WO2016137127A1 - 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트를 함유하는 히알루론산의 분해억제제 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents

소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트를 함유하는 히알루론산의 분해억제제 및 이를 포함하는 조성물 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a composition for inhibiting the degradation of hyaluronic acid or a derivative thereof, and more particularly, to a composition of hyaluronic acid or a derivative thereof having increased resistance to hyaluronidase activity by containing sodium 2-mercaptoethane sulfonate. It relates to a biodegradation inhibitor and a composition for bioadministration or cosmetic molding, in particular a composition for repairing a biological tissue, containing the decomposition inhibitor and hyaluronic acid or a derivative thereof.
  • Hyaluronic acid is one of complex polysaccharides composed of amino acids and uronic acids, and is a high molecular compound having a molecular weight of 200,000 to 400,000 in which N-acetylglucosamine and glucuronic acid are alternately bonded in a chain form.
  • Hyaluronic acid is a component that exists in animal vitreous, joint fluid, cartilage, and skin. It is combined with a large amount of water and becomes a gel state. It is involved in lubrication of joints and flexibility of the skin. It also plays an important role in preventing skin penetration.
  • the hyaluronic acid is a component naturally present in all living organisms, and more than 50% of hyaluronic acid in the mammal's body has been reported to be distributed in the intercellular spaces of the skin, especially the epidermis and the connective tissues of the dermis. Is known to be synthesized mainly by keratinocytes and fibroblasts.
  • Hyaluronic acid makes the skin elastic and reduces damage to the lower part of the skin during skin damage. And important collagen facilitates the movement between cells, and acts as a lubricant to facilitate the movement of bones and joints.
  • Hyaluronic acid also plays a role in preventing diseases such as skin infections by preventing the penetration of substances such as bacteria from the outside.
  • the amount of hyaluronic acid in your skin decreases and your production capacity decreases. Usually, it is the highest before and after 18 years of age, resulting in a beautiful and voluminous appearance. As such, the amount of hyaluronic acid in human skin decreases with aging, which is one of the direct causes of decreased skin elasticity and water content with aging.
  • sodium 2-mercaptoethane sulfonate is an organic sulfur compound used as an adjuvant in anticancer therapy involving cyclophosphamide and ifosfamide, hemorrhagic cystitis resulting from the use of cyclophosphamide and ifosfamide, It has been used mainly as a drug for lowering the incidence of hematuria.
  • thiol additives such as sodium 2-mercaptoethane sulfonate accelerate the formation of the hydrogel and promote the decomposition of the formed hydrogel, while sodium 2-mercaptoethane How sulfonates work in skin or skin tissue is not specifically disclosed.
  • the style-age filler developed by Vivacy, France is known to slow down the decomposition of hyaluronic acid by adding mannitol, an antioxidant, to inhibit free radicals, but the specific mechanism of action is not known. Inhibition of active oxygen using an agent is not a method capable of directly inhibiting the decomposition of hyaluronic acid.
  • the present inventors have sought to find a substance that can prevent the degradation of hyaluronic acid or its derivatives by hyaluronidase as an approach that can increase the amount (remaining amount in the composition) and / or lifespan of hyaluronic acid or derivatives thereof. It has been surprisingly found that sodium 2-mercaptoethane sulfonate can impart resistance to hyaluronidase, thus completing the present invention.
  • an object of the present invention is to provide a composition having resistance to hyaluronidase by using sodium 2-mercaptoethane sulfonate.
  • the present invention provides a decomposition inhibitor of hyaluronic acid or a derivative thereof containing sodium 2-mercaptoethane sulfonate as an active ingredient.
  • the present invention provides a composition for inhibiting decomposition of hyaluronic acid or a derivative thereof, containing sodium 2-mercaptoethane sulfonate as an active ingredient.
  • the present invention also provides a composition for bioadministration or cosmetic molding containing the decomposition inhibitor and hyaluronic acid or a derivative thereof.
  • the inhibitor of degradation of the hyaluronic acid or derivatives thereof of the present invention contains sodium 2-mercaptoethane sulfonate and thus has increased resistance to hyaluronic acid degradation by hyaluronidase, and thus hyaluronic acid or in skin or skin tissue. It is possible to prevent the reduction of its derivatives, and also to effectively suppress the decrease in skin elasticity and the decrease in moisture content due to aging.
  • the composition of the present invention by containing sodium 2-mercaptoethane sulfonate and hyaluronic acid can effectively increase the skin volume and maintain it for a long time to provide an excellent biological tissue repair effect.
  • Figure 1 shows the results of measuring the resistance to the decomposition of hyaluronic acid by hyaluronidase.
  • Figure 2 shows the results of measuring the cytotoxicity by concentration of MESNA.
  • the present invention relates to a composition capable of inhibiting the decomposition of hyaluronic acid by hyaluronidase, specifically, hyaluronic acid containing sodium 2-mercaptoethane sulfonate as an active ingredient or It relates to an inhibitor of degradation of its derivatives.
  • the present invention provides a composition for inhibiting decomposition of hyaluronic acid or a derivative thereof, containing sodium 2-mercaptoethane sulfonate as an active ingredient.
  • the present invention relates to a composition containing said degradation inhibitor or composition for inhibiting degradation and a biodegradable polymer, preferably hyaluronic acid or a derivative thereof, in particular a composition for bioadministration or cosmetic molding, preferably a composition for repairing biological tissue.
  • a biodegradable polymer preferably hyaluronic acid or a derivative thereof
  • a composition for bioadministration or cosmetic molding preferably a composition for repairing biological tissue.
  • biodegradable polymer refers to a substance that can be degraded in the body when inserted into a living body, and examples thereof include natural polymers such as hyaluronic acid, collagen, albumin, chitosan, polyglycolide, polylactide, and polyhydroxy. Polyester-based synthetic polymers such as varate.
  • the type of derivative of hyaluronic acid is not particularly limited, but hyaluronic acid-collagen complex, hyaluronic acid-polycarboxylic acid-containing natural polymer complex, hyaluronic acid-chitosan complex, hyaluronic acid-based blend (eg For example, polyvinyl alcohol or blend of polyacrylic acid and hyaluronic acid), graft hyaluronic acid copolymer (see Misook Kim et al., Biomaterials application of hyaluronic acid derivatives, see Biomaterials Research (2008) 12 (3): 83-95) It includes.
  • hyaluronic acid-collagen complex e.g, polyvinyl alcohol or blend of polyacrylic acid and hyaluronic acid
  • graft hyaluronic acid copolymer see Misook Kim et al., Biomaterials application of hyaluronic acid derivatives, see Biomaterials Research (2008) 12 (3): 83-95
  • compositions of the present invention include 2-mercaptoethane sulfonate and salts thereof, preferably metal salts of 2-mercaptoethane sulfonate can be used.
  • the metal ions forming the metal salt are not particularly limited in kind, but include sodium, potassium, lithium, calcium, magnesium, and the like, and sodium cation is particularly preferably used.
  • Sodium 2-mercaptoethane sulfonate used in the present invention is a compound represented by the following Chemical Formula 1, and is referred to as 2-mercaptoethane sulfonate Na (2-mercaptoethane sulfonate Na) or MESNA (hereinafter, “MESNA”). ).
  • the composition of the present invention is 0.0001 to 20% by weight, preferably 0.0005 to 15% by weight, more preferably 0.001 to 10% by weight of 2-mercaptoethane sulfonate and salts thereof, preferably MESNA, based on the total weight of the composition. Even more preferably 0.005 to 2% by weight, even more preferably 0.01 to 1.5% by weight. If it is less than 0.0001% by weight, the desired efficacy cannot be obtained, and it is not appropriate to exceed 20% by weight in consideration of irritation to the skin and combination with other ingredients.
  • the osmotic pressure of the final product is 250 to 350 mOsm, which is the same as the osmotic pressure range suitable for bioadministration, that is, the osmotic pressure inside the human body. It is preferable to include 2-mercaptoethane sulfonate and salts thereof, preferably MESNA, so that it is preferably in the range of 300 to 350 mOsm.
  • 2-mercaptoethane sulfonate and salts thereof, preferably MESNA in the parenteral dosage form in liquid form are preferably 0.0001 to 100 mg, preferably 0.001 to 20 mg, more preferably per 1 ml of the composition volume. May be included in an amount of 0.001-15 mg per 1 ml of the composition volume.
  • 2-mercaptoethane sulfonate and its salts preferably MESNA
  • MESNA MESNA
  • a composition containing 2-mercaptoethane sulfonate and its salt, preferably MESNA, as an active ingredient may exhibit a skin whitening effect in addition to the above effects.
  • Biodegradable composition of the present invention is a biodegradable polymer, preferably hyaluronic acid or a derivative thereof is 0.001 to 90% by weight, preferably 0.005 to 70% by weight, more preferably 0.01 to 50% by weight relative to the total weight of the composition It is contained in the amount of.
  • the hyaluronic acid and the MESNA inhibits the decomposition of the hyaluronic acid and at the same time significantly increases the retention time of the hyaluronic acid in the cell, thereby enhancing the skin's moisturizing and elasticity, as well as the volume of the skin. It can also help to increase your skin's aging benefits.
  • compositions according to the invention may be used as parenteral agents in liquid form, such as injections or fillers, under the eyes, cheeks, When applied to areas where the volume of skin tissue, such as forehead and nose, is desired, not only can an excellent skin repair effect be obtained, but the effect can be maintained for a longer period of time.
  • the present invention also provides a method for inhibiting the decomposition of hyaluronic acid by using 2-mercaptoethane sulfonate and salts thereof, preferably MESNA.
  • compositions of the present invention may also be formulated as a topical skin composition, in particular as a cosmetic composition, and may be formulated containing a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base.
  • a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base for example emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes) and non-obtained by dispersing an oil phase in solution, gels, solids, pasty anhydrous products, aqueous phases.
  • It may be provided in the form of an ionic vesicle dispersant or in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or cone stick. It may also be used in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
  • composition of the present invention may be used on the face, particularly around the eyes, around the mouth, cheeks, or forehead, neck, hands, feet, etc., but is not limited thereto, and in particular, flexible longevity (skin lotion and milk lotion), nutrient longevity , Essence, nourishing cream, massage cream, pack, gel, essence, eye cream, eye essence, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, powder, body lotion, body cream, body oil and body essence It may be prepared in one or more formulations, but is not limited thereto. These compositions can be prepared according to conventional methods in the art.
  • the composition according to the present invention is a fatty substance, an organic solvent, a dissolving agent, a thickening agent, a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, a fragrance, a surfactant, water, an ionic or nonionic.
  • a fatty substance an organic solvent, a dissolving agent, a thickening agent, a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, a fragrance, a surfactant, water, an ionic or nonionic.
  • adjuvants conventionally used in the
  • the cosmetic composition of the present invention may contain a skin absorption promoting substance to increase the effect.
  • compositions of the present invention may be formulated as pharmaceutical compositions.
  • the composition according to the present invention When the composition according to the present invention is applied to a pharmaceutical product, it may be formulated as a parenteral dosage form in the form of a semi-solid or liquid by adding an inorganic or organic carrier commonly used in the active ingredient used in the present invention.
  • the pharmaceutical compositions can be administered parenterally, rectally, topically, transdermally, intravenously, intramuscularly, intraperitoneally, subcutaneously, and the like.
  • Formulations for parenteral administration include injections, fillers, drops, ointments, lotions, sprays, suspensions, emulsions, suppositories, and the like.
  • the composition according to the present invention can be easily formulated by carrying out according to conventional methods well known in the art, in which case surfactants, excipients, coloring agents, spices, preservatives, stabilizers, buffers, suspensions, etc.
  • a commercially available adjuvant can be used suitably.
  • composition of the present invention when formulated in the form of injections, fillers and the like, it may be formulated in a prefilled syringe, a vial and the like.
  • the dosage of the active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, weight, pathology and severity of the subject to be administered, the route of administration or the judgment of the prescriber. Determination of a suitable dose based on these factors is within the level of one of skill in the art and its daily dosage may be, for example, 0.1 mg / kg / day to 100 mg / kg / day, more specifically 5 mg / kg / day to 50 mg / kg. May be, but is not limited to.
  • test examples and formulation examples are provided only for the purpose of illustration to help the understanding of the present invention is not limited to the scope and scope of the present invention by the following examples.
  • Example 1 and Comparative Examples 1 and 2 were prepared for the enzyme degradation resistance test. At this time, Examples 1, Comparative Examples 1 and 2 were used as a test substance of MESNA, NaCl and mannitol, respectively, as candidates for decomposition resistance of hyaluronidase, and the sol state containing the test substance was used. It was composed of a liquid of a gel state containing a liquid and hyaluronic acid (HA), and a mixture of sol and gel in a volume ratio of 6: 4 was used as a sample. Specific compositions are shown in Table 1 below, and the hyaluronic acid material used as the gel is described in detail below.
  • HA liquid and hyaluronic acid
  • lidocaine added to a concentration of 0.3%
  • Example 1 and Comparative Examples 1 and 2 were precisely quantitated by 0.1 ml in 15 ml tubes, respectively.
  • phosphate buffer pH 7.0, 10 mM PBS, NaCl 0.8%
  • Example 1 Comparative Example 1 or Comparative Example 2 was precisely measured by 0.170g each dissolved in water to make a 100g aqueous solution, 10g of the aqueous solution was measured precisely and put water therein exactly 200g Then, using this as a test liquid, three types of test liquids each containing Example 1 and Comparative Examples 1 to 2 were prepared.
  • Equation 1 the calibration curve (Equation 1 below) prepared from the average absorbance of the standard solution.
  • Equation 1 since glucuronic acid is included in sodium hyaluronate, the total amount of sodium hyaluronate is calculated using glucuronic acid as a control standard solution, and the percentage of hyaluronic acid decomposed through drying loss can be calculated. have.
  • the percentage of decomposed hyaluronic acid was calculated based on the amount of residual sodium hyaluronate obtained according to Equation 1, and the results are shown in FIG. 1.
  • MESNA exhibits high resistance to the degradation activity of hyaluronidase, and that when MESNA is mixed, hyaluronic acid can be effectively inhibited from being degraded by hyaluronidase.
  • cytotoxicity was evaluated according to the dose of test substance in Melan a cells.
  • Cytotoxicity test by diluting MESNA in cell culture medium (RPMI media (Gibco), 10% Fetal Bovine Serum (Gibco), 1% penicillin streptomycin (Gibco)) by concentration as shown in Table 3 below. Proceeded. Cytotoxicity testing was performed using Cell Counting Kit-8 (CCK8 kit; Dojindo). Specific evaluation methods are as follows.
  • CCK8 reagent and cell culture medium were mixed at a volume ratio of 1:10. 500 ⁇ l of the cells were placed in 48 wells in which cells were grown, and the cells were incubated for 1 hour and half in a 37 ° C. 5% CO 2 incubator. After incubation, only the embryos were walked, and the OD values (synergy2, Biotek Instruments, Inc.) were measured at 450 nm.
  • Formulation Example 1 and Comparative Formulation Examples 1 and 2 were prepared according to the composition of Table 5 below (unit: wt%).
  • the aqueous phase components (1-8) are uniformly mixed at room temperature.
  • TWEL transdermal water loss

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Abstract

본 발명은 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해를 저해시키는 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트를 함유함으로써 히알루로니다제 활성에 대한 저항성이 증가된, 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제용 조성물, 및 상기 분해억제용 조성물과 히알루론산 또는 이의 유도체를 함유하는 생체투여 또는 미용성형용 조성물, 특히 생체 조직 수복용 조성물에 관한 것이다.

Description

소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트를 함유하는 히알루론산의 분해억제제 및 이를 포함하는 조성물
본 발명은 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해를 저해시키는 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트를 함유함으로써 히알루로니다제 활성에 대한 저항성이 증가된 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제제, 및 상기 분해억제제와 히알루론산 또는 이의 유도체를 함유하는 생체투여 또는 미용성형용 조성물, 특히 생체 조직 수복용 조성물에 관한 것이다.
히알루론산은 아미노산과 우론산으로 이루어지는 복잡한 다당류의 하나로, N-아세틸글루코사민과 글루쿠론산이 교대로 사슬 모양으로 결합한 분자량이 20만∼40만 되는 고분자 화합물이다. 세포외기질의 주 구성성분으로서 수분 보유, 세포간 간격 유지, 세포성장인자 및 영양성분의 저장 및 확산에 관여할 뿐만 아니라, 세포의 분열과 분화, 이동 등에 관여한다. 히알루론산은 동물의 유리체, 관절액, 연골, 피부 등에 많이 존재하는 성분으로 많은 양의 물과 결합하여 겔 상태가 되어 관절의 윤활작용이나 피부의 유연성 등에 관여하며 점성이 크므로 세균의 침입이나 독물의 피부 침투를 막는 데에도 중요한 역할을 한다.
상기 히알루론산은 모든 살아있는 유기체에 자연상태로 존재하는 성분으로 포유류의 체내에 존재하는 히알루론산의 50% 이상이 피부, 특히 표피의 세포간 간격과 진피의 결체 조직에 분포한다고 보고되었고, 이러한 히알루론산은 주로 각질형성세포와 섬유아세포에 의해 합성되는 것으로 알려졌다. 히알루론산은 피부를 탄력 있게 하고 피부 손상 시에 피부 하층부의 손상을 줄여주는 역할을 한다. 그리고 중요한 콜라겐이 세포 사이로의 움직임을 원활하게 하여 주며, 뼈나 관절의 움직임을 원활하게 하도록 윤활유와 같은 역할을 한다. 히알루론산은 또한 외부에서의 박테리아와 같은 물질의 침투를 예방하여 주어 피부 감염과 같은 질병을 예방하여 주는 역할을 한다.
나이가 들면서 피부에 있는 히알루론산의 양이 감소하게 되고 생산 능력도 줄어들게 되는데 보통 18세 전후에 가장 높아 아름답고 볼륨 있는 모습이 되며 그 이후부터는 감소한다고 알려져 있다. 이처럼, 인간의 피부에서 히알루론산의 양은 노화와 함께 감소되는데, 이것이 노화에 따른 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나이다.
한편, 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트는 사이클로포스파미드 및 이포스파미드를 수반하는 항암 요법에서 애주번트로서 사용되는 유기 황 화합물로서, 사이클로포스파미드 및 이포스파미드의 사용에 따른 출혈성 방광염 및 혈뇨의 발생율을 낮추기 위한 약물로서 주로 사용되어 왔다. 또한, 미국 특허공개 2014-142063호는 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트와 같은 티올 첨가제가 하이드로겔의 형성 과정을 촉진하고, 형성된 하이드로겔 분해를 촉진함을 기술하고 있으나, 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트가 피부 또는 피부 조직 내에서 어떻게 작용하는지에 대하여는 구체적으로 밝혀져 있지 않다.
기존에 히알루론산 분해를 방지하기 위하여, 히알루론산 필러를 구성하는 겔과 졸의 비율을 조정함으로써 히알루론산 분해를 늦추는 방법이 있었으나, 이러한 방법으로는 히알루론산 분해를 효과적으로 막는데 한계가 있었다.
또한, 프랑스 Vivacy사에서 개발한 스타일에이지 필러는 항산화제인 만니톨을 첨가하여 활성 산소를 억제함으로써 히알루론산의 분해를 늦출 수 있다고 알려져 있으나, 이에 대한 구체적인 작용 기작은 규명되어 있지 아니하며, 게다가 만니톨과 같은 항산화제를 이용한 활성 산소 억제는 히알루론산의 분해를 직접적으로 억제할 수 있는 방법이라고 볼 수 없다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
1. 한국 특허공개 10-2011-0057895호(2011년 6월 1일 공개)
2. 미국 특허공개 2014-142063호(2014년 5월 22일 공개)
3. 한국 특허공개 제10-2013-0132503(2013.12.04 공개)
4. 한국 특허공개 제10-2004-0020789(2004.03.09 공개)
[비특허문헌]
1. 김미숙 외, 히알루론산 유도체의 생체재료 응용, Biomaterials Research (2008) 12(3):83-95
본 발명자들은 히알루론산 또는 이의 유도체의 양(조성물 중의 잔존양) 및/또는 수명을 증가시킬 수 있는 접근법으로서, 히알루로니다제에 의한 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해를 방지할 수 있는 물질을 찾고자 하였으며, 놀랍게도 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트가 히알루로니다제에 대한 저항성을 부여할 수 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트를 사용함으로써 히알루로니다제에 대한 저항성을 가지는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트(sodium 2-mercaptoethane sulfonate)를 유효성분으로 함유하는, 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제제를 제공한다.
또한, 본 발명은 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트(sodium 2-mercaptoethane sulfonate)를 유효성분으로 함유하는, 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 분해억제제와 히알루론산 또는 이의 유도체를 함유하는 생체투여 또는 미용성형용 조성물을 제공한다.
본 발명의 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제제는 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트를 함유함으로써 히알루로니다제에 의한 히알루론산 분해에 대하여 증가된 저항성을 가지게 되며, 따라서 피부 또는 피부 조직 내 히알루론산 또는 이의 유도체의 감소를 방지하고, 또한 노화에 따른 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소를 효과적으로 억제할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트와 히알루론산을 함유함으로써 효과적으로 피부 볼륨을 증가시키고 이를 장기간 유지시킬 수 있어 우수한 생체 조직 수복 효과를 제공한다.
도 1은 히알루로니다제에 의한 히알루론산의 분해에 대한 저항성을 측정한 결과를 나타낸다.
도 2는 MESNA의 농도별 세포 독성을 측정한 결과를 나타낸다.
본 발명은 히알루로니다제에 의한 히알루론산의 분해를 억제할 수 있는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트(sodium 2-mercaptoethane sulfonate)를 유효성분으로 함유하는 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제제에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트(sodium 2-mercaptoethane sulfonate)를 유효성분으로 함유하는, 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 분해억제제 또는 분해억제용 조성물과 생분해성 고분자, 바람직하게는 히알루론산 또는 이의 유도체를 함유하는 조성물, 특히 생체투여 또는 미용성형용 조성물, 바람직하게는 생체 조직 수복용 조성물에 관한 것이다.
본원에 있어서, “생분해성 고분자”는 생체에 삽입시 체내에서 분해가 가능한 물질을 말하며, 그 예로는 히알루론산, 콜라겐, 알부민, 키토산 등과 같은 천연 고분자, 폴리글리콜리드, 폴리락티드, 폴리하이드록시발레이트 등과 같은 폴리에스테르 계열의 합성 고분자가 있다.
본원에 있어서, 히알루론산의 유도체로는 그 종류가 특별히 한정되는 것은 아니지만, 히알루론산-콜라겐 복합체, 히알루론산-폴리카르복실산 함유 천연고분자 복합체, 히알루론산-키토산 복합체, 히알루론산 기반의 블렌드(예를 들어, 폴리비닐알코올 또는 폴리아크릴산과 히알루론산의 블렌드), 그라프트 히알루론산 공중합체(김미숙 외, 히알루론산 유도체의 생체재료 응용, Biomaterials Research (2008) 12(3):83-95 참조) 등을 포함한다.
본 발명의 조성물에는 2-메르캅토에탄 설포네이트 및 이의 염이 포함되며, 바람직하게는 2-메르캅토에탄 설포네이트의 금속염이 사용될 수 있다. 또한, 상기 금속염을 형성하는 금속 이온으로는 그 종류가 특별히 한정되는 것은 아니지만, 소듐, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘 등을 포함하며, 특히 바람직하게 소듐 양이온이 사용된다.
본 발명에서 사용되는 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트는 하기 화학식 1로 표현되는 화합물로서, 2-메르캅토에탄 설포네이트 Na(2-mercaptoethane sulfonate Na) 또는 간략히 MESNA라고 지칭된다(이하, “MESNA”로 지칭함).
[화학식 1]
Figure PCTKR2016000865-appb-I000001
본 발명의 조성물은 2-메르캅토에탄 설포네이트 및 이의 염, 바람직하게는 MESNA를 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~20중량%, 바람직하게는 0.0005~15중량%, 더 바람직하게는 0.001~10중량%, 보다 더 바람직하게는 0.005~2중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.01~1.5중량%의 양으로 함유한다. 0.0001중량% 미만이면 원하는 효능을 얻을 수 없으며, 피부에 대한 자극 및 다른 성분과의 배합을 고려할 때 20중량%를 초과하는 것은 적절하지 않다.
또한, 본 발명의 생체투여용 조성물이 주사제 또는 필러 등과 같은 액체 형태의 비경구 투여제로 제형화될 경우에는, 최종 생성물의 삼투압이 생체투여에 적합한 삼투압 범위, 즉 인체 내부의 삼투압과 동일한 250~350mOsm, 바람직하게는 300~350mOsm의 범위가 되도록 2-메르캅토에탄 설포네이트 및 이의 염, 바람직하게는 MESNA를 포함시키는 것이 좋다. 이러한 삼투압 범위를 고려하면, 액체 형태의 비경구 투여제에 있어서 2-메르캅토에탄 설포네이트 및 이의 염, 바람직하게는 MESNA는 조성물 부피 1ml 당 0.0001~100mg, 바람직하게는 0.001~20mg, 더 바람직하게는 조성물 부피 1ml 당 0.001~15mg의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명에 따르면, 2-메르캅토에탄 설포네이트 및 이의 염, 바람직하게 MESNA는 효소, 특히 히알루로니다제의 활성에 의한 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해를 억제함으로써 피부의 보습력과 피부 탄력 및 볼륨이 저하되는 것을 효과적으로 방지할 수 있으며, 나아가 피부 노화를 방지하는 효과를 나타낸다.
또한, 본 발명에 따라서 2-메르캅토에탄 설포네이트 및 이의 염, 바람직하게는 MESNA를 유효성분으로 포함하는 조성물은 상기 효과와 더불어 피부 미백 효과도 나타낼 수 있다.
본 발명의 생체투여용 조성물은 생분해성 고분자, 바람직하게는 히알루론산 또는 이의 유도체를 조성물 총 중량에 대하여 0.001~90중량%, 바람직하게는 0.005~70중량%, 더 바람직하게는 0.01~50중량%의 양으로 함유한다.
이와 같이, 히알루론산과 MESNA를 함께 사용하게 되면, 히알루론산의 분해를 억제함과 동시에 세포 내에 히알루론산을 보유하는 시간을 현저하게 증가시키게 되어 피부의 보습력과 탄력을 증진시키는 것은 물론, 피부의 볼륨을 증가시키는 데에도 도움이 되며, 나아가 피부 노화 개선에도 탁월한 효과를 얻을 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 조성물, 특히 바람직하게는 MESNA를 함유하는 조성물, 보다 바람직하게는 히알루론산과 MESNA를 모두 함유하는 조성물을 주사제 또는 필러 등과 같은 액체 형태의 비경구 투여제로서 눈 밑, 볼, 이마, 코 등과 같이 피부 조직의 볼륨을 증가시키기를 원하는 부위에 적용하게 되면, 우수한 피부 수복 효과를 얻을 수 있을 뿐만 아니라, 상기 효과를 보다 장기간 동안 유지시킬 수 있다.
또한, 본 발명은 2-메르캅토에탄 설포네이트 및 이의 염, 바람직하게는 MESNA를 이용함으로써 히알루론산의 분해를 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명의 조성물은 또한 피부 외용제 조성물, 특히 화장료 조성물로서 제형화될 수 있으며, 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한 폼(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 얼굴, 특히 눈 주위, 입 주위, 뺨, 또는 이마 부위, 목, 손, 발 등에 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 구체적으로 유연화장수(스킨로션 및 밀크로션), 영양화장수, 에센스, 영양크림, 마사지크림, 팩, 젤, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 파우더, 보디 로션, 보디 크림, 보디오일 및 보디 에센스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
또한 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 약학 조성물로서 제형화될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 본 발명에서 사용되는 유효성분에 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 반고체 또는 액상의 형태로 비경구 투여제로 제형화할 수 있으며, 본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.
상기 비경구 투여를 위한 제형으로는 주사제, 필러, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 등을 들 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 당업계에 널리 알려진 통상적인 방법에 따라 실시함으로써, 유효성분을 용이하게 제형화할 수 있으며, 이 때 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.
특히, 본 발명의 조성물이 주사제, 필러 등의 형태로 제형화될 경우, 프리필드 시린지(prefilled syringe), 바이알(vial) 등으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 유효 성분의 투여 용량은 투여받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적당한 용량의 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5mg/kg/일 내지 50mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 시험예 및 제형예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 시험예 및 제형예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[시험예 1] 히알루론산 분해에 대한 저항성 평가
1. 시료
효소 분해 저항성 시험을 위하여 실시예 1 및 비교예 1 내지 2의 시험 시료를 준비하였다. 이 때, 실시예 1, 비교예 1 및 2는 히알루로니다제의 분해 저항성 물질 후보군으로서 각각 MESNA, NaCl 및 만니톨 중 1종을 시험 물질로 사용하였고, 시험 물질을 포함하는 졸(sol) 상태의 액체와 히알루론산(HA)을 포함하는 겔(gel) 상태의 액체로 구성하였으며, 졸과 겔을 6:4의 부피 비율로 혼합한 것을 시료로 사용하였다. 구체적인 조성은 하기 표 1과 같으며, Gel로 사용한 히알루론산 물질에 대해서는 하기에 구체적으로 기재하였다.
표 1 (총 부피가 3mL인 경우)
구분 성분 실시예 1 비교예 1 비교예 2
졸(1.8mL) 1)인산염 버퍼 10mM 1.8mL 1.8mL 1.8mL
2)리도카인 9mg 9mg 9mg
3)MESNA 45mg - -
3)NaCl - 23.7mg -
3)만니톨 - - 144mg
HA 겔 4)히알루론산 1.2mL 1.2mL 1.2mL
1) 인산염 버퍼 10mM
= 인산수소나트륨 탈수물(Sodium phosphate monobasic dehydrate) 0.49g
+ 인산수소이나트륨 탈수물(Sodium phosphate dibasic dehydrate) 2.45g
+ 증류수 1L
2) 리도카인: 0.3%의 농도가 되도록 첨가함
3) 인체 내부의 삼투압이 250~350mOsm이므로, MESNA, NaCl 및 만니톨을 최종 삼투압이 300mOsm이 되도록 사용함.
- MESNA: Jiangsu Hengrui Medicin.Co., 배치 번호 642130904
- NaCl: Samchun chemical, 로트 080207
- 만니톨: Sigma, 로트 31K0003
4) 히알루론산:
소듐 히알루로네이트 섬유(NaHA, Mw = 0.5 내지 3MDa) 1g을 10g의 1% 수산화나트륨 용액과 혼합하고, 혼합물을 5시간 동안 수화되도록 두었다. 여기에 150mg의 1,4-부탄다이올 다이글리시딜 에테르를 NaHA 젤에 첨가하여 혼합물을 균일하게 혼합하고, 생성된 가교결합된 하이드로겔을 동몰량의 염산(HCl)으로 중화하였으며, 이를 PBS(pH 약 7) 중에서 팽창시켰다. 이렇게 하여 얻어진 하이드로겔을 기계적으로 균질화하고, 이를 실시예 및 비교예의 제조에 사용하였다.
2. 시험 프로토콜
1) 전처리
실시예 1, 비교예 1 내지 2의 시료를 15ml 튜브에 각각 0.1ml씩 정밀하게 정량하여 넣었다. 인산염 버퍼(pH 7.0, 10mM PBS, NaCl 0.8%, 이하 'PBS'라 함)에 히알루로니다제를 녹여서 100 IU/㎖이 되도록 만들고(1500 IU/15 ㎖), 상기 100 IU/㎖인 히알루로니다제 용액을 각 시료별로 하기 표 2와 같이 투여하고, PBS를 더하여 총 1 ㎖이 되도록 하였다.
표 2
대상시료 시료 함량(㎖) 요구되는 효소 양(IU, 50IU/HA ㎎) 효소 용액량 (㎖)
실시예1 HA 겔 + MESNA/PB 버퍼 (HA 13.2mg/mL) 0.1 26.4 IU 264μL, PBS 636μL
비교예1 HA 겔+ NaCl/PB 버퍼 (HA 13.2mg/mL) 0.1 26.4 IU 264μL, PBS 636μL
비교예2 HA 겔 + 만니톨/PB 버퍼 (HA13.2mg/mL) 0.1 26.4 IU 264μL, PBS 636μL
2) 처리
실시예 1, 비교예 1 내지 2 각각의 시료에 효소 용액을 투입한 후, 37℃, 80rpm에서 30분간 반응시켰다. 각 시료에 HCl 0.1N 용액 1㎖씩을 투입하고, 10초간 강력하게 교반을 실시하여 반응을 정지시켰다. 교반 완료 후, 0.1N NaOH 1㎖와 PBS를 모든 시료에 각각 더하여 총 4㎖가 되도록 중화하였다. 4㎖로 만들어진 용액은 기공 직경이 0.2㎛인 막으로 거른 다음, 냉장보관하였다.
3. 정량 - 카르바졸 분석
카르바졸과 반응시켜 글루쿠론산 함량을 측정하였다. 구체적으로, 실시예 1, 비교예 1 또는 비교예 2를 0.170g씩 정밀하게 측정하고 이를 각각 물에 용해시켜 100g의 수용액을 만들었으며, 상기 수용액 10g을 정밀하게 측정하고 여기에 물을 넣어 정확하게 200g으로 한 다음, 이를 검액으로 하여, 실시예 1, 비교예 1 내지 2를 각각 포함하는 3종의 검액을 제조하였다. 감압에서 항량으로 건조한 D-글루쿠론산 약 0.1g을 정밀하게 측정하고 여기에 물을 넣어 정확하게 100g의 수용액을 만들고, 상기 수용액 일정량에 물을 넣어 수용액 1g 중 글루쿠론산을 각각 6.5μg, 16.3μg, 32.5μg, 48.8μg 및 65μg을 함유하는 용액 5종을 만들어 표준액으로 하였다. 시험관 25개를 준비하여 1~25로 표시하고 얼음물에 넣었다. 상기 5종의 표준액 1.0mL씩을 각 농도에 대하여 3회 취하여 시험관에 넣어 표준액시험관(1~15)으로 한 다음 3종의 검액을 각 1.0mL씩 3회 취하여 9개의 시험관에 넣어 검액시험관(16~24)으로 하였다. 마지막 시험관에는 물만 넣어 공시험액시험관(25)으로 하였다. 각 시험관에 새로 만든 0.95w/v% 붕사의 황산 용액을 5mL씩 넣어 플라스틱 마개로 기밀하게 막고 흔들어 섞은 다음, 수욕에서 15분간 방치한 후 얼음물에서 식혔다. 각 시험관에 0.125w/v% 카르바졸의 에탄올 용액 0.2mL씩을 넣고 마개를 기밀하게 닫고 흔들어 섞은 다음, 15분간 수욕에 방치하고 실온으로 식혔다. 이들 액을 가지고 자외가시부흡광도측정법에 따라 공시험액을 대조로 하여 파장 530nm에서 흡광도을 측정하였다. 표준액의 평균 흡광도로부터 작성한 검량선(하기 수학식 1이 이에 해당함)을 써서 검액 중 D-글루쿠론산의 평균농도를 구하였다. 수학식 1은, 글루쿠론산이 히알루론산나트륨내에 포함된 구조이므로 글루쿠론산을 컨트롤 표준액으로 하여 히알루론산나트륨의 총량을 계산하는 식이며, 건조된 감량을 통해서 분해된 히알루론산의 백분율을 산정할 수 있다.
수학식 1
Figure PCTKR2016000865-appb-M000001
Cs: 검액들 중 실시예 1, 비교예 1 또는 비교예 2의 평균 농도(mg/g)
Z: D-글루쿠론산의 함량(%)
h: 건조감량(%)
401.3: 이당류(히알루론산)의 상대분자량
194.1: 글루쿠론산의 상대분자량
상기 수학식 1에 따라서 구한 잔존 히알루론산나트륨의 양을 기초로 분해된 히알루론산의 백분율을 산정하였으며, 이에 대한 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1을 보면, 30분간 효소 처리한 결과 시험 물질, 즉 MESNA, NaCl 또는 만니톨을 포함하는 실시예 1, 비교예 1 및 2의 시료의 경우, 모두 어느 정도 히알루로니다제에 의한 히알루론산 분해에 저항성을 나타내기는 하지만, 히알루론산 분해율이 비교예 1의 경우에는 88%이고, 비교예 2의 경우에는 92%인 것으로 나타나 히알루로니다제에 의한 히알루론산 분해에 대한 저항성 정도가 미약한 수준인 반면, 실시예 1의 경우는 히알루론산 분해율이 79% 정도로서 히알루론산의 분해가 상당히 저해되었다는 것을 확인할 수 있다.
이는 MESNA가 히알루로니다제의 분해 활성에 대하여 높은 저항성을 나타내어, MESNA를 혼합한 경우에는 히알루론산이 히알루로다제에 의해 분해되는 것을 효과적으로 억제할 수 있다는 것을 시사한다.
[시험예 2] MESNA에 대한 안전성 평가 - Melan a 세포에서의 세포독성 평가
MESNA의 안전성을 검증하기 위하여, Melan a 세포에서 시험 물질의 투여량에 따른 세포독성을 평가하였다.
하기 표 3에서 나타낸 바와 같이 MESNA를 농도별로 세포배양 배지(RPMI media(Gibco), 10% 소태아혈청(Fetal Bovine Serum; Gibco), 1% 페니실린 스트렙토마이신(Gibco) 포함)에 희석하여 세포독성 테스트를 진행하였다. 세포독성 테스트는 Cell Counting Kit-8(CCK8 kit; Dojindo)를 사용해서 진행되었다. 구체적인 평가방법은 다음과 같다.
CCK8 시약과 세포배양 배지를 1:10의 부피 비율로 섞어서, 세포가 자라고 있는 48웰에 500μl씩 넣고 37℃ 5% CO2 인큐베이터에서 세포를 1시간 반 동안 배양하였다. 배양 후 배지만 걷어서 O.D값(synergy2, Biotek Instruments, Inc.)을 450nm에서 측정하였다.
아무것도 처리하지 않은 그룹 1의 O.D값을 100%로 하고, 이에 대비한 나머지 그룹의 O.D값을 변환 계산하였다. 대비값이 80% 이상인 경우 독성이 없다고 판단하였다. 결과는 표 4 및 도 2에 나타내었다.
표 3
번호 시험군
그룹 1 배지
그룹 2 MESNA 30μM + 배지
그룹 3 MESNA 100μM + 배지
그룹 4 MESNA 300μM + 배지
그룹 5 MESNA 900μM + 배지
표 4
MESNA 농도 세포 독성(%)
0μM 100
30μM 97.58
100μM 96.34
300μM 99.65
900μM 97.55
상기 표 4 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 평가한 모든 그룹에서 세포독성은 나타나지 않았다. 따라서 이로부터 MESNA는 부작용이 없는 안전한 물질임을 확인할 수 있다.
[참고예 1] 제형예 1 및 비교제형예 1~2의 제조
하기 표 5의 조성에 따라서 제형예 1 및 비교제형예 1~2를 제조하였다(단위: 중량%).
표 5
원료명 제형예 1 비교제형예 1 비교제형예 2
수상성분 1 MESNA 1.5 - -
만니톨 - 1.5 -
NaCl - - 1.5
2 정제수 To 100 To 100 To 100
3 디소듐이디티에이 0.02 0.02 0.02
4 글리세린 5.0 5.0 5.0
5 잔탄검 0.15 0.15 0.15
6 메틸글루세스-20 2.0 2.0 2.0
7 히알루론산 2.0 2.0 2.0
8 암모늄아크릴로일디메틸타우레이트/브이피코폴리머 0.3 0.3 0.3
에탄올상성분 9 에탄올 3.0 3.0 3.0
10 하이드로제네이티드캐스터오일 0.3 0.3 0.3
11 향 0.1 0.1 0.1
12 방부제 0.3 0.3 0.3
<제조방법>
(1) 수상성분들(1~8)을 실온에서 균일하게 혼합한다.
(2) 에탄올상 성분들(9~12)을 50~55℃로 가열하여 균일하게 용해 및 혼합한다.
(3) 교반하에 상기 (2)에 상기 (1)을 투입하여 균일하게 가용화한다.
[시험예 3] 피부 탄력 개선 효과 평가
본 발명에 따른 조성물의 피부 탄력 개선 효과를 확인하기 위하여, 상기 제형예 1 및 비교제형예 1~2를 이용하여 다음과 같이 시험하였다.
30~40대 여성 35명을 각각 5명씩 7조로 나누고 각 조에 대하여 각각 상기 제형예 1, 비교제형예 1 또는 비교제형예 2를 매일 2회(아침, 저녁)씩 4주간 안면에 도포하여 하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 4주가 경과한 시점에 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., 독일)를 이용하여 피부 탄력 정도를 측정하여 피부 탄력 개선 효과를 산정하였으며, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다. 표 6의 결과값은 피부 점탄성(viscoelasticity) 성질의 개선 정도를 의미한다.
표 6
시험 물질 피부 탄력 개선 효과
제형예 1 0.76±0.10
비교제형예 1 0.50±0.09
비교제형예 2 0.45±0.10
상기 표 6에 나타낸 결과로부터, MESNA를 포함하는 제형예 1의 경우 MESNA를 함유하지 않는 비교제형예 1 및 2에 비하여 152%~168% 정도로 현저하게 우수한 피부 탄력 증진 효과를 나타낸다는 것을 확인할 수 있다.
[시험예 4] 리프팅 효과의 관능 평가
본 발명에 따른 조성물의 리프팅 효과를 확인하기 위하여, 상기 제형예 1 및 비교제형예 1~2를 이용하여 다음과 같이 시험하였다.
피부 처짐으로 고민하는 25~35세의 여성 35명을 각각 5명씩 7조로 나누고 각 조에 대하여 각각 상기 제형예 1, 비교제형예 1 또는 비교제형예 2를 매일 2회(아침, 저녁)씩 4주간 일반적인 화장수와 같은 방법으로 사용하도록 한 후, 사용 개시 후 1주 간격으로 사용자의 피부 리프팅 효능감 정도를 하기의 평가 기준에 따라 설문지를 통해 평가하도록 하였다. 그 결과는 하기 표 7에 나타내었다.
<평가기준>
+++:매우 양호한 개선 효과가 있음
++:상당한 개선 효과가 있음
+:약간의 개선 효과가 있음
±:개선 효과는 없으나, 악화되지도 않음
-:개선 효과가 없고, 오히려 악화됨
표 7
시험 물질 기간
1주 2주 3주 4주
제형예 1 ++ ++ +++ +++
비교제형예 1 + + ++ ++
비교제형예 2 + + + ++
상기 표 7에 나타낸 결과로부터, MESNA를 포함하는 제형예 1의 경우 MESNA를 함유하지 않는 비교제형예 1 및 2에 비하여 신속하면서 더 우수한 리프팅 효능을 나타낸다는 것을 확인할 수 있다.
[시험예 5] 피부 장벽기능 회복 효과 측정
본 발명에 따른 조성물이 피부 손상으로 인해 손상된 피부 장벽기능의 회복에 미치는 효과를 확인하기 위하여, 상기 제형예 1 및 비교제형예 1~2를 이용하여 다음과 같이 시험하였다.
성인 남녀 10명의 상박을 테이프 스트리핑(Tape Stripping) 방법을 이용하여 피부 장벽에 손상을 주고 각각 상기 제형예 1, 비교제형예 1 또는 비교제형예 2의 3가지 조성물을 매일 도포하면서 7일 동안 하루에 한번씩 경피 수분손실량(TWEL)의 회복 정도를 Vapometer(Delfin, 핀란드)로 측정 비교하였다. 실험 결과는 하기 표 8에 나타내었다. 표 9의 결과는 장벽 손상 전과 장벽 손상 후의 처리 전 차이를 100% 기준으로 하여 비교한 것이다.
표 8
시험군 TWEL 변화(%)
처리전 1일 2일 3일 4일 5일 6일
제형예 1 100 79.9 60.1 31.1 26.4 18.8 15.9
비교제형예 1 100 97.7 87.3 71.6 65.4 51.7 46.6
비교제형예 2 100 96.4 90.5 79.7 70.3 62.4 57.7
상기 표 8에 나타낸 결과로부터, MESNA를 포함하는 제형예 1의 경우 MESNA를 함유하지 않는 비교제형예 1 및 2에 비하여 빠른 속도로 경피 수분 손실량이 정상으로 돌아오며 장벽 손상이 회복된다는 것을 확인할 수 있다.
[시험예 6] 피부 보습력 증가 효과 측정
본 발명에 따른 조성물의 피부 보습 개선 효과를 확인하기 위하여, 상기 제형예 1 및 비교제형예 1~2를 이용하여 다음과 같이 시험하였다.
건조 피부로 분류된 40~50 대 성인 남녀 60명을 각각 20명씩 3조로 나누고 각 조에 대하여 각각 상기 제형예 1, 비교제형예 1 또는 비교제형예 2를 매일 2회(아침, 저녁)씩 4주간 안면에 도포하게 하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주, 2주, 4주 경과한 시점, 그리고 도포를 중지한 2주 경과(총 6주 경과) 후에 항온, 항습 조건(24℃, 상대습도 40%)에서 피부 수분량 측정기(Corneometer CM825, C+K Electronic Co., 독일)로 피부수분량을 측정하였다. 그 결과는 하기 표 9에 나타내었다. 표 9의 결과는 시험 개시 직전에 측정한 피부 수분량 측정기 값을 기준으로 하여 일정 기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 표시한 것이다.
표 9
시험 물질 수분 증가율(%)
1주 경과 2주 경과 4주 경과 6주 경과
제형예 1 42 41 43 34
비교제형예 1 31 30 32 16
비교제형예 2 30 32 30 15
상기 표 9의 결과를 보면, 비교제형예 1 및 2를 도포한 경우에는 도포가 이루어진 4주까지는 약 30% 정도의 수분 증가율을 보이지만, 도포를 중지한 후에는 피부 수분량이 감소하는 반면, MESNA를 함유한 제형예 1을 도포한 경우에는 도포를 중지한 후에도 30% 이상의 피부 수분 증가율을 보임을 확인할 수 있다. 이를 통해 MESNA를 함유한 조성물은 피부 보습력 개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

Claims (17)

  1. 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트(sodium 2-mercaptoethane sulfonate)를 유효성분으로 함유하는, 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제제.
  2. 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트(sodium 2-mercaptoethane sulfonate)를 유효성분으로 함유하는, 히알루론산 또는 이의 유도체의 분해억제용 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 소듐 2-메르캅토에탄 설포네이트는 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~20중량%의 양으로 함유됨을 특징으로 하는, 조성물.
  4. 제1항의 분해억제제 또는 제2항의 분해억제용 조성물; 및 히알루론산 또는 이의 유도체를 함유하는 생체투여 또는 미용성형용 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 생체 조직 수복용임을 특징으로 하는, 조성물.
  6. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 피부 보습용임을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 피부 탄력 증진용임을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선용임을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 피부 볼륨 증가용임을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 피부 노화 방지용임을 특징으로 하는 조성물.
  11. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 피부 미백용임을 특징으로 하는 조성물.
  12. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 피부 외용제의 형태로 제형화됨을 특징으로 하는, 조성물.
  13. 제1항의 분해억제제 또는 제2항의 분해억제용 조성물; 및 생분해성 고분자를 유효성분으로 함유하는 생체 조직 수복용 프리필드 시린지(prefilled syringe).
  14. 제13항에 있어서, 상기 생분해성 고분자는 히알루론산 또는 이의 유도체임을 특징으로 하는, 프리필드 시린지.
  15. 제1항의 분해억제제 또는 제2항의 분해억제용 조성물; 및 생분해성 고분자를 유효성분으로 함유하는 생체 조직 수복용 주사제.
  16. 제15항에 있어서, 상기 생분해성 고분자는 히알루론산 또는 이의 유도체임을 특징으로 하는, 주사제.
  17. 제16항에 있어서, 상기 주사제는 바이알(vial)의 형태로 제형화됨을 특징으로 하는, 주사제.
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009022430A1 (en) * 2007-08-10 2009-02-19 Ki Pharmaceuticals, Inc. Skin whitening agent
US20140142063A1 (en) * 2012-11-19 2014-05-22 Actamax Surgical Materials, Llc Hydrogel tissue adhesive having decreased gelation time and decreased degradation time
CN103910886A (zh) * 2014-03-24 2014-07-09 海南大学 半胱氨酸功能化的透明质酸结合物及其合成方法以及在可注射原位形成的水凝胶中的应用
KR20140097122A (ko) * 2012-11-22 2014-08-06 (주)오리지날 바이오메디칼스 자유 라디칼에 의한 손상을 줄이기 위해 사용되는 약학 조성물

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100507545B1 (ko) 2002-09-03 2005-08-09 주식회사 엘지생명과학 히알루론산 유도체 및 그의 제조방법
KR20130116386A (ko) * 2008-04-14 2013-10-23 할로자임, 아이엔씨 히알루로난 관련 질환 및 상태 치료용 변형된 히알루로니다제 및 그 용도
KR101427572B1 (ko) 2009-11-25 2014-08-08 (주)아모레퍼시픽 진세노사이드 Ｒｅ 및 진세노사이드 화합물 Ｋ를 함유하는 히알루론산 생성 촉진용 피부 외용제 조성물
IT1404145B1 (it) 2010-12-27 2013-11-15 Altergon Sa Composizioni di acido ialuronico stabilizzate verso l'azione di degradazione del calore o degli enzimi

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009022430A1 (en) * 2007-08-10 2009-02-19 Ki Pharmaceuticals, Inc. Skin whitening agent
US20140142063A1 (en) * 2012-11-19 2014-05-22 Actamax Surgical Materials, Llc Hydrogel tissue adhesive having decreased gelation time and decreased degradation time
KR20140097122A (ko) * 2012-11-22 2014-08-06 (주)오리지날 바이오메디칼스 자유 라디칼에 의한 손상을 줄이기 위해 사용되는 약학 조성물
CN103910886A (zh) * 2014-03-24 2014-07-09 海南大学 半胱氨酸功能化的透明质酸结合物及其合成方法以及在可注射原位形成的水凝胶中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SAGLAM, BEYHAN ET AL.: "Protective Effects of 2-Mercaptoethane Sulfonate (mesna) on Protamine Sulfate induced Bladder Damage", MAMIARA MEDICAL JOURNAL, vol. 18, no. 1, 2005, pages 6 - 12, XP055019423 *

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