WO2016186429A1 - 인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 포함하는 암 치료용 조성물 - Google Patents

인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 포함하는 암 치료용 조성물 Download PDF

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WO2016186429A1
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phosphocholine
indocyanine green
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phosphatidylcholine
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박지호
윤환준
이혜성
김현구
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Korea University Research and Business Foundation
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Korea University Research and Business Foundation
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant

Definitions

  • the present invention relates to a composition for treating cancer comprising a liposome complex encapsulated with indocyanine green, a method for treating cancer using the same, and a method for preparing the same, wherein the induction of apoptosis by therapeutically effective light irradiation is provided. It relates to a composition for treating cancer, a method for treating cancer using the same, and a method for producing the same.
  • Indocianin green is a near-infrared fluorescent die (NIR) that is licensed by the US Food and Drug Administration (FDA) for the diagnosis of the heart and liver vascular systems as well as the lymphatic system.
  • NIR near-infrared fluorescent die
  • FDA US Food and Drug Administration
  • indocyanine green is known as an excellent probe for imaging metastatic lymph nodes and mapping of lymph nodes for early diagnosis of breast cancer.
  • indocyanine green has low hydrophilicity, low light stability, low photon yield, and low sensitivity.
  • indocyanine green is susceptible to nonspecific aggregation, has a disadvantage of being chemically decomposed by external light, solvent and temperature change, and has a problem of being rapidly absorbed into serum proteins and rapidly removed through the liver due to low molecular weight and hydrophobic characteristics. have.
  • indocyanine green probes have been studied, and indocyanine green is trapped in nanoparticles, or polymers are used to examine in vivo and in vitro stability of indocyanine green.
  • indocyanine green is trapped in nanoparticles, or polymers are used to examine in vivo and in vitro stability of indocyanine green.
  • indocyanine green is combined with liposomes applicable in the body and applied to the composition for treating cancer.
  • Cancer phototherapy is based on light, and is a method of treating cancer by radiating light at a tumor site, rather than by dangerous and expensive surgery.
  • Phototherapy is nondestructive, simple and has fewer side effects than surgical procedures. In addition, there is no need for general anesthesia, little pain of the patient, a short period of stability and recovery as well as the advantage that can be repeated several times.
  • phototherapy technology that combines silica nanoparticles with gold-coated nanoshells and near infrared light
  • phototherapy technology that combines single wall carbon nanotubes (SWCNT) with near infrared light
  • SWCNT single wall carbon nanotubes
  • the inventors of the present application include a complex in which indocyanine green is encapsulated in liposomes, and solve the conventional problems through a composition for treating cancer that can induce apoptosis by therapeutically effective light irradiation. It was confirmed that the desired cancer treatment effect can be achieved, and completed the present invention.
  • An object of the present invention is to provide a composition for treating cancer comprising a liposome complex in which indocyanine green is encapsulated by inducing apoptosis by therapeutically effective light irradiation and exhibiting a desired cancer therapeutic effect, and a method for preparing the same. There is.
  • the present invention contains indocyanine green-liposomal complex prepared by mixing phosphatidylcholine, stabilizer and indocyanine green, the indocyanine green is encapsulated in liposomes, It provides a composition for treating cancer, which induces apoptosis by therapeutically effective light irradiation.
  • the present invention also provides a method for treating cancer, comprising the following steps:
  • step (b) irradiating a therapeutically effective light to the complex administered in step (a) accumulated at the tumor site.
  • the present invention also provides a method of preparing a composition for treating cancer, comprising the following steps:
  • step (c) isolating a complex in which indocyanine green is encapsulated in the liposome in the liposome of step (b).
  • 1 is a graph comparing the degree of exotherm upon light irradiation according to the ratio of phosphatidylcholine and ICG in a mixture for preparing an indocyanine green encapsulated liposome complex;
  • Figure 2 is a graph comparing the degree of exotherm upon light irradiation according to the DSPC and ICG ratio in the mixture for preparing a liposome complex when preparing a liposome containing DSPC;
  • FIG. 3 is a graph comparing the exothermic degree upon light irradiation according to the ratio of DPPC and ICG in a mixture for preparing a liposome complex when preparing a liposome including a DPPC;
  • Figure 4 is a graph comparing the exothermic degree upon light irradiation according to the ratio of DMPC and ICG in the mixture for preparing a liposome complex when preparing a liposome containing a DMPC;
  • 5 is a graph comparing the degree of exotherm upon light irradiation according to the ratio of DOPC and ICG in a mixture for preparing a liposome complex when preparing a liposome including DOPC;
  • Figure 6 is a graph comparing the degree of exotherm when irradiated with light to free ICG (lip ICo) free ICG;
  • FIG. 7 is a graph comparing the absorbance according to the DSPC and ICG ratio in the mixture for preparing a liposome complex when preparing a liposome comprising a DSPC;
  • FIG. 10 is a graph comparing the absorbance according to the ratio of DOPC and ICG in a mixture for preparing a liposome complex when preparing a liposome including DOPC;
  • FIG. 11 is a graph comparing relative fluorescence intensities according to DSPC, DPPC, DMPC and DOPC and ICG ratios in liposomes including DSPC, DPPC, DMPC and DOPC, respectively;
  • FIG. 12 is a graph comparing the passive mechanical average diameter according to DSPC, DPPC, DMPC and DOPC and ICG ratios in liposomes including DSPC, DPPC, DMPC and DOPC, respectively;
  • FIG. 13 is a graph comparing zeta potential according to DSPC, DPPC, DMPC and DOPC and ICG ratios in liposomes including DSPC, DPPC, DMPC and DOPC, respectively;
  • FIG. 14 is a graph comparing polydispersity index (PDI) according to DSPC, DPPC, DMPC and DOPC and ICG ratio in liposomes including DSPC, DPPC, DMPC and DOPC, respectively;
  • PDI polydispersity index
  • 16 is a graph showing cell viability according to light irradiation in a liposome complex containing DMPC.
  • the present invention contains an indocyanine green-liposomal complex prepared by mixing phosphatidylcholine, a stabilizer, and an indocyanine green, wherein the indocyanine green is encapsulated in liposomes and is therapeutic It relates to a composition for treating cancer, which induces cell death by effective light irradiation.
  • the inventors of the present application can improve the stability of indocyanine green by overcoming the disadvantages associated with low stability of indocyanine green through liposome complexes in which indocyanine green is encapsulated, It was confirmed that cancer treatment by apoptosis is possible.
  • Phototherapy includes photodynamic therapy (PDT) and photothermal therapy (PTT), which include reactive oxygen species (ROS) and light and photosensitizers for thermal energy generation, respectively. Formulation is required.
  • the inventors of the present application confirmed that the indocyanine green according to the present invention may exhibit an excellent photothermal treatment effect upon light irradiation to the encapsulated liposome complex. This effect was confirmed to increase the cytotoxicity to cancer cells can exhibit a cancer treatment effect.
  • the liposomes are prepared including phosphatidylcholine and stabilizers, and liposomes in the form of a single lamellar or a multilamellar may be used.
  • the phosphatidylcholine is a kind of phospholipid with choline, and includes a hydrophobic tail and a choline hydrophilic head of saturated or unsaturated fatty acids, for example, L- ⁇ -phosphatidylcholine (Egg, Chicken), L - ⁇ -phosphatidylcholine, hydrogenated (Egg, Chicken), L- ⁇ -phosphatidylcholine (Soy), L- ⁇ -phosphatidylcholine, hydrogenated (Soy) 1,2-didecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (10: 0 PC) , 1,2-diundecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (11: 0 PC), 1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine
  • encapsulation as used herein means that indocyanine green is substantially present only in the space in the liposome to form a liposome-ICG complex, and only on the free ICG or liposome surface to which the liposome is not bound. Bound ICG is removed to mean that it is substantially nonexistent.
  • the inventors of the present application confirmed that the photothermal effect is improved, especially as the hydrophobic tail length of the phospholipid is shortened, and that the unsaturated fatty acid is included in the hydrophobic tail.
  • DMPC has 14 carbon atoms in hydrophobic tail, shorter hydrophobic tail length than 16 DPPC, 18 DSPC or DOPC, and showed excellent photothermal effect compared to DOPC containing unsaturated fatty acid in hydrophobic tail (Test Example 3 ).
  • the phosphatidylcholine may preferably be DMPC.
  • the stabilizer may be a lipid, a lipid derivative, a protein or a peptide, and the like, and specifically, may be phosphatidylethanolamine conjugated with polyethylene glycol.
  • the polyethylene glycol may be used without limitation as long as it is a size suitable for stabilization, for example, may have a molecular weight of about 1,000 to 10,000, preferably 2,000 to 8, 000, more preferably 2,000 to 6, 000.
  • the phosphatidylethanolamine may be mono or diunsaturated fatty acid, and for example, may be one or more selected from the group consisting of dimyristoylphosphatidylethanolamine (DMPE), dipalmitoylphosphatidylethanolamine (DPPE), dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE), and DSPE (distearoylphosphatidyl-ethanolamine). It is not limited.
  • DMPE dimyristoylphosphatidylethanolamine
  • DPPE dipalmitoylphosphatidylethanolamine
  • DOPE dioleoylphosphatidylethanolamine
  • DSPE disearoylphosphatidyl-ethanolamine
  • the phosphatidylcholine and stabilizer may be included with indocyanine green to an extent suitable for liposome formation suitable for photothermal effect, for example, the molar ratio of phosphatidylcholine and stabilizer is from about 85:15 to about 98: 2, preferably about 90:10 to 95: 5. Within this molar ratio range, liposomes in vivo are most stable to maximize lifespan.
  • Phosphatidylcholine and indocyanine green in the mixture are not limited so long as they are suitable for producing a photothermal effect for cancer treatment, but may be included, for example, in a molar ratio of 250: 0.1-32.
  • phosphatidylcholine and indocyanine green in the mixture may be included in a molar ratio of 250: 0.5-16.
  • the desired photothermal effect can be exhibited throughout this range, and the inventors of the present application find that indocyanine green is optimally dispersed and encapsulated inside liposomes, particularly when phosphatidylcholine and indocyanine green are included in the molar ratio of the range. Complexes can be formed, and having an optimal absorbance that can exhibit an effective photothermal effect in the treatment of cancer, it was confirmed that it exhibits a significant photothermal effect.
  • the amount of indocyanine green is smaller than the range described, the desired degree of photoreaction effect cannot be expected, and the amount of liposomes is relatively high, which is very inefficient considering the cost and time required for preparing liposomes. If the amount of indocyanine green is higher, agglomeration may occur in liposomes, or a threshold level that no longer reacts to light may be reached, and a synergistic photothermal effect may not be expected. In particular, it was confirmed that phosphatidylcholine and indocyanine green had the best photothermal effect when they had a molar ratio of 250: 1. This may be due to the highest dispersion of indocyanine green among liposome complexes prepared from phosphatidylcholine and indocyanine green in a molar ratio of 250: 1.
  • heat may be generated when the composite is irradiated with near infrared rays, and the near infrared rays may be irradiated for 3 minutes or more with a power of 100 mW or more at 700-900 nm.
  • the power for generating heat may be, for example, 100 mW or more, 1 W or less, preferably 400 mW or more and 800 mW or less.
  • the light irradiation time may be 3 minutes or more and 30 minutes or less. In the light irradiation conditions lower than the above range, indocyanine green is not effectively consumed in generating the photothermal effect, and in high light irradiation conditions, surrounding normal cells may be exposed to phototoxicity and damage may be caused.
  • the heat generated at this time may be, for example, a temperature of about 45 ° C. or higher, preferably 50 ° C. or higher, more preferably 60 ° C. or higher, at which 90% or more apoptosis, preferably 95% or more, may occur. .
  • Indocyanine green in the heat generating complex may include, for example, at a concentration of 0.1-30 ug / ml, preferably 1-10 ug / ml.
  • the inventors of the present application confirmed that heat can be generated to a temperature rise of 10 ° C. or more, in which near-infrared irradiation may cause 95% or more apoptosis of liposome complexes including indocyanine green in the aforementioned concentration range.
  • the complex may be determined in size (diameter) according to the type and size of liposomes in which indocyanine green is encapsulated, and the average hydrodynamic diameter (HD) of the complex is, for example, It may be 50-200 nm, preferably 100-150 nm.
  • the composite exhibits a low degree of polydispersity index to confirm that the molecular weight and structure is uniform, wherein the polydispersity index may be 0.2 or less.
  • composition for treating cancer according to the present invention may further include an antibody effective for treating cancer or an immunotherapeutic fragment thereof, a cytotoxic agent or a chemotherapeutic agent thereof.
  • Antibodies include monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies formed from two or more intact antibodies, and antibody fragments exhibiting the desired biological cancer therapeutic activity, wherein immunotherapeutic antibody fragments include antigen binding or variable regions thereof For example, Fab, Fab ', F (ab') 2, Fv and Fc fragments, diabodies, linear antibodies, single chain antibody molecules; And multispecific antibodies formed from antibody fragments, including portions of intact antibodies.
  • Cytotoxic agents are substances that inhibit or prevent the function of a cell and / or cause cell disruption, and include radioisotopes, chemotherapeutic agents and toxins such as enzymatically active toxins of bacterial, fungal, plant or animal origin, or And fragments thereof.
  • Chemotherapeutic agents include chemical agents that prevent the development, maturation or proliferation of new cells directly on tumor cells, such as by cytostatic or cytotoxic effects and not indirectly through mechanisms such as changes in biological response.
  • Chemotherapeutic agents suitable for the present invention preferably include natural or synthetic chemical compounds.
  • 'Cancer' and 'tumor' refer to or describe the physiological condition in mammals, typical of uncontrolled cell growth, and according to the compositions of the present invention, breast, heart, lung, small intestine, large intestine, spleen Tumors or metastatic tumors, such as tumors of the kidneys, bladder, head and neck, ovaries, prostate, brain, pancreas, skin, bone, bone marrow, blood, thymus, uterus, testes, cervix and liver, can be treated.
  • the present invention provides a cancer treatment method comprising the following steps:
  • step (b) irradiating a therapeutically effective light to the complex administered in step (a) accumulated at the tumor site.
  • the present invention relates to a method for preparing a composition for treating cancer, comprising the following steps:
  • step (c) isolating a complex in which indocyanine green is encapsulated in the liposome in the liposome of step (b).
  • step (a) is a step of preparing a cake by dissolving at least one phosphatidylcholine, a stabilizer, and indocyanine green in an organic solvent, and removing the organic solvent.
  • Compositions comprising complexes in which indocyanine green is encapsulated in liposomes can be prepared via film hydration / extrusion.
  • phosphatidylcholine and stabilizer which are the materials of the liposomes, are equally applicable to the above-mentioned invention related to the preparation method.
  • Phosphatidylcholine and a stabilizer may be dissolved in the organic solvent.
  • the organic solvent in the step (a) for example, methanol (methanol), ethanol (ethanol), propanol (propanol), isopropanol (isopropanol), butanol (acetone), acetone (acetone), ether (ether), benzene ( It may be at least one selected from the group consisting of benzene, chloroform, ethyl acetate, ethyl acetate, methylene chloride, hexane, and cyclohexane, and preferably chloroform may be used. .
  • the dispersion may be prepared by hydration with an isotonic solution, the isotonic solution may include, for example, glucose, trehalose, etc., the isotonic agent may be, for example, 1-10% (w / v), preferably To 3-7% (w / v).
  • the dispersion may be prepared by liposomes in the form of single or multi-lamellar vesicles by extruding the porous polymer membrane, wherein the porous polymer membrane may be, for example, a polycarbonate polymer membrane, and the pore diameter of the porous polymer membrane may be, for example. For example 10-1000 nm, preferably 50-200 nm.
  • the indocyanine green separates the complex encapsulated in the liposome.
  • the method used for removal can be used without limitation as long as indocyanine green can separate complexes encapsulated within liposomes and free indocyanine green and liposome surfaces, or indocyanine green that has been exposed or exposed.
  • only the complexes in which the desired indocyanine green is encapsulated in liposomes can be separated by passing through a dialysis membrane or using chromatography (eg, size exclusion chromatography, etc.).
  • ICG insulin-derived neuropeptide (IR-25, laser grade pure) was obtained from Acros Organics.
  • composition of the hydration solution was DSPC, DPPC, DMPC, or the ratio of DOPC and ICG was 250: 0.5, 250: 1, 250: 4, 250: 8, 250: 16 and 250: 32.
  • the hydrated liposome solution was extruded to an average of 100 nm single or multi lamellar liposomes.
  • Dialysis membranes with a 100 kDa MWCO (molecular weight cut-off) were used for dialysis to remove trace amounts of free ICG and ICG adhering to the liposome surface, thereby preparing an ICG encapsulated liposome complex.
  • the concentration of phosphatidylcholine was determined in the liposome-ICG complex from which free ICG was removed by Stewart assay, which shows the concentration of phosphatidylcholine and phosphatidylcholine in DSPE-PEG200.
  • Stewart assay shows the concentration of phosphatidylcholine and phosphatidylcholine in DSPE-PEG200.
  • the liposome structure is all collapsed, and the ICG shows the original absorbance, and the absorbance has a maximum at 785 nm. Since the absorbance of ICG increases in proportion to the concentration in methanol of 80%, the concentration of ICG contained in the liposome complex was obtained through the absorbance of 785 nm.
  • ⁇ (Total Phosphatidylcholine Concentration) / (ICG Concentration) ⁇ can determine the ratio between phosphatidylcholine and ICG in the liposome-ICG complex. This allows comparing the amount of ICG included in the finally synthesized liposome-ICG complex, compared to the amount of ICG added when preparing a phosphatidylcholine-containing cake to synthesize each liposome-ICG complex.
  • Liposomal ICG complex prepared in Example 1 all the Liposomal ICG and Free ICG ICG concentrations were adjusted to 5 ug / ml, and the Liposomal ICG complex prepared in Example 1 was irradiated with a laser of 808 nm at 650 mW for 3 minutes (81 J, Joule), the thermal imaging camera (FLIR) to measure the photothermal effect caused by the total volume of liposome solution 100ul.
  • FLIR thermal imaging camera
  • FIGS. 1 to 6 The measured photothermal effects are shown in FIGS. 1 to 6. Comparing FIGS. 1 and 6, in the case of free ICG not bound to liposomes, the temperature rise is only 5 ° C. despite light irradiation of 150 seconds or more, and is relatively weaker than that of ICG encapsulated in liposomes. It was confirmed that the light heat effect.
  • FIGS. 2 to 5 The photothermal effects occurring in each of the complexes including DSPC, DPPC, DMPC, or DOPC in FIG. 1 are shown in FIGS. 2 to 5, respectively.
  • the hydrophobic tail length of the phospholipid constituting the complex becomes shorter, the photothermal effect is improved, and when the unsaturated lipid chain is included in the hydrophobic tail, the photothermal effect is reduced.
  • DMPC (FIG. 4) shows that the best photothermal effect occurs.
  • the molar ratio of DSPC, DPPC, DMPC, or DOPC: ICG was 250: 0.5 to 250: 16, the desired photothermal effect was observed.
  • the molar ratio of phosphatidylcholine: ICG was 250: 1, it was related to the type of phosphatidylcholine. Excellent photothermal effect.
  • the molar ratio of phosphatidylcholine: ICG is less than 250: 0.5, for example 250: 0.1, in order to obtain a similar degree of photothermal effect, the amount of liposomes added is too high and the cost and time required for the preparation of liposomes is increased. It is very inefficient when considered and is not suitable when considering industrial applications.
  • the molar ratio of phosphatidylcholine: ICG in the composition for treating cancer through the photothermal effect can be optimized from the range of 250: 0.5.
  • the addition of ICG does not increase the ratio of ICG in the liposome-ICG complex, but rather aggregation occurs. Not suitable (FIG. 15).
  • Dynamic light scattering was used to determine the average hydrodynamic diameter (HD), polydispersity index, and zeta potential of each composite.
  • absorbance was measured at intervals of 5 nm at a wavelength of 400 nm to 1000 nm, and fluorescence intensity was measured by Excitation 785 nm and Emission 820 nm. The concentration used at this time is 5 ug / ml based on the ICG.
  • the composite including DSPC, DPPC, DMPC, or DOPC has a maximum absorbance at 800 nm and shows a low peak at the early 700 nm.
  • the higher the molar ratio of DSPC, DPPC, DMPC, or DOPC (M): ICG (M) to ICG the lower the maximum absorbance at 800 nm and the lower peak in the early 700 nm range. This means that if DSPC, DPPC, DMPC or DOPC: ICG exceeds 250: 16, the likelihood of ICG aggregation inside the liposome complex is high.
  • HeLa cells (ATCC® CCL-2 TM) were prepared in an amount of 5000 Cells / 100ul 1 Well. Hela cells were treated with lipids (phosphatidylcholine) (M): ICG (M) prepared in 250: 1 ratio, respectively, at 5 ug / ml (based on the concentration of ICG), respectively, at 808 nm. , 650mW laser was irradiated for 3 minutes. After irradiating the laser, the liposomes including indocyanine green remaining in the cell culture were removed after 30 minutes, and the cells were cultured for 24 hours, and then apoptosis was measured by MTT assay.
  • M lipids
  • ICG ICG
  • composition for treating cancer according to the present invention exhibits a significant apoptosis effect by irradiating therapeutically effective light to a complex comprising liposomes encapsulated with indocyanine green, thereby showing an excellent cancer treatment effect, Tumors can be removed without surgical intervention.
  • apoptosis effect against cancer cells While minimizing the effect on normal cells, it may selectively exhibit apoptosis effect against cancer cells.

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Abstract

본 발명은 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀 복합체를 포함하는 암 치료용 조성물, 이를 이용한 암 치료방법 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 구체적으로는 리포좀 및 인도시아닌그린을 포함하는 복합체를 포함하고, 치료적으로 유효한 광 조사시 발생하는 광열을 이용하여 암을 치료하는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물, 이를 이용한 암 치료방법 및 이를 제조할 수 있는 방법에 관한 것이다.

Description

인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 포함하는 암 치료용 조성물
본 발명은 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀 복합체를 포함하는 암 치료용 조성물, 이를 이용한 암 치료방법 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 치료적으로 유효한 광 조사에 의해 세포사멸을 유도하는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물, 이를 이용한 암 치료방법 및 이를 제조할 수 있는 방법에 관한 것이다.
인도시아닌 그린(Indocianin green, ICG)은 근적외선 형광 다이(NIR)로, 미국 FDA(Food and Drug Administration)에서 림프계 뿐 아니라 심장, 간 혈관 시스템의 진단에 사용 허가를 받은 물질이다. 특히, 인도시아닌 그린은 유방암의 조기 진단을 위한 전이성 림프노드의 이미징 및 감시림프절(sentinel lymph node)의 맵핑에 우수한 프로브로 알려져 있다.
이러한 인도시아닌 그린은 친수성이 낮고, 광안정성이 낮으며, 광자 수율이 낮고, 감도가 떨어지는 단점을 가지고 있다. 또한, 인도시아닌 그린은 비특이적 응집에 취약하고, 외부 광, 용매 및 온도 변화에 의해 화학적으로 분해되는 단점이 있으며, 낮은 분자량과 소수성 특징 때문에 혈청 단백질로 잘 흡수되어 빠르게 간을 거쳐 제거된다는 문제점이 있다.
이러한 단점을 극복하고자, 나노 물질 기반 인도시아닌 그린 프로브가 연구되어 왔으며, 나노파티클에 인도시아닌 그린을 포집하거나, 폴리머 등을 이용하여, 인도시아닌 그린의 in vivo 및 in vitro에서의 안정성을 증가시킨 연구가 있어왔다. 인도시아닌 그린을 나노파티클에 포집함으로써, 외부 광선 및 온도에 대한 물리화학적 안정이 현저히 증가되었다.
그럼에도 불구하고, 현재 인도시아닌 그린을 체내에 적용 가능한 리포좀과 결합시켜 이를 암 치료용 조성물에 적용한 예는 없다. 암 광치료는 광에 기반한 것으로, 암 치료시 위험하고 비용이 많이 드는 수술에 의하지 않고, 종양 부위에 광을 쪼여 암을 치료하는 방법이다.
광 치료법은 외과수술법에 비해 비파괴적이고 간단하며 부작용이 적다. 또한, 전신 마취가 불필요하고 환자의 고통도 거의 없으며, 안정과 회복을 위한 기간이 짧을 뿐만 아니라 여러 차례 반복 치료가 가능한 이점도 있다.
한편, 종양 부위에 발열기구를 삽입하여 단순히 가열하는 방식을 갖는 열에 의한 암 치료기술은 이미 오래 전에 시도된 바 있으나, 암세포와 정상세포의 식별이 불가능하여 암세포 주변의 정상세포들도 파괴되는 문제로 인해, 실제 임상에는 널리 적용되지 못하였다. 이에 반해, 광 치료법은 약물 치료법과 방사선 치료법의 단점을 모두 극복한 새로운 암 치료법이라 할 수 있다. 초기의 광 치료법은 광원에 따라 그 종류가 다양하나, 대부분 치료기간이 길고, 치료 부위의 경계면이 부정확하다는 단점을 가지고 있다.
예를 들어, 실리카 나노입자에 금을 코팅한 나노쉘과 근적외선을 결합한 광 치료기술 또는 단일벽 탄소나노튜브 (single wall carbon nanotube: SWCNT)를 근적외선과 결합한 광 치료기술이 선택적 암 치료를 위한 방법으로 사용될 수 있음이 제시되었으나, 이들은 체내 적용에 허가를 받은 물질이 아니어서 임상적 적용에 제한이 있고, 목적하는 열을 얻기 위해 매우 고강도의 근적외선을 사용하여야 하나 광원의 강도가 이렇게 높으면 정상세포가 나노쉘이나 SWCNT와 같은 발열제와 아주 가까이 있지 않더라도 손상될 수 있다는 문제점이 발생한다.
이러한 기술적 배경하에서, 본 출원의 발명자들은 인도시아닌 그린이 리포좀에 캡슐화되어 있는 복합체를 포함하고, 치료적으로 유효한 광 조사에 의해 세포사멸을 유도할 수 있는 암 치료용 조성물을 통해 종래의 문제점을 해결하고, 목적하는 암 치료 효과를 달성할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
발명의 요약
본 발명의 목적은 치료적으로 유효한 광 조사에 의해 세포사멸을 유도하여 목적하는 암 치료 효과를 나타낼 수 있는 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀 복합체를 포함하는 암 치료용 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 포스파티딜콜린, 안정화제 및 인도시아닌 그린의 혼합에 의해 제조되는 인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 함유하고, 상기 인도시아닌 그린은 리포좀에 캡슐화(encapsulation)된 것이며, 치료적으로 유효한 광 조사에 의해 세포사멸을 유도하는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 다음의 단계를 포함하는 암 치료방법을 제공한다:
(a) 인도시아닌 그린이 리포좀에 캡슐화되어 있는 인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 환자에 투여하는 단계; 및
(b) 종양 부위에 축적된 상기 (a) 단계에서 투여된 복합체에 치료적으로 유효한 광을 조사하는 단계.
본 발명은 또한, 다음 단계를 포함하는 암 치료용 조성물의 제조방법을 제공한다:
(a) 유기용매 중에 1종 이상의 포스파티딜콜린과 안정화제 및 인도시아닌 그린을 용해시키고, 유기용매를 제거하여 케익을 제조하는 단계;
(b) 상기 케익을 수화시켜 분산액을 제조하고, 다공성 고분자막에 압출시켜 인도시아닌 그린이 포함된 리포좀을 제조하는 단계; 및
(c) 상기 단계 (b)의 리포좀 중 인도시아닌 그린이 리포좀 내에 캡슐화된 복합체를 분리하는 단계.
도 1은 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 포스파티딜콜린과 ICG 비율에 따라 광 조사시 발열 정도를 비교한 그래프이다;
도 2는 DSPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DSPC와 ICG 비율에 따라 광 조사시 발열 정도를 비교한 그래프이다;
도 3은 DPPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DPPC와 ICG 비율에 따라 광 조사시 발열 정도를 비교한 그래프이다;
도 4는 DMPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DMPC와 ICG 비율에 따라 광 조사시 발열 정도를 비교한 그래프이다;
도 5는 DOPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DOPC와 ICG 비율에 따라 광 조사시 발열 정도를 비교한 그래프이다;
도 6은 리포좀과 결합하지 않은 자유 ICG (free ICG)에 광 조사시 발열 정도를 비교한 그래프이다;
도 7은 DSPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DSPC와 ICG 비율에 따라 흡광도를 비교한 그래프이다;
도 8은 DPPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DPPC와 ICG 비율에 따라 흡광도를 비교한 그래프이다;
도 9는 DMPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DMPC와 ICG 비율에 따라 흡광도를 비교한 그래프이다;
도 10은 DOPC를 포함하는 리포좀 제조시, 리포좀 복합체를 제조하기 위한 혼합물 중 DOPC와 ICG 비율에 따라 흡광도를 비교한 그래프이다;
도 11은 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC 각각을 포함한 리포좀에서 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC과 ICG 비율에 따라 상대적 형광 세기를 비교한 그래프이다;
도 12는 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC 각각을 포함한 리포좀에서 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC과 ICG 비율에 따라 수동력학적 평균 직경을 비교한 그래프이다;
도 13은 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC 각각을 포함한 리포좀에서 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC과 ICG 비율에 따라 제타 포텐셜을 비교한 그래프이다;
도 14는 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC 각각을 포함한 리포좀에서 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC과 ICG 비율에 따라 다분산지수(Polydispersity Index, PDI)를 비교한 그래프이다;
도 15는 DSPC, DPPC, DMPC 및 DOPC과 ICG 비율에 따른 광열 효과를 나타낸 그래프이다; 및
도 16은 DMPC를 포함하는 리포좀 복합체에서 광 조사에 따른 세포생존도를 나타낸 그래프이다.
발명의 상세한 설명 및 바람직한 구현예
본 발명은 일 관점에서, 포스파티딜콜린, 안정화제 및 인도시아닌 그린의 혼합에 의해 제조되는 인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 함유하고, 상기 인도시아닌 그린은 리포좀에 캡슐화(encapsulation)된 것이며, 치료적으로 유효한 광 조사에 의해 세포사멸을 유도하는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 출원의 발명자들은 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀 복합체를 통해 인도시아닌 그린의 낮은 안정성과 관련된 단점을 극복함으로써 인도시아닌 그린의 안정성을 향상시킬 수 있을 뿐 아니라, 치료적으로 유효한 광 조사시 세포사멸에 의한 암 치료가 가능함을 확인하였다.
본 명세서에서 광 조사에 의한 세포사멸은 광치료(phototherapy)에 의해 달성되는 것으로, 광치료는 부작용이 적고, 비침습적이며, 특정 파장의 광에 특이적이기 때문에, 암치료에 널리 사용되는 임상 방법 중 하나이다. 광치료는 광역치료 (photodynamic therapy, PDT) 및 광열치료 (photothermal therapy, PTT)를 포함하며, 이를 위해 각각 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)과 열에너지 발생을 위한 빛과 광민감제(photosensitizer)를 포함한 제제가 필요하다.
본 출원의 발명자들은 특히, 본 발명에 따른 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀 복합체에 광 조사시 우수한 광열 치료 효과가 나타날 수 있음을 확인하였다. 이러한 효과는 암세포에 대한 세포 독성을 높여 암 치료 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
하나의 실시예에서, 상기 리포좀은 포스파티딜콜린 및 안정화제를 포함하여 제조되는데, 단일 라멜라 (unilamellar) 또는 복합 라멜라 (multilamellar) 형태의 리포좀이 사용될 수 있다. 상기 포스파티딜콜린은 콜린을 도입한 인지질의 일종으로, 포화 또는 불포화 지방산의 소수성 꼬리 (hydrophobic tail) 및 콜린 친수성 머리 (hydrophilic head)를 포함하며, 예를 들어 L-α-phosphatidylcholine (Egg, Chicken) , L-α-phosphatidylcholine, hydrogenated (Egg, Chicken), L-α-phosphatidylcholine (Soy), L-α-phosphatidylcholine, hydrogenated (Soy) 1,2-didecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (10:0 PC), 1,2-diundecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (11:0 PC), 1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine (12:0 PC (DLPC)), 1,2-ditridecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (13:0 PC), 1,2-dipentadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (15:0 PC), 1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (4ME 16:0 PC), 1,2-diheptadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (17:0 PC), 1,2-dinonadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (19:0 PC), 1,2-diarachidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (20:0 PC), 1,2-dimyristoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (14:1 (Δ9-Cis) PC), 1,2-dimyristelaidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (14:1 (Δ9-Trans) PC), 1,2-dipalmitoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (16:1 (Δ9-Cis) PC), 1,2-dipalmitelaidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (16:1 (Δ9-Trans) PC), 1,2-dipetroselenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:1 (Δ6-Cis) PC), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:1 (Δ9-Cis) PC (DOPC)), 1,2-dielaidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:1 (Δ9-Trans) PC), 1,2-dilinoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:2 (Cis) PC), 1,2-dilinolenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:3 (Cis) PC), 1,2-dieicosenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (20:1 (Cis) PC), DSPC (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DPPC (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DMPC (1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine) 및 DOPC (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 출원의 발명자들은 리포좀이 결합되지 않은 자유 ICG (공지의 인도시아닌 그린 단독 사용) 및 리포좀 표면에 결합된 ICG에 비해 리포좀이 캡슐화된 ICG에서 향상된 광열 효과가 나타남을 확인하였다. 이를 바탕으로, 본 명세서에서 사용되는 캡슐화는 인도시아닌 그린이 실질적으로 리포좀 내 공간에만 존재하여 리포좀-ICG 복합체를 형성하는 것을 의미하며, 리포좀이 결합되지 않은 자유 ICG (free ICG) 또는 리포좀 표면에만 결합된 ICG는 제거되어 실질적으로 존재하지 않는 것을 의미한다.
또한, 본 출원의 발명자들은 특히 인지질의 소수성 꼬리 길이가 짧아질수록 광열 효과가 향상되고, 소수성 꼬리에 불포화 지방산이 포함되면 광열 효과가 감소할 수 있음을 확인하였다.
이를 바탕으로, DSPC, DPPC, DMPC 또는 DOPC를 포함하는 리포좀을 고려한 결과, 동일한 인도시아닌 그린 농도일 때 DMPC를 포함하는 리포좀 제조시, 가장 우수한 광열효과가 나타남을 확인하였다. DMPC는 소수성 꼬리의 탄소수가 14개로, 16개인 DPPC, 18개인 DSPC 또는 DOPC에 비해 소수성 꼬리 길이가 짧고, 소수성 꼬리에 불포화 지방산이 포함된 DOPC에 비해 우수한 광열 효과를 나타냄을 확인하였다 (시험예 3). 따라서, 상기 포스파티딜콜린은 바람직하게 DMPC일 수 있다.
상기 안정화제는 지질, 지질 유도체, 단백질 또는 펩타이드 등일 수 있고, 구체적으로 폴리에틸렌글리콜이 컨쥬게이션된 포스파티딜에탄올아민일 수 있다. 상기 폴리에틸렌글리콜은 안정화에 적합한 정도의 크기라면 제한없이 사용될 수 있으나, 예를 들어 분자량이 약 1, 000 내지 10,000, 바람직하게 2,000 내지 8, 000, 더욱 바람직하게 2,000 내지 6, 000일 수 있다.
상기 포스파티딜에탄올아민은 모노 또는 디 불포화지방산일 수 있으며, 예를 들어 DMPE (dimyristoylphosphatidylethanolamine), DPPE (dipalmitoylphosphatidylethanolamine), DOPE (dioleoylphosphatidylethanolamine) 및 DSPE (distearoylphosphatidyl-ethanolamine)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 포스파티딜콜린 및 안정화제는 인도시아닌 그린과 함께 광열 효과를 내기에 적합한 리포좀 형성에 적합한 정도로 포함될 수 있으며, 예를 들어 포스파티딜콜린 및 안정화제의 몰비가 약 85:15 내지 약 98:2, 바람직하게 약 90:10 내지 95:5일 수 있다. 상기 몰비 범위 내에서, 생체 내 리포좀이 가장 안정되어 수명을 최대화 시킬 수 있다.
상기 혼합물 중 포스파티딜콜린과 인도시아닌 그린은 암 치료를 위한 광열 효과를 내기에 적합한 정도라면 제한되지 않으나, 예를 들어 250:0.1-32의 몰비로 포함될 수 있다. 바람직하게, 상기 혼합물 중 포스파티딜콜린과 인도시아닌 그린은 250:0.5-16의 몰비로 포함될 수 있다. 해당 범위 전체에서 목적하는 광열 효과를 나타낼 수 있으며, 본 출원의 발명자들은 특히, 해당 범위의 몰비로 포스파티딜콜린과 인도시아닌 그린을 포함하는 경우, 인도시아닌 그린이 리포좀 내부에서 최적으로 분산되어 캡슐화된 복합체를 형성할 수 있으며, 암 치료에 유효한 광열 효과를 나타낼 수 있는 최적 흡광도를 가짐으로써, 유의한 광열 효과를 나타냄을 확인하였다.
기재된 범위보다 인도시아닌 그린의 포함량이 적으면 목적하는 정도의 광 반응 효과를 기대할 수 없고, 상대적으로 리포좀의 양이 많아져 리포좀 제조에 소요되는 비용 및 시간을 고려하였을 때 매우 비효율적이며, 기재된 범위보다 인도시아닌 그린의 포함량이 많으면, 오히려 리포좀 내에서 응집이 일어나거나, 더 이상 광에 반응하지 않는 정도의 임계치에 도달하게 되어 상승적 광열 효과 기대할 수 없다. 특히, 포스파티딜콜린과 인도시아닌 그린이 250:1의 몰비를 가지는 경우 가장 우수한 광열 효과를 나타냄을 확인하였다. 이는 250:1의 몰비로 포함된 포스파티딜콜린과 인도시아닌 그린으로부터 제조된 리포좀 복합체 중 인도시아닌 그린이 가장 높은 분산도로 분포되어 있기 때문일 것으로 판단된다.
하나의 실시예에서, 상기 복합체에 근적외선 조사시 열이 발생할 수 있으며, 상기 근적외선은 700-900nm에서 100 mW 이상의 전력으로 3분 이상 조사될 수 있다. 이 때, 열을 발생시키는 전력은 예를 들어 100 mW 이상, 1 W 이하일 수 있으며, 바람직하게 400mW 이상 800mW 이하일 수 있다. 광 조사 시간은 3분 이상 30분 이하일 수 있다. 전술한 범위 보다 낮은 광 조사 조건에서는 인도시아닌 그린이 효과적으로 광열효과 발생에 소모되지 않으며, 높은 광 조사 조건에서는 주변 정상세포가 광 독성에 노출되어 손상이 유발될 수 있다.
이 때 발생하는 열은 예를 들어, 90% 이상의 세포사멸, 바람직하게 95% 이상의 세포사멸이 일어날 수 있는 약 45℃ 이상의 온도, 바람직하게 50℃ 이상의 온도, 더욱 바람직하게 60℃ 이상의 온도일 수 있다.
상기 열을 내는 복합체 중 인도시아닌 그린은 예를 들어, 0.1-30 ug/ml, 바람직하게 1-10 ug/ml의 농도로 포함할 수 있다. 본 출원의 발명자들은 전술한 농도 범위의 인도시아닌 그린을 포함하는 리포좀 복합체에 근적외선 조사시 95% 이상의 세포사멸이 일어날 수 있는 10℃ 이상의 온도 상승을 나타내는 정도로 열이 발생할 수 있음을 확인하였다.
특히, 종양이 발생한 림프절 중 인도시아닌 그린을 포함하는 리포좀 복합체의 축적량이 높을수록 열 발생량 역시 높아져, 주요 세포 파괴에 충분한 정도 이상의 열이 발생하여 세포사멸이 일어날 수 있음을 확인하였다. 이를 통해, FDA 허가받은 물질에 기반하여 개발된 인도시아닌 그린을 포함하는 리포좀 복합체는 큰 임상적 잠재성을 가질 수 있음을 확인하였다.
하나의 실시예에서, 상기 복합체는 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀의 종류 및 크기에 따라 크기 (직경)이 결정될 수 있으며, 복합체의 평균 수동력학적 직경(hydrodynamic diameter, HD)은 예를 들어, 50-200nm, 바람직하게 100-150 nm 일 수 있다.
또 다른 실시예에서, 상기 복합체는 낮은 정도의 다분산지수를 나타내어 분자량 및 구조가 균일함을 확인하였는데, 이 때 상기 다분산지수는 0.2 이하일 수 있다.
경우에 따라서, 본 발명에 따른 암 치료용 조성물은 암 치료에 유효한 항체 또는 이의 면역치료적으로 유효한 단편, 세포독성제 또는 화학치료제를 추가로 포함할 수 있다.
항체는 단클론 항체, 다클론 항체, 2 개 이상의 온전한 항체로 형성되는 다중특이성 항체 및 목적하는 생물학적 암 치료 활성을 나타내는 항체 단편을 포함하며, 면역치료적으로 유효한 항체 단편은 항원 결합 또는 이들의 가변 구역을 포함하는 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 Fc 단편, 디아바디 (diabodies), 선형 항체, 단일쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체로, 온전한 항체의 일부를 포함한다.
세포독성제는 세포의 기능을 저해하거나 또는 방지하고/하거나 세포의 붕괴를 야기하는 물질로, 방사성 동위원소, 화학치료제 및 독소, 예컨대 박테리아, 균류, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소 또는 그의 단편을 포함할 수 있다.
화학치료제는 종양 세포 상에 직접적으로, 예컨대 세포정지 또는 세포 독성 효과에 의해서 및 생물학적 응답 변화와 같은 메카니즘을 통해 간접적이지 않게, 신규 세포의 발생, 성숙 또는 확산을 방지하는 화학적 약제가 포함된다. 본 발명에 적합한 화학치료제는 바람직하게는 천연 또는 합성 화학적 화합물이 포함된다.
'암' 및 '종양'은 비제어적인 세포 성장을 전형적인 특징으로 하는, 포유류에서의 생리학적 상태를 의미하거나 또는 설명하는 것으로, 본 발명의 조성물에 의해 유방, 심장, 폐, 소장, 대장, 비장, 신장, 방광, 두경부, 난소, 전립선, 뇌, 췌장, 피부, 뼈, 골수, 혈액, 흉선, 자궁, 정소, 자궁경부 및 간의 종양과 같은 종양 또는 전이성 종양이 치료될 수 있다.
이를 바탕으로, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 암 치료방법을 제공한다:
(a) 인도시아닌 그린이 리포좀에 캡슐화되어 있는 인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 환자에 투여하는 단계; 및
(b) 종양 부위에 축적된 상기 (a) 단계에서 투여된 복합체에 치료적으로 유효한 광을 조사하는 단계.
다른 관점에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 암 치료용 조성물의 제조방법에 관한 것이다:
(a) 유기용매 중에 1종 이상의 포스파티딜콜린과 안정화제 및 인도시아닌 그린을 용해시켜 이의 혼합물을 제조하고, 유기용매를 제거하여 케익을 제조하는 단계;
(b) 상기 케익을 수화시켜 분산액을 제조하고, 다공성 고분자막에 압출시켜 인도시아닌 그린이 포함된 리포좀을 제조하는 단계; 및
(c) 상기 단계 (b)의 리포좀 중 인도시아닌 그린이 리포좀 내에 캡슐화된 복합체를 분리하는 단계.
본 발명에 따른 제조방법에서 단계 (a)는 유기용매 중에 1종 이상의 포스파티딜콜린과 안정화제 및 인도시아닌 그린을 용해시키고 유기용매를 제거하여 케익을 제조하는 단계이다. 인도시아닌 그린이 리포좀에 캡슐화되어 있는 복합체를 포함한 조성물은 필름 수화/압출법을 통해 제조될 수 있다.
상기 리포좀의 재료가 되는 포스파티딜콜린 및 안정화제는 앞서 언급한 내용이 제조방법과 관련된 발명에도 동일하게 적용된다. 상기 유기용매에 포스파티딜콜린 및 안정화제를 용해시킬 수 있다.
상기 단계 (a)에서 유기용매는 예를 들어, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 바람직하게 클로로포름을 사용할 수 있다.
이후 (b) 유기용매를 제거하고 건조시켜 제조된 케익을 수화시켜 분산액을 제조하고, 다공성 고분자막에 압출시켜 인도시아닌 그린이 포함된 리포좀을 제조하는 단계를 거친다. 상기 분산액은 등장액으로 수화시켜 제조될 수 있는데, 상기 등장액은 등장화제로 예를 들어, 글루코스, 트레할로스 등을 포함할 수 있으며, 등장화제는 예를 들어, 1-10% (w/v), 바람직하게 3-7 % (w/v)의 농도로 포함될 수 있다.
상기 분산액은 다공성 고분자막에 압출시켜 단일 또 멀티 라멜라 소포(vesicle) 형태의 리포좀으로 제조될 수 있으며, 이 때 사용되는 다공성 고분자막은 예를 들어 폴리카보네이트 고분자막일 수 있고, 다공성 고분자막의 공극 직경은 예를 들어 10∼1000 nm, 바람직하게 50∼200 nm일 수 있다.
다음 단계 (c)에서 인도시아닌 그린이 리포좀 내에 캡슐화된 복합체를 분리한다. 제거에 사용되는 방법은 인도시아닌 그린이 리포좀 내에 캡슐화된 복합체와 자유 인도시아닌 그린 및 리포좀 표면에 단순히 결합하거나 노출된 인도시아닌 그린을 분리할 수 있는 방법이라면 제한없이 사용될 수 있으며, 예를 들어 투석 막에 통과시키거나, 크로마토그래피 (예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피 등)를 사용하여, 목적하는 인도시아닌 그린이 리포좀 내에 캡슐화된 복합체만을 분리할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: Liposomal ICG의 제조
ICG (IR-25, laser grade pure)는 Acros Organics에서 입수하였다. 주성분 지질로 DSPC (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DPPC (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DMPC (1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine) 또는 DOPC (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)와 DSPE-PEG2000 (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000])을 95:5의 몰비율로 혼합하여 클로로포름에 녹인 용액에 1mg/ml로 메탄올에 녹인 인도시아닌 그린 (지질 몰농도 총합: ICG = 250:X (M)) 을 필요한 농도만큼 혼합하고 유기용매를 완전히 증발시킨 후 플라스크 바닥에 생성된 지질 케익을 5% 글루코스 수용액 2ml로 수화(hydration)하였다.
이 때, 수화 용액 중 조성은 DSPC, DPPC, DMPC 또는 DOPC과 ICG의 비율이 각각 250:0.5, 250:1, 250:4, 250:8, 250:16 및 250:32이었다.
0.1um 폴리카보네이트 막을 이용해 수화 완료한 리포좀 용액을 평균 100nm의 단일 또는 멀티 라멜라 리포좀이 되도록 압출하였다. 압출을 완료한 100nm 단일 또는 멀티 라멜라 리포좀 용액을 Sephadex G-50이 채워진 컬럼을 통과시켜, 크기 배제 크로마토그래피 (Size-exclusion chromatography) 기법을 이용해 리포좀에 포함되지 않은 ICG와 ICG가 함유된 리포좀을 분리한다. 100kDa MWCO (molecular weight cut-off)를 갖는 투석막 (dialysis membrane)을 이용해 투석하여 미량 존재하는 자유 ICG (Free ICG)와 리포좀 표면에 붙어 있는 ICG를 제거하고, ICG가 캡슐화된 리포좀 복합체를 제조하였다.
ICG가 리포좀에 캡슐화되어 생기는 분산효과로 인한 형광세기 증가 및 흡광도 변화를 이용해, 리포좀 ICG 용액에 존재 하는 자유 ICG 및 리포좀 표면에 노출된 ICG의 유무를 확인하였다.
리포좀을 구성하는 포스파티딜콜린과 DSPE-PEG200 중 포스파티딜콜린의 농도를 알 수 있는 Stewart assay를 통해 자유 ICG를 제거한 리포좀-ICG 복합체에서 포스파티딜콜린의 농도를 구하였다. 또한, 메탄올 80%와 리포좀 용액 20%를 혼합하면 리포좀 구조가 모두 붕괴되고 ICG가 본래의 흡광도를 나타내고, 785nm에서 흡광도가 최대치를 갖는다. 메탄올 80%에서 ICG는 농도에 비례하여 흡광도가 증가하기 때문에, 이를 통해 리포좀 복합체내에 포함되어 있는 ICG의 농도를 785nm의 흡광도를 통해 구하였다. {(총 포스파티딜콜린 농도) / (ICG 농도)}을 통해 리포좀-ICG 복합체 중 포스파티딜콜린과 ICG 간의 비율을 구할 수 있다. 이를 통해 각각의 리포좀-ICG 복합체를 합성하기 위해 포스파티딜콜린 포함 케익을 제작할 때에 첨가된 ICG의 양에 비해, 최종적으로 합성된 리포좀-ICG 복합체에 포함된 ICG의 양을 비교할 수 있다.
그 결과, 케익 제작시 첨가된 ICG의 양이 포스파티딜콜린:ICG의 몰비가 250:0.5~16 (M)의 범위일 때는 첨가된 ICG의 양이 증가할 수록 리포좀 내부에 포함되는 ICG의 양이 증가한다. 그러나, 케익 제작시 첨가된 ICG의 양이 포스파티딜콜린:ICG의 몰비가 250: 16을 초과하면, 리포좀 내부에 포함되는 ICG의 양이 증가하지 않게 된다.
시험예 1: Liposomal ICG의 광열효과
실시예 1에서 제조된 Liposomal ICG 복합체 중 모든 Liposomal ICG와 Free ICG의 ICG 농도를 5ug/ml에 맞추었고, 실시예 1에서 제조된 Liposomal ICG 복합체에 808nm의 레이져를 650mW로 3분간 조사하고(81J, Joule), 열화상카메라(FLIR)를 통해 리포좀 용액 총 부피 100ul에 의해 발생하는 광열효과를 측정하였다.
측정된 광열 효과를 도 1 내지 도 6에 나타내었다. 도 1 및 도 6을 비교하면, 리포좀에 결합되지 않은 자유 ICG의 경우 150초 이상의 광 조사에도 불구하고 온도 상승 정도가 5℃에 불과하여, 리포좀에 캡슐화되어 포함된 ICG에 비해 보다 상대적으로 미약한 광열효과를 나타냄을 확인하였다.
도 1 중 DSPC, DPPC, DMPC 또는 DOPC를 포함하는 복합체 각각에서 발생하는 광열효과를 각각 도 2 내지 도 5에 나타내었다. 복합체를 구성하는 인지질의 소수성 꼬리 길이가 짧아질수록 광열 효과가 향상됨을 확인하였고, 소수성 꼬리에 불포화 지질쇄가 포함되면 광열 효과가 감소함을 확인할 수 있다. DSPC, DPPC, DMPC 및DOPC 중 DMPC (도 4)에서 가장 우수한 광열 효과가 발생함을 확인할 수 있다. DSPC, DPPC, DMPC 또는 DOPC: ICG의 몰비가 250:0.5 내지 250:16인 경우 목적하는 광열 효과가 나타남을 확인할 수 있었는데, 특히, 포스파티딜콜린: ICG의 몰비가 250:1인 경우 포스파티딜콜린의 종류와 관계없이 우수한 광열 효과를 나타내었다.
포스파티딜콜린: ICG의 몰비가 250:0.5 미만, 예를 들어 250:0.1인 경우는 유사한 정도의 광열 효과를 얻고자 하는 경우 상대적으로 투입되는 리포좀의 양이 지나치게 많아져 리포좀 제조에 소요되는 비용 및 시간을 고려하였을 때 매우 비효율적이며, 산업적 적용을 고려하면 적합하지 않다. 따라서, 광열 효과를 통해 암을 치료하기 위한 조성물에서 포스파티딜콜린: ICG의 몰비는 250:0.5의 범위에서부터 최적화될 수 있다. 또한, 포스파티딜콜린: ICG의 몰비가 250:16 초과, 예를 들어 250:32인 경우에는 ICG를 추가로 넣은 경우에도 리포좀-ICG 복합체에서 ICG의 비율이 증가하지 않고, 오히려 뭉침 (aggregation)이 발생하여 적합하지 않다 (도 15).
시험예 2: Liposomal ICG의 특성
Dynamic light scattering 방법을 이용하여 각 복합체의 평균 수동력학적 직경(hydrodynamic diameter, HD), 다분산 지수 (polydispersity index) 및 제타포텐셜 (zeta potential)을 측정하였다. 또한, 400nm ~ 1000nm의 파장에서 5nm 간격으로 흡광도를 측정하였으며, Excitation 785nm 및 Emission 820nm로 형광 세기를 측정하였다. 이 때 사용된 농도는 ICG 기준으로 5 ug/ml 이다.
그 결과를 도 7 내지 도 14에 나타내었다. 도 7 내지 도 10을 참조하면, DSPC, DPPC, DMPC 또는 DOPC를 포함하는 복합체는 800nm에서 최대 흡광도를 가지고, 700nm 초반대에서 낮은 peak를 나타냄을 확인할 수 있다. 동일한 ICG 농도에서 DSPC, DPPC, DMPC 또는 DOPC (M): ICG (M) 중 ICG의 몰비가 높아질수록 800nm에서 가지는 최대 흡광도가 낮아지고, 700nm 초반대에서 나타나는 낮은 peak가 상대적으로 높아짐을 알 수 있는데, 이는 DSPC, DPPC, DMPC 또는 DOPC:ICG가 250:16을 초과하는 경우, 리포좀 복합체 내부에서 ICG가 응집될 가능성이 높음을 의미한다.
도 11을 참조하면, 동일한 ICG 농도에서 총 지질 (M): ICG (M) 중 ICG의 비율이 높아질수록 형광 세기가 감소함을 확인할 수 있으며, 도 12 내지 도 14에서와 같이 평균 수동력학적 직경(hydrodynamic diameter, HD), 제타포텐셜 및 다분산 지수는 총 지질 (M): ICG (M)의 비율 또는 지질 종류에 따라 큰 차이가 없었다.
시험예 3: Liposomal ICG의 세포 사멸 효과
HeLa 세포 (ATCC® CCL-2™)를 5000 Cells/100ul 1 Well의 양으로 준비하였다. Hela 세포에 제조예 1 중 지질(포스파티딜콜린) (M): ICG (M)을 250:1 비율로 각각 합성한 리포좀-ICG 복합체를 5 ug/ml (ICG의 농도 기준)로 각각 처리한 뒤, 808nm, 650mW의 레이져를 3분 동안 조사하였다. 레이저를 조사하고 30분 이후에 세포 배양액 내에 잔존하는 인도시아닌 그린을 포함한 리포좀을 제거하고 24시간 동안 세포를 배양한 후 MTT Assay를 통해 세포사멸 효과를 측정하였다.
그 결과를 도 16에 나타내었다. 도 16을 참조하면, DMPC를 포함하는 리포좀-ICG 복합체에서 가장 향상된 세포사멸 효과를 나타냄을 확인하였다.
본 발명에 따른 암 치료용 조성물은 인도시아닌 그린이 캡슐화된 리포좀을 포함하는 복합체에 치료적으로 유효한 광을 조사하여 유의한 세포사멸 효과를 나타냄으로써, 우수한 암 치료 효과를 나타낼 수 있을 뿐 아니라, 외과 수술법에 의하지 않고도 종양을 제거할 수 있다. 또한, 정상세포에의 영향을 최소화하면서도 암 세포에 대하여 선별적으로 세포사멸 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

Claims (15)

  1. 포스파티딜콜린, 안정화제 및 인도시아닌 그린의 혼합에 의해 제조되는 인도시아닌 그린-리포좀 복합체를 함유하고,
    상기 인도시아닌 그린은 리포좀에 캡슐화(encapsulation)된 것이며,
    치료적으로 유효한 광 조사에 의해 세포사멸을 유도하는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 포스파티딜콜린은 L-α-phosphatidylcholine (Egg, Chicken) , L-α-phosphatidylcholine, hydrogenated (Egg, Chicken), L-α-phosphatidylcholine (Soy), L-α-phosphatidylcholine, hydrogenated (Soy) 1,2-didecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (10:0 PC), 1,2-diundecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (11:0 PC), 1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine (12:0 PC (DLPC)), 1,2-ditridecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (13:0 PC), 1,2-dipentadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (15:0 PC), 1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (4ME 16:0 PC), 1,2-diheptadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (17:0 PC), 1,2-dinonadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (19:0 PC), 1,2-diarachidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (20:0 PC), 1,2-dimyristoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (14:1 (Δ9-Cis) PC), 1,2-dimyristelaidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (14:1 (Δ9-Trans) PC), 1,2-dipalmitoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (16:1 (Δ9-Cis) PC), 1,2-dipalmitelaidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (16:1 (Δ9-Trans) PC), 1,2-dipetroselenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:1 (Δ6-Cis) PC), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:1 (Δ9-Cis) PC (DOPC)), 1,2-dielaidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:1 (Δ9-Trans) PC), 1,2-dilinoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:2 (Cis) PC), 1,2-dilinolenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18:3 (Cis) PC), 1,2-dieicosenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (20:1 (Cis) PC), DSPC (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DPPC (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DMPC (1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine) 및 DOPC (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 안정화제는 폴리에틸렌글리콜에 컨쥬게이션된 포스파티딜에탄올아민 (phosphatidylethanolamine)인 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 폴리에틸렌글리콜은 1, 000 내지 10, 000의 분자량을 가지는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 상기 포스파티딜에탄올아민은 DMPE (dimyristoylphosphatidylethanolamine), DPPE (dipalmitoylphosphatidylethanolamine), DOPE (dioleoylphosphatidylethanolamine) 및 DSPE (distearoylphosphatidyl-ethanolamine)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 인도시아닌 그린은 0.1-30 ug/ml의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 포스파티딜콜린과 인도시아닌 그린은 250:0.1-32의 몰비로 포함되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 포스파티딜콜린과 인도시아닌 그린은 250:0.5-16의 몰비로 포함되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 치료적으로 유효한 광은 700-900nm에서 100 mW 이상 1 W 이하의 전력으로 3분 이상 30분 이하로 조사되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 복합체의 평균 수동력학적 직경(hydrodynamic diameter, HD)은 50-200nm인 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 복합체의 다분산지수(polydispersity index)는 0.2 이하인 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 암 치료에 유효한 항체 또는 이의 면역치료적으로 유효한 단편, 세포독성제 또는 화학치료제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물.
  13. 하기 단계를 포함하는 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 암 치료용 조성물의 제조방법:
    (a) 유기용매 중에 1종 이상의 포스파티딜콜린과 안정화제 및 인도시아닌 그린을 용해시키고, 유기용매를 제거하여 케익을 제조하는 단계;
    (b) 상기 케익을 수화시켜 분산액을 제조하고, 다공성 고분자막에 압출시켜 인도시아닌 그린이 포함된 리포좀을 제조하는 단계; 및
    (c) 상기 단계 (b)의 리포좀 중 인도시아닌 그린이 리포좀 내에 캡슐화된 복합체를 분리하는 단계.
  14. 제13항에 있어서, 상기 유기용매는 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물의 제조방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 다공성 고분자막은 공극의 직경이 50-200nm인 폴리카보네이트로 이루어진 것임을 특징으로 하는 암 치료용 조성물의 제조방법.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113750241A (zh) * 2021-10-21 2021-12-07 新疆生产建设兵团医院 一种包载光热剂和化疗药物含钙微沉淀脂质体及其制备方法和应用
WO2023102877A1 (zh) * 2021-12-10 2023-06-15 深圳先进技术研究院 吲哚菁绿脂质体及其大规模制备方法和应用
CN120459035A (zh) * 2025-06-04 2025-08-12 广东云曌医疗科技有限公司 一种as1411适配体功能化脂质体及其制备方法和应用

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101967537B1 (ko) 2017-07-10 2019-04-09 가톨릭대학교 산학협력단 광 조사 기포 발생 리포좀 조성물
KR20190113376A (ko) 2018-03-28 2019-10-08 영남대학교 산학협력단 양친매성 독소루비신 및 엽산을 이용한 항암 리포좀 조성물
CN112423738B (zh) * 2018-06-01 2023-06-20 西江大学校产学协力团 通过利用脂质的表面改性提升细胞内摄取效率的纳米粒子复合体及其制造方法
KR102742323B1 (ko) * 2021-07-15 2024-12-11 인천대학교 산학협력단 초음파 감작제가 탑재된 종양 표적화 엑소좀 및 이의 제조방법
KR20250065513A (ko) 2023-11-03 2025-05-13 충남대학교산학협력단 레이저 감응성 콘드로이틴 황산염 나노입자를 포함하는 암 치료용 조성물 및 이의 제조방법

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6602274B1 (en) * 1999-01-15 2003-08-05 Light Sciences Corporation Targeted transcutaneous cancer therapy
KR20110138003A (ko) * 2010-06-18 2011-12-26 김진왕 피부 병변, 피부 신생물 및 피부암, 피부혈관, 통증완화, 다모증완화, 두피모발재생, 피부재생, 피부미백, 피부회춘, 노화방지, 국소지방세포감소, 지방조직감소, 줄기세포 병행치료, 안면 및 전신에 관한 단순치료 혹은 복합광선치료, 공기압 맛사지치료, 공기압 광선역학치료, 고주파, 초음파기기 복합치료, 성형외과, 피부과, 스파병행 시술등에 있어 앨이디, 오앨이디, 레이저 ,레이저 다이오드, 광선, 광선역학 치료방법 및 광선역학 치료기
KR20120018234A (ko) * 2010-07-20 2012-03-02 임경원 Ｐｄｔ를 이용한, 포유동물의 종양 또는 피부질환 치료방법
CN103893761A (zh) * 2014-03-13 2014-07-02 中国科学院深圳先进技术研究院 一种超声辅助基于光热剂的肿瘤细胞杀伤方法、系统和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6602274B1 (en) * 1999-01-15 2003-08-05 Light Sciences Corporation Targeted transcutaneous cancer therapy
KR20110138003A (ko) * 2010-06-18 2011-12-26 김진왕 피부 병변, 피부 신생물 및 피부암, 피부혈관, 통증완화, 다모증완화, 두피모발재생, 피부재생, 피부미백, 피부회춘, 노화방지, 국소지방세포감소, 지방조직감소, 줄기세포 병행치료, 안면 및 전신에 관한 단순치료 혹은 복합광선치료, 공기압 맛사지치료, 공기압 광선역학치료, 고주파, 초음파기기 복합치료, 성형외과, 피부과, 스파병행 시술등에 있어 앨이디, 오앨이디, 레이저 ,레이저 다이오드, 광선, 광선역학 치료방법 및 광선역학 치료기
KR20120018234A (ko) * 2010-07-20 2012-03-02 임경원 Ｐｄｔ를 이용한, 포유동물의 종양 또는 피부질환 치료방법
CN103893761A (zh) * 2014-03-13 2014-07-02 中国科学院深圳先进技术研究院 一种超声辅助基于光热剂的肿瘤细胞杀伤方法、系统和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHEMESH, COLBY S. ET AL.: "Indocyanine Green Loaded Liposome Nanocarriers for Photodynamic Therapy Using Human Triple Negative Breast Cancer Cells", PHOTODIAGNOSIS AND PHOTODYNAMIC THERAPY, vol. 11, no. 2, 19 March 2014 (2014-03-19), pages 193 - 203, XP055330452 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113750241A (zh) * 2021-10-21 2021-12-07 新疆生产建设兵团医院 一种包载光热剂和化疗药物含钙微沉淀脂质体及其制备方法和应用
WO2023102877A1 (zh) * 2021-12-10 2023-06-15 深圳先进技术研究院 吲哚菁绿脂质体及其大规模制备方法和应用
CN120459035A (zh) * 2025-06-04 2025-08-12 广东云曌医疗科技有限公司 一种as1411适配体功能化脂质体及其制备方法和应用
CN120459035B (zh) * 2025-06-04 2026-03-03 广东云曌医疗科技有限公司 一种as1411适配体功能化脂质体及其制备方法和应用

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