WO2016142633A1 - Collagène extrait de peaux de poissons - Google Patents

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WO2016142633A1
WO2016142633A1 PCT/FR2016/050550 FR2016050550W WO2016142633A1 WO 2016142633 A1 WO2016142633 A1 WO 2016142633A1 FR 2016050550 W FR2016050550 W FR 2016050550W WO 2016142633 A1 WO2016142633 A1 WO 2016142633A1
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collagen
skins
fish
juice
chains
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WO2016142633A8 (fr
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Marc Hemon
Fabienne GUERARD
Roxane Fagon
Gilles Charpentier
Margot PROVOST
Original Assignee
Ys Lab
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Publication of WO2016142633A8 publication Critical patent/WO2016142633A8/fr

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]

Definitions

  • the present invention relates to a collagen isolated from its natural environment from animal skins, and more particularly relates to collagen of skins of fish.
  • Native collagen consists of three polypeptide chains of about 1050 amino acids associated in triple helix.
  • Collagen has three alpha chains ( ⁇ 1, a2 and / or a3) associated in triple helices, which triple collagen helix is called a gamma chain ( ⁇ ).
  • ⁇ triple collagen helix
  • type I collagen remains the most abundant in vertebrate organisms. This type I collagen consists of the triple helix association of two chains a1 to a chain a2.
  • Many uses are known collagens obtained from animal skins.
  • industries, such as the cosmetics industry and the food industry take advantage of the interesting properties of collagen derivatives, as is the case with gelatin.
  • Collagen gelatin is well known as an essential ingredient for the manufacture of confectionery.
  • Marine collagen is mainly extracted from skins, bones or scales of marine animals, or it can be extracted from cnidarians.
  • Known extraction methods require the use of acid for extraction, which extraction is followed by precipitation with salts.
  • the collagens or derivatives obtained are composed mainly of alpha (a1 or a2) and beta ( ⁇ ) chains (the beta chain being composed of two alpha chains), and therefore can not be considered as native collagen.
  • the patent application US2014147400 describes a process for obtaining a collagen from the skins of a fish, tilapia (also called “red tilapia” or "Oreochromis nilotica”).
  • Collagen is extracted using the use of papain and sodium chloride.
  • the collagen derivative obtained is used as a clarifying agent for beer, wine or fruit juice.
  • the present invention relates to a native collagen of fish skin comprising ⁇ , ⁇ and ⁇ chains.
  • the inventors have unexpectedly discovered that a treatment with water, with a slight heating, of fish skins suitably pretreated mechanically made it possible to isolate a native collagen comprising gamma-type ( ⁇ ) polypeptide chains without denaturing it.
  • the ⁇ chains are free or associated chains with a molecular weight of each gamma chain of at least 300 kDa.
  • the collagen chain contents according to the invention are advantageously from 2 to 15% of the total weight of collagen solids, or even from 6 to 12%.
  • the ⁇ -chain contents of the collagen according to the invention are advantageously from 1 to 10% of the total weight of solids of collagen, or even from 3 to 7%.
  • the present invention is more particularly a composition consisting of a collagen juice or a dry extract of collagen isolated from fish skin comprising ⁇ , ⁇ and ⁇ chains.
  • the native collagen according to the invention advantageously comprises a weight content of ⁇ (high molecular weight) chains free and / or associated with each other - also qualified as total ⁇ chain content - of at least 60% relative to the total mass. of the dry extract of collagen obtained.
  • ⁇ chain content guarantees the quality of native collagen extracted from the skin of fish.
  • the total content of ⁇ chains is preferably at least 65%, more preferably at least 70%, or even at least 75%.
  • the content of free ⁇ -chains - that is to say not associated with each other - of the collagen according to the invention is advantageously from 5 to 20% of the total weight of solids content of collagen, even from 10 to 15%.
  • the content of ⁇ chains associated with each other is advantageously 60 to 80%.
  • the native collagen according to the invention is advantageously extracted from fresh fish skins.
  • a fresh fish skin within the meaning of the present invention corresponds to a skin used within ten days after fishing, and kept on ice bed while waiting for its transformation. The skin thus retains all its structural quality. Collagen obtained from fresh fish skins is isolated in a non-denaturing condition.
  • the native collagen according to the invention is advantageously extracted from salmon skins.
  • the salmon skin requires only a rough mechanical pretreatment and it is possible to extract the native collagen with a high yield.
  • the collagen obtained from salmon skins has a structure identical to the native collagen found in the skin of salmon.
  • the native collagen according to the invention is advantageously extracted from farmed salmon skins.
  • Farmed salmon is a source of choice because its traceability is well known, the presence of heavy metals is avoided for example.
  • Collagen obtained from farmed salmon skins has a consistent structure and quality that is not likely to change, as is the case of wild salmon whose source nature is dependent on the fishing season and sampling areas.
  • the present invention also relates to a process for obtaining native collagen as described above in the context of the invention, from fish, comprising the steps of: a) fillet fresh fish to recover skins;
  • the fish used in the process are advantageously salmon or even farmed salmon.
  • Step c) advantageously employs the use of a mechanical separator (high-pressure mechanical separator comprising at least one slotted screen) for sieving under pressure by eliminating liquid and semi-liquid residues, which pass through the slots sieves. Only the retentate, that is to say the fraction retained in the filters, is kept in view of the subsequent processing steps of the process.
  • a mechanical separator high-pressure mechanical separator comprising at least one slotted screen
  • the process advantageously comprises a disinfection step by contacting the freshly pulped skins with a sodium hydroxide solution at 0.5-1.5 mol / L for 5-15 min, rinsing and then contacting with a formic acid solution at 2.5 to 7.5. % for 5 to 15 minutes. Skins with too much microbiological flora must be treated in this way, in order to eliminate the bacteria they contain.
  • the formic acid can be replaced by phosphoric acid or lactic acid.
  • the process advantageously comprises an ultimate drying step taking care to avoid denaturation of the triple helix.
  • the process for obtaining collagen advantageously comprises an ultimate filtration step (before drying, when this has to be carried out) in deodorization and / or decontamination.
  • the raw collagen juice colored, and / or having a strong odor, is transformed into a colorless and odorless juice.
  • the collagen juice obtained according to the process according to the invention comprises ⁇ , ⁇ and ⁇ chains with a ⁇ chain content of at least 60%.
  • the present application also relates to a use of native collagen as described above in the context of the invention for the cosmetic care of the skin by hydration.
  • the raw material consists of fresh salmon skins (used less than 10 days after the fishing of the fish, this one being conserved on ice bed while waiting for its transformation). The skin thus retains all its quality.
  • the skin is recovered and cut into pieces of 2 to 4 cm 2 .
  • This mechanical treatment is done using a mechanical separator type SM marketed by the company AM2C® under the reference SM820, whose separation principle prevents heating of the skin of fish. - The skin thus removed is dipped in 4 volumes of hot water (45 ° C +/- 5 ° C) and slowly brewed for 90 minutes. This step allows the extraction of collagen.
  • the liquid formed is then sieved (0.8mm internal diameter mesh) to recover the collagen juice.
  • drying of the collagenic juice is carried out at low temperature, thus avoiding the denaturation of the triple helix.
  • SDS-PAGE electrophoresis allows the chains to be broken down by their size.
  • the SDS-PAGE technique was implemented according to the method described by Laemmli (1970).
  • the freeze-dried collagen is solubilized in Milli-Q water at a concentration of 1.5 mg / ml and then dissolved in Laemmli buffer at a ratio of 1: 1.
  • Protein bands are detected with the Gel Doc TM EZ Imager image analyzer, and the data is analyzed with Image Lab 4.0.1 software (BioRad®).
  • FIG. 2 shows the chromatogram obtained according to the following protocol:
  • Thyroglobulin control solution dissolve 10.0 mg of thyroglobulin
  • ⁇ -amylase control solution dissolve 10.0 mg of ⁇ -amylase (marketed by Sigma-Aldrich® under the reference: A8781) in 10.0 mL of HPLC-grade water.
  • Gammaglobulin control solution dissolve 10.0 mg of gamma globulin (marketed by Sigma-Aldrich® under the reference:
  • BSA Bovine Serum Albumin Control Solution
  • Carbonic anhydrase control solution dissolve 5.0 mg of carbonic anhydrase (marketed by Sigma-Aldrich® under the reference: C7025) in 5.0 ml of HPLC-grade water.
  • Myoglobin control solution dissolve 10.0 mg of myoglobin (marketed by Sigma-Aldrich® under the reference: M5696) in 10.0 mL of HPLC-grade water. • Exclusion volume:
  • the exclusion volume Vo is determined by injecting a solution of blue dextran at the concentration of 5.0 mg / ml.
  • Solid sample Weigh 50.0 mg of the sample to be analyzed and dissolve it in 10.0 mL of HPLC grade water.
  • Liquid sample Take 3.0 mL and make up to 10.0 mL with HPLC grade water.
  • SEM Scanning Electron Microscopy
  • the collagen obtained was subjected to ATR-FTIR spectroscopy.
  • An FTIR spectrometer (Bruker® Vertex 70 FT-IR with an ATR module) was used. The spectrum in the range 4000-400 cm “1 with an automatic gain signal is collected with 32 scans with a resolution of 4 cm" 1. The spectrum obtained is analyzed using the software OPUS 8.0 (Bruker®). The determination is made in triplicate.
  • the collagen thus obtained is used for cosmetic purposes as a moisturizing agent.

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Abstract

Composition consistant en un jus de collagène ou un extrait sec de collagène isolé de peau de poisson comprenant des chaînes α, β et γ.

Description

Collaqène extrait de peaux de poissons
La présente invention concerne un collagène isolé de son milieu naturel à partir de peaux d'animaux, et concerne plus particulièrement du collagène de peaux de poisson.
Le collagène à l'état natif est constitué de trois chaînes polypeptidiques d'environs 1050 acides aminés associées en triple hélice. Le collagène comporte trois chaînes alpha (α1 , a2 et/ou a3) associées en triple hélice, laquelle triple hélice de collagène est qualifiée de chaîne gamma (γ). S'il existe différents types de collagènes, le collagène de type I reste le plus abondant dans les organismes des vertébrés. Ce collagène de type I consiste en l'association en triple hélice de deux chaînes a1 à une chaîne a2. De nombreuses utilisations sont connues des collagènes obtenus à partir de peaux d'animaux. Diverses industries, par exemple l'industrie des cosmétiques et celle des produits alimentaires, tirent profit des propriétés intéressantes des dérivés du collagène, comme c'est le cas de la gélatine. La gélatine de collagène est bien connue en tant qu'ingrédient essentiel pour la fabrication des confiseries.
Le collagène marin est extrait principalement de peaux, d'arêtes ou d'écaillés d'animaux marin, voire il peut être extrait à partir de cnidaires. Des procédés d'extractions connus requièrent l'utilisation d'acide pour l'extraction, laquelle extraction est suivie d'une précipitation par des sels. Les collagènes ou dérivés obtenus sont composés majoritairement de chaînes alpha (a1 ou a2) et béta (β) (la chaîne béta étant composée de deux chaînes alpha), et ne peuvent donc pas être considérés comme du collagène natif. La demande de brevet US2014147400 décrit un procédé d'obtention d'un collagène à partir de peaux d'un poisson, le tilapia (aussi dénommé « red tilapia » ou « Oreochromis nilotica »). Le collagène est extrait en ayant recours à l'utilisation de la papaïne et de chlorure de sodium. Le dérivé de collagène obtenu est utilisé comme agent de clarification des bières, du vin ou des jus de fruit.
Tous ces dérivés de collagène de l'art antérieur obtenus à partir de source de collagène sont dénaturés au cours des étapes de purification, soit par l'utilisation d'acides ou de bases, soit par l'utilisation de sels, soit encore par l'utilisation d'enzymes. Il ne s'agit donc pas de collagène natif à proprement parler. Pour pallier tout ou partie des inconvénients de l'état de la technique, la présente invention a pour objet un collagène natif de peau de poisson comprenant des chaînes α, β et γ. Les inventeurs ont découvert de manière inattendue qu'un traitement à l'eau, avec un léger chauffage, de peaux de poisson convenablement prétraités mécaniquement permettait d'isoler un collagène natif comportant des chaînes polypeptidiques de type gamma (γ) sans le dénaturer. Les chaînes γ sont des chaînes libres, ou associées entre elles, avec un poids moléculaire de chaque chaîne gamma d'au moins 300 kDa. Les teneurs en chaînes a du collagène selon l'invention sont avantageusement de 2 à 15% du poids total en extrait sec de collagène, voire de 6 à 12%. Les teneurs en chaînes β du collagène selon l'invention sont avantageusement de 1 à 10 % du poids total en extrait sec de collagène, voire de 3 à 7%. La présente invention est plus particulièrement une composition consistant en un jus de collagène ou un extrait sec de collagène isolé de peau de poisson comprenant des chaînes α, β et γ.
Le collagène natif selon l'invention comporte avantageusement une teneur pondérale en chaînes γ (de haut poids moléculaires) libres et/ou associées entre elles - aussi qualifiée de teneur totale en chaîne γ - d'au moins 60% par rapport à la masse totale de l'extrait sec de collagène obtenu. Une telle teneur en chaîne γ garantie la qualité du collagène natif extrait de la peau des poissons. La teneur totale en chaînes γ est de préférence d'au moins 65%, elle est de manière d'avantage préférée d'au moins 70%, voire d'au moins 75%. La teneur en chaînes γ libres - c'est-à-dire non associées entre elles - du collagène selon l'invention est avantageusement de 5 à 20 % du poids total en extrait sec de collagène, voire de 10 à 15%.
La teneur en chaînes γ associées entre-elles, c'est-à-dire d'un poids moléculaire supérieur ou égal à 600 kDa, est avantageusement de 60 à 80 %.
Toutes les combinaisons des plages des valeurs des différentes molécules du collagène, présentées précédemment dans le cadre de l'invention, sont également possibles.
Le collagène natif selon l'invention est avantageusement extrait à partir de peaux de poisson fraîches. Une peau de poisson fraîche au sens de la présente invention correspond à une peau utilisée dans les dix jours qui suivent la pêche, et conservée sur lit de glace dans l'attente de sa transformation. La peau conserve ainsi toute sa qualité structurale. Le collagène obtenu à partir de peaux de poisson frais est isolé en condition non dénaturante.
Le collagène natif selon l'invention est avantageusement extrait à partir de peaux de saumon. La peau du saumon ne requiert qu'un prétraitement mécanique sommaire et il est possible d'en extraire le collagène natif avec un rendement élevé. Le collagène obtenu à partir de peaux de saumon a une structure identique au collagène natif présent au sein de la peau du saumon.
Le collagène natif selon l'invention est avantageusement extrait à partir de peaux de saumon d'élevage. Le saumon d'élevage est une source de choix étant donné que sa traçabilité est parfaitement connue, la présence de métaux lourds est par exemple évitée. Le collagène obtenu à partir de peaux de saumon d'élevage a une structure et une qualité constante qui n'est pas susceptible d'évoluer, comme c'est le cas du saumon sauvage dont la nature de la source est dépendante des périodes de pêche et des zones de prélèvement.
La présente invention concerne aussi un procédé d'obtention de collagène natif tel que décrit précédemment dans le cadre de l'invention, à partir de poisson, comprenant les étapes : a) fileter des poissons frais pour en récupérer les peaux ;
b) découper les peaux en morceaux de 2 à 4 cm2 ;
c) traiter les morceaux dans une séparatrice mécanique pour en éliminer la chair et les déshydrater ;
d) plonger les morceaux dépulpés et déshydratés dans une enceinte comportant quatre volumes d'eau portée à une température de 40 à 50 °C ;
e) extraire le collagène en effectuant une agitation douce pendant 60 à 120 minutes ;
f) collecter le jus de collagène par tamisage ou filtration (clarifiante) ; et
g) congeler le jus de collagène.
Les poissons mis en œuvre dans le procédé sont avantageusement des saumons, voire des saumons d'élevage.
L'étape c) met avantageusement en œuvre l'utilisation d'une séparatrice mécanique (séparatrice mécanique à haute pression comprenant au moins un tamis à fentes) pour tamiser sous pression en éliminant les résidus liquides et semi-liquides, lesquels passent par les fentes des tamis. Seul le rétentat, c'est-à- dire la fraction retenue dans les filtres, est gardé en vu des étapes de traitement ultérieures du procédé.
Le procédé comporte avantageusement une étape de désinfection par mise en contact des peaux fraîchement dépulpées avec une solution de soude à 0.5 - 1 .5 mol/L pendant 5 à 15 mn, rinçage puis contact avec une solution d'acide formique à 2.5 à 7.5% pendant 5 à 15 mn. Les peaux comportant une flore microbiologique trop importante doivent être traitée ainsi, en vu d'éliminer les bactéries quelles contiennent. L'acide formique peut être remplacé par de l'acide phosphorique ou de l'acide lactique.
Le procédé comporte avantageusement une étape ultime de séchage en prenant soin d'éviter la dénaturation de la triple hélice. Le procédé d'obtention du collagène comporte avantageusement une étape ultime de filtration (avant le séchage, lorsque celui-ci doit être effectué) en vue d'une désodorisation et/ou d'une décontamination. Le jus de collagène brut coloré, et/ou ayant une odeur forte, est transformé en un jus incolore et inodore.
De préférence, le jus de collagène obtenu suivant le procédé selon l'invention comprend des chaînes α, β et γ avec une teneur en chaîne γ d'au moins 60%.
La présente demande concerne aussi une utilisation du collagène natif telle que décrit précédemment dans le cadre de l'invention pour le soin cosmétique de la peau par hydratation.
Les exemples présentés dans la partie expérimentale sont uniquement donnés à titre illustratif et ne sauraient être interprétés comme limitatifs eu égard à la protection demandée.
PARTIE EXPERIMENTALE
La correspondance entre l'unité Dalton (symbole « Da »), utilisée dans le cas d'espèce pour quantifier la masse des molécules du collagène, et l'unité de masse atomique unifiée (symbole « u ») du Système International (SI) est rappelée : 1 Da = 1 .00794 u. Le symbole kDa correspond au kilodalton très souvent utilisé en biochimie et en biologie.
1) Préparation :
Le collagène natif marin est isolé de la manière suivante :
- la matière première consiste en des peaux de saumon fraîches (utilisée moins de 10 jours après la pêche du poisson, celui-ci étant conservé sur lit de glace dans l'attente de sa transformation). La peau conserve ainsi toute sa qualité.
- après filetage du saumon, la peau est récupérée et découpée en morceau de 2 à 4 cm2.
- les morceaux de peau sont ensuite traités mécaniquement pour en éliminer tous les résidus de chairs. Cette étape permet de ne conserver que strictement la peau et les écailles de saumon.
Ce traitement mécanique se fait à l'aide d'une séparatrice mécanique de type SM commercialisé par la société AM2C® sous la référence SM820, dont le principe de séparation permet d'éviter réchauffement de la peau de poisson. - la peau ainsi dépulpée est plongée dans 4 volumes d'eau et chaude (45°C+/- 5°C) et lentement brassée pendant 90 minutes. Cette étape permet l'extraction du collagène.
- le liquide formé est ensuite tamisé (mailles de diamètre interne de 0.8mm) pour récupérer le jus collagénique.
- Ce jus est ensuite conditionné et congelé avant d'être séché.
- le séchage du jus collagénique est réalisé à basse température, évitant ainsi la dénaturation de la triple hélice.
Deux options sont possibles dans ce procédé :
- en cas de flore microbiologique trop importante sur les peaux de saumons, une étape de débactérisation par contact avec de la soude (2 volume de NaOH 1 N pendant 10 minutes), rinçage puis contact avec de l'acide (acide formique 5% pendant 10 minutes) peut être mise en œuvre avant l'extraction (sur la peau parfaitement dépulpée.)
- en cas de jus collagénique trop coloré ou trop odorant, une étape de filtration - sur plaque ou sur charbon - peut être mise en œuvre.
2) Résultats :
Caractérisation du collagène obtenu par différentes techniques
SDS-PAGE (électrophorèse sur gel polyacrylamide en conditions dénaturantes par le sodium dodécyl sulfate) : Une électrophorèse SDS-PAGE, permet de fractionner les chaînes par leur taille.
Protocole :
La technique SDS-PAGE a été mise en œuvre selon la méthode décrite par Laemmli (1970). Le collagène lyophilisé est solubilisé dans de l'eau Milli-Q à la concentration de 1 .5 mg/mL, puis dissout dans du tampon Laemmli au ratio 1 :1 .
15 μ\- de cette solution échantillon et 10 μ\- de marqueurs moléculaires sont chargés dans les puits du gel de polyacrylamide 4-20% pré-coulé (kit Mini- PROTEAN® TGX™, Laboratoires Bio-Rad®). La migration est réalisée en tampon Tris-Gly-SDS (pH=8.3) contenant 25 mM de Tris, 192 mM de glycine et 0.1 % (w/v) dans une cuve Mini Protean® Tétra System (Bio-Rad®). Les gels sont colorés avec 50 mL de bleu de Coomassie puis rincés à l'eau Milli-Q.
Les bandes de protéines sont détectées avec l'analyseur d'image Gel Doc™ EZ Imager, puis les données sont analyses avec le logiciel Image Lab 4.0.1 (Bio- rad®).
La présence de chaîne γ confirme la présence de collagène en triple hélice (voir la figure 1 ) et conforte que le collagène obtenu est du collagène natif. Chromatographie HPLC
Une chromatographie liquide haute performance, permet de montrer la répartition des chaînes de protéines collagéniques en fonction de leur poids. La figure 2 montre le chromatogramme obtenu selon le protocole suivant :
• Conditions d'analyses :
Colonne : Yarra™ 3μηι SEC 4000 : 300 mm x 7.8 mm
Débit : 1 mL/min
Température : 20 °C
λ : 220 nm
Phase mobile : tampon phosphate sodium 0.1 M ; pH=7 + 100 mM NaCI Injection : 20 μ\- Enregistrement : 15 minutes
• Témoins :
Vérification de la gamme d'étalonnage entre 670 kDa et 17 kDa :
- Solution témoin thyroglobuline : dissoudre 10.0 mg de thyroglobuline
(commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence: T9145) dans 10.0 mL d'eau qualité HPLC.
- Solution témoin apoferritine : prélever 100 μ\- de la solution d'apoferritine
(commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence: 3660- 1 vl) et compléter avec 1 .2 d'eau qualité HPLC.
- Solution témoin β-amylase : dissoudre 10.0 mg de β-amylase (commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence : A8781 ) dans 10.0 mL d'eau qualité HPLC.
- Solution témoin gammaglobuline : dissoudre 10.0 mg de gammaglobuline (commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence :
G7516) dans 5.0 mL d'eau qualité HPLC.
- Solution témoin alcool déshydrogénase : dissoudre 10.0 mg d'alcool déshydrogénase (commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence: A8656) dans 5.0 mL d'eau qualité HPLC.
- Solution témoin Bovine Sérum albumine (BSA) : dissoudre 10.0 mg de
BSA (commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence: A2153) dans 10.0 mL d'eau qualité HPLC.
- Solution témoin anhydrase carbonique : dissoudre 5.0 mg d'anhydrase carbonique (commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence: C7025) dans 5.0 mL d'eau qualité HPLC.
- Solution témoin myoglobine : dissoudre 10.0 mg de myoglobine (commercialisé par la société Sigma-AIdrich® sous la référence : M5696) dans 10.0 mL d'eau qualité HPLC. • Volume d'exclusion :
Le volume d'exclusion Vo est déterminé en injectant une solution de blue dextran à la concentration de 5.0 mg/mL.
• Echantillons :
Echantillon solide : peser 50.0 mg de l'échantillon à analyser et le dissoudre dans 10.0 mL d'eau qualité HPLC.
Echantillon liquide : Prélever 3.0 mL et compléter à 10.0 mL avec de l'eau qualité HPLC.
Une majorité de chaînes de poids moléculaires supérieurs à 300 000 Da sont observées, ce qui atteste de la majorité de présence de triple hélice, voir du maintien de la structure fibrillaire du collagène extrait.
Microscopie électronique à balayage (MEB) : Les caractéristiques morphologiques du collagène ont été observées par microscopie électronique à balayage (S-3200N; Hitachi®). Les échantillons sont déposés sur des supports recouverts d'un alliage or/palladium et observés à différents grossissement. L'image obtenue conforte la présence des chaînes γ mises en évidence par l'électrophorèse et la chromatographie haute densité en phase liquide (voir la figure 3). Sur la figure 3 des fibres de l'ordre de 14 μηι (cadre ovale) et de l'ordre de 90 μηι sont observées (cadre rectangulaire avec grossissement).
Analyse Infrarouge (FTIR) :
Le collagène obtenu a été soumis à une spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier en réflexion totale atténuée (ATR-FTIR). Un spectromètre FTIR (Bruker® Vertex 70 FT-IR avec un module ATR) a été utilisé. Le spectre, dans la gamme 4000-400 cm"1 avec un gain de signal automatique, est collecté par 32 scans avec une résolution de 4 cm"1. Le spectre obtenu est analysé à l'aide du logiciel OPUS 8.0 (Bruker®). La détermination est faite en triplicata.
Le spectre infrarouge obtenu conforte la présence des chaînes γ en grande quantité (voir la figure 4). Tableau reportant les pics d'intérêt sur le spectre représenté en figure 4 :
Figure imgf000011_0001
Le collagène ainsi obtenu est utilisé à des fins cosmétiques comme agent hydratant.

Claims

REVENDICATIONS
Procédé d'obtention d'un collagène isolé de peaux de poisson comprenant les étapes :
a. fileter des poissons frais pour en récupérer les peaux ;
b. découper les peaux en morceaux de 2 à 4 cm2 ;
c. traiter les morceaux dans une séparatrice mécanique pour en éliminer la chair et les déshydrater ;
d. plonger les morceaux dépulpés et déshydratés dans une enceinte comportant quatre volumes d'eau portée à une température de 40 à 50 °C ;
e. extraire le collagène en effectuant une agitation douce pendant 60 à 120 minutes ;
f. collecter le jus de collagène par tamisage ou filtration ; et g. congeler le jus de collagène.
Procédé selon la revendication 1 , dans lequel les poissons sont des saumons.
Procédé selon l'une des revendications 1 à 2, dans lequel les poissons sont des saumons d'élevage.
Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel le procédé comporte une étape de désinfection par mise en contact des peaux fraîchement dépulpées à la fin de l'étape c) avec une solution de soude à 0.5 - 1 .5 mol/L pendant 5 à 15 mn, rinçage, puis contact avec une solution d'acide, de préférence une solution d'acide formique, à 2.5 à 7.5% pendant 5 à 15 mn.
Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, dans lequel le procédé comporte une étape ultime de filtration juste après l'étape f), en vue d'une désodorisation et/ou d'une décontamination.
6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, dans lequel le jus de collagène comprend des chaînes α, β et γ et dont la teneur en chaîne γ est d'au moins 60%.
7. Utilisation du collagène obtenu suivant les procédés selon l'une des revendications 1 à 6 pour le soin cosmétique de la peau par hydratation.
PCT/FR2016/050550 2015-03-11 2016-03-11 Collagène extrait de peaux de poissons WO2016142633A1 (fr)

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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0436266A1 (fr) * 1988-08-04 1991-07-10 Bar Ilan University Procédé de production de gélatine à partir de peaux de poissons
EP1016347A1 (fr) * 1998-12-31 2000-07-05 Skw Biosystems Procédé de préparation de gélatine de poisson
US6271350B1 (en) * 1998-08-11 2001-08-07 Thara & Company Ltd. Fish collagen and method of producing same
WO2010074552A1 (fr) * 2008-12-23 2010-07-01 Universiti Putra Malaysia (Upm) Extraction de collagène d'animaux aquatiques

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ519878A (en) * 1999-11-29 2004-02-27 Nz Inst For Crop & Food Res Collagen

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0436266A1 (fr) * 1988-08-04 1991-07-10 Bar Ilan University Procédé de production de gélatine à partir de peaux de poissons
US6271350B1 (en) * 1998-08-11 2001-08-07 Thara & Company Ltd. Fish collagen and method of producing same
EP1016347A1 (fr) * 1998-12-31 2000-07-05 Skw Biosystems Procédé de préparation de gélatine de poisson
WO2010074552A1 (fr) * 2008-12-23 2010-07-01 Universiti Putra Malaysia (Upm) Extraction de collagène d'animaux aquatiques
US20140147400A1 (en) 2008-12-23 2014-05-29 Universiti Putra Malaysia Collagen extraction from aquatic animals

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KOLODZIEJSKA ET AL: "Effect of extracting time and temperature on yield of gelatin from different fish offal", FOOD CHEMISTRY, ELSEVIER LTD, NL, vol. 107, no. 2, 19 November 2007 (2007-11-19), pages 700 - 706, XP022351968, ISSN: 0308-8146, DOI: 10.1016/J.FOODCHEM.2007.08.071 *

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