 13B, 13C).
  • Example 2 based on the experimental results of Example 2, to determine the effect of inhibiting breast cancer according to the inhibition of STK32C gene expression using a mouse animal model.
  • the MDA-MB-231 cell line containing Luciferase the MDA-MB-231-Luc / shSTK32C cell line silencing STK32C gene expression was cultured, and the cell line was injected into the mammary fad of SCID mice to breast cancer. Induced. Thereafter, the volume change of the cancer cells was confirmed for 11 weeks, and after removing the cancer tissue, the volume change of the cancer tissue was visually observed, and the change of the expression of Ki67, a proliferation marker, was compared through immunochemical staining.
  • a mouse animal model (MDA-MB-231-Luc / shCon) injected with the MDA-MB-231 cell line that did not inhibit the STK32C gene was used.
  • mice injected with the MDA-MB-231 cell line that suppressed the expression of the STK32C gene (MDA-MB-231-Luc / shSTK32C) compared with the control group compared with the volume of the cancer tissue.
  • mice injected with the MDA-MB-231 cell line that suppressed the expression of the STK32C gene (MDA-MB-231-Luc / shSTK32C) compared with the control group compared with the volume of the cancer tissue.
  • the expression of the proliferation marker Ki67 was also reduced (Figs. 16a and 16b).
  • luciferase activity was investigated using Luciferin, and lung tissue was extracted and compared with the changes of infiltrated cells through H & E (Hematoxillin & Eosin) staining.
  • H & E Hematoxillin & Eosin
  • a mouse animal model (MDA-MB-231-Luc / shCon) injected with the MDA-MB-231 cell line that did not inhibit the STK32C gene was used.
  • FIG. 17 luciferase activity was confirmed throughout the body in the control group (FIG. 17A), whereas mice injected with the MDA-MB-231 cell line that suppressed the expression of the STK32C gene (MDA-MB-231). -Luc / shSTK32C) was observed to be localized (FIG. 17B).
  • FIG. 18 the M ' -injected MDA-MB-231 cell line that suppressed the expression of the STK32C gene (MDA-MB-), while metastasis to lung tissue in the control group also progressed through H & E staining (FIG. 18a). 231-Luc / shSTK32C) confirmed that little metastasis occurred (FIG. 18B).
  • the substrate protein of STK32C was discovered and the specific site of the substrate protein phosphorylated by STK32 gene was identified. Specifically, the immunoprecipitation method (Immunoprecipitation) was confirmed the substrate protein of STK32C, and the results were verified by immunoprecipitation again using the detected substrate protein. In addition, after site-directed mutagenesis of specific sites (serine 165, serine 167) where phosphorylation is expected in the substrate protein, the in vitro kinase assay was performed using the modified substrate protein and STK32C as substrates and enzyme sources, respectively. ATP labeled with P32 was used.
  • YB-1 protein was detected as a substrate protein of STK32C (FIG. 19A), and the result was verified by confirming that SKT32C was detected even in immunoprecipitation using YB-1 (FIG. 19A). 19b).
  • SKT32C serine 167 of the YB-1 substrate protein is phosphorylated by SKT32C.
  • the present invention relates to a breast cancer-related STK32C (Serine threonine kinase 32C) gene and its use, confirmed the high expression of the STK32C gene in various breast cancer cells or tissues, and experimentally confirmed the change of breast cancer cells according to the STK32C gene expression difference .
  • STK32C Serine threonine kinase 32C
  • YB-1 a substrate protein for inhibiting breast cancer by inhibiting expression of the STK32C gene
  • the STK32C gene is expected to be used as a target gene for the diagnosis or treatment of breast cancer.

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Abstract

본 발명은 유방암 관련 STK32C(Serine threonine kinase 32C) 유전자 및 이의 용도에 관한 것으로서, 구체적으로 STK32C 유전자를 이용한 유방암의 진단, 예방, 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서, STK32C 유전자의 발현 차이에 따른 유방암 세포의 변화를 확인하였으며, STK32C 유전자의 발현 억제에 의한 유방암 억제 효과 및 기질 단백질인 YB-1을 새롭게 규명하였는바, 유방암의 치료에 있어서, 보다 근본적으로 접근하여 타겟 치료를 할 수 있을 것으로 기대된다.

Description

유방암 관련 STK32C 유전자 및 이의 용도
본 발명은 유방암 관련 STK32C(Serine threonine kinase 32C) 유전자 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 STK32C 유전자를 이용한 유방암의 진단, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
국내 유방암의 발생률은 1990년대 여성암중 4-5번째의 암종이었으나, 2001년 이후 대부분 환자가 완치되고 예후가 좋은 갑상선암을 제외하고는 가장 수위의 암으로 알려져 있다. 예컨대, 국내 여성 암환자에서 암종의 연령표준화 발생률을 보면 초음파 등 진단기기의 보급으로 인하여 급격하게 늘고 있는 갑상선암을 제외하고는 유방암의 발생률이 가장 급격하게 증가하고 있음을 확인할 수 있다. 따라서 유방암의 정확한 진단 및 치료에 대한 개발이 필요한 실정이다.
한편, 현재까지 악성종양인 암을 치료하는 방법으로 주로 3가지 치료법 즉, 외과적인 수술, 방사선 치료 및 화학요법이 있으며, 이 중 한 가지 또는 이들의 조합을 통해 암을 치료하고 있다. 구체적으로, 외과적 수술은 질병 조직을 대부분 제거하는 방법으로, 이러한 외과적 수술은 제거가 어려운 부위에 있는 종양을 치료하거나 분산성 종양을 치료하기에는 부적절하다. 또한, 방사선 치료는 급성염증성 질환, 양성 또는 악성 종양, 내분비기능장애 및 알레르기성 질환 등에 주로 사용되며, 일반적으로 급속히 분열하는 세포로 구성된 악성종양에 효과적으로 사용되고 있다. 이러한 방사선 치료의 단점으로는 방사선의 치료에 따라 정상조직의 기능 약화 또는 상실, 치료 후 치료부위에 피부질환이 발생할 우려가 있으며, 특히 장기의 발육이 진행되는 소아의 경우 지능발달 지연 또는 골 발육 장애 등 심각한 부작용을 초래할 수 있다. 아울러, 화학요법은 암세포의 복제 또는 대사를 교란시킴으로써 유방, 폐 및 정소의 암을 치료하는데 널리 이용되고 있는데, 이러한 방법에 있어서 가장 큰 단점은 암 치료에 이용되는 전신성 화학요법에 의하여 유도되는 부작용이다. 화학요법에 의한 부작용은 환자의 생명에 중요한 영향을 미치며 치료에 대한 환자의 불안감을 증가시킬 수 있다. 또한, 화학치료제와 관련된 부작용으로는 일반적으로 이러한 약물의 투여시 주의해야 하는 용량 제한 독성(dose limiting toxicity, DLT)이 있다. 예를 들면, 점막염은 여러 항암제(항대사물질 세포독소제인 5-플루오로우라실, 메소트렉세이트 및 항종양 항생제인 독소루비신) 등에 대한 용량 제한 독성(DLT)이 있다. 이러한 화학 요법의 부작용 중 대부분은 심한 경우, 입원을 요하거나 통증을 치료하기 위하여 진통제를 필요로 하기도 한다. 이처럼, 화학치료제 및 방사선 치료에 의한 부작용들은 암 환자의 치료에 있어서 중요한 문제로 부각되고 있다.
이에, 상기와 같은 종래의 암 치료 기술의 문제점을 해소하기 위한 대안으로서, 암 관련 유전자를 타겟으로 하는 치료가 각광 받고 있다. 특히, 유방암의 발병과 관련된 유전자로서, BRCA1(Breast Cancer gene 1) 및 BRCA2(Breast Cancer gene 2)등이 보고된바 있으며, 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으나(한국공개특허 10-2013-0057760), 아직은 미비한 실정이다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 STK32C(Serine threonine kinase 32C) 유전자의 발현 억제에 의한 유방암 저해 효과를 확인하고 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.
이에, 본 발명의 목적은 STK32C(Serine threonine kinase 32C)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는, 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 STK32C의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 유방암 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 a) STK32C를 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계; b) 상기 세포에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및 c) 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 STK32C의 발현 또는 활성을 억제시키는 시험물질을 유방암 치료 물질로 선정하는 단계를 포함하는, 유방암 치료 물질의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 a) 피검체 유래의 생물학적 시료에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및 b) 상기 측정된 STK32C의 발현 또는 활성이 정상 대조군 보다 높을 경우 유방암에 걸린 것으로 예측 또는 진단하는 단계를 포함하는, 유방암 진단을 위한 정보 제공방법을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 STK32C(Serine threonine kinase 32C)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는, 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 STK32C의 발현 억제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, shRNA, microRNA 및 리보자임으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 STK32C 활성 억제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 화합물, 펩티드, 단백질, 앱타머 및 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 YB-1의 인산화를 억제시킬 수 있다.
본 발명은 STK32C의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 유방암 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 STK32C의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브, 및 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명은 a) STK32C를 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계; b) 상기 세포에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및 c) 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 STK32C의 발현 또는 활성을 억제시키는 시험물질을 유방암 치료 물질로 선정하는 단계를 포함하는, 유방암 치료 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 STK32C를 발현하는 세포는 MCF-10A, MCF-7, MDA-MB-231 및 SK-BR-3 유방암 세포로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계는 STK32C에 의한 YB-1의 인산화 정도를 측정할 수 있다.
본 발명은 a) 피검체 유래의 생물학적 시료에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및 b) 상기 측정된 STK32C의 발현 또는 활성이 정상 대조군보다 높을 경우 유방암에 걸린 것으로 예측 또는 진단하는 단계를 포함하는, 유방암 진단을 위한 정보 제공방법을 제공한다.
본 발명은 상기 STK32C의 발현 또는 활성 억제제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 유방암 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 유방암 치료제의 제조를 위한 STK32C의 발현 또는 활성 억제제의 용도를 제공한다.
본 발명은 유방암 관련 STK32C(Serine threonine kinase 32C) 유전자 및 이의 용도에 관한 것으로서, 다양한 유방암 세포 또는 조직에서 STK32C 유전자의 높은 발현을 확인하였으며, STK32C 유전자 발현 차이에 따른 유방암 세포의 변화를 실험적으로 확인하였다. 또한, STK32C 유전자의 발현 억제에 의한 유방암 저해 효과 및 기질 단백질인 YB-1을 새롭게 규명하였는바, 상기 STK32C 유전자는 유방암의 진단 또는 치료를 위한 타겟 유전자로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 ER/PR positive, HER2 positive, 및 Triple negative(ER/PR/HER2 nagative) 유방암 세포에서 STK32C 유전자의 발현을 RT-PCR을 통해 확인한 결과이다.
도 2는 다양한 유방암 조직에서, STK32C 유전자 발현을 유방암 tissue array를 통해 확인한 결과이다.
도 3a는 STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포(STK32C/MCF7)에서 증식능 변화를 나타낸 결과이다.
도 3b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포(siSTK32C/MDA-MB-231)에서 증식능 변화를 나타낸 결과이다.
도 3c는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 SK-BR-3 세포(siSTK32C/SK-BR-3)에서 증식능 변화를 나타낸 결과이다.
도 4a는 STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포(STK32C)에서 세포 주기의 변화를 나타낸 결과이다.
도 4b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포(siSTK32C)에서 세포 주기의 변화를 나타낸 결과이다.
도 4c는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 SK-BR-3 세포(siSTK32C)에서 세포 주기의 변화를 나타낸 결과이다.
도 5는 STK32 유전자 발현 차이에 따른 세포주기 관련 단백질의 발현 변화를 확인한 것으로서, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포(STK32C), 및 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231, SK-BR-3 세포에서 발현을 나타낸 결과이다.
도 6a는 STK32C 유전자를 과발현시키지 않은 MCF-7 세포의 콜로니(Colony) 형성을 현미경을 통해 관찰한 결과이다.
도 6b는 STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포의 콜로니(Colony) 형성을 현미경을 통해 관찰한 결과이다.
도 7은 MCF-7 세포에서 대조군(MCF7-mock)과 STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포(MCF7-STK32C)의 콜로니(Colony) 개수를 비교한 결과이다.
도 8a는 STK32C 유전자의 발현을 억제시키지 않은 MDA-MB-231 세포의 콜로니(Colony) 형성을 현미경을 통해 관찰한 결과이다.
도 8b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포의 콜로니(Colony) 형성을 현미경을 통해 관찰한 결과이다.
도 9는 MDA-MB-231 세포에서, 대조군(MDA-MB-231-mock)과 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MCF-7 세포(MDA-MB-231-siSTK32C)의 콜로니(Colony) 개수를 비교한 결과이다.
도 10a는 MCF-10A, MCF-7, 및 MDA-MB-231 세포에서, N-cadherin, Vimentin, 및 E-cadherin의 발현을 웨스턴 블롯을 통해 비교한 결과이다.
도 10b는 MCF-10A, MCF-7, 및 MDA-MB-231 세포에서, N-cadherin, Vimentin, 및 E-cadherin의 발현을 RT-PCR을 통해 비교한 결과이다.
도 11은 MCF-10A, MCF-7, 및 MDA-MB-231 세포에서, N-cadherin, Vimentin, 및 E-cadherin의 발현을 공초점 현미경을 통해 확인한 결과이다.
도 12a는 STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-10 세포(pSTK32C)에서 암세포의 이동을 확인한 결과이다.
도 12b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포(STK32C siRNA)에서 암세포의 이동을 확인한 결과이다.
도 12c는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 SK-BR-3 세포(STK32C siRNA)에서 암세포의 이동을 확인한 결과이다.
도 13a는 STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-10 세포(pSTK32C)에서 암세포의 침윤을 확인한 결과이다.
도 13b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포(STK32C siRNA)에서 암세포의 침윤을 확인한 결과이다.
도 13c는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 SK-BR-3 세포(STK32C siRNA)에서 암세포의 침윤을 확인한 결과이다.
도 14는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-luc/shSTK32C)에서 시간의 경과에 따른 암 조직의 부피 변화를 나타낸 결과이다.
도 15a는 STK32C 유전자를 억제시키지 않은 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-Luc/shCon)에서 암 조직의 부피 변화를 육안으로 확인한 결과이다.
도 15b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-luc/shSTK32C)에서 암 조직의 부피 변화를 육안으로 확인한 결과이다.
도 16a는 STK32C 유전자를 억제시키지 않은 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-Luc/shCon)에서 증식 마커인 Ki67의 발현을 확인한 결과이다.
도 16b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-luc/shSTK32C)에서 증식 마커인 Ki67의 발현을 확인한 결과이다.
도 17a는 STK32C 유전자를 억제시키지 않은 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-Luc/shCon)에서 폐 조직으로의 전이를 luciferase 활성 평가를 통해 확인한 결과이다.
도 17b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-Luc/shSTK32C)에서 폐 조직으로의 전이를 luciferase 활성 평가를 통해 확인한 결과이다.
도 18a는 STK32C 유전자를 억제시키지 않은 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-Luc/shCon)에서 폐 조직으로의 전이를 H&E(Hematoxillin & Eosin) 염색을 통해 확인한 결과이다.
도 18b는 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-luc/shSTK32C)에서 폐 조직으로의 전이를 H&E(Hematoxillin & Eosin) 염색을 통해 확인한 결과이다.
도 19a는 STK32C의 기질 단백질 발굴을 위하여 STK32C를 항체로 면역침강시킨 결과이다.
도 19b는 STK32C의 기질 단백질 검증을 위하여 기질 단백질인 YB-1으로 면역침강시킨 결과이다.
도 20은 STK32C와 site directed mutagenesis에 의해 변형된 YB-1을 각각 효소원과 기질로 사용하여 in vitro kinase assay를 실시한 결과이다.
본 발명자들은, 다양한 유방암 세포 또는 조직에서, STK32C(Serine threonine kinase 32C) 유전자의 높은 발현을 확인하였으며, STK32C 유전자 발현 차이에 따른 유방암 세포의 증식, 세포주기, 콜로니 형성, 상피간엽이행, 침윤성의 변화를 확인하였다. 또한, 마우스 동물모델에서, STK32C 유전자 발현 억제에 의한 유방암 억제 효과를 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 STK32C의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는, 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 유방암을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 유방암에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 조성물에 의한 예방, 치료 대상 질병인 유방암은 유방에 생긴 암 세포로 이루어진 종괴로서, 일반적으로 유방암은 유방의 유관과 소엽에서 발생한 암을 의미한다. 유방암의 기본적 치료는 병변의 외과적 절제이며, 다른 장기에 전이가 없는 한, 모든 환자는 외과적 절제가 필요하다. 이와 더불어, 보조요법으로서, 항암 화학요법, 방사선 치료, 항호르몬 치료 등이 요구되고 있으며, 본 발명의 조성물은 유전자 표적 치료의 일환으로서, STK32C를 표적으로 하는 유방암 치료제를 제공한다.
본 발명에서, 유방암 치료의 표적 유전자인 STK32C(Serine/threonine kinase 32C) 유전자는 Serine/threonine protein 카이나제 중 하나로서, Sweet Taste Signaling과 관련되어 있다고 알려져 있으나, STK32C의 발현 또는 활성 억제를 통한 유방암 치료에 대해서는 아직 보고된 바가 없는 실정이다.
본 발명에서, STK32C의 발현 억제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, shRNA, microRNA 및 리보자임으로 이루어진 군으로부터, STK32C 활성 억제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 화합물, 펩티드, 단백질, 앱타머 및 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으나, 유전자의 발현 또는 활성을 억제시킬 수 있는 제제라면 제한없이 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이때, 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성셀룰로스, 폴리비닐피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 다른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래 의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1kg 당 0.001 내지 150mg, 바람직하게는 0.01 내지 100mg을 매일 또는 격일 투여하거나, 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감 될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 유방암 치료방법을 제공한다. 본 발명에서 "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는, 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말 및 소 등의 포유류를 의미한다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 STK32C(Serine threonine kinase 32C)의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 포함하는 유방암 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "진단"이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 병리 상태, 즉 유방암의 존재 또는 특징을 확인하는 행위를 의미한다.
본 발명에서, STK32C의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브, 단백질, 및 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으나, 유전자의 발현 또는 활성 수준을 측정할 수 있는 제제라면 제한없이 포함될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 다양한 유방암 세포와 조직에서 STK32C 유전자의 높은 발현을 확인함으로써, 유방암의 발병과 STK32C 유전자간 밀접한 관련성을 확인하였으며(실시예 1 참조), 이를 토대로 STK32C 유전자가 과발현 될수록 유방암 세포의 증식, 세포주기, 콜로니 형성, 상피간엽이행, 및 침윤이 촉진되며, STK32C 유전자가 억제될수록 상기와 반대의 경향성을 나타냄을 확인하였다(실시예 2 참조). 또한, 마우스 동물모델을 이용하여 STK32C 유전자 억제에 의한 유방암 저해 효과를 확인하였으며(실시예 3 참조), 상기 STK32C 유전자의 기질로 YB-1 단백질을 규명하였는바, STK32C 유전자의 발현 또는 활성 조절을 통해 유방암을 치료할 수 있음을 구체적으로 확인하였다(실시예 4 참조).
이에, 본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 a) STK32C를 발현하는 세포를 시험물질 또는 시험물질 없이 배양하는 단계; b) 상기 세포에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및 c) 시험물질 없이 배양한 군과 비교하여 STK32C의 발현 또는 활성을 억제시키는 시험물질을 유방암 치료 물질로 선정하는 단계를 포함하는 유방암 치료 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명에서, STK32C를 발현하는 세포는 MCF-10A, MCF-7, 및 MDA-MB-231 유방암 세포로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, STK32C 유전자의 발현 변화를 확인할 수 있는 세포라면 제한없이 포함될 수 있다.
본 발명에서, 상기 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계는 중합효소반응(PCR), 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응 (Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블롯팅(Northern blotting), DNA 칩, 웨스턴 블롯팅(Western blotting), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선 면역 분석 (Radioimmunoassay, RIA), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니 (Ouchterlony) 면역확산법, 로케트 (rocket) 면역전기영동, 면역침전 분석법 (Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 단백질 칩, 및 In vitro kinase assay로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 방법으로 측정할 수 있으며, 바람직하게는 STK32C에 의한 YB-1의 인산화 정도를 통하여 측정할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 a) 피검체 유래의 생물학적 시료에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및 b) 상기 측정된 STK32C의 발현 또는 활성이 정상 대조군보다 높을 경우 유방암에 걸린 것으로 예측 또는 진단하는 단계를 포함하는 유방암 진단을 위한 정보 제공방법을 제공한다.
본 발명에서, 생물학적 시료는 혈액 및 생물학적 기원의 기타 액상 시료, 생검 표본, 조직 배양과 같은 고형 조직 시료 또는 이로부터 유래된 세포가 포함된다. 보다 구체적으로 조직, 추출물, 세포 용해물, 전혈, 혈장, 혈청, 침, 안구액, 뇌척수액, 땀, 뇨, 젖, 복수액, 활액, 복막액 등일 수 있으며, 상기 시료는 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간으로부터 수득될 수 있다.
상기 시료는 검출에 사용하기 전에 전처리할 수 있으며, 예를 들어, 여과, 증류, 추출, 농축, 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등을 포함할 수 있다. 또한, 상기 시료로부터 핵산 및 단백질을 분리하여 검출에 사용할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 유방암 세포 또는 조직에서의 STK32C의 발현 확인
본 실시예에서는, 유방암의 발병과 서열번호 1의 STK32C(Serine threonine kinase 32C) 유전자간 관련성을 확인하기 위하여, 다양한 유방암 세포 또는 조직에서 STK32C 유전자의 발현을 확인하였다. 구체적으로, ER/PR positive, HER2 positive, 및 Triple negative(ER/PR/HER2 nagative) 유방암 세포에서 STK32C primer를 이용한 RT-PCR을 통해 STK32C 유전자의 발현 여부를 확인하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, ER/PR positive, HER2 positive, 및 Triple negative(ER/PR/HER2 nagative) 유방암 세포에서 STK32C 유전자의 발현을 확인하였다.
또한, 침윤성 유관암(Infiltrating duct carcinoma), 전이암(metastaic carcinoma), 육종암(Sarcoma), 관내 유두암(Intraductal papillary carcinoma), 비정형적 수질성암(Atypical medullary carcinoma), 및 화생암종(Metaplastic carcinoma)과 같이 다양한 유방암 조직과 정상 유선 조직간 STK32C 유전자 발현 양상을 유방암 tissue array를 통해 비교하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 정상 유선 조직(Normal breast)에서는 STK32C 유전자의 발현이 낮은 반면, 다양한 유방암 조직에서는 높은 발현을 나타냈으며, 특히, 침윤성 유관암에서 더욱 높게 관찰되었다.
상기 결과들을 종합하여 볼때, 유방암의 발병과 STK32C 유전자는 밀접한 관련성이 있음을 나타낸다.
실시예 2. STK32C 발현에 따른 유방암 세포의 변화 확인
본 실시예에서는, STK32C 유전자가 유방암 세포에 어떠한 영향을 미치는지를 확인하고자 하였다. 이에, STK32C 유전자의 발현 증가 또는 억제에 따른 유방암 세포의 증식, 세포주기, 콜로니 형성, 상피간엽이행, 침윤의 변화를 확인하였다.
실시예 2-1. 유방암 세포의 증식에 미치는 영향 확인
STK32C 유전자의 발현에 차이가 있는 MCF-7 세포 및 MDA-MB-231 세포를 이용하여 STK32 유전자 발현에 따른 유방암 세포의 증식능 변화를 확인하였다. 구체적으로, STK32C 유전자의 발현이 상대적으로 낮은 MCF-7 세포에서, STK32C 유전자를 과발현시킨 반면, STK32C 유전자의 발현이 상대적으로 높은 MDA-MB-231 세포에서는 STK32C 유전자를 gene silencing시켰다. 상기 gene silencing은 하기 표 1에 나타낸 siRNA를 이용하여 실시하였다.
siRNA 뉴클레오타이드 서열
sc-90587A Sense GAUGUCAAGCCUGACAACAtt (서열번호 1)
Antisense UGUUGUCAGGCUUGACAUCtt (서열번호 2)
sc-90587B Sense CCGAGAAUGACUAUCUUCAtt (서열번호 3)
Antisense UGAAGAUAGUCAUUCUCGGtt (서열번호 4)
이후 각각의 흡광도를 측정하여 유방암 세포 증식능을 비교하였으며, 대조군으로는 STK32C 유전자를 과발현 또는 억제시키기 전의 MCF-7 및 MDA-MB-231 세포를 이용하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포(STK32C/MCF7)에서 대조군과 비교하여 유방암 세포의 증식이 증가한 반면(도 3a), STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231, SK-BR-3 세포(siSTK32C/MDA-MB-231)에서는 유방암 세포의 증식이 감소함을 확인하였다(도 3b, 3c). 상기 결과는 STK32C 유전자의 과발현에 의해 유방암 세포의 증식이 촉진되며, STK32C 유전자 발현의 억제에 의해 그 증식이 저해됨을 나타낸다.
실시예 2-2. 유방암세포의 세포주기에 미치는 영향 확인
암세포는 정상세포와 달리, 세포 분열에 대한 조절작용이 상실되어 끊임없이 분열 및 증식 관련 세포 주기만을 반복하게 되는바, 본 실시예에서는 STK32C 유전자의 발현에 차이에 따른 세포 주기의 변화를 확인하였다. 구체적으로, 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 MCF-7 세포 및 MDA-MB-231 세포의 STK32C 유전자를 과발현 또는 억제시킨 후, 각각의 세포 주기(Sub-G1, G1, S, G2/M)의 분포를 수치화하여 비교하였다. 대조군으로는 STK32C 유전자를 과발현 또는 억제시키기 전의 MCF-7 및 MDA-MB-231 세포를 이용하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포(STK32C)에서, 대조군과 비교하여 분열 준비 단계인 G1 phase의 비율이 감소하고 분열 단계인 S phase의 비율이 증가한 반면(도 4a), STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포(siSTK32C)와 SK-BR-3 세포 (siSTK32C)에서는, 반대로 G1 phase의 비율이 증가하고 S phase의 비율이 감소함을 확인하였다(도 4b, 도 4c).
또한, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포 및 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포에서, 세포주기 관련 단백질의 발현 변화를 웨스턴 블롯(Western blot)을 통해 확인하였다. 대조군으로는 STK32C 유전자를 과발현 또는 억제시키기 전의 MCF-7 및 MDA-MB-231 세포를 이용하였다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포(STK32C)에서, 세포 주기의 진행에 관련된 인자인 cyclin 단백질의 발현이 증가하고 세포 주기의 진행을 저해하는 p21 및 p27 단백질의 발현이 감소한 반면, STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포(siSTK32C)에서는, 반대로 cyclin 단백질의 발현이 감소하고 p21 및 p27 단백질의 발현이 증가함을 확인하였다.
상기 결과들을 종합하여 볼 때, STK32C 유전자의 과발현에 의해 유방암 세포의 분열과 밀접한 관계가 있는 세포 주기의 진행을 촉진시키며, STK32C 유전자 발현의 억제에 의해 그 진행을 저해시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 2-3. 유방암 세포의 콜로니 형성에 미치는 영향 확인
STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포주 및 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 soft agarose 배지에 배양시켰으며, 이후, 콜로니(Colony)의 형성을 현미경을 통하여 확인하였으며, 각각의 콜로니 수를 수치화하여 비교하였다. 대조군으로는 STK32C 유전자를 과발현 또는 억제시키기 전의 MCF-7 및 MDA-MB-231 세포를 이용하였다.
그 결과, 도 6 및 도 7에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-7 세포주에서, 대조군과 비교하여 콜로니의 생성이 현저하게 증가하였으며(도 6a 및 도 6b), 상대적으로 약 5배 가량 증가함을 확인하였다(도 7). 이와 반대로, 도 8 및 도 9에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주에서는 대조군과 비교하여 콜로니의 생성이 현저하게 감소하였으며(도 8a 및 도 8b), 상대적으로 약 6배 가량 감소함을 확인하였다(도 9).
상기 결과들을 종합하여 볼 때, STK32C 유전자의 과발현에 의해 유방암 세포의 콜로니 생성이 촉진되며, STK32C 유전자 발현의 억제에 의해 그 생성이 저해됨을 나타낸다.
실시예 2-4. 유방암 세포의 전이에 미치는 영향 확인
전이성 유방암의 경우, 상피간엽이행(epithelial-mesenchymal transition, EMT)을 활성화하여 암의 전이를 촉진하는바, 본 실시예에서는 STK32C 유전자의 발현에 차이에 따른 상피간엽이행의 변화를 통해 암의 전이에 미치는 영향을 확인하였다. 구체적으로, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-10A, MCF-7 세포주 및 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주에서, 중간엽 마커인 N-cadherin 및 Vimentin과 상피엽 마커인 E-cadherin의 발현 양상을 웨스턴 블롯(Western blot) 및 RT-PCR을 통해 확인하였다. 또한, 상기 마커들의 발현 양상을 공초점 현미경(confocal microscopy)을 통해 재차 확인하였다. 대조군으로는 STK32C 유전자를 과발현 또는 억제시키기 전의 MCF-10A, MCF-7 및 MDA-MB-231 세포를 이용하였다.
그 결과, 도 10에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-10A, MCF-7 세포에서 대조군과 비교하여 중간엽 마커인 N-cadherin 및 Vimentin의 발현이 증가된 반면, 상피엽 마커인 E-cadherin은 감소하였으며, 이와 반대로, STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포에서는 대조군과 비교하여 N-cadherin 및 Vimentin의 발현이 감소한 반면, E-cadherin이 증가함을 웨스턴 블롯(도 10a) 및 RT-PCR(도 10b)를 통하여 확인하였다. 또한, 도 11에 나타낸 바와 같이, 공초점 현미경을 통해서도 상기와 동일한 실험 결과를 확인하였다.
상기 결과들을 종합하여 볼 때, STK32C 유전자의 과발현에 의해 유방암 세포의 전이가 촉진되며, STK32C 유전자 발현의 억제에 의해 그 전이가 저해됨을 나타낸다.
실시예 2-5. 유방암 세포의 침윤성에 미치는 영향 확인
STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-10 세포 및 STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포를 이용하여 STK32 유전자 발현에 따른 유방암 세포의 침윤성 변화를 확인하였다. 구체적으로 MCF-10A 세포에서, STK32C 유전자를 과발현시킨 반면, MDA-MB-231 세포에서는 STK32C 유전자를 gene silencing시킨 후, 유방암세포의 침윤 정도를 수치화하여 비교하였다. 대조군으로는 STK32C 유전자를 과발현 또는 억제시키기 전의 MCF-10A 세포 및 MDA-MB-231 세포를 이용하였다.
그 결과, 도 12 및 도 13에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자를 과발현시킨 MCF-10A(pSTK32C)에서 이동성과 침윤성이 2배 내지 4배 가량 현저히 증가한 반면(도 12a 및 도 13a), STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주(STK32C siRNA)와 SK-BR-3 세포 (STK32CsiRNA) 에서는 이동성과 침윤성이 현저하게 감소함을 확인하였다(도 12b, 12c 및 13b, 13c).
상기 결과를 종합하여 볼 때, STK32C 유전자의 과발현에 의해 유방암 세포의 침윤이 촉진되며, STK32C 유전자 발현의 억제에 의해 그 침윤이 저해됨을 나타낸다.
실시예 3. 마우스 동물모델을 이용한 유방암 저해 효과 확인
본 실시예에서는, 실시예 2의 실험 결과를 토대로, 마우스 동물모델을 이용하여 STK32C 유전자의 발현 억제에 따른 유방암 저해 효과를 확인하고자 하였다. 구체적으로, Luciferase를 포함하고 있는 MDA-MB-231 세포주에서, STK32C 유전자의 발현이 silencing된 MDA-MB-231-Luc/shSTK32C 세포주를 배양하였으며, SCID 마우스의 mammary fad에 상기 세포주를 주입하여 유방암을 유도하였다. 이후, 11주 동안 암 세포의 부피 변화를 확인하였으며, 암 조직을 적출한 후, 암 조직의 부피 변화를 육안으로 관찰하였고, 면역 화학염색법을 통하여 증식 마커인 Ki67의 발현을 변화를 비교하였다. 대조군으로는 STK32C 유전자를 억제시키지 않은 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-Luc/shCon)을 이용하였다.
그 결과, 도 14 내지 도 16에 나타낸 바와 같이, STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 (MDA-MB-231-Luc/shSTK32C)는 대조군과 비교하여 암 조직의 부피가 시간의 경과에 따라 현저하게 감소되었으며(도 14, 도 15a, 및 도 15b), 증식마커인 Ki67의 발현 역시 감소되었음을 확인하였다(도 16a 및 도 16b).
또한, 폐 조직으로의 전이를 확인하고자, Luciferin을 이용하여 luciferase의 활성을 조사하였으며, 폐 조직을 적출한 후, H&E(Hematoxillin & Eosin) 염색을 통해 침윤된 세포의 변화를 비교하였다. 대조군으로는 STK32C 유전자를 억제시키지 않은 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스 동물모델(MDA-MB-231-Luc/shCon)을 이용하였다.
그 결과, 도 17에 나타낸 바와 같이, 대조군에서는 luciferase의 활성이 전신에 걸쳐서 확인된 반면(도 17a), STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스(MDA-MB-231-Luc/shSTK32C)는 국소부위에 한정되어 관찰되었다(도 17b). 또한, 도 18에 나타낸 바와 같이, H&E 염색을 통해서도 대조군에서는 폐 조직으로의 전이가 진행된 반면(도 18a), STK32C 유전자의 발현을 억제시킨 MDA-MB-231 세포주를 주입한 마우스(MDA-MB-231-Luc/shSTK32C)는 전이가 거의 일어나지 않음을 확인하였다(도 18b).
상기 결과들을 종합하여 볼 때, 실시예 2의 결과와 마찬가지로 in vivo 상에서도 STK32C 유전자의 발현을 억제시킴으로써, 유방암 세포의 증식 및 전이를 저해시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 4. STK32C의 기질 단백질 확인
본 실시예에서는, STK32C의 기질 단백질을 발굴하고 STK32 유전자에 의해 인산화 되는 기질 단백질의 구체적인 부위를 확인하고자 하였다. 구체적으로, 면역침강법(Immunoprecipitation)을 이용하여 STK32C의 기질 단백질을 확인하였으며, 상기 검출된 기질 단백질을 이용하여 재차 면역침강시킴으로써 결과를 검증하였다. 또한, 기질 단백질에서 인산화가 예상되는 특정 부위(serine 165, serine 167)를 alanine으로 site directed mutagenesis시킨 후, 상기 변형된 기질 단백질과 STK32C를 각각 기질과 효소원으로 사용하여 in vitro kinase assay를 실시하였으며, P32로 표지된 ATP를 이용하였다.
그 결과, 도 19에 나타낸 바와 같이, STK32C의 기질 단백질로서, YB-1 단백질을 검출하였으며(도 19a), 상기 YB-1을 이용한 면역침강에서도 SKT32C가 검출됨을 확인함으로써 상기 결과를 검증하였다(도 19b). 또한, 도 20에 나타낸 바와 같이, 상기 YB-1 기질 단백질의 serine 167이 SKT32C에 의해 인산화됨을 확인하였다.
상기 결과들을 종합하여 볼 때, SKT32C의 발현 억제에 따라 YB-1 기질 단백질(serine 167)의 인산화가 저해될 수 있음을 나타낸다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
본 발명은 유방암 관련 STK32C(Serine threonine kinase 32C) 유전자 및 이의 용도에 관한 것으로서, 다양한 유방암 세포 또는 조직에서 STK32C 유전자의 높은 발현을 확인하였으며, STK32C 유전자 발현 차이에 따른 유방암 세포의 변화를 실험적으로 확인하였다. 또한, STK32C 유전자의 발현 억제에 의한 유방암 저해 효과 및 기질 단백질인 YB-1을 새롭게 규명하였는바, 상기 STK32C 유전자는 유방암의 진단 또는 치료를 위한 타겟 유전자로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

Claims (12)

  1. STK32C(Serine threonine kinase 32C)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는, 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 STK32C의 발현 억제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, shRNA, microRNA 및 리보자임으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 STK32C 활성 억제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 화합물, 펩티드, 앱타머, 단백질 및 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 YB-1의 인산화를 억제시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  5. STK32C의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 유방암 진단용 조성물.
  6. 제 5항에 있어서,
    상기 STK32C의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제는 STK32C에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브, 및 단백질, 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  7. 하기의 단계를 포함하는, 유방암 치료 물질의 스크리닝 방법:
    a) STK32C를 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계;
    b) 상기 세포에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및
    c) 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 STK32C의 발현 또는 활성을 억제시키는 시험물질을 유방암 치료 물질로 선정하는 단계.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 STK32C를 발현하는 세포는 MCF-10A, MCF-7, MDA-MB-231 및 SK-BR-3 유방암 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  9. 제 7항에 있어서,
    상기 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계는 STK32C에 의한 YB-1의 인산화 정도를 측정하는 것을 특징으로 하는, 방법.
  10. 하기의 단계를 포함하는, 유방암 진단을 위한 정보 제공방법.
    a) 피검체 유래의 생물학적 시료에서 STK32C의 발현 또는 활성 정도를 측정하는 단계; 및
    b) 상기 측정된 STK32C의 발현 또는 활성이 정상 대조군보다 높을 경우 유방암에 걸린 것으로 예측 또는 진단하는 단계.
  11. STK32C(Serine threonine kinase 32C)의 발현 또는 활성 억제제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 유방암 치료 방법.
  12. 유방암 치료제의 제조를 위한 STK32C의 발현 또는 활성 억제제의 용도.
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