WO2016133059A1 - Ｆｓｔｌ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤およびその併用剤 - Google Patents

Ｆｓｔｌ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤およびその併用剤 Download PDF

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千恵 工藤
雅義 豊浦
有希子 石田
雄二 庄屋
ちひろ 山崎
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株式会社ファーマフーズ
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic agent for malignant tumors and the like. [Background technology]
  • Immunosuppression has become known as the cause of cancer worsening. Development is underway as releasing immune suppression leads to effective treatment of cancer.
  • Patent Document 1 a molecule related to immune suppression release was reported. Although research on FSTL1 has progressed to some extent (Non-Patent Documents 1 and 2), there are still many unclear points about its functions.
  • Non-patent document 3 Andaloussi and Lesniak Neuro-Oncology 8, 234-243, 2006).
  • Non-patent document 5 Wolf et al. Clin. Cancer Res. 9, 606-612, 2003
  • Non-patent Document 3 Andaloussi and Lesniak Neuro-Oncology 8, 234-243, 2006
  • Reference 12 Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007).
  • Patent Document 1 International Publication No. WO2009 / 028411 [Non-patent literature]
  • Non-Patent Document 1 Cancer Research 73 (20); 6185-93, 2013 [Non-Patent Document 2] OncoImmunology 2:11, e26528, 2013 [Non-Patent Document 3] Andaloussi and Lesniak Neuro-Oncology 8, 234-243, 2006 [Non-Patent Document 4] Ichihara et al. Clin. Cancer Res. 9, 4404-4408, 2003 [Non-Patent Document 5] Wolf et al. Clin. Cancer Res. 9, 606-612, 2003 [Non-Patent Document 6] Hicky et al. Semin. Immunol. 11, 125-137, 1999 [Non-Patent Document 7] Liyanage et al. J. Immunol.
  • Non-patent document 8 Sasada et al. Cancer 98, 1098-1099, 2003 [Non-patent document 9] Woo et al. Cancer Res. 61, 4766-4772, 2001
  • Non-Patent Document 10 Sakaguchi et al. Immunol. Rev. 182, 18-32, 2001
  • Non-Patent Document 11 Turk et al. Immunol. Rev. 188, 122-135, 2002
  • Non-Patent Document 12 Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007 [Summary of Invention] [Means for solving problems]
  • FSTL1 is a more promising target for releasing immune suppression, and that cancer-related mesenchymal stem cells that induce immunosuppression that inhibition of FSTL1 activity is thought to contribute to cancer progression (MSC) induction and proliferation, as well as the acquisition of cancer cell metastasis, especially acquisition of bone metastasis, and found out that it has a remarkable effect in eliminating cancer, and completed the present invention. It was.
  • MSC cancer progression
  • FSTL1 can induce MSCs that induce immunosuppressive cells such as regulatory T cells, regulatory dendritic cells, tolerant dendritic cells, and bone marrow-derived immunosuppressive cells. It was.
  • the present invention enables cancers from in vivo more effectively than conventional methods by both “inhibition of MSCs that induce immune breakdown such as immunosuppression or immunodeficiency” and “inhibition of metastasis of cancer cells”. It should be noted that it is expected to be eliminated.
  • the present invention provides the following. (1) An anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein the antibody has amino acids 148 to 170, 193 to 228, and 233 to 289 of SEQ ID NO: 1 (amino acid sequence of human FSTL1). An anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, having an epitope in a region selected from the group consisting of: (2) The anti-FSTL1 antibody according to item 1, wherein the antibody has an epitope in a region selected from the group consisting of amino acids 148 to 162 and 233 to 289 of SEQ ID NO: 1 (amino acid sequence of human FSTL1) Or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibody is antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 6; heavy chain: SEQ ID NO: 8), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 10; heavy chain: SEQ ID NO: 12), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 14; heavy chain: SEQ ID NO: 16), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 18; heavy chain: SEQ ID NO: 20), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 22) Heavy chain: SEQ ID NO: 24), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 8-4 (light chain: SEQ ID NO: 38; heavy chain: SEQ ID NO: 40), # 8-7 (light chain: SEQ ID NO: 42) Heavy chain: SEQ ID NO: 44), # 8-8 (light chain: S
  • An antibody comprising a heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 of an antibody selected from the group consisting of: light chain: SEQ ID NO: 66; heavy chain: SEQ ID NO: 68) FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8 -1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: sequence) No. 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 58; heavy chain: SEQ ID NO: 60) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 66; heavy chain: SEQ ID NO: 68). 4.
  • the antibody is antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 6; heavy chain: SEQ ID NO: 8), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 10; heavy chain: SEQ ID NO: 12), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 14; heavy chain: SEQ ID NO: 16), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 18; heavy chain: SEQ ID NO: 20), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 22) Heavy chain: SEQ ID NO: 24), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 8-4 (light
  • the anti-FSTL1 antibody of item 3 or a fragment or functional equivalent thereof, comprising the full length of an antibody variable region selected from the group consisting of light chain: SEQ ID NO: 66; heavy chain: SEQ ID NO: 68).
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8 -1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: sequence) No. 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 58; heavy chain: SEQ ID NO: 60) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 66; heavy chain: SEQ ID NO: 68).
  • the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 3 to 5, or a fragment or functional equivalent thereof, comprising the full length of (7)
  • the antibody is antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 96; heavy chain: SEQ ID NO: 98), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 100; heavy chain: SEQ ID NO: 102), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 104; heavy chain: SEQ ID NO: 106), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 108; heavy chain: SEQ ID NO: 110), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 112) Heavy chain: SEQ ID NO: 114), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 116; heavy chain: SEQ ID NO: 118), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 120; heavy chain: SEQ ID NO: 122), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 124; heavy chain: SEQ ID NO: 126), # 8-4 (light chain: SEQ
  • the anti-FSTL1 antibody according to 3 or 5, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 116; heavy chain: SEQ ID NO: 118), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 120; heavy chain: SEQ ID NO: 122), # 8 -1 (light chain: SEQ ID NO: 124; heavy chain: SEQ ID NO: 126), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 140; heavy chain: SEQ ID NO: 142), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 148; heavy chain: sequence) No.
  • a medicament comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 1 to 8, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • An anticancer agent comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 1 to 8, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • a therapeutic agent for metastatic malignant tumor comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 1 to 8, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • a melanoma, colon cancer, breast cancer, lymphoma, lung cancer, prostate cancer, kidney cancer, head and neck cancer comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 1 to 8, or a fragment or functional equivalent thereof
  • a therapeutic agent for at least one disease selected from the group consisting of esophageal cancer, gastric cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, bladder cancer, cervical cancer, brain central nerve tumor, sarcoma, leukemia and multiple myeloma.
  • An inhibitor of cancer cell metastasis comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 1 to 8, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the inhibitor according to item 13, wherein the metastasis includes bone metastasis or lung metastasis.
  • An inhibitor of enhancement of immune disruption by mesenchymal stem cells comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 1 to 8, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • the enhancement of the immune failure may be performed by proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency suppressive activity, and immunosuppressive activity or 16.
  • the inhibitor according to item 15 comprising at least one of immunosuppressive activity or acquisition of immunodeficiency activity of MSC cells having no immunodeficiency activity.
  • An inhibitor of the acquisition and / or enhancement of immune disruption activity of immune-related cells comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items 1 to 8, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the inhibitor according to item 18, wherein the immune disruption includes immunosuppression and immunodeficiency.
  • the acquisition and / or enhancement of the immune disruption activity of the immune-related cells may be achieved by proliferation of regulatory T cells, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory T cells, differentiation into regulatory T cells, regulatory dendritic cells Proliferation, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory dendritic cells, differentiation into regulatory dendritic cells, proliferation of tolerant dendritic cells, enhancement of immunosuppressive activity of tolerant dendritic cells, to tolerant dendritic cells Differentiation, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells, enhancement of immunosuppressive activity of bone marrow-derived immunosuppressive cells, differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, proliferation of exhausted T cells, enhancement of immunodeficiency activity of exhausted T cells
  • the inhibitor according to item 18, comprising at least one selected from the group consisting of induction of exhausted T cells.
  • the present invention also provides the following.
  • the antibody is an epitope in a region selected from the group consisting of amino acids 48 to 100, 148 to 162, 205 to 228 and 272 to 289 of SEQ ID NO: 1 (amino acid sequence of human FSTL1)
  • the anti-FSTL1 antibody according to item A1, or a fragment or functional equivalent thereof
  • A3 The anti-FSTL1 according to item A1 or A2, wherein the antibody has an epitope in a region selected from the group consisting of amino acids 148 to 162 and 205 to 228 of SEQ ID NO: 1 (amino acid sequence of human FSTL1)
  • Antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 6; heavy chain: SEQ ID NO: 8), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 10; heavy chain: SEQ ID NO: 12), antibody # 5-8 ( Light chain: SEQ ID NO: 14; heavy chain: SEQ ID NO: 16), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 18; heavy chain: SEQ ID NO: 20), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 22; heavy chain: SEQ ID NO: 24), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 ( Light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 8-4 (light chain: SEQ ID NO: 38; heavy chain: SEQ ID NO: 40), # 8-7 (light chain: SEQ ID NO: 42; heavy chain: SEQ ID NO: 44), # 8-8 (light chain: SEQ ID
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8 -1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: sequence) No. 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 58; heavy chain: SEQ ID NO: 60) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 66; heavy chain: SEQ ID NO: 68).
  • the anti-FSTL1 antibody of item A4 comprising a CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light From: chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 148; heavy chain: SEQ ID NO: 150) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 156; heavy chain: SEQ ID NO: 158)
  • the antibodies are antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 6; heavy chain: SEQ ID NO: 8), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 10; heavy chain: SEQ ID NO: 12), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 14; heavy chain: SEQ ID NO: 16), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 18; heavy chain: SEQ ID NO: 20), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 22) Heavy chain: SEQ ID NO: 24), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 8-4 (light chain: SEQ ID NO: 38; heavy chain: SEQ ID NO: 40), # 8-7 (light chain: SEQ ID NO: 42) Heavy chain: SEQ ID NO: 44), # 8-8 (light chain: S
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8 -1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: sequence) No. 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 58; heavy chain: SEQ ID NO: 60) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 66; heavy chain: SEQ ID NO: 68).
  • the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A4 to A7, or a fragment or functional equivalent thereof, comprising the full length of (A9)
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light From: chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 148; heavy chain: SEQ ID NO: 150) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 156; heavy chain: SEQ ID NO: 158)
  • the antibodies are antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 96; heavy chain: SEQ ID NO: 98), # 5-3 (light chain: SEQ ID
  • the anti-FSTL1 antibody according to any one of A4 to A9, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 116; heavy chain: SEQ ID NO: 118), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 120; heavy chain: SEQ ID NO: 122), # 8 -1 (light chain: SEQ ID NO: 124; heavy chain: SEQ ID NO: 126), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 140; heavy chain: SEQ ID NO: 142), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: sequence) No.
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light From: chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 148; heavy chain: SEQ ID NO: 150) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 156; heavy chain: SEQ ID NO: 158)
  • the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A4 to A11, or a fragment or functional equivalent thereof, comprising a full-length antibody selected from the group consisting of or a humanized sequence thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A12, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein the antibody is a humanized antibody.
  • the humanized antibodies are SEQ ID NOS: 161, 163, 165 and 167 (H (1) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175 (H (2 ) A heavy chain framework sequence comprising humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 177, 179, 181 and 183 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) and SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 (L (1) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 231, 233, 235 and 237 (L (2) humanized light chain sequences FR1, FR2 , FR3 and
  • the humanized antibodies are SEQ ID NOs: 171, 173, 175 and 177 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4, respectively), SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175 (H (2) humanized) Heavy chain framework sequence comprising the heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 177, 179, 181 and 183 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or the heavy chain
  • a sequence in which amino acids different from the corresponding chicken heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 SEQ ID NOs: 206, 207, 208 and 209, respectively
  • SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 each L (1) Light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4
  • A16 The anti-FSTL1 antibody of item A14 or A15, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein at least one of the different amino acids is selected from Vernier residues.
  • A17 The anti-FSTL1 antibody according to any one of items A14 to A16, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein all the different amino acids are selected from Vernier residues.
  • the antibody is a humanized antibody and comprises H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175, respectively) and L chain FR1,
  • a medicament comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A18, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • A20 An anticancer agent comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A18, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • a therapeutic agent for metastatic malignancy comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A18, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • A22 Melanoma, colorectal cancer, breast cancer, lymphoma, lung cancer, prostate cancer, renal cancer, head and neck cancer comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A18, or a fragment or functional equivalent thereof
  • a therapeutic agent for at least one disease selected from the group consisting of: esophageal cancer, gastric cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, bladder cancer, cervical cancer, brain central nerve tumor, sarcoma, leukemia and multiple myeloma.
  • An inhibitor of cancer cell metastasis comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A18, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • A25 An inhibitor of enhancement of immune disruption by mesenchymal stem cells (MSC), comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A18, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • A26 The inhibitor according to item A25, wherein the immune breakdown includes immunosuppression and immunodeficiency.
  • the enhancement of the immunological failure includes the proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity and immunosuppressive activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, or 27.
  • the inhibitor according to item A25 or A26 comprising at least one of immunosuppressive activity or acquisition of immunodeficiency activity of MSC cells having no immunodeficiency activity.
  • A28 An inhibitor of acquisition and / or enhancement of immune disruption activity of immune-related cells, comprising the anti-FSTL1 antibody according to any one of items A1 to A18, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • A29 The inhibitor according to item A28, wherein the immune disruption includes immunosuppression and immunodeficiency.
  • (A30) Acquisition and / or enhancement of the immune disruption activity of the immune-related cells may be achieved by proliferation of regulatory T cells, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory T cells, differentiation into regulatory T cells, regulatory dendritic cells Proliferation, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory dendritic cells, differentiation into regulatory dendritic cells, proliferation of tolerant dendritic cells, enhancement of immunosuppressive activity of tolerant dendritic cells, to tolerant dendritic cells Differentiation, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells, enhancement of immunosuppressive activity of bone marrow-derived immunosuppressive cells, differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, proliferation of exhausted T cells, enhancement of immunodeficiency activity of exhausted T cells And the inhibitor according to item A28 or A29, comprising at least one selected from the group consisting of induction of exhausted T cells.
  • A31 The pharmaceutical according to item A19, the anticancer agent according to item A20, the therapeutic agent according to item A21 or A22, or any of items A23 to A30, characterized by being combined with another cancer treatment An inhibitor according to claim 1.
  • A32 The medicament, anticancer agent, therapeutic agent or inhibitor according to item A31, wherein the another cancer treatment includes another anticancer agent and / or radiation therapy.
  • the present invention relates to immunosuppressive or immunodeficiency such as regulatory T cells (Treg) and bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) that act directly on cancer cells by inhibiting FSTL1 or suppress immunity.
  • immunosuppressive or immunodeficiency such as regulatory T cells (Treg) and bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) that act directly on cancer cells by inhibiting FSTL1 or suppress immunity.
  • Inhibiting proliferation and differentiation induction of mesenchymal stem cells (MSC) that promotes differentiation induction, proliferation, and / or enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of sex cells, and effects cancer cell metastasis indirectly Suppresses cancer metastasis, which is considered difficult to suppress, particularly bone metastases for which no effective treatment has been established.
  • the present invention provides an effective cancer therapeutic agent over many aspects.
  • immunosuppression or immunodeficiency can be released simultaneously as compared with conventional ones, the present invention also provides a wide range of immunosuppression releasing agents or immunodeficiency releasing agents.
  • the immunosuppressive releasing agent or immunodeficiency releasing agent of the present invention does not remove or inhibit the function of some immunosuppressive cell populations such as regulatory T cells and regulatory dendritic cells, Since it is widely released from the restriction of the inhibitor releasing agent and has an effect on exhausted T cells, it has an immune deficiency releasing effect and is also useful as an immune failure releasing agent for releasing immune failure.
  • FIG. 1 is a graph showing the binding activity to FSTL1 for the antibody of the present invention (Example 2).
  • FIG. 1A shows the evaluation of the binding activity of the clone obtained from the initial screening to human FSTL1 by ELISA.
  • White diamond is clone # 5-2
  • x is clone # 5-4
  • black triangle is clone # 5-8
  • white circle is clone # 5-10
  • white square is clone # 5-43
  • white triangle is clone # 6- 55
  • black circles indicate clone # 7-34
  • black squares indicate anti-dinitrophenyl (DNP) antibody as a control.
  • DNP anti-dinitrophenyl
  • FIG. 1B investigates cross-reactivity between mice and humans.
  • the binding activity of clones that also showed reactivity to mouse FSTL1 at the time of screening was evaluated.
  • the left shows the binding activity to human FSTL1
  • the right shows the binding activity to mouse FSTL1.
  • Both # 6-55 and # 7-34 showed strong binding activity to human and mouse FSTL1.
  • antibody concentration was diluted from 1000 ng / ml.
  • FIG. 2 the experiment was performed by further diluting the concentration.
  • FIG. 2 shows the evaluation of the binding activity of human clones obtained by mid-term screening to human FSTL1 by ELISA (Example 2).
  • White squares represent clone # 6-55
  • white triangles represent clone # 8-1
  • black circles represent clone # 8-4
  • black triangles represent clone # 8-7
  • white diamonds represent clone # 8-8.
  • the assay is performed together with # 6-55.
  • the strength of the binding activity was clones # 6-55, # 8-1, # 8-7>#8-4># 8-8.
  • the antibody concentration in FIG. 2 was diluted from 125 ng / ml.
  • FIG. 3 is a graph showing the binding activity of clones obtained by panning using mouse FSTL1 (Example 2).
  • the right side and left side of FIG. 3A and the right side and left side of FIG. 3B were evaluated at the same time, but because of the large number of clones, the figure was divided into two parts with emphasis on the ease of viewing the figure.
  • FIG. 3A shows the evaluation of the binding activity to human FSTL1, including clones (# 7, # 10, # 13, # 22, # 33) obtained by panning using mouse FSTL1.
  • white square is clone # 5-8
  • white triangle is clone # 6-55
  • black circle is clone # 7-34
  • black triangle is clone # 8-1
  • white diamond is clone # 8-4
  • black square Indicates an anti-DNP antibody.
  • the white square indicates clone # 7
  • the white triangle indicates clone # 10
  • the black circle indicates clone # 13
  • the black triangle indicates clone # 22
  • the white diamond indicates clone # 33
  • the black square indicates an anti-DNP antibody.
  • the strength of the binding activity to human FSTL1 is # 6-55, # 7-34, # 13># 8-1, # 10>#8-4># 7, # 33>#5-8># 22 there were.
  • FIG. 3B shows the evaluation of the binding activity of the above clones to mouse FSTL1 by ELISA.
  • white square is clone # 5-8
  • white triangle is clone # 6-55
  • black circle is clone # 7-34
  • black triangle is clone # 8-1
  • white diamond is clone # 8-4
  • black square Indicates an anti-DNP antibody.
  • the white square indicates clone # 7
  • the white triangle indicates clone # 10
  • the black circle indicates clone # 13
  • the black triangle indicates clone # 22
  • the white diamond indicates clone # 33
  • the black square indicates an anti-DNP antibody.
  • the strength of binding activity to mouse FSTL1 was # 6-55, # 7-34, # 10, # 13>#22>#7>#33># 8-1.
  • # 8-1 shows some binding activity.
  • # 5-8, # 8-4, anti-DNP antibody did not show any binding activity.
  • the antibody concentration in FIG. 3 was diluted from 100 ng / ml. Based on the results of the binding activity by ELISA and in vitro evaluation, promising clones to be used for in vivo evaluation were narrowed down (# 6-55, # 7-34, # 8-1). Furthermore, clones (# 7, # 10, # 13, # 22, # 33) obtained by new panning were also subjected to in vivo evaluation.
  • FIG. 4 shows deletion mutants (deletion mutants) and putative epitopes (Example 3).
  • the upper part of FIG. 4 shows a schematic diagram of human FSTL1 and the position of the defect site. The estimated site of the epitope of each clone was identified by ELISA using these human FSTL1 deletions as antigens.
  • the lower part of FIG. 4 shows the comparison between the obtained clone and the putative epitope of the rat anti-FSTL1 antibody of R & D Systems evaluated in the Example of Patent Document 1 (WO2009 / 028411). Furthermore, clones (strong binding activity; ⁇ , weak binding activity; ⁇ ) showing cross-reactivity to humans and mice were described.
  • FIG. 5 shows the results showing the effects of FSTL1 on mesenchymal stem cells (MSC) and bone metastasis (Examples 6 to 7).
  • FIG. 5A shows the influence of an antibody on the induction effect of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells by FSTL1 (Example 6).
  • the clones shown in the graph are shown from the left, the control antibody (anti-DNP antibody) is the third from the right, the antigen is the second, and the sample to which nothing is added is the right.
  • all antibody clones showed inhibitory activity on the action of FSTL1.
  • clones # 5-3, # 5-8 and # 7-34 showed higher inhibitory activity and almost completely inhibited the action of FSTL1.
  • FIG. 5B shows the effect of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2-positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1 (Example 7).
  • the expression of RANKL and CCR2 was analyzed by flow cytometry, and the number of positive cells was shown in the graph.
  • the clones shown in the graph are shown from the left, the control antibody (anti-DNP antibody) is the third from the right, the antigen is the second, and the sample to which nothing is added is the right.
  • control All antibody clones showed inhibitory activity as compared to the antibody (anti-DNP antibody). In particular, clones # 5-3 and # 5-8 show higher inhibitory activity.
  • FIG. 6-1 FIG.
  • FIG. 6 is also a result showing the effect on mesenchymal stem cells and bone metastasis by suppression of FSTL1 (Examples 8 to 11).
  • FIG. 6A shows the effect of antibodies on the induction effect of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells by FSTL1 (Example 8; FSTL1 concentration was set to a low concentration of 20 ng / ml).
  • the clones shown in the graph are shown from the right, with the control antibody (anti-DNP antibody) third from the left, the antigen only second, and the leftmost sample with nothing added.
  • FIG. 6B shows the effect of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2 positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1 (Example 9; FSTL1 concentration was 20 ng / ml at a low concentration).
  • RANKL and CCR2 expression was analyzed by flow cytometry among molecules known as bone metastasis markers, and the number of positive cells was shown in the graph.
  • the clones shown in the graph are shown from the right, with the control antibody (anti-DNP antibody) third from the left, the antigen only second, and the leftmost sample with nothing added.
  • FIG. 6C shows the influence of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2-positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1 (Example 10).
  • the clones shown in the graph are shown from the right, with the control antibody (anti-DNP antibody) third from the left, the antigen only second, and the leftmost sample with nothing added. All antibody clones showed inhibitory activity compared to the control antibody (anti-DNP antibody).
  • FIG. 6D shows the effect of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2-positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1.
  • an antibody dose-dependent test was conducted (Example 11).
  • the expression of RANKL and CCR2 was analyzed by flow cytometry, and the number of positive cells was shown in the graph.
  • Clone # 6-55 showed inhibitory activity compared to the control antibody (anti-DNP antibody), but no antibody dose dependency was observed.
  • FIG. 7 shows the influence of an antibody on the induction effect of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells by FSTL1 (Example 12; FSTL1 concentration of 20 ng / ml was used).
  • FIG. 8 shows the activity evaluation of anti-FSTL1 antibody and anti-PD-L1 antibody produced for in vivo (Example 13). Mouse bone marrow cells are cultured with FSTL1 and each antibody added.
  • CD45 negative cells (MS) with high probability of MSCs
  • MSCs “CD45 negative, ALCAM positive, CD271 positive cells” that increase with cancer metastasis.
  • Middle graph bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) “CD11b positive, Gr1 positive, ALCAM positive cells” (right graph) were analyzed by flow cytometry, and the number of cells was shown. In each graph, nothing is added at the left end, the control antibody is the second from the left, and the anti-PD-L1 antibody is shown on the right, and the four clones in the graph show the respective anti-FSTL1 antibodies. All of these antibodies showed high inhibitory activity as compared with the results so far, indicating that these antibodies produced for in vivo are also appropriate antibodies.
  • FIG. 9A shows the results of conducting the same test as FIG. 8 with another clone (clone described in each graph) (Example 14). As in FIG.
  • FSTL1 and each antibody were added to mouse bone marrow cells and cultured, “CD45 negative cells” (left graph) containing MSC with high probability, MSC “CD45 negative, ALCAM positive, increased with cancer metastasis, CD271 positive cells "(middle graph) and bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC)" CD11b positive, Gr1 positive, ALCAM positive cells "(right graph) were analyzed by flow cytometry, and the number of cells was shown. In each graph, nothing is added at the left end, the control antibody (anti-DNP antibody) is shown second from the left, and the anti-PD-L1 antibody is shown at the right end, and the four clones in the graph show the respective anti-FSTL1 antibodies.
  • FIG. 9B shows the results of analyzing the inhibitory activity of MSC induction having the ability to differentiate into adipocytes. In the graph, nothing is added at the left end, control is the second from the left, and anti-FSTL1 antibody clone is shown.
  • FIG. 10 shows a comparison of the activity with the anti-FSTL1 antibody manufactured by R & D Systems evaluated in the Example of Patent Document 1 (WO2009 / 028411) (Examples 15 to 16).
  • a dose-dependent test was conducted to compare # 6-55 (mouse chimeric antibody) with anti-FSTL1 antibody (rat antibody; labeled R & D) manufactured by R & D Systems, and the effect of FSTL1 as in FIG. The result of having analyzed the inhibitory activity of (Example 15) is shown.
  • FIG. 10A is similar to FIG.
  • mouse bone marrow cells were cultured with FSTL1 and each antibody added, and “CD45 negative cells” (left graph) containing MSC with high probability, and MSC “CD45 negative, “ALCAM positive, CD271 positive cells” (middle graph), bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) “CD11b positive, Gr1 positive, ALCAM positive cells” (right graph) were analyzed by flow cytometry, and the number of cells was shown. In each graph, nothing is added at the left end, the mouse control antibody is the second from the left, and the rat control antibody is the third from the left. Two clones show each anti-FSTL1 antibody, and the numerical value shows the amount of antibody used ( ⁇ g / mL).
  • FIG. 10B shows the results of analyzing the inhibitory activity of MSC induction having the ability to differentiate into adipocytes (Example 16). In the graph, nothing is added at the left end, the mouse control antibody is the second from the left, and the rat control antibody is the third from the left. Two clones show each anti-FSTL1 antibody, and the numerical value shows the amount of antibody used ( ⁇ g / mL).
  • the ability to differentiate into adipocytes is one of the functions of cancer-related MSCs (cells also shown in the center cell of FIG. 10A) that induce immunosuppression. From the comparison between FIG. 10A and FIG. 10B, the following can be said. That is, compared with the case where a mouse control antibody (mouse-derived protein) is administered, when a “rat-derived protein” called a rat control antibody is administered into a mouse in vivo, its own reaction is reduced.
  • a mouse control antibody mouse-derived protein
  • FIG. 11 shows in vivo antibody activity evaluation (Example 17). Snail forced expression mouse melanoma cells (B16-F10) were transplanted subcutaneously and intravenously into C57BL / 6N mice. The results of comparative analysis of antitumor effect and immune suppression release effect using bone metastasis model are shown. The test subject anti-FSTL1 antibody was administered into the tumor.
  • FIG. 11A shows the percentage of GFP-positive tumor cells in bone marrow cells analyzed by flow cytometry, and based on this data, the number of GFP-positive tumor cells per mouse ( ⁇ 10 6 The results of counting cells) show the effects of various antibodies on bone metastasis (in which bone metastasis is suppressed).
  • 11B shows the percentage of CD45 negative cells in bone marrow cells analyzed by flow cytometry, and based on this data, the number of CD45 negative bone marrow cells per mouse ( ⁇ 10 6 The results of counting cells) show the effect of various antibodies on the increase in MSC in the bone marrow (inhibition of increase in MSC in the bone marrow).
  • the double bar graph from the top, the group to which no treatment, control antibody, clones # 6-55, # 7-34 and # 8-1 were administered is shown.
  • 11C tumor volume by mouse individual
  • tumor volume by mouse individual is the tumor volume by mouse individual (one mouse is 1 line) measured 7 days, 11 and 14 days after tumor implantation, and the effects of various antibodies on tumor growth (transplanted subcutaneously). Tumor growth is suppressed). From the left, there is no treatment, and a group to which control antibodies, clones # 6-55, # 7-34 and # 8-1 were administered is shown. The numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14). The horizontal axis indicates the number of days. The vertical axis represents the tumor volume (mm3). All three anti-FSTL1 antibodies significantly inhibited the growth of subcutaneous tumors compared to the control antibody.
  • FIG. 11 shows in vivo antibody activity evaluation (Example 17). Snail forced expression mouse melanoma cells (B16-F10) were transplanted subcutaneously and intravenously into C57BL / 6N mice. The results of comparative analysis of antitumor effect and immune suppression release effect using bone metastasis model are shown. The test subject anti-FSTL1 antibody was administered into the tumor.
  • FIG. 11D shows changes in the cell population within the spleen. It is suggested that even if the antibody is administered locally within the tumor, it is modified / affected throughout the body. The left shows the number of CD45 negative cells, indicating that MSC is decreased in the spleen. The middle shows the number of CD4-positive Foxp3-positive T cells, indicating that Treg is decreasing.
  • FIG. 12 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 18). In vivo antibody activity evaluation, showing antitumor effect and immune suppression release effect using bone metastasis model in which Snail forced expression mouse melanoma cells (B16-F10) were transplanted subcutaneously and intravenously in C57BL / 6N mice The result of comparative analysis is shown.
  • the test subject anti-FSTL1 antibody was administered intraperitoneally (systemic administration).
  • GFP positive Snail positive B16-F10 tumor cells subcutaneous 5x10 Five Individual & intravenous 1x10 Five
  • FIG. 12A left shows the percentage of GFP positive tumor cells in the bone marrow cells analyzed by flow cytometry, and based on this data, GFP positive tumor cells per mouse.
  • the results of counting cells show the effects of various antibodies on bone metastasis (in which bone metastasis is suppressed).
  • the center of FIG. 12A shows the percentage of CD45 ⁇ cells in the bone marrow cells analyzed by flow cytometry, and based on this data, the number of CD45 negative bone marrow cells per mouse ( ⁇ 10 6 The results of counting cells) show the effect of various antibodies on the increase in MSC in the bone marrow (inhibition of increase in MSC in the bone marrow).
  • FIG. 12 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 18).
  • FIG. 12C shows changes in the cell population within the spleen. The upper left of FIG. 12C is the number of GFP-positive tumor cells, and as a result of examining the metastasis into the spleen, it is also suppressed. This indicates metastasis to other organs.
  • FIG. 13 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 19). This figure shows a comparison of the efficacy of an existing immunosuppressive antibody and anti-FSTL1 antibody using a mouse melanoma Snail forced expression B16-F10 cell transplanted bone metastasis model.
  • FIG. 13A shows the effect of various antibodies on tumor volume over time.
  • each mouse individual (one line is one mouse) measured 8 days, 11 days and 15 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth. From the left, no treatment, control antibody, anti-FSTL1 antibody, anti-CTLA4 antibody, anti-PD-1 antibody and anti-PD-L1 antibody are shown. The numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 15). The horizontal axis indicates the number of days. Vertical axis is tumor volume (mm 3 ).
  • FIG. 13B left shows the effect on bone metastasis (number of GFP positive cells (10 6
  • FIG. 13B right shows the effect on weight change (weight (g)).
  • FIG. 13B shows, from above, no treatment, control antibody, anti-FSTL1 antibody, anti-CTLA4 antibody, anti-PD-1 antibody, and anti-PD-L1 antibody.
  • the following existing antibody drugs were used as control antibodies.
  • Anti-CTLA4 mAb (Clone 9H10, BioLegend);
  • Anti-PD-1 mAb (Clone 29F.1A12, BioLegend);
  • Anti-PD-L1 mAb (Clone 10F.9G2, BioLegend).
  • FIG. 14 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 20). This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse colon cancer CT26 cell transplantation model.
  • FIG. 14A shows the effect on tumor growth for all three graphs.
  • Tumor volume measured for individual mice one mouse is 1 mouse measured 7 days, 11 days, and 14 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth.
  • the left shows no treatment, the center shows a control antibody (anti-DNP antibody), and the right shows an anti-FSTL1 antibody (# 6-55).
  • the numbers in parentheses and on the line indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • the vertical axis represents the tumor volume (mm3). Efficacy was evaluated using mouse tumor models other than Snail + tumor bone metastasis model.
  • FIG. 14B shows the results regarding the number of lung metastatic nodules. From the left, no treatment, the center shows a control antibody (anti-DNP antibody), and the right shows an anti-FSTL1 antibody.
  • the vertical axis represents the number of lung metastasis nodules. The vertical axis indicates the standard deviation bar.
  • Anti-FSTL1 antibody (# 6-55) remarkably suppressed the growth and lung metastasis of CT26 subcutaneous tumor, solid tumors disappeared in 3 out of 5 mice, and the number of lung metastatic nodules was very small ( The average of the control antibody group was 14 vs. approximately 0-3 for the anti-FSTL1 antibody group). From this result, data indicating that not only metastasis to “bone” but also metastasis to “lung” was also shown, and thus it is understood that the antibody of the present invention is generally effective for cancer metastasis.
  • FIG. 15 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 21). This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse breast cancer 4T1 cell transplantation model.
  • All three graphs show the effect on tumor growth. It is the tumor volume of each mouse individual (one line is 1 mouse) measured 4 days, 7 days, 11 days and 14 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth. The left shows no treatment, the center shows a control antibody, and the right shows an anti-FSTL1 antibody (# 6-55). The numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14). The horizontal axis indicates the number of days. Vertical axis is tumor volume (mm 3 ).
  • FIG. 16A also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 22).
  • FIG. 16B shows the effect on weight change.
  • the left shows a control antibody
  • the center shows an anti-FSTL1 antibody
  • the right shows an untreated individual not receiving tumor cells.
  • the vertical axis shows tumor volume (g).
  • the efficacy of the anti-FSTL1 antibody was evaluated using another cancer-bearing model of the C57BL / 6 mouse system similar to the Snail positive tumor bone metastasis model.
  • “mouse melanoma B16-F10” is a parental strain of Snail forced expression cell line transplanted in the bone metastasis model used so far.
  • subcutaneous tumor growth was strongly suppressed by administration of anti-FSTL1 antibody (# 6-55). It also showed inhibitory activity on weight loss.
  • Example 23 shows in vivo antibody activity evaluation (Example 23).
  • This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse lymphoma EL4.
  • Both graphs show the effect on tumor growth. Tumor volume measured by individual mice (one mouse per line) measured 3, 6, and 10 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth. The left shows a control antibody and the right shows an anti-FSTL1 antibody.
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • the vertical axis represents the tumor volume (mm3).
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibodies was evaluated using mouse lymphoma EL4, one of the cancer types with enhanced FSTL1 expression.
  • FIG. 18 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 24). This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse melanoma B16-F10. All four graphs show the effect on tumor growth. It is the tumor volume of each mouse individual (one line is 1 mouse) measured 6 days, 10 days and 14 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth.
  • the left end shows the control antibody
  • the second from the left shows 1 mg / kg anti-FSTL1 antibody
  • the second from the right shows 3 mg / kg anti-FSTL1 antibody
  • the right end shows 10 mg / kg anti-FSTL1 antibody.
  • the numbers in parentheses and on the line indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • Vertical axis is tumor volume (mm 3 ).
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibody was evaluated in the same test system as the experiment in the diagram of FIG. However, only subcutaneous transplantation was performed this time in order to evaluate clearer reactivity.
  • FIG. 19 shows% CD4 + in an experimental system containing the anti-FSTL1 antibody of the present invention (# 6-55) and a known anti-FSTL1 antibody (R & D Systems, Cat. No. MAB1694, clone 229007). It is the result of the Treg induction
  • FIG. 20 shows the results of looking at various functions of the anti-FSTL1 antibody.
  • Panel A shows the results of the effect of anti-FSTL1 antibodies on the proliferative and invasive potential of various human tumor cells.
  • the upper panel of panel A shows the results of proliferation and the lower panel shows the results of infiltration. From the left, Panc1, MIAPaCa, MDA231, and Hs294 are shown.
  • the graph shows the number of cells after culturing on day 3 ( ⁇ 10 3 ).
  • the lower panel shows the number of tumor cells treated with the antibody for 3 days.
  • Panels C to D show the effect of anti-FSTL1 antibody on Snail forced expression cells.
  • the results of Matrigel infiltration, CCR2 expression, and RANKL expression are shown from the left of C.
  • the parental Panc1 cells (Mock) in which Snail is not forcibly expressed from the left, the second to right end from the left are the presence of anti-FSTL1 antibody (50 ng / ml), nothing from the left, mouse IgG, Anti-FSTL1 antibody (# 6-55) is shown.
  • Panel D shows the results with Snail transfectants with mouse melanoma B16t-F10.
  • FIG. 21 shows the results of an MSC induction inhibition test using mouse bone marrow cells.
  • panel A CD45 + MSC cells from the left, CD45 + on the right + CD146 + ALCAM + sMSC is shown.
  • FSTL1 (20 ng / ml)
  • antibody # 6- 55, # 7, # 10, # 13, and # 33 are shown.
  • FIG. 22 shows the results of a Treg induction inhibition test using mouse spleen cells.
  • the graph is CD4 + Foxp3 in cells + CTLA4 + The percentage of cells is shown.
  • the left end is nothing, and the second to right end from the left is the experiment in the presence of FSTL (5 ng / ml).
  • Mouse immunoglobulins from the second from the left, antibodies # 6-55, # 7, # 10, and # 33 of the present invention are shown, respectively.
  • FIG. 23 shows the evaluation of inhibitory activity against mouse tumor activation for three newly prepared anti-FSTL1 antibodies with different epitopes (# 7, # 10, # 33).
  • Upper left shows cell adhesion
  • upper right shows cell infiltration
  • lower left shows CCR2 expression
  • lower right shows RANKL expression.
  • FIG. 24 (FIGS. 24-1 to 24-4) is a comparison of in vivo drug efficacy of immunodepressant antibody and anti-FSTL1 antibody already in clinical use using Snail + tumor bone metastasis model. This is the result.
  • FIG. 24-1 shows tumor growth in the upper row, bone metastasis in the lower row, sMSC in bone marrow, and sMSC in spleen.
  • Each horizontal axis is GFP + Number of tumor cells, CD45 - ALCAM + Number of cells and CD45 - ALCAM + The number of cells is indicated.
  • FIG. 24-2 shows a group of cells responsible for anti-tumor immunity that has infiltrated the tumor. From left, CD4 + T cells (CD45 + CD3 + CD4 + Cells), tumor-specific CD8 + T cells (CD45) + CD8 + Tetramer + ), Activated NK cells (CD45) + NK1.1 + NKG2D + ). The upper row shows the percentage of positive cells. Bottom is mm 3 The number of cells is shown.
  • FIG. 24-3 is the same experiment as FIG. 24-2 and shows the results of immunosuppressive T cell group infiltrating into the tumor and highly metastatic tumor cells in the subcutaneous tumor. From the left, CD4 + Treg (CD45 + CD4 + Foxp3 + Tregs), MDSCs (CD45 + CD11b + Gr1 + MDSCs), tumor cells producing EMT (Snail) + CD44 + The description of the graph is the same as in FIG. 24-2.
  • FIG. 24-4 shows the results of immune cell groups in the spleen. From left, tumor-specific CD8 + T cells (CD3 + CD8 + Tetramer + CTLs), CD4 + Treg (CD4 + CTLA4 + Foxp + Tregs), CD8 + Treg (CD8 + CTLA4 + Foxp3 + Tregs). The graph shows the number of cells per spleen ( ⁇ 10 6 Is displayed). From the top, no treatment, control, anti-CTLA4 antibody, anti-PD1 antibody, anti-PD-L1 antibody, and anti-FSTL1 antibody are shown. FIG.
  • FIG. 25 shows the results of evaluation of drug efficacy (tumor growth, body weight, and number of sMSCs in bone marrow) using a mouse lung cancer model.
  • drug efficacy tumor growth, body weight, and number of sMSCs in bone marrow
  • the left is a control and the anti-FSTL1 antibody is shown on the right.
  • the horizontal axis is the number of days after tumor transplantation, and the vertical axis is the tumor volume (mm 3 ).
  • the middle graph shows the animal weight. From left, control, antibody FSTL1 antibody and naive are shown. Body weight is expressed in g.
  • the right graph shows sMSC in bone marrow. From left, control, anti-FSTL1 antibody and naive are shown.
  • FIG. 26 to FIG. 27 show the results of in vivo drug efficacy evaluation of clones classified by anti-FSTL1 antibody using Snail + tumor bone metastasis model.
  • FIG. 26 shows changes in tumor volume (mm 3 ). From the left, the results of control immunoglobulin and antibodies # 6-55, # 7, # 10, # 13 and # 33 of the present invention are shown. In both cases, the statistical significance (p value) is shown in parentheses in comparison with the control, and the statistical significance between # 6-55 is shown as a p value connected with a line. The horizontal axis is the number of days after tumor transplantation. [FIG. 27] FIG. 26 to FIG.
  • FIG. 27 show the results of in vivo drug efficacy evaluation of clones classified by anti-FSTL1 antibody using Snail + tumor bone metastasis model.
  • FIG. 27 shows the survival rate.
  • the results of the control immunoglobulin and the antibodies # 6-55, # 7, # 10, # 13 and # 33 of the present invention are shown.
  • # 6-55 is a thin black line
  • # 7 is a gray broken line
  • # 10 is a thick black solid line
  • # 13 is a gray solid line
  • # 33 is a dark black broken line.
  • FIG. 28 shows affinity data (measured by BIACORE) of mouse chimeric antibody. The figure is a plot of antigen binding and dissociation for mouse chimeric antibodies.
  • FIG. 29 to FIG. 30 show ELISA results for humanized antibodies.
  • FIG. 29 shows a comparison of the binding activity of the humanized 6-55 antibody by the combination of H chain (IgG1 type) and L chain.
  • the black solid line on the white circle is the humanized antibody H1-L1
  • the black solid line on the square is H2-L1
  • the black solid line on the white triangle is H3-L1
  • the black dotted line is the humanized antibody H1-L2
  • the black triangular line is the black dotted line
  • the results of H2-L2, the black dot on the black circle, H3-L2, the gray solid line on the gray square, the humanized antibody H1-L1, the gray dot on the gray triangle, the H2-L1, the gray line on the gray circle, and the H3-L1 are shown.
  • the value of OD450 is shown on the horizontal axis of antibody concentration. H2-L1 was found to be the best.
  • FIG. 29 to FIG. 30 show the results of ELISA for humanized antibodies.
  • FIG. 30 shows the binding activity of the antibody humanized # 6-55H2-L1 (IgG1 type) of the present invention to human and mouse FSTL1.
  • the left shows binding activity to human FSTL1 and the right shows mouse FSTL1.
  • Black circles indicate human # 6-55 antibody, and white squares indicate human anti-DNP antibody.
  • the antibody concentration shows the value of OD490 / 630 on the horizontal axis.
  • FSTL1 is a protein that is similar to follistatin and encodes a protein that is an activin-binding protein, includes FS modules contained in a follistatin-like sequence, and contains 10 conserved cysteines. It is said to have a residue. Although it has been considered to be an autoantigen related to rheumatoid arthritis, recent findings are described in Patent Document 1 (WO 2009/028411).
  • accession number of FSTL1 described in NCBI is, for example, NP_009016 (NP_009016.1) (amino acid) for humans; NP_032073.2 (amino acid) for mice, NM_007085 (NM_007085.4) (mRNA) for humans; It is NM_008047.5 (mRNA).
  • the amino acid sequence of FSTL1 is, for example, SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3.
  • the base sequence of FSTL1 mRNA is, for example, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4.
  • the amino acid sequence of FSTL1 is not limited as long as it has FSTL1 activity.
  • a “derivative”, “analog” or “variant” as used herein is preferably, but not intended to be limited, a region that is substantially homologous to a protein of interest (eg, FSTL1).
  • such molecules are at least when compared to sequences aligned over amino acid sequences of the same size or aligned by computer homology programs known in the art. Nucleic acids that are 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% or 99% identical or that encode such molecules are subject to (highly) stringent conditions It can hybridize to a sequence encoding a component protein under moderately stringent or non-stringent conditions.
  • the representative nucleotide sequence of FSTL1 is (A) a polynucleotide having the base sequence set forth in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 or a fragment sequence thereof; (B) a polynucleotide encoding a polypeptide consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4 or a fragment thereof; (C) In the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4, one or more amino acids are a variant polypeptide or a fragment thereof having one mutation selected from the group consisting of substitution, addition and deletion A polynucleotide encoding a variant polypeptide having biological activity; (D) a polynucleotide which is a splice variant or allelic variant of the base sequence described in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 or a fragment thereof; (E) a polynucleotide encoding a species homologue of a poly
  • a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4 or a fragment thereof;
  • B In the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4, one or more amino acids have one mutation selected from the group consisting of substitution, addition and deletion, and have biological activity A polypeptide;
  • C a polypeptide encoded by a splice variant or allelic variant of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3;
  • D a polypeptide that is a species homologue of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4; or (e) at least 70% identity to any one polypeptide of (a)-(d)
  • biological activity can typically be distinguished from other proteins present in the same organism as the activity or marker of FSTL1 (for example, it can function as a specific epitope when used as an antigen) Including the area).
  • SEQ ID NOs: 1-4 are precursors containing a leader sequence.
  • the first 20 amino acids from methionine to alanine
  • SEQ ID NO: 4 the first 18 amino acids (from methionine to glycine) are leader sequences. Therefore, when referring to FSTL1 in the present invention, the amino acid sequence may refer to those after deletion of these leader sequences.
  • An “agent” or “FSTL1 interacting molecule” is a molecule or substance that at least temporarily binds to FSTL1.
  • a therapeutic agent is further bound.
  • substances that bind to FSTL1 include antibodies, antisense oligonucleotides, siRNA, low molecular weight molecules (LMW), binding peptides, aptamers, ribozymes, and peptidomimetics.
  • a substance that binds to FSTL1 or ⁇ FSTL1-interacting molecule may be an inhibitor of FSTL1, e.g. binding protein or binding peptide directed against FSTL1, in particular directed against the active site of FSTL1, Also included is a nucleic acid directed against the FSTL1 gene, which refers to a double-stranded or single-stranded DNA or RNA, or a modification or derivative thereof that inhibits, for example, expression of the FSTL1 gene or activity of FSTL1.
  • binding protein or “binding peptide” for FSTL1 is any binding to FSTL1
  • An antibody eg, polyclonal antibody or monoclonal that refers to a protein or peptide and is directed against FSTL1 Le antibodies), including antibody fragments and functional equivalents without limitation.
  • protein protein
  • polypeptide oligopeptide
  • peptide refers to a polymer of amino acids having an arbitrary length.
  • This polymer may be linear, branched, or cyclic.
  • the amino acid may be natural or non-natural and may be a modified amino acid.
  • the term can also encompass one assembled into a complex of multiple polypeptide chains.
  • the term also encompasses natural or artificially modified amino acid polymers. Such modifications include, for example, disulfide bond formation, glycosylation, lipidation, acetylation, phosphorylation or any other manipulation or modification (eg, conjugation with a labeling component).
  • amino acid is a general term for organic compounds having an amino group and a carboxyl group.
  • amino acid sequence may be chemically modified. Any amino acid in the amino acid sequence may form a salt or a solvate. Further, any amino acid in the amino acid sequence may be L-type or D-type.
  • the protein according to the embodiment of the present invention includes the above-mentioned “specific amino acid sequence”.
  • specific amino acid sequence examples include N-terminal modification (for example, acetylation, myristoylation, etc.), C-terminal modification (for example, amidation, glycosylphosphatidylinositol addition, etc.), or side chain Modifications (for example, phosphorylation, sugar chain addition, etc.) are known. As long as the object of the present invention is satisfied, it may be natural or non-natural.
  • polynucleotide As used herein, “polynucleotide”, “oligonucleotide”, and “nucleic acid” are used interchangeably herein and refer to a nucleotide polymer of any length. The term also includes “oligonucleotide derivatives” or “polynucleotide derivatives”. “Oligonucleotide derivatives” or “polynucleotide derivatives” refer to oligonucleotides or polynucleotides that include derivatives of nucleotides or that have unusual linkages between nucleotides, and are used interchangeably.
  • oligonucleotides include, for example, 2′-O-methyl-ribonucleotides, oligonucleotide derivatives in which phosphodiester bonds in oligonucleotides are converted to phosphorothioate bonds, and phosphodiester bonds in oligonucleotides.
  • oligonucleotide derivative in which ribose and phosphodiester bond in oligonucleotide are converted to peptide nucleic acid bond uracil in oligonucleotide is C- Oligonucleotide derivatives substituted with 5-propynyluracil, oligonucleotide derivatives where uracil in the oligonucleotide is substituted with C-5 thiazole uracil, and cytosine in the oligonucleotide substituted with C-5 propynylcytosine Nucleotide derivatives, oligonucleotide derivatives in which cytosine in the oligonucleotide is substituted with phenoxazine-modified cytosine, oligonucleotide derivatives in which ribose in DNA is substituted with 2'-O-propylribos
  • a particular nucleic acid sequence may also be conservatively modified (eg, degenerate codon substitutes) and complementary sequences, as well as those explicitly indicated. Is contemplated. Specifically, a degenerate codon substitute creates a sequence in which the third position of one or more selected (or all) codons is replaced with a mixed base and / or deoxyinosine residue. (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19: 5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260: 2605-2608 (1985); Rossolini et al., Mol. Cell .Probes 8: 91-98 (1994)).
  • nucleic acid is also used interchangeably with gene, cDNA, mRNA, oligonucleotide, and polynucleotide.
  • nucleotide may be natural or non-natural.
  • gene refers to a factor that defines a genetic trait
  • gene may refer to “polynucleotide”, “oligonucleotide”, and “nucleic acid”.
  • homology of a gene refers to the degree of identity of two or more gene sequences to each other, and generally “having homology” means that the degree of identity or similarity is high. Say. Therefore, the higher the homology between two genes, the higher the sequence identity or similarity. Whether two genes have homology can be determined by direct sequence comparison or, in the case of nucleic acids, hybridization methods under stringent conditions. When directly comparing two gene sequences, the DNA sequence between the gene sequences is typically at least 50% identical, preferably at least 70% identical, more preferably at least 80%, 90% , 95%, 96%, 97%, 98% or 99% are identical, the genes have homology.
  • a “homolog” or “homologous gene product” is a protein in another species, preferably a mammal, that performs the same biological function as the protein component of the complex further described herein. Means. Such homologues may also be referred to as “ortholog gene products”. It will be understood that such homologues, homologous gene products, orthologous gene products and the like can be used as long as they meet the objectives of the present invention.
  • Amino acids may be referred to herein by either their commonly known three letter symbols or by the one letter symbols recommended by the IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission. Nucleotides can also be referred to by the generally recognized one letter code.
  • comparison of similarity, identity and homology between amino acid sequences and base sequences is calculated using default parameters using BLAST, which is a sequence analysis tool.
  • the identity search can be performed, for example, using NCBI's BLAST 2.2.28 (issued 2013.4.2).
  • the identity value usually refers to a value when the above BLAST is used and aligned under default conditions. However, if a higher value is obtained by changing the parameter, the highest value is set as the identity value. When identity is evaluated in a plurality of areas, the highest value among them is set as the identity value. Similarity is a numerical value calculated for similar amino acids in addition to identity.
  • “several” may be, for example, 10, 8, 6, 5, 4, 3, or 2, or may be less than or equal to any of these values.
  • Polypeptides that have been deleted, added, inserted, or replaced with other amino acids by one or several amino acid residues are known to retain their biological activity (Market al., Proc Natl Acad Sci USA. 1984 Sep; 81 (18): 5662-5666., Zoller et al., Nucleic Acids Res. 1982 Oct 25; 10 (20): 6487-6500., Wang et al., Science. 1984 Jun 29 ; 224 (4656): 1431-1433.).
  • Antibodies with deletions and the like can be produced by, for example, site-specific mutagenesis, random mutagenesis, or biopanning using an antibody phage library.
  • site-specific mutagenesis method for example, KOD-Plus-Mutagenesis Kit (TOYOBO CO., LTD.) Can be used. It is possible to select an antibody having the same activity as that of the wild type from mutant antibodies into which deletion or the like has been introduced by performing various characterizations such as FACS analysis and ELISA.
  • “90% or more” may be, for example, 90, 95, 96, 97, 98, 99, or 100% or more, and is within the range of any two values thereof. Also good.
  • the above-mentioned “homology” may be calculated according to a method known in the art, based on the ratio of the number of amino acids homologous in two or more amino acid sequences. Before calculating the ratio, the amino acid sequences of the group of amino acid sequences to be compared are aligned, and a gap is introduced into a part of the amino acid sequence when necessary to maximize the ratio of the same amino acids.
  • polynucleotide hybridizing under stringent conditions refers to well-known conditions commonly used in the art.
  • a polynucleotide can be obtained by using a colony hybridization method, a plaque hybridization method, a Southern blot hybridization method or the like using a polynucleotide selected from among the polynucleotides of the present invention as a probe.
  • hybridization was performed at 65 ° C. in the presence of 0.7 to 1.0 M NaCl using a filter on which colony or plaque-derived DNA was immobilized, and then a 0.1 to 2-fold concentration was obtained.
  • SSC saline-sodium citrate
  • composition of 1-fold concentration of SSC solution is 150 mM sodium chloride, 15 mM sodium citrate
  • stringent conditions for example, the following conditions can be adopted.
  • a polypeptide used in the present invention is encoded by a nucleic acid molecule that hybridizes under highly or moderately stringent conditions to a nucleic acid molecule encoding a polypeptide specifically described in the present invention. are also included.
  • a “purified” substance or biological factor refers to a substance from which at least a part of the factor naturally associated with the substance or biological factor has been removed. .
  • the purity of a biological agent in a purified biological agent is higher (ie, enriched) than the state in which the biological agent is normally present.
  • the term “purified” as used herein is preferably at least 75% by weight, more preferably at least 85% by weight, even more preferably at least 95% by weight, and most preferably at least 98% by weight, Means the presence of the same type of biological agent.
  • the substance or biological agent used in the present invention is preferably a “purified” substance.
  • an “isolated” substance or biological agent is substantially free of the factors that naturally accompany the substance or biological agent. Say things.
  • the term “isolated” as used herein does not necessarily have to be expressed in purity, as it will vary depending on its purpose, but is preferably at least 75% by weight, more preferably if necessary. Means that there is at least 85%, more preferably at least 95%, and most preferably at least 98% by weight of the same type of biological agent.
  • the materials used in the present invention are preferably “isolated” materials or biological agents.
  • a “corresponding” amino acid or nucleic acid or moiety refers to a predetermined amino acid or nucleotide or moiety in a polypeptide or polynucleotide to be compared in a polypeptide molecule or polynucleotide molecule (eg, FSTL1).
  • Amino acids or nucleotides that have or are expected to have a similar action especially in the case of enzyme molecules, amino acids that are present at similar positions in the active site and that contribute similarly to catalytic activity, In the case of a complex molecule, it refers to a corresponding part (for example, a transmembrane domain).
  • an antisense molecule can be a similar part in an ortholog corresponding to a particular part of the antisense molecule.
  • Corresponding amino acids for example, cysteinylation, glutathioneation, SS bond formation, oxidation (eg methionine side chain oxidation), formylation, acetylation, phosphorylation, glycosylation, myristylation, etc.
  • the corresponding amino acid can be an amino acid responsible for dimerization.
  • Such “corresponding” amino acids or nucleic acids may be regions or domains spanning a range. Thus, in such cases, it is referred to herein as a “corresponding” region or domain. Such corresponding regions or domains are useful when designing complex molecules in the present invention.
  • a “corresponding” gene eg, a polynucleotide sequence or molecule
  • a “corresponding” gene has, or is expected to have, in a species, the same effect as a given gene in a species to which comparison is made. It refers to a gene (for example, a polynucleotide sequence or a molecule), and when there are a plurality of genes having such an action, those having the same origin in evolution.
  • a gene corresponding to a gene can be an ortholog of that gene.
  • each human FSTL1 can find the corresponding FSTL1 in other animals (especially mammals).
  • Such corresponding genes can be identified using techniques well known in the art.
  • a corresponding gene in an animal is a reference gene of the corresponding gene (for example, FSTL1), and the sequence of SEQ ID NOs: 1 to 4 is used as a query sequence. It can be found by searching a database containing sequences.
  • fragment refers to a polypeptide or polynucleotide having a sequence length of 1 to n ⁇ 1 with respect to a full-length polypeptide or polynucleotide (length is n).
  • the length of the fragment can be appropriately changed according to the purpose.
  • the lower limit of the length is 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, Examples include 15, 20, 25, 30, 40, 50 and more amino acids, and lengths expressed in integers not specifically listed here (eg, 11 etc.) are also suitable as lower limits obtain.
  • examples include 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 100 and more nucleotides.
  • Non-integer lengths may also be appropriate as a lower limit.
  • such a fragment falls within the scope of the present invention as long as the full-length fragment functions as a marker or target molecule as long as the fragment itself also functions as a marker or target molecule. Is understood.
  • the term “activity” refers herein to the function of a molecule in the broadest sense. Activity is not intended to be limiting, but generally includes the biological function, biochemical function, physical function or chemical function of a molecule. Activity activates, promotes, stabilizes, inhibits, suppresses, or destabilizes, for example, enzyme activity, the ability to interact with other molecules, and the function of other molecules Ability, stability, and ability to localize to specific intracellular locations. Where applicable, the term also relates to the function of the protein complex in the broadest sense.
  • biological function refers to a specific function that a gene, nucleic acid molecule or polypeptide may have in vivo when referring to a gene or a nucleic acid molecule or polypeptide related thereto.
  • the antibody include, but are not limited to, generation of specific antibodies, enzyme activity, and imparting resistance.
  • FSTL1 can include a function involved in inhibition of VLDL uptake and the like, but is not limited thereto.
  • a biological function can be exerted by “biological activity”.
  • biological activity refers to activity that a certain factor (eg, polynucleotide, protein, etc.) may have in vivo, and exhibits various functions (eg, transcription promoting activity). For example, an activity in which another molecule is activated or inactivated by interaction with one molecule. When two factors interact, the biological activity can be the binding between the two molecules and the resulting biological change, and for example, one molecule was precipitated using an antibody Sometimes, when other molecules co-precipitate, the two molecules are considered to be linked. Therefore, seeing such coprecipitation is one of the judgment methods. For example, when a factor is an enzyme, the biological activity includes the enzyme activity.
  • an agent when an agent is a ligand, the ligand includes binding to the corresponding receptor.
  • biological activity can be measured by techniques well known in the art.
  • “activity” indicates or reveals binding (either direct or indirect); affects the response (ie, has a measurable effect in response to some exposure or stimulus),
  • expression of a gene, polynucleotide, polypeptide or the like means that the gene or the like undergoes a certain action in vivo to take another form.
  • a gene, a polynucleotide or the like is transcribed and translated into a polypeptide form.
  • transcription and production of mRNA are also an aspect of expression.
  • expression product includes such a polypeptide or protein, or mRNA. More preferably, such polypeptide forms may be post-translationally processed.
  • the expression level of FSTL1 can be determined by any method.
  • the expression level of FSTL1 can be determined by evaluating the amount of FSTL1 mRNA, the amount of FSTL1 protein, and the biological activity of FSTL1 protein. Such measurements can be used in companion diagnostics.
  • the amount of FSTL1 mRNA or protein can be determined by the methods detailed elsewhere in this specification or other methods known in the art.
  • the “functional equivalent” refers to an object having a target function equivalent to the target entity but having a different structure. Therefore, the functional equivalent of “FSTL1” or its antibody is not FSTL1 or its antibody itself, but is a variant or variant (for example, amino acid sequence variant, etc.) of FSTL1 or its antibody, and possessed by FSTL1. Those having a biological effect, and those that can change to FSTL1 or its antibody itself or a variant or variant of this FSTL1 or its antibody at the time of action (eg, FSTL1 or its antibody itself or FSTL1 or It is understood that nucleic acids encoding the antibody variants or variants, and vectors, cells, etc. containing the nucleic acids) are encompassed.
  • a functional equivalent of FSTL1 or an antibody thereof can be used similarly to FSTL1 or an antibody thereof, even if not specifically mentioned.
  • Functional equivalents can be found by searching a database or the like.
  • search refers to finding another nucleobase sequence having a specific function and / or property using a nucleobase sequence electronically or biologically or by other methods.
  • Electronic searches include BLAST (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990)), FASTA (Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci., USA 85: 2444- 2448 (1988)), Smith and Waterman method (Smith and Waterman, J. Mol.
  • Biological searches include stringent hybridization, macroarrays with genomic DNA affixed to nylon membranes, microarrays affixed to glass plates (microarray assays), PCR, and in situ hybridization. It is not limited to. In the present specification, it is intended that the gene used in the present invention should include a corresponding gene identified by such an electronic search or biological search.
  • an amino acid sequence having one or more amino acid insertions, substitutions or deletions, or those added to one or both ends can be used.
  • “insertion, substitution or deletion of one or a plurality of amino acids in the amino acid sequence, or addition to one or both ends thereof” is a well-known technical method such as site-directed mutagenesis. It means that a modification has been made by substitution of a plurality of amino acids to the extent that can occur naturally by a method or by natural mutation.
  • the modified amino acid sequence has, for example, 1 to 30, preferably 1 to 20, more preferably 1 to 9, further preferably 1 to 5, particularly preferably 1 to 2 amino acid insertions, substitutions or deletions. Lost or added to one or both ends thereof.
  • the modified amino acid sequence preferably has one or more (preferably 1 or several or 1, 2, 3, or 4) conservative substitutions in the amino acid sequence of a polypeptide such as FSTL1 or an antibody.
  • An amino acid sequence having as used herein, “conservative substitution” means substitution of one or more amino acid residues with another chemically similar amino acid residue so as not to substantially alter the function of the protein. For example, when a certain hydrophobic residue is substituted by another hydrophobic residue, a certain polar residue is substituted by another polar residue having the same charge, and the like. Functionally similar amino acids that can make such substitutions are known in the art for each amino acid.
  • non-polar (hydrophobic) amino acids such as alanine, valine, isoleucine, leucine, proline, tryptophan, phenylalanine, and methionine.
  • polar (neutral) amino acids include glycine, serine, threonine, tyrosine, glutamine, asparagine, and cysteine.
  • positively charged (basic) amino acids include arginine, histidine, and lysine.
  • negatively charged (acidic) amino acids include aspartic acid and glutamic acid.
  • the term “inhibitor” refers to a substance or factor that inhibits the biological action of a target entity (eg, receptor or cell).
  • the inhibitor of FSTL1 of the present invention is a factor that can temporarily or permanently reduce or eliminate the function of a target FSTL1 or a cell expressing FSTL1.
  • factors include, but are not limited to, antibodies, antigen-binding fragments thereof, derivatives thereof, functional equivalents, nucleic acids such as RNAi factors such as antisense and siRNA, and the like.
  • agonist refers to a substance that expresses or enhances the biological action of a target entity (for example, a receptor).
  • a target entity for example, a receptor
  • agonists also called ligands
  • synthesized ones and modified ones can be mentioned.
  • antagonist refers to a substance that suppresses or inhibits the expression of a biological action of a target entity (for example, a receptor).
  • a target entity for example, a receptor
  • synthetic antagonists and modified ones can be mentioned.
  • those that inhibit or inhibit competitively with agonists (or ligands) there are those that inhibit or inhibit non-competitively. It can also be obtained by modifying the agonist.
  • An antagonist can be included in the concept of an inhibitor (inhibitor) or an inhibitory factor because it suppresses or inhibits a physiological phenomenon. Accordingly, herein, an antagonist is used interchangeably with “suppressor”.
  • antibody broadly refers to polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, multispecific antibodies, chimeric antibodies, and anti-idiotype antibodies, and fragments thereof such as Fv fragments, Fab ′ fragments, F (ab ′) 2 and Fab fragments, and other recombinantly produced conjugates or functional equivalents (eg, chimeric antibodies, humanized antibodies, multifunctional antibodies, bispecific or oligospecific antibodies, single chains Antibody, scFV, diabody, sc (Fv) 2 (singlechain (Fv) 2), scFv-Fc).
  • antibodies may be covalently linked or recombinantly fused to enzymes such as alkaline phosphatase, horseradish peroxidase, alpha galactosidase, and the like.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the present invention may be bound to the FSTL1 protein, and its origin, type, shape, etc. are not limited. Specifically, known antibodies such as non-human animal antibodies (eg, mouse antibodies, rat antibodies, camel antibodies), human antibodies, chimeric antibodies, and humanized antibodies can be used. In the present invention, monoclonal or polyclonal antibodies can be used as antibodies, but monoclonal antibodies are preferred.
  • the binding of the antibody to the FSTL1 protein is preferably specific binding.
  • the antibody includes an antibody modified product or an antibody unmodified product. In the modified antibody, an antibody and various molecules such as polyethylene glycol may be bound.
  • the modified antibody can be obtained by chemically modifying the antibody using a known technique.
  • the “anti-FSTL1 antibody” includes an antibody having binding ability to FSTL1.
  • the method for producing this anti-FSTL1 antibody is not particularly limited, and for example, it may be produced by immunizing mammals or birds with FSTL1.
  • “functional equivalent” of “an antibody against FSTL1 (anti-FSTL1 antibody) or a fragment thereof” is, for example, in the case of an antibody, an antibody itself having a binding activity of FSTL1, and an inhibitory activity if necessary, and a fragment thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody according to one embodiment of the present invention is preferably an anti-FSTL1 antibody that specifically binds to a specific epitope of FSTL1 from the viewpoint of particularly strongly suppressing the growth of malignant tumors.
  • the anti-FSTL1 antibody according to one embodiment of the present invention may be a monoclonal antibody.
  • a monoclonal antibody can be made to act on FSTL1 more efficiently than a polyclonal antibody. From the viewpoint of efficiently producing anti-FSTL1 monoclonal antibodies, it is preferable to immunize FSTL1 to chickens.
  • the antibody class of the anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, IgM, IgD, IgG, IgA, IgE, or IgY.
  • the anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention may be an antibody fragment having an antigen binding activity (hereinafter also referred to as “antigen-binding fragment”).
  • antigen-binding fragment an antibody fragment having an antigen binding activity
  • there are effects such as an increase in stability or antibody production efficiency.
  • the anti-FSTL1 antibody according to one embodiment of the present invention may be a fusion protein.
  • This fusion protein may be a polypeptide or oligopeptide bound to the N or C terminus of an anti-FSTL1 antibody.
  • the oligopeptide may be a His tag.
  • the fusion protein may be a fusion of a mouse, human, or chicken antibody partial sequence. Such fusion proteins are also included in one form of the anti-FSTL1 antibody according to this embodiment.
  • the anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention may be, for example, an antibody obtained through a step of immunizing a living organism with purified FSTL1, FSTL1-expressing cells, or a FSTL1-containing lipid membrane. From the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on FSTL1-positive malignant tumors, FSTL1-expressing cells are preferably used for immunization.
  • the anti-FSTL1 antibody may be an antibody having a CDR set of antibodies obtained through a step of immunizing an organism with purified FSTL1, FSTL1-expressing cell vesicles, or a FSTL1-containing lipid membrane. From the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on FSTL1-positive malignant tumors, FSTL1-expressing cells are preferably used for immunization.
  • a CDR set is a set of heavy chain CDR1, 2, and 3 and light chain CDR1, 2, and 3.
  • FSTL1-expressing cells may be obtained, for example, by expressing a FSTL1 after introducing a polynucleotide encoding FSTL1 into the cells.
  • FSTL1 includes an FSTL1 fragment.
  • the “FSTL1-containing lipid membrane” may be obtained, for example, by mixing FSTL1 and a lipid bilayer membrane.
  • FSTL1 includes an FSTL1 fragment.
  • the anti-FSTL1 antibody according to one embodiment of the present invention is an antibody obtained through a step of immunizing a chicken with an antigen, or an antibody having a CDR set of the antibody, from the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on FSTL1-positive malignant tumors. preferable.
  • the anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention may have any binding force as long as the object is achieved.
  • the KD value (kd / ka) is at least 1.0 ⁇ 10 ⁇ 6 (M) or less, 2.0 ⁇ 10 ⁇ 6 (M) or less, 5.0 ⁇ 10 ⁇ 6 (M) or less, and 1.0 ⁇ 10 ⁇ 7 or less can be mentioned, but it is not limited thereto.
  • the KD value (kd / ka) may be 1.0 ⁇ 10 ⁇ 7 (M) or less, and is 1.0 ⁇ 10 ⁇ 9 (M) or 1.0 ⁇ 10 ⁇ 10 (M) or less. obtain.
  • the anti-FSTL1 antibody according to one embodiment of the present invention may have ADCC or CDC activity.
  • the anti-FSTL1 antibody may be an antibody that binds to a wild type or mutant type of FSTL1. Variants include those resulting from differences in DNA sequences between individuals.
  • the amino acid sequence of wild-type or mutant FSTL1 is preferably 80% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more, particularly preferably 98% or more with respect to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4. % Homology.
  • the “antibody” includes a molecule or a population thereof that can specifically bind to a specific epitope on an antigen.
  • the antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • the antibody can exist in various forms, for example, full-length antibody (an antibody having Fab region and Fc region), Fv antibody, Fab antibody, F (ab ') 2 antibody, Fab' antibody, diabody, single Chain antibody (eg, scFv), dsFv, multivalent specific antibody (eg, bivalent specific antibody), peptide or polypeptide having antigen binding property, chimeric antibody (eg, mouse-human chimeric antibody, chicken-human chimeric antibody, etc.) ), One or more forms selected from the group consisting of mouse antibodies, chicken antibodies, humanized antibodies, human antibodies, or their equivalents (or equivalents).
  • the antibody includes an antibody modified product or an antibody unmodified product.
  • an antibody and various molecules such as polyethylene glycol may be bound.
  • the modified antibody can be obtained by chemically modifying the antibody using a known technique.
  • such antibodies may be covalently linked or recombinantly fused to enzymes such as alkaline phosphatase, horseradish peroxidase, alpha galactosidase, and the like.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the present invention may be bound to the FSTL1 protein, and its origin, type, shape, etc. are not limited.
  • known antibodies such as non-human animal antibodies (eg, mouse antibodies, rat antibodies, camel antibodies), human antibodies, chimeric antibodies, and humanized antibodies can be used.
  • monoclonal or polyclonal antibodies can be used as antibodies, but monoclonal antibodies are preferred.
  • the binding of the antibody to the FSTL1 protein is preferably specific binding.
  • the antibody includes an antibody modified product or an antibody unmodified product.
  • an antibody and various molecules such as polyethylene glycol may be bound.
  • the modified antibody can be obtained by chemically modifying the antibody using a known technique.
  • a “polyclonal antibody” refers to, for example, mammals (eg, rats, mice, rabbits, cows, monkeys, etc.), birds, etc. in order to induce the production of polyclonal antibodies specific to the antigen. It can be generated by administering an immunogen containing the antigen of interest. Administration of the immunogen may involve infusion of one or more immunizing agents and, if desired, an adjuvant.
  • An adjuvant may be used to increase the immune response and may include Freund's adjuvant (complete or incomplete), mineral gel (such as aluminum hydroxide), or a surfactant (such as lysolecithin). .
  • Immunization protocols are known in the art and may be performed by any method that elicits an immune response, depending on the host organism chosen (Protein Experiment Handbook, Yodosha (2003): 86-91). .).
  • a “monoclonal antibody” is an antibody in which the individual antibodies constituting the population substantially correspond to a single epitope, except for antibodies having mutations that can naturally occur in small amounts. Including the case of Alternatively, the individual antibodies that make up the population may be antibodies that are substantially identical except for antibodies that have mutations that can occur naturally in small amounts. Monoclonal antibodies are highly specific and differ from normal polyclonal antibodies, which typically include different antibodies corresponding to different epitopes. In addition to its specificity, monoclonal antibodies are useful in that they can be synthesized from hybridoma cultures that are not contaminated by other immunoglobulins.
  • the form “monoclonal” may be characterized as being derived from a substantially homogeneous population of antibodies, but does not mean that the antibodies must be produced in any particular way.
  • the monoclonal antibody may be prepared by a method similar to the hybridoma method described in “Kohler G, Milstein C., Nature. 1975 Aug7; 256 (5517): 495-497.”.
  • monoclonal antibodies may be made by methods similar to recombinant methods such as those described in US Pat. No. 4,816,567.
  • the monoclonal antibody may be "Clackson et al., Nature.
  • any technique known in the art can be used.
  • the construction of a typical mass production system of antibodies and the production of antibodies can be exemplified as follows. That is, CHO cells are transfected with an H chain antibody expression vector and an L chain antibody expression vector, cultured using selection reagents G418 and Zeocin, and cloned by limiting dilution. After cloning, clones that stably express the antibody are selected by ELISA. The selected CHO cells are expanded and cultured, and the culture supernatant containing the antibody is collected. The antibody can be purified from the collected culture supernatant by Protein A or Protein G purification.
  • Fv antibody is an antibody containing an antigen recognition site. This region contains a dimer of one heavy chain variable domain and one light chain variable domain by non-covalent bonds. In this configuration, the three CDRs of each variable domain can interact to form an antigen binding site on the surface of the VH-VL dimer.
  • the “Fab antibody” refers to, for example, about half of the N-terminal side of the H chain and the entire L chain of fragments obtained by treating an antibody containing the Fab region and the Fc region with the proteolytic enzyme papain. Is an antibody bound through some disulfide bonds.
  • Fab can be obtained, for example, by treating an anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention containing a Fab region and an Fc region with the proteolytic enzyme papain.
  • the ⁇ F (ab ′) 2 antibody '' refers to, for example, 2 sites corresponding to Fab among fragments obtained by treating an antibody containing a Fab region and an Fc region with proteolytic enzyme pepsin.
  • One antibody. F (ab ') 2 can be obtained, for example, by treating an anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention containing a Fab region and an Fc region with a proteolytic enzyme pepsin.
  • it can be prepared by linking the following Fab 'with a thioether bond or a disulfide bond.
  • the “Fab ′ antibody” is, for example, an antibody obtained by cleaving a disulfide bond in the hinge region of F (ab ′) 2.
  • F (ab ') 2 can be obtained by treating with a reducing agent dithiothreitol.
  • the “scFv antibody” is an antibody in which VH and VL are linked via an appropriate peptide linker.
  • the scFv antibody obtains cDNA encoding VH and VL of the anti-FSTL1 antibody according to the embodiment of the present invention, constructs a polynucleotide encoding VH-peptide linker-VL, and incorporates the polynucleotide into a vector Can be produced using cells for expression.
  • “diabody” is an antibody having a bivalent antigen binding activity.
  • the bivalent antigen binding activity can be the same, or one can be a different antigen binding activity.
  • a diabody is constructed by constructing a polynucleotide encoding scFv so that the length of the amino acid sequence of the peptide linker is 8 residues or less, incorporating the obtained polynucleotide into a vector, and using cells for expression. it can.
  • “dsFv” is an antibody in which a polypeptide in which a cysteine residue is introduced into VH and VL is bound via a disulfide bond between the cysteine residues.
  • the position to be introduced into the cysteine residue should be selected based on the three-dimensional structure prediction of the antibody according to the method shown by Reiter et al. (Reiter et al., Protein Eng. 1994 May; 7 (5): 697-704.) Can do.
  • an “antigen-binding peptide or polypeptide” is an antibody comprising antibody VH, VL, or CDR1, 2, or 3 thereof. Peptides containing multiple CDRs can be linked directly or via a suitable peptide linker.
  • Fv antibody Fab antibody, F (ab ′) 2 antibody, Fab ′ antibody, scFv antibody, diabody, dsFv antibody, peptide or polypeptide having antigen binding properties (hereinafter also referred to as “Fv antibody etc.”)
  • Production method is not particularly limited.
  • DNA encoding a region such as an Fv antibody in the anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention can be incorporated into an expression vector and produced using an expression cell. Alternatively, it may be produced by a chemical synthesis method such as Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) or tBOC method (t-butyloxycarbonyl method).
  • the antigen-binding fragment according to an embodiment of the present invention may be one or more of the above Fv antibodies.
  • a “chimeric antibody” is, for example, a variable region of an antibody between heterologous organisms and a constant region of the antibody, and can be constructed by a gene recombination technique.
  • a mouse-human chimeric antibody can be prepared by the method described in, for example, “Roguska et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Feb 1:91 (3): 969-973”.
  • Basic methods for making mouse-human chimeric antibodies include, for example, encoding the mouse leader and variable region sequences present in the cloned cDNA, and the human antibody constant regions already present in mammalian cell expression vectors.
  • the mouse leader sequence and variable region sequence present in the cloned cDNA may be linked to a sequence encoding a human antibody constant region and then linked to a mammalian cell expression vector.
  • the fragment of the human antibody constant region can be of any human antibody H chain constant region and human antibody L chain constant region, for example, for human H chain, C ⁇ 1, C ⁇ 2, C ⁇ 3 or C ⁇ 4, For the L chain, C ⁇ or C ⁇ can be mentioned, respectively.
  • a “humanized antibody” has, for example, one or more CDRs derived from a non-human species, a framework region (FR) derived from a human immunoglobulin, and a constant region derived from a human immunoglobulin. And an antibody that binds to the desired antigen.
  • Antibody humanization can be performed using various techniques known in the art (Almagro et al., Front Biosci. 2008 Jan 1:13: 1619-1633.). For example, CDR grafting (Ozaki et al., Blood. 1999 Jun 1:93 (11): 3922-3930), Re-surfacing (Roguska et al., Proc Natl Acad Sci US A.
  • FR shuffle (Damschroder et al., Mol Immunol. 2007 Apr; 44 (11): 3049-3060. Epub 2007 Jan 22.).
  • amino acid residues in the human FR region may be substituted with corresponding residues from the CDR donor antibody. This FR substitution can be performed by methods well known in the art (Riechmann et al., Nature. 1988 Mar 24; 332 (6162): 323-327.).
  • FR residues important for antigen binding may be identified by modeling the interaction of CDR and FR residues.
  • an abnormal FR residue at a particular position may be identified by sequence comparison.
  • humanized antibodies may be constructed based on Matsuda et al., Molecular Immunology 43 (2006) 634-642.
  • the H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175, respectively) and the light chains FR1, FR2, FR3 and FR4 ( Humanized antibodies having SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191), respectively, can be used, but are not limited thereto.
  • the full length sequences of these humanized antibodies are shown in this humanized antibody, and the full length sequence of the H (1) heavy chain is represented by SEQ ID NOs: 192 and 193 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively) of IgG1 type.
  • IgG1 type H (2) heavy chain is SEQ ID NOs: 194 and 195 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively)
  • IgG4 type is shown in SEQ ID NOs: 200 and 201 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively), and IgG1 type is H (3) heavy chain full-length sequences are SEQ ID NOs: 196 and 197 (respectively nucleic acid and amino acid, respectively)
  • IgG4 type is represented by SEQ ID NOs: 202 and 203 (representing the nucleic acid and amino acid sequences, respectively), and the full-length L (1) light chain Are shown in SEQ ID NOs: 204 and 205 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively), and the full length sequence of the L (2) light chain is represented by SEQ ID NOs: 246 and 247 (representing nucleic acid and
  • H (2) -L (1) is H (3) -L (1) (the framework of H (3) (SEQ ID NO: 177, 179, 181 and 183)) and H (1) -L (1) (the framework of H (1) has been observed to be one order of magnitude higher than (SEQ ID NOs: 161, 163, 165 and 167, respectively)).
  • a “human antibody” is derived from a gene encoding human immunoglobulin, for example, the variable region and the constant region of the heavy chain and the region including the variable region and the constant region of the light chain that constitute the antibody.
  • the main production methods include a transgenic mouse method for producing human antibodies, a phage display method, and the like.
  • human antibodies having various antigen-binding abilities can be produced instead of mouse antibodies.
  • a human monoclonal antibody can be obtained by a conventional hybridoma method.
  • phage display method a foreign gene is fused to the N-terminal side of the coat protein (g3p, g10p, etc.) of filamentous phages such as M13 and T7, which are typically E. coli viruses. It is a system for expressing as a protein. For example, it can be produced by the method described in “Vaughan et al., Nat Biotechnol. 1996 Mar; 14 (3): 309-314.”
  • the antibody may be any antibody by CDR-grafting (Ozaki et al., Blood. 1999 Jun 1:93 (11): 3922-3930.) Or the heavy chain CDR or light chain of the anti-FSTL1 antibody according to the embodiment of the present invention.
  • the chain CDR may be prepared by grafting.
  • the encoded DNA can be obtained by ligation to a vector according to a method known in the art, and then expression using a known cell.
  • a method known in the art for example, a method of randomly mutating the amino acid residue of the antibody and screening for a highly reactive one, or phage
  • the region excluding the heavy chain CDR or the light chain CDR may be optimized using a display method or the like.
  • FR shuffle (Damschroder et al., Mol Immunol. 2007 Apr; 44 (11): 3049-3060.
  • the FR region may be optimized using JP-A-2006-241026 or Footeet al., J Mol Biol.1992 Mar 20; 224 (2): 487-499.
  • the “heavy chain” is typically the main component of a full-length antibody.
  • the heavy chain is usually linked to the light chain by disulfide bonds and non-covalent bonds.
  • the domain on the N-terminal side of the heavy chain has a region called the variable region (VH) where the amino acid sequence is not constant even with antibodies of the same type and the same class.
  • VH variable region
  • VH has high specificity and affinity for antigen It is known to contribute.
  • VH-only molecule was produced in “Reiter et al., J Mol Biol. 1999 Jul 16; 290 (3): 685-98.”, It was specifically bound to the antigen with high affinity. Is described.
  • camel antibodies only heavy chain antibodies without light chains exist. Are listed.
  • CDR complementarity determining region
  • Fv including heavy chain variable region variable region (VH) and light chain variable region (VL)
  • CDR1, CDR2, and CDR3 consisting of about 5 to 30 amino acid residues.
  • CDR3 is known to have the highest contribution in binding of an antibody to an antigen.
  • the definition of Kabat is adopted as a preferred example, but is not necessarily limited thereto. In some cases, it may be determined in consideration of both the Kabat definition and the Chothia definition.For example, the overlapping part of the CDR according to each definition or the part including both the CDRs according to each definition It can also be a CDR.
  • antigen refers to any substrate that can be specifically bound by an antibody molecule.
  • immunogen refers to an antigen capable of initiating lymphocyte activation that produces an antigen-specific immune response.
  • epitope or “antigenic determinant” refers to a site in an antigen molecule to which an antibody or lymphocyte receptor binds. Methods for determining epitopes are well known in the art, and such epitopes can be determined by those skilled in the art using such well known techniques once the primary sequence of the nucleic acid or amino acid is provided. It will be understood that the antibodies of the present invention can be used in the same manner even if they have the same epitope, even antibodies having other sequences.
  • the antibody used in the present invention may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • “means” refers to any tool that can achieve a certain purpose (for example, detection, diagnosis, treatment).
  • selective recognition means A means by which one object can be recognized differently from another.
  • a “malignant tumor” includes, for example, a tumor that occurs when a normal cell is mutated. Malignant tumors can arise from any organ or tissue throughout the body.
  • cancer and “cancer” are used interchangeably unless otherwise specified.
  • This malignant tumor is, for example, lung cancer, esophageal cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, adrenal cancer, biliary tract cancer, breast cancer, colon cancer, small intestine cancer, ovarian cancer, uterine cancer, bladder cancer, prostate cancer, urine Duct cancer, renal pelvis cancer, ureteral cancer, penile cancer, testicular cancer, brain tumor, cancer of central nervous system, cancer of peripheral nervous system, head and neck cancer, glioma, glioblastoma multiforme, skin cancer, melanoma, thyroid cancer Including one or more selected from the group consisting of salivary gland cancer, malignant lymphoma, carcinoma, sarcoma, leukemia and hematological malignancy.
  • ovarian cancer includes, for example, ovarian serous adenocarcinoma or ovarian clear cell line carcinoma.
  • Uterine cancer includes, for example, endometrial cancer or cervical cancer.
  • Head and neck cancer includes, for example, oral cancer, pharyngeal cancer, laryngeal cancer, nasal cavity cancer, sinus cancer, salivary gland cancer, or thyroid cancer.
  • Lung cancer includes, for example, non-small cell lung cancer or small cell lung cancer.
  • the malignant tumor may be FSTL1-positive.
  • metalastasis refers to the process by which a cancerous lesion develops similar to a new location as cancer spreads or moves from the primary site of the body to other areas.
  • a “metastatic” or “metastatic” cell is a cell that loses adhesive contact with neighboring cells and migrates from the primary site of disease through the bloodstream or lymph to invade neighboring body structures.
  • metastasis herein is preferably, but not limited to, the cancer described herein, more preferably a solid cancer, more preferably breast, heart, lung, small intestine, large intestine, spleen, kidney, Includes metastasis of cancer selected from the group consisting of bladder, head and neck, ovary, prostate, brain, pancreas, skin, bone, thymus, uterus, testis, cervix and / or liver cancer.
  • the metastasis according to the present invention is more preferably breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, colorectal cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, ovarian cancer, prostate cancer, brain cancer, pancreatic cancer, skin Including bone metastasis of cancer selected from the group consisting of cancer, thymic cancer, uterine cancer, testicular cancer, cervical cancer and liver cancer.
  • bone metastasis means metastasis of cancer to bone, and includes bone metastasis of any origin.
  • the term bone metastases is preferred, but not limited to, for the cancers described herein, more preferably for solid cancers, more preferably breast, heart, lung, small intestine, large intestine, spleen, kidney, bladder, head and neck.
  • Including bone metastasis of cancer selected from the group consisting of cancer of the head, ovary, prostate, brain, pancreas, skin, bone, thymus, uterus, testis, cervix and / or liver.
  • the term bone metastases preferably also includes bone lesions, preferably osteolytic and / or osteogenic bone lesions, more preferably osteolytic bone lesions, even more preferably myeloma, malignant. It includes bone lesions of myeloma and / or multiple myeloma, in particular osteolytic bone lesions of myeloma, malignant myeloma and / or multiple myeloma.
  • the term bone metastases is also preferably a bone lesion of Waldenstrom disease, preferably an osteolytic and / or osteogenic bone lesion of Waldenstrom disease, more preferably Waldenstrom disease. Also includes osteolytic bone lesions of the disease.
  • the bone metastasis according to the present invention is more preferably breast cancer, lung cancer, colon cancer, colorectal cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, ovarian cancer, prostate cancer, brain cancer, pancreatic cancer, skin cancer, thymic cancer, Includes bone metastasis of cancer selected from the group consisting of uterine cancer, testicular cancer, cervical cancer and liver cancer.
  • mesenchymal stem cell or its abbreviation “MSC” is a term that can be used interchangeably, and has a self-renewal ability, such as osteoblasts, chondrocytes, and adipocytes.
  • MSC mesenchymal stem cell
  • a self-renewal ability such as osteoblasts, chondrocytes, and adipocytes.
  • pluripotent stem cells with the ability to differentiate into mesenchymal cells, typically proliferating in an undifferentiated state and differentiating into all or some of osteoblasts, chondroblasts and lipoblasts Broadly means a population of possible stem cells or their progenitor cells.
  • mesenchymal stem cells are present at a low frequency in bone marrow, peripheral blood, umbilical cord blood, adipose tissue, and the like.
  • Mesenchymal stem cells can be isolated or purified from these tissues by known methods, and the main molecular indicator is that CD45 expression is negative. “Isolation” or “purification” refers to the artificial placement in a state different from the naturally occurring state, for example, the operation of removing components other than the target component from the naturally occurring state. Means that For example, human mesenchymal stem cells can be isolated from bone marrow fluid by the Percoll gradient method (Hum. Cell, vol. 10, p. 45-50, 1997). Alternatively, human mesenchymal stem cells can be isolated by culture and passage of hematopoietic stem cells after bone marrow puncture (Journal of Autoimmunity, 30 (2008) 163-171).
  • activated MSCs activated by endogenous factors, and such MSCs are also referred to herein as “activated mesenchymal stem cells” or “activated MSCs”. That is, cells that originally have immunosuppressive activity (for example, regulatory T cells, tolerant dendritic cells, regulatory dendritic cells, bone marrow-derived immunosuppressive cells) proliferate and have strong overall immunosuppressive activity.
  • immunosuppressive activity for example, regulatory T cells, tolerant dendritic cells, regulatory dendritic cells, bone marrow-derived immunosuppressive cells
  • FSTL1 is thought to control these directly and / or indirectly through proliferation of activated MSCs (Immunology and Cell Biology 91: 12-18, 2013).
  • the antibody FSTL1 antibody and the like of the present invention can inhibit the induction or enhancement of immunosuppression of this MSC and immunodeficiency, thereby causing cancer deterioration. It can be said that immunosuppression can be released, and therefore a remarkable cancer prevention or treatment effect can be achieved. Further, in the present invention, it is possible to inhibit the upstream of the induction or enhancement of MSC that induces immunocompromised cells such as these immunosuppressive cells and / or immunodeficient cells. Alternatively, it is considered that the entire immune failure mechanism such as an immunodeficiency mechanism can be canceled all at once, and a more effective treatment is considered possible.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • FSTL1 increases immunosuppressive MSC itself and / or enhances the suppressive activity of other cells.
  • immunosuppression also referred to as “immunosuppression” is also referred to as immunosuppressive, immunoregulatory, immunoregulatory, immunomodulation, immunoregulatory, immunomodification, immunomodification
  • the term “enhancement” in this field is used interchangeably in the art to increase the ability of immunosuppressive cells and increase the number of immunosuppressive cells (immunity of immunosuppressive cells). Including the enhancement of suppressive activity and / or the promotion of proliferation of immunosuppressive cells and / or the differentiation of non-immunosuppressive cells into immunosuppressive cells) and results As used herein, immunosuppression is enhanced.
  • the ability of immunosuppressive cells is enhanced and the number of immunosuppressive cells increases (enhancement of immunosuppressive activity of immunosuppressive cells and / or immunosuppressive cells). Is included) and / or differentiation of cells that are not immunosuppressive into immunosuppressive cells).
  • immunosuppressive cells As a form of induction of immunosuppressive cells of MSC cells, differentiation into immunosuppressive cells such as regulatory T cells is promoted, and immunosuppressive activity of immunosuppressive cells such as regulatory T cells. And proliferation of immunosuppressive cells such as regulatory T cells, and as a result, enhanced immunosuppressive properties are included.
  • immunosuppressive cell the term “immunosuppressive” is also referred to as immunoregulatory property, immunomodulatory property, and immunomodulatory property, and these are used interchangeably in the art.
  • Is a cell having a function of suppressing immune ability and is typically a regulatory T cell, a regulatory dendritic cell, a tolerant dendritic cell, and a bone marrow-derived immunosuppressive cell. However, it is not limited to them.
  • MSCs mesenchymal stem cells
  • immunodeficiency refers to a state in which a normal immune mechanism has been impaired due to a deficiency or dysfunction of some or some of the cellular elements constituting the immune system.
  • the pathological conditions resulting from this are collectively referred to as immunodeficiency diseases.
  • Immunodeficiency is broadly divided into primary and secondary, and the former is mainly caused by congenital genetic abnormalities. The latter is caused by physicochemical factors such as drugs and X-rays, infectious diseases such as viruses, and nutrition. This is due to external environmental factors such as conditions.
  • the site of damage is considered to be various such as dysfunction of the B cell region such as antibody production, abnormalities of the T cell region related to cellular immunity, impairment of phagocytic cell functions such as complement system and phagocytic function. “Depleted T cells” are the main indicator of immune deficiency. Anti-PD-1 antibodies and the like have also been developed as antibodies that can inhibit this “exhaustion / failure”.
  • immune failure refers to a concept that combines immunosuppression and immunodeficiency.
  • cancer cells with low immunogenicity that are more advantageous for survival are selected and proliferated (equilibrium phase (a state in which they do not disappear or grow due to the interaction between immune cells and cancer cells) ) To the escape phase).
  • Equilibrium phase a state in which they do not disappear or grow due to the interaction between immune cells and cancer cells
  • escape phase To the escape phase.
  • T cells that should kill cancer cells play a paradoxical role.
  • exhaust refers to various co-suppressive molecules (described later) such as PD-1, CTLA4, and TIM3 that are induced on long-term exposure to antigen, resulting in functional T cells. To fall into a state of failure. It is thought that T cell unresponsiveness is induced during chronic infection and cancer. Such T cells are referred to herein as “exhausted T cells”.
  • Anti-PD-1 antibodies and the like have also been developed as antibodies that can inhibit this “exhaustion” state and “immune deficiency”. Accordingly, the anti-FSTL1 antibody used in the present invention can inhibit exhausted T cells (the proliferation or development thereof) as shown in the Examples. "Is expected to be able to inhibit” and is therefore understood to be able to inhibit "immune failure”.
  • immune-related cells refers to cells of any immune system that undergo immunosuppression, dysfunction, etc.
  • acquisition and / or enhancement of immunosuppressive activity of immune-related cells refers to the present specification.
  • proliferation of regulatory T cells proliferation of regulatory dendritic cells, differentiation into regulatory dendritic cells, proliferation of tolerant dendritic cells, tolerant dendritic cells It is understood to include differentiation into bone marrow, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells and differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, increase in exhausted T cells, and the like.
  • the “subject (person)” refers to a subject to be diagnosed or detected or treated according to the present invention (for example, an organism such as a human or a cell, blood, serum, etc. removed from the organism). .
  • sample refers to any substance obtained from a subject or the like, and includes, for example, serum. Those skilled in the art can appropriately select a preferable sample based on the description of the present specification.
  • drug drug
  • drug may also be a substance or other element (eg energy such as light, radioactivity, heat, electricity).
  • Such substances include, for example, proteins, polypeptides, oligopeptides, peptides, polynucleotides, oligonucleotides, nucleotides, nucleic acids (eg, DNA such as cDNA, genomic DNA, RNA such as mRNA), poly Saccharides, oligosaccharides, lipids, small organic molecules (for example, hormones, ligands, signaling substances, small organic molecules, molecules synthesized by combinatorial chemistry, small molecules that can be used as pharmaceuticals (for example, small molecule ligands, etc.)) , These complex molecules are included, but not limited thereto.
  • a factor specific for a polynucleotide is a polynucleotide having complementarity with a certain sequence homology to the sequence of the polynucleotide (eg, 70% or more sequence identity), Examples include, but are not limited to, a polypeptide such as a transcription factor that binds to the promoter region.
  • Factors specific for a polypeptide typically include an antibody specifically directed against the polypeptide or a derivative or analog thereof (eg, a single chain antibody), and the polypeptide is a receptor.
  • specific ligands or receptors in the case of ligands, and substrates thereof when the polypeptide is an enzyme include, but are not limited to.
  • diagnosis identifies various parameters associated with a disease, disorder, condition (eg, malignant tumor), etc. in a subject, and determines the current state or future of such a disease, disorder, or condition. That means.
  • conditions within the body can be examined, and such information can be used to formulate a disease, disorder, condition, treatment to be administered or prevention in a subject.
  • various parameters such as methods can be selected.
  • diagnosis in a narrow sense means diagnosis of the current state, but in a broad sense includes “early diagnosis”, “predictive diagnosis”, “preliminary diagnosis”, and the like.
  • the diagnostic method of the present invention is industrially useful because, in principle, the diagnostic method of the present invention can be used from the body and can be performed away from the hands of medical personnel such as doctors.
  • diagnosis, prior diagnosis or diagnosis may be referred to as “support”.
  • prognosis predicts the likelihood of death or progression due to cancer, such as recurrence of a neoplastic disease, such as a malignant tumor (eg, ovarian cancer), metastatic spread, and drug resistance. Means. Therefore, in the present specification, “good prognosis” means a state in which no recurrence cancer originating from the cancer is observed over a certain period (for example, 4 years) after cancer tissue resection. "Poor prognosis” or “poor prognosis” refers to a condition in which recurrent cancer originating from the cancer is observed over a certain period (for example, 4 years) after resection of the cancer tissue.
  • Prognostic factors are variables related to the natural course of malignant tumors, which affect the recurrence rate and outcome of patients once they have developed a malignant tumor.
  • Clinical indicators associated with worsening prognosis include, for example, lymph node metastasis and high-grade tumors.
  • Prognostic factors are often used to classify patients into subgroups with different underlying risk of recurrence.
  • the expression of FSTL1 of the present invention can be used as a prognostic factor.
  • the term “prediction” means the likelihood that a patient will have a specific clinical outcome, whether good or bad, after removal of the primary tumor. Therefore, FSTL1 of the present invention can be used as a poor prognostic marker.
  • the prediction method of the present invention can be used clinically to determine a therapy by selecting the optimal therapy for a particular patient.
  • the prediction method of the present invention is a useful tool in predicting if a patient may respond well to a treatment plan, such as a surgical intervention.
  • the prediction can include prognostic factors.
  • detection agent or “test agent (agent)” refers to any agent that can detect or inspect a target object in a broad sense.
  • diagnostic agent refers to any agent that can diagnose a target state (for example, a disease such as a malignant tumor).
  • treatment refers to prevention of worsening of a disease or disorder when the disease or disorder (eg, malignant tumor) becomes such a condition, Preferably, it refers to reduction, more preferably elimination, and includes the ability to exert a symptom improving effect or a preventive effect on one or more symptoms associated with a patient's disease or disease. Diagnosing in advance and performing appropriate treatment is referred to as “companion treatment”, and the diagnostic agent therefor is sometimes referred to as “companion diagnostic agent”.
  • therapeutic agent refers to any agent that can treat a target condition (for example, a disease such as a malignant tumor) in a broad sense.
  • the “therapeutic agent” may be a pharmaceutical composition comprising an active ingredient and one or more pharmacologically acceptable carriers.
  • the pharmaceutical composition can be produced by any method known in the technical field of pharmaceutics, for example, by mixing the active ingredient and the carrier.
  • the form of use of the therapeutic agent is not limited as long as it is a substance used for treatment, and it may be an active ingredient alone or a mixture of an active ingredient and an arbitrary ingredient.
  • the shape of the carrier is not particularly limited, and may be, for example, a solid or a liquid (for example, a buffer solution).
  • the therapeutic agent for malignant tumor includes a drug (prophylactic agent) used for preventing malignant tumor, or a growth inhibitor of malignant tumor cells.
  • prevention means that a certain disease or disorder (for example, malignant tumor) is prevented from becoming such a state before it becomes such a state. Diagnosis can be performed using the drug of the present invention, and malignant tumors, for example, can be prevented using the drug of the present invention as necessary, or countermeasures for prevention can be taken.
  • a certain disease or disorder for example, malignant tumor
  • prophylactic agent refers to any agent that can prevent a target condition (for example, a disease such as a malignant tumor) in a broad sense.
  • interaction refers to two substances. Force (for example, intermolecular force (van der Waals force), hydrogen bond, hydrophobic interaction between one substance and the other substance. Etc.). Usually, two interacting substances are in an associated or bound state. The detection, inspection and diagnosis of the present invention can be realized by utilizing such interaction.
  • bond means a physical or chemical interaction between two substances or a combination thereof. Bonds include ionic bonds, non-ionic bonds, hydrogen bonds, van der Waals bonds, hydrophobic interactions, and the like.
  • a physical interaction (binding) can be direct or indirect, where indirect is through or due to the effect of another protein or compound. Direct binding refers to an interaction that does not occur through or due to the effects of another protein or compound and does not involve other substantial chemical intermediates.
  • a “factor” (or drug, detection agent, etc.) that interacts (or binds) “specifically” to a biological agent such as a polynucleotide or a polypeptide is defined as that
  • the affinity for a biological agent such as a nucleotide or polypeptide thereof is typically equal or greater than the affinity for other unrelated (especially less than 30% identity) polynucleotides or polypeptides. Includes those that are high or preferably significantly (eg, statistically significant). Such affinity can be measured, for example, by hybridization assays, binding assays, and the like.
  • a first substance or factor interacts (or binds) “specifically” to a second substance or factor means that the first substance or factor has a relationship to the second substance or factor. Interact (or bind) with a higher affinity than a substance or factor other than the second substance or factor (especially other substances or factors present in the sample containing the second substance or factor) That means.
  • Specific interactions (or bindings) for substances or factors include, for example, hybridization in nucleic acids, antigen-antibody reactions in proteins, enzyme-substrate reactions, etc., nucleic acid and protein reactions, protein-lipid interactions, nucleic acid-lipids Examples include, but are not limited to, interactions.
  • the first substance or factor “specifically interacts” with the second substance or factor means that the first substance or factor has the second substance Or having at least a part of complementarity to the factor.
  • both substances or factors are proteins
  • the fact that the first substance or factor interacts (or binds) “specifically” to the second substance or factor is, for example, by antigen-antibody reaction Examples include, but are not limited to, interaction by receptor-ligand reaction, enzyme-substrate interaction, and the like.
  • the first substance or factor interacts (or binds) “specifically” to the second substance or factor by means of an antibody and its antigen Interaction (or binding) between is included.
  • an object in a sample can be detected or quantified.
  • detection or “quantification” of polynucleotide or polypeptide expression includes mRNA measurement and immunoassay methods, including, for example, binding or interaction with a detection agent, test agent or diagnostic agent. It can be achieved using any suitable method. Examples of molecular biological measurement methods include Northern blotting, dot blotting, and PCR.
  • an immunological measurement method for example, an ELISA method using a microtiter plate, an RIA method, a fluorescent antibody method, a luminescence immunoassay (LIA), an immunoprecipitation method (IP), an immunodiffusion method (SRID), an immune method
  • LIA luminescence immunoassay
  • IP immunoprecipitation method
  • SRID immunodiffusion method
  • an immune method examples are turbidimetry (TIA), Western blotting, immunohistochemical staining, and the like.
  • the quantification method include ELISA method and RIA method. It can also be performed by a gene analysis method using an array (eg, DNA array, protein array).
  • the DNA array has been extensively outlined in (edited by Shujunsha, separate volume of cell engineering "DNA microarray and the latest PCR method”). For protein arrays, see Nat Genet.
  • gene expression analysis methods include, but are not limited to, RT-PCR, RACE method, SSCP method, immunoprecipitation method, two-hybrid system, in vitro translation and the like.
  • RT-PCR RT-PCR
  • RACE method RACE method
  • SSCP method immunoprecipitation method
  • two-hybrid system in vitro translation and the like.
  • further analysis methods are described in, for example, Genome Analysis Experimental Method / Yusuke Nakamura Laboratory Manual, Editing / Yusuke Nakamura Yodosha (2002), etc., all of which are incorporated herein by reference. Is done.
  • expression level refers to the amount of polypeptide or mRNA that is expressed in a target cell, tissue, or the like. Such expression level is evaluated by any appropriate method including immunoassay methods such as ELISA, RIA, fluorescent antibody, Western blot, and immunohistochemical staining using the antibody of the present invention.
  • the expression level of the peptide at the mRNA level is mentioned.
  • “Change in expression level” means expression at the protein level or mRNA level of the polypeptide used in the present invention evaluated by any appropriate method including the above immunological measurement method or molecular biological measurement method. Means that the amount increases or decreases. By measuring the expression level of a certain marker, various detection or diagnosis based on the marker can be performed.
  • “reduction” or “suppression” or synonyms for activity, expression products (eg, proteins, transcripts (RNA, etc.)) or synonyms are reductions in the quantity, quality or effect of a particular activity, transcript or protein. Or activity to decrease. When “disappears” among the decreases, it means that the activity, the expression product, etc. are below the detection limit, and in particular, may be “disappeared”. As used herein, “disappearance” is encompassed by “decrease” or “suppression”.
  • “increase” or “activation” of an activity, expression product eg, protein, transcript (RNA, etc.) or a synonym thereof refers to a quantity, quality or effect of a particular activity, transcript or protein. An activity that increases or increases.
  • in vivo refers to the inside of a living body. In a particular context, “in vivo” refers to the location where a target substance is to be placed.
  • in vitro refers to a state in which a part of a living body is removed or released “outside the living body” (for example, in a test tube) for various research purposes. A term that contrasts with in vivo.
  • ex vivo refers to a series of actions ex vivo when a certain treatment is performed outside the body but is then intended to be returned to the body. Also in the present invention, an embodiment in which cells in the living body are treated with the drug of the present invention and returned to the patient can be envisaged.
  • the “kit” is a unit provided with a portion to be provided (eg, a test agent, a diagnostic agent, a therapeutic agent, an antibody, a label, instructions, etc.) usually divided into two or more compartments.
  • a portion to be provided eg, a test agent, a diagnostic agent, a therapeutic agent, an antibody, a label, instructions, etc.
  • This kit form is preferred when it is intended to provide a composition that should not be provided in admixture for stability or the like, but preferably used in admixture immediately before use.
  • Such kits preferably include instructions or instructions that describe how to use the provided parts (eg, test agents, diagnostic agents, therapeutic agents, or how the reagents should be processed).
  • the kit when the kit is used as a reagent kit, the kit usually contains instructions including usage of test agents, diagnostic agents, therapeutic agents, antibodies, etc. Is included.
  • the “instruction sheet” describes the method for using the present invention for a doctor or other user.
  • This instruction manual includes a word indicating that the detection method of the present invention, how to use a diagnostic agent, or administration of a medicine or the like is given.
  • the instructions may include a word indicating that the administration site is oral or esophageal administration (for example, by injection).
  • This instruction is prepared in accordance with the format prescribed by the national supervisory authority (for example, the Ministry of Health, Labor and Welfare in Japan and the Food and Drug Administration (FDA) in the United States, etc.) It is clearly stated that it has been received.
  • the instruction sheet is a so-called package insert and is usually provided in a paper medium, but is not limited thereto, and is in a form such as an electronic medium (for example, a homepage or an e-mail provided on the Internet). But it can be provided.
  • the present invention is an anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof (collectively referred to herein as “anti-FSTL1 antibody etc.” or “antibody of the present invention”).
  • the antibody comprises amino acid positions 48 to 100, 148 to 170, or 148 to 162, positions 193 to 228, positions 193 to 216, and positions 205 to 228 of SEQ ID NO: 2 (amino acid sequence of human FSTL1), and
  • An anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, comprising one or more amino acids contained in a region selected from the group consisting of positions 233 to 289 or positions 272 to 289 as an epitope is provided.
  • it is an anti-FSTL1 antibody having an epitope in the corresponding region, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • it may have an epitope in the region of amino acids 148 to 162 or 272 to 289 of SEQ ID NO: 2 (amino acid sequence of human FSTL1).
  • the epitope is a continuous or discontinuous 5 amino acids or more, or 6 amino acids or more, 7 amino acids or more, 8 amino acids or more, 9 amino acids or more, 10 amino acids or more, 11 amino acids or more in the corresponding region, A region of 12 amino acids or more or a combination thereof may be applicable.
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention is amino acids 48 to 100, 148 to 162, 205 to 228 of SEQ ID NO: 1 (amino acid sequence of human FSTL1). And a region selected from the group consisting of positions 272 to 289.
  • These epitopes include those that have been confirmed to be effective in animal studies.
  • # 6-55, # 7-34, and # 13 recognize 148-162 sites.
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention is selected from the group consisting of amino acids 148 to 162 and 205 to 228 of SEQ ID NO: 1 (amino acid sequence of human FSTL1). Have an epitope in the region. These epitopes include those recognized by antibodies that have been confirmed to be more active.
  • it has an epitope in the region of amino acid positions 48-100, 148-162, or 205-228 of SEQ ID NO: 2 (amino acid sequence of human FSTL1).
  • these epitopes include those that have been shown to have efficacy in in vitro or in vivo studies.
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention has a specific CDR.
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention, or a fragment or functional equivalent thereof is an antibody or antigen-binding fragment thereof comprising any sequence comprising CDRs of the full-length sequence, or a variable region of a sequence relating to a specific antibody of the invention Or an antigen-binding fragment thereof comprising 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12 in the framework region thereof , 15 or 17, or 20 or more substitutions, impossibility or deletions, or an antigen-binding fragment thereof.
  • heavy chain CDR1,2,3, light chain CDR1,2,3 include antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 6; heavy chain). : SEQ ID NO: 8), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 10; heavy chain: SEQ ID NO: 12), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 14; heavy chain: SEQ ID NO: 16), # 5- 10 (light chain: SEQ ID NO: 18; heavy chain: SEQ ID NO: 20), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 22; heavy chain: SEQ ID NO: 24), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy) Chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 8- 4 (light chain: SEQ ID NO: 38; heavy chain: SEQ ID NO: 40), # 8-7 (
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention is a variant of the antibody, wherein one or several substitutions, additions or deletions are made in the framework of the antibody in the variant.
  • the CDR may be a mutant that does not contain a mutation.
  • an antibody or fragment or functional equivalent thereof preferably has inhibitory activity downstream of FSTL1 or its signal transduction pathway. Such activity can be determined by examining the expression level or activity of FSTL1, or by directly using cancer cell lines to inhibit cell growth, metastasis activity, bone metastasis inhibition, MSC immunosuppression and immunodeficiency, etc.
  • Immunosuppressive activity or immunodeficiency activity for example, proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, and immunosuppressive activity or immunodeficiency
  • immunosuppression or immunodeficiency of immune-related cells eg, proliferation of regulatory T cells, immunosuppressive activity of regulatory T cells
  • Increase, differentiation into regulatory T cells, proliferation of regulatory dendritic cells, increased immunosuppressive activity of regulatory dendritic cells, differentiation into regulatory dendritic cells, proliferation of tolerant dendritic cells Increased immunosuppressive activity of tolerant dendritic cells, differentiation into tolerant dendritic cells, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells, increase of bone marrow-derived immunosuppressive cells and immunosuppressive cells
  • antibodies of the present invention are monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, human antibodies, multifunctional antibodies, bispecific or oligospecific antibodies.
  • a single chain antibody scFV, diabody, sc (Fv) 2 (single chain (Fv) 2), and scFv-Fc.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGSGYYYG WYQQKSPGSVPVTVIY NNNNRPS DIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYYC GGYDNSGTGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 12): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 16): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGSYVGSYYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSAGGI FGAGTTLTVL H chain SEQ ID NO: 20: CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 24): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSAIPGETVKITC SGGGNNYG WYQQRSPGSAPVTVIY YNDNRPS NIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQADDEAIYYC GSWDSNTDSGI FGAGTTLTVL H chain SEQ ID NO: 28: CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGNNYG WYQQKSPGSAPVTVIY YNNNRPS NIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQAEDEAVYYC GSYEGSTDSGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 32): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSSGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 36): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 44): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQVEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 48): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGSRYG WYQQKSPGSAPVTVIY YNDKRPS NIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFC GGYDGSTDAA FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 52): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKLTC SGGGSRYG WYQQKSPGSAPVTVIY YNDKRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDGSRDAGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 56): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGNNYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNNRPS NIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYYC GSYDSSSDSGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 60): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGSGSYG WFQQKSPGSAPVTVIY WDDRRPS DIPSRFSGSKSGSIHTLTITGVQADDEAVYLC GNAVRSGTGYVGV FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 64): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVEITC SGDSSYYG WFQQKSPGSAPVTVIY DNTNRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYC GGYDSSTYDGI FGAGTTLTVL H chain SEQ ID NO: 68: CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 ( Light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 58; heavy chain: SEQ ID NO: 60) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 ( Light chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO:
  • the antibody in the anti-FSTL1 antibody of the present invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7 (light chain: Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3 of an antibody selected from the group consisting of SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52) and # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56) , Light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 or functional equivalents thereof (eg, including one, two, three or more conservative amino acid substitutions), preferably two One, three, four, five, and more preferably all six. In these clones, stronger drug efficacy is observed in the Examples, and it is understood that it is expected to retain this stronger drug efficacy by retaining similar CDRs.
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention has the full length of a particular variable region.
  • Such specific variable regions are antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 6; heavy chain: SEQ ID NO: 8), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 10; heavy chain: SEQ ID NO: 12), Antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 14; heavy chain: SEQ ID NO: 16), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 18; heavy chain: SEQ ID NO: 20), # 5-43 (light chain: sequence) No.
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7-34 (light Chain: SEQ ID NO: 30; heavy chain: SEQ ID NO: 32), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 34; heavy chain: SEQ ID NO: 36), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52) ), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 58; heavy chain: SEQ ID NO: 60) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 66; heavy chain) : Full length of a variable region of an antibody selected from the group consisting of SEQ ID NO: 68) or a functional equivalent thereof (eg, comprising one, two, three or more conservative amino acid substitutions).
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7 (light chain). : Full length of the variable region of an antibody selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52) and # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56) or a functional equivalent thereof (E.g., including one, two or three or more conservative amino acid substitutions).
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 96; heavy chain: SEQ ID NO: 898), # 5-3 ( Light chain: SEQ ID NO: 100; heavy chain: SEQ ID NO: 102), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 104; heavy chain: SEQ ID NO: 106), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 108; heavy chain) : SEQ ID NO: 110), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 112; heavy chain: SEQ ID NO: 114), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 116; heavy chain: SEQ ID NO: 118), # 7-34 (Light chain: SEQ ID NO: 120; heavy chain: SEQ ID NO: 122), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 124; heavy chain: SEQ ID NO: 126), # 8-4 (light chain: SEQ ID NO: 128
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 116; heavy chain: SEQ ID NO: 118), # 7-34 ( Light chain: SEQ ID NO: 120; heavy chain: SEQ ID NO: 122), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 124; heavy chain: SEQ ID NO: 126), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 140; heavy chain: SEQ ID NO: 142), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 148; heavy chain: SEQ ID NO: 150) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 156; heavy) A full length of an antibody selected from the group consisting of: chain: SEQ ID NO: 158) or a humanized sequence thereof.
  • the antibody in the anti-FSTL1 antibody of the present invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 26; heavy chain: SEQ ID NO: 28), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 50; heavy chain: SEQ ID NO: 52), and full length of an antibody selected from the group consisting of # 10 (light chain: SEQ ID NO: 54; heavy chain: SEQ ID NO: 56) or a humanized sequence thereof.
  • the antibody of the invention is a humanized antibody and the anti-FSTL1 antibody of the invention, or fragment or functional equivalent thereof, is a humanized anti-FSTL1 antibody, or fragment or functional equivalent thereof. It can be.
  • the humanized antibodies of the invention comprise H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175, respectively) and L chain FR1, FR2 , FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 respectively).
  • the humanized antibodies of the invention comprise SEQ ID NOs: 161, 163, 165 and 167 (H (1) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175 (H (2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 177, 179, 181 and 183 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) Including heavy chain framework sequences, and SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 (L (1) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 231, 233, 235 and 237 (L (2)) Humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 239, 241, 243 and 245 (L (3) A light chain framework sequence comprising a light chain sequence FR1, FR1, FR1,
  • the heavy chain framework sequence is that of H (2), ie, the humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175 (H (2)) or heavy chains thereof.
  • a sequence obtained by mutating (backmutating) one or more amino acids different from the heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of the corresponding chicken sequence to amino acids in the chicken sequence may be used. This is because, in the present specification, when H (2) is used, the KD value is one-order superior to H (1) and H (3).
  • the light chain framework sequence comprising SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 (L (1) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4, respectively)
  • a sequence obtained by mutating (backmuting) one or more amino acids different from the chicken light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NO: 210, 211 or 214, 212 or 215 and 213, respectively) to amino acids in the chicken sequence Can be used.
  • the humanized antibodies are SEQ ID NOs: 161, 163, 165 and 167 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (1)), SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175 (H ( 2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or heavy chain framework comprising SEQ ID NOs: 177, 179, 181 and 183 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) 1 to 8 amino acids that differ from the corresponding chicken heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 206, 207, 208 and 209, respectively) in the sequence or the heavy chain framework sequence , 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8) sequences mutated to amino acids in chicken sequence SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 (L (1) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs
  • At least one, more preferably at least 2, at least 3, at least 4, at least 5 of the different amino acids considered during backmutation of the humanized antibody are Vernier residues. Selected from. It is understood that mutations other than Vernier residues may be included as long as the activity is optimized. In a preferred embodiment, all of the different amino acids are selected from Vernier residues. For the Vernier residue, see, for example, JP2010-4895, Nishibori N et al. , MolecularImmunology 43 (2006) 634-642, etc., and these descriptions are incorporated herein by reference.
  • the Vernier residues are the FR1 amino acid (SEQ ID NO: 169) at positions 28 and 30 of the H chain of the humanized sequence, the FR2 amino acid (SEQ ID NO: 171) at position 12, the FR3 amino acid (SEQ ID NO: 173) at positions 2, 10; It includes positions 13, 17 and 32, and FR1 (SEQ ID NO: 185) 20 of the L chain, FR3 amino acid (SEQ ID NO: 189) positions 10, 15 and 31. It is understood that the Vernier sequence can vary if the sequences are different.
  • the antibody of the invention is a humanized antibody and is H (1) -L (1), H (2) -L (1), H (3) -L (1), H (1) -L (2), H (2) -L (2), H (3) -L (2), H (1) -L (3), H (2) -L (3), H (3) -L (3) H chain FR1, FR2, FR3 and FR4 and L chain FR1, FR2, FR3 and FR4.
  • the antibody of the invention is a humanized antibody and comprises H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 169, 171, 173 and 175, respectively). And L chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 respectively).
  • the antibody of the invention is a humanized antibody and is SEQ ID NO: 161, 163, 165 and 167 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (1)), SEQ ID NO: 169, 171, 173 and 175 (H (2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 177, 179, 181 and 183 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2 , FR3 and FR4) variants comprising heavy chain framework sequences or 1-10 amino acid substitutions, additions and / or deletions thereof, and humanized light sequences of SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 (L (1)) Chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 231, 233, 235 and 237 (L (2) humanized light chain sequences FR1, FR2 FR3 and FR4) or a light chain framework sequence comprising SEQ ID NO:
  • the antibody of the invention is a humanized antibody, SEQ ID NO: 161, 163, 165 and 167 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (1)), sequence No. 169, 171, 173 and 175 (H (2) humanized heavy chain sequence FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NO: 177, 179, 181 and 183 (H (3) humanized heavy chain sequence FR1, FR2, FR3 and FR4) heavy chain framework sequences, and SEQ ID NOs: 185, 187, 189 and 191 (humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 231, 233, 235 and 237 (L (2) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 239, 241, 243 and 245 L (3) a light chain framework sequence comprising a humanized light chain sequence FR1, FR2, FR3 and FR4 of H
  • a transformant can be produced by introducing into a cell a polynucleotide or vector encoding an antibody in an anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • an anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention, or an antibody thereof in a fragment or functional equivalent can be produced.
  • the transformant may be a cell of a human or a mammal other than a human (eg, rat, mouse, guinea pig, rabbit, cow, monkey, etc.). Examples of mammalian cells include Chinese hamster ovary cells (CHO cells), monkey cells COS-7, and the like. Alternatively, the transformant may be Escherichia genus, yeast or the like.
  • vectors examples include plasmids derived from E. coli (for example, pET-Blue), plasmids derived from Bacillus subtilis (for example, pUB110), yeast-derived plasmids (for example, pSH19), animal cell expression plasmids (for example, pA1-11, pcDNA3.1- V5 / His-TOPO), bacteriophages such as ⁇ phage, virus-derived vectors, and the like can be used.
  • These vectors may contain components necessary for protein expression such as promoter, origin of replication, or antibiotic resistance gene.
  • the vector may be an expression vector.
  • a method for introducing the polynucleotide or vector into a cell for example, calcium phosphate method, lipofection method, electroporation method, adenovirus method, retrovirus method, or microinjection can be used (Revised 4th edition) New Genetic Engineering Handbook, Yodosha (2003): 152-179.).
  • a production method using antibody cells for example, the method described in "Protein Experiment Handbook, Yodosha (2003): 128-142.” Can be used.
  • antibody purification for example, ammonium sulfate, ethanol precipitation, protein A, protein G, gel filtration chromatography, anion, cation exchange chromatography, phosphocellulose chromatography, hydrophobic interaction chromatography, affinity chromatography, hydroxyl Apatite chromatography or lectin chromatography can be used (Protein Experiment Handbook, Yodosha (2003): 27-52.).
  • the present invention provides a medicament comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the medicament of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof is the same as the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that it can be used.
  • the present invention provides the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof for use as a medicament.
  • the antibody for pharmaceutical use of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the invention treats a disease associated with FSTL1, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention provides an anticancer agent comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the anticancer agent of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, is described in any embodiment and any examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that any of the antibodies can be used.
  • the present invention provides the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof for the treatment or prevention of cancer.
  • the antibody for the treatment or prevention of cancer of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof can be used in any of the embodiments and examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It will be appreciated that antibodies can be used.
  • the present invention is for treating or preventing cancer, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • an anti-FSTL1 antibody of the present invention or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention provides a therapeutic or preventive agent for metastatic malignant tumors or metastasis of malignant tumors, comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the metastatic malignant tumor of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, is described in any embodiment and any examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that any of the antibodies can be used.
  • the present invention provides an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof for treating or preventing metastatic malignant tumors or metastasis of malignant tumors.
  • the antibody for treating metastatic malignant tumor of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, is described in any embodiment and any examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that any of the antibodies can be used.
  • the present invention relates to metastatic malignancies or malignant tumors comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • Methods are provided for treating or preventing metastasis.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the disease targeted by the present invention is cancer, for example, melanoma, colon cancer, breast cancer, lymphoma, lung cancer, prostate cancer, kidney cancer, head and neck cancer, esophageal cancer, stomach cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, bladder cancer, Examples include, but are not limited to, cervical cancer, brain central nerve tumors, sarcomas, leukemias and multiple myeloma and their metastatic malignancies. These cancers may be cancer types that highly express SNAIL and / or FSTL1.
  • the present invention provides an inhibitor of cancer cell metastasis comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, and bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis,
  • the present invention provides an inhibitor capable of inhibiting lymph node metastasis, brain metastasis, particularly bone metastasis, and lung metastasis.
  • the present invention is intended to inhibit cancer cell metastasis (eg, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis), particularly for bone metastasis, lung metastasis inhibition.
  • cancer cell metastasis eg, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention or a fragment or functional equivalent thereof.
  • An antibody for inhibiting metastasis of cancer cells of the present invention eg, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis
  • an antibody for inhibiting bone metastasis, lung metastasis, or the like can use the antibodies of any embodiment and any example described herein, such as in the section (Anti-FSTL1 antibody).
  • the invention provides cancer cell metastasis (e.g., comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the invention, or a fragment or functional equivalent thereof
  • the present invention provides a method for inhibiting bone metastasis, lung metastasis, in particular, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis).
  • inhibiting bone metastasis has been extremely difficult in the past.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention relates to inhibition of induction or enhancement of immune failure such as immunosuppression and immunodeficiency by mesenchymal stem cells (MSC) containing the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • Enhancement of immunological failure such as immunosuppression and immunodeficiency includes the proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, and immunity It includes at least one acquisition of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of a cell having no suppressive activity or immunodeficiency activity.
  • Enhancement of immune failure such as immunosuppression and immunodeficiency by mesenchymal stem cells also includes the concept of induction of mesenchymal stem cells that induce immune failure such as immunosuppression and immunodeficiency.
  • MSCs with high immunosuppressive ability are also known as activated MSCs or cancer-related MSCs.
  • FSTL1 secreted from Snail-positive cancer cells, etc. acts on so-called progenitor cells of MSC, and MSC uses immunosuppressive cells as immunosuppressive immune-related cells.
  • an immunosuppressed state is caused by secreting a factor that causes so-called progenitor cells to become immunosuppressive cells. Therefore, it is considered that the action of FSTL1 is suppressed by the action of an anti-FSTL1 antibody as in the present invention, and as a result, the immunosuppressed state is released.
  • the present invention relates to the acquisition and / or enhancement of immune disruption activity such as immunosuppression, immunodeficiency and the like of immune-related cells containing the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • Inhibitors are provided.
  • the acquisition and / or enhancement of immunosuppression activity such as immunosuppression of immune related cells and immunodeficiency also includes the phenomenon of induction of immunosuppressive cells.
  • Inhibitors of acquisition and / or enhancement will include the concept of inhibitors of induction of cells with immune disruption activity such as immunosuppression, immunodeficiency.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention provides the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, for inhibiting the acquisition and / or enhancement of immune disruption activity such as immunosuppression of immune-related cells and immunodeficiency.
  • an antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, for inhibiting the acquisition and / or enhancement of immune disruption activity such as immunosuppression and immune deficiency of the immune-related cells of the present invention is described herein (anti-FSTL1 antibody). It will be understood that the antibodies of any of the embodiments and any of the examples described in the sections etc. can be used.
  • the present invention provides for obtaining immunosuppressive activity and / or comprising administering an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, to a subject in need thereof.
  • Methods are provided for inhibiting potentiation.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the acquisition and / or enhancement of immunosuppression activity such as immunosuppression and immunodeficiency in the inhibitor of the present invention is the proliferation and control of regulatory T cell proliferation and regulatory T cell immunosuppressive activity.
  • Enhancement of immunosuppressive activity differentiation into tolerant dendritic cells, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells, enhancement of immunosuppressive activity of bone marrow-derived immunosuppressive cells and differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, exhausted T cells At least one selected from the group consisting of proliferation, enhancement of immunodeficiency activity of exhausted T cells, and induction (increase or differentiation) of exhausted T cells, more preferably at least 3, more preferably At least 4, more preferably at least 5, more preferably at least 6, more preferably at least 7, more
  • the medicament, anticancer agent, therapeutic agent or inhibitor of the present invention may be combined with another cancer treatment.
  • another cancer treatment includes an anticancer agent different from the anticancer agent of the present invention, surgical treatment or radiation therapy, or a combination thereof.
  • Chemotherapy and radiation therapy for cancer inevitably have the side effect of dramatically reducing lymphocyte proliferation.
  • administration of the composition of the present invention has the effect of stimulating and proliferating reduced lymphocyte cells and can minimize the severe side effects associated with conventional chemotherapy. The same applies to radiation therapy.
  • the combined use with the composition of the present invention can greatly reduce the dose or irradiation dose of a chemotherapeutic agent from the dose or irradiation dose usually used.
  • the cancer therapeutic composition of the present invention can be used in combination with or combined with an existing or novel chemotherapeutic agent different from the anticancer agent of the present invention.
  • chemotherapeutic agents include alkylating agents, nitrosourea agents, antimetabolites, anticancer antibiotics, plant-derived alkaloids, topoisomerase inhibitors, hormone therapeutic agents, hormone antagonists, aromatase inhibitors, P-sugars
  • chemotherapeutic agents include protein inhibitors, platinum complex derivatives, other immunotherapeutic agents, and other anticancer agents.
  • it can be used in combination or combined with a therapeutic agent for leukocyte (neutrophil) depletion, a thrombocytopenia, an antiemetic, or a cancer pain remedy that is a cancer treatment adjuvant for the recovery of QOL of the patient.
  • the present invention further comprises a cell killing agent in addition to the anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof. Therefore, it can be said that the composition, agent, medicament, etc. (therapeutic agent or prophylactic agent, etc.) of the present invention can contain or bind a complex molecule.
  • the “cell-killing drug” is a drug that may dissolve the cell membrane.
  • Cytocidal agents are referred to as cytotoxic peptides in the case of peptides, and cytotoxic peptides have various designations in the art, for example, “soluble peptide component”, “cell killing sequence” These are also referred to as “cell-lytic peptide (sequence)” or “cell membrane-lytic peptide (sequence)”, and these are used interchangeably for the purposes of the present invention.
  • Representative examples of such cytotoxic drugs include Gail D. et al., Cancer Res 2008; 68: 9280-9290 .; Ian Krop and Eric P.
  • examples thereof include, but are not limited to, ⁇ -calicheamicin dimethyl hydrazide (NAc- ⁇ calicheamicin, DMH).
  • peptides include, but are not limited to, cell membrane lytic peptides, cell membrane potential destabilizing peptides, cell membrane lytic / nucleic acid binding peptides, and mitochondrial membrane disrupting peptides.
  • such a cell-killing drug may be bound to the binding agent of the present invention such as an antibody with a spacer.
  • the “spacer” refers to a portion that forms a chemical bond between molecules of a chain polymer so as to form a bridge, and is also referred to as a linker.
  • Examples of peptide spacers typically include, but are not limited to, a sequence of 0 to 5 amino acids consisting of G and P. The spacer is not essential and may not be present.
  • the combination of an anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, and a cell-killing agent may be provided as a complex molecule.
  • a complex molecule is that a cytotoxic portion corresponding to the explosive portion and a portion responsible for specificity to the cancer cell corresponding to the warhead portion (for example, a receptor highly expressed in cancer cells).
  • a spacer it is composed of a cancer cell specific binding agent + spacer + cell killing agent.
  • any cancer cell-specific binding agent, any spacer, any cell-killing agent can be arbitrarily combined, and examples of their production and use are described.
  • Such molecules are usually synthesized by chemical synthesis, but when composed of peptides, a method of forcibly expressing and purifying by gene recombination, or a method combined therewith is also possible.
  • the cancer cells to be treated are examined for the expression of FSTL1 on the cell surface and the susceptibility of cancer cells to cell killing agents. Based on the results, the warhead and explosive are selected and the optimal molecule for the cancer cell is designed.
  • a custom-made peptide toxin obtained by chemical synthesis or the like can be combined with a DDS such as atelocollagen as necessary, and can be treated by local administration or systemic administration.
  • the target of the present invention may include cancer caused by Snail positive cancer cells. . Since some cancer cells generate EMT and express SNAIL, it is said that not only a limited number of these types of cancer but also cells that have generated "EMT" in various cancer types express SNAIL. Yes.
  • Such cancers include squamous cell carcinoma, melanoma, colon cancer, breast cancer, lymphoma, lung cancer, prostate cancer, kidney cancer, thyroid cancer, head and neck cancer, esophageal cancer, stomach cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, bladder cancer, Examples include, but are not limited to, cervical cancer, brain central nerve tumors, sarcomas, leukemias and multiple myeloma.
  • the administration route of the therapeutic agent is preferably one that is effective in the treatment, and may be, for example, intravenous, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, or oral administration.
  • the administration form may be, for example, an injection, capsule, tablet, granule or the like.
  • Aqueous solutions for injection may be stored, for example, in vials or stainless steel containers.
  • the aqueous solution for injection may contain, for example, physiological saline, sugar (for example, trehalose), NaCl, or NaOH.
  • the therapeutic agent may contain a sustained release agent such as a buffer (for example, phosphate buffer), a stabilizer, an adjuvant, and the like.
  • composition, medicament, agent (therapeutic agent, prophylactic agent, etc.) of the present invention contains a therapeutically effective amount of the therapeutic agent or active ingredient, and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • pharmaceutically acceptable refers to a licensed or otherwise recognized pharmacopoeia of a government for use in animals, and more particularly in humans, by a government supervisory authority. It means that it is enumerated.
  • carrier refers to a diluent, adjuvant, excipient, or vehicle with which the therapeutic agent is administered.
  • Such carriers can be sterile liquids, such as water and oils, including but not limited to those of petroleum, animal, vegetable or synthetic origin, including but not limited to peanut oil, soybean oil, minerals Oil, sesame oil, etc. are included.
  • Water is a preferred carrier when the drug is administered orally.
  • Saline and aqueous dextrose are preferred carriers when the pharmaceutical composition is administered intravenously.
  • saline solutions and aqueous dextrose and glycerol solutions are used as liquid carriers for injectable solutions.
  • Suitable excipients include light anhydrous silicic acid, crystalline cellulose, mannitol, starch, glucose, lactose, sucrose, gelatin, malt, rice, flour, chalk, silica gel, sodium stearate, glycerol monostearate, talc, chloride Sodium, nonfat dry milk, glycerol, propylene, glycol, water, ethanol, carmellose calcium, carmellose sodium, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylacetal diethylaminoacetate, polyvinylpyrrolidone, gelatin, medium chain fatty acid triglyceride, polyoxyethylene hardening Castor oil 60, sucrose, carboxymethylcellulose, corn starch, inorganic salts and the like are included.
  • compositions can also contain minor amounts of wetting or emulsifying agents, or pH buffering agents, if desired.
  • These compositions can take the form of solutions, suspensions, emulsion, tablets, pills, capsules, powders, sustained-release formulations and the like. It is also possible to formulate the composition as a suppository, with traditional binders and carriers such as triglycerides. Oral formulations may also include standard carriers such as pharmaceutical grade mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, sodium saccharin, cellulose, magnesium carbonate. Examples of suitable carriers are E.I. W. Martin, Remington ’s Pharmaceutical Sciences (Mark Publishing Company, Easton, U.S.A).
  • compositions contain a therapeutically effective amount of the therapeutic agent, preferably in purified form, together with a suitable amount of carrier so as to provide the form for proper administration to the patient.
  • the formulation must be suitable for the mode of administration.
  • surfactants, excipients, coloring agents, flavoring agents, preservatives, stabilizers, buffering agents, suspending agents, tonicity agents, binders, disintegrating agents, lubricants, fluidity Accelerators, flavoring agents and the like may be included.
  • various delivery systems are known, and such systems can be used to administer the therapeutic agent of the present invention to an appropriate site (eg, esophagus).
  • Such systems include, for example, encapsulation in liposomes, microparticles, and microcapsules: the use of recombinant cells capable of expressing therapeutic agents (eg, polypeptides), receptor-mediated endocytosis There is use.
  • Introduction methods include, but are not limited to, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, intranasal, epidural, and oral routes.
  • an inhaler or nebulizer can be used with an aerosolizing agent and can be administered with other biologically active agents. Administration can be systemic or local.
  • the present invention can also be administered directly to the tumor.
  • the composition can be formulated as a pharmaceutical composition adapted for human administration according to known methods. Such compositions can be administered by injection. Typically, compositions for injection administration are solutions in sterile isotonic aqueous buffer. Where necessary, the composition can also include a solubilizing agent and a local anesthetic such as lidocaine to ease pain at the site of the injection. In general, the ingredients are supplied separately or mixed together in a unit dosage form, for example in a sealed container such as an ampoule or sachet indicating the amount of active agent, lyophilized powder or water-free concentration Can be supplied as a product.
  • a sealed container such as an ampoule or sachet indicating the amount of active agent, lyophilized powder or water-free concentration Can be supplied as a product.
  • composition is to be administered by infusion
  • it can be dispensed with an infusion bottle containing sterile pharmaceutical grade water or saline.
  • an ampoule of sterile water for injection or saline can be provided so that the ingredients may be mixed prior to administration.
  • the antibody of the present invention, composition, medicine, agent (therapeutic agent, prophylactic agent, etc.), etc. can be formulated as a neutral type, salt type, or other prodrug (eg, ester).
  • Pharmaceutically acceptable salts include those formed with free carboxyl groups derived from hydrochloric acid, phosphoric acid, acetic acid, oxalic acid, tartaric acid, isopropylamine, triethylamine, 2-ethylaminoethanol, histidine, procaine And those formed with free amine groups such as those derived from, and those derived from sodium, potassium, ammonium, calcium, ferric hydroxide, and the like.
  • the amount of the therapeutic agent of the invention effective for the treatment of a particular disorder or condition can vary depending on the nature of the disorder or condition, but can be determined by those skilled in the art by standard clinical techniques based on the description herein. In addition, in some cases, in vitro assays can be used to help identify optimal dosage ranges.
  • the exact dose to be used in the formulation can also vary depending on the route of administration and the severity of the disease or disorder and should be determined according to the judgment of the attending physician and the circumstances of each patient. However, the dose is not particularly limited, and may be, for example, 0.001, 1, 5, 10, 15, 100, or 1000 mg / kg body weight per dose, and within the range of any two of them. Also good.
  • the dosing interval is not particularly limited, for example, it may be administered once or twice per 1, 7, 14, 21, or 28 days, or once or twice per any two of these ranges Also good.
  • the dose, administration interval, and administration method may be appropriately selected depending on the age, weight, symptoms, target organ, etc. of the patient.
  • the therapeutic agent preferably contains a therapeutically effective amount or an effective amount of an active ingredient that exhibits a desired action. If the malignant tumor marker is significantly decreased after administration, it may be determined that there is a therapeutic effect. Effective doses can be extrapolated from dose-response curves derived from in vitro or animal model test systems.
  • a “patient” is a human or non-human mammal (eg, mouse, guinea pig, hamster, rat, mouse, rabbit, pig, sheep, goat, cow, horse, cat, dog, marmoset. , Monkey or chimpanzee).
  • the patient may be a patient who is judged or diagnosed as having developed FSTL1 or Snail positive malignant tumor.
  • the determination or diagnosis is preferably performed by detecting the protein level of FSTL1 or Snail.
  • the pharmaceutical composition or agent (therapeutic agent or preventive agent) of the present invention can be provided as a kit.
  • the present invention provides a drug pack or kit comprising one or more containers filled with one or more components of the composition or medicament of the present invention.
  • associated with such containers manufactured, used or sold for human administration by a government agency in a manner prescribed by the government agency that regulates the manufacture, use or sale of a pharmaceutical or biological product. It is also possible to indicate information indicating authorization.
  • the kit of the present invention can also contain an expression vector encoding a protein for use as a composition, therapeutic agent, prophylactic agent or pharmaceutical, such as the antibody of the present invention, and after the protein is expressed, It can also be reconstituted to form a biologically active complex.
  • a kit preferably also contains the necessary buffers and reagents.
  • such containers may be accompanied by instructions for use of the kit (package insert) and / or in a form prescribed by a government agency that regulates the manufacture, use or sale of a pharmaceutical or biological product. It is also possible to provide information indicating the approval of manufacture, use or sale for human administration by a government agency.
  • Short Protocols in Molecular Biology A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub.Associates; Ausubel, FM (1995) .Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub.Associates; Innis, MA et al. (1995) .PCR Strategies, Academic Press; Ausubel, FM (1999). Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, and annual updates; Sninsky, JJet al. (1999). PCR Applications: Protocols for Functional Genomics, Academic Press, a separate volume of experimental medicine “Gene Transfer & Expression Analysis Experimental Method”, Yodosha, 1997, etc., which are incorporated herein by reference in their entirety (which may be all).
  • the oligonucleotide of the present invention can be synthesized by standard methods known in the art, for example, by using an automated DNA synthesizer (commercially available from Biosearch, Applied Biosystems, etc.). is there.
  • an automated DNA synthesizer commercially available from Biosearch, Applied Biosystems, etc.
  • Stein et al. Steinet al., 1988, Nucl. Acids Res. 16: 3209
  • control pore glass polymer support Sarinet al., 1988
  • Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 7448-7451 can also be used to prepare methylphosphonate oligonucleotides.
  • Example 1 Production of anti-FSTL1 antibody For three moth Boris Brown at three months of age, one human FSTL1 (Novoprotein, Cat # CF23) (SEQ ID NO: 159) as an antigen once per bird 100 ⁇ g was immunized into the peritoneal cavity. Immunize the abdominal cavity with complete Freund's adjuvant (Wako, 014-09541) for primary immunization and incomplete Freund's adjuvant (Wako, 011-09551) for secondary, tertiary and quaternary immunization. did. In the fifth immunization, an antigen diluted in PBS (phosphate buffered saline) was intravenously injected.
  • PBS phosphate buffered saline
  • CDNA was synthesized from the extracted RNA by RT-PCR using PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (TAKARA, 6210A) to prepare an scFv phage library.
  • PPDS was used as an expression vector.
  • the scFv phage library was prepared according to the method described in Reference: “Nakamura et al., J Vet Med Sci. 2004 Ju; 66 (7): 807-814”.
  • Panning was performed using scFv phage library, and FSTL1-specific phages were concentrated.
  • the only antigens used for panning were human FSTL1 (Novoprotein, Cat # CF23), or human FSTL1 (R & D Systems, Cat # 1694-FN-050) and mouse FSTL1 (R & D Systems Cat # 1738-FN-050).
  • By alternately using seeding panning antigens antibodies having cross-reactivity in mice were also obtained.
  • Panning was performed according to the method described in the reference “Nakamura et al., J Vet Med Sci. 2004 Ju; 66 (7): 807-814”.
  • phages were infected with E. coli, plated on 2 ⁇ YT Agar plate containing ampicillin (50 ⁇ g / ml, nacalai, 02739-32), and the resulting colonies were ampicillin-containing 2 ⁇ YT liquid Cultured in medium.
  • amplification of the chicken-derived antibody gene H chain variable region and L chain variable region was performed by PCR using the DNA chain encoding the scFv antibody as a template, and then the PCR product was SacII (BioLabs, Cat # R0157S) and NheI restriction enzyme treatment (BioLabs, Cat # R0131S).
  • a mouse / chicken chimeric antibody (IgG1) expression vector expression vector for H chain: pcDNA4 / myc-His, expression for L chain
  • Vector pcDNA3 / myc-His, Invitrogen).
  • the prepared H-chain and L-chain constructs were transfected into CHO cells, and then the reactivity of the culture supernatant was confirmed by ELISA using a solid phase of human or mouse FSTL1 protein.
  • the mouse chimera expression vector used was the vector described in Tateishi et al., J Vet Med Sci. 2008 Apr; 70 (4): 397-400.
  • clones # 5-2, # 5-3, # 5-8, # 5-10, # 5-43, # 6-55, # 7 -34, # 8-1, # 8-4, # 8-7, # 8-8, # 6-55, # 7, # 10, # 13, # 22, # 33 were used in the following experiments.
  • the amino acid sequences of the light chain variable regions are SEQ ID NOs: 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30 in this order.
  • nucleic acid sequences are SEQ ID NOs: 95, 99, 103, 107, 111, 115, 119, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147, 151, 155.
  • amino acid sequences of the heavy chain variable regions are SEQ ID NOs: 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32 in this order.
  • 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, and the full-length amino acid sequences are SEQ ID NOs: 98, 102, 106, 110, 114, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, and the nucleic acid sequences are SEQ ID NOs: 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 55, 59, 63, 67 in this order.
  • the full-length nucleic acid sequences are SEQ ID NOS: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157.
  • the constructed H chain and L chain constructs were transfected into mammalian cultured cells using Expi293Expression system (Invitrogen, Cat # A14635), and then the purified antibody was purified by ProteinG. Sepharose 4 Fast Flow (GE healthcare, 17-018-02) was used. The measurement of the binding activity of the obtained purified antibody of each clone to FSTL1 is shown in Example 2.
  • Example 2 Evaluation of binding activity of purified antibody to FSTL1 ELISA was performed under the following conditions to evaluate the reactivity of the obtained antibody clones against FSTL1.
  • Antibody used anti-dinitrophenyl (DNP) antibody (negative control), # 5-2, # 5-3, # 5-8, # 5-10, # 5-43, # 6-55, # 7-34 .
  • DNP anti-dinitrophenyl
  • FIGS. 2 and 3 show the results of evaluating the binding activity under the conditions shown in Table 3 for clones with different timings of screening and antibody purification.
  • Antibody used anti-DNP antibody, # 5-8, # 6-55, # 7-34, # 8-1, # 8-4, # 8-7, # 8-8, # 7, # 10, # 13, # 22, # 33
  • Example 3 Epitope mapping of antibody
  • epitope mapping of the antibody obtained in the above Example was performed.
  • the human FSTL1 gene is NM_007085.4 (SEQ ID NO: 1) and the mouse FSTL1 gene is NM_008047.5 (SEQ ID NO: 3).
  • the sequence of the His-tagged human and mouse FSTL1 genes with 10 histidine residues added was designed. Furthermore, in consideration of expression in mammalian cells, codon optimization is performed, and a gene in which a nucleic acid sequence for inserting a plasmid (SEQ ID NOs: 75 and 76) is added to both ends of each gene is designed. Outsourced to Technologies.
  • Nucleic acid and amino acid sequences of original human and mouse FSTL1 (SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4) and nucleic acid sequences actually synthesized and amino acid sequences after translation (SEQ ID NOs: 69, 70, 71, 72) Shown below. Sequence for insertion into plasmid: N-terminal 5′-CGAACCCTTAAGCTTG-3 ′ (SEQ ID NO: 75) C terminal 5'-CGTGGCATCTAGACA-3 (SEQ ID NO: 76) -Human FSTL1 nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 1) ⁇ Underlined is the leader sequence.
  • the purified plasmid was treated with restriction enzymes BamHI-HF (BioLabs Cat # R3136L) and NheI-HF (BioLabs Cat # R3131L), and subjected to 1% agarose electrophoresis. After electrophoresis, it was stained with ethidium bromide, and the plasmid band was excised and the plasmid was purified from the gel using NucleoSpin Gel and PCR Clean-up (TAKARA, Cat # 740609.250).
  • the synthesized human FSTL1 (SEQ ID NO: 69) or mouse FSTL1 gene (SEQ ID NO: 71) is incorporated into the above restriction enzyme-treated plasmid using GeneArt Seamless Cloning and Assembly Enzyme Mix (Invitrogen, Cat # A14606). E. coli was transformed. The transformed E. coli was cultured, and the plasmid was extracted from the E. coli and purified to confirm the DNA sequence. As a result of DNA sequencing, a plasmid in which the target human and mouse FSTL1 gene sequences were confirmed was used as an expression plasmid.
  • transient expression was performed with Expi293TM Expression system (Life Technologies, Cat # A14635).
  • the culture supernatant after expression was purified using HisPur Cobalt Resin (Thermo Scientific, Cat # 89964), and used as an antigen for ELISA and epitope mapping ELISA.
  • a defective expression vector was constructed using the following primers for defective preparation and KOD-Plus-Mutagenesis Kit (TOYOBO, Cat # SMK-101).
  • the site to be deleted is selected with reference to Uniprot No. Q12841, except for the site that contains many important disulfide bonds in the steric structure (see Fig.
  • 21st to 53rd amino acid deletion ( ⁇ 21-53) 100th to 140th amino acid deletion ( ⁇ 100-140), 148th to 170th amino acid deletion ( ⁇ 148-170), 148th to 154th amino acid deletion ( ⁇ 148-154), 155th to 162th Amino acid deletion ( ⁇ 155-162), amino acids from 163 to 170 ( ⁇ 163-170), amino acids from 181 to 190 ( ⁇ 181-190), amino acids from 193 to 228 Expression vectors for ( ⁇ 193-228) and the 233rd to 289th amino acid deletion ( ⁇ 233-289) were prepared. Various deletions were transiently expressed using the Expi293TM Expression system.
  • Antibodies used various chicken-mouse chimeric antibodies obtained in Example 1, rat anti-FSTL1 antibody (R & D Systems, Cat. No. MAB1694, clone 229007) negative control evaluated in Examples of patent WO2009 / 028411 Anti-DNP antibody and rat IgG2b isotype control (R & D Systems, Cat. No. MAB0061, clone 141945) (Table 4 Epitope mapping ELISA conditions)
  • FIG. 4 shows a schematic diagram of human FSTL1 (Uniprot, No. Q12841 reference) and the defect site of each of the prepared defects.
  • the epitope location of each antibody is # 5-2, # 5-3, # 5-8, # 5-10, # 5-43, # 8-1, # 8-2, # 8-4, and # 8-7 are sequences included in the amino acid sequence from the 233rd to 289th positions, and # 7, # 10, and # 22 are sequences included in the amino acid sequence from the 193rd to 228th positions. Presumed to be recognized as an epitope.
  • the epitope of the rat anti-FSLT1 antibody manufactured by R & D was presumed to be a sequence contained in the 21st to 53rd amino acid sequences, and was found to be a different epitope from the various antibodies obtained in Example 1.
  • # 6-55, # 7-34, and # 13 are presumed to recognize sequences contained in the 148th to 170th amino acid sequences as epitopes, and these clones are promising antibody clones by in vitro evaluation described later. Therefore, the epitope sequence was narrowed down for the 148th to 170th amino acid sequences containing the epitope.
  • the 154th amino acid deletion from 148th ( ⁇ 148-154), the 155th to 162nd amino acid deletion ( ⁇ 155-162), the 163rd to 170th amino acid deletion ( ⁇ 163-170) And epitope mapping ELISA was performed as described above. As a result, it was presumed that the epitope sites # 6-55, # 7-34, and # 13 recognize the sequence contained in the 148th to 162nd amino acid sequences as epitopes as shown in the lower part of FIG.
  • the epitope of # 33 is the amino acid sequence of 48 to 100th
  • the epitope of # 7 and # 10 is the amino acid sequence of 205 to 22
  • the epitope of # 22 is the amino acid sequence of positions 193 to 216, # 5 -2, # 5-3, # 5-10, # 5-43, # 8-1, # 8-4, # 8-7, # 8-10 have an epitope in the amino acid sequence from 272 to 289. It was estimated.
  • Example 4 Evaluation of inhibitory activity of mesenchymal stem cell (MSC) induction>
  • MSC mesenchymal stem cell
  • Example 5 Evaluation of inhibitory activity of tumor cell activation by FSTL1>
  • the inhibition activity of tumor cell activation by FSTL1 was evaluated.
  • Example 6 Evaluation of inhibitory activity of mesenchymal stem cell (MSC) induction by FSTL1> In this example, the same experiment as in Example 4 was performed.
  • Mouse bone marrow cells prepared in the same manner as in Example 4 were mixed with a final concentration of 50 ng / mL FSTL1 and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibody (# 5-2, # 5-3, # 5-8, # 5-10, # 5-10, # 5 5-43, # 6-55, # 7-34) or a control antibody, anti-DNP antibody, was added for stimulation culture. Eleven days later, the number of cells was counted, the number of cells was counted, and staining was performed using a PE-Cy5-labeled anti-CD45 antibody (BD Pharmingen, Cat. No. 555484).
  • BD Pharmingen Cat. No. 555484
  • CD45 negative cells The content of CD45 negative cells reported to be contained in the cells was analyzed by flow cytometry using FACScan, and the MSC ratio and number in one culture were calculated (FIG. 5A).
  • all antibody clones showed inhibitory activity against the increase of CD45 negative cells by FSTL1.
  • # 5-3, # 5-8, # 7-34, # 5-43 showed higher inhibitory activity and almost completely inhibited the action of FSTL1.
  • Example 7 Evaluation of inhibitory activity of tumor cell activation by FSTL1>
  • the inhibition activity of tumor cell activation by FSTL1 was evaluated for RANKL positive cells and CCR2 positive cells.
  • a human pancreatic cancer cell line Panc1 was added with FSTL1 (R & D) at a final concentration of 50 ng / mL and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibody (the same clone as in Example 6) or a control antibody to stimulate culture. did.
  • the cells were counted and stained with PE-labeled anti-RANKL antibody and PE-labeled anti-CCR2 antibody, and the content of RANKL-positive cells and CCR2-positive cells was determined by flow cytometry using FACScan (BD). The number of cells in one culture was calculated (FIG. 5B).
  • FACScan FACScan
  • Example 8 Evaluation of inhibitory activity of mesenchymal stem cell (MSC) induction by FSTL1>
  • concentration was changed, and the inhibitory activity of mesenchymal stem cell (MSC) induction by FSTL1 was evaluated in the same manner as in Examples 4 and 6.
  • Mouse bone marrow cells prepared in the same manner as in Example 4 were added to a final concentration of 20 ng / mL FSTL1 and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibody (# 5-2, # 5-3, # 5-8, # 5-10, # 5-10, # 5 5-43, # 6-55, # 8-1, # 8-4, # 8-7, # 8-8) or a control antibody, anti-DNP antibody, was added for stimulation culture. Eight days later, the number of cells was counted, the number of cells was counted, and the cells were stained with PE-Cy5-labeled anti-CD45 antibody, and the content of CD45 negative cells was analyzed by flow cytometry using FACScan. The MSC ratio and number were calculated (FIG. 6A). As a result, compared with the control antibody, # 5-8, # 5-43, # 6-55, # 8-1 and # 8-4 showed inhibitory activity against the increase of CD45 negative cells by FSTL1.
  • Example 9 Evaluation of inhibitory activity of tumor cell activation by FSTL1>
  • the inhibitory activity of tumor cell activation by FSTL1 was evaluated at a low concentration.
  • Example 5 the final concentration of 20 ng / mL FSTL1 and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibody (# 5-2, # 5-8, # 6-55) or control antibody was added to human pancreatic cancer cell line Panc1. And stimulated culture. Three days later, the cells were counted and stained using PE-labeled anti-RANKL antibody and PE-labeled anti-CCR2 antibody. The number of cells in one culture was calculated (FIG. 6B). As a result, even at the final concentration of 20 ng / mL, # 5-8 and # 6-55 showed inhibitory activity against the increase of RANKL positive cells and CCR2 positive cells compared with the control antibody.
  • Example 10 Evaluation of inhibitory activity of tumor cell activation by FSTL1>
  • the inhibition activity of tumor cell activation by FSTL1 was evaluated including newly obtained clones.
  • the human pancreatic cancer cell line Panc1 was treated with FSTL1 at a final concentration of 50 ng / mL and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibody (# 5-2, # 5-3, # 6-55, # 7-34, # 8-1, # 8-4, # 8-7, # 8-8) or a control antibody was added for stimulation culture. Three days later, the cells were counted, stained with PE-labeled anti-RANKL antibody and PE-labeled anti-CCR2 antibody, and the content of RANKL-positive cells and CCR2-positive cells was determined by flow cytometry using FACScan (BD). Analysis was performed and the number of cells in one culture was calculated. As a result, compared with the control antibody, # 5-2, # 6-55, # 8-4, and # 8-7 showed higher inhibitory activity against the increase of RANKL positive cells and CCR2 positive cells (FIG. 6C). ).
  • Example 11 Evaluation of inhibitory activity of tumor cell activation by FSTL1 (dose-dependent test)>
  • the inhibitory activity of tumor cell activation by FSTL1 was evaluated by changing the dose to include a low dose.
  • the human pancreatic cancer cell line Panc1 was added with FSTL1 at a final concentration of 50 ng / mL and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibody (# 6-55) or a control antibody for stimulation culture. Three days later, the cells were counted, stained with PE-labeled anti-RANKL antibody and PE-labeled anti-CCR2 antibody, and the content of RANKL-positive cells and CCR2-positive cells was determined by flow cytometry using FACScan (BD). Analysis was performed and the number of cells in one culture was calculated.
  • BD FACScan
  • Example 12 Evaluation of inhibitory activity of mesenchymal stem cell (MSC) induction by FSTL1>
  • MSC mesenchymal stem cell
  • Mouse bone marrow cells prepared in the same manner as in Example 4 were mixed with a final concentration of 20 ng / mL FSTL1 and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibody (# 5-2, # 5-8, # 6-55, # 7-34, # 7 8-1, # 8-4, # 8-7, # 8-8) or a control antibody, anti-DNP antibody, was added for stimulation culture. Eight days later, the cells were counted and stained with PE-Cy5-labeled anti-CD45 antibody, and the content of CD45 negative cells was analyzed by flow cytometry using FACScan, and the MSC ratio and number in one culture were determined. Calculated (FIG. 7). As a result, as compared with Control, all clones showed inhibitory activity against the increase of CD45 negative cells by FSTL1. In particular, high inhibitory activity was observed in the order of # 7-34, # 5-2, # 6-55, and # 8-7.
  • Example 13 Evaluation of inhibitory activity for induction of mesenchymal stem cells (MSC), cancer-related MSCs, and bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) by FSTL1>
  • MSC mesenchymal stem cells
  • MDSC bone marrow-derived immunosuppressive cells
  • mice bone marrow cells prepared in the same manner as in Example 4, a final concentration of 20 ng / mL FSTL1 and 10 ⁇ g / mL anti-FSTL1 antibodies (# 6-55, # 7-34, # 8-1, # 8-4), Anti-PD-L1 antibody or control antibody anti-DNP antibody, which has been reported to be effective in releasing immunosuppression, was added for stimulation culture. Eight days later, the number of cells was counted, and MSC (CD45 negative cells), cancer-related MSC (CD45 negative, ALCAM positive, CD271 positive cells) that increased with cancer metastasis, and cancer-related MSC increased.
  • MSC CD45 negative cells
  • cancer-related MSC CD45 negative, ALCAM positive, CD271 positive cells
  • PE-Cy5-labeled anti-CD45 antibody PE-labeled anti-ALCAM antibody, FITC-labeled anti-CD271 antibody (Abcam) , Cat. No. AB62122), FITC-labeled anti-CD11b antibody (BD Pharmingen, Cat. No. 553310), PE-Cy5-labeled anti-Gr1 antibody (eBioscience, Cat. No. 15-5931),
  • the above-described cell content was analyzed by flow cytometry using FACScan, and the number and ratio of MSCs in one culture were calculated (FIG. 8).
  • Example 14 Evaluation of inhibitory activity of mesenchymal stem cell (MSC), cancer-related MSC, bone marrow-derived immunosuppressive cell (MDSC) induction by FSTL1 and evaluation of differentiation ability into adipocytes>
  • MSC mesenchymal stem cell
  • MDSC bone marrow-derived immunosuppressive cell
  • the activity of the antibody clones was evaluated by the same test method as in Example 13. # 6-55 was set up as a positive control for activity. As a result, all clones showed inhibitory activity against the induction of MSC, cancer-related MSC, and M-MDSC by FSTL1, compared with the control antibody. (FIG. 9A). # 13 and # 6-55 appear to be reasonable results because the epitope is in the same region.
  • FIG. 9B shows the results of analyzing the inhibitory activity of MSC induction having the ability to differentiate into adipocytes. Mice bone marrow cells were added with FSTL1 and various antibodies and cultured for 8 days, and 5 x 10 4 cells / well were collected from each culture system.
  • SC010) was used to evaluate the ability to differentiate into adipocytes.
  • the evaluation method was evaluated by counting adipocytes in one culture system under a microscope 8 days after culturing after adding an adipocyte differentiation reagent. In the graph, nothing is added at the left end, control antibody is the second from the left, and anti-FSLT1 antibody clone is shown. No anti-FSLT1 antibody shows adipocytes, and it is understood that the induction of differentiation into the original MSC is inhibited.
  • Example 15 Comparison with conventional antibody>
  • the activity was compared with the anti-FSTL1 antibody manufactured by R & D Systems, which was evaluated in the example of Patent Document 1 (WO2009 / 028411).
  • Rat anti-FSTL1 antibody (Cat. No. MAB1694, clone 229007) manufactured by R & D Systems, which showed an inhibitory activity on induction of regulatory T cells important for immunosuppression in Patent Document 1 (WO2009 / 028411) and # 6 of the present invention -55 FSTL1 inhibitory activity was compared.
  • Bone marrow cells prepared in the same manner as in Example 4 Mouse bone marrow cells received rat anti-FSTL1 antibody and # 6-55 at a final concentration of 20 ng / mL FSTL1 and final concentrations of 20.0, 10.0, 5.0, 2.5 ⁇ g / ml. Added to.
  • rat IgG2b isotype control R & D Systems, Cat. No. MAB0061, clone 141945
  • anti-DNP antibody to be used as respective control antibodies and anti-DNP antibody were added to mouse bone marrow cells at a final concentration of 20.0 ⁇ g / ml and cultured for 8 days.
  • Example 16 Evaluation of inhibitory activity of mesenchymal stem cell (MSC) induction by FSTL1 (evaluation of differentiation ability into adipocytes)>
  • MSC mesenchymal stem cell
  • each antibody mixed with FSTL1 and its concentration was added to mouse bone marrow cells and cultured for 8 days. From each culture system, 5 ⁇ 10 4 cells / well were collected and “Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit (R & D Systems) The ability to differentiate into adipocytes was evaluated using an adipocyte differentiation reagent contained in “Cat. No. SC010”. In the evaluation method, the adipocyte differentiation reagent was added, and 8 days after culturing, the adipocytes in 1 culture system were counted under a microscope (FIG. 10B).
  • the number of cells that differentiated into adipocytes decreased in a dose-dependent manner by the addition of # 6-55.
  • the rat anti-FSTL1 antibody from R & D Systems was added, there was no effect on the differentiation into adipocytes, and a large number of adipocytes were observed at any dose as in the rat IgG2b isotype control group .
  • CD45 negative cell populations are MSCs, but only cell populations containing MSC at a high rate, but R & D Systems' rat anti-FSTL1 antibody reduces the number of CD45 negative cells, but there are A large number of MSCs that differentiate into adipocytes still remain.
  • Example 17 Evaluation of antibody activity in vivo-intratumoral administration>
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibody was evaluated by intratumoral administration using mouse melanoma Snail forced expression B16-F10 cell transplanted bone metastasis model.
  • FIG. 11A Effect on increase of mesenchymal stem cells (CD45 negative cells in bone marrow and spleen) (FIG. 11B, D) ⁇ Effect on increase of immunosuppressive Treg cells (CD4 positive Foxp3 positive cells in bone marrow and spleen) (FIG. 11D) ) ⁇ Other immunosuppressive properties (Fig. 11D) (Explanation)
  • Snail forced expression mouse melanoma cells B16-F10 were transplanted subcutaneously and intravenously in C57BL / 6N mice Were analyzed.
  • the test subject anti-FSTL1 antibody was administered into the tumor.
  • Snail-positive tumor cells When Snail-positive tumor cells are transplanted subcutaneously or intravenously in mice, they metastasize not only to various organs but also to the bone marrow. It is known that induction of anti-tumor immunity is suppressed (Cancer Research 73: 6185,2013).
  • FIG. 11D shows the change in the cell population in the spleen, but it is shown that even when the antibody is administered locally in the tumor, it is modified / influenced systemically.
  • FIG. 11D left the number of CD45 negative cells is shown, MSC is also reduced in the spleen, and in the center of FIG. 11D, the number of CD4 positive Foxp3 positive T cells is shown to be decreased. It has been shown that (regulatory T cells) are reduced.
  • the number of CD8-positive Tim3-positive T cells is shown, and it is demonstrated that exhausted CD8-positive T cells are reduced.
  • “exhaustion” indicates a state in which the function is reduced or incomplete, and Tim3 is one of the markers reflecting the state. If CD8 positive T cells that should kill tumor cells are exhausted, cancer cells cannot be eliminated from the body. Therefore, it can be said that the effect of the present invention has a remarkable effect also in suppressing such enhancement of immunosuppression.
  • Example 18 Evaluation of antibody activity in vivo to intraperitoneal administration>
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibody was evaluated by systemic administration (intraperitoneal administration) using a mouse melanoma Snail forced expression B16-F10 cell transplanted bone metastasis model.
  • Example 17 the antibody was administered into the tumor in accordance with the purpose of “inhibiting metastasis from the primary to the bone” that the present inventors have performed so far.
  • the intraperitoneal administration generally used in mouse experiments was adopted. Except for the antibody administration method, the same procedure as in Example 17 was performed.
  • anti-FSTL1 antibody was administered intraperitoneally (systemic administration) using a bone metastasis model in which Snail forced expression mouse melanoma cells (B16-F10) were transplanted subcutaneously and intravenously into C57BL / 6N mice. The tumor effect and immune suppression release effect were compared and analyzed.
  • the assay was also performed 14 days after tumor implantation.
  • the antibody was administered intraperitoneally at 10 mg / kg twice at 5 and 10 days after tumor implantation.
  • FIG. 12C shows changes in the cell population within the spleen.
  • the upper left of FIG. 12C is the number of GFP-positive tumor cells, and as a result of examining the metastasis into the spleen, it is also suppressed. This indicates metastasis to other organs.
  • the upper right is the number of CD45 negative cells, and shows that MSC decreases in the spleen.
  • Bottom left is the number of CD4-positive Foxp3-positive T cells, indicating that Treg decreases.
  • the lower right is the number of CD8 positive Tim3 positive T cells, indicating that exhausted CD8 positive T cells decrease.
  • Example 19 Evaluation of antibody activity in vivo-Comparison with existing drugs>
  • the efficacy of an existing immunosuppressive release antibody drug and anti-FSTL1 antibody was compared using a mouse melanoma Snail forced expression B16-F10 cell transplanted bone metastasis model.
  • the following antibodies were administered intraperitoneally at 10 mg / kg (200 ⁇ g / mouse) twice each 4 days and 8 days after tumor implantation.
  • the therapeutic effect of the anti-FSTL1 antibody which is one of the mechanisms of action of "immunosuppression" is compared with that of an antibody that has already been used clinically and a Snail-positive tumor bone metastasis model. did.
  • the antibody was administered twice systemically in the same manner as the previous time according to a general animal test using an antibody drug.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • anti-FSTL1 antibody is also an existing drug It was found that the same antitumor effect was exhibited.
  • the anti-CTLA4 antibody-administered group and the anti-PD-1 antibody-administered group did not improve the weakness such as significant fuzz, decreased exercise, and weight loss caused by bone metastasis. There was also a large difference between the two.
  • Example 20 Evaluation of antibody activity in vivo-colorectal cancer model>
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibody was evaluated using a mouse colon cancer CT26 cell transplantation model.
  • the experimental procedure and method were basically performed under substantially the same conditions as the bone metastasis model experiments of Examples 17-19. That is, the drug efficacy was evaluated using a mouse tumor model other than the Snail positive tumor bone metastasis model.
  • the efficacy of the anti-FSTL1 antibody was evaluated using a cancer-bearing model of BALB / c mice of a different strain from C57BL / 6, which has been used so far. Only the amount of tumor transplantation, the timing of antibody administration, and the timing of the assay were changed.
  • Day 0 implantation of tumor cells (subcutaneously 5x10 5 pieces and intravenous 5x10 5 pieces) Day 4, 7: Intraperitoneal antibody administration (10mg / kg) Day 14: Evaluation of drug efficacy (subcutaneous tumor growth (FIG. 14A), lung metastasis (FIG. 14B)) Lung metastases were macroscopically counted for the number of tumor nodules in the lung. Mouse tumor volume was measured 7, 11, 14 days after tumor implantation.
  • Anti-FSTL1 antibody (# 6-55) extremely suppressed the growth and lung metastasis of CT26 subcutaneous tumor, solid tumor disappeared in 3 out of 5 mice, and the number of lung metastasis nodules was very small ( Control antibody group average 14 vs. anti-FSTL1 antibody group approximately 0-3). From this result, data indicating that not only metastasis to “bone” but also metastasis to “lung” was also shown, and thus it is understood that the antibody of the present invention is generally effective for cancer metastasis.
  • Example 21 Evaluation of antibody activity in vivo-breast cancer model>
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibody was evaluated using a mouse breast cancer 4T1 cell transplantation model.
  • the experiment was performed according to Examples 17 to 20, and the experimental procedure and method were basically the same as the bone metastasis model experiment of Examples 17 to 20. Efficacy was evaluated using mouse tumor models other than Snail positive tumor bone metastasis model. In addition, the efficacy of anti-FSTL1 antibody was evaluated using a tumor bearing model of BALB / c mice of a different strain from C57BL / 6 which has been used so far. The changes are as follows.
  • Example 22 Evaluation of antibody activity in vivo-melanoma B16-10>
  • the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse melanoma B16-F10 is shown.
  • Example 23 Evaluation of antibody activity in vivo-lymphoma>
  • efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse lymphoma EL4 is shown.
  • anti-FSTL1 antibody was evaluated using mouse lymphoma EL4, which is one of the cancer types with enhanced FSTL1 expression, according to Examples 17-20.
  • subcutaneous tumor growth was strongly suppressed by administration of anti-FSTL1 antibody (# 6-55).
  • anti-FSTL1 antibody # 6-55
  • subcutaneous tumors showed very aggressive growth compared to other tumor models, but anti-FSTL1 antibody administration was still significantly suppressed compared to the control antibody administration group.
  • the ability to demonstrate efficacy in lymphoma which is one of FSTL1 highly expressing cancer types along with breast cancer, is very useful data for clinical trial development.
  • Example 24 Evaluation of antibody activity in vivo-melanoma B16-10, subcutaneous implantation>
  • the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse melanoma B16-F10 is shown.
  • Example 17 The evaluation was performed according to Examples 17 to 20, and the efficacy of the anti-FSTL1 antibody was evaluated in the same test system as in Example 22. However, only subcutaneous transplantation was performed this time in order to evaluate clearer reactivity.
  • Example 25 Treg induction inhibitory activity of anti-FSTL1 antibody using human peripheral blood cells>
  • Treg induction inhibitory activity of anti-FSTL1 antibody was evaluated using human peripheral blood cells.
  • PBMC blood was collected, layered on ficoll (specific gravity 1.090), centrifuged (1500 rpm, 20 minutes, room temperature), and the cell fraction present in the intermediate layer was expressed as “ Used as “PBMC”.
  • Antibody (5 ⁇ g / mL) was added to a system in which these PBMCs (1 ⁇ 10 6 ) were stimulated for 3 days with FSTL1 (5 ng / ml) in a 24-well plate. PBMCs recovered from the culture system were incubated for 1 hour at 4 ° C.
  • FIG. 19 presents a table summarizing these data and results.
  • ⁇ , ⁇ , and ⁇ are statistically significant, showing a decrease of 30% or more, a decrease of 10% to 30%, and a decrease of less than 10%, respectively.
  • X indicates that there was no statistically significant difference.
  • Treg was significantly increased by FSTL1 stimulation, and it was found that it was significantly suppressed by addition of antibody # 6-55 of the present invention (Exp.1 and Exp.2, The difference from 3 is due to the difference in peripheral blood donors).
  • the R & D antibody R & D Systems, Cat. No.
  • MAB1694, clone 229007) which is a known antibody, hardly inhibited, and again, the superiority of the antibody # 6-55 of the present invention was confirmed. From the above results, it was shown that antibody # 6-55 of the present invention can be remarkably inhibited with respect to Treg induction induced by FSTL1.
  • Example 26 Effect of anti-FSTL1 antibody on proliferation ability and invasive ability of various human tumor cells>
  • the effect of anti-FSTL1 antibody on the proliferation ability and invasive ability of various human tumor cells, the action of anti-FSTL1 antibody under FSTL1 stimulation, and the action of anti-FSTL1 antibody on Snail forced expression cells were examined.
  • pancreatic cancer cell line Panc1 (ATCC # CRL-1469), its Snail forced expression cell line Panc1-snail +, pancreatic cancer cell line MIAPaCa (ATCC # CRL-1420), bone metastatic breast cancer cell line MDA231 (ATCC) # HTB-26) and melanoma cell line Hs294T (ATCC # HTB-140) are cultured in 1x10 5 each, anti-FSTL1 antibody (# 6-55,5 ⁇ g / ml) or control antibody (aHema: mouse chimeric anti-hemagglutinin) Antibody, 5 ⁇ g / ml) was added and the cells were cultured for 3 days, and the cell proliferation ability was evaluated by counting the number of cells in one culture system.
  • anti-FSTL1 antibody # 6-55,5 ⁇ g / ml
  • control antibody aHema: mouse chimeric anti-hemagglutinin
  • FSTL1 does not significantly affect / contribute to tumor growth, but by adding anti-FSTL1 antibody together with FSTL1, Cell proliferation was reduced.
  • FSTL1 has also been reported to enhance the invasion ability, but it has been clarified that the action is canceled (FIG. 20B).
  • Anti-FSTL1 antibody action on Snail forced expression cells Using the Snail forced expression cell line Panc1-snail + instead of the FSTL1-stimulated tumor cells in the previous section, anti-FSTL1 antibody (# 6-55, 5 ⁇ g / ml) or control antibody (aHema, 5 ⁇ g / ml) is present in the chamber. Cell invasion was evaluated. The result was very similar to the result in the previous section, and inhibitory activity was confirmed for 6-55 (FIG. 20C)).
  • Panc1-snail + cells were cultured for 3 days with the above-mentioned antibody added, and then the expression of CCR2 and RANKL was analyzed by flow cytometry from molecules known as bone metastasis markers.
  • both CCR2 and RANKL are strongly suppressed by the anti-FSTL1 antibody, and it is speculated that the anti-FSTL1 antibody has an inhibitory activity against cell invasion (FIG. 20D).
  • Example 27 MSC induction inhibition test using mouse bone marrow cells>
  • the inhibitory activity of anti-FSTL1 antibody was confirmed in a mesenchymal stem cell induction experiment system, and not only FSTL1 but also FSTL1 inhibitory effect on MSC increase induced by Snail + tumor cells was evaluated.
  • C57 / BL / 6 mouse-derived bone marrow cells were stimulated with FSTL1 (20 ng / mL) or tumor cell culture supernatant, and each antibody (10 ⁇ g / mL) was added for stimulation for 8 days.
  • Example 14 cell fraction CD45 ( ⁇ ) cells (MSC) containing MSC at a high rate and CD45 ( ⁇ ) CD146 (+) ALCAM (+) cells (sMSC) that increase with cancer metastasis were used in Example 14. Similarly, analysis was performed by flow cytometry, and the number of cells per culture system was counted. In this example, mouse immunoglobulin (# 401408, Cone MG1-45) manufactured by BioLegend was used as a control antibody.
  • Example 28 Treg induction inhibition test using mouse spleen cells>
  • three types of newly prepared anti-FSTL1 antibodies having different epitopes were evaluated for inhibitory activity against Treg induction in a mouse system.
  • Example 17 An experiment was performed according to Example 17. Specifically, spleen cells derived from C57 / BL / 6 mice (2x10 6 ) were stimulated with 5 ng / ml of FSTL1, 5 ⁇ g / mL of each antibody was added and cultured for 3 days, and CD4 + as Treg cells. The percentage (%) of Foxp3 + CTLA4 + cell fraction in T cells was analyzed by flow cytometry, and the activity was compared with # 6-55 studied so far.
  • Example 29 Inhibitory activity on mouse tumor activation for three newly prepared anti-FSTL1 antibodies with different epitopes>
  • three newly produced anti-FSTL1 antibodies with different epitopes were evaluated for inhibitory activity against mouse tumor activation.
  • Mouse Snail forced expression melanoma cell line F10-snail + was added with 5 ⁇ g / ml of anti-FSTL1 antibody or control antibody (anti-DNP antibody) and cultured for 3 days, and changes in the properties of tumor cells were analyzed by various assays.
  • the cell adhesion ability was evaluated by counting the number of cells adhering to the plate after culturing for 2 hours using a Fibronectin-coated plate.
  • the cell invasion ability was evaluated by counting the number of cells permeating the membrane after 4 hours of culture using a Matrigel-coated transwell chamber.
  • the expression of typical molecular markers CCR2 and RANKL was analyzed by flow cytometry.
  • Example 30 Comparison of in vivo drug efficacy of anti-immunogenic drug antibody and anti-FSTL1 antibody already used clinically using Snail + tumor bone metastasis model> Intratumoral administration of anti-CTLA4 antibodies and other immunodepressants has been attracting attention because it can directly improve the immunosuppressive environment in tumors that favor cancer cells and effectively enhance antitumor immunity ( Clin Cancer Res 20: 1747, 2014). Therefore, using the Snail + tumor bone metastasis model, we compared the in vivo drug efficacy of anti-immunogenic drug antibodies and anti-FSTL1 antibodies already in clinical use.
  • CD4 + T cells CD45 + CD3 + CD4 + ; FITC-labeled anti-CD3 antibody, PE-labeled anti-CD4 antibody, Cy5 label
  • Anti-CD45 antibodies both BD
  • tumor-specific CD8 + T cells CD45 + CD8 + Tetramer + ; BD FITC-labeled anti-CD8 antibody, MBL PE-labeled Tetramer, Cy5-labeled anti-CD45 antibody
  • activation NK cells CD45 + NK1.1 + NKG2D + ; FITC-labeled anti-NK1.1 antibody, PE-labeled anti-NKG2D antibody, Cy5-labeled anti-CD45 antibody, BD
  • immunosuppressive T cells CD45 + CD4 + FOXP3 + Tregs: FITC
  • NK cells are the main effector cells of the innate immune system, like MSCs, and have been reported as the cells most susceptible to the inhibitory action by MSC cells. Therefore, it is presumed that the number and function of NK cells were greatly improved / enhanced, presumably because MSCs were drastically decreased by administration of FSTL1 antibody.
  • the anti-tumor effector cell group increased in all treatment groups, but when looking at the immunosuppressive cell group, Treg and MDSC were found in the tumors of the existing antibody drug administration group. In contrast, the increase in MDSC was particularly noticeable in the CTLA4 antibody administration group and the PDL1 antibody administration group (Fig. 24-3). In addition, CTLA4 antibody could not suppress the increase in Treg in the spleen, and further increased CD8 + Treg (Fig. 24-4). This may be a rebound effect after days after administration, or a feedback phenomenon where other immunosuppressive cell groups try to compensate for the decreased CD4 + Treg.
  • tumor cells are stimulated by cytokines released by infiltrated immune cells, and EMT sputum may be induced, so changes on the tumor cell side were also confirmed.
  • Snail / CD44 expression which is a major EMT marker.
  • the tumor cells used for transplantation were originally Snail + CD44 +, but tumor cells isolated from subcutaneous tumors showed a subpopulation fraction in which their expression intensity was further enhanced. (Fig. 24-3). This denovo EMT was particularly prominent in the CTLA4 antibody administration group and the PDL1DL antibody administration group in which MDSC ⁇ ⁇ increased and bone metastasis worsened.
  • CTLA4 antibody and PDL1 antibody can certainly mobilize members that enhance anti-tumor immunity into the tumor and suppress tumor growth, but the increase in immunosuppressive cell population and de novoEMT on the tumor cell side, etc. Therefore, systemic anti-tumor immunity is not improved, and as a result, it is presumed that bone metastasis could not be sufficiently inhibited.
  • the PD1 antibody does not show any significant weakness in the data, but it is thought that the bone metastasis amount and sMSC amount are caused by the extremely drastic decrease in the number of bone marrow cells. That is, when bone marrow cells of the PD1 antibody administration group were cultured, many tumor cells formed colonies as in the CTLA4 antibody administration group.
  • CTLA4 antibody was found to effectively mobilize anti-tumor effector cells within the tumor in this intratumoral administration compared to systemic administration.
  • the FSTL1 antibody has a high effect of suppressing the bad part, the effect of mobilizing anti-tumor effector cells is not so high.
  • Example 31 Mouse lung cancer model>
  • the efficacy was evaluated using a mouse lung cancer model in anticipation of developing an anti-FSTL1 antibody as a lung cancer therapeutic agent.
  • Example 32 Evaluation of in vivo drug efficacy of anti-FSTL1 antibody-specific clones>
  • four types of new clone antibodies # 7, # 10, # 13, # 33
  • # 6-55 As a positive control.
  • In vivo therapeutic effects were compared and evaluated.
  • the treatment effect is further enhanced by removal.
  • the FSTL1 inhibition treatment of the present invention seems to exert an antitumor effect by mobilizing not only CD8 + cells but also various immune cells. This is because FSTL1 and MSCs amplified by FSTL1 act as the most upstream key factor in cancer-related abnormal immune mechanisms. This is thought to be the result of turning to anti-tumor direction.
  • the concept from the beginning of development can be reconfirmed, and the anti-FSTL1 antibody of the present invention is significantly different from the conventional immunomodulator, and it is a new one that can improve the whole host immunity from the ground up and appropriately activate Expected to be a cancer drug.
  • FSTL1 causes MSC differentiation induction inhibition and immunosuppressive cell group (MDSC, Treg) inhibition causes activation of the anti-tumor immune cell group.
  • MDSC immunosuppressive cell group
  • Treg immunosuppressive cell group
  • Example 33 Characterization of mouse chimera>
  • the affinity of the produced mouse chimeric antibody for human FSTL1 antigen was measured.
  • Mouse chimeric antibody was immobilized on Sensor Chip CM5 (GE Healthcare, BR-1005-30) using Mouse Antibody Capture Kit (GE Healthcare, BR-1008-38), and affinity for human FSTL1 was measured using Biacore T-200 (GE (Healthcare).
  • the vertical axis represents the amount of antigen bound to the antibody
  • the horizontal axis represents the amount of antigen dissociated from the antibody.
  • the antigen concentration was adjusted to 0 to 20 ⁇ g / ml, and the KD value was calculated (Table). 35-2). As a result, it was shown that # 7, # 10, # 33, etc. including clones # 6-55, # 7-34, and # 13 have strong affinity even in the measurement system using surface plasmon resonance.
  • Example 34 Development of humanized antibody and affinity measurement> ⁇ Affinity of humanized antibody: measured with Biacore T-200> In this example, a humanized antibody was developed, and the affinity of the developed antibody for human FSTL1 was measured.
  • H chain (1) is sometimes referred to as H (1), H1, etc., but all refer to the same clones: H chain (2), H chain (3), L chain The same applies to (1), (2), and (3).
  • the full-length sequence of the H (1) heavy chain is shown in SEQ ID NOs: 192 and 193 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively) for IgG1 type, and in SEQ ID NOs: 198 and 199 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively).
  • the synthesized variable region gene is amplified by PCR, then treated with restriction enzymes, and a light chain or heavy chain expression cassette vector (restriction enzyme-treated vector) containing a chicken antibody leader sequence and human IgG1 constant region Introduced.
  • a light chain or heavy chain expression cassette vector (restriction enzyme-treated vector) containing a chicken antibody leader sequence and human IgG1 constant region Introduced.
  • a total of nine types of combinations of the expression vectors of H chain (1) to (3) and L chain (1) to (3) of each constructed clone were introduced into HEK293 cells, and protein A Sepharose was used from the culture supernatant.
  • the humanized antibody was purified.
  • the humanized clone of H (2) -L (1) showed an order of magnitude higher than the other
  • ELISA> The binding activity of the purified antibody of IgG type humanized # 6-55H chain (2) + L chain (1) to human FSTL1 and mouse FSTL1 was confirmed by ELISA (FIG. 30). From the results of FIG. 30, it was confirmed that the antibody of the present invention has the same binding activity against human FSTL1 and mouse FSTL1, and possesses activity against human FSTL1.
  • SEQ ID NO: 1 nucleic acid sequence of human FSTL1
  • SEQ ID NO: 2 amino acid sequence of human FSTL1
  • SEQ ID NO: 3 nucleic acid sequence of mouse FSTL1
  • SEQ ID NO: 4 amino acid sequence of mouse FSTL1
  • SEQ ID NO: 5 light chain variable of antibody clone # 5-2
  • SEQ ID NO: 6 amino acid sequence of light chain variable region of antibody clone # 5-2
  • SEQ ID NO: 7 nucleic acid sequence of heavy chain variable region of antibody clone # 5-2
  • SEQ ID NO: 8 antibody clone # 5-2
  • SEQ ID NO: 10 amino acid sequence of the light chain variable region of antibody clone # 5-3
  • SEQ ID NO: 11 antibody clone # 5-3 heavy chain variable region nucleic acid
  • the present invention relates to a therapeutic combination drug for malignant tumors and the like. [Background technology]
  • Immunosuppression has become known as the cause of cancer worsening. Development is underway as releasing immune suppression leads to effective treatment of cancer.
  • Patent Document 1 a molecule related to immune suppression release was reported. Although research on FSTL1 has progressed to some extent (Non-Patent Documents 1 and 2), there are still many unclear points about its functions.
  • Non-patent document 3 Andaloussi and Lesniak Neuro-Oncology 8, 234-243, 2006).
  • Non-patent document 5 Wolf et al. Clin. Cancer Res. 9, 606-612, 2003
  • Non-patent Document 3 Andaloussi and Lesniak Neuro-Oncology 8, 234-243, 2006
  • Reference 12 Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007).
  • Patent Document 1 International Publication No. WO2009 / 028411 [Non-patent literature]
  • Non-Patent Document 1 Cancer Research 73 (20); 6185-93, 2013 [Non-Patent Document 2] OncoImmunology 2:11, e26528, 2013 [Non-Patent Document 3] Andaloussi and Lesniak Neuro-Oncology 8, 234-243, 2006 [Non-Patent Document 4] Ichihara et al. Clin. Cancer Res. 9, 4404-4408, 2003 [Non-Patent Document 5] Wolf et al. Clin. Cancer Res. 9, 606-612, 2003 [Non-Patent Document 6] Hicky et al. Semin. Immunol. 11, 125-137, 1999 [Non-Patent Document 7] Liyanage et al. J. Immunol.
  • Non-patent document 8 Sasada et al. Cancer 98, 1098-1099, 2003 [Non-patent document 9] Woo et al. Cancer Res. 61, 4766-4772, 2001
  • Non-Patent Document 10 Sakaguchi et al. Immunol. Rev. 182, 18-32, 2001
  • Non-Patent Document 11 Turk et al. Immunol. Rev. 188, 122-135, 2002
  • Non-Patent Document 12 Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007 [Summary of Invention] [Means for solving problems]
  • FSTL1 is a more promising target for canceling immunosuppression, and that cancer-related mesenchymal stem cells that induce immunosuppression that inhibition of FSTL1 activity is thought to contribute to cancer progression (MSC) induction and proliferation, as well as the acquisition of metastasis of cancer cells, especially the acquisition of bone metastasis, and has been found to have a remarkable effect in eliminating cancer, thereby completing the present invention. It was.
  • MSC cancer progression
  • FSTL1 can induce MSCs that induce immunosuppressive cells such as regulatory T cells, regulatory dendritic cells, tolerant dendritic cells, and bone marrow-derived immunosuppressive cells. It was.
  • the present invention enables cancers from in vivo more effectively than conventional methods by both “inhibition of MSCs that induce immune disruption such as immunosuppression or immunodeficiency” and “inhibition of metastasis of cancer cells”. It should be noted that it is expected to be eliminated. Based on this finding, the present inventors have further developed and found that there is an unexpectedly significant therapeutic effect by combining anti-FSTL1 antibody and anti-PD-L1 antibody, thereby completing the present invention.
  • the present invention provides the following: (1) A combination of an anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, and an anti-PD-L1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody has an epitope in a region selected from the group consisting of amino acids 148 to 170, 193 to 228, and 233 to 289 of SEQ ID NO: 250 (amino acid sequence of human FSTL1). The combination according to 1.
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 279; heavy chain: SEQ ID NO: 281), # 8- 1 (light chain: SEQ ID NO: 283; heavy chain: SEQ ID NO: 285), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 315; heavy chain: SEQ ID NO: 317) of an antibody selected from the group consisting of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light The combination according to item 1, comprising the chain CDR3.
  • the anti-FSTL1 antibody comprises antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 279; heavy chain: SEQ ID NO: 281), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 283; heavy chain: SEQ ID NO: 285), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain)
  • Item 4 The item 1, wherein the entire variable region of an antibody selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 309) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 315; heavy chain: SEQ ID NO: 317) is included.
  • the anti-FSTL1 antibody comprises antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 365; heavy chain: SEQ ID NO: 367), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 369; heavy chain: SEQ ID NO: 371), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 373; heavy chain: SEQ ID NO: 375), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 389; heavy chain: SEQ ID NO: 391), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 397; heavy chain) Or any one of items 1 to 4, comprising the full length of an antibody selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 399) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 405; heavy chain: SEQ ID NO: 407) or a humanized sequence thereof.
  • the anti-PD-L1 antibody comprises any one of items 1 to 6, comprising heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 of antibody Clone 10F.9G2 A combination according to item.
  • An inhibitor of enhancement of immune disruption of mesenchymal stem cells comprising the combination according to any one of items 1 to 9.
  • the enhancement of the immune failure may be performed by proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency suppressive activity, and immunosuppressive activity or The inhibitor according to item 16, comprising at least one of immunosuppressive activity or acquisition of immunodeficiency activity of MSC cells having no immunodeficiency activity.
  • An inhibitor of acquisition and / or enhancement of immune disruption activity of immune-related cells comprising the combination according to any one of items 1 to 9.
  • Acquisition and / or enhancement of the immune disruption activity of the immune-related cells may be achieved by proliferation of regulatory T cells, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory T cells, differentiation into regulatory T cells, regulatory dendritic cells Proliferation, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory dendritic cells, differentiation into regulatory dendritic cells, proliferation of tolerant dendritic cells, enhancement of immunosuppressive activity of tolerant dendritic cells, to tolerant dendritic cells Differentiation, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells, enhancement of immunosuppressive activity of bone marrow-derived immunosuppressive cells, differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, proliferation of exhausted T cells, enhancement of immunodeficiency activity of exhausted T cells
  • the inhibitor according to item 16 comprising at least one
  • An anticancer agent comprising an anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein the anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof is an anti-PD-L1 antibody, a fragment thereof or An anticancer agent characterized by being administered in combination with a functional equivalent.
  • 22A The anticancer agent according to item 22, wherein the anticancer agent comprises one or more features according to any one of items 1 to 21.
  • An anticancer agent comprising an anti-PD-L1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein the anti-PD-L1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof is an anti-FSTL1 antibody, or a An anticancer agent, wherein the anticancer agent is administered in combination with a fragment or a functional equivalent.
  • the present invention also provides the following.
  • A1 A combination of an FSTL1 inhibitor and a PD-L1 inhibitor.
  • the FSTL1 inhibitor and the PD-L1 inhibitor are each independently an antibody, an antigen-binding fragment thereof, a derivative thereof, a functional equivalent, an antisense nucleic acid, an siRNA, an aptamer, and a ribozyme, and A combination according to item A1, selected from the group consisting of:
  • the above-mentioned FSTL1 inhibitor is an anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof
  • the PD-L1 inhibitor is an anti-PD-L1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, Item A1 or A combination according to A2.
  • the anti-FSTL1 antibody is a group consisting of amino acid positions 48 to 100, 148 to 162, 193 to 216, 205 to 228, and 272 to 289 of SEQ ID NO: 250 (amino acid sequence of human FSTL1).
  • the antibodies are antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 279; heavy chain: SEQ ID NO: 281), # 8- 1 (light chain: SEQ ID NO: 283; heavy chain: SEQ ID NO: 285), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain: SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 315; heavy chain: SEQ ID NO: 317) of the antibody heavy chain CDR1 A combination according to any one of items A3-A5, comprising: heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3.
  • the anti-FSTL1 antibody comprises antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 279; heavy chain: SEQ ID NO: 281), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 283; heavy chain: SEQ ID NO: 285), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain) : SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 315; heavy chain: SEQ ID NO: 317)
  • the anti-FSTL1 antibody comprises antibodies # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 365; heavy chain: SEQ ID NO: 367), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 369; heavy chain: SEQ ID NO: 371), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 373; heavy chain: SEQ ID NO: 375), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 389; heavy chain: SEQ ID NO: 391), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain) : SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 397; heavy chain: SEQ ID NO: 399) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 405; heavy chain: SEQ ID NO: 407) of an antibody selected from the group consisting of The combination according to any one of items A3-A7, comprising the full length or a humanized sequence thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody is a humanized antibody and comprises H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424, respectively) and L chain.
  • Item 10. The combination according to any one of items A3 to A9, having FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 434, 436, 438 and 440, respectively).
  • the anti-PD-L1 antibody has the ability to inhibit the binding of PD-L1 and PD-1, items A3 to A10 A combination according to any one of the above.
  • the anti-PD-L1 antibody comprises the heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 of antibody Clone MIH5 or Clone 10F.9G2 A combination according to any one of the above.
  • A13 The combination according to any one of items A3 to A12, wherein the anti-PD-L1 antibody comprises the full length of the variable region of the antibody Clone MIH5 or Clone 10F.9G2.
  • A14 The combination according to any one of items A3 to A13, wherein the anti-PD-L1 antibody comprises the full length of the antibody Clone MIH5 or Clone 10F.9G2 or a humanized sequence thereof.
  • a medicament comprising the combination according to any one of items A1 to A14.
  • An anticancer agent comprising the combination according to any one of items A1 to A14.
  • a therapeutic agent for metastatic malignancy comprising the combination according to any one of items A1 to A14.
  • A18 Melanoma, colorectal cancer, breast cancer, lymphoma, lung cancer, prostate cancer, kidney cancer, head and neck cancer, esophageal cancer, gastric cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer comprising the combination according to any one of items A1 to A14
  • a therapeutic agent for at least one disease selected from the group consisting of bladder cancer, cervical cancer, brain central nervous system tumor, sarcoma, leukemia, and multiple myeloma.
  • An inhibitor of cancer cell metastasis comprising the combination according to any one of items A1 to A14.
  • A20 The inhibitor according to Item A19, wherein the metastasis includes bone metastasis or lung metastasis.
  • A21 An inhibitor of enhancement of immune disruption of mesenchymal stem cells (MSC), comprising the combination according to any one of items A1 to A14.
  • the enhancement of the immune breakdown includes the proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency suppressive activity, and immunosuppressive activity or The inhibitor according to item A21 or A22, comprising at least one of obtaining immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having no immunodeficiency activity.
  • A24 An inhibitor of acquisition and / or enhancement of immune disruption activity of immune-related cells, comprising the combination according to any one of items A1 to A14.
  • A25 The inhibitor according to item A24, wherein the immune breakdown includes immunosuppression and immunodeficiency.
  • the acquisition and / or enhancement of the immune disruption activity of the immunity-related cell may be achieved by proliferation of regulatory T cells, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory T cells, differentiation into regulatory T cells, regulatory dendritic cells Proliferation, enhancement of immunosuppressive activity of regulatory dendritic cells, differentiation into regulatory dendritic cells, proliferation of tolerant dendritic cells, enhancement of immunosuppressive activity of tolerant dendritic cells, to tolerant dendritic cells Differentiation, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells, enhancement of immunosuppressive activity of bone marrow-derived immunosuppressive cells, differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, proliferation of exhausted T cells, enhancement of immunodeficiency activity of exhausted T cells And the inhibitor according to item A24 or A25, comprising at least one selected from the group consisting of induction of exhausted T cells.
  • An anticancer agent comprising an FSTL1 inhibitor, wherein the FSTL1 inhibitor is administered in combination with a PD-L1 inhibitor.
  • An anticancer agent comprising an anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein the anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof is an anti-PD-L1 antibody, a fragment thereof or An anticancer agent characterized by being administered in combination with a functional equivalent.
  • An anticancer agent comprising a PD-L1 inhibitor, wherein the PD-L1 inhibitor is administered in combination with an FSTL inhibitor.
  • An anti-cancer agent comprising an anti-PD-L1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, wherein the anti-PD-L1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof is an anti-FSTL1 antibody, or a An anticancer agent, wherein the anticancer agent is administered in combination with a fragment or a functional equivalent.
  • the present invention relates to immunosuppressive or immunodeficiency such as regulatory T cells (Treg) and bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) that act directly on cancer cells by inhibiting FSTL1 or suppress immunity.
  • immunosuppressive or immunodeficiency such as regulatory T cells (Treg) and bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) that act directly on cancer cells by inhibiting FSTL1 or suppress immunity.
  • Inhibiting proliferation and differentiation induction of mesenchymal stem cells (MSC) that promotes differentiation induction, proliferation, and / or enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of sex cells, and effects cancer cell metastasis indirectly Suppresses cancer metastasis, which is considered difficult to suppress, particularly bone metastases for which no effective treatment has been established.
  • the present invention provides a cancer therapeutic agent that is effective over many aspects.
  • the present invention also provides a wide range of immunosuppression releasing agents or immunodeficiency releasing agents.
  • the immunosuppressive releasing agent or immunodeficiency releasing agent of the present invention does not remove or inhibit the function of some immunosuppressive cell populations such as regulatory T cells and regulatory dendritic cells, Since it is widely released from the restriction of the inhibitor releasing agent and has an effect on exhausted T cells, it has an immune deficiency releasing effect and is also useful as an immune failure releasing agent for releasing immune failure.
  • the present invention has found that these effects on the inhibition of FSTL1 have a more remarkable effect by combining with the inhibition of PD-L1. Specifically, inhibition of FSTL1 and inhibition of PD-L1 unexpectedly showed a synergistic effect, enhanced antitumor effect, and synergistic effect that subcutaneous tumor disappeared in 2 out of 5 animals. The above effects were shown. [Brief description of drawings]
  • FIG. 31 is a graph showing binding activity to FSTL1 for the antibody of the present invention (Example 2).
  • FIG. 31A shows the evaluation of the binding activity of the clone obtained from the initial screening to human FSTL1 by ELISA.
  • White diamond is clone # 5-2
  • x is clone # 5-4
  • black triangle is clone # 5-8
  • white circle is clone # 5-10
  • white square is clone # 5-43
  • white triangle is clone # 6- 55
  • black circles indicate clone # 7-34
  • black squares indicate anti-dinitrophenyl (DNP) antibody as a control.
  • DNP anti-dinitrophenyl
  • FIG. 31B investigates cross-reactivity between mice and humans.
  • the binding activity of clones that also showed reactivity to mouse FSTL1 at the time of screening was evaluated.
  • the left shows the binding activity to human FSTL1
  • the right shows the binding activity to mouse FSTL1.
  • Both # 6-55 and # 7-34 showed strong binding activity to human and mouse FSTL1.
  • the antibody concentration was diluted from 1000 ng / ml.
  • FIG. 32 the experiment was performed by further diluting the concentration.
  • FIG. 32 shows the evaluation of the binding activity of human clones obtained by mid-term screening to human FSTL1 by ELISA (Example 2).
  • White squares represent clone # 6-55
  • white triangles represent clone # 8-1
  • black circles represent clone # 8-4
  • black triangles represent clone # 8-7
  • white diamonds represent clone # 8-8.
  • the assay is performed together with # 6-55.
  • the strength of the binding activity was clones # 6-55, # 8-1, # 8-7>#8-4># 8-8.
  • the antibody concentration in FIG. 32 was diluted from 125 ng / ml.
  • FIG. 33 is a graph showing the binding activity of clones obtained by panning using mouse FSTL1 (Example 2).
  • the right side and left side of FIG. 33A and the right side and left side of FIG. 33B are evaluated at the same time. However, since the number of clones is large, the figure is divided into two parts with emphasis on the ease of viewing the figure.
  • FIG. 33A shows the evaluation of the binding activity to human FSTL1 by ELISA, including clones (# 7, # 10, # 13, # 22, # 33) obtained by panning using mouse FSTL1.
  • white square is clone # 5-8
  • white triangle is clone # 6-55
  • black circle is clone # 7-34
  • black triangle is clone # 8-1
  • white diamond is clone # 8-4
  • black square Indicates an anti-DNP antibody.
  • the white square indicates clone # 7
  • the white triangle indicates clone # 10
  • the black circle indicates clone # 13
  • the black triangle indicates clone # 22
  • the white diamond indicates clone # 33
  • the black square indicates an anti-DNP antibody.
  • the strength of the binding activity to human FSTL1 is # 6-55, # 7-34, # 13># 8-1, # 10>#8-4># 7, # 33>#5-8># 22 there were.
  • FIG. 33B shows the evaluation of the binding activity of the above clones to mouse FSTL1 by ELISA.
  • white square is clone # 5-8
  • white triangle is clone # 6-55
  • black circle is clone # 7-34
  • black triangle is clone # 8-1
  • white diamond is clone # 8-4
  • black square Indicates an anti-DNP antibody.
  • the white square indicates clone # 7
  • the white triangle indicates clone # 10
  • the black circle indicates clone # 13
  • the black triangle indicates clone # 22
  • the white diamond indicates clone # 33
  • the black square indicates an anti-DNP antibody.
  • the strength of binding activity to mouse FSTL1 was # 6-55, # 7-34, # 10, # 13>#22>#7>#33># 8-1.
  • # 8-1 shows some binding activity.
  • # 5-8, # 8-4, anti-DNP antibody did not show any binding activity.
  • the antibody concentration in FIG. 33 was diluted from 100 ng / ml. Based on the results of the binding activity by ELISA and in vitro evaluation, promising clones to be used for in vivo evaluation were narrowed down (# 6-55, # 7-34, # 8-1). Furthermore, clones (# 7, # 10, # 13, # 22, # 33) obtained by new panning were also subjected to in vivo evaluation.
  • FIG. 34 shows deletion mutants (deletion mutants) and putative epitopes (Example 3).
  • the upper part of FIG. 34 shows a schematic diagram of human FSTL1 and the position of the defect site. The estimated site of the epitope of each clone was identified by ELISA using these human FSTL1 deletions as antigens.
  • the lower part of FIG. 34 shows a comparison between the obtained clones and the putative epitopes of R & D Systems rat anti-FSTL1 antibody evaluated in Examples of Patent Document 1 (WO2009 / 028411). Furthermore, clones (strong binding activity; ⁇ , weak binding activity; ⁇ ) showing cross-reactivity to humans and mice were described.
  • FIG. 35 shows the results showing the effects of FSTL1 on mesenchymal stem cells (MSC) and bone metastasis (Examples 6 to 7).
  • FIG. 35A shows the effect of an antibody on the induction effect of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells by FSTL1 (Example 6).
  • the clones shown in the graph are shown from the left, the control antibody (anti-DNP antibody) is the third from the right, the antigen is the second, and the sample to which nothing is added is the right.
  • all antibody clones showed inhibitory activity on the action of FSTL1.
  • clones # 5-3, # 5-8 and # 7-34 showed higher inhibitory activity and almost completely inhibited the action of FSTL1.
  • 35B shows the effect of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2-positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1 (Example 7).
  • the expression of RANKL and CCR2 was analyzed by flow cytometry, and the number of positive cells was shown in the graph.
  • the clones shown in the graph are shown from the left, the control antibody (anti-DNP antibody) is the third from the right, the antigen is the second, and the sample to which nothing is added is the right. All antibody clones showed inhibitory activity compared to the control antibody (anti-DNP antibody). In particular, clones # 5-3 and # 5-8 show higher inhibitory activity. [FIG. 36-1] FIG.
  • FIG. 36 also shows the results of effects on mesenchymal stem cells and bone metastasis by the inhibition of FSTL1 (Examples 8 to 11).
  • FIG. 36A shows the effect of an antibody on the effect of inducing mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells by FSTL1 (Example 8; FSTL1 concentration was 20 ng / ml at a low concentration).
  • the clones shown in the graph are shown from the right, with the control antibody (anti-DNP antibody) third from the left, the antigen only second, and the leftmost sample with nothing added.
  • FIG. 36B shows the effect of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2-positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1 (Example 9; FSTL1 concentration was 20 ng / ml at a low concentration).
  • RANKL and CCR2 expression was analyzed by flow cytometry among molecules known as bone metastasis markers, and the number of positive cells was shown in the graph.
  • the clones shown in the graph are shown from the right, with the control antibody (anti-DNP antibody) third from the left, the antigen only second, and the leftmost sample with nothing added.
  • FIG. 36C shows the effect of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2 positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1 (Example 10).
  • the clones shown in the graph are shown from the right, with the control antibody (anti-DNP antibody) third from the left, the antigen only second, and the leftmost sample with nothing added. All antibody clones showed inhibitory activity compared to the control antibody (anti-DNP antibody).
  • FIG. 36D shows the effect of antibodies on the induction effect of RANKL and CCR2-positive cells in human pancreatic cancer cell line Panc1 by FSTL1.
  • an antibody dose-dependent test was conducted (Example 11).
  • the expression of RANKL and CCR2 was analyzed by flow cytometry, and the number of positive cells was shown in the graph.
  • Clone # 6-55 showed inhibitory activity compared to the control antibody (anti-DNP antibody), but no antibody dose dependency was observed.
  • FIG. 37 shows the effect of antibodies on the induction effect of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells by FSTL1 (Example 12; FSTL1 concentration used was 20 ng / ml at a low concentration). The ratio of mesenchymal stem cells (MSC), marker CD45 negative cells, was analyzed by flow cytometry, and the ratio and number of cells were shown.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • FIG. 38 shows the activity evaluation of anti-FSTL1 antibody and anti-PD-L1 antibody produced for in vivo use (Example 13). Mouse bone marrow cells are cultured with FSTL1 and each antibody added.
  • CD45 negative cells (MS) with high probability of MSCs
  • MSCs “CD45 negative, ALCAM positive, CD271 positive cells” that increase with cancer metastasis.
  • Middle graph bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) “CD11b positive, Gr1 positive, ALCAM positive cells” (right graph) were analyzed by flow cytometry, and the number of cells was shown. In each graph, nothing is added at the left end, the control antibody is the second from the left, and the anti-PD-L1 antibody is shown on the right, and the four clones in the graph show the respective anti-FSTL1 antibodies. All of these antibodies showed high inhibitory activity as compared with the results so far, indicating that these antibodies produced for in vivo are also appropriate antibodies.
  • FIG. 39A shows the results of conducting the same test as FIG. 38 using another clone (clone described in each graph) (Example 14). Similarly to FIG.
  • FSTL1 and each antibody were added to mouse bone marrow cells and cultured, “CD45 negative cells” (left graph) containing MSC with high probability, MSC “CD45 negative, ALCAM positive, increased with cancer metastasis, CD271 positive cells "(middle graph) and bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC)" CD11b positive, Gr1 positive, ALCAM positive cells "(right graph) were analyzed by flow cytometry, and the number of cells was shown. In each graph, nothing is added at the left end, the control antibody (anti-DNP antibody) is shown second from the left, and the anti-PD-L1 antibody is shown at the right end, and the four clones in the graph show the respective anti-FSTL1 antibodies.
  • FIG. 39B shows the results of analyzing the inhibitory activity of MSC induction having the ability to differentiate into adipocytes. In the graph, nothing is added at the left end, control is the second from the left, and anti-FSTL1 antibody clone is shown.
  • FIG. 40 shows a comparison of the activity with the anti-FSTL1 antibody manufactured by R & D Systems evaluated in the Example of Patent Document 1 (WO2009 / 028411) (Examples 15 to 16).
  • a dose-dependent test was conducted to compare # 6-55 (mouse chimeric antibody) with anti-FSTL1 antibody (rat antibody; labeled R & D) manufactured by R & D Systems, and the effect of FSTL1 as in FIG. The result of having analyzed the inhibitory activity of (Example 15) is shown.
  • FIG. 40A is similar to FIG.
  • mouse bone marrow cells were added with FSTL1 and each antibody and cultured, and “CD45 negative cells” (left graph) containing MSC with high probability, MSC “CD45 negative, “ALCAM positive, CD271 positive cells” (middle graph), bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSC) “CD11b positive, Gr1 positive, ALCAM positive cells” (right graph) were analyzed by flow cytometry, and the number of cells was shown. In each graph, nothing is added at the left end, the mouse control antibody is the second from the left, and the rat control antibody is the third from the left. Two clones show each anti-FSTL1 antibody, and the numerical value shows the amount of antibody used ( ⁇ g / mL).
  • FIG. 40B shows the results of analyzing the inhibitory activity of MSC induction having the ability to differentiate into adipocytes (Example 16). In the graph, nothing is added at the left end, the mouse control antibody is the second from the left, and the rat control antibody is the third from the left. Two clones show each anti-FSTL1 antibody, and the numerical value shows the amount of antibody used ( ⁇ g / mL).
  • the ability to differentiate into adipocytes is one of the functions of cancer-related MSCs (cells also shown in the center cell of FIG. 40A) that induce immunosuppression. From the comparison between FIG. 40A and FIG. 40B, the following can be said. That is, compared with the case where a mouse control antibody (mouse-derived protein) is administered, when a “rat-derived protein” called a rat control antibody is administered into a mouse in vivo, its own reaction is reduced.
  • a mouse control antibody mouse-derived protein
  • FIG. 41 shows in vivo antibody activity evaluation (Example 17). Snail forced expression mouse melanoma cells (B16-F10) were transplanted subcutaneously and intravenously into C57BL / 6N mice. The results of comparative analysis of antitumor effect and immune suppression release effect using bone metastasis model are shown. The test subject anti-FSTL1 antibody was administered into the tumor.
  • FIG. 41A shows the percentage of GFP-positive tumor cells in bone marrow cells analyzed by flow cytometry, and based on this data, the number of GFP-positive tumor cells per mouse The results of counting ( ⁇ 10 6 cells) indicate the effect of various antibodies on bone metastasis (that bone metastasis is suppressed).
  • 41B shows the percentage of CD45 negative cells in bone marrow cells analyzed by flow cytometry, and based on this data, the number of CD45 negative bone marrow cells per mouse ( ⁇ The results of counting 10 6 cells) show the effect of various antibodies on the increase in MSC in the bone marrow (inhibition of the increase in MSC in the bone marrow).
  • the double bar graph from the top, the group to which no treatment, control antibody, clones # 6-55, # 7-34 and # 8-1 were administered is shown.
  • 41C tumor volume by mouse individual is the tumor volume by mouse individual (one mouse is 1 line) measured 7 days, 11 and 14 days after tumor implantation, and the effects of various antibodies on tumor growth (transplanted subcutaneously). Tumor growth is suppressed). From the left, there is no treatment, and a group to which control antibodies, clones # 6-55, # 7-34 and # 8-1 were administered is shown. The numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14). The horizontal axis indicates the number of days. The vertical axis represents the tumor volume (mm3). All three anti-FSTL1 antibodies significantly inhibited the growth of subcutaneous tumors compared to the control antibody.
  • FIG. 41-2 shows in vivo antibody activity evaluation (Example 17). Snail forced expression mouse melanoma cells (B16-F10) were transplanted subcutaneously and intravenously into C57BL / 6N mice. The results of comparative analysis of antitumor effect and immune suppression release effect using bone metastasis model are shown. The test subject anti-FSTL1 antibody was administered into the tumor.
  • FIG. 41D shows changes in the cell population within the spleen. It is suggested that even if the antibody is administered locally within the tumor, it is modified / affected throughout the body. The left shows the number of CD45 negative cells, indicating that MSC is decreased in the spleen. The middle shows the number of CD4-positive Foxp3-positive T cells, indicating that Treg is decreasing.
  • FIG. 42 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 18). In vivo antibody activity evaluation, showing antitumor effect and immune suppression release effect using bone metastasis model in which Snail forced expression mouse melanoma cells (B16-F10) were transplanted subcutaneously and intravenously in C57BL / 6N mice The result of comparative analysis is shown.
  • FIG. 42A left shows the percentage of GFP positive tumor cells in bone marrow cells analyzed by flow cytometry, and based on this data, GFP positive tumor cells per mouse.
  • the result of counting the number shows the effect of various antibodies on bone metastasis (bone metastasis is suppressed).
  • the center of FIG. 42A shows the number of CD45 negative bone marrow cells per mouse based on this data after analyzing the percentage of CD45 ⁇ cells in the bone marrow cells by flow cytometry.
  • the results of counting ⁇ 10 6 cells show the effect of various antibodies on the increase in MSC in the bone marrow (inhibition of the increase in MSC in the bone marrow).
  • the right side (mouse weight) of FIG. 42A shows the effect on the weight change (the mouse is weakened by bone metastasis, but measuring the body weight as one of the indices shows that this is suppressed).
  • 5 graphs of FIG. 42B showing the group treated with no treatment from the top and receiving control antibody, clones # 6-55, # 7-34 and # 8-1, are shown on days 7, 11, 14 of tumor transplantation. It is the tumor volume of each mouse (1 line is 1 mouse) measured later, and shows the effect of various antibodies on tumor growth.
  • FIG. 42 also shows antibody activity evaluation in vivo (Example 18).
  • FIG. 42C shows changes in the cell population within the spleen. The upper left of FIG. 42C is the number of GFP positive tumor cells, and as a result of examining the metastasis into the spleen, it is shown that this was also suppressed.
  • FIG. 43 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 19). This figure shows a comparison of the efficacy of an existing immunosuppressive antibody and anti-FSTL1 antibody using a mouse melanoma Snail forced expression B16-F10 cell transplanted bone metastasis model.
  • FIG. 43A shows the effect of various antibodies on tumor volume over time.
  • each mouse individual (one line is one mouse) measured 8 days, 11 days and 15 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth. From the left, no treatment, control antibody, anti-FSTL1 antibody, anti-CTLA4 antibody, anti-PD-1 antibody and anti-PD-L1 antibody are shown. The numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 15). The horizontal axis indicates the number of days. The vertical axis represents tumor volume (mm 3 ).
  • FIG. 43B shows the effect on bone metastasis (the number of GFP positive cells (10 6 / mouse)), and the center of FIG. 43B shows the effect on the increase of bone marrow MSC (the number of CD45 negative cells ((10 6 / mouse)).
  • 43B shows the effect on body weight change (body weight (g)), all from the top without treatment, control antibody, anti-FSTL1 antibody, anti-CTLA4 antibody, anti-PD-1 antibody, anti-PD-
  • the following existing antibody drug was used as a control antibody: Anti-CTLA4 mAb (Clone 9H10, BioLegend); Anti-PD-1 mAb (Clone 29F.1A12, BioLegend); Anti-PD-L1 mAb (Clone 10F.9G2, BioLegend)
  • MSC mesenchymal stem cells
  • FIG. 44 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 20). This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse colon cancer CT26 cell transplantation model.
  • FIG. 44A shows the effect on tumor growth for all three graphs. Tumor volume measured for individual mice (one mouse is 1 mouse) measured 7 days, 11 days, and 14 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth.
  • the left shows no treatment
  • the center shows a control antibody (anti-DNP antibody)
  • the right shows an anti-FSTL1 antibody (# 6-55).
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • the vertical axis represents tumor volume (mm 3 ).
  • Efficacy was evaluated using mouse tumor models other than Snail + tumor bone metastasis model.
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibodies is evaluated using a cancer-bearing model of BALB / c mice whose strain is different from C57BL / 6 which has been used so far.
  • FIG. 44B shows the results regarding the number of lung metastatic nodules.
  • the center shows a control antibody (anti-DNP antibody), and the right shows an anti-FSTL1 antibody.
  • the vertical axis represents the number of lung metastasis nodules.
  • the vertical axis indicates the standard deviation bar.
  • Anti-FSTL1 antibody (# 6-55) extremely suppressed the growth and lung metastasis of CT26 subcutaneous tumors, solid tumors disappeared in 3 out of 5 mice, and the number of lung metastatic nodules was very small ( The average of the control antibody group was 14 vs. approximately 0-3 for the anti-FSTL1 antibody group).
  • FIG. 45 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 21).
  • This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse breast cancer 4T1 cell transplantation model. All three graphs show the effect on tumor growth. It is the tumor volume of each mouse individual (one line is 1 mouse) measured 4 days, 7 days, 11 days and 14 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth. The left shows no treatment, the center shows a control antibody, and the right shows an anti-FSTL1 antibody (# 6-55).
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • the vertical axis represents tumor volume (mm 3 ).
  • To Day 0 performs implantation of tumor cells (subcutaneously 5x10 5 cells & intravenous 5x10 5 cells), the intraperitoneal administration of antibody (10 mg / kg) on Day4 and 7, efficacy evaluation in Day 14 (the subcutaneous tumor growth) went. Efficacy was evaluated using mouse tumor models other than Snail positive tumor bone metastasis model.
  • FIG. 46A also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 22). This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse melanoma B16-F10. Both graphs in the left panel show the effect on tumor growth. It is the tumor volume of each mouse individual (one line is 1 mouse) measured 6 days, 10 days and 14 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth.
  • the left shows a control
  • the right shows an anti-FSTL1 antibody (# 6-55).
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • the vertical axis represents tumor volume (mm 3 ).
  • FIG. 46B shows the effect on weight change.
  • the left shows a control antibody, the center shows an anti-FSTL1 antibody, and the right shows an untreated individual not receiving tumor cells.
  • the vertical axis shows tumor volume (g).
  • the efficacy of the anti-FSTL1 antibody was evaluated using another cancer-bearing model of the C57BL / 6 mouse system similar to the Snail positive tumor bone metastasis model.
  • FIG. 47 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 23). This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse lymphoma EL4. Both graphs show the effect on tumor growth. Tumor volume measured by individual mice (one mouse per line) measured 3, 6, and 10 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth.
  • the left shows a control antibody and the right shows an anti-FSTL1 antibody.
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • the vertical axis represents tumor volume (mm 3 ).
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibodies was evaluated using mouse lymphoma EL4, one of the cancer types with enhanced FSTL1 expression.
  • subcutaneous tumor growth was strongly suppressed by administration of anti-FSTL1 antibody (# 6-55). In this model, subcutaneous tumors showed very aggressive growth compared to other tumor models, but anti-FSTL1 antibody administration was still significantly suppressed compared to the control antibody administration group.
  • Example 48 also shows in vivo antibody activity evaluation (Example 24).
  • This figure shows the efficacy evaluation of anti-FSTL1 antibody using mouse melanoma B16-F10. All four graphs show the effect on tumor growth. It is the tumor volume of each mouse individual (one line is 1 mouse) measured 6 days, 10 days and 14 days after tumor implantation, and shows the effect of various antibodies on tumor growth. The left end shows the control antibody, the second from the left shows 1 mg / kg anti-FSTL1 antibody, the second from the right shows 3 mg / kg anti-FSTL1 antibody, and the right end shows 10 mg / kg anti-FSTL1 antibody.
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the horizontal axis indicates the number of days.
  • the vertical axis represents tumor volume (mm 3 ).
  • the efficacy of anti-FSTL1 antibody was evaluated in the same test system as the experiment in the diagram of FIG. However, only subcutaneous transplantation was performed this time in order to evaluate clearer reactivity.
  • Anti-FSTL1 antibody administration strongly suppressed subcutaneous tumor growth compared to the control antibody administration group at any of the doses studied, and tumor disappearing mice were observed in the 3 mg / kg administration group and the 10 mg / kg administration group. Efficacious medicinal effects were observed.
  • FIG. 49 shows the effect of combination therapy in vivo. In this figure, the efficacy evaluation in combination therapy with an anti-FSTL1 antibody and an existing drug is shown (Example 25).
  • the top six graphs show the effect of various antibodies on tumor volume over time. From left, control, anti-FSTL1 antibody (half amount 5 mg / kg), anti-FSTL1 antibody (total amount 10 mg / kg), combination of anti-FSTL1 antibody (half amount 5 mg / kg) and anti-CTLA4 antibody (half amount 5 mg / kg), anti-FSTL1 antibody A combination of (half amount 5 mg / kg) and anti-PD1 antibody (half amount 5 mg / kg) and a combination of anti-FSTL1 antibody (half amount 5 mg / kg) and anti-PD-L1 antibody (half amount 5 mg / kg) are shown.
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 13).
  • the lower graph shows the effect on body weight change (body weight (g)) From the top, the following figures show the control, anti-FSTL1 antibody (half amount 5 mg / kg), anti-FSTL1 antibody (total amount 10 mg / kg), anti-FSTL1 antibody (half amount) from the top.
  • anti-FSTL1 antibody Shows the combination of anti-PD-L1 antibody (half amount 5 mg / kg) and naive, whether or not the combined use of immunosuppressive antibody can enhance the efficacy of anti-FSTL1 antibody using Snail + tumor bone metastasis model Consideration
  • the anti-FSTL1 antibody is effective even at the half dose of 5 mg / kg that has been used so far, and compared with the control antibody group in any of the examined items such as subcutaneous tumor growth, bone metastasis, MSC growth, and mouse weight loss.
  • FIG. 49B shows an experimental system containing anti-FSTL1 antibody (# 6-55) of the present invention and a known anti-FSTL1 antibody (R & D Systems, Cat. No. MAB1694, clone 229007) in% CD4 + It is the result of the Treg induction
  • ⁇ , ⁇ , and ⁇ are statistically significant, indicating a decrease of 30% or more, a decrease of 10% to 30%, and a decrease of less than 10%, respectively. ⁇ indicates that there was no statistically significant difference Show.
  • FIG. 50 shows the results of looking at various functions of the anti-FSTL1 antibody.
  • Panel A shows the results of the effect of anti-FSTL1 antibodies on the proliferative and invasive potential of various human tumor cells.
  • the upper panel of panel A shows the results of proliferation and the lower panel shows the results of infiltration. From the left, Panc1, MIAPaCa, MDA231, and Hs294 are shown.
  • the graph shows the number of cells ( ⁇ 10 3 ) after culturing on the 3rd day.
  • the lower panel shows the number of tumor cells treated with the antibody for 3 days. In the top row, none, control IgG, and anti-FSTL1 antibody are shown from the top in each graph.
  • Panel B shows the effect of anti-FSTL1 antibodies under FSTL1 stimulation.
  • the left shows proliferative ability and the right shows invasive ability. None from the left, nothing added (None), the second from the left in the presence of FSTL1 (50 ng / ml), nothing from the left, mouse IgG, anti-FSTL1 antibody (# 6-55) Indicates.
  • Panels C to D show the effect of anti-FSTL1 antibody on Snail forced expression cells.
  • FIG. 51 shows the results of an MSC induction inhibition test using mouse bone marrow cells.
  • CD45 + MSC cells are shown from the left, and CD45 + CD146 + ALCAM + sMSC is shown on the right.
  • FSTL1 (20 ng / ml)
  • antibody # 6- 55, # 7, # 10, # 13, and # 33 are shown.
  • Panel B shows CD45 ⁇ MSC cells, CD45 ⁇ ALCAM + sMSC cells, sphere colonies (self-renewal potential).
  • the left end indicates F10-mock, and the second to right end from the left indicates F10-snail +.
  • the results with no immunoglobulin, mouse immunoglobulin, and anti-FSTL1 antibody are shown in order from the second from the left.
  • the results are shown by the number of cells in the left and middle graphs.
  • the sphere colony indicates the number of colonies. Of the three sphere colonies, the left shows the total number, the middle shows large colonies (> 50 cells), and the right shows small colonies (10-50 cells).
  • FIG. 52 shows the results of a Treg induction inhibition test using mouse spleen cells.
  • the graph shows the percentage of Foxp3 + CTLA4 + cells in CD4 + cells.
  • the left end is nothing, and the second to right end from the left is the experiment in the presence of FSTL (5 ng / ml).
  • Mouse immunoglobulins from the second from the left, antibodies # 6-55, # 7, # 10, and # 33 of the present invention are shown, respectively.
  • FIG. 53 shows the evaluation of inhibitory activity against mouse tumor activation for three newly produced anti-FSTL1 antibodies with different epitopes (# 7, # 10, # 33).
  • Upper left shows cell adhesion
  • upper right shows cell infiltration
  • lower left shows CCR2 expression
  • lower right shows RANKL expression.
  • FIG. 54 (FIGS. 54-1 to 54-4) is a comparison of in vivo drug efficacy of immunodepressant antibody and anti-FSTL1 antibody already in clinical use using Snail + tumor bone metastasis model. This is the result.
  • FIG. 54-1 shows tumor growth in the upper row, bone metastasis in the lower row, sMSC in bone marrow, and sMSC in spleen.
  • FIG. 54-2 shows a group of cells responsible for anti-tumor immunity that has infiltrated into the tumor. From the left, CD4 + T cells (CD45 + CD3 + CD4 + cells), tumor-specific CD8 + T cells (CD45 + CD8 + tetramer + ), activated NK cells (CD45 + NK1.1 + NKG2D + ) are shown. The upper row shows the percentage of positive cells. The lower row shows the number of cells per mm 3 .
  • FIG. 54-3 is the same experiment as FIG. 54-2, and shows the results for the immunosuppressive T cell group infiltrated in the tumor and the highly metastatic tumor cells in the subcutaneous tumor. From left, CD4 + Treg (CD45 + CD4 + Foxp3 + Tregs), MDSCs (CD45 + CD11b + Gr1 + MDSCs), tumor cells giving rise to EMT (Snail + CD44 + tumor) are shown, and the explanation of the graph is shown in FIG. Same as -2.
  • FIG. 54-4 shows the results of immune cell groups in the spleen. From left, tumor-specific CD8 + T cells (CD3 + CD8 + tetramer + CTLs), CD4 + Treg (CD4 + CTLA4 + Foxp + Tregs), CD8 + Treg (CD8 + CTLA4 + Foxp3 + Tregs) are shown. The graph shows the number of cells per spleen (indicated by ⁇ 10 6). From the top, no treatment, control, anti-CTLA4 antibody, anti-PD1 antibody, anti-PD-L1 antibody, and anti-FSTL1 antibody are shown.
  • FIG. 55 shows the results of evaluation of drug efficacy (tumor growth, body weight, and number of sMSCs in bone marrow) using a mouse lung cancer model. For tumor growth, statistical significance is indicated by the p-value.
  • the left is a control and the anti-FSTL1 antibody is shown on the right.
  • the horizontal axis represents the number of days after tumor transplantation, and the vertical axis represents the tumor volume (mm 3 ).
  • the middle graph shows the animal weight. From left, control, antibody FSTL1 antibody and naive are shown. Body weight is expressed in g.
  • the right graph shows sMSC in bone marrow. From left, control, anti-FSTL1 antibody and naive are shown.
  • FIG. 56 to FIG. 57 show the results of in vivo drug efficacy evaluation of clones by anti-FSTL1 antibody using Snail + tumor bone metastasis model.
  • FIG. 56 shows the change in tumor volume (mm 3 ) after tumor implantation. From the left, the results of control immunoglobulin and antibodies # 6-55, # 7, # 10, # 13 and # 33 of the present invention are shown. In both cases, the statistical significance (p value) is shown in parentheses in comparison with the control, and the statistical significance between # 6-55 is shown as a p value connected with a line. The horizontal axis is the number of days after tumor transplantation. [FIG. 57] FIG.
  • FIG. 56 to FIG. 57 show the results of in vivo drug efficacy evaluation of clones classified by anti-FSTL1 antibody using Snail + tumor bone metastasis model.
  • FIG. 57 shows the survival rate.
  • the results of the control immunoglobulin and the antibodies # 6-55, # 7, # 10, # 13 and # 33 of the present invention are shown.
  • # 6-55 is a thin black line
  • # 7 is a gray dashed line
  • # 10 is a thick black solid line
  • # 13 is a gray solid line
  • # 33 is a statistically significant value (p Value), and statistical significance (p value) for # 6-55 is shown in parentheses.
  • FIG. 58 shows affinity data (measured by BIACORE) of mouse chimeric antibody. The figure is a plot of antigen binding and dissociation for mouse chimeric antibodies. .
  • FIG. 59 to FIG. 60 show ELISA results of humanized antibodies.
  • FIG. 59 shows a comparison of the binding activity of the humanized 6-55 antibody by the combination of H chain (IgG1 type) and L chain.
  • the black solid line on the white circle is the humanized antibody H1-L1
  • the black solid line on the square is H2-L1
  • the black solid line on the white triangle is H3-L1
  • the black dotted line is the humanized antibody H1-L2
  • the black triangular line is the black dotted line
  • the results of H2-L2, the black dot on the black circle, H3-L2, the gray solid line on the gray square, the humanized antibody H1-L1, the gray dot on the gray triangle, the H2-L1, the gray line on the gray circle, and the H3-L1 are shown.
  • the value of OD450 is shown on the horizontal axis of antibody concentration. H2-L1 was found to be the best.
  • FIG. 59 to FIG. 60 show ELISA results for humanized antibodies.
  • FIG. 60 shows the binding activity of the antibody humanized # 6-55H2-L1 (IgG1 type) of the present invention to human and mouse FSTL1.
  • the left shows binding activity to human FSTL1 and the right shows mouse FSTL1.
  • Black circles indicate human # 6-55 antibody, and white squares indicate human anti-DNP antibody.
  • the antibody concentration shows the value of OD490 / 630 on the horizontal axis.
  • FIG. 61 shows the results of confirming the reproducibility of the combined effect with an anti-FSTL1 antibody using an anti-PD-L1 antibody of another clone (CloneMIH5, manufactured by BD).
  • This figure shows the evaluation of drug efficacy in combination therapy with anti-FSTL1 antibody and anti-PD-L1 antibody (Example 37).
  • the top four graphs show the effect of various antibodies on tumor volume over time. From left, control, anti-FSTL1 antibody (5 mg / kg), anti-PD-L1 antibody (5 mg / kg), a combination of anti-FSTL1 antibody (5 mg / kg) and anti-PD-L1 antibody (5 mg / kg) are shown.
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the lower panel shows the survival rate.
  • control immunoglobulin The results of control immunoglobulin, antibody # 6-55 of the present invention (antibody FSTL1 antibody), antibody PD-L1 antibody and the combination of anti-FSTL1 antibody and anti-PD-L1 antibody are shown.
  • Statistically significant values (p values) with control immunoglobulin are shown in parentheses and are on the statistically significant (p values) line for antibody FSTL1 antibody.
  • Control IgG is indicated by a black solid line
  • anti-FSTL1 antibody is indicated by a dark black solid line.
  • the anti-PD-L1 antibody is shown by a gray broken line, and the combination shows a thick gray solid line as at the right end.
  • FIG. 62 shows the combined effect of FSTL1 antibody and PD-L1 antibody in the Colon26 lung metastasis model.
  • the upper panel shows mouse immunoglobulin (control), rat immunoglobulin (control), anti-FSTL1 antibody, and anti-PD-L1 antibody combined with each other from the left, and combined with anti-FSTL1 and anti-PD-L1 antibodies on the right. Evaluation of drug efficacy is shown (Example 37, Experiment 2).
  • the vertical axis shows tumor volume.
  • the horizontal axis indicates the number of days after tumor transplantation.
  • the numbers in parentheses and on the line (labeled P) indicate the p-value for statistical significance (day 14).
  • the lower panel shows the survival rate.
  • the vertical axis represents the survival rate
  • the horizontal axis represents the number of days after tumor transplantation.
  • Control rat IgG is indicated by a gray dotted line
  • control mouse IgG is indicated by a thin black solid line
  • anti-FSTL1 antibody is indicated by a dark black solid line.
  • the anti-PD-L1 antibody is shown as a thick gray solid line
  • the combination is shown as a thick gray dashed line at the right end.
  • FSTL1 is a protein that is similar to follistatin and encodes a protein that is an activin-binding protein, includes FS modules contained in a follistatin-like sequence, and contains 10 conserved cysteines. It is said to have a residue. Although it has been considered to be an autoantigen related to rheumatoid arthritis, recent findings are described in Patent Document 1 (WO2009 / 028411).
  • the accession numbers of FSTL1 described in NCBI are, for example, NP_009016 (NP_009016.1); NP_032073.2 (amino acids), NM_007085 (NM_007085.4); NM_008047.5 (mRNA).
  • the amino acid sequence of FSTL1 is, for example, SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252.
  • the base sequence of FSTL1 mRNA is, for example, SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253.
  • the amino acid sequence of FSTL1 is not limited as long as it has FSTL1 activity.
  • the representative nucleotide sequence of FSTL1 is (A) a polynucleotide having the base sequence set forth in SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252 or a fragment sequence thereof; (B) a polynucleotide encoding a polypeptide consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253 or a fragment thereof; (C) In the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253, one or more amino acids are a variant polypeptide or a fragment thereof having one mutation selected from the group consisting of substitution, addition and deletion A polynucleotide encoding a variant polypeptide having biological activity; (D) a polynucleotide which is a splice variant or allelic variant of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252 or a fragment thereof; (E) a polynucleotide encoding a
  • amino acid sequence of FSTL1 As the amino acid sequence of FSTL1, (A) a polypeptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253 or a fragment thereof; (B) In the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253, one or more amino acids have one mutation selected from the group consisting of substitution, addition and deletion, and have biological activity A polypeptide; (C) a polypeptide encoded by a splice variant or allelic variant of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252; (D) a polypeptide that is a species homologue of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253; or (e) at least 70% identity to any one polypeptide of (a)-(d) A polypeptide having an amino acid sequence that is at least 80%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least
  • SEQ ID NOs: 250-253 are precursors containing a leader sequence.
  • the first 20 amino acids (from methionine to alanine) and in SEQ ID NO: 253 the first 18 amino acids (from methionine to glycine) are leader sequences. Therefore, when referring to FSTL1 in the present invention, the amino acid sequence may refer to those after deletion of these leader sequences.
  • An “agent” or “FSTL1 interacting molecule” is a molecule or substance that at least temporarily binds to FSTL1.
  • a therapeutic agent is further bound.
  • substances that bind to FSTL1 include antibodies, antisense oligonucleotides, siRNA, low molecular weight molecules (LMW), binding peptides, aptamers, ribozymes, and peptidomimetics.
  • a substance that binds to FSTL1 or ⁇ FSTL1-interacting molecule may be an inhibitor of FSTL1, e.g. binding protein or binding peptide directed against FSTL1, in particular directed against the active site of FSTL1, Also included is a nucleic acid directed against the FSTL1 gene, which refers to a double-stranded or single-stranded DNA or RNA, or a modification or derivative thereof that inhibits, for example, expression of the FSTL1 gene or activity of FSTL1.
  • binding protein or “binding peptide” for FSTL1 is any binding to FSTL1
  • An antibody eg, polyclonal antibody or monoclonal that refers to a protein or peptide and is directed against FSTL1 Le antibodies), including antibody fragments and functional equivalents without limitation.
  • PDL1 or “PD-L1” is a 40 kDa type 1 transmembrane protein that is used interchangeably and is also called CD274 or B7-H1. It has this name because it also acts as a ligand for PD-1.
  • accession numbers of PD-L1 described in NCBI are, for example, NP_001254635 (amino acid) for humans; NP_068693 (amino acid) for mice, NM_001267706 (mRNA) for humans, and NM_021893 (mRNA) for mice.
  • the amino acid sequence of PD-L1 is, for example, SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252.
  • the base sequence of PD-L1 mRNA is, for example, SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253.
  • the amino acid sequence of PD-L1 is not limited as long as it has PD-L1 activity. Therefore, as long as the specific object of the present invention is met, not only a protein (or a nucleic acid encoding it) having an amino acid sequence described in a specific sequence number or accession number, but also a functionally active derivative thereof , Analogs or variants or functionally active fragments thereof, or homologues thereof, or variants encoded by nucleic acids that hybridize to nucleic acids encoding this protein under high or low stringency conditions It is understood that can also be used in the present invention.
  • the representative nucleotide sequence of PD-L1 is (A) a polynucleotide having the base sequence set forth in SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252 or a fragment sequence thereof; (B) a polynucleotide encoding a polypeptide consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 233 or a fragment thereof; (C) a variant polypeptide or fragment thereof in which one or more amino acids have one mutation selected from the group consisting of substitution, addition and deletion in the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 233; A polynucleotide encoding a variant polypeptide having biological activity; (D) a polynucleotide which is a splice variant or allelic variant of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252 or a fragment thereof; (E) a polynucleotide encoding
  • the biological activity typically means that PD-L1 can be distinguished from other proteins existing in the same organism as the activity or marker.
  • A a polypeptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253 or a fragment thereof;
  • B In the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253, one or more amino acids have one mutation selected from the group consisting of substitution, addition and deletion, and have biological activity A polypeptide;
  • C a polypeptide encoded by a splice variant or allelic variant of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 250 or SEQ ID NO: 252;
  • D a polypeptide that is a species homologue of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253; or (e) at least 70% identity to any one polypeptide of (a)-(d) A polypeptide having an amino acid sequence that is at least 80%
  • the biological activity can typically be distinguished from other proteins present in the same organism as the activity or marker of PD-L1 (for example, function as a specific epitope when used as an antigen) Including a possible area).
  • SEQ ID NOs: 250-253 are precursors containing a leader sequence.
  • the first 18 amino acids from methionine to alanine
  • the amino acid sequence may refer to the amino acid sequence after these leader sequences have been deleted.
  • “substance that binds to PD-L1,” “PD-L1 binding agent,” or “PD-L1 interacting molecule” is a molecule or substance that binds at least temporarily to PD-L1. It is. For detection purposes, preferably it is possible to indicate that it has been bound (eg, labeled or in a labelable state), and for therapeutic purposes, it is further advantageous that a therapeutic agent is further bound.
  • substances that bind to PD-L1 include antibodies, antisense oligonucleotides, siRNA, low molecular weight molecules (LMW), binding peptides, aptamers, ribozymes, and peptidomimetics. .
  • Substance that binds to PD-L1 or “PD-L1 interacting molecule may be an inhibitor of PD-L1, eg directed against PD-L1, especially directed against the active site of PD-L1
  • binding proteins or binding peptides as well as nucleic acids directed against the PD-L1 gene, such as nucleic acids that inhibit PD-L1 gene expression or PD-L1 activity
  • nucleic acids that inhibit PD-L1 gene expression or PD-L1 activity refers to single-stranded or single-stranded DNA or RNA, or modifications or derivatives thereof, and includes but is not limited to antisense nucleic acids, aptamers, siRNA (small interfering RNA) and ribozymes.
  • Binding protein or “binding peptide” for L1 refers to any protein or peptide that binds to PD-L1 and is directed to PD-L1 (eg, a polyclonal antibody or a monoclonal antibody).
  • Le antibodies including antibody fragments and functional equivalents without limitation.
  • a “derivative”, “analog” or “variant” as used herein is preferably, but not intended to be limited, substantially to the protein of interest (eg, FSTL1 or PD-L1). Molecules comprising regions of homology to, in various embodiments, compared to sequences aligned in various embodiments over the same size amino acid sequence or by alignment with computer homology programs known in the art.
  • the nucleic acids that are at least 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% or 99% identical or that encode such molecules (highly) It can hybridize to a sequence encoding a component protein under stringent, moderately stringent, or non-stringent conditions.
  • protein protein
  • polypeptide oligopeptide
  • peptide refers to a polymer of amino acids having an arbitrary length.
  • This polymer may be linear, branched, or cyclic.
  • the amino acid may be natural or non-natural and may be a modified amino acid.
  • the term can also encompass one assembled into a complex of multiple polypeptide chains.
  • the term also encompasses natural or artificially modified amino acid polymers. Such modifications include, for example, disulfide bond formation, glycosylation, lipidation, acetylation, phosphorylation or any other manipulation or modification (eg, conjugation with a labeling component).
  • amino acid is a general term for organic compounds having an amino group and a carboxyl group.
  • amino acid sequence may be chemically modified. Any amino acid in the amino acid sequence may form a salt or a solvate. Further, any amino acid in the amino acid sequence may be L-type or D-type.
  • the protein according to the embodiment of the present invention includes the above-mentioned “specific amino acid sequence”.
  • specific amino acid sequence examples include N-terminal modification (for example, acetylation, myristoylation, etc.), C-terminal modification (for example, amidation, glycosylphosphatidylinositol addition, etc.), or side chain Modifications (for example, phosphorylation, sugar chain addition, etc.) are known. As long as the object of the present invention is satisfied, it may be natural or non-natural.
  • polynucleotide As used herein, “polynucleotide”, “oligonucleotide”, and “nucleic acid” are used interchangeably herein and refer to a nucleotide polymer of any length. The term also includes “oligonucleotide derivatives” or “polynucleotide derivatives”. “Oligonucleotide derivatives” or “polynucleotide derivatives” refer to oligonucleotides or polynucleotides that include derivatives of nucleotides or that have unusual linkages between nucleotides, and are used interchangeably.
  • oligonucleotides include, for example, 2′-O-methyl-ribonucleotides, oligonucleotide derivatives in which phosphodiester bonds in oligonucleotides are converted to phosphorothioate bonds, and phosphodiester bonds in oligonucleotides.
  • oligonucleotide derivative in which ribose and phosphodiester bond in oligonucleotide are converted to peptide nucleic acid bond uracil in oligonucleotide is C- Oligonucleotide derivatives substituted with 5-propynyluracil, oligonucleotide derivatives where uracil in the oligonucleotide is substituted with C-5 thiazole uracil, and cytosine in the oligonucleotide substituted with C-5 propynylcytosine Nucleotide derivatives, oligonucleotide derivatives in which cytosine in the oligonucleotide is substituted with phenoxazine-modified cytosine, oligonucleotide derivatives in which ribose in DNA is substituted with 2'-O-propylribos
  • a particular nucleic acid sequence may also be conservatively modified (eg, degenerate codon substitutes) and complementary sequences, as well as those explicitly indicated. Is contemplated. Specifically, a degenerate codon substitute creates a sequence in which the third position of one or more selected (or all) codons is replaced with a mixed base and / or deoxyinosine residue. (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19: 5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260: 2605-2608 (1985); Rossolini et al., Mol. Cell .Probes 8: 91-98 (1994)).
  • nucleic acid is also used interchangeably with gene, cDNA, mRNA, oligonucleotide, and polynucleotide.
  • nucleotide may be natural or non-natural.
  • gene refers to a factor that defines a genetic trait
  • gene may refer to “polynucleotide”, “oligonucleotide”, and “nucleic acid”.
  • homology of a gene refers to the degree of identity of two or more gene sequences to each other, and generally “having homology” means that the degree of identity or similarity is high. Say. Therefore, the higher the homology between two genes, the higher the sequence identity or similarity. Whether two genes have homology can be determined by direct sequence comparison or, in the case of nucleic acids, hybridization methods under stringent conditions. When directly comparing two gene sequences, the DNA sequence between the gene sequences is typically at least 50% identical, preferably at least 70% identical, more preferably at least 80%, 90% , 95%, 96%, 97%, 98% or 99% are identical, the genes have homology.
  • a “homolog” or “homologous gene product” is a protein in another species, preferably a mammal, that performs the same biological function as the protein component of the complex further described herein. Means. Such homologues may also be referred to as “ortholog gene products”. It will be understood that such homologues, homologous gene products, orthologous gene products and the like can be used as long as they meet the objectives of the present invention.
  • Amino acids may be referred to herein by either their commonly known three letter symbols or by the one-letter symbols recommended by the IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission. Nucleotides can also be referred to by the generally recognized one letter code.
  • comparison of similarity, identity and homology between amino acid sequences and base sequences is calculated using default parameters using BLAST, which is a sequence analysis tool.
  • the identity search can be performed, for example, using NCBI's BLAST 2.2.28 (issued 2013.4.2).
  • the identity value usually refers to a value when the above BLAST is used and aligned under default conditions. However, if a higher value is obtained by changing the parameter, the highest value is set as the identity value. When identity is evaluated in a plurality of areas, the highest value among them is set as the identity value. Similarity is a numerical value calculated for similar amino acids in addition to identity.
  • “several” may be, for example, 10, 8, 6, 5, 4, 3, or 2, and may be any value or less.
  • Polypeptides that have undergone deletion, addition, insertion, or substitution with other amino acids of one or several amino acid residues are known to maintain their biological activity (Market al., Proc Natl Acad Sci USA.1984 Sep; 81 (18): 5662-5666., Zoller et al., Nucleic Acids Res. 1982 Oct 25; 10 (20): 6487-6500., Wang et al., Science. 1984 Jun 29 ; 224 (4656): 1431-1433.).
  • Antibodies with deletions and the like can be prepared by, for example, site-specific mutagenesis, random mutagenesis, or biopanning using an antibody phage library.
  • site-specific mutagenesis method for example, KOD-Plus-Mutagenesis Kit (TOYOBO CO., LTD.) Can be used. It is possible to select an antibody having the same activity as that of the wild type from mutant antibodies into which deletion or the like has been introduced by performing various characterizations such as FACS analysis and ELISA.
  • “90% or more” may be, for example, 90, 95, 96, 97, 98, 99, or 100% or more, and is within the range of any two values thereof. Also good.
  • the above-mentioned “homology” may be calculated according to a method known in the art, based on the ratio of the number of amino acids homologous in two or more amino acid sequences. Before calculating the ratio, the amino acid sequences of the group of amino acid sequences to be compared are aligned, and a gap is introduced into a part of the amino acid sequence when necessary to maximize the ratio of the same amino acids.
  • polynucleotide hybridizing under stringent conditions refers to well-known conditions commonly used in the art.
  • a polynucleotide can be obtained by using a colony hybridization method, a plaque hybridization method, a Southern blot hybridization method or the like using a polynucleotide selected from among the polynucleotides of the present invention as a probe.
  • hybridization was performed at 65 ° C. in the presence of 0.7 to 1.0 M NaCl using a filter on which colony or plaque-derived DNA was immobilized, and then a 0.1 to 2-fold concentration was obtained.
  • SSC saline-sodium citrate
  • composition of 1-fold concentration of SSC solution is 150 mM sodium chloride, 15 mM sodium citrate
  • stringent conditions for example, the following conditions can be adopted.
  • a polypeptide used in the present invention is encoded by a nucleic acid molecule that hybridizes under highly or moderately stringent conditions to a nucleic acid molecule encoding a polypeptide specifically described in the present invention. are also included.
  • a “purified” substance or biological factor refers to a substance from which at least a part of the factor naturally associated with the substance or biological factor has been removed. .
  • the purity of a biological agent in a purified biological agent is higher (ie, enriched) than the state in which the biological agent is normally present.
  • the term “purified” as used herein is preferably at least 75% by weight, more preferably at least 85% by weight, even more preferably at least 95% by weight, and most preferably at least 98% by weight, Means the presence of the same type of biological agent.
  • the substance or biological agent used in the present invention is preferably a “purified” substance.
  • an “isolated” substance or biological agent is substantially free of the factors that naturally accompany the substance or biological agent. Say things.
  • the term “isolated” as used herein does not necessarily have to be expressed in purity, as it will vary depending on its purpose, but is preferably at least 75% by weight, more preferably if necessary. Means that there is at least 85%, more preferably at least 95%, and most preferably at least 98% by weight of the same type of biological agent.
  • the materials used in the present invention are preferably “isolated” materials or biological agents.
  • a “corresponding” amino acid or nucleic acid or moiety refers to a predetermined amino acid or polypeptide in a reference polypeptide or polynucleotide in a polypeptide molecule or polynucleotide molecule (eg FSTL1 or PD-L1)
  • an antisense molecule can be a similar part in an ortholog corresponding to a particular part of the antisense molecule.
  • Corresponding amino acids for example, cysteinylation, glutathioneation, SS bond formation, oxidation (eg methionine side chain oxidation), formylation, acetylation, phosphorylation, glycosylation, myristylation, etc.
  • the corresponding amino acid can be an amino acid responsible for dimerization.
  • Such “corresponding” amino acids or nucleic acids may be regions or domains spanning a range. Thus, in such cases, it is referred to herein as a “corresponding” region or domain. Such corresponding regions or domains are useful when designing complex molecules in the present invention.
  • a “corresponding” gene eg, a polynucleotide sequence or molecule
  • a gene for example, a polynucleotide sequence or a molecule
  • a gene corresponding to a gene can be an ortholog of that gene.
  • human FSTL1 or PD-L1 can find the corresponding FSTL1 or PD-L1 in other animals, particularly mammals, respectively.
  • Such corresponding genes can be identified using techniques well known in the art.
  • a corresponding gene in an animal is a gene that serves as a reference for the corresponding gene (for example, FSTL1 or PD-L1) has a sequence of SEQ ID NOs: 250 to 253, 409 to 412, or the like. It can be found by searching a database containing the animal's sequence using it as a query sequence.
  • fragment refers to a polypeptide or polynucleotide having a sequence length of 1 to n ⁇ 1 with respect to a full-length polypeptide or polynucleotide (length is n).
  • the length of the fragment can be appropriately changed according to the purpose.
  • the lower limit of the length is 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, Examples include 15, 20, 25, 30, 40, 50 and more amino acids, and lengths expressed in integers not specifically listed here (eg, 11 etc.) are also suitable as lower limits obtain.
  • examples include 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 100 and more nucleotides.
  • Non-integer lengths may also be appropriate as a lower limit.
  • such a fragment falls within the scope of the present invention as long as the full-length fragment functions as a marker or target molecule as long as the fragment itself also functions as a marker or target molecule. Is understood.
  • the term “activity” refers herein to the function of a molecule in the broadest sense. Activity is not intended to be limiting, but generally includes the biological function, biochemical function, physical function or chemical function of a molecule. Activity activates, promotes, stabilizes, inhibits, suppresses, or destabilizes, for example, enzyme activity, the ability to interact with other molecules, and the function of other molecules Ability, stability, and ability to localize to specific intracellular locations. Where applicable, the term also relates to the function of the protein complex in the broadest sense.
  • biological function refers to a specific function that a gene, nucleic acid molecule or polypeptide may have in vivo when referring to a gene or a nucleic acid molecule or polypeptide related thereto.
  • the antibody include, but are not limited to, generation of specific antibodies, enzyme activity, and imparting resistance.
  • FSTL1 or PD-L1 can include a function involved in inhibition of VLDL uptake and the like, but is not limited thereto.
  • a biological function can be exerted by “biological activity”.
  • biological activity refers to activity that a certain factor (eg, polynucleotide, protein, etc.) may have in vivo, and exhibits various functions (eg, transcription promoting activity). For example, an activity in which another molecule is activated or inactivated by interaction with one molecule. When two factors interact, the biological activity can be the binding between the two molecules and the resulting biological change, and for example, one molecule was precipitated using an antibody Sometimes, when other molecules co-precipitate, the two molecules are considered to be linked. Therefore, seeing such coprecipitation is one of the judgment methods. For example, when a factor is an enzyme, the biological activity includes the enzyme activity.
  • an agent when an agent is a ligand, the ligand includes binding to the corresponding receptor.
  • biological activity can be measured by techniques well known in the art.
  • “activity” indicates or reveals binding (either direct or indirect); affects the response (ie, has a measurable effect in response to some exposure or stimulus),
  • expression of a gene, polynucleotide, polypeptide or the like means that the gene or the like undergoes a certain action in vivo to take another form.
  • a gene, a polynucleotide or the like is transcribed and translated into a polypeptide form.
  • transcription and production of mRNA are also an aspect of expression.
  • expression product includes such a polypeptide or protein, or mRNA. More preferably, such polypeptide forms may be post-translationally processed.
  • the expression level of FSTL1 or PD-L1 can be determined by any method.
  • FSTL1 or PD-L1 by assessing the amount of FSTL1 or PD-L1 mRNA, the amount of FSTL1 or PD-L1 protein, and the biological activity of FSTL1 or PD-L1 protein You can know the level. Such measurements can be used in companion diagnostics.
  • the amount of FSTL1 or PD-L1 mRNA or protein can be determined by methods as detailed elsewhere in this specification or other methods known in the art.
  • the “functional equivalent” refers to an object having a target function equivalent to the target entity but having a different structure.
  • a functional equivalent of “FSTL1 or PD-L1” or an antibody thereof is not FSTL1 or PD-L1 or an antibody thereof, but a variant or variant of FSTL1 or PD-L1 or an antibody thereof (eg, an amino acid Sequence variants, etc.) having the biological action of FSTL1 or PD-L1, and at the time of action, FSTL1 or PD-L1 or its antibody itself or this FSTL1 or PD-L1 or its antibody
  • a functional equivalent of FSTL1 or PD-L1 or an antibody thereof can be used similarly to FSTL1 or PD-L1 or an antibody thereof, even if not specifically mentioned.
  • Functional equivalents can be found by searching a database or the like.
  • search refers to finding another nucleobase sequence having a specific function and / or property using a nucleobase sequence electronically or biologically or by other methods.
  • Electronic searches include BLAST (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990)), FASTA (Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad.
  • Bio searches include stringent hybridization, macroarrays with genomic DNA affixed to nylon membranes, microarrays affixed to glass plates (microarray assays), PCR, and in situ hybridization. It is not limited to. In the present specification, it is intended that the gene used in the present invention should include a corresponding gene identified by such an electronic search or biological search.
  • an amino acid sequence having one or more amino acid insertions, substitutions or deletions, or those added to one or both ends can be used.
  • “insertion, substitution or deletion of one or a plurality of amino acids in the amino acid sequence, or addition to one or both ends thereof” is a well-known technical method such as site-directed mutagenesis. It means that a modification has been made by substitution of a plurality of amino acids to the extent that can occur naturally by a method or by natural mutation.
  • the modified amino acid sequence has, for example, 1 to 30, preferably 1 to 20, more preferably 1 to 9, further preferably 1 to 5, particularly preferably 1 to 2 amino acid insertions, substitutions or deletions. Lost or added to one or both ends thereof.
  • the modified amino acid sequence preferably has one or more (preferably 1 or several or 1, 2, 3, or 4) conservative substitutions in the amino acid sequence of FSTL1 or PD-L1 It may be an amino acid sequence.
  • conservative substitution means substitution of one or more amino acid residues with another chemically similar amino acid residue so as not to substantially alter the function of the protein. For example, when a certain hydrophobic residue is substituted by another hydrophobic residue, a certain polar residue is substituted by another polar residue having the same charge, and the like. Functionally similar amino acids that can make such substitutions are known in the art for each amino acid.
  • non-polar (hydrophobic) amino acids such as alanine, valine, isoleucine, leucine, proline, tryptophan, phenylalanine, and methionine.
  • polar (neutral) amino acids include glycine, serine, threonine, tyrosine, glutamine, asparagine, and cysteine.
  • positively charged (basic) amino acids include arginine, histidine, and lysine.
  • negatively charged (acidic) amino acids include aspartic acid and glutamic acid.
  • inhibitor refers to a substance or factor that inhibits the biological action of a target entity (eg, receptor or cell).
  • the inhibitor of FSTL1 or PD-L1 of the present invention is a factor that can temporarily or permanently reduce or eliminate the function of a target FSTL1 or PD-L1 or FSTL1 or PD-L1 expressing cell. is there.
  • factors include, but are not limited to, antibodies, antigen-binding fragments thereof, derivatives thereof, functional equivalents, nucleic acids such as RNAi factors such as antisense and siRNA, and the like.
  • agonist refers to a substance that expresses or enhances the biological action of a target entity (for example, a receptor).
  • a target entity for example, a receptor
  • agonists also called ligands
  • synthesized ones and modified ones can be mentioned.
  • antagonist refers to a substance that suppresses or inhibits the expression of a biological action of a target entity (for example, a receptor).
  • a target entity for example, a receptor
  • synthetic antagonists and modified ones can be mentioned.
  • those that inhibit or inhibit competitively with agonists (or ligands) there are those that inhibit or inhibit non-competitively. It can also be obtained by modifying the agonist.
  • An antagonist can be included in the concept of an inhibitor (inhibitor) or an inhibitory factor because it suppresses or inhibits a physiological phenomenon. Accordingly, herein, an antagonist is used interchangeably with “suppressor”.
  • antibody broadly refers to polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, multispecific antibodies, chimeric antibodies, and anti-idiotype antibodies, and fragments thereof such as Fv fragments, Fab ′ fragments, F (ab ′) 2 and Fab fragments, and other recombinantly produced conjugates or functional equivalents (eg, chimeric antibodies, humanized antibodies, multifunctional antibodies, bispecific or oligospecific antibodies, single chains Antibody, scFV, diabody, sc (Fv) 2 (single chain (Fv) 2 ), scFv-Fc).
  • antibodies may be covalently linked or recombinantly fused to enzymes such as alkaline phosphatase, horseradish peroxidase, alpha galactosidase, and the like.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody used in the present invention may be bound to the FSTL1 or PD-L1 protein, and its origin, type, shape, etc. are not limited.
  • known antibodies such as non-human animal antibodies (eg, mouse antibodies, rat antibodies, camel antibodies), human antibodies, chimeric antibodies, and humanized antibodies can be used.
  • monoclonal or polyclonal antibodies can be used as antibodies, but monoclonal antibodies are preferred.
  • the binding of the antibody to the FSTL1 or PD-L1 protein is preferably specific binding.
  • the antibody includes an antibody modified product or an antibody unmodified product.
  • an antibody and various molecules such as polyethylene glycol may be bound.
  • the modified antibody can be obtained by chemically modifying the antibody using a known technique.
  • the “anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody” includes an antibody having binding ability to FSTL1 or PD-L1.
  • the method for producing this anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody is not particularly limited. For example, it may be produced by immunizing mammals or birds with FSTL1 or PD-L1.
  • “functional equivalent” of “an antibody against FSTL1 or PD-L1 (anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody) or fragment thereof” is, for example, an antibody, the binding activity of FSTL1 or PD-L1
  • chimeric antibodies, humanized antibodies, multifunctional antibodies, bispecific or oligospecific antibodies, single chain antibodies, scFV, diabodies , Sc (Fv) 2 (single chain (Fv) 2 ), scFv-Fc and the like are also included.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention is an anti-FSTL1 antibody that specifically binds to a specific epitope of FSTL1 or PD-L1 from the viewpoint of particularly strongly suppressing the growth of malignant tumors. It is preferably an antibody or an anti-PD-L1 antibody.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention may be a monoclonal antibody.
  • a monoclonal antibody can be more efficiently acted on FSTL1 or PD-L1 than a polyclonal antibody. From the viewpoint of efficiently producing anti-FSTL1 or PD-L1 monoclonal antibodies, it is preferable to immunize chickens with FSTL1 or PD-L1.
  • the antibody class of the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, IgM, IgD, IgG, IgA, IgE, or IgY.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention may be an antibody fragment having antigen-binding activity (hereinafter also referred to as “antigen-binding fragment”).
  • antigen-binding fragment an antibody fragment having antigen-binding activity
  • there are effects such as an increase in stability or antibody production efficiency.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention may be a fusion protein.
  • This fusion protein may be a polypeptide or oligopeptide bound to the N- or C-terminus of an anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody.
  • the oligopeptide may be a His tag.
  • the fusion protein may be a fusion of a mouse, human, or chicken antibody partial sequence. Such fusion proteins are also included in one form of the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to this embodiment.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody immunizes an organism with, for example, purified FSTL1 or PD-L1, FSTL1 or PD-L1-expressing cells, or FSTL1 or PD-L1-containing lipid membranes
  • the antibody obtained through a process may be sufficient.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody comprises a step of immunizing an organism with purified FSTL1 or PD-L1, FSTL1 or PD-L1-expressing cell vesicle, or FSTL1 or PD-L1-containing lipid membrane.
  • An antibody having a CDR set of antibodies obtained through the method may be used. From the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on FSTL1- or PD-L1-positive malignant tumors, it is preferable to use FSTL1- or PD-L1-expressing cells for immunization.
  • a CDR set is a set of heavy chain CDR1, 2, and 3 and light chain CDR1, 2, and 3.
  • FSTL1 or PD-L1-expressing cell may be obtained by, for example, introducing FSTL1 or PD-L1-encoding polynucleotide into a cell and then expressing FSTL1 or PD-L1.
  • FSTL1 or PD-L1 includes an FSTL1 or PD-L1 fragment.
  • FSTL1 or PD-L1-containing lipid membrane may be obtained, for example, by mixing FSTL1 or PD-L1 and a lipid bilayer membrane.
  • FSTL1 or PD-L1 includes an FSTL1 or PD-L1 fragment.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention is an antibody obtained through a step of immunizing a chicken with an antigen from the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on FSTL1 or PD-L1-positive malignant tumor, Alternatively, an antibody having a CDR set of the antibody is preferable.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention may have any binding force as long as the object is achieved, for example, at least 1.0 ⁇ 10 6 or more, 2 .0 ⁇ 10 6 or more, 5.0 ⁇ 10 6 or more, there may be mentioned a 1.0 ⁇ 10 7 or more without being limited to, usually, K D values (kd / ka) is, 1.0 ⁇ 10 -7 or less, and may be 1.0 x 10 -9 (M) or 1.0 x 10 -10 (M) or less.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to one embodiment of the present invention may have ADCC or CDC activity.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody may be an antibody that binds to a wild type or mutant type of FSTL1 or PD-L1. Variants include those resulting from differences in DNA sequences between individuals.
  • the amino acid sequence of wild-type or mutant FSTL1 or PD-L1 is preferably 80% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more, relative to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 251 or SEQ ID NO: 253. Particularly preferably, it has 98% or more homology.
  • an “antibody” comprises a molecule or population thereof that can specifically bind to a specific epitope on an antigen.
  • the antibody may also be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • the antibody can exist in various forms, for example, full-length antibody (antibody having Fab region and Fc region), Fv antibody, Fab antibody, F (ab ′) 2 antibody, Fab ′ antibody, diabody, single Chain antibody (eg, scFv), dsFv, multivalent specific antibody (eg, bivalent specific antibody), peptide or polypeptide having antigen binding property, chimeric antibody (eg, mouse-human chimeric antibody, chicken-human chimeric antibody, etc.) ), One or more forms selected from the group consisting of mouse antibodies, chicken antibodies, humanized antibodies, human antibodies, or their equivalents (or equivalents).
  • the antibody includes an antibody modified product or an antibody unmodified product.
  • an antibody and various molecules such as polyethylene glycol may be bound.
  • the modified antibody can be obtained by chemically modifying the antibody using a known technique.
  • such antibodies may be covalently linked or recombinantly fused to enzymes such as alkaline phosphatase, horseradish peroxidase, alpha galactosidase, and the like.
  • the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody used in the present invention may be bound to the FSTL1 or PD-L1 protein, and its origin, type, shape, etc. are not limited.
  • known antibodies such as non-human animal antibodies (eg, mouse antibodies, rat antibodies, camel antibodies), human antibodies, chimeric antibodies, and humanized antibodies can be used.
  • monoclonal or polyclonal antibodies can be used as antibodies, but monoclonal antibodies are preferred.
  • the binding of the antibody to the FSTL1 or PD-L1 protein is preferably specific binding.
  • the antibody includes an antibody modified product or an antibody unmodified product.
  • an antibody and various molecules such as polyethylene glycol may be bound.
  • the modified antibody can be obtained by chemically modifying the antibody using a known technique.
  • a “polyclonal antibody” refers to, for example, mammals (eg, rats, mice, rabbits, cows, monkeys, etc.), birds, etc. in order to induce the production of polyclonal antibodies specific to the antigen. It can be generated by administering an immunogen containing the antigen of interest. Administration of the immunogen may involve infusion of one or more immunizing agents and, if desired, an adjuvant.
  • An adjuvant may be used to increase the immune response and may include Freund's adjuvant (complete or incomplete), mineral gel (such as aluminum hydroxide), or a surfactant (such as lysolecithin). .
  • Immunization protocols are known in the art and may be performed by any method that elicits an immune response, depending on the host organism chosen (Protein Experiment Handbook, Yodosha (2003): 86-91). .).
  • a “monoclonal antibody” is an antibody in which the individual antibodies constituting the population substantially correspond to a single epitope, except for antibodies having mutations that can naturally occur in small amounts. Including the case of Alternatively, the individual antibodies that make up the population may be antibodies that are substantially identical except for antibodies that have mutations that can occur naturally in small amounts. Monoclonal antibodies are highly specific and differ from normal polyclonal antibodies, which typically include different antibodies corresponding to different epitopes. In addition to its specificity, monoclonal antibodies are useful in that they can be synthesized from hybridoma cultures that are not contaminated by other immunoglobulins.
  • the form “monoclonal” may be characterized as being derived from a substantially homogeneous population of antibodies, but does not mean that the antibodies must be produced in any particular way.
  • the monoclonal antibody may be prepared by a method similar to the hybridoma method described in “Kohler G, Milstein C., Nature. 1975 Aug7; 256 (5517): 495-497.”.
  • monoclonal antibodies may be made by methods similar to recombinant methods such as those described in US Pat. No. 4,816,567.
  • the monoclonal antibody may be "Clackson et al., Nature.
  • any technique known in the art can be used.
  • the construction of a typical mass production system of antibodies and the production of antibodies can be exemplified as follows. That is, CHO cells are transfected with an H chain antibody expression vector and an L chain antibody expression vector, cultured using selection reagents G418 and Zeocin, and cloned by limiting dilution. After cloning, clones that stably express the antibody are selected by ELISA. The selected CHO cells are expanded and cultured, and the culture supernatant containing the antibody is collected. The antibody can be purified from the collected culture supernatant by Protein A or Protein G purification.
  • Fv antibody is an antibody containing an antigen recognition site. This region contains a dimer of one heavy chain variable domain and one light chain variable domain by non-covalent bonds. In this configuration, the three CDRs of each variable domain can interact to form an antigen binding site on the surface of the VH-VL dimer.
  • the “Fab antibody” refers to, for example, about half of the N-terminal side of the H chain and the entire L chain of fragments obtained by treating an antibody containing the Fab region and the Fc region with the proteolytic enzyme papain. Is an antibody bound through some disulfide bonds.
  • the Fab can be obtained, for example, by treating the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to the embodiment of the present invention containing the Fab region and the Fc region with the proteolytic enzyme papain.
  • the ⁇ F (ab ′) 2 antibody '' refers to, for example, 2 sites corresponding to Fab in a fragment obtained by treating an antibody containing a Fab region and an Fc region with a proteolytic enzyme pepsin.
  • One antibody. F (ab ′) 2 can be obtained, for example, by treating the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to the embodiment of the present invention containing the Fab region and the Fc region with the proteolytic enzyme pepsin.
  • it can be prepared by linking the following Fab ′ with a thioether bond or a disulfide bond.
  • Fab ′ antibody is, for example, an antibody obtained by cleaving a disulfide bond in the hinge region of F (ab ′) 2 .
  • F (ab ′) 2 can be obtained by treating with a reducing agent dithiothreitol.
  • the “scFv antibody” is an antibody in which VH and VL are linked via an appropriate peptide linker.
  • the scFv antibody is obtained, for example, by obtaining cDNA encoding VH and VL of the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to the embodiment of the present invention, constructing a polynucleotide encoding VH-peptide linker-VL, Polynucleotides can be incorporated into vectors and produced using cells for expression.
  • “diabody” is an antibody having a bivalent antigen binding activity.
  • the bivalent antigen binding activity can be the same, or one can be a different antigen binding activity.
  • a diabody is constructed by constructing a polynucleotide encoding scFv so that the length of the amino acid sequence of the peptide linker is 8 residues or less, incorporating the obtained polynucleotide into a vector, and using cells for expression. it can.
  • “dsFv” is an antibody in which a polypeptide in which a cysteine residue is introduced into VH and VL is bound via a disulfide bond between the cysteine residues.
  • the position to be introduced into the cysteine residue can be selected based on the three-dimensional structure prediction of the antibody according to the method shown by Reiter et al. (Reiteretal., Protein Eng. 1994 May; 7 (5): 697-704.) .
  • an “antigen-binding peptide or polypeptide” is an antibody comprising antibody VH, VL, or CDR1, 2, or 3 thereof. Peptides containing multiple CDRs can be linked directly or via a suitable peptide linker.
  • Fv antibody Fab antibody, F (ab ′) 2 antibody, Fab ′ antibody, scFv antibody, diabody, dsFv antibody, peptide or polypeptide having antigen binding properties (hereinafter sometimes referred to as “Fv antibody etc.”)
  • Production method is not particularly limited.
  • DNA encoding a region such as an Fv antibody in the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to the embodiment of the present invention can be incorporated into an expression vector and produced using an expression cell. Alternatively, it may be produced by a chemical synthesis method such as Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) or tBOC method (t-butyloxycarbonyl method).
  • the antigen-binding fragment according to an embodiment of the present invention may be one or more of the above Fv antibodies.
  • a “chimeric antibody” is, for example, a variable region of an antibody between heterologous organisms and a constant region of the antibody, and can be constructed by a gene recombination technique.
  • a mouse-human chimeric antibody can be prepared by the method described in, for example, “Roguska et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Feb 1:91 (3): 969-973”.
  • Basic methods for making mouse-human chimeric antibodies include, for example, encoding the mouse leader and variable region sequences present in the cloned cDNA, and the human antibody constant regions already present in mammalian cell expression vectors.
  • the mouse leader sequence and variable region sequence present in the cloned cDNA may be linked to a sequence encoding a human antibody constant region and then linked to a mammalian cell expression vector.
  • the fragment of the human antibody constant region can be of any human antibody H chain constant region and human antibody L chain constant region, for example, for human H chain, C ⁇ 1, C ⁇ 2, C ⁇ 3 or C ⁇ 4, For the L chain, C ⁇ or C ⁇ can be mentioned, respectively.
  • a “humanized antibody” has, for example, one or more CDRs derived from a non-human species, a framework region (FR) derived from a human immunoglobulin, and a constant region derived from a human immunoglobulin. And an antibody that binds to the desired antigen.
  • Antibody humanization can be performed using various techniques known in the art (Almagro et al., Front Biosci. 2008 Jan 1:13: 1619-1633.). For example, CDR grafting (Ozaki et al., Blood. 1999 Jun 1:93 (11): 3922-3930), Re-surfacing (Roguska et al., Proc Natl Acad Sci US A.
  • FR shuffle (Damschroder et al., Mol Immunol. 2007 Apr; 44 (11): 3049-3060. Epub 2007 Jan 22.).
  • amino acid residues in the human FR region may be substituted with corresponding residues from the CDR donor antibody. This FR substitution can be performed by methods well known in the art (Riechmann et al., Nature. 1988 Mar 24; 332 (6162): 323-327.).
  • FR residues important for antigen binding may be identified by modeling the interaction of CDR and FR residues.
  • an unusual FR residue at a particular position may be identified by sequence comparison.
  • humanized antibodies may be constructed based on the report of Matsuda et al.
  • the H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424, respectively) and the light chains FR1, FR2, FR3 and FR4 ( Humanized antibodies having SEQ ID NOs: 434, 436, 438, and 440, respectively, can be used, but are not limited thereto.
  • the full length sequences of these humanized antibodies are shown in this humanized antibody, and the full length sequence of the H (1) heavy chain is represented by SEQ ID NOs: 441 and 442 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively) of IgG1 type, and IgG4
  • SEQ ID NOs: 441 and 442 depict nucleic acid and amino acid sequences, respectively
  • IgG4 The types are shown in SEQ ID NOs: 447 and 448 (representing the nucleic acid and amino acid sequences, respectively)
  • the full length sequence of the IgG1 type H (2) heavy chain is SEQ ID NOs: 443 and 444 (representing the nucleic acid and amino acid sequences, respectively).
  • IgG4 type is shown in SEQ ID NOs: 449 and 450 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively), and IgG1 type is H (3) heavy chain full-length sequence, SEQ ID NOs: 445 and 446 (respectively nucleic acid and amino acid, respectively).
  • IgG4 type is represented by SEQ ID NOs: 451 and 452 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively), and the full-length L (1) light chain Are shown in SEQ ID NOs: 453 and 454 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively), and the full-length sequences of L (2) light chains are shown in SEQ ID NOs: 495 and 496 (representing nucleic acid and amino acid sequences, respectively).
  • H (2) -L (1) is H (3) -L (1) (the framework of H (3) (SEQ ID NOs: 426, 428, 430 and 432)) and H (1) -L (1) (the framework of H (1) has been observed to be an order of magnitude higher than (SEQ ID NO: 410, 412, 414 and 416, respectively)).
  • a “human antibody” is derived from a gene encoding human immunoglobulin, for example, the variable region and the constant region of the heavy chain and the region including the variable region and the constant region of the light chain that constitute the antibody.
  • the main production methods include a transgenic mouse method for producing human antibodies, a phage display method, and the like.
  • human antibodies having various antigen-binding abilities can be produced instead of mouse antibodies.
  • a human monoclonal antibody can be obtained by a conventional hybridoma method.
  • phage display method a foreign gene is fused to the N-terminal side of the coat protein (g3p, g10p, etc.) of filamentous phages such as M13 and T7, which are typically E. coli viruses. It is a system for expressing as a protein. For example, it can be produced by the method described in “Vaughan et al., Nat Biotechnol. 1996 Mar; 14 (3): 309-314.”
  • the antibody may be any antibody by CDR-grafting (Ozaki et al., Blood. 1999 Jun 1:93 (11): 3922-3930.), And the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to the embodiment of the present invention. It may be prepared by grafting the heavy chain CDR or the light chain CDR. Alternatively, the DNA encoding the heavy chain or light chain CDR of the anti-FSTL1 antibody or anti-PD-L1 antibody according to the embodiment of the present invention and the heavy chain CDR or light chain of an antibody derived from a known human or non-human organism.
  • a DNA encoding a region excluding the chain CDR can be obtained by ligation to a vector according to a method known in the art, and then expressing using a known cell.
  • a method known in the art for example, by randomly mutating the amino acid residue of the antibody.
  • the region excluding the heavy chain CDR or the light chain CDR may be optimized using a screening method or a phage display method. For example, FR shuffle (Damschroder et al., Mol Immunol. 2007 Apr; 44 (11): 3049-3060.
  • the FR region may be optimized using JP-A-2006-241026 or Footeet al., J Mol Biol.1992 Mar 20; 224 (2): 487-499.
  • the “heavy chain” is typically the main component of a full-length antibody.
  • the heavy chain is usually linked to the light chain by disulfide bonds and non-covalent bonds.
  • the domain on the N-terminal side of the heavy chain has a region called the variable region (VH) where the amino acid sequence is not constant even with antibodies of the same type and the same class.
  • VH variable region
  • VH has high specificity and affinity for antigen It is known to contribute.
  • VH-only molecule was produced in “Reiter et al., J Mol Biol. 1999 Jul 16; 290 (3): 685-98.”, It was specifically bound to the antigen with high affinity. Is described.
  • camel antibodies only heavy chain antibodies without light chains exist. Are listed.
  • CDR complementarity determining region
  • Fv including heavy chain variable region variable region (VH) and light chain variable region (VL)
  • CDR1, CDR2, and CDR3 consisting of about 5 to 30 amino acid residues.
  • CDR3 is known to have the highest contribution in binding of an antibody to an antigen.
  • the definition of Kabat is adopted as a preferred example, but is not necessarily limited thereto. In some cases, it may be determined in consideration of both the Kabat definition and the Chothia definition.For example, the overlapping part of the CDR according to each definition or the part including both the CDRs according to each definition It can also be a CDR.
  • antigen refers to any substrate that can be specifically bound by an antibody molecule.
  • immunogen refers to an antigen capable of initiating lymphocyte activation that produces an antigen-specific immune response.
  • epitope or “antigenic determinant” refers to a site in an antigen molecule to which an antibody or lymphocyte receptor binds. Methods for determining epitopes are well known in the art, and such epitopes can be determined by those skilled in the art using such well known techniques once the primary sequence of the nucleic acid or amino acid is provided. It will be understood that the antibodies of the present invention can be used in the same manner even if they have the same epitope, even antibodies having other sequences.
  • the antibody used in the present invention may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • “means” refers to any tool that can achieve a certain purpose (for example, detection, diagnosis, treatment).
  • selective recognition means A means by which one object can be recognized differently from another.
  • a “malignant tumor” includes, for example, a tumor that occurs when a normal cell is mutated. Malignant tumors can arise from any organ or tissue throughout the body.
  • cancer and “cancer” are used interchangeably unless otherwise specified.
  • This malignant tumor is, for example, lung cancer, esophageal cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, adrenal cancer, biliary tract cancer, breast cancer, colon cancer, small intestine cancer, ovarian cancer, uterine cancer, bladder cancer, prostate cancer, urine Duct cancer, renal pelvis cancer, ureteral cancer, penile cancer, testicular cancer, brain tumor, cancer of central nervous system, cancer of peripheral nervous system, head and neck cancer, glioma, glioblastoma multiforme, skin cancer, melanoma, thyroid cancer Including one or more selected from the group consisting of salivary gland cancer, malignant lymphoma, carcinoma, sarcoma, leukemia and hematological malignancy.
  • ovarian cancer includes, for example, ovarian serous adenocarcinoma or ovarian clear cell line carcinoma.
  • Uterine cancer includes, for example, endometrial cancer or cervical cancer.
  • Head and neck cancer includes, for example, oral cancer, pharyngeal cancer, laryngeal cancer, nasal cavity cancer, sinus cancer, salivary gland cancer, or thyroid cancer.
  • Lung cancer includes, for example, non-small cell lung cancer or small cell lung cancer.
  • the malignant tumor may be FSTL1 or PD-L1 positive.
  • metalastasis refers to the process by which a cancerous lesion develops similar to a new location as cancer spreads or moves from the primary site of the body to other areas.
  • a “metastatic” or “metastatic” cell is a cell that loses adhesive contact with neighboring cells and migrates from the primary site of disease through the bloodstream or lymph to invade neighboring body structures.
  • metastasis herein is preferably, but not limited to, the cancer described herein, more preferably a solid cancer, more preferably breast, heart, lung, small intestine, large intestine, spleen, kidney, Includes metastasis of cancer selected from the group consisting of bladder, head and neck, ovary, prostate, brain, pancreas, skin, bone, thymus, uterus, testis, cervix and / or liver cancer.
  • the metastasis according to the present invention is more preferably breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, colorectal cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, ovarian cancer, prostate cancer, brain cancer, pancreatic cancer, skin Including bone metastasis of cancer selected from the group consisting of cancer, thymic cancer, uterine cancer, testicular cancer, cervical cancer and liver cancer.
  • bone metastasis means metastasis of cancer to bone, and includes bone metastasis of any origin.
  • the term bone metastases is preferred, but not limited to, for the cancers described herein, more preferably for solid cancers, more preferably breast, heart, lung, small intestine, large intestine, spleen, kidney, bladder, head and neck.
  • Including bone metastasis of cancer selected from the group consisting of cancer of the head, ovary, prostate, brain, pancreas, skin, bone, thymus, uterus, testis, cervix and / or liver.
  • the term bone metastases preferably also includes bone lesions, preferably osteolytic and / or osteogenic bone lesions, more preferably osteolytic bone lesions, even more preferably myeloma, malignant. It includes bone lesions of myeloma and / or multiple myeloma, in particular osteolytic bone lesions of myeloma, malignant myeloma and / or multiple myeloma.
  • the term bone metastases is also preferably a bone lesion of Waldenstrom disease, preferably an osteolytic and / or osteogenic bone lesion of Waldenstrom disease, more preferably Waldenstrom disease. Also includes osteolytic bone lesions of the disease.
  • the bone metastasis according to the present invention is more preferably breast cancer, lung cancer, colon cancer, colorectal cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, ovarian cancer, prostate cancer, brain cancer, pancreatic cancer, skin cancer, thymic cancer, Includes bone metastasis of cancer selected from the group consisting of uterine cancer, testicular cancer, cervical cancer and liver cancer.
  • activated MSCs activated by endogenous factors, and such MSCs are also referred to herein as “activated mesenchymal stem cells” or “activated MSCs”. That is, cells that originally have immunosuppressive activity (for example, regulatory T cells, tolerant dendritic cells, regulatory dendritic cells, bone marrow-derived immunosuppressive cells) proliferate and have strong overall immunosuppressive activity.
  • immunosuppressive activity for example, regulatory T cells, tolerant dendritic cells, regulatory dendritic cells, bone marrow-derived immunosuppressive cells
  • FSTL1 is thought to regulate these directly and / or indirectly through the proliferation of activated MSCs (Immunology and Cell Biology 91: 12-18, 2013).
  • the antibody FSTL1 antibody and the like of the present invention can inhibit the induction or enhancement of immunosuppression of this MSC and immunodeficiency, thereby causing cancer deterioration. It can be said that immunosuppression can be released, and therefore a remarkable cancer prevention or treatment effect can be achieved. Further, in the present invention, it is possible to inhibit the upstream of the induction or enhancement of MSC that induces immunocompromised cells such as these immunosuppressive cells and / or immunodeficient cells. Alternatively, it is considered that the entire immune failure mechanism such as an immunodeficiency mechanism can be canceled all at once, and a more effective treatment is considered possible.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • FSTL1 increases immunosuppressive MSC itself and / or enhances the suppressive activity of other cells.
  • immunosuppression also referred to as “immunosuppression” is also referred to as immunosuppressive, immunoregulatory, immunoregulatory, immunomodulation, immunoregulatory, immunomodification, immunomodification
  • the term “enhancement” in this field is used interchangeably in the art to increase the ability of immunosuppressive cells and increase the number of immunosuppressive cells (immunity of immunosuppressive cells). Including the enhancement of suppressive activity and / or the promotion of proliferation of immunosuppressive cells and / or the differentiation of non-immunosuppressive cells into immunosuppressive cells) and results As used herein, immunosuppression is enhanced.
  • the ability of immunosuppressive cells is enhanced and the number of immunosuppressive cells increases (enhancement of immunosuppressive activity of immunosuppressive cells and / or immunosuppressive cells). Is included) and / or differentiation of cells that are not immunosuppressive into immunosuppressive cells).
  • immunosuppressive cells As a form of induction of immunosuppressive cells of MSC cells, differentiation into immunosuppressive cells such as regulatory T cells is promoted, and immunosuppressive activity of immunosuppressive cells such as regulatory T cells. And proliferation of immunosuppressive cells such as regulatory T cells, and as a result, enhanced immunosuppressive properties are included.
  • immunosuppressive cell the term “immunosuppressive” is also referred to as immunoregulatory property, immunomodulatory property, and immunomodulatory property, and these are used interchangeably in the art.
  • Is a cell having a function of suppressing immune ability and is typically a regulatory T cell, a regulatory dendritic cell, a tolerant dendritic cell, and a bone marrow-derived immunosuppressive cell. However, it is not limited to them.
  • MSCs mesenchymal stem cells
  • immunodeficiency refers to a state in which a normal immune mechanism has been impaired due to a deficiency or dysfunction of some or some of the cellular elements constituting the immune system.
  • the pathological conditions resulting from this are collectively referred to as immunodeficiency diseases.
  • Immunodeficiency is broadly divided into primary and secondary, and the former is mainly caused by congenital genetic abnormalities. The latter is caused by physicochemical factors such as drugs and X-rays, infectious diseases such as viruses, and nutrition. This is due to external environmental factors such as conditions.
  • the site of damage is considered to be various such as dysfunction of the B cell region such as antibody production, abnormalities of the T cell region related to cellular immunity, impairment of phagocytic cell functions such as complement system and phagocytic function. “Depleted T cells” are the main indicator of immune deficiency. Anti-PD-1 antibodies and the like have also been developed as antibodies that can inhibit this “exhaustion / failure”.
  • immune failure refers to a concept that combines immunosuppression and immunodeficiency.
  • cancer cells with low immunogenicity that are more advantageous for survival are selected and proliferated (equilibrium phase (a state in which they do not disappear or grow due to the interaction between immune cells and cancer cells) ) To the escape phase).
  • Equilibrium phase a state in which they do not disappear or grow due to the interaction between immune cells and cancer cells
  • escape phase To the escape phase.
  • T cells that should kill cancer cells play a paradoxical role.
  • exhaust refers to various co-suppressive molecules (described later) such as PD-1, CTLA4, and TIM3 that are induced on long-term exposure to antigen, resulting in functional T cells. To fall into a state of failure. It is thought that T cell unresponsiveness is induced during chronic infection and cancer. Such T cells are referred to herein as “exhausted T cells”.
  • Anti-PD-1 antibodies and the like have also been developed as antibodies that can inhibit this “exhaustion” state and “immune deficiency”. Accordingly, the anti-FSTL1 antibody used in the present invention can inhibit exhausted T cells (the proliferation or development thereof) as shown in the Examples. "Is expected to be able to inhibit” and is therefore understood to be able to inhibit "immune failure”.
  • immune-related cells refers to cells of any immune system that undergo immunosuppression, dysfunction, etc.
  • acquisition and / or enhancement of immunosuppressive activity of immune-related cells refers to the present specification.
  • proliferation of regulatory T cells proliferation of regulatory dendritic cells, differentiation into regulatory dendritic cells, proliferation of tolerant dendritic cells, tolerant dendritic cells It is understood to include differentiation into bone marrow, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells and differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, increase in exhausted T cells, and the like.
  • the “subject (person)” refers to a subject to be diagnosed or detected or treated according to the present invention (for example, an organism such as a human or a cell, blood, serum, etc. removed from the organism). .
  • sample refers to any substance obtained from a subject or the like, and includes, for example, serum. Those skilled in the art can appropriately select a preferable sample based on the description of the present specification.
  • drug drug
  • drug may also be a substance or other element (eg energy such as light, radioactivity, heat, electricity).
  • Such substances include, for example, proteins, polypeptides, oligopeptides, peptides, polynucleotides, oligonucleotides, nucleotides, nucleic acids (eg, DNA such as cDNA, genomic DNA, RNA such as mRNA), poly Saccharides, oligosaccharides, lipids, small organic molecules (for example, hormones, ligands, signaling substances, small organic molecules, molecules synthesized by combinatorial chemistry, small molecules that can be used as pharmaceuticals (for example, small molecule ligands, etc.)) , These complex molecules are included, but not limited thereto.
  • a factor specific for a polynucleotide is a polynucleotide having complementarity with a certain sequence homology to the sequence of the polynucleotide (eg, 70% or more sequence identity), Examples include, but are not limited to, a polypeptide such as a transcription factor that binds to the promoter region.
  • Factors specific for a polypeptide typically include an antibody specifically directed against the polypeptide or a derivative or analog thereof (eg, a single chain antibody), and the polypeptide is a receptor.
  • specific ligands or receptors in the case of ligands, and substrates thereof when the polypeptide is an enzyme include, but are not limited to.
  • diagnosis identifies various parameters associated with a disease, disorder, condition (eg, malignant tumor), etc. in a subject, and determines the current state or future of such a disease, disorder, or condition. That means.
  • conditions within the body can be examined, and such information can be used to formulate a disease, disorder, condition, treatment to be administered or prevention in a subject.
  • various parameters such as methods can be selected.
  • diagnosis in a narrow sense means diagnosis of the current state, but in a broad sense includes “early diagnosis”, “predictive diagnosis”, “preliminary diagnosis”, and the like.
  • the diagnostic method of the present invention is industrially useful because, in principle, the diagnostic method of the present invention can be used from the body and can be performed away from the hands of medical personnel such as doctors.
  • diagnosis, prior diagnosis or diagnosis may be referred to as “support”.
  • prognosis predicts the likelihood of death or progression due to cancer, such as recurrence of a neoplastic disease, such as a malignant tumor (eg, ovarian cancer), metastatic spread, and drug resistance. Means. Therefore, in the present specification, “good prognosis” means a state in which no recurrence cancer originating from the cancer is observed over a certain period (for example, 4 years) after cancer tissue resection. "Poor prognosis” or “poor prognosis” refers to a condition in which recurrent cancer originating from the cancer is observed over a certain period (for example, 4 years) after resection of the cancer tissue.
  • Prognostic factors are variables related to the natural course of malignant tumors, which affect the recurrence rate and outcome of patients once they have developed a malignant tumor.
  • Clinical indicators associated with worsening prognosis include, for example, lymph node metastasis and high-grade tumors.
  • Prognostic factors are often used to classify patients into subgroups with different underlying risk of recurrence.
  • the expression of FSTL1 of the present invention can be used as a prognostic factor.
  • the term “prediction” means the likelihood that a patient will have a specific clinical outcome, whether good or bad, after removal of the primary tumor. Therefore, FSTL1 of the present invention can be used as a poor prognostic marker.
  • the prediction method of the present invention can be used clinically to determine a therapy by selecting the optimal therapy for a particular patient.
  • the prediction method of the present invention is a valuable tool in predicting if a patient is likely to respond well to a treatment plan, such as a surgical intervention.
  • the prediction can include prognostic factors.
  • detection agent or “test agent (agent)” refers to any agent that can detect or inspect a target object in a broad sense.
  • diagnostic agent refers to any agent that can diagnose a target state (for example, a disease such as a malignant tumor).
  • treatment refers to prevention of worsening of a disease or disorder when the disease or disorder (eg, malignant tumor) becomes such a condition, Preferably, it refers to reduction, more preferably elimination, and includes the ability to exert a symptom improving effect or a preventive effect on one or more symptoms associated with a patient's disease or disease. Diagnosing in advance and performing appropriate treatment is referred to as “companion treatment”, and the diagnostic agent therefor is sometimes referred to as “companion diagnostic agent”.
  • therapeutic agent refers to any agent that can treat a target condition (for example, a disease such as a malignant tumor) in a broad sense.
  • the “therapeutic agent” may be a pharmaceutical composition comprising an active ingredient and one or more pharmacologically acceptable carriers.
  • the pharmaceutical composition can be produced by any method known in the technical field of pharmaceutics, for example, by mixing the active ingredient and the carrier.
  • the form of use of the therapeutic agent is not limited as long as it is a substance used for treatment, and it may be an active ingredient alone or a mixture of an active ingredient and an arbitrary ingredient.
  • the shape of the carrier is not particularly limited, and may be, for example, a solid or a liquid (for example, a buffer solution).
  • the therapeutic agent for malignant tumor includes a drug (prophylactic agent) used for preventing malignant tumor, or a growth inhibitor of malignant tumor cells.
  • prevention means that a certain disease or disorder (for example, malignant tumor) is prevented from becoming such a state before it becomes such a state. Diagnosis can be performed using the drug of the present invention, and malignant tumors, for example, can be prevented using the drug of the present invention as necessary, or countermeasures for prevention can be taken.
  • a certain disease or disorder for example, malignant tumor
  • prophylactic agent refers to any agent that can prevent a target condition (for example, a disease such as a malignant tumor) in a broad sense.
  • interaction refers to two substances. Force (for example, intermolecular force (van der Waals force), hydrogen bond, hydrophobic interaction between one substance and the other substance. Etc.). Usually, two interacting substances are in an associated or bound state. The detection, inspection and diagnosis of the present invention can be realized by utilizing such interaction.
  • bond means a physical or chemical interaction between two substances or a combination thereof. Bonds include ionic bonds, non-ionic bonds, hydrogen bonds, van der Waals bonds, hydrophobic interactions, and the like.
  • a physical interaction (binding) can be direct or indirect, where indirect is through or due to the effect of another protein or compound. Direct binding refers to an interaction that does not occur through or due to the effects of another protein or compound and does not involve other substantial chemical intermediates.
  • a “factor” (or drug, detection agent, etc.) that interacts (or binds) “specifically” to a biological agent such as a polynucleotide or a polypeptide is defined as that
  • the affinity for a biological agent such as a nucleotide or polypeptide thereof is typically equal or greater than the affinity for other unrelated (especially less than 30% identity) polynucleotides or polypeptides. Includes those that are high or preferably significantly (eg, statistically significant). Such affinity can be measured, for example, by hybridization assays, binding assays, and the like.
  • a first substance or factor interacts (or binds) “specifically” to a second substance or factor means that the first substance or factor has a relationship to the second substance or factor. Interact (or bind) with a higher affinity than a substance or factor other than the second substance or factor (especially other substances or factors present in the sample containing the second substance or factor) That means.
  • Specific interactions (or bindings) for substances or factors include, for example, hybridization in nucleic acids, antigen-antibody reactions in proteins, enzyme-substrate reactions, etc., nucleic acid and protein reactions, protein-lipid interactions, nucleic acid-lipids Examples include, but are not limited to, interactions.
  • the first substance or factor “specifically interacts” with the second substance or factor means that the first substance or factor has the second substance Or having at least a part of complementarity to the factor.
  • both substances or factors are proteins
  • the fact that the first substance or factor interacts (or binds) “specifically” to the second substance or factor is, for example, by antigen-antibody reaction Examples include, but are not limited to, interaction by receptor-ligand reaction, enzyme-substrate interaction, and the like.
  • the first substance or factor interacts (or binds) “specifically” to the second substance or factor by means of an antibody and its antigen Interaction (or binding) between is included.
  • an object in a sample can be detected or quantified.
  • detection or “quantification” of polynucleotide or polypeptide expression includes mRNA measurement and immunoassay methods, including, for example, binding or interaction with a detection agent, test agent or diagnostic agent. It can be achieved using any suitable method. Examples of molecular biological measurement methods include Northern blotting, dot blotting, and PCR.
  • an immunological measurement method for example, an ELISA method using a microtiter plate, an RIA method, a fluorescent antibody method, a luminescence immunoassay (LIA), an immunoprecipitation method (IP), an immunodiffusion method (SRID), an immune method
  • LIA luminescence immunoassay
  • IP immunoprecipitation method
  • SRID immunodiffusion method
  • an immune method examples are turbidimetry (TIA), Western blotting, immunohistochemical staining, and the like.
  • the quantification method include ELISA method and RIA method. It can also be performed by a gene analysis method using an array (eg, DNA array, protein array).
  • the DNA array has been extensively outlined in (edited by Shujunsha, separate volume of cell engineering "DNA microarray and the latest PCR method”). For protein arrays, see NatGenet.
  • gene expression analysis methods include, but are not limited to, RT-PCR, RACE method, SSCP method, immunoprecipitation method, two-hybrid system, in vitro translation and the like.
  • RT-PCR RT-PCR
  • RACE method RACE method
  • SSCP method immunoprecipitation method
  • two-hybrid system in vitro translation and the like.
  • further analysis methods are described in, for example, Genome Analysis Experimental Method / Yusuke Nakamura Laboratory Manual, Editing / Yusuke Nakamura Yodosha (2002), etc., all of which are incorporated herein by reference. Is done.
  • expression level refers to the amount of polypeptide or mRNA that is expressed in a target cell, tissue, or the like. Such expression level is evaluated by any appropriate method including immunoassay methods such as ELISA, RIA, fluorescent antibody, Western blot, and immunohistochemical staining using the antibody of the present invention.
  • the expression level of the peptide at the mRNA level is mentioned.
  • “Change in expression level” means expression at the protein level or mRNA level of the polypeptide used in the present invention evaluated by any appropriate method including the above immunological measurement method or molecular biological measurement method. Means that the amount increases or decreases. By measuring the expression level of a certain marker, various detection or diagnosis based on the marker can be performed.
  • “reduction” or “suppression” or synonyms for activity, expression products (eg, proteins, transcripts (RNA, etc.)) or synonyms are reductions in the quantity, quality or effect of a particular activity, transcript or protein. Or activity to decrease. When “disappears” among the decreases, it means that the activity, the expression product, etc. are below the detection limit, and in particular, may be “disappeared”. As used herein, “disappearance” is encompassed by “decrease” or “suppression”.
  • “increase” or “activation” of an activity, expression product eg, protein, transcript (RNA, etc.) or a synonym thereof refers to a quantity, quality or effect of a particular activity, transcript or protein. An activity that increases or increases.
  • in vivo refers to the inside of a living body. In a particular context, “in vivo” refers to the location where a target substance is to be placed.
  • in vitro refers to a state in which a part of a living body is removed or released “outside the living body” (for example, in a test tube) for various research purposes. A term that contrasts with in vivo.
  • ex vivo refers to a series of actions ex vivo when a certain treatment is performed outside the body but is then intended to be returned to the body. Also in the present invention, an embodiment in which cells in the living body are treated with the drug of the present invention and returned to the patient can be envisaged.
  • “combination” of a certain pharmaceutical component for example, the antibody of the present invention, such as anti-FSTL1 antibody
  • another pharmaceutical component for example, anti-PD-L1 antibody
  • Sequential administration is intended to encompass administration of the therapeutic agent (s) and the antibodies of the invention (one or more) to the subject in various orders.
  • a drug for administering a pharmaceutical component for example, the antibody of the present invention, such as an anti-FSTL1 antibody
  • another pharmaceutical component for example, an anti-PD-L1 antibody
  • a pharmaceutical component for example, the antibody of the present invention, such as an anti-FSTL1 antibody
  • another pharmaceutical component for example, an anti-PD-L1 antibody
  • the “kit” is a unit provided with a portion to be provided (eg, a test agent, a diagnostic agent, a therapeutic agent, an antibody, a label, instructions, etc.) usually divided into two or more compartments.
  • a portion to be provided eg, a test agent, a diagnostic agent, a therapeutic agent, an antibody, a label, instructions, etc.
  • This kit form is preferred when it is intended to provide a composition that should not be provided in admixture for stability or the like, but preferably used in admixture immediately before use.
  • Such kits preferably include instructions or instructions that describe how to use the provided parts (eg, test agents, diagnostic agents, therapeutic agents, or how the reagents should be processed).
  • the kit when the kit is used as a reagent kit, the kit usually contains instructions including usage of test agents, diagnostic agents, therapeutic agents, antibodies, etc. Is included.
  • the “instruction” describes a method for using the present invention for a doctor or other user.
  • This instruction manual includes a word indicating that the detection method of the present invention, how to use a diagnostic agent, or administration of a medicine or the like is given.
  • the instructions may include a word indicating that the administration site is oral or esophageal administration (for example, by injection).
  • This instruction is prepared according to the format prescribed by the national regulatory agency (for example, the Ministry of Health, Labor and Welfare in Japan and the Food and Drug Administration (FDA) in the United States, etc.) in the country where the present invention is implemented, and approved by the regulatory agency. It is clearly stated that it has been received.
  • the instructions are so-called package inserts and are usually provided in a paper medium, but are not limited thereto, and are in a form such as an electronic medium (for example, a homepage or an e-mail provided on the Internet). But it can be provided.
  • the present invention is an anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof (collectively referred to herein as “anti-FSTL1 antibody etc.” or “antibody of the present invention”).
  • the antibody comprises amino acids 48 to 100, 148 to 170 or 148 to 162, 193 to 228, 193 to 216 and 205 to 228 of SEQ ID NO: 251 (amino acid sequence of human FSTL1), and
  • An anti-FSTL1 antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, having an epitope in a region selected from the group consisting of positions 233 to 289 or positions 272 to 289 is provided. In one preferred embodiment, it may have an epitope in the region of amino acids 148 to 162 or 272 to 289 of SEQ ID NO: 251 (amino acid sequence of human FSTL1).
  • the epitope is a continuous or discontinuous 5 amino acids or more, or 6 amino acids or more, 7 amino acids or more, 8 amino acids or more, 9 amino acids or more, 10 amino acids or more, 11 amino acids or more in the corresponding region, A region of 12 amino acids or more or a combination thereof may be applicable.
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention is amino acids 48 to 100, 148 to 162, 205 to 228 of SEQ ID NO: 250 (the amino acid sequence of human FSTL1). And a region selected from the group consisting of positions 272 to 289.
  • These epitopes include those that have been confirmed to be effective in animal studies.
  • # 6-55, # 7-34, and # 13 recognize 148-162 sites.
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention is selected from the group consisting of amino acids 148 to 162 and 205 to 228 of SEQ ID NO: 250 (amino acid sequence of human FSTL1). Have an epitope in the region. These epitopes include those recognized by antibodies that have been confirmed to be more active.
  • it has an epitope in the region of amino acid positions 48-100, 148-162, or 205-228 of SEQ ID NO: 251 (amino acid sequence of human FSTL1).
  • these epitopes include those that have been shown to have efficacy in in vitro or in vivo studies.
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention in another embodiment, has a particular CDR.
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention, or a fragment or functional equivalent thereof is an antibody or antigen-binding fragment thereof comprising any sequence comprising CDRs of the full-length sequence, or a variable region of a sequence relating to a specific antibody of the invention Or an antigen-binding fragment thereof comprising 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12 in the framework region thereof , 15 or 17, or 20 or more substitutions, impossibility or deletions, or an antigen-binding fragment thereof.
  • heavy chain CDR1,2,3, light chain CDR1,2,3 include antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 255; heavy chain) : SEQ ID NO: 257), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 259; heavy chain: SEQ ID NO: 261), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 263; heavy chain: SEQ ID NO: 265), # 5- 10 (light chain: SEQ ID NO: 267; heavy chain: SEQ ID NO: 269), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 271; heavy chain: SEQ ID NO: 273), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy) Chain: SEQ ID NO: 277), # 7-34 (light chain: SEQ ID NO: 279; heavy chain: SEQ ID NO: 281), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 283; heavy chain: SEQ ID NO: 285), # 8- 4 (light chain: SEQ ID NO:
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention is a variant of the antibody, wherein one or several substitutions, additions or deletions are made in the framework of the antibody in the variant.
  • the CDR may be a mutant that does not contain a mutation.
  • an antibody or fragment or functional equivalent thereof preferably has inhibitory activity downstream of FSTL1 or its signal transduction pathway.
  • Such activity can be determined by examining the expression level or activity of FSTL1, or by directly using cancer cell lines to inhibit cell growth, metastasis activity, bone metastasis inhibition, MSC immunosuppression and immunodeficiency, etc.
  • Activity that enhances failure for example, proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, and immunosuppressive activity or immunodeficiency
  • immunosuppression or immunodeficiency of immune-related cells eg, proliferation of regulatory T cells, immunosuppressive activity of regulatory T cells
  • antibodies of the present invention are monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, human antibodies, multifunctional antibodies, bispecific or oligospecific antibodies.
  • CDR amino acid sequences of each antibody clone are shown as underlined in the heavy and light chain sequences.
  • # 5-2 Light chain (L chain; SEQ ID NO: 255): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, and CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGSGYYYG WYQQKSPGSVPVTVIY NNNNRPS DIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYYC GGYDNSGTGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 261): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 265): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGSYVGSYYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSAGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 269): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 273): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSAIPGETVKITC SGGGNNYG WYQQRSPGSAPVTVIY YNDNRPS NIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQADDEAIYYC GSWDSNTDSGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 277): CDR is underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGNNYG WYQQKSPGSAPVTVIY YNNNRPS NIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQAEDEAVYYC GSYEGSTDSGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 281): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSSGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 285): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • CDR is underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASSQPSSVSANPGETVKITC SGGSGYYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNDNKPS DIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYFC GGYDNSGTGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 289): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain SEQ ID NO: 293: CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGEAVKITC SGGSGSYYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNQRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQVEDEAVYFC GGYDSSTGHGGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 297): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGSRYG WYQQKSPGSAPVTVIY YNDKRPS NIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFC GGYDGSTDAA FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 301): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKLTC SGGGSRYG WYQQKSPGSAPVTVIY YNDKRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFC GGYDGSRDAGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 305): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGGNNYG WYQQKSPGSAPVTVIY NNNNRPS NIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYYC GSYDSSSDSGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 309): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVKITC SGGSGSYG WFQQKSPGSAPVTVIY WDDRRPS DIPSRFSGSKSGSIHTLTITGVQADDEAVYLC GNAVRSGTGYVGV FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 313): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • ASTQPSSVSANPGETVEITC SGDSSYYG WFQQKSPGSAPVTVIY DNTNRPS DIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYC GGYDSSTYDGI FGAGTTLTVL H chain (SEQ ID NO: 317): CDR is shown underlined, and CDR1, CDR2, CDR3 are shown in order from the N-terminus.
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7-34 ( Light chain: SEQ ID NO: 279; heavy chain: SEQ ID NO: 281), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 283; heavy chain: SEQ ID NO: 285), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain: SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain: SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33 (Light chain: SEQ ID NO: 315; heavy chain: SEQ ID NO: 317) of an antibody selected from the group consisting of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 or their At least one, preferably two, three, four, five, or even more preferred functional equivalents (eg, those containing one, two or three or more conservative amino acid substitutions) Ku includes all six. In these clones, stronger drug effic
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention has the full length of a particular variable region.
  • Such specific variable regions are antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 255; heavy chain: SEQ ID NO: 257), # 5-3 (light chain: SEQ ID NO: 259; heavy chain: SEQ ID NO: 261), Antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 263; heavy chain: SEQ ID NO: 265), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 267; heavy chain: SEQ ID NO: 269), # 5-43 (light chain: sequence) No.
  • the anti-FSTL1 antibodies of the invention are # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7-34 (light Chain: SEQ ID NO: 279; heavy chain: SEQ ID NO: 281), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 283; heavy chain: SEQ ID NO: 285), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301) ), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain: SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 315; heavy chain) : Full length of a variable region of an antibody selected from the group consisting of SEQ ID NO: 317) or a functional equivalent thereof (eg, comprising one, two, three or more conservative amino acid substitutions).
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7 (light chain : SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain: SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 315; heavy chain: SEQ ID NO: 317) full length of the variable region of an antibody selected from the group consisting of or a functional equivalent thereof (eg one, two, three or more) Including conservative amino acid substitutions).
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 5-2 (light chain: SEQ ID NO: 345; heavy chain: SEQ ID NO: 347), # 5-3 ( Light chain: SEQ ID NO: 349; heavy chain: SEQ ID NO: 351), antibody # 5-8 (light chain: SEQ ID NO: 353; heavy chain: SEQ ID NO: 355), # 5-10 (light chain: SEQ ID NO: 357; heavy chain) : SEQ ID NO: 359), # 5-43 (light chain: SEQ ID NO: 361; heavy chain: SEQ ID NO: 363), # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 365; heavy chain: SEQ ID NO: 367), # 7-34 (Light chain: SEQ ID NO: 369; heavy chain: SEQ ID NO: 371), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 373; heavy chain: SEQ ID NO: 375), # 8-4 (light chain: SEQ ID NO: SEQ ID NO:
  • # 8-8 (light chain: SEQ ID NO: 385; heavy chain: SEQ ID NO: 387), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 389; heavy chain: SEQ ID NO: 391), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 393; heavy chain: SEQ ID NO: 395), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 397; heavy chain: SEQ ID NO: 399), # 22 (light chain: SEQ ID NO: 401; heavy chain: SEQ ID NO: 403) and # 33 (light A full length of an antibody selected from the group consisting of: chain: SEQ ID NO: 405; heavy chain: SEQ ID NO: 407) or a humanized sequence thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody of the invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 365; heavy chain: SEQ ID NO: 367), # 7-34 ( Light chain: SEQ ID NO: 369; heavy chain: SEQ ID NO: 371), # 8-1 (light chain: SEQ ID NO: 373; heavy chain: SEQ ID NO: 375), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 389; heavy chain: SEQ ID NO: 391), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain: SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 397; heavy chain: SEQ ID NO: 399) and # 33 (light chain: SEQ ID NO: 405; heavy) A full length of an antibody selected from the group consisting of: chain: SEQ ID NO: 407) or a humanized sequence thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention is antibody # 6-55 (light chain: SEQ ID NO: 275; heavy chain: SEQ ID NO: 277), # 7 (light chain: SEQ ID NO: 299; heavy chain: SEQ ID NO: 301), # 10 (light chain: SEQ ID NO: 303; heavy chain: SEQ ID NO: 305), # 13 (light chain: SEQ ID NO: 307; heavy chain: SEQ ID NO: 309) and # 33 It comprises the full length of an antibody selected from the group consisting of (light chain: SEQ ID NO: 255; heavy chain: SEQ ID NO: 257) or a humanized sequence thereof.
  • the antibody of the invention is a humanized antibody and the anti-FSTL1 antibody of the invention, or fragment or functional equivalent thereof, is a humanized anti-FSTL1 antibody, or fragment or functional equivalent thereof. It can be.
  • the humanized antibodies of the invention comprise H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424, respectively) and L chain FR1, FR2 , FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 434, 436, 438 and 440, respectively).
  • the humanized antibodies of the invention comprise SEQ ID NOs: 410, 412, 414 and 416 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (1)), SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424 (H (2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 426, 428, 430 and 432 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4).
  • SEQ ID NOs: 410, 412, 414 and 416 humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (1)
  • SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424 H (2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4
  • SEQ ID NOs: 426, 428, 430 and 432 H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4
  • Heavy chain framework sequences and SEQ ID NOs: 434, 436, 438 and 440 (L (1) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 480, 482, 484 and 486 (L (2)) Humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 488, 490, 492 and 494 (L (3) A light chain framework sequence comprising a light chain sequence FR1, FR2, FR3 and FR4), or a heavy chain sequence FR1, FR2, FR3 of a corresponding chicken sequence in the heavy chain framework sequence and the light chain framework sequence.
  • the heavy chain framework sequence is that of H (2), ie SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (2)) or heavy chains thereof.
  • a sequence obtained by mutating (backmutating) one or more amino acids different from the heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of the corresponding chicken sequence to amino acids in the chicken sequence may be used. This is because, in the present specification, when H (2) is used, the KD value is one-order superior to H (1) and H (3).
  • the light chain framework sequence comprising SEQ ID NOs 434, 436, 438 and 440 (L (1) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4, respectively)
  • a sequence obtained by mutating (backmutating) one or more amino acids different from the chicken light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 SEQ ID NOs: 459, 460 or 463, 461 or 464 and 462, respectively
  • the humanized antibodies are SEQ ID NOs: 410, 412, 414 and 416 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (1)), SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424 (H ( 2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or heavy chain frameworks comprising SEQ ID NOs: 426, 428, 430 and 432 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) 1 to 8 amino acids that differ from the corresponding chicken heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 455, 456, 457 and 458, respectively) in the sequence or the heavy chain framework sequence , 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8) sequences mutated to amino acids in chicken sequence SEQ ID NOs: 434, 436, 438 and 440 (H (1) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NO
  • At least one, more preferably at least 2, at least 3, at least 4, at least 5 of the different amino acids considered during backmutation of the humanized antibody are Vernier residues. Selected from. It is understood that mutations other than Vernier residues may be included as long as the activity is optimized. In a preferred embodiment, all of the different amino acids are selected from Vernier residues. For the Vernier residue, see, for example, JP2010-4895, Nishibori N et al. , Molecular Immunology 43 (2006) 634-642, etc., and these descriptions are incorporated herein by reference.
  • the Vernier residues are the FR1 amino acid (SEQ ID NO: 418) positions 28 and 30 of the humanized H chain, the FR2 amino acid (SEQ ID NO: 420) position 12, the FR3 amino acid (SEQ ID NO: 422) position 2, 10; It includes positions 13, 17 and 32, and FR1 (SEQ ID NO: 434) 20 of the L chain and FR3 amino acid (SEQ ID NO: 438) at positions 10, 15 and 31. It is understood that the Vernier sequence can vary if the sequences are different.
  • the antibody of the invention is a humanized antibody and is H (1) -L (1), H (2) -L (1), H (3) -L (1), H (1) -L (2), H (2) -L (2), H (3) -L (2), H (1) -L (3), H (2) -L (3), H (3) It has any one of the H chains FR1, FR2, FR3 and FR4 and L chains FR1, FR2, FR3 and FR4 of -L (3).
  • the antibody of the invention is a humanized antibody and comprises H (2) -L (1) heavy chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 418, 420, 422 and 424, respectively). And L chains FR1, FR2, FR3 and FR4 (SEQ ID NOs: 434, 436, 438 and 440, respectively).
  • the antibody of the invention is a humanized antibody, SEQ ID NO: 410, 412, 414 and 416 (H (1) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NO: 418, 420, 422 and 424 (H (2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 426, 428, 430 and 432 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2 , FR3 and FR4) including heavy chain framework sequences or variants thereof containing 1-10 amino acid substitutions, additions and / or deletions, and humanized light sequences of SEQ ID NOs: 434, 436, 438 and 440 (L (1)).
  • an antibody of the invention is a humanized antibody, SEQ ID NOs: 410, 412, 414 and 416 (humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4 of H (1)), sequence Nos. 418, 420, 422 and 424 (H (2) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 426, 428, 430 and 432 (H (3) humanized heavy chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) and heavy chain framework sequences and SEQ ID NOs: 434, 436, 438 and 440 (humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4), SEQ ID NOs: 480, 482, 484 and 486 (L (2) humanized light chain sequences FR1, FR2, FR3 and FR4) or SEQ ID NOs: 488, 490, 492 and 494 L (3) a light chain framework sequence comprising a humanized light chain sequence FR
  • a transformant can be produced by introducing into a cell a polynucleotide or vector encoding an antibody in an anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • an anti-FSTL1 antibody according to an embodiment of the present invention, or an antibody thereof in a fragment or functional equivalent can be produced.
  • the transformant may be a cell of a human or a mammal other than a human (eg, rat, mouse, guinea pig, rabbit, cow, monkey, etc.). Examples of mammalian cells include Chinese hamster ovary cells (CHO cells), monkey cells COS-7, and the like. Alternatively, the transformant may be Escherichia genus, yeast or the like.
  • vectors examples include plasmids derived from E. coli (for example, pET-Blue), plasmids derived from Bacillus subtilis (for example, pUB110), yeast-derived plasmids (for example, pSH19), animal cell expression plasmids (for example, pA1-11, pcDNA3.1- V5 / His-TOPO), bacteriophages such as ⁇ phage, virus-derived vectors, and the like can be used.
  • These vectors may contain components necessary for protein expression such as promoter, origin of replication, or antibiotic resistance gene.
  • the vector may be an expression vector.
  • antibody purification for example, ammonium sulfate, ethanol precipitation, protein A, protein G, gel filtration chromatography, anion, cation exchange chromatography, phosphocellulose chromatography, hydrophobic interaction chromatography, affinity chromatography, hydroxyl Apatite chromatography or lectin chromatography can be used (Protein Experiment Handbook, Yodosha (2003): 27-52.).
  • the present invention provides a medicament comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the medicament of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof is the same as the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that it can be used.
  • the present invention provides the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof for use as a medicament.
  • the antibody for pharmaceutical use of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the invention treats a disease associated with FSTL1, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • an anti-FSTL1 antibody of the invention or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention provides an anticancer agent comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the anticancer agent of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, is described in any embodiment and any examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that any of the antibodies can be used.
  • the present invention provides the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof for the treatment or prevention of cancer.
  • the antibody for the treatment or prevention of cancer of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof can be used in any of the embodiments and examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It will be appreciated that antibodies can be used.
  • the present invention is for treating or preventing cancer, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • an anti-FSTL1 antibody of the present invention or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention provides a therapeutic or preventive agent for metastatic malignant tumors or metastasis of malignant tumors, comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • the anti-FSTL1 antibody used in the metastatic malignant tumor of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, is described in any embodiment and any examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that any of the antibodies can be used.
  • the present invention provides an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof for treating or preventing metastatic malignant tumors or metastasis of malignant tumors.
  • the antibody for treating metastatic malignant tumor of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, is described in any embodiment and any examples described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that any of the antibodies can be used.
  • the present invention relates to metastatic malignancies or malignant tumors comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • Methods are provided for treating or preventing metastasis.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the disease targeted by the present invention is cancer, for example, melanoma, colon cancer, breast cancer, lymphoma, lung cancer, prostate cancer, kidney cancer, head and neck cancer, esophageal cancer, stomach cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, bladder cancer, Examples include, but are not limited to, cervical cancer, brain central nerve tumors, sarcomas, leukemias and multiple myeloma and their metastatic malignancies. These cancers may be cancer types that highly express SNAIL and / or FSTL1.
  • the present invention provides an inhibitor of cancer cell metastasis comprising the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, and bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis,
  • the present invention provides an inhibitor capable of inhibiting lymph node metastasis, brain metastasis, particularly bone metastasis, and lung metastasis.
  • the present invention is intended to inhibit cancer cell metastasis (eg, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis), particularly for bone metastasis, lung metastasis inhibition.
  • cancer cell metastasis eg, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis
  • the anti-FSTL1 antibody of the present invention or a fragment or functional equivalent thereof.
  • An antibody for inhibiting metastasis of cancer cells of the present invention eg, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis
  • an antibody for inhibiting bone metastasis, lung metastasis, or the like can use the antibodies of any embodiment and any example described herein, such as in the section (Anti-FSTL1 antibody).
  • the invention provides cancer cell metastasis (e.g., comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the invention, or a fragment or functional equivalent thereof
  • the present invention provides a method for inhibiting bone metastasis, lung metastasis, in particular, bone metastasis, lung metastasis, liver metastasis, spleen metastasis, lymph node metastasis, brain metastasis).
  • inhibiting bone metastasis has been extremely difficult in the past.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention relates to inhibition of induction or enhancement of immune failure such as immunosuppression and immunodeficiency by mesenchymal stem cells (MSC) containing the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • MSC mesenchymal stem cells
  • Enhancement of immunological failure such as immunosuppression and immunodeficiency includes the proliferation of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, enhancement of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of MSC cells having immunosuppressive activity or immunodeficiency activity, and immunity It includes at least one acquisition of immunosuppressive activity or immunodeficiency activity of a cell having no suppressive activity or immunodeficiency activity.
  • Enhancement of immune failure such as immunosuppression and immunodeficiency by mesenchymal stem cells also includes the concept of induction of mesenchymal stem cells that induce immune failure such as immunosuppression and immunodeficiency.
  • MSCs with high immunosuppressive ability are also known as activated MSCs or cancer-related MSCs.
  • FSTL1 secreted from Snail-positive cancer cells, etc.
  • MSC acts on so-called progenitor cells of MSC, and MSC uses immunosuppressive cells as immunosuppressive immune-related cells (Eg, regulatory T cells, regulatory dendritic cells, tolerant dendritic cells, and bone marrow-derived immunosuppressive cells) and / or factors that promote proliferation and / or enhance their immunosuppressive activity It is considered that an immunosuppressed state is caused by secreting a factor that causes so-called progenitor cells to become immunosuppressive cells. Therefore, it is considered that the action of FSTL1 is suppressed by the action of an anti-FSTL1 antibody as in the present invention, and as a result, the immunosuppressed state is released.
  • immunosuppressive immune-related cells Eg, regulatory T cells, regulatory dendritic cells, tolerant dendritic cells, and bone marrow-derived immunosuppressive cells
  • the present invention relates to the acquisition and / or enhancement of immune disruption activity such as immunosuppression, immunodeficiency and the like of immune-related cells containing the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof.
  • Inhibitors are provided.
  • the acquisition and / or enhancement of immunosuppression activity such as immunosuppression of immune related cells and immunodeficiency also includes the phenomenon of induction of immunosuppressive cells.
  • Inhibitors of acquisition and / or enhancement will include the concept of inhibitors of induction of cells with immune disruption activity such as immunosuppression, immunodeficiency.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the present invention provides the anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, for inhibiting the acquisition and / or enhancement of immune disruption activity such as immunosuppression of immune-related cells and immunodeficiency.
  • an antibody, or a fragment or functional equivalent thereof, for inhibiting the acquisition and / or enhancement of immune disruption activity such as immunosuppression and immune deficiency of the immune-related cells of the present invention is described herein (anti-FSTL1 antibody). It will be understood that the antibodies of any of the embodiments and any of the examples described in the sections etc. can be used.
  • the present invention provides for obtaining immunosuppressive activity and / or comprising administering an effective amount of an anti-FSTL1 antibody of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof, to a subject in need thereof.
  • Methods are provided for inhibiting potentiation.
  • the antibody that can be used in the method of the present invention, or a fragment or functional equivalent thereof uses the antibody of any embodiment and any example described in the section (anti-FSTL1 antibody) and the like herein. It is understood that you can.
  • the acquisition and / or enhancement of immunosuppression activity such as immunosuppression and immunodeficiency in the inhibitor of the present invention is the proliferation and control of regulatory T cell proliferation and regulatory T cell immunosuppressive activity.
  • Enhancement of immunosuppressive activity differentiation into tolerant dendritic cells, proliferation of bone marrow-derived immunosuppressive cells, enhancement of immunosuppressive activity of bone marrow-derived immunosuppressive cells and differentiation into bone marrow-derived immunosuppressive cells, exhausted T cells At least one, preferably at least two, more preferably three, more preferably selected from the group consisting of proliferation, enhancement of immunodeficiency activity of exhausted T cells, and induction (increase or differentiation) of exhausted T cells 4 more preferred 5, more preferably six, more preferably seven, more preferably eight

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Abstract

　本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であって、該抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。また、本発明は、ＦＳＴＬ１抑制剤と別のがん治療との組み合わせ物を提供する。本発明により、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻が効果的に解除されることが理解される。

Description

ＦＳＴＬ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤およびその併用剤
　本発明は、悪性腫瘍の治療薬等に関する。
［背景技術］
　癌が悪化する原因として免疫抑制が知られるようになった。免疫抑制を解除すると癌の効果的な治療につながるとして開発が進められている。
　特許文献１では、免疫抑制解除に関する分子の報告がなされた。FSTL1についてはある程度研究が進んでいるが（非特許文献１および２）、その機能は不明な点がまだまだ多い。
　免疫抑制解除については、いまだ発展途上であり、癌患者の生体内には、癌を攻撃して排除しようとする宿主免疫が存在するが、癌細胞の側でも、宿主免疫の監視から逃れようとするシステムを備えていることが知られており、例えば、癌細胞の存在下で制御性Ｔ細胞を除去すると、癌細胞に対する免疫反応が変化することがin　vitroとin　vivoで示されている（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）。また、胃癌（非特許文献４＝Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003，非特許文献５＝Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003参照）、直腸癌（非特許文献６＝Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999参照）、膵臓癌（非特許文献７＝Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002，８＝Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003参　照）、肺癌（非特許文献９＝Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001参照）、グリオーマ（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）において、制御性Ｔ細胞が増加することから、癌細胞による免疫回避システムに制御性Ｔ細胞が関与していると考えられている。しかし、そのメカニズムは明らかでなく、制御性Ｔ細胞由来のサイトカインがどのように貢献しているのか、未だに議論がある（非特許文献３参照）。
　さらに、制御性Ｔ細胞の欠損は重篤な自己免疫疾患を引き起こす（非特許文献１０＝Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001参照）ことから、自己免疫と癌免疫には共通のメカニズムが存在することと考えられている（非特許文献１１＝Turk　et
　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002参照）。このように、制御性Ｔ細胞は、免疫反応の抑制を通じ、癌細胞に対する免疫抑制だけでなく、自己免疫やアレルギー反応のような過剰免疫反応に関与していることが知られている（非特許文献１２＝Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007参照）。
　このような背景から、現在開発されている免疫抑制解除薬は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するようにデザインされているため、免疫系全体を修飾するためには、それらを併用せざるを得ないのが現状で、実際にはあまり有効ではないとされている。
［先行技術文献］
［特許文献］
　　［特許文献１］国際公開公報WO2009/028411
［非特許文献］
　　［非特許文献１］Cancer　Research　73(20);　6185-93,　2013
　　［非特許文献２］OncoImmunology　2:11,　e26528,　2013
　　［非特許文献３］Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006
　　［非特許文献４］Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003
　　［非特許文献５］Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003
　　［非特許文献６］Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999
　　［非特許文献７］Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002
　　［非特許文献８］Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003
　　［非特許文献９］Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001
　　［非特許文献１０］Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001
　　［非特許文献１１］Turk　et　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002
　　［非特許文献１２］Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007
［発明の概要］
［課題を解決するための手段］
　本発明者らは鋭意検討した結果、ＦＳＴＬ１が免疫抑制解除のためのより有望な標的であり、ＦＳＴＬ１の活性阻害が癌の悪化の一因と考えられる免疫抑制を誘導する癌関連間葉系幹細胞（MSC）の誘導や増殖、さらに、癌細胞の転移性、特に骨転移性の獲得に対しても効果があり、癌を排除する上で顕著な効果があることを突き止め、本発明を完成させた。本発明において、ＦＳＴＬ１は、制御性Ｔ細胞や制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞などの免疫抑制性細胞を誘導するMSCを誘導することができることが見出された。それゆえ、この上流を阻害することで、免疫抑制機序全体を一斉に解除できる可能性があり、効果的な抗癌剤としての利用価値があることを見出した。したがって、特に、本発明は、「免疫抑制または免疫不全等の免疫破綻を誘導するMSCの阻害」および「癌細胞の転移性阻害」の両方によって、従来の方法よりも効果的に生体内から癌を排除できると期待される点が注目されるべきものである。
　したがって、本発明は以下を提供する。
（１）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であって、該抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１７０位、１９３～２２８位、および２３３～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（２）前記抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位、および２３３～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、項目１に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（３）前記抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（４）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目３に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（５）前記抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目３に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（６）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目３～５のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（７）前記抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号９６；重鎖：配列番号９８）、＃５－３（軽鎖：配列番１００；重鎖：配列番号１０２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１０４；重鎖：配列番号１０６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１０８；重鎖：配列番号１１０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号１１２；重鎖：配列番号１１４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃８－４（軽鎖：配列番号１２８；重鎖：配列番号１３０）、＃８－７（軽鎖：配列番号１３２；重鎖：配列番号１３４）、＃８－８（軽鎖：配列番号１３６；重鎖：配列番号１３８）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１０（軽鎖：配列番号１４４；重鎖：配列番号１４６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）、＃２２（軽鎖：配列番号１５２；重鎖：配列番号１５４）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目３または５に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（８）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目３～７のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（９）項目１～８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む医薬。
（１０）項目１～８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤。
（１１）項目１～８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤。
（１２）項目１～８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
（１３）項目１～８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
（１４）前記転移は、骨転移または肺転移を含む、項目１３に記載の阻害剤。
（１５）項目１～８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫破綻の増強の阻害剤。（１６）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目１５に記載の阻害剤。
（１６Ａ）前記免疫破綻は免疫抑制を含む、項目１５に記載の阻害剤。
（１６Ｂ）前記免疫破綻は免疫不全を含む、項目１５に記載の阻害剤。
（１７）前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、項目１５に記載の阻害剤。
（１８）項目１～８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
（１９）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目１８に記載の阻害剤。
（１９Ａ）前記免疫破綻は免疫抑制を含む、項目１８に記載の阻害剤。
（１９Ｂ）前記免疫破綻は免疫不全を含む、項目１８に記載の阻害剤。
（２０）前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目１８に記載の阻害剤。
　本発明は以下をも提供する。
（Ａ１）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であって、該抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ２）前記抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、、２０５～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、項目Ａ１に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ３）前記抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位および２０５～２２８位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、項目Ａ１またはＡ２に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ４）抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ５）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目Ａ４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ６）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目Ａ４またはＡ５に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ７）前記抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目Ａ４～Ａ６のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ８）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目Ａ４～Ａ７のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ９）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目Ａ４～Ａ８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１０）前記抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号９６；重鎖：配列番号９８）、＃５－３（軽鎖：配列番１００；重鎖：配列番号１０２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１０４；重鎖：配列番号１０６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１０８；重鎖：配列番号１１０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号１１２；重鎖：配列番号１１４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃８－４（軽鎖：配列番号１２８；重鎖：配列番号１３０）、＃８－７（軽鎖：配列番号１３２；重鎖：配列番号１３４）、＃８－８（軽鎖：配列番号１３６；重鎖：配列番号１３８）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１０（軽鎖：配列番号１４４；重鎖：配列番号１４６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）、＃２２（軽鎖：配列番号１５２；重鎖：配列番号１５４）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目Ａ４～Ａ９のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１１）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目Ａ４～Ａ１０のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１２）前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目Ａ４～Ａ１１のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１３）前記抗体は、ヒト化抗体である、項目Ａ１～Ａ１２のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１４）前記ヒト化抗体は、配列番号１６１、１６３、１６５および１６７（Ｈ（１）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列および配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（Ｌ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列、または該重鎖フレームワーク配列および該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（配列番号２０６、２０７、２０８および２０９）および軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（配列番号２１０、２１１もしくは２１４、２１２もしくは２１５および２１３）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を有する、項目Ａ１３に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１５）前記ヒト化抗体は、配列番号１７１、１７３、１７５および１７７（それぞれヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列または該重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８および２０９）と相違するアミノ酸を１個～８個ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有し、配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（それぞれＬ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２１０、２１１もしくは２１４、２１２もしくは２１５および２１３）と相違するアミノ酸を１個～４個ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有する、項目Ａ１３またはＡ１４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１６）前記相違するアミノ酸の少なくとも１つは、Vernier残基から選択される、項目Ａ１４またはＡ１５に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１７）前記相違するアミノ酸のすべてが、Vernier残基から選択される、項目Ａ１４～Ａ１６のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１８）前記抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１６９、１７１、１７３および１７５）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１８５、１８７、１８９および１９１）を有する、項目Ａ１～Ａ１７のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（Ａ１９）項目Ａ１～Ａ１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む医薬。
（Ａ２０）項目Ａ１～Ａ１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤。
（Ａ２１）項目Ａ１～Ａ１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤。
（Ａ２２）項目Ａ１～Ａ１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
（Ａ２３）項目Ａ１～Ａ１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
（Ａ２４）前記転移は、骨転移または肺転移を含む、項目Ａ２３に記載の阻害剤。
（Ａ２５）項目Ａ１～Ａ１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫破綻の増強の阻害剤。
（Ａ２６）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目Ａ２５に記載の阻害剤。
（Ａ２７）前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、項目Ａ２５またはＡ２６に記載の阻害剤。
（Ａ２８）項目Ａ１～Ａ１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
（Ａ２９）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目Ａ２８に記載の阻害剤。
（Ａ３０）前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目Ａ２８またはＡ２９に記載の阻害剤。
（Ａ３１）別のがん治療と組み合わせることを特徴とする、項目Ａ１９に記載の医薬、項目Ａ２０に記載の抗がん剤、項目Ａ２１もしくはＡ２２に記載の治療剤、または項目Ａ２３～Ａ３０のいずれかに記載の阻害剤。
（Ａ３２）前記別のがん治療は別の抗がん剤または放射線療法またはその両者を含む、項目Ａ３１に記載の医薬、抗がん剤、治療剤または阻害剤。
　本発明において、上述した１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解することにより、当業者に認識される。
［発明の効果］
　本発明は、ＦＳＴＬ１の阻害によって、癌細胞に作用して直接的に、あるいは、免疫を抑制する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）や骨髄由来免疫抑制性細胞（ＭＤＳＣ）等の免疫抑制性または免疫不全性の細胞の分化誘導、増殖、および／または免疫抑制活性または免疫不全活性の増強を促進する間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の増殖および分化誘導を抑制して間接的に、癌細胞の転移を効果的に抑制し、抑制困難と考えられている癌転移、特に、有効な治療法が確立されていない骨転移をも効果的に抑制する。また、骨転移モデルだけに限らず、種々の動物がんモデルにおいても、Ｔｒｅｇの分化誘導、腫瘍の増殖、転移、衰弱による体重減少などが抑制される。このように、本発明は、多局面にわたり有効な癌治療薬を提供する。また、免疫抑制または免疫不全も従来のものに比べて一斉に解除できることから、本発明は、広範囲の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤をも提供する。本発明の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するものではないため、従来の免疫抑制解除剤の制約から広く解放され、疲弊Ｔ細胞に対する効果もあることから、免疫不全解除効果もあり、免疫破綻を解除する免疫破綻解除剤としても有用である。
　　［図１］図１は、本発明の抗体についてのＦＳＴＬ１に対する結合活性を示すグラフである（実施例２）。図１Ａは、初期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。白ひし形がクローン＃５－２、×がクローン＃５－４、黒三角がクローン＃５－８、白丸がクローン＃５－１０、白四角がクローン＃５－４３、白三角がクローン＃６－５５、黒丸がクローン＃７－３４を示し、黒四角がコントロールである抗ジニトロフェニル（ＤＮＰ）抗体を示す。結合活性の強さは＃５－１０、＃６－５５、＃７－３４＞＃５－３＞＃５－８＞＃５－４３であった。図１Ｂはマウスとヒトとの間の交差反応性を調査したものである。図１Ａで示した抗体の内、スクリーニングの際にマウスFSTL1にも反応性を示したクローンの結合活性を評価したものである。左にヒトFSTL1に対する結合活性を示し、右にマウスFSTL１に対する結合活性を示す。＃6-55および＃7-34ともヒトおよびマウスFSTL1にも強い結合活性を示した。図１では、抗体濃度は1000　ng/mlから希釈した。図2以降に示す実験では濃度をさらに希釈して実験を行った。
　　［図２］図２は、中期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す（実施例２）。白四角はクローン＃６－５５、白三角はクローン＃８－１、黒丸はクローン＃８－４、黒三角はクローン＃８－７、白ひし形はクローン＃８－８を示す。比較として＃6-55と共にアッセイを行っている。結合活性の強さはクローン＃６－５５、＃８－１、＃８－７＞＃８－４＞＃８－８であった。＊図2における抗体濃度は125　ng/mlから希釈した。
　　［図３］図３は、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローンの結合活性を示すグラフである（実施例２）。図３Aの右側と左側、図３Bの右側と左側はそれぞれ同時に評価したものであるが、クローン数が多いために図の見易さを重視して二つに図を分けたものである。図3Aは、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）も含め、ヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものである。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。ヒトFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１３＞＃８－１、＃１０＞＃８－４＞＃７、＃３３＞＃５－８＞＃２２であった。抗DNP抗体は結合活性が観察されなかった。図3Bは、同上のクローンのマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。マウスFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１０、＃１３＞＃２２＞＃７＞＃３３＞＃８－１であった。＃8-1が若干結合活性を示している。＃５－８、＃８－４、抗DNP抗体は全く結合活性を示さなかった。図３における抗体濃度は100ng/mlから希釈した。これらELISAによる結合活性の結果とin　vitro評価を元に、in　vivo評価に供試する有望なクローンを絞り込んだ（＃６－５５、＃７－３４、＃８－１）。更に新たなパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）もin　vivo評価の対象とした。
　　［図４］図４は、欠損変異体（デリションミュータント）および推定エピトープを示す（実施例３）。図４の上段はヒトFSTL1の模式図と欠損部位の位置を示す。これらヒトFSTL1の欠損体を抗原に用いたELISAにより、各クローンのエピトープの推定箇所を特定した。図４の下段は、取得したクローンと特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の推定エピトープとの対比を表に示す。さらにヒトおよびマウスに交差反応性を示すクローン（強い結合活性；○、弱い結合活性；△）を記載した。結合活性の強いまたは弱いの基準は、１２．５ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトおよびマウスの両方に結合活性がみられるものを「強い」と分類し、それより高い濃度でヒトおよびマウスの両方に初めて結合活性がみられるものを「弱い」とした。
　　［図５］図５は、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞（MSC)および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例６～７）。図５Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例６）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。その中でもクローン＃５－３、＃５－８、＃７－３４がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。図５Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例７）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロー
ル抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンが阻害活性を示した。特にクローン＃５－３、＃５－８がより高い阻害活性を示している。
　　［図６－１］図６もまた、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例８～１１）。図６Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例８；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃５－４３、＃６－５５、＃８－１、＃８－８で阻害活性が認められた。図６Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例９；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした)。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLおよびCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃６－５５がより高い阻害活性を示している。
　　［図６－２］図６Cは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1における　RANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１０）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、いずれの抗体クローンも阻害活性を示した。特に、クローン＃５－２、＃６－５５、＃８－４、＃８－７がより高い阻害活性を示した。図６Dは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す。ここでは、抗体用量依存試験を行った（実施例１１）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、クローン＃６－５５が阻害活性を示したが、抗体の用量依存性は認められなかった。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃６－５５はRANKL陽性細胞とCCR2陽性細胞の両方の細胞誘導を、同時に強く阻害した。
　　［図７］図７は、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１２；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlを使用した)。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。特に、クローン＃７－３４、＃５－２、＃６－５５、＃８－７の順で強い阻害活性が認められた。
　　［図８］図８は、in　vivo用に製造した抗FSTL1抗体および抗PD-L1抗体の活性評価を示す（実施例１３）。マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、右に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。いずれもコントロール抗体と比べ、これまでの結果と同様に高い阻害活性を示したことから、in　vivo用に製造されたこれらの抗体も妥当な抗体であることが示された。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想されるが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強いことが示された。
　　［図９］図９Aは、図８と同様の試験を別のクローン（各グラフに記載のクローン）によって行った結果を示す（実施例１４）。図８同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、右端に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、MDSCの誘導に対して阻害活性を示した。中でも、#13、#33はポジティブコントロール(#6‐55)と同等以上の阻害活性を示した。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図９Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール、続いて抗FSTL１抗体クローンを示す。いずれの抗FSTL1抗体クローンにおいても、FSTL1による脂肪細胞への分化能を有するMSCの分化誘導に対して阻害活性を示した。
　　［図１０］図１０は特許文献１（WO2009／028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体との活性比較を示す（実施例１５～１６）。（A）＃６－５５（マウスキメラ抗体）とR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体（ラット抗体；Ｒ＆Ｄと表示）とで比較するために用量依存性試験を行い、図8と同様にFSTL1の作用の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１５）。図１０Aは図８同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。R&D社製の抗体は＃6-55と同等レベルでFSTL1による各細胞の誘導の阻害活性を示した。用量依存性の効果は認められなかった。各アイソタイプ抗体を基準とすれば、＃６－５５の阻害活性の方がやや優位かと考えられる。図１０Bは脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１６）。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。＃6-55により、脂肪細胞への分化能をもつMSCの誘導が抗体用量依存的に阻害された。他方、R&D社製の抗体は阻害活性を示さなかったことから、＃６－５５の抗体の優位性が認められた。なお、脂肪細胞への分化能は、免疫抑制を誘導する癌関連MSC（図１０Aの中央の細胞にも示されている細胞）の機能の一つである。図１０Aと図１０Bとの比較から以下のことがいえる。すなわち、マウスコントロール抗体（マウス由来タンパク質）を投与した場合と比べて、ラットコントロール抗体という「ラット由来のタンパク質」をマウスの生体内に投与した際に、それ自体の反応が低下していることがわかる（特に10A中央の図）。これは、マウスの骨髄細胞を使ったための異物に対する免疫反応が若干生じたためと推測されるが、同じ「ラット由来タンパク質」であるR&D社のFSTL1抗体を投与した場合は、本来は、このラットコントロール抗体投与群と比較するのが妥当であるところ、それぞれのコントロールタンパク質に対する『抑制率』を考えると、マウスコントロール抗体投与群に対する6-55の抑制率に比べて、ラットコントロール抗体投与群に対するR&D社のFSTL1抗体の抑制率は小さく、実は、＃6-55の方が優位であることが示唆される。FSTL1によって誘導されたCD45陰性MSCの全てが免疫抑制を引き起こす癌関連MSCではなく、数種類のマーカーや脂肪細胞への分化能などで同定する必要がある。本発明の抗体はFSTL1の作用を阻害することで癌関連MSCの誘導を強く阻害することができると言える。
　　［図１１－１］図１１は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200　μg/0.1　mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図１１Ａ（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図１１Ｂ（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45陰性細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。両棒グラフについて、上から、処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。図１１Ｃ（マウス個体別腫瘍体積）は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果（皮下に移植した腫瘍増殖が抑制されていること）を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。
　　［図１１－２］図１１は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200　μg/0.1　mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図１１Ｄは、脾臓内の細胞集団の変化を示す。腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身に修飾／影響を受けることを提示する。左は、ＣＤ４５陰性細胞数を示し脾臓内でもＭＳＣが減少していることを示す。中央は、ＣＤ４陽性Ｆｏｘｐ３陽性Ｔ細胞数を示し、Ｔｒｅｇが減少していることを示す。右はＣＤ８陽性Ｔｉｍ３陽性Ｔ細胞数を示し、疲弊ＣＤ８陽性Ｔ細胞が減少していることを示す。ここで、疲弊とは、機能が低下または不全に陥っている状態を示し、Ｔｉｍ３はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきＣＤ８陽性Ｔ細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。
　　［図１２－１］図１２もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200μg/mouse=10mg/kg　相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図１２Ａ左（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図１２Ａ中央（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。図１２Ａ右（マウス体重）は体重変化に対する効果（骨転移によりマウスが衰弱するが、その指標の一つとして体重を計測したところこれが抑制されていることが示されること）を示す。図１２Aの棒グラフについて、上から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す図１２Bの５グラフは、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。被験対象である抗FSTL1抗体3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果が認められた。
　　［図１２－２］図１２もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図１２Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図１２Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。下右は　CD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　　［図１３］図１３もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１９）。本図では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較が示される。図１３Ａは、各種抗体の腫瘍容積に対する効果を時間経過とともに示す。腫瘍移植８、１１、１５日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１５日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day　0でGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を行い、Day　4で抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）を行い、Day　8で抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）を行い、Day　15で各種アッセイを行った。図１３Ｂ左は、骨転移に対する効果（GFP陽性細胞数（１０６／マウス））を示し、図１３Ｂ中央は骨髄中ＭＳＣの増加に対する効果（CD４５陰性細胞数（（１０６／マウス））について示す。図１３Ｂ　右は体重変化（体重（ｇ））に対する効果を示す。図１３Ｂはいずれも、上から、処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。対照抗体として、以下の既存の抗体薬を用いた。Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)；　Anti-PD-1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)；Anti-PD-L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全て対照抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　　［図１４］図１４もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２０）。本図では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。
図１４Ａは、３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Snail+腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。本実施例では、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価している。図１４Ｂは、肺転移結節数に関する結果を示す。左から、処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体（＃６－５５）は、CT26　皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強く抑制し、5匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(対照抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　　［図１５］図１５もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２１）。本図ではマウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day　0に腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）を行い、Day　4および7に抗体の腹腔内投与（10mg/kg）を行い、Day　14に薬効評価（皮下腫瘍増殖）を行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/c　マウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　　［図１６］図１６Aもまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２２）。
本図ではマウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。左パネルの２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図１６Bは体重変化に対する効果を示す。左はコントロール抗体、中央は抗FSTL1抗体、右は腫瘍細胞を投与していない未処置の個体を示す。縦軸は腫瘍体積（ｇ）を示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail強制発現細胞株の親株である。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、体重減少についても抑制活性を示した。
　　［図１７］図１７もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２３）。本図では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示す。２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植３、６、１０日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。FSTL1発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与は対照抗体投与群に比し有意に抑制した。
　　［図１８］図１８もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２４）。本図では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。４つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左端はコントロール抗体、左から２番目は１ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、右から２番目は３ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、そして右端は１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図１６の図の実験と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与は
対照抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　　［図１９］図１９は、本発明の抗FSTL1抗体（＃６－５５）と、既知の抗FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)とを含む実験系で％CD4+Foxp3＋CTLA+細胞を指標に活性を測定したTreg誘導実験の結果である。◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。
　　［図２０］図２０は、抗FSTL1 抗体の種々の機能を見た結果である。パネルAでは、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響の結果を示す。パネルAの上段は増殖の結果を示し、下段は浸潤の結果を示す。左からPanc1、MIAPaCa、MDA231、Hs294を示す。グラフは、上段では、3日に培養した後の細胞数（×１０３）を示す。下段では、3日間抗体で処理した腫瘍細胞の細胞数を示す。上段では、それぞれのグラフ中上からなにもなし（None）、コントロールＩｇＧ、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。下段ではそれぞれのグラフ中上がコントロールＩｇＧ、下が抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。これらから、Snail＋腫瘍細胞はきわめて転移性の高いことが明らかになった。パネルBでは、FSTL1刺激下における抗FSTL1 抗体の作用を示す。左は増殖能および右は浸潤能を示す。いずれも左から、何も添加していない（None）、左から２番目はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）
の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルC～Dでは、Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を示す。Ｃの左からＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤、ＣＣＲ２発現、ＲＡＮＫＬ発現の結果を示す。いずれも左から、Snailを強制発現させていない親株のPanc1細胞（Mock）、左から２番目から右端は抗FSTL1抗体（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルＤでは、マウスメラノーマＢ１６ｔ－Ｆ１０でのＳｎａｉｌトランスフェクタントでの結果を示す。いずれも左から、偽抗体（Mock）、左から２番目から右端はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。
　　［図２１］図２１は、マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験の結果を示す。パネルＡでは、左からＣＤ４５＋ＭＳＣ細胞、右はＣＤ４５＋ＣＤ１４６＋ＡＬＣＡＭ＋ｓＭＳＣを示す。左から、なにもなし、左から２番目から右端はＦＳＴＬ１（２０ｎｇ／ｍｌ）での結果であり、左から２番めから、イムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリンあり、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３のものを示す。パネルＢでは、ＣＤ４５－ＭＳＣ細胞、ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋　ｓＭＳＣ細胞、スフェアコロニー（自己新生能）を示す。左端はＦ１０－ｍｏｃｋを示し、左から２番目から右端はＦ１０－ｓｎａｉｌ＋を示す。左から２番目から順にイムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリン、抗ＦＳＴＬ１抗体での結果を示す。結果は左グラフおよび中グラフは細胞数で示される。スフェアコロニーは、コロニー数を示す。スフェアコロニーは３つあるグラフのうち左は総数、中は大きなコロニー（＞５０細胞）、右は小さなコロニー（１０～５０細胞）を示す。
　　［図２２］図２２は、マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験結果を示す。グラフは、ＣＤ４＋細胞中のFoxp3＋CTLA4+細胞の割合を示す。左端はなにもなし、左から２番目～右端はＦＳＴＬ（５ｎｇ／ｍｌ）の存在下での実験である。左から２番目からそれぞれマウスイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。
　　［図２３］図２３は、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種（＃７、＃１０、＃３３）について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性の評価を示す。左上は細胞接着、右上は細胞浸潤、左下はＣＣＲ２発現、右下はＲＡＮＫＬ発現を示す。それぞれのグラフ中、左からなにもなし、コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。＊は統計学的有意（ｐ＜０．０５）を示す。
　　［図２４－１］図２４（図２４－１～２４－４）は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのin vivo 薬効比較をした結果である。図２４－１は、上段に腫瘍増殖、下段に骨転移、骨髄中のｓＭＳＣ、脾臓中のｓＭＳＣを示す。上段の腫瘍増殖では左から、処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。統計学的有意かどうかはp値を示すことによって表示する。ｘ軸は腫瘍移植後の日数である（なおp値は１４日目の値である）。ｙ軸は腫瘍の容積（ｍｍ３）である。骨転移、２種のｓＭＳＣグラフトも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブ（腫瘍無モデル）を示す。横軸はそれぞれＧＦＰ＋腫瘍細胞の数、ＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数およびＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数を示す。
　　［図２４－２］図２４―２は、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群を示す。左から、CD4+T 細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞）、腫瘍特異的CD8+T細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ８＋テトラマー＋）、活性化NK 細胞（ＣＤ４５＋ＮＫ１．１＋ＮＫＧ２Ｄ＋）を示す。上段は、陽性細胞割合を示し。下段はｍｍ３当たりの細胞数を示す。各々のグラフとも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図２４－３］図２４－３は、図２４－２と同様の実験であり、腫瘍内に浸潤した免疫抑制性T 細胞群ならびに皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞についての結果を示す。左から、CD4+Treg（ＣＤ４５＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）、MDSCs（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋ＭＤＳＣｓ）、EMTを生じている腫瘍細胞（Ｓｎａｉｌ＋ＣＤ４４＋腫瘍）を示し、グラフの説明は図２４－２と同様である。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図２４－４］図２４－４は、脾臓内における免疫細胞群の結果を示す。左から、腫瘍特異的CD8+T 細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋テトラマー＋ＣＴＬｓ）、CD4+Treg（ＣＤ４＋ＣＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ＋Ｔｒｅｇｓ）、CD8+Treg（ＣＤ８＋ＣＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）を示す。グラフは脾臓当たりの細胞数（×１０６で表示）を示す。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図２５］図２５は、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価（腫瘍増殖、体重および骨髄中のｓＭＳＣ数）した結果である。腫瘍増殖では、統計学的有意はｐ値で示す。左はコントロールであり、抗ＦＳＴＬ１抗体は右に示す。横軸は腫瘍移植後の日数であり、縦軸は腫瘍容積（ｍｍ３）を示す。中グラフは動物の体重を示す。左からコントロール、抗体ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。体重はｇで表す。右グラフは骨髄中のｓＭＳＣを示す。左からコントロール、抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋細胞数（×１０６）を示す。
　　［図２６］図２６～図２７は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図２６は、腫瘍移植後の腫瘍容積の変動（ｍｍ３）を示す。左からコントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。いずれもカッコ内にコントロールと比較しての統計学的有意（ｐ値）を示し、＃６－５５との間の統計学的有意は線で結びp値で示す。横軸は腫瘍移植後の日数である。
　　［図２７］図２６～図２７は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図２７は、生存率を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示し縦軸はマウス生存率（ｎ＝５）を示す。コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。＃６－５５は細い黒線、＃７はグレイの破線、＃１０は太い黒の実線、＃１３はグレイの実線、＃３３は黒の濃い破線を示す。コントロールイムノグロブリンとの統計学的有意値（ｐ値）を示し、＃６－５５に対する統計学的有意（ｐ値）をカッコ内に示す。
　　［図２８］図２８は、マウスキメラ抗体の親和性データ（BIACOREによる測定）を示す。図は、マウスキメラ抗体に対する抗原結合量および解離量のプロットである。
　　［図２９］図２９～図３０は、ヒト化抗体のELISA結果を示す。図２９は、ヒト化6-55抗体のH鎖(IgG1型)とL鎖の組み合わせによる結合活性比較を示す。白丸に黒実線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ１、四角に黒実線がＨ２－Ｌ１、白三角に黒実線がＨ３－Ｌ１、黒四角に黒点線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ２、黒三角に黒点線がＨ２－Ｌ２、黒丸に黒点線がＨ３－Ｌ２、灰四角に灰実線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ１、灰三角に灰点線がＨ２－Ｌ１、灰丸に灰実線がＨ３－Ｌ１の結果を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４５０の値を示したものである。Ｈ２－Ｌ１が最良であることが分かった。
　　［図３０］図２９～図３０は、ヒト化抗体のELISA結果を示す。図３０では、本発明の抗体ヒト化＃６－５５Ｈ２－Ｌ１（ＩｇＧ１型）のヒトおよびマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。左がヒトＦＳＴＬ１および右がマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。黒丸はいずれもヒト＃６－５５抗体を示し、白四角がヒト抗ＤＮＰ抗体を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４９０／６３０の値を示したものである。
［発明を実施するための形態］
　以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。なお、同様な内容については繰り返しの煩雑を避けるために、適宜説明を省略する。また、本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「a」、「an」、「the」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。従って、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
　最初に本発明において使用される用語および一般的な技術を説明する。
　本明細書において「FSTL1」とは、フォリスタチンに類似するタンパク質であって、アクチビン結合タンパク質であるタンパク質をコードするものであり、フォリスタチン様配列に含まれるFSモジュールを含み、10個の保存システイン残基を有するとされている。関節リウマチに関する自己抗原であると考えられてきたが、最近の知見は、特許文献１（WO　2009/028411）に説明されている。NCBIに記載されているFSTL1のアクセッションナンバーは、例えば、ヒトはNP_009016（NP_009016.1）（アミノ酸）；マウスはNP_032073.2（アミノ酸）、ヒトはNM_007085（NM_007085.4）（ｍRNA）；マウスはNM_008047.5（ｍRNA）である。FSTL1のアミノ酸配列は、例えば、配列番号１または配列番号３である。FSTL1　mRNAの塩基配列は、例えば、配列番号２または配列番号４である。FSTL1は、FSTL1活性を有していれば、そのアミノ酸配列は限定されない。したがって、本発明の具体的な目的に合致する限り、特定の配列番号またはアクセッション番号に記載されるアミノ酸配列を有するタンパク質（あるいはそれをコードする核酸）のみならず、機能的に活性なその誘導体、類似体もしくは変異体または機能的に活性なそのフラグメント、またはその相同体、または高ストリンジェンシー条件または低ストリンジェンシー条件下で、このタンパク質をコードする核酸にハイブリダイズする核酸にコードされる変異体もまた、本発明において用いることができることが理解される。
　本明細書で使用される「誘導体」、「類似体」または「変異体」は、好ましくは、限定を意図するものではないが、対象となるタンパク質（例えば、FSTL1）に実質的に相同な領域を含む分子を含み、このような分子は、種々の実施形態において、同一サイズのアミノ酸配列にわたり、または当該分野で公知のコンピュータ相同性プログラムによってアラインメントを行ってアラインされる配列と比較した際、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％または99％同一であるか、あるいはこのような分子をコードする核酸は、（高度に）ストリンジェントな条件、中程度にストリンジェントな条件、またはストリンジェントでない条件下で、構成要素タンパク質をコードする配列にハイブリダイズ可能である。これは、それぞれ、アミノ酸置換、欠失および付加によって、天然存在タンパク質を改変した産物であり、その誘導体がなお天然存在タンパク質の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示すタンパク質を意味する。例えば、本明細書において記載されあるいは当該分野で公知の適切で利用可能なin　vitroアッセイによって、このようなタンパク質の生物学的機能を調べることも可能である。本明細書で使用される「機能的に活性な」は、本明細書において、本発明のポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体が関連する態様に従って、生物学的活性などの、タンパク質の構造的機能、制御機能、または生化学的機能を有する、ポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体を指す。本発明では、FSTL1についてヒトが主に論じられるが、ヒト以外の多くの動物がFSTL1を発現していることが知られているため、これらの動物、特に哺乳動物についても、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　したがって、FSTL1の代表的なヌクレオチド配列は、
　（a）配列番号１または配列番号３に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
　（b）配列番号２または配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；
　（c）配列番号２または配列番号４に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
　（d）配列番号１または配列番号３に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
　（e）配列番号２または配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
　（f）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
　（g）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ることをいう。
　FSTL1のアミノ酸配列としては、
　（a）配列番号２または配列番号４に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
　（b）配列番号２または配列番号４に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
　（c）配列番号１または配列番号３に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
　（d）配列番号２または配列番号４に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
　（e）（a）～（d）のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、であり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ること（例えば、抗原として用いられる場合特異的エピトープとして機能し得る領域を含むこと）をいう。配列番号１～４はリーダー配列を含む前駆体である。配列番号２では最初の２０アミノ酸（メチオニンからアラニンまで）および配列番号４では最初の１８アミノ酸（メチオニンからグリシンまで）がリーダー配列である。したがって、本発明においてFSTL1といった場合、そのアミノ酸配列は、これらのリーダー配列が削除された後のものをさすことがある
　本発明の関連において、「FSTL1に結合する物質」、「FSTL1（の）結合剤」または「FSTL1相互作用分子」は、少なくとも一時的にFSTL1に結合する分子または物質である。検出目的では好ましくは、結合したことを表示しうる（例えば標識されるか標識可能な状態である）ことが有利であり、治療目的では、さらに治療用薬剤が結合していることが有利である。FSTL1に結合する物質は、例としては、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、siRNA、低分子量分子（LMW）、結合性ペプチド、アプタマー、リボザイムおよびペプチド模倣体（peptidomimetic）等を挙げることができる。FSTL1に結合する物質または「FSTL1相互作用分子は、FSTL1の阻害剤であってもよく、例えばFSTL1に対して向けられる、特にFSTL1の活性部位に対して向けられる、結合性タンパク質または結合性ペプチド、並びにFSTL1遺伝子に対して向けられる核酸も含まれる。FSTL1に対する核酸は、例えばFSTL1遺伝子の発現またはFSTL1の活性を阻害する、二本鎖または一本鎖DNAまたはRNA、あるいはその修飾物または誘導体を指し、そしてアンチセンス核酸、アプタマー、siRNA（低分子干渉RNA）およびリボザイムを含むがこれらに限定されない。本明細書において、FSTL1について「結合タンパク質」または「結合ペプチド」とは、FSTL1に結合する任意のタンパク質またはペプチドを指し、そしてFSTL1に対して指向される抗体（例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体）、抗体フラグメントおよび機能的等価物を含むがこれらに限定されない。
　本明細書において「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）が包含される。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の1または2以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基を持つ有機化合物の総称である。本発明の実施形態に係る抗体が「特定のアミノ酸配列」を含むとき、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が化学修飾を受けていてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が塩、または溶媒和物を形成していてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸がL型、またはD型であってもよい。それらのような場合でも、本発明の実施形態に係るタンパク質は、上記「特定のアミノ酸配列」を含むといえる。タンパク質に含まれるアミノ酸が生体内で受ける化学修飾としては、例えば、N末端修飾（例えば、アセチル化、ミリストイル化等）、C末端修飾（例えば、アミド化、グリコシルホスファチジルイノシトール付加等）、または側鎖修飾（例えば、リン酸化、糖鎖付加等）等が知られている。本発明の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」を含む。「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、2’－O－メチル－リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がN3’－P5’ホスホロアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5プロピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5チアゾールウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがC－5プロピニルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（phenoxazine－modified　cytosine）で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、DNA中のリボースが2’－O－プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体およびオリゴヌクレオチド中のリボースが2’－メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、1またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの3番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Batzer　et　al.,　Nucleic　Acid　Res.19:5081(1991);　Ohtsuka　et　al.,　J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985);　Rossolini　et　al.,　Mol.Cell.Probes　8:91-98(1994)）。本明細書において「核酸」はまた、遺伝子、cDNA、mRNA、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換可能に使用される。本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいい、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」をさすことがある。
　本明細書において遺伝子の「相同性」とは、2以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいい、一般に「相同性」を有するとは、同一性または類似性の程度が高いことをいう。従って、ある2つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。2種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。2つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でDNA配列が、代表的には少なくとも50％同一である場合、好ましくは少なくとも70％同一である場合、より好ましくは少なくとも80％、90％、95％、96％、97％、98％または99％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。従って本明細書において「相同体」または「相同遺伝子産物」は、本明細書にさらに記載する複合体のタンパク質構成要素と同じ生物学的機能を発揮する、別の種、好ましくは哺乳動物におけるタンパク質を意味する。こうような相同体はまた、「オルソログ遺伝子産物」とも称されることもある。本発明の目的に合致する限り、このような相同体、相同遺伝子産物、オルソログ遺伝子産物等も用いることができることが理解される。
　アミノ酸は、その一般に公知の3文字記号か、またはIUPAC－IUB　Biochemical　Nomenclature　Commissionにより推奨される1文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された1文字コードにより言及され得る。本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるBLASTを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、NCBIのBLAST2.2.28（2013.4.2発行）を用いて行うことができる。本明細書における同一性の値は通常は上記BLASTを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメータの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。類似性は、同一性に加え、類似のアミノ酸についても計算に入れた数値である。
　本発明の一実施形態において「数個」は、例えば、10、8、6、5、4、3、または2個であってもよく、それらいずれかの値以下であってもよい。1または数個のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入、または他のアミノ酸による置換を受けたポリペプチドが、その生物学的活性を維持することは知られている（Market　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.1984　Sep;81(18):　5662-5666.、Zoller　et　al.,Nucleic　Acids　Res.　1982　Oct　25;10(20):　6487-6500.、Wang　et　al.,　Science.　1984　Jun　29;224(4656):　1431-1433.）。欠失等がなされた抗体は、例えば、部位特異的変異導入法、ランダム変異導入法、または抗体ファージ・ライブラリを用いたバイオパニング等によって作製できる。部位特異的変異導入法としては、例えばKOD-Plus-　Mutagenesis　Kit　(TOYOBO　CO.,　LTD.)を使用できる。欠失等を導入した変異型抗体から、野生型と同様の活性のある抗体を選択することは、FACS解析やELISA等の各種キャラクタリゼーションを行うことで可能である
。
　本発明の一実施形態において「90％以上」は、例えば、90、95、96、97、98、99、または100％以上であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。上記「相同性」は、2つもしくは複数間のアミノ酸配列において相同なアミノ酸数の割合を、当該技術分野で公知の方法に従って算定してもよい。割合を算定する前には、比較するアミノ酸配列群のアミノ酸配列を整列させ、同一アミノ酸の割合を最大にするために必要である場合はアミノ酸配列の一部に間隙を導入する。整列のための方法、割合の算定方法、比較方法、およびそれらに関連するコンピュータプログラムは、当該技術分野で従来からよく知られている(例えば、BLAST、GENETYX等)。本明細書において「相同性」は、特に断りのない限りNCBIのBLASTによって測定された値で表すことができる。BLASTでアミノ酸配列を比較するときのアルゴリズムには、Blastpをデフォルト設定で使用できる。測定結果はPositivesまたはIdentitiesとして数値化される。
　本明細書において「ストリンジェント（な）条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法などを用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、コロニーあるいはプラーク由来のDNAを固定化したフィルターを用いて、0．7～1．0MのNaCl存在下、65℃でハイブリダイゼーションを行った後、0．1～2倍濃度のSSC（saline-sodium　citrate）溶液（1倍濃度のSSC溶液の組成は、150mM　塩化ナトリウム、15mM　クエン酸ナトリウムである）を用い、65℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。「ストリンジェントな条件」は、例えば、以下の条件を採用することができる。(1)洗浄のために低イオン強度および高温度を用いる(例えば、50℃で、0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1％のドデシル硫酸ナトリウム)、(2)ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤を用いる(例えば、42℃で、50％(v/v)ホルムアミドと0.1％ウシ血清アルブミン/0.1％フィコール/0.1％のポリビニルピロリドン/50mMのpH6.5のリン酸ナトリウムバッファー、および750mMの塩化ナトリウム、75mMクエン酸ナトリウム)、または(3)20％ホルムアミド、5×SSC、50mMリン酸ナトリウム(pH7.6)、5×デンハード液、10％硫酸デキストラン、および20mg/mlの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中で、37℃で一晩インキュベーションし、次に約37-50℃で1×SSCでフィルターを洗浄する。なお、ホルムアミド濃度は50％またはそれ以上であってもよい。洗浄時間は、5、15、30、60、もしくは120分、またはそれら以上であってもよい。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーに影響する要素としては温度、塩濃度など複数の要素が考えられ、詳細はAusubelet　al.,　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Wiley　Interscience　Publishers,(1995)を参照することができる。「高度にストリンジェントな条件」の例は、０．００１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、６５～６８℃、または０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、および５０％　ホルムアミド、４２℃である。ハイブリダイゼーション、Molecular　Cloning　2nd　ed.,Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Supplement　1-38,　DNA　Cloning1:Core　Techniques,　A　Practical　Approach,　Second　Edition,　Oxford　University　Press(1995)などの実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、A配列のみまたはT配列のみを含む配列が除外される。中程度のストリンジェントな条件は、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することができ、Sambrookら、Molecular　Cloning:A　Laboratory　Manual、第3版、Vol．1、7.42-7.45　Cold　Spring　Harbor　Laboratory　Presｓ，2001に示され、そしてニトロセルロースフィルターに関し、５×ＳＳＣ、０．５％　ＳＤＳ、１．０ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の前洗浄溶液、約４０－５０°Cでの、約５０％ホルムアミド、２×ＳＳＣ－６×ＳＳＣ（または約４２°Cでの約５０％ホルムアミド中の、スターク溶液（Ｓｔａｒｋ’ｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）などの他の同様のハイブリダイゼーション溶液）のハイブリダイゼーション条件、および約６０°C、０．５×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳの洗浄条件の使用が含まれる。従って、本発明において使用されるポリペプチドには、本発明で特に記載されたポリペプチドをコードする核酸分子に対して、高度または中程度でストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるポリペプチドも包含される。
　本明細書において「精製された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものをいう。従って、通常、精製された生物学的因子におけるその生物学的因子の純度は、その生物学的因子が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。本明細書中で使用される用語「精製された」は、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質または生物学的因子は、好ましくは「精製された」物質である。本明細書で使用される「単離された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子が実質的に除去されたものをいう。本明細書中で使用される用語「単離された」は、その目的に応じて変動するため、必ずしも純度で表示される必要はないが、必要な場合、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質は、好ましくは「単離された」物質または生物学的因子である。
　本明細書において「対応する」アミノ酸または核酸あるいは部分とは、あるポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子（例えば、FSTL1）において、比較の基準となるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおける所定のアミノ酸またはヌクレオチドあるいは部分と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸またはヌクレオチドをいい、特に酵素分子にあっては、活性部位中の同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸をいい、複合分子にあっては対応する部分（例えば、膜貫通ドメイン等）をいう。例えば、アンチセンス分子であれば、そのアンチセンス分子の特定の部分に対応するオルソログにおける同様の部分であり得る。対応するアミノ酸は、例えば、システイン化、グルタチオン化、S－S結合形成、酸化（例えば、メチオニン側鎖の酸化）、ホルミル化、アセチル化、リン酸化、糖鎖付加、ミリスチル化などがされる特定のアミノ酸であり得る。あるいは、対応するアミノ酸は、二量体化を担うアミノ酸であり得る。このような「対応する」アミノ酸または核酸は、一定範囲にわたる領域またはドメインであってもよい。従って、そのような場合、本明細書において「対応する」領域またはドメインと称される。このような対応する領域またはドメインは、本発明において複合分子を設計する場合に有用である。
　本明細書において「対応する」遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）とは、ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、または有することが予測される遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在する場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子に対応する遺伝子は、その遺伝子のオルソログであり得る。従って、ヒトのFSTL1は、それぞれ、他の動物（特に哺乳動物）において、対応するFSTL1を見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を用いて同定することができる。従って、例えば、ある動物（例えば、マウス）における対応する遺伝子は、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、FSTL1等）は、配列番号１～４等の配列をクエリ配列として用いてその動物の配列を含むデータベースを検索することによって見出すことができる。
　本明細書において「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがn）に対して、1～n－1までの配列長さを有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。本明細書において、このようなフラグメントは、例えば、全長のものがマーカーまたは標的分子として機能する場合、そのフラグメント自体もまたマーカーまたは標的分子としての機能を有する限り、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　本発明に従って、用語「活性」は、本明細書において、最も広い意味での分子の機能を指す。活性は、限定を意図するものではないが、概して、分子の生物学的機能、生化学的機能、物理的機能または化学的機能を含む。活性は、例えば、酵素活性、他の分子と相互作用する能力、および他の分子の機能を活性化するか、促進するか、安定化するか、阻害するか、抑制するか、または不安定化する能力、安定性、特定の細胞内位置に局在する能力を含む。適用可能な場合、この用語はまた、最も広い意味でのタンパク質複合体の機能にも関する。
　本明細書において「生物学的機能」とは、ある遺伝子またはそれに関する核酸分子もしくはポリペプチドについて言及するとき、その遺伝子、核酸分子またはポリペプチドが生体内において有し得る特定の機能をいい、これには、例えば、特異的な抗体の生成、酵素活性、抵抗性の付与等を挙げることができるがそれらに限定されない。本発明においては、例えば、FSTL1がＶＬＤＬの取り込みの阻害等に関与する機能などを挙げることができるがそれらに限定されない。本明細書において、生物学的機能は、「生物学的活性」によって発揮され得る。本明細書において「生物学的活性」とは、ある因子（例えば、ポリヌクレオチド、タンパク質など）が、生体内において有し得る活性のことをいい、種々の機能（例えば、転写促進活性）を発揮する活性が包含され、例えば、ある分子との相互作用によって別の分子が活性化または不活化される活性も包含される。2つの因子が相互作用する場合、その生物学的活性は、その二分子の間の結合およびそれによって生じる生物学的変化であり得、そして、例えば、一つの分子を抗体を用いて沈降させたときに他の分子も共沈するとき、2分子は結合していると考えられる。従って、そのような共沈を見ることが一つの判断手法として挙げられる。例えば、ある因子が酵素である場合、その生物学的活性は、その酵素活性を包含する。別の例では、ある因子がリガンドである場合、そのリガンドが対応するレセプターへの結合を包含する。そのような生物学的活性は、当該分野において周知の技術によって測定することができる。従って、「活性」は、結合（直接的または間接的のいずれか）を示すかまたは明らかにするか；応答に影響する（すなわち、いくらかの曝露または刺激に応答する測定可能な影響を有する）、種々の測定可能な指標をいい、例えば、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに直接結合する化合物の親和性、または例えば、いくつかの刺激後または事象後の上流または下流のタンパク質の量あるいは他の類似の機能の尺度が挙げられる。
　本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」とは、その遺伝子などがインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好ましくは、遺伝子、ポリヌクレオチドなどが、転写および翻訳されて、ポリペプチドの形態になることをいうが、転写されてmRNAが作製されることもまた発現の一態様である。したがって、本明細書において「発現産物」とは、このようなポリペプチドもしくはタンパク質、またはｍRNAを含む。より好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシングを受けたものであり得る。例えば、FSTL1の発現レベルは、任意の方法によって決定することができる。具体的には、FSTL1のmRNAの量、FSTL1タンパク質の量、そしてFSTL1タンパク質の生物学的な活性を評価することによって、FSTL1の発現レベルを知ることができる。このような測定値はコンパニオン診断において使用し得る。FSTL1のmRNAやタンパク質の量は、本明細書の他の箇所に詳述したような方法あるいは他の当該分野において公知の方法によって決定することができる。
　本明細書において「機能的等価物」とは、対象となるもとの実体に対して、目的となる機能が等価であるが構造が異なる任意のものをいう。従って、「FSTL1」またはその抗体の機能的等価物は、FSTL1またはその抗体自体ではないが、FSTL1またはその抗体の変異体または改変体（例えば、アミノ酸配列改変体等）であって、FSTL1の持つ生物学的作用を有するもの、ならびに、作用する時点において、FSTL1またはその抗体自体またはこのFSTL1またはその抗体の変異体もしくは改変体に変化することができるもの（例えば、FSTL1またはその抗体自体またはFSTL1またはその抗体の変異体もしくは改変体をコードする核酸、およびその核酸を含むベクター、細胞等を含む）が包含されることが理解される。本発明において、FSTL1またはその抗体の機能的等価物は、格別に言及していなくても、FSTL1またはその抗体と同様に用いられうることが理解される。機能的等価物は、データベース等を検索することによって、見出すことができる。本明細書において「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および／または性質を有する他の核酸塩基配列を見出すことをいう。電子的な検索としては、BLAST（Altschul　et　al.,J.Mol.Biol.　215:403-410(1990))、FASTA　(Pearson　&　Lipman,　Proc.Natl.Acad.Sci.,USA　85:2444-2448(1988)）、Smith　and　Waterman法（Smith　and　Waterman,　J.Mol.Biol.147:　195-197(1981)）、およびNeedleman　and　Wunsch法（Needleman　and　Wunsch,　J.Mol.Biol.　48:443-453(1970)）などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジェントハイブリダイゼーション、ゲノムDNAをナイロンメンブレン等に貼り付けたマクロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ（マイクロアレイアッセイ）、PCRおよびin　situハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書において、本発明において使用される遺伝子には、このような電子的検索、生物学的検索によって同定された対応遺伝子も含まれるべきであることが意図される。
　本発明の機能的等価物としては、アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加されたものを用いることができる。本明細書において、「アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加」とは、部位特異的突然変異誘発法等の周知の技術的方法により、あるいは天然の変異により、天然に生じ得る程度の複数個の数のアミノ酸の置換等により改変がなされていることを意味する。改変アミノ酸配列は、例えば1～30個、好ましくは1～20個、より好ましくは1～9個、さらに好ましくは1～5個、特に好ましくは1～2個のアミノ酸の挿入、置換、もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加がなされたものであることができる。改変アミノ酸配列は、好ましくは、そのアミノ酸配列が、FSTL1、抗体等のポリペプチドのアミノ酸配列において1または複数個（好ましくは1もしくは数個または1、2、3、もしくは4個）の保存的置換を有するアミノ酸配列であってもよい。ここで「保存的置換」とは、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、1または複数個のアミノ酸残基を、別の化学的に類似したアミノ酸残基で置換えることを意味する。例えば、ある疎水性残基を別の疎水性残基によって置換する場合、ある極性残基を同じ電荷を有する別の極性残基によって置換する場合などが挙げられる。このような置換を行うことができる機能的に類似のアミノ酸は、アミノ酸毎に当該分野において公知である。具体例を挙げると、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニンなどが挙げられる。極性（中性）アミノ酸としては、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システインなどが挙げられる。陽電荷をもつ（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジン、リジンなどが挙げられる。また、負電荷をもつ（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などが挙げられる。
　　本明細書において「抑制剤」とは、対象となる実体（例えば、レセプターまたは細胞）に対してそのレセプターまたは細胞の生物学的作用を阻害する物質または因子をいう。本発明のFSTL1の抑制剤としては、対象となるFSTL1またはFSTL1を発現する細胞等の機能を一時的または永久に低下または消失させることができる因子である。このような因子には、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス、siRNA等のRNAi因子等の核酸の形態のもの等を挙げることができるがこれらに限定されない。
　本明細書において「アゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用を発現またはそれを増強する物質をいう。天然のアゴニスト（リガンドとも称される）のほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。
　本明細書において「アンタゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用の発現を抑制または阻害する物質をいう。天然のアンタゴニストのほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。アゴニスト（またはリガンド）と競合的に抑制または阻害するもののほか、非競合的に抑制または阻害するもの等がある。アゴニストを改変することによっても得られうる。生理現象を抑制または阻害することから、アンタゴニストは抑制剤（阻害剤）または抑制（する）因子の概念に包含されうる。したがって、本明細書においては実質的にアンタゴニストは「抑制剤」と同義で用いられる。
　本明細書において「抗体」は、広義にはポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体、ならびにそれらのフラグメント、例えばFvフラグメント、Fab’フラグメント、F（ab’）2およびFabフラグメント、ならびにその他の組換えにより生産された結合体または機能的等価物（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー（diabody）、sc（Fv）2（singlechain　（Fv）2）、scFv－Fc）を含む。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体は、FSTL1のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「抗FSTL1抗体」は、FSTL1に結合性を有する抗体を含む。この抗FSTL1抗体の生産方法は特に限定されないが、例えば、FSTL1を哺乳類または鳥類に免疫することによって生産してもよい。
　また、「FSTL1に対する抗体（抗FSTL1抗体）、または、そのフラグメント」の「機能的等価物」は、例えば、抗体の場合、FSTL1の結合活性、必要であれば抑制活性を有する抗体自体およびそのフラグメント自体のほか、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（singlechain　（Fv）2）、scFv－Fcなども包含されることが理解される。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、悪性腫瘍の増殖が特に強く抑制される観点からは、FSTL1の特定のエピトープに特異的に結合する抗FSTL1抗体であることが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体であれば、ポリクローナル抗体に比べて、効率的にFSTL1に対して作用させることができる。抗FSTL1モノクローナル抗体を効率的に生産する観点からは、FSTL1をニワトリに免役することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体の抗体クラスは特に限定されないが、例えばIgM、IgD、IgG、IgA、IgE、またはIgYであってもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、抗原結合活性を有する抗体断片（以下、「抗原結合性断片」と称することもある）であっても良い。この場合、安定性または抗体の生産効率が上昇する等の効果がある。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、融合タンパク質であってもよい。この融合タンパク質は、抗FSTL1抗体のNまたはC末端に、ポリペプチドまたはオリゴペプチドが結合したものであってもよい。ここで、オリゴペプチドは、Hisタグであってもよい。また融合タンパク質は、マウス、ヒト、またはニワトリの抗体部分配列を融合したものであってもよい。それらのような融合タンパク質も、本実施形態に係る抗FSTL1抗体の一形態に含まれる。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、例えば、精製FSTL1、FSTL1発現細胞、またはFSTL1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体であってもよい。FSTL1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、精製FSTL1、FSTL1発現細胞胞またはFSTL1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体の、CDRセットを有する抗体であってもよい。FSTL1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。CDRセットとは、重鎖CDR1、2、および3、並びに、軽鎖CDR1、2、および3のセットである。
　本発明の一実施形態において「FSTL1発現細胞」は、例えば、FSTL1をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入後、FSTL1を発現させることによって得てもよい。ここでFSTL1は、FSTL1断片を含む。また本発明の一実施形態において「FSTL1含有脂質膜」は、例えば、FSTL1と脂質二重膜を混合することによって得てもよい。ここでFSTL1は、FSTL1断片を含む。また本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、FSTL1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、抗原をニワトリに免疫する工程を経て得られる抗体、またはその抗体のCDRセットを有する抗体が好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、目的を達成する限り、どのような結合力を有していてもよく、例えば、KD値（kd　/　ka）が、少なくとも１．０×１０-６(M)以下、２．０×１０-６(M)　以下、５．０×１０-６(M)　以下、１．０×１０-７以下であるものを挙げることができるがこれらに限定されず、通常は、KD値（kd/ka）は、1.0×10-7(M)以下であってもよく、1.0×10-9(M)あるいは1.0×10-10(M)以下であり得る。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、ADCCまたはCDC活性を有していてもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、FSTL1の野生型または変異型に結合する抗体であってもよい。変異型とは、個体間のDNA配列の差異に起因するものを含む。野生型または変異型のFSTL1のアミノ酸配列は、配列番号２または配列番号４に示すアミノ酸配列に対し、好ましくは80％以上、より好ましくは90％以上、より好ましくは95％以上、特に好ましくは98％以上の相同性を有している。
　本発明の一実施形態において「抗体」は、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができる分子またはその集団を含むまた抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。抗体は、様々な形態で存在することができ、例えば、全長抗体（Fab領域とFc領域を有する抗体）、Fv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、diabody、一本鎖抗体（例えば、scFv）、dsFv、多価特異的抗体（例えば、二価特異的抗体）、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド、キメラ抗体（例えば、マウス-ヒトキメラ抗体、ニワトリ-ヒトキメラ抗体等）、マウス抗体、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはそれらの同等物（または等価物）からなる群から選ばれる1種以上の形態であってもよい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体は、FSTL1のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「ポリクローナル抗体」は、例えば、抗原に特異的なポリクローナル抗体の産生を誘導するために、哺乳類（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、サル等）、鳥類等に、目的の抗原を含む免疫原を投与することによって生成することが可能である。免疫原の投与は、1つ以上の免疫剤、および所望の場合にはアジュバントの注入をしてもよい。アジュバントは、免疫応答を増加させるために使用されることもあり、フロイントアジュバント（完全または不完全）、ミネラルゲル（水酸化アルミニウム等）、または界面活性物質（リゾレシチン等）等を含んでいてもよい。免疫プロトコールは、当該技術分野で公知であり、選択する宿主生物に合わせて、免疫応答を誘発する任意の方法によって実施される場合がある（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):86-91.）。
　本発明の一実施形態において「モノクローナル抗体」は、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に単一のエピトープに対応する抗体である場合を含む。または、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に同一である抗体であってもよい。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、異なるエピトープに対応する異なる抗体を典型的に含むような、通常のポリクローナル抗体とは異なる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていないハイブリドーマ培養から合成できる点で有用である。「モノクローナル」という形容は、実質的に均一な抗体集団から得られるという特徴を示していてもよいが、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、モノクローナル抗体は、"Kohler　G,　Milstein　C.,　Nature.　1975　Aug7;256(5517):495-497."に掲載されているようなハイブリドーマ法と同様の方法によって作製してもよい。あるいは、モノクローナル抗体は、米国特許第4816567号に記載されているような組換え法と同様の方法によって作製してもよい。または、モノクローナル抗体は、"Clackson　et　al.,　Nature.　1991　Aug　15;352(6336):　624-628."、または"Marks　et　al.,　J　Mol　Biol.　1991　Dec　5;222(3):　581-597."に記載されているような技術と同様の方法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。または、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):92-96."に掲載されている方法でよって作製してもよい。
　抗体の大量生産については、当該分野で公知の任意の手法を用いることができるが、例えば、代表的な抗体の大量生産系の構築および抗体製造としては、以下を例示することができる。すなわち、CHO細胞にH鎖抗体発現ベクターおよびL鎖抗体発現ベクターをトランスフェクションし、選択試薬であるG418およびZeocinを用いて培養を行い、限界希釈法によるクローニングを行う。クローニング後、安定的に抗体を発現しているクローンをELISA法により選択する。選択したCHO細胞を用いて拡大培養し、抗体を含む培養上清を回収する。回収した培養上清からProtein　AもしくはProtein　G精製により抗体を精製することができる。
　本発明の一実施形態において「Fv抗体」は、抗原認識部位を含む抗体である。この領域は、非共有結合による1つの重鎖可変ドメインおよび1つの軽鎖可変ドメインの二量体を含む。この構成において、各可変ドメインの3つのCDRは相互に作用してVH-VL二量体の表面に抗原結合部位を形成することができる。
　本発明の一実施形態において「Fab抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素パパインで処理して得られる断片のうち、H鎖のN末端側約半分とL鎖全体が一部のジスルフィド結合を介して結合した抗体である。Fabは、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体を、タンパク質分解酵素パパインで処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「F(ab’)2抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素ペプシンで処理して得られる断片のうち、Fabに相当する部位を2つ含む抗体である。F(ab’)2は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体を、タンパク質分解酵素ペプシンで処理して得ることができる。また、例えば、下記のFab’をチオエーテル結合あるいはジスルフィド結合させることで、作製することができる。
　本発明の一実施形態において「Fab’抗体」は、例えば、F(ab’)2のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断して得られる抗体である。例えば、F(ab’)2を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「scFv抗体」は、VHとVLとが適当なペプチドリンカーを介して連結した抗体である。scFv抗体は、例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体のVHおよびVLをコードするcDNAを取得し、VH-ペプチドリンカー-VLをコードするポリヌクレオチドを構築し、そのポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「diabody」は、二価の抗原結合活性を有する抗体である。二価の抗原結合活性は、同一であることもできるし、一方を異なる抗原結合活性とすることもできる。diabodyは、例えば、scFvをコードするポリヌクレオチドをペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが8残基以下となるように構築し、得られたポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「dsFv」は、VHおよびVL中にシステイン残基を導入したポリペプチドを、上記システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させた抗体である。システイン残基に導入する位置はReiterらにより示された方法(Reiter　et　al.,　Protein　Eng.　1994　May;7(5):697-704.)に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。
　本発明の一実施形態において「抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド」は、抗体のVH、VL、またはそれらのCDR1、2、もしくは3を含んで構成される抗体である。複数のCDRを含むペプチドは、直接または適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。
　上記のFv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、scFv抗体、diabody、dsFv抗体、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド（以下、「Fv抗体等」と称することもある）の生産方法は特に限定しない。例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体におけるFv抗体等の領域をコードするDNAを発現用ベクターに組み込み、発現用細胞を用いて生産できる。または、Fmoc法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、tBOC法（t-ブチルオキシカルボニル法）などの化学合成法によって生産してもよい。なお本発明の一実施形態に係る抗原結合性断片は、上記Fv抗体等の1種以上であってもよい。
　本発明の一実施形態において「キメラ抗体」は、例えば、異種生物間における抗体の可変領域と、抗体の定常領域とを連結したもので、遺伝子組換え技術によって構築できる。マウス-ヒトキメラ抗体は、例えば、"Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.　1994　Feb　1;91(3):969-973."に記載の方法で作製できる。マウス-ヒトキメラ抗体を作製するための基本的な方法は、例えば、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列を、哺乳類細胞の発現ベクター中にすでに存在するヒト抗体定常領域をコードする配列に連結する。または、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列をヒト抗体定常領域をコードする配列に連結した後、哺乳類細胞発現ベクターに連結してもよい。ヒト抗体定常領域の断片は、任意のヒト抗体のH鎖定常領域およびヒト抗体のL鎖定常領域のものとすることができ、例えばヒトH鎖のものについてはCγ1、Cγ2、Cγ3またはCγ4を、L鎖のものについてはCλまたはCκを各々挙げることができる。
　本発明の一実施形態において「ヒト化抗体」は、例えば、非ヒト種由来の1つ以上のCDR、およびヒト免疫グロブリン由来のフレームワーク領域（FR）、さらにヒト免疫グロブリン由来の定常領域を有し、所望の抗原に結合する抗体である。抗体のヒト化は、当該技術分野で既知の種々の手法を使用して実施可能である(Almagro　et　al.,　Front　Biosci.　2008　Jan　1;13:　1619-1633.)。例えば、CDRグラフティング（Ozaki　et　al.,Blood.　1999　Jun　1;93(11):　3922-3930.）、Re-surfacing(Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　U　S　A.　1994　Feb　1;91(3):969-973.)、またはFRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）などが挙げられる。抗原結合を改変するために（好ましくは改善するために）、ヒトFR領域のアミノ酸残基は、CDRドナー抗体からの対応する残基と置換してもよい。このFR置換は、当該技術分野で周知の方法によって実施可能である（Riechmann　et　al.,　Nature.　1988　Mar　24;332(6162):323-327.）。例えば、CDRとFR残基の相互作用のモデリングによって抗原結合に重要なFR残基を同定してもよい。または、配列比較によって、特定の位置で異常なＦＲ残基を同定してもよい。好ましい実施形態では、松田らのＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　４３（２００６）６３４－６４２　の報告に基づきヒト化抗体を構築してもよい。
　本発明の好ましい実施形態では、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１６９、１７１、１７３および１７５）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１８５、１８７、１８９および１９１）を有するヒト化抗体が使用され得るがこれに限定されない。これらのヒト化抗体の全長配列は、このヒト化抗体において、Ｈ（１）重鎖の全長配列は、IgG1型が配列番号１９２および１９３（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号１９８および１９９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号１９４および１９５（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号２００および２０１（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号１９６および１９７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号２０２および２０３（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号２０４および２０５（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号２４６および２４７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号２４８および２４９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。理論に束縛されることを望まないが、Ｈ（２）－Ｌ（１）は、Ｈ（３）－Ｌ（１）（Ｈ（３）のフレームワークは（それぞれ配列番号１７７、１７９、１８１および１８３））およびＨ（１）－Ｌ（１）（Ｈ（１）のフレームワークは（それぞれ配列番号１６１、１６３、１６５および１６７））よりも１桁高い活性が観察されているからである。
　本発明の一実施形態において「ヒト抗体」は、例えば、抗体を構成する重鎖の可変領域および定常領域、軽鎖の可変領域および定常領域を含む領域が、ヒトイムノグロブリンをコードする遺伝子に由来する抗体である。主な作製方法としてはヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法、ファージディスプレイ法などがある。ヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法では、内因性Igをノックアウトしたマウスに機能的なヒトのIg遺伝子を導入すれば、マウス抗体の代わりに多様な抗原結合能を持つヒト抗体が産生される。さらにこのマウスを免疫すればヒトモノクローナル抗体を従来のハイブリドーマ法で得ることが可能である。例えば、"Lonberg　et　al.,　Int　Rev　Immunol.　1995;13(1):65-93."に記載の方法で作製できる。ファージディスプレイ法は、典型的には大腸菌ウイルスの一つであるM13やT7などの繊維状ファージのコートタンパク質（g3p、g10p等）のN末端側にファージの感染性を失わないよう外来遺伝子を融合タンパク質として発現させるシステムである。例えば、"Vaughan　et　al.,　Nat　Biotechnol.　1996　Mar;14(3):309-314."に記載の方法で作製できる。
　また抗体は、CDR-grafting(Ozaki　et　al.,　Blood.　1999　Jun　1;93(11):3922-3930.)によって任意の抗体に本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをグラフティングすることで作製してもよい。または、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをコードするDNAと、公知のヒトまたはヒト以外の生物由来の抗体の、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域をコードするDNAとを、当該技術分野で公知の方法に従ってベクターに連結後、公知の細胞を使用して発現させることによって得ることができる。このとき、抗FSTL1抗体の標的抗原への作用効率を上げるために、当該分野で公知の方法（例えば、抗体のアミノ酸残基をランダムに変異させ、反応性の高いものをスクリーニングする方法、またはファージディスプレイ法等）を用いて、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域を最適化してもよい。また、例えば、FRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）、またはバーニヤゾーンのアミノ酸残基またはパッケージング残基を置換する方法（特開2006-241026、またはFooteet　al.,　J　Mol　Biol.1992　Mar　20;224(2):487-499.）を用いて、FR領域を最適化してもよい。
　本発明の一実施形態において「重鎖」は、典型的には、全長抗体の主な構成要素である。重鎖は、通常、軽鎖とジスルフィド結合および非共有結合によって結合している。重鎖のN末端側のドメインには、同種の同一クラスの抗体でもアミノ酸配列が一定しない可変領域（VH）と呼ばれる領域が存在し、一般的に、VHが抗原に対する特異性、親和性に大きく寄与していることが知られている。例えば、"Reiter　et　al.,　J　Mol　Biol.　1999　Jul　16;290(3):685-98."にはVHのみの分子を作製したところ、抗原と特異的に、高い親和性で結合したことが記載されている。さらに、"Wolfson　W,　Chem　Biol.　2006　Dec;13(12):1243-1244."には、ラクダの抗体の中には、軽鎖を持たない重鎖のみの抗体が存在していることが記載されている。
　本発明の一実施形態において「CDR（相補性決定領域）」は、抗体において、実際に抗原に接触して結合部位を形成している領域である。一般的にCDRは、抗体のFv（重鎖可変領域可変領域（VH）および軽鎖可変領域（VL）を含む）上に位置している。また一般的にCDRは、5～30アミノ酸残基程度からなるCDR1、CDR2、CDR3が存在する。そして、特に重鎖のCDRが抗体の抗原への結合に寄与していることが知られている。またCDRの中でも、CDR3が抗体の抗原への結合における寄与が最も高いことが知られている。例えば、"Willy　et　al.,　Biochemical　and　Biophysical　Research　Communications　Volume　356,　Issue　1,　27　April　2007,　Pages　124-128"には、重鎖CDR3を改変させることで抗体の結合能を上昇させたことが記載されている。CDR以外のFv領域はフレームワーク領域（FR）と呼ばれ、FR1、FR2、FR3およびFR4からなり、抗体間で比較的よく保存されている（Kabatet　al.,「Sequence　of　Proteins　of　Immunological　Interest」US　Dept.　Health　and　Human　Services,1983.）。即ち、抗体の反応性を特徴付ける要因はCDRにあり、特に重鎖CDRにあるといえる。
　CDRの定義およびその位置を決定する方法は複数報告されている。例えば、Kabatの定義(Sequences　of　Proteins　of　Immunological　Interest,　5th　ed.,　Public　Health　Service,　National　Institutes　of　Health,　Bethesda,　MD.　(1991))、またはChothiaの定義(Chothiaet　al.,　J.　Mol.　Biol.,1987;196:901-917)を採用してもよい。本発明の一実施形態においては、Kabatの定義を好適な例として採用するが、必ずしもこれに限定されない。また、場合によっては、Kabatの定義とChothiaの定義の両方を考慮して決定しても良く、例えば、各々の定義によるCDRの重複部分を、または各々の定義によるCDRの両方を含んだ部分をCDRとすることもできる。そのような方法の具体例としては、Kabatの定義とChothiaの定義の折衷案である、Oxford　Molecular's　AbM　antibody　modeling　softwareを用いたMartinらの方法（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,　1989;86:9268-9272）がある。このようなCDRの情報を用いて、本発明に使用されうる変異体を生産することができる。このような抗体の変異体では、もとの抗体のフレームワークに１または数個（例えば、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個）の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まないように生産することができる。
　本明細書において「抗原」（antigen）とは、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。本明細書において「免疫原」（immunogen）とは、抗原特異的免疫応答を生じるリンパ球活性化を開始し得る抗原をいう。本明細書において「エピトープ」または「抗原決定基」とは、抗体またはリンパ球レセプターが結合する抗原分子中の部位をいう。エピトープを決定する方法は、当該分野において周知であり、そのようなエピトープは、核酸またはアミノ酸の一次配列が提供されると、当業者はそのような周知慣用技術を用いて決定することができる。本発明の抗体は、エピトープが同じであれば、他の配列を有する抗体であっても同様に利用することができることが理解される。
　本明細書において使用される抗体は、擬陽性が減じられる限り、どのような特異性の抗体を用いても良いことが理解される。従って、本発明において用いられる抗体は、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクローナル抗体であってもよい。
　本明細書において「手段」とは、ある目的（例えば、検出、診断、治療）を達成する任意の道具となり得るものをいい、特に、本明細書では、「選択的に認識する手段」とは、ある対象を他のものとは異なって認識することができる手段をいう。
　本明細書において使用される「悪性腫瘍」は、例えば、正常な細胞が突然変異を起こして発生する腫瘍を含む。悪性腫瘍は全身のあらゆる臓器や組織から生じ得る。特に識別しない場合、本明細書では「癌」「がん」と同義で用いる。この悪性腫瘍は、例えば、肺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、乳癌、大腸癌、小腸癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、前立腺癌、尿管癌、腎盂癌、尿管癌、陰茎癌、精巣癌、脳腫瘍、中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、頭頸部癌、グリオーマ、多形性膠芽腫、皮膚癌、メラノーマ、甲状腺癌、唾液腺癌、悪性リンパ腫、癌腫、肉腫、白血病および血液悪性腫瘍からなる群から選ばれる1種以上を含む。ここで、卵巣癌は、例えば、卵巣漿液性腺癌、または卵巣明細胞線癌を含む。子宮癌は、例えば、子宮内膜癌、または子宮頸癌を含む。頭頸部癌は、例えば、口腔癌、咽頭癌、喉頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、または甲状腺癌を含む。肺癌は、例えば、非小細胞肺癌、または小細胞肺癌を含む。また悪性腫瘍は、FSTL1陽性であってもよい。
　本明細書において「転移」（metastasis）とは、癌が体の原発部位から他の領域に広がるか移って新しい場所に類似した癌性の病巣が発達する過程を指す。「転移性」または「転移する」細胞は、隣接細胞との接着性接触を失い、血流またはリンパを通して疾患の原発部位から移動して、近隣の体構造に侵入する細胞である。本明細書において転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、転移を含む。本発明によれば、本発明による転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　本明細書において「骨転移」とは、骨への癌の転移を意味し、任意の起源の骨転移を含む。骨転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、骨転移を含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、骨病変、好ましくは溶骨性および／または骨形成骨病変を含み、より好ましくは溶骨性骨病変、さらにより好ましくは骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の骨病変を含み、特に骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の溶骨性骨病変も含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、ワルデンストレーム病の骨病変、好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性および／または骨形成骨病変、より好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性骨病変も含む。本発明による骨転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　本明細書において「間葉系幹細胞」またはその略称「ＭＳＣ」とは、交換可能に使用することができる用語であり、自己再生能力を有し、骨芽細胞、軟骨細胞、及び脂肪細胞などの間葉系細胞に分化する能力を備えた多能性幹細胞を指し、代表的に、未分化の状態で増殖し、骨芽細胞、軟骨芽細胞及び脂肪芽細胞の全て又はいくつかへの分化が可能な幹細胞又はその前駆細胞の集団を広義に意味する。生体においては、間葉系幹細胞は骨髄、末梢血、臍帯血、脂肪組織中などに低頻度で存在する。間葉系幹細胞は、これらの組織から公知の方法で単離又は精製することができ、主な分子指標はCD45発現が陰性であることである。「単離」または「精製」とは、天然に存在する状態とは異なる状態に人為的に置かれること、例えば、天然に存在する状態から、目的とする成分以外の　成分を除去する操作が施されていることを意味する。例えば、ヒト間葉系幹細胞は、パーコールグラディエント法により骨髄液から単離することができる　（Hum.　Cell,　vol.10,　p.45-50,　1997）。或いは、骨髄穿刺後の造血幹細胞等の培養、継代によりヒト間葉系幹細胞を単離することができる（Journal　of　Autoimmunity,　30　(2008)　163-171）。
　間葉系幹細胞は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導または増強するが、この活性を獲得するためには活性化が必須であり、癌に関連して増加するＭＳＣは、様々な生体内因子によって活性化された「活性化ＭＳＣ」であると考えられており、本明細書でもこのようなＭＳＣは「活性化間葉系幹細胞」または「活性化ＭＳＣ」と称する。つまり、もともと免疫抑制活性を持っている細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）が増殖して総合的に免疫抑制活性が強くなる場合と、通常の何も活性を有さない細胞（つまり前駆細胞）が免疫抑制性を獲得してそれらの免疫抑制活性を有する細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）に転じる割合が多くなって免疫抑制活性が強くなる場合、および、免疫機能を果たすことができない不全状態に陥る疲弊T細胞の誘導等の免疫破綻機序が存在するが、ＦＳＴＬ１はこれらを直接的および／または活性化ＭＳＣの増殖等を介して間接的に制御していると考えられる（Immunology　and　Cell　Biology　91:12-18,　2013）。理論に束縛されることを望まないが、本発明の抗体ＦＳＴＬ１抗体等は、このＭＳＣの免疫抑制の誘導または増強、および免疫不全等を阻害することができ、それによって、癌の悪化の原因となる免疫抑制を解除することができ、それゆえ、顕著な癌の予防または治療効果を達成することができるといえる。また、本発明ではこれらの免疫抑制性細胞および／または免疫不全性細胞等の免疫破綻の細胞を誘導するＭＳＣの誘導または増強について、この上流を阻害することができるため、免疫抑制機序および／または免疫不全機序等の免疫破綻機序の全体を一斉に解除できるものと考えられ、より効果的な治療が可能になるものと考えられる。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（癌関連MSCおよび活性化MSCを含む）の誘導や増殖の抑制は、例えば、ＭＳＣの脂肪細胞への分化の阻害を見ることで確認することができ、例えば、図９、１０に示されている。理論に束縛されることを望まないが、FSTL1は免疫抑制性のMSC自身を増やし、および／または他の細胞の抑制活性を強めるものと考えられる。
　本明細書において「免疫抑制」（「免疫抑制」の用語は、このほか、免疫抑制性、免疫制御、免疫制御性、免疫調節、免疫調節性、免疫修飾、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）の「増強」とは、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）ことを包含する概念であり、結果として、免疫抑制が増強されることをいう。したがって、免疫抑制の増強には、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）の概念が含まれることが理解される。ＭＳＣ細胞の免疫抑制性の細胞の誘導の形態としては、制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞への分化が促進されること、制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強、および制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の増殖が包含され、結果として免疫抑制性が増強されることが包含される。
　本明細書において、「免疫抑制性の細胞」（「免疫抑制性」の用語は、このほか、免疫制御性、免疫調節性、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）とは、免疫能を抑制する働きを有する細胞を指し、代表的には、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞等を挙げることができるがそれらに限定されない。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が免疫機能を破壊する機序として、上記で説明したような免疫抑制のみならず、免疫不全も役割を果たしていることが知られており、これらは、合わせて「免疫破綻」と総称される。
　本明細書において「免疫不全」とは、免疫系を構成する細胞要素の一部あるいはいくつかの欠損あるいは機能不全によって，正常免疫機構に障害を生じた状態をいう。これに起因する病態を免疫不全症(immunodeficiency　diseases)と総称する。免疫不全症は一次性と二次性に大別され，前者は主に先天性の遺伝的異常に起因するもので，後者は薬剤やＸ線など物理化学的因子，ウイルスなどの感染症，栄養状態などの外的環境因子によるものをいう。障害部位は，抗体産生などＢ細胞領域の機能不全，細胞性免疫にかかわるＴ細胞領域の異常，補体系や貪食機能など貪食系細胞機能の障害などさまざまであるとされている。「疲弊T細胞」が免疫不全の主な指標である。抗PD-1抗体などは、この「疲弊／不全」を阻害できる抗体としても開発されている。
　本明細書において「免疫破綻」とは免疫抑制および免疫不全を合わせた概念をいう。免疫破綻が起こると、より生存に有利な免疫原性の低いがん細胞が選ばれて増殖する（平衡相（免疫細胞とがん細胞との相互作用により、消えもしない、大きくもならないといった状態）から逃避相へ移行する）。そして、平衡相の終わりから逃避相にかけての短い時間に、がんの免疫原性が低下すると考えられており、がん細胞を殺すはずのT細胞が逆説的にこの役割を果たしているとされている。
　本明細書において「疲弊」（exhaustion）とは抗原の長期的な曝露によって，T細胞上にPD-1，CTLA4，TIM3などさまざまな共抑制分子（後述）が誘導される結果，T細胞が機能不全状態に陥ることをいう。慢性感染症やがんの際に，T細胞の不応答性が誘導される原因と考えられている。そのようなT細胞を本明細書において「疲弊T細胞」という。
　抗PD-1抗体などは、この「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できる抗体としても開発されている。したがって、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、実施例において示されているように疲弊Ｔ細胞（の増殖または発生）を阻害することができることから、このような「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できるものと期待され、したがって、「免疫破綻」を阻害できるものと理解される。
　本明細書において、「免疫関連細胞」とは、免疫抑制や機能不全などを受ける任意の免疫系の細胞を指し、「免疫関連細胞の免疫抑制活性の獲得および／または増強」は、本明細書では代表的に、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊T細胞の増加等を含むことが理解される。
　本明細書において「被験体（者）」とは、本発明の診断または検出、あるいは治療等の対象となる対象（例えば、ヒト等の生物または生物から取り出した細胞、血液、血清等）をいう。
　本明細書において「試料」とは、被験体等から得られた任意の物質をいい、例えば、血清等が含まれる。当業者は本明細書の記載をもとに適宜好ましい試料を選択することができる。
　本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」（いずれも英語ではagentに相当する）は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、cDNA、ゲノムDNAのようなDNA、mRNAのようなRNAを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）など）、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。ポリヌクレオチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリヌクレオチドの配列に対して一定の配列相同性を（例えば、70％以上の配列同一性）もって相補性を有するポリヌクレオチド、プロモーター領域に結合する転写因子のようなポリペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ポリペプチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリペプチドに対して特異的に指向された抗体またはその誘導体あるいはその類似物（例えば、単鎖抗体）、そのポリペプチドがレセプターまたはリガンドである場合の特異的なリガンドまたはレセプター、そのポリペプチドが酵素である場合、その基質などが挙げられるがそれらに限定されない。
　本明細書において「診断」とは、被験体における疾患、障害、状態（例えば、悪性腫瘍）などに関連する種々のパラメータを同定し、そのような疾患、障害、状態の現状または未来を判定することをいう。本発明の方法、装置、システムを用いることによって、体内の状態を調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書において、狭義には、「診断」は、現状を診断することをいうが、広義には「早期診断」、「予測診断」、「事前診断」等を含む。本発明の診断方法は、原則として、身体から出たものを利用することができ、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることから、産業上有用である。本明細書において、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることを明確にするために、特に「予測診断、事前診断もしくは診断」を「支援」すると称することがある。
　本明細書において「予後」という用語は、悪性腫瘍（例えば、卵巣癌）などの腫瘍性疾患の再発、転移拡散、および薬剤耐性など、癌に起因する死亡または進行が起こる可能性を予測することを意味する。したがって、本明細書において「予後状態が良好」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌を認めない状態のことを、「予後状態が不良」または「予後不良」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌が認められる状態のことをいう。予後因子とは悪性腫瘍の自然経過に関する変数のことであり、これらは、いったん悪性腫瘍を発症した患者の再発率および転帰に影響を及ぼす。予後の悪化に関連した臨床的指標には、例えば、リンパ節転移、および高悪性度の腫瘍が含まれる。予後因子は、しばしば、患者を異なった基礎的再発リスクをもつサブグループに分類するために用いられる。このように、本発明のFSTL1の発現は、予後因子として使用することができる。本明細書において「予測」という用語は、原発腫瘍の摘出後に、患者が、良不良を問わず特定の臨床転帰を持つ可能性を意味する。したがって、本発明のFSTL1は、予後不良マーカーとして用いることができる。本発明の予測法を臨床的に用いて、特定の患者にとって最適な治療法を選択することによって治療法を決定することができる。本発明の予測法は、患者が治療計画、例えば、外科的介入など　に対して良好な反応をする可能性があれば、予測する際の有益な手段となる。予測には予後因子を含むことができる。
　本明細書において「検出薬（剤）」または「検査薬（剤）」とは、広義には、目的の対象を検出または検査することができるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「診断薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を診断できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になった場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好ましくは、軽減、さらに好ましくは消退させることをいい、患者の疾患、もしくは疾患に伴う1つ以上の症状の、症状改善効果あるいは予防効果を発揮しうることを含む。事前に診断を行って適切な治療を行うことは「コンパニオン治療」といい、そのための診断薬を「コンパニオン診断薬」ということがある。
　本明細書において「治療薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を治療できるあらゆる薬剤をいう。本発明の一実施形態において「治療薬」は、有効成分と、薬理学的に許容される1つもしくはそれ以上の担体とを含む医薬組成物であってもよい。医薬組成物は、例えば有効成分と上記担体とを混合し、製剤学の技術分野において知られる任意の方法により製造できる。また治療薬は、治療のために用いられる物であれば使用形態は限定されず、有効成分単独であってもよいし、有効成分と任意の成分との混合物であってもよい。また上記担体の形状は特に限定されず、例えば、固体または液体（例えば、緩衝液）であってもよい。なお悪性腫瘍の治療薬は、悪性腫瘍の予防のために用いられる薬物（予防薬）、または悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤を含む。
　本明細書において「予防」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になる前に、そのような状態にならないようにすることをいう。本発明の薬剤を用いて、診断を行い、必要に応じて本発明の薬剤を用いて例えば、悪性腫瘍等の予防をするか、あるいは予防のための対策を講じることができる。
　本明細書において「予防薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を予防できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「相互作用」とは、2つの物質についていうとき、一方の物質と他方
の物質との間で力（例えば、分子間力（ファンデルワールス力）、水素結合、疎水性相互作用など）を及ぼしあうこという。通常、相互作用をした2つの物質は、会合または結合している状態にある。本発明の検出、検査および診断は、このような相互作用を利用して実現することができる。
　本明細書中で使用される用語「結合」は、2つの物質の間、あるいはそれらの組み合わせの間での、物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合には、イオン結合、非イオン結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水性相互作用などが含まれる。物理的相互作用（結合）は、直接的または間接的であり得、間接的なものは、別のタンパク質または化合物の効果を介するかまたは起因する。直接的な結合とは、別のタンパク質または化合物の効果を介してもまたはそれらに起因しても起こらず、他の実質的な化学中間体を伴わない、相互作用をいう。
　従って、本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチドなどの生物学的因子に対して「特異的に」相互作用する（または結合する）「因子」（または、薬剤、検出剤等）とは、そのポリヌクレオチドまたはそのポリペプチドなどの生物学的因子に対する親和性が、他の無関連の（特に、同一性が30％未満の）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対する親和性よりも、代表的には同等またはより高いか、好ましくは有意に（例えば、統計学的に有意に）高いものを包含する。そのような親和性は、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイ、結合アッセイなどによって測定することができる。
　本明細書において第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）とは、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して、第二の物質または因子以外の物質または因子（特に、第二の物質または因子を含む試料中に存在する他の物質または因子）に対するよりも高い親和性で相互作用する（または結合する）ことをいう。物質または因子について特異的な相互作用（または結合）としては、例えば、核酸におけるハイブリダイゼーション、タンパク質における抗原抗体反応、酵素－基質反応など、核酸およびタンパク質の反応、タンパク質－脂質相互作用、核酸－脂質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。従って、物質または因子がともに核酸である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に相互作用する」ことには、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して少なくとも一部に相補性を有することが包含される。また例えば、物質または因子がともにタンパク質である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）こととしては、例えば、抗原抗体反応による相互作用、レセプター－リガンド反応による相互作用、酵素－基質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。2種類の物質または因子がタンパク質および核酸を含む場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）ことには、抗体と、その抗原との間の相互作用（または結合）が包含される。このような特異的な相互作用または結合の反応を利用することにより、試料中の対象物の検出または定量お行うことができる。
　本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチド発現の「検出」または「定量」は、例えば、検出剤、検査剤または診断剤への結合または相互作用を含む、mRNAの測定および免疫学的測定方法を含む適切な方法を用いて達成され得る。分子生物学的測定方法としては、例えば、ノーザンブロット法、ドットブロット法またはPCR法などが例示される。免疫学的測定方法としては、例えば、方法としては、マイクロタイタープレートを用いるELISA法、RIA法、蛍光抗体法、発光イムノアッセイ（LIA）、免疫沈降法（IP）、免疫拡散法（SRID）、免疫比濁法（TIA）、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが例示される。また、定量方法としては、ELISA法またはRIA法などが例示される。アレイ（例えば、DNAアレイ、プロテインアレイ）を用いた遺伝子解析方法によっても行われ得る。DNAアレイについては、（秀潤社編、細胞工学別冊「DNAマイクロアレイと最新PCR法」）に広く概説されている。プロテインアレイについては、Nat　Genet．2002　Dec;32　Suppl:526－532に詳述されている。遺伝子発現の分析法としては、上述に加えて、RT－PCR、RACE法、SSCP法、免疫沈降法、two－hybridシステム、in　vitro翻訳などが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなさらなる分析方法は、例えば、ゲノム解析実験法・中村祐輔ラボ・マニュアル、編集・中村祐輔羊土社（2002）などに記載されており、本明細書においてそれらの記載はすべて参考として援用される。
　本明細書において「発現量」とは、目的の細胞、組織などにおいて、ポリペプチドまたはmRNA等が発現される量をいう。そのような発現量としては、本発明の抗体を用いてELISA法、RIA法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などの免疫学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明ポリペプチドのタンパク質レベルでの発現量、またはノーザンブロット法、ドットブロット法、PCR法などの分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのmRNAレベルでの発現量が挙げられる。「発現量の変化」とは、上記免疫学的測定方法または分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのタンパク質レベルまたはmRNAレベルでの発現量が増加あるいは減少することを意味する。あるマーカーの発現量を測定することによって、マーカーに基づく種々の検出または診断を行うことができる。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「減少」または「抑制」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における減少、または減少させる活性をいう。減少のうち「消失」した場合は、活性、発現産物等が検出限界未満になることをいい、特に「消失」ということがある。本明細書では、「消失」は「減少」または「抑制」に包含される。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「増加」または「活性化」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における増加または増加させる活性をいう。
　本明細書において「インビボ」（in　vivo）とは、生体の内部をいう。特定の文脈において、「生体内」は、目的とする物質が配置されるべき位置をいう。
　本明細書において「インビトロ」（in　vitro）とは、種々の研究目的のために生体の一部分が「生体外に」（例えば、試験管内に）摘出または遊離されている状態をいう。インビボと対照をなす用語である。
　本明細書において「エキソビボ」（ex　vivo）とは、ある処置について、体外で行われるがその後体内に戻されることが意図される場合、一連の動作をエキソビボという。本発明においても、生体内にある細胞を本発明の薬剤で処置して再度患者に戻すような実施形態を想定することができる。
　本明細書において「キット」とは、通常2つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬、抗体、標識、説明書など）が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが試薬キットとして使用される場合、キットには、通常、検査薬、診断薬、治療薬、抗体等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。
　本明細書において「指示書」は、本発明を使用する方法を医師または他の使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本発明の検出方法、診断薬の使い方、または医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、投与部位として、経口、食道への投与（例えば、注射などによる）することを指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（FDA）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（package　insert）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。
　（好ましい実施形態）
　以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本発明の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
　（抗ＦＳＴＬ１抗体）
　１つの局面において、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物（本明細書において総称して「抗ＦＳＴＬ１抗体等」あるいは「本発明の抗体等」ということがある）であって、該抗体は、配列番号２（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１７０位または１４８～１６２位、１９３～２２８位または１９３～２１６位および２０５～２２８位、ならびに２３３～２８９位または２７２～２８９位からなる群より選択される領域に含まれる１アミノ酸以上をエピトープに含む、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。好ましくは該当する領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。１つの好ましい実施形態では、配列番号２（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位または２７２～２８９位の領域にエピトープを有していてもよい。
　本発明における抗体について、エピトープは、該当する領域中の連続するまたは不連続の、５アミノ酸以上、あるいは６アミノ酸以上、７アミノ酸以上、８アミノ酸以上、９アミノ酸以上、１０アミノ酸以上、１１アミノ酸以上、１２アミノ酸以上の領域あるいはそれらの組合せが該当し得る。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、２０５～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは動物試験において薬効が確認されているものを含む。なお、＃６－５５、＃７－３４、＃１３については、１４８－１６２部位を認識するものと理解される。また、＃５－２、＃５－３、＃５－８．＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－６、＃８－８は、アミノ酸２７２～２８９位を認識するものと理解され、＃７および＃１０はアミノ酸２０５位～２２８位を認識するものと理解され、＃２２はアミノ酸１９３位～２１６位を認識するものと理解され、＃３３はアミノ酸４８位～１００位を認識するものと理解される。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位および２０５～２２８位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは、より活性が強いことが確認されている抗体が認識するものを含む。別の好ましい実施形態では、配列番号２（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８～１００位、１４８～１６２位または２０５～２２８位の領域にエピトープを有する。理論に束縛されることは望まないが、これらのエピトープはインビトロ試験またはインビボ試験において薬効が確認されているものを含む。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定のＣＤＲを有する。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、全長配列のＣＤＲを含む任意の配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいは、本発明の特定の抗体に関する配列の可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、そのフレームワーク領域において、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、１７個、もしくは、２０個、またはそれ以上の置換、不可、もしくは、欠失を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。より特定すると、そのような特定のＣＤＲについて、重鎖CDR１，２，３、軽鎖CDR１，２，３の具体的な例としては、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、該抗体の変異体であって、該変異体において該抗体のフレームワークに１または数個の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まない、変異体であってもよい。抗体の製造等については、本明細書の他の箇所に記載された実施形態および／または当該分野で公知の手法を用いることができる。なお、本発明の治療または予防の目的では、このような抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、好ましくは、ＦＳＴＬ１またはその情報伝達経路の下流の抑制活性を有することが好ましい。そのような活性は、ＦＳＴＬ１の発現量またはその活性をみるか、あるいはがん細胞株を直接使用して細胞の増殖阻害、転移活性阻害、骨転移阻害、ＭＳＣの免疫抑制や免疫不全等の免疫破綻を増強する活性（例えば、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得）の阻害、免疫関連細胞の免疫抑制性化または免疫不全化（例えば、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増加、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞免疫抑制活性の増加および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の増殖・誘導等による疲弊T細胞の増加の阻害、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）での細胞傷害活性、またはモデル動物に移植して腫瘍の退縮を観察する等をみることで確認してもよい。これらの手法は、当該分野において周知であり、本明細書において使用される手法を用いてもよい。本発明のこれらの抗体は、特定の実施形態では、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（single　chain　（Fv）2）、およびscFv－Fcから選択される抗体でありうる。
　ここで、各抗体クローンのＣＤＲのアミノ酸配列を、重鎖および軽鎖の配列中の下線として示す。
＃5-2：
軽鎖（L鎖；配列番号６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
重鎖（H鎖；配列番号８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTGYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGSYVGDIDAWGHGTEVIVSS
＃5-3
L鎖（配列番号１０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSVPVTVIYNNNNRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYYCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号１２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFSFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-8
L鎖（配列番号１４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号１６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGTAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-10
L鎖（配列番号１８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYVGSYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSAGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTTYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNDLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃5-43
L鎖（配列番号２２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGGTGYGAAVDGRATISKDSGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYDWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃6-55
L鎖（配列番号２６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSAIPGETVKITCSGGGNNYGWYQQRSPGSAPVTVIYYNDNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQADDEAIYYCGSWDSNTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFTSVTMQWVRQAPGKGLEWVASVCSGSSTYYAPAVKGRATISRDNGQSTVRLQLSNLRPEDTGTYYCAKIAGRARWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃7-34
L鎖（配列番号３０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNNNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQAEDEAVYYCGSYEGSTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号３２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃8-1
L鎖（配列番号３４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSSGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号３６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-4
L鎖（配列番号３８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASSQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNDNKPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYFCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号４０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTAYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃8-7
L鎖（配列番号４２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号４４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-8
L鎖（配列番号４６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQVEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号４８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃７
L鎖（配列番号５０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSNIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGGYDGSTDAAFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFSIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGEYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSP
＃10
L鎖（配列番号５４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKLTCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDGSRDAGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFRIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGRYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSS
＃13
L鎖（配列番号５８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNNRPSNIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYYCGSYDSSSDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号６０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃22
L鎖（配列番号６２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYWDDRRPSDIPSRFSGSKSGSIHTLTITGVQADDEAVYLCGNAVRSGTGYVGVFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号６４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSNGMAWVRQAPGKGLELVARINSSGSYTNYGAAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKGASGYGAYPGNIDAWGHGTEVIVSS
＃33
L鎖（配列番号６６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVEITCSGDSSYYGWFQQKSPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYCGGYDSSTYDGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号６８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSFNMNWVRQAPGKGLEYVAEISGTGSSTYYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTATYFCARGDGAYSIDAWGHGTEVIVSS
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、ＦＳＴＬ１に対するより強い結合活性が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い結合活性を保持することが期待され、同様の薬効が奏されることが理解される。
　さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、および＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、より強い薬効が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い薬効を保持することが期待されることが理解される。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定の可変領域の全長を有する。そのような特定の可変領域は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、および＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号９６；重鎖：配列番号８９８）、＃５－３（軽鎖：配列番１００；重鎖：配列番号１０２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１０４；重鎖：配列番号１０６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１０８；重鎖：配列番号１１０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号１１２；重鎖：配列番号１１４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃８－４（軽鎖：配列番号１２８；重鎖：配列番号１３０）、＃８－７（軽鎖：配列番号１３２；重鎖：配列番号１３４）、＃８－８（軽鎖：配列番号１３６；重鎖：配列番号１３８）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１０（軽鎖：配列番号１４４；重鎖：配列番号１４６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）、＃２２（軽鎖：配列番号１５２；重鎖：配列番号１５４）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、および＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　一つの好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であり、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ヒト化抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり得る。好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１６９、１７１、１７３および１７５）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１８５、１８７、１８９および１９１）を有する。
　好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１６１、１６３、１６５および１６７（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（Ｌ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列、または該重鎖フレームワーク配列および該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８および２０９）および軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２１０、２１１もしくは２１４、２１２もしくは２１５および２１３）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を有する。好ましくは、重鎖フレームワーク配列は、Ｈ（２）のもの、すなわち配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）またはその重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。本明細書において、Ｈ（２）を用いた場合、Ｈ（１）およびＨ（３）よりもＫＤ値がワンオーダー優れた活性がされたからである。また、好ましくは配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（それぞれＬ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２１０、２１１もしくは２１４、２１２もしくは２１５および２１３）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。
　さらに好ましくは、ヒト化抗体は、配列番号１６１、１６３、１６５および１６７（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列または該重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８および２０９）と相違するアミノ酸を１個～８個（例えば、1個、2個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有し、配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２１０、２１１もしくは２１４、２１２もしくは２１５および２１３）と相違するアミノ酸を１個～４個（例えば、1個、2個、３個または４個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有する。
　好ましい実施形態では、ヒト化抗体のバックミューテーションの際に考慮される、相違するアミノ酸の少なくとも１つ、さらに好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つは、Vernier残基から選択される。活性が最適化される限りＶｅｒｎｉｅｒ残基以外の変異が含まれていてもよいことが理解される。好ましい実施形態では、相違するアミノ酸のすべてが、Vernier残基から選択される。Ｖｅｒｎｉｅｒ残基については、例えば、特開２０１０－４８９５、Ｎｉｓｈｉｂｏｒｉ　Ｎ　ｅｔ　ａｌ．，　MolecularImmunology 43 (2006) 634-642等を参照することができ、これらの記載は本明細書において参考として援用される。
　前記Vernier残基は、ヒト化配列のＨ鎖のＦＲ１アミノ酸（配列番号１６９）２８位、３０位、ＦＲ２のアミノ酸（配列番号１７１）１２位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号１７３）２位、１０位、１３位、１７位および３２位、ならびにＬ鎖のＦＲ１（配列番号１８５）２０位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号１８９）１０位、１５位および３１位を含む。配列が異なる場合はＶｅｒｎｉｅｒ配列は変動し得ることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（１）－Ｌ（１）、Ｈ（２）－Ｌ（１）、Ｈ（３）－Ｌ（１）、Ｈ（１）－Ｌ（２）、Ｈ（２）－Ｌ（２）、Ｈ（３）－Ｌ（２）、Ｈ（１）－Ｌ（３）、Ｈ（２）－Ｌ（３）、Ｈ（３）－Ｌ（３）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4ならびL鎖FR1、FR2、FR3およびFR4のいずれかを有する。別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号１６９、１７１、１７３および１７５）ならびにL鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号１８５、１８７、１８９および１９１）を有する。
　別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号１６１、１６３、１６５および１６７（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体、ならびに配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体を有する。
　さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号１６１、１６３、１６５および１６７（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列からなるフレームワーク配列または該フレームワーク配列において１～１０アミノ酸、１～９アミノ酸、１～８アミノ酸、１～７アミノ酸、１～６アミノ酸、１～５アミノ酸、１～４アミノ酸、１～３アミノ酸、１～２アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む配列を含む。
　本発明の一実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを細胞に導入することによって、形質転換体を作成できる。この形質転換体を用いれば、本発明の実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体を作製できる。形質転換体は、ヒトまたはヒトを除く哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、サル等）の細胞であってもよい。哺乳動物細胞としては、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO細胞)、サル細胞COS-7などが挙げられる。または、形質転換体はEscherichia属菌、酵母等であってもよい。
　上記のベクターとしては、例えば大腸菌由来のプラスミド（例えばpET-Blue）、枯草菌由来のプラスミド（例えばpUB110）、酵母由来プラスミド（例えばpSH19）、動物細胞発現プラスミド（例えばpA1-11、pcDNA3.1-V5/His-TOPO）、λファージなどのバクテリオファージ、ウイルス由来のベクターなどを用いることができる。これらのベクターは、プロモーター、複製開始点、または抗生物質耐性遺伝子など、蛋白質発現に必要な構成要素を含んでいてもよい。ベクターは発現ベクターであってもよい。
　上記のポリヌクレオチドまたはベクターの細胞への導入方法としては、例えば、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、エレクトロポレーション法、アデノウイルスによる方法、レトロウイルスによる方法、またはマイクロインジェクションなどを使用できる（改訂第4版　新　遺伝子工学ハンドブック,　羊土社(2003):152-179.）。抗体の細胞を用いた生産方法としては、例えば、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):128-142."に記載の方法を使用できる。抗体の精製においては、例えば、硫酸アンモニウム、エタノール沈殿、プロテインA、プロテインG、ゲルろ過クロマトグラフィー、陰イオン、陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、またはレクチンクロマトグラフィーなどを用いることができる（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):27-52.）。
　（医薬、抗がん剤）
　１つの局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む医薬を提供する。本発明の医薬において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、医薬として使用するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の医薬用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、ＦＳＴＬ１に関連する疾患を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤を提供する。本発明の抗がん剤において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、がんの治療または予防のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがんの治療または予防のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がんを処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移の治療剤または予防剤を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を治療または予防するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍を治療用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　本発明が対象とする疾患は、がんであり、例えば、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫およびそれらの転移性の悪性腫瘍を挙げることができるがそれらに限定されない。また、これらの癌は、SNAILおよび／またはFSTL1を高発現する癌種であってもよい。なお、これらのSNAILおよび／またはFSTL1の発現については、
https://www.oncomine.com/resource/login.html
で提供されるOncomineのヒト腫瘍組織解析情報サイトにおいて得られる情報（以下の表１Ａを参照）に基づいて、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫に高発現がみられることが説明されていることから、これらの癌種でも実施例で実証されたものと同様に効果があることが理解される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
（ONCOMINE　data）
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むがん細胞の転移の阻害剤を提供し、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移、特に骨転移、肺転移の阻害をもなし得る阻害剤を提供する。
　この局面において、本発明は、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）を阻害するため、特に骨転移、肺転移の阻害のための方法を提供する。特に、骨転移を阻害することは従来きわめて困難といわれてきたところ、本明細書中の実施例において示されるようにこれを顕著に阻害することができることが見出されていることから、この点においても、本発明の優位性が見出される。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の阻害剤を提供する。免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導する間葉系幹細胞の誘導の概念も包含する。このような免疫抑制能の高いＭＳＣは、活性化MSCまたは癌関連MSCとしても知られている。理論に束縛されることを望まないが、Snail　陽性癌細胞等から分泌されたFSTL1は、MSCのいわゆる前駆細胞に作用して、MSCが免疫抑制性細胞の前駆細胞を免疫抑制性の免疫関連細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞）へと分化させる因子ならびに／または増殖を促進する因子および／もしくはその免疫抑制活性を増強する因子を分泌させそれによって、いわゆる前駆細胞が免疫抑制性細胞となることによって、免疫抑制状態となっていると考えられる。そこで、本願発明のような抗FSTL１抗体を作用させることによって、FSTL１の作用が抑制され、結果として、免疫抑制状態が解除されると考えられる。
　したがって、別の局面では、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤を提供する。免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、免疫抑制細胞の誘導の現象も含むため、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻活性のあるの細胞の誘導の阻害剤の概念を含むことになる。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、免疫抑制活性の獲得および／または増強を阻害するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の阻害剤における免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導（増加または分化）からなる群より選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、より好ましくは少なくとも６つ、より好ましくは少なくとも７つ、より好ましくは少なくとも８つ、より好ましくは少なくとも９つ、より好ましくは少なくとも１０、より好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、より好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、より好ましくはすべてを含む。
　１つの局面において、本発明の医薬、抗がん剤、治療剤または阻害剤は、別のがん治療と組み合わせてもよい。具体的には、別のがん治療は、本発明の抗がん剤とは別の抗がん剤、手術療法もしくは放射線療法またはそれらの組合せを含む。
　癌に対する化学療法および放射線療法は、リンパ球の増殖を激しく減少させるという副作用が不可避である。一つの実施形態では、本発明の組成物の投与は、減少したリンパ球細胞を刺激、増殖させる効果を示すと共に、通常の化学療法に付随する激烈な副作用を最小限に抑制することができる。また、放射線療法についても同様である。また、本発明の組成物との併用によって、化学療法剤の用量または照射放射線量を通常使用される用量あるいは照射量から大幅に減少させることができる。本発明の癌治療組成物は、本発明の抗がん剤とは別の、既存のまたは新規の化学療法剤と併用あるいは合剤化することができる。そのような化学療法剤として、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。さらに、患者のQOL回復のための癌治療補助剤である白血球(好中球)減少症治療薬、血小板減少症治療薬、制吐剤、癌性疼痛治療薬と併用あるいは合剤化ができる。
　好ましい実施形態では、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物に加え、さらに細胞殺傷性薬剤を含む。したがって、本発明の組成物、剤、医薬等（治療薬または予防薬等）は複合分子を含みうるあるいは結合したものであるといえる。
　本明細書において、「細胞殺傷性薬剤」は、細胞膜を溶解する可能性のある薬剤である。細胞殺傷性薬剤は、ペプチドの場合は細胞傷害性ペプチドと呼ばれ、細胞傷害性ペプチドは当該分野において種々の呼称があり、例えば、「溶解性ペプチド成分」、「細胞殺傷性配列」は、「細胞溶解性ペプチド（配列）」または「細胞膜溶解性ペプチド（配列）」などとも称されるが、これらは本発明の目的では同義で用いられる。このような細胞傷害性薬剤の代表例としては、Gail　D.　et　al.,　Cancer　Res　2008;68:9280-9290.;　Ian　Krop　and　Eric　P.　Winer,　Clin　Cancer　Res;　20(1);　1-6.およびK　Naito　et　al.,　Leukemia(2000)　14,　1436-144に列挙されたものを挙げることができ、メイタンシノイド（Maytansinoid）、エムタンシン（emtansine）、CMA-676に含まれるN-アセチルーγ－カリケアミシンジメチルヒドラジド（NAc-γカリケアミシン、DMH）などを挙げることができるがこれらに限定されない。ペプチドとしては、代表的な細胞殺傷性ペプチドとしては、細胞膜溶解性ペプチド、細胞膜電位不安定化ペプチド、細胞膜溶解・核酸結合ペプチドおよびミトコンドリア膜崩壊ペプチドを挙げることができるがこれらに限定されない。
　必要に応じて、このような細胞殺傷性薬剤は抗体等の本発明の結合剤に対してスペーサーで結合されていてもよい。本明細書において「スペーサー」とは、橋をかけるように，鎖式高分子の分子間で化学結合を形成させる部分をいい、リンカーとも称される。ペプチドのスペーサーとしては例えば、代表的には、Ｇ、Ｐからなる０～５アミノ酸の配列が挙げられるがこれに限定されない。スペーサーは必須ではなく、存在しなくてもよい。
　本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、細胞殺傷性薬剤との組み合わせは複合分子で提供されてもよい。このような分子を例示的に説明すると、爆薬部分に当たる、細胞傷害性部分と、弾頭部分にあたるがん細胞に対する特異性を担当する部分（たとえば、がん細胞に高発現している受容体に対して特異的に結合するペプチド・配列、代表的には抗体）とを組み合わせてできる分子と説明することができる。スペーサーを使用する場合、がん細胞特異的結合剤＋スペーサー＋細胞殺傷性薬剤から構成されることになる。本明細書では、任意のがん細胞特異的結合剤、任意のスペーサー、任意の細胞殺傷性薬剤を任意に組み合わせることができ、その製造法および使用法の例を記載する。このような分子は、化学合成法が通常であるが、ペプチドで構成される場合は遺伝子組換えにより強制発現させ精製する方法、あるいはこれと組み合わせた方法も可能である。
　本発明の使用について、治療しようとするがん細胞について、細胞表面のＦＳＴＬ１の発現および細胞殺傷性薬剤に対するがん細胞の傷害感受性を調べる。その結果をもとに弾頭と爆薬を選択し、そのがん細胞に最適な分子をデザインする。化学合成等により得られたオーダーメイドペプチドトキシンを必要に応じてアテロコラーゲン等のDDSと組み合わせ、局所投与または全身投与を行い治療することができる。
　本発明は、Snail陽性癌細胞における作用効果から見出されたものであるため、理論に束縛されることを望まないが、本発明の標的は、Snail陽性癌細胞に起因するがんを含みうる。癌細胞の一部がEMTを生じてSNAILを発現するので、そのような限られた数種の癌だけでなく、実に様々な癌種で“EMT”を生じた細胞がSNAILを発現するといわれている。そのようながんとしては、扁平上皮癌、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫を挙げることができるがこれらに限定されない。
　治療薬の投与経路は、治療に際して効果的なものを使用するのが好ましく、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、または経口投与等であってもよい。投与形態としては、例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤等であってもよい。抗体またはポリヌクレオチドを投与する場合には、注射剤として用いることが効果的である。注射用の水溶液は、例えば、バイアル、またはステンレス容器で保存してもよい。また注射用の水溶液は、例えば生理食塩水、糖(例えばトレハロース)、NaCl、またはNaOH等を配合してもよい。また治療薬は、例えば、緩衝剤(例えばリン酸塩緩衝液)、安定剤、アジュバント等の徐放剤等を配合してもよい。
　一般的に、本発明の組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等は、治療有効量の治療剤または有効成分、および薬学的に許容しうるキャリアもしくは賦形剤を含む。本明細書において「薬学的に許容しうる」は、動物、そしてより詳細にはヒトにおける使用のため、政府の監督官庁に認可されたか、あるいは薬局方または他の一般的に認められる薬局方に列挙されていることを意味する。本明細書において使用される「キャリア」は、治療剤を一緒に投与する、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このようなキャリアは、無菌液体、例えば水および油であることも可能であり、石油、動物、植物または合成起源のものが含まれ、限定されるわけではないが、ピーナツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油等が含まれる。医薬を経口投与する場合は、水が好ましいキャリアである。医薬組成物を静脈内投与する場合は、生理食塩水および水性デキストロースが好ましいキャリアである。好ましくは、生理食塩水溶液、並びに水性デキストロースおよびグリセロール溶液が、注射可能溶液の液体キャリアとして使用される。適切な賦形剤には、軽質無水ケイ酸、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等が含まれる。組成物は、望ましい場合、少量の湿潤剤または乳化剤、あるいはpH緩衝剤もまた含有することも可能である。これらの組成物は、溶液、懸濁物、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、持続放出配合物等の形を取ることも可能である。伝統的な結合剤およびキャリア、例えばトリグリセリドを用いて、組成物を座薬として配合することも可能である。経口配合物は、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン・ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的キャリアを含むことも可能である。適切なキャリアの例は、E．W．Martin,　Remington’s　Pharmaceutical　Sciences(Mark　Publishing　Company,　Easton,　U.S.A）に記載される。このような組成物は、患者に適切に投与する形を提供するように、適切な量のキャリアと一緒に、治療有効量の療法剤、好ましくは精製型のものを含有する。配合物は、投与様式に適していなければならない。これらのほか、例えば、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等を含んでいてもよい。
　本発明を医薬として投与する場合、種々の送達（デリバリー）系が知られ、そしてこのような系を用いて、本発明の治療剤を適切な部位（例えば、食道）に投与することも可能であり、このような系には、例えばリポソーム、微小粒子、および微小カプセル中の被包：治療剤（例えば、ポリペプチド）を発現可能な組換え細胞の使用、受容体が仲介するエンドサイトーシスの使用などがある。導入法には、限定されるわけではないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、および経口経路が含まれる。好適な経路いずれによって、例えば注入によって、ボーラス（bolus）注射によって、上皮または皮膚粘膜裏打ち（例えば口腔、直腸および腸粘膜など）を通じた吸収によって、医薬を投与することも可能であるし、必要に応じてエアロゾル化剤を用いて吸入器または噴霧器を使用しうるし、そして他の生物学的活性剤と一緒に投与することも可能である。投与は全身性または局所であることも可能である。本発明は腫瘍に直接投与することもできる。
　好ましい実施形態において、公知の方法に従って、ヒトへの投与に適応させた医薬組成物として、組成物を配合することができる。このような組成物は注射により投与することができる。代表的には、注射投与のための組成物は、無菌等張水性緩衝剤中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるリドカインなどの局所麻酔剤も含むことも可能である。一般的に、成分を別個に供給するか、または単位投薬型中で一緒に混合して供給し、例えば活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器中、凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として供給することができる。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌薬剤等級の水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて、分配することも可能である。組成物を注射によって投与しようとする場合、投与前に、成分を混合可能であるように、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルを提供することも可能である。
　本発明の抗体等、組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等を中性型または塩型あるいは他のプロドラッグ（例えば、エステル等）で配合することも可能である。薬学的に許容しうる塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する遊離型のカルボキシル基とともに形成されるもの、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの遊離型のアミン基とともに形成されるもの、並びにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、および水酸化第二鉄などに由来するものが含まれる。
　特定の障害または状態の治療に有効な本発明の治療剤の量は、障害または状態の性質によって変動しうるが、当業者は本明細書の記載に基づき標準的臨床技術によって決定可能である。さらに、場合によって、in　vitroアッセイを使用して、最適投薬量範囲を同定するのを補助することも可能である。配合物に使用しようとする正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重大性によっても変動しうるため、担当医の判断および各患者の状況に従って、決定すべきである。しかし、投与量は特に限定されないが、例えば、1回あたり0.001、1、5、10、15、100、または1000mg/kg体重であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。投与間隔は特に限定されないが、例えば、1、7、14、21、または28日あたりに1または2回投与してもよく、それらいずれか2つの値の範囲あたりに1または2回投与してもよい。投与量、投与間隔、投与方法は、患者の年齢や体重、症状、対象臓器等により、適宜選択してもよい。また治療薬は、治療有効量、または所望の作用を発揮する有効量の有効成分を含むことが好ましい。悪性腫瘍マーカーが、投与後に有意に減少した場合に、治療効果があったと判断してもよい。有効用量は、in　vitroまたは動物モデル試験系から得られる用量－反応曲線から推定可能である。
　本発明の一実施形態において「患者」は、ヒト、またはヒトを除く哺乳動物（例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ネズミ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、マーモセット、サル、またはチンパンジー等の1種以上）を含む。また患者は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌ陽性悪性腫瘍を発症していると判断または診断された患者であってもよい。このとき、判断または診断は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌの蛋白質レベルを検出することにより行われることが好ましい。
　本発明の医薬組成物または剤（治療剤もしくは予防剤等）はキットとして提供することができる。　特定の実施形態では、本発明は、本発明の組成物または医薬の1以上の成分が充填された、1以上の容器を含む、薬剤パックまたはキットを提供する。場合によって、このような容器に付随して、医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　本発明のキットはまた、本発明の抗体等、組成物、治療剤、予防剤または医薬として使用するタンパク質をコードする発現ベクターも含有することも可能であり、このタンパク質は、発現された後、生物学的に活性な複合体を形成するため、再構成されることも可能である。このようなキットは、好ましくはまた、必要な緩衝剤および試薬も含有する。場合によって、このような容器に付随して、キット使用のための指示書（添付文書）、並びに／あるいは医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　（一般技術）
　本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Sambrook　J.　et　al.(1989).　Molecular　Cloning:　A　Laboratory　Manual,　Cold　Spring　Harborおよびその3rd　Ed.(2001);　Ausubel,　F.M.(1987).Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;　Ausubel,F.M.(1989).　Short　Protocols　inMolecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;Innis,M.A.(1990).PCR　Protocols:　A　Guide　to　Methods　and　Applications,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1992).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Ausubel,F.M.　(1995).Short　Protocols　in　MolecularBiology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Innis,M.A.　et　al.(1995).PCR　Strategies,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1999).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　fromCurrent　Protocols　in　Molecular　Biology,Wiley,　and　annual　updates;　Sninsky,　J.J.et　al.(1999).　PCR　Applications:　Protocols　for　Functional　Genomics,　Academic　Press、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
　人工的に合成した遺伝子を作製するためのDNA合成技術および核酸化学については、例えば、Gait,　M.J.(1985).　Oligonucleotide　Synthesis:A　Practical　Approach,IRL　Press;　Gait,M.J.(1990).　Oligonucleotide　Synthesis:　A　Practical　Approach,　IRL　Press;　Eckstein,F.(1991).　Oligonucleotides　and　Analogues:APractical　Approach,　IRL　Press;Adams,　R.L.　et　al.(1992).　The　Biochemistry　of　the　Nucleic　Acids,　Chapman&Hall;　Shabarova,Z.　et　al.(1994).　Advanced　Organic　Chemistry　of　Nucleic　Acids,　Weinheim;Blackburn,　G.M.et　al.(1996).　Nucleic　Acids　in　Chemistry　and　Biology,　Oxford　University　Press;　Hermanson,G.T.(I996).Bioconjugate　Techniques,　Academic　Pressなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
　例えば、本明細書において、当該分野に知られる標準法によって、例えば自動化DNA合成装置（Biosearch、Applied　Biosystems等から市販されるものなど）の使用によって、本発明のオリゴヌクレオチドを合成することも可能である。例えば、Steinら（Steinet　al.,　1988,　Nucl.　Acids　Res.　16:3209）の方法によって、ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドを合成することも可能であるし、調節孔ガラスポリマー支持体（Sarinet　al.,1988,　Proc.　Natl.　Acad.　Sci.　USA　85:7448-7451）等の使用によって、メチルホスホネート・オリゴヌクレオチドを調製することも可能である。
　本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも1つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「2つの値の範囲内」と明記した場合、その範囲には2つの値自体も含む。
　本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
　以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、請求の範囲によってのみ限定される。
［実施例］
　以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　＜実施例１＞抗FSTL1抗体の作製
　3ヵ月齢のボリスブラウン3羽に対して、1羽当たり1回に抗原であるヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）（配列番号１５９）を1羽あたり100μgずつ腹腔に免疫した。1次免疫には完全フロイントアジュバンド（Wako社、014-09541）、2次、3次および4次免疫には不完全フロイントアジュバンド（Wako社、011-09551）を用いて抗原を腹腔に免疫した。5次免疫はPBS（phosphate　buffered　saline）に希釈した抗原を静脈注射した。隔週で翼下静脈より採血を行い、ELISAによって抗体価の確認を行った。3羽に対して4次免疫まで実施し、最も抗体価の上昇が見られた個体1羽に対して、5次免疫を行い、5次免疫を最終免疫とした。最終免疫3日後、ニワトリの脾臓を回収し、Ficoll　paque　PLUS（GE　Healthcare社、17-1440-03）を用いた密度勾配遠心によりリンパ球を単離し、TRIzole　Reagent（Life　Technologies、15596026）を用いてRNAを抽出した。抽出したRNAからPrimeScript　II　1st　Strand　cDNA　Synthesis　Kit（TAKARA、6210A）を用いたRT-PCRによりcDNAの合成を行い、scFvファージライブラリーを作製した。発現ベクターはpPDSを使用した。scFvファージライブラリーの作製は、参考文献：“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。
　scFv　ファージライブラリーを用いてパニングを行いFSTL1特異的なファージの濃縮を行った。パニングに用いた抗原はヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）のみ、またはヒト　FSTL1（R&D　Systems社、Cat#　1694-FN-050）およびマウスFSTL1（R&D　Systems　Cat#1738-FN-050）の2種のパニング用の抗原を交互に使用することでマウスにも交差反応性を持つ抗体を取得した。パニングは参考文献“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。5回パニングを行った後、ライブラリーの反応性を、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1を固相化したプレートを用いたELISAによって確認し、反応性が上昇し始めたライブラリーからファージのスクリーニングを行った。scFvファージ抗体のサンプル調製では、ファージを大腸菌に感染させ、アンピシリン（50μg/ml、nacalai、02739-32）を含む2×YT　Agar　plateにプレーティング
し、得られたコロニーをアンピシリン含有2×YT液体培地中で培養した。ヘルパーファージを感染させた後、アンピシリン（50μg/ml）、カナマイシン（25μg/ml、明治製菓株式会社、GS1-RSS）、IPTG（100μg/ml、nacalai、19742-94）含有2×YT液体培地中でファージの誘導を行った。得られた培養上清中のscFvファージ抗体の反応性を、抗原固相化プレートを用いたELISAによって確認した。ELISAによるスクリーニングでは、PBSで希釈した１μg／mlのヒトFSTL1またはマウスFSTL1を50μｌ／ウェルで96ウェルプレート（Nunc社、Cat.　No.　442404、）に入れ、一晩、４℃で抗原を固相化した。固相化の後、25％Block　Ace（DSファーマバイオメディカル、UK-B80）を含むＰＢＳでウェルをブロッキングし、scFvファージ抗体を含む培養上清を反応させた。二次抗体として、HRP標識Goat　anti-mouse　IgG　(H+L)　（KPL社、Cat.　No.474-1806）を10％Block　Aceに1000倍希釈した溶液に加え、基質として用いたOPDの発色をプレートリーダー（BIO-RAD社、Model　680）で490nmおよび630nmの吸光度を測定した。以上の条件を表1にまとめる。
　（表１　スクリーニング条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
（Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。）
　ELISAにて得られた陽性クローンについて、ユーロフィンジェノミクスに外注し、DNAシークエンスを行い、配列を決定した。
　配列の異なるクローンについて、scFv抗体をコードするDNA鎖を鋳型にして、ニワトリ由来抗体遺伝子H鎖可変領域及びL鎖可変領域の増幅をPCRで行った後、PCR産物をSacII（BioLabs社,　Cat#R0157S）及びNheI制限酵素処理（BioLabs社,　Cat#R0131S）した。次に、H鎖可変領域及びL鎖可変領域のそれぞれについて、同じように制限酵素処理したマウス/ニワトリキメラ抗体（IgG1）発現ベクター（H鎖用発現ベクター：pcDNA4/myc-His、L鎖用発現ベクター：pcDNA3/myc-His、Invitrogen）に組換えた。作製したH鎖及びL鎖のコンストラクトをCHO細胞にトランスフェクトした後、培養上清をヒトまたはマウス　FSTL1タンパク質を固相したELISAで反応性の確認を行った。使用したマウスキメラ発現ベクターはTateishi　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2008　Apr;70(4):　397-400に記載されているベクターを使用した。
　以上により得られた抗体クローン（ニワトリ-マウスキメラ抗体）のうち、クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３を以下の実験で使用した。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６であり、全長アミノ酸配列は、配列番号９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６であり、核酸配列は順に配列番号５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５であり、全長核酸配列は、配列番号９５、９９、１０３、１０７、１１１、１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７、１５１、１５５である。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号８、１２、１６、２０、２４，２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、６４、６８であり、全長アミノ酸配列は、配列番号９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８であり、核酸配列は順に配列番号７、１１、１５、１９、２３、２７、３１、３５、３９、４３、４７、５１、５５、５９、６３、６７であり、全長核酸配列は、配列番号９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７である。
　上記の抗体クローンを大量に製造するため、作製したH鎖およびL鎖のコンストラクトをほ乳類培養細胞にExpi293Expression　system(Invitrogen社、Cat#A14635)を利用しトランスフェクトした後、発現した抗体の精製をProteinG　Sepharose　4　Fast　Flow（GE　healthcare社、17-018-02）を用いて行った。得られた各クローンの精製抗体のFSTL1に対する結合活性の測定については、実施例２で示す。
　＜実施例２＞精製抗体のFSTL1に対する結合活性評価
　以下の条件でELISAを行い、取得した上記の抗体クローンのFSTL1に対する反応性を評価した。
　（表２　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗ジニトロフェニル（DNP）抗体（ネガティブコントロール）、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　結果、ヒトFSTL1に対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#7-34、#5-10＞#5-3＞#5-8＞#5-43となった（図１A）。また、抗体クローンの中で＃6-55と＃7-34はヒトおよびマウスFSTL1の両方に特異的かつ同程度の強い結合活性を示した（図１B）。
　図２および図３では、スクリーニングおよび抗体精製の時期が異なるクローンに関しても表３の条件で結合活性を評価した結果を示した。
　（表３　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗DNP抗体、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#7、#10、#13、#22,#33
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　（結果）
　ヒトFSTLに対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#8-1＞#8-7＞#8-4＞#8-8　となった（図２）。更に、ヒトおよびマウスFSTL1に対する結合活性を評価した結果、（図３A）ヒトFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#13＞#8-1、#10＞#8-4＞#7、#33＞#5-8＞#22となった。（図３B）マウスFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#10、#13＞#22＞#７＞#33＞#8-1となり、#8-1はごくわずかに結合活性を示した。#5-8、#8-4はマウスFSTL1に対して全く結合活性を示さなかった。
　＜実施例３＞抗体のエピトープマッピング
　本実施例では、上記実施例で得られた抗体のエピトープマッピングを行った。
　＜遺伝子合成＞
　ヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の合成にあたり、ヒトFSTL1遺伝子はNM_007085.4（配列番号１）を、マウスFSTL1遺伝子はNM_008047.5（配列番号３）の配列情報を参考に、C末端にアラニン残基3個とヒスチジン残基10個を付加したHisタグ付きのヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の配列設計を行った。更に、哺乳類細胞での発現を考慮して、コドンの最適化を行い、各遺伝子の両末端にプラスミド挿入用の核酸配列（配列番号７５および７６）をそれぞれ付加した遺伝子を設計し、合成はLife　Technologies社に外注した。元になったヒトおよびマウスFSTL1の核酸およびアミノ酸配列（配列番号１，２，３、４）および実際に遺伝子合成した核酸配列および翻訳後のアミノ酸配列（配列番号６９，７０，７１，７２）を下記に示す。
プラスミドへの挿入用の配列：N末側　5’-CGAACCCTTAAGCTTG-3’（配列番号７５）
　　　　　　　　　　　　　　C末側　5’-CGTGGCATCTAGACA-3（配列番号７６）
・ヒトFSTL1核酸配列（配列番号１）＜以下下線はリーダー配列である。＞
atgtggaaacgctggctcgcgctcgcgctcgcgctggtggcggtcgcctgggtccgcgccgaggaagagctaaggagcaaatccaagatctgtgccaatgtgttttgtggagccggccgggaatgtgcagtcacagagaaaggggaacccacctgtctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaactgcatcgagatgcctgcctcactggatccaaaatccaggttgattacgatggacactgcaaagagaagaaatccgtaagtccatctgccagcccagttgtttgctatcagtccaaccgtgatgagctccgacgtcgcatcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagcaactacagtgaaatcctagacaagtattttaagaactttgataatggtgattctcgcctggactccagtgaattcctgaagtttgtggaacagaatgaaactgccatcaatattacaacgtatccagaccaggagaacaacaagttgcttaggggactctgtgttgatgctctcattgaactgtctgatgaaaatgctgattggaaactcagcttccaagagtttctcaagtgcctcaacccatctttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggatgaaacgtatgcagatggagctgagaccgaggtggactgtaaccgctgtgtctgtgcctgtggaaattgggtctgtacagccatgacctgtgacggaaagaatcagaagggggcccagacccagacagaggaggagatgaccagatatgtccaggagctccaaaagcatcaggaaacagctgaaaagaccaagagagtgagcaccaaagagatctaa
・マウスFSTL1核酸配列（配列番号３）
atgtggaaacgatggctggcgctctcgctggtgaccatcgccctggtccacggcgaggaggaacctagaagcaaatccaagatctgcgccaatgtgttttgtggagctggcagggaatgtgccgtcacagagaagggggagcccacgtgcctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaacttcatagagatgcctgcctcactggatccaagatccaggttgattatgatgggcactgcaaagaaaagaagtctgcgagtccatctgccagcccagttgtctgctatcaagctaaccgcgatgagctccgacggcgcctcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagtaactacagtgagatcctagacaagtactttaagagctttgataatggcgactctcacctggactccagtgaattcctgaaattcgtggagcagaatgaaacagccatcaacatcaccacttatgcagatcaggagaacaacaaactgctcagaagcctctgtgttgacgccctcattgaactgtctgatgagaacgctgactggaaactcagcttccaagagttcctcaagtgcctcaacccatccttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggacgaaacctatgcagatggagctgagactgaggtggactgcaatcgctgtgtctgttcctgtggccactgggtctgcacagcaatgacctgtgatggaaagaatcagaagggggtccagacccacacagaggaggagaagacaggatatgtccaggaactccagaagcaccagggcacagcagaaaagaccaagaaggtgaacaccaaagagatctaa
・実施例で用いたヒトＦＳＴＬ１の核酸配列（配列番号６９）
atgtggaagagatggctggccctggctctggcactggtggctgtggcttgggtgcgcgccgaggaagaactgcggagcaagagcaagatctgcgccaacgtgttctgcggagccggcagagaatgtgccgtgaccgagaagggcgagcctacctgcctgtgcatcgagcagtgcaagccccacaagaggcctgtgtgcggcagcaacggcaagacctacctgaaccactgcgagctgcaccgggatgcctgtctgaccggcagcaagatccaggtggactacgacggccactgcaaagaaaagaaaagcgtgtcccccagcgccagccccgtcgtgtgttaccagagcaacagggacgagctgcggcggagaatcatccagtggctggaagccgagatcatccccgacggctggttcagcaagggcagcaactacagcgagatcctggacaagtacttcaagaacttcgacaacggcgacagcagactggacagcagcgagttcctgaagttcgtggaacagaacgagacagccatcaacatcaccacctaccccgaccaggaaaacaacaagctgctgcggggcctgtgcgtggacgccctgattgagctgagcgacgagaacgccgactggaagctgagctttcaggaatttctgaagtgcctgaaccccagcttcaacccccccgagaagaagtgcgccctggaggacgagacatacgccgatggcgccgagacagaggtggactgcaacagatgcgtgtgcgcctgcggcaactgggtgtgcaccgccatgacctgcgacggcaagaatcagaagggcgcccagacccagaccgaagaagagatgaccagatacgtgcaggaactgcagaagcaccaggaaaccgccgaaaagaccaagcgggtgtccaccaaagagatcgccgctgcccaccaccatcaccatcatcaccaccaccattga
・実施例で用いたマウスFSTL1の核酸配列（配列番号７１）
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・ヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号２）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEI
・マウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号４）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEI
・実施例で用いたヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号７０）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEIAAAHHHHHHHHHH
・実施例で用いたマウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号７１）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEIAAAHHHHHHHHHH
　＜発現ベクター構築＞
　次に、pcDNA3.4TOPO（登録商標）へのマルチクローニングサイトの挿入、およびFSTL1遺伝子の挿入方法を説明する。
　以下のマルチクローニングサイトを有する配列を、ファスマック社へ外注し、一本鎖DNAの合成を行った。それぞれの一本鎖DNAは相補的であり、合成した一本鎖DNAを二本鎖にした後に、pcDNATM3.4-TOPO（登録商標）　TA　Cloning　Kit　(Life　Technologies,　Cat#　A14697)を用いてpcDNA　3.4　TOPO（登録商標）　vectorに挿入した。
・マルチクローニングサイト配列
5‘-AAGCTTGGATCCACTAGTGAATTCATCTACCAGCTAGCGTGGCATCTAGACACTCTCGAGA-3’（配列番号７３）
5‘-CTCGAGAGTGTCTAGATGCCACGCTAGCTGGTAGATGAATTCACTAGTGGATCCAAGCTTA-3’（配列番号７４）
　マルチクローニングサイトを挿入して得られたプラスミドを大腸菌に形質転換し、大腸菌を培養してPureYieldTM　Plasmid　Midiprep　System（Promega社、Cat#　A2492）を用いてプラスミドを精製した。精製したプラスミドを制限酵素BamHI-HF（BioLabs社　Cat#　R3136L）およびNheI-HF（BioLabs社　Cat#R3131L）で処理し、１％アガロース電気泳動を行った。泳動後にエチジウムブロマイドで染色し、プラスミドのバンドを切り出しNucleoSpin　Gel　and　PCR　Clean-up（TAKARA社、Cat#　740609.250）を用いてゲルからプラスミドを精製した。
　合成したヒトFSTL1（配列番号６９）またはマウスFSTL1遺伝子（配列番号７１）をGeneArt　Seamless　Cloning　and　Assembly　Enzyme　Mix（Invitrogen社、Cat#A14606）を用いて、上記制限酵素処理済みプラスミドに組込み、そのプラスミドを大腸菌に形質転換した。形質転換した大腸菌を培養し、大腸菌からプラスミドを抽出・精製してDNAシーケンスを確認した。DNAシーケンスの結果、目的のヒトおよびマウスFSTL1遺伝子配列が確認できたプラスミドを発現プラスミドとした。得られたヒトおよびマウスFSTL1発現ベクターを用いて、Expi293TM　Expression　system（Life　Technologies社,　Cat#　A14635）で一過性発現を行った。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resin(Thermo　Scientific社、Cat#　89964)を用いて精製を行い、ELISAおよびエピトープマッピングELISA用の抗原とした。
　＜FSTL1欠損体の作製＞
　次に、各種欠損体作製方法を示す。上記で作製したヒトFSTL1発現プラスミドをテンプレートとして、以下に示す欠損体作製用プライマーおよびKOD　-Plus-　Mutagenesis　Kit(TOYOBO社、Cat#　SMK-101)を用いて欠損体の発現ベクターを構築した。欠損させる箇所は、Uniprotの　No.Q12841を参考にして立体構造に重要なジスルフィド結合が多く含まれる箇所以外を選択し（図４A参照）、21番目から53番目のアミノ酸欠損体（Δ21-53）、100番目から140番目のアミノ酸欠損体（Δ100-140）、148目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ148-170）、148番目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163番目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）、181番目から190番目のアミノ酸欠損体（Δ181-190）、193番目から228番目のアミノ酸欠損体（Δ193-228）および233番目から289番目のアミノ酸欠損体（Δ233-289）の発現ベクターを作製した。各種欠損体はExpi293TM　Expression　systemで一過性発現を行った。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resinを用いて精製を行い、エピトープマッピングELISA用の抗原とした。
Δ21-53　(Forward　primer)
5’-TGCATCGAGCAGTGCAAGCCCCACA-3’（配列番号７７）
Δ21-53(Reverse　primer)
5’-GGCGCGCACCCAAGCCACAGCCACC-3’　（配列番号７８）

Δ100-140(Forward　primer)
5’-AAGGGCAGCAACTACAGCGAGATCC-3’　（配列番号７９）
Δ100-140(Reverse　primer)
5’-TTTGCAGTGGCCGTCGTAGTCCACC-3’　（配列番号８０）

Δ148-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号８１）
Δ148-170(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号８２）

Δ181-190(Forward　primer)
5’-AAGCTGCTGCGGGGCCTGTGCGTGG-3’　（配列番号８３）
Δ181-190(Reverse　primer)
5’-GTTGATGGCTGTCTCGTTCTGTTCC-3’　（配列番号８４）

Δ193-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG-3’　（配列番号８５）
Δ193-228(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG-3’　（配列番号８６）

Δ233-289(Forward　primer)
5’-CTGCAGAAGCACCAGGAAACCGCCG-3’　（配列番号８７）
Δ233-289(Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG-3’　（配列番号８８）

Δ148-154(Forward　primer)
5’-AACTTCGACAACGGCGACAGCAGACT-3’　（配列番号８９）
Δ148-154(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号９０）

Δ155-162(Forward　primer)
5’-CTGGACAGCAGCGAGTTCCTGAAGT-3’　（配列番号９１）
Δ155-162(Reverse　primer)
5’-CTTGAAGTACTTGTCCAGGATCTCG-3’　（配列番号９２）

Δ163-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号９３）
Δ163-170(Reverse　primer)
5’-TCTGCTGTCGCCGTTGTCGAAGTTC-3’　（配列番号９４）

Δ193-204(Forward　primer)
5’-AGCGACGAGAACGCCGACTGG -3’　（配列番号２１６）
Δ193-204(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG -3’　（配列番号２１７）

Δ205-216(Forward　primer)
5’-GAATTTCTGAAGTGCCTGAAC -3’　（配列番号２１８）
Δ205-216 (Reverse　primer)
5’-CAGCTCAATCAGGGCGTCCAC -3’　（配列番号２１９）

Δ217-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG -3’　（配列番号２２０）
Δ217-228 (Reverse　primer)
5’-CTGAAAGCTCAGCTTCCAGTC -3’　（配列番号２２１）

Δ233-251(Forward　primer)
5’-AGATGCGTGTGCGCCTGCGGC -3’　（配列番号２２２）
Δ233-251 (Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号２２３）

Δ252-270(Forward　primer)
5’-AATCAGAAGGGCGCCCAGACC -3’　（配列番号２２４）
Δ252-270 (Reverse　primer)
5’-GTTGCAGTCCACCTCTGTCTCG -3’　（配列番号２２５）

Δ271-289(Forward　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号２２６）
Δ271-289 (Reverse　primer)
5’-CTTGCCGTCGCAGGTCATGGCG -3’　（配列番号２２７）

Δ48-100(Forward　primer)
5’-AAGAAAAGCGTGTCCCCCAGC -3’　（配列番号２２８）
Δ48-100 (Reverse　primer)
5’-CTTCTCGGTCACGGCACATTC -3’　（配列番号２２９）

　＜エピトープマッピングELISA＞
上記で調整した抗原と以下の抗体を用いてエピトープマッピングELISAを行った。
使用した抗体；実施例1で得られた各種ニワトリ-マウスキメラ抗体、特許WO2009/028411の実施例で評価されているラット抗　FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)ネガティブコントロールとして抗DNP抗体およびラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061、clone　141945)
　（表４　エピトープマッピングELISA条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　図４の上段でヒトFSTL1の模式図（Uniprot,　No.Q12841参考）と調製したそれぞれの欠損体の欠損部位を示す。エピトープマッピングELISAの結果、各抗体のエピトープ箇所は図４下段で示すように、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#8-1、#8-2、#8-4、#8-7は233番目から289番目のアミノ酸配列に含まれる配列、#7、#10、#22は193番目から228番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定される。また、R&D社製のラット抗FSLT1抗体のエピトープは21番目から53番目のアミノ酸配列に含まれる配列と推定され、実施例１で得られた抗体各種とは異なるエピトープであることが分かった。また、#6-55、#7-34、#13は148番目から170番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定され、更にこれらのクローンは後述のin　vitro　評価によって有望な抗体クローンとして判断されたため、エピトープが含まれる148番目から170番目のアミノ酸配列についてエピトープ配列の絞り込みを行った。具体的には、148目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）を作製し、上記と同様にエピトープマッピングELISAを行った。結果、#6-55、#7-34、#13のエピトープ箇所は図４下段で示すように148番目から162番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定された。
　＜エピトープのさらなる絞り込み＞
　１４８－１７０番目のアミノ酸配列（＃６－５５、＃７－３４、＃１３のエピトープ）、１９３－２２８番目のアミノ酸配列（＃７、＃１０、＃２２のエピトープ）および２３３－２８９番目のアミノ酸配列（＃５－２、＃５－３、＃５－８、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－８のエピトープ）について、更に欠損配列を細分化し、エピトープ配列の絞り込みを行った。＃３３のクローンについてエピトープの同定を行った。
　図４下段には、これらの結果をまとめたものも反映されている。＃３３のエピトープは、４８～１００番目のアミノ酸配列に、＃７、＃１０のエピトープは、２０５～２２８番目のアミノ酸配列に、＃２２のエピトープは、１９３～２１６位のアミノ酸配列に、＃５－２、＃５－３、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－１０のエピトープは、２７２～２８９番目のアミノ酸配列にあるものと推定された。
　＜実施例４：間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　骨髄細胞をFSTL1で刺激すると、多分化能や自己増殖能を備えた間葉系幹細胞　(MSC)が増殖することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、C57BL/6マウスの大腿骨より採取した2x107個/wellの骨髄細胞を3mL/wellの2%ウシ胎児血清含有RPMI1640　(GIBCO社、Cat.　No.　C11875500BT)培地に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D　Systems社　Cat#　1694-FN-050)と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10
、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その11日後、細胞数を計
数するとともに、MSCマーカーの発現を調べるためにPE標識抗ALCAM抗体　(eBiosciences社、Cat.　No.12-1661-82)およびPE標識抗PDGFRA抗体(eBiosciences社、Cat＃12-1401-81)を用いて染色して、ALCAM陽性細胞およびPDGFR陽性細胞の含有率をFACScan　(BD　社、Code.　BECTON-DICKINSON-FACSCAN)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の各陽性細胞の数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるALCAM陽性細胞およびPDGFRA陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。他と比べ、#5‐43、#6-55、#7‐34は若干阻害活性が強い傾向が見られた。
　＜実施例５：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　FSTL1で刺激活性化された腫瘍細胞は、骨転移を促す分子群を高発現し、転移浸潤能を亢進することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、ヒト膵癌細胞株Panc1を、それぞれ2x107個/wellずつ1　mL/wellの10%　ウシ胎児血清含有D-MEM培地(GIBCO社　Cat.　No.　C11885500BT)に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10　μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その3日後、細胞数を計数するとともに、骨転移性を示すマーカーの発現を調べるためにPE標識抗RANKL抗体(eBiosciences社　Cat.　No.12-6619)およびPE標識抗CCR2抗体　(R&D社　Cat.　No.　FAB151P)を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるRANKL陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。本実験結果から、RANKL陽性細胞の含有率と1培養中の細胞数とでは、細胞数がより評価に適切であることが判明したので、以下の実施例では細胞数を指標として判断を行った。
　＜実施例６：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、実施例４と同様の実験を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その11日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体(BD　Pharmingen社、Cat.　No.555484)を用いて染色して、一般的にMSCを高率に含むと報告されているCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図５A）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8、#7-34、#5‐43がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。
　＜実施例７：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価をRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞で行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10　μg/mLの抗FSTL1抗体（実施例６と同じクローン）または対照抗体を添加して刺激培養した。
その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図５B）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8がより高い阻害活性を示した。
　＜実施例８：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、濃度を変更して、実施例４、６と同様にFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図６A）。結果、コントロール抗体と比較して、#5-8、#5‐43、#6‐55、#8‐1、#8‐4がFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例９：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、低濃度で、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-8、#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図６B）。結果、最終濃度20ng/mLの濃度でも、コントロール抗体と比較して、#5-8と#6-55がRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例１０：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、新たに取得したクローンも含めFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μｇ/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-3、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、#5-2、#6‐55、#8‐4、#8‐7はRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して高い阻害活性を示した（図６C）。
　＜実施例１１：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価(用量依存試験)＞
　本実施例では、低用量を含むよう用量を変動させてFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、抗体の用量依存性は認められなかったが、試験した#6-55は試験したすべての用量（５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ）でRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対してほぼ１００％の阻害活性を示した（図６Ｄ）。
　＜実施例１２：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、さらなるクローンを含めてFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図７）。結果、Control　と比較して、全てのクローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。特に、#7‐34、#5-2、#6‐55、#8‐7の順で高い阻害活性が認められた。
　＜実施例１３：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞
（MDSC）誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞
（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調製したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#6-55、#7-34、#8-1、#8-4）、免疫抑制解除の効果が報告されている抗PD-L1抗体またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、MSC（CD45陰性細胞）、癌転移に伴って増加するMSCである癌関連MSC（CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞）、癌関連MSCと共に増加する単球系骨髄由来免疫抑制性細胞（M-MDSC：CD11b陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞）を検出するため、PE-Cy5標識抗CD45抗体、PE標識抗ALCAM抗体、FITC標識抗CD271抗体　(Abcam社、Cat.　No.　AB62122)、FITC標識抗CD11b抗体(BD　Pharmingen社、Cat.No.553310)、PE-Cy5標識抗Gr1抗体（eBioscience社、Cat.　No.15-5931）を用いて染色し、上述の細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析して1培養中のMSC数および割合を算出した（図８）。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して高い阻害活性を示した。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想していたが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強かった。
　＜実施例１４：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞
（MDSC）誘導の阻害活性評価および脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞
（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例１３と同様の試験方法によって抗体クローン（#6-55、#7、#10、#13、#22）について活性評価を行った。#6-55は活性のポジティブコントロールとして設置した。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して阻害活性を示し、中でも、#13はポジティブコントロールと同等以上の阻害活性を示した（図９A）。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図９Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、続いて抗FSLT１抗体クローンを示す。いずれの抗FSLT１抗体でも脂肪細胞は認められず、大元となるMSCへの分化誘導が阻害されていることが理解される。
　＜実施例１５：従来の抗体との比較＞
　本実施例では、特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体との活性比較を行った。
　特許文献１（WO2009/028411）において免疫抑制に重要な制御性T細胞の誘導阻害活性を示したR&D　Systems社製のラット抗FSTL1抗体(Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)と本発明の#6‐55のFSTL1阻害活性の比較を行った。
　実施例４と同様に調整した骨髄細胞マウス骨髄細胞に最終濃度20ng/mLのFSTL1におよび、最終濃度20.0、10.0、5.0、2.5μg/mlでラット抗FSTL1抗体および#6‐55をマウス骨髄細胞に添加した。また、それぞれのコントロール抗体となるラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061、clone　141945)および抗DNP抗体は最終濃度が20.0μg/mlでマウス骨髄細胞に添加して8日間培養し、実施例１３と同様にして、FSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対する各抗体の阻害活性を評価した（図１０A）。結果、ラット抗FSTL1抗体と#6‐55の抗体の阻害活性は同等レベルであった。一方、用量依存性は認められなかった。特許文献１（WO2009/028411）において示されている制御性T細胞の阻害はMSC誘導阻害を介した結果だったと推測される。
　＜実施例１６：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価（脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)免疫抑制を誘導する効果についての阻害活性評価として、脂肪細胞への分化能の評価を行った。
　実施例１５と同様に、マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1　培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した(図１０B)。結果、抗DNP抗体（マウスIgGコントロール群）と比較し、脂肪細胞に分化する細胞は#6-55の添加によって用量依存的に減少した。一方、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の添加した場合、脂肪細胞への分化に対して全く影響が認められず、いずれの用量でもラットIgG2bアイソタイプコントロール群と同様に多数の脂肪細胞が観察された。つまり、CD45陰性細胞集団全てがMSCというわけではなく、MSCを高率に含む細胞集団に過ぎないのだが、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体では、CD45陰性細胞数は減少するものの、そこには脂肪細胞に分化するMSCがまだ多数残存していることを示している。
　＜実施例１７：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腫瘍内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた腫瘍内投与による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　＜方法および材料＞
　抗体3　種について、Snail　強制発現マウスメラノーマ細胞B16-F10をC57BL/6N　マウスの皮下・静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。
　１．実験群(n=5)
1.　　No　treatment
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
　2.　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下移植5x105個＆静脈内移植1x105個）
Day　7　抗体の腫瘍内投与（200μg/0.1　mL/tumor）
Day　14　各種アッセイ（フローサイトメトリー解析を中心に）
　3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図１１Ｃ）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞）（図１１Ａ）
◆間葉系幹細胞の増加に対する効果（骨髄内と脾臓内のCD45陰性細胞）（図１１Ｂ、Ｄ）◆免疫抑制性Treg　細胞の増加に対する効果（骨髄や脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図１１Ｄ）
◆その他の免疫抑制性（図１１Ｄ）
　（説明）
　in　vivoにおける抗体活性評価を示すために、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。
　Snail陽性腫瘍細胞をマウスの皮下または静脈内へ移植すると、様々な臓器の他、骨髄に優位に転移し、これが骨髄を起点とした間葉系幹細胞　(MSC)の増加を招いて全身的に強く抗腫瘍免疫の誘導が抑制されてしまうことが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、GFP遺伝子とマウスSnail遺伝子を導入して強制発現させたGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞を皮下に5x105個、尾静脈内に1x105移植し、その7日後に生理食塩水で1mg/mlに調製した抗FSTL1抗体(＃6-55,＃7-34,＃8-1)またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)をコントロール抗体として10mg/kgで腫瘍内に接種した(5匹／群)。まずは、アッセイまでの間、皮下腫瘍径を測定して腫瘍体積を算出し、皮下腫瘍増殖に対する阻害効果を評価した（図１１C（各個体の推移を示す。））。抗体投与から7日後　(腫瘍移植14日後)は、マウスから骨髄細胞や脾臓細胞を採取して1匹当たりの細胞数を計数するとともに、FACScan(BD社)を用いたフローサイトメトリー解析により、さらに詳細に薬効を比較解析した。すなわち、a)骨髄細胞中のGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞含有率を解析して、骨転移に対する阻害効果を評価し（図１１A）、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数し（図１１B）、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果を示するものである。b)脾臓内のCD45陰性細胞含有率を解析して(PE-Cy5標識抗CD45抗体,BD社)、MSC増加に対する阻害効果を評価し（図１１D左）、c)MSCが誘導するとされている免疫抑制性CD4陽性Foxp3陽性細胞(PE標識抗CD4抗体,BD社;FITC標識抗Foxp3抗体,eBiosciences社)（図１１D中）や、疲弊して機能不全に陥ったCD8陽性Tim3陽性T細胞(CyChrome標識抗CD8抗体,BD社;FITC標識抗Tim3抗体,R&D社)の含有率（図１１D右）を骨髄や脾臓において解析して、免疫抑制解除効果を評価した。
　（結果）
　結果を図１１に示す。Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いた、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。なお、被験対象である抗FSTL1抗体の投与法として、腫瘍内投与を行った。3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。図１１Dでは脾臓内の細胞集団の変化を示すが、腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身的に修飾／影響を受けることが示されている。図１１D左では、　CD45陰性細胞数が示され、脾臓内でもMSCが減少することが示されており、図１１D中央では、CD4陽性Foxp3陽性T細胞数が減少することが示されており、Treg（制御性T細胞）が減少していることが示されている。また、図１１D右では、CD8陽性Tim3陽性T細胞数が示され、疲弊CD8陽性T細胞が減少することが実証されている。ここで、「疲弊」とは、機能が低下あるいは不全に陥っている状態を示し、Tim3はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきCD8陽性T細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。したがって、本発明の効果は、このような免疫抑制の増強を抑制するという点でも顕著な効果を奏しているといえる。
　＜実施例１８：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腹腔内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた全身投与（腹腔内投与）による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．実験群(n=5)
1.No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
　2.実験手順
Day　0:　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　5:　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　10:　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
＊腹腔内投与と静脈内投与は、全身投与術として薬理的に同義で用いられる。
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図１２B）
◆骨転移に対する効果（骨髄や脾臓内のGFP陽性腫瘍細胞）（図１２A、C）
◆MSC増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45陰性細胞）（図１２A、C）
◆体重喪失に対する効果（図１２A）
◆免疫抑制性Treg細胞の増加に対する効果（脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図１２C）
◆その他の免疫抑制性（図１２C）
　（説明）
　実施例１７では、本発明者らがこれまで行ってきた「原発から骨への転移を阻害する」という目的に準じて抗体は腫瘍内へ投与したが、本実施例では、実施例１７の条件を変更して、抗体薬が一般的に全身投与されていることを考慮し、マウス実験で一般的に行われている腹腔内投与を採用した。抗体投与法以外は、上記実施例１７と全て同様に行った。具体的には、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗FSTL1抗体を腹腔内投与し（全身投与）、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。
　また、アッセイも腫瘍移植14日後に行った。抗体は、腫瘍移植5日後と10日後に2回、10　mg/kgずつをマウス腹腔内に投与した。
　（結果）
　結果を図１２に示す。なお、今回の被験対象である抗FSTL1抗体の投与法は、腹腔内投与にて行った。in　vivo評価は実施例１７と同様に、3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した（図１２Ｂ）。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果（図１２Ａ右）が認められた。これらの機能解析結果を考察すると、従来免疫抑制で注目されてきたTregを減少・除去したとしても癌治療上は十分な治療とは言えず、やはり免疫抑制カスケード全体の制圧を考えるべきであり、その最上流に位置するMSCを標的とすることがより有効であることが期待される。また、MSCを減らす（図１２Ａ左）と同時に、癌転移をも阻害する（図１２Ａ中央）ことがさらに効果的であることも再確認でき、FSTL1を標的とした阻害治療が癌治療上有効である可能性が期待される。図１２Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図１２Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。下右はCD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　＜実施例１９：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～既存薬との比較＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較を行った。
　（説明）
　実験の手順や方法は実施例１７および１８とほぼ同様であり、アッセイは腫瘍移植15日後に行った。
　既存薬として下記抗体を腫瘍移植4日後と8日後に2回、10mg/kg（200μg/mouse）ずつをマウス腹腔内に投与した。
　本実施例では、抗FSTL1抗体の作用機序の一つである「免疫抑制解除」の目的で既に臨床で使用されている抗体薬と、Snail陽性腫瘍骨転移モデルを用いて治療効果を比較検討した。抗体は、抗体薬を用いた一般的な動物試験に準じて、前回同様に全身的に２回投与した。
　1　実験群(n=5)
１　No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
２　Control　IgG(anti-DNP)
３　Anti-FSTL1　mAb(＃6-55)
４　Anti-CTLA4　mAb(Clone　9H10,　BioLegend)
５　Anti-PD-1　mAb(Clone　29F.1A12,　BioLegend)
６　Anti-PD-L1　mAb(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
７　Naive　(no　tumors,　no　treatment)　
　2　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　8　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　15　各種アッセイ
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植８、１１、１４日後に測定した。（図１３A）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞量）（図１３B）
◆骨髄におけるMSC増加に対する効果（図１３B）
◆体重減少に対する効果（図１３B）
　（結果）
　結果を図１３に示す。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全てコントロール抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　＜実施例２０：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～大腸癌モデル＞
　本実施例では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　骨転移を評価しないこと以外、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～１９の骨転移モデル実験とほぼ同じ条件で行った。すなわち、Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。腫瘍移植量、抗体投与のタイミング、アッセイのタイミングのみ変更して行った。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖（図１４Ａ）、肺転移（図１４Ｂ））
　肺転移は、肺における腫瘍結節数を肉眼的に計数した。マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図１４に示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6　とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。また、肺転移結節数に関する結果は図１４Ｂに示される。左から、処置なし、中央はアイソタイプコントロール（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)は、CT26皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強い抑制し、5匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(コントロール抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　＜実施例２１：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～乳癌モデル＞
　本実施例では、マウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　実施例１７～２０に準じて行い、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～２０の骨転移モデル実験とほぼ同じように行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/c　マウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。
変更点は、以下のとおりである。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図１５に示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　＜実施例２２：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6　マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail　強制発現細胞株の親株である。
　１．実験群(n=5)
1.マウスメラノーマB16-F10+Control　IgG　(anti-DNP　mAb)
2.マウスメラノーマB16-F10+Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106個＆静脈内1x106個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。（図１６A）
◆体重減少に対する効果（図１６B）。
　（結果）
　結果を図１６に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、抗FSTL1抗体投与群では、体重減少についても抑制活性を示し（図１６Ａ）、著しい痩せや毛羽立ちなどは全く観察されず（図１６Ｂ）、全例元気だった。本モデルでは通常、移植20-30日後に肺転移が観察されるが、今回はこれまでのタイミングに合わせて約２週間後に評価したため、肺転移結節は肉眼的に観察されなかった。
　＜実施例２３：in　vivoにおける抗体活性評価～リンパ腫＞
　本実施例では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、FSTL1発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．　実験群(n=5)
１．マウスリンパ腫EL4+Control　IgG　(anti-DNPmAb)
２.マウスリンパ腫EL4+Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106　個＆静脈内1x106　個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植３、６、１０日後に測定した
　（結果）
　結果を図１７に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比し有意に抑制した。乳癌と並んでFSTL1高発現癌種の一つであるリンパ腫において有効性を提示できたことは、臨床試験展開上、大変有用なデータであるといえる。
　＜実施例２４：in　vivoにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０、皮下移植＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、実施例２２と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効の評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。
　1.　実験群　(n=5)
1.　Control　IgG　(anti-DNP),10　mg/kg
2.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),　1　mg/kg
3.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),　3　mg/kg
4.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),　10　mg/kg
　2.　実験手順
Day　0　マウスメラノーマB16-F10　細胞の皮下移植（1x106個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1
Day　8　抗体の腹腔内投与-2
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆　皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図１８に示す。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　＜実施例２５：ヒト末梢血細胞を用いた抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性＞
　本実施例では、ヒト末梢血細胞を用いて抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性を評価した
。
　FSTL1(5ng/ml)を用いてヒト末梢血細胞(1x106　cells)を刺激し、そこに抗体(5μg/mL)を添加して3日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をフローサイトメトリーで解析した。フローサイトメトリーの条件は以下のとおりである。
　健常人から１／１０量の４％クエン酸ナトリウムを加えて採血後、フィコール（比重1.090）に重層して遠心分離（１５００rpm、２０分、室温）し、中間層に存在する細胞分画を「PBMC」として使用した。このPBMC(1x106個)を24穴プレートにおいてFSTL1(5ng/ml)で３日間刺激培養する系に抗体(5μg/mL)を添加した。その培養系から回収したPBMCについて、抗CD4抗体(BD PharMingen社)、抗CD25抗体(BD PharMingen社)、抗FoxP3抗体(eBioscience社)を用いて、４℃で１時間インキュベート後、フローサイトメーターFACScan（Becton,Dickinson and Company社）を使用して、そこに含まれるCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をTreg細胞として解析した。
　図１９にこれらのデータ、結果をまとめた表を提示する◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。その結果、TGFb などと同様に、FSTL1刺激によってもTreg は顕著に増加し、それが本発明の抗体＃6-55 添加によって有意に抑制されることが分かった（Exp.1とExp.2、3 との違いは、末梢血ドナーの違いによる）。他方既知抗体であるR&D抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)はほとんど阻害せず、ここでもまた本発明の抗体＃6-55の優位性が確認された。以上の結果から、FSTL1 が引き起こすTreg 誘導に関しては、本発明の抗体＃6-55 は顕著に阻害できることが示された。
　＜実施例２６：様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響等＞
　本実施例では、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響、FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用およびSnail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を調べた。
　具体的には、Snail やFSTL1 の発現有無に関わらず様々なヒト腫瘍細胞を用いて、その増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響を検討した。すなわち、膵癌細胞株Panc1（ATCC社#CRL-1469）、そのSnail強制発現細胞株であるPanc1-snail+、膵癌細胞株MIAPaCa（ATCC社 #CRL-1420）、骨転移性乳癌細胞株MDA231（ATCC社#HTB-26）、メラノーマ細胞株Hs294T（ATCC社 #HTB-140） をそれぞれ1x105個培養する系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema:マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体,5μg/ml)を添加して3 日間培養後、一培養系における細胞数を計数して細胞増殖能を評価した。更に、計数した後の細胞(5x104個)をMatrigel コートtranswell chamber (Corning社 #354480)に播種し、4 時間培養後に膜を外してクリスタルバイオレット固定液で染色固定した後、膜を透過した細胞数を顕微鏡下でカウントして細胞浸潤能を評価した。その結果、特にSnailを高発現する高転移性の腫瘍細胞株で増殖能、浸潤能ともに強く抑制された。このことから、抗FSTL1 抗体は、EMT を呈してFSTL1 を高発現している腫瘍細胞に特に作用することが示された（図２０Ａ）。
　（FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用）
　次に、Snail/FSTL1 発現細胞が産生するFSTL1 を受けた周囲の腫瘍細胞が癌微小環境においてどのように変化し、かつ、抗FSTL1 抗体がどう作用するかを調べるため、SnailやFSTL1をわずかにしか発現しないことが分かっているヒト膵癌細胞株Panc1 をFSTL1で3 日間刺激し、この培養系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)を加えて、その後の細胞機能の変化を前項と同様の方法で解析した。その結果、以前論文（Cancer Res; 73(20); 6185-93.2013）でも報告しているように、FSTL1は腫瘍増殖にはあまり影響／寄与しないが、FSTL1 とともに抗FSTL1 抗体を添加することによって、細胞増殖は低下した。また、FSTL1は浸潤能を増強することも同様に報告しているが、その作用を打ち消すことが明らかとなった（図２０Ｂ）。
　（Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用）
　前項のFSTL1 刺激腫瘍細胞の代わりにSnail 強制発現細胞株Panc1-snail+を用いて、chamber 内に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)が存在下での細胞浸潤を評価した。その結果は前項の結果と酷似しており6-55については抑制活性が確認できた（図２０Ｃ)）。
　また、本実施例では、Panc1-snail+細胞を上記抗体添加下で3 日間培養した後で、骨転移マーカーとして知られる分子の中からCCR2 とRANKL の発現をフローサイトメトリーで解析した。その結果、CCR2とRANKL ともに抗FSTL1 抗体によっても強く抑制され、抗FSTL1 抗体は細胞浸潤に対して阻害活性を有していると推測される（図２０Ｄ）。
　＜実施例２７：マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験＞
　本実施例では抗FSTL1 抗体の阻害活性を間葉系幹細胞誘導実験系で確認するとともに、FSTL1 だけではなく、Snail+腫瘍細胞によって誘導されるMSC増加に対するFSTL1 阻害効果も併せて評価した。具体的な操作としては、C57/BL/6 マウス由来骨髄細胞をFSTL1(20ng/mL)または腫瘍細胞の培養上清で刺激する状況下に各抗体(10μg/mL)を添加し、8日間刺激培養後、MSC を高率に含む細胞分画CD45(-)細胞(MSC)と、癌転移に伴って増加するCD45(-)CD146(+)ALCAM(+)細胞(sMSC)を実施例１４と同様にしてフローサイトメトリーで解析し、一培養系当たりの細胞数を計数した。本実施例では、コントロール抗体としてBioLegend社製のマウスイムノグロブリン(#401408,Cone MG1-45)を使用した。

　結果を図２１に示す。図２１Ａに示すように、本実施例のMSC 誘導阻害試験では、#7,#10,#13,#33 がフローサイトメトリー解析で#6-55 と同等あるいはそれ以上の強い阻害効果を示した。その結果、#7,#10,#33が#6-55 と同等あるいはそれ以上の高いMSC 誘導阻害活性を示し、この３クローンについては再現性が確認できた。
　（腫瘍細胞が誘導するMSC 増加に及ぼす影響）
　本実施例では、骨髄細胞を用いたMSC 誘導系において、Snail+腫瘍細胞の培養上清が誘導するMSC 増加を抗FSTL1 抗体で阻害できるか否かを評価した。C57/BL/6マウス由来骨髄細胞にSnail+腫瘍細胞の培養上清と各抗体(10μg/mL)を添加して8 日間刺激培養後、以下の2種の細胞群についてフローサイトメトリーで解析した。
1)MSCを高率に含む一般的な細胞分画『CD45(-)細胞』
2)癌転移に伴って増加する『CD45(-)ALCAM(+)CD271(+)細胞(＝sMSC)』
また、sphere コロニーの形成を、50個以上の細胞数でコロニーを形成しているlargeとそれ以下で形成されているsmallとに区別し、培養8日目に顕微鏡下で観察した。その結果、図２１Ｂ～Ｄに示すように、MSC/sMSCの誘導は顕著に阻害され、幹細胞性を代表する自己複製能を示すsphere コロニーの形成も強く抑制された。つまり、FSTL1 抗体は、癌転移下で増幅されるMSC誘導を阻害することで、in　vivo において抗腫瘍効果を発揮している可能性が示唆された。
　＜実施例２８：マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、Treg 誘導に対する阻害活性をマウスの系で評価した。
　（材料および方法）
　本実施例では実施例１７に準じて実験を行った。具体的には、C57/BL/6 マウス由来の脾臓細胞(2x106)を5ng/ml のFSTL1 で刺激する系に、各抗体を5μg/mL 添加して3 日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画の割合(%)をフローサイトメトリーで解析して、これまで検討してきた#6-55と活性を比較した。
　(結果)
　その結果、図２２に示されるように、新規3 クローンともに対照抗体と比べてTreg 誘導を抑制し、特に、#7 と#10 では#6-55 以上に強い抑制活性を示した。他の実施例でもヒト末梢血細胞を用いたヒト評価系では抗FSTL1抗体のTreg誘導阻害活性をきちんと確認できていたが、本マウス評価系では本実施例でより明確にインパクトある阻害活性を観察したことになる。#7 と#10 はともにFSTL1 の205-228a.a.を認識するクローンであることから、#6-55が認識する148-162a.a.に次いで205-228a.a.もまたFSTL1 活性において重要な領域であることも示された。
　＜実施例２９：新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性を評価した。
　（材料および方法）
　マウスSnail 強制発現メラノーマ細胞株F10-snail+に5μg/ml の抗FSTL1 抗体または対照抗体(抗DNP 抗体)を添加して3日間培養し、各種アッセイで腫瘍細胞の性状変化を解析した。細胞接着能は、Fibronectinコートプレートを用いて2 時間培養後、プレートに接着している細胞数をカウントして評価した。細胞浸潤能は、Matrigel コートtranswell　chamberを用いて4 時間培養後、membrane を透過した細胞数をカウントして評価した。骨転移関連分子発現について、代表的な分子マーカーであるCCR2 とRANKLの発現をフローサイトメトリーで解析した。
　（結果）
　図２３に示されるように、いずれの新規クローン抗体も対照抗体と比べて有意にCCR2 やRANKL の発現や細胞浸潤能を低下させ、細胞接着は増強した。つまり、上皮系の細胞に変化したことを意味する。各活性ともにほぼ#6-55と同等であり、大きな差は見られなかった。
　＜実施例３０：Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのinvivo 薬効比較＞
　抗CTLA4 抗体などの免疫解除薬を腫瘍内に投与することで、癌細胞に有利に作用する腫瘍内の免疫抑制環境を直接改善でき、抗腫瘍免疫を効果的に増強できると注目されている(Clin Cancer Res20:1747,2014)。そこで、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1抗体とのin vivo 薬効を比較した。
　（材料および方法）
1.実験プロトコール
1-1.実験群(n=5)
1.Notreatment(0.9%NaCl as a sham)
2.Control　mouse　IgG　(マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体、aHemaとも記載する)
3.Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
4.　Anti-PD1　mAb　(Clone　9F.1A12,　BioLegend)
5.　Anti-PDL1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
6.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
7.　Naive　(no　tumors,　no　treatment)
1-2.　実験手順
Day　0:　GFP+Snail+B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下3x105＆静脈内2x104）
Day　5:　抗体の腫瘍内投与（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種アッセイ
1-3.薬効評価の指標
　以下を薬効評価の指標として用いた。
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP+腫瘍細胞量）
◆骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果
◆免疫系に及ぼす影響
　（手順）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植５、７、１０、１４日後に測定した。皮下腫瘍の増殖、骨転移および骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果の評価方法は実施例１７と同様に行った。免疫系に及ぼす影響を評価するため、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群であるCD4+T 細胞（CD45+CD3+CD4+;FITC標識抗CD3抗体, PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、腫瘍特異的CD8+T 細胞（CD45+CD8+Tetramer+；BD社製FITC標識抗CD8抗体,MBL社製PE標識Tetramer, Cy5標識抗CD45抗体）、活性化NK 細胞（CD45+NK1.1+NKG2D+；FITC標識抗NK1.1抗体,PE標識抗NKG2D抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、免疫抑制性T 細胞（CD45+CD4+FOXP3+Tregs；eBiosciencess社製FITC標識抗Foxp3抗体,PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体）、MDSCs(CD45+CD11b+Gr1+MDSCs；FITC標識抗CD11b抗体,PE標識抗Gr1抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社)の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。また、皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞（Snail+CD44+tumors；eBiosciencess社製PE標識抗Snail抗体,BD社製Cy5標識抗CD44抗体）の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。
　（結果）
　皮下腫瘍の増殖は、対照抗体投与群に比し、全治療群において有意に抑制され、各治療群間に有意差は認められなかった(図２４－1)。しかし、骨転移や骨髄と脾臓内でのMSC 誘導が、FSTL1 抗体によって有意に抑制されたのに対し、CTLA4 抗体とPDL1抗体では逆に骨転移は増強され、PDL1 抗体では骨髄内のMSC 誘導も阻害されなかった(図２４－1)。骨髄細胞を培養した結果、そこに存在する腫瘍細胞の性状は両群で異なっており、CTLA4抗体投与群では多数のsphere　colony を形成したが、PDL1 抗体投与群では強接着性を示した。
　一方、抗体を投与した皮下腫瘍内に浸潤した免疫細胞群(TIL)を解析したところ、いずれの治療群でもCD4+T 細胞、腫瘍特異的CD8+T 細胞、活性化NK 細胞がともに多数浸潤していた(図２４－２)。特に、CTLA4抗体の腫瘍内投与では、これらの抗腫瘍エフェクター細胞群が極めて顕著に増加することが分かった。興味深いのは、これまで注目されておらず、解析してこなかった活性化NK細胞が、このCTLA4 抗体群と同様にFSTL1 抗体群においても腫瘍特異的CD8+T 細胞以上に多数浸潤していたことである(図２４－２)。NK 細胞は、MSCと同様に自然免疫系の主要なエフェクター細胞であり、MSC による抑制作用を最も受け易い細胞としても報告されている。したがって、おそらくはFSTL1 抗体投与によってMSCが激減したことから、NK 細胞の数や機能が大幅に改善・増強されたと推測される。
　前述のように、抗腫瘍エフェクター細胞群は、いずれの治療群においても増加していたが、免疫抑制性の細胞群を見てみると、既存抗体薬投与群の腫瘍内にはTreg やMDSC が逆に増加しており、特にMDSCの増加については、CTLA4 抗体投与群とPDL1 抗体投与群で顕著に見られた(図２４－3)。また、CTLA4抗体では、脾臓内のTreg 増加も抑制できず、さらには、CD8+Treg が増加していた(図２４－4)。これはおそらく、投与後日数が経過した後のリバウンド効果か、CD4+Tregが減少した部分を他の免疫抑制性細胞群が補おうとするフィードバック現象なのかも知れない。また、腫瘍内環境では、例えば、浸潤した免疫細胞が放出するサイトカインなどによって腫瘍細胞が刺激され、EMT などが誘導されてしまう可能性も考えられるので腫瘍細胞側の変化も確認した。まずは、主要なEMT マーカーであるSnail/CD44発現を解析してみた。その結果、移植に用いた腫瘍細胞はもともとSnail+CD44+ではあるが、皮下腫瘍から分離した腫瘍細胞ではそれらの発現強度がさらに増強されているsubpopulation分画が見られ、治療によって逆にEMT が促進されていることが分かった(図２４－3)。このdenovo　EMT は、MDSC が増加して骨転移も悪化したCTLA4抗体投与群とPDL1 抗体投与群で、特に顕著に見られた。以上の結果から、CTLA4 抗体とPDL1 抗体は、確かに抗腫瘍免疫を増強するメンバーを腫瘍内に動員して腫瘍増殖を抑制できるものの、免疫抑制性細胞群の増加や腫瘍細胞側におけるde　novoEMTなどは抑制できないため、全身性の抗腫瘍免疫までは改善されず、その結果、骨転移は十分に阻害できなかったと推測される。一方、PD1 抗体については、データとしては大きな弱点は見られないが、特に骨転移量やsMSC量については、骨髄細胞数が極めて激減していたことに起因すると考えられる。つまり、PD1 抗体投与群の骨髄細胞を培養すると、CTLA4 抗体投与群と同様に多数の腫瘍細胞がコロニーを形成した。おそらく、実際には骨転移は逆に悪化しており、骨環境内に腫瘍細胞が多量に集積あるいは過剰に増殖したことで、骨髄細胞の増殖は抑制されて細胞数が激減したと推測される。なお、CTLA4 抗体は、全身投与時と比べて今回の腫瘍内投与では、抗腫瘍エフェクター細胞を腫瘍内に効果的に動員することが分かった。一方、FSTL1抗体は、悪い部分を抑制する効果は高いものの、抗腫瘍エフェクター細胞の動員効果はそれほど高くはない。
　＜実施例３１：マウス肺癌モデル＞
　本実施例では、肺癌治療薬として抗FSTL1 抗体を開発することを見据えて、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
1.Isotyoe　mouse　IgG　(aHema)
2.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
3.　正常マウス
1-2.　実験手順
Day　0:　マウス肺癌3LL細胞の移植（皮下1x106 cells＆静脈内5x105 cells）
Day　3:　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　7:　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
1-3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆マウス衰弱に対する改善効果（マウス体重の測定）
◆MSC 増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45-細胞）
◆免疫反応に及ぼす影響など
　(手順)
　皮下腫瘍増殖の測定は移植後3,5,7,10,14日目に測定を行った。体重の測定、MSC増加に対する効果、免疫反応に及ぼす影響は14日目に上記実施例と同様に測定を実施した。
　（結果）
　図２５に示すように、対照抗体投与群と比較して、抗FSTL1 抗体投与によって皮下腫瘍増殖は強く抑制され、5 匹中2 匹のマウスで腫瘍は消失した。本モデルでは、いずれの臓器にも腫瘍の転移は肉眼的に観察されない。腫瘍移植14日後、腫瘍移植後早期にも関わらず、これまで用いてきた骨転移モデルと同様に歩行もできないほど著しく衰弱した。しかし、抗FSTL1 抗体投与群では、体重減少や痩せ、毛羽立ちなどは一切観察されず、全マウスが元気であった。
　他方、腫瘍内浸潤細胞や骨髄細胞、脾臓細胞について、MSC をはじめ、Treg やMDSC など様々な免疫細胞を解析した。しかし、唯一大きな変化が見られたのは骨転移モデルで注目している癌転移関連sMSCであるCD45-ALCAM+細胞であった。本モデルでは骨転移を生じないことを確認しているが、なぜか骨髄内にのみsMSCが増加し、それが抗FSTL1 抗体投与によって減少した。3LL 細胞はSnail を高発現していることも判明し、これがsMSC 増加を招いたと推測される。
　以上の結果から、3LL などのように「Snail」や「sMSC」などを共通項とする癌種では
、FSTL1 阻害治療が有効であることが改めて提示され、肺癌は臨床治療でもFSTL1抗体投
与の対象癌種になり得ると期待される。
　＜実施例３２：抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価＞
　本実施例では、in vitro 薬効スクリーニングで有効性を確認した新規クローン抗体4 種(#7,#10,#13,#33)について、これまで用いてきた#6-55を陽性対照として用いてin　vivo治療効果を比較評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
ControlIgG (anti-DNP mAb)
#6-55
#7
#10
#13
#33
1-2.　実験手順
Day　0:GFP+F10-snail+腫瘍細胞の移植（皮下3x105cells＆静脈内2x104 cells）
Day　4:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-1
Day　7:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-2
1-3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖の抑制
◆マウス生存期間の延長
　（手順）
　皮下腫瘍の測定は腫瘍細胞移植4, 7, 10, 14, 17, 20, 23日後に実施した。
　（結果）
　図２６に示すように、皮下腫瘍増殖は、#13 を除く全てのクローンが#6-55 と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な抑制活性を示し、#6-55 との間に有意差は見られなかった。一方、図２７に示すように、マウス生存期間については、いずれのクローンも#6-55と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な延命効果を示し、特に、#10 と#33 は#6-55 以上の高い治療効果を示した。なお、#6-55ではｎ＝１０で行った試験でも統計学的有意が12日目においてｐ＜０．００１のレベルで示されている。以下に、P 値を基にまとめた各クローン活性順位を示す。
皮下腫瘍増殖抑制効果：
#7＝#10＞#6-55＞＞#33＞＞#13
マウス延命効果：
#33＝#10＞#6-55＞#13＞#7
以上の結果を総合的に評価すると、『#10』が#6-55 を上回る高い抗腫瘍活性を有している可能性が示された。
　データは示さないが、FSTL1 阻害による抗腫瘍免疫反応には、CD4+細胞、CD8+細胞、NK細胞と幅広い免疫細胞が関与しているが、特に、細胞障害活性を示すCD8+細胞とNK細胞は必須の役割を果たしていることも確認している。一般的な免疫療法では、抗腫瘍エフェクター細胞は主にCD8+T 細胞であり、NK は担癌初期にのみ関与する重要性の低い細胞群であることが多く、Tregなどを含むCD4+T 細胞はむしろ除去した方が治療効果はさらに増強されることなどが示されている。一方、本発明のFSTL1 阻害治療では、CD8+細胞に限らず様々な免疫細胞を動員して抗腫瘍効果を発揮するようである。これは、FSTL1ならびにFSTL1 が作用して増幅するMSC は、癌関連異常免疫機構の最上流キー因子であり、FSTL1 阻害によって、MSCをはじめ、その下流で負に制御される様々な免疫反応を一斉に抗腫瘍方向へ転じさせた結果と考えられる。つまり、開発当初からのコンセプトを再確認でき、本発明の抗FSTL1抗体は、従来の免疫修飾薬とは作用機序が大きく異なり、宿主免疫全体を根底から改善して適切に賦活化できる新たな癌治療薬となり得ると期待される。
　すなわち、FSTL1阻害により、MSC分化誘導阻害が起こり、免疫抑制性細胞群（MDSC,Treg）阻害が起こることで、抗腫瘍免疫細胞群の活性化が起こると予想される。本実施例において、最後の段階まで達成し得ることが確認され、ＦＳＴＬ１を抑制することで一般に、抗体で示される効果と同様の効果が抑制剤によって達成されることが期待される。
　＜実施例３３：マウスキメラの特徴づけ＞
　本実施例では、製造したマウスキメラ抗体のヒトFSTL１抗原に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)に Mouse Antibody CaptureKit（GE Healthcare、 BR-1008-38）を用いてマウスキメラ抗体を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacore T-200(GE Healthcare) によって算出した。
　（結果）
　まず、ヒトFSTL1濃度を10 μg/mlに固定し、取得抗体の網羅的な活性比較を行った（表３３－１、図２８）。 
　図２８の縦軸は抗体に対する抗原の結合量、横軸は抗体に対する抗原の解離量を示す。抗原の結合量が高く、解離量が低いほど親和性が示唆される（図の左上に位置するほど親和性が高い）。次に、図２８の中で親和性の高いと想定されるクローン#6-55、#7-34および#13について、抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD値を算出した(表３５－２)。結果、表面プラズモン共鳴を用いた測定系でも、クローン#6-55、#7-34および#13を含め、＃７、＃１０、＃３３等が強い親和性を有することが示された。
　（表３３－１）マウスキメラ抗体に対する抗原の結合量および解離量
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　（表３３－２）マウスキメラ抗体のＫＤ値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　＜実施例３４：ヒト化抗体の開発および親和性測定＞
　＜ヒト化抗体の親和性：Biacore T-200 による測定＞ 
　本実施例では、ヒト化抗体を開発し、開発した抗体のヒトFSTL1に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)にHuman Antibody Capture Kit（GEHealthcare、 BR-1008-38）を用いて、9種のIgG1型ヒト化#6-55を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacoreT-200 (GE Healthcare) によって算出した。抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD 値を算出した(表３４－１)。9種のIgG1型ヒト化#6-55の中で、KD 値が高かった「H（２）‐L（１）」の組み合わせのクローンをリード抗体に選んだ。
（表３４－１）表．ヒト化6-55抗体（IgG1型）のH鎖とL鎖の組み合わせによる親和性（KD値）比較
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　＜ヒト化抗体の作製＞
　松田らのMolecular Immunology 43(2006)634-642 の報告に基づき、クローン#6-55のH鎖およびL鎖の可変領域にあるフレーム領域をニワトリ配列からヒト配列に置換した遺伝子を設計し、遺伝子合成を行った。1クローンにつき、H鎖およびL鎖を3種類ずつ設計して合成した（ヒト化H鎖（１）、（２）、（３）、ヒト化L鎖（１）、（２）、（３）；なお、Ｈ鎖（１）はＨ（１）やＨ１等と記載されることもあるがいずれも同じクローンを指すことが理解される。Ｈ鎖（２）、Ｈ鎖（３）、Ｌ鎖（１）、（２）、（３）も同様である。）。Ｈ（１）重鎖の全長配列は、IgG1型が配列番号１９２および１９３（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号１９８および１９９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号１９４および１９５（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号２００および２０１（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号１９６および１９７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号２０２および２０３（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号２０４および２０５（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号２４６および２４７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号２４８および２４９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。合成した可変領域の遺伝子をPCRによって増幅した後、制限酵素処理を行い、ニワトリ抗体のリーダー配列およびヒトIgG1の定常領域が組込まれたL鎖またはH鎖発現カセットベクター（制限酵素処理されたベクター）に導入した。構築した各クローンのH鎖（１）～（３）およびL鎖（１）～（３）の発現ベクターの合計9種類の組み合わせをHEK293細胞に導入し、培養上清からProtein A Sepharose を用いてヒト化抗体の精製を行った。精製したIgG1型ヒト化抗体のヒトFSTL1に対する結合活性を確認するためにELISAを行った結果、いずれのクローンも一定程度の結合活性が確認できた(図２９)。このうち、Ｈ（２）－Ｌ（１）のヒト化クローンが、他のクローンに比べて、１桁高い数値を示した（表３４－１参照）ことから、次の実験は、このクローンについて行った。
　＜ヒト化抗体の結合活性：ELISA＞ 
　IｇG1型ヒト化#6-55H鎖（２）＋L鎖（１）の精製抗体のヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって確かめた(図３０）。図３０の結果から、本発明の抗体は、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性は同様であり、ヒトFSTL1に対する活性が保有されていることが確認できた。
　以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
［産業上の利用可能性］
　免疫抑制等の免疫破綻の解除によるがんの予防および治療剤、および転移、特に骨転移を抑制する技術が提供され、がん治療および予防に関連する技術に関与する産業（試薬、製薬等）において利用可能な技術が提供される。
［配列表フリーテキスト］
配列番号１：ヒトＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号２：ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号３：マウスＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号４：マウスＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号５：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号６：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号９：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号１０：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号１１：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号１２：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号１３：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号１４：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号１５：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号１６：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号１７：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号１８：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号１９：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２０：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２１：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２２：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２４：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２５：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２６：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２７：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２８：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２９：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号３０：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３１：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号３２：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３３：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号３４：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３５：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号３６：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３７：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号３８：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３９：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号４０：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号４１：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号４２：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号４３：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号４４：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号４５：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号４６：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号４７：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号４８：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号４９：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５０：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５１：抗体クローン＃７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５２：抗体クローン＃７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５３：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５４：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５５：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５６：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５７：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５８：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５９：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号６０：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号６１：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号６２：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号６３：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号６４：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号６５：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号６６：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号６７：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号６８：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号６９：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号７０：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号７１：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号７２：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配（赤色）を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号７３：MCS配列
配列番号７４：MCS配列（相補鎖）
配列番号７５：挿入用の配列
配列番号７６：挿入用の配列
配列番号７７：Δ21-53　(Forward　primer)
配列番号７８：Δ21-53(Reverse　primer)
配列番号７９：Δ100-140(Forward　primer)
配列番号８０：Δ100-140(Reverse　primer)
配列番号８１：Δ148-170(Forward　primer)
配列番号８２：Δ148-170(Reverse　primer)
配列番号８３：Δ181-190(Forward　primer)
配列番号８４：Δ181-190(Reverse　primer)
配列番号８５：Δ193-228(Forward　primer)
配列番号８６：Δ193-228(Reverse　primer)
配列番号８７：Δ233-289(Forward　primer)
配列番号８８：Δ233-289(Reverse　primer)
配列番号８９：Δ148-154(Forward　primer)
配列番号９０：Δ148-154(Reverse　primer)
配列番号９１：Δ155-162(Forward　primer)
配列番号９２：Δ155-162(Reverse　primer)
配列番号９３：Δ163-170(Forward　primer)
配列番号９４：Δ163-170(Reverse　primer)
配列番号９５：抗体クローン＃５－２の軽鎖核酸全長配列
配列番号９６：抗体クローン＃５－２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号９７：抗体クローン＃５－２の重鎖核酸全長配列
配列番号９８：抗体クローン＃５－２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号９９：抗体クローン＃５－３の軽鎖核酸全長配列
配列番号１００：抗体クローン＃５－３軽鎖のアミノ酸全長配列
配列番号１０１：抗体クローン＃５－３の重鎖核酸全長配列
配列番号１０２：抗体クローン＃５－３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１０３：抗体クローン＃５－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号１０４：抗体クローン＃５－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１０５：抗体クローン＃５－８の重鎖核酸全長配列
配列番号１０６：抗体クローン＃５－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１０７：抗体クローン＃５－１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号１０８：抗体クローン＃５－１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１０９：抗体クローン＃５－１０の重鎖核酸全長配列
配列番号１１０：抗体クローン＃５－１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１１１：抗体クローン＃５－４３の軽鎖核酸全長配列
配列番号１１２：抗体クローン＃５－４３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１１３：抗体クローン＃５－４３の重鎖核酸全長配列
配列番号１１４：抗体クローン＃５－４３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１１５：抗体クローン＃６－５５の軽鎖核酸全長配列
配列番号１１６：抗体クローン＃６－５５の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１１７：抗体クローン＃６－５５の核酸全長配列
配列番号１１８：抗体クローン＃６－５５のアミノ酸全長配列
配列番号１１９：抗体クローン＃７－３４の軽鎖核酸全長配列
配列番号１２０：抗体クローン＃７－３４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１２１：抗体クローン＃７－３４の重鎖核酸全長配列
配列番号１２２：抗体クローン＃７－３４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１２３：抗体クローン＃８－１の軽鎖核酸全長配列
配列番号１２４：抗体クローン＃８－１の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１２５：抗体クローン＃８－１の重鎖核酸全長配列
配列番号１２６：抗体クローン＃８－１の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１２７：抗体クローン＃８－４の軽鎖核酸全長配列
配列番号１２８：抗体クローン＃８－４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１２９：抗体クローン＃８－４の重鎖核酸全長配列
配列番号１３０：抗体クローン＃８－４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１３１：抗体クローン＃８－７の軽鎖核酸全長配列
配列番号１３２：抗体クローン＃８－７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１３３：抗体クローン＃８－７の重鎖核酸全長配列
配列番号１３４：抗体クローン＃８－７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１３５：抗体クローン＃８－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号１３６：抗体クローン＃８－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１３７：抗体クローン＃８－８の重鎖核酸全長配列
配列番号１３８：抗体クローン＃８－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１３９：抗体クローン＃７の軽鎖核酸全長配列
配列番号１４０：抗体クローン＃７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１４１：抗体クローン＃７の重鎖核酸全長配列
配列番号１４２：抗体クローン＃７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１４３：抗体クローン＃１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号１４４：抗体クローン＃１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１４５：抗体クローン＃１０の重鎖核酸全長配列
配列番号１４６：抗体クローン＃１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１４７：抗体クローン＃１３の軽鎖核酸全長配列
配列番号１４８：抗体クローン＃１３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１４９：抗体クローン＃１３の重鎖核酸全長配列
配列番号１５０：抗体クローン＃１３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１５１：抗体クローン＃２２の軽鎖核酸全長配列
配列番号１５２：抗体クローン＃２２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１５３：抗体クローン＃２２の重鎖核酸全長配列
配列番号１５４：抗体クローン＃２２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１５５：抗体クローン＃３３の軽鎖核酸全長配列
配列番号１５６：抗体クローン＃３３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号１５７：抗体クローン＃３３の重鎖核酸全長配列
配列番号１５８：抗体クローン＃３３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号１５９：Novoprotein社のFSTL１のアミノ酸配列
配列番号１６０：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号１６１：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号１６２：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号１６３：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号１６４：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号１６５：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号１６６：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号１６７：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号１６８：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号１６９：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号１７０：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号１７１：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号１７２：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号１７３：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号１７４：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号１７５：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号１７６：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号１７７：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号１７８：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号１７９：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号１８０：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号１８１：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号１８２：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号１８３：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号１８４：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号１８５：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号１８６：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号１８７：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号１８８：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号１８９：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号１９０：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号１９１：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号１９２：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号１９３：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号１９４：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号１９５：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号１９６：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号１９７：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号１９８：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号１９９：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号２００：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号２０１：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号２０２：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号２０３：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号２０４：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長核酸配列
配列番号２０５：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号２０６：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号２０７：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号２０８：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号２０９：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号２１０：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号２１１：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号２１２：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号２１３：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号２１４：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２の代替アミノ酸配列
配列番号２１５：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３の代替アミノ酸配列
配列番号２１６：Δ193-204(Forward　primer)
配列番号２１７：Δ193-204(Reverse　primer)
配列番号２１８：Δ205-216(Forward　primer)
配列番号２１９：Δ205-216(Reverse　primer)
配列番号２２０：Δ217-228(Forward　primer)
配列番号２２１：Δ217-228(Reverse　primer)
配列番号２２２：Δ233-251(Forward　primer)
配列番号２２３：Δ233-251(Reverse　primer)
配列番号２２４：Δ252-270(Forward　primer)
配列番号２２５：Δ252-270(Reverse　primer)
配列番号２２６：Δ271-289(Forward　primer)
配列番号２２７：Δ271-289(Reverse　primer)
配列番号２２８：Δ48-100(Forward　primer)
配列番号２２９：Δ48-100(Reverse　primer)
配列番号２３０：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号２３１：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号２３２：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号２３３：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号２３４：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号２３５：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号２３６：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号２３７：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号２３８：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号２３９：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号２４０：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号２４１：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号２４２：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号２４３：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号２４４：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号２４５：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号２４６：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長核酸配列
配列番号２４７：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号２４８：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長核酸配列
配列番号２４９：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長アミノ酸配列
＜ＰＡＲＴ２＞
［発明の名称］ＦＳＴＬ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤の併用剤
［技術分野］
　本発明は、悪性腫瘍の治療併用薬等に関する。
［背景技術］
　癌が悪化する原因として免疫抑制が知られるようになった。免疫抑制を解除すると癌の効果的な治療につながるとして開発が進められている。
　特許文献１では、免疫抑制解除に関する分子の報告がなされた。FSTL1についてはある程度研究が進んでいるが（非特許文献１および２）、その機能は不明な点がまだまだ多い。
　免疫抑制解除については、いまだ発展途上であり、癌患者の生体内には、癌を攻撃して排除しようとする宿主免疫が存在するが、癌細胞の側でも、宿主免疫の監視から逃れようとするシステムを備えていることが知られており、例えば、癌細胞の存在下で制御性Ｔ細胞を除去すると、癌細胞に対する免疫反応が変化することがin　vitroとin　vivoで示されている（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）。また、胃癌（非特許文献４＝Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003，非特許文献５＝Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003参照）、直腸癌（非特許文献６＝Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999参照）、膵臓癌（非特許文献７＝Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002，８＝Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003参　照）、肺癌（非特許文献９＝Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001参照）、グリオーマ（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）において、制御性Ｔ細胞が増加することから、癌細胞による免疫回避システムに制御性Ｔ細胞が関与していると考えられている。しかし、そのメカニズムは明らかでなく、制御性Ｔ細胞由来のサイトカインがどのように貢献しているのか、未だに議論がある（非特許文献３参照）。
　さらに、制御性Ｔ細胞の欠損は重篤な自己免疫疾患を引き起こす（非特許文献１０＝Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001参照）ことから、自己免疫と癌免疫には共通のメカニズムが存在することと考えられている（非特許文献１１＝Turk　et　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002参照）。このように、制御性Ｔ細胞は、免疫反応の抑制を通じ、癌細胞に対する免疫抑制だけでなく、自己免疫やアレルギー反応のような過剰免疫反応に関与していることが知られている（非特許文献１２＝Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007参照）。
　このような背景から、現在開発されている免疫抑制解除薬は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するようにデザインされているため、免疫系全体を修飾するためには、それらを併用せざるを得ないのが現状で、実際にはあまり有効ではないとされている。
［先行技術文献］
［特許文献］
　　［特許文献１］国際公開公報WO2009/028411
［非特許文献］
　　［非特許文献１］Cancer　Research　73(20);　6185-93,　2013
　　［非特許文献２］OncoImmunology　2:11,　e26528,　2013
　　［非特許文献３］Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006
　　［非特許文献４］Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003
　　［非特許文献５］Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003
　　［非特許文献６］Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999
　　［非特許文献７］Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002
　　［非特許文献８］Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003
　　［非特許文献９］Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001
　　［非特許文献１０］Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001
　　［非特許文献１１］Turk　et　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002
　　［非特許文献１２］Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007
［発明の概要］
［課題を解決するための手段］
　本発明者らは鋭意検討した結果、ＦＳＴＬ１が免疫抑制解除のためのより有望な標的であり、ＦＳＴＬ１の活性阻害が癌の悪化の一因と考えられる免疫抑制を誘導する癌関連間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の誘導や増殖、さらに、癌細胞の転移性、特に骨転移性の獲得に対しても効果があり、癌を排除する上で顕著な効果があることを突き止め、本発明を完成させた。本発明において、ＦＳＴＬ１は、制御性Ｔ細胞や制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞などの免疫抑制性細胞を誘導するＭＳＣを誘導することができることが見出された。それゆえ、この上流を阻害することで、免疫抑制機序全体を一斉に解除できる可能性があり、効果的な抗癌剤としての利用価値があることを見出した。したがって、特に、本発明は、「免疫抑制または免疫不全等の免疫破綻を誘導するＭＳＣの阻害」および「癌細胞の転移性阻害」の両方によって、従来の方法よりも効果的に生体内から癌を排除できると期待される点が注目されるべきものである。この知見に基づいて本発明者らはさらに開発を続けさらに抗ＦＳＴＬ１抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体とを組み合わせることによって予想外に顕著な治療効果があることを見出し本発明を完成させた。
　したがって、本発明は以下を提供する
（１）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物との組み合わせ物。
（２）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号２５０（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１７０位、１９３～２２８位、および２３３～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、項目１に記載の組合せ物。
（３）前記抗体は抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目１に記載の組合せ物。
（４）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目１～３のいずれか１項に記載の組合せ物。
（５）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号３６５；重鎖：配列番号３６７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３６９；重鎖：配列番号３７１）、＃８－１（軽鎖：配列番号３７３；重鎖：配列番号３７５）、＃７（軽鎖：配列番号３８９；重鎖：配列番号３９１）、＃１３（軽鎖：配列番号３９７；重鎖：配列番号３９９）および＃３３（軽鎖：配列番号４０５；重鎖：配列番号４０７）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目１～４のいずれか１項に記載の組合せ物。
（６）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、PD-L1とPD-1の結合阻害能を有する、項目１～５のいずれか１項に記載の組合せ物。
（７）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone　10F.9G2の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目１～６のいずれか１項に記載の組合せ物。
（８）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone　10F.9G2の可変領域の全長を含む、項目１～７のいずれか１項に記載の組合せ物。
（９）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone　10F.9G2の全長またはそのヒト化配列を含む、項目１～８のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１０）項目１～９のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
（１１）項目１～９のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
（１２）項目１～９のいずれか１項に記載の組合せ物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤。
（１３）項目１～９のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
（１４）項目１～９のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
（１５）前記転移は、骨転移または肺転移を含む、項目１４に記載の阻害剤。
（１６）項目１～９のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
（１７）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目１６に記載の阻害剤。
（１８）前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、項目１６に記載の阻害剤。
（１９）項目１～９のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
（２０）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目１９に記載の阻害剤。
（２１）前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目１６に記載の阻害剤。
（２２）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
（２２Ａ）前記抗がん剤は、項目１～２１のいずれか１項に記載の１つ以上の特徴を含む、項目２２に記載の抗がん剤。
（２３）抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
（２３Ａ）前記抗がん剤は、項目１～２１のいずれか１項に記載の１つ以上の特徴を含む、項目２３に記載の抗がん剤。
　本発明は以下をも提供する。
（Ａ１）ＦＳＴＬ１抑制剤とＰＤ－Ｌ１抑制剤との組み合わせ物。
（Ａ２）前記ＦＳＴＬ１抑制剤および前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は、それぞれ独立して、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される
、項目Ａ１に記載の組み合わせ物。
（Ａ３）前記ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である、項目Ａ１またはＡ２に記載の組合せ物。
（Ａ４）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物との組み合わせ物。
（Ａ５）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号２５０（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位から１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、項目Ａ３またはＡ４に記載の組合せ物。
（Ａ６）前記抗体は抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目Ａ３～Ａ５のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ７）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目Ａ３～Ａ６のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ８）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号３６５；重鎖：配列番号３６７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３６９；重鎖：配列番号３７１）、＃８－１（軽鎖：配列番号３７３；重鎖：配列番号３７５）、＃７（軽鎖：配列番号３８９；重鎖：配列番号３９１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３９７；重鎖：配列番号３９９）および＃３３（軽鎖：配列番号４０５；重鎖：配列番号４０７）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目Ａ３～Ａ７のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ９）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体である、項目Ａ３～Ａ８のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ１０）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４１８、４２０、４２２および４２４）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４３４、４３６、４３８および４４０）を有する、項目Ａ３～９のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ１１）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、PD-L1とPD-1の結合阻害能を有する、項目Ａ３～Ａ１０
のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ１２）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目Ａ３～Ａ１１のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ１３）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の可変領域の全長を含む、項目Ａ３～Ａ１２のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ１４）抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の全長またはそのヒト化配列を含む、項目Ａ３～Ａ１３のいずれか１項に記載の組合せ物。
（Ａ１５）項目Ａ１～Ａ１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
（Ａ１６）項目Ａ１～Ａ１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
（Ａ１７）項目Ａ１～Ａ１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤。
（Ａ１８）項目Ａ１～Ａ１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
（Ａ１９）項目Ａ１～Ａ１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
（Ａ２０）前記転移は、骨転移または肺転移を含む、項目Ａ１９に記載の阻害剤。
（Ａ２１）項目Ａ１～Ａ１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
（Ａ２２）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目Ａ２１に記載の阻害剤。
（Ａ２３）前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、項目Ａ２１またはＡ２２に記載の阻害剤。
（Ａ２４）項目Ａ１～Ａ１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
（Ａ２５）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目Ａ２４に記載の阻害剤。
（Ａ２６）前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目Ａ２４またはＡ２５に記載の阻害剤。
（Ａ２７）ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤はＰＤ－Ｌ１抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
（Ａ２８）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
（Ａ２９）ＰＤ－Ｌ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＰＤ－Ｌ１抑制剤はＦＳＴＬ抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
（Ａ３０）抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
　本発明において、上述した１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解することにより、当業者に認識される。
［発明の効果］
　本発明は、ＦＳＴＬ１の阻害によって、癌細胞に作用して直接的に、あるいは、免疫を抑制する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）や骨髄由来免疫抑制性細胞（ＭＤＳＣ）等の免疫抑制性または免疫不全性の細胞の分化誘導、増殖、および／または免疫抑制活性または免疫不全活性の増強を促進する間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の増殖および分化誘導を抑制して間接的に、癌細胞の転移を効果的に抑制し、抑制困難と考えられている癌転移、特に、有効な治療法が確立されていない骨転移をも効果的に抑制する。また、骨転移モデルだけに限らず、種々の動物がんモデルにおいても、Ｔｒｅｇの分化誘導、腫瘍の増殖、転移、衰弱による体重減少などが抑制される。このように、本発明は、多局面にわたり有効な癌治療薬を提供する。また、免疫抑制または免疫不全も従来のものに比べて一斉に解除できることから、本発明は、広範囲の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤をも提供する。本発明の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するものではないため、従来の免疫抑制解除剤の制約から広く解放され、疲弊Ｔ細胞に対する効果もあることから、免疫不全解除効果もあり、免疫破綻を解除する免疫破綻解除剤としても有用である。本発明は、これらのFSTL1の阻害についての効果について、ＰＤ－Ｌ１の阻害とを組み合わせることによってさらに顕著な効果を奏することを見出した。詳細に述べると、ＦＳＴＬ１の阻害と、ＰＤ－Ｌ１の阻害によって、予想外にも、相乗効果が示され、抗腫瘍効果が増強され、５匹中２匹では、皮下腫瘍が消失するという相乗効果以上の効果が示された。
［図面の簡単な説明］
　　［図３１］図３１は、本発明の抗体についてのＦＳＴＬ１に対する結合活性を示すグラフである（実施例２）。図３１Ａは、初期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。白ひし形がクローン＃５－２、×がクローン＃５－４、黒三角がクローン＃５－８、白丸がクローン＃５－１０、白四角がクローン＃５－４３、白三角がクローン＃６－５５、黒丸がクローン＃７－３４を示し、黒四角がコントロールである抗ジニトロフェニル（ＤＮＰ）抗体を示す。結合活性の強さは＃５－１０、＃６－５５、＃７－３４＞＃５－３＞＃５－８＞＃５－４３であった。図３１Ｂはマウスとヒトとの間の交差反応性を調査したものである。図３１Ａで示した抗体の内、スクリーニングの際にマウスFSTL1にも反応性を示したクローンの結合活性を評価したものである。左にヒトFSTL1に対する結合活性を示し、右にマウスFSTL１に対する結合活性を示す。＃6-55および＃7-34ともヒトおよびマウスFSTL1にも強い結合活性を示した。図３１では、抗体濃度は1000　ng/mlから希釈した。図３２以降に示す実験では濃度をさらに希釈して実験を行った。
　　［図３２］図３２は、中期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す（実施例２）。白四角はクローン＃６－５５、白三角はクローン＃８－１、黒丸はクローン＃８－４、黒三角はクローン＃８－７、白ひし形はクローン＃８－８を示す。比較として＃6-55と共にアッセイを行っている。結合活性の強さはクローン＃６－５５、＃８－１、＃８－７＞＃８－４＞＃８－８であった。＊図３２における抗体濃度は125　ng/mlから希釈した。
　　［図３３］図３３は、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローンの結合活性を示すグラフである（実施例２）。図３３Aの右側と左側、図３３Bの右側と左側はそれぞれ同時に評価したものであるが、クローン数が多いために図の見易さを重視して二つに図を分けたものである。図３３Aは、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）も含め、ヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものである。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。ヒトFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１３＞＃８－１、＃１０＞＃８－４＞＃７、＃３３＞＃５－８＞＃２２であった。抗DNP抗体は結合活性が観察されなかった。図３３Bは、同上のクローンのマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。マウスFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１０、＃１３＞＃２２＞＃７＞＃３３＞＃８－１であった。＃8-1が若干結合活性を示している。＃５－８、＃８－４、抗DNP抗体は全く結合活性を示さなかった。図３３における抗体濃度は100ng/mlから希釈した。これらELISAによる結合活性の結果とin　vitro評価を元に、in　vivo評価に供試する有望なクローンを絞り込んだ（＃６－５５、＃７－３４、＃８－１）。更に新たなパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）もin　vivo評価の対象とした。
　　［図３４］図３４は、欠損変異体（デリションミュータント）および推定エピトープを示す（実施例３）。図３４の上段はヒトFSTL1の模式図と欠損部位の位置を示す。これらヒトFSTL1の欠損体を抗原に用いたELISAにより、各クローンのエピトープの推定箇所を特定した。図３４の下段は、取得したクローンと特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の推定エピトープとの対比を表に示す。さらにヒトおよびマウスに交差反応性を示すクローン（強い結合活性；○、弱い結合活性；△）を記載した。結合活性の強いまたは弱いの基準は、１２．５ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトおよびマウスの両方に結合活性がみられるものを「強い」と分類し、それより高い濃度でヒトおよびマウスの両方に初めて結合活性がみられるものを「弱い」とした。
　　［図３５］図３５は、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞（MSC)および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例６～７）。図３５Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例６）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。その中でもクローン＃５－３、＃５－８、＃７－３４がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。図３５Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例７）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンが阻害活性を示した。特にクローン＃５－３、＃５－８がより高い阻害活性を示している。
　　［図３６－１］図３６もまた、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例８～１１）。図３６Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例８；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃５－４３、＃６－５５、＃８－１、＃８－８で阻害活性が認められた。図３６Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例９；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした)。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLおよびCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃６－５５がより高い阻害活性を示している。
　　［図３６－２］図３６Cは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1における　RANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１０）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、いずれの抗体クローンも阻害活性を示した。特に、クローン＃５－２、＃６－５５、＃８－４、＃８－７がより高い阻害活性を示した。図３６Dは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す。ここでは、抗体用量依存試験を行った（実施例１１）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、クローン＃６－５５が阻害活性を示したが、抗体の用量依存性は認められなかった。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃６－５５はRANKL陽性細胞とCCR2陽性細胞の両方の細胞誘導を、同時に強く阻害した。
　　［図３７］図３７は、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１２；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlを使用した)。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。特に、クローン＃７－３４、＃５－２、＃６－５５、＃８－７の順で強い阻害活性が認められた。
　　［図３８］図３８は、in　vivo用に製造した抗FSTL1抗体および抗PD-L1抗体の活性評価を示す（実施例１３）。マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、右に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。いずれもコントロール抗体と比べ、これまでの結果と同様に高い阻害活性を示したことから、in　vivo用に製造されたこれらの抗体も妥当な抗体であることが示された。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想されるが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強いことが示された。
　　［図３９］図３９Aは、図３８と同様の試験を別のクローン（各グラフに記載のクローン）によって行った結果を示す（実施例１４）。図３８同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、右端に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、MDSCの誘導に対して阻害活性を示した。中でも、#13、#33はポジティブコントロール(#6‐55)と同等以上の阻害活性を示した。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図３９Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール、続いて抗FSTL１抗体クローンを示す。いずれの抗FSTL1抗体クローンにおいても、FSTL1による脂肪細胞への分化能を有するMSCの分化誘導に対して阻害活性を示した。
　　［図４０］図４０は特許文献１（WO2009／028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体との活性比較を示す（実施例１５～１６）。（A）＃６－５５（マウスキメラ抗体）とR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体（ラット抗体；Ｒ＆Ｄと表示）と
で比較するために用量依存性試験を行い、図３8と同様にFSTL1の作用の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１５）。図４０Aは図３８同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。R&D社製の抗体は＃6-55と同等レベルでFSTL1による各細胞の誘導の阻害活性を示した。用量依存性の効果は認められなかった。各アイソタイプ抗体を基準とすれば、＃６－５５の阻害活性の方がやや優位かと考えられる。図４０Bは脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１６）。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。＃6-55により、脂肪細胞への分化能をもつMSCの誘導が抗体用量依存的に阻害された。他方、R&D社製の抗体は阻害活性を示さなかったことから、＃６－５５の抗体の優位性が認められた。なお、脂肪細胞への分化能は、免疫抑制を誘導する癌関連MSC（図４０Aの中央の細胞にも示されている細胞）の機能の一つである。図４０Aと図４０Bとの比較から以下のことがいえる。すなわち、マウスコントロール抗体（マウス由来タンパク質）を投与した場合と比べて、ラットコントロール抗体という「ラット由来のタンパク質」をマウスの生体内に投与した際に、それ自体の反応が低下していることがわかる（特に４０A中央の図）。これは、マウスの骨髄細胞を使ったための異物に対する免疫反応が若干生じたためと推測されるが、同じ「ラット由来タンパク質」であるR&D社のFSTL1抗体を投与した場合は、本来は、このラットコントロール抗体投与群と比較するのが妥当であるところ、それぞれのコントロールタンパク質に対する『抑制率』を考えると、マウスコントロール抗体投与群に対する6-55の抑制率に比べて、ラットコントロール抗体投与群に対するR&D社のFSTL1抗体の抑制率は小さく、実は、＃6-55の方が優位であることが示唆される。FSTL1によって誘導されたCD45陰性MSCの全てが免疫抑制を引き起こす癌関連MSCではなく、数種類のマーカーや脂肪細胞への分化能などで同定する必要がある。本発明の抗体はFSTL1の作用を阻害することで癌関連MSCの誘導を強く阻害することができると言える。
　　［図４１－１］図４１は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図４１Ａ（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図４１Ｂ（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45陰性細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。両棒グラフについて、上から、処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。図４１Ｃ（マウス個体別腫瘍体積）は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果（皮下に移植した腫瘍増殖が抑制されていること）を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。
　　［図４１－２］図４１は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図４１Ｄは、脾臓内の細胞集団の変化を示す。腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身に修飾／影響を受けることを提示する。左は、ＣＤ４５陰性細胞数を示し脾臓内でもＭＳＣが減少していることを示す。中央は、ＣＤ４陽性Ｆｏｘｐ３陽性Ｔ細胞数を示し、Ｔｒｅｇが減少していることを示す。右はＣＤ８陽性Ｔｉｍ３陽性Ｔ細胞数を示し、疲弊ＣＤ８陽性Ｔ細胞が減少していることを示す。ここで、疲弊とは、機能が低下または不全に陥っている状態を示し、Ｔｉｍ３はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきＣＤ８陽性Ｔ細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。
　　［図４２－１］図４２もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図４２Ａ左（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図４２Ａ中央（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。図４２Ａ右（マウス体重）は体重変化に対する効果（骨転移によりマウスが衰弱するが、その指標の一つとして体重を計測したところこれが抑制されていることが示されること）を示す。図４２Aの棒グラフについて、上から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す図４２Bの５グラフは、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。被験対象である抗FSTL1抗体3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果が認められた。
　　［図４２－２］図４２もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200μg/mouse=10mg/kg　相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図４２Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図４２Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。下右はCD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　　［図４３］図４３もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１９）。本図では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較が示される。図４３Ａは、各種抗体の腫瘍容積に対する効果を時間経過とともに示す。腫瘍移植８、１１、１５日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１５日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day0でGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を行い、Day　4で抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）を行い、Day8で抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）を行い、Day　15で各種アッセイを行った。図４３Ｂ左は、骨転移に対する効果（GFP陽性細胞数（１０６／マウス））を示し、図４３Ｂ中央は骨髄中ＭＳＣの増加に対する効果（CD４５陰性細胞数（（１０６／マウス））について示す。図４３Ｂ　右は体重変化（体重（ｇ））に対する効果を示す。図４３Ｂはいずれも、上から、処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。対照抗体として、以下の既存の抗体薬を用いた。Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)；Anti-PD-1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)；Anti-PD-L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全て対照抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　　［図４４］図４４もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２０）。本図では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。
図４４Ａは、３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Snail+腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。本実施例では、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価している。図４４Ｂは、肺転移結節数に関する結果を示す。左から、処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体（＃６－５５）は、CT26皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強く抑制し、5匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(対照抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　　［図４５］図４５もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２１）。本図ではマウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day　0に腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）を行い、Day4および7に抗体の腹腔内投与（10mg/kg）を行い、Day　14に薬効評価（皮下腫瘍増殖）を行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　　［図４６］図４６Aもまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２２）。
本図ではマウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。左パネルの２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図４６Bは体重変化に対する効果を示す。
左はコントロール抗体、中央は抗FSTL1抗体、右は腫瘍細胞を投与していない未処置の個体を示す。縦軸は腫瘍体積（ｇ）を示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail強制発現細胞株の親株である。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、体重減少についても抑制活性を示した。
　　［図４７］図４７もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２３）。本図では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示す。２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植３、６、１０日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。FSTL1発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与は対照抗体投与群に比し有意に抑制した。
　　［図４８］図４８もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２４）。本図では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。４つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左端はコントロール抗体、左から２番目は１ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、右から２番目は３ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、そして右端は１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図４６の図の実験と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与は対照抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　　［図４９］図４９は、in vivoにおける併用療法の効果を示す。本図では、抗FSTL1抗体と既存薬との併用療法における薬効評価が示される（実施例２５）。上の６つのグラフは、各種抗体の腫瘍容積に対する効果を時間経過とともに示す。左からコントロール、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）、抗FSTL1抗体（全量１０ｍｇ／ｋｇ）、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）と抗CTLA4抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）と抗PD1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）と抗PD－L1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせを示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１３日目）。Day0でGFP+Snail+B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下5x105＆静脈内1x105）を行い、抗体投与はDay3およびDay 7で行いアッセイは13日目に行った。各線は各個体の腫瘍体積の推移を示す（腫瘍体積（mm３））横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。左下図は、骨転移に対する効果（GFP陽性細胞数（１０６／マウス））を示し、中央下図は骨髄中ＭＳＣの増加に対する効果（CD４５陰性細胞数（（１０６／マウス））について示す。右下は体重変化（体重（ｇ））に対する効果を示す。下図はいずれも、上から、コントロール、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）、抗FSTL1抗体（全量１０ｍｇ／ｋｇ）、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）と抗CTLA4抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）と抗PD1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、抗FSTL1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）と抗PD－L1抗体（半量５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、およびナイーブを示す。Ｓnail+腫瘍骨転移モデルを用いて、免疫抑制解除抗体薬の併用が抗FSTL1抗体の薬効を増強できるか否かを検討した。抗FSTL1抗体は、これまで用いてきた半量の5mg/kg でも有効で、皮下腫瘍の増殖、骨転移、MSC 増殖、マウス体重減少など、検討したいずれの項目においても対照抗体群に比し有意な抑制効果を示した。この5mg/kgの抗FSTL1抗体と一緒に免疫抑制解除抗体薬3 種をそれぞれ同時に投与したところ、抗PD-L1抗体を併用した場合のみ抗FSTL1 抗体の抗腫瘍効果は増強され、5匹中2 匹のマウスの皮下腫瘍が消失した。倍量である10mg/kgの抗FSTL1 抗体を単剤で投与した場合も、抗PD-L1抗体併用投与時とほぼ同等の強い薬効が観察されたが、皮下腫瘍の増殖抑制効果については、抗PD-L1抗体を併用した場合の方が優位であった。抗CTLA4抗体と抗PD1抗体の併用では相乗効果は全く認められず、むしろ抗FSTL1 抗体の薬効を打ち消してしまい、骨転移やMSC 増加を強く抑制することができなかった。
　　［図４９Ｂ］図４９Ｂは、本発明の抗FSTL1抗体（＃６－５５）と、既知の抗FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)とを含む実験系で％CD4+Foxp3＋CTLA+細胞を指標に活性を測定したTreg誘導実験の結果である。◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。
　　［図５０］図５０は、抗FSTL1 抗体の種々の機能を見た結果である。パネルAでは、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響の結果を示す。パネルAの上段は増殖の結果を示し、下段は浸潤の結果を示す。左からPanc1、MIAPaCa、MDA231、Hs294を示す。グラフは、上段では、3日に培養した後の細胞数（×１０３）を示す。下段では、3日間抗体で処理した腫瘍細胞の細胞数を示す。上段では、それぞれのグラフ中上からなにもなし（None）、コントロールＩｇＧ、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。下段ではそれぞれのグラフ中上がコントロールＩｇＧ、下が抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。これらから、Snail＋腫瘍細胞はきわめて転移性の高いことが明らかになった。パネルBでは、FSTL1刺激下における抗FSTL1 抗体の作用を示す。左は増殖能および右は浸潤能を示す。いずれも左から、何も添加していない（None）、左から２番目はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルC～Dでは、Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を示す。Ｃの左からＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤、ＣＣＲ２発現、ＲＡＮＫＬ発現の結果を示す。いずれも左から、Snailを強制発現させていない親株のPanc1細胞（Mock）、左から２番目から右端は抗FSTL1抗体（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルＤでは、マウスメラノーマＢ１６ｔ－Ｆ１０でのＳｎａｉｌトランスフェクタントでの結果を示す。いずれも左から、偽抗体（Mock）、左から２番目から右端はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。
　　［図５１］図５１は、マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験の結果を示す。パネルＡでは、左からＣＤ４５＋ＭＳＣ細胞、右はＣＤ４５＋ＣＤ１４６＋ＡＬＣＡＭ＋ｓＭＳＣを示す。左から、なにもなし、左から２番目から右端はＦＳＴＬ１（２０ｎｇ／ｍｌ）での結果であり、左から２番めから、イムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリンあり、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３のものを示す。パネルＢでは、ＣＤ４５－ＭＳＣ細胞、ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋　ｓＭＳＣ細胞、スフェアコロニー（自己新生能）を示す。左端はＦ１０－ｍｏｃｋを示し、左から２番目から右端はＦ１０－ｓｎａｉｌ＋を示す。左から２番目から順にイムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリン、抗ＦＳＴＬ１抗体での結果を示す。結果は左グラフおよび中グラフは細胞数で示される。スフェアコロニーは、コロニー数を示す。スフェアコロニーは３つあるグラフのうち左は総数、中は大きなコロニー（＞５０細胞）、右は小さなコロニー（１０～５０細胞）を示す。
　　［図５２］図５２は、マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験結果を示す。グラフは、ＣＤ４＋細胞中のFoxp3＋CTLA4+細胞の割合を示す。左端はなにもなし、左から２番目～右端はＦＳＴＬ（５ｎｇ／ｍｌ）の存在下での実験である。左から２番目からそれぞれマウスイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。
　　［図５３］図５３は、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種（＃７、＃１０、＃３３）について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性の評価を示す。左上は細胞接着、右上は細胞浸潤、左下はＣＣＲ２発現、右下はＲＡＮＫＬ発現を示す。それぞれのグラフ中、左からなにもなし、コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。＊は統計学的有意（ｐ＜０．０５）を示す。
　　［図５４－１］図５４（図５４－１～５４－４）は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのin vivo 薬効比較をした結果である。図５４－１は、上段に腫瘍増殖、下段に骨転移、骨髄中のｓＭＳＣ、脾臓中のｓＭＳＣを示す。上段の腫瘍増殖では左から、処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。統計学的有意かどうかはp値を示すことによって表示する。ｘ軸は腫瘍移植後の日数である（なおp値は１４日目の値である）。ｙ軸は腫瘍の容積（ｍｍ３）である。骨転移、２種のｓＭＳＣグラフトも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブ（腫瘍無モデル）を示す。横軸はそれぞれＧＦＰ＋腫瘍細胞の数、ＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数およびＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数を示す。
　　［図５４－２］図５４―２は、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群を示す。左から、CD4+T 細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞）、腫瘍特異的CD8+T細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ８＋テトラマー＋）、活性化NK 細胞（ＣＤ４５＋ＮＫ１．１＋ＮＫＧ２Ｄ＋）を示す。上段は、陽性細胞割合を示し。下段はｍｍ３当たりの細胞数を示す。各々のグラフとも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図５４－３］図５４－３は、図５４－２と同様の実験であり、腫瘍内に浸潤した免疫抑制性T 細胞群ならびに皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞についての結果を示す。左から、CD4+Treg（ＣＤ４５＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）、MDSCs（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋ＭＤＳＣｓ）、EMTを生じている腫瘍細胞（Ｓｎａｉｌ＋ＣＤ４４＋腫瘍）を示し、グラフの説明は図５４－２と同様である。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図５４－４］図５４－４は、脾臓内における免疫細胞群の結果を示す。左から、腫瘍特異的CD8+T 細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋テトラマー＋ＣＴＬｓ）、CD4+Treg（ＣＤ４＋ＣＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ＋Ｔｒｅｇｓ）、CD8+Treg（ＣＤ８＋ＣＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）を示す。グラフは脾臓当たりの細胞数（×１０６で表示）を示す。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図５５］図５５は、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価（腫瘍増殖、体重および骨髄中のｓＭＳＣ数）した結果である。腫瘍増殖では、統計学的有意はｐ値で示す。左はコントロールであり、抗ＦＳＴＬ１抗体は右に示す。横軸は腫瘍移植後の日数であり、縦軸は腫瘍容積（ｍｍ３）を示す。中グラフは動物の体重を示す。左からコントロール、抗体ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。体重はｇで表す。右グラフは骨髄中のｓＭＳＣを示す。左からコントロール、抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋細胞数（×１０６）を示す。
　　［図５６］図５６～図５７は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図５６は、腫瘍移植後の腫瘍容積の変動（ｍｍ３）を示す。左からコントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。いずれもカッコ内にコントロールと比較しての統計学的有意（ｐ値）を示し、＃６－５５との間の統計学的有意は線で結びp値で示す。横軸は腫瘍移植後の日数である。
　　［図５７］図５６～図５７は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図５７は、生存率を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示し縦軸はマウス生存率（ｎ＝５）を示す。コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。＃６－５５は細い黒線、＃７はグレイの破線、＃１０は太い黒の実線、＃１３はグレイの実線、＃３３は黒の濃い破線コントロールイムノグロブリンとの統計学的有意値（ｐ値）を示し、＃６－５５に対する統計学的有意（ｐ値）をカッコ内に示す。
　　［図５８］図５８は、マウスキメラ抗体の親和性データ（BIACOREによる測定）を示す。図は、マウスキメラ抗体に対する抗原結合量および解離量のプロットである。。
　　［図５９］図５９～図６０は、ヒト化抗体のELISA結果を示す。図５９は、ヒト化6-55抗体のH鎖(IgG1型)とL鎖の組み合わせによる結合活性比較を示す。白丸に黒実線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ１、四角に黒実線がＨ２－Ｌ１、白三角に黒実線がＨ３－Ｌ１、黒四角に黒点線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ２、黒三角に黒点線がＨ２－Ｌ２、黒丸に黒点線がＨ３－Ｌ２、灰四角に灰実線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ１、灰三角に灰点線がＨ２－Ｌ１、灰丸に灰実線がＨ３－Ｌ１の結果を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４５０の値を示したものである。Ｈ２－Ｌ１が最良であることが分かった。
　　［図６０］図５９～図６０は、ヒト化抗体のELISA結果を示す。図６０では、本発明の抗体ヒト化＃６－５５Ｈ２－Ｌ１（ＩｇＧ１型）のヒトおよびマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。左がヒトＦＳＴＬ１および右がマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。黒丸はいずれもヒト＃６－５５抗体を示し、白四角がヒト抗ＤＮＰ抗体を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４９０／６３０の値を示したものである。
　　［図６１］図６１は、別クローン(CloneMIH5,BD 社製)の抗PD-L1 抗体を用いて、抗FSTL1抗体との併用効果の再現性を確認した結果である。本図では、抗FSTL1抗体と抗PD-L1抗体との併用療法における薬効評価が示される（実施例３７）。上の４つのグラフは、各種抗体の腫瘍容積に対する効果を時間経過とともに示す。左からコントロール、抗FSTL1抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、抗PD－L1抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、抗FSTL1抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と抗PD－L1抗体（５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせを示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。下パネルは、生存率を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示し縦軸はマウス生存率（ｎ＝５）を示す。コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５（抗体FSTL1抗体）、抗体PD-L1抗体および抗FSTL1抗体と抗PD－L1抗体との組み合わせの結果を示す。コントロールイムノグロブリンとの統計学的有意値（ｐ値）を括弧内に示し、抗体FSTL1抗体に対する統計学的有意（ｐ値）線上に示す。コントロールＩｇＧは、黒色実線で示し、抗ＦＳＴＬ１抗体は濃い黒色実線で示す。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は灰色破線で示し、組み合わせは、右端にあるような太い灰色実線を示す。
　　［図６２］図６２は、Colon26肺転移モデルにおけるFSTL1抗体とPD－L1 抗体との併用効果を示す。上パネルは、左からマウスイムノグロブリン（コントロール）、ラットイムノグロブリン（コントロール）、抗FSTL1抗体、抗PD-L1抗体を単剤同士、および右端では抗FSTL1抗体および抗PD-L1抗体と組み合わせた併用剤での薬効評価が示される（実施例３７、実験２）。縦軸は腫瘍容積を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。下パネルは生存率を示す。縦軸は生存率、横軸は腫瘍移植後の日数を示す。コントロールラットＩｇＧは灰色点線で示し、コントロールマウスＩｇＧは細い黒色実線で示し、抗ＦＳＴＬ１抗体は濃い黒色実線で示す。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は太い灰色実線で示し、組み合わせは、右端にあるような太い灰色破線を示す。
［発明を実施するための形態］
　以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。なお、同様な内容については繰り返しの煩雑を避けるために、適宜説明を省略する。また、本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「a」、「an」、「the」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。従って、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
　最初に本発明において使用される用語および一般的な技術を説明する。
　本明細書において「FSTL1」とは、フォリスタチンに類似するタンパク質であって、アクチビン結合タンパク質であるタンパク質をコードするものであり、フォリスタチン様配列に含まれるFSモジュールを含み、10個の保存システイン残基を有するとされている。関節リウマチに関する自己抗原であると考えられてきたが、最近の知見は、特許文献１（WO2009/028411）に説明されている。NCBIに記載されているFSTL1のアクセッションナンバーは、例えば、NP_009016（NP_009016.1）；NP_032073.2（アミノ酸）、NM_007085（NM_007085.4）；NM_008047.5（ｍRNA）である。FSTL1のアミノ酸配列は、例えば、配列番号２５０または配列番号２５２である。FSTL1mRNAの塩基配列は、例えば、配列番号２５１または配列番号２５３である。FSTL1は、FSTL1活性を有していれば、そのアミノ酸配列は限定されない。したがって、本発明の具体的な目的に合致する限り、特定の配列番号またはアクセッション番号に記載されるアミノ酸配列を有するタンパク質（あるいはそれをコードする核酸）のみならず、機能的に活性なその誘導体、類似体もしくは変異体または機能的に活性なそのフラグメント、またはその相同体、または高ストリンジェンシー条件または低ストリンジェンシー条件下で、このタンパク質をコードする核酸にハイブリダイズする核酸にコードされる変異体もまた、本発明において用いることができることが理解される。
　したがって、FSTL1の代表的なヌクレオチド配列は、
　（a）配列番号２５０または配列番号２５２に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
　（b）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；
　（c）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
　（d）配列番号２５０または配列番号２５２に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
　（e）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
　（f）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
　（g）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ることをいう。
　FSTL1のアミノ酸配列としては、
　（a）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
　（b）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
　（c）配列番号２５０または配列番号２５２に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
　（d）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
　（e）（a）～（d）のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、であり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ること（例えば、抗原として用いられる場合特異的エピトープとして機能し得る領域を含むこと）をいう。配列番号２５０～２５３はリーダー配列を含む前駆体である。配列番号２５１では最初の２０アミノ酸（メチオニンからアラニンまで）および配列番号２５３では最初の１８アミノ酸（メチオニンからグリシンまで）がリーダー配列である。したがって、本発明においてFSTL1といった場合、そのアミノ酸配列は、これらのリーダー配列が削除された後のものをさすことがある
　本発明の関連において、「FSTL1に結合する物質」、「FSTL1（の）結合剤」または「FSTL1相互作用分子」は、少なくとも一時的にFSTL1に結合する分子または物質である。検出目的では好ましくは、結合したことを表示しうる（例えば標識されるか標識可能な状態である）ことが有利であり、治療目的では、さらに治療用薬剤が結合していることが有利である。FSTL1に結合する物質は、例としては、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、siRNA、低分子量分子（LMW）、結合性ペプチド、アプタマー、リボザイムおよびペプチド模倣体（peptidomimetic）等を挙げることができる。FSTL1に結合する物質または「FSTL1相互作用分子は、FSTL1の阻害剤であってもよく、例えばFSTL1に対して向けられる、特にFSTL1の活性部位に対して向けられる、結合性タンパク質または結合性ペプチド、並びにFSTL1遺伝子に対して向けられる核酸も含まれる。FSTL1に対する核酸は、例えばFSTL1遺伝子の発現またはFSTL1の活性を阻害する、二本鎖または一本鎖DNAまたはRNA、あるいはその修飾物または誘導体を指し、そしてアンチセンス核酸、アプタマー、siRNA（低分子干渉RNA）およびリボザイムを含むがこれらに限定されない。本明細書において、FSTL1について「結合タンパク質」または「結合ペプチド」とは、FSTL1に結合する任意のタンパク質またはペプチドを指し、そしてFSTL1に対して指向される抗体（例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体）、抗体フラグメントおよび機能的等価物を含むがこれらに限定されない。
　本明細書において「ＰＤＬ１」または「ＰＤ－Ｌ１」とは、交換可能に用いられ、別名CD274あるいはB7-H1とも呼ばれる４０ｋDaのタイプ１膜貫通タンパク質である。PD-1のリガンドとしても作用することからこの名称がある。NCBIに記載されているPD-L1のアクセッションナンバーは、例えば、ヒトはNP_001254635（アミノ酸）；マウスはNP_068693（アミノ酸）、ヒトはNM_001267706（ｍRNA）；マウスはNM_021893（ｍRNA）である。PD-L1のアミノ酸配列は、例えば、配列番号２５０または配列番号２５２である。PD-L1mRNAの塩基配列は、例えば、配列番号２５１または配列番号２５３である。PD-L1は、PD-L1活性を有していれば、そのアミノ酸配列は限定されない。したがって、本発明の具体的な目的に合致する限り、特定の配列番号またはアクセッション番号に記載されるアミノ酸配列を有するタンパク質（あるいはそれをコードする核酸）のみならず、機能的に活性なその誘導体、類似体もしくは変異体または機能的に活性なそのフラグメント、またはその相同体、または高ストリンジェンシー条件または低ストリンジェンシー条件下で、このタンパク質をコードする核酸にハイブリダイズする核酸にコードされる変異体もまた、本発明において用いることができることが理解される。
　したがって、PD-L1の代表的なヌクレオチド配列は、
　（a）配列番号２５０または配列番号２５２に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
　（b）配列番号２５１または配列番号２３３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；
　（c）配列番号２５１または配列番号２３３に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
　（d）配列番号２５０または配列番号２５２に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
　（e）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
　（f）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
　（g）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、PD-L1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ることをいう。
PD-L1のアミノ酸配列としては、
　（a）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
　（b）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
　（c）配列番号２５０または配列番号２５２に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
　（d）配列番号２５１または配列番号２５３に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
　（e）（a）～（d）のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、であり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、PD-L1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ること（例えば、抗原として用いられる場合特異的エピトープとして機能し得る領域を含むこと）をいう。配列番号２５０～２５３はリーダー配列を含む前駆体である。配列番号２５１および２５３では、いずれも最初の１８アミノ酸（メチオニンからアラニンまで）がリーダー配列である。したがって、本発明においてＰＤ－Ｌ１といった場合、そのアミノ酸配列は、これらのリーダー配列が削除された後のものをさすことがある。
　本発明の関連において、「PD-L1に結合する物質」、「PD-L1（の）結合剤」または「PD-L1相互作用分子」は、少なくとも一時的にPD-L1に結合する分子または物質である。検出目的では好ましくは、結合したことを表示しうる（例えば標識されるか標識可能な状態である）ことが有利であり、治療目的では、さらに治療用薬剤が結合していることが有利である。PD-L1に結合する物質は、例としては、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、siRNA、低分子量分子（LMW）、結合性ペプチド、アプタマー、リボザイムおよびペプチド模倣体（peptidomimetic）等を挙げることができる。PD-L1に結合する物質または「PD-L1相互作用分子は、PD-L1の阻害剤であってもよく、例えばPD-L1に対して向けられる、特にPD-L1の活性部位に対して向けられる、結合性タンパク質または結合性ペプチド、並びにPD-L1遺伝子に対して向けられる核酸も含まれる。PD-L1に対する核酸は、例えばPD-L1遺伝子の発現またはPD-L1の活性を阻害する、二本鎖または一本鎖DNAまたはRNA、あるいはその修飾物または誘導体を指し、そしてアンチセンス核酸、アプタマー、siRNA（低分子干渉RNA）およびリボザイムを含むがこれらに限定されない。本明細書において、PD-L1について「結合タンパク質」または「結合ペプチド」とは、PD-L1に結合する任意のタンパク質またはペプチドを指し、そしてPD-L1に対して指向される抗体（例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体）、抗体フラグメントおよび機能的等価物を含むがこれらに限定されない。
　本明細書で使用される「誘導体」、「類似体」または「変異体」は、好ましくは、限定を意図するものではないが、対象となるタンパク質（例えば、FSTL1またはPD-L1）に実質的に相同な領域を含む分子を含み、このような分子は、種々の実施形態において、同一サイズのアミノ酸配列にわたり、または当該分野で公知のコンピュータ相同性プログラムによってアラインメントを行ってアラインされる配列と比較した際、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％または99％同一であるか、あるいはこのような分子をコードする核酸は、（高度に）ストリンジェントな条件、中程度にストリンジェントな条件、またはストリンジェントでない条件下で、構成要素タンパク質をコードする配列にハイブリダイズ可能である。これは、それぞれ、アミノ酸置換、欠失および付加によって、天然存在タンパク質を改変した産物であり、その誘導体がなお天然存在タンパク質の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示すタンパク質を意味する。例えば、本明細書において記載されあるいは当該分野で公知の適切で利用可能なin　vitroアッセイによって、このようなタンパク質の生物学的機能を調べることも可能である。本明細書で使用される「機能的に活性な」は、本明細書において、本発明のポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体が関連する態様に従って、生物学的活性などの、タンパク質の構造的機能、制御機能、または生化学的機能を有する、ポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体を指す。本発明では、FSTL1またはPD-L1についてヒトが主に論じられるが、ヒト以外の多くの動物がFSTL1またはPD-L1を発現していることが知られているため、これらの動物、特に哺乳動物についても、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　本明細書において「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）が包含される。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の1または2以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基を持つ有機化合物の総称である。本発明の実施形態に係る抗体が「特定のアミノ酸配列」を含むとき、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が化学修飾を受けていてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が塩、または溶媒和物を形成していてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸がL型、またはD型であってもよい。それらのような場合でも、本発明の実施形態に係るタンパク質は、上記「特定のアミノ酸配列」を含むといえる。タンパク質に含まれるアミノ酸が生体内で受ける化学修飾としては、例えば、N末端修飾（例えば、アセチル化、ミリストイル化等）、C末端修飾（例えば、アミド化、グリコシルホスファチジルイノシトール付加等）、または側鎖修飾（例えば、リン酸化、糖鎖付加等）等が知られている。本発明の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」を含む。「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、2’－O－メチル－リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がN3’－P5’ホスホロアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5プロピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5チアゾールウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがC－5プロピニルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（phenoxazine－modified　cytosine）で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、DNA中のリボースが2’－O－プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体およびオリゴヌクレオチド中のリボースが2’－メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、1またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの3番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Batzer　et　al.,　Nucleic　Acid　Res.19:5081(1991);　Ohtsuka　et　al.,　J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985);　Rossolini　et　al.,　Mol.Cell.Probes　8:91-98(1994)）。本明細書において「核酸」はまた、遺伝子、cDNA、mRNA、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換可能に使用される。本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいい、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」をさすことがある。
　本明細書において遺伝子の「相同性」とは、2以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいい、一般に「相同性」を有するとは、同一性または類似性の程度が高いことをいう。従って、ある2つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。2種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。2つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でDNA配列が、代表的には少なくとも50％同一である場合、好ましくは少なくとも70％同一である場合、より好ましくは少なくとも80％、90％、95％、96％、97％、98％または99％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。従って本明細書において「相同体」または「相同遺伝子産物」は、本明細書にさらに記載する複合体のタンパク質構成要素と同じ生物学的機能を発揮する、別の種、好ましくは哺乳動物におけるタンパク質を意味する。こうような相同体はまた、「オルソログ遺伝子産物」とも称されることもある。本発明の目的に合致する限り、このような相同体、相同遺伝子産物、オルソログ遺伝子産物等も用いることができることが理解される。
　アミノ酸は、その一般に公知の3文字記号か、またはIUPAC－IUB Biochemical Nomenclature Commissionにより推奨される1文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された1文字コードにより言及され得る。本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるBLASTを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、NCBIのBLAST2.2.28（2013.4.2発行）を用いて行うことができる。本明細書における同一性の値は通常は上記BLASTを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメータの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。類似性は、同一性に加え、類似のアミノ酸についても計算に入れた数値である。
　本発明の一実施形態において「数個」は、例えば、10、8、6、5、4、3、または2個であってもよく、それらいずれかの値以下であってもよい。1または数個のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入、または他のアミノ酸による置換を受けたポリペプチドが、その生物学的活性を維持することは知られている（Market　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.1984　Sep;81(18):　5662-5666.、Zoller　et　al.,Nucleic　Acids　Res.　1982　Oct　25;10(20):　6487-6500.、Wang　et　al.,　Science.　1984　Jun　29;224(4656):　1431-1433.）。欠失等がなされた抗体は、例えば、部位特異的変異導入法、ランダム変異導入法、または抗体ファージライブラリを用いたバイオパニング等によって作製できる。部位特異的変異導入法としては、例えばKOD-Plus-　Mutagenesis　Kit　(TOYOBO　CO.,　LTD.)を使用できる。欠失等を導入した変異型抗体から、野生型と同様の活性のある抗体を選択することは、FACS解析やELISA等の各種キャラクタリゼーションを行うことで可能である。
　本発明の一実施形態において「90％以上」は、例えば、90、95、96、97、98、99、または100％以上であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。上記「相同性」は、2つもしくは複数間のアミノ酸配列において相同なアミノ酸数の割合を、当該技術分野で公知の方法に従って算定してもよい。割合を算定する前には、比較するアミノ酸配列群のアミノ酸配列を整列させ、同一アミノ酸の割合を最大にするために必要である場合はアミノ酸配列の一部に間隙を導入する。整列のための方法、割合の算定方法、比較方法、およびそれらに関連するコンピュータプログラムは、当該技術分野で従来からよく知られている(例えば、BLAST、GENETYX等)。本明細書において「相同性」は、特に断りのない限りNCBIのBLASTによって測定された値で表すことができる。BLASTでアミノ酸配列を比較するときのアルゴリズムには、Blastpをデフォルト設定で使用できる。測定結果はPositivesまたはIdentitiesとして数値化される。
　本明細書において「ストリンジェント（な）条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法などを用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、コロニーあるいはプラーク由来のDNAを固定化したフィルターを用いて、0．7～1．0MのNaCl存在下、65℃でハイブリダイゼーションを行った後、0．1～2倍濃度のSSC（saline-sodium　citrate）溶液（1倍濃度のSSC溶液の組成は、150mM　塩化ナトリウム、15mM　クエン酸ナトリウムである）を用い、65℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。「ストリンジェントな条件」は、例えば、以下の条件を採用することができる。(1)洗浄のために低イオン強度および高温度を用いる(例えば、50℃で、0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1％のドデシル硫酸ナトリウム)、(2)ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤を用いる(例えば、42℃で、50％(v/v)ホルムアミドと0.1％ウシ血清アルブミン/0.1％フィコール/0.1％のポリビニルピロリドン/50mMのpH6.5のリン酸ナトリウムバッファー、および750mMの塩化ナトリウム、75mMクエン酸ナトリウム)、または(3)20％ホルムアミド、5×SSC、50mMリン酸ナトリウム(pH7.6)、5×デンハード液、10％硫酸デキストラン、および20mg/mlの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中で、37℃で一晩インキュベーションし、次に約37-50℃で1×SSCでフィルターを洗浄する。なお、ホルムアミド濃度は50％またはそれ以上であってもよい。洗浄時間は、5、15、30、60、もしくは120分、またはそれら以上であってもよい。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーに影響する要素としては温度、塩濃度など複数の要素が考えられ、詳細はAusubelet　al.,　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Wiley　Interscience　Publishers,(1995)を参照することができる。「高度にストリンジェントな条件」の例は、０．００１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、６５～６８℃、または０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、および５０％　ホルムアミド、４２℃である。ハイブリダイゼーション、Molecular　Cloning　2nd　ed.,Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Supplement　1-38,　DNA　Cloning1:Core　Techniques,　A　Practical　Approach,　Second　Edition,　Oxford　University　Press(1995)などの実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、A配列のみまたはT配列のみを含む配列が除外される。中程度のストリンジェントな条件は、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することができ、Sambrookら、Molecular　Cloning:A　Laboratory　Manual、第3版、Vol．1、7.42-7.45　Cold　Spring　Harbor　Laboratory　Presｓ，2001に示され、そしてニトロセルロースフィルターに関し、５×ＳＳＣ、０．５％　ＳＤＳ、１．０ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の前洗浄溶液、約４０－５０°Cでの、約５０％ホルムアミド、２×ＳＳＣ－６×ＳＳＣ（または約４２°Cでの約５０％ホルムアミド中の、スターク溶液（Ｓｔａｒｋ’ｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）などの他の同様のハイブリダイゼーション溶液）のハイブリダイゼーション条件、および約６０°C、０．５×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳの洗浄条件の使用が含まれる。従って、本発明において使用されるポリペプチドには、本発明で特に記載されたポリペプチドをコードする核酸分子に対して、高度または中程度でストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるポリペプチドも包含される。
　本明細書において「精製された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものをいう。従って、通常、精製された生物学的因子におけるその生物学的因子の純度は、その生物学的因子が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。本明細書中で使用される用語「精製された」は、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質または生物学的因子は、好ましくは「精製された」物質である。本明細書で使用される「単離された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子が実質的に除去されたものをいう。本明細書中で使用される用語「単離された」は、その目的に応じて変動するため、必ずしも純度で表示される必要はないが、必要な場合、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質は、好ましくは「単離された」物質または生物学的因子である。
　本明細書において「対応する」アミノ酸または核酸あるいは部分とは、あるポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子（例えば、FSTL1またはPD-L1）において、比較の基準となるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおける所定のアミノ酸またはヌクレオチドあるいは部分と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸またはヌクレオチドをいい、特に酵素分子にあっては、活性部位中の同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸をいい、複合分子にあっては対応する部分（例えば、膜貫通ドメイン等）をいう。例えば、アンチセンス分子であれば、そのアンチセンス分子の特定の部分に対応するオルソログにおける同様の部分であり得る。対応するアミノ酸は、例えば、システイン化、グルタチオン化、S－S結合形成、酸化（例えば、メチオニン側鎖の酸化）、ホルミル化、アセチル化、リン酸化、糖鎖付加、ミリスチル化などがされる特定のアミノ酸であり得る。あるいは、対応するアミノ酸は、二量体化を担うアミノ酸であり得る。このような「対応する」アミノ酸または核酸は、一定範囲にわたる領域またはドメインであってもよい。従って、そのような場合、本明細書において「対応する」領域またはドメインと称される。このような対応する領域またはドメインは、本発明において複合分子を設計する場合に有用である。
　本明細書において「対応する」遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）とは、ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、または有することが予測される遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在する場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子に対応する遺伝子は、その遺伝子のオルソログであり得る。従って、ヒトのFSTL1またはPD-L1は、それぞれ、他の動物（特に哺乳動物）において、対応するFSTL1またはPD-L1を見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を用いて同定することができる。従って、例えば、ある動物（例えば、マウス）における対応する遺伝子は、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、FSTL1またはPD-L1等）は、配列番号２５０～２５３、４０９～４１２等の配列をクエリ配列として用いてその動物の配列を含むデータベースを検索することによって見出すことができる。
　本明細書において「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがn）に対して、1～n－1までの配列長さを有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。本明細書において、このようなフラグメントは、例えば、全長のものがマーカーまたは標的分子として機能する場合、そのフラグメント自体もまたマーカーまたは標的分子としての機能を有する限り、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　本発明に従って、用語「活性」は、本明細書において、最も広い意味での分子の機能を指す。活性は、限定を意図するものではないが、概して、分子の生物学的機能、生化学的機能、物理的機能または化学的機能を含む。活性は、例えば、酵素活性、他の分子と相互作用する能力、および他の分子の機能を活性化するか、促進するか、安定化するか、阻害するか、抑制するか、または不安定化する能力、安定性、特定の細胞内位置に局在する能力を含む。適用可能な場合、この用語はまた、最も広い意味でのタンパク質複合体の機能にも関する。
　本明細書において「生物学的機能」とは、ある遺伝子またはそれに関する核酸分子もしくはポリペプチドについて言及するとき、その遺伝子、核酸分子またはポリペプチドが生体内において有し得る特定の機能をいい、これには、例えば、特異的な抗体の生成、酵素活性、抵抗性の付与等を挙げることができるがそれらに限定されない。本発明においては、例えば、FSTL1またはPD-L1がＶＬＤＬの取り込みの阻害等に関与する機能などを挙げることができるがそれらに限定されない。本明細書において、生物学的機能は、「生物学的活性」によって発揮され得る。本明細書において「生物学的活性」とは、ある因子（例えば、ポリヌクレオチド、タンパク質など）が、生体内において有し得る活性のことをいい、種々の機能（例えば、転写促進活性）を発揮する活性が包含され、例えば、ある分子との相互作用によって別の分子が活性化または不活化される活性も包含される。2つの因子が相互作用する場合、その生物学的活性は、その二分子の間の結合およびそれによって生じる生物学的変化であり得、そして、例えば、一つの分子を抗体を用いて沈降させたときに他の分子も共沈するとき、2分子は結合していると考えられる。従って、そのような共沈を見ることが一つの判断手法として挙げられる。例えば、ある因子が酵素である場合、その生物学的活性は、その酵素活性を包含する。別の例では、ある因子がリガンドである場合、そのリガンドが対応するレセプターへの結合を包含する。そのような生物学的活性は、当該分野において周知の技術によって測定することができる。従って、「活性」は、結合（直接的または間接的のいずれか）を示すかまたは明らかにするか；応答に影響する（すなわち、いくらかの曝露または刺激に応答する測定可能な影響を有する）、種々の測定可能な指標をいい、例えば、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに直接結合する化合物の親和性、または例えば、いくつかの刺激後または事象後の上流または下流のタンパク質の量あるいは他の類似の機能の尺度が挙げられる。
　本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」とは、その遺伝子などがインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好ましくは、遺伝子、ポリヌクレオチドなどが、転写および翻訳されて、ポリペプチドの形態になることをいうが、転写されてmRNAが作製されることもまた発現の一態様である。したがって、本明細書において「発現産物」とは、このようなポリペプチドもしくはタンパク質、またはｍRNAを含む。より好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシングを受けたものであり得る。例えば、FSTL1またはPD-L1の発現レベルは、任意の方法によって決定することができる。具体的には、FSTL1またはPD-L1のmRNAの量、FSTL1またはPD-L1タンパク質の量、そしてFSTL1またはPD-L1タンパク質の生物学的な活性を評価することによって、FSTL1またはPD-L1の発現レベルを知ることができる。このような測定値はコンパニオン診断において使用し得る。FSTL1またはPD-L1のmRNAやタンパク質の量は、本明細書の他の箇所に詳述したような方法あるいは他の当該分野において公知の方法によって決定することができる。
　本明細書において「機能的等価物」とは、対象となるもとの実体に対して、目的となる機能が等価であるが構造が異なる任意のものをいう。従って、「FSTL1またはPD-L1」またはその抗体の機能的等価物は、FSTL1またはPD-L1またはその抗体自体ではないが、FSTL1またはPD-L1またはその抗体の変異体または改変体（例えば、アミノ酸配列改変体等）であって、FSTL1またはPD-L1の持つ生物学的作用を有するもの、ならびに、作用する時点において、FSTL1またはPD-L1またはその抗体自体またはこのFSTL1またはPD-L1またはその抗体の変異体もしくは改変体に変化することができるもの（例えば、FSTL1またはPD-L1またはその抗体自体またはFSTL1またはPD-L1またはその抗体の変異体もしくは改変体をコードする核酸、およびその核酸を含むベクター、細胞等を含む）が包含されることが理解される。本発明において、FSTL1またはPD-L1またはその抗体の機能的等価物は、格別に言及していなくても、FSTL1またはPD-L1またはその抗体と同様に用いられうることが理解される。機能的等価物は、データベース等を検索することによって、見出すことができる。本明細書において「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および／または性質を有する他の核酸塩基配列を見出すことをいう。電子的な検索としては、BLAST（Altschul　et　al.,J.Mol.Biol.　215:403-410(1990))、FASTA　(Pearson　&　Lipman,　Proc.Natl.Acad.Sci.,USA　85:2444-2448(1988)）、Smith　and　Waterman法（Smith　and　Waterman,　J.Mol.Biol.147:　195-197(1981)）、およびNeedleman　and　Wunsch法（Needleman　and　Wunsch,　J.Mol.Biol.　48:443-453(1970)）などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジェントハイブリダイゼーション、ゲノムDNAをナイロンメンブレン等に貼り付けたマクロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ（マイクロアレイアッセイ）、PCRおよびin　situハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書において、本発明において使用される遺伝子には、このような電子的検索、生物学的検索によって同定された対応遺伝子も含まれるべきであることが意図される。
　本発明の機能的等価物としては、アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加されたものを用いることができる。本明細書において、「アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加」とは、部位特異的突然変異誘発法等の周知の技術的方法により、あるいは天然の変異により、天然に生じ得る程度の複数個の数のアミノ酸の置換等により改変がなされていることを意味する。改変アミノ酸配列は、例えば1～30個、好ましくは1～20個、より好ましくは1～9個、さらに好ましくは1～5個、特に好ましくは1～2個のアミノ酸の挿入、置換、もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加がなされたものであることができる。改変アミノ酸配列は、好ましくは、そのアミノ酸配列が、FSTL1またはPD-L1のアミノ酸配列において1または複数個（好ましくは1もしくは数個または1、2、3、もしくは4個）の保存的置換を有するアミノ酸配列であってもよい。ここで「保存的置換」とは、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、1または複数個のアミノ酸残基を、別の化学的に類似したアミノ酸残基で置換えることを意味する。例えば、ある疎水性残基を別の疎水性残基によって置換する場合、ある極性残基を同じ電荷を有する別の極性残基によって置換する場合などが挙げられる。このような置換を行うことができる機能的に類似のアミノ酸は、アミノ酸毎に当該分野において公知である。具体例を挙げると、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニンなどが挙げられる。極性（中性）アミノ酸としては、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システインなどが挙げられる。陽電荷をもつ（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジン、リジンなどが挙げられる。また、負電荷をもつ（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などが挙げられる。
　本明細書において「抑制剤」とは、対象となる実体（例えば、レセプターまたは細胞）に対してそのレセプターまたは細胞の生物学的作用を阻害する物質または因子をいう。本発明のFSTL1またはPD-L1の抑制剤としては、対象となるFSTL1またはPD-L1またはFSTL1またはPD-L1を発現する細胞等の機能を一時的または永久に低下または消失させることができる因子である。このような因子には、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス、siRNA等のRNAi因子等の核酸の形態のもの等を挙げることができるがこれらに限定されない。
　本明細書において「アゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用を発現またはそれを増強する物質をいう。天然のアゴニスト（リガンドとも称される）のほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。
　本明細書において「アンタゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用の発現を抑制または阻害する物質をいう。天然のアンタゴニストのほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。アゴニスト（またはリガンド）と競合的に抑制または阻害するもののほか、非競合的に抑制または阻害するもの等がある。アゴニストを改変することによっても得られうる。生理現象を抑制または阻害することから、アンタゴニストは抑制剤（阻害剤）または抑制（する）因子の概念に包含されうる。したがって、本明細書においては実質的にアンタゴニストは「抑制剤」と同義で用いられる。
　本明細書において「抗体」は、広義にはポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体、ならびにそれらのフラグメント、例えばFvフラグメント、Fab’フラグメント、F（ab’）2およびFabフラグメント、ならびにその他の組換えにより生産された結合体または機能的等価物（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー（diabody）、sc（Fv）2（single chain（Fv）2）、scFv－Fc）を含む。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、FSTL1またはPD-L1のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1またはPD-L1タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体」は、FSTL1またはPD-L1に結合性を有する抗体を含む。この抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体の生産方法は特に限定されないが、例えば、FSTL1またはPD-L1を哺乳類または鳥類に免疫することによって生産してもよい。
　また、「FSTL1またはPD-L1に対する抗体（抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体）、または、そのフラグメント」の「機能的等価物」は、例えば、抗体の場合、FSTL1またはPD-L1の結合活性、必要であれば抑制活性を有する抗体自体およびそのフラグメント自体のほか、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（single chain（Fv）2）、scFv－Fcなども包含されることが理解される。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、悪性腫瘍の増殖が特に強く抑制される観点からは、FSTL1またはPD-L1の特定のエピトープに特異的に結合する抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体であることが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体であれば、ポリクローナル抗体に比べて、効率的にFSTL1またはPD-L1に対して作用させることができる。抗FSTL1またはPD-L1モノクローナル抗体を効率的に生産する観点からは、FSTL1またはPD-L1をニワトリに免役することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体の抗体クラスは特に限定されないが、例えばIgM、IgD、IgG、IgA、IgE、またはIgYであってもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、抗原結合活性を有する抗体断片（以下、「抗原結合性断片」と称することもある）であっても良い。この場合、安定性または抗体の生産効率が上昇する等の効果がある。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、融合タンパク質であってもよい。この融合タンパク質は、抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体のNまたはC末端に、ポリペプチドまたはオリゴペプチドが結合したものであってもよい。ここで、オリゴペプチドは、Hisタグであってもよい。また融合タンパク質は、マウス、ヒト、またはニワトリの抗体部分配列を融合したものであってもよい。それらのような融合タンパク質も、本実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体の一形態に含まれる。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、例えば、精製FSTL1またはPD-L1、FSTL1またはPD-L1発現細胞、またはFSTL1またはPD-L1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体であってもよい。FSTL1またはPD-L1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1またはPD-L1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、精製FSTL1またはPD-L1、FSTL1またはPD-L1発現細胞胞またはFSTL1またはPD-L1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体の、CDRセットを有する抗体であってもよい。FSTL1またはPD-L1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1またはPD-L1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。CDRセットとは、重鎖CDR1、2、および3、並びに、軽鎖CDR1、2、および3のセットである。
　本発明の一実施形態において「FSTL1またはPD-L1発現細胞」は、例えば、FSTL1またはPD-L1をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入後、FSTL1またはPD-L1を発現させることによって得てもよい。ここでFSTL1またはPD-L1は、FSTL1またはPD-L1断片を含む。また本発明の一実施形態において「FSTL1またはPD-L1含有脂質膜」は、例えば、FSTL1またはPD-L1と脂質二重膜を混合することによって得てもよい。ここでFSTL1またはPD-L1は、FSTL1またはPD-L1断片を含む。また本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、FSTL1またはPD-L1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、抗原をニワトリに免疫する工程を経て得られる抗体、またはその抗体のCDRセットを有する抗体が好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、目的を達成する限り、どのような結合力を有していてもよく、例えば、少なくとも１．０×１０６以上、２．０×１０６以上、５．０×１０６以上、１．０×１０７以上を挙げることができるがこれらに限定されず、通常は、KD値（kd/ka）が、1.0×10-7以下であってもよく、1.0×10-9(M)あるいは1.0×10-10(M)以下であり得る。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、ADCCまたはCDC活性を有していてもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、FSTL1またはPD-L1の野生型または変異型に結合する抗体であってもよい。変異型とは、個体間のDNA配列の差異に起因するものを含む。野生型または変異型のFSTL1またはPD-L1のアミノ酸配列は、配列番号２５１または配列番号２５３に示すアミノ酸配列に対し、好ましくは80％以上、より好ましくは90％以上、より好ましくは95％以上、特に好ましくは98％以上の相同性を有している。
　　本発明の一実施形態において「抗体」は、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができる分子またはその集団を含むまた抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。抗体は、様々な形態で存在することができ、例えば、全長抗体（Fab領域とFc領域を有する抗体）、Fv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、diabody、一本鎖抗体（例えば、scFv）、dsFv、多価特異的抗体（例えば、二価特異的抗体）、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド、キメラ抗体（例えば、マウス-ヒトキメラ抗体、ニワトリ-ヒトキメラ抗体等）、マウス抗体、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはそれらの同等物（または等価物）からなる群から選ばれる1種以上
の形態であってもよい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体は、FSTL1またはPD-L1のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1またはPD-L1タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「ポリクローナル抗体」は、例えば、抗原に特異的なポリクローナル抗体の産生を誘導するために、哺乳類（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、サル等）、鳥類等に、目的の抗原を含む免疫原を投与することによって生成することが可能である。免疫原の投与は、1つ以上の免疫剤、および所望の場合にはアジュバントの注入をしてもよい。アジュバントは、免疫応答を増加させるために使用されることもあり、フロイントアジュバント（完全または不完全）、ミネラルゲル（水酸化アルミニウム等）、または界面活性物質（リゾレシチン等）等を含んでいてもよい。免疫プロトコールは、当該技術分野で公知であり、選択する宿主生物に合わせて、免疫応答を誘発する任意の方法によって実施される場合がある（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):86-91.）。
　本発明の一実施形態において「モノクローナル抗体」は、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に単一のエピトープに対応する抗体である場合を含む。または、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に同一である抗体であってもよい。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、異なるエピトープに対応する異なる抗体を典型的に含むような、通常のポリクローナル抗体とは異なる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていないハイブリドーマ培養から合成できる点で有用である。「モノクローナル」という形容は、実質的に均一な抗体集団から得られるという特徴を示していてもよいが、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、モノクローナル抗体は、"Kohler　G,　Milstein　C.,　Nature.　1975　Aug7;256(5517):495-497."に掲載されているようなハイブリドーマ法と同様の方法によって作製してもよい。あるいは、モノクローナル抗体は、米国特許第4816567号に記載されているような組換え法と同様の方法によって作製してもよい。または、モノクローナル抗体は、"Clackson　et　al.,　Nature.　1991　Aug　15;352(6336):　624-628."、または"Marks　et　al.,　J　Mol　Biol.　1991　Dec　5;222(3):　581-597."に記載されているような技術と同様の方法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。または、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):92-96."に掲載されている方法でよって作製してもよい。
　抗体の大量生産については、当該分野で公知の任意の手法を用いることができるが、例えば、代表的な抗体の大量生産系の構築および抗体製造としては、以下を例示することができる。すなわち、CHO細胞にH鎖抗体発現ベクターおよびL鎖抗体発現ベクターをトランスフェクションし、選択試薬であるG418およびZeocinを用いて培養を行い、限界希釈法によるクローニングを行う。クローニング後、安定的に抗体を発現しているクローンをELISA法により選択する。選択したCHO細胞を用いて拡大培養し、抗体を含む培養上清を回収する。回収した培養上清からProteinAもしくはProteinG精製により抗体を精製することができる。
　本発明の一実施形態において「Fv抗体」は、抗原認識部位を含む抗体である。この領域は、非共有結合による1つの重鎖可変ドメインおよび1つの軽鎖可変ドメインの二量体を含む。この構成において、各可変ドメインの3つのCDRは相互に作用してVH-VL二量体の表面に抗原結合部位を形成することができる。
　本発明の一実施形態において「Fab抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素パパインで処理して得られる断片のうち、H鎖のN末端側約半分とL鎖全体が一部のジスルフィド結合を介して結合した抗体である。Fabは、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体を、タンパク質分解酵素パパインで処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「F(ab’)2抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素ペプシンで処理して得られる断片のうち、Fabに相当する部位を2つ含む抗体である。F(ab’)2は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体を、タンパク質分解酵素ペプシンで処理して得ることができる。また、例えば、下記のFab’をチオエーテル結合あるいはジスルフィド結合させることで、作製することができる。
　本発明の一実施形態において「Fab’抗体」は、例えば、F(ab’)2のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断して得られる抗体である。例えば、F(ab’)2を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「scFv抗体」は、VHとVLとが適当なペプチドリンカーを介して連結した抗体である。scFv抗体は、例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体のVHおよびVLをコードするcDNAを取得し、VH-ペプチドリンカー-VLをコードするポリヌクレオチドを構築し、そのポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「diabody」は、二価の抗原結合活性を有する抗体である。二価の抗原結合活性は、同一であることもできるし、一方を異なる抗原結合活性とすることもできる。diabodyは、例えば、scFvをコードするポリヌクレオチドをペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが8残基以下となるように構築し、得られたポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「dsFv」は、VHおよびVL中にシステイン残基を導入したポリペプチドを、上記システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させた抗体である。システイン残基に導入する位置はReiterらにより示された方法(Reiteretal., Protein　Eng. 1994 May;7(5):697-704.)に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。
　本発明の一実施形態において「抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド」は、抗体のVH、VL、またはそれらのCDR1、2、もしくは3を含んで構成される抗体である。複数のCDRを含むペプチドは、直接または適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。
　上記のFv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、scFv抗体、diabody、dsFv抗体、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド（以下、「Fv抗体等」と称することもある）の生産方法は特に限定しない。例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体におけるFv抗体等の領域をコードするDNAを発現用ベクターに組み込み、発現用細胞を用いて生産できる。または、Fmoc法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、tBOC法（t-ブチルオキシカルボニル法）などの化学合成法によって生産してもよい。なお本発明の一実施形態に係る抗原結合性断片は、上記Fv抗体等の1種以上であってもよい。
　本発明の一実施形態において「キメラ抗体」は、例えば、異種生物間における抗体の可変領域と、抗体の定常領域とを連結したもので、遺伝子組換え技術によって構築できる。マウス-ヒトキメラ抗体は、例えば、"Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.　1994　Feb　1;91(3):969-973."に記載の方法で作製できる。マウス-ヒトキメラ抗体を作製するための基本的な方法は、例えば、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列を、哺乳類細胞の発現ベクター中にすでに存在するヒト抗体定常領域をコードする配列に連結する。または、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列をヒト抗体定常領域をコードする配列に連結した後、哺乳類細胞発現ベクターに連結してもよい。ヒト抗体定常領域の断片は、任意のヒト抗体のH鎖定常領域およびヒト抗体のL鎖定常領域のものとすることができ、例えばヒトH鎖のものについてはCγ1、Cγ2、Cγ3またはCγ4を、L鎖のものについてはCλまたはCκを各々挙げることができる。
　本発明の一実施形態において「ヒト化抗体」は、例えば、非ヒト種由来の1つ以上のCDR、およびヒト免疫グロブリン由来のフレームワーク領域（FR）、さらにヒト免疫グロブリン由来の定常領域を有し、所望の抗原に結合する抗体である。抗体のヒト化は、当該技術分野で既知の種々の手法を使用して実施可能である(Almagro　et　al.,　Front　Biosci.　2008　Jan　1;13:　1619-1633.)。例えば、CDRグラフティング（Ozaki　et　al.,Blood.　1999　Jun　1;93(11):　3922-3930.）、Re-surfacing(Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　U　S　A.　1994　Feb　1;91(3):969-973.)、またはFRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）などが挙げられる。抗原結合を改変するために（好ましくは改善するために）、ヒトFR領域のアミノ酸残基は、CDRドナー抗体からの対応する残基と置換してもよい。このFR置換は、当該技術分野で周知の方法によって実施可能である（Riechmann　et　al.,　Nature.　1988　Mar　24;332(6162):323-327.）。例えば、CDRとFR残基の相互作用のモデリングによって抗原結合に重要なFR残基を同定してもよい。または、配列比較によって、特定の位置で異常なFR残基を同定してもよい。好ましい実施形態では、松田らのMolecular Immunology 43(2006)634-642 の報告に基づきヒト化抗体を構築してもよい。
　本発明の好ましい実施形態では、Ｈ（２）－Ｌ（１）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号４１８、４２０、４２２および４２４）ならびにL鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号４３４、４３６、４３８および４４０）を有するヒト化抗体が使用され得るがこれに限定されない。これらのヒト化抗体の全長配列は、このヒト化抗体において、Ｈ（１）重鎖の全長配列は、IgG1型が配列番号４４１および４４２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号４４７および４４８（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号４４３および４４４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号４４９および４５０（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号４４５および４４６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号４５１および４５２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号４５３および４５４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号４９５および４９６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号４９７および４９８（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。理論に束縛されることを望まないが、Ｈ（２）－Ｌ（１）は、Ｈ（３）－Ｌ（１）（Ｈ（３）のフレームワークは（それぞれ配列番号４２６、４２８、４３０および４３２））およびＨ（１）－Ｌ（１）（Ｈ（１）のフレームワークは（それぞれ配列番号４１０、４１２、４１４および４１６））よりも１桁高い活性が観察されているからである。
　本発明の一実施形態において「ヒト抗体」は、例えば、抗体を構成する重鎖の可変領域および定常領域、軽鎖の可変領域および定常領域を含む領域が、ヒトイムノグロブリンをコードする遺伝子に由来する抗体である。主な作製方法としてはヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法、ファージディスプレイ法などがある。ヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法では、内因性Igをノックアウトしたマウスに機能的なヒトのIg遺伝子を導入すれば、マウス抗体の代わりに多様な抗原結合能を持つヒト抗体が産生される。さらにこのマウスを免疫すればヒトモノクローナル抗体を従来のハイブリドーマ法で得ることが可能である。例えば、"Lonberg　et　al.,　Int　Rev　Immunol.　1995;13(1):65-93."に記載の方法で作製できる。ファージディスプレイ法は、典型的には大腸菌ウイルスの一つであるM13やT7などの繊維状ファージのコートタンパク質（g3p、g10p等）のN末端側にファージの感染性を失わないよう外来遺伝子を融合タンパク質として発現させるシステムである。例えば、"Vaughan　et　al.,　Nat　Biotechnol.　1996　Mar;14(3):309-314."に記載の方法で作製できる。
　また抗体は、CDR-grafting(Ozaki　et　al.,　Blood.　1999　Jun　1;93(11):3922-3930.)によって任意の抗体に本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをグラフティングすることで作製してもよい。または、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをコードするDNAと、公知のヒトまたはヒト以外の生物由来の抗体の、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域をコードするDNAとを、当該技術分野で公知の方法に従ってベクターに連結後、公知の細胞を使用して発現させることによって得ることができる。このとき、抗FSTL1抗体または抗PD-L1抗体の標的抗原への作用効率を上げるために、当該分野で公知の方法（例えば、抗体のアミノ酸残基をランダムに変異させ、反応性の高いものをスクリーニングする方法、またはファージディスプレイ法等）を用いて、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域を最適化してもよい。また、例えば、FRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）、またはバーニヤゾーンのアミノ酸残基またはパッケージング残基を置換する方法（特開2006-241026、またはFooteet　al.,　J　Mol　Biol.1992　Mar　20;224(2):487-499.）を用いて、FR領域を最適化してもよい。
　本発明の一実施形態において「重鎖」は、典型的には、全長抗体の主な構成要素である。重鎖は、通常、軽鎖とジスルフィド結合および非共有結合によって結合している。重鎖のN末端側のドメインには、同種の同一クラスの抗体でもアミノ酸配列が一定しない可変領域（VH）と呼ばれる領域が存在し、一般的に、VHが抗原に対する特異性、親和性に大きく寄与していることが知られている。例えば、"Reiter　et　al.,　J　Mol　Biol.　1999　Jul　16;290(3):685-98."にはVHのみの分子を作製したところ、抗原と特異的に、高い親和性で結合したことが記載されている。さらに、"Wolfson　W,　Chem　Biol.　2006　Dec;13(12):1243-1244."には、ラクダの抗体の中には、軽鎖を持たない重鎖のみの抗体が存在していることが記載されている。
　本発明の一実施形態において「CDR（相補性決定領域）」は、抗体において、実際に抗原に接触して結合部位を形成している領域である。一般的にCDRは、抗体のFv（重鎖可変領域可変領域（VH）および軽鎖可変領域（VL）を含む）上に位置している。また一般的にCDRは、5～30アミノ酸残基程度からなるCDR1、CDR2、CDR3が存在する。そして、特に重鎖のCDRが抗体の抗原への結合に寄与していることが知られている。またCDRの中でも、CDR3が抗体の抗原への結合における寄与が最も高いことが知られている。例えば、"Willy　et　al.,　Biochemical　and　Biophysical　Research　Communications　Volume　356,　Issue　1,　27　April　2007,　Pages　124-128"には、重鎖CDR3を改変させることで抗体の結合能を上昇させたことが記載されている。CDR以外のFv領域はフレームワーク領域（FR）と呼ばれ、FR1、FR2、FR3およびFR4からなり、抗体間で比較的よく保存されている（Kabat　et　al.,「Sequence　of　Proteins　of　Immunological　Interest」US　Dept.　Health　and　Human　Services,1983.）。即ち、抗体の反応性を特徴付ける要因はCDRにあり、特に重鎖CDRにあるといえる。
　CDRの定義およびその位置を決定する方法は複数報告されている。例えば、Kabatの定義(Sequences　of　Proteins　of　Immunological　Interest,　5th　ed.,　Public　Health　Service,　National　Institutes　of　Health,　Bethesda,　MD.　(1991))、またはChothiaの定義(Chothiaet　al.,　J.　Mol.　Biol.,1987;196:901-917)を採用してもよい。本発明の一実施形態においては、Kabatの定義を好適な例として採用するが、必ずしもこれに限定されない。また、場合によっては、Kabatの定義とChothiaの定義の両方を考慮して決定しても良く、例えば、各々の定義によるCDRの重複部分を、または各々の定義によるCDRの両方を含んだ部分をCDRとすることもできる。そのような方法の具体例としては、Kabatの定義とChothiaの定義の折衷案である、Oxford　Molecular's　AbM　antibody　modeling　softwareを用いたMartinらの方法（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,　1989;86:9268-9272）がある。このようなCDRの情報を用いて、本発明に使用されうる変異体を生産することができる。このような抗体の変異体では、もとの抗体のフレームワークに１または数個（例えば、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個）の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まないように生産することができる。
　本明細書において「抗原」（antigen）とは、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。本明細書において「免疫原」（immunogen）とは、抗原特異的免疫応答を生じるリンパ球活性化を開始し得る抗原をいう。本明細書において「エピトープ」または「抗原決定基」とは、抗体またはリンパ球レセプターが結合する抗原分子中の部位をいう。エピトープを決定する方法は、当該分野において周知であり、そのようなエピトープは、核酸またはアミノ酸の一次配列が提供されると、当業者はそのような周知慣用技術を用いて決定することができる。本発明の抗体は、エピトープが同じであれば、他の配列を有する抗体であっても同様に利用することができることが理解される。
　本明細書において使用される抗体は、擬陽性が減じられる限り、どのような特異性の抗体を用いても良いことが理解される。従って、本発明において用いられる抗体は、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクローナル抗体であってもよい。
　本明細書において「手段」とは、ある目的（例えば、検出、診断、治療）を達成する任意の道具となり得るものをいい、特に、本明細書では、「選択的に認識する手段」とは、ある対象を他のものとは異なって認識することができる手段をいう。
　本明細書において使用される「悪性腫瘍」は、例えば、正常な細胞が突然変異を起こして発生する腫瘍を含む。悪性腫瘍は全身のあらゆる臓器や組織から生じ得る。特に識別しない場合、本明細書では「癌」「がん」と同義で用いる。この悪性腫瘍は、例えば、肺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、乳癌、大腸癌、小腸癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、前立腺癌、尿管癌、腎盂癌、尿管癌、陰茎癌、精巣癌、脳腫瘍、中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、頭頸部癌、グリオーマ、多形性膠芽腫、皮膚癌、メラノーマ、甲状腺癌、唾液腺癌、悪性リンパ腫、癌腫、肉腫、白血病および血液悪性腫瘍からなる群から選ばれる1種以上を含む。ここで、卵巣癌は、例えば、卵巣漿液性腺癌、または卵巣明細胞線癌を含む。子宮癌は、例えば、子宮内膜癌、または子宮頸癌を含む。頭頸部癌は、例えば、口腔癌、咽頭癌、喉頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、または甲状腺癌を含む。肺癌は、例えば、非小細胞肺癌、または小細胞肺癌を含む。また悪性腫瘍は、FSTL1またはPD-L1陽性であってもよい。
　本明細書において「転移」（metastasis）とは、癌が体の原発部位から他の領域に広がるか移って新しい場所に類似した癌性の病巣が発達する過程を指す。「転移性」または「転移する」細胞は、隣接細胞との接着性接触を失い、血流またはリンパを通して疾患の原発部位から移動して、近隣の体構造に侵入する細胞である。本明細書において転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、転移を含む。本発明によれば、本発明による転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　本明細書において「骨転移」とは、骨への癌の転移を意味し、任意の起源の骨転移を含む。骨転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、骨転移を含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、骨病変、好ましくは溶骨性および／または骨形成骨病変を含み、より好ましくは溶骨性骨病変、さらにより好ましくは骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の骨病変を含み、特に骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の溶骨性骨病変も含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、ワルデンストレーム病の骨病変、好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性および／または骨形成骨病変、より好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性骨病変も含む。本発明による骨転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　間葉系幹細胞は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導または増強するが、この活性を獲得するためには活性化が必須であり、癌に関連して増加するＭＳＣは、様々な生体内因子によって活性化された「活性化ＭＳＣ」であると考えられており、本明細書でもこのようなＭＳＣは「活性化間葉系幹細胞」または「活性化ＭＳＣ」と称する。つまり、もともと免疫抑制活性を持っている細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）が増殖して総合的に免疫抑制活性が強くなる場合と、通常の何も活性を有さない細胞（つまり前駆細胞）が免疫抑制性を獲得してそれらの免疫抑制活性を有する細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）に転じる割合が多くなって免疫抑制活性が強くなる場合、および、免疫機能を果たすことができない不全状態に陥る疲弊T細胞の誘導等の免疫破綻機序が存在するが、ＦＳＴＬ１はこれらを直接的および／または活性化ＭＳＣの増殖等を介して間接的に制御していると考えられる（ImmunologyandCell Biology 91:12-18, 2013）。理論に束縛されることを望まないが、本発明の抗体ＦＳＴＬ１抗体等は、このＭＳＣの免疫抑制の誘導または増強、および免疫不全等を阻害することができ、それによって、癌の悪化の原因となる免疫抑制を解除することができ、それゆえ、顕著な癌の予防または治療効果を達成することができるといえる。また、本発明ではこれらの免疫抑制性細胞および／または免疫不全性細胞等の免疫破綻の細胞を誘導するＭＳＣの誘導または増強について、この上流を阻害することができるため、免疫抑制機序および／または免疫不全機序等の免疫破綻機序の全体を一斉に解除できるものと考えられ、より効果的な治療が可能になるものと考えられる。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（癌関連MSCおよび活性化MSCを含む）の誘導や増殖の抑制は、例えば、ＭＳＣの脂肪細胞への分化の阻害を見ることで確認することができ、例えば、図３９、４０に示されている。理論に束縛されることを望まないが、FSTL1は免疫抑制性のMSC自身を増やし、および／または他の細胞の抑制活性を強めるものと考えられる。
　本明細書において「免疫抑制」（「免疫抑制」の用語は、このほか、免疫抑制性、免疫制御、免疫制御性、免疫調節、免疫調節性、免疫修飾、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）の「増強」とは、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）ことを包含する概念であり、結果として、免疫抑制が増強されることをいう。したがって、免疫抑制の増強には、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）の概念が含まれることが理解される。ＭＳＣ細胞の免疫抑制性の細胞の誘導の形態としては、制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞への分化が促進されること、制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強、および制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の増殖が包含され、結果として免疫抑制性が増強されることが包含される。
　本明細書において、「免疫抑制性の細胞」（「免疫抑制性」の用語は、このほか、免疫制御性、免疫調節性、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）とは、免疫能を抑制する働きを有する細胞を指し、代表的には、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞等を挙げることができるがそれらに限定されない。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が免疫機能を破壊する機序として、上記で説明したような免疫抑制のみならず、免疫不全も役割を果たしていることが知られており、これらは、合わせて「免疫破綻」と総称される。
　本明細書において「免疫不全」とは、免疫系を構成する細胞要素の一部あるいはいくつかの欠損あるいは機能不全によって，正常免疫機構に障害を生じた状態をいう。これに起因する病態を免疫不全症(immunodeficiency　diseases)と総称する。免疫不全症は一次性と二次性に大別され，前者は主に先天性の遺伝的異常に起因するもので，後者は薬剤やＸ線など物理化学的因子，ウイルスなどの感染症，栄養状態などの外的環境因子によるものをいう。障害部位は，抗体産生などＢ細胞領域の機能不全，細胞性免疫にかかわるＴ細胞領域の異常，補体系や貪食機能など貪食系細胞機能の障害などさまざまであるとされている。「疲弊T細胞」が免疫不全の主な指標である。抗PD-1抗体などは、この「疲弊／不全」を阻害できる抗体としても開発されている。
　本明細書において「免疫破綻」とは免疫抑制および免疫不全を合わせた概念をいう。免疫破綻が起こると、より生存に有利な免疫原性の低いがん細胞が選ばれて増殖する（平衡相（免疫細胞とがん細胞との相互作用により、消えもしない、大きくもならないといった状態）から逃避相へ移行する）。そして、平衡相の終わりから逃避相にかけての短い時間に、がんの免疫原性が低下すると考えられており、がん細胞を殺すはずのT細胞が逆説的にこの役割を果たしているとされている。
　本明細書において「疲弊」（exhaustion）とは抗原の長期的な曝露によって，T細胞上にPD-1，CTLA4，TIM3などさまざまな共抑制分子（後述）が誘導される結果，T細胞が機能不全状態に陥ることをいう。慢性感染症やがんの際に，T細胞の不応答性が誘導される原因と考えられている。そのようなT細胞を本明細書において「疲弊T細胞」という。
　抗PD-1抗体などは、この「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できる抗体としても開発されている。したがって、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、実施例において示されているように疲弊Ｔ細胞（の増殖または発生）を阻害することができることから、このような「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できるものと期待され、したがって、「免疫破綻」を阻害できるものと理解される。
　本明細書において、「免疫関連細胞」とは、免疫抑制や機能不全などを受ける任意の免疫系の細胞を指し、「免疫関連細胞の免疫抑制活性の獲得および／または増強」は、本明細書では代表的に、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊T細胞の増加等を含むことが理解される。
　本明細書において「被験体（者）」とは、本発明の診断または検出、あるいは治療等の対象となる対象（例えば、ヒト等の生物または生物から取り出した細胞、血液、血清等）をいう。
　本明細書において「試料」とは、被験体等から得られた任意の物質をいい、例えば、血清等が含まれる。当業者は本明細書の記載をもとに適宜好ましい試料を選択することができる。
　本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」（いずれも英語ではagentに相当する）は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、cDNA、ゲノムDNAのようなDNA、mRNAのようなRNAを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）など）、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。ポリヌクレオチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリヌクレオチドの配列に対して一定の配列相同性を（例えば、70％以上の配列同一性）もって相補性を有するポリヌクレオチド、プロモーター領域に結合する転写因子のようなポリペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ポリペプチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリペプチドに対して特異的に指向された抗体またはその誘導体あるいはその類似物（例えば、単鎖抗体）、そのポリペプチドがレセプターまたはリガンドである場合の特異的なリガンドまたはレセプター、そのポリペプチドが酵素である場合、その基質などが挙げられるがそれらに限定されない。
　本明細書において「診断」とは、被験体における疾患、障害、状態（例えば、悪性腫瘍）などに関連する種々のパラメータを同定し、そのような疾患、障害、状態の現状または未来を判定することをいう。本発明の方法、装置、システムを用いることによって、体内の状態を調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書において、狭義には、「診断」は、現状を診断することをいうが、広義には「早期診断」、「予測診断」、「事前診断」等を含む。本発明の診断方法は、原則として、身体から出たものを利用することができ、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることから、産業上有用である。本明細書において、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることを明確にするために、特に「予測診断、事前診断もしくは診断」を「支援」すると称することがある。
　本明細書において「予後」という用語は、悪性腫瘍（例えば、卵巣癌）などの腫瘍性疾患の再発、転移拡散、および薬剤耐性など、癌に起因する死亡または進行が起こる可能性を予測することを意味する。したがって、本明細書において「予後状態が良好」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌を認めない状態のことを、「予後状態が不良」または「予後不良」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌が認められる状態のことをいう。予後因子とは悪性腫瘍の自然経過に関する変数のことであり、これらは、いったん悪性腫瘍を発症した患者の再発率および転帰に影響を及ぼす。予後の悪化に関連した臨床的指標には、例えば、リンパ節転移、および高悪性度の腫瘍が含まれる。予後因子は、しばしば、患者を異なった基礎的再発リスクをもつサブグループに分類するために用いられる。このように、本発明のFSTL1の発現は、予後因子として使用することができる。本明細書において「予測」という用語は、原発腫瘍の摘出後に、患者が、良不良を問わず特定の臨床転帰を持つ可能性を意味する。したがって、本発明のFSTL1は、予後不良マーカーとして用いることができる。本発明の予測法を臨床的に用いて、特定の患者にとって最適な治療法を選択することによって治療法を決定することができる。本発明の予測法は、患者が治療計画、例えば、外科的介入などに対して良好な反応をする可能性があれば、予測する際の有益な手段となる。予測には予後因子を含むことができる。
　本明細書において「検出薬（剤）」または「検査薬（剤）」とは、広義には、目的の対象を検出または検査することができるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「診断薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を診断できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になった場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好ましくは、軽減、さらに好ましくは消退させることをいい、患者の疾患、もしくは疾患に伴う1つ以上の症状の、症状改善効果あるいは予防効果を発揮しうることを含む。事前に診断を行って適切な治療を行うことは「コンパニオン治療」といい、そのための診断薬を「コンパニオン診断薬」ということがある。
　本明細書において「治療薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を治療できるあらゆる薬剤をいう。本発明の一実施形態において「治療薬」は、有効成分と、薬理学的に許容される1つもしくはそれ以上の担体とを含む医薬組成物であってもよい。医薬組成物は、例えば有効成分と上記担体とを混合し、製剤学の技術分野において知られる任意の方法により製造できる。また治療薬は、治療のために用いられる物であれば使用形態は限定されず、有効成分単独であってもよいし、有効成分と任意の成分との混合物であってもよい。また上記担体の形状は特に限定されず、例えば、固体または液体（例えば、緩衝液）であってもよい。なお悪性腫瘍の治療薬は、悪性腫瘍の予防のために用いられる薬物（予防薬）、または悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤を含む。
　本明細書において「予防」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になる前に、そのような状態にならないようにすることをいう。本発明の薬剤を用いて、診断を行い、必要に応じて本発明の薬剤を用いて例えば、悪性腫瘍等の予防をするか、あるいは予防のための対策を講じることができる。
　本明細書において「予防薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を予防できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「相互作用」とは、2つの物質についていうとき、一方の物質と他方の物質との間で力（例えば、分子間力（ファンデルワールス力）、水素結合、疎水性相互作用など）を及ぼしあうこという。通常、相互作用をした2つの物質は、会合または結合している状態にある。本発明の検出、検査および診断は、このような相互作用を利用して実現することができる。
　本明細書中で使用される用語「結合」は、2つの物質の間、あるいはそれらの組み合わせの間での、物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合には、イオン結合、非イオン結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水性相互作用などが含まれる。物理的相互作用（結合）は、直接的または間接的であり得、間接的なものは、別のタンパク質または化合物の効果を介するかまたは起因する。直接的な結合とは、別のタンパク質または化合物の効果を介してもまたはそれらに起因しても起こらず、他の実質的な化学中間体を伴わない、相互作用をいう。
　従って、本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチドなどの生物学的因子に対して「特異的に」相互作用する（または結合する）「因子」（または、薬剤、検出剤等）とは、そのポリヌクレオチドまたはそのポリペプチドなどの生物学的因子に対する親和性が、他の無関連の（特に、同一性が30％未満の）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対する親和性よりも、代表的には同等またはより高いか、好ましくは有意に（例えば、統計学的に有意に）高いものを包含する。そのような親和性は、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイ、結合アッセイなどによって測定することができる。
　本明細書において第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）とは、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して、第二の物質または因子以外の物質または因子（特に、第二の物質または因子を含む試料中に存在する他の物質または因子）に対するよりも高い親和性で相互作用する（または結合する）ことをいう。物質または因子について特異的な相互作用（または結合）としては、例えば、核酸におけるハイブリダイゼーション、タンパク質における抗原抗体反応、酵素－基質反応など、核酸およびタンパク質の反応、タンパク質－脂質相互作用、核酸－脂質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。従って、物質または因子がともに核酸である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に相互作用する」ことには、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して少なくとも一部に相補性を有することが包含される。また例えば、物質または因子がともにタンパク質である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）こととしては、例えば、抗原抗体反応による相互作用、レセプター－リガンド反応による相互作用、酵素－基質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。2種類の物質または因子がタンパク質および核酸を含む場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）ことには、抗体と、その抗原との間の相互作用（または結合）が包含される。このような特異的な相互作用または結合の反応を利用することにより、試料中の対象物の検出または定量お行うことができる。
　本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチド発現の「検出」または「定量」は、例えば、検出剤、検査剤または診断剤への結合または相互作用を含む、mRNAの測定および免疫学的測定方法を含む適切な方法を用いて達成され得る。分子生物学的測定方法としては、例えば、ノーザンブロット法、ドットブロット法またはPCR法などが例示される。免疫学的測定方法としては、例えば、方法としては、マイクロタイタープレートを用いるELISA法、RIA法、蛍光抗体法、発光イムノアッセイ（LIA）、免疫沈降法（IP）、免疫拡散法（SRID）、免疫比濁法（TIA）、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが例示される。また、定量方法としては、ELISA法またはRIA法などが例示される。アレイ（例えば、DNAアレイ、プロテインアレイ）を用いた遺伝子解析方法によっても行われ得る。DNAアレイについては、（秀潤社編、細胞工学別冊「DNAマイクロアレイと最新PCR法」）に広く概説されている。プロテインアレイについては、NatGenet．2002Dec;32 Suppl:526－532に詳述されている。遺伝子発現の分析法としては、上述に加えて、RT－PCR、RACE法、SSCP法、免疫沈降法、two－hybridシステム、invitro翻訳などが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなさらなる分析方法は、例えば、ゲノム解析実験法・中村祐輔ラボ・マニュアル、編集・中村祐輔羊土社（2002）などに記載されており、本明細書においてそれらの記載はすべて参考として援用される。
　本明細書において「発現量」とは、目的の細胞、組織などにおいて、ポリペプチドまたはmRNA等が発現される量をいう。そのような発現量としては、本発明の抗体を用いてELISA法、RIA法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などの免疫学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明ポリペプチドのタンパク質レベルでの発現量、またはノーザンブロット法、ドットブロット法、PCR法などの分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのmRNAレベルでの発現量が挙げられる。「発現量の変化」とは、上記免疫学的測定方法または分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのタンパク質レベルまたはmRNAレベルでの発現量が増加あるいは減少することを意味する。あるマーカーの発現量を測定することによって、マーカーに基づく種々の検出または診断を行うことができる。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「減少」または「抑制」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における減少、または減少させる活性をいう。減少のうち「消失」した場合は、活性、発現産物等が検出限界未満になることをいい、特に「消失」ということがある。本明細書では、「消失」は「減少」または「抑制」に包含される。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「増加」または「活性化」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における増加または増加させる活性をいう。
　本明細書において「インビボ」（in　vivo）とは、生体の内部をいう。特定の文脈において、「生体内」は、目的とする物質が配置されるべき位置をいう。
　本明細書において「インビトロ」（in　vitro）とは、種々の研究目的のために生体の一部分が「生体外に」（例えば、試験管内に）摘出または遊離されている状態をいう。インビボと対照をなす用語である。
　本明細書において「エキソビボ」（ex vivo）とは、ある処置について、体外で行われるがその後体内に戻されることが意図される場合、一連の動作をエキソビボという。本発明においても、生体内にある細胞を本発明の薬剤で処置して再度患者に戻すような実施形態を想定することができる。
　本明細書において、ある医薬成分（例えば、本発明の抗体等、例えば抗FSTL１抗体）と別の医薬成分（例えば、抗PD-L1抗体等）とを「併用」することは、同時（共存）投与および連続投与を含むことを意図している。連続投与は、治療剤（１種または複数種）と本発明の抗体等（１種またな複数種）を種々の順序で対象に投与することを包含することを意図する。
　ある医薬成分（例えば、本発明の抗体等、例えば抗FSTL１抗体）と別の医薬成分（例えば、抗PD-L1抗体等）とを「併用」して投与するための薬剤は、「併用剤」と呼ばれることがある。
　本明細書において「キット」とは、通常2つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬、抗体、標識、説明書など）が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが試薬キットとして使用される場合、キットには、通常、検査薬、診断薬、治療薬、抗体等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。
　本明細書において「指示書」は、本発明を使用する方法を医師または他の使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本発明の検出方法、診断薬の使い方、または医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、投与部位として、経口、食道への投与（例えば、注射などによる）することを指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（FDA）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（package　insert）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば
、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。
　（好ましい実施形態）
　以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本発明の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
　（抗ＦＳＴＬ１抗体）
　１つの局面において、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物（本明細書において総称して「抗ＦＳＴＬ１抗体等」あるいは「本発明の抗体等」ということがある）であって、該抗体は、配列番号２５１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１７０位または１４８～１６２位、１９３～２２８位または１９３～２１６位および２０５～２２８位、ならびに２３３～２８９位または２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。１つの好ましい実施形態では、配列番号２５１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位または２７２～２８９位の領域にエピトープを有していてもよい。
　本発明における抗体について、エピトープは、該当する領域中の連続するまたは不連続の、５アミノ酸以上、あるいは６アミノ酸以上、７アミノ酸以上、８アミノ酸以上、９アミノ酸以上、１０アミノ酸以上、１１アミノ酸以上、１２アミノ酸以上の領域あるいはそれらの組合せが該当し得る。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号２５０（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、２０５～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは動物試験において薬効が確認されているものを含む。なお、＃６－５５、＃７－３４、＃１３については、１４８－１６２部位を認識するものと理解される。また、＃５－２、＃５－３、＃５－８．＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－６、＃８－８は、アミノ酸２７２～２８９位を認識するものと理解され、＃７および＃１０はアミノ酸２０５位～２２８位を認識するものと理解され、＃２２はアミノ酸１９３位～２１６位を認識するものと理解され、＃３３はアミノ酸４８位～１００位を認識するものと理解される。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号２５０（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位および２０５～２２８位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは、より活性が強いことが確認されている抗体が認識するものを含む。別の好ましい実施形態では、配列番号２５１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８～１００位、１４８～１６２位または２０５～２２８位の領域にエピトープを有する。理論に束縛されることは望まないが、これらのエピトープはインビトロ試験またはインビボ試験において薬効が確認されているものを含む。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定のＣＤＲを有する。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、全長配列のＣＤＲを含む任意の配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいは、本発明の特定の抗体に関する配列の可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、そのフレームワーク領域において、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、１７個、もしくは、２０個、またはそれ以上の置換、不可、もしくは、欠失を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。より特定すると、そのような特定のＣＤＲについて、重鎖CDR１，２，３、軽鎖CDR１，２，３の具体的な例としては、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号２５５；重鎖：配列番号２５７）、＃５－３（軽鎖：配列番号２５９；重鎖：配列番号２６１）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号２６３；重鎖：配列番号２６５）、＃５－１０（軽鎖：配列番号２６７；重鎖：配列番号２６９）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２７１；重鎖：配列番号２７３）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃８－４（軽鎖：配列番号２８７；重鎖：配列番号２８９）、＃８－７（軽鎖：配列番号２９１；重鎖：配列番号２９３）、＃８－８（軽鎖：配列番号２９５；重鎖：配列番号２９７）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）、＃２２（軽鎖：配列番号３１１；重鎖：配列番号３１２）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、該抗体の変異体であって、該変異体において該抗体のフレームワークに１または数個の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まない、変異体であってもよい。抗体の製造等については、本明細書の他の箇所に記載された実施形態および／または当該分野で公知の手法を用いることができる。なお、本発明の治療または予防の目的では、このような抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、好ましくは、ＦＳＴＬ１またはその情報伝達経路の下流の抑制活性を有することが好ましい。そのような活性は、ＦＳＴＬ１の発現量またはその活性をみるか、あるいはがん細胞株を直接使用して細胞の増殖阻害、転移活性阻害、骨転移阻害、ＭＳＣの免疫抑制や免疫不全等の免疫破綻を増強する活性（例えば、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得）の阻害、免疫関連細胞の免疫抑制性化または免疫不全化（例えば、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増加、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞免疫抑制活性の増加および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の増殖・誘導等による疲弊T細胞の増加の阻害、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）での細胞傷害活性、またはモデル動物に移植して腫瘍の退縮を観察する等をみることで確認してもよい。これらの手法は、当該分野において周知であり、本明細書において使用される手法を用いてもよい。本発明のこれらの抗体は、特定の実施形態では、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（single　chain（Fv）2）、およびscFv－Fcから選択される抗体でありうる。
　ここで、各抗体クローンのＣＤＲのアミノ酸配列を、重鎖および軽鎖の配列中の下線として示す。
＃5-2：
軽鎖（L鎖；配列番号２５５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
重鎖（H鎖；配列番号２５７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTGYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGSYVGDIDAWGHGTEVIVSS
＃5-3
L鎖（配列番号２５９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSVPVTVIYNNNNRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYYCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２６１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFSFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-8
L鎖（配列番号２６３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２６５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGTAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-10
L鎖（配列番号２６７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYVGSYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSAGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２６９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTTYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNDLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃5-43
L鎖（配列番号２７１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２７３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGGTGYGAAVDGRATISKDSGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYDWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃6-55
L鎖（配列番号２７５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSAIPGETVKITCSGGGNNYGWYQQRSPGSAPVTVIYYNDNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQADDEAIYYCGSWDSNTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２７７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFTSVTMQWVRQAPGKGLEWVASVCSGSSTYYAPAVKGRATISRDNGQSTVRLQLSNLRPEDTGTYYCAKIAGRARWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃7-34
L鎖（配列番号２７９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNNNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQAEDEAVYYCGSYEGSTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２８１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃8-1
L鎖（配列番号２８３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSSGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２８５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-4
L鎖（配列番号２８７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASSQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNDNKPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYFCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２８９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTAYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃8-7
L鎖（配列番号２９１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２９３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-8
L鎖（配列番号２９５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQVEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号２９７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃７
L鎖（配列番号２９９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSNIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGGYDGSTDAAFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号３０１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFSIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGEYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSP
＃10
L鎖（配列番号３０３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKLTCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDGSRDAGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号３０５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFRIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGRYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSS
＃13
L鎖（配列番号３０７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNNRPSNIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYYCGSYDSSSDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号３０９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃22
L鎖（配列番号３１１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYWDDRRPSDIPSRFSGSKSGSIHTLTITGVQADDEAVYLCGNAVRSGTGYVGVFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号３１３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSNGMAWVRQAPGKGLELVARINSSGSYTNYGAAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKGASGYGAYPGNIDAWGHGTEVIVSS
＃33
L鎖（配列番号３１５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVEITCSGDSSYYGWFQQKSPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYCGGYDSSTYDGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号３１７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSFNMNWVRQAPGKGLEYVAEISGTGSSTYYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTATYFCARGDGAYSIDAWGHGTEVIVSS
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、ＦＳＴＬ１に対するより強い結合活性が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い結合活性を保持することが期待され、同様の薬効が奏されることが理解される。
　さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、より強い薬効が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い薬効を保持することが期待されることが理解される。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定の可変領域の全長を有する。そのような特定の可変領域は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号２５５；重鎖：配列番号２５７）、＃５－３（軽鎖：配列番号２５９；重鎖：配列番号２６１）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号２６３；重鎖：配列番号２６５）、＃５－１０（軽鎖：配列番号２６７；重鎖：配列番号２６９）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２７１；重鎖：配列番号２７３）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃８－４（軽鎖：配列番号２８７；重鎖：配列番号２８９）、＃８－７（軽鎖：配列番号２９１；重鎖：配列番号２９３）、＃８－８（軽鎖：配列番号２９５；重鎖：配列番号２９７）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）、＃２２（軽鎖：配列番号３１１；重鎖：配列番号３１３）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号３４５；重鎖：配列番号３４７）、＃５－３（軽鎖：配列番３４９；重鎖：配列番号３５１）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号３５３；重鎖：配列番号３５５）、＃５－１０（軽鎖：配列番号３５７；重鎖：配列番号３５９）、＃５－４３（軽鎖：配列番号３６１；重鎖：配列番号３６３）、＃６－５５（軽鎖：配列番号３６５；重鎖：配列番号３６７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３６９；重鎖：配列番号３７１）、＃８－１（軽鎖：配列番号３７３；重鎖：配列番号３７５）、＃８－４（軽鎖：配列番号３７７；重鎖：配列番号３７９）、＃８－７（軽鎖：配列番号３８１；重鎖：配列番号３８３）、＃８－８（軽鎖：配列番号３８５；重鎖：配列番号３８７）、＃７（軽鎖：配列番号３８９；重鎖：配列番号３９１）、＃１０（軽鎖：配列番号３９３；重鎖：配列番号３９５）、＃１３（軽鎖：配列番号３９７；重鎖：配列番号３９９）、＃２２（軽鎖：配列番号４０１；重鎖：配列番号４０３）および＃３３（軽鎖：配列番号４０５；重鎖：配列番号４０７）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号３６５；重鎖：配列番号３６７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３６９；重鎖：配列番号３７１）、＃８－１（軽鎖：配列番号３７３；重鎖：配列番号３７５）、＃７（軽鎖：配列番号３８９；重鎖：配列番号３９１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３９７；重鎖：配列番号３９９）および＃３３（軽鎖：配列番号４０５；重鎖：配列番号４０７）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号２５５；重鎖：配列番号２５７）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　一つの好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であり、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ヒト化抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり得る。好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４１８、４２０、４２２および４２４）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４３４、４３６、４３８および４４０）を有する。
　好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号４１０、４１２、４１４および４１６（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４１８、４２０、４２２および４２４（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４２６、４２８、４３０および４３２（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号４３４、４３６、４３８および４４０（Ｌ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４８０、４８２、４８４および４８６（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４８８、４９０、４９２および４９４（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列、または該重鎖フレームワーク配列および該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４５５、４５６、４５７および４５８）および軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４５９、４６０もしくは４６３、４６１もしくは４６４および４６２）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を有する。好ましくは、重鎖フレームワーク配列は、Ｈ（２）のもの、すなわち配列番号４１８、４２０、４２２および４２４（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）またはその重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。本明細書において、Ｈ（２）を用いた場合、Ｈ（１）およびＨ（３）よりもＫＤ値がワンオーダー優れた活性がされたからである。また、好ましくは配列番号４３４、４３６、４３８および４４０（それぞれＬ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４５９、４６０もしくは４６３、４６１もしくは４６４および４６２）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。
　さらに好ましくは、ヒト化抗体は、配列番号４１０、４１２、４１４および４１６（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４１８、４２０、４２２および４２４（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４２６、４２８、４３０および４３２（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列または該重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４５５、４５６、４５７および４５８）と相違するアミノ酸を１個～８個（例えば、1個、2個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有し、配列番号４３４、４３６、４３８および４４０（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４８０、４８２、４８４および４８６（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４８８、４９０、４９２および４９４（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４５９、４６０もしくは４６３、４６１もしくは４６４および４６２）と相違するアミノ酸を１個～４個（例えば、1個、2個、３個または４個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有する。
　好ましい実施形態では、ヒト化抗体のバックミューテーションの際に考慮される、相違するアミノ酸の少なくとも１つ、さらに好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つは、Vernier残基から選択される。活性が最適化される限りＶｅｒｎｉｅｒ残基以外の変異が含まれていてもよいことが理解される。好ましい実施形態では、相違するアミノ酸のすべてが、Vernier残基から選択される。Ｖｅｒｎｉｅｒ残基については、例えば、特開２０１０－４８９５、Ｎｉｓｈｉｂｏｒｉ　Ｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Molecular　Immunology 43 (2006) 634-642等を参照することができ、これらの記載は本明細書において参考として援用される。
　前記Vernier残基は、ヒト化配列のＨ鎖のＦＲ１アミノ酸（配列番号４１８）２８位、３０位、ＦＲ２のアミノ酸（配列番号４２０）１２位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号４２２）２位、１０位、１３位、１７位および３２位、ならびにＬ鎖のＦＲ１（配列番号４３４）２０位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号４３８）１０位、１５位および３１位を含む。配列が異なる場合はＶｅｒｎｉｅｒ配列は変動し得ることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（１）－Ｌ（１）、Ｈ（２）－Ｌ（１）、Ｈ（３）－Ｌ（１）、Ｈ（１）－Ｌ（２）、Ｈ（２）－Ｌ（２）、Ｈ（３）－Ｌ（２）、Ｈ（１）－Ｌ（３）、Ｈ（２）－Ｌ（３）、Ｈ（３）－Ｌ（３）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４ならびＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のいずれかを有する。別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４１８、４２０、４２２および４２４）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４３４、４３６、４３８および４４０）を有する。
　別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号４１０、４１２、４１４および４１６（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４１８、４２０、４２２および４２４（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４２６、４２８、４３０および４３２（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体、ならびに配列番号４３４、４３６、４３８および４４０（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４８０、４８２、４８４および４８６（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４８８、４９０、４９２および４９４（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体を有する。
　さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号４１０、４１２、４１４および４１６（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４１８、４２０、４２２および４２４（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４２６、４２８、４３０および４３２（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号４３４、４３６、４３８および４４０（ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号４８０、４８２、４８４および４８６（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号４８８、４９０、４９２および４９４（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列からなるフレームワーク配列または該フレームワーク配列において１～１０アミノ酸、１～９アミノ酸、１～８アミノ酸、１～７アミノ酸、１～６アミノ酸、１～５アミノ酸、１～４アミノ酸、１～３アミノ酸、１～２アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む配列を含む。
　本発明の一実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを細胞に導入することによって、形質転換体を作成できる。この形質転換体を用いれば、本発明の実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体を作製できる。形質転換体は、ヒトまたはヒトを除く哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、サル等）の細胞であってもよい。哺乳動物細胞としては、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO細胞)、サル細胞COS-7などが挙げられる。または、形質転換体はEscherichia属菌、酵母等であってもよい。
　上記のベクターとしては、例えば大腸菌由来のプラスミド（例えばpET-Blue）、枯草菌由来のプラスミド（例えばpUB110）、酵母由来プラスミド（例えばpSH19）、動物細胞発現プラスミド（例えばpA1-11、pcDNA3.1-V5/His-TOPO）、λファージなどのバクテリオファージ、ウイルス由来のベクターなどを用いることができる。これらのベクターは、プロモーター、複製開始点、または抗生物質耐性遺伝子など、蛋白質発現に必要な構成要素を含んでいてもよい。ベクターは発現ベクターであってもよい。
　上記のポリヌクレオチドまたはベクターの細胞への導入方法としては、例えば、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、エレクトロポレーション法、アデノウイルスによる方法、レトロウイルスによる方法、またはマイクロインジェクションなどを使用できる（改訂第4版新遺伝子工学ハンドブック, 羊土社(2003):152-179.）。抗体の細胞を用いた生産方法としては、例えば、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):128-142."に記載の方法を使用できる。抗体の精製においては、例えば、硫酸アンモニウム、エタノール沈殿、プロテインA、プロテインG、ゲルろ過クロマトグラフィー、陰イオン、陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、またはレクチンクロマトグラフィーなどを用いることができる（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):27-52.）。
　（医薬、抗がん剤）
　１つの局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む医薬を提供する。本発明の医薬において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、医薬として使用するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の医薬用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、ＦＳＴＬ１に関連する疾患を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤を提供する。本発明の抗がん剤において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、がんの治療または予防のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがんの治療または予防のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がんを処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移の治療剤または予防剤を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を治療または予防するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍を治療用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　本発明が対象とする疾患は、がんであり、例えば、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫およびそれらの転移性の悪性腫瘍を挙げることができるがそれらに限定されない。また、これらの癌は、SNAILおよび／またはFSTL1を高発現する癌種であってもよい。なお、これらのSNAILおよび／またはFSTL1の発現については、
https://www.oncomine.com/resource/login.html
で提供されるOncomineのヒト腫瘍組織解析情報サイトにおいて得られる情報（以下の表１Ａを参照）に基づいて、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫に高発現がみられることが説明されていることから、これらの癌種でも実施例で実証されたものと同様に効果があることが理解される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
（ONCOMINEdata）
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むがん細胞の転移の阻害剤を提供し、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移、特に骨転移、肺転移の阻害をもなし得る阻害剤を提供する。
　この局面において、本発明は、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）を阻害するため、特に骨転移、肺転移の阻害のための方法を提供する。特に、骨転移を阻害することは従来きわめて困難といわれてきたところ、本明細書中の実施例において示されるようにこれを顕著に阻害することができることが見出されていることから、この点においても、本発明の優位性が見出される。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の阻害剤を提供する。免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導する間葉系幹細胞の誘導の概念も包含する。このような免疫抑制能の高いＭＳＣは、活性化MSCまたは癌関連MSCとしても知られている。理論に束縛されることを望まないが、Snail陽性癌細胞等から分泌されたFSTL1は、MSCのいわゆる前駆細胞に作用して、MSCが免疫抑制性細胞の前駆細胞を免疫抑制性の免疫関連細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞）へと分化させる因子ならびに／または増殖を促進する因子および／もしくはその免疫抑制活性を増強する因子を分泌させそれによって、いわゆる前駆細胞が免疫抑制性細胞となることによって、免疫抑制状態となっていると考えられる。そこで、本願発明のような抗FSTL１抗体を作用させることによって、FSTL１の作用が抑制され、結果として、免疫抑制状態が解除されると考えられる。
　したがって、別の局面では、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤を提供する。免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、免疫抑制細胞の誘導の現象も含むため、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻活性のある細胞の誘導の阻害剤の概念を含むことになる。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、免疫抑制活性の獲得および／または増強を阻害するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の阻害剤における免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導（増加または分化）からなる群より選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ、より好ましくは４つ、より好ましくは５つ、より好ましくは６つ、より好ましくは７つ、より好ましくは８つ、より好ましくは９つ、より好ましくは１０、より好ましくは１１、より好ましくはすべてを含む。
　好ましい実施形態では、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物に加え、さらに細胞殺傷性薬剤を含む。したがって、本発明の組成物、剤、医薬等（治療薬または予防薬等）は複合分子を含みうるあるいは結合したものであるといえる。
　１つの局面において、本発明の併用剤は、FSTL1抑制剤およびPD-L1抑制剤の他に、別のがん治療と組み合わせてもよい。具体的には、別のがん治療は、本発明の抗がん剤とは別の抗がん剤、手術療法もしくは放射線療法またはそれらの組合せを含む。
　癌に対する化学療法および放射線療法は、リンパ球の増殖を激しく減少させるという副作用が不可避である。一つの実施形態では、本発明の組成物の投与は、減少したリンパ球細胞を刺激、増殖させる効果を示すと共に、通常の化学療法に付随する激烈な副作用を最小限に抑制することができる。また、放射線療法についても同様である。また、本発明の組成物との併用によって、化学療法剤の用量または照射放射線量を通常使用される用量あるいは照射量から大幅に減少させることができる。本発明の癌治療組成物は、本発明の抗がん剤とは別の、既存のまたは新規の化学療法剤と併用あるいは合剤化することができる。そのような化学療法剤として、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。さらに、患者のQOL回復のための癌治療補助剤である白血球(好中球)減少症治療薬、血小板減少症治療薬、制吐剤、癌性疼痛治療薬と併用あるいは合剤化ができる。
　本明細書において、「細胞殺傷性薬剤」は、細胞膜を溶解する可能性のある薬剤である。細胞殺傷性薬剤は、ペプチドの場合は細胞傷害性ペプチドと呼ばれ、細胞傷害性ペプチドは当該分野において種々の呼称があり、例えば、「溶解性ペプチド成分」、「細胞殺傷性配列」は、「細胞溶解性ペプチド（配列）」または「細胞膜溶解性ペプチド（配列）」などとも称されるが、これらは本発明の目的では同義で用いられる。このような細胞傷害性薬剤の代表例としては、GailD.et al., Cancer Res 2008;68:9280-9290.; Ian Krop and Eric P. Winer, ClinCancerRes; 20(1); 1-6.およびK Naito et al., Leukemia(2000) 14, 1436-144に列挙されたものを挙げることができ、メイタンシノイド（Maytansinoid）、エムタンシン（emtansine）、CMA-676に含まれるN-アセチルーγ－カリケアミシンジメチルヒドラジド（NAc-γカリケアミシン、DMH）などを挙げることができるがこれらに限定されない。ペプチドとしては、代表的な細胞殺傷性ペプチドとしては、細胞膜溶解性ペプチド、細胞膜電位不安定化ペプチド、細胞膜溶解・核酸結合ペプチドおよびミトコンドリア膜崩壊ペプチドを挙げることができるがこれらに限定されない。
　必要に応じて、このような細胞殺傷性薬剤は抗体等の本発明の結合剤に対してスペーサーで結合されていてもよい。本明細書において「スペーサー」とは、橋をかけるように，鎖式高分子の分子間で化学結合を形成させる部分をいい、リンカーとも称される。ペプチドのスペーサーとしては例えば、代表的には、Ｇ、Ｐからなる０～５アミノ酸の配列が挙げられるがこれに限定されない。スペーサーは必須ではなく、存在しなくてもよい。
　本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体および／もしくは抗体ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそれらのフラグメントもしくは機能的等価物と、細胞殺傷性薬剤との組み合わせは複合分子で提供されてもよい。このような分子を例示的に説明すると、爆薬部分に当たる、細胞傷害性部分と、弾頭部分にあたるがん細胞に対する特異性を担当する部分（たとえば、がん細胞に高発現している受容体に対して特異的に結合するペプチド・配列、代表的には抗体）とを組み合わせてできる分子と説明することができる。スペーサーを使用する場合、がん細胞特異的結合剤＋スペーサー＋細胞殺傷性薬剤から構成されることになる。本明細書では、任意のがん細胞特異的結合剤、任意のスペーサー、任意の細胞殺傷性薬剤を任意に組み合わせることができ、その製造法および使用法の例を記載する。このような分子は、化学合成法が通常であるが、ペプチドで構成される場合は遺伝子組換えにより強制発現させ精製する方法、あるいはこれと組み合わせた方法も可能である。
　本発明の使用について、治療しようとするがん細胞について、細胞表面のＦＳＴＬ１の発現および細胞殺傷性薬剤に対するがん細胞の傷害感受性を調べる。その結果をもとに弾頭と爆薬を選択し、そのがん細胞に最適な分子をデザインする。化学合成等により得られたオーダーメイドペプチドトキシンを必要に応じてアテロコラーゲン等のDDSと組み合わせ、局所投与または全身投与を行い治療することができる。
　本発明は、Snail陽性癌細胞における作用効果から見出されたものであるため、理論に束縛されることを望まないが、本発明の標的は、Snail陽性癌細胞に起因するがんを含みうる。癌細胞の一部がEMTを生じてSNAILを発現するので、そのような限られた数種の癌だけでなく、実に様々な癌種で“EMT”を生じた細胞がSNAILを発現するといわれている。そのようながんとしては、扁平上皮癌、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫を挙げることができるがこれらに限定されない。
　治療薬の投与経路は、治療に際して効果的なものを使用するのが好ましく、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、または経口投与等であってもよい。投与形態としては、例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤等であってもよい。抗体またはポリヌクレオチドを投与する場合には、注射剤として用いることが効果的である。注射用の水溶液は、例えば、バイアル、またはステンレス容器で保存してもよい。また注射用の水溶液は、例えば生理食塩水、糖(例えばトレハロース)、NaCl、またはNaOH等を配合してもよい。また治療薬は、例えば、緩衝剤(例えばリン酸塩緩衝液)、安定剤、アジュバント等の徐放剤等を配合してもよい。
　一般的に、本発明の組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等は、治療有効量の治療剤または有効成分、および薬学的に許容しうるキャリアもしくは賦形剤を含む。本明細書において「薬学的に許容しうる」は、動物、そしてより詳細にはヒトにおける使用のため、政府の監督官庁に認可されたか、あるいは薬局方または他の一般的に認められる薬局方に列挙されていることを意味する。本明細書において使用される「キャリア」は、治療剤を一緒に投与する、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このようなキャリアは、無菌液体、例えば水および油であることも可能であり、石油、動物、植物または合成起源のものが含まれ、限定されるわけではないが、ピーナツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油等が含まれる。医薬を経口投与する場合は、水が好ましいキャリアである。医薬組成物を静脈内投与する場合は、生理食塩水および水性デキストロースが好ましいキャリアである。好ましくは、生理食塩水溶液、並びに水性デキストロースおよびグリセロール溶液が、注射可能溶液の液体キャリアとして使用される。適切な賦形剤には、軽質無水ケイ酸、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等が含まれる。組成物は、望ましい場合、少量の湿潤剤または乳化剤、あるいはpH緩衝剤もまた含有することも可能である。これらの組成物は、溶液、懸濁物、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、持続放出配合物等の形を取ることも可能である。伝統的な結合剤およびキャリア、例えばトリグリセリドを用いて、組成物を座薬として配合することも可能である。経口配合物は、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン・ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的キャリアを含むことも可能である。適切なキャリアの例は、E．W．Martin,　Remington’s　PharmaceuticalSciences(MarkPublishing Company, Easton, U.S.A）に記載される。このような組成物は、患者に適切に投与する形を提供するように、適切な量のキャリアと一緒に、治療有効量の療法剤、好ましくは精製型のものを含有する。配合物は、投与様式に適していなければならない。これらのほか、例えば、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等を含んでいてもよい。
　本発明を医薬として投与する場合、種々の送達（デリバリー）系が知られ、そしてこのような系を用いて、本発明の治療剤を適切な部位（例えば、食道）に投与することも可能であり、このような系には、例えばリポソーム、微小粒子、および微小カプセル中の被包：治療剤（例えば、ポリペプチド）を発現可能な組換え細胞の使用、受容体が仲介するエンドサイトーシスの使用などがある。導入法には、限定されるわけではないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、および経口経路が含まれる。好適な経路いずれによって、例えば注入によって、ボーラス（bolus）注射によって、上皮または皮膚粘膜裏打ち（例えば口腔、直腸および腸粘膜など）を通じた吸収によって、医薬を投与することも可能であるし、必要に応じてエアロゾル化剤を用いて吸入器または噴霧器を使用しうるし、そして他の生物学的活性剤と一緒に投与することも可能である。投与は全身性または局所であることも可能である。本発明は腫瘍に直接投与することもできる。
　好ましい実施形態において、公知の方法に従って、ヒトへの投与に適応させた医薬組成物として、組成物を配合することができる。このような組成物は注射により投与することができる。代表的には、注射投与のための組成物は、無菌等張水性緩衝剤中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるリドカインなどの局所麻酔剤も含むことも可能である。一般的に、成分を別個に供給するか、または単位投薬型中で一緒に混合して供給し、例えば活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器中、凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として供給することができる。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌薬剤等級の水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて、分配することも可能である。組成物を注射によって投与しようとする場合、投与前に、成分を混合可能であるように、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルを提供することも可能である。
　本発明の抗体等、組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等を中性型または塩型あるいは他のプロドラッグ（例えば、エステル等）で配合することも可能である。薬学的に許容しうる塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する遊離型のカルボキシル基とともに形成されるもの、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの遊離型のアミン基とともに形成されるもの、並びにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、および水酸化第二鉄などに由来するものが含まれる。
　特定の障害または状態の治療に有効な本発明の治療剤の量は、障害または状態の性質によって変動しうるが、当業者は本明細書の記載に基づき標準的臨床技術によって決定可能である。さらに、場合によって、in　vitroアッセイを使用して、最適投薬量範囲を同定するのを補助することも可能である。配合物に使用しようとする正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重大性によっても変動しうるため、担当医の判断および各患者の状況に従って、決定すべきである。しかし、投与量は特に限定されないが、例えば、1回あたり0.001、1、5、10、15、100、または1000mg/kg体重であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。投与間隔は特に限定されないが、例えば、1、7、14、21、または28日あたりに1または2回投与してもよく、それらいずれか2つの値の範囲あたりに1または2回投与してもよい。投与量、投与間隔、投与方法は、患者の年齢や体重、症状、対象臓器等により、適宜選択してもよい。また治療薬は、治療有効量、または所望の作用を発揮する有効量の有効成分を含むことが好ましい。悪性腫瘍マーカーが、投与後に有意に減少した場合に、治療効果があったと判断してもよい。有効用量は、in　vitroまたは動物モデル試験系から得られる用量－反応曲線から推定可能である。
　本発明の一実施形態において「患者」は、ヒト、またはヒトを除く哺乳動物（例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ネズミ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、マーモセット、サル、またはチンパンジー等の1種以上）を含む。また患者は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌ陽性悪性腫瘍を発症していると判断または診断された患者であってもよい。このとき、判断または診断は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌの蛋白質レベルを検出することにより行われることが好ましい。
　本発明の医薬組成物または剤（治療剤もしくは予防剤等）はキットとして提供することができる。　特定の実施形態では、本発明は、本発明の組成物または医薬の1以上の成分が充填された、1以上の容器を含む、薬剤パックまたはキットを提供する。場合によって、このような容器に付随して、医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　本発明のキットはまた、本発明の抗体等、組成物、治療剤、予防剤または医薬として使用するタンパク質をコードする発現ベクターも含有することも可能であり、このタンパク質は、発現された後、生物学的に活性な複合体を形成するため、再構成されることも可能である。このようなキットは、好ましくはまた、必要な緩衝剤および試薬も含有する。場合によって、このような容器に付随して、キット使用のための指示書（添付文書）、並びに／あるいは医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　（併用剤）
　１つの局面において、本発明は、ＦＳＴＬ１抑制剤とＰＤ－Ｌ１抑制剤との組み合わせ物を提供する。理論に束縛されることを望まないが、本発明は、ＦＳＴＬ１の経路を抑制することに加え、ＰＤ－Ｌ１の経路を抑制することにより、骨転移モデルにおいて皮下腫瘍が消失するという顕著な効果が示されたことに例示されるように、予想外に顕著にがんの免疫抑制解除に対する効果が増強されたことに基づくものであり、実施例において示された抗体による例から、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＰＤ－Ｌ１抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＰＤ－Ｌ１のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の組合せ物では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。　１つの局面において、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物との組み合わせ物を提供する。
　この組み合わせ物は、実施例においても実証されているように、予想外に、癌に対する効果を示した。すなわち、骨転移モデルに対して、抗FSTL1抗体と一緒に免疫抑制解除抗体薬3種をそれぞれ同時に投与したところ、抗PD-L1抗体を併用した場合のみ抗FSTL1抗体の抗腫瘍効果は増強され、5匹中2 匹のマウスの皮下腫瘍が消失するという顕著な効果を示した。このことは、抗CTLA4抗体と抗PD-1抗体の併用では相乗効果は全く認められず、むしろ抗FSTL1抗体の薬効を打ち消してしまい、骨転移やMSC 増加を強く抑制することができなかった。すくなくとも骨転移モデルにおいてこれらの抗体は、骨転移を増強してしまう傾向があることが観察されたことから、PD-L1について特異的な効果であるといえ、免疫抑制解除抗体であるからといってみられる複合効果ではない。
　１つの実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号２５０（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１７０位（好ましくは１４８～１６２位）、１９３～２２８位または１９３～２１６位および２０５～２２８位ならびに２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。
　好ましい実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む。
　より好ましい実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む。
　さらに別の実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号３６５；重鎖：配列番号３６７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３６９；重鎖：配列番号３７１）、＃８－１（軽鎖：配列番号３７３；重鎖：配列番号３７５）、＃７（軽鎖：配列番号３８９；重鎖：配列番号３９１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３９７；重鎖：配列番号３９９）および＃３３（軽鎖：配列番号４０５；重鎖：配列番号４０７）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　一つの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であり、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ヒト化抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり得る。好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４１８、４２０、４２２および４２４）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４３４、４３６、４３８および４４０）を有する。
　１つの実施形態では、本発明で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Clone MIH5またはClone　10F.9G2のエピトープと同様のエピトープを有する。これらのエピトープについては、PD-L1-CD80結合領域と説明されており、J Immunol. 2013 Sep 1; 191(5): 2829-2836.（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3750086/）およびJ Immunol. 2011 Aug 1; 187(3): 1097-1105.（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3148082/）を参照することができる。例えば、これらの文献に記載の競合阻害法で競合し得る抗体であれば、本発明の代替の抗体であり得ることが理解される。
　あるいは別の実施形態では、本発明で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、PD-L1とPD-1の結合阻害能を有する。PD-L1とPD-1の結合阻害能は、例えば、Alison M. Paterson,*et　al., The Journal ofImmunology　 2011, 187: 1097-1105.に見出される方法で測定することができる。
　別の実施形態では、本発明で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、（抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む。
　別の実施形態では、本発明で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の可変領域の全長を含む。
　別の実施形態では、本発明で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の全長またはそのヒト化配列を含む。
　別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む医薬を提供する。本発明の医薬で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む抗がん剤を提供する。本発明の抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍の治療剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病、および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤を提供する。本発明のこれらの疾患の治療剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含むがん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移）の阻害剤を提供し、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移、特に骨転移、肺転移の阻害をもなし得る阻害剤を提供する。本発明のがん細胞の転移の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の阻害剤を提供する。本発明のＭＳＣの免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の増強の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤を提供する。本発明の免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの実施形態では、上記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、より好ましくは少なくとも６つ、より好ましくは少なくとも７つ、より好ましくは少なくとも８つ、より好ましくは少なくとも９つ、より好ましくは少なくとも１０、より好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、より好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、より好ましくはすべてを含む。
　１つの局面において、本発明の医薬、抗がん剤、治療剤または阻害剤は、別のがん治療と組み合わせてもよい。具体的には、別のがん治療は、本発明の抗がん剤とは別の抗がん剤、手術療法もしくは放射線療法またはそれらの組合せを含む。
　癌に対する化学療法および放射線療法は、リンパ球の増殖を激しく減少させるという副作用が不可避である。一つの実施形態では、本発明の組成物の投与は、減少したリンパ球細胞を刺激、増殖させる効果を示すと共に、通常の化学療法に付随する激烈な副作用を最小限に抑制することができる。また、放射線療法についても同様である。また、本発明の組成物との併用によって、化学療法剤の用量または照射放射線量を通常使用される用量あるいは照射量から大幅に減少させることができる。本発明の癌治療組成物は、本発明の抗がん剤とは別の、既存のまたは新規の化学療法剤と併用あるいは合剤化することができる。そのような化学療法剤として、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。さらに、患者のQOL回復のための癌治療補助剤である白血球(好中球)減少症治療薬、血小板減少症治療薬、制吐剤、癌性疼痛治療薬と併用あるいは合剤化ができる。
　１つの別の局面では、本発明は、ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤はＰＤ－Ｌ１抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤を提供する。抑制剤としては、実施例において示された抗体による例から、それぞれ独立して、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＰＤ－Ｌ１抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＰＤ－Ｌ１のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の抗がん剤物では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。
　好ましくは、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤を提供する。このような抗がん剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むが、使用形態が、併用であるものであり、そのような併用は例えば、キットに記載されあるいは添付文書において記載される。本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　他の局面では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＰＤ－Ｌ１抑制剤はＦＳＴＬ抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤を提供する。抑制剤としては、実施例において示された抗体による例から、それぞれ独立して、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＰＤ－Ｌ１抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＰＤ－Ｌ１のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の抗がん剤では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。
　好ましくは、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤を提供する。本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの局面では、本発明は、有効量のＦＳＴＬ１抑制剤と有効量のＰＤ－Ｌ１抑制剤とを組み合わせて投与する工程を含むがんを治療または予防するための方法を提供する。理論に束縛されることを望まないが、本発明の方法では、ＦＳＴＬ１の経路を抑制することに加え、ＰＤ－Ｌ１の経路を抑制することにより、皮下腫瘍が消失するという顕著な効果が示されたことに例示されるように、予想外に顕著にがんの免疫解除抑制に対する効果が増強されたことに基づくものであり、実施例において示された抗体による例から、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＰＤ－Ｌ１抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＰＤ－Ｌ１のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の方法では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。
　好ましくは、がんを治療または予防するための方法であって、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量とを組み合わせて、必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法を提供する。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物とは、同時に投与してもよく別々に（別時に）投与してもよい。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物とは、合剤とされてもよく、別々の剤型として投与されてもよい。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物とは、同じ経路で投与されても別経路で（例えば、経口および静脈内投与）投与されてもよい。
　（一般技術）
　本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Sambrook　J.　et　al.(1989).　Molecular　Cloning:　A　Laboratory　Manual,Cold　Spring　Harborおよびその3rd　Ed.(2001);　Ausubel,　F.M.(1987).Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;　Ausubel,F.M.(1989).　Short　Protocols　inMolecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;Innis,M.A.(1990).PCR　Protocols:　A　Guide　to　Methods　and　Applications,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1992).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Ausubel,F.M.　(1995).Short　Protocols　in　MolecularBiology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Innis,M.A.　et　al.(1995).PCR　Strategies,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1999).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　fromCurrent　Protocols　in　Molecular　Biology,Wiley,　and　annual　updates;　Sninsky,　J.J.et　al.(1999).　PCR　Applications:　Protocols　for　Functional　Genomics,　Academic　Press、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
　人工的に合成した遺伝子を作製するためのDNA合成技術および核酸化学については、例えば、Gait,　M.J.(1985).　Oligonucleotide　Synthesis:A　Practical　Approach,IRL　Press;　Gait,M.J.(1990).　Oligonucleotide　Synthesis:　A　Practical　Approach,　IRL　Press;　Eckstein,F.(1991).　Oligonucleotides　and　Analogues:APractical　Approach,　IRL　Press;Adams,　R.L.　et　al.(1992).　The　Biochemistry　of　the　Nucleic　Acids,　Chapman&Hall;　Shabarova,Z.　et　al.(1994).　Advanced　Organic　Chemistry　of　Nucleic　Acids,　Weinheim;Blackburn,　G.M.et　al.(1996).　Nucleic　Acids　in　Chemistry　and　Biology,　Oxford　University　Press;　Hermanson,G.T.(I996).Bioconjugate　Techniques,　Academic　Pressなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
　例えば、本明細書において、当該分野に知られる標準法によって、例えば自動化DNA合成装置（Biosearch、Applied　Biosystems等から市販されるものなど）の使用によって、本発明のオリゴヌクレオチドを合成することも可能である。例えば、Steinら（Steinet　al.,　1988,　Nucl.　Acids　Res.　16:3209）の方法によって、ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドを合成することも可能であるし、調節孔ガラスポリマー支持体（Sarinet　al.,1988,　Proc.　Natl.　Acad.　Sci.　USA　85:7448-7451）等の使用によって、メチルホスホネート・オリゴヌクレオチドを調製することも可能である。
　本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも1つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「2つの値の範囲内」と明記した場合、その範囲には2つの値自体も含む。
　本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
　以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、請求の範囲によってのみ限定される。
［実施例］
　以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　＜実施例１＞抗FSTL1抗体の作製
　3ヵ月齢のボリスブラウン3羽に対して、1羽当たり1回に抗原であるヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）（配列番号４０８）を1羽あたり100μgずつ腹腔に免疫した。1次免疫には完全フロイントアジュバンド（Wako社、014-09541）、2次、3次および4次免疫には不完全フロイントアジュバンド（Wako社、011-09551）を用いて抗原を腹腔に免疫した。5次免疫はPBS（phosphate　buffered　saline）に希釈した抗原を静脈注射した。隔週で翼下静脈より採血を行い、ELISAによって抗体価の確認を行った。3羽に対して4次免疫まで実施し、最も抗体価の上昇が見られた個体1羽に対して、5次免疫を行い、5次免疫を最終免疫とした。最終免疫3日後、ニワトリの脾臓を回収し、Ficoll　paque　PLUS（GE　Healthcare社、17-1440-03）を用いた密度勾配遠心によりリンパ球を単離し、TRIzole　Reagent（Life　Technologies、15596026）を用いてRNAを抽出した。抽出したRNAからPrimeScript　II　1st　Strand　cDNA　Synthesis　Kit（TAKARA、6210A）を用いたRT-PCRによりcDNAの合成を行い、scFvファージライブラリーを作製した。発現ベクターはpPDSを使用した。scFvファージライブラリーの作製は、参考文献：“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。
　scFv　ファージライブラリーを用いてパニングを行いFSTL1特異的なファージの濃縮を行った。パニングに用いた抗原はヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）のみ、またはヒト　FSTL1（R&D　Systems社、Cat#　1694-FN-050）およびマウスFSTL1（R&D　Systems　Cat#1738-FN-050）の2種のパニング用の抗原を交互に使用することでマウスにも交差反応性を持つ抗体を取得した。パニングは参考文献“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。5回パニングを行った後、ライブラリーの反応性を、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1を固相化したプレートを用いたELISAによって確認し、反応性が上昇し始めたライブラリーからファージのスクリーニングを行った。scFvファージ抗体のサンプル調製では、ファージを大腸菌に感染させ、アンピシリン（50μg/ml、nacalai、02739-32）を含む2×YT　Agar　plateにプレーティングし、得られたコロニーをアンピシリン含有2×YT液体培地中で培養した。ヘルパーファージを感染させた後、アンピシリン（50μg/ml）、カナマイシン（25μg/ml、明治製菓株式会社、GS1-RSS）、IPTG（100μg/ml、nacalai、19742-94）含有2×YT液体培地中でファージの誘導を行った。得られた培養上清中のscFvファージ抗体の反応性を、抗原固相化プレートを用いたELISAによって確認した。
　ELISAによるスクリーニングでは、PBSで希釈した１μg／mlのヒトFSTL1またはマウスFSTL1を50μｌ／ウェルで96ウェルプレート（Nunc社、Cat.　No.　442404、）に入れ、一晩、４℃で抗原を固相化した。固相化の後、25％Block　Ace（DSファーマバイオメディカル、UK-B80）を含むＰＢＳでウェルをブロッキングし、scFvファージ抗体を含む培養上清を反応させた。二次抗体として、HRP標識Goat　anti-mouse　IgG　(H+L)　（KPL社、Cat.　No.474-1806）を10％Block　Aceに1000倍希釈した溶液に加え、基質として用いたOPDの発色をプレートリーダー（BIO-RAD社、Model　680）で490nmおよび630nmの吸光度を測定した。以上の条件を表1にまとめる。
　（表１　スクリーニング条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
（Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。）
　ELISAにて得られた陽性クローンについて、ユーロフィンジェノミクスに外注し、DNAシークエンスを行い、配列を決定した。
　配列の異なるクローンについて、scFv抗体をコードするDNA鎖を鋳型にして、ニワトリ由来抗体遺伝子H鎖可変領域及びL鎖可変領域の増幅をPCRで行った後、PCR産物をSacII（BioLabs社,　Cat#R0157S）及びNheI制限酵素処理（BioLabs社,　Cat#R0131S）した。次に、H鎖可変領域及びL鎖可変領域のそれぞれについて、同じように制限酵素処理したマウス/ニワトリキメラ抗体（IgG1）発現ベクター（H鎖用発現ベクター：pcDNA4/myc-His、L鎖用発現ベクター：pcDNA3/myc-His、Invitrogen）に組換えた。作製したH鎖及びL鎖のコンストラクトをCHO細胞にトランスフェクトした後、培養上清をヒトまたはマウス　FSTL1タンパク質を固相したELISAで反応性の確認を行った。使用したマウスキメラ発現ベクターはTateishi　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2008　Apr;70(4):　397-400に記載されているベクターを使用した。
　以上により得られた抗体クローン（ニワトリ-マウスキメラ抗体）のうち、クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３を以下の実験で使用した。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号２５５、２５９、２６３、２６７、２７１、２７５、２７９、２８３、２８７、２９１、２９５、２９９、３０３、３０７、３１１、３１５であり、全長アミノ酸配列は、配列番号３４５、３４９、３５３、３５７、３６１、３６５、３６９、３７３、３７７、３８１、３８５、３８９、３９３、３９７、４０１、４０５であり、核酸配列は順に配列番号２５４、２５８、２６２、２６６、２７０、２７４、２７８、２８２、２８６、２９０、２９４、２９８、３０２、３０６、３１０、３１４であり、全長核酸配列は、配列番号３４４、３４８、３５２、３５６、３６０、３６４、３６８、３７２、３７６、３８０、３８４、３８８、３９２、３９６、４００、４０４である。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号２５７、２６１、２６５、２６９、２７３，２７７、２８１、２８５、２８９、２９３、２９７、３０１、３０５、３０９、３１３、３１７であり、全長アミノ酸配列は、配列番号３４７、３５１、３５５、３５９、３６３、３６７、３７１、３７５、３７９、３８３、３８７、３９１、３９５、３９９、４０３、４０７であり、核酸配列は順に配列番号２５６、２６０、２６４、２６８、２７２、２７６、２８０、２８４、２８８、２９２、２９６、３００、３０４、３０８、３１２、３１６であり、全長核酸配列は、配列番号３４６、３５０、３５４、３５８、３６２、３６６、３７０、３７４、３７８、３８２、３８６、３９０、３９４、３９８、４０２、４０６である。
　上記の抗体クローンを大量に製造するため、作製したH鎖およびL鎖のコンストラクトをほ乳類培養細胞にExpi293Expression　system(Invitrogen社、Cat#A14635)を利用しトランスフェクトした後、発現した抗体の精製をProteinG　Sepharose　4　Fast　Flow（GE　healthcare社、17-018-02）を用いて行った。得られた各クローンの精製抗体のFSTL1に対する結合活性の測定については、実施例２で示す。
　＜実施例２＞精製抗体のFSTL1に対する結合活性評価
　以下の条件でELISAを行い、取得した上記の抗体クローンのFSTL1に対する反応性を評価した。
　（表２　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗ジニトロフェニル（DNP）抗体（ネガティブコントロール）、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　結果、ヒトFSTL1に対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#7-34、#5-10＞#5-3＞#5-8＞#5-43　となった（図３１A）。また、抗体クローンの中で＃6-55と＃7-34はヒトおよびマウスFSTL1の両方に特異的かつ同程度の強い結合活性を示した（図３１B）。
　図３２および図３３では、スクリーニングおよび抗体精製の時期が異なるクローンに関しても表３の条件で結合活性を評価した結果を示した。
　（表３　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗DNP抗体、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#7、#10、#13、#22,#33
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　（結果）
　ヒトFSTLに対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#8-1＞#8-7＞#8-4＞#8-8　となった（図３２）。更に、ヒトおよびマウスFSTL1に対する結合活性を評価した結果、（図３３A）ヒトFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#13＞#8-1、#10＞#8-4＞#7、#33＞#5-8＞#22となった。（図３３B）マウスFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#10、#13＞#22＞#７＞#33＞#8-1となり、#8-1はごくわずかに結合活性を示した。#5-8、#8-4はマウスFSTL1に対して全く結合活性を示さなかった。
　＜実施例３＞抗体のエピトープマッピング
　本実施例では、上記実施例で得られた抗体のエピトープマッピングを行った。
　＜遺伝子合成＞
　ヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の合成にあたり、ヒトFSTL1遺伝子はNM_007085.4（配列番号２５０）を、マウスFSTL1遺伝子はNM_008047.5（配列番号２５２）の配列情報を参考に、C末端にアラニン残基3個とヒスチジン残基10個を付加したHisタグ付きのヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の配列設計を行った。更に、哺乳類細胞での発現を考慮して、コドンの最適化を行い、各遺伝子の両末端にプラスミド挿入用の核酸配列（配列番号３２４および３２５）をそれぞれ付加した遺伝子を設計し、合成はLife　Technologies社に外注した。元になったヒトおよびマウスFSTL1の核酸およびアミノ酸配列（配列番号２５０，２５１，２５２、２５３）および実際に遺伝子合成した核酸配列および翻訳後のアミノ酸配列（配列番号３１８，３１９，３２０，３２１）を下記に示す。
プラスミドへの挿入用の配列：N末側　5’-CGAACCCTTAAGCTTG-3’（配列番号３２４）
　　　　　　　　　　　　　　C末側　5’-CGTGGCATCTAGACA-3（配列番号３２５）
・ヒトFSTL1核酸配列（配列番号２５０）＜以下下線はリーダー配列である。＞
atgtggaaacgctggctcgcgctcgcgctcgcgctggtggcggtcgcctgggtccgcgccgaggaagagctaaggagcaaatccaagatctgtgccaatgtgttttgtggagccggccgggaatgtgcagtcacagagaaaggggaacccacctgtctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaactgcatcgagatgcctgcctcactggatccaaaatccaggttgattacgatggacactgcaaagagaagaaatccgtaagtccatctgccagcccagttgtttgctatcagtccaaccgtgatgagctccgacgtcgcatcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagcaactacagtgaaatcctagacaagtattttaagaactttgataatggtgattctcgcctggactccagtgaattcctgaagtttgtggaacagaatgaaactgccatcaatattacaacgtatccagaccaggagaacaacaagttgcttaggggactctgtgttgatgctctcattgaactgtctgatgaaaatgctgattggaaactcagcttccaagagtttctcaagtgcctcaacccatctttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggatgaaacgtatgcagatggagctgagaccgaggtggactgtaaccgctgtgtctgtgcctgtggaaattgggtctgtacagccatgacctgtgacggaaagaatcagaagggggcccagacccagacagaggaggagatgaccagatatgtccaggagctccaaaagcatcaggaaacagctgaaaagaccaagagagtgagcaccaaagagatctaa
・マウスFSTL1核酸配列（配列番号２５２）
atgtggaaacgatggctggcgctctcgctggtgaccatcgccctggtccacggcgaggaggaacctagaagcaaatccaagatctgcgccaatgtgttttgtggagctggcagggaatgtgccgtcacagagaagggggagcccacgtgcctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaacttcatagagatgcctgcctcactggatccaagatccaggttgattatgatgggcactgcaaagaaaagaagtctgcgagtccatctgccagcccagttgtctgctatcaagctaaccgcgatgagctccgacggcgcctcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagtaactacagtgagatcctagacaagtactttaagagctttgataatggcgactctcacctggactccagtgaattcctgaaattcgtggagcagaatgaaacagccatcaacatcaccacttatgcagatcaggagaacaacaaactgctcagaagcctctgtgttgacgccctcattgaactgtctgatgagaacgctgactggaaactcagcttccaagagttcctcaagtgcctcaacccatccttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggacgaaacctatgcagatggagctgagactgaggtggactgcaatcgctgtgtctgttcctgtggccactgggtctgcacagcaatgacctgtgatggaaagaatcagaagggggtccagacccacacagaggaggagaagacaggatatgtccaggaactccagaagcaccagggcacagcagaaaagaccaagaaggtgaacaccaaagagatctaa
・実施例で用いたヒトＦＳＴＬ１の核酸配列（３１８）
atgtggaagagatggctggccctggctctggcactggtggctgtggcttgggtgcgcgccgaggaagaactgcggagcaagagcaagatctgcgccaacgtgttctgcggagccggcagagaatgtgccgtgaccgagaagggcgagcctacctgcctgtgcatcgagcagtgcaagccccacaagaggcctgtgtgcggcagcaacggcaagacctacctgaaccactgcgagctgcaccgggatgcctgtctgaccggcagcaagatccaggtggactacgacggccactgcaaagaaaagaaaagcgtgtcccccagcgccagccccgtcgtgtgttaccagagcaacagggacgagctgcggcggagaatcatccagtggctggaagccgagatcatccccgacggctggttcagcaagggcagcaactacagcgagatcctggacaagtacttcaagaacttcgacaacggcgacagcagactggacagcagcgagttcctgaagttcgtggaacagaacgagacagccatcaacatcaccacctaccccgaccaggaaaacaacaagctgctgcggggcctgtgcgtggacgccctgattgagctgagcgacgagaacgccgactggaagctgagctttcaggaatttctgaagtgcctgaaccccagcttcaacccccccgagaagaagtgcgccctggaggacgagacatacgccgatggcgccgagacagaggtggactgcaacagatgcgtgtgcgcctgcggcaactgggtgtgcaccgccatgacctgcgacggcaagaatcagaagggcgcccagacccagaccgaagaagagatgaccagatacgtgcaggaactgcagaagcaccaggaaaccgccgaaaagaccaagcgggtgtccaccaaagagatcgccgctgcccaccaccatcaccatcatcaccaccaccattga
・実施例で用いたマウスFSTL1の核酸配列（配列番号３２０）
atgtggaagcggtggctggccctgagcctcgtgacaattgctctggtgcacggcgaggaagaacccagaagcaagagcaagatctgcgccaacgtgttctgcggagccggcagagaatgtgccgtgaccgagaagggcgagcctacctgcctgtgcatcgagcagtgcaagccccacaagaggcctgtgtgcggcagcaacggcaagacctacctgaaccactgcgagctgcaccgggatgcctgtctgaccggcagcaagatccaggtggactacgacggccactgcaaagagaagaagtccgccagccctagcgccagcccagtcgtgtgttaccaggccaaccgggacgagctgcggcggagactgattcagtggctggaagccgagatcatccccgacggctggttcagcaagggcagcaactacagcgagatcctggacaagtacttcaagagcttcgacaacggcgacagccacctggacagcagcgagttcctgaagttcgtggaacagaacgagacagccatcaacatcaccacctacgccgaccaggaaaacaacaagctgctgagaagcctgtgcgtggacgccctgatcgagctgagcgacgagaacgccgactggaagctgagctttcaggaatttctgaagtgcctgaaccccagcttcaacccccccgagaagaaatgcgccctggaagatgagacatacgccgacggcgccgagacagaggtggactgcaatagatgcgtgtgcagctgcggccactgggtgtgcaccgccatgacctgcgacggcaagaaccagaaaggcgtgcagacccacaccgaggaagagaaaaccggctacgtgcaggaactgcagaagcaccagggcaccgccgaaaagaccaagaaagtgaacaccaaagagatcgccgctgcccaccaccatcaccatcatcaccaccaccattga
・ヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号２５１）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEI
・マウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号２５３）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEI
・実施例で用いたヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号３１９）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEIAAAHHHHHHHHHH
・実施例で用いたマウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号３２０）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEIAAAHHHHHHHHHH
　＜発現ベクター構築＞
　次に、pcDNA3.4TOPO（登録商標）へのマルチクローニングサイトの挿入、およびFSTL1遺伝子の挿入方法を説明する。
　以下のマルチクローニングサイトを有する配列を、ファスマック社へ外注し、一本鎖DNAの合成を行った。それぞれの一本鎖DNAは相補的であり、合成した一本鎖DNAを二本鎖にした後に、pcDNATM3.4-TOPO（登録商標）　TA　Cloning　Kit　(Life　Technologies,　Cat#　A14697)を用いてpcDNA　3.4　TOPO（登録商標）　vectorに挿入した。
・マルチクローニングサイト配列
5‘-AAGCTTGGATCCACTAGTGAATTCATCTACCAGCTAGCGTGGCATCTAGACACTCTCGA　GA-3’　（配列番号３２２）
5‘CTCGAGAGTGTCTAGATGCCACGCTAGCTGGTAGATGAATTCACTAGTGGATCCAAGCTT　A-3’　（配列番号３２３）
　マルチクローニングサイトを挿入して得られたプラスミドを大腸菌に形質転換し、大腸菌を培養してPureYieldTM　Plasmid　Midiprep　System（Promega社、Cat#　A2492）を用いてプラスミドを精製した。精製したプラスミドを制限酵素BamHI-HF（BioLabs社　Cat#　R3136L）およびNheI-HF（BioLabs社　Cat#R3131L）で処理し、１％アガロース電気泳動を行った。泳動後にエチジウムブロマイドで染色し、プラスミドのバンドを切り出しNucleoSpin　Gel　and　PCR　Clean-up（TAKARA社、Cat#　740609.250）を用いてゲルからプラスミドを精製した。
　合成したヒトFSTL1（配列番号３１８）またはマウスFSTL1遺伝子（配列番号３２０）をGeneArt　Seamless　Cloning　and　Assembly　Enzyme　Mix（Invitrogen社、Cat#A14606）を用いて、上記制限酵素処理済みプラスミドに組込み、そのプラスミドを大腸菌に形質転換した。形質転換した大腸菌を培養し、大腸菌からプラスミドを抽出・精製してDNAシーケンスを確認した。DNAシーケンスの結果、目的のヒトおよびマウスFSTL1遺伝子配列が確認できたプラスミドを発現プラスミドとした。得られたヒトおよびマウスFSTL1発現ベクターを用いて、Expi293TM　Expression　system（Life　Technologies社,　Cat#　A14635）で一過性発現を行った。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resin(Thermo　Scientific社、Cat#　89964)を用いて精製を行い、ELISAおよびエピトープマッピングELISA用の抗原とした。
　＜FSTL1欠損体の作製＞
　次に、各種欠損体作製方法を示す。上記で作製したヒトFSTL1発現プラスミドをテンプレートとして、以下に示す欠損体作製用プライマーおよびKOD　-Plus-　Mutagenesis　Kit(TOYOBO社、Cat#　SMK-101)を用いて欠損体の発現ベクターを構築した。欠損させる箇所は、Uniprotの　No.Q12841を参考にして立体構造に重要なジスルフィド結合が多く含まれる箇所以外を選択し（図３４A参照）、21番目から53番目のアミノ酸欠損体（Δ21-53）、100番目から140番目のアミノ酸欠損体（Δ100-140）、148目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ148-170）、148番目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163番目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）、181番目から190番目のアミノ酸欠損体（Δ181-190）、193番目から228番目のアミノ酸欠損体（Δ193-228）および233番目から289番目のアミノ酸欠損体（Δ233-289）の発現ベクターを作製した。各種欠損体はExpi293TM　Expression　systemで一過性発現を行った
。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resinを用いて精製を行い、エピトープマッピングELISA用の抗原とした。
Δ21-53　(Forward　primer)
5’-TGCATCGAGCAGTGCAAGCCCCACA-3’（配列番号３２６）
Δ21-53(Reverse　primer)
5’-GGCGCGCACCCAAGCCACAGCCACC-3’　（配列番号３２７）

Δ100-140(Forward　primer)
5’-AAGGGCAGCAACTACAGCGAGATCC-3’　（配列番号３２８）
Δ100-140(Reverse　primer)
5’-TTTGCAGTGGCCGTCGTAGTCCACC-3’　（配列番号３２９）

Δ148-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号３３０）
Δ148-170(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号３３１）

Δ181-190(Forward　primer)
5’-AAGCTGCTGCGGGGCCTGTGCGTGG-3’　（配列番号３３２）
Δ181-190(Reverse　primer)
5’-GTTGATGGCTGTCTCGTTCTGTTCC-3’　（配列番号３３３）

Δ193-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG-3’　（配列番号３３４）
Δ193-228(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG-3’　（配列番号３３５）

Δ233-289(Forward　primer)
5’-CTGCAGAAGCACCAGGAAACCGCCG-3’　（配列番号３３６）
Δ233-289(Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG-3’　（配列番号３３７）

Δ148-154(Forward　primer)
5’-AACTTCGACAACGGCGACAGCAGACT-3’　（配列番号３３８）
Δ148-154(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号３３９）

Δ155-162(Forward　primer)
5’-CTGGACAGCAGCGAGTTCCTGAAGT-3’　（配列番号３４０）
Δ155-162(Reverse　primer)
5’-CTTGAAGTACTTGTCCAGGATCTCG-3’　（配列番号３４１）

Δ163-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号３４２）
Δ163-170(Reverse　primer)
5’-TCTGCTGTCGCCGTTGTCGAAGTTC-3’　（配列番号３４３）

Δ193-204(Forward　primer)
5’-AGCGACGAGAACGCCGACTGG -3’　（配列番号４６５）
Δ193-204(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG -3’　（配列番号４６６）

Δ205-216(Forward　primer)
5’-GAATTTCTGAAGTGCCTGAAC -3’　（配列番号４６７）
Δ205-216 (Reverse　primer)
5’-CAGCTCAATCAGGGCGTCCAC -3’　（配列番号４６８）

Δ217-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG -3’　（配列番号４６９）
Δ217-228 (Reverse　primer)
5’-CTGAAAGCTCAGCTTCCAGTC -3’　（配列番号４７０）

Δ233-251(Forward　primer)
5’-AGATGCGTGTGCGCCTGCGGC -3’　（配列番号４７１）
Δ233-251 (Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号４７２）

Δ252-270(Forward　primer)
5’-AATCAGAAGGGCGCCCAGACC -3’　（配列番号４７３）
Δ252-270 (Reverse　primer)
5’-GTTGCAGTCCACCTCTGTCTCG -3’　（配列番号４７４）

Δ271-289(Forward　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号４７５）
Δ271-289 (Reverse　primer)
5’-CTTGCCGTCGCAGGTCATGGCG -3’　（配列番号４７６）

Δ48-100(Forward　primer)
5’-AAGAAAAGCGTGTCCCCCAGC -3’　（配列番号４７７）
Δ48-100 (Reverse　primer)
5’-CTTCTCGGTCACGGCACATTC -3’　（配列番号４７８）

　＜エピトープマッピングELISA＞
上記で調整した抗原と以下の抗体を用いてエピトープマッピングELISAを行った。
使用した抗体；実施例1で得られた各種ニワトリ-マウスキメラ抗体、特許WO2009/028411の実施例で評価されているラット抗　FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)ネガティブコントロールとして抗DNP抗体およびラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061、clone　141945)
　（表４　エピトープマッピングELISA条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　図３４の上段でヒトFSTL1の模式図（Uniprot,　No.Q12841参考）と調製したそれぞれの欠損体の欠損部位を示す。エピトープマッピングELISAの結果、各抗体のエピトープ箇所は図３４下段で示すように、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#8-1、#8-2、#8-4、#8-7は233番目から289番目のアミノ酸配列に含まれる配列、#7、#10、#22は193番目から228番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定される。また、R&D社製のラット抗FSLT1抗体のエピトープは21番目から53番目のアミノ酸配列に含まれる配列と推定され、実施例１で得られた抗体各種とは異なるエピトープであることが分かった。また、#6-55、#7-34、#13は148番目から170番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定され、更にこれらのクローンは後述のin　vitro　評価によって有望な抗体クローンとして判断されたため、エピトープが含まれる148番目から170番目のアミノ酸配列についてエピトープ配列の絞り込みを行った。具体的には、148目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）を作製し、上記と同様にエピトープマッピングELISAを行った。結果、#6-55、#7-34、#13のエピトープ箇所は図３４下段で示すように148番目から162番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定された。
　＜エピトープのさらなる絞り込み＞
　１４８－１７０番目のアミノ酸配列（＃６－５５、＃７－３４、＃１３のエピトープ）、１９３－２２８番目のアミノ酸配列（＃７、＃１０、＃２２のエピトープ）および２３３－２８９番目のアミノ酸配列（＃５－２、＃５－３、＃５－８、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－８のエピトープ）について、更に欠損配列を細分化し、エピトープ配列の絞り込みを行った。＃３３のクローンについてエピトープの同定を行った。
　図３４下段には、これらの結果をまとめたものも反映されている。＃３３のエピトープは、４８～１００番目のアミノ酸配列に、＃７、＃１０のエピトープは、２０５～２２８番目のアミノ酸配列に、＃２２のエピトープは、１９３～２１６位のアミノ酸配列に、＃５－２、＃５－３、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－１０のエピトープは、２７２～２８９番目のアミノ酸配列にあるものと推定された。
　＜実施例４：間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　骨髄細胞をFSTL1で刺激すると、多分化能や自己増殖能を備えた間葉系幹細胞　(MSC)が増殖することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、C57BL/6マウスの大腿骨より採取した2x107個/wellの骨髄細胞を3mL/wellの2%ウシ胎児血清含有RPMI1640　(GIBCO社、Cat.　No.　C11875500BT)培地に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D　Systems社　Cat#　1694-FN-050)と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その11日後、細胞数を計数するとともに、MSCマーカーの発現を調べるためにPE標識抗ALCAM抗体　(eBiosciences社、Cat.　No.12-1661-82)およびPE標識抗PDGFRA抗体(eBiosciences社、Cat＃12-1401-81)を用いて染色して、ALCAM陽性細胞およびPDGFR陽性細胞の含有率をFACScan　(BD　社、Code.　BECTON-DICKINSON-FACSCAN)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の各陽性細胞の数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるALCAM陽性細胞およびPDGFRA陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。他と比べ、#5‐43、#6-55、#7‐34は若干阻害活性が強い傾向が見られた。
　＜実施例５：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　FSTL1で刺激活性化された腫瘍細胞は、骨転移を促す分子群を高発現し、転移浸潤能を亢進することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、ヒト膵癌細胞株Panc1を、それぞれ2x107個/wellずつ1　mL/wellの10%　ウシ胎児血清含有D-MEM培地(GIBCO社　Cat.　No.　C11885500BT)に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10　μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その3日後、細胞数を計数するとともに、骨転移性を示すマーカーの発現を調べるためにPE標識抗RANKL抗体(eBiosciences社　Cat.　No.12-6619)およびPE標識抗CCR2抗体　(R&D社　Cat.　No.　FAB151P)を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるRANKL陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。本実験結果から、RANKL陽性細胞の含有率と1培養中の細胞数とでは、細胞数がより評価に適切であることが判明したので、以下の実施例では細胞数を指標として判断を行った。
　＜実施例６：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、実施例４と同様の実験を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その11日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体(BD　Pharmingen社、Cat.　No.555484)を用いて染色して、一般的にMSCを高率に含むと報告されているCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図３５A）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8、#7-34、#5‐43がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。
　＜実施例７：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価をRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞で行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10μg/mLの抗FSTL1抗体（実施例６と同じクローン）または対照抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図３５B）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8がより高い阻害活性を示した。
　＜実施例８：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、濃度を変更して、実施例４、６と同様にFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図３６A）。結果、コントロール抗体と比較して、#5-8、#5‐43、#6‐55、#8‐1、#8‐4がFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例９：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、低濃度で、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-8、#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図３６B）。結果、最終濃度20ng/mLの濃度でも、コントロール抗体と比較して、#5-8と#6-55がRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例１０：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、新たに取得したクローンも含めFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性
評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μｇ/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-3、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、#5-2、#6‐55、#8‐4、#8‐7はRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して高い阻害活性を示した（図３６C）。
　＜実施例１１：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価(用量依存試験)＞
　本実施例では、低用量を含むよう用量を変動させてFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、抗体の用量依存性は認められなかったが、試験した#6-55は試験したすべての用量（５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ）でRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対してほぼ１００％の阻害活性を示した（図３６Ｄ）。
　＜実施例１２：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、さらなるクローンを含めてFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図３７）。結果、Control　と比較して、全てのクローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。特に、#7‐34、#5-2、#6‐55、#8‐7の順で高い阻害活性が認められた。
　＜実施例１３：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調製したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#6-55、#7-34、#8-1、#8-4）、免疫抑制解除の効果が報告されている抗PD-L1抗体またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、MSC（CD45陰性細胞）、癌転移に伴って増加するMSCである癌関連MSC（CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞）、癌関連MSCと共に増加する単球系骨髄由来免疫抑制性細胞（M-MDSC：CD11b陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞）を検出するため、PE-Cy5標識抗CD45抗体、PE標識抗ALCAM抗体、FITC標識抗CD271抗体　(Abcam社、Cat.　No.　AB62122)、FITC標識抗CD11b抗体(BD　Pharmingen社、Cat.No.553310)、PE-Cy5標識抗Gr1抗体（eBioscience社、Cat.　No.15-5931）を用いて染色し、上述の細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析して1培養中のMSC数および割合を算出した（図３８）。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して高い阻害活性を示した。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想していたが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強かった。
　＜実施例１４：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価および脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例１３と同様の試験方法によって抗体クローン（#6-55、#7、#10、#13、#22）について活性評価を行った。#6-55は活性のポジティブコントロールとして設置した。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して阻害活性を示し、中でも、#13はポジティブコントロールと同等以上の阻害活性を示した（図３９A）。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図３９Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、続いて抗FSLT１抗体クローンを示す。いずれの抗FSLT１抗体でも脂肪細胞は認められず、大元となるMSCへの分化誘導が阻害されていることが理解される。
　＜実施例１５：従来の抗体との比較＞
　本実施例では、特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体との活性比較を行った。
　特許文献１（WO2009/028411）において免疫抑制に重要な制御性T細胞の誘導阻害活性を示したR&D　Systems社製のラット抗FSTL1抗体(Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)と本発明の#6‐55のFSTL1阻害活性の比較を行った。
　実施例４と同様に調整した骨髄細胞マウス骨髄細胞に最終濃度20ng/mLのFSTL1におよび、最終濃度20.0、10.0、5.0、2.5　μg/mlでラット抗FSTL1抗体および#6‐55をマウス骨髄細胞に添加した。また、それぞれのコントロール抗体となるラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061　、clone　141945)および抗DNP抗体は最終濃度が20.0　μg/ml　でマウス骨髄細胞に添加して8日間培養し、実施例１３と同様にして、FSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対する各抗体の阻害活性を評価した（図４０A）。結果、ラット抗FSTL1抗体と#6‐55の抗体の阻害活性は同等レベルであった。一方、用量依存性は認められなかった。特許文献１（WO2009/028411）において示されている制御性T細胞の阻害はMSC誘導阻害を介した結果だったと推測される。
　＜実施例１６：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価（脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)免疫抑制を誘導する効果についての阻害活性評価として、脂肪細胞への分化能の評価を行った。
　実施例１５と同様に、マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1　培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した(図４０B)。結果、抗DNP抗体（マウスIgGコントロール群）と比較し、脂肪細胞に分化する細胞は#6-55の添加によって用量依存的に減少した。一方、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の添加した場合、脂肪細胞への分化に対して全く影響が認められず、いずれの用量でもラットIgG2bアイソタイプコントロール群と同様に多数の脂肪細胞が観察された。つまり、CD45陰性細胞集団全てがMSCというわけではなく、MSCを高率に含む細胞集団に過ぎないのだが、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体では、CD45陰性細胞数は減少するものの、そこには脂肪細胞に分化するMSCがまだ多数残存していることを示している。
　＜実施例１７：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腫瘍内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた腫瘍内投与による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　＜方法および材料＞
　抗体3　種について、Snail　強制発現マウスメラノーマ細胞B16-F10　をC57BL/6N　マウスの皮下・静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。
１．実験群(n=5)
1.　　No　treatment
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
2.　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下移植5x105個＆静脈内移植1x105個）
Day　7　抗体の腫瘍内投与（200μg/0.1mL/tumor）
Day　14　各種アッセイ（フローサイトメトリー解析を中心に）
　3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図４１Ｃ）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞）（図４１Ａ）
◆間葉系幹細胞の増加に対する効果（骨髄内と脾臓内のCD45陰性細胞）（図４１Ｂ、Ｄ）◆免疫抑制性Treg　細胞の増加に対する効果（骨髄や脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図４１Ｄ）
◆その他の免疫抑制性（図４１Ｄ）
　（説明）
　in　vivoにおける抗体活性評価を示すために、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。
　Snail陽性腫瘍細胞をマウスの皮下または静脈内へ移植すると、様々な臓器の他、骨髄に優位に転移し、これが骨髄を起点とした間葉系幹細胞　(MSC)の増加を招いて全身的に強く抗腫瘍免疫の誘導が抑制されてしまうことが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、GFP遺伝子とマウスSnail遺伝子を導入して強制発現させたGFP陽性Snail陽性　B16-F10腫瘍細胞を皮下に5x105個、尾静脈内に1x105移植し、その7日後に生理食塩水で1mg/ml　に調製した抗FSTL1抗体　(＃6-55,＃7-34,＃8-1)またはそのアイソタイプであるマウスIgG　(抗DNP抗体)をコントロール抗体として10mg/kgで腫瘍内に接種した　(5匹／群)。まずは、アッセイまでの間、皮下腫瘍径を測定して腫瘍体積を算出し、皮下腫瘍増殖に対する阻害効果を評価した（図４１C（各個体の推移を示す。））。抗体投与から7日後　(腫瘍移植14日後)は、マウスから骨髄細胞や脾臓細胞を採取して1匹当たりの細胞数を計数するとともに、FACScan(BD社)を用いたフローサイトメトリー解析により、さ
らに詳細に薬効を比較解析した。すなわち、a)骨髄細胞中のGFP陽性Snail陽性　B16-F10腫瘍細胞含有率を解析して、骨転移に対する阻害効果を評価し（図４１A）、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数し（図４１B）、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果を示するものである。b)脾臓内のCD45陰性細胞含有率を解析して(PE-Cy5標識抗CD45抗体,BD社)、MSC増加に対する阻害効果を評価し（図４１D左）、c)MSCが誘導するとされている免疫抑制性CD4陽性Foxp3陽性細胞(PE標識抗CD4抗体,BD社;FITC標識抗Foxp3抗体,eBiosciences社)　（図４１D中）や、疲弊して機能不全に陥ったCD8陽性Tim3陽性T細胞(CyChrome標識抗CD8抗体,　BD社;　FITC標識抗Tim3抗体,　R&D社)の含有率（図４１D右）を骨髄や脾臓において解析して、免疫抑制解除効果を評価した。
　（結果）
　結果を図４１に示す。Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いた、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。なお、被験対象である抗FSTL1抗体の投与法として、腫瘍内投与を行った。3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。図４１Dでは脾臓内の細胞集団の変化を示すが、腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身的に修飾／影響を受けることが示されている。図４１D左では、　CD45陰性細胞数が示され、脾臓内でもMSCが減少することが示されており、図４１D中央では、CD4陽性Foxp3陽性T細胞数が減少することが示されており、Treg（制御性T細胞）が減少していることが示されている。また、図４１D右では、CD8陽性Tim3陽性T細胞数が示され、疲弊CD8陽性T細胞が減少することが実証されている。ここで、「疲弊」とは、機能が低下あるいは不全に陥っている状態を示し、Tim3はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきCD8陽性T細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。したがって、本発明の効果は、このような免疫抑制の増強を抑制するという点でも顕著な効果を奏しているといえる。
　＜実施例１８：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腹腔内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた全身投与（腹腔内投与）による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．実験群(n=5)
1.No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
　2.実験手順
Day　0:　GFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　5:　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　10:　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
＊腹腔内投与と静脈内投与は、全身投与術として薬理的に同義で用いられる。
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図４２B）
◆骨転移に対する効果（骨髄や脾臓内のGFP陽性腫瘍細胞）（図４２A、C）
◆MSC増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45陰性細胞）（図４２A、C）
◆体重喪失に対する効果（図４２A）
◆免疫抑制性Treg細胞の増加に対する効果（脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図４２C）
◆その他の免疫抑制性（図４２C）
　（説明）
　実施例１７では、本発明者らがこれまで行ってきた「原発から骨への転移を阻害する」という目的に準じて抗体は腫瘍内へ投与したが、本実施例では、実施例１７の条件を変更して、抗体薬が一般的に全身投与されていることを考慮し、マウス実験で一般的に行われている腹腔内投与を採用した。抗体投与法以外は、上記実施例１７と全て同様に行った。具体的には、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗FSTL1抗体を腹腔内投与し（全身投与）、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。
　また、アッセイも腫瘍移植14日後に行った。抗体は、腫瘍移植5日後と10日後に2回、10mg/kgずつをマウス腹腔内に投与した。
　（結果）
　結果を図４２に示す。なお、今回の被験対象である抗FSTL1抗体の投与法は、腹腔内投与にて行った。in　vivo評価は実施例１７と同様に、3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した（図４２Ｂ）。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果（図４２Ａ右）が認められた。これらの機能解析結果を考察すると、従来免疫抑制で注目されてきたTregを減少・除去したとしても癌治療上は十分な治療とは言えず、やはり免疫抑制カスケード全体の制圧を考えるべきであり、その最上流に位置するMSCを標的とすることがより有効であることが期待される。また、MSCを減らす（図４２Ａ左）と同時に、癌転移をも阻害する（図４２Ａ中央）ことがさらに効果的であることも再確認でき、FSTL1を標的とした阻害治療が癌治療上有効である可能性が期待される。図４２Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図４２Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。
下右は　CD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　＜実施例１９：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～既存薬との比較＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較を行った。
　（説明）
　実験の手順や方法は実施例１７および１８とほぼ同様であり、アッセイは腫瘍移植15日後に行った。
　既存薬として下記抗体を腫瘍移植4日後と8日後に2回、10mg/kg（200μg/mouse）ずつをマウス腹腔内に投与した。
　本実施例では、抗FSTL1抗体の作用機序の一つである「免疫抑制解除」の目的で既に臨床で使用されている抗体薬と、Snail陽性腫瘍骨転移モデルを用いて治療効果を比較検討した。抗体は、抗体薬を用いた一般的な動物試験に準じて、前回同様に全身的に２回投与した。
　1　実験群(n=5)
１　No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
２　Control　IgG　(anti-DNP)
３　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55)
４　Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
５　Anti-PD-1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)
６　Anti-PD-L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
７　Naive　(no　tumors,　no　treatment)　
　2　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　8　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種アッセイ
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植８、１１、１４日後に測定した。（図４３A）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞量）（図４３B）
◆骨髄におけるMSC増加に対する効果（図４３B）
◆体重減少に対する効果（図４３B）
　（結果）
　結果を図４３に示す。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全てコントロール抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　＜実施例２０：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～大腸癌モデル＞
　本実施例では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　骨転移を評価しないこと以外、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～１９の骨転移モデル実験とほぼ同じ条件で行った。すなわち、Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。腫瘍移植量、抗体投与のタイミング、アッセイのタイミングのみ変更して行った。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖（図４４Ａ）、肺転移（図４４Ｂ））
　肺転移は、肺における腫瘍結節数を肉眼的に計数した。マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図４４に示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6　とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。また、肺転移結節数に関する結果は図４４Ｂに示される。左から、処置なし、中央はアイソタイプコントロール（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)は、CT26皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強い抑制し、5　匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(コントロール抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　＜実施例２１：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～乳癌モデル＞
　本実施例では、マウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　実施例１７～２０に準じて行い、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～２０の骨転移モデル実験とほぼ同じように行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。変更点は、以下のとおりである。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図４５に示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　＜実施例２２：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6　マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail　強制発現細胞株の親株である。
　１．実験群(n=5)
1.マウスメラノーマB16-F10+Control　IgG　(anti-DNP　mAb)
2.マウスメラノーマB16-F10+Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106個＆静脈内1x106個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。（図４６A）
◆体重減少に対する効果（図４６B）。
　（結果）
　結果を図４６に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、抗FSTL1抗体投与群では、体重減少についても抑制活性を示し（図４６Ａ）、著しい痩せや毛羽立ちなどは全く観察されず（図４６Ｂ）、全例元気だった。本モデルでは通常、移植20-30　日後に肺転移が観察されるが、今回はこれまでのタイミングに合わせて約２週間後に評価したため、肺転移結節は肉眼的に観察されなかった。
　＜実施例２３：in　vivoにおける抗体活性評価～リンパ腫＞
　本実施例では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、FSTL1　発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．　実験群(n=5)
1.マウスリンパ腫EL4+Control　IgG(anti-DNPmAb)
２.マウスリンパ腫EL4+Anti-FSTL1　mAb(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106個＆静脈内1x106個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植３、６、１０日後に測定した
　（結果）
　結果を図４７に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比し有意に抑制した。乳癌と並んでFSTL1　高発現癌種の一つであるリンパ腫において有効性を提示できたことは、臨床試験展開上、大変有用なデータであるといえる。
　＜実施例２４：in　vivoにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０、皮下移植＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、実施例２２と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効の評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。
　1.　実験群　(n=5)
1.　Control　IgG　(anti-DNP),10mg/kg
2.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),1mg/kg
3.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),3mg/kg
4.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),10mg/kg
　2.　実験手順
Day　0　マウスメラノーマB16-F10細胞の皮下移植（1x106個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1
Day　8　抗体の腹腔内投与-2
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆　皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図４８に示す。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　＜実施例２５：in　vivoにおける併用療法の効果＞
　本実施例では、抗FSTL1抗体と既存薬との併用療法における薬効評価を行った。
　Ｓnail+腫瘍骨転移モデルを用いて、免疫抑制解除抗体薬の併用が抗FSTL1　抗体の薬効を増強できるか否かを検討した。
実験群(n=5)
1.　Control　IgG　(Anti-DNP　mAb)
2.　Anti-FSTL1　mAb　(Clone　6-55),　5　mg/kg
3.　Anti-FSTL1　mAb　(Clone　6-55),　10　mg/kg
4.　Anti-FSTL1　mAb　(Clone　6-55)+Anti-CTLA4　mAb(Clone　9H10, BioLegend),　各5mg/kg
5.　Anti-FSTL1　mAb　(Clone　6-55)+Anti-PD1　mAb(Clone　29F.1A12, BioLegend),　各5mg/kg
6.　Anti-FSTL1　mAb　(Clone　6-55)+Anti-PD-L1　mAb(Clone　10F.9G2, BioLegend),　各5mg/kg
7.　Naive　(no　tumors,　no　treatment)
　2.　実験手順
Day　0:　GFP+Snail+B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下5x105＆静脈内1x105）
Day　3:　抗体の腹腔内投与-1
Day　7　抗体の腹腔内投与-2
Day　13　各種アッセイ
3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP+腫瘍細胞量）
◆マウス体重減少に対する効果
◆骨髄中MSC増加に対する効果
　（結果）
　結果を図４８に示す。抗FSTL1抗体は、これまでの実施例で用いてきた半量の5mg/kgでも有効で、皮下腫瘍の増殖、骨転移、MSC増殖、マウス体重減少など、検討したいずれの項目においても対照抗体群に比し有意な抑制効果を示した。
　この5mg/kgの抗FSTL1抗体と一緒に免疫抑制解除抗体薬3種をそれぞれ同時に投与したところ、抗PD-L1抗体を併用した場合のみ抗FSTL1抗体の抗腫瘍効果は増強され、5　匹中2匹のマウスの皮下腫瘍が消失した。
・倍量である10mg/kgの抗FSTL1抗体を単剤で投与した場合も、抗PD-L1抗体併用投与時とほぼ同等の強い薬効が観察されたが、皮下腫瘍の増殖抑制効果については、抗PD-L1抗体を併用した場合の方が優位であった。
・抗CTLA4抗体と抗PD1抗体の併用では相乗効果は全く認められず、むしろ抗FSTL1抗体の薬効を打ち消してしまい、骨転移やMSC増加を強く抑制することができなかった。これらの抗体は、骨転移を増強してしまう傾向があるようである。
　強い抗腫瘍効果が見られた抗FSTL1抗体単剤投与群や抗PD-L1抗体併用投与群と同様に、腫瘍内のCD4+Foxp3+Treg細胞の増加は抗CTLA4抗体の併用によって、CD11b+Gr1+MDSC細胞の増加は抗PD1抗体の併用によって、それぞれ有意に抑制された。それにも関わらず、腫瘍内には癌を攻撃し得るCD8+T細胞は、ほとんど浸潤しなかった。このことは、これまで注目されてきたTregやMDSCの減少よりも、その上流に位置するMSCを減少させることが、まずは正しくCTLを誘導する上で重要であることが示唆された。
　＜実施例２６－１：ヒト末梢血細胞を用いた抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性＞
　本実施例では、ヒト末梢血細胞を用いて抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性を評価した。
　FSTL1(5ng/ml)を用いてヒト末梢血細胞(1x106　cells)を刺激し、そこに抗体(5μg/mL)を添加して3日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をフローサイトメトリーで解析した。フローサイトメトリーの条件は以下のとおりである。
　健常人から１／１０量の４％クエン酸ナトリウムを加えて採血後、フィコール（比重1.090）に重層して遠心分離（１５００rpm、２０分、室温）し、中間層に存在する細胞分画を「PBMC」として使用した。このPBMC(1x106個)を24穴プレートにおいてFSTL1(5ng/ml)で３日間刺激培養する系に抗体(5μg/mL)を添加した。その培養系から回収したPBMCについて、抗CD4抗体(BD PharMingen社)、抗CD25抗体(BD PharMingen社)、抗FoxP3抗体(eBioscience社)を用いて、４℃で１時間インキュベート後、フローサイトメーターFACScan（Becton,Dickinson and Company社）を使用して、そこに含まれるCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をTreg細胞として解析した。
　図４９Ｂにこれらのデータ、結果をまとめた表を提示する◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。その結果、TGFb などと同様に、FSTL1刺激によってもTreg は顕著に増加し、それが本発明の抗体＃6-55 添加によって有意に抑制されることが分かった（Exp.1とExp.2、3 との違いは、末梢血ドナーの違いによる）。他方既知抗体であるR&D抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)はほとんど阻害せず、ここでもまた本発明の抗体＃6-55の優位性が確認された。以上の結果から、FSTL1 が引き起こすTreg 誘導に関しては、本発明の抗体＃6-55 は顕著に阻害できることが示された。
　＜実施例２６－２：様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響等＞
　本実施例では、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響、FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用およびSnail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を調べた。
　具体的には、Snail やFSTL1 の発現有無に関わらず様々なヒト腫瘍細胞を用いて、その増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響を検討した。すなわち、膵癌細胞株Panc1（ATCC社#CRL-1469）、そのSnail強制発現細胞株であるPanc1-snail+、膵癌細胞株MIAPaCa（ATCC社 #CRL-1420）、骨転移性乳癌細胞株MDA231（ATCC社#HTB-26）、メラノーマ細胞株Hs294T（ATCC社 #HTB-140） をそれぞれ1x105個培養する系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema:マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体,5μg/ml)を添加して3 日間培養後、一培養系における細胞数を計数して細胞増殖能を評価した。更に、計数した後の細胞(5x104個)をMatrigel コートtranswell chamber (Corning社 #354480)に播種し、4 時間培養後に膜を外してクリスタルバイオレット固定液で染色固定した後、膜を透過した細胞数を顕微鏡下でカウントして細胞浸潤能を評価した。その結果、特にSnailを高発現する高転移性の腫瘍細胞株で増殖能、浸潤能ともに強く抑制された。このことから、抗FSTL1 抗体は、EMT を呈してFSTL1 を高発現している腫瘍細胞に特に作用することが示された（図５０Ａ）。
　（FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用）
　次に、Snail/FSTL1 発現細胞が産生するFSTL1 を受けた周囲の腫瘍細胞が癌微小環境においてどのように変化し、かつ、抗FSTL1 抗体がどう作用するかを調べるため、SnailやFSTL1をわずかにしか発現しないことが分かっているヒト膵癌細胞株Panc1 をFSTL1で3 日間刺激し、この培養系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)を加えて、その後の細胞機能の変化を前項と同様の方法で解析した。その結果、以前論文（Cancer Res; 73(20); 6185-93.2013）でも報告しているように、FSTL1は腫瘍増殖にはあまり影響／寄与しないが、FSTL1 とともに抗FSTL1 抗体を添加することによって、細胞増殖は低下した。また、FSTL1は浸潤能を増強することも同様に報告しているが、その作用を打ち消すことが明らかとなった（図５０Ｂ）。
　（Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用）
　前項のFSTL1 刺激腫瘍細胞の代わりにSnail 強制発現細胞株Panc1-snail+を用いて、chamber 内に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)が存在下での細胞浸潤を評価した。その結果は前項の結果と酷似しており6-55については抑制活性が確認できた（図５０Ｃ)）。
　また、本実施例では、Panc1-snail+細胞を上記抗体添加下で3 日間培養した後で、骨転移マーカーとして知られる分子の中からCCR2 とRANKL の発現をフローサイトメトリーで解析した。その結果、CCR2とRANKL ともに抗FSTL1 抗体によっても強く抑制され、抗FSTL1 抗体は細胞浸潤に対して阻害活性を有していると推測される（図５０Ｄ）。
　＜実施例２７：マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験＞
　本実施例では抗FSTL1 抗体の阻害活性を間葉系幹細胞誘導実験系で確認するとともに、FSTL1 だけではなく、Snail+腫瘍細胞によって誘導されるMSC増加に対するFSTL1 阻害効果も併せて評価した。具体的な操作としては、C57/BL/6 マウス由来骨髄細胞をFSTL1(20ng/mL)または腫瘍細胞の培養上清で刺激する状況下に各抗体(10μg/mL)を添加し、8日間刺激培養後、MSC を高率に含む細胞分画CD45(-)細胞(MSC)と、癌転移に伴って増加するCD45(-)CD146(+)ALCAM(+)細胞(sMSC)を実施例１４と同様にしてフローサイトメトリーで解析し、一培養系当たりの細胞数を計数した。本実施例では、コントロール抗体としてBioLegend社製のマウスイムノグロブリン(#401408,Cone MG1-45)を使用した。
　結果を図５１に示す。図５１Ａに示すように、本実施例のMSC 誘導阻害試験では、#7,#10,#13,#33 がフローサイトメトリー解析で#6-55 と同等あるいはそれ以上の強い阻害効果を示した。その結果、#7,#10,#33が#6-55 と同等あるいはそれ以上の高いMSC 誘導阻害活性を示し、この３クローンについては再現性が確認できた。
　（腫瘍細胞が誘導するMSC 増加に及ぼす影響）
　本実施例では、骨髄細胞を用いたMSC誘導系において、Snail+腫瘍細胞の培養上清が誘導するMSC 増加を抗FSTL1 抗体で阻害できるか否かを評価した。C57/BL/6 マウス由来骨髄細胞にSnail+腫瘍細胞の培養上清と各抗体(10μg/mL)を添加して8日間刺激培養後、以下の2種の細胞群についてフローサイトメトリーで解析した。
1)MSCを高率に含む一般的な細胞分画『CD45(-)細胞』
2)癌転移に伴って増加する『CD45(-)ALCAM(+)CD271(+)細胞(＝sMSC)』
また、sphere コロニーの形成を、50個以上の細胞数でコロニーを形成しているlargeとそれ以下で形成されているsmallとに区別し、培養8日目に顕微鏡下で観察した。その結果、図５１Ｂ～Ｄに示すように、MSC/sMSCの誘導は顕著に阻害され、幹細胞性を代表する自己複製能を示すsphere コロニーの形成も強く抑制された。つまり、FSTL1 抗体は、癌転移下で増幅されるMSC誘導を阻害することで、in　vivo において抗腫瘍効果を発揮している可能性が示唆された。
　＜実施例２８：マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、Treg 誘導に対する阻害活性をマウスの系で評価した。
　（材料および方法）
　本実施例では実施例１７に準じて実験を行った。具体的には、C57/BL/6 マウス由来の脾臓細胞(2x106)を5ng/ml のFSTL1 で刺激する系に、各抗体を5μg/mL 添加して3 日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画の割合(%)をフローサイトメトリーで解析して、これまで検討してきた#6-55と活性を比較した。
　(結果)
　その結果、図５２に示されるように、新規3 クローンともに対照抗体と比べてTreg 誘導を抑制し、特に、#7 と#10 では#6-55 以上に強い抑制活性を示した。他の実施例でもヒト末梢血細胞を用いたヒト評価系では抗FSTL1抗体のTreg誘導阻害活性をきちんと確認できていたが、本マウス評価系では本実施例でより明確にインパクトある阻害活性を観察したことになる。#7 と#10 はともにFSTL1 の205-228a.a.を認識するクローンであることから、#6-55が認識する148-162a.a.に次いで205-228a.a.もまたFSTL1 活性において重要な領域であることも示された。
　＜実施例２９：新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性を評価した。
　（材料および方法）
　マウスSnail 強制発現メラノーマ細胞株F10-snail+に5μg/ml の抗FSTL1 抗体または対照抗体(抗DNP 抗体)を添加して3日間培養し、各種アッセイで腫瘍細胞の性状変化を解析した。細胞接着能は、Fibronectinコートプレートを用いて2 時間培養後、プレートに接着している細胞数をカウントして評価した。細胞浸潤能は、Matrigel コートtranswell　chamberを用いて4 時間培養後、membrane を透過した細胞数をカウントして評価した。骨転移関連分子発現について、代表的な分子マーカーであるCCR2 とRANKLの発現をフローサイトメトリーで解析した。
　（結果）
　図５３に示されるように、いずれの新規クローン抗体も対照抗体と比べて有意にCCR2 やRANKL の発現や細胞浸潤能を低下させ、細胞接着は増強した。つまり、上皮系の細胞に変化したことを意味する。各活性ともにほぼ#6-55と同等であり、大きな差は見られなかった。
　＜実施例３０：Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのinvivo 薬効比較＞
　抗CTLA4 抗体などの免疫解除薬を腫瘍内に投与することで、癌細胞に有利に作用する腫瘍内の免疫抑制環境を直接改善でき、抗腫瘍免疫を効果的に増強できると注目されている(Clin Cancer Res20:1747,2014)。そこで、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1抗体とのin vivo 薬効を比較した。
　（材料および方法）
1.実験プロトコール
1-1.実験群(n=5)
1.Notreatment(0.9%NaCl as a sham)
2.Control　mouse　IgG　(マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体、aHemaとも記載する)
3.Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
4.　Anti-PD1　mAb　(Clone　9F.1A12,　BioLegend)
5.　Anti-PDL1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
6.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
7.　Naive　(no　tumors,　no　treatment)
1-2.　実験手順
Day　0:　GFP+Snail+B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下3x105＆静脈内2x104）
Day　5:　抗体の腫瘍内投与（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種アッセイ
1-3.薬効評価の指標
　以下を薬効評価の指標として用いた。
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP+腫瘍細胞量）
◆骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果
◆免疫系に及ぼす影響
　（手順）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植５、７、１０、１４日後に測定した。皮下腫瘍の増殖、骨転移および骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果の評価方法は実施例１７と同様に行った。免疫系に及ぼす影響を評価するため、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群であるCD4+T 細胞（CD45+CD3+CD4+;FITC標識抗CD3抗体, PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、腫瘍特異的CD8+T 細胞（CD45+CD8+Tetramer+；BD社製FITC標識抗CD8抗体,MBL社製PE標識Tetramer, Cy5標識抗CD45抗体）、活性化NK 細胞（CD45+NK1.1+NKG2D+；FITC標識抗NK1.1抗体,PE標識抗NKG2D抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、免疫抑制性T 細胞（CD45+CD4+FOXP3+Tregs；eBiosciencess社製FITC標識抗Foxp3抗体,PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体）、MDSCs(CD45+CD11b+Gr1+MDSCs；FITC標識抗CD11b抗体,PE標識抗Gr1抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社)の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。また、皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞（Snail+CD44+tumors；eBiosciencess社製PE標識抗Snail抗体,BD社製Cy5標識抗CD44抗体）の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。
　（結果）
　皮下腫瘍の増殖は、対照抗体投与群に比し、全治療群において有意に抑制され、各治療群間に有意差は認められなかった(図５４－1)。しかし、骨転移や骨髄と脾臓内でのMSC 誘導が、FSTL1 抗体によって有意に抑制されたのに対し、CTLA4 抗体とPDL1抗体では逆に骨転移は増強され、PDL1 抗体では骨髄内のMSC 誘導も阻害されなかった(図５４－1)。骨髄細胞を培養した結果、そこに存在する腫瘍細胞の性状は両群で異なっており、CTLA4抗体投与群では多数のsphere　colony を形成したが、PDL1 抗体投与群では強接着性を示した。
　一方、抗体を投与した皮下腫瘍内に浸潤した免疫細胞群(TIL)を解析したところ、いずれの治療群でもCD4+T 細胞、腫瘍特異的CD8+T 細胞、活性化NK 細胞がともに多数浸潤していた(図５４－２)。特に、CTLA4抗体の腫瘍内投与では、これらの抗腫瘍エフェクター細胞群が極めて顕著に増加することが分かった。興味深いのは、これまで注目されておらず、解析してこなかった活性化NK細胞が、このCTLA4 抗体群と同様にFSTL1 抗体群においても腫瘍特異的CD8+T 細胞以上に多数浸潤していたことである(図５４－２)。NK 細胞は、MSCと同様に自然免疫系の主要なエフェクター細胞であり、MSC による抑制作用を最も受け易い細胞としても報告されている。したがって、おそらくはFSTL1 抗体投与によってMSCが激減したことから、NK 細胞の数や機能が大幅に改善・増強されたと推測される。
　前述のように、抗腫瘍エフェクター細胞群は、いずれの治療群においても増加していたが、免疫抑制性の細胞群を見てみると、既存抗体薬投与群の腫瘍内にはTreg やMDSC が逆に増加しており、特にMDSCの増加については、CTLA4 抗体投与群とPDL1 抗体投与群で顕著に見られた(図５４－3)。また、CTLA4抗体では、脾臓内のTreg 増加も抑制できず、さらには、CD8+Treg が増加していた(図５４－4)。これはおそらく、投与後日数が経過した後のリバウンド効果か、CD4+Tregが減少した部分を他の免疫抑制性細胞群が補おうとするフィードバック現象なのかも知れない。また、腫瘍内環境では、例えば、浸潤した免疫細胞が放出するサイトカインなどによって腫瘍細胞が刺激され、EMT などが誘導されてしまう可能性も考えられるので腫瘍細胞側の変化も確認した。まずは、主要なEMT マーカーであるSnail/CD44発現を解析してみた。その結果、移植に用いた腫瘍細胞はもともとSnail+CD44+ではあるが、皮下腫瘍から分離した腫瘍細胞ではそれらの発現強度がさらに増強されているsubpopulation分画が見られ、治療によって逆にEMT が促進されていることが分かった(図５４－3)。このdenovo　EMT は、MDSC が増加して骨転移も悪化したCTLA4抗体投与群とPDL1 抗体投与群で、特に顕著に見られた。以上の結果から、CTLA4 抗体とPDL1 抗体は、確かに抗腫瘍免疫を増強するメンバーを腫瘍内に動員して腫瘍増殖を抑制できるものの、免疫抑制性細胞群の増加や腫瘍細胞側におけるde　novoEMTなどは抑制できないため、全身性の抗腫瘍免疫までは改善されず、その結果、骨転移は十分に阻害できなかったと推測される。一方、PD1 抗体については、データとしては大きな弱点は見られないが、特に骨転移量やsMSC量については、骨髄細胞数が極めて激減していたことに起因すると考えられる。つまり、PD1 抗体投与群の骨髄細胞を培養すると、CTLA4 抗体投与群と同様に多数の腫瘍細胞がコロニーを形成した。おそらく、実際には骨転移は逆に悪化しており、骨環境内に腫瘍細胞が多量に集積あるいは過剰に増殖したことで、骨髄細胞の増殖は抑制されて細胞数が激減したと推測される。なお、CTLA4 抗体は、全身投与時と比べて今回の腫瘍内投与では、抗腫瘍エフェクター細胞を腫瘍内に効果的に動員することが分かった。一方、FSTL1抗体は、悪い部分を抑制する効果は高いものの、抗腫瘍エフェクター細胞の動員効果はそれほど高くはない。
　＜実施例３１：マウス肺癌モデル＞
　本実施例では、肺癌治療薬として抗FSTL1 抗体を開発することを見据えて、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
1.Isotyoe　mouse　IgG　(aHema)
2.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
3.　正常マウス
1-2.　実験手順
Day　0:　マウス肺癌3LL細胞の移植（皮下1x106 cells＆静脈内5x105 cells）
Day　3:　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　7:　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
1-3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆マウス衰弱に対する改善効果（マウス体重の測定）
◆MSC 増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45-細胞）
◆免疫反応に及ぼす影響など
　(手順)
　皮下腫瘍増殖の測定は移植後3,5,7,10,14日目に測定を行った。体重の測定、MSC増加に対する効果、免疫反応に及ぼす影響は14日目に上記実施例と同様に測定を実施した。
　（結果）
　図５５に示すように、対照抗体投与群と比較して、抗FSTL1 抗体投与によって皮下腫瘍増殖は強く抑制され、5 匹中2 匹のマウスで腫瘍は消失した。本モデルでは、いずれの臓器にも腫瘍の転移は肉眼的に観察されない。腫瘍移植14日後、腫瘍移植後早期にも関わらず、これまで用いてきた骨転移モデルと同様に歩行もできないほど著しく衰弱した。しかし、抗FSTL1 抗体投与群では、体重減少や痩せ、毛羽立ちなどは一切観察されず、全マウスが元気であった。
　他方、腫瘍内浸潤細胞や骨髄細胞、脾臓細胞について、MSC をはじめ、Treg やMDSC など様々な免疫細胞を解析した。しかし、唯一大きな変化が見られたのは骨転移モデルで注目している癌転移関連sMSCであるCD45-ALCAM+細胞であった。本モデルでは骨転移を生じないことを確認しているが、なぜか骨髄内にのみsMSCが増加し、それが抗FSTL1 抗体投与によって減少した。3LL 細胞はSnail を高発現していることも判明し、これがsMSC 増加を招いたと推測される。
　以上の結果から、3LL などのように「Snail」や「sMSC」などを共通項とする癌種では、FSTL1 阻害治療が有効であることが改めて提示され、肺癌は臨床治療でもFSTL1抗体投与の対象癌種になり得ると期待される。
　＜実施例３２：抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価＞
　本実施例では、in vitro 薬効スクリーニングで有効性を確認した新規クローン抗体4 
種(#7,#10,#13,#33)について、これまで用いてきた#6-55を陽性対照として用いてin　vivo治療効果を比較評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
ControlIgG (anti-DNP mAb)
#6-55
#7
#10
#13
#33
1-2.　実験手順
Day　0:GFP+F10-snail+腫瘍細胞の移植（皮下3x105cells＆静脈内2x104 cells）
Day　4:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-1
Day　7:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-2
1-3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖の抑制
◆マウス生存期間の延長
　（手順）
　皮下腫瘍の測定は腫瘍細胞移植4, 7, 10, 14, 17, 20, 23日後に実施した。
　（結果）
　図５６に示すように、皮下腫瘍増殖は、#13 を除く全てのクローンが#6-55 と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な抑制活性を示し、#6-55 との間に有意差は見られなかった。一方、図５７に示すように、マウス生存期間については、いずれのクローンも#6-55と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な延命効果を示し、特に、#10 と#33 は#6-55 以上の高い治療効果を示した。なお、#6-55ではｎ＝１０で行った試験でも統計学的有意が12日目においてｐ＜０．００１のレベルで示されている。以下に、P 値を基にまとめた各クローン活性順位を示す。
皮下腫瘍増殖抑制効果：
#7＝#10＞#6-55＞＞#33＞＞#13
マウス延命効果：
#33＝#10＞#6-55＞#13＞#7
以上の結果を総合的に評価すると、『#10』が#6-55 を上回る高い抗腫瘍活性を有している可能性が示された。
　データは示さないが、FSTL1 阻害による抗腫瘍免疫反応には、CD4+細胞、CD8+細胞、NK細胞と幅広い免疫細胞が関与しているが、特に、細胞障害活性を示すCD8+細胞とNK細胞は必須の役割を果たしていることも確認している。一般的な免疫療法では、抗腫瘍エフェクター細胞は主にCD8+T 細胞であり、NK は担癌初期にのみ関与する重要性の低い細胞群であることが多く、Tregなどを含むCD4+T 細胞はむしろ除去した方が治療効果はさらに増強されることなどが示されている。一方、本発明のFSTL1 阻害治療では、CD8+細胞に限らず様々な免疫細胞を動員して抗腫瘍効果を発揮するようである。これは、FSTL1ならびにFSTL1 が作用して増幅するMSC は、癌関連異常免疫機構の最上流キー因子であり、FSTL1 阻害によって、MSCをはじめ、その下流で負に制御される様々な免疫反応を一斉に抗腫瘍方向へ転じさせた結果と考えられる。つまり、開発当初からのコンセプトを再確認でき、本発明の抗FSTL1抗体は、従来の免疫修飾薬とは作用機序が大きく異なり、宿主免疫全体を根底から改善して適切に賦活化できる新たな癌治療薬となり得ると期待される。
　すなわち、FSTL1阻害により、MSC分化誘導阻害が起こり、免疫抑制性細胞群（MDSC,Treg）阻害が起こることで、抗腫瘍免疫細胞群の活性化が起こると予想される。本実施例において、最後の段階まで達成し得ることが確認され、ＦＳＴＬ１を抑制することで一般に、抗体で示される効果と同様の効果が抑制剤によって達成されることが期待される。
　＜実施例３３：マウスキメラの特徴づけ＞
　本実施例では、製造したマウスキメラ抗体のヒトFSTL１抗原に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)に Mouse Antibody CaptureKit（GE Healthcare、 BR-1008-38）を用いてマウスキメラ抗体を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacore T-200(GE Healthcare) によって算出した。
　（結果）
　まず、ヒトFSTL1濃度を10 μg/mlに固定し、取得抗体の網羅的な活性比較を行った（表３３－１、図５８）。 
　図５８の縦軸は抗体に対する抗原の結合量、横軸は抗体に対する抗原の解離量を示す。抗原の結合量が高く、解離量が低いほど親和性が示唆される（図の左上に位置するほど親和性が高い）。次に、図５８の中で親和性の高いと想定されるクローン#6-55、#7-34および#13について、抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD値を算出した(表３５－２)。結果、表面プラズモン共鳴を用いた測定系でも、クローン#6-55、#7-34および#13を含め、＃７、＃１０、＃３３等が強い親和性を有することが示された。
　（表３３－１）マウスキメラ抗体に対する抗原の結合量および解離量
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
　（表３３－２）マウスキメラ抗体のＫＤ値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
　＜実施例３４：ヒト化抗体の開発および親和性測定＞
　＜ヒト化抗体の親和性：Biacore T-200 による測定＞ 
　本実施例では、ヒト化抗体を開発し、開発した抗体のヒトFSTL1に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)にHuman Antibody Capture Kit（GEHealthcare、 BR-1008-38）を用いて、9種のIgG1型ヒト化#6-55を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacoreT-200 (GE Healthcare) によって算出した。抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD 値を算出した(表３４－１)。9種のIgG1型ヒト化#6-55の中で、KD 値が高かった「H（２）‐L（１）」の組み合わせのクローンをリード抗体に選んだ。
（表３４－１）表．ヒト化6-55抗体（IgG1型）のH鎖とL鎖の組み合わせによる親和性（KD値）比較
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
　＜ヒト化抗体の作製＞
　松田らのMolecular Immunology 43(2006)634-642 の報告に基づき、クローン#6-55のH鎖およびL鎖の可変領域にあるフレーム領域をニワトリ配列からヒト配列に置換した遺伝子を設計し、遺伝子合成を行った。1クローンにつき、H鎖およびL鎖を3種類ずつ設計して合成した（ヒト化H鎖（１）、（２）、（３）、ヒト化L鎖（１）、（２）、（３）；なお、Ｈ鎖（１）はＨ（１）やＨ１等と記載されることもあるがいずれも同じクローンを指すことが理解される。Ｈ鎖（２）、Ｈ鎖（３）、Ｌ鎖（１）、（２）、（３）も同様である。）。Ｈ（１）重鎖の全長配列は、IgG1型が配列番号４４１および４４２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号４４７および４４８（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号４４３および４４４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号４４９および４５０（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号４４５および４４６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号４５１および４５２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号４５３および４５４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号４９５および４９６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号４９７および４９８（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。合成した可変領域の遺伝子をPCRによって増幅した後、制限酵素処理を行い、ニワトリ抗体のリーダー配列およびヒトIgG1の定常領域が組込まれたL鎖またはH鎖発現カセットベクター（制限酵素処理されたベクター）に導入した。構築した各クローンのH鎖（１）～（３）およびL鎖（１）～（３）の発現ベクターの合計9種類の組み合わせをHEK293細胞に導入し、培養上清からProtein A Sepharose を用いてヒト化抗体の精製を行った。精製したIgG1型ヒト化抗体のヒトFSTL1に対する結合活性を確認するためにELISAを行った結果、いずれのクローンも一定程度の結合活性が確認できた(図５９)。このうち、Ｈ（２）－Ｌ（１）のヒト化クローンが、他のクローンに比べて、１桁高い数値を示した（表３４－１参照）ことから、次の実験は、このクローンについて行った。
　＜ヒト化抗体の結合活性：ELISA＞ 
　IｇG1型ヒト化#6-55H鎖（２）＋L鎖（１）の精製抗体のヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって確かめた(図６０）。図６０の結果から、本発明の抗体は、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性は同様であり、ヒトFSTL1に対する活性が保有されていることが確認できた。
　＜実施例３５：別クローンの抗PD-L1 抗体を用いた併用治療＞
　実施例２５では、F10-snail+腫瘍移植急性骨転移モデルを用いて、抗FSTL1 抗体に各種Immune Check point阻害抗体薬を併用すると、抗PD-L1 抗体(Clone10F.9G2,BioLegend 社製)のみが優れた相乗効果を示すことを報告した。本実施例では、異なるクローン(CloneMIH5,BD社製)の抗PD-L1 抗体を用いて、抗FSTL1 抗体との併用効果の再現性を確認した。
　（材料および方法）
1.実験群(n=5)
G1.マウスIgG 対照抗体
G2.抗FSTL1 抗体
G3.抗PD-L1 抗体
G4.Combination
2.実験スケジュール
Day0:GFP+F10-snail+腫瘍細胞の移植（皮下3x105 cells/ml ＆静脈内2x104cells/ml）
Days4&7:抗体の腹腔内投与x2
-マウスIgG 対照抗体(抗DNP 抗体)10mg/kgx2
-抗FSTL1 抗体(Clone6-55)5mg/kgx2
-抗PD-L1 抗体(Clone　MIH5,BD 社) 5mg/kgx2
＊抗腫瘍効果判定基準：皮下腫瘍増殖抑制効果、マウス生存期間の延長
　（結果＆考察）
　Clone10F.9G2 を用いた実施例２５の結果とは異なり、Clone MIH5 投与では皮下腫瘍増殖抑制とマウス生存日数どちらに対しても、対照抗体投与群に比し統計学的に有意な抗腫瘍効果は見られなかった。おそらく、Kd値の違いを反映した結果なのかも知れない。一方、MIH5 に抗FSTL1 抗体を併用すると、どちらか単独で治療した場合に比し有意に高い抗腫瘍効果が誘導された。ただし、実施例２５で使用した10F.9G2との併用効果と比べると、MIH5 を併用しても皮下腫瘍が消失するほどの強力な相乗効果は見られず、併用効果はかなり小さかった。しかしながら、少なくとも本骨転移モデルにおいては、PD-L1とFSTL1の同時阻害が極めて相性が良く、２抗体を併用することは癌治療において有用であることが示された。
　＜実施例３６：マウス大腸癌Colon26 肺転移モデルを用いた効果検討＞
　これまでは、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体とFSTL1 抗体のin　vivo薬効は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて比較してきた。今回は、FSTL1 抗体とPD－L1 抗体との併用効果について評価した。
　（実験スケジュール）
Day0:Colon26 腫瘍細胞の移植（皮下5x105 cells/ml＆静脈内5x105cells/ml）
Day5:抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg 相当）
Day8:抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg 相当）
　（実験.　FSTL1 抗体とPD－L1 抗体との併用効果）
　2-1.実験群(n=5)
1.　Control　mouse　IgG(aDNP)
2.　Control　rat　IgG(R&D)
3.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
4.　Anti-PD－L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
5.　Anti-FSTL1　mAb　+　Anti-PD－L1　mAb
（結果＆考察）
　骨転移モデルで見られたFSTL1 抗体とPD－L1 抗体の併用効果について、その汎用性を確認するために同様の実験を行ったが、どちらの抗体も皮下腫瘍増殖を有意に抑制したものの、通常の1/2量(5mg/kg)のためか、FSTL1 抗体ではマウスの生存期間は延長されず、一方、PD－L1 抗体では有意な延長効果が見られた(図６２)。そのPD－L1 抗体効果は、FSTL1抗体を併用することで有意に増強され、両抗体の相性がいいことを再確認できた。
　以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
［産業上の利用可能性］
　免疫抑制等の免疫破綻の解除によるがんの予防および治療剤、および転移、特に骨転移を抑制する技術が提供され、特に予想外に顕著な効果を奏する併用効果により、がん治療および予防に関連する技術に関与する産業（試薬、製薬等）において利用可能な技術が提供される。
［配列表フリーテキスト］
配列番号２５０：ヒトＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号２５１：ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号２５２：マウスＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号２５３：マウスＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号２５４：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２５５：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２５６：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２５７：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２５８：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２５９：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２６０：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２６１：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２６２：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２６３：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２６４：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２６５：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２６６：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２６７：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２６８：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２６９：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２７０：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２７１：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２７２：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２７３：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２７４：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２７５：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２７６：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２７７：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２７８：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２７９：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２８０：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２８１：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２８２：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２８３：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２８４：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２８５：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２８６：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２８７：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２８８：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２８９：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２９０：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２９１：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２９２：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２９３：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２９４：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２９５：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２９６：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号２９７：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号２９８：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号２９９：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３００：抗体クローン＃７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号３０１：抗体クローン＃７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３０２：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号３０３：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３０４：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号３０５：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３０６：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号３０７：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３０８：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号３０９：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３１０：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号３１１：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３１２：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号３１３：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３１４：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号３１５：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３１６：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号３１７：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号３１８：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号３１９：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号３２０：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号３２１：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配（赤色）を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号３２２：MCS配列
配列番号３２３：MCS配列（相補鎖）
配列番号３２４：挿入用の配列
配列番号３２５：挿入用の配列
配列番号３２６：Δ21-53(Forward　primer)
配列番号３２７：Δ21-53(Reverseprimer)
配列番号３２８：Δ100-140(Forward　primer)
配列番号３２９：Δ100-140(Reverseprimer)
配列番号３３０：Δ148-170(Forward　primer)
配列番号３３１：Δ148-170(Reverseprimer)
配列番号３３２：Δ181-190(Forward　primer)
配列番号３３３：Δ181-190(Reverseprimer)
配列番号３３４：Δ193-228(Forward　primer)
配列番号３３５：Δ193-228(Reverseprimer)
配列番号３３６：Δ233-289(Forward　primer)
配列番号３３７：Δ233-289(Reverseprimer)
配列番号３３８：Δ148-154(Forward　primer)
配列番号３３９：Δ148-154(Reverse　primer)
配列番号３４０：Δ155-162(Forward　primer)
配列番号３４１：Δ155-162(Reverse　primer)
配列番号３４２：Δ163-170(Forward　primer)
配列番号３４３：Δ163-170(Reverse　primer)
配列番号３４４：抗体クローン＃５－２の軽鎖核酸全長配列
配列番号３４５：抗体クローン＃５－２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３４６：抗体クローン＃５－２の重鎖核酸全長配列
配列番号３４７：抗体クローン＃５－２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３４８：抗体クローン＃５－３の軽鎖核酸全長配列
配列番号３４９：抗体クローン＃５－３軽鎖のアミノ酸全長配列
配列番号３５０：抗体クローン＃５－３の重鎖核酸全長配列
配列番号３５１：抗体クローン＃５－３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３５２：抗体クローン＃５－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号３５３：抗体クローン＃５－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３５４：抗体クローン＃５－８の重鎖核酸全長配列
配列番号３５５：抗体クローン＃５－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３５６：抗体クローン＃５－１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号３５７：抗体クローン＃５－１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３５８：抗体クローン＃５－１０の重鎖核酸全長配列
配列番号３５９：抗体クローン＃５－１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３６０：抗体クローン＃５－４３の軽鎖核酸全長配列
配列番号３６１：抗体クローン＃５－４３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３６２：抗体クローン＃５－４３の重鎖核酸全長配列
配列番号３６３：抗体クローン＃５－４３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３６４：抗体クローン＃６－５５の軽鎖核酸全長配列
配列番号３６５：抗体クローン＃６－５５の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３６６：抗体クローン＃６－５５の核酸全長配列
配列番号３６７：抗体クローン＃６－５５のアミノ酸全長配列
配列番号３６８：抗体クローン＃７－３４の軽鎖核酸全長配列
配列番号３６９：抗体クローン＃７－３４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３７０：抗体クローン＃７－３４の重鎖核酸全長配列
配列番号３７１：抗体クローン＃７－３４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３７２：抗体クローン＃８－１の軽鎖核酸全長配列
配列番号３７３：抗体クローン＃８－１の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３７４：抗体クローン＃８－１の重鎖核酸全長配列
配列番号３７５：抗体クローン＃８－１の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３７６：抗体クローン＃８－４の軽鎖核酸全長配列
配列番号３７７：抗体クローン＃８－４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３７８：抗体クローン＃８－４の重鎖核酸全長配列
配列番号３７９：抗体クローン＃８－４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３８０：抗体クローン＃８－７の軽鎖核酸全長配列
配列番号３８１：抗体クローン＃８－７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３８２：抗体クローン＃８－７の重鎖核酸全長配列
配列番号３８３：抗体クローン＃８－７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３８４：抗体クローン＃８－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号３８５：抗体クローン＃８－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３８６：抗体クローン＃８－８の重鎖核酸全長配列
配列番号３８７：抗体クローン＃８－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３８８：抗体クローン＃７の軽鎖核酸全長配列
配列番号３８９：抗体クローン＃７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３９０：抗体クローン＃７の重鎖核酸全長配列
配列番号３９１：抗体クローン＃７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３９２：抗体クローン＃１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号３９３：抗体クローン＃１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３９４：抗体クローン＃１０の重鎖核酸全長配列
配列番号３９５：抗体クローン＃１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号３９６：抗体クローン＃１３の軽鎖核酸全長配列
配列番号３９７：抗体クローン＃１３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号３９８：抗体クローン＃１３の重鎖核酸全長配列
配列番号３９９：抗体クローン＃１３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号４００：抗体クローン＃２２の軽鎖核酸全長配列
配列番号４０１：抗体クローン＃２２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号４０２：抗体クローン＃２２の重鎖核酸全長配列
配列番号４０３：抗体クローン＃２２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号４０４：抗体クローン＃３３の軽鎖核酸全長配列
配列番号４０５：抗体クローン＃３３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号４０６：抗体クローン＃３３の重鎖核酸全長配列
配列番号４０７：抗体クローン＃３３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号４０８：Novoprotein社のFSTL１のアミノ酸配列
配列番号４０９：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号４１０：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４１１：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号４１２：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４１３：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号４１４：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４１５：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号４１６：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４１７：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号４１８：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４１９：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号４２０：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４２１：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号４２２：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４２３：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号４２４：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４２５：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号４２６：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４２７：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号４２８：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４２９：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号４３０：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４３１：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号４３２：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４３３：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号４３４：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４３５：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号４３６：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４３７：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号４３８：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４３９：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号４４０：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４４１：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号４４２：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４４３：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号４４４：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４４５：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号４４６：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４４７：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号４４８：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４４９：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号４５０：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４５１：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号４５２：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４５３：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長核酸配列
配列番号４５４：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４５５：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４５６：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４５７：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４５８：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４５９：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４６０：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４６１：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４６２：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４６３：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２の代替アミノ酸配列
配列番号４６４：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３の代替アミノ酸配列
配列番号４６５：Δ193-204(Forward　primer)
配列番号４６６：Δ193-204(Reverse　primer)
配列番号４６７：Δ205-216(Forward　primer)
配列番号４６８：Δ205-216 (Reverse　primer)
配列番号４６９：Δ217-228(Forward　primer)
配列番号４７０：Δ217-228 (Reverse　primer)
配列番号４７１：Δ233-251(Forward　primer)
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配列番号４７３：Δ252-270(Forward　primer)
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配列番号４７７：Δ48-100(Forward　primer)
配列番号４７８：Δ48-100 (Reverse　primer) 
配列番号４７９：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号４８０：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４８１：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号４８２：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４８３：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号４８４：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４８５：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号４８６：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４８７：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号４８８：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号４８９：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号４９０：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号４９１：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号４９２：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号４９３：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号４９４：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号４９５：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長核酸配列
配列番号４９６：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４９７：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長核酸配列
配列番号４９８：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号４９９：ヒトＰＤ―Ｌ１の核酸配列
配列番号５００：ヒトＰＤ―Ｌ１のアミノ酸配列
配列番号５０１：マウスＰＤ―Ｌ１の核酸配列
配列番号５０２：マウスＰＤ―Ｌ１のアミノ酸配列
＜ＰＡＲＴ３＞
［発明の名称］ＦＳＴＬ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤のＣＴＬＡ４併用剤
［技術分野］
　本発明は、悪性腫瘍の治療併用薬等に関する。
［背景技術］
　癌が悪化する原因として免疫抑制が知られるようになった。免疫抑制を解除すると癌の効果的な治療につながるとして開発が進められている。
　特許文献１では、免疫抑制解除に関する分子の報告がなされた。FSTL1についてはある程度研究が進んでいるが（非特許文献１および２）、その機能は不明な点がまだまだ多い。
　免疫抑制解除については、いまだ発展途上であり、癌患者の生体内には、癌を攻撃して排除しようとする宿主免疫が存在するが、癌細胞の側でも、宿主免疫の監視から逃れようとするシステムを備えていることが知られており、例えば、癌細胞の存在下で制御性Ｔ細胞を除去すると、癌細胞に対する免疫反応が変化することがin　vitroとin　vivoで示されている（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）。また、胃癌（非特許文献４＝Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003，非特許文献５＝Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003参照）、直腸癌（非特許文献６＝Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999参照）、膵臓癌（非特許文献７＝Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002，８＝Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003参　照）、肺癌（非特許文献９＝Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001参照）、グリオーマ（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）において、制御性Ｔ細胞が増加することから、癌細胞による免疫回避システムに制御性Ｔ細胞が関与していると考えられている。しかし、そのメカニズムは明らかでなく、制御性Ｔ細胞由来のサイトカインがどのように貢献しているのか、未だに議論がある（非特許文献３参照）。
　さらに、制御性Ｔ細胞の欠損は重篤な自己免疫疾患を引き起こす（非特許文献１０＝Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001参照）ことから、自己免疫と癌免疫には共通のメカニズムが存在することと考えられている（非特許文献１１＝Turk　et　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002参照）。このように、制御性Ｔ細胞は、免疫反応の抑制を通じ、癌細胞に対する免疫抑制だけでなく、自己免疫やアレルギー反応のような過剰免疫反応に関与していることが知られている（非特許文献１２＝Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007参照）。
　このような背景から、現在開発されている免疫抑制解除薬は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するようにデザインされているため、免疫系全体を修飾するためには、それらを併用せざるを得ないのが現状で、実際にはあまり有効ではないとされている。
［先行技術文献］
［特許文献］
　　［特許文献１］国際公開公報WO2009/028411
［非特許文献］
　　［非特許文献１］Cancer　Research　73(20);　6185-93,　2013 
　　［非特許文献２］OncoImmunology　2:11,　e26528,　2013
　　［非特許文献３］Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006
　　［非特許文献４］Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003
　　［非特許文献５］Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003
　　［非特許文献６］Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999
　　［非特許文献７］Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002
　　［非特許文献８］Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003
　　［非特許文献９］Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001
　　［非特許文献１０］Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001
　　［非特許文献１１］Turk　et　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002
　　［非特許文献１２］Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007
［発明の概要］
［課題を解決するための手段］
　本発明者らは鋭意検討した結果、ＦＳＴＬ１が免疫抑制解除のためのより有望な標的であり、ＦＳＴＬ１の活性阻害が癌の悪化の一因と考えられる免疫抑制を誘導する癌関連間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の誘導や増殖、さらに、癌細胞の転移性、特に骨転移性の獲得に対しても効果があり、癌を排除する上で顕著な効果があることを突き止め、本発明を完成させた。本発明において、ＦＳＴＬ１は、制御性Ｔ細胞や制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞などの免疫抑制性細胞を誘導するＭＳＣを誘導することができることが見出された。それゆえ、この上流を阻害することで、免疫抑制機序全体を一斉に解除できる可能性があり、効果的な抗癌剤としての利用価値があることを見出した。したがって、特に、本発明は、「免疫抑制または免疫不全等の免疫破綻を誘導するＭＳＣの阻害」および「癌細胞の転移性阻害」の両方によって、従来の方法よりも効果的に生体内から癌を排除できると期待される点が注目されるべきものである。この知見に基づいて本発明者らはさらに開発を続けさらに抗ＦＳＴＬ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体とを組み合わせることによって予想外に顕著な治療効果があることを見出し本発明を完成させた。
　したがって、本発明は以下を提供する。
（１）ＦＳＴＬ１抑制剤とＣＴＬＡ４抑制剤との組み合わせ物。
（２）前記ＦＳＴＬ１抑制剤および前記ＣＴＬＡ４抑制剤は、それぞれ独立して、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される、項目１に記載の組み合わせ物。
（３）前記ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、前記ＣＴＬＡ４抑制剤は抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である、項目１または２に記載の組合せ物。
（４）抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物との組み合わせ物。
（５）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号５０３（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位から１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、項目３または４に記載の組合せ物。
（６）前記抗体は抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２お よび軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目３～５のいずれか１項に記載の組合せ物。
（７）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目３～６のいずれか１項に記載の組合せ物。
（８）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号６１８；重鎖：配列番号６２０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号６２２；重鎖：配列番号６２４）、＃８－１（軽鎖：配列番号６２６；重鎖：配列番号６２８）、＃７（軽鎖：配列番号６４２；重鎖：配列番号６４４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号６５０；重鎖：配列番号６５２）および＃３３（軽鎖：配列番号６５８；重鎖：配列番号６６０）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目３～７のいずれか１項に記載の組合せ物。
（９）抗ＣＴＬＡ４抗体は、ＣＴＬＡ４とＣＤ８０および／またはＣＤ８６の結合阻害能を有する、項目３～８のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１０）抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Ｃｌｏｎｅ　９Ｈ１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）またはＩｐｉｌｉｍｕｍａｂの重鎖ＣＤＲ１（配列番号７５６の３１～３５位）、重鎖ＣＤＲ２（配列番号７５６の５０～６６位）、重鎖ＣＤＲ３（配列番号７５６の９９～１０７位）、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号７５７の２４～３５位）、軽鎖ＣＤＲ２（配列番号７５７の５１～５７位）および軽鎖ＣＤＲ３（配列番号７５７の９０～９７位）を含む、項目３～９のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１１）抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Ｃｌｏｎｅ　９Ｈ１０またはＩｐｉｌｉｍｕｍａｂの可変領域（重鎖（配列番号７５６）の１～１１８位および軽鎖（配列番号７５７）の１～１１０位）の全長を含む、項目３～１０のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１２）抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Ｃｌｏｎｅ　９Ｈ１０またはＩｐｉｌｉｍｕｍａｂの全長（配列番号７５６および配列番号７５７）またはそのヒト化配列を含む、項目３～１１のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１３）前記抗ＦＳＴＬ１１抗体は、ヒト化抗体である、項目３～１２のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１４）前記抗ＦＳＴＬ１１抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６７１、６７３、６７５および６７７）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６８７、６８９、６９１および６９３）を有する、項目３～１３のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１５）項目１～１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
（１６）項目１～１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
（１７）項目１～１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
（１８）項目１～１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む大腸癌の治療剤。
（１９）項目１～１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
（２０）項目１～１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
（２１）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目２０に記載の阻害剤。
（２２）前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、項目２０または２１に記載の阻害剤。
（２３）項目１～１４のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
（２４）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目２３に記載の阻害剤。
（２５）前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目２３または２４に記載の阻害剤。
（２６）抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
（２７）ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤はＣＴＬＡ４抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
（２８）抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
（２９）ＣＴＬＡ４抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＣＴＬＡ４制剤はＦＳＴＬ１抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
（３０）前記抗体は、腫瘍内または静脈内に投与されることを特徴とする、項目１６に記載の医薬、項目１７、２６～２９のいずれかに記載の抗がん剤、項目１７もしくは１８に記載の治療剤、または項目１９～２５のいずれかに記載の阻害剤。
　本発明において、上述した１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解することにより、当業者に認識される。
［発明の効果］
　本発明は、ＦＳＴＬ１の阻害によって、癌細胞に作用して直接的に、あるいは、免疫を抑制する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）や骨髄由来免疫抑制性細胞（ＭＤＳＣ）等の免疫抑制性または免疫不全性の細胞の分化誘導、増殖、および／または免疫抑制活性または免疫不全活性の増強を促進する間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の増殖および分化誘導を抑制して間接的に、癌細胞の転移を効果的に抑制し、抑制困難と考えられている癌転移、特に、有効な治療法が確立されていない骨転移をも効果的に抑制する。また、骨転移モデルだけに限らず、種々の動物がんモデルにおいても、Ｔｒｅｇの分化誘導、腫瘍の増殖、転移、衰弱による体重減少などが抑制される。このように、本発明は、多局面にわたり有効な癌治療薬を提供する。また、免疫抑制または免疫不全も従来のものに比べて一斉に解除できることから、本発明は、広範囲の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤をも提供する。本発明の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するものではないため、従来の免疫抑制解除剤の制約から広く解放され、疲弊Ｔ細胞に対する効果もあることから、免疫不全解除効果もあり、免疫破綻を解除する免疫破綻解除剤としても有用である。本発明は、これらのＦＳＴＬ１の阻害についての効果について、ＣＴＬＡ４の阻害とを組み合わせることによってさらに顕著な効果を奏することを見出した。詳細に述べると、ＦＳＴＬ１の阻害と、 抗ＣＴＬＡ４抗体の阻害によって、予想外にも、相乗効果が示され、抗腫瘍効果が増強され、５匹中５匹では、大腸がんが消失するという相乗効果以上の効果が示された。
［図面の簡単な説明］
　　［図６３］図６３は、本発明の抗体についてのＦＳＴＬ１に対する結合活性を示すグラフである（実施例２）。図６３Ａは、初期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。白ひし形がクローン＃５－２、×がクローン＃５－４、黒三角がクローン＃５－８、白丸がクローン＃５－１０、白四角がクローン＃５－４３、白三角がクローン＃６－５５、黒丸がクローン＃７－３４を示し、黒四角がコントロールである抗ジニトロフェニル（ＤＮＰ）抗体を示す。結合活性の強さは＃５－１０、＃６－５５、＃７－３４＞＃５－３＞＃５－８＞＃５－４３であった。図６３Ｂはマウスとヒトとの間の交差反応性を調査したものである。図６３Ａで示した抗体の内、スクリーニングの際にマウスFSTL1にも反応性を示したクローンの結合活性を評価したものである。左にヒトFSTL1に対する結合活性を示し、右にマウスFSTL１に対する結合活性を示す。＃6-55および＃7-34ともヒトおよびマウスFSTL1にも強い結合活性を示した。図６３では、抗体濃度は1000　ng/mlから希釈した。図６４以降に示す実験では濃度をさらに希釈して実験を行った。
　　［図６４］図６４は、中期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す（実施例２）。白四角はクローン＃６－５５、白三角はクローン＃８－１、黒丸はクローン＃８－４、黒三角はクローン＃８－７、白ひし形はクローン＃８－８を示す。比較として＃6-55と共にアッセイを行っている。結合活性の強さはクローン＃６－５５、＃８－１、＃８－７＞＃８－４＞＃８－８であった。＊図６４における抗体濃度は125　ng/mlから希釈した。
　　［図６５］図６５は、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローンの結合活性を示すグラフである（実施例２）。図６５Aの右側と左側、図６５Bの右側と左側はそれぞれ同時に評価したものであるが、クローン数が多いために図の見易さを重視して二つに図を分けたものである。図６５Aは、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）も含め、ヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものである。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。ヒトFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１３＞＃８－１、＃１０＞＃８－４＞＃７、＃３３＞＃５－８＞＃２２であった。抗DNP抗体は結合活性が観察されなかった。図６５Bは、同上のクローンのマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。マウスFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１０、＃１３＞＃２２＞＃７＞＃３３＞＃８－１であった。＃8-1が若干結合活性を示している。＃５－８、＃８－４、抗DNP抗体は全く結合活性を示さなかった。図６５における抗体濃度は100ng/mlから希釈した。これらELISAによる結合活性の結果とin　vitro評価を元に、in　vivo評価に供試する有望なクローンを絞り込んだ（＃６－５５、＃７－３４、＃８－１）。更に新たなパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）もin　vivo評価の対象とした。
　　［図６６］図６６は、欠損変異体（デリションミュータント）および推定エピトープを示す（実施例３）。図６６の上段はヒトFSTL1の模式図と欠損部位の位置を示す。これらヒトFSTL1の欠損体を抗原に用いたELISAにより、各クローンのエピトープの推定箇所を特定し た。図６６の下段は、取得したクローンと特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の推定エピトープとの対比を表に示す。さらにヒトおよびマウスに交差反応性を示すクローン（強い結合活性；○、弱い結合活性；△）を記載した。結合活性の強いまたは弱いの基準は、１２．５ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトおよびマウスの両方に結合活性がみられるものを「強い」と分類し、それより高い濃度でヒトおよびマウスの両方に初めて結合活性がみられるものを「弱い」とした。
　　［図６７］図６７は、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞（MSC)および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例６～７）。図６７Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例６）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。その中でもクローン＃５－３、＃５－８、＃７－３４がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。図６７Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例７）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンが阻害活性を示した。特にクローン＃５－３、＃５－８がより高い阻害活性を示している。
　　［図６８－１］図６８もまた、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例８～１１）。図６８Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例８；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃５－４３、＃６－５５、＃８－１、＃８－８で阻害活性が認められた。図６８Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例９；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした)。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLおよびCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃６－５５がより高い阻害活性を示している。
　　［図６８－２］図６８Cは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1における　RANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１０）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、いずれの抗体クローンも阻害活性を示した。特に、クローン＃５－２、＃６－５５、＃８－４、＃８－７がより高い阻害活性を示した。図６８Dは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す。ここでは、抗体用量依存試験を行った（実施例１１）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、クローン＃６－５５が阻害活性を示したが、抗体の用量依存性は認められなかった。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃６－５５はRANKL陽性細胞とCCR2陽性細胞の両方の細胞誘導を、同時に強く阻害した。 
　　［図６９］図６９は、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１２；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlを使用した)。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。特に、クローン＃７－３４、＃５－２、＃６－５５、＃８－７の順で強い阻害活性が認められた。
　　［図７０］図７０は、in　vivo用に製造した抗FSTL1抗体および抗PD-L1抗体の活性評価を示す（実施例１３）。マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、右に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。いずれもコントロール抗体と比べ、これまでの結果と同様に高い阻害活性を示したことから、in　vivo用に製造されたこれらの抗体も妥当な抗体であることが示された。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想されるが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強いことが示された。
　　［図７１］図７１Aは、図７０と同様の試験を別のクローン（各グラフに記載のクローン）によって行った結果を示す（実施例１４）。図７０同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、右端に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、MDSCの誘導に対して阻害活性を示した。中でも、#13、#33はポジティブコントロール(#6‐55)と同等以上の阻害活性を示した。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図７１Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール、続いて抗FSTL１抗体クローンを示す。いずれの抗FSTL1抗体クローンにおいても、FSTL1による脂肪細胞への分化能を有するMSCの分化誘導に対して阻害活性を示した。
　　［図７２］図７２は特許文献１（WO2009／028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体との活性比較を示す（実施例１５～１６）。（A）＃６－５５（マウスキメラ抗体）とR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体（ラット抗体；Ｒ＆Ｄと表示）とで比較するために用量依存性試験を行い、図７０と同様にFSTL1の作用の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１５）。図７２Aは図７０同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。R&D社製の抗体は＃6-55と同等レベルでFSTL1による各細胞の誘導の阻害活性を示した。用量依存性の効果は認められなかった。各アイソタイプ抗体を基準とすれば、＃６－５５の阻害活性の方がやや優位かと考えられる。図７２Bは脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１６）。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体 を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。＃6-55により、脂肪細胞への分化能をもつMSCの誘導が抗体用量依存的に阻害された。他方、R&D社製の抗体は阻害活性を示さなかったことから、＃６－５５の抗体の優位性が認められた。なお、脂肪細胞への分化能は、免疫抑制を誘導する癌関連MSC（図７２Aの中央の細胞にも示されている細胞）の機能の一つである。図７２Aと図７２Bとの比較から以下のことがいえる。すなわち、マウスコントロール抗体（マウス由来タンパク質）を投与した場合と比べて、ラットコントロール抗体という「ラット由来のタンパク質」をマウスの生体内に投与した際に、それ自体の反応が低下していることがわかる（特に７２A中央の図）。これは、マウスの骨髄細胞を使ったための異物に対する免疫反応が若干生じたためと推測されるが、同じ「ラット由来タンパク質」であるR&D社のFSTL1抗体を投与した場合は、本来は、このラットコントロール抗体投与群と比較するのが妥当であるところ、それぞれのコントロールタンパク質に対する『抑制率』を考えると、マウスコントロール抗体投与群に対する6-55の抑制率に比べて、ラットコントロール抗体投与群に対するR&D社のFSTL1抗体の抑制率は小さく、実は、＃6-55の方が優位であることが示唆される。FSTL1によって誘導されたCD45陰性MSCの全てが免疫抑制を引き起こす癌関連MSCではなく、数種類のマーカーや脂肪細胞への分化能などで同定する必要がある。本発明の抗体はFSTL1の作用を阻害することで癌関連MSCの誘導を強く阻害することができると言える。
　　［図７３－１］図７３は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図７３Ａ（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図７３Ｂ（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45陰性細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。両棒グラフについて、上から、処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。図７３Ｃ（マウス個体別腫瘍体積）は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果（皮下に移植した腫瘍増殖が抑制されていること）を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。
　　［図７３－２］図７３は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図７３Ｄは、脾臓内の細胞集団の変化を示す。腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身に修飾／影響を受けることを提示する。左は、ＣＤ４５陰性細胞数を示し脾臓内でもＭＳＣが減少していることを示す。中央は、ＣＤ４陽性Ｆｏｘｐ３陽性Ｔ細胞数を示し、Ｔｒｅｇが減少していることを示す。右はＣＤ８陽性Ｔｉｍ３陽性Ｔ細胞数を示し、疲弊ＣＤ８陽性Ｔ細胞が減 少していることを示す。ここで、疲弊とは、機能が低下または不全に陥っている状態を示し、Ｔｉｍ３はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきＣＤ８陽性Ｔ細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。
　　［図７４－１］図７４もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図７４Ａ左（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図７４Ａ中央（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。図７４Ａ右（マウス体重）は体重変化に対する効果（骨転移によりマウスが衰弱するが、その指標の一つとして体重を計測したところこれが抑制されていることが示されること）を示す。図７４Aの棒グラフについて、上から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す図７４Bの５グラフは、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。被験対象である抗FSTL1抗体3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果が認められた。
　　［図７４－２］図７４もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200μg/mouse=10mg/kg　相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図７４Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図７４Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。下右はCD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　　［図７５］図７５もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１９）。本図では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較が示される。図７５Ａは、各種抗体の腫瘍容積に対する効果を時間経過とともに示す。腫瘍移植８、１１、１５日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１５日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day0でGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を行い、Day　4で 抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）を行い、Day8で抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）を行い、Day　15で各種アッセイを行った。図７５Ｂ左は、骨転移に対する効果（GFP陽性細胞数（１０６／マウス））を示し、図７５Ｂ中央は骨髄中ＭＳＣの増加に対する効果（CD４５陰性細胞数（（１０６／マウス））について示す。図７５Ｂ　右は体重変化（体重（ｇ））に対する効果を示す。図７５Ｂはいずれも、上から、処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。対照抗体として、以下の既存の抗体薬を用いた。Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)；Anti-PD-1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)；Anti-PD-L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全て対照抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　　［図７６］図７６もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２０）。本図では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。
図７６Ａは、３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Snail+腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。本実施例では、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価している。図７６Ｂは、肺転移結節数に関する結果を示す。左から、処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体（＃６－５５）は、CT26皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強く抑制し、5匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(対照抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　　［図７７］図７７もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２１）。本図ではマウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day　0に腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）を行い、Day4および7に抗体の腹腔内投与（10mg/kg）を行い、Day　14に薬効評価（皮下腫瘍増殖）を行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　　［図７８］図７８Aもまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２２）。本図ではマウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。左パネルの２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図７８Bは体重変化に対する効果を示す。 
左はコントロール抗体、中央は抗FSTL1抗体、右は腫瘍細胞を投与していない未処置の個体を示す。縦軸は腫瘍体積（ｇ）を示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail強制発現細胞株の親株である。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、体重減少についても抑制活性を示した。
　　［図７９］図７９もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２３）。本図では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示す。２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植３、６、１０日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。FSTL1発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与は対照抗体投与群に比し有意に抑制した。
　　［図８０］図８０もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２４）。本図では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。４つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左端はコントロール抗体、左から２番目は１ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、右から２番目は３ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、そして右端は１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図７８の図の実験と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与は対照抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　　［図８１］図８１は、本発明の抗FSTL1抗体（＃６－５５）と、既知の抗FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)とを含む実験系で％CD4+Foxp3＋CTLA+細胞を指標に活性を測定したTreg誘導実験の結果である。◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。
　　［図８２］図８２は、抗FSTL1 抗体の種々の機能を見た結果である。パネルAでは、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響の結果を示す。パネルAの上段は増殖の結果を示し、下段は浸潤の結果を示す。左からPanc1、MIAPaCa、MDA231、Hs294を示す。グラフは、上段では、3日に培養した後の細胞数（×１０３）を示す。下段では、3日間抗体で処理した腫瘍細胞の細胞数を示す。上段では、それぞれのグラフ中上からなにもなし（None）、コントロールＩｇＧ、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。下段ではそれぞれのグラフ中上がコントロールＩｇＧ、下が抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。これらから、Snail＋腫瘍細胞はきわめて転移性の高いことが明らかになった。パネルBでは、FSTL1刺激下における抗FSTL1 抗体の作用を示す。左は増殖能および右は浸潤能を示す。いずれも左から、何も添加していない（None）、左から２番目はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルC～Dでは、Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を示す。Ｃの左からＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤、ＣＣＲ２発現、ＲＡＮＫＬ発現の結果を示す。いずれも左から、Snailを強制発現させていない親株のPanc1細胞（Mock）、左から２番目から右端は抗FSTL1抗体（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルＤでは、マウスメラノーマＢ１６ｔ－Ｆ１０でのＳｎａｉｌト ランスフェクタントでの結果を示す。いずれも左から、偽抗体（Mock）、左から２番目から右端はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。
　　［図８３］図８３は、マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験の結果を示す。パネルＡでは、左からＣＤ４５＋ＭＳＣ細胞、右はＣＤ４５＋ＣＤ１４６＋ＡＬＣＡＭ＋ｓＭＳＣを示す。左から、なにもなし、左から２番目から右端はＦＳＴＬ１（２０ｎｇ／ｍｌ）での結果であり、左から２番めから、イムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリンあり、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３のものを示す。パネルＢでは、ＣＤ４５－ＭＳＣ細胞、ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋　ｓＭＳＣ細胞、スフェアコロニー（自己新生能）を示す。左端はＦ１０－ｍｏｃｋを示し、左から２番目から右端はＦ１０－ｓｎａｉｌ＋を示す。左から２番目から順にイムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリン、抗ＦＳＴＬ１抗体での結果を示す。結果は左グラフおよび中グラフは細胞数で示される。スフェアコロニーは、コロニー数を示す。スフェアコロニーは３つあるグラフのうち左は総数、中は大きなコロニー（＞５０細胞）、右は小さなコロニー（１０～５０細胞）を示す。
　　［図８４］図８４は、マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験結果を示す。グラフは、ＣＤ４＋細胞中のFoxp3＋CTLA4+細胞の割合を示す。左端はなにもなし、左から２番目～右端はＦＳＴＬ（５ｎｇ／ｍｌ）の存在下での実験である。左から２番目からそれぞれマウスイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。
　　［図８５］図８５は、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種（＃７、＃１０、＃３３）について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性の評価を示す。左上は細胞接着、右上は細胞浸潤、左下はＣＣＲ２発現、右下はＲＡＮＫＬ発現を示す。それぞれのグラフ中、左からなにもなし、コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。＊は統計学的有意（ｐ＜０．０５）を示す。
　　［図８６－１］図８６（図８６－１～８６－４）は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのin vivo 薬効比較をした結果である。図８６－１は、上段に腫瘍増殖、下段に骨転移、骨髄中のｓＭＳＣ、脾臓中のｓＭＳＣを示す。上段の腫瘍増殖では左から、処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。統計学的有意かどうかはp値を示すことによって表示する。ｘ軸は腫瘍移植後の日数である（なおp値は１４日目の値である）。ｙ軸は腫瘍の容積（ｍｍ３）である。骨転移、２種のｓＭＳＣグラフトも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブ（腫瘍無モデル）を示す。横軸はそれぞれＧＦＰ＋腫瘍細胞の数、ＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数およびＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数を示す。
　　［図８６－２］図８６―２は、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群を示す。左から、CD4+T 細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞）、腫瘍特異的CD8+T細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ８＋テトラマー＋）、活性化NK 細胞（ＣＤ４５＋ＮＫ１．１＋ＮＫＧ２Ｄ＋）を示す。上段は、陽性細胞割合を示し。下段はｍｍ３当たりの細胞数を示す。各々のグラフとも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図８６－３］図８６－３は、図８６－２と同様の実験であり、腫瘍内に浸潤した免疫抑制性T 細胞群ならびに皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞についての結果を示す。左から、CD4+Treg（ＣＤ４５＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）、MDSCs（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋ＭＤＳＣｓ）、EMTを生じている腫瘍細胞（Ｓｎａｉｌ＋ＣＤ４４＋腫瘍）を示し、グラフの説明は図８６－２と同様である。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図８６－４］図８６－４は、脾臓内における免疫細胞群の結果を示す。左から、腫瘍特異的CD8+T 細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋テトラマー＋ＣＴＬｓ）、CD4+Treg（ＣＤ４＋Ｃ ＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ＋Ｔｒｅｇｓ）、CD8+Treg（ＣＤ８＋ＣＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）を示す。グラフは脾臓当たりの細胞数（×１０６で表示）を示す。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図８７］図８７は、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価（腫瘍増殖、体重および骨髄中のｓＭＳＣ数）した結果である。腫瘍増殖では、統計学的有意はｐ値で示す。左はコントロールであり、抗ＦＳＴＬ１抗体は右に示す。横軸は腫瘍移植後の日数であり、縦軸は腫瘍容積（ｍｍ３）を示す。中グラフは動物の体重を示す。左からコントロール、抗体ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。体重はｇで表す。右グラフは骨髄中のｓＭＳＣを示す。左からコントロール、抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋細胞数（×１０６）を示す。
　　［図８８］図８８～図８９は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図８８は、腫瘍移植後の腫瘍容積の変動（ｍｍ３）を示す。左からコントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。いずれもカッコ内にコントロールと比較しての統計学的有意（ｐ値）を示し、＃６－５５との間の統計学的有意は線で結びp値で示す。横軸は腫瘍移植後の日数である。
　　［図８９］図８８～図８９は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図８９は、生存率を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示し縦軸はマウス生存率（ｎ＝５）を示す。コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。＃６－５５は細い黒線、＃７はグレイの破線、＃１０は太い黒の実線、＃１３はグレイの実線、＃３３は黒の濃い破線コントロールイムノグロブリンとの統計学的有意値（ｐ値）を示し、＃６－５５に対する統計学的有意（ｐ値）をカッコ内に示す。
　　［図９０］図９０は、マウスキメラ抗体の親和性データ（BIACOREによる測定）を示す。図は、マウスキメラ抗体に対する抗原結合量および解離量のプロットである。。
　　［図９１］図９１～図９２は、ヒト化抗体の結果を示す。図９１は、ヒト化6-55抗体のH鎖(IgG1型)とL鎖の組み合わせによる結合活性比較を示す。白丸に点線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ１、四角に実線がＨ２－Ｌ１、白三角に実線がＨ３－Ｌ１の結果を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４５０の値を示したものである。Ｈ２－Ｌ１が最良であることが分かった。
　　［図９２］図９１～図９２は、ヒト化抗体の結果を示す。図９２では、本発明の抗体ヒト化＃６－５５Ｈ２－Ｌ１（ＩｇＧ１型）のヒトおよびマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。左がヒトＦＳＴＬ１および右がマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。黒丸はいずれもヒト＃６－５５抗体を示し、白四角がヒト抗ＤＮＰ抗体を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４９０／６３０の値を示したものである。
　　［図９３］図９３は、Colon26 肺転移モデルにおける既存免疫抑制解除抗体薬とのin　vivo 活性比較を示す図である。本図では、抗FSTL1抗体、抗CTLA4 抗体、抗PD1抗体、抗PD-L1抗体を単剤同士で比較した薬効評価が示される（実施例３７）。左からマウスイムノグロブリン（コントロール）、ラットイムノグロブリン（コントロール）、抗体FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、および抗PD-L1抗体を示す。縦軸は腫瘍容積を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。
　下パネルは生存率を示す。コントロールラットＩｇＧは、灰色点線で示し、コントロールマウスIgGは黒色実線で示し、抗ＰＤ１抗体は灰色破線で示し、抗体ＰＤ－Ｌ１抗体は太い灰色実線で示す。抗ＦＳＴＬ１抗体は濃い黒色実線で示し、抗ＣＴＬＡ４抗体は濃い黒色破線で示す。
　　［図９４］図９４は、CT26 移植モデルを用いた抗CTLA4 抗体との併用効果の結果を示す。上パネルは、左からイムノグロブリン（コントロール）、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体を単剤同士、および右端では抗FSTL1抗体および抗CTLA抗体と組み合わせた併用剤での 薬効評価が示される（実施例３８）。縦軸は腫瘍容積を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。
　下パネルは生存率を示す。縦軸は生存率、横軸は腫瘍移植後の日数を示す。組合せ療法では、驚くべきことに、３５日経過後も死亡例がなかった。コントロールＩｇＧは、灰色実線で示し、抗ＦＳＴＬ１抗体は濃い黒色実線で示す。抗ＣＴＬＡ４抗体は灰色破線で示し、組み合わせは、１００％を常に示す灰色実線を示す。
［発明を実施するための形態］
　以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。なお、同様な内容については繰り返しの煩雑を避けるために、適宜説明を省略する。また、本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「a」、「an」、「the」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。従って、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
　最初に本発明において使用される用語および一般的な技術を説明する。
　本明細書において「FSTL1」とは、フォリスタチンに類似するタンパク質であって、アクチビン結合タンパク質であるタンパク質をコードするものであり、フォリスタチン様配列に含まれるFSモジュールを含み、10個の保存システイン残基を有するとされている。関節リウマチに関する自己抗原であると考えられてきたが、最近の知見は、特許文献１（WO2009/028411）に説明されている。NCBIに記載されているFSTL1のアクセッションナンバーは、例えば、NP_009016（NP_009016.1）；NP_032073.2（アミノ酸）、NM_007085（NM_007085.4）；NM_008047.5（ｍRNA）である。FSTL1のアミノ酸配列は、例えば、配列番号５０３または配列番号５０５である。FSTL1mRNAの塩基配列は、例えば、配列番号５０４または配列番号５０６である。FSTL1は、FSTL1活性を有していれば、そのアミノ酸配列は限定されない。したがって、本発明の具体的な目的に合致する限り、特定の配列番号またはアクセッション番号に記載されるアミノ酸配列を有するタンパク質（あるいはそれをコードする核酸）のみならず、機能的に活性なその誘導体、類似体もしくは変異体または機能的に活性なそのフラグメント、またはその相同体、または高ストリンジェンシー条件または低ストリンジェンシー条件下で、このタンパク質をコードする核酸にハイブリダイズする核酸にコードされる変異体もまた、本発明において用いることができることが理解される。
　したがって、FSTL1の代表的なヌクレオチド配列は、
　（a）配列番号５０３または配列番号５０５に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
　（b）配列番号５０４または配列番号５０６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；
　（c）配列番号５０４または配列番号５０６に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
　（d）配列番号５０３または配列番号５０５に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド； 
　（e）配列番号５０４または配列番号５０６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
　（f）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
　（g）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ることをいう。
　FSTL1のアミノ酸配列としては、
　（a）配列番号５０４または配列番号５０６に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
　（b）配列番号５０４または配列番号５０６に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
　（c）配列番号５０３または配列番号５０５に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
　（d）配列番号５０４または配列番号５０６に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
　（e）（a）～（d）のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、であり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ること（例えば、抗原として用いられる場合特異的エピトープとして機能し得る領域を含むこと）をいう。配列番号５０３～５０６はリーダー配列を含む前駆体である。配列番号５０４では最初の２０アミノ酸（メチオニンからアラニンまで）および配列番号５０６では最初の１８アミノ酸（メチオニンからグリシンまで）がリーダー配列である。したがって、本発明においてFSTL1といった場合、そのアミノ酸配列は、これらのリーダー配列が削除された後のものをさすことがある。
　本発明の関連において、「FSTL1に結合する物質」、「FSTL1（の）結合剤」または「FSTL1相互作用分子」は、少なくとも一時的にFSTL1に結合する分子または物質である。検出目的では好ましくは、結合したことを表示しうる（例えば標識されるか標識可能な状態である）ことが有利であり、治療目的では、さらに治療用薬剤が結合していることが有利である。FSTL1に結合する物質は、例としては、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、siRNA、低分子量分子（LMW）、結合性ペプチド、アプタマー、リボザイムおよびペプチド模倣体（peptidomimetic）等を挙げることができる。FSTL1に結合する物質または「FSTL1相互作用分子は、FSTL1の阻害剤であってもよく、例えばFSTL1に対して向けられる、特にFSTL1の活性部位に対して向けられる、結合性タンパク質または結合性ペプチド、並びにFSTL1遺伝子に対して向けられる核酸も含まれる。FSTL1に対する核酸は、例えばFSTL1遺伝子の発現またはFSTL1の活性を阻害する、二本鎖または一本鎖DNAまたはRNA、あるいはその修飾物または誘導体を指し、そしてアンチセンス核酸、アプタマー、siRNA（低分子干渉RNA）およびリボザイムを含むがこれらに限定されない。本明細書において、FSTL1について「結合タンパク質」または「結合ペプチド」とは、FSTL1に結合する任意のタンパク質またはペプチドを指し、そしてFSTL1に対して指向される抗体（例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体）、抗体フラグメントおよび機能的等価物を含むが これらに限定されない。
　本明細書において、「ＣＴＬＡ４」と「ＣＴＬＡ－４」は、交換可能に用いられ、別名CD152とも呼ばれる４０ｋＤａのイムノグロブリンスーパーファミリーの一つであり、ヘルパーＴ細胞の表面上に発現されＴ細胞に対して阻害的シグナルを伝達するものであり、ＣＤ８０およびＣＤ８６に結合する。細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質であることからその４番目としてＣＴＬＡ－４の名がある。NCBIに記載されているＣＴＬＡ４のアクセッションナンバーは、例えば、ヒトはNP_001032720（アミノ酸）；マウスはNP_001268905（アミノ酸）、ヒトはNM_001037631（ｍRNA）；マウスはNM_001281976（ｍRNA）である。ＣＴＬＡ４のアミノ酸配列は、例えば、配列番号７５２または配列番号７５４である。ＣＴＬＡ４　mRNAの塩基配列は、例えば、配列番号７５３または配列番号７５５である。ＣＴＬＡ４は、ＣＴＬＡ４活性を有していれば、そのアミノ酸配列は限定されない。したがって、本発明の具体的な目的に合致する限り、特定の配列番号またはアクセッション番号に記載されるアミノ酸配列を有するタンパク質（あるいはそれをコードする核酸）のみならず、機能的に活性なその誘導体、類似体もしくは変異体または機能的に活性なそのフラグメント、またはその相同体、または高ストリンジェンシー条件または低ストリンジェンシー条件下で、このタンパク質をコードする核酸にハイブリダイズする核酸にコードされる変異体もまた、本発明において用いることができることが理解される。
　したがって、ＣＴＬＡ４の代表的なヌクレオチド配列は、
　（a）配列番号７５２または配列番号７５４に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
　（b）配列番号７５３たは配列番号７５５に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；
　（c）配列番号７５３または配列番号７５５に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
　（d）配列番号７５２または配列番号７５４に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
　（e）配列番号７５３または配列番号７５５に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
　（f）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
　（g）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、ＣＴＬＡ４の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ることをいう。
ＣＴＬＡ４のアミノ酸配列としては、
　（a）配列番号７５３または配列番号７５５に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
　（b）配列番号７５３または配列番号７５５に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
　（c）配列番号７５２または配列番号７５４に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド； 
　（d）配列番号７５３または配列番号７５５に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
　（e）（a）～（d）のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、であり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、PD-L1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ること（例えば、抗原として用いられる場合特異的エピトープとして機能し得る領域を含むこと）をいう。配列番号７５２～７５５はリーダー配列を含む前駆体である。配列番号７５３および７５５では、いずれも最初の３５アミノ酸（それぞれ配列番号７５３ではメチオニンからシステインまで、配列番号７５５ではメチオニンからセリンまで）がリーダー配列である。したがって、本発明においてＣＴＬＤ４といった場合、そのアミノ酸配列は、これらのリーダー配列が削除された後のものをさすことがある。
　本発明の関連において、「ＣＴＬＡ４に結合する物質」、「ＣＴＬＡ４（の）結合剤」または「ＣＴＬＡ４相互作用分子」は、少なくとも一時的にＣＴＬＡ４に結合する分子または物質である。検出目的では好ましくは、結合したことを表示しうる（例えば標識されるか標識可能な状態である）ことが有利であり、治療目的では、さらに治療用薬剤が結合していることが有利である。ＣＴＬＡ４に結合する物質は、例としては、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、siRNA、低分子量分子（LMW）、結合性ペプチド、アプタマー、リボザイムおよびペプチド模倣体（peptidomimetic）等を挙げることができる。ＣＴＬＡ４に結合する物質または「ＣＴＬＡ４相互作用分子は、ＣＴＬＡ４の阻害剤であってもよく、例えばＣＴＬＡ４に対して向けられる、特にＣＴＬＡ４の活性部位に対して向けられる、結合性タンパク質または結合性ペプチド、並びにＣＴＬＡ４遺伝子に対して向けられる核酸も含まれる。ＣＴＬＡ４に対する核酸は、例えばＣＴＬＡ４遺伝子の発現またはＣＴＬＡ４の活性を阻害する、二本鎖または一本鎖DNAまたはRNA、あるいはその修飾物または誘導体を指し、そしてアンチセンス核酸、アプタマー、siRNA（低分子干渉RNA）およびリボザイムを含むがこれらに限定されない。本明細書において、ＣＴＬＡ４について「結合タンパク質」または「結合ペプチド」とは、ＣＴＬＡ４に結合する任意のタンパク質またはペプチドを指し、そしてＣＴＬＡ４に対して指向される抗体（例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体）、抗体フラグメントおよび機能的等価物を含むがこれらに限定されない。
　本明細書で使用される「誘導体」、「類似体」または「変異体」は、好ましくは、限定を意図するものではないが、対象となるタンパク質（例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４）に実質的に相同な領域を含む分子を含み、このような分子は、種々の実施形態において、同一サイズのアミノ酸配列にわたり、または当該分野で公知のコンピュータ相同性プログラムによってアラインメントを行ってアラインされる配列と比較した際、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％または99％同一であるか、あるいはこのような分子をコードする核酸は、（高度に）ストリンジェントな条件、中程度にストリンジェントな条件、またはストリンジェントでない条件下で、構成要素タンパク質をコードする配列にハイブリダイズ可能である。これは、それぞれ、アミノ酸置換、欠失および付加によって、天然存在タンパク質を改変した産物であり、その誘導体がなお天然存在タンパク質の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示すタンパク質を意味する。例えば、本明細書において記載されあるいは当該分野で公知の適切で利用可能なin　vitroアッセイによって、このようなタンパク質の生物学的機能を調べることも可能である。本明細書で使用される「機能的に活性な」は、本明細書において、本発明のポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体が関連する態様に従って、生物学的活性などの、タンパク質の構造的機能、制御機能、または生化学的機能を有する、ポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体を指す。本発明では、FSTL1またはＣＴＬＡ４についてヒ トが主に論じられるが、ヒト以外の多くの動物がFSTL1またはＣＴＬＡ４を発現していることが知られているため、これらの動物、特に哺乳動物についても、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　本明細書において「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）が包含される。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の1または2以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基を持つ有機化合物の総称である。本発明の実施形態に係る抗体が「特定のアミノ酸配列」を含むとき、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が化学修飾を受けていてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が塩、または溶媒和物を形成していてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸がL型、またはD型であってもよい。それらのような場合でも、本発明の実施形態に係るタンパク質は、上記「特定のアミノ酸配列」を含むといえる。タンパク質に含まれるアミノ酸が生体内で受ける化学修飾としては、例えば、N末端修飾（例えば、アセチル化、ミリストイル化等）、C末端修飾（例えば、アミド化、グリコシルホスファチジルイノシトール付加等）、または側鎖修飾（例えば、リン酸化、糖鎖付加等）等が知られている。本発明の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」を含む。「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、2’－O－メチル－リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がN3’－P5’ホスホロアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5プロピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5チアゾールウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがC－5プロピニルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（phenoxazine－modified　cytosine）で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、DNA中のリボースが2’－O－プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体およびオリゴヌクレオチド中のリボースが2’－メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、1またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの3番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Batzer　et　al.,　Nucleic　Acid　Res.19:5081(1991);　Ohtsuka　et　al.,　J. Biol.Chem.260:2605-2608(1985);　Rossolini　et　al.,　Mol.Cell.Probes　8:91-98(1994)）。本明細書において「核酸」はまた、遺伝子、cDNA、mRNA、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換可能に使用される。本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいい、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」をさすことがある。
　本明細書において遺伝子の「相同性」とは、2以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいい、一般に「相同性」を有するとは、同一性または類似性の程度が高いことをいう。従って、ある2つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。2種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。2つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でDNA配列が、代表的には少なくとも50％同一である場合、好ましくは少なくとも70％同一である場合、より好ましくは少なくとも80％、90％、95％、96％、97％、98％または99％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。従って本明細書において「相同体」または「相同遺伝子産物」は、本明細書にさらに記載する複合体のタンパク質構成要素と同じ生物学的機能を発揮する、別の種、好ましくは哺乳動物におけるタンパク質を意味する。こうような相同体はまた、「オルソログ遺伝子産物」とも称されることもある。本発明の目的に合致する限り、このような相同体、相同遺伝子産物、オルソログ遺伝子産物等も用いることができることが理解される。
　アミノ酸は、その一般に公知の3文字記号か、またはIUPAC－IUB Biochemical Nomenclature Commissionにより推奨される1文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された1文字コードにより言及され得る。本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるBLASTを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、NCBIのBLAST2.2.28（2013.4.2発行）を用いて行うことができる。本明細書における同一性の値は通常は上記BLASTを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメータの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。類似性は、同一性に加え、類似のアミノ酸についても計算に入れた数値である。
　本発明の一実施形態において「数個」は、例えば、10、8、6、5、4、3、または2個であってもよく、それらいずれかの値以下であってもよい。1または数個のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入、または他のアミノ酸による置換を受けたポリペプチドが、その生物学的活性を維持することは知られている（Market　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.1984　Sep;81(18):　5662-5666.、Zoller　et　al.,Nucleic　Acids　Res.　1982　Oct　25;10(20):　6487-6500.、Wang　et　al.,　Science.　1984　Jun　29;224(4656):　1431-1433.）。欠失等がなされた抗体は、例えば、部位特異的変異導入法、ランダム変異導入法、または抗体ファージライブラリを用いたバイオパニング等によって作製できる。部位特異的変異導入法としては、例えばKOD-Plus-　Mutagenesis　Kit　(TOYOBO　CO.,　LTD.)を使用できる。欠失等を導入した変異型抗体から、野生型と同様の活性のある抗体を選択することは、FACS解析やELISA等の各種キャラクタリゼーションを行うことで可能である。
　本発明の一実施形態において「90％以上」は、例えば、90、95、96、97、98、99、または100％以上であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。上記「相同性」は、2つもしくは複数間のアミノ酸配列において相同なアミノ酸数の割合を、当該技術分野で公知の方法に従って算定してもよい。割合を算定する前には、比較するアミノ 酸配列群のアミノ酸配列を整列させ、同一アミノ酸の割合を最大にするために必要である場合はアミノ酸配列の一部に間隙を導入する。整列のための方法、割合の算定方法、比較方法、およびそれらに関連するコンピュータプログラムは、当該技術分野で従来からよく知られている(例えば、BLAST、GENETYX等)。本明細書において「相同性」は、特に断りのない限りNCBIのBLASTによって測定された値で表すことができる。BLASTでアミノ酸配列を比較するときのアルゴリズムには、Blastpをデフォルト設定で使用できる。測定結果はPositivesまたはIdentitiesとして数値化される。
　本明細書において「ストリンジェント（な）条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法などを用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、コロニーあるいはプラーク由来のDNAを固定化したフィルターを用いて、0．7～1．0MのNaCl存在下、65℃でハイブリダイゼーションを行った後、0．1～2倍濃度のSSC（saline-sodium　citrate）溶液（1倍濃度のSSC溶液の組成は、150mM　塩化ナトリウム、15mM　クエン酸ナトリウムである）を用い、65℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。「ストリンジェントな条件」は、例えば、以下の条件を採用することができる。(1)洗浄のために低イオン強度および高温度を用いる(例えば、50℃で、0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1％のドデシル硫酸ナトリウム)、(2)ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤を用いる(例えば、42℃で、50％(v/v)ホルムアミドと0.1％ウシ血清アルブミン/0.1％フィコール/0.1％のポリビニルピロリドン/50mMのpH6.5のリン酸ナトリウムバッファー、および750mMの塩化ナトリウム、75mMクエン酸ナトリウム)、または(3)20％ホルムアミド、5×SSC、50mMリン酸ナトリウム(pH7.6)、5×デンハード液、10％硫酸デキストラン、および20mg/mlの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中で、37℃で一晩インキュベーションし、次に約37-50℃で1×SSCでフィルターを洗浄する。なお、ホルムアミド濃度は50％またはそれ以上であってもよい。洗浄時間は、5、15、30、60、もしくは120分、またはそれら以上であってもよい。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーに影響する要素としては温度、塩濃度など複数の要素が考えられ、詳細はAusubelet　al.,　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Wiley　Interscience　Publishers,(1995)を参照することができる。「高度にストリンジェントな条件」の例は、０．００１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、６５～６８℃、または０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、および５０％　ホルムアミド、４２℃である。ハイブリダイゼーション、Molecular　Cloning　2nd　ed.,Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Supplement　1-38,　DNA　Cloning1:Core　Techniques,　A　Practical　Approach,　Second　Edition,　Oxford　University　Press(1995)などの実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、A配列のみまたはT配列のみを含む配列が除外される。中程度のストリンジェントな条件は、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することができ、Sambrookら、Molecular　Cloning:A　Laboratory　Manual、第3版、Vol．1、7.42-7.45　Cold　Spring　Harbor　Laboratory　Presｓ，2001に示され、そしてニトロセルロースフィルターに関し、５×ＳＳＣ、０．５％　ＳＤＳ、１．０ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の前洗浄溶液、約４０－５０°Cでの、約５０％ホルムアミド、２×ＳＳＣ－６×ＳＳＣ（または約４２°Cでの約５０％ホルムアミド中の、スターク溶液（Ｓｔａｒｋ’ｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）などの他の同様のハイブリダイゼーション溶液）のハイブリダイゼーション条件、および約６０°C、０．５×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳの洗浄条件の使用が含まれる。従って、本発明において使用されるポリペプチドには、本発明で特に記載されたポリペプチドをコードする核酸分子に対して、高度または中程度でストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるポリペプチドも包含される。
　本明細書において「精製された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものをいう。従って、通常、精製された生物学的因子におけるその生物学的因子の純度は、その生物学的因子が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。本明細書中で使用される用語「精製された」は、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質または生物学的因子は、好ましくは「精製された」物質である。本明細書で使用される「単離された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子が実質的に除去されたものをいう。本明細書中で使用される用語「単離された」は、その目的に応じて変動するため、必ずしも純度で表示される必要はないが、必要な場合、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質は、好ましくは「単離された」物質または生物学的因子である。
　本明細書において「対応する」アミノ酸または核酸あるいは部分とは、あるポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子（例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４）において、比較の基準となるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおける所定のアミノ酸またはヌクレオチドあるいは部分と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸またはヌクレオチドをいい、特に酵素分子にあっては、活性部位中の同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸をいい、複合分子にあっては対応する部分（例えば、膜貫通ドメイン等）をいう。例えば、アンチセンス分子であれば、そのアンチセンス分子の特定の部分に対応するオルソログにおける同様の部分であり得る。対応するアミノ酸は、例えば、システイン化、グルタチオン化、S－S結合形成、酸化（例えば、メチオニン側鎖の酸化）、ホルミル化、アセチル化、リン酸化、糖鎖付加、ミリスチル化などがされる特定のアミノ酸であり得る。あるいは、対応するアミノ酸は、二量体化を担うアミノ酸であり得る。このような「対応する」アミノ酸または核酸は、一定範囲にわたる領域またはドメインであってもよい。従って、そのような場合、本明細書において「対応する」領域またはドメインと称される。このような対応する領域またはドメインは、本発明において複合分子を設計する場合に有用である。
　本明細書において「対応する」遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）とは、ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、または有することが予測される遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在する場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子に対応する遺伝子は、その遺伝子のオルソログであり得る。従って、ヒトのFSTL1またはＣＴＬＡ４は、それぞれ、他の動物（特に哺乳動物）において、対応するFSTL1またはＣＴＬＡ４を見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を用いて同定することができる。従って、例えば、ある動物（例えば、マウス）における対応する遺伝子は、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４等）は、配列番号５０３～５０６、６６２～６６５等の配列をクエリ配列として用いてその動物の配列を含むデータベースを検索することによって見出すことができる。
　本明細書において「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがn）に対して、1～n－1までの配列長さを有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。本明細書において、このようなフラグメントは、例えば、全長のものがマーカーまたは標的分子として機能する場合、そのフラグメント自体もまたマーカーまたは標的分子としての機能を有する限り、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　本発明に従って、用語「活性」は、本明細書において、最も広い意味での分子の機能を指す。活性は、限定を意図するものではないが、概して、分子の生物学的機能、生化学的機能、物理的機能または化学的機能を含む。活性は、例えば、酵素活性、他の分子と相互作用する能力、および他の分子の機能を活性化するか、促進するか、安定化するか、阻害するか、抑制するか、または不安定化する能力、安定性、特定の細胞内位置に局在する能力を含む。適用可能な場合、この用語はまた、最も広い意味でのタンパク質複合体の機能にも関する。
　本明細書において「生物学的機能」とは、ある遺伝子またはそれに関する核酸分子もしくはポリペプチドについて言及するとき、その遺伝子、核酸分子またはポリペプチドが生体内において有し得る特定の機能をいい、これには、例えば、特異的な抗体の生成、酵素活性、抵抗性の付与等を挙げることができるがそれらに限定されない。本発明においては、例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４がＶＬＤＬの取り込みの阻害等に関与する機能などを挙げることができるがそれらに限定されない。本明細書において、生物学的機能は、「生物学的活性」によって発揮され得る。本明細書において「生物学的活性」とは、ある因子（例えば、ポリヌクレオチド、タンパク質など）が、生体内において有し得る活性のことをいい、種々の機能（例えば、転写促進活性）を発揮する活性が包含され、例えば、ある分子との相互作用によって別の分子が活性化または不活化される活性も包含される。2つの因子が相互作用する場合、その生物学的活性は、その二分子の間の結合およびそれによって生じる生物学的変化であり得、そして、例えば、一つの分子を抗体を用いて沈降させたときに他の分子も共沈するとき、2分子は結合していると考えられる。従って、そのような共沈を見ることが一つの判断手法として挙げられる。例えば、ある因子が酵素である場合、その生物学的活性は、その酵素活性を包含する。別の例では、ある因子がリガンドである場合、そのリガンドが対応するレセプターへの結合を包含する。そのような生物学的活性は、当該分野において周知の技術によって測定することができる。従って、「活性」は、結合（直接的または間接的のいずれか）を示すかまたは明らかにするか；応答に影響する（すなわち、いくらかの曝露または刺激に応答する測定可能な影響を有する）、種々の測定可能な指標をいい、例えば、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに直接結合する化合物の親和性、または例えば、いくつかの刺激後または事象後の上流または下流のタンパク質の量あるいは他の類似の機能の尺度が挙げられる。
　本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」とは、その遺伝子などがインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好ましくは、遺伝子、ポリヌクレオチドなどが、転写および翻訳されて、ポリペプチドの形態になることをいうが、転写されてmRNAが作製されることもまた発現の一態様である。したがって、本明細書において「発現産物」とは、このようなポリペプチドもしくはタンパク質、またはｍRNAを含む。より好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシン
グを受けたものであり得る。例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４の発現レベルは、任意の方法によって決定することができる。具体的には、FSTL1またはＣＴＬＡ４のmRNAの量、FST L1またはＣＴＬＡ４タンパク質の量、そしてFSTL1またはＣＴＬＡ４タンパク質の生物学的な活性を評価することによって、FSTL1またはＣＴＬＡ４の発現レベルを知ることができる。このような測定値はコンパニオン診断において使用し得る。FSTL1またはＣＴＬＡ４のmRNAやタンパク質の量は、本明細書の他の箇所に詳述したような方法あるいは他の当該分野において公知の方法によって決定することができる。
　本明細書において「機能的等価物」とは、対象となるもとの実体に対して、目的となる機能が等価であるが構造が異なる任意のものをいう。従って、「FSTL1またはＣＴＬＡ４」またはその抗体の機能的等価物は、FSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体自体ではないが、FSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体の変異体または改変体（例えば、アミノ酸配列改変体等）であって、FSTL1またはＣＴＬＡ４の持つ生物学的作用を有するもの、ならびに、作用する時点において、FSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体自体またはこのFSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体の変異体もしくは改変体に変化することができるもの（例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体自体またはFSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体の変異体もしくは改変体をコードする核酸、およびその核酸を含むベクター、細胞等を含む）が包含されることが理解される。本発明において、FSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体の機能的等価物は、格別に言及していなくても、FSTL1またはＣＴＬＡ４またはその抗体と同様に用いられうることが理解される。機能的等価物は、データベース等を検索することによって、見出すことができる。本明細書において「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および／または性質を有する他の核酸塩基配列を見出すことをいう。電子的な検索としては、BLAST（Altschul　et　al.,J.Mol.Biol.　215:403-410(1990))、FASTA　(Pearson　&　Lipman,　Proc.Natl.Acad.Sci.,USA　85:2444-2448(1988)）、Smith　and　Waterman法（Smith　and　Waterman,　J.Mol.Biol.147:　195-197(1981)）、およびNeedleman　and　Wunsch法（Needleman　and　Wunsch,　J.Mol.Biol.　48:443-453(1970)）などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジェントハイブリダイゼーション、ゲノムDNAをナイロンメンブレン等に貼り付けたマクロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ（マイクロアレイアッセイ）、PCRおよびin　situハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書において、本発明において使用される遺伝子には、このような電子的検索、生物学的検索によって同定された対応遺伝子も含まれるべきであることが意図される。
　本発明の機能的等価物としては、アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加されたものを用いることができる。本明細書において、「アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加」とは、部位特異的突然変異誘発法等の周知の技術的方法により、あるいは天然の変異により、天然に生じ得る程度の複数個の数のアミノ酸の置換等により改変がなされていることを意味する。改変アミノ酸配列は、例えば1～30個、好ましくは1～20個、より好ましくは1～9個、さらに好ましくは1～5個、特に好ましくは1～2個のアミノ酸の挿入、置換、もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加がなされたものであることができる。改変アミノ酸配列は、好ましくは、そのアミノ酸配列が、FSTL1またはＣＴＬＡ４のアミノ酸配列において1または複数個（好ましくは1もしくは数個または1、2、3、もしくは4個）の保存的置換を有するアミノ酸配列であってもよい。ここで「保存的置換」とは、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、1または複数個のアミノ酸残基を、別の化学的に類似したアミノ酸残基で置換えることを意味する。例えば、ある疎水性残基を別の疎水性残基によって置換する場合、ある極性残基を同じ電荷を有する別の極性残基によって置換する場合などが挙げられる。このような置換を行うことができる機能的に類似のアミノ酸は、アミノ酸毎に当該分野において公知である。具体例を挙げると、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニ ルアラニン、メチオニンなどが挙げられる。極性（中性）アミノ酸としては、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システインなどが挙げられる。陽電荷をもつ（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジン、リジンなどが挙げられる。また、負電荷をもつ（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などが挙げられる。
　本明細書において「抑制剤」とは、対象となる実体（例えば、レセプターまたは細胞）に対してそのレセプターまたは細胞の生物学的作用を阻害する物質または因子をいう。本発明のFSTL1またはＣＴＬＡ４の抑制剤としては、対象となるFSTL1またはＣＴＬＡ４またはFSTL1またはＣＴＬＡ４を発現する細胞等の機能を一時的または永久に低下または消失させることができる因子である。このような因子には、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス、siRNA等のRNAi因子等の核酸の形態のもの等を挙げることができるがこれらに限定されない。
　本明細書において「アゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用を発現またはそれを増強する物質をいう。天然のアゴニスト（リガンドとも称される）のほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。
　本明細書において「アンタゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用の発現を抑制または阻害する物質をいう。天然のアンタゴニストのほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。アゴニスト（またはリガンド）と競合的に抑制または阻害するもののほか、非競合的に抑制または阻害するもの等がある。アゴニストを改変することによっても得られうる。生理現象を抑制または阻害することから、アンタゴニストは抑制剤（阻害剤）または抑制（する）因子の概念に包含されうる。したがって、本明細書においては実質的にアンタゴニストは「抑制剤」と同義で用いられる。
　本明細書において「抗体」は、広義にはポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体、ならびにそれらのフラグメント、例えばFvフラグメント、Fab’フラグメント、F（ab’）2およびFabフラグメント、ならびにその他の組換えにより生産された結合体または機能的等価物（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー（diabody）、sc（Fv）2（singlechain（Fv）2）、scFv－Fc）を含む。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、FSTL1またはＣＴＬＡ４のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1またはＣＴＬＡ４タンパク質への結合は特異的な結合
であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体」は、FSTL1またはＣＴＬＡ４に結合性を有する抗体を含む。この抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体の生産方法は特に限定されないが、例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４を哺乳類または鳥類に免疫することによって生産してもよい。 
　また、「FSTL1またはＣＴＬＡ４に対する抗体（抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体）、または、そのフラグメント」の「機能的等価物」は、例えば、抗体の場合、FSTL1またはＣＴＬＡ４の結合活性、必要であれば抑制活性を有する抗体自体およびそのフラグメント自体のほか、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（singlechain（Fv）2）、scFv－Fcなども包含されることが理解される。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、悪性腫瘍の増殖が特に強く抑制される観点からは、FSTL1またはＣＴＬＡ４の特定のエピトープに特異的に結合する抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体であることが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体であれば、ポリクローナル抗体に比べて、効率的にFSTL1またはＣＴＬＡ４に対して作用させることができる。抗FSTL1またはＣＴＬＡ４モノクローナル抗体を効率的に生産する観点からは、FSTL1またはＣＴＬＡ４をニワトリに免役することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体の抗体クラスは特に限定されないが、例えばIgM、IgD、IgG、IgA、IgE、またはIgYであってもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗原結合活性を有する抗体断片（以下、「抗原結合性断片」と称することもある）であっても良い。この場合、安定性または抗体の生産効率が上昇する等の効果がある。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、融合タンパク質であってもよい。この融合タンパク質は、抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体のNまたはC末端に、ポリペプチドまたはオリゴペプチドが結合したものであってもよい。ここで、オリゴペプチドは、Hisタグであってもよい。また融合タンパク質は、マウス、ヒト、またはニワトリの抗体部分配列を融合したものであってもよい。それらのような融合タンパク質も、本実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体の一形態に含まれる。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、例えば、精製FSTL1またはＣＴＬＡ４、FSTL1またはＣＴＬＡ４発現細胞、またはFSTL1またはＣＴＬＡ４含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体であってもよい。FSTL1またはＣＴＬＡ４陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1またはＣＴＬＡ４発現細胞を免疫に使用することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、精製FSTL1またはＣＴＬＡ４、FSTL1またはＣＴＬＡ４発現細胞胞またはFSTL1またはＣＴＬＡ４含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体の、CDRセットを有する抗体であってもよい。FSTL1またはＣＴＬＡ４陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1またはＣＴＬＡ４発現細胞を免疫に使用することが好ましい。CDRセットとは、重鎖CDR1、2、および3、並びに、軽鎖CDR1、2、および3のセットである。
　本発明の一実施形態において「FSTL1またはＣＴＬＡ４発現細胞」は、例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入後、FSTL1またはＣＴＬＡ４を発現させることによって得てもよい。ここでFSTL1またはＣＴＬＡ４は、FSTL1またはＣＴＬＡ４断片を含む。また本発明の一実施形態において「FSTL1またはＣＴＬＡ４含有脂質膜」は、例えば、FSTL1またはＣＴＬＡ４と脂質二重膜を混合することによって得てもよい。ここでFSTL1またはＣＴＬＡ４は、FSTL1またはＣＴＬＡ４断片を含む。また本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、FSTL1またはＣＴＬＡ４陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、抗原をニワトリに免疫する工程を経て得られる抗体、またはその抗体のCDRセットを有する抗体が好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、目的を達成する限り、どのような結合力を有していてもよく、例えば、少なくとも１．０×１０６以上、２．０×１０６以上、５．０×１０６以上、１．０×１０７以上を挙げることができるがこれらに限定されず、通常は、KD値（kd/ka）が、1.0×10-7以下であってもよく、1.0×10-9(M)あるいは1.0×10-10(M)以下であり得る。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、ADCCまたはCDC活性を有していてもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、FSTL1またはＣＴＬＡ４の野生型または変異型に結合する抗体であってもよい。変異型とは、個体間のDNA配列の差異に起因するものを含む。野生型または変異型のFSTL1またはＣＴＬＡ４のアミノ酸配列は、配列番号５０４または配列番号５０６に示すアミノ酸配列に対し、好ましくは80％以上、より好ましくは90％以上、より好ましくは95％以上、特に好ましくは98％以上の相同性を有している。
　　本発明の一実施形態において「抗体」は、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができる分子またはその集団を含むまた抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。抗体は、様々な形態で存在することができ、例えば、全長抗体（Fab領域とFc領域を有する抗体）、Fv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、diabody、一本鎖抗体（例えば、scFv）、dsFv、多価特異的抗体（例えば、二価特異的抗体）、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド、キメラ抗体（例えば、マウス-ヒトキメラ抗体、ニワトリ-ヒトキメラ抗体等）、マウス抗体、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはそれらの同等物（または等価物）からなる群から選ばれる1種以上の形態であってもよい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体は、FSTL1またはＣＴＬＡ４のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1またはＣＴＬＡ４タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「ポリクローナル抗体」は、例えば、抗原に特異的なポリクローナル抗体の産生を誘導するために、哺乳類（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、サル等）、鳥類等に、目的の抗原を含む免疫原を投与することによって生成することが可能である。免疫原の投与は、1つ以上の免疫剤、および所望の場合にはアジュバントの注入をしてもよい。アジュバントは、免疫応答を増加させるために使用されることもあり、フロイントアジュバント（完全または不完全）、ミネラルゲル（水酸化アルミニウム等）、または界面活性物質（リゾレシチン等）等を含んでいてもよい。免疫プロトコールは、当該技術分野で公知であり、選択する宿主生物に合わせて、免疫応答を誘発する任意の方法によって実施される場合がある（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):86-91.）。
　本発明の一実施形態において「モノクローナル抗体」は、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に単一のエピトープに対応する抗体である場合を含む。または、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に同一である抗体であってもよい。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、異なるエピトープに対応する異なる抗体を典型的に含むような、通常のポリクローナル抗体とは異なる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていないハイブリドーマ培養から合成できる点で有用である。「モノクローナル」という形容は、実質的に均一な抗体集団から得られるという特徴を示していてもよいが、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、モノクローナル抗体は、"Kohler　G,　Milstein　C.,　Nature.　1975　Aug7;256(5517):495-497."に掲載されているようなハイブリドーマ法と同様の方法によって作製してもよい。あるいは、モノクローナル抗体は、米国特許第4816567号に記載されているような組換え法と同様の方法によって作製してもよい。または、モノクローナル抗体は、"Clackson　et　al.,　Nature.　1991　Aug　15;352(6336):　624-628."、または"Marks　et　al.,　J　Mol　Biol.　1991　Dec　5;222(3):　581-597."に記載されているような技術と同様の方法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。または、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):92-96."に掲載されている方法でよって作製してもよい。
　抗体の大量生産については、当該分野で公知の任意の手法を用いることができるが、例えば、代表的な抗体の大量生産系の構築および抗体製造としては、以下を例示することができる。すなわち、CHO細胞にH鎖抗体発現ベクターおよびL鎖抗体発現ベクターをトランスフェクションし、選択試薬であるG418およびZeocinを用いて培養を行い、限界希釈法によるクローニングを行う。クローニング後、安定的に抗体を発現しているクローンをELISA法により選択する。選択したCHO細胞を用いて拡大培養し、抗体を含む培養上清を回収する。回収した培養上清からProteinAもしくはProteinG精製により抗体を精製することができる。
　本発明の一実施形態において「Fv抗体」は、抗原認識部位を含む抗体である。この領域は、非共有結合による1つの重鎖可変ドメインおよび1つの軽鎖可変ドメインの二量体を含む。この構成において、各可変ドメインの3つのCDRは相互に作用してVH-VL二量体の表面に抗原結合部位を形成することができる。
　本発明の一実施形態において「Fab抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素パパインで処理して得られる断片のうち、H鎖のN末端側約半分とL鎖全体が一部のジスルフィド結合を介して結合した抗体である。Fabは、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体を、タンパク質分解酵素パパインで処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「F(ab’)2抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素ペプシンで処理して得られる断片のうち、Fabに相当する部位を2つ含む抗体である。F(ab’)2は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体を、タンパク質分解酵素ペプシンで処理して得ることができる。また、例えば、下記のFab’をチオエーテル結合あるいはジスルフィド結合させることで、作製することができる。 
　本発明の一実施形態において「Fab’抗体」は、例えば、F(ab’)2のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断して得られる抗体である。例えば、F(ab’)2を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「scFv抗体」は、VHとVLとが適当なペプチドリンカーを介して連結した抗体である。scFv抗体は、例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体のVHおよびVLをコードするcDNAを取得し、VH-ペプチドリンカー-VLをコードするポリヌクレオチドを構築し、そのポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「diabody」は、二価の抗原結合活性を有する抗体である。二価の抗原結合活性は、同一であることもできるし、一方を異なる抗原結合活性とすることもできる。diabodyは、例えば、scFvをコードするポリヌクレオチドをペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが8残基以下となるように構築し、得られたポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「dsFv」は、VHおよびVL中にシステイン残基を導入したポリペプチドを、上記システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させた抗体である。システイン残基に導入する位置はReiterらにより示された方法(Reiteretal., Protein　Eng. 1994 May;7(5):697-704.)に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。
　本発明の一実施形態において「抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド」は、抗体のVH、VL、またはそれらのCDR1、2、もしくは3を含んで構成される抗体である。複数のCDRを含むペプチドは、直接または適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。
　上記のFv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、scFv抗体、diabody、dsFv抗体、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド（以下、「Fv抗体等」と称することもある）の生産方法は特に限定しない。例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体におけるFv抗体等の領域をコードするDNAを発現用ベクターに組み込み、発現用細胞を用いて生産できる。または、Fmoc法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、tBOC法（t-ブチルオキシカルボニル法）などの化学合成法によって生産してもよい。なお本発明の一実施形態に係る抗原結合性断片は、上記Fv抗体等の1種以上であってもよい。
　本発明の一実施形態において「キメラ抗体」は、例えば、異種生物間における抗体の可変領域と、抗体の定常領域とを連結したもので、遺伝子組換え技術によって構築できる。マウス-ヒトキメラ抗体は、例えば、"Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.　1994　Feb　1;91(3):969-973."に記載の方法で作製できる。マウス-ヒトキメラ抗体を作製するための基本的な方法は、例えば、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列を、哺乳類細胞の発現ベクター中にすでに存在するヒト抗体定常領域をコードする配列に連結する。または、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列をヒト抗体定常領域をコードする配列に連結した後、哺乳類細胞発現ベクターに連結してもよい。ヒト抗体定常領域の断片は、任意のヒト抗体のH鎖定常領域およびヒト抗体のL鎖定常領域のものとすることができ、例えばヒトH鎖のものについてはCγ1、Cγ2、Cγ3またはCγ4を、L鎖のものについてはCλまたはCκを各々挙げることができる。
　本発明の一実施形態において「ヒト化抗体」は、例えば、非ヒト種由来の1つ以上のCDR、およびヒト免疫グロブリン由来のフレームワーク領域（FR）、さらにヒト免疫グロブリン由来の定常領域を有し、所望の抗原に結合する抗体である。抗体のヒト化は、当該技術分野で既知の種々の手法を使用して実施可能である(Almagro　et　al.,　Front　Biosci.　2008　Jan　1;13:　1619-1633.)。例えば、CDRグラフティング（Ozaki　et　al.,Blood.　1999　Jun　1;93(11):　3922-3930.）、Re-surfacing(Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　U　S　A.　1994　Feb　1;91(3):969-973.)、またはFRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）などが挙げられる。抗原結合を改変するために（好ましくは改善するために）、ヒトFR領域のアミノ酸残基は、CDRドナー抗体からの対応する残基と置換してもよい。このFR置換は、当該技術分野で周知の方法によって実施可能である（Riechmann　et　al.,　Nature.　1988　Mar　24;332(6162):323-327.）。例えば、CDRとFR残基の相互作用のモデリングによって抗原結合に重要なFR残基を同定してもよい。または、配列比較によって、特定の位置で異常なFR残基を同定してもよい。好ましい実施形態では、松田らのMolecular Immunology 43(2006)634-642 の報告に基づきヒト化抗体を生産してもよい。
　本発明の好ましい実施形態では、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６７１、６７３、６７５および６７７）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６８７、６８９、６９１および６９３）を有するヒト化抗体が使用され得るがこれに限定されない。これらのヒト化抗体の全長配列は、このヒト化抗体において、Ｈ（１）重鎖の全長配列は、ＩｇＧ１型が配列番号６９４および６９５（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、ＩｇＧ４型が配列番号７００および７０１（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、ＩｇＧ１型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号６９６および６９７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号７０２および７０３（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号６９８および６９９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号７０４および７０５（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号７０６および７０７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号７４８および７４９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号７５０および７５１（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。理論に束縛されることを望まないが、Ｈ（２）－Ｌ（１）は、Ｈ（３）－Ｌ（１）（Ｈ（３）のフレームワークは（それぞれ配列番号６７９、６８１、６８３および６８５））およびＨ（１）－Ｌ（１）（Ｈ（１）のフレームワークは（それぞれ配列番号６６３、６６５、６６７および６６９））よりも１桁高い活性が観察されているからである。
　本発明の一実施形態において「ヒト抗体」は、例えば、抗体を構成する重鎖の可変領域および定常領域、軽鎖の可変領域および定常領域を含む領域が、ヒトイムノグロブリンをコードする遺伝子に由来する抗体である。主な作製方法としてはヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法、ファージディスプレイ法などがある。ヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法では、内因性Igをノックアウトしたマウスに機能的なヒトのIg遺伝子を導入すれば、マウス抗体の代わりに多様な抗原結合能を持つヒト抗体が産生される。さらにこのマウスを免疫すればヒトモノクローナル抗体を従来のハイブリドーマ法で得ることが可能である。例えば、"Lonberg　et　al.,　Int　Rev　Immunol.　1995;13(1):65-93."に記載の方法で作製できる。ファージディスプレイ法は、典型的には大腸菌ウイルスの一つであるM13やT7などの繊維状ファージのコートタンパク質（g3p、g10p等）のN末端側にファージの感染性を失わないよう外来遺伝子を融合タンパク質として発現させるシステムである。例えば、"Vaughan　et　al.,　Nat　Biotechnol.　1996　Mar;14(3):309-314."に記載の方法で作製できる。 
　また抗体は、CDR-grafting(Ozaki　et　al.,　Blood.　1999　Jun　1;93(11):3922-3930.)によって任意の抗体に本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをグラフティングすることで作製してもよい。または、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをコードするDNAと、公知のヒトまたはヒト以外の生物由来の抗体の、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域をコードするDNAとを、当該技術分野で公知の方法に従ってベクターに連結後、公知の細胞を使用して発現させることによって得ることができる。このとき、抗FSTL1抗体または抗ＣＴＬＡ４抗体の標的抗原への作用効率を上げるために、当該分野で公知の方法（例えば、抗体のアミノ酸残基をランダムに変異させ、反応性の高いものをスクリーニングする方法、またはファージディスプレイ法等）を用いて、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域を最適化してもよい。また、例えば、FRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）、またはバーニヤゾーンのアミノ酸残基またはパッケージング残基を置換する方法（特開2006-241026、またはFooteet　al.,　J　Mol　Biol.1992　Mar　20;224(2):487-499.）を用いて、FR領域を最適化してもよい。
　本発明の一実施形態において「重鎖」は、典型的には、全長抗体の主な構成要素である。重鎖は、通常、軽鎖とジスルフィド結合および非共有結合によって結合している。重鎖のN末端側のドメインには、同種の同一クラスの抗体でもアミノ酸配列が一定しない可変領域（VH）と呼ばれる領域が存在し、一般的に、VHが抗原に対する特異性、親和性に大きく寄与していることが知られている。例えば、"Reiter　et　al.,　J　Mol　Biol.　1999　Jul　16;290(3):685-98."にはVHのみの分子を作製したところ、抗原と特異的に、高い親和性で結合したことが記載されている。さらに、"Wolfson　W,　Chem　Biol.　2006　Dec;13(12):1243-1244."には、ラクダの抗体の中には、軽鎖を持たない重鎖のみの抗体が存在していることが記載されている。
　本発明の一実施形態において「CDR（相補性決定領域）」は、抗体において、実際に抗原に接触して結合部位を形成している領域である。一般的にCDRは、抗体のFv（重鎖可変領域可変領域（VH）および軽鎖可変領域（VL）を含む）上に位置している。また一般的にCDRは、5～30アミノ酸残基程度からなるCDR1、CDR2、CDR3が存在する。そして、特に重鎖のCDRが抗体の抗原への結合に寄与していることが知られている。またCDRの中でも、CDR3が抗体の抗原への結合における寄与が最も高いことが知られている。例えば、"Willy　et　al.,　Biochemical　and　Biophysical　Research　Communications　Volume　356,　Issue　1,　27　April　2007,　Pages　124-128"には、重鎖CDR3を改変させることで抗体の結合能を上昇させたことが記載されている。CDR以外のFv領域はフレームワーク領域（FR）と呼ばれ、FR1、FR2、FR3およびFR4からなり、抗体間で比較的よく保存されている（Kabat　et　al.,「Sequence　of　Proteins　of　Immunological　Interest」US　Dept.　Health　and　Human　Services,1983.）。即ち、抗体の反応性を特徴付ける要因はCDRにあり、特に重鎖CDRにあるといえる。
　CDRの定義およびその位置を決定する方法は複数報告されている。例えば、Kabatの定義(Sequences　of　Proteins　of　Immunological　Interest,　5th　ed.,　Public　Health　Service,　National　Institutes　of　Health,　Bethesda,　MD.　(1991))、またはChothiaの定義(Chothiaet　al.,　J.　Mol.　Biol.,1987;196:901-917)を採用してもよい。本発明の一実施形態においては、Kabatの定義を好適な例として採用するが、必ずしもこれに限定されない。また、場合によっては、Kabatの定義とChothiaの定義の両方を考慮して決定しても良く、例えば、各々の定義によるCDRの重複部分を、または各々の定義によるCDRの両方を含んだ部分をCDRとすることもできる。そのような方法の具体例としては、Kabatの定義とChothiaの定義の折衷案である、Oxford　Molecular's　AbM　antibody　modeling　softwareを用いたMartinらの方法（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,　1989;86:9268-9272）がある。このようなCDRの情報を用いて、本発明に使用されうる変異体を生産することができる。このような抗体の変異体では、もとの抗体のフレームワークに１または数個（例えば、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個）の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まないように生産することができる。
　本明細書において「抗原」（antigen）とは、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。本明細書において「免疫原」（immunogen）とは、抗原特異的免疫応答を生じるリンパ球活性化を開始し得る抗原をいう。本明細書において「エピトープ」または「抗原決定基」とは、抗体またはリンパ球レセプターが結合する抗原分子中の部位をいう。エピトープを決定する方法は、当該分野において周知であり、そのようなエピトープは、核酸またはアミノ酸の一次配列が提供されると、当業者はそのような周知慣用技術を用いて決定することができる。本発明の抗体は、エピトープが同じであれば、他の配列を有する抗体であっても同様に利用することができることが理解される。
　本明細書において使用される抗体は、擬陽性が減じられる限り、どのような特異性の抗体を用いても良いことが理解される。従って、本発明において用いられる抗体は、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクローナル抗体であってもよい。
　本明細書において「手段」とは、ある目的（例えば、検出、診断、治療）を達成する任意の道具となり得るものをいい、特に、本明細書では、「選択的に認識する手段」とは、ある対象を他のものとは異なって認識することができる手段をいう。
　本明細書において使用される「悪性腫瘍」は、例えば、正常な細胞が突然変異を起こして発生する腫瘍を含む。悪性腫瘍は全身のあらゆる臓器や組織から生じ得る。特に識別しない場合、本明細書では「癌」「がん」と同義で用いる。この悪性腫瘍は、例えば、肺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、乳癌、大腸癌、小腸癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、前立腺癌、尿管癌、腎盂癌、尿管癌、陰茎癌、精巣癌、脳腫瘍、中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、頭頸部癌、グリオーマ、多形性膠芽腫、皮膚癌、メラノーマ、甲状腺癌、唾液腺癌、悪性リンパ腫、癌腫、肉腫、白血病および血液悪性腫瘍からなる群から選ばれる1種以上を含む。ここで、卵巣癌は、例えば、卵巣漿液性腺癌、または卵巣明細胞線癌を含む。子宮癌は、例えば、子宮内膜癌、または子宮頸癌を含む。頭頸部癌は、例えば、口腔癌、咽頭癌、喉頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、または甲状腺癌を含む。肺癌は、例えば、非小細胞肺癌、または小細胞肺癌を含む。また悪性腫瘍は、FSTL1またはＣＴＬＡ４陽性であってもよい。
　本明細書において「転移」（metastasis）とは、癌が体の原発部位から他の領域に広がるか移って新しい場所に類似した癌性の病巣が発達する過程を指す。「転移性」または「転移する」細胞は、隣接細胞との接着性接触を失い、血流またはリンパを通して疾患の原発部位から移動して、近隣の体構造に侵入する細胞である。本明細書において転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、転移を含む。本発明によれば、本発明による転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　本明細書において「骨転移」とは、骨への癌の転移を意味し、任意の起源の骨転移を含む。骨転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より 好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、骨転移を含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、骨病変、好ましくは溶骨性および／または骨形成骨病変を含み、より好ましくは溶骨性骨病変、さらにより好ましくは骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の骨病変を含み、特に骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の溶骨性骨病変も含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、ワルデンストレーム病の骨病変、好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性および／または骨形成骨病変、より好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性骨病変も含む。本発明による骨転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　間葉系幹細胞は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導または増強するが、この活性を獲得するためには活性化が必須であり、癌に関連して増加するＭＳＣは、様々な生体内因子によって活性化された「活性化ＭＳＣ」であると考えられており、本明細書でもこのようなＭＳＣは「活性化間葉系幹細胞」または「活性化ＭＳＣ」と称する。つまり、もともと免疫抑制活性を持っている細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）が増殖して総合的に免疫抑制活性が強くなる場合と、通常の何も活性を有さない細胞（つまり前駆細胞）が免疫抑制性を獲得してそれらの免疫抑制活性を有する細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）に転じる割合が多くなって免疫抑制活性が強くなる場合、および、免疫機能を果たすことができない不全状態に陥る疲弊T細胞の誘導等の免疫破綻機序が存在するが、ＦＳＴＬ１はこれらを直接的および／または活性化ＭＳＣの増殖等を介して間接的に制御していると考えられる（ImmunologyandCell Biology 91:12-18, 2013）。理論に束縛されることを望まないが、本発明の抗体ＦＳＴＬ１抗体等は、このＭＳＣの免疫抑制の誘導または増強、および免疫不全等を阻害することができ、それによって、癌の悪化の原因となる免疫抑制を解除することができ、それゆえ、顕著な癌の予防または治療効果を達成することができるといえる。また、本発明ではこれらの免疫抑制性細胞および／または免疫不全性細胞等の免疫破綻の細胞を誘導するＭＳＣの誘導または増強について、この上流を阻害することができるため、免疫抑制機序および／または免疫不全機序等の免疫破綻機序の全体を一斉に解除できるものと考えられ、より効果的な治療が可能になるものと考えられる。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（癌関連MSCおよび活性化MSCを含む）の誘導や増殖の抑制は、例えば、ＭＳＣの脂肪細胞への分化の阻害を見ることで確認することができ、例えば、図７１、７２に示されている。理論に束縛されることを望まないが、FSTL1は免疫抑制性のMSC自身を増やし、および／または他の細胞の抑制活性を強めるものと考えられる。
　本明細書において「免疫抑制」（「免疫抑制」の用語は、このほか、免疫抑制性、免疫制御、免疫制御性、免疫調節、免疫調節性、免疫修飾、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）の「増強」とは、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）ことを包含する概念であり、結果として、免疫抑制が増強されることをいう。したがって、免疫抑制の増強には、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）の概念が含まれることが理解される。ＭＳＣ細胞の免疫抑制性の細胞の誘導の形態としては、制御性 Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞への分化が促進されること、制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強、および制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の増殖が包含され、結果として免疫抑制性が増強されることが包含される。
　本明細書において、「免疫抑制性の細胞」（「免疫抑制性」の用語は、このほか、免疫制御性、免疫調節性、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）とは、免疫能を抑制する働きを有する細胞を指し、代表的には、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞等を挙げることができるがそれらに限定されない。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が免疫機能を破壊する機序として、上記で説明したような免疫抑制のみならず、免疫不全も役割を果たしていることが知られており、これらは、合わせて「免疫破綻」と総称される。
　本明細書において「免疫不全」とは、免疫系を構成する細胞要素の一部あるいはいくつかの欠損あるいは機能不全によって，正常免疫機構に障害を生じた状態をいう。これに起因する病態を免疫不全症(immunodeficiency　diseases)と総称する。免疫不全症は一次性と二次性に大別され，前者は主に先天性の遺伝的異常に起因するもので，後者は薬剤やＸ線など物理化学的因子，ウイルスなどの感染症，栄養状態などの外的環境因子によるものをいう。障害部位は，抗体産生などＢ細胞領域の機能不全，細胞性免疫にかかわるＴ細胞領域の異常，補体系や貪食機能など貪食系細胞機能の障害などさまざまであるとされている。「疲弊T細胞」が免疫不全の主な指標である。抗PD-1抗体などは、この「疲弊／不全」を阻害できる抗体としても開発されている。
　本明細書において「免疫破綻」とは免疫抑制および免疫不全を合わせた概念をいう。免疫破綻が起こると、より生存に有利な免疫原性の低いがん細胞が選ばれて増殖する（平衡相（免疫細胞とがん細胞との相互作用により、消えもしない、大きくもならないといった状態）から逃避相へ移行する）。そして、平衡相の終わりから逃避相にかけての短い時間に、がんの免疫原性が低下すると考えられており、がん細胞を殺すはずのT細胞が逆説的にこの役割を果たしているとされている。
　本明細書において「疲弊」（exhaustion）とは抗原の長期的な曝露によって，T細胞上にPD-1，CTLA4，TIM3などさまざまな共抑制分子（後述）が誘導される結果，T細胞が機能不全状態に陥ることをいう。慢性感染症やがんの際に，T細胞の不応答性が誘導される原因と考えられている。そのようなT細胞を本明細書において「疲弊T細胞」という。
　抗PD-1抗体などは、この「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できる抗体としても開発されている。したがって、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、実施例において示されているように疲弊Ｔ細胞（の増殖または発生）を阻害することができることから、このような「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できるものと期待され、したがって、「免疫破綻」を阻害できるものと理解される。
　本明細書において、「免疫関連細胞」とは、免疫抑制や機能不全などを受ける任意の免疫系の細胞を指し、「免疫関連細胞の免疫抑制活性の獲得および／または増強」は、本明細書では代表的に、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊T細胞の増加等を含むことが理解される。
　本明細書において「被験体（者）」とは、本発明の診断または検出、あるいは治療等の 対象となる対象（例えば、ヒト等の生物または生物から取り出した細胞、血液、血清等）をいう。
　本明細書において「試料」とは、被験体等から得られた任意の物質をいい、例えば、血清等が含まれる。当業者は本明細書の記載をもとに適宜好ましい試料を選択することができる。
　本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」（いずれも英語ではagentに相当する）は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、cDNA、ゲノムDNAのようなDNA、mRNAのようなRNAを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）など）、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。ポリヌクレオチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリヌクレオチドの配列に対して一定の配列相同性を（例えば、70％以上の配列同一性）もって相補性を有するポリヌクレオチド、プロモーター領域に結合する転写因子のようなポリペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ポリペプチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリペプチドに対して特異的に指向された抗体またはその誘導体あるいはその類似物（例えば、単鎖抗体）、そのポリペプチドがレセプターまたはリガンドである場合の特異的なリガンドまたはレセプター、そのポリペプチドが酵素である場合、その基質などが挙げられるがそれらに限定されない。
　本明細書において「診断」とは、被験体における疾患、障害、状態（例えば、悪性腫瘍）などに関連する種々のパラメータを同定し、そのような疾患、障害、状態の現状または未来を判定することをいう。本発明の方法、装置、システムを用いることによって、体内の状態を調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書において、狭義には、「診断」は、現状を診断することをいうが、広義には「早期診断」、「予測診断」、「事前診断」等を含む。本発明の診断方法は、原則として、身体から出たものを利用することができ、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることから、産業上有用である。本明細書において、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることを明確にするために、特に「予測診断、事前診断もしくは診断」を「支援」すると称することがある。
　本明細書において「予後」という用語は、悪性腫瘍（例えば、卵巣癌）などの腫瘍性疾患の再発、転移拡散、および薬剤耐性など、癌に起因する死亡または進行が起こる可能性を予測することを意味する。したがって、本明細書において「予後状態が良好」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌を認めない状態のことを、「予後状態が不良」または「予後不良」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌が認められる状態のことをいう。予後因子とは悪性腫瘍の自然経過に関する変数のことであり、これらは、いったん悪性腫瘍を発症した患者の再発率および転帰に影響を及ぼす。予後の悪化に関連した臨床的指標には、例えば、リンパ節転移、および高悪性度の腫瘍が含まれる。予後因子は、しばしば、患者を異なった基礎的再発リスクをもつサブグループに分類するために用いられる。このように、本発明のFSTL1の発現は、予後因子として使用することができる。本明細書において「予測」という用語は、原発腫瘍の摘出後に、患者が、良不良を問わず特定の臨床転帰を持つ可能性を意味する。したがって、本発明のFSTL1は、予後不良マーカーとして用 いることができる。本発明の予測法を臨床的に用いて、特定の患者にとって最適な治療法を選択することによって治療法を決定することができる。本発明の予測法は、患者が治療計画、例えば、外科的介入などに対して良好な反応をする可能性があれば、予測する際の有益な手段となる。予測には予後因子を含むことができる。
　本明細書において「検出薬（剤）」または「検査薬（剤）」とは、広義には、目的の対象を検出または検査することができるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「診断薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を診断できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になった場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好ましくは、軽減、さらに好ましくは消退させることをいい、患者の疾患、もしくは疾患に伴う1つ以上の症状の、症状改善効果あるいは予防効果を発揮しうることを含む。事前に診断を行って適切な治療を行うことは「コンパニオン治療」といい、そのための診断薬を「コンパニオン診断薬」ということがある。
　本明細書において「治療薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を治療できるあらゆる薬剤をいう。本発明の一実施形態において「治療薬」は、有効成分と、薬理学的に許容される1つもしくはそれ以上の担体とを含む医薬組成物であってもよい。医薬組成物は、例えば有効成分と上記担体とを混合し、製剤学の技術分野において知られる任意の方法により製造できる。また治療薬は、治療のために用いられる物であれば使用形態は限定されず、有効成分単独であってもよいし、有効成分と任意の成分との混合物であってもよい。また上記担体の形状は特に限定されず、例えば、固体または液体（例えば、緩衝液）であってもよい。なお悪性腫瘍の治療薬は、悪性腫瘍の予防のために用いられる薬物（予防薬）、または悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤を含む。
　本明細書において「予防」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になる前に、そのような状態にならないようにすることをいう。本発明の薬剤を用いて、診断を行い、必要に応じて本発明の薬剤を用いて例えば、悪性腫瘍等の予防をするか、あるいは予防のための対策を講じることができる。
　本明細書において「予防薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を予防できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「相互作用」とは、2つの物質についていうとき、一方の物質と他方の物質との間で力（例えば、分子間力（ファンデルワールス力）、水素結合、疎水性相互作用など）を及ぼしあうこという。通常、相互作用をした2つの物質は、会合または結合している状態にある。本発明の検出、検査および診断は、このような相互作用を利用して実現することができる。
　本明細書中で使用される用語「結合」は、2つの物質の間、あるいはそれらの組み合わせの間での、物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合には、イオン結合、非イオン結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水性相互作用などが含まれる。物理的相互作用（結合）は、直接的または間接的であり得、間接的なものは、別のタンパク質または化合物の効果を介するかまたは起因する。直接的な結合とは、別のタンパク質または化合物の効果を介してもまたはそれらに起因しても起こらず、他の実質的な化学中間体を伴わない、相互作用をいう。
　従って、本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチドなどの生物学的因子に対して「特異的に」相互作用する（または結合する）「因子」（または、薬剤、検出剤等）とは、そのポリヌクレオチドまたはそのポリペプチドなどの生物学的因子に対する親和性が、他の無関連の（特に、同一性が30％未満の）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対する親和性よりも、代表的には同等またはより高いか、好ましくは有意に（例えば、統計学的に有意に）高いものを包含する。そのような親和性は、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイ、結合アッセイなどによって測定することができる。
　本明細書において第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）とは、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して、第二の物質または因子以外の物質または因子（特に、第二の物質または因子を含む試料中に存在する他の物質または因子）に対するよりも高い親和性で相互作用する（または結合する）ことをいう。物質または因子について特異的な相互作用（または結合）としては、例えば、核酸におけるハイブリダイゼーション、タンパク質における抗原抗体反応、酵素－基質反応など、核酸およびタンパク質の反応、タンパク質－脂質相互作用、核酸－脂質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。従って、物質または因子がともに核酸である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に相互作用する」ことには、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して少なくとも一部に相補性を有することが包含される。また例えば、物質または因子がともにタンパク質である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）こととしては、例えば、抗原抗体反応による相互作用、レセプター－リガンド反応による相互作用、酵素－基質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。2種類の物質または因子がタンパク質および核酸を含む場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）ことには、抗体と、その抗原との間の相互作用（または結合）が包含される。このような特異的な相互作用または結合の反応を利用することにより、試料中の対象物の検出または定量お行うことができる。
　本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチド発現の「検出」または「定量」は、例えば、検出剤、検査剤または診断剤への結合または相互作用を含む、mRNAの測定および免疫学的測定方法を含む適切な方法を用いて達成され得る。分子生物学的測定方法としては、例えば、ノーザンブロット法、ドットブロット法またはPCR法などが例示される。免疫学的測定方法としては、例えば、方法としては、マイクロタイタープレートを用いるELISA法、RIA法、蛍光抗体法、発光イムノアッセイ（LIA）、免疫沈降法（IP）、免疫拡散法（SRID）、免疫比濁法（TIA）、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが例示される。また、定量方法としては、ELISA法またはRIA法などが例示される。アレイ（例えば、DNAアレイ、プロテインアレイ）を用いた遺伝子解析方法によっても行われ得る。DNAアレイについては、（秀潤社編、細胞工学別冊「DNAマイクロアレイと最新PCR法」）に広く概説されている。プロテインアレイについては、NatGenet．2002Dec;32 Suppl:526－532に詳述されている。遺伝子発現の分析法としては、上述に加えて、RT－PCR、RACE法、SSCP法、免疫沈降法、two－hybridシステム、invitro翻訳などが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなさらなる分析方法は、例えば、ゲノム解析実験法・中村祐輔ラボ・マニュアル、編集・中村祐輔羊土社（2002）などに記載されており、本明細書においてそれらの記載はすべて参考として援用される。
　本明細書において「発現量」とは、目的の細胞、組織などにおいて、ポリペプチドまたはmRNA等が発現される量をいう。そのような発現量としては、本発明の抗体を用いてELISA法、RIA法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などの免疫学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明ポリペプチドのタンパク質レベルでの発現量、またはノーザンブロット法、ドットブロット法、PCR法などの分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのmRNAレベルでの発現量が挙げられる。「発現量の変化」とは、上記免疫学的測定方法または分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのタンパク質レベルまたはmRNAレベルでの発現量が増加あるいは減少することを意味する。あるマーカーの発現量を測定することによって、マーカーに基づく種々の検出または診断を行うことができる。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「減少」または「抑制」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における減少、または減少させる活性をいう。減少のうち「消失」した場合は、活性、発現産物等が検出限界未満になることをいい、特に「消失」ということがある。本明細書では、「消失」は「減少」または「抑制」に包含される。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「増加」または「活性化」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における増加または増加させる活性をいう。
　本明細書において「インビボ」（in　vivo）とは、生体の内部をいう。特定の文脈において、「生体内」は、目的とする物質が配置されるべき位置をいう。
　本明細書において「インビトロ」（in　vitro）とは、種々の研究目的のために生体の一部分が「生体外に」（例えば、試験管内に）摘出または遊離されている状態をいう。インビボと対照をなす用語である。
　本明細書において「エキソビボ」（ex vivo）とは、ある処置について、体外で行われるがその後体内に戻されることが意図される場合、一連の動作をエキソビボという。本発明においても、生体内にある細胞を本発明の薬剤で処置して再度患者に戻すような実施形態を想定することができる。
　本明細書において、ある医薬成分（例えば、本発明の抗体等、例えば抗FSTL１抗体）と別の医薬成分（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体等）とを「併用」することは、同時（共存）投与および連続投与を含むことを意図している。連続投与は、治療剤（１種または複数種）と本発明の抗体等（１種またな複数種）を種々の順序で対象に投与することを包含することを意図する。
　ある医薬成分（例えば、本発明の抗体等、例えば抗FSTL１抗体）と別の医薬成分（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体等）とを「併用」して投与するための薬剤は、「併用剤」と呼ばれることがある。
　本明細書において「キット」とは、通常2つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬、抗体、標識、説明書など）が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが試薬キットとして使用される場合、キットには、通常、検査薬、診断薬、治療薬、抗体等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。
　本明細書において「指示書」は、本発明を使用する方法を医師または他の使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本発明の検出方法、診断薬の使い方、または医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、投与部位として、経口、食道への投与（例えば、注射などによる）することを指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（FDA）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（package　insert）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。
　（好ましい実施形態）
　以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本発明の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
　（抗ＦＳＴＬ１抗体）
　１つの局面において、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物（本明細書において総称して「抗ＦＳＴＬ１抗体等」あるいは「本発明の抗体等」ということがある）であって、該抗体は、配列番号５０４（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１７０位または１４８～１６２位、１９３～２２８位または１９３～２１６位および２０５～２２８位、ならびに２３３～２８９位または２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。１つの好ましい実施形態では、配列番号５０４（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位または２７２～２８９位の領域にエピトープを有していてもよい。
　本発明における抗体について、エピトープは、該当する領域中の連続するまたは不連続の、５アミノ酸以上、あるいは６アミノ酸以上、７アミノ酸以上、８アミノ酸以上、９アミノ酸以上、１０アミノ酸以上、１１アミノ酸以上、１２アミノ酸以上の領域あるいはそれらの組合せが該当し得る。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号５０３（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、２０５～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは動物試験において薬効が確認されているものを含む。なお、＃６－５５、＃７－３４、＃１３については、１４８－１６２部位を認識するものと理解される。また、＃５－２、＃５－３、＃５－８．＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－６、＃８－８は、アミノ酸２７２～２８９位を認識するものと理解され、＃７および＃１０はアミノ酸２０５位～２２８位を認識するものと理解され、＃２２はアミノ酸１９３位～２１６位を認識するものと理解され、＃３３はアミノ酸４８位～１００位を認識するものと理解される。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号５０３（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位および２０５～２２８位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは、より活性が強いことが確認されている抗体が認識するものを含む。別の好ましい実施形態では、配列番号５０４（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８～１００位、１４８～１６２位または２０５～２２８位の領域にエピトープを有する。理論に束縛されることは望まないが、これらのエピトープはインビトロ試験またはインビボ試験において薬効が確認されているものを含む。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定のＣＤＲを有する。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、全長配列のＣＤＲを含む任意の配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいは、本発明の特定の抗体に関する配列の可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、そのフレームワーク領域において、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、１７個、もしくは、２０個、またはそれ以上の置換、不可、もしくは、欠失を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。より特定すると、そのような特定のＣＤＲについて、重鎖CDR１，２，３、軽鎖CDR１，２，３の具体的な例としては、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号５０８；重鎖：配列番号５１０）、＃５－３（軽鎖：配列番号５１２；重鎖：配列番号５１４）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号５１６；重鎖：配列番号５１８）、＃５－１０（軽鎖：配列番号５２０；重鎖：配列番号５２２）、＃５－４３（軽鎖：配列番号５２４；重鎖：配列番号５２６）、＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃８－４（軽鎖：配列番号５４０；重鎖：配列番号５４２）、＃８－７（軽鎖：配列番号５４４；重鎖：配列番号５４６）、＃８－８（軽鎖：配列番号５４８；重鎖：配列番号５５０）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）、＃２２（軽鎖：配列番号５６４；重鎖：配列番号５６６）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、該抗体の変異体であって、該変異体において該抗体のフレームワークに１または数個の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まない、変異体であってもよい。抗体
の製造等については、本明細書の他の箇所に記載された実施形態および／または当該分野で公知の手法を用いることができる。なお、本発明の治療または予防の目的では、このような抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、好ましくは、ＦＳＴＬ１またはその情報伝達経路の下流の抑制活性を有することが好ましい。そのような活性は、ＦＳＴＬ１の発現量またはその活性をみるか、あるいはがん細胞株を直接使用して細胞の増殖阻害、転移活性阻害、骨転移阻害、ＭＳＣの免疫抑制や免疫不全等の免疫破綻を増強する活性（例えば、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得）の阻害、免疫関連細胞の免疫抑制性化または免疫不全化（例えば、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増加、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞免疫抑制活性の増加および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の増殖・誘導等による疲弊T細胞の増加の阻害、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）での細胞傷害活性、またはモデル動物に移植して腫瘍の退縮を観察する等をみることで確認してもよい。これらの手法は、当該分野において周知であり、本明細書において使用される手法を用いてもよい。本発明のこれらの抗体は、特定の実施形態では、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（single　chain（Fv）2）、およびscFv－Fcから選択される抗体でありうる。
　ここで、各抗体クローンのＣＤＲのアミノ酸配列を、重鎖および軽鎖の配列中の下線として示す。
＃5-2：
軽鎖（L鎖；配列番号５０８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
重鎖（H鎖；配列番号５１０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTGYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGSYVGDIDAWGHGTEVIVSS
＃5-3
L鎖（配列番号５１２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSVPVTVIYNNNNRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYYCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５１４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFSFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-8
L鎖（配列番号５１６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５１８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGTAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-10
L鎖（配列番号５２０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYVGSYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSAGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５２２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTTYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNDLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃5-43
L鎖（配列番号５２４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５２６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGGTGYGAAVDGRATISKDSGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYDWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃6-55 
L鎖（配列番号５２８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSAIPGETVKITCSGGGNNYGWYQQRSPGSAPVTVIYYNDNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQADDEAIYYCGSWDSNTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５３０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFTSVTMQWVRQAPGKGLEWVASVCSGSSTYYAPAVKGRATISRDNGQSTVRLQLSNLRPEDTGTYYCAKIAGRARWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃7-34
L鎖（配列番号５３２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNNNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQAEDEAVYYCGSYEGSTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５３４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃8-1
L鎖（配列番号５３６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSSGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５３８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-4
L鎖（配列番号５４０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASSQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNDNKPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYFCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５４２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTAYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃8-7
L鎖（配列番号５４４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５４６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-8
L鎖（配列番号５４８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQVEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５５０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す 。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃７
L鎖（配列番号５５２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSNIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGGYDGSTDAAFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５５４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFSIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGEYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSP
＃10
L鎖（配列番号５５６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKLTCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDGSRDAGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５５８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFRIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGRYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSS
＃13
L鎖（配列番号５６０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNNRPSNIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYYCGSYDSSSDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５６２）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃22
L鎖（配列番号５６４）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYWDDRRPSDIPSRFSGSKSGSIHTLTITGVQADDEAVYLCGNAVRSGTGYVGVFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５６６）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSNGMAWVRQAPGKGLELVARINSSGSYTNYGAAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKGASGYGAYPGNIDAWGHGTEVIVSS
＃33
L鎖（配列番号５６８）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVEITCSGDSSYYGWFQQKSPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYCGGYDSSTYDGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号５７０）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSFNMNWVRQAPGKGLEYVAEISGTGSSTYYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTATYFCARGDGAYSIDAWGHGTEVIVSS
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列 番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、ＦＳＴＬ１に対するより強い結合活性が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い結合活性を保持することが期待され、同様の薬効が奏されることが理解される。
　さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、より強い薬効が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い薬効を保持することが期待されることが理解される。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定の可変領域の全長を有する。そのような特定の可変領域は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号５０８；重鎖：配列番号５１０）、＃５－３（軽鎖：配列番号５１２；重鎖：配列番号５１４）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号５１６；重鎖：配列番号５１８）、＃５－１０（軽鎖：配列番号５２０；重鎖：配列番号５２２）、＃５－４３（軽鎖：配列番号５２４；重鎖：配列番号５２６）、＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃８－４（軽鎖：配列番号５４０；重鎖：配列番号５４２）、＃８－７（軽鎖：配列番号５４４；重鎖：配列番号５４６）、＃８－８（軽鎖：配列番号５４８；重鎖：配列番号５５０）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）、＃２２（軽鎖：配列番号５６４；重鎖：配列番号５６６）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号５９８；重鎖：配列番号６００）、＃５－３（軽鎖：配列番６０２；重鎖：配列番号６０４）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号６０６；重鎖：配列番号６０８）、＃５－１０（軽鎖：配列番号６１０；重鎖：配列番号６１２）、＃５－４３（軽鎖：配列番号６１４；重鎖：配列番号６１６）、＃６－５５（軽鎖：配列番号６１８；重鎖：配列番号６２０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号６２２；重鎖：配列番号６２４）、＃８－１（軽鎖：配列番号６２６；重鎖：配列番号６２８）、＃８－４（軽鎖：配列番号６３０；重鎖：配列番号６３２）、＃８－７（軽鎖：配列番号６３４；重鎖：配列番号６３６）、＃８－８（軽鎖：配列番号６３８；重鎖：配列番号６４０）、＃７（軽鎖：配列番号６４２；重鎖：配列番号６４４）、＃１０（軽鎖：配列番号６４６；重鎖：配列番号６４８）、＃１３（軽鎖：配列番号６５０；重鎖：配列番号６５２）、＃２２（軽鎖：配列番号６５４；重鎖：配列番号６５６）および＃３３（軽鎖：配列番号６５８；重鎖：配列番号６６０）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号６１８；重鎖：配列番号６２０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号６２２；重鎖：配列番号６２４）、＃８－１（軽鎖：配列番号６２６；重鎖：配列番号６２８）、＃７（軽鎖：配列番号６４２；重鎖：配列番号６４４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号６５０；重鎖：配列番号６５２）および＃３３（軽鎖：配列番号６５８；重鎖：配列番号６６０）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　一つの好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であり、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ヒト化抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり得る。好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６７１、６７３、６７５および６７７）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６８７、６８９、６９１および６９３）を有する。
　好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号６６３、６６５、６６７および６６９（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号６７１、６７３、６７５および６７７（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号６７９、６８１、６８３および６８５（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号６８７、６８９、６９１および６９３（Ｌ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号７３３、７３５、７３７および７３９（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号７４１、７４３、７４５および７４７（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列、または該重鎖フレームワーク配列および該軽鎖フレームワ ーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号７０８、７０９、７１０および７１１）および軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号７１２、７１３もしくは７１６、７１４もしくは７１７および７１５）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を有する。好ましくは、重鎖フレームワーク配列は、Ｈ（２）のもの、すなわち配列番号６７１、６７３、６７５および６７７（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）またはその重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。本明細書において、Ｈ（２）を用いた場合、Ｈ（１）およびＨ（３）よりもＫＤ値がワンオーダー優れた活性がされたからである。また、好ましくは配列番号６８７、６８９、６９１および６９３（それぞれＬ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号７１２、７１３もしくは７１６、７１４もしくは７１７および７１５）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。
　さらに好ましくは、ヒト化抗体は、配列番号６６３、６６５、６６７および６６９（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号６７１、６７３、６７５および６７７（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号６７９、６８１、６８３および６８５（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列または該重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号７０８、７０９、７１０および７１１）と相違するアミノ酸を１個～８個（例えば、1個、2個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有し、配列番号６８７、６８９、６９１および６９３（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号７３３、７３５、７３７および７３９（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号７４１、７４３、７４５および７４７（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号７１２、７１３もしくは７１６、７１４もしくは７１７および７１５）と相違するアミノ酸を１個～４個（例えば、1個、2個、３個または４個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有する、好ましい実施形態では、ヒト化抗体のバックミューテーションの際に考慮される、相違するアミノ酸の少なくとも１つ、さらに好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つは、Vernier残基から選択される。活性が最適化される限りＶｅｒｎｉｅｒ残基以外の変異が含まれていてもよいことが理解される。好ましい実施形態では、相違するアミノ酸のすべてが、Vernier残基から選択される。Ｖｅｒｎｉｅｒ残基については、例えば、特開２０１０－４８９５、Ｎｉｓｈｉｂｏｒｉ　Ｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Molecular Immunology 43 (2006) 634-642等を参照することができ、これらの記載は本明細書において参考として援用される。
　前記Vernier残基は、ヒト化配列のＨ鎖のＦＲ１アミノ酸（配列番号６７１）２８位、３０位、ＦＲ２のアミノ酸（配列番号６７３）１２位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号６７５）２位、１０位、１３位、１７位および３２位、ならびにＬ鎖のＦＲ１（配列番号６８７）２０位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号６９１）１０位、１５位および３１位を含む。配列が異なる場合はＶｅｒｎｉｅｒ配列は変動し得ることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（１）－Ｌ（１）、Ｈ （２）－Ｌ（１）、Ｈ（３）－Ｌ（１）、Ｈ（１）－Ｌ（２）、Ｈ（２）－Ｌ（２）、Ｈ（３）－Ｌ（２）、Ｈ（１）－Ｌ（３）、Ｈ（２）－Ｌ（３）、Ｈ（３）－Ｌ（３）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4ならびL鎖FR1、FR2、FR3およびFR4のいずれかを有する。別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号６７１、６７３、６７５および６７７）ならびにL鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号６８７、６８９、６９１および６９３）を有する。
　別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号６６３、６６５、６６７および６６９（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号６７１、６７３、６７５および６７７（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号６７９、６８１、６８３および６８５（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体、ならびに配列番号６８７、６８９、６９１および６９３（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号７３３、７３５、７３７および７３９（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号７４１、７４３、７４５および７４７（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体を有する。
　さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号６６３、６６５、６６７および６６９（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号６７１、６７３、６７５および６７７（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号６７９、６８１、６８３および６８５（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号６８７、６８９、６９１および６９３（ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号７３３、７３５、７３７および７３９（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号７４１、７４３、７４５および７４７（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列からなるフレームワーク配列または該フレームワーク配列において１～１０アミノ酸、１～９アミノ酸、１～８アミノ酸、１～７アミノ酸、１～６アミノ酸、１～５アミノ酸、１～４アミノ酸、１～３アミノ酸、１～２アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む配列を含む。
　本発明の一実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを細胞に導入することによって、形質転換体を作成できる。この形質転換体を用いれば、本発明の実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体を作製できる。形質転換体は、ヒトまたはヒトを除く哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、サル等）の細胞であってもよい。哺乳動物細胞としては、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO細胞)、サル細胞COS-7などが挙げられる。または、形質転換体はEscherichia属菌、酵母等であってもよい。
　上記のベクターとしては、例えば大腸菌由来のプラスミド（例えばpET-Blue）、枯草菌由来のプラスミド（例えばpUB110）、酵母由来プラスミド（例えばpSH19）、動物細胞発現プラスミド（例えばpA1-11、pcDNA3.1-V5/His-TOPO）、λファージなどのバクテリオファージ、ウイルス由来のベクターなどを用いることができる。これらのベクターは、プロモーター、複製開始点、または抗生物質耐性遺伝子など、蛋白質発現に必要な構成要素を含んでいてもよい。ベクターは発現ベクターであってもよい。 
　上記のポリヌクレオチドまたはベクターの細胞への導入方法としては、例えば、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、エレクトロポレーション法、アデノウイルスによる方法、レトロウイルスによる方法、またはマイクロインジェクションなどを使用できる（改訂第4版新遺伝子工学ハンドブック, 羊土社(2003):152-179.）。抗体の細胞を用いた生産方法としては、例えば、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):128-142."に記載の方法を使用できる。抗体の精製においては、例えば、硫酸アンモニウム、エタノール沈殿、プロテインA、プロテインG、ゲルろ過クロマトグラフィー、陰イオン、陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、またはレクチンクロマトグラフィーなどを用いることができる（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):27-52.）。
　（医薬、抗がん剤）
　１つの局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む医薬を提供する。本発明の医薬において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、医薬として使用するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の医薬用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、ＦＳＴＬ１に関連する疾患を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤を提供する。本発明の抗がん剤において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、がんの治療または予防のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがんの治療または予防のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がんを処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが 理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移の治療剤または予防剤を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を治療または予防するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍を治療用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　本発明が対象とする疾患は、がんであり、例えば、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫およびそれらの転移性の悪性腫瘍を挙げることができるがそれらに限定されない。また、これらの癌は、SNAILおよび／またはFSTL1を高発現する癌種であってもよい。なお、これらのSNAILおよび／またはFSTL1の発現については、
https://www.oncomine.com/resource/login.html
で提供されるOncomineのヒト腫瘍組織解析情報サイトにおいて得られる情報（以下の表１Ａを参照）に基づいて、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫に高発現がみられることが説明されていることから、これらの癌種でも実施例で実証されたものと同様に効果があることが理解される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
（ONCOMINEdata）
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むがん細胞の転移の阻害剤を提供し、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移、特に骨転移、肺転移の阻害をもなし得る阻害剤を提供する。
　この局面において、本発明は、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）を阻害するため、特に骨転移、肺転移の阻害のための方法を提供する。特に、骨転移を阻害することは従来きわめて困難といわれてきたところ、本明細書中の実施例において示されるようにこれを顕著に阻害することができることが見出されていることから、この点においても、本発明の優位性が見出される。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の阻害剤を提供する。免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導する間葉系幹細胞の誘導の概念も包含する。このような免疫抑制能の高いＭＳＣは、活性化MSCまたは癌関連MSCとしても知られている。理論に束縛されることを望まないが、Snail陽性癌細胞等から分泌されたFSTL1は、MSCのいわゆる前駆細胞に作用して、MSCが免疫抑制性細胞の前駆細胞を免疫抑制性の免疫関連細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞）へと分化させる因子ならびに／または増殖を促進する因子および／もしくはその免疫抑制活性を増強する因子を分泌させそれによって、いわゆる前駆細胞が免疫抑制性細胞となることによって、免疫抑制状態となっていると考えられる。そこで、本願発明のような抗FSTL１抗体を作用させることによって、FSTL１の作用が抑制され、結果として、免疫抑制状態が解除されると考えられる。
　したがって、別の局面では、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤を提供する。免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、免疫抑制細胞の誘導の現象も含むため、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻活性のある細胞の誘導の阻害剤の概念を含むことになる。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、免疫抑制活性の獲得および／または増強を阻害するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の阻害剤における免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導（増加または分化）からなる群より選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ、より好ましくは４つ、より好ましくは５つ、より好ましくは６つ、より好ましくは７つ、より好ましくは８つ、より好ましくは９つ、より好ましくは１０、より好ましくは１１、より好ましくはすべてを含む。
　好ましい実施形態では、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物およびＣＴＬＡ４抑制剤に加え、さらに細胞殺傷性薬剤を含む。したがって、本発明の組成物、剤、医薬等（治療薬または予防薬等）は複合分子を含みうるあるいは結合したものであるといえる。
　１つの局面において、本発明の併用剤は、FSTL1抑制剤およびＣＴＬＡ４抑制剤の他に、別のがん治療と組み合わせてもよい。具体的には、別のがん治療は、本発明の抗がん剤とは別の抗がん剤、手術療法もしくは放射線療法またはそれらの組合せを含む。
　癌に対する化学療法および放射線療法は、リンパ球の増殖を激しく減少させるという副作用が不可避である。一つの実施形態では、本発明の組成物の投与は、減少したリンパ球細胞を刺激、増殖させる効果を示すと共に、通常の化学療法に付随する激烈な副作用を最小限に抑制することができる。また、放射線療法についても同様である。また、本発明の組成物との併用によって、化学療法剤の用量または照射放射線量を通常使用される用量あるいは照射量から大幅に減少させることができる。本発明の癌治療組成物は、本発明の抗がん剤とは別の、既存のまたは新規の化学療法剤と併用あるいは合剤化することができる。そのような化学療法剤として、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。さらに、患者のQOL回復のための癌治療補助剤である白血球(好中球)減少症治療薬、血小板減少症治療薬、制吐剤、癌性疼痛治療薬と併用あるいは合剤化ができる。
　本明細書において、「細胞殺傷性薬剤」は、細胞膜を溶解する可能性のある薬剤である。細胞殺傷性薬剤は、ペプチドの場合は細胞傷害性ペプチドと呼ばれ、細胞傷害性ペプチドは当該分野において種々の呼称があり、例えば、「溶解性ペプチド成分」、「細胞殺傷性配列」は、「細胞溶解性ペプチド（配列）」または「細胞膜溶解性ペプチド（配列）」などとも称されるが、これらは本発明の目的では同義で用いられる。このような細胞傷害性薬剤の代表例としては、GailD.et al., Cancer Res 2008;68:9280-9290.; Ian Krop and Eric P. Winer, ClinCancerRes; 20(1); 1-6.およびK Naito et al., Leukemia(2000) 14, 1436-144に列挙されたものを挙げることができ、メイタンシノイド（Maytansinoid）、エムタンシン（emtansine）、CMA-676に含まれるN-アセチルーγ－カリケアミシンジメチルヒドラジド（NAc-γカリケアミシン、DMH）などを挙げることができるがこれらに限定されない。ペプチドとしては、代表的な細胞殺傷性ペプチドとしては、細胞膜溶解性ペプチド、細胞膜電位不安定化ペプチド、細胞膜溶解・核酸結合ペプチドおよびミトコンドリア膜崩壊ペプチドを挙げることができるがこれらに限定されない。
　必要に応じて、このような細胞殺傷性薬剤は抗体等の本発明の結合剤に対してスペーサーで結合されていてもよい。本明細書において「スペーサー」とは、橋をかけるように，鎖式高分子の分子間で化学結合を形成させる部分をいい、リンカーとも称される。ペプチドのスペーサーとしては例えば、代表的には、Ｇ、Ｐからなる０～５アミノ酸の配列が挙げられるがこれに限定されない。スペーサーは必須ではなく、存在しなくてもよい。
　本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体および／もしくは抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらのフラグメントもしくは機能的等価物と、細胞殺傷性薬剤との組み合わせは複合分子で提供されてもよい。このような分子を例示的に説明すると、爆薬部分に当たる、細胞傷害性部分と、弾頭部分にあたるがん細胞に対する特異性を担当する部分（たとえば、がん細胞に高発現している受容体に対して特異的に結合するペプチド・配列、代表的には抗体）とを組み合わせてできる分子と説明することができる。スペーサーを使用する場合、がん細胞特異的結合剤＋スペーサー＋細胞殺傷性薬剤から構成されることになる。本明細書では、任意のがん細胞特異的結合剤、任意のスペーサー、任意の細胞殺傷性薬剤を任意に組み合わせることができ、その製造法および使用法の例を記載する。このような分子は、化学合成法が通常であるが、ペプチドで構成される場合は遺伝子組換えにより強制発現させ精製する方法、あるいはこれと組み合わせた方法も可能である。
　本発明の使用について、治療しようとするがん細胞について、細胞表面のＦＳＴＬ１の発現および細胞殺傷性薬剤に対するがん細胞の傷害感受性を調べる。その結果をもとに弾頭と爆薬を選択し、そのがん細胞に最適な分子をデザインする。化学合成等により得られたオーダーメイドペプチドトキシンを必要に応じてアテロコラーゲン等のDDSと組み合わせ、局所投与または全身投与を行い治療することができる。
　本発明は、Snail陽性癌細胞における作用効果から見出されたものであるため、理論に束縛されることを望まないが、本発明の標的は、Snail陽性癌細胞に起因するがんを含みうる。癌細胞の一部がEMTを生じてSNAILを発現するので、そのような限られた数種の癌だけでなく、実に様々な癌種で“EMT”を生じた細胞がSNAILを発現するといわれている。そのようながんとしては、扁平上皮癌、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫を挙げることができるがこれらに限定されない。
　治療薬の投与経路は、治療に際して効果的なものを使用するのが好ましく、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、または経口投与等であってもよい。投与形態としては、例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤等であってもよい。抗体またはポリヌクレオチドを投与する場合には、注射剤として用いることが効果的である。注射用の水溶液は、例えば、バイアル、またはステンレス容器で保存してもよい。また注射用の水溶液は、例えば生理食塩水、糖(例えばトレハロース)、NaCl、またはNaOH等を配合してもよい。また治療薬は、例えば、緩衝剤(例えばリン酸塩緩衝液)、安定剤、アジュバント等の徐放剤等を配合してもよい。
　一般的に、本発明の組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等は、治療有効量の治療剤または有効成分、および薬学的に許容しうるキャリアもしくは賦形剤を含む。本明細書において「薬学的に許容しうる」は、動物、そしてより詳細にはヒトにおける使用のため、政府の監督官庁に認可されたか、あるいは薬局方または他の一般的に認められる薬局方に列挙されていることを意味する。本明細書において使用される「キャリア」は、治療剤を一緒に投与する、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このようなキャリアは、無菌液体、例えば水および油であることも可能であり、石油、動物、植物または合成起源のものが含まれ、限定されるわけではないが、ピーナツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油等が含まれる。医薬を経口投与する場合は、水が好ましいキャリアである。医薬組成物を静脈内投与する場合は、生理食塩水および水性デキストロースが好ましいキャリアである。好ましくは、生理食塩水溶液、並びに水性デキストロースおよびグリセロール溶液が、注射可能溶液の液体キャリアとして使用される。適切な賦形剤には、軽質無水ケイ酸、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等が含まれる。組成物は、望ましい場合、少量の湿潤剤または乳化剤、あるいはpH緩衝剤もまた含有することも可能である。これらの組成物は、溶液、懸濁物、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、持続放出配合物等の形を取ることも可能である。伝統的な結合剤およびキャリア、例えばトリグリセリドを用いて、組成物を座薬として配合することも可能である。経口配合物は、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン・ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的キャリアを含むことも可能である。適切なキャリアの例は、E．W．Martin,　Remington’s　PharmaceuticalSciences(MarkPublishing Company, Easton, U.S.A）に記載される。このような組成物は、患者に適切に投与する形を提供するように、適切な量のキャリアと一緒に、治療有効量の療法剤、好ましくは精製型のものを含有する。配合物は、投与様式に適していなければならない。これらのほか、例えば、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等を含んでいてもよい。
　本発明を医薬として投与する場合、種々の送達（デリバリー）系が知られ、そしてこのような系を用いて、本発明の治療剤を適切な部位（例えば、食道）に投与することも可能であり、このような系には、例えばリポソーム、微小粒子、および微小カプセル中の被包：治療剤（例えば、ポリペプチド）を発現可能な組換え細胞の使用、受容体が仲介するエンドサイトーシスの使用などがある。導入法には、限定されるわけではないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、および経口経路が含まれる。好適な経路いずれによって、例えば注入によって、ボーラス（bolus）注射によって、上皮または皮膚粘膜裏打ち（例えば口腔、直腸および腸粘膜など）を通じた吸収によって、医薬を投与することも可能であるし、必要に応じてエアロゾル化剤を用いて吸入器または噴霧器を使用しうるし、そして他の生物学的活性剤と一緒に投与することも可能である。投与は全身性または局所であることも可能である。本発明は腫瘍に直接投与することもできる。
　好ましい実施形態において、公知の方法に従って、ヒトへの投与に適応させた医薬組成物として、組成物を配合することができる。このような組成物は注射により投与することができる。代表的には、注射投与のための組成物は、無菌等張水性緩衝剤中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるリドカインなどの局所麻酔剤も含むことも可能である。一般的に、成分を別個に供給するか、または単位投薬型中で一緒に混合して供給し、例えば活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器中、凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として供給することができる。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌薬剤等級の水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて、分配することも可能である。組成物を注射によって投与しようとする場合、投与前に、成分を混合可能であるように、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルを提供することも可能である。
　本発明の抗体等、組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等を中性型または塩型あるいは他のプロドラッグ（例えば、エステル等）で配合することも可能である。薬学的に許容しうる塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する遊離型のカルボキシル基とともに形成されるもの、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの遊離型のアミン基とともに形成されるもの、並びにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、および水酸化第二鉄などに由来するものが含まれる。
　特定の障害または状態の治療に有効な本発明の治療剤の量は、障害または状態の性質によって変動しうるが、当業者は本明細書の記載に基づき標準的臨床技術によって決定可能である。さらに、場合によって、in　vitroアッセイを使用して、最適投薬量範囲を同定するのを補助することも可能である。配合物に使用しようとする正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重大性によっても変動しうるため、担当医の判断および各患者の状況に従って、決定すべきである。しかし、投与量は特に限定されないが、例えば、1回あたり0.001、1、5、10、15、100、または1000mg/kg体重であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。投与間隔は特に限定されないが、例えば、1、7、14、21、または28日あたりに1または2回投与してもよく、それらいずれか2つの値の範囲あたりに1または2回投与してもよい。投与量、投与間隔、投与方法は、患者の年齢や体重、症状、対象臓器等により、適宜選択してもよい。また治療薬は、治療有効量、または所望の作用を発揮する有効量の有効成分を含むことが好ましい。悪性腫瘍マーカーが、投与後に有意に減少した場合に、治療効果があったと判断してもよい。有効用量は、in　vitroまたは動物モデル試験系から得られる用量－反応曲線から推定可能である。
　本発明の一実施形態において「患者」は、ヒト、またはヒトを除く哺乳動物（例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ネズミ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、マーモセット、サル、またはチンパンジー等の1種以上）を含む。
また患者は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌ陽性悪性腫瘍を発症していると判断または診断された患者であってもよい。このとき、判断または診断は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌの蛋白質レベルを検出することにより行われることが好ましい。
　本発明の医薬組成物または剤（治療剤もしくは予防剤等）はキットとして提供することができる。　特定の実施形態では、本発明は、本発明の組成物または医薬の1以上の成分が充填された、1以上の容器を含む、薬剤パックまたはキットを提供する。場合によって、このような容器に付随して、医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　本発明のキットはまた、本発明の抗体等、組成物、治療剤、予防剤または医薬として使用するタンパク質をコードする発現ベクターも含有することも可能であり、このタンパク質は、発現された後、生物学的に活性な複合体を形成するため、再構成されることも可能である。このようなキットは、好ましくはまた、必要な緩衝剤および試薬も含有する。場合によって、このような容器に付随して、キット使用のための指示書（添付文書）、並びに／あるいは医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　（併用剤）
　１つの局面において、本発明は、ＦＳＴＬ１抑制剤とＣＴＬＡ４抑制剤との組み合わせ物を提供する。理論に束縛されることを望まないが、本発明は、ＦＳＴＬ１の経路を抑制することに加え、ＣＴＬＡ４の経路を抑制することにより、大腸癌が消失し生存率が調べた範囲で１００％であるという顕著な効果が示されたことに例示されるように、予想外に顕著にがんの免疫解除抑制に対する効果が増強されたことに基づくものであり、実施例において示された抗体による例から、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＣＴＬＡ４抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＣＴＬＡ４のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の組合せ物では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＣＴＬＡ４抑制剤は抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。
　１つの局面において、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物との組み合わせ物を提供する。
　１つの実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号５０３（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１７０位（好ましくは１４８～１６２位）、１９３～２２８位または１９３～２１６位および２０５～２２８位ならびに２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。
　好ましい実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む。
　より好ましい実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む。
　さらに別の実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号６１８；重鎖：配列番号６２０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号６２２；重鎖：配列番号６２４）、＃８－１（軽鎖：配列番号６２６；重鎖：配列番号６２８）、＃７（軽鎖：配列番号６４２；重鎖：配列番号６４４）、＃１０（軽鎖：配列番号６５６；重鎖：配列番号６５８）、＃１３（軽鎖：配列番号６５０；重鎖：配列番号６５２）および＃３３（軽鎖：配列番号６５８；重鎖：配列番号６６０）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　一つの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であり、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ヒト化抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり得る。好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６７１、６７３、６７５および６７７）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号６８７、６８９、６９１および６９３）を有する。
　１つの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、ＣＴＬＡ４とCD80および／またはCD86の結合阻害能を有する（例えば、http://first.lifesciencedb.jp/archives/1194を参照。）。
　１つの実施形態では、本発明で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体は、Clone 9H10（BioLegend）またはイピリムバブ(Ipilimumab；その重鎖のアミノ酸配列は配列番号７５６であり、軽鎖のアミノ酸配列は配列番号７５７である)のエピトープと同様のエピトープを有する。
　別の実施形態では、本発明で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Clone 9H10（BioLegend）またはイピリムバブ(Ipilimumab)の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む。イピリムマブのＣＤＲ配列は、それぞれ、重鎖ＣＤＲ１はSYTMH（配列番号７５６の３１～３５位）であり、重鎖ＣＤＲ２はFISYDGNNKYY ADSVKG（配列番号７５６の５０～６６位）であり、重鎖ＣＤＲ３はTGWLGPFDY（配列番号７５６の９９～１０７位）である、軽鎖ＣＤＲ１はRASQSVGSSYLA（配列番号７５７の２４～３５位）であり、軽鎖ＣＤＲ２はGAFSRAT（配列番号７５７の５１～５７位）であり、および軽鎖ＣＤＲ３はQQYGSPWT（配列番号７５７の９０～９７位）である。イピリムバブは、CTLA4とそのリガンドであるB7.1およびB7.2との結合部位にエピトープを有することから、このようなエピトープ特性も好ましくあり得る。
　別の実施形態では、本発明で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Clone 9H10（BioLegend）またはIpilimumabの可変領域（重鎖（配列番号７５６）の１～１１８位および軽鎖（配列番号７５７）の１～１１０位）の全長を含む。
　別の実施形態では、本発明で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Clone 9H10（BioLegend）またはIpilimumabの全長（配列番号７５６および配列番号７５７）またはそのヒト化配列を含む。
　別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む医薬を提供する。本発明の医薬で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む抗がん剤を提供する。本発明の抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍の治療剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病、および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤を提供する。本発明のこれらの疾患の治療剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含むがん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移）の阻害剤を提供し、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移、特に骨転移、肺転移の阻害をもなし得る阻害剤を提供する。本発明のがん細胞の転移の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の阻害剤を提供する。本発明のＭＳＣの免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の増強の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤を提供する。本発明の免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの実施形態では、上記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、より好ましくは少なくとも６つ、より好ましくは少なくとも７つ、より好ましくは少なくとも８つ、より好ましくは少なくとも９つ、より好ましくは少なくとも１０、より好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、より好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、より好ましくはすべてを含む。
　１つの局面において、本発明の医薬、抗がん剤、治療剤または阻害剤は、別のがん治療と組み合わせてもよい。具体的には、別のがん治療は、本発明の抗がん剤とは別の抗がん剤、手術療法もしくは放射線療法またはそれらの組合せを含む。
　癌に対する化学療法および放射線療法は、リンパ球の増殖を激しく減少させるという副作用が不可避である。一つの実施形態では、本発明の組成物の投与は、減少したリンパ球細胞を刺激、増殖させる効果を示すと共に、通常の化学療法に付随する激烈な副作用を最小限に抑制することができる。また、放射線療法についても同様である。また、本発明の組成物との併用によって、化学療法剤の用量または照射放射線量を通常使用される用量あるいは照射量から大幅に減少させることができる。本発明の癌治療組成物は、本発明の抗がん剤とは別の、既存のまたは新規の化学療法剤と併用あるいは合剤化することができる。そのような化学療法剤として、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。さらに、患者のQOL回復のための癌治療補助剤である白血球(好中球)減少症治療薬、血小板減少症治療薬、制吐剤、癌性疼痛治療薬と併用あるいは合剤化ができる。
　１つの別の局面では、本発明は、ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤はＣＴＬＡ４抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤を提供する。抑制剤としては、実施例において示された抗体による例から、それぞれ独立して、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＣＴＬＡ４抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＣＴＬＡ４のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の抗がん剤物では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＣＴＬＡ４抑制剤は抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。
　好ましくは、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤を提供する。このような抗がん剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むが、使用形態が、併用であるものであり、そのような併用は例えば、キットに記載されあるいは添付文書において記載される。本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　他の局面では、本発明は、ＣＴＬＡ４抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＣＴＬＡ４抑制剤はＦＳＴＬ抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤を提供する。抑制剤としては、実施例において示された抗体による例から、それぞれ独立して、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＣＴＬＡ４抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＣＴＬＡ４のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の抗がん剤では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＣＴＬＡ４抑制剤は抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。
　好ましくは、本発明は、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤を提供する。本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいは任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの局面では、本発明は、有効量のＦＳＴＬ１抑制剤と有効量のＣＴＬＡ４抑制剤とを組み合わせて投与する工程を含むがんを治療または予防するための方法を提供する。理論に束縛されることを望まないが、本発明の方法では、ＦＳＴＬ１の経路を抑制することに加え、ＣＴＬＡ４の経路を抑制することにより、大腸癌が消失するという顕著な効果が示されたことに例示されるように、予想外に顕著にがんの免疫解除抑制に対する効果が増強されたことに基づくものであり、実施例において示された抗体による例から、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤およびＣＴＬＡ４抑制剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路およびＣＴＬＡ４のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の方法では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または前記ＣＴＬＡ４抑制剤は抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である。
　好ましくは、がんを治療または予防するための方法であって、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量と、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量とを組み合わせて、必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法を提供する。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物とは、同時に投与してもよく別々に（別時に）投与してもよい。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物とは、合剤とされてもよく、別々の剤型として投与されてもよい。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物とは、同じ経路で投与されても別経路で（例えば、経口および静脈内投与）投与されてもよい。
　（一般技術）
　本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Sambrook　J.　et　al.(1989).　Molecular　Cloning:　A　Laboratory　Manual,Cold　Spring　Harborおよびその3rd　Ed.(2001);　Ausubel,　F.M.(1987).Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;　Ausubel,F.M.(1989).　Short　Protocols　inMolecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;Innis,M.A.(1990).PCR　Protocols:　A　Guide　to　Methods　and　Applications,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1992).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Ausubel,F.M.　(1995).Short　Protocols　in　MolecularBiology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Innis,M.A.　et　al.(1995).PCR　Strategies,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1999).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　fromCurrent　Protocols　in　Molecular　Biology,Wiley,　and　annual　updates;　Sninsky,　J.J.et　al.(1999).　PCR　Applications:　Protocols　for　Functional　Genomics,　Academic　Press、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
　人工的に合成した遺伝子を作製するためのDNA合成技術および核酸化学については、例えば、Gait,　M.J.(1985).　Oligonucleotide　Synthesis:A　Practical　Approach,IRL　Press;　Gait,M.J.(1990).　Oligonucleotide　Synthesis:　A　Practical　Approach,　IRL　Press;　Eckstein,F.(1991).　Oligonucleotides　and　Analogues:APractical　Approach,　IRL　Press;Adams,　R.L.　et　al.(1992).　The　Biochemistry　of　the　Nucleic　Acids,　Chapman&Hall;　Shabarova,Z.　et　al.(1994).　Advanced　Organic　Chemistry　of　Nucleic　Acids,　Weinheim;Blackburn,　G.M.et　al.(1996).　Nucleic　Acids　in　Chemistry　and　Biology,　Oxford　University　Press;　Hermanson,G.T.(I996).Bioconjugate　Techniques,　Academic　Pressなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
　例えば、本明細書において、当該分野に知られる標準法によって、例えば自動化DNA合成装置（Biosearch、Applied　Biosystems等から市販されるものなど）の使用によって、本発明のオリゴヌクレオチドを合成することも可能である。例えば、Steinら（Steinet　al.,　1988,　Nucl.　Acids　Res.　16:3209）の方法によって、ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドを合成することも可能であるし、調節孔ガラスポリマー支持体（Sarinet　al.,1988,　Proc.　Natl.　Acad.　Sci.　USA　85:7448-7451）等の使用によって、メチルホスホネート・オリゴヌクレオチドを調製することも可能である。
　本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも1つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「2つの値の範囲内」と明記した場合、その範囲には2つの値自体も含む。
　本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
　以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、請求の範囲によってのみ限定される。
［実施例］
　以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　＜実施例１＞抗FSTL1抗体の作製
　3ヵ月齢のボリスブラウン3羽に対して、1羽当たり1回に抗原であるヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）（配列番号６６１）を1羽あたり100μgずつ腹腔に免疫した。1次免疫には完全フロイントアジュバンド（Wako社、014-09541）、2次、3次および4次免疫には不完全フロイントアジュバンド（Wako社、011-09551）を用いて抗原を腹腔に免疫した。5次免疫はPBS（phosphate　buffered　saline）に希釈した抗原を静脈注射した。隔週で翼下静脈より採血を行い、ELISAによって抗体価の確認を行った。3羽に対して4次免疫まで実施し、最も抗体価の上昇が見られた個体1羽に対して、5次免疫を行い、5次免疫を最終免疫とした。最終免疫3日後、ニワトリの脾臓を回収し、Ficoll　paque　PLUS（GE　Healthcare社、17-1440-03）を用いた密度勾配遠心によりリンパ球を単離し、TRIzole　Reagent（Life　Technologies、15596026）を用いてRNAを抽出した。抽出したRNAからPrimeScript　II　1st　Strand　cDNA　Synthesis　Kit（TAKARA、6210A）を用いたRT-PCRによりcDNAの合成を行い、scFvファージライブラリーを作製した。発現ベクターはpPDSを使用した。scFvファージライブラリーの作製は、参考文献：“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。
　scFv　ファージライブラリーを用いてパニングを行いFSTL1特異的なファージの濃縮を行った。パニングに用いた抗原はヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）のみ、またはヒト　FSTL1（R&D　Systems社、Cat#　1694-FN-050）およびマウスFSTL1（R&D　Systems　Cat#1738-FN-050）の2種のパニング用の抗原を交互に使用することでマウスにも交差反応性を持つ抗体を取得した。パニングは参考文献“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。5回パニングを行った後、ライブラリーの反応性を、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1を固相化したプレートを用いたELISAによって確認し、反応性が上昇し始めたライブラリーからファージのスクリーニングを行った。scFvファージ抗体のサンプル調製では、ファージを大腸菌に感染させ、アンピシリン（50μg/ml、nacalai、02739-32）を含む2×YT　Agar　plateにプレーティングし、得られたコロニーをアンピシリン含有2×YT液体培地中で培養した。ヘルパーファージを感染させた後、アンピシリン（50μg/ml）、カナマイシン（25μg/ml、明治製菓株式会社、GS1-RSS）、IPTG（100μg/ml、nacalai、19742-94）含有2×YT液体培地中でファージの誘導を行った。得られた培養上清中のscFvファージ抗体の反応性を、抗原固相化プレートを用いたELISAによって確認した。
　ELISAによるスクリーニングでは、PBSで希釈した１μg／mlのヒトFSTL1またはマウスFSTL1を50μｌ／ウェルで96ウェルプレート（Nunc社、Cat.　No.　442404、）に入れ、一晩、４℃で抗原を固相化した。固相化の後、25％Block　Ace（DSファーマバイオメディカル、UK-B80）を含むＰＢＳでウェルをブロッキングし、scFvファージ抗体を含む培養上清を反応させた。二次抗体として、HRP標識Goat　anti-mouse　IgG　(H+L)　（KPL社、Cat.　No.474-1806）を10％Block　Aceに1000倍希釈した溶液に加え、基質として用いたOPDの発色をプレートリーダー（BIO-RAD社、Model　680）で490nmおよび630nmの吸光度を測定した。以上の条件を表1にまとめる。
　（表１　スクリーニング条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
（Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。）
　ELISAにて得られた陽性クローンについて、ユーロフィンジェノミクスに外注し、DNAシークエンスを行い、配列を決定した。
　配列の異なるクローンについて、scFv抗体をコードするDNA鎖を鋳型にして、ニワトリ由来抗体遺伝子H鎖可変領域及びL鎖可変領域の増幅をPCRで行った後、PCR産物をSacII（BioLabs社,　Cat#R0157S）及びNheI制限酵素処理（BioLabs社,　Cat#R0131S）した。次に、H鎖可変領域及びL鎖可変領域のそれぞれについて、同じように制限酵素処理したマウス/ニワトリキメラ抗体（IgG1）発現ベクター（H鎖用発現ベクター：pcDNA4/myc-His、L鎖用発現ベクター：pcDNA3/myc-His、Invitrogen）に組換えた。作製したH鎖及びL鎖のコンストラクトをCHO細胞にトランスフェクトした後、培養上清をヒトまたはマウス　FSTL1タンパク質を固相したELISAで反応性の確認を行った。使用したマウスキメラ発現ベクターはTateishi　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2008　Apr;70(4):　397-400に記載されているベクターを使用した。
　以上により得られた抗体クローン（ニワトリ-マウスキメラ抗体）のうち、クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３を以下の実験で使用した。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号５０８、５１２、５１６、５２０、５２４、５２８、５３２、５３６、５４０、５４４、５４８、５５２、５５６、５６０、５６４、５６８であり、全長アミノ酸配列は、配列番号５９８、６０２、６０６、６１０、６１４、６１８、６２２、６２６、６３０、６３４、６３８、６４２、６４６、６５０、６５４、６５８であり、核酸配列は順に配列番号５０７、５１１、５１５、５１９、５２３、５２７、５３１、５３５、５３９、５４３、５４７、５５１、５５５、５５９、５６３、５６７であり、全長核酸配列は、配列番号５９７、６０１、６０５、６０９、６１３、６１７、６２１、６２５、６２９、６３３、６３７、６４１、６４５、６４９、６５３、６５７である。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号５１０、５１４、５１８、５２２、５２６，５３０、５３４、５３８、５４２、５４６、５５０、５５４、５５８、５６２、５６６、５７０であり、全長アミノ酸配列は、配列番号６００、６０４、６０８、６１２、６１６、６２０、６２４、６２８、６３２、６３６、６４０、６４４、６４８、６５２、６５６、６６０であり、核酸配列は順に配列番号５０９、５１３、５１７、５２１、５２５、５２９、５３３、５３７、５４１、５４５、５４９、５５３、５５７、５６１、５６５、５６９であり、全長核酸配列は、配列番号５９９、６０３、６０７、６１１、６１５、６１９、６２３、６２７、６３１、６３５、６３９、６４３、６４７、６５１、６５５、６５９である。
　上記の抗体クローンを大量に製造するため、作製したH鎖およびL鎖のコンストラクトをほ乳類培養細胞にExpi293Expression　system(Invitrogen社、Cat#A14635)を利用しトランスフェクトした後、発現した抗体の精製をProteinG　Sepharose　4　Fast　Flow（GE　healthcare社、17-018-02）を用いて行った。得られた各クローンの精製抗体のFSTL1に対する結合活性の測定については、実施例２で示す。
　＜実施例２＞精製抗体のFSTL1に対する結合活性評価
　以下の条件でELISAを行い、取得した上記の抗体クローンのFSTL1に対する反応性を評価した。
　（表２　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗ジニトロフェニル（DNP）抗体（ネガティブコントロール）、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　結果、ヒトFSTL1に対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#7-34、#5-10＞#5-3＞#5-8＞#5-43　となった（図６３A）。また、抗体クローンの中で＃6-55と＃7-34はヒトおよびマウスFSTL1の両方に特異的かつ同程度の強い結合活性を示した（図６３B）。
　図６４および図６５では、スクリーニングおよび抗体精製の時期が異なるクローンに関しても表３の条件で結合活性を評価した結果を示した。
　（表３　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗DNP抗体、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#7、#10、#13、#22,#33
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　（結果）
　ヒトFSTLに対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#8-1＞#8-7＞#8-4＞#8-8　となった（図６４）。更に、ヒトおよびマウスFSTL1に対する結合活性を評価した結果、（図６５A）ヒトFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#13＞#8-1、#10＞#8-4＞#7、#33＞#5-8＞#22となった。（図６５B）マウスFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#10、#13＞#22＞#７＞#33＞#8-1となり、#8-1はごくわずかに結合活性を示した。#5-8、#8-4はマウスFSTL1に対して全く結合活性を示さなかった。
　＜実施例３＞抗体のエピトープマッピング
　本実施例では、上記実施例で得られた抗体のエピトープマッピングを行った。
　＜遺伝子合成＞
　ヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の合成にあたり、ヒトFSTL1遺伝子はNM_007085.4（配列番号５０３）を、マウスFSTL1遺伝子はNM_008047.5（配列番号５０５）の配列情報を参考に、C末端にアラニン残基3個とヒスチジン残基10個を付加したHisタグ付きのヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の配列設計を行った。更に、哺乳類細胞での発現を考慮して、コドンの最適化を行い、各遺伝子の両末端にプラスミド挿入用の核酸配列（配列番号５７７および５７８）をそれぞれ付加した遺伝子を設計し、合成はLife　Technologies社に外注した。元になったヒトおよびマウスFSTL1の核酸およびアミノ酸配列（配列番号５０３，５０４，５０５、５０６）および実際に遺伝子合成した核酸配列および翻訳後のアミノ酸配列（配列番号５７１，５７２，５７３，５７４）を下記に示す。
プラスミドへの挿入用の配列：N末側　5’-CGAACCCTTAAGCTTG-3’（配列番号５７７）
　　　　　　　　　　　　　　C末側　5’-CGTGGCATCTAGACA-3（配列番号５７８）
・ヒトFSTL1核酸配列（配列番号５０３）＜以下下線はリーダー配列である。＞
atgtggaaacgctggctcgcgctcgcgctcgcgctggtggcggtcgcctgggtccgcgccgaggaagagctaaggagcaaatccaagatctgtgccaatgtgttttgtggagccggccgggaatgtgcagtcacagagaaaggggaacccacctgtctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaactgcatcgagatgcctgcctcactggatccaaaatccaggttgattacgatggacactgcaaagagaagaaatccgtaagtccatctgccagcccagttgtttgctatcagtccaaccgtgatgagctccgacgtcgcatcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagcaactacagtgaaatcctagacaagtattttaagaactttgataatggtgattctcgcctggactccagtgaattcctgaagtttgtggaacagaatgaaactgccatcaatattacaacgtatccagaccaggagaacaacaagttgcttaggggactctgtgttgatgctctcattgaactgtctgatgaaaatgctgattggaaactcagcttccaagagtttctcaagtgcctcaacccatctttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggatgaaacgtatgcagatggagctgagaccgaggtggactgtaaccgctgtgtctgtgcctgtggaaattgggtctgtacagccatgacctgtgacggaaagaatcagaagggggcccagacccagacagaggaggagatgaccagatatgtccaggagctccaaaagcatcaggaaacagctgaaaagaccaagagagtgagcaccaaagagatctaa
・マウスFSTL1核酸配列（配列番号５０５）
atgtggaaacgatggctggcgctctcgctggtgaccatcgccctggtccacggcgaggaggaacctagaagcaaatccaagatctgcgccaatgtgttttgtggagctggcagggaatgtgccgtcacagagaagggggagcccacgtgcctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaacttcatagagatgcctgcctcactggatccaagatccaggttgattatgatgggcactgcaaagaaaagaagtctgcgagtccatctgccagcccagttgtctgctatcaagctaaccgcgatgagctccgacggcgcctcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagtaactacagtgagatcctagacaagtactttaagagctttgataatggcgactctcacctggactccagtgaattcctgaaattcgtggagcagaatgaaacagccatcaacatcaccacttatgcagatcaggagaacaacaaactgctcagaagcctctgtgttgacgccctcattgaactgtctgatgagaacgctgactggaaactcagcttccaagagttcctcaagtgcctcaacccatccttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggacgaaacctatgcagatggagctgagactgaggtggactgcaatcgctgtgtctgttcctgtggccactgggtctgcacagcaatgacctgtgatggaaagaatcagaagggggtccagacccacacagaggaggagaagacaggatatgtccaggaactccagaagcaccagggcacagcagaaaagaccaagaaggtgaacaccaaagagatctaa
・実施例で用いたヒトＦＳＴＬ１の核酸配列（配列番号５７１）
atgtggaagagatggctggccctggctctggcactggtggctgtggcttgggtgcgcgccgaggaagaactgcggagcaagagcaagatctgcgccaacgtgttctgcggagccggcagagaatgtgccgtgaccgagaagggcgagcctacctgcctgtgcatcgagcagtgcaagccccacaagaggcctgtgtgcggcagcaacggcaagacctacctgaaccactgcgagctgcaccgggatgcctgtctgaccggcagcaagatccaggtggactacgacggccactgcaaagaaaagaaaagcgtgtcccccagcgccagccccgtcgtgtgttaccagagcaacagggacgagctgcggcggagaatcatccagtggctggaagccgagatcatccccgacggctggttcagcaagggcagcaactacagcgagatcctggacaagtacttcaagaacttcgacaacggcgacagcagactggacagcagcgagttcctgaagttcgtggaacagaacgagacagccatcaacatcaccacctaccccgaccaggaaaacaacaagctgctgcggggcctgtgcgtggacgccctgattgagctgagcgacgagaacgccgactggaagctgagctttcaggaatttctgaagtgcctgaaccccagcttcaacccccccgagaagaagtgcgccctggaggacgagacatacgccgatggcgccgagacagaggtggactgcaacagatgcgtgtgcgcctgcggcaactgggtgtgcaccgccatgacctgcgacggcaagaatcagaagggcgcccagacccagaccgaagaagagatgaccagatacgtgcaggaactgcagaagcaccaggaaaccgccgaaaagaccaagcgggtgtccaccaaagagatcgccgctgcccaccaccatcaccatcatcaccaccaccattga
・実施例で用いたマウスFSTL1の核酸配列（配列番号５７３）
atgtggaagcggtggctggccctgagcctcgtgacaattgctctggtgcacggcgaggaagaacccagaagcaagagcaagatctgcgccaacgtgttctgcggagccggcagagaatgtgccgtgaccgagaagggcgagcctacctgcctgtgcatcgagcagtgcaagccccacaagaggcctgtgtgcggcagcaacggcaagacctacctgaaccactgcgagctgcaccgggatgcctgtctgaccggcagcaagatccaggtggactacgacggccactgcaaagagaagaagtccgccagccctagcgccagcccagtcgtgtgttaccaggccaaccgggacgagctgcggcggagactgattcagtggctggaagccgagatcatccccgacggctggttcagcaagggcagcaactacagcgagatcctggacaagtacttcaagagcttcgacaacggcgacagccacctggacagcagcgagttcctgaagttcgtggaacagaacgagacagccatcaacatcaccacctacgccgaccaggaaaacaacaagctgctgagaagcctgtgcgtggacgccctgatcgagctgagcgacgagaacgccgactggaagctgagctttcaggaatttctgaagtgcctgaaccccagcttcaacccccccgagaagaaatgcgccctggaagatgagacatacgccgacggcgccgagacagaggtggactgcaatagatgcgtgtgcagctgcggccactgggtgtgcaccgccatgacctgcgacggcaagaaccagaaaggcgtgcagacccacaccgaggaagagaaaaccggctacgtgcaggaactgcagaagcaccagggcaccgccgaaaagaccaagaaagtgaacaccaaagagatcgccgctgcccaccaccatcaccatcatcaccaccaccattga
・ヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号５０４）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEI
・マウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号５０６）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEI
・実施例で用いたヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号５７２）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEIAAAHHHHHHHHHH
・実施例で用いたマウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号５７３）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEIAAAHHHHHHHHHH

　＜発現ベクター構築＞
　次に、pcDNA3.4TOPO（登録商標）へのマルチクローニングサイトの挿入、およびFSTL1遺伝子の挿入方法を説明する。
　以下のマルチクローニングサイトを有する配列を、ファスマック社へ外注し、一本鎖DNAの合成を行った。それぞれの一本鎖DNAは相補的であり、合成した一本鎖DNAを二本鎖にした後に、pcDNATM3.4-TOPO（登録商標）　TA　Cloning　Kit　(Life　Technologies,　Cat#　A14697)を用いてpcDNA　3.4　TOPO（登録商標）　vectorに挿入した。
・マルチクローニングサイト配列
5‘-AAGCTTGGATCCACTAGTGAATTCATCTACCAGCTAGCGTGGCATCTAGACACTCTCGA　GA-3’　（配列番号５７５）
5‘CTCGAGAGTGTCTAGATGCCACGCTAGCTGGTAGATGAATTCACTAGTGGATCCAAGCTT　A-3’　（配列番号５７６）
　マルチクローニングサイトを挿入して得られたプラスミドを大腸菌に形質転換し、大腸菌を培養してPureYieldTM　Plasmid　Midiprep　System（Promega社、Cat#　A2492）を用いてプラスミドを精製した。精製したプラスミドを制限酵素BamHI-HF（BioLabs社　Cat#　R3136L）およびNheI-HF（BioLabs社　Cat#R3131L）で処理し、１％アガロース電気泳動を行った。泳動後にエチジウムブロマイドで染色し、プラスミドのバンドを切り出しNucleoSpin　Gel　and　PCR　Clean-up（TAKARA社、Cat#　740609.250）を用いてゲルからプラスミドを精製した。
　合成したヒトFSTL1（配列番号５７１）またはマウスFSTL1遺伝子（配列番号５７３）をGeneArt　Seamless　Cloning　and　Assembly　Enzyme　Mix（Invitrogen社、Cat#A14606）を用いて、上記制限酵素処理済みプラスミドに組込み、そのプラスミドを大腸菌に形質転換した。形質転換した大腸菌を培養し、大腸菌からプラスミドを抽出・精製してDNAシーケンスを確認した。DNAシーケンスの結果、目的のヒトおよびマウスFSTL1遺伝子配列が確認できたプラスミドを発現プラスミドとした。得られたヒトおよびマウスFSTL1発現ベクターを用いて、Expi293TM　Expression　system（Life　Technologies社,　Cat#　A14635）で一過性発現を行った。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resin(Thermo　Scientific社、Cat#　89964)を用いて精製を行い、ELISAおよびエピトープマッピングELISA用の抗原とした。
　＜FSTL1欠損体の作製＞
　次に、各種欠損体作製方法を示す。上記で作製したヒトFSTL1発現プラスミドをテンプレートとして、以下に示す欠損体作製用プライマーおよびKOD　-Plus-　Mutagenesis　Kit(TOYOBO社、Cat#　SMK-101)を用いて欠損体の発現ベクターを構築した。欠損させる箇所は、Uniprotの　No.Q12841を参考にして立体構造に重要なジスルフィド結合が多く含まれる箇所以外を選択し（図６６A参照）、21番目から53番目のアミノ酸欠損体（Δ21-53）、100番目から140番目のアミノ酸欠損体（Δ100-140）、148目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ148-170）、148番目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163番目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）、181番目から190番目のアミノ酸欠損体（Δ181-190）、193番目から228番目のアミノ酸欠損体（Δ193-228）および233番目から289番目のアミノ酸欠損体（Δ233-289）の発現ベクターを作製した。各種欠損体はExpi293TM　Expression　systemで一過性発現を行った
。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resinを用いて精製を行い、エピトープマッピン
グELISA用の抗原とした。
Δ21-53　(Forward　primer)
5’-TGCATCGAGCAGTGCAAGCCCCACA-3’（配列番号５７９）
Δ21-53(Reverse　primer)
5’-GGCGCGCACCCAAGCCACAGCCACC-3’　（配列番号５８０）

Δ100-140(Forward　primer)
5’-AAGGGCAGCAACTACAGCGAGATCC-3’　（配列番号５８１）
Δ100-140(Reverse　primer)
5’-TTTGCAGTGGCCGTCGTAGTCCACC-3’　（配列番号５８２）

Δ148-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号５８３）
Δ148-170(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号５８４）

Δ181-190(Forward　primer)
5’-AAGCTGCTGCGGGGCCTGTGCGTGG-3’　（配列番号５８５）
Δ181-190(Reverse　primer)
5’-GTTGATGGCTGTCTCGTTCTGTTCC-3’　（配列番号５８６）

Δ193-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG-3’　（配列番号５８７）
Δ193-228(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG-3’　（配列番号５８８）

Δ233-289(Forward　primer)
5’-CTGCAGAAGCACCAGGAAACCGCCG-3’　（配列番号５８９）
Δ233-289(Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG-3’　（配列番号５９０）

Δ148-154(Forward　primer)
5’-AACTTCGACAACGGCGACAGCAGACT-3’　（配列番号５９１）
Δ148-154(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号５９２）

Δ155-162(Forward　primer)
5’-CTGGACAGCAGCGAGTTCCTGAAGT-3’　（配列番号５９３）
Δ155-162(Reverse　primer)
5’-CTTGAAGTACTTGTCCAGGATCTCG-3’　（配列番号５９４）

Δ163-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号５９５）
Δ163-170(Reverse　primer)
5’-TCTGCTGTCGCCGTTGTCGAAGTTC-3’　（配列番号５９６）
Δ193-204(Forward　primer)
5’-AGCGACGAGAACGCCGACTGG -3’　（配列番号７１８）
Δ193-204(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG -3’　（配列番号７１９）

Δ205-216(Forward　primer)
5’-GAATTTCTGAAGTGCCTGAAC -3’　（配列番号７２０）
Δ205-216 (Reverse　primer)
5’-CAGCTCAATCAGGGCGTCCAC -3’　（配列番号７２１）

Δ217-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG -3’　（配列番号７２２）
Δ217-228 (Reverse　primer)
5’-CTGAAAGCTCAGCTTCCAGTC -3’　（配列番号７２３）

Δ233-251(Forward　primer)
5’-AGATGCGTGTGCGCCTGCGGC -3’　（配列番号７２４）
Δ233-251 (Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号７２５）

Δ252-270(Forward　primer)
5’-AATCAGAAGGGCGCCCAGACC -3’　（配列番号７２６）
Δ252-270 (Reverse　primer)
5’-GTTGCAGTCCACCTCTGTCTCG -3’　（配列番号７２７）

Δ271-289(Forward　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号７２８）
Δ271-289 (Reverse　primer)
5’-CTTGCCGTCGCAGGTCATGGCG -3’　（配列番号７２９）

Δ48-100(Forward　primer)
5’-AAGAAAAGCGTGTCCCCCAGC -3’　（配列番号７３０）
Δ48-100 (Reverse　primer)
5’-CTTCTCGGTCACGGCACATTC -3’　（配列番号７３１）


　＜エピトープマッピングELISA＞
上記で調整した抗原と以下の抗体を用いてエピトープマッピングELISAを行った。
使用した抗体；実施例1で得られた各種ニワトリ-マウスキメラ抗体、特許WO2009/028411の実施例で評価されているラット抗　FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)ネガティブコントロールとして抗DNP抗体およびラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061、clone　141945)
　（表４　エピトープマッピングELISA条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　図６６の上段でヒトFSTL1の模式図（Uniprot,　No.Q12841参考）と調製したそれぞれの欠損体の欠損部位を示す。エピトープマッピングELISAの結果、各抗体のエピトープ箇所は図６６下段で示すように、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#8-1、#8-2、#8-4、#8-7は233番目から289番目のアミノ酸配列に含まれる配列、#7、#10、#22は193番目から228番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定される。また、R&D社製のラット抗FSLT1抗体のエピトープは21番目から53番目のアミノ酸配列に含まれる配列と推定され、実施例１で得られた抗体各種とは異なるエピトープであることが分かった。また、#6-55、#7-34、#13は148番目から170番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定され、更にこれらのクローンは後述のin　vitro　評価によって有望な抗体クローンとして判断されたため、エピトープが含まれる148番目から170番目のアミノ酸配列についてエピトープ配列の絞り込みを行った。具体的には、148目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）を作製し、上記と同様にエピトープマッピングELISAを行った。結果、#6-55、#7-34、#13のエピトープ箇所は図６６下段で示すように148番目から162番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定された。
　＜エピトープのさらなる絞り込み＞
　１４８－１７０番目のアミノ酸配列（＃６－５５、＃７－３４、＃１３のエピトープ）、１９３－２２８番目のアミノ酸配列（＃７、＃１０、＃２２のエピトープ）および２３３－２８９番目のアミノ酸配列（＃５－２、＃５－３、＃５－８、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－８のエピトープ）について、更に欠損配列を細分化し、エピトープ配列の絞り込みを行った。＃３３のクローンについてエピトープの同定を行った。
　図６６下段には、これらの結果をまとめたものも反映されている。＃３３のエピトープは、４８～１００番目のアミノ酸配列に、＃７、＃１０のエピトープは、２０５～２２８番目のアミノ酸配列に、＃２２のエピトープは、１９３～２１６位のアミノ酸配列に、＃５－２、＃５－３、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－１０のエピトープは、２７２～２８９番目のアミノ酸配列にあるものと推定された。
　＜実施例４：間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　骨髄細胞をFSTL1で刺激すると、多分化能や自己増殖能を備えた間葉系幹細胞　(MSC)が増殖することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、C57BL/6マウスの大腿骨より採取した2x107個/wellの骨髄細胞を3mL/wellの2%ウシ胎児血清含有RPMI1640　(GIBCO社、Cat.　No.　C11875500BT)培地に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D　Systems社　Cat#　1694-FN-050)と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その11日後、細胞数を計数するとともに、MSCマーカーの発現を調べるためにPE標識抗ALCAM抗体　(eBiosciences社、Cat.　No.12-1661-82)およびPE標識抗PDGFRA抗体(eBiosciences社、Cat＃12-1401-81)を用いて染色して、ALCAM陽性細胞およびPDGFR陽性細胞の含有率をFACScan　(BD　社、Code.　BECTON-DICKINSON-FACSCAN)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の各陽性細胞の数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるALCAM陽性細胞およびPDGFRA陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。他と比べ、#5‐43、#6-55、#7‐34は若干阻害活性が強い傾向が見られた。
　＜実施例５：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　FSTL1で刺激活性化された腫瘍細胞は、骨転移を促す分子群を高発現し、転移浸潤能を亢進することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、ヒト膵癌細胞株Panc1を、それぞれ2x107個/wellずつ1　mL/wellの10%　ウシ胎児血清含有D-MEM培地(GIBCO社　Cat.　No.　C11885500BT)に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10　μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その3日後、細胞数を計数するとともに、骨転移性を示すマーカーの発現を調べるためにPE標識抗RANKL抗体(eBiosciences社　Cat.　No.12-6619)およびPE標識抗CCR2抗体　(R&D社　Cat.　No.　FAB151P)を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるRANKL陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。本実験結果から、RANKL陽性細胞の含有率と1培養中の細胞数とでは、細胞数がより評価に適切であることが判明したので、以下の実施例では細胞数を指標として判断を行った。
　＜実施例６：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、実施例４と同様の実験を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その11日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体(BD　Pharmingen社、Cat.　No.555484)を用いて染色して、一般的にMSCを高率に含むと報告されているCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図６７A）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8、#7-34、#5‐43がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。
　＜実施例７：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価をRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞で行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10μg/mLの抗FSTL1抗体（実施例６と同じクローン）または対照抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図６７B）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8がより高い阻害活性を示した。
　＜実施例８：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、濃度を変更して、実施例４、６と同様にFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図６８A）。結果、コントロール抗体と比較して、#5-8、#5‐43、#6‐55、#8‐1、#8‐4がFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例９：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、低濃度で、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-8、#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図６８B）。結果、最終濃度20ng/mLの濃度でも、コントロール抗体と比較して、#5-8と#6-55がRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例１０：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、新たに取得したクローンも含めFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μｇ/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-3、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、#5-2、#6‐55、#8‐4、#8‐7はRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して高い阻害活性を示した（図６８C）。
　＜実施例１１：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価(用量依存試験)＞
　本実施例では、低用量を含むよう用量を変動させてFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、抗体の用量依存性は認められなかったが、試験した#6-55は試験したすべての用量（５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ）でRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対してほぼ１００％の阻害活性を示した（図６８Ｄ）。
　＜実施例１２：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、さらなるクローンを含めてFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図６９）。結果、Control　と比較して、全てのクローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。特に、#7‐34、#5-2、#6‐55、#8‐7の順で高い阻害活性が認められた。
　＜実施例１３：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調製したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#6-55、#7-34、#8-1、#8-4）、免疫抑制解除の効果が報告されている抗PD-L1抗体またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、MSC（CD45陰性細胞）、癌転移に伴って増加するMSCである癌関連MSC（CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞）、癌関連MSCと共に増加する単球系骨髄由来免疫抑制性細胞（M-MDSC：CD11b陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞）を検出するため、PE-Cy5標識抗CD45抗体、PE標識抗ALCAM抗体、FITC標識抗CD271抗体　(Abcam社、Cat.　No.　AB62122)、FITC標識抗CD11b抗体(BD　Pharmingen社、Cat.No.553310)、PE-Cy5標識抗Gr1抗体（eBioscience社、Cat.　No.15-5931）を用いて染色し、上述の細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析して1培養中のMSC数および割合を算出した（図７０）。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して高い阻害活性を示した。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想していたが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強かった。
　＜実施例１４：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価および脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例１３と同様の試験方法によって抗体クローン（#6-55、#7、#10、#13、#22）について活性評価を行った。#6-55は活性のポジティブコントロールとして設置した。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して阻害活性を示し、中でも、#13はポジティブコントロールと同等以上の阻害活性を示した（図７１A）。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図７１Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、続いて抗FSLT１抗体クローンを示す。いずれの抗FSLT１抗体でも脂肪細胞は認められず、大元となるMSCへの分化誘導が阻害されていることが理解される。
　＜実施例１５：従来の抗体との比較＞
　本実施例では、特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems
社製の抗FSTL1抗体との活性比較を行った。
　特許文献１（WO2009/028411）において免疫抑制に重要な制御性T細胞の誘導阻害活性を示したR&D　Systems社製のラット抗FSTL1抗体(Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)と本発明の#6‐55のFSTL1阻害活性の比較を行った。
　実施例４と同様に調整した骨髄細胞マウス骨髄細胞に最終濃度20ng/mLのFSTL1におよび、最終濃度20.0、10.0、5.0、2.5　μg/mlでラット抗FSTL1抗体および#6‐55をマウス骨髄細胞に添加した。また、それぞれのコントロール抗体となるラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061　、clone　141945)および抗DNP抗体は最終濃度が20.0　μg/ml　でマウス骨髄細胞に添加して8日間培養し、実施例１３と同様にして、FSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対する各抗体の阻害活性を評価した（図７２A）。結果、ラット抗FSTL1抗体と#6‐55の抗体の阻害活性は同等レベルであった。一方、用量依存性は認められなかった。特許文献１（WO2009/028411）において示されている制御性T細胞の阻害はMSC誘導阻害を介した結果だったと推測される。
　＜実施例１６：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価（脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)免疫抑制を誘導する効果についての阻害活性評価として、脂肪細胞への分化能の評価を行った。
　実施例１５と同様に、マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1　培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した(図７２B)。結果、抗DNP抗体（マウスIgGコントロール群）と比較し、脂肪細胞に分化する細胞は#6-55の添加によって用量依存的に減少した。一方、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の添加した場合、脂肪細胞への分化に対して全く影響が認められず、いずれの用量でもラットIgG2bアイソタイプコントロール群と同様に多数の脂肪細胞が観察された。つまり、CD45陰性細胞集団全てがMSCというわけではなく、MSCを高率に含む細胞集団に過ぎないのだが、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体では、CD45陰性細胞数は減少するものの、
そこには脂肪細胞に分化するMSCがまだ多数残存していることを示している。
　＜実施例１７：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腫瘍内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた腫瘍内投与による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　＜方法および材料＞
　抗体3　種について、Snail　強制発現マウスメラノーマ細胞B16-F10　をC57BL/6N　マウスの皮下・静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。
１．実験群(n=5)
1.　　No　treatment
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
2.　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下移植5x105個＆静脈内移植1x105個）
Day　7　抗体の腫瘍内投与（200μg/0.1　mL/tumor）
Day　14　各種アッセイ（フローサイトメトリー解析を中心に）
　3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図７３Ｃ）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞）（図７３Ａ）
◆間葉系幹細胞の増加に対する効果（骨髄内と脾臓内のCD45陰性細胞）（図７３Ｂ、Ｄ）
◆免疫抑制性Treg細胞の増加に対する効果（骨髄や脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図７３Ｄ）
◆その他の免疫抑制性（図７３Ｄ）
　（説明）
　in　vivoにおける抗体活性評価を示すために、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。
　Snail陽性腫瘍細胞をマウスの皮下または静脈内へ移植すると、様々な臓器の他、骨髄に優位に転移し、これが骨髄を起点とした間葉系幹細胞　(MSC)の増加を招いて全身的に強く抗腫瘍免疫の誘導が抑制されてしまうことが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、GFP遺伝子とマウスSnail遺伝子を導入して強制発現させたGFP陽性Snail陽性　B16-F10腫瘍細胞を皮下に5x105個、尾静脈内に1x105移植し、その7日後に生理食塩水で1　mg/ml　に調製した抗FSTL1抗体　(＃6-55,＃7-34,＃8-1)またはそのアイソタイプであるマウスIgG　(抗DNP抗体)をコントロール抗体として10mg/kgで腫瘍内に接種した　(5匹／群)。まずは、アッセイまでの間、皮下腫瘍径を測定して腫瘍体積を算出し、皮下腫瘍増殖に対する阻害効果を評価した（図７３C（各個体の推移を示す。））。抗体投与から7日後　(腫瘍移植14日後)は、マウスから骨髄細胞や脾臓細胞を採取して1匹当たりの細胞数を計数するとともに、FACScan(BD社)を用いたフローサイトメトリー解析により、さらに詳細に薬効を比較解析した。すなわち、a)骨髄細胞中のGFP陽性Snail陽性　B16-F10腫瘍細胞含有率を解析して、骨転移に対する阻害効果を評価し（図７３A）、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数し（図７３B）、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果を示するものである。b)脾臓内のCD45陰性細胞含有率を解析して(PE-Cy5標識抗CD45抗体,BD社)、MSC増加に対する阻害効果を評価し（図７３D左）、c)MSCが誘導するとされている免疫抑制性CD4陽性Foxp3陽性細胞(PE標識抗CD4抗体,BD社;FITC標識抗Foxp3抗体,eBiosciences社)　（図７３D中）や、疲弊して機能不全に陥ったCD8陽性Tim3陽性T細胞(CyChrome標識抗CD8抗体,　BD社;　FITC標識抗Tim3抗体,　R&D社)の含有率（図７３D右）を骨髄や脾臓において解析して、免疫抑制解除効果を評価した。
　（結果）
　結果を図７３に示す。Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いた、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。なお、被験対象である抗FSTL1抗体の投与法として、腫瘍内投与を行った。3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。図７３Dでは脾臓内の細胞集団の変化を示すが、腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身的に修飾／影響を受けることが示されている。図７３D左では、　CD45陰性細胞数が示され、脾臓内でもMSCが減少することが示されており、図７３D中央では、CD4陽性Foxp3陽性T細胞数が減少することが示されており、Treg（制御性T細胞）が減少していることが示されている。また、図７３D右では、CD8陽性Tim3陽性T細胞数が示され、疲弊CD8陽性T細胞が減少することが実証されている。ここで、「疲弊」とは、機能が低下あるいは不全に陥っている状態を示し、Tim3はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきCD8陽性T細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。したがって、本発明の効果は、このような免疫抑制の増強を抑制するという点でも顕著な効果を奏しているといえる。
　＜実施例１８：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腹腔内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた全身投与（腹腔内投与）による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．実験群(n=5)
1.No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
　2.実験手順
Day　0:　GFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　5:　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　10:　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
＊腹腔内投与と静脈内投与は、全身投与術として薬理的に同義で用いられる。
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図７４B）
◆骨転移に対する効果（骨髄や脾臓内のGFP陽性腫瘍細胞）（図７４A、C）
◆MSC増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45陰性細胞）（図７４A、C）
◆体重喪失に対する効果（図７４A）
◆免疫抑制性Treg細胞の増加に対する効果（脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図７４C）
◆その他の免疫抑制性（図７４C）
　（説明）
　実施例１７では、本発明者らがこれまで行ってきた「原発から骨への転移を阻害する」という目的に準じて抗体は腫瘍内へ投与したが、本実施例では、実施例１７の条件を変更して、抗体薬が一般的に全身投与されていることを考慮し、マウス実験で一般的に行われている腹腔内投与を採用した。抗体投与法以外は、上記実施例１７と全て同様に行った。具体的には、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗FSTL1抗体を腹腔内投与し（全身投与）、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。
　また、アッセイも腫瘍移植14日後に行った。抗体は、腫瘍移植5日後と10日後に2回、10mg/kgずつをマウス腹腔内に投与した。
　（結果）
　結果を図７４に示す。なお、今回の被験対象である抗FSTL1抗体の投与法は、腹腔内投与にて行った。in　vivo評価は実施例１７と同様に、3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した（図７４Ｂ）。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果（図７４Ａ右）が認められた。これらの機能解析結果を考察すると、従来免疫抑制で注目されてきたTregを減少・除去したとしても癌治療上は十分な治療とは言えず、やはり免疫抑制カスケード全体の制圧を考えるべきであり、その最上流に位置するMSCを標的とすることがより有効であることが期待される。また、MSCを減らす（図７４Ａ左）と同時に、癌転移をも阻害する（図７４Ａ中央）ことがさらに効果的であることも再確認でき、FSTL1を標的とした阻害治療が癌治療上有効である可能性が期待される。図７４Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図７４Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。下右は　CD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　＜実施例１９：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～既存薬との比較＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較を行った。
　（説明）
　実験の手順や方法は実施例１７および１８とほぼ同様であり、アッセイは腫瘍移植15日後に行った。
　既存薬として下記抗体を腫瘍移植4日後と8日後に2回、10mg/kg（200μg/mouse）ずつをマウス腹腔内に投与した。
　本実施例では、抗FSTL1抗体の作用機序の一つである「免疫抑制解除」の目的で既に臨床で使用されている抗体薬と、Snail陽性腫瘍骨転移モデルを用いて治療効果を比較検討した。抗体は、抗体薬を用いた一般的な動物試験に準じて、前回同様に全身的に２回投与した。
　1　実験群(n=5)
１　No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
２　Control　IgG　(anti-DNP)
３　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55)
４　Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
５　Anti-PD-1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)
６　Anti-PD-L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
７　Naive　(no　tumors,　no　treatment)　
　2　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　8　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種アッセイ
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植８、１１、１４日後に測定した。（図７５A）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞量）（図７５B）
◆骨髄におけるMSC増加に対する効果（図７５B）
◆体重減少に対する効果（図７５B）
　（結果）
　結果を図７５に示す。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全てコントロール抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　＜実施例２０：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～大腸癌モデル＞
　本実施例では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　骨転移を評価しないこと以外、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～１９の骨転移モデル実験とほぼ同じ条件で行った。すなわち、Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。腫瘍移植量、抗体投与のタイミング、アッセイのタイミングのみ変更して行った。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖（図７６Ａ）、肺転移（図７６Ｂ））
　肺転移は、肺における腫瘍結節数を肉眼的に計数した。マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図７６に示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6　とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。また、肺転移結節数に関する結果は図７６Ｂに示される。左から、処置なし、中央はアイソタイプコントロール（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)は、CT26皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強い抑制し、5　匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(コントロール抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　＜実施例２１：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～乳癌モデル＞
　本実施例では、マウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　実施例１７～２０に準じて行い、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～２０の骨転移モデル実験とほぼ同じように行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。変更点は、以下のとおりである。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図７７に示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　＜実施例２２：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6　マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail　強制発現細胞株の親株である。
　１．実験群(n=5)
1.マウスメラノーマB16-F10+Control　IgG　(anti-DNP　mAb)
2.マウスメラノーマB16-F10+Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106個＆静脈内1x106個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。（図７８A）
◆体重減少に対する効果（図７８B）。
　（結果）
　結果を図７８に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、抗FSTL1抗体投与群では、体重減少についても抑制活性を示し（図７８Ａ）、著しい痩せや毛羽立ちなどは全く観察されず（図７８Ｂ）、全例元気だった。本モデルでは通常、移植20-30　日後に肺転移が観察されるが、今回はこれまでのタイミングに合わせて約２週間後に評価したため、肺転移結節は肉眼的に観察されなかった。
　＜実施例２３：in　vivoにおける抗体活性評価～リンパ腫＞
　本実施例では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、FSTL1　発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．　実験群(n=5)
1.マウスリンパ腫EL4+Control　IgG(anti-DNPmAb)
２.マウスリンパ腫EL4+Anti-FSTL1　mAb(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106個＆静脈内1x106個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植３、６、１０日後に測定した
　（結果）
　結果を図７９に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比し有意に抑制した。乳癌と並んでFSTL1　高発現癌種の一つであるリンパ腫において有効性を提示できたことは、臨床試験展開上、大変有用なデータであるといえる。
　＜実施例２４：in　vivoにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０、皮下移植＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、実施例２２と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効の評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。
　1.　実験群　(n=5)
1.　Control　IgG　(anti-DNP),10mg/kg
2.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),1mg/kg
3.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),3mg/kg
4.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),10mg/kg
　2.　実験手順
Day　0　マウスメラノーマB16-F10細胞の皮下移植（1x106個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1
Day　8　抗体の腹腔内投与-2
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆　皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図８０に示す。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　＜実施例２５：ヒト末梢血細胞を用いた抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性＞
　本実施例では、ヒト末梢血細胞を用いて抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性を評価した。
　FSTL1(5ng/ml)を用いてヒト末梢血細胞(1x106　cells)を刺激し、そこに抗体(5μg/mL)を添加して3日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をフローサイトメトリーで解析した。フローサイトメトリーの条件は以下のとおりである。
　健常人から１／１０量の４％クエン酸ナトリウムを加えて採血後、フィコール（比重1.090）に重層して遠心分離（１５００rpm、２０分、室温）し、中間層に存在する細胞分画を「PBMC」として使用した。このPBMC(1x106個)を24穴プレートにおいてFSTL1(5ng/ml)で３日間刺激培養する系に抗体(5μg/mL)を添加した。その培養系から回収したPBMCについて、抗CD4抗体(BD PharMingen社)、抗CD25抗体(BD PharMingen社)、抗FoxP3抗体(eBioscience社)を用いて、４℃で１時間インキュベート後、フローサイトメーターFACScan（Becton,Dickinson and Company社）を使用して、そこに含まれるCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をTreg細胞として解析した。
　図８１にこれらのデータ、結果をまとめた表を提示する◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。その結果、TGFb などと同様に、FSTL1刺激によってもTreg は顕著に増加し、それが本発明の抗体＃6-55 添加によって有意に抑制されることが分かった（Exp.1とExp.2、3 との違いは、末梢血ドナーの違いによる）。他方既知抗体であるR&D抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)はほとんど阻害せず、ここでもまた本発明の抗体＃6-55の優位性が確認された。以上の結果から、FSTL1 が引き起こすTreg 誘導に関しては、本発明の抗体＃6-55 は顕著に阻害できることが示された。
　＜実施例２６：様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響等＞
　本実施例では、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響、FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用およびSnail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を調べた。
　具体的には、Snail やFSTL1 の発現有無に関わらず様々なヒト腫瘍細胞を用いて、その増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響を検討した。すなわち、膵癌細胞株Panc1（ATCC社#CRL-1469）、そのSnail強制発現細胞株であるPanc1-snail+、膵癌細胞株MIAPaCa（ATCC社 #CRL-1420）、骨転移性乳癌細胞株MDA231（ATCC社#HTB-26）、メラノーマ細胞株Hs294T（ATCC社 #HTB-140） をそれぞれ1x105個培養する系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema:マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体,5μg/ml)を添加して3 日間培養後、一培養系における細胞数を計数して細胞増殖能を評価した。更に、計数した後の細胞(5x104個)をMatrigel コートtranswell chamber (Corning社 #354480)に播種し、4 時間培養後に膜を外してクリスタルバイオレット固定液で染色固定した後、膜を透過した細胞数を顕微鏡下でカウントして細胞浸潤能を評価した。その結果、特にSnailを高発現する高転移性の腫瘍細胞株で増殖能、浸潤能ともに強く抑制された。このことから、抗FSTL1 抗体は、EMT を呈してFSTL1 を高発現している腫瘍細胞に特に作用することが示された（図８２Ａ）。
　（FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用）
　次に、Snail/FSTL1 発現細胞が産生するFSTL1 を受けた周囲の腫瘍細胞が癌微小環境においてどのように変化し、かつ、抗FSTL1 抗体がどう作用するかを調べるため、SnailやFSTL1をわずかにしか発現しないことが分かっているヒト膵癌細胞株Panc1 をFSTL1で3 日間刺激し、この培養系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)を加えて、その後の細胞機能の変化を前項と同様の方法で解析した。その結果、以前論文（Cancer Res; 73(20); 6185-93.2013）でも報告しているように、FSTL1は腫瘍増殖にはあまり影響／寄与しないが、FSTL1 とともに抗FSTL1 抗体を添加することによって、細胞増殖は低下した。また、FSTL1は浸潤能を増強することも同様に報告しているが、その作用を打ち消すことが明らかとなった（図８２Ｂ）。
　（Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用）
　前項のFSTL1 刺激腫瘍細胞の代わりにSnail 強制発現細胞株Panc1-snail+を用いて、chamber 内に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)が存在下での細胞浸潤を評価した。その結果は前項の結果と酷似しており6-55については抑制活性が確認できた（図８２Ｃ)）。
　また、本実施例では、Panc1-snail+細胞を上記抗体添加下で3 日間培養した後で、骨転移マーカーとして知られる分子の中からCCR2 とRANKL の発現をフローサイトメトリーで解析した。その結果、CCR2とRANKL ともに抗FSTL1 抗体によっても強く抑制され、抗FSTL1 抗体は細胞浸潤に対して阻害活性を有していると推測される（図８２Ｄ）。
　＜実施例２７：マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験＞
　本実施例では抗FSTL1 抗体の阻害活性を間葉系幹細胞誘導実験系で確認するとともに、FSTL1 だけではなく、Snail+腫瘍細胞によって誘導されるMSC増加に対するFSTL1 阻害効果も併せて評価した。具体的な操作としては、C57/BL/6 マウス由来骨髄細胞をFSTL1(20ng/mL)または腫瘍細胞の培養上清で刺激する状況下に各抗体(10μg/mL)を添加し、8日間刺激培養後、MSC を高率に含む細胞分画CD45(-)細胞(MSC)と、癌転移に伴って増加するCD45(-)CD146(+)ALCAM(+)細胞(sMSC)を実施例１４と同様にしてフローサイトメトリーで解析し、一培養系当たりの細胞数を計数した。本実施例では、コントロール抗体としてBioLegend 社製のマウスイムノグロブリン(#401408, Cone MG1-45)を使用した。
　結果を図８３に示す。図８３Ａに示すように、本実施例のMSC 誘導阻害試験では、#7,#10,#13,#33 がフローサイトメトリー解析で#6-55 と同等あるいはそれ以上の強い阻害効果を示した。その結果、#7,#10,#33が#6-55 と同等あるいはそれ以上の高いMSC 誘導阻害活性を示し、この３クローンについては再現性が確認できた。
　（腫瘍細胞が誘導するMSC 増加に及ぼす影響）
　本実施例では、骨髄細胞を用いたMSC誘導系において、Snail+腫瘍細胞の培養上清が誘導するMSC 増加を抗FSTL1 抗体で阻害できるか否かを評価した。C57/BL/6 マウス由来骨
髄細胞にSnail+腫瘍細胞の培養上清と各抗体(10μg/mL)を添加して8日間刺激培養後、以下の2種の細胞群についてフローサイトメトリーで解析した。
1)MSCを高率に含む一般的な細胞分画『CD45(-)細胞』
2)癌転移に伴って増加する『CD45(-)ALCAM(+)CD271(+)細胞(＝sMSC)』
また、sphere コロニーの形成を、50個以上の細胞数でコロニーを形成しているlargeとそれ以下で形成されているsmallとに区別し、培養8日目に顕微鏡下で観察した。その結果、図８３Ｂ～Ｄに示すように、MSC/sMSCの誘導は顕著に阻害され、幹細胞性を代表する自己複製能を示すsphere コロニーの形成も強く抑制された。つまり、FSTL1 抗体は、癌転移下で増幅されるMSC誘導を阻害することで、in　vivo において抗腫瘍効果を発揮している可能性が示唆された。
　＜実施例２８：マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、Treg 誘導に対する阻害活性をマウスの系で評価した。
　（材料および方法）
　本実施例では実施例１７に準じて実験を行った。具体的には、C57/BL/6 マウス由来の脾臓細胞(2x106)を5ng/ml のFSTL1 で刺激する系に、各抗体を5μg/mL 添加して3 日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画の割合(%)をフローサイトメトリーで解析して、これまで検討してきた#6-55と活性を比較した。
　(結果)
　その結果、図８４に示されるように、新規3 クローンともに対照抗体と比べてTreg 誘導を抑制し、特に、#7 と#10 では#6-55 以上に強い抑制活性を示した。他の実施例でもヒト末梢血細胞を用いたヒト評価系では抗FSTL1抗体のTreg誘導阻害活性をきちんと確認できていたが、本マウス評価系では本実施例でより明確にインパクトある阻害活性を観察したことになる。#7 と#10 はともにFSTL1 の205-228a.a.を認識するクローンであることから、#6-55が認識する148-162a.a.に次いで205-228a.a.もまたFSTL1 活性において重要な領域であることも示された。
　＜実施例２９：新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性を評価した。
　（材料および方法）
　マウスSnail 強制発現メラノーマ細胞株F10-snail+に5μg/ml の抗FSTL1 抗体または対照抗体(抗DNP 抗体)を添加して3日間培養し、各種アッセイで腫瘍細胞の性状変化を解析した。細胞接着能は、Fibronectinコートプレートを用いて2 時間培養後、プレートに接着している細胞数をカウントして評価した。細胞浸潤能は、Matrigel コートtranswell　chamberを用いて4 時間培養後、membrane を透過した細胞数をカウントして評価した。骨転移関連分子発現について、代表的な分子マーカーであるCCR2 とRANKLの発現をフローサイトメトリーで解析した。
　（結果）
　図８５に示されるように、いずれの新規クローン抗体も対照抗体と比べて有意にCCR2 やRANKL の発現や細胞浸潤能を低下させ、細胞接着は増強した。つまり、上皮系の細胞に変化したことを意味する。各活性ともにほぼ#6-55と同等であり、大きな差は見られなかった。
　＜実施例３０：Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのinvivo 薬効比較＞
　抗CTLA4 抗体などの免疫解除薬を腫瘍内に投与することで、癌細胞に有利に作用する腫瘍内の免疫抑制環境を直接改善でき、抗腫瘍免疫を効果的に増強できると注目されている(Clin Cancer Res20:1747,2014)。そこで、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1抗体とのin vivo 薬効を比較した。
　（材料および方法）
1.実験プロトコール
1-1.実験群(n=5)
1.Notreatment(0.9%NaCl as a sham)
2.Control　mouse　IgG　(マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体、aHemaとも記載する)
3.Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
4.　Anti-PD1　mAb　(Clone　9F.1A12,　BioLegend)
5.　Anti-PDL1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
6.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
7.　Naive　(no　tumors,　no　treatment)
1-2.　実験手順
Day　0:　GFP+Snail+B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下3x105＆静脈内2x104）
Day　5:　抗体の腫瘍内投与（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種アッセイ
1-3.薬効評価の指標
　以下を薬効評価の指標として用いた。
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP+腫瘍細胞量）
◆骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果
◆免疫系に及ぼす影響
　（手順）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植５、７、１０、１４日後に測定した。皮下腫瘍の増殖、骨転移および骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果の評価方法は実施例１７と同様に行った。免疫系に及ぼす影響を評価するため、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群であるCD4+T 細胞（CD45+CD3+CD4+;FITC標識抗CD3抗体, PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、腫瘍特異的CD8+T 細胞（CD45+CD8+Tetramer+；BD社製FITC標識抗CD8抗体,MBL社製PE標識Tetramer, Cy5標識抗CD45抗体）、活性化NK 細胞（CD45+NK1.1+NKG2D+；FITC標識抗NK1.1抗体,PE標識抗NKG2D抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、免疫抑制性T 細胞（CD45+CD4+FOXP3+Tregs；eBiosciencess社製FITC標識抗Foxp3抗体,PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体）、MDSCs(CD45+CD11b+Gr1+MDSCs；FITC標識抗CD11b抗体,PE標識抗Gr1抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社)の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。また、皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞（Snail+CD44+tumors；eBiosciencess社製PE標識抗Snail抗体,BD社製Cy5標識抗CD44抗体）の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。
　（結果）
　皮下腫瘍の増殖は、対照抗体投与群に比し、全治療群において有意に抑制され、各治療群間に有意差は認められなかった(図８６－1)。しかし、骨転移や骨髄と脾臓内でのMSC 誘導が、FSTL1 抗体によって有意に抑制されたのに対し、CTLA4 抗体とPDL1抗体では逆に骨転移は増強され、PDL1 抗体では骨髄内のMSC 誘導も阻害されなかった(図８６－1)。骨髄細胞を培養した結果、そこに存在する腫瘍細胞の性状は両群で異なっており、CTLA4抗体投与群では多数のsphere　colony を形成したが、PDL1 抗体投与群では強接着性を示した。
　一方、抗体を投与した皮下腫瘍内に浸潤した免疫細胞群(TIL)を解析したところ、いずれの治療群でもCD4+T 細胞、腫瘍特異的CD8+T 細胞、活性化NK 細胞がともに多数浸潤していた(図８６－２)。特に、CTLA4抗体の腫瘍内投与では、これらの抗腫瘍エフェクター細胞群が極めて顕著に増加することが分かった。興味深いのは、これまで注目されておらず、解析してこなかった活性化NK細胞が、このCTLA4 抗体群と同様にFSTL1 抗体群においても腫瘍特異的CD8+T 細胞以上に多数浸潤していたことである(図８６－２)。NK 細胞は、MSCと同様に自然免疫系の主要なエフェクター細胞であり、MSC による抑制作用を最も受け易い細胞としても報告されている。したがって、おそらくはFSTL1 抗体投与によってMSCが激減したことから、NK 細胞の数や機能が大幅に改善・増強されたと推測される。
　前述のように、抗腫瘍エフェクター細胞群は、いずれの治療群においても増加していたが、免疫抑制性の細胞群を見てみると、既存抗体薬投与群の腫瘍内にはTreg やMDSC が逆に増加しており、特にMDSCの増加については、CTLA4 抗体投与群とPDL1 抗体投与群で顕著に見られた(図８６－3)。また、CTLA4抗体では、脾臓内のTreg 増加も抑制できず、さらには、CD8+Treg が増加していた(図８６－4)。これはおそらく、投与後日数が経過した後のリバウンド効果か、CD4+Tregが減少した部分を他の免疫抑制性細胞群が補おうとするフィードバック現象なのかも知れない。また、腫瘍内環境では、例えば、浸潤した免疫細胞が放出するサイトカインなどによって腫瘍細胞が刺激され、EMT などが誘導されてしまう可能性も考えられるので腫瘍細胞側の変化も確認した。まずは、主要なEMT マーカーであるSnail/CD44発現を解析してみた。その結果、移植に用いた腫瘍細胞はもともとSnail+CD44+ではあるが、皮下腫瘍から分離した腫瘍細胞ではそれらの発現強度がさらに増強されているsubpopulation分画が見られ、治療によって逆にEMT が促進されていることが分かった(図８６－3)。このdenovo　EMT は、MDSC が増加して骨転移も悪化したCTLA4抗体投与群とPDL1 抗体投与群で、特に顕著に見られた。以上の結果から、CTLA4 抗体とPDL1 抗体は、確かに抗腫瘍免疫を増強するメンバーを腫瘍内に動員して腫瘍増殖を抑制できるものの、免疫抑制性細胞群の増加や腫瘍細胞側におけるde　novoEMTなどは抑制できないため、全身性の抗腫瘍免疫までは改善されず、その結果、骨転移は十分に阻害できなかったと推測される。一方、PD1 抗体については、データとしては大きな弱点は見られないが、特に骨転移量やsMSC量については、骨髄細胞数が極めて激減していたことに起因すると考えられる。つまり、PD1 抗体投与群の骨髄細胞を培養すると、CTLA4 抗体投与群と同様に多数の腫瘍細胞がコロニーを形成した。おそらく、実際には骨転移は逆に悪化しており、骨環境内に腫瘍細胞が多量に集積あるいは過剰に増殖したことで、骨髄細胞の増殖は抑制されて細胞数が激減したと推測される。なお、CTLA4 抗体は、全身投与時と比べて今回の腫瘍内投与では、抗腫瘍エフェクター細胞を腫瘍内に効果的に動員することが分かった。一方、FSTL1抗体は、悪い部分を抑制する効果は高いものの、抗腫瘍エフェクター細胞の動員効果はそれほど高くはない。
　＜実施例３１：マウス肺癌モデル＞
　本実施例では、肺癌治療薬として抗FSTL1 抗体を開発することを見据えて、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
1.Isotyoe　mouse　IgG　(aHema)
2.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
3.　正常マウス
1-2.　実験手順
Day　0:　マウス肺癌3LL細胞の移植（皮下1x106 cells＆静脈内5x105 cells）
Day　3:　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　7:　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
1-3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆マウス衰弱に対する改善効果（マウス体重の測定）
◆MSC 増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45-細胞）
◆免疫反応に及ぼす影響など
　(手順)
　皮下腫瘍増殖の測定は移植後3,5,7,10,14日目に測定を行った。体重の測定、MSC増加に対する効果、免疫反応に及ぼす影響は14日目に上記実施例と同様に測定を実施した。
　（結果）
　図８７に示すように、対照抗体投与群と比較して、抗FSTL1 抗体投与によって皮下腫瘍増殖は強く抑制され、5 匹中2 匹のマウスで腫瘍は消失した。本モデルでは、いずれの臓器にも腫瘍の転移は肉眼的に観察されない。腫瘍移植14日後、腫瘍移植後早期にも関わらず、これまで用いてきた骨転移モデルと同様に歩行もできないほど著しく衰弱した。しかし、抗FSTL1 抗体投与群では、体重減少や痩せ、毛羽立ちなどは一切観察されず、全マウスが元気であった。
　他方、腫瘍内浸潤細胞や骨髄細胞、脾臓細胞について、MSC をはじめ、Treg やMDSC など様々な免疫細胞を解析した。しかし、唯一大きな変化が見られたのは骨転移モデルで注目している癌転移関連sMSCであるCD45-ALCAM+細胞であった。本モデルでは骨転移を生じないことを確認しているが、なぜか骨髄内にのみsMSCが増加し、それが抗FSTL1 抗体投与によって減少した。3LL 細胞はSnail を高発現していることも判明し、これがsMSC 増加を招いたと推測される。
　以上の結果から、3LL などのように「Snail」や「sMSC」などを共通項とする癌種では、FSTL1 阻害治療が有効であることが改めて提示され、肺癌は臨床治療でもFSTL1抗体投与の対象癌種になり得ると期待される。
　＜実施例３２：抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価＞
　本実施例では、in vitro 薬効スクリーニングで有効性を確認した新規クローン抗体4 
種(#7,#10,#13,#33)について、これまで用いてきた#6-55を陽性対照として用いてin　vivo治療効果を比較評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
ControlIgG (anti-DNP mAb)
#6-55
#7
#10
#13
#33
1-2.　実験手順
Day　0:GFP+F10-snail+腫瘍細胞の移植（皮下3x105cells＆静脈内2x104 cells）
Day　4:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-1
Day　7:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-2
1-3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖の抑制
◆マウス生存期間の延長
　（手順）
　皮下腫瘍の測定は腫瘍細胞移植4, 7, 10, 14, 17, 20, 23日後に実施した。
　（結果）
　図８８に示すように、皮下腫瘍増殖は、#13 を除く全てのクローンが#6-55 と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な抑制活性を示し、#6-55 との間に有意差は見られなかった。一方、図８９に示すように、マウス生存期間については、いずれのクローンも#6-55と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な延命効果を示し、特に、#10 と#33 は#6-55 以上の高い治療効果を示した。なお、#6-55ではｎ＝１０で行った試験でも統計学的有意が12日目においてｐ＜０．００１のレベルで示されている。以下に、P 値を基にまとめた各クローン活性順位を示す。
皮下腫瘍増殖抑制効果：
#7＝#10＞#6-55＞＞#33＞＞#13
マウス延命効果：
#33＝#10＞#6-55＞#13＞#7
以上の結果を総合的に評価すると、『#10』が#6-55 を上回る高い抗腫瘍活性を有している可能性が示された。
　データは示さないが、FSTL1 阻害による抗腫瘍免疫反応には、CD4+細胞、CD8+細胞、NK細胞と幅広い免疫細胞が関与しているが、特に、細胞障害活性を示すCD8+細胞とNK細胞は必須の役割を果たしていることも確認している。一般的な免疫療法では、抗腫瘍エフェクター細胞は主にCD8+T 細胞であり、NK は担癌初期にのみ関与する重要性の低い細胞群であることが多く、Tregなどを含むCD4+T 細胞はむしろ除去した方が治療効果はさらに増強されることなどが示されている。一方、本発明のFSTL1 阻害治療では、CD8+細胞に限らず様々な免疫細胞を動員して抗腫瘍効果を発揮するようである。これは、FSTL1ならびにFSTL1 が作用して増幅するMSC は、癌関連異常免疫機構の最上流キー因子であり、FSTL1阻害によって、MSCをはじめ、その下流で負に制御される様々な免疫反応を一斉に抗腫瘍方向へ転じさせた結果と考えられる。つまり、開発当初からのコンセプトを再確認でき、本発明の抗FSTL1抗体は、従来の免疫修飾薬とは作用機序が大きく異なり、宿主免疫全体を根底から改善して適切に賦活化できる新たな癌治療薬となり得ると期待される。
　すなわち、FSTL1阻害により、MSC分化誘導阻害が起こり、免疫抑制性細胞群（MDSC,Treg）阻害が起こることで、抗腫瘍免疫細胞群の活性化が起こると予想される。本実施例において、最後の段階まで達成し得ることが確認され、ＦＳＴＬ１を抑制することで一般に、抗体で示される効果と同様の効果が抑制剤によって達成されることが期待される。
　＜実施例３３：マウスキメラの特徴づけ＞
　本実施例では、製造したマウスキメラ抗体のヒトFSTL１抗原に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)に Mouse Antibody CaptureKit（GE Healthcare、 BR-1008-38）を用いてマウスキメラ抗体を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacore T-200(GE Healthcare) によって算出した。
　（結果）
　まず、ヒトFSTL1濃度を10 μg/mlに固定し、取得抗体の網羅的な活性比較を行った（表３３－１、図９０）。 
　図９０の縦軸は抗体に対する抗原の結合量、横軸は抗体に対する抗原の解離量を示す。抗原の結合量が高く、解離量が低いほど親和性が示唆される（図の左上に位置するほど親和性が高い）。次に、図９０の中で親和性の高いと想定されるクローン#6-55、#7-34および#13について、抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD値を算出した(表３５－２)。結果、表面プラズモン共鳴を用いた測定系でも、クローン#6-55、#7-34および#13を含め、＃７、＃１０、＃３３等が強い親和性を有することが示された。
　（表３３－１）マウスキメラ抗体に対する抗原の結合量および解離量
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
　（表３３－２）マウスキメラ抗体のＫＤ値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
　＜実施例３４：ヒト化抗体の開発および親和性測定＞
　＜ヒト化抗体の親和性：Biacore T-200 による測定＞ 
　本実施例では、ヒト化抗体を開発し、開発した抗体のヒトFSTL1に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)にHuman Antibody Capture Kit（GEHealthcare、 BR-1008-38）を用いて、9種のIgG1型ヒト化#6-55を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacoreT-200 (GE Healthcare) によって算出した。抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD 値を算出した(表３４－１)。9種のIgG1型ヒト化#6-55の中で、KD 値が高かった「H（２）‐L（１）」の組み合わせのクローンをリード抗体に選んだ。
（表３４－１）表．ヒト化6-55抗体（IgG1型）のH鎖とL鎖の組み合わせによる親和性（KD値）比較
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
　＜ヒト化抗体の作製＞
　松田らのMolecular Immunology 43(2006)634-642 の報告に基づき、クローン#6-55のH鎖およびL鎖の可変領域にあるフレーム領域をニワトリ配列からヒト配列に置換した遺伝子を設計し、遺伝子合成を行った。1クローンにつき、H鎖およびL鎖を3種類ずつ設計して合成した（ヒト化H鎖（１）、（２）、（３）、ヒト化L鎖（１）、（２）、（３）；なお、Ｈ鎖（１）はＨ（１）やＨ１等と記載されることもあるがいずれも同じクローンを指すことが理解される。Ｈ鎖（２）、Ｈ鎖（３）、Ｌ鎖（１）、（２）、（３）も同様である。）。Ｈ（１）重鎖の全長配列は、IgG1型が配列番号６９４および６９５（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号７００および７０１（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号６９６および６９７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号７０２および７０３（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号６９８および６９９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号７０４および２０３（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号７０６および７０７（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号７４８および７４９（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号７５０および７５１（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。合成した可変領域の遺伝子をPCRによって増幅した後、制限酵素処理を行い、ニワトリ抗体のリーダー配列およびヒトIgG1の定常領域が組込まれたL鎖またはH鎖発現カセットベクター（制限酵素処理されたベクター）に導入した。構築した各クローンのH鎖（１）～（３）およびL鎖（１）～（３）の発現ベクターの合計9種類の組み合わせをHEK293細胞に導入し、培養上清からProtein A Sepharose を用いてヒト化抗体の精製を行った。精製したIgG1型ヒト化抗体のヒトFSTL1に対する結合活性を確認するためにELISAを行った結果、いずれのクローンも一定程度の結合活性が確認できた(図９１)。このうち、Ｈ（２）－Ｌ（１）のヒト化クローンが、他のクローンに比べて、１桁高い数値を示した（表３４－１参照）ことから、次の実験は、このクローンについて行った。
　＜ヒト化抗体の結合活性：ELISA＞ 
　IｇG1型ヒト化#6-55H鎖（２）＋L鎖（１）の精製抗体のヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって確かめた(図９２）。図９２の結果から、本発明の抗体は、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性は同様であり、ヒトFSTL1に対する活性が保有されていることが確認できた。
　＜実施例３５：マウス大腸癌Colon26 肺転移モデルを用いた効果検討＞
　これまでは、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体とFSTL1 抗体のin　vivo薬効は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて比較してきた。今回は、その薬効と汎用性を確認することを目的に、別の腫瘍モデル、すなわち、マウス大腸癌Colon26肺転移モデルを用いて同様の検討を行った。
　（実験スケジュール）
Day0:Colon26 腫瘍細胞の移植（皮下5x105 cells/ml＆静脈内5x105cells/ml）
Day5:抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg 相当）
Day8:抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg 相当）
実験.　既存免疫抑制解除抗体薬との薬効比較
1.　実験群　(n=5)
Control　mouse　IgG　(aDNP)
2.　Control　rat　IgG　(R&D)
3.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
4.　Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
5.　Anti-PD1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)
6.　Anti-PD－L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
　（2.結果＆考察）
皮下腫瘍の増殖は、対照抗体投与群に比し、全治療群において有意に抑制され、各治療群間に有意差は認められなかった(図９３)。しかし、骨転移モデルの場合とは異なり、PD－L1抗体投与群では、全マウスで長期間に渡って腫瘍増殖は強く抑制され、CTLA4 抗体の効果もそれに準じて強く見られ、FSTL1抗体の優位性は認められなかった。一方、マウス生存期間では、これら3 群間に有意差は認められず、対照抗体投与群と比較して有意な延長効果が見られた。おそらく、肺転移に関しては同等の抑制効果を示したためと推察される。PD1抗体については、骨転移モデルの場合と同様で、皮下腫瘍の増殖は有意に抑制されたものの、マウス生存期間は対照抗体投与群と大差なく、わずかにしか延長されなかった。おそらく肺転移を抑制できなかったためと推察される。以上の結果から、Colon26肺転移モデルにおいては、FSTL1 抗体の優位性は見られないが、少なくともPD－L1 抗体やCTLA4 抗体と同等の活性を有することが分かった。
（結果＆考察）
本腫瘍モデルでは、実験1 で示したように、CTLA4 抗体も高い抗腫瘍活性を示した。
　＜実施例３６：CT26 移植モデルを用いた抗CTLA4 抗体との併用効果検討＞
　実施例３５（In　vivo report-11）では、Colon26 移植肺転移モデルを用いて、抗FSTL1 抗体の優位性は見られないものの、抗CTLA4抗体や抗PD－L1 抗体と同等の抗腫瘍活性が見られることを報告した。このとき同時に、骨転移モデルの場合とは異なり、Colon26 移植肺転移モデルでは抗CTLA4抗体がよく奏功することが分かったことから、抗FSTL1 抗体と抗CTLA4 抗体の相乗効果も期待されたため、今回はその併用効果を評価した。
　１．実験群(n=5)
G1.マウスIgG対照抗体
G2.抗FSTL1抗体
G3.抗CTLA4抗体
G4.Combination2.
　２．実験スケジュール
Day0:CT26腫瘍細胞の移植（皮下1x106 cells/ml＆静脈内5x105 cells/ml）
Days4&7:抗体の腹腔内投与x2
-マウスIgG対照抗体(抗DNP 抗体)10mg/kgx2
-抗FSTL1抗体(#6-55)5mg/kgx2
-抗CTLA4抗体(Clone9H10,BioLegend)5mg/kgx2
＊抗腫瘍効果判定基準：皮下腫瘍増殖抑制効果、マウス生存期間の延長
　３．結果＆考察
　CT26 に比し悪性度の高いColon26 細胞を移植したモデルを用いた前回の実験結果以上に、抗CTLA4 抗体は高い抗腫瘍効果を示し、5匹中2 匹のマウスで皮下腫瘍が消失した。しかし、これらのマウスも後におそらく肺転移が生じたことで死亡した。一方、抗CTLA4抗体に抗FSTL1 抗体を併用すると、皮下腫瘍は5匹全てのマウスで消失し、長期間に渡って毛羽立ちも体重減少もないまま良好な状態で生存した。全例が完全に治癒したと考えられる。以上の結果から、癌種（あるいは癌細胞におけるFSTL1/DIP2A発現の違い）によっては、CTLA4 を阻害することもFSTL1 阻害治療効果を相乗的に増強できることが示された。
　以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
［産業上の利用可能性］
　免疫抑制等の免疫破綻の解除によるがんの予防および治療剤、および転移、特に骨転移を抑制する技術が提供され、特に予想外に顕著な効果を奏する併用効果により、がん治療および予防に関連する技術に関与する産業（試薬、製薬等）において利用可能な技術が提供される。
［配列表フリーテキスト］
配列番号５０３：ヒトＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号５０４：ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号５０５：マウスＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号５０６：マウスＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号５０７：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５０８：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５０９：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５１０：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５１１：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５１２：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５１３：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５１４：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５１５：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５１６：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５１７：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５１８：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５１９：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５２０：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５２１：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５２２：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５２３：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５２４：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５２５：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５２６：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５２７：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５２８：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５２９：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５３０：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５３１：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５３２：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５３３：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５３４：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５３５：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５３６：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５３７：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５３８：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５３９：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５４０：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５４１：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５４２：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５４３：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５４４：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５４５：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５４６：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５４７：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５４８：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５４９：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５５０：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５５１：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５５２：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５５３：抗体クローン＃７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５５４：抗体クローン＃７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５５５：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５５６：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５５７：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５５８：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５５９：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５６０：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５６１：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５６２：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５６３：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５６４：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５６５：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５６６：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５６７：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号５６８：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５６９：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号５７０：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号５７１：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号５７２：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号５７３：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号５７４：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配（赤色）を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号５７５：MCS配列
配列番号５７６：MCS配列（相補鎖）
配列番号５７７：挿入用の配列
配列番号５７８：挿入用の配列
配列番号５７９：Δ21-53(Forward　primer)
配列番号５８０：Δ21-53(Reverseprimer)
配列番号５８１：Δ100-140(Forward　primer)
配列番号５８２：Δ100-140(Reverseprimer)
配列番号５８３：Δ148-170(Forward　primer)
配列番号５８４：Δ148-170(Reverseprimer)
配列番号５８５：Δ181-190(Forward　primer)
配列番号５８６：Δ181-190(Reverseprimer)
配列番号５８７：Δ193-228(Forward　primer)
配列番号５８８：Δ193-228(Reverseprimer)
配列番号５８９：Δ233-289(Forward　primer)
配列番号５９０：Δ233-289(Reverseprimer)
配列番号５９１：Δ148-154(Forward　primer)
配列番号５９２：Δ148-154(Reverse　primer)
配列番号５９３：Δ155-162(Forward　primer)
配列番号５９４：Δ155-162(Reverse　primer)
配列番号５９５：Δ163-170(Forward　primer)
配列番号５９６：Δ163-170(Reverse　primer)
配列番号５９７：抗体クローン＃５－２の軽鎖核酸全長配列
配列番号５９８：抗体クローン＃５－２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号５９９：抗体クローン＃５－２の重鎖核酸全長配列
配列番号６００：抗体クローン＃５－２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６０１：抗体クローン＃５－３の軽鎖核酸全長配列
配列番号６０２：抗体クローン＃５－３軽鎖のアミノ酸全長配列
配列番号６０３：抗体クローン＃５－３の重鎖核酸全長配列
配列番号６０４：抗体クローン＃５－３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６０５：抗体クローン＃５－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号６０６：抗体クローン＃５－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６０７：抗体クローン＃５－８の重鎖核酸全長配列
配列番号６０８：抗体クローン＃５－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６０９：抗体クローン＃５－１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号６１０：抗体クローン＃５－１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６１１：抗体クローン＃５－１０の重鎖核酸全長配列
配列番号６１２：抗体クローン＃５－１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６１３：抗体クローン＃５－４３の軽鎖核酸全長配列
配列番号６１４：抗体クローン＃５－４３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６１５：抗体クローン＃５－４３の重鎖核酸全長配列
配列番号６１６：抗体クローン＃５－４３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６１７：抗体クローン＃６－５５の軽鎖核酸全長配列
配列番号６１８：抗体クローン＃６－５５の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６１９：抗体クローン＃６－５５の核酸全長配列
配列番号６２０：抗体クローン＃６－５５のアミノ酸全長配列
配列番号６２１：抗体クローン＃７－３４の軽鎖核酸全長配列
配列番号６２２：抗体クローン＃７－３４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６２３：抗体クローン＃７－３４の重鎖核酸全長配列
配列番号６２４：抗体クローン＃７－３４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６２５：抗体クローン＃８－１の軽鎖核酸全長配列
配列番号６２６：抗体クローン＃８－１の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６２７：抗体クローン＃８－１の重鎖核酸全長配列
配列番号６２８：抗体クローン＃８－１の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６２９：抗体クローン＃８－４の軽鎖核酸全長配列
配列番号６３０：抗体クローン＃８－４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６３１：抗体クローン＃８－４の重鎖核酸全長配列
配列番号６３２：抗体クローン＃８－４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６３３：抗体クローン＃８－７の軽鎖核酸全長配列
配列番号６３４：抗体クローン＃８－７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６３５：抗体クローン＃８－７の重鎖核酸全長配列
配列番号６３６：抗体クローン＃８－７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６３７：抗体クローン＃８－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号６３８：抗体クローン＃８－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６３９：抗体クローン＃８－８の重鎖核酸全長配列
配列番号６４０：抗体クローン＃８－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６４１：抗体クローン＃７の軽鎖核酸全長配列
配列番号６４２：抗体クローン＃７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６４３：抗体クローン＃７の重鎖核酸全長配列
配列番号６４４：抗体クローン＃７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６４５：抗体クローン＃１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号６４６：抗体クローン＃１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６４７：抗体クローン＃１０の重鎖核酸全長配列
配列番号６４８：抗体クローン＃１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６４９：抗体クローン＃１３の軽鎖核酸全長配列
配列番号６５０：抗体クローン＃１３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６５１：抗体クローン＃１３の重鎖核酸全長配列
配列番号６５２：抗体クローン＃１３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６５３：抗体クローン＃２２の軽鎖核酸全長配列
配列番号６５４：抗体クローン＃２２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６５５：抗体クローン＃２２の重鎖核酸全長配列
配列番号６５６：抗体クローン＃２２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６５７：抗体クローン＃３３の軽鎖核酸全長配列
配列番号６５８：抗体クローン＃３３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号６５９：抗体クローン＃３３の重鎖核酸全長配列
配列番号６６０：抗体クローン＃３３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号６６１：Novoprotein社のFSTL１のアミノ酸配列
配列番号６６２：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号６６３：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号６６４：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号６６５：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号６６６：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号６６７：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号６６８：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号６６９：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号６７０：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号６７１：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号６７２：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号６７３：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号６７４：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号６７５：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号６７６：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号６７７：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号６７８：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号６７９：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号６８０：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号６８１：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号６８２：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号６８３：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号６８４：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号６８５：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号６８６：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号６８７：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号６８８：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号６８９：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号６９０：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号６９１：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号６９２：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号６９３：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号６９４：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号６９５：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号６９６：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号６９７：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号６９８：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号６９９：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号７００：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号７０１：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号７０２：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号７０３：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号７０４：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号７０５：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号７０６：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長核酸配列
配列番号７０７：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号７０８：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号７０９：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号７１０：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号７１１：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号７１２：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号７１３：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号７１４：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号７１５：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号７１６：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２の代替アミノ酸配列
配列番号７１７：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３の代替アミノ酸配列
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配列番号７３２：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号７３３：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号７３４：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号７３５：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号７３６：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号７３７：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号７３８：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号７３９：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号７４０：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号７４１：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号７４２：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号７４３：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号７４４：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号７４５：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号７４６：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号７４７：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号７４８：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長核酸配列
配列番号７４９：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号７５０：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長核酸配列
配列番号７５１：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号７５２：ヒトＣＴＬＡ４の核酸配列
配列番号７５３：ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列
配列番号７５４：マウスＣＴＬＡ４の核酸配列
配列番号７５５：マウスＣＴＬＡ４のアミノ酸配列
配列番号７５６：イピリムマブ（ipilimumab）の重鎖のアミノ酸配列
配列番号７５７：イピリムマブ（ipilimumab）の軽鎖のアミノ酸配列
＜ＰＡＲＴ４＞
［発明の名称］ＦＳＴＬ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤の化学療法併用剤
［技術分野］
　本発明は、悪性腫瘍の治療併用薬等に関する。
［背景技術］
　癌が悪化する原因として免疫抑制が知られるようになった。免疫抑制を解除すると癌の効果的な治療につながるとして開発が進められている。
　特許文献１では、免疫抑制解除に関する分子の報告がなされた。FSTL1についてはある程度研究が進んでいるが（非特許文献１および２）、その機能は不明な点がまだまだ多い。
　免疫抑制解除については、いまだ発展途上であり、癌患者の生体内には、癌を攻撃して排除しようとする宿主免疫が存在するが、癌細胞の側でも、宿主免疫の監視から逃れようとするシステムを備えていることが知られており、例えば、癌細胞の存在下で制御性Ｔ細胞を除去すると、癌細胞に対する免疫反応が変化することがin　vitroとin　vivoで示されている（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）。また、胃癌（非特許文献４＝Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003，非特許文献５＝Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003参照）、直腸癌（非特許文献６＝Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999参照）、膵臓癌（非特許文献７＝Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002，８＝Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003参　照）、肺癌（非特許文献９＝Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001参照）、グリオーマ（非特許文献３＝Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006参照）において、制御性Ｔ細胞が増加することから、癌細胞による免疫回避システムに制御性Ｔ細胞が関与していると考えられている。しかし、そのメカニズムは明らかでなく、制御性Ｔ細胞由来のサイトカインがどのように貢献しているのか、未だに議論がある（非特許文献３参照）。
　さらに、制御性Ｔ細胞の欠損は重篤な自己免疫疾患を引き起こす（非特許文献１０＝Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001参照）ことから、自己免疫と癌免疫には共通のメカニズムが存在することと考えられている（非特許文献１１＝Turk　et　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002参照）。このように、制御性Ｔ細胞は、免疫反応の抑制を通じ、癌細胞に対する免疫抑制だけでなく、自己免疫やアレルギー反応のような過剰免疫反応に関与していることが知られている（非特許文献１２＝Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007参照）。
　このような背景から、現在開発されている免疫抑制解除薬は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するようにデザインされているため、免疫系全体を修飾するためには、それらを併用せざるを得ないのが現状で、実際にはあまり有効ではないとされている。
［先行技術文献］
［特許文献］
　　［特許文献１］国際公開公報WO2009/028411
［非特許文献］
　　［非特許文献１］Cancer　Research　73(20);　6185-93,　2013
　　［非特許文献２］OncoImmunology　2:11,　e26528,　2013
　　［非特許文献３］Andaloussi　and　Lesniak　Neuro-Oncology　8,　234-243,　2006
　　［非特許文献４］Ichihara　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　4404-4408,　2003
　　［非特許文献５］Wolf　et　al.　Clin.Cancer　Res.　9,　606-612,　2003
　　［非特許文献６］Hicky　et　al.　Semin.　Immunol.　11,　125-137,　1999
　　［非特許文献７］Liyanage　et　al.　J.　Immunol.　169,　2756-2761,　2002
　　［非特許文献８］Sasada　et　al.　Cancer　98,　1098-1099,　2003
　　［非特許文献９］Woo　et　al.　Cancer　Res.　61,　4766-4772,　2001
　　［非特許文献１０］Sakaguchi　et　al.　Immunol.　Rev.　182,　18-32,　2001
　　［非特許文献１１］Turk　et　al.　Immunol.　Rev.　188,　122-135,　2002
　　［非特許文献１２］Miyara　and　Sakaguchi　Trends　Mol.　Med.　13,　108-116,　2007
［発明の概要］
［課題を解決するための手段］
　本発明者らは鋭意検討した結果、ＦＳＴＬ１が免疫抑制解除のためのより有望な標的であり、ＦＳＴＬ１の活性阻害が癌の悪化の一因と考えられる免疫抑制を誘導する癌関連間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の誘導や増殖、さらに、癌細胞の転移性、特に骨転移性の獲得に対しても効果があり、癌を排除する上で顕著な効果があることを突き止め、本発明を完成させた。本発明において、ＦＳＴＬ１は、制御性Ｔ細胞や制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞などの免疫抑制性細胞を誘導するＭＳＣを誘導することができることが見出された。それゆえ、この上流を阻害することで、免疫抑制機序全体を一斉に解除できる可能性があり、効果的な抗癌剤としての利用価値があることを見出した。したがって、特に、本発明は、「免疫抑制または免疫不全等の免疫破綻を誘導するＭＳＣの阻害」および「癌細胞の転移性阻害」の両方によって、従来の方法よりも効果的に生体内から癌を排除できると期待される点が注目されるべきものである。この知見に基づいて本発明者らはさらに開発を続けさらに抗ＦＳＴＬ１抗体と化学療法剤とを組み合わせることによって予想外に顕著な治療効果があることを見出し本発明を完成させた。
　したがって、本発明は以下を提供する。
（１）ＦＳＴＬ１抑制剤と化学療法剤との組み合わせ物。
（２）前記ＦＳＴＬ１抑制剤は、それぞれ独立して、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される、項目１に記載の組み合わせ物。
（３）前記ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である、項目１または２に記載の組合せ物。
（４）抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、化学療法剤との組み合わせ物。
（５）前記化学療法剤はＤＮＡ合成阻害機能を有する、項目１～４のいずれか１項に記載の組合せ物。
（６）前記化学療法剤は、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖蛋白阻害剤および白金錯体誘導体からなる群より選択される少なくとも１つである、項目１～５のいずれか１項に記載の組合せ物。
（７）前記化学療法剤は、アルキル化剤を含む、項目１～６のいずれか１項に記載の組合せ物。
（８）前記化学療法剤は、シクロフォスファミドまたはその誘導体を含む、項目１～７のいずれか１項に記載の組合せ物。
（９）前記化学療法剤はシクロフォスファミドを含む、項目１～８のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１０）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号７５８（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位から１００位、１４８～１６２位、１９３～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、項目３～９のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１１）前記抗体は抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、項目３～１０のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１２）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、項目３～１１のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１３）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号８７３；重鎖：配列番号８７５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号８７７；重鎖：配列番号８７９）、＃８－１（軽鎖：配列番号８８１；重鎖：配列番号８８３）、＃７（軽鎖：配列番号８９７；重鎖：配列番号８９９）、＃１３（軽鎖：配列番号９０５；重鎖：配列番号９０７）および＃３３（軽鎖：配列番号９１３；重鎖：配列番号９１５）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、項目３～１２のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１４）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体である、項目３～１３のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１５）前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９２６、９２８、９３０および９３２）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９４２、９４４、９４６および９４８）を有するを有する、項目３～１４のいずれか１項に記載の組合せ物。
（１６）項目１～１５のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
（１７）項目１～１５のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
（１８）項目１～１５のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
（１９）項目１～１５のいずれか１項に記載の組合せ物を含む肺癌の治療剤。
（２０）項目１～１５のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。（２１）項目１～１５のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
（２２）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目２１に記載の阻害剤。
（２３）前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、項目２１に記載の阻害剤。
（２４）項目１～１５のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
（２５）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目２４に記載の阻害剤。
（２６）前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目２４または２５に記載の阻害剤。
（２７）ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤は化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
（２８）抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
（２９）化学療法剤を含む抗がん剤であって、該化学療法剤はＦＳＴＬ１抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
（３０）化学療法剤を含む抗がん剤であって、該化学療法剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
　本発明において、上述した１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解することにより、当業者に認識される。
［発明の効果］
　本発明は、ＦＳＴＬ１の阻害によって、癌細胞に作用して直接的に、あるいは、免疫を抑制する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）や骨髄由来免疫抑制性細胞（ＭＤＳＣ）等の免疫抑制性または免疫不全性の細胞の分化誘導、増殖、および／または免疫抑制活性または免疫不全活性の増強を促進する間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の増殖および分化誘導を抑制して間接的に、癌細胞の転移を効果的に抑制し、抑制困難と考えられている癌転移、特に、有効な治療法が確立されていない骨転移をも効果的に抑制する。また、骨転移モデルだけに限らず、種々の動物がんモデルにおいても、Ｔｒｅｇの分化誘導、腫瘍の増殖、転移、衰弱による体重減少などが抑制される。このように、本発明は、多局面にわたり有効な癌治療薬を提供する。また、免疫抑制または免疫不全も従来のものに比べて一斉に解除できることから、本発明は、広範囲の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤をも提供する。本発明の免疫抑制解除剤または免疫不全解除剤は、制御性T細胞や制御性樹状細胞など、一部の免疫抑制性細胞集団を除去あるいはその機能を阻害するものではないため、従来の免疫抑制解除剤の制約から広く解放され、疲弊Ｔ細胞に対する効果もあることから、免疫不全解除効果もあり、免疫破綻を解除する免疫破綻解除剤としても有用である。本発明は、これらのＦＳＴＬ１の阻害についての効果について、化学療法剤の阻害機構とを組み合わせることによってさらに顕著な効果を奏することを見出した。詳細に述べると、ＦＳＴＬ１の阻害と、化学療法剤による阻害によって、予想外にも、相乗効果が示され、抗腫瘍効果が増強され、５匹中３匹では、肺癌が消失するという相乗効果以上の効果が示された。
［図面の簡単な説明］
　　［図９５］図９５は、本発明の抗体についてのＦＳＴＬ１に対する結合活性を示すグラフである（実施例２）。図９５Ａは、初期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。白ひし形がクローン＃５－２、×がクローン＃５－４、黒三角がクローン＃５－８、白丸がクローン＃５－１０、白四角がクローン＃５－４３、白三角がクローン＃６－５５、黒丸がクローン＃７－３４を示し、黒四角がコントロールである抗ジニトロフェニル（ＤＮＰ）抗体を示す。結合活性の強さは＃５－１０、＃６－５５、＃７－３４＞＃５－３＞＃５－８＞＃５－４３であった。図９５Ｂはマウスとヒトとの間の交差反応性を調査したものである。図９５Ａで示した抗体の内、スクリーニングの際にマウスFSTL1にも反応性を示したクローンの結合活性を評価したものである。左にヒトFSTL1に対する結合活性を示し、右にマウスFSTL１に対する結合活性を示す。＃6-55および＃7-34ともヒトおよびマウスFSTL1にも強い結合活性を示した。図９５では、抗体濃度は1000　ng/mlから希釈した。図９６以降に示す実験では濃度をさらに希釈して実験を行った。
　　［図９６］図９６は、中期のスクリーニングより得られたクローンのヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す（実施例２）。白四角はクローン＃６－５５、白三角はクローン＃８－１、黒丸はクローン＃８－４、黒三角はクローン＃８－７、白ひし形はクローン＃８－８を示す。比較として＃6-55と共にアッセイを行っている。結合活性の強さはクローン＃６－５５、＃８－１、＃８－７＞＃８－４＞＃８－８であった。＊図９６における抗体濃度は125　ng/mlから希釈した。
　　［図９７］図９７は、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローンの結合活性を示すグラフである（実施例２）。図９７Aの右側と左側、図９７Bの右側と左側はそれぞれ同時に評価したものであるが、クローン数が多いために図の見易さを重視して二つに図を分けたものである。図９７Aは、マウスFSTL1を用いたパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）も含め、ヒトFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものである。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。ヒトFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１３＞＃８－１、＃１０＞＃８－４＞＃７、＃３３＞＃５－８＞＃２２であった。抗DNP抗体は結合活性が観察されなかった。図９７Bは、同上のクローンのマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって評価したものを示す。左グラフでは、白四角はクローン＃５－８、白三角はクローン＃６－５５、黒丸はクローン＃７－３４、黒三角はクローン＃８－１、白ひし形はクローン＃８－４、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。右グラフでは、白四角はクローン＃７、白三角はクローン＃１０、黒丸はクローン＃１３、黒三角はクローン＃２２、白ひし形はクローン＃３３、黒四角は抗ＤＮＰ抗体を示す。マウスFSTL1への結合活性の強さは＃６－５５、＃７－３４、＃１０、＃１３＞＃２２＞＃７＞＃３３＞＃８－１であった。＃8-1が若干結合活性を示している。＃５－８、＃８－４、抗DNP抗体は全く結合活性を示さなかった。図９７における抗体濃度は100ng/mlから希釈した。これらELISAによる結合活性の結果とin　vitro評価を元に、in　vivo評価に供試する有望なクローンを絞り込んだ（＃６－５５、＃７－３４、＃８－１）。更に新たなパニングによって得られたクローン（＃７、＃１０、＃１３、＃２２、＃３３）もin　vivo評価の対象とした。
　　［図９８］図９８は、欠損変異体（デリションミュータント）および推定エピトープを示す（実施例３）。図９８の上段はヒトFSTL1の模式図と欠損部位の位置を示す。これらヒトFSTL1の欠損体を抗原に用いたELISAにより、各クローンのエピトープの推定箇所を特定した。図９８の下段は、取得したクローンと特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の推定エピトープとの対比を表に示す。さらにヒトおよびマウスに交差反応性を示すクローン（強い結合活性；○、弱い結合活性；△）を記載した。結合活性の強いまたは弱いの基準は、１２．５ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトおよびマウスの両方に結合活性がみられるものを「強い」と分類し、それより高い濃度でヒトおよびマウスの両方に初めて結合活性がみられるものを「弱い」とした。
　　［図９９］図９９は、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞（MSC)および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例６～７）。図９９Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例６）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。その中でもクローン＃５－３、＃５－８、＃７－３４がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。図９９Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例７）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。左からグラフに示したクローンを示し、右から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番右に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンが阻害活性を示した。特にクローン＃５－３、＃５－８がより高い阻害活性を示している。
　　［図１００－１］図１００もまた、ＦＳＴＬ１の抑制による間葉系幹細胞および骨転移に関する効果を示す結果である（実施例８～１１）。図１００Aは、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例８；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃５－４３、＃６－５５、＃８－１、＃８－８で阻害活性が認められた。図１００Bは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例９；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlとした)。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLおよびCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃５－８、＃６－５５がより高い阻害活性を示している。
　　［図１００－２］図１００Cは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1における　RANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１０）。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、いずれの抗体クローンも阻害活性を示した。特に、クローン＃５－２、＃６－５５、＃８－４、＃８－７がより高い阻害活性を示した。図１００Dは、FSTL1によるヒト膵癌細胞株Panc1におけるRANKLおよびCCR2陽性細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す。ここでは、抗体用量依存試験を行った（実施例１１）。骨転移マーカーとして知られている分子の中からRANKLとCCR2の発現をフローサイトメトリーで解析し、陽性細胞の数をグラフに示した。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、クローン＃６－５５が阻害活性を示したが、抗体の用量依存性は認められなかった。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。クローン＃６－５５はRANKL陽性細胞とCCR2陽性細胞の両方の細胞誘導を、同時に強く阻害した。
　　［図１０１］図１０１は、FSTL1によるマウス骨髄由来間葉系幹細胞の誘導効果に及ぼす抗体の影響を示す（実施例１２；FSTL1濃度は低濃度の20ng/mlを使用した)。間葉系幹細胞（MSC)のマーカーCD45陰性細胞比率をフローサイトメトリーにより解析し、細胞の割合と数を示した。右からグラフに示したクローンを示し、左から３番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、２番目に抗原のみ、一番左に何も加えないサンプルを示す。コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較し、全ての抗体クローンがFSTL1の作用に阻害活性を示した。特に、クローン＃７－３４、＃５－２、＃６－５５、＃８－７の順で強い阻害活性が認められた。
　　［図１０２］図１０２は、in　vivo用に製造した抗FSTL1抗体および抗PD-L1抗体の活性評価を示す（実施例１３）。マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、右に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。いずれもコントロール抗体と比べ、これまでの結果と同様に高い阻害活性を示したことから、in　vivo用に製造されたこれらの抗体も妥当な抗体であることが示された。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想されるが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強いことが示された。
　　［図１０３］図１０３Aは、図１０２と同様の試験を別のクローン（各グラフに記載のクローン）によって行った結果を示す（実施例１４）。図１０２同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC)「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体（抗DNP抗体）、右端に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示し、中の４クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、MDSCの誘導に対して阻害活性を示した。中でも、#13、#33はポジティブコントロール(#6‐55)と同等以上の阻害活性を示した。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図１０３Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール、続いて抗FSTL１抗体クローンを示す。いずれの抗FSTL1抗体クローンにおいても、FSTL1による脂肪細胞への分化能を有するMSCの分化誘導に対して阻害活性を示した。
　　［図１０４］図１０４は特許文献１（WO2009／028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体との活性比較を示す（実施例１５～１６）。（A）＃６－５５（マウスキメラ抗体）とR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体（ラット抗体；Ｒ＆Ｄと表示）とで比較するために用量依存性試験を行い、図１０２と同様にFSTL1の作用の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１５）。図１０４Aは図１０２同様、マウス骨髄細胞にFSTL1と各抗体を添加して培養し、MSCを高確率に含む「CD45陰性細胞」（左グラフ）、癌転移に伴って増加するMSC「CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞」（中グラフ）、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）「CD11ｂ陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞」（右グラフ）をフローサイトメトリーにより解析し、細胞数を示した。各グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。R&D社製の抗体は＃6-55と同等レベルでFSTL1による各細胞の誘導の阻害活性を示した。用量依存性の効果は認められなかった。各アイソタイプ抗体を基準とすれば、＃６－５５の阻害活性の方がやや優位かと考えられる。図１０４Bは脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す（実施例１６）。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にマウスコントロール抗体、左から3番目にラットコントロール抗体を示す。２クローンはそれぞれの抗ＦＳＴＬ１抗体を示し、数値は用いた抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。＃6-55により、脂肪細胞への分化能をもつMSCの誘導が抗体用量依存的に阻害された。他方、R&D社製の抗体は阻害活性を示さなかったことから、＃６－５５の抗体の優位性が認められた。なお、脂肪細胞への分化能は、免疫抑制を誘導する癌関連MSC（図１０４Aの中央の細胞にも示されている細胞）の機能の一つである。図１０４Aと図１０４Bとの比較から以下のことがいえる。すなわち、マウスコントロール抗体（マウス由来タンパク質）を投与した場合と比べて、ラットコントロール抗体という「ラット由来のタンパク質」をマウスの生体内に投与した際に、それ自体の反応が低下していることがわかる（特に10４A中央の図）。これは、マウスの骨髄細胞を使ったための異物に対する免疫反応が若干生じたためと推測されるが、同じ「ラット由来タンパク質」であるR&D社のFSTL1抗体を投与した場合は、本来は、このラットコントロール抗体投与群と比較するのが妥当であるところ、それぞれのコントロールタンパク質に対する『抑制率』を考えると、マウスコントロール抗体投与群に対する6-55の抑制率に比べて、ラットコントロール抗体投与群に対するR&D社のFSTL1抗体の抑制率は小さく、実は、＃6-55の方が優位であることが示唆される。FSTL1によって誘導されたCD45陰性MSCの全てが免疫抑制を引き起こす癌関連MSCではなく、数種類のマーカーや脂肪細胞への分化能などで同定する必要がある。本発明の抗体はFSTL1の作用を阻害することで癌関連MSCの誘導を強く阻害することができると言える。
　　［図１０５－１］図１０５は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図１０５Ａ（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図１０５Ｂ（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45陰性細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。両棒グラフについて、上から、処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。図１０５Ｃ（マウス個体別腫瘍体積）は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果（皮下に移植した腫瘍増殖が抑制されていること）を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。
　　［図１０５－２］図１０５は、in　vivoにおける抗体活性評価を示しており（実施例１７）、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。図１０５Ｄは、脾臓内の細胞集団の変化を示す。腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身に修飾／影響を受けることを提示する。左は、ＣＤ４５陰性細胞数を示し脾臓内でもＭＳＣが減少していることを示す。中央は、ＣＤ４陽性Ｆｏｘｐ３陽性Ｔ細胞数を示し、Ｔｒｅｇが減少していることを示す。右はＣＤ８陽性Ｔｉｍ３陽性Ｔ細胞数を示し、疲弊ＣＤ８陽性Ｔ細胞が減少していることを示す。ここで、疲弊とは、機能が低下または不全に陥っている状態を示し、Ｔｉｍ３はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきＣＤ８陽性Ｔ細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。
　　［図１０６－１］図１０６もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図１０６Ａ左（骨髄内に転移した腫瘍細胞数）は、骨髄細胞中におけるGFP陽性腫瘍細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのGFP陽性腫瘍細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨転移に対する各種抗体の効果（骨転移が抑制されていること）を示している。図１０６Ａ中央（骨髄内のＣＤ４５陰性細胞数）は、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数した結果で、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果（骨髄内のＭＳＣ増加が抑制されていること）を示している。図１０６Ａ右（マウス体重）は体重変化に対する効果（骨転移によりマウスが衰弱するが、その指標の一つとして体重を計測したところこれが抑制されていることが示されること）を示す。図１０６Aの棒グラフについて
、上から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す図１０６Bの５グラフは、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、クローン＃６－５５、＃７－３４および＃８－１を投与した群を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。被験対象である抗FSTL1抗体3種の抗FSTL1抗体ともに対照抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果が認められた。
　　［図１０６－２］図１０６もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１８）。in　vivoにおける抗体活性評価を示しており、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した結果を示す。被験対象である抗FSTL1抗体は、腹腔内投与した（全身投与）。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、5日目に抗体を腹腔内投与（1回目、200μg/mouse=10mg/kg　相当）し、10日目に抗体を腹腔内投与（２回目、200μg/mouse=10mg/kg相当）し、14日目に各種アッセイを行った。図１０６Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図１０６Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。下右はCD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　　［図１０７］図１０７もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例１９）。本図では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較が示される。図１０７Ａは、各種抗体の腫瘍容積に対する効果を時間経過とともに示す。腫瘍移植８、１１、１５日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左から処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１５日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day0でGFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を行い、Day　4で抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）を行い、Day8で抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）を行い、Day　15で各種アッセイを行った。図１０７Ｂ左は、骨転移に対する効果（GFP陽性細胞数（１０６／マウス））を示し、図１０７Ｂ中央は骨髄中ＭＳＣの増加に対する効果（CD４５陰性細胞数（（１０６／マウス））について示す。図１０７Ｂ　右は体重変化（体重（ｇ））に対する効果を示す。図１０７Ｂはいずれも、上から、処置なし、コントロール抗体、抗FSTL1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD－L1抗体を示す。対照抗体として、以下の既存の抗体薬を用いた。Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)；Anti-PD-1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)；Anti-PD-L1　mAb
　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全て対照抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　　［図１０８］図１０８もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２０）。本図では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。
図１０８Ａは、３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Snail+腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。本実施例では、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価している。図１０８Ｂは、肺転移結節数に関する結果を示す。左から、処置なし、中央はコントロール抗体（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体（＃６－５５）は、CT26皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強く抑制し、5匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(対照抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　　［図１０９］図１０９もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２１）。本図ではマウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。３つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左は処置なし、中央はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。Day　0に腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）を行い、Day4および7に抗体の腹腔内投与（10mg/kg）を行い、Day　14に薬効評価（皮下腫瘍増殖）を行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　　［図１１０］図１１０Aもまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２２）。本図ではマウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。左パネルの２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール、右は抗ＦＳＴＬ１抗体（＃６－５５）を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図１１０Bは体重変化に対する効果を示す。左はコントロール抗体、中央は抗FSTL1抗体、右は腫瘍細胞を投与していない未処置の個体を示す。縦軸は腫瘍体積（ｇ）を示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail強制発現細胞株の親株である。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、体重減少についても抑制活性を示した。
　　［図１１１］図１１１もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２３）。本図では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示す。２つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植３、６、１０日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左はコントロール抗体、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。FSTL1発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。対照抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与は対照抗体投与群に比し有意に抑制した。
　　［図１１２］図１１２もまた、in　vivoにおける抗体活性評価を示す（実施例２４）。本図では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価が示される。４つのグラフとも腫瘍増殖に対する効果を示す。腫瘍移植６、１０、１４日後に測定したマウス個体別（１線が１マウス）の腫瘍体積であり、腫瘍増殖に対する各種抗体の効果を示す。左端はコントロール抗体、左から２番目は１ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、右から２番目は３ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体、そして右端は１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。横軸は日数を示す。縦軸は腫瘍体積（mm３）を示す。図１１０の図の実験と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与は対照抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　　［図１１３］図１１３は、本発明の抗FSTL1抗体（＃６－５５）と、既知の抗FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)とを含む実験系で％CD4+Foxp3＋CTLA+細胞を指標に活性を測定したTreg誘導実験の結果である。◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。
　　［図１１４］図１１４は、抗FSTL1 抗体の種々の機能を見た結果である。パネルAでは、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響の結果を示す。パネルAの上段は増殖の結果を示し、下段は浸潤の結果を示す。左からPanc1、MIAPaCa、MDA231、Hs294を示す。グラフは、上段では、3日に培養した後の細胞数（×１０３）を示す。下段では、3日間抗体で処理した腫瘍細胞の細胞数を示す。上段では、それぞれのグラフ中上からなにもなし（None）、コントロールＩｇＧ、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。下段ではそれぞれのグラフ中上がコントロールＩｇＧ、下が抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。これらから、Snail＋腫瘍細胞はきわめて転移性の高いことが明らかになった。パネルBでは、FSTL1刺激下における抗FSTL1 抗体の作用を示す。左は増殖能および右は浸潤能を示す。いずれも左から、何も添加していない（None）、左から２番目はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルC～Dでは、Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を示す。Ｃの左からＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤、ＣＣＲ２発現、ＲＡＮＫＬ発現の結果を示す。いずれも左から、Snailを強制発現させていない親株のPanc1細胞（Mock）、左から２番目から右端は抗FSTL1抗体（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。パネルＤでは、マウスメラノーマＢ１６ｔ－Ｆ１０でのＳｎａｉｌトランスフェクタントでの結果を示す。いずれも左から、偽抗体（Mock）、左から２番目から右端はFSTL1（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、左からなにもなし、マウスＩｇＧ、抗FSTL1抗体（＃６－５５）を示す。
　　［図１１５］図１１５は、マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験の結果を示す。パネルＡでは、左からＣＤ４５＋ＭＳＣ細胞、右はＣＤ４５＋ＣＤ１４６＋ＡＬＣＡＭ＋ｓＭＳＣを示す。左から、なにもなし、左から２番目から右端はＦＳＴＬ１（２０ｎｇ／ｍｌ）での結果であり、左から２番めから、イムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリンあり、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３のものを示す。パネルＢでは、ＣＤ４５－ＭＳＣ細胞、ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋　ｓＭＳＣ細胞、スフェアコロニー（自己新生能）を示す。左端はＦ１０－ｍｏｃｋを示し、左から２番目から右端はＦ１０－ｓｎａｉｌ＋を示す。左から２番目から順にイムノグロブリンなし、マウスイムノグロブリン、抗ＦＳＴＬ１抗体での結果を示す。結果は左グラフおよび中グラフは細胞数で示される。スフェアコロニーは、コロニー数を示す。スフェアコロニーは３つあるグラフのうち左は総数、中は大きなコロニー（＞５０細胞）、右は小さなコロニー（１０～５０細胞）を示す。
　　［図１１６］図１１６は、マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験結果を示す。グラフは、ＣＤ４＋細胞中のFoxp3＋CTLA4+細胞の割合を示す。左端はなにもなし、左から２番目～右端はＦＳＴＬ（５ｎｇ／ｍｌ）の存在下での実験である。左から２番目からそれぞれマウスイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。
　　［図１１７］図１１７は、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種（＃７、＃１０、＃３３）について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性の評価を示す。左上は細胞接着、右上は細胞浸潤、左下はＣＣＲ２発現、右下はＲＡＮＫＬ発現を示す。それぞれのグラフ中、左からなにもなし、コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃３３を示す。＊は統計学的有意（ｐ＜０．０５）を示す。
　　［図１１８－１］図１１８（図１１８－１～１１８－４）は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのin vivo 薬効比較をした結果である。図１１８－１は、上段に腫瘍増殖、下段に骨転移、骨髄中のｓＭＳＣ、脾臓中のｓＭＳＣを示す。上段の腫瘍増殖では左から、処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。統計学的有意かどうかはp値を示すことによって表示する。ｘ軸は腫瘍移植後の日数である（なおp値は１４日目の値である）。ｙ軸は腫瘍の容積（ｍｍ３）である。骨転移、２種のｓＭＳＣグラフトも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブ（腫瘍無モデル）を示す。横軸はそれぞれＧＦＰ＋腫瘍細胞の数、ＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数およびＣＤ４５-ＡＬＣＡＭ＋細胞の数を示す。
　　［図１１８－２］図１１８―２は、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群を示す。左から、CD4+T 細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞）、腫瘍特異的CD8+T細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ８＋テトラマー＋）、活性化NK 細胞（ＣＤ４５＋ＮＫ１．１＋ＮＫＧ２Ｄ＋）を示す。上段は、陽性細胞割合を示し。下段はｍｍ３当たりの細胞数を示す。各々のグラフとも、上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図１１８－３］図１１８－３は、図１１８－２と同様の実験であり、腫瘍内に浸潤した免疫抑制性T 細胞群ならびに皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞についての結果を示す。左から、CD4+Treg（ＣＤ４５＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）、MDSCs（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋ＭＤＳＣｓ）、EMTを生じている腫瘍細胞（Ｓｎａｉｌ＋ＣＤ４４＋腫瘍）を示し、グラフの説明は図１１８－２と同様である。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図１１８－４］図１１８－４は、脾臓内における免疫細胞群の結果を示す。左から、腫瘍特異的CD8+T 細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋テトラマー＋ＣＴＬｓ）、CD4+Treg（ＣＤ４＋ＣＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ＋Ｔｒｅｇｓ）、CD8+Treg（ＣＤ８＋ＣＴＬＡ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇｓ）を示す。グラフは脾臓当たりの細胞数（×１０６で表示）を示す。上から処置なし、コントロール、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。
　　［図１１９］図１１９は、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価（腫瘍増殖、体重および骨髄中のｓＭＳＣ数）した結果である。腫瘍増殖では、統計学的有意はｐ値で示す。左はコントロールであり、抗ＦＳＴＬ１抗体は右に示す。横軸は腫瘍移植後の日数であり、縦軸は腫瘍容積（ｍｍ３）を示す。中グラフは動物の体重を示す。左からコントロール、抗体ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。体重はｇで表す。右グラフは骨髄中のｓＭＳＣを示す。左からコントロール、抗ＦＳＴＬ１抗体、ナイーブを示す。ＣＤ４５－ＡＬＣＡＭ＋細胞数（×１０６）を示す。
　　［図１２０］図１２０～図１２１は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図１２０は、腫瘍移植後の腫瘍容積の変動（ｍｍ３）を示す。左からコントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。いずれもカッコ内にコントロールと比較しての統計学的有意（ｐ値）を示し、＃６－５５との間の統計学的有意は線で結びp値で示す。横軸は腫瘍移植後の日数である。
　　［図１２１］図１２０～図１２１は、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いた抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価の結果を示す。図１２１は、生存率を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示し縦軸はマウス生存率（ｎ＝５）を示す。コントロールイムノグロブリン、本発明の抗体＃６－５５、＃７、＃１０、＃１３、＃３３の結果を示す。＃６－５５は細い黒線、＃７はグレイの破線、＃１０は太い黒の実線、＃１３はグレイの実線、＃３３は黒の濃い破線コントロールイムノグロブリンとの統計学的有意値（ｐ値）を示し、＃６－５５に対する統計学的有意（ｐ値）をカッコ内に示す。
　　［図１２２］図１２２は、マウスキメラ抗体の親和性データ（BIACOREによる測定）を示す。図は、マウスキメラ抗体に対する抗原結合量および解離量のプロットである。。
　　［図１２３］図１２３～図１２４は、ヒト化抗体の結果を示す。図１２３は、ヒト化6-55抗体のH鎖(IgG1型)とL鎖の組み合わせによる結合活性比較を示す。白丸に点線がヒト化抗体Ｈ１－Ｌ１、四角に実線がＨ２－Ｌ１、白三角に実線がＨ３－Ｌ１の結果を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４５０の値を示したものである。Ｈ２－Ｌ１が最良であることが分かった。
　　［図１２４］図１２３～図１２４は、ヒト化抗体の結果を示す。図１２４では、本発明の抗体ヒト化＃６－５５Ｈ２－Ｌ１（ＩｇＧ１型）のヒトおよびマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。左がヒトＦＳＴＬ１および右がマウスＦＳＴＬ１に対する結合活性を示す。黒丸はいずれもヒト＃６－５５抗体を示し、白四角がヒト抗ＤＮＰ抗体を示す。抗体濃度を横軸にＯＤ４９０／６３０の値を示したものである。
　　［図１２５］図１２５は、マウス肺癌3LL 皮下移植モデルにおけるCPA との併用効果を示す結果である。左からVehicle(0.9%NaCl)にマウスイムノグロブリンを組み合わせたもの、シクロフォスファミドとマウスイムノグロブリンを組み合わせたもの、Vehicleと抗ＦＳＴＬ１抗体とを組み合わせたもの、右端にシクロフォスファミドと抗ＦＳＴＬ１抗体とを組み合わせたものを示す。縦軸は腫瘍容積を示す。横軸は腫瘍移植後の日数を示す。括弧内の数値および線上の数値（Pと表示）は統計学的有意に関するｐ値を示す（１４日目）。
［発明を実施するための形態］
　以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。なお、同様な内容については繰り返しの煩雑を避けるために、適宜説明を省略する。また、本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「a」、「an」、「the」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。従って、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
　最初に本発明において使用される用語および一般的な技術を説明する。
　本明細書において「FSTL1」とは、フォリスタチンに類似するタンパク質であって、アクチビン結合タンパク質であるタンパク質をコードするものであり、フォリスタチン様配列に含まれるFSモジュールを含み、10個の保存システイン残基を有するとされている。関節リウマチに関する自己抗原であると考えられてきたが、最近の知見は、特許文献１（WO2009/028411）に説明されている。NCBIに記載されているFSTL1のアクセッションナンバーは、例えば、NP_009016（NP_009016.1）；NP_032073.2（アミノ酸）、NM_007085（NM_007085.4）；NM_008047.5（ｍRNA）である。FSTL1のアミノ酸配列は、例えば、配列番号７５８または配列番号７６０である。FSTL1mRNAの塩基配列は、例えば、配列番号７５９または配列番号７６１である。FSTL1は、FSTL1活性を有していれば、そのアミノ酸配列は限定されない。したがって、本発明の具体的な目的に合致する限り、特定の配列番号またはアクセッション番号に記載されるアミノ酸配列を有するタンパク質（あるいはそれをコードする核酸）のみならず、機能的に活性なその誘導体、類似体もしくは変異体または機能的に活性なそのフラグメント、またはその相同体、または高ストリンジェンシー条件または低ストリンジェンシー条件下で、このタンパク質をコードする核酸にハイブリダイズする核酸にコードされる変異体もまた、本発明において用いることができることが理解される。
　本明細書で使用される「誘導体」、「類似体」または「変異体」は、好ましくは、限定を意図するものではないが、対象となるタンパク質（例えば、FSTL1）に実質的に相同な領域を含む分子を含み、このような分子は、種々の実施形態において、同一サイズのアミノ酸配列にわたり、または当該分野で公知のコンピュータ相同性プログラムによってアラインメントを行ってアラインされる配列と比較した際、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％または99％同一であるか、あるいはこのような分子をコードする核酸は、（高度に）ストリンジェントな条件、中程度にストリンジェントな条件、またはストリンジェントでない条件下で、構成要素タンパク質をコードする配列にハイブリダイズ可能である。これは、それぞれ、アミノ酸置換、欠失および付加によって、天然存在タンパク質を改変した産物であり、その誘導体がなお天然存在タンパク質の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示すタンパク質を意味する。例えば、本明細書において記載されあるいは当該分野で公知の適切で利用可能なin　vitroアッセイによって、このようなタンパク質の生物学的機能を調べることも可能である。本明細書で使用される「機能的に活性な」は、本明細書において、本発明のポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体が関連する態様に従って、生物学的活性などの、タンパク質の構造的機能、制御機能、または生化学的機能を有する、ポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体を指す。本発明では、FSTL1についてヒトが主に論じられるが、ヒト以外の多くの動物がFSTL1を発現していることが知られているため、これらの動物、特に哺乳動物についても、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　したがって、FSTL1の代表的なヌクレオチド配列は、
　（a）配列番号７５８または配列番号７６０に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
　（b）配列番号７５９または配列番号７６１に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；
　（c）配列番号７５９または配列番号７６１に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
　（d）配列番号７５８または配列番号７６０に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
　（e）配列番号７５９または配列番号７６１に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
　（f）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
　（g）（a）～（e）のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ることをいう。
　FSTL1のアミノ酸配列としては、
　（a）配列番号７５９または配列番号７６１に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
　（b）配列番号７５９または配列番号７６１に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
　（c）配列番号７５８または配列番号７６０に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
　（d）配列番号７５９または配列番号７６１に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
　（e）（a）～（d）のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、であり得る。ここで、生物学的活性とは、代表的に、FSTL1の有する活性またはマーカーとして同じ生物内に存在する他のタンパク質から識別し得ること（例えば、抗原として用いられる場合特異的エピトープとして機能し得る領域を含むこと）をいう。配列番号７５８～７６１はリーダー配列を含む前駆体である。配列番号７５９では最初の２０アミノ酸（メチオニンからアラニンまで）および配列番号７６１では最初の１８アミノ酸（メチオニンからグリシンまで）がリーダー配列である。したがって、本発明においてFSTL1といった場合、そのアミノ酸配列は、これらのリーダー配列が削除された後のものをさすことがある。
　本発明の関連において、「FSTL1に結合する物質」、「FSTL1（の）結合剤」または「FSTL1相互作用分子」は、少なくとも一時的にFSTL1に結合する分子または物質である。検出目的では好ましくは、結合したことを表示しうる（例えば標識されるか標識可能な状態である）ことが有利であり、治療目的では、さらに治療用薬剤が結合していることが有利である。FSTL1に結合する物質は、例としては、抗体、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、siRNA、低分子量分子（LMW）、結合性ペプチド、アプタマー、リボザイムおよびペプチド模倣体（peptidomimetic）等を挙げることができる。FSTL1に結合する物質または「FSTL1相互作用分子は、FSTL1の阻害剤であってもよく、例えばFSTL1に対して向けられる、特にFSTL1の活性部位に対して向けられる、結合性タンパク質または結合性ペプチド、並びにFSTL1遺伝子に対して向けられる核酸も含まれる。FSTL1に対する核酸は、例えばFSTL1遺伝子の発現またはFSTL1の活性を阻害する、二本鎖または一本鎖DNAまたはRNA、あるいはその修飾物または誘導体を指し、そしてアンチセンス核酸、アプタマー、siRNA（低分子干渉RNA）およびリボザイムを含むがこれらに限定されない。本明細書において、FSTL1について「結合タンパク質」または「結合ペプチド」とは、FSTL1に結合する任意のタンパク質またはペプチドを指し、そしてFSTL1に対して指向される抗体（例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体）、抗体フラグメントおよび機能的等価物を含むがこれらに限定されない。
　本明細書において「化学療法」とは、がんについて用いられる場合、がんまたはがん細胞に対して抑制的に作用する薬剤を用いて行う療法をいい、この目的で用いられる化学物質を「化学療法剤」という。したがって、本明細書において「化学療法剤」とは、悪性腫瘍に対して抑制的に作用する、化学的に合成した物質である薬剤として定義され、好ましくは、細胞内に送達され、癌細胞の増殖を阻害する機能を持つ薬剤のことである。化学療法剤としては、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤を挙げることができるがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、本発明で用いられる化学療法剤は、DNA合成阻害機能を有する。シクロフォスファミドはDNA合成阻害機能を有するところ、本発明ではＦＳＴＬ１抑制剤である抗ＦＳＴＬ１抗体とともに用いたところ顕著な相乗作用を見出すことができたからである。より特定すると本発明は、化学療法剤はアルキル化剤および代謝拮抗剤を含み、さらに好ましくはアルキル化剤である。アルキル化剤としてはシクロフォスファミドまたはその誘導体を挙げることができる。代謝拮抗剤としては、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）およびその誘導体等を挙げることができるがそれらに限定されない。
　理論に束縛されることを望まないが、本明細書の実施例でで示された「アルキル化剤」とＦＳＴＬ１抑制剤との併用で見られた効果は、化学療法剤として「アルキル化剤」以外の化学療法剤においても実現することができると考えられる。その理由としては、理論に束縛されることを望まないが、化学療法剤は、その種類を問わず、また、影響の大小は別にして、癌細胞のみならず正常細胞にも作用することから、癌細胞の増殖を抑えることはできるものの、正常細胞の増殖も抑える可能性がある。従って、癌を排除することに必要な免疫関連細胞の増殖も抑えられ、免疫力の向上による癌の排除は期待できない。他方、抗FSTL1抗体等のＦＳＴＬ１抑制剤は、本明細書において示されるように、癌に対する免疫機能の向上に繋がる薬剤である。本明細書で示されるように、「アルキル化剤」等の化学療法剤とＦＳＴＬ１抑制剤である抗ＦＳＴＬ抗体とを併用すると、腫瘍抑制効果のばらつきが減少するなど抗がん効果の安定的な付与等の予想外の追加の効果の付与や、死亡率の予想外の減少（寛解の予想外の増加）等で示されるように、化学療法剤との併用療法による相乗効果が実証されており、「アルキル化剤」以外の化学療法剤でも同様のＦＳＴＬ１抑制剤による癌に対する免疫機能の向上効果による相乗効果が期待されるからである。
　本明細書において「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）が包含される。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の1または2以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基を持つ有機化合物の総称である。本発明の実施形態に係る抗体が「特定のアミノ酸配列」を含むとき、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が化学修飾を受けていてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が塩、または溶媒和物を形成していてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸がL型、またはD型であってもよい。それらのような場合でも、本発明の実施形態に係るタンパク質は、上記「特定のアミノ酸配列」を含むといえる。タンパク質に含まれるアミノ酸が生体内で受ける化学修飾としては、例えば、N末端修飾（例えば、アセチル化、ミリストイル化等）、C末端修飾（例えば、アミド化、グリコシルホスファチジルイノシトール付加等）、または側鎖修飾（例えば、リン酸化、糖鎖付加等）等が知られている。本発明の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」を含む。「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、2’－O－メチル－リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がN3’－P5’ホスホロアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5プロピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5チアゾールウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがC－5プロピニルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（phenoxazine－modified　cytosine）で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、DNA中のリボースが2’－O－プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体およびオリゴヌクレオチド中のリボースが2’－メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、1またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの3番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Batzer　et　al.,　Nucleic　Acid　Res.19:5081(1991);　Ohtsuka　et　al.,　J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985);　Rossolini　et　al.,　Mol.Cell.Probes　8:91-98(1994)）。本明細書において「核酸」はまた、遺伝子、cDNA、mRNA、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換可能に使用される。本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。
　本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいい、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」をさすことがある。
　本明細書において遺伝子の「相同性」とは、2以上の遺伝子配列の、互いに対する同一
性の程度をいい、一般に「相同性」を有するとは、同一性または類似性の程度が高いことをいう。従って、ある2つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。2種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。2つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でDNA配列が、代表的には少なくとも50％同一である場合、好ましくは少なくとも70％同一である場合、より好ましくは少なくとも80％、90％、95％、96％、97％、98％または99％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。従って本明細書において「相同体」または「相同遺伝子産物」は、本明細書にさらに記載する複合体のタンパク質構成要素と同じ生物学的機能を発揮する、別の種、好ましくは哺乳動物におけるタンパク質を意味する。こうような相同体はまた、「オルソログ遺伝子産物」とも称されることもある。本発明の目的に合致する限り、このような相同体、相同遺伝子産物、オルソログ遺伝子産物等も用いることができることが理解される。
　アミノ酸は、その一般に公知の3文字記号か、またはIUPAC－IUB　Biochemical　Nomenclature　Commissionにより推奨される1文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された1文字コードにより言及され得る。本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるBLASTを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、NCBIのBLAST2.2.28（2013.4.2発行）を用いて行うことができる。本明細書における同一性の値は通常は上記BLASTを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメータの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。類似性は、同一性に加え、類似のアミノ酸についても計算に入れた数値である。
　本発明の一実施形態において「数個」は、例えば、10、8、6、5、4、3、または2個であってもよく、それらいずれかの値以下であってもよい。1または数個のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入、または他のアミノ酸による置換を受けたポリペプチドが、その生物学的活性を維持することは知られている（Market　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.1984　Sep;81(18):　5662-5666.、Zoller　et　al.,Nucleic　Acids　Res.　1982　Oct　25;10(20):　6487-6500.、Wang　et　al.,　Science.　1984　Jun　29;224(4656):　1431-1433.）。欠失等がなされた抗体は、例えば、部位特異的変異導入法、ランダム変異導入法、または抗体ファージ・ライブラリを用いたバイオパニング等によって作製できる。部位特異的変異導入法としては、例えばKOD-Plus-　Mutagenesis　Kit　(TOYOBO　CO.,　LTD.)を使用できる。欠失等を導入した変異型抗体から、野生型と同様の活性のある抗体を選択することは、FACS解析やELISA等の各種キャラクタリゼーションを行うことで可能である。
　本発明の一実施形態において「90％以上」は、例えば、90、95、96、97、98、99、または100％以上であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。上記「相同性」は、2つもしくは複数間のアミノ酸配列において相同なアミノ酸数の割合を、当該技術分野で公知の方法に従って算定してもよい。割合を算定する前には、比較するアミノ酸配列群のアミノ酸配列を整列させ、同一アミノ酸の割合を最大にするために必要である場合はアミノ酸配列の一部に間隙を導入する。整列のための方法、割合の算定方法、比較方法、およびそれらに関連するコンピュータプログラムは、当該技術分野で従来からよく知られている(例えば、BLAST、GENETYX等)。本明細書において「相同性」は、特に断りのない限りNCBIのBLASTによって測定された値で表すことができる。BLASTでアミノ酸配列を比較するときのアルゴリズムには、Blastpをデフォルト設定で使用できる。測定結果はPositivesまたはIdentitiesとして数値化される。
　本明細書において「ストリンジェント（な）条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法などを用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、コロニーあるいはプラーク由来のDNAを固定化したフィルターを用いて、0．7～1．0MのNaCl存在下、65℃でハイブリダイゼーションを行った後、0．1～2倍濃度のSSC（saline-sodium　citrate）溶液（1倍濃度のSSC溶液の組成は、150mM　塩化ナトリウム、15mM　クエン酸ナトリウムである）を用い、65℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。「ストリンジェントな条件」は、例えば、以下の条件を採用することができる。(1)洗浄のために低イオン強度および高温度を用いる(例えば、50℃で、0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1％のドデシル硫酸ナトリウム)、(2)ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤を用いる(例えば、42℃で、50％(v/v)ホルムアミドと0.1％ウシ血清アルブミン/0.1％フィコール/0.1％のポリビニルピロリドン/50mMのpH6.5のリン酸ナトリウムバッファー、および750mMの塩化ナトリウム、75mMクエン酸ナトリウム)、または(3)20％ホルムアミド、5×SSC、50mMリン酸ナトリウム(pH7.6)、5×デンハード液、10％硫酸デキストラン、および20mg/mlの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中で、37℃で一晩インキュベーションし、次に約37-50℃で1×SSCでフィルターを洗浄する。なお、ホルムアミド濃度は50％またはそれ以上であってもよい。洗浄時間は、5、15、30、60、もしくは120分、またはそれら以上であってもよい。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーに影響する要素としては温度、塩濃度など複数の要素が考えられ、詳細はAusubelet　al.,　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Wiley　Interscience　Publishers,(1995)を参照することができる。「高度にストリンジェントな条件」の例は、０．００１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、６５～６８℃、または０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、および５０％　ホルムアミド、４２℃である。ハイブリダイゼーション、Molecular　Cloning　2nd　ed.,Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Supplement　1-38,　DNA　Cloning1:Core　Techniques,　A　Practical　Approach,　Second　Edition,　Oxford　University　Press(1995)などの実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、A配列のみまたはT配列のみを含む配列が除外される。中程度のストリンジェントな条件は、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することができ、Sambrookら、Molecular　Cloning:A　Laboratory　Manual、第3版、Vol．1、7.42-7.45　Cold　Spring　Harbor　Laboratory　Presｓ，2001に示され、そしてニトロセルロースフィルターに関し、５×ＳＳＣ、０．５％　ＳＤＳ、１．０ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の前洗浄溶液、約４０－５０°Cでの、約５０％ホルムアミド、２×ＳＳＣ－６×ＳＳＣ（または約４２°Cでの約５０％ホルムアミド中の、スターク溶液（Ｓｔａｒｋ’ｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）などの他の同様のハイブリダイゼーション溶液）のハイブリダイゼーション条件、および約６０°C、０．５×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳの洗浄条件の使用が含まれる。従って、本発明において使用されるポリペプチドには、本発明で特に記載されたポリペプチドをコードする核酸分子に対して、高度または中程度でストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるポリペプチドも包含される。
　本明細書において「精製された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものをいう。従って、通常、精製された生物学的因子におけるその生物学的因子の純度は、その生物学的因子が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。本明細書中で使用される用語「精製された」は、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質または生物学的因子は、好ましくは「精製された」物質である。本明細書で使用される「単離された」物質または生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その物質または生物学的因子に天然に随伴する因子が実質的に除去されたものをいう。本明細書中で使用される用語「単離された」は、その目的に応じて変動するため、必ずしも純度で表示される必要はないが、必要な場合、好ましくは少なくとも75重量％、より好ましくは少なくとも85重量％、よりさらに好ましくは少なくとも95重量％、そして最も好ましくは少なくとも98重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。本発明で用いられる物質は、好ましくは「単離された」物質または生物学的因子である。
　本明細書において「対応する」アミノ酸または核酸あるいは部分とは、あるポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子（例えば、FSTL1）において、比較の基準となるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおける所定のアミノ酸またはヌクレオチドあるいは部分と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸またはヌクレオチドをいい、特に酵素分子にあっては、活性部位中の同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸をいい、複合分子にあっては対応する部分（例えば、膜貫通ドメイン等）をいう。例えば、アンチセンス分子であれば、そのアンチセンス分子の特定の部分に対応するオルソログにおける同様の部分であり得る。対応するアミノ酸は、例えば、システイン化、グルタチオン化、S－S結合形成、酸化（例えば、メチオニン側鎖の酸化）、ホルミル化、アセチル化、リン酸化、糖鎖付加、ミリスチル化などがされる特定のアミノ酸であり得る。あるいは、対応するアミノ酸は、二量体化を担うアミノ酸であり得る。このような「対応する」アミノ酸または核酸は、一定範囲にわたる領域またはドメインであってもよい。従って、そのような場合、本明細書において「対応する」領域またはドメインと称される。このような対応する領域またはドメインは、本発明において複合分子を設計する場合に有用である。
　本明細書において「対応する」遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）とは、ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、または有することが予測される遺伝子（例えば、ポリヌクレオチド配列または分子）をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在する場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子に対応する遺伝子は、その遺伝子のオルソログであり得る。従って、ヒトのFSTL1は、それぞれ、他の動物（特に哺乳動物）において、対応するFSTL1を見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を用いて同定することができる。従って、例えば、ある動物（例えば、マウス）における対応する遺伝子は、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、FSTL1等）は、配列番号７５８～７６１等の配列をクエリ配列として用いてその動物の配列を含むデータベースを検索することによって見出すことができる。
　本明細書において「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがn）に対して、1～n－1までの配列長さを有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、11など）もまた、下限として適切であり得る。本明細書において、このようなフラグメントは、例えば、全長のものがマーカーまたは標的分子として機能する場合、そのフラグメント自体もまたマーカーまたは標的分子としての機能を有する限り、本発明の範囲内に入ることが理解される。
　本発明に従って、用語「活性」は、本明細書において、最も広い意味での分子の機能を指す。活性は、限定を意図するものではないが、概して、分子の生物学的機能、生化学的機能、物理的機能または化学的機能を含む。活性は、例えば、酵素活性、他の分子と相互作用する能力、および他の分子の機能を活性化するか、促進するか、安定化するか、阻害するか、抑制するか、または不安定化する能力、安定性、特定の細胞内位置に局在する能力を含む。適用可能な場合、この用語はまた、最も広い意味でのタンパク質複合体の機能にも関する。
　本明細書において「生物学的機能」とは、ある遺伝子またはそれに関する核酸分子もしくはポリペプチドについて言及するとき、その遺伝子、核酸分子またはポリペプチドが生体内において有し得る特定の機能をいい、これには、例えば、特異的な抗体の生成、酵素活性、抵抗性の付与等を挙げることができるがそれらに限定されない。本発明においては、例えば、FSTL1がＶＬＤＬの取り込みの阻害等に関与する機能などを挙げることができるがそれらに限定されない。本明細書において、生物学的機能は、「生物学的活性」によって発揮され得る。本明細書において「生物学的活性」とは、ある因子（例えば、ポリヌクレオチド、タンパク質など）が、生体内において有し得る活性のことをいい、種々の機能（例えば、転写促進活性）を発揮する活性が包含され、例えば、ある分子との相互作用によって別の分子が活性化または不活化される活性も包含される。2つの因子が相互作用する場合、その生物学的活性は、その二分子の間の結合およびそれによって生じる生物学的変化であり得、そして、例えば、一つの分子を抗体を用いて沈降させたときに他の分子も共沈するとき、2分子は結合していると考えられる。従って、そのような共沈を見ることが一つの判断手法として挙げられる。例えば、ある因子が酵素である場合、その生物学的活性は、その酵素活性を包含する。別の例では、ある因子がリガンドである場合、そのリガンドが対応するレセプターへの結合を包含する。そのような生物学的活性は、当該分野において周知の技術によって測定することができる。従って、「活性」は、結合（直接的または間接的のいずれか）を示すかまたは明らかにするか；応答に影響する（すなわち、いくらかの曝露または刺激に応答する測定可能な影響を有する）、種々の測定可能な指標をいい、例えば、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに直接結合する化合物の親和性、または例えば、いくつかの刺激後または事象後の上流または下流のタンパク質の量あるいは他の類似の機能の尺度が挙げられる。
　本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」とは、その遺伝子などがインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好ましくは、遺伝子、ポリヌクレオチドなどが、転写および翻訳されて、ポリペプチドの形態になることをいうが、転写されてmRNAが作製されることもまた発現の一態様である。したがって、本明細書において「発現産物」とは、このようなポリペプチドもしくはタンパク質、またはｍRNAを含む。より好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシングを受けたものであり得る。例えば、FSTL1の発現レベルは、任意の方法によって決定することができる。具体的には、FSTL1のmRNAの量、FSTL1タンパク質の量、そしてFSTL1タンパク質の生物学的な活性を評価することによって、FSTL1の発現レベルを知ることができる。このような測定値はコンパニオン診断において使用し得る。FSTL1のmRNAやタンパク質の量は、本明細書の他の箇所に詳述したような方法あるいは他の当該分野において公知の方法によって決定することができる。
　本明細書において「機能的等価物」とは、対象となるもとの実体に対して、目的となる機能が等価であるが構造が異なる任意のものをいう。従って、「FSTL1」またはその抗体の機能的等価物は、FSTL1またはその抗体自体ではないが、FSTL1またはその抗体の変異体または改変体（例えば、アミノ酸配列改変体等）であって、FSTL1の持つ生物学的作用を有するもの、ならびに、作用する時点において、FSTL1またはその抗体自体またはこのFSTL1またはその抗体の変異体もしくは改変体に変化することができるもの（例えば、FSTL1またはその抗体自体またはFSTL1またはその抗体の変異体もしくは改変体をコードする核酸、およびその核酸を含むベクター、細胞等を含む）が包含されることが理解される。本発明において、FSTL1またはその抗体の機能的等価物は、格別に言及していなくても、FSTL1またはその抗体と同様に用いられうることが理解される。機能的等価物は、データベース等を検索することによって、見出すことができる。本明細書において「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および／または性質を有する他の核酸塩基配列を見出すことをいう。電子的な検索としては、BLAST（Altschul　et　al.,J.Mol.Biol.　215:403-410(1990))、FASTA　(Pearson　&　Lipman,　Proc.Natl.Acad.Sci.,USA　85:2444-2448(1988)）、Smith　and　Waterman法（Smith　and　Waterman,　J.Mol.Biol.147:　195-197(1981)）、およびNeedleman　and　Wunsch法（Needleman　and　Wunsch,　J.Mol.Biol.　48:443-453(1970)）などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジェントハイブリダイゼーション、ゲノムDNAをナイロンメンブレン等に貼り付けたマクロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ（マイクロアレイアッセイ）、PCRおよびin　situハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書において、本発明において使用される遺伝子には、このような電子的検索、生物学的検索によって同定された対応遺伝子も含まれるべきであることが意図される。
　本発明の機能的等価物としては、アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加されたものを用いることができる。本明細書において、「アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加」とは、部位特異的突然変異誘発法等の周知の技術的方法により、あるいは天然の変異により、天然に生じ得る程度の複数個の数のアミノ酸の置換等により改変がなされていることを意味する。改変アミノ酸配列は、例えば1～30個、好ましくは1～20個、より好ましくは1～9個、さらに好ましくは1～5個、特に好ましくは1～2個のアミノ酸の挿入、置換、もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加がなされたものであることができる。改変アミノ酸配列は、好ましくは、そのアミノ酸配列が、FSTL1、抗体等のポリペプチドのアミノ酸配列において1または複数個（好ましくは1もしくは数個または1、2、3、もしくは4個）の保存的置換を有するアミノ酸配列であってもよい。ここで「保存的置換」とは、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、1または複数個のアミノ酸残基を、別の化学的に類似したアミノ酸残基で置換えることを意味する。例えば、ある疎水性残基を別の疎水性残基によって置換する場合、ある極性残基を同じ電荷を有する別の極性残基によって置換する場合などが挙げられる。このような置換を行うことができる機能的に類似のアミノ酸は、アミノ酸毎に当該分野において公知である。具体例を挙げると、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニンなどが挙げられる。極性（中性）アミノ酸としては、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システインなどが挙げられる。陽電荷をもつ（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジン、リジンなどが挙げられる。また、負電荷をもつ（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などが挙げられる。
　　本明細書において「抑制剤」とは、対象となる実体（例えば、レセプターまたは細胞）に対してそのレセプターまたは細胞の生物学的作用を阻害する物質または因子をいう。本発明のFSTL1の抑制剤としては、対象となるFSTL1またはFSTL1を発現する細胞等の機能を一時的または永久に低下または消失させることができる因子である。このような因子には、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス、siRNA等のRNAi因子等の核酸の形態のもの等を挙げることができるがこれらに限定されない。
　本明細書において「アゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用を発現またはそれを増強する物質をいう。天然のアゴニスト（リガンドとも称される）のほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。
　本明細書において「アンタゴニスト」とは、対象となる実体（例えば、レセプター）に対してそのレセプターの生物学的作用の発現を抑制または阻害する物質をいう。天然のアンタゴニストのほか、合成されたものや改変されたもの等を挙げることができる。アゴニスト（またはリガンド）と競合的に抑制または阻害するもののほか、非競合的に抑制または阻害するもの等がある。アゴニストを改変することによっても得られうる。生理現象を抑制または阻害することから、アンタゴニストは抑制剤（阻害剤）または抑制（する）因子の概念に包含されうる。したがって、本明細書においては実質的にアンタゴニストは「抑制剤」と同義で用いられる。
　本明細書において「抗体」は、広義にはポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体、ならびにそれらのフラグメント、例えばFvフラグメント、Fab’フラグメント、F（ab’）2およびFabフラグメント、ならびにその他の組換えにより生産された結合体または機能的等価物（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー（diabody）、sc（Fv）2（singlechain　（Fv）2）、scFv－Fc）を含む。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体は、FSTL1のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「抗FSTL1抗体」は、FSTL1に結合性を有する抗体を含む。この抗FSTL1抗体の生産方法は特に限定されないが、例えば、FSTL1を哺乳類または鳥類に免疫することによって生産してもよい。
　また、「FSTL1に対する抗体（抗FSTL1抗体）、または、そのフラグメント」の「機能的等価物」は、例えば、抗体の場合、FSTL1の結合活性、必要であれば抑制活性を有する抗体自体およびそのフラグメント自体のほか、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（singlechain　（Fv）2）、scFv－Fcなども包含されることが理解される。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、悪性腫瘍の増殖が特に強く抑制される観点からは、FSTL1の特定のエピトープに特異的に結合する抗FSTL1抗体であることが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体であれば、ポリクローナル抗体に比べて、効率的にFSTL1に対して作用させることができる。抗FSTL1モノクローナル抗体を効率的に生産する観点からは、FSTL1をニワトリに免役することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体の抗体クラスは特に限定されないが、例えばIgM、IgD、IgG、IgA、IgE、またはIgYであってもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、抗原結合活性を有する抗体断片（以下、「抗原結合性断片」と称することもある）であっても良い。この場合、安定性または抗体の生産効率が上昇する等の効果がある。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、融合タンパク質であってもよい。この融合タンパク質は、抗FSTL1抗体のNまたはC末端に、ポリペプチドまたはオリゴペプチドが結合したものであってもよい。ここで、オリゴペプチドは、Hisタグであってもよい。また融合タンパク質は、マウス、ヒト、またはニワトリの抗体部分配列を融合したものであってもよい。それらのような融合タンパク質も、本実施形態に係る抗FSTL1抗体の一形態に含まれる。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、例えば、精製FSTL1、FSTL1発現細胞、またはFSTL1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体であってもよい。FSTL1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、精製FSTL1、FSTL1発現細胞胞またはFSTL1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体の、CDRセットを有する抗体であってもよい。FSTL1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、FSTL1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。CDRセットとは、重鎖CDR1、2、および3、並びに、軽鎖CDR1、2、および3のセットである。
　本発明の一実施形態において「FSTL1発現細胞」は、例えば、FSTL1をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入後、FSTL1を発現させることによって得てもよい。ここでFSTL1は、FSTL1断片を含む。また本発明の一実施形態において「FSTL1含有脂質膜」は、例えば、FSTL1と脂質二重膜を混合することによって得てもよい。ここでFSTL1は、FSTL1断片を含む。また本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、FSTL1陽性悪性腫瘍に対する治療効果を高める観点からは、抗原をニワトリに免疫する工程を経て得られる抗体、またはその抗体のCDRセットを有する抗体が好ましい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、目的を達成する限り、どのような結合力を有していてもよく、例えば、KD値（kd　/　ka）が、少なくとも１．０×１０-６(M)以下、２．０×１０-６(M)　以下、５．０×１０-６(M)　以下、１．０×１０-７以下であるものを挙げることができるがこれらに限定されず、通常は、KD値（kd/ka）は、1.0×10-7(M)以下であってもよく、1.0×10-9(M)あるいは1.0×10-10(M)以下であり得る。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、ADCCまたはCDC活性を有していてもよい。
　本発明の一実施形態に係る抗FSTL1抗体は、FSTL1の野生型または変異型に結合する抗体であってもよい。変異型とは、個体間のDNA配列の差異に起因するものを含む。野生型または変異型のFSTL1のアミノ酸配列は、配列番号７５９または配列番号７６１に示すアミノ酸配列に対し、好ましくは80％以上、より好ましくは90％以上、より好ましくは95％以上、特に好ましくは98％以上の相同性を有している。
　本発明の一実施形態において「抗体」は、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができる分子またはその集団を含むまた抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。抗体は、様々な形態で存在することができ、例えば、全長抗体（Fab領域とFc領域を有する抗体）、Fv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、diabody、一本鎖抗体（例えば、scFv）、dsFv、多価特異的抗体（例えば、二価特異的抗体）、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド、キメラ抗体（例えば、マウス-ヒトキメラ抗体、ニワトリ-ヒトキメラ抗体等）、マウス抗体、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはそれらの同等物（または等価物）からなる群から選ばれる1種以上の形態であってもよい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本発明で用いられる抗FSTL1抗体は、FSTL1のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のFSTL1タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
　本発明の一実施形態において「ポリクローナル抗体」は、例えば、抗原に特異的なポリクローナル抗体の産生を誘導するために、哺乳類（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、サル等）、鳥類等に、目的の抗原を含む免疫原を投与することによって生成することが可能である。免疫原の投与は、1つ以上の免疫剤、および所望の場合にはアジュバントの注入をしてもよい。アジュバントは、免疫応答を増加させるために使用されることもあり、フロイントアジュバント（完全または不完全）、ミネラルゲル（水酸化アルミニウム等）、または界面活性物質（リゾレシチン等）等を含んでいてもよい。免疫プロトコールは、当該技術分野で公知であり、選択する宿主生物に合わせて、免疫応答を誘発する任意の方法によって実施される場合がある（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):86-91.）。
　本発明の一実施形態において「モノクローナル抗体」は、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に単一のエピトープに対応する抗体である場合を含む。または、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に同一である抗体であってもよい。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、異なるエピトープに対応する異なる抗体を典型的に含むような、通常のポリクローナル抗体とは異なる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていないハイブリドーマ培養から合成できる点で有用である。「モノクローナル」という形容は、実質的に均一な抗体集団から得られるという特徴を示していてもよいが、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、モノクローナル抗体は、"Kohler　G,　Milstein　C.,　Nature.　1975　Aug7;256(5517):495-497."に掲載されているようなハイブリドーマ法と同様の方法によって作製してもよい。あるいは、モノクローナル抗体は、米国特許第4816567号に記載されているような組換え法と同様の方法によって作製してもよい。または、モノクローナル抗体は、"Clackson　et　al.,　Nature.　1991　Aug　15;352(6336):　624-628."、または"Marks　et　al.,　J　Mol　Biol.　1991　Dec　5;222(3):　581-597."に記載されているような技術と同様の方法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。または、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):92-96."に掲載されている方法でよって作製してもよい。
　抗体の大量生産については、当該分野で公知の任意の手法を用いることができるが、例えば、代表的な抗体の大量生産系の構築および抗体製造としては、以下を例示することができる。すなわち、CHO細胞にH鎖抗体発現ベクターおよびL鎖抗体発現ベクターをトランスフェクションし、選択試薬であるG418およびZeocinを用いて培養を行い、限界希釈法によるクローニングを行う。クローニング後、安定的に抗体を発現しているクローンをELISA法により選択する。選択したCHO細胞を用いて拡大培養し、抗体を含む培養上清を回収する。回収した培養上清からProtein　AもしくはProtein　G精製により抗体を精製することができる。
　本発明の一実施形態において「Fv抗体」は、抗原認識部位を含む抗体である。この領域は、非共有結合による1つの重鎖可変ドメインおよび1つの軽鎖可変ドメインの二量体を含む。この構成において、各可変ドメインの3つのCDRは相互に作用してVH-VL二量体の表面に抗原結合部位を形成することができる。
　本発明の一実施形態において「Fab抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素パパインで処理して得られる断片のうち、H鎖のN末端側約半分とL鎖全体が一部のジスルフィド結合を介して結合した抗体である。Fabは、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体を、タンパク質分解酵素パパインで処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「F(ab’)2抗体」は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む抗体をタンパク質分解酵素ペプシンで処理して得られる断片のうち、Fabに相当する部位を2つ含む抗体である。F(ab’)2は、例えば、Fab領域およびFc領域を含む本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体を、タンパク質分解酵素ペプシンで処理して得ることができる。また、例えば、下記のFab’をチオエーテル結合あるいはジスルフィド結合させることで、作製することができる。
　本発明の一実施形態において「Fab’抗体」は、例えば、F(ab’)2のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断して得られる抗体である。例えば、F(ab’)2を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。
　本発明の一実施形態において「scFv抗体」は、VHとVLとが適当なペプチドリンカーを介して連結した抗体である。scFv抗体は、例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体のVHおよびVLをコードするcDNAを取得し、VH-ペプチドリンカー-VLをコードするポリヌクレオチドを構築し、そのポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「diabody」は、二価の抗原結合活性を有する抗体である。二価の抗原結合活性は、同一であることもできるし、一方を異なる抗原結合活性とすることもできる。diabodyは、例えば、scFvをコードするポリヌクレオチドをペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが8残基以下となるように構築し、得られたポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
　本発明の一実施形態において「dsFv」は、VHおよびVL中にシステイン残基を導入したポリペプチドを、上記システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させた抗体である。システイン残基に導入する位置はReiterらにより示された方法(Reiter　et　al.,　Protein　Eng.　1994　May;7(5):697-704.)に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。
　本発明の一実施形態において「抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド」は、抗体のVH、VL、またはそれらのCDR1、2、もしくは3を含んで構成される抗体である。複数のCDRを含むペプチドは、直接または適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。
　上記のFv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、scFv抗体、diabody、dsFv抗体、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド（以下、「Fv抗体等」と称することもある）の生産方法は特に限定しない。例えば、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体におけるFv抗体等の領域をコードするDNAを発現用ベクターに組み込み、発現用細胞を用いて生産できる。または、Fmoc法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、tBOC法（t-ブチルオキシカルボニル法）などの化学合成法によって生産してもよい。なお本発明の一実施形態に係る抗原結合性断片は、上記Fv抗体等の1種以上であってもよい。
　本発明の一実施形態において「キメラ抗体」は、例えば、異種生物間における抗体の可変領域と、抗体の定常領域とを連結したもので、遺伝子組換え技術によって構築できる。マウス-ヒトキメラ抗体は、例えば、"Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　USA.　1994　Feb　1;91(3):969-973."に記載の方法で作製できる。マウス-ヒトキメラ抗体を作製するための基本的な方法は、例えば、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列を、哺乳類細胞の発現ベクター中にすでに存在するヒト抗体定常領域をコードする配列に連結する。または、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列をヒト抗体定常領域をコードする配列に連結した後、哺乳類細胞発現ベクターに連結してもよい。ヒト抗体定常領域の断片は、任意のヒト抗体のH鎖定常領域およびヒト抗体のL鎖定常領域のものとすることができ、例えばヒトH鎖のものについてはCγ1、Cγ2、Cγ3またはCγ4を、L鎖のものについてはCλまたはCκを各々挙げることができる。
　本発明の一実施形態において「ヒト化抗体」は、例えば、非ヒト種由来の1つ以上のCDR、およびヒト免疫グロブリン由来のフレームワーク領域（FR）、さらにヒト免疫グロブリン由来の定常領域を有し、所望の抗原に結合する抗体である。抗体のヒト化は、当該技術分野で既知の種々の手法を使用して実施可能である(Almagro　et　al.,　Front　Biosci.　2008　Jan　1;13:　1619-1633.)。例えば、CDRグラフティング（Ozaki　et　al.,Blood.　1999　Jun　1;93(11):　3922-3930.）、Re-surfacing(Roguska　et　al.,　Proc　Natl　Acad　Sci　U　S　A.　1994　Feb　1;91(3):969-973.)、またはFRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）などが挙げられる。抗原結合を改変するために（好ましくは改善するために）、ヒトFR領域のアミノ酸残基は、CDRドナー抗体からの対応する残基と置換してもよい。このFR置換は、当該技術分野で周知の方法によって実施可能である（Riechmann　et　al.,　Nature.　1988　Mar　24;332(6162):323-327.）。例えば、CDRとFR残基の相互作用のモデリングによって抗原結合に重要なFR残基を同定してもよい。または、配列比較によって、特定の位置で異常なFR残基を同定してもよい。好ましい実施形態では、松田らのMolecular Immunology 43(2006)634-642 の報告に基づきヒト化抗体を生産してもよい。
　本発明の好ましい実施形態では、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９２６、９２８、９３０および９３２）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９４２、９４４、９４６および９４８）を有するヒト化抗体が使用され得るがこれに限定されない。これらのヒト化抗体の全長配列は、このヒト化抗体において、Ｈ（１）重鎖の全長配列は、ＩｇＧ１型が配列番号９４９および９５０（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、ＩｇＧ４型が配列番号９５５および９５６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、ＩｇＧ１型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号９５１および９５２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号９５７および９５８（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号９５３および９５４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号９５９および９６０（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号９６１および９６２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号１００３および１００４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号１００５および１００６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。理論に束縛されることを望まないが、Ｈ（２）－Ｌ（１）は、Ｈ（３）－Ｌ（１）（Ｈ（３）のフレームワークは（それぞれ配列番号９３４、９３６、９３８および９４０））およびＨ（１）－Ｌ（１）（Ｈ（１）のフレームワークは（それぞれ配列番号９１８、９２０、９２２および９２４））よりも１桁高い活性が観察されているからである。
　本発明の一実施形態において「ヒト抗体」は、例えば、抗体を構成する重鎖の可変領域および定常領域、軽鎖の可変領域および定常領域を含む領域が、ヒトイムノグロブリンをコードする遺伝子に由来する抗体である。主な作製方法としてはヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法、ファージディスプレイ法などがある。ヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法では、内因性Igをノックアウトしたマウスに機能的なヒトのIg遺伝子を導入すれば、マウス抗体の代わりに多様な抗原結合能を持つヒト抗体が産生される。さらにこのマウスを免疫すればヒトモノクローナル抗体を従来のハイブリドーマ法で得ることが可能である。例えば、"Lonberg　et　al.,　Int　Rev　Immunol.　1995;13(1):65-93."に記載の方法で作製できる。ファージディスプレイ法は、典型的には大腸菌ウイルスの一つであるM13やT7などの繊維状ファージのコートタンパク質（g3p、g10p等）のN末端側にファージの感染性を失わないよう外来遺伝子を融合タンパク質として発現させるシステムである。例えば、"Vaughan　et　al.,　Nat　Biotechnol.　1996　Mar;14(3):309-314."に記載の方法で作製できる。
　また抗体は、CDR-grafting(Ozaki　et　al.,　Blood.　1999　Jun　1;93(11):3922-3930.)によって任意の抗体に本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをグラフティングすることで作製してもよい。または、本発明の実施形態に係る抗FSTL1抗体の重鎖CDRまたは軽鎖CDRをコードするDNAと、公知のヒトまたはヒト以外の生物由来の抗体の、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域をコードするDNAとを、当該技術分野で公知の方法に従ってベクターに連結後、公知の細胞を使用して発現させることによって得ることができる。このとき、抗FSTL1抗体の標的抗原への作用効率を上げるために、当該分野で公知の方法（例えば、抗体のアミノ酸残基をランダムに変異させ、反応性の高いものをスクリーニングする方法、またはファージディスプレイ法等）を用いて、重鎖CDRまたは軽鎖CDRを除く領域を最適化してもよい。また、例えば、FRシャッフル（Damschroder　et　al.,　Mol　Immunol.　2007　Apr;44(11):3049-3060.　Epub　2007　Jan　22.）、またはバーニヤゾーンのアミノ酸残基またはパッケージング残基を置換する方法（特開2006-241026、またはFooteet　al.,　J　Mol　Biol.1992　Mar　20;224(2):487-499.）を用いて、FR領域を最適化してもよい。
　本発明の一実施形態において「重鎖」は、典型的には、全長抗体の主な構成要素である。重鎖は、通常、軽鎖とジスルフィド結合および非共有結合によって結合している。重鎖のN末端側のドメインには、同種の同一クラスの抗体でもアミノ酸配列が一定しない可変領域（VH）と呼ばれる領域が存在し、一般的に、VHが抗原に対する特異性、親和性に大きく寄与していることが知られている。例えば、"Reiter　et　al.,　J　Mol　Biol.　1999　Jul　16;290(3):685-98."にはVHのみの分子を作製したところ、抗原と特異的に、高い親和性で結合したことが記載されている。さらに、"Wolfson　W,　Chem　Biol.　2006　Dec;13(12):1243-1244."には、ラクダの抗体の中には、軽鎖を持たない重鎖のみの抗体が存在していることが記載されている。
　本発明の一実施形態において「CDR（相補性決定領域）」は、抗体において、実際に抗原に接触して結合部位を形成している領域である。一般的にCDRは、抗体のFv（重鎖可変領域可変領域（VH）および軽鎖可変領域（VL）を含む）上に位置している。また一般的にCDRは、5～30アミノ酸残基程度からなるCDR1、CDR2、CDR3が存在する。そして、特に重鎖のCDRが抗体の抗原への結合に寄与していることが知られている。またCDRの中でも、CDR3が抗体の抗原への結合における寄与が最も高いことが知られている。例えば、"Willy　et　al.,　Biochemical　and　Biophysical　Research　Communications　Volume　356,　Issue　1,　27　April　2007,　Pages　124-128"には、重鎖CDR3を改変させることで抗体の結合能を上昇させたことが記載されている。CDR以外のFv領域はフレームワーク領域（FR）と呼ばれ、FR1、FR2、FR3およびFR4からなり、抗体間で比較的よく保存されている（Kabatet　al.,「Sequence　of　Proteins　of　Immunological　Interest」US　Dept.　Health　and　Human　Services,1983.）。即ち、抗体の反応性を特徴付ける要因はCDRにあり、特に重鎖CDRにあるといえる。
　CDRの定義およびその位置を決定する方法は複数報告されている。例えば、Kabatの定義(Sequences　of　Proteins　of　Immunological　Interest,　5th　ed.,　Public　Health　Service,　National　Institutes　of　Health,　Bethesda,　MD.　(1991))、またはChothiaの定義(Chothiaet　al.,　J.　Mol.　Biol.,1987;196:901-917)を採用してもよい。本発明の一実施形態においては、Kabatの定義を好適な例として採用するが、必ずしもこれに限定されない。また、場合によっては、Kabatの定義とChothiaの定義の両方を考慮して決定しても良く、例えば、各々の定義によるCDRの重複部分を、または各々の定義によるCDRの両方を含んだ部分をCDRとすることもできる。そのような方法の具体例としては、Kabatの定義とChothiaの定義の折衷案である、Oxford　Molecular's　AbM　antibody　modeling　softwareを用いたMartinらの方法（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,　1989;86:9268-9272）がある。このようなCDRの情報を用いて、本発明に使用されうる変異体を生産することができる。このような抗体の変異体では、もとの抗体のフレームワークに１または数個（例えば、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個）の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まないように生産することができる。
　本明細書において「抗原」（antigen）とは、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。本明細書において「免疫原」（immunogen）とは、抗原特異的免疫応答を生じるリンパ球活性化を開始し得る抗原をいう。本明細書において「エピトープ」または「抗原決定基」とは、抗体またはリンパ球レセプターが結合する抗原分子中の部位をいう。エピトープを決定する方法は、当該分野において周知であり、そのようなエピトープは、核酸またはアミノ酸の一次配列が提供されると、当業者はそのような周知慣用技術を用いて決定することができる。本発明の抗体は、エピトープが同じであれば、他の配列を有する抗体であっても同様に利用することができることが理解される。
　本明細書において使用される抗体は、擬陽性が減じられる限り、どのような特異性の抗体を用いても良いことが理解される。従って、本発明において用いられる抗体は、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクローナル抗体であってもよい。
　本明細書において「手段」とは、ある目的（例えば、検出、診断、治療）を達成する任意の道具となり得るものをいい、特に、本明細書では、「選択的に認識する手段」とは、ある対象を他のものとは異なって認識することができる手段をいう。
　本明細書において使用される「悪性腫瘍」は、例えば、正常な細胞が突然変異を起こして発生する腫瘍を含む。悪性腫瘍は全身のあらゆる臓器や組織から生じ得る。特に識別しない場合、本明細書では「癌」「がん」と同義で用いる。この悪性腫瘍は、例えば、肺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、乳癌、大腸癌、小腸癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、前立腺癌、尿管癌、腎盂癌、尿管癌、陰茎癌、精巣癌、脳腫瘍、中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、頭頸部癌、グリオーマ、多形性膠芽腫、皮膚癌、メラノーマ、甲状腺癌、唾液腺癌、悪性リンパ腫、癌腫、肉腫、白血病および血液悪性腫瘍からなる群から選ばれる1種以上を含む。ここで、卵巣癌は、例えば、卵巣漿液性腺癌、または卵巣明細胞線癌を含む。子宮癌は、例えば、子宮内膜癌、または子宮頸癌を含む。頭頸部癌は、例えば、口腔癌、咽頭癌、喉頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、または甲状腺癌を含む。肺癌は、例えば、非小細胞肺癌、または小細胞肺癌を含む。また悪性腫瘍は、FSTL1陽性であってもよい。
　本明細書において「転移」（metastasis）とは、癌が体の原発部位から他の領域に広がるか移って新しい場所に類似した癌性の病巣が発達する過程を指す。「転移性」または「転移する」細胞は、隣接細胞との接着性接触を失い、血流またはリンパを通して疾患の原発部位から移動して、近隣の体構造に侵入する細胞である。本明細書において転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、転移を含む。本発明によれば、本発明による転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　本明細書において「骨転移」とは、骨への癌の転移を意味し、任意の起源の骨転移を含む。骨転移の用語は好ましくは、ただし限定はされないが、本明細書に記載の癌の、より好ましくは固形癌の、より好ましくは乳房、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、胸腺、子宮、睾丸、子宮頸部および／または肝臓の癌からなる群から選択される癌の、骨転移を含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、骨病変、好ましくは溶骨性および／または骨形成骨病変を含み、より好ましくは溶骨性骨病変、さらにより好ましくは骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の骨病変を含み、特に骨髄腫、悪性骨髄腫および／または多発性骨髄腫の溶骨性骨病変も含む。本発明によれば、骨転移の用語は好ましくはまた、ワルデンストレーム病の骨病変、好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性および／または骨形成骨病変、より好ましくはワルデンストレーム病の溶骨性骨病変も含む。本発明による骨転移は、より好ましくは、乳癌、肺癌、大腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、皮膚癌、胸腺癌、子宮癌、睾丸癌、子宮頸癌および肝臓癌からなる群から選択される癌の骨転移を含む。
　本明細書において「間葉系幹細胞」またはその略称「ＭＳＣ」とは、交換可能に使用することができる用語であり、自己再生能力を有し、骨芽細胞、軟骨細胞、及び脂肪細胞などの間葉系細胞に分化する能力を備えた多能性幹細胞を指し、代表的に、未分化の状態で増殖し、骨芽細胞、軟骨芽細胞及び脂肪芽細胞の全て又はいくつかへの分化が可能な幹細胞又はその前駆細胞の集団を広義に意味する。生体においては、間葉系幹細胞は骨髄、末梢血、臍帯血、脂肪組織中などに低頻度で存在する。間葉系幹細胞は、これらの組織から公知の方法で単離又は精製することができ、主な分子指標はCD45発現が陰性であることである。「単離」または「精製」とは、天然に存在する状態とは異なる状態に人為的に置かれること、例えば、天然に存在する状態から、目的とする成分以外の　成分を除去する操作が施されていることを意味する。例えば、ヒト間葉系幹細胞は、パーコールグラディエント法により骨髄液から単離することができる　（Hum.　Cell,　vol.10,　p.45-50,　1997）。或いは、骨髄穿刺後の造血幹細胞等の培養、継代によりヒト間葉系幹細胞を単離することができる（Journal　of　Autoimmunity,　30　(2008)　163-171）。
　間葉系幹細胞は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導または増強するが、この活性を獲得するためには活性化が必須であり、癌に関連して増加するＭＳＣは、様々な生体内因子によって活性化された「活性化ＭＳＣ」であると考えられており、本明細書でもこのようなＭＳＣは「活性化間葉系幹細胞」または「活性化ＭＳＣ」と称する。つまり、もともと免疫抑制活性を持っている細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）が増殖して総合的に免疫抑制活性が強くなる場合と、通常の何も活性を有さない細胞（つまり前駆細胞）が免疫抑制性を獲得してそれらの免疫抑制活性を有する細胞（例えば、制御性Ｔ細胞や寛容性樹状細胞、制御性樹状細胞、骨髄由来免疫抑制性細胞）に転じる割合が多くなって免疫抑制活性が強くなる場合、および、免疫機能を果たすことができない不全状態に陥る疲弊T細胞の誘導等の免疫破綻機序が存在するが、ＦＳＴＬ１はこれらを直接的および／または活性化ＭＳＣの増殖等を介して間接的に制御していると考えられる（Immunology　and　Cell　Biology　91:12-18,　2013）。理論に束縛されることを望まないが、本発明の抗体ＦＳＴＬ１抗体等は、このＭＳＣの免疫抑制の誘導または増強、および免疫不全等を阻害することができ、それによって、癌の悪化の原因となる免疫抑制を解除することができ、それゆえ、顕著な癌の予防または治療効果を達成することができるといえる。また、本発明ではこれらの免疫抑制性細胞および／または免疫不全性細胞等の免疫破綻の細胞を誘導するＭＳＣの誘導または増強について、この上流を阻害することができるため、免疫抑制機序および／または免疫不全機序等の免疫破綻機序の全体を一斉に解除できるものと考えられ、より効果的な治療が可能になるものと考えられる。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（癌関連MSCおよび活性化MSCを含む）の誘導や増殖の抑制は、例えば、ＭＳＣの脂肪細胞への分化の阻害を見ることで確認することができ、例えば、図１０３、１０４に示されている。理論に束縛されることを望まないが、FSTL1は免疫抑制性のMSC自身を増やし、および／または他の細胞の抑制活性を強めるものと考えられる。
　本明細書において「免疫抑制」（「免疫抑制」の用語は、このほか、免疫抑制性、免疫制御、免疫制御性、免疫調節、免疫調節性、免疫修飾、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）の「増強」とは、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）ことを包含する概念であり、結果として、免疫抑制が増強されることをいう。したがって、免疫抑制の増強には、免疫抑制性の細胞の能力が増強されることおよび免疫抑制性の細胞が増加する（免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強および／または免疫抑制性の細胞の増殖が促進されるおよび／または免疫抑制性ではない細胞が免疫抑制性の細胞に分化されることを含む）の概念が含まれることが理解される。ＭＳＣ細胞の免疫抑制性の細胞の誘導の形態としては、制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞への分化が促進されること、制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の免疫抑制活性の増強、および制御性Ｔ細胞等の免疫抑制性の細胞の増殖が包含され、結果として免疫抑制性が増強されることが包含される。
　本明細書において、「免疫抑制性の細胞」（「免疫抑制性」の用語は、このほか、免疫制御性、免疫調節性、免疫修飾性とも言われ、これらは当該分野で交換可能に使用される用語である。）とは、免疫能を抑制する働きを有する細胞を指し、代表的には、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞等を挙げることができるがそれらに限定されない。
　間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が免疫機能を破壊する機序として、上記で説明したような免疫抑制のみならず、免疫不全も役割を果たしていることが知られており、これらは、合わせて「免疫破綻」と総称される。
　本明細書において「免疫不全」とは、免疫系を構成する細胞要素の一部あるいはいくつかの欠損あるいは機能不全によって，正常免疫機構に障害を生じた状態をいう。これに起因する病態を免疫不全症(immunodeficiency　diseases)と総称する。免疫不全症は一次性と二次性に大別され，前者は主に先天性の遺伝的異常に起因するもので，後者は薬剤やＸ線など物理化学的因子，ウイルスなどの感染症，栄養状態などの外的環境因子によるものをいう。障害部位は，抗体産生などＢ細胞領域の機能不全，細胞性免疫にかかわるＴ細胞領域の異常，補体系や貪食機能など貪食系細胞機能の障害などさまざまであるとされている。「疲弊T細胞」が免疫不全の主な指標である。抗PD-1抗体などは、この「疲弊／不全」を阻害できる抗体としても開発されている。
　本明細書において「免疫破綻」とは免疫抑制および免疫不全を合わせた概念をいう。免疫破綻が起こると、より生存に有利な免疫原性の低いがん細胞が選ばれて増殖する（平衡相（免疫細胞とがん細胞との相互作用により、消えもしない、大きくもならないといった状態）から逃避相へ移行する）。そして、平衡相の終わりから逃避相にかけての短い時間に、がんの免疫原性が低下すると考えられており、がん細胞を殺すはずのT細胞が逆説的にこの役割を果たしているとされている。
　本明細書において「疲弊」（exhaustion）とは抗原の長期的な曝露によって，T細胞上にPD-1，CTLA4，TIM3などさまざまな共抑制分子（後述）が誘導される結果，T細胞が機能不全状態に陥ることをいう。慢性感染症やがんの際に，T細胞の不応答性が誘導される原因と考えられている。そのようなT細胞を本明細書において「疲弊T細胞」という。
　抗PD-1抗体などは、この「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できる抗体としても開発されている。したがって、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、実施例において示されているように疲弊Ｔ細胞（の増殖または発生）を阻害することができることから、このような「疲弊」状態および「免疫不全」を阻害できるものと期待され、したがって、「免疫破綻」を阻害できるものと理解される。
　本明細書において、「免疫関連細胞」とは、免疫抑制や機能不全などを受ける任意の免疫系の細胞を指し、「免疫関連細胞の免疫抑制活性の獲得および／または増強」は、本明細書では代表的に、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊T細胞の増加等を含
むことが理解される。
　本明細書において「被験体（者）」とは、本発明の診断または検出、あるいは治療等の対象となる対象（例えば、ヒト等の生物または生物から取り出した細胞、血液、血清等）をいう。
　本明細書において「試料」とは、被験体等から得られた任意の物質をいい、例えば、血清等が含まれる。当業者は本明細書の記載をもとに適宜好ましい試料を選択することができる。
　本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」（いずれも英語ではagentに相当する）は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、cDNA、ゲノムDNAのようなDNA、mRNAのようなRNAを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）など）、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。ポリヌクレオチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリヌクレオチドの配列に対して一定の配列相同性を（例えば、70％以上の配列同一性）もって相補性を有するポリヌクレオチド、プロモーター領域に結合する転写因子のようなポリペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ポリペプチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリペプチドに対して特異的に指向された抗体またはその誘導体あるいはその類似物（例えば、単鎖抗体）、そのポリペプチドがレセプターまたはリガンドである場合の特異的なリガンドまたはレセプター、そのポリペプチドが酵素である場合、その基質などが挙げられるがそれらに限定されない。
　本明細書において「診断」とは、被験体における疾患、障害、状態（例えば、悪性腫瘍）などに関連する種々のパラメータを同定し、そのような疾患、障害、状態の現状または未来を判定することをいう。本発明の方法、装置、システムを用いることによって、体内の状態を調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書において、狭義には、「診断」は、現状を診断することをいうが、広義には「早期診断」、「予測診断」、「事前診断」等を含む。本発明の診断方法は、原則として、身体から出たものを利用することができ、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることから、産業上有用である。本明細書において、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることを明確にするために、特に「予測診断、事前診断もしくは診断」を「支援」すると称することがある。
　本明細書において「予後」という用語は、悪性腫瘍（例えば、卵巣癌）などの腫瘍性疾患の再発、転移拡散、および薬剤耐性など、癌に起因する死亡または進行が起こる可能性を予測することを意味する。したがって、本明細書において「予後状態が良好」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌を認めない状態のことを、「予後状態が不良」または「予後不良」とは、癌組織切除後から一定期間（例えば、４年）を超えて当該癌を原発とする再発癌が認められる状態のことをいう。予後因子とは悪性腫瘍の自然経過に関する変数のことであり、これらは、いったん悪性腫瘍を発症した患者の再発率および転帰に影響を及ぼす。予後の悪化に関連した臨床的指標には、例えば、リンパ節転移、および高悪性度の腫瘍が含まれる。予後因子は、しばしば、患者を異なった基礎的再発リスクをもつサブグループに分類するために用いられる。このように、本発明のFSTL1の発現は、予後因子として使用することができる。本明細書において「予測」という用語は、原発腫瘍の摘出後に、患者が、良不良を問わず特定の臨床転帰を持つ可能性を意味する。したがって、本発明のFSTL1は、予後不良マーカーとして用いることができる。本発明の予測法を臨床的に用いて、特定の患者にとって最適な治療法を選択することによって治療法を決定することができる。本発明の予測法は、患者が治療計画、例えば、外科的介入など　に対して良好な反応をする可能性があれば、予測する際の有益な手段となる。予測には予後因子を含むことができる。
　本明細書において「検出薬（剤）」または「検査薬（剤）」とは、広義には、目的の対象を検出または検査することができるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「診断薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を診断できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になった場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好ましくは、軽減、さらに好ましくは消退させることをいい、患者の疾患、もしくは疾患に伴う1つ以上の症状の、症状改善効果あるいは予防効果を発揮しうることを含む。事前に診断を行って適切な治療を行うことは「コンパニオン治療」といい、そのための診断薬を「コンパニオン診断薬」ということがある。
　本明細書において「治療薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を治療できるあらゆる薬剤をいう。本発明の一実施形態において「治療薬」は、有効成分と、薬理学的に許容される1つもしくはそれ以上の担体とを含む医薬組成物
であってもよい。医薬組成物は、例えば有効成分と上記担体とを混合し、製剤学の技術分野において知られる任意の方法により製造できる。また治療薬は、治療のために用いられる物であれば使用形態は限定されず、有効成分単独であってもよいし、有効成分と任意の成分との混合物であってもよい。また上記担体の形状は特に限定されず、例えば、固体または液体（例えば、緩衝液）であってもよい。なお悪性腫瘍の治療薬は、悪性腫瘍の予防のために用いられる薬物（予防薬）、または悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤を含む。
　本明細書において「予防」とは、ある疾患または障害（例えば、悪性腫瘍）について、そのような状態になる前に、そのような状態にならないようにすることをいう。本発明の薬剤を用いて、診断を行い、必要に応じて本発明の薬剤を用いて例えば、悪性腫瘍等の予防をするか、あるいは予防のための対策を講じることができる。
　本明細書において「予防薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、悪性腫瘍等の疾患など）を予防できるあらゆる薬剤をいう。
　本明細書において「相互作用」とは、2つの物質についていうとき、一方の物質と他方の物質との間で力（例えば、分子間力（ファンデルワールス力）、水素結合、疎水性相互作用など）を及ぼしあうこという。通常、相互作用をした2つの物質は、会合または結合している状態にある。本発明の検出、検査および診断は、このような相互作用を利用して実現することができる。
　本明細書中で使用される用語「結合」は、2つの物質の間、あるいはそれらの組み合わせの間での、物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合には、イオン結合、非イオン結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水性相互作用などが含まれる。物理的相互作用（結合）は、直接的または間接的であり得、間接的なものは、別のタンパク質または化合物の効果を介するかまたは起因する。直接的な結合とは、別のタンパク質または化合物の効果を介してもまたはそれらに起因しても起こらず、他の実質的な化学中間体を伴わない、相互作用をいう。
　従って、本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチドなどの生物学的因子に対して「特異的に」相互作用する（または結合する）「因子」（または、薬剤、検出剤等）とは、そのポリヌクレオチドまたはそのポリペプチドなどの生物学的因子に対する親和性が、他の無関連の（特に、同一性が30％未満の）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対する親和性よりも、代表的には同等またはより高いか、好ましくは有意に（例えば、統計学的に有意に）高いものを包含する。そのような親和性は、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイ、結合アッセイなどによって測定することができる。
　本明細書において第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）とは、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して、第二の物質または因子以外の物質または因子（特に、第二の物質または因子を含む試料中に存在する他の物質または因子）に対するよりも高い親和性で相互作用する（または結合する）ことをいう。物質または因子について特異的な相互作用（または結合）としては、例えば、核酸におけるハイブリダイゼーション、タンパク質における抗原抗体反応、酵素－基質反応など、核酸およびタンパク質の反応、タンパク質－脂質相互作用、核酸－脂質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。従って、物質または因子がともに核酸である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に相互作用する」ことには、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して少なくとも一部に相補性を有することが包含される。また例えば、物質または因子がともにタンパク質である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）こととしては、例えば、抗原抗体反応による相互作用、レセプター－リガンド反応による相互作用、酵素－基質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。2種類の物質または因子がタンパク質および核酸を含む場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に」相互作用する（または結合する）ことには、抗体と、その抗原との間の相互作用（または結合）が包含される。このような特異的な相互作用または結合の反応を利用することにより、試料中の対象物の検出または定量お行うことができる。
　本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチド発現の「検出」または「定量」は、例えば、検出剤、検査剤または診断剤への結合または相互作用を含む、mRNAの測定および免疫学的測定方法を含む適切な方法を用いて達成され得る。分子生物学的測定方法としては、例えば、ノーザンブロット法、ドットブロット法またはPCR法などが例示される。免疫学的測定方法としては、例えば、方法としては、マイクロタイタープレートを用いるELISA法、RIA法、蛍光抗体法、発光イムノアッセイ（LIA）、免疫沈降法（IP）、免疫拡散法（SRID）、免疫比濁法（TIA）、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが例示される。また、定量方法としては、ELISA法またはRIA法などが例示される。アレイ（例えば、DNAアレイ、プロテインアレイ）を用いた遺伝子解析方法によっても行われ得る。DNAアレイについては、（秀潤社編、細胞工学別冊「DNAマイクロアレイと最新PCR法」）に広く概説されている。プロテインアレイについては、Nat　Genet．2002　Dec;32　Suppl:526－532に詳述されている。遺伝子発現の分析法としては、上述に加えて、RT－PCR、RACE法、SSCP法、免疫沈降法、two－hybridシステム、in　vitro翻訳などが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなさらなる分析方法は、例えば、ゲノム解析実験法・中村祐輔ラボ・マニュアル、編集・中村祐輔羊土社（2002）などに記載されており、本明細書においてそれらの記載はすべて参考として援用される。
　本明細書において「発現量」とは、目的の細胞、組織などにおいて、ポリペプチドまたはmRNA等が発現される量をいう。そのような発現量としては、本発明の抗体を用いてELISA法、RIA法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などの免疫学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明ポリペプチドのタンパク質レベルでの発現量、またはノーザンブロット法、ドットブロット法、PCR法などの分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのmRNAレベルでの発現量が挙げられる。「発現量の変化」とは、上記免疫学的測定方法または分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明において使用されるポリペプチドのタンパク質レベルまたはmRNAレベルでの発現量が増加あるいは減少することを意味する。あるマーカーの発現量を測定することによって、マーカーに基づく種々の検出または診断を行うことができる。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「減少」または「抑制」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における減少、または減少させる活性をいう。減少のうち「消失」した場合は、活性、発現産物等が検出限界未満になることをいい、特に「消失」ということがある。本明細書では、「消失」は「減少」または「抑制」に包含される。
　本明細書において、活性、発現産物（例えば、タンパク質、転写物（RNAなど））の「増加」または「活性化」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における増加または増加させる活性をいう。
　本明細書において「インビボ」（in　vivo）とは、生体の内部をいう。特定の文脈において、「生体内」は、目的とする物質が配置されるべき位置をいう。
　本明細書において「インビトロ」（in　vitro）とは、種々の研究目的のために生体の一部分が「生体外に」（例えば、試験管内に）摘出または遊離されている状態をいう。インビボと対照をなす用語である。
　本明細書において「エキソビボ」（ex　vivo）とは、ある処置について、体外で行われるがその後体内に戻されることが意図される場合、一連の動作をエキソビボという。本発明においても、生体内にある細胞を本発明の薬剤で処置して再度患者に戻すような実施形態を想定することができる。
　本明細書において「キット」とは、通常2つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬、抗体、標識、説明書など）が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分（例えば、検査薬、診断薬、治療薬をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが試薬キットとして使用される場合、キットには、通常、検査薬、診断薬、治療薬、抗体等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。
　本明細書において「指示書」は、本発明を使用する方法を医師または他の使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本発明の検出方法、診断薬の使い方、または医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、投与部位として、経口、食道への投与（例えば、注射などによる）することを指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（FDA）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（package　insert）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。
　（好ましい実施形態）
　以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本発明の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
　（抗ＦＳＴＬ１抗体）
　１つの局面において、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物（本明細書において総称して「抗ＦＳＴＬ１抗体等」あるいは「本発明の抗体等」ということがある）であって、該抗体は、配列番号７５９（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１７０位または１４８～１６２位、１９３～２２８位または１９３～２１６位および２０５～２２８位、ならびに２３３～２８９位または２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。１つの好ましい実施形態では、配列番号７５９（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位または２７２～２８９位の領域にエピトープを有していてもよい。
　本発明における抗体について、エピトープは、該当する領域中の連続するまたは不連続の、５アミノ酸以上、あるいは６アミノ酸以上、７アミノ酸以上、８アミノ酸以上、９アミノ酸以上、１０アミノ酸以上、１１アミノ酸以上、１２アミノ酸以上の領域あるいはそれらの組合せが該当し得る。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号７５８（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、２０５～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは動物試験において薬効が確認されているものを含む。なお、＃６－５５、＃７－３４、＃１３については、１４８－１６２部位を認識するものと理解される。また、＃５－２、＃５－３、＃５－８．＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－６、＃８－８は、アミノ酸２７２～２８９位を認識するものと理解され、＃７および＃１０はアミノ酸２０５位～２２８位を認識するものと理解され、＃２２はアミノ酸１９３位～２１６位を認識するものと理解され、＃３３はアミノ酸４８位～１００位を認識するものと理解される。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、配列番号７５８（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位および２０５～２２８位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。これらのエピトープは、より活性が強いことが確認されている抗体が認識するものを含む。別の好ましい実施形態では、配列番号７５９（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８～１００位、１４８～１６２位または２０５～２２８位の領域にエピトープを有する。理論に束縛されることは望まないが、これらのエピトープはインビトロ試験またはインビボ試験において薬効が確認されているものを含む。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定のＣＤＲを有する。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、全長配列のＣＤＲを含む任意の配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいは、本発明の特定の抗体に関する配列の可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、そのフレームワーク領域において、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、１７個、もしくは、２０個、またはそれ以上の置換、不可、もしくは、欠失を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。より特定すると、そのような特定のＣＤＲについて、重鎖CDR１，２，３、軽鎖CDR１，２，３の具体的な例としては、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号７６３；重鎖：配列番号７６５）、＃５－３（軽鎖：配列番号７６７；重鎖：配列番号７６９）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号７７１；重鎖：配列番号７７３）、＃５－１０（軽鎖：配列番号７７５；重鎖：配列番号７７７）、＃５－４３（軽鎖：配列番号７７９；重鎖：配列番号７８１）、＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃８－４（軽鎖：配列番号７９５；重鎖：配列番号７９７）、＃８－７（軽鎖：配列番号７９９；重鎖：配列番号８０１）、＃８－８（軽鎖：配列番号８０３；重鎖：配列番号８０５）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）、＃２２（軽鎖：配列番号８１９；重鎖：配列番号８２１）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。あるいは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、該抗体の変異体であって、該変異体において該抗体のフレームワークに１または数個の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まない、変異体であってもよい。抗体の製造等については、本明細書の他の箇所に記載された実施形態および／または当該分野で公知の手法を用いることができる。なお、本発明の治療または予防の目的では、このような抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、好ましくは、ＦＳＴＬ１またはその情報伝達経路の下流の抑制活性を有することが好ましい。そのような活性は、ＦＳＴＬ１の発現量またはその活性をみるか、あるいはがん細胞株を直接使用して細胞の増殖阻害、転移活性阻害、骨転移阻害、ＭＳＣの免疫抑制や免疫不全等の免疫破綻を増強する活性（例えば、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得）の阻害、免疫関連細胞の免疫抑制性化または免疫不全化（例えば、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増加、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増加、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞免疫抑制活性の増加および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の増殖・誘導等による疲弊T細胞の増加の阻害、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）での細胞傷害活性、またはモデル動物に移植して腫瘍の退縮を観察する等をみることで確認してもよい。これらの手法は、当該分野において周知であり、本明細書において使用される手法を用いてもよい。本発明のこれらの抗体は、特定の実施形態では、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligospecific）抗体、単鎖抗体、scFV、ダイアボディー、sc（Fv）2（single　chain（Fv）2）、およびscFv－Fcから選択される抗体でありうる。
　ここで、各抗体クローンのＣＤＲのアミノ酸配列を、重鎖および軽鎖の配列中の下線として示す。
＃5-2：
軽鎖（L鎖；配列番号７６３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
重鎖（H鎖；配列番号７６５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTGYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGSYVGDIDAWGHGTEVIVSS
＃5-3
L鎖（配列番号７６７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSVPVTVIYNNNNRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYYCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７６９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFSFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-8
L鎖（配列番号７７１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７７３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGTAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃5-10
L鎖（配列番号７７５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYVGSYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSAGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７７７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTTYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNDLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃5-43
L鎖（配列番号７７９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７８１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGGTGYGAAVDGRATISKDSGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYDWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃6-55
L鎖（配列番号７８３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSAIPGETVKITCSGGGNNYGWYQQRSPGSAPVTVIYYNDNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQADDEAIYYCGSWDSNTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７８５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFTSVTMQWVRQAPGKGLEWVASVCSGSSTYYAPAVKGRATISRDNGQSTVRLQLSNLRPEDTGTYYCAKIAGRARWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃7-34
L鎖（配列番号７８７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNNNRPSNIPSRFSGSTSGSTSTLTITGVQAEDEAVYYCGSYEGSTDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７８９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃8-1
L鎖（配列番号７９１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSSGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７９３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-4
L鎖（配列番号７９５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASSQPSSVSANPGETVKITCSGGSGYYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNDNKPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYFCGGYDNSGTGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号７９７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTLSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGVGKDGGTAYGAAVDGRATISRDSGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYSWCGAYVGDLDAWGHGTEVIVSS
＃8-7
L鎖（配列番号７９９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号８０１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTLRLQLNNLRAEDTGTYFCAKAAGGCSYDWCGIYAGDIDTWGHGTEVIVSS
＃8-8
L鎖（配列番号８０３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGEAVKITCSGGSGSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNQRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQVEDEAVYFCGGYDSSTGHGGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号８０５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEWVAGIGKDGVPKYGAAVDGRATISKDNGQSTMRLQLNNLRAEDTGTYYCAKAAGGCSYGWCGAYTGDIDTWGHGTEVIVSS
＃７
L鎖（配列番号８０７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSNIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGGYDGSTDAAFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号８０９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFSIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGEYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSP
＃10
L鎖（配列番号８１１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKLTCSGGGSRYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDGSRDAGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号８１３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFFFFRIYDMGWVRQAPGKGLEWVAGIDDYGRYTGYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGAGTGCNSAGCGAYAGSIDAWGHGTEVIVSS
＃13
L鎖（配列番号８１５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGGNNYGWYQQKSPGSAPVTVIYNNNNRPSNIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYYCGSYDSSSDSGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号８１７）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEWVASICSGSSTYYGPAVKGRATISRDNGQNTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKIVGRGRWSCTSAAYNIDAWGHGTEVIVSS
＃22
L鎖（配列番号８１９）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYWDDRRPSDIPSRFSGSKSGSIHTLTITGVQADDEAVYLCGNAVRSGTGYVGVFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号８２１）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSNGMAWVRQAPGKGLELVARINSSGSYTNYGAAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKGASGYGAYPGNIDAWGHGTEVIVSS
＃33
L鎖（配列番号８２３）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す。
ASTQPSSVSANPGETVEITCSGDSSYYGWFQQKSPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYCGGYDSSTYDGIFGAGTTLTVL
H鎖（配列番号８２５）：下線部にＣＤＲを示し、Ｎ末端から順にCDR1、CDR2、CDR3を示す
。AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSFNMNWVRQAPGKGLEYVAEISGTGSSTYYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTATYFCARGDGAYSIDAWGHGTEVIVSS
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、ＦＳＴＬ１に対するより強い結合活性が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い結合活性を保持することが期待され、同様の薬効が奏されることが理解される。
　さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３あるいはそれらの機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）の少なくとも１つ、好ましくは２つ、３つ、４つ、５つ、さらに好ましくは６つすべてを含む。これらのクローンでは、実施例において、より強い薬効が観察されており、同様のＣＤＲを保持することによってこのより強い薬効を保持することが期待されることが理解される。
　別の実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、特定の可変領域の全長を有する。そのような特定の可変領域は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号７６３；重鎖：配列番号７６５）、＃５－３（軽鎖：配列番号７６７；重鎖：配列番号７６９）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号７７１；重鎖：配列番号７７３）、＃５－１０（軽鎖：配列番号７７５；重鎖：配列番号７７７）、＃５－４３（軽鎖：配列番号７７９；重鎖：配列番号７８１）、＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃８－４（軽鎖：配列番号７９５；重鎖：配列番号７９７）、＃８－７（軽鎖：配列番号７９９；重鎖：配列番号８０１）、＃８－８（軽鎖：配列番号８０３；重鎖：配列番号８０５）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）、＃２２（軽鎖：配列番号８１９；重鎖：配列番号８２１）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長またはその機能的等価物（例えば、１つ、２つまたは３つあるいはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含むもの）を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号８５３；重鎖：配列番号８５５）、＃５－３（軽鎖：配列番８５７；重鎖：配列番号８５９）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号８６１；重鎖：配列番号８６３）、＃５－１０（軽鎖：配列番号８６５；重鎖：配列番号８６７）、＃５－４３（軽鎖：配列番号８６９；重鎖：配列番号８７１）、＃６－５５（軽鎖：配列番号８７３；重鎖：配列番号８７５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号８７７；重鎖：配列番号８７９）、＃８－１（軽鎖：配列番号８８１；重鎖：配列番号８８３）、＃８－４（軽鎖：配列番号８８５；重鎖：配列番号８８７）、＃８－７（軽鎖：配列番号８８９；重鎖：配列番号８９１）、＃８－８（軽鎖：配列番号８９３；重鎖：配列番号８９５）、＃７（軽鎖：配列番号８９７；重鎖：配列番号８９９）、＃１０（軽鎖：配列番号９０１；重鎖：配列番号９０３）、＃１３（軽鎖：配列番号９０５；重鎖：配列番号９０７）、＃２２（軽鎖：配列番号９０９；重鎖：配列番号９１１）および＃３３（軽鎖：配列番号９１３；重鎖：配列番号９１５）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　好ましい実施形態では、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号８７３；重鎖：配列番号８７５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号８７７；重鎖：配列番号８７９）、＃８－１（軽鎖：配列番号８８１；重鎖：配列番号８８３）、＃７（軽鎖：配列番号８９７；重鎖：配列番号８９９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号９０５；重鎖：配列番号９０７）および＃３３（軽鎖：配列番号９１３；重鎖：配列番号９１５）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　一つの好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であり、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ヒト化抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり得る。好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９２６、９２８、９３０および９３２）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９４２、９４４、９４６および９４８）を有する。
　好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号９１８、９２０、９２２および９２４（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９２６、９２８、９３０および９３２（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９３４、９３６、９３８および９４０（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号９４２、９４４、９４６および９４８（Ｌ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９８８、９９０、９９２および９９４（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９９６、９９８、１０００および１００２（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列、または該重鎖フレームワーク配列および該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９６３、９６５、９６７および９６９）および軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９６７、９６８もしくは９７１、９６９もしくは９７２および９７０）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を有する。好ましくは、重鎖フレームワーク配列は、Ｈ（２）のもの、すなわち配列番号９２６、９２８、９３０および９３２（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）またはその重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。本明細書において、Ｈ（２）を用いた場合、Ｈ（１）およびＨ（３）よりもＫＤ値がワンオーダー優れた活性がされたからである。また、好ましくは配列番号９４２、９４４、９４６および９４８（それぞれＬ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９６７、９６８もしくは９７１、９６９もしくは９７２および９７０）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を使用し得る。
　さらに好ましくは、ヒト化抗体は、配列番号９１８、９２０、９２２および９２４（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９２６、９２８、９３０および９３２（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９３４、９３６、９３８および９４０（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列または該重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９６３、９６５、９６７および９６９）と相違するアミノ酸を１個～８個（例えば、1個、2個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有し、配列番号９４２、９４４、９４６および９４８（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９８８、９９０、９９２および９９４（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９９６、９９８、１０００および１００２（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９６７、９６８もしくは９７１、９６９もしくは９７２および９７０）と相違するアミノ酸を１個～４個（例えば、1個、2個、３個または４個）ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有する。
　好ましい実施形態では、ヒト化抗体のバックミューテーションの際に考慮される、相違するアミノ酸の少なくとも１つ、さらに好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つは、Vernier残基から選択される。活性が最適化される限りＶｅｒｎｉｅｒ残基以外の変異が含まれていてもよいことが理解される。好ましい実施形態では、相違するアミノ酸のすべてが、Vernier残基から選択される。Ｖｅｒｎｉｅｒ残基については、例えば、特開２０１０－４８９５、Ｎｉｓｈｉｂｏｒｉ　Ｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Molecular Immunology 43 (2006) 634-642等を参照することができ、これらの記載は本明細書において参考として援用される。
　前記Vernier残基は、ヒト化配列のＨ鎖のＦＲ１アミノ酸（配列番号９２６）２８位、３０位、ＦＲ２のアミノ酸（配列番号９２８）１２位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号９３０）２位、１０位、１３位、１７位および３２位、ならびにＬ鎖のＦＲ１（配列番号９４２）２０位、ＦＲ３アミノ酸（配列番号９４６）１０位、１５位および３１位を含む。配列が異なる場合はＶｅｒｎｉｅｒ配列は変動し得ることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（１）－Ｌ（１）、Ｈ（２）－Ｌ（１）、Ｈ（３）－Ｌ（１）、Ｈ（１）－Ｌ（２）、Ｈ（２）－Ｌ（２）、Ｈ（３）－Ｌ（２）、Ｈ（１）－Ｌ（３）、Ｈ（２）－Ｌ（３）、Ｈ（３）－Ｌ（３）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4ならびL鎖FR1、FR2、FR3およびFR4のいずれかを有する。別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号９２６、９２８、９３０および９３２）ならびにL鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号９４２、９４４、９４６および９４８）を有する。
　別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号９１８、９２０、９２２および９２４（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９２６、９２８、９３０および９３２（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９３４、９３６、９３８および９４０（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）含む重鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体、ならびに配列番号９４２、９４４、９４６および９４８（Ｌ（１）のヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９８８、９９０、９９２および９９４（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９９６、９９８、１０００および１００２（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列またはその１～１０アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む変異体を有する。
　さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号９１８、９２０、９２２および９２４（Ｈ（１）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９２６、９２８、９３０および９３２（Ｈ（２）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９３４、９３６、９３８および９４０（Ｈ（３）のヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列、ならびに配列番号９４２、９４４、９４６および９４８（ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号９８８、９９０、９９２および９９４（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号９９６、９９８、１０００および１００２（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列からなるフレームワーク配列または該フレームワーク配列において１～１０アミノ酸、１～９アミノ酸、１～８アミノ酸、１～７アミノ酸、１～６アミノ酸、１～５アミノ酸、１～４アミノ酸、１～３アミノ酸、１～２アミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む配列を含む。
　本発明の一実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを細胞に導入することによって、形質転換体を作成できる。この形質転換体を用いれば、本発明の実施形態に係る抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体を作製できる。形質転換体は、ヒトまたはヒトを除く哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、サル等）の細胞であってもよい。哺乳動物細胞としては、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO細胞)、サル細胞COS-7などが挙げられる。または、形質転換体はEscherichia属菌、酵母等であってもよい。
　上記のベクターとしては、例えば大腸菌由来のプラスミド（例えばpET-Blue）、枯草菌由来のプラスミド（例えばpUB110）、酵母由来プラスミド（例えばpSH19）、動物細胞発現プラスミド（例えばpA1-11、pcDNA3.1-V5/His-TOPO）、λファージなどのバクテリオファージ、ウイルス由来のベクターなどを用いることができる。これらのベクターは、プロモーター、複製開始点、または抗生物質耐性遺伝子など、蛋白質発現に必要な構成要素を含んでいてもよい。ベクターは発現ベクターであってもよい。
　上記のポリヌクレオチドまたはベクターの細胞への導入方法としては、例えば、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、エレクトロポレーション法、アデノウイルスによる方法、レトロウイルスによる方法、またはマイクロインジェクションなどを使用できる（改訂第4版新遺伝子工学ハンドブック, 羊土社(2003):152-179.）。抗体の細胞を用いた生産方法としては、例えば、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):128-142."に記載の方法を使用できる。抗体の精製においては、例えば、硫酸アンモニウム、エタノール沈殿、プロテインA、プロテインG、ゲルろ過クロマトグラフィー、陰イオン、陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、またはレクチンクロマトグラフィーなどを用いることができる（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):27-52.）。
　（医薬、抗がん剤）
　１つの局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む医薬を提供する。本発明の医薬において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、医薬として使用するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の医薬用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、ＦＳＴＬ１に関連する疾患を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤を提供する。本発明の抗がん剤において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、がんの治療または予防のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがんの治療または予防のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がんを処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移の治療剤または予防剤を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍において使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を治療または予防するための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍を治療用途のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、転移性悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を処置または予防するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　本発明が対象とする疾患は、がんであり、例えば、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫およびそれらの転移性の悪性腫瘍を挙げることができるがそれらに限定されない。また、これらの癌は、SNAILおよび／またはFSTL1を高発現する癌種であってもよい。なお、これらのSNAILおよび／またはFSTL1の発現については、
https://www.oncomine.com/resource/login.html
で提供されるOncomineのヒト腫瘍組織解析情報サイトにおいて得られる情報（以下の表１Ａを参照）に基づいて、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫に高発現がみられることが説明されていることから、これらの癌種でも実施例で実証されたものと同様に効果があることが理解される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
（ONCOMINEdata）
　別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むがん細胞の転移の阻害剤を提供し、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移、特に骨転移、肺転移の阻害をもなし得る阻害剤を提供する。
　この局面において、本発明は、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明のがん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）の阻害のため、特に骨転移、肺転移の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、がん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移）を阻害するため、特に骨転移、肺転移の阻害のための方法を提供する。特に、骨転移を阻害することは従来きわめて困難といわれてきたところ、本明細書中の実施例において示されるようにこれを顕著に阻害することができることが見出されていることから、この点においても、本発明の優位性が見出される。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の阻害剤を提供する。免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しない細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の増強は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻を誘導する間葉系幹細胞の誘導の概念も包含する。このような免疫抑制能の高いＭＳＣは、活性化MSCまたは癌関連MSCとしても知られている。理論に束縛されることを望まないが、Snail陽性癌細胞等から分泌されたFSTL1は、MSCのいわゆる前駆細胞に作用して、MSCが免疫抑制性細胞の前駆細胞を免疫抑制性の免疫関連細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、制御性樹状細胞、寛容性樹状細胞、および骨髄由来免疫抑制性細胞）へと分化させる因子ならびに／または増殖を促進する因子および／もしくはその免疫抑制活性を増強する因子を分泌させそれによって、いわゆる前駆細胞が免疫抑制性細胞となることによって、免疫抑制状態となっていると考えられる。そこで、本願発明のような抗FSTL１抗体を作用させることによって、FSTL１の作用が抑制され、結果として、免疫抑制状態が解除されると考えられる。
　したがって、別の局面では、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤を提供する。免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、免疫抑制細胞の誘導の現象も含むため、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤は、免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻活性のある細胞の誘導の阻害剤の概念を含むことになる。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を提供する。本発明の免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害のための抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　この局面において、本発明は、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を包含する、免疫抑制活性の獲得および／または増強を阻害するための方法を提供する。本発明の方法で使用され得る抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態および任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。
　１つの実施形態では、本発明の阻害剤における免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強および骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導（増加または分化）からなる群より選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ、より好ましくは４つ、より好ましくは５つ、より好ましくは６つ、より好ましくは７つ、より好ましくは８つ、より好ましくは９つ、より好ましくは１０、より好ましくは１１、より好ましくはすべてを含む。
　好ましい実施形態では、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物および化学療法剤に加え、さらに細胞殺傷性薬剤を含む。したがって、本発明の組成物、剤、医薬等（治療薬または予防薬等）は複合分子を含みうるあるいは結合したものであるといえる。
　１つの局面において、本発明の併用剤は、FSTL1抑制剤および化学療法剤の他に、別のがん治療と組み合わせてもよい。具体的には、別のがん治療は、本発明の抗がん剤とは別の抗がん剤、手術療法もしくは放射線療法またはそれらの組合せを含む。
　癌に対する化学療法および放射線療法は、リンパ球の増殖を激しく減少させるという副作用が不可避である。一つの実施形態では、本発明の組成物の投与は、減少したリンパ球細胞を刺激、増殖させる効果を示すと共に、通常の化学療法に付随する激烈な副作用を最小限に抑制することができる。また、放射線療法についても同様である。また、本発明の組成物との併用によって、化学療法剤の用量または照射放射線量を通常使用される用量あるいは照射量から大幅に減少させることができる。本発明の癌治療組成物は、本発明の抗がん剤とは別の、既存のまたは新規の化学療法剤と併用あるいは合剤化することができる。そのような化学療法剤として、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。さらに、患者のQOL回復のための癌治療補助剤である白血球(好中球)減少症治療薬、血小板減少症治療薬、制吐剤、癌性疼痛治療薬と併用あるいは合剤化ができる。
　本明細書において、「細胞殺傷性薬剤」は、細胞膜を溶解する可能性のある薬剤である。細胞殺傷性薬剤は、ペプチドの場合は細胞傷害性ペプチドと呼ばれ、細胞傷害性ペプチドは当該分野において種々の呼称があり、例えば、「溶解性ペプチド成分」、「細胞殺傷性配列」は、「細胞溶解性ペプチド（配列）」または「細胞膜溶解性ペプチド（配列）」などとも称されるが、これらは本発明の目的では同義で用いられる。このような細胞傷害性薬剤の代表例としては、GailD.et al., Cancer Res 2008;68:9280-9290.; Ian Krop and Eric P. Winer, ClinCancerRes; 20(1); 1-6.およびK Naito et al., Leukemia(2000) 14, 1436-144に列挙されたものを挙げることができ、メイタンシノイド（Maytansinoid）、エムタンシン（emtansine）、CMA-676に含まれるN-アセチルーγ－カリケアミシンジメチルヒドラジド（NAc-γカリケアミシン、DMH）などを挙げることができるがこれらに限定されない。ペプチドとしては、代表的な細胞殺傷性ペプチドとしては、細胞膜溶解性ペプチド、細胞膜電位不安定化ペプチド、細胞膜溶解・核酸結合ペプチドおよびミトコンドリア膜崩壊ペプチドを挙げることができるがこれらに限定されない。
　必要に応じて、このような細胞殺傷性薬剤は抗体等の本発明の結合剤に対してスペーサーで結合されていてもよい。本明細書において「スペーサー」とは、橋をかけるように，鎖式高分子の分子間で化学結合を形成させる部分をいい、リンカーとも称される。ペプチドのスペーサーとしては例えば、代表的には、Ｇ、Ｐからなる０～５アミノ酸の配列が挙げられるがこれに限定されない。スペーサーは必須ではなく、存在しなくてもよい。
　本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体またはそれらのフラグメントもしくは機能的等価物と、化学療法剤と、細胞殺傷性薬剤との組み合わせは複合分子で提供されてもよい。このような分子を例示的に説明すると、爆薬部分に当たる、細胞傷害性部分と、弾頭部分にあたるがん細胞に対する特異性を担当する部分（たとえば、がん細胞に高発現している受容体に対して特異的に結合するペプチド・配列、代表的には抗体）とを組み合わせてできる分子と説明することができる。スペーサーを使用する場合、がん細胞特異的結合剤＋スペーサー＋細胞殺傷性薬剤から構成されることになる。本明細書では、任意のがん細胞特異的結合剤、任意のスペーサー、任意の細胞殺傷性薬剤を任意に組み合わせることができ、その製造法および使用法の例を記載する。このような分子は、化学合成法が通常であるが、ペプチドで構成される場合は遺伝子組換えにより強制発現させ精製する方法、あるいはこれと組み合わせた方法も可能である。
　本発明の使用について、治療しようとするがん細胞について、細胞表面のＦＳＴＬ１の発現および細胞殺傷性薬剤に対するがん細胞の傷害感受性を調べる。その結果をもとに弾頭と爆薬を選択し、そのがん細胞に最適な分子をデザインする。化学合成等により得られたオーダーメイドペプチドトキシンを必要に応じてアテロコラーゲン等のDDSと組み合わせ、局所投与または全身投与を行い治療することができる。
　本発明は、Snail陽性癌細胞における作用効果から見出されたものであるため、理論に束縛されることを望まないが、本発明の標的は、Snail陽性癌細胞に起因するがんを含みうる。癌細胞の一部がEMTを生じてSNAILを発現するので、そのような限られた数種の癌だけでなく、実に様々な癌種で“EMT”を生じた細胞がSNAILを発現するといわれている。そのようながんとしては、扁平上皮癌、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫を挙げることができるがこれらに限定されない。
　治療薬の投与経路は、治療に際して効果的なものを使用するのが好ましく、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、または経口投与等であってもよい。投与形態としては、例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤等であってもよい。抗体またはポリヌクレオチドを投与する場合には、注射剤として用いることが効果的である。注射用の水溶液は、例えば、バイアル、またはステンレス容器で保存してもよい。また注射用の水溶液は、例えば生理食塩水、糖(例えばトレハロース)、NaCl、またはNaOH等を配合してもよい。また治療薬は、例えば、緩衝剤(例えばリン酸塩緩衝液)、安定剤、アジュバント等の徐放剤等を配合してもよい。
　一般的に、本発明の組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等は、治療有効量の治療剤または有効成分、および薬学的に許容しうるキャリアもしくは賦形剤を含む。本明細書において「薬学的に許容しうる」は、動物、そしてより詳細にはヒトにおける使用のため、政府の監督官庁に認可されたか、あるいは薬局方または他の一般的に認められる薬局方に列挙されていることを意味する。本明細書において使用される「キャリア」は、治療剤を一緒に投与する、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このようなキャリアは、無菌液体、例えば水および油であることも可能であり、石油、動物、植物または合成起源のものが含まれ、限定されるわけではないが、ピーナツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油等が含まれる。医薬を経口投与する場合は、水が好ましいキャリアである。医薬組成物を静脈内投与する場合は、生理食塩水および水性デキストロースが好ましいキャリアである。好ましくは、生理食塩水溶液、並びに水性デキストロースおよびグリセロール溶液が、注射可能溶液の液体キャリアとして使用される。適切な賦形剤には、軽質無水ケイ酸、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等が含まれる。組成物は、望ましい場合、少量の湿潤剤または乳化剤、あるいはpH緩衝剤もまた含有することも可能である。これらの組成物は、溶液、懸濁物、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、持続放出配合物等の形を取ることも可能である。伝統的な結合剤およびキャリア、例えばトリグリセリドを用いて、組成物を座薬として配合することも可能である。経口配合物は、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン・ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的キャリアを含むことも可能である。適切なキャリアの例は、E．W．Martin,　Remington’s　PharmaceuticalSciences(MarkPublishing Company, Easton, U.S.A）に記載される。このような組成物は、患者に適切に投与する形を提供するように、適切な量のキャリアと一緒に、治療有効量の療法剤、好ましくは精製型のものを含有する。配合物は、投与様式に適していなければならない。これらのほか、例えば、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等を含んでいてもよい。
　本発明を医薬として投与する場合、種々の送達（デリバリー）系が知られ、そしてこのような系を用いて、本発明の治療剤を適切な部位（例えば、食道）に投与することも可能であり、このような系には、例えばリポソーム、微小粒子、および微小カプセル中の被包：治療剤（例えば、ポリペプチド）を発現可能な組換え細胞の使用、受容体が仲介するエンドサイトーシスの使用などがある。導入法には、限定されるわけではないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、および経口経路が含まれる。好適な経路いずれによって、例えば注入によって、ボーラス（bolus）注射によって、上皮または皮膚粘膜裏打ち（例えば口腔、直腸および腸粘膜など）を通じた吸収によって、医薬を投与することも可能であるし、必要に応じてエアロゾル化剤を用いて吸入器または噴霧器を使用しうるし、そして他の生物学的活性剤と一緒に投与することも可能である。投与は全身性または局所であることも可能である。本発明は腫瘍に直接投与することもできる。
　好ましい実施形態において、公知の方法に従って、ヒトへの投与に適応させた医薬組成物として、組成物を配合することができる。このような組成物は注射により投与することができる。代表的には、注射投与のための組成物は、無菌等張水性緩衝剤中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるリドカインなどの局所麻酔剤も含むことも可能である。一般的に、成分を別個に供給するか、または単位投薬型中で一緒に混合して供給し、例えば活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器中、凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として供給することができる。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌薬剤等級の水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて、分配することも可能である。組成物を注射によって投与しようとする場合、投与前に、成分を混合可能であるように、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルを提供することも可能である。
　本発明の抗体等、組成物、医薬、剤（治療剤、予防剤等）等を中性型または塩型あるいは他のプロドラッグ（例えば、エステル等）で配合することも可能である。薬学的に許容しうる塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する遊離型のカルボキシル基とともに形成されるもの、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの遊離型のアミン基とともに形成されるもの、並びにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、および水酸化第二鉄などに由来するものが含まれる。
　特定の障害または状態の治療に有効な本発明の治療剤の量は、障害または状態の性質によって変動しうるが、当業者は本明細書の記載に基づき標準的臨床技術によって決定可能である。さらに、場合によって、in　vitroアッセイを使用して、最適投薬量範囲を同定するのを補助することも可能である。配合物に使用しようとする正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重大性によっても変動しうるため、担当医の判断および各患者の状況に従って、決定すべきである。しかし、投与量は特に限定されないが、例えば、1回あたり0.001、1、5、10、15、100、または1000mg/kg体重であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。投与間隔は特に限定されないが、例えば、1、7、14、21、または28日あたりに1または2回投与してもよく、それらいずれか2つの値の範囲あたりに1または2回投与してもよい。投与量、投与間隔、投与方法は、患者の年齢や体重、症状、対象臓器等により、適宜選択してもよい。また治療薬は、治療有効量、または所望の作用を発揮する有効量の有効成分を含むことが好ましい。悪性腫瘍マーカーが、投与後に有意に減少した場合に、治療効果があったと判断してもよい。有効用量は、in　vitroまたは動物モデル試験系から得られる用量－反応曲線から推定可能である。
　本発明の一実施形態において「患者」は、ヒト、またはヒトを除く哺乳動物（例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ネズミ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、マーモセット、サル、またはチンパンジー等の1種以上）を含む。
また患者は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌ陽性悪性腫瘍を発症していると判断または診断された患者であってもよい。このとき、判断または診断は、ＦＳＴＬ１またはＳｎａｉｌの蛋白質レベルを検出することにより行われることが好ましい。
　本発明の医薬組成物または剤（治療剤もしくは予防剤等）はキットとして提供することができる。　特定の実施形態では、本発明は、本発明の組成物または医薬の1以上の成分が充填された、1以上の容器を含む、薬剤パックまたはキットを提供する。場合によって、このような容器に付随して、医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　本発明のキットはまた、本発明の抗体等、組成物、治療剤、予防剤または医薬として使用するタンパク質をコードする発現ベクターも含有することも可能であり、このタンパク質は、発現された後、生物学的に活性な複合体を形成するため、再構成されることも可能である。このようなキットは、好ましくはまた、必要な緩衝剤および試薬も含有する。場合によって、このような容器に付随して、キット使用のための指示書（添付文書）、並びに／あるいは医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　本発明のキットはまた、本発明の抗体等、組成物、治療剤、予防剤または医薬として使用するタンパク質をコードする発現ベクターも含有することも可能であり、このタンパク質は、発現された後、生物学的に活性な複合体を形成するため、再構成されることも可能である。このようなキットは、好ましくはまた、必要な緩衝剤および試薬も含有する。場合によって、このような容器に付随して、キット使用のための指示書（添付文書）、並びに／あるいは医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
　（併用剤）
　１つの局面において、本発明は、ＦＳＴＬ１抑制剤と化学療法剤との組み合わせ物を提供する。理論に束縛されることを望まないが、本発明は、ＦＳＴＬ１の経路を抑制することに加え、化学療法剤によるがん治療とを組み合わせることにより、肺癌が消失し生存率が調べた範囲で６０％を超えるという顕著な効果が示されたことに例示されるように、予想外に顕著にがんに対する効果が増強されたことに基づくものであり、実施例において示された抗体による例から、抑制剤については、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができ、化学療法剤については同様の機構で抗がん作用が達成されるものであればどのようなものでも採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤および化学療法剤は、各々ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路および化学療法剤に関する作用機序が同様である限り、上記例示される等のどのような形態でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の組合せ物では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、および／または化学療法剤はシクロフォスファミドや５‐フルオロウラシルと同様の機能を有する誘導体等であり得る。
　１つの局面において、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、化学療法剤との組み合わせ物を提供する。
　１つの実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号７５８（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１７０位（好ましくは１４８～１６２位）、１９３～２２８位または１９３～２１６位および２０５～２２８位ならびに２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する。
　好ましい実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む。
　より好ましい実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む。
　さらに別の実施形態では、本発明で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号８７３；重鎖：配列番号８７５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号８７７；重鎖：配列番号８７９）、＃８－１（軽鎖：配列番号８８１；重鎖：配列番号８８３）、＃７（軽鎖：配列番号８９７；重鎖：配列番号８９９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号９０５；重鎖：配列番号９０７）および＃３３（軽鎖：配列番号９１３；重鎖：配列番号９１５）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。さらに好ましくは、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物における抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１０（軽鎖：配列番号８１１；重鎖：配列番号８１３）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む。
　一つの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体であり、本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ヒト化抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり得る。好ましい実施形態では、本発明のヒト化抗体は、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９２６、９２８、９３０および９３２）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９４２、９４４、９４６および９４８）を有する。
　１つの実施形態では、本発明で用いられる化学療法剤はDNA合成阻害機能を有する。
　具体的な実施形態では、使用され得る化学療法剤は、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体またはそれらの組合せであり得る。
　好ましい実施形態では、使用される化学療法剤は、アルキル化剤を含む。
具体的な実施形態では、使用され得る化学療法剤は、シクロフォスファミドまたはその誘導体を含む。さらに好ましくは、化学療法剤はシクロフォスファミドを含む。
　別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む医薬を提供する。本発明の医薬で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む抗がん剤を提供する。本発明の抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤を提供する。本発明の転移性悪性腫瘍の治療剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病、および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤を提供する。本発明のこれらの疾患の治療剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含むがん細胞の転移（例えば、骨転移、肺転移）の阻害剤を提供し、骨転移、肺転移、肝転移、脾臓転移、リンパ節転移、脳転移、特に骨転移、肺転移の阻害をもなし得る阻害剤を提供する。本発明のがん細胞の転移の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の阻害剤を提供する。本発明のＭＳＣの免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の誘導や増強の増強の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミド、５－フルオロウラシルまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　さらに別の局面では、本発明は、本発明の組合せ物を含む免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤を提供する。本発明の免疫関連細胞の免疫抑制、免疫不全等の免疫破綻の活性の獲得および／または増強の阻害剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミド、５－フルオロウラシルまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　１つの実施形態では、上記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、より好ましくは少なくとも６つ、より好ましくは少なくとも７つ、より好ましくは少なくとも８つ、より好ましくは少なくとも９つ、より好ましくは少なくとも１０、より好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、より好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、より好ましくはすべてを含む。
　１つの局面において、本発明の医薬、抗がん剤、治療剤または阻害剤は、別のがん治療と組み合わせてもよい。具体的には、別のがん治療は、本発明の抗がん剤とは別の抗がん剤、手術療法もしくは放射線療法またはそれらの組合せを含む。
　癌に対する化学療法および放射線療法は、リンパ球の増殖を激しく減少させるという副作用が不可避である。一つの実施形態では、本発明の組成物の投与は、減少したリンパ球細胞を刺激、増殖させる効果を示すと共に、通常の化学療法に付随する激烈な副作用を最小限に抑制することができる。また、放射線療法についても同様である。また、本発明の組成物との併用によって、化学療法剤の用量または照射放射線量を通常使用される用量あるいは照射量から大幅に減少させることができる。本発明の癌治療組成物は、本発明の抗がん剤とは別の、既存のまたは新規の化学療法剤と併用あるいは合剤化することができる。そのような化学療法剤として、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、P糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。さらに、患者のQOL回復のための癌治療補助剤である白血球(好中球)減少症治療薬、血小板減少症治療薬、制吐剤、癌性疼痛治療薬と併用あるいは合剤化ができる。
　　１つの別の局面では、本発明は、ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤は化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤を提供する。抑制剤としては、実施例において示された抗体による例から、それぞれ独立して、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤は、ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよく、そして化学療法剤は同様の作用機序でがんを撲滅することができるか限りどのような化学療法剤でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の抗がん剤物では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　好ましくは、本発明は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤を提供する。このような抗がん剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むが、使用形態が、併用であるものであり、そのような併用は例えば、キットに記載されあるいは添付文書において記載される。本発明の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　他の局面では、本発明は、化学療法剤を含む抗がん剤であって、該化学療法剤はＦＳＴＬ抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤を提供する。抑制剤としては、実施例において示された抗体による例から、それぞれ独立して、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤は、ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよく、化学療法剤は同様の作用機序でがんを撲滅することができるか限りどのような化学療法剤でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の抗がん剤では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、化学療法剤は、シクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　好ましくは、本発明は、化学療法剤、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、化学療法剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤を提供する。本発明の化学療法剤を含む抗がん剤で使用される抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、本明細書において（抗ＦＳＴＬ１抗体）の節等に記載される任意の実施形態あるいは、本発明の医薬で使用されるおよび任意の実施例の抗体を使用することができることが理解される。本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　１つの局面では、本発明は、有効量のＦＳＴＬ１抑制剤と有効量の化学療法剤とを組み合わせて投与する工程を含むがんを治療または予防するための方法を提供する。理論に束縛されることを望まないが、本発明の方法では、ＦＳＴＬ１の経路を抑制することに加え、化学療法剤でのがん撲滅機序を併用することにより、肺癌患者が過半数生存するという顕著な効果が示されたことに例示されるように、予想外に顕著にがんに対する効果が増強されたことに基づくものであり、実施例において示された抗体による例から、他の抑制剤、抗体以外の形態たとえば抗体の抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される任意の形態を採用することができることが理解される。本発明において使用され得るＦＳＴＬ１抑制剤は、ＦＳＴＬ１のシグナル伝達経路を抑制することができる限り、上記例示される等のどのような形態でもよく、化学療法剤は同様の作用機序でがんを撲滅することができるか限りどのような化学療法剤でもよいが、好ましい実施形態では、本発明の方法では、ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、本発明の医薬で使用される化学療法剤は、本明細書において記載される任意の実施形態あるいはシクロフォスファミドまたはその誘導体を使用することができることが理解される。
　好ましくは、がんを治療または予防するための方法であって、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物の有効量と、化学療法剤の有効量とを組み合わせて、必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法を提供する。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、化学療法剤とは、同時に投与してもよく別々に（別時に）投与してもよい。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、化学療法剤とは、合剤とされてもよく、別々の剤型として投与されてもよい。抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、化学療法剤とは、同じ経路で投与されても別経路で（例えば、経口および静脈内投与）投与されてもよい。
　　（一般技術）
　本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Sambrook　J.　et　al.(1989).　Molecular　Cloning:　A　Laboratory　Manual,Cold　Spring　Harborおよびその3rd　Ed.(2001);　Ausubel,　F.M.(1987).Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;　Ausubel,F.M.(1989).　Short　Protocols　inMolecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,Greene　Pub.　Associates　and　Wiley-Interscience;Innis,M.A.(1990).PCR　Protocols:　A　Guide　to　Methods　and　Applications,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1992).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Ausubel,F.M.　(1995).Short　Protocols　in　MolecularBiology:　A　Compendium　of　Methods　from　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Greene　Pub.　Associates;Innis,M.A.　et　al.(1995).PCR　Strategies,　Academic　Press;　Ausubel,F.M.(1999).Short　Protocols　in　Molecular　Biology:　A　Compendium　of　Methods　fromCurrent　Protocols　in　Molecular　Biology,Wiley,　and　annual　updates;　Sninsky,　J.J.et　al.(1999).　PCR　Applications:　Protocols　for　Functional　Genomics,　Academic　Press、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
　人工的に合成した遺伝子を作製するためのDNA合成技術および核酸化学については、例えば、Gait,　M.J.(1985).　Oligonucleotide　Synthesis:A　Practical　Approach,IRL　Press;　Gait,M.J.(1990).　Oligonucleotide　Synthesis:　A　Practical　Approach,　IRL　Press;　Eckstein,F.(1991).　Oligonucleotides　and　Analogues:APractical　Approach,　IRL　Press;Adams,　R.L.　et　al.(1992).　The　Biochemistry　of　the　Nucleic　Acids,　Chapman&Hall;　Shabarova,Z.　et　al.(1994).　Advanced　Organic　Chemistry　of　Nucleic　Acids,　Weinheim;Blackburn,　G.M.et　al.(1996).　Nucleic　Acids　in　Chemistry　and　Biology,　Oxford　University　Press;　Hermanson,G.T.(I996).Bioconjugate　Techniques,　Academic　Pressなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
　例えば、本明細書において、当該分野に知られる標準法によって、例えば自動化DNA合成装置（Biosearch、Applied　Biosystems等から市販されるものなど）の使用によって、本発明のオリゴヌクレオチドを合成することも可能である。例えば、Steinら（Steinet　al.,　1988,　Nucl.　Acids　Res.　16:3209）の方法によって、ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドを合成することも可能であるし、調節孔ガラスポリマー支持体（Sarinet　al.,1988,　Proc.　Natl.　Acad.　Sci.　USA　85:7448-7451）等の使用によって、メチルホスホネート・オリゴヌクレオチドを調製することも可能である。
　本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも1つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「2つの値の範囲内」と明記した場合、その範囲には2つの値自体も含む。
　本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
　以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、請求の範囲によってのみ限定される。
［実施例］
　以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　＜実施例１＞抗FSTL1抗体の作製
　3ヵ月齢のボリスブラウン3羽に対して、1羽当たり1回に抗原であるヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）（配列番号９１６）を1羽あたり100μgずつ腹腔に免疫した。1次免疫には完全フロイントアジュバンド（Wako社、014-09541）、2次、3次および4次免疫には不完全フロイントアジュバンド（Wako社、011-09551）を用いて抗原を腹腔に免疫した。5次免疫はPBS（phosphate　buffered　saline）に希釈した抗原を静脈注射した。隔週で翼下静脈より採血を行い、ELISAによって抗体価の確認を行った。3羽に対して4次免疫まで実施し、最も抗体価の上昇が見られた個体1羽に対して、5次免疫を行い、5次免疫を最終免疫とした。最終免疫3日後、ニワトリの脾臓を回収し、Ficoll　paque　PLUS（GE　Healthcare社、17-1440-03）を用いた密度勾配遠心によりリンパ球を単離し、TRIzole　Reagent（Life　Technologies、15596026）を用いてRNAを抽出した。抽出したRNAからPrimeScript　II　1st　Strand　cDNA　Synthesis　Kit（TAKARA、6210A）を用いたRT-PCRによりcDNAの合成を行い、scFvファージライブラリーを作製した。発現ベクターはpPDSを使用した。scFvファージライブラリーの作製は、参考文献：“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。
　scFv　ファージライブラリーを用いてパニングを行いFSTL1特異的なファージの濃縮を行った。パニングに用いた抗原はヒトFSTL1（Novoprotein社、Cat#CF23）のみ、またはヒト　FSTL1（R&D　Systems社、Cat#　1694-FN-050）およびマウスFSTL1（R&D　Systems　Cat#1738-FN-050）の2種のパニング用の抗原を交互に使用することでマウスにも交差反応性を持つ抗体を取得した。パニングは参考文献“Nakamura　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2004　Ju;66　(7):　807-814”に記載の方法に従って行った。5回パニングを行った後、ライブラリーの反応性を、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1を固相化したプレートを用いたELISAによって確認し、反応性が上昇し始めたライブラリーからファージのスクリーニングを行った。scFvファージ抗体のサンプル調製では、ファージを大腸菌に感染させ、アンピシリン（50μg/ml、nacalai、02739-32）を含む2×YT　Agar　plateにプレーティングし、得られたコロニーをアンピシリン含有2×YT液体培地中で培養した。ヘルパーファージを感染させた後、アンピシリン（50μg/ml）、カナマイシン（25μg/ml、明治製菓株式会社、GS1-RSS）、IPTG（100μg/ml、nacalai、19742-94）含有2×YT液体培地中でファージの誘導を行った。得られた培養上清中のscFvファージ抗体の反応性を、抗原固相化プレートを用いたELISAによって確認した。
　ELISAによるスクリーニングでは、PBSで希釈した１μg／mlのヒトFSTL1またはマウスFSTL1を50μｌ／ウェルで96ウェルプレート（Nunc社、Cat.　No.　442404、）に入れ、一晩、４℃で抗原を固相化した。固相化の後、25％Block　Ace（DSファーマバイオメディカル、UK-B80）を含むＰＢＳでウェルをブロッキングし、scFvファージ抗体を含む培養上清を反応させた。二次抗体として、HRP標識Goat　anti-mouse　IgG　(H+L)　（KPL社、Cat.　No.474-1806）を10％Block　Aceに1000倍希釈した溶液に加え、基質として用いたOPDの発色をプレートリーダー（BIO-RAD社、Model　680）で490nmおよび630nmの吸光度を測定した。以上の条件を表1にまとめる。
　（表１　スクリーニング条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
（Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。）
　ELISAにて得られた陽性クローンについて、ユーロフィンジェノミクスに外注し、DNAシークエンスを行い、配列を決定した。
　配列の異なるクローンについて、scFv抗体をコードするDNA鎖を鋳型にして、ニワトリ由来抗体遺伝子H鎖可変領域及びL鎖可変領域の増幅をPCRで行った後、PCR産物をSacII（BioLabs社,　Cat#R0157S）及びNheI制限酵素処理（BioLabs社,　Cat#R0131S）した。次に、H鎖可変領域及びL鎖可変領域のそれぞれについて、同じように制限酵素処理したマウス/ニワトリキメラ抗体（IgG1）発現ベクター（H鎖用発現ベクター：pcDNA4/myc-His、L鎖用発現ベクター：pcDNA3/myc-His、Invitrogen）に組換えた。作製したH鎖及びL鎖のコンストラクトをCHO細胞にトランスフェクトした後、培養上清をヒトまたはマウス　FSTL1タンパク質を固相したELISAで反応性の確認を行った。使用したマウスキメラ発現ベクターはTateishi　et　al.,　J　Vet　Med　Sci.　2008　Apr;70(4):　397-400に記載されているベクターを使用した。
　以上により得られた抗体クローン（ニワトリ-マウスキメラ抗体）のうち、クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３を以下の実験で使用した。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号７６３、７６７、７７１、７７５、７７９、７８３、７８７、７９１、７９５、７９９、８０３、８０７、８１１、８１５、８１９、８２３であり、全長アミノ酸配列は、配列番号８５３、８５７、８６１、８６５、８６９、８７３、８７７、８８１、８８５、８８９、８９３、８９７、９０１、９０５、９０９、９１３であり、核酸配列は順に配列番号７６２、７６６、７７０、７７４、７７８、７８２、７８６、７９０、７９４、７９８、８０２、８０６、８１０、８１４、８１８、８２２であり、全長核酸配列は、配列番号８５２、８５６、８６０、８６４、８６８、８７２、８７６、８８０、８８４、８８８、８９２、８９６、９００、９０４、９０８、９１２である。クローン#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#6-55、#7、#10、#13、#22,＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列は順に配列番号７６５、７６９、７７３、７７７、７８１，７８５、７８９、７９３、７９７、８０１、８０５、８０９、８１３、８１７、８２１、８２５であり、全長アミノ酸配列は、配列番号８５５、８５９、８６３、８６７、８７１、８７５、８７９、８８３、８８７、８９１、８９５、８９９、９０３、９０７、９１１、９１５であり、核酸配列は順に配列番号７６４、７６８、７７２、７７６、７８０、７８４、７８８、７９２、７９６、８００、８０４、８０８、８１２、８１６、８２０、８２４であり、全長核酸配列は、配列番号８５４、８５８、８６２、８６６、８７０、８７４、８７８、８８２、８８６、８９０、８９４、８９８、９０２、９０６、９１０、９１４である。
　上記の抗体クローンを大量に製造するため、作製したH鎖およびL鎖のコンストラクトをほ乳類培養細胞にExpi293Expression　system(Invitrogen社、Cat#A14635)を利用しトランスフェクトした後、発現した抗体の精製をProteinG　Sepharose　4　Fast　Flow（GE　healthcare社、17-018-02）を用いて行った。得られた各クローンの精製抗体のFSTL1に対する結合活性の測定については、実施例２で示す。
　＜実施例２＞精製抗体のFSTL1に対する結合活性評価
　以下の条件でELISAを行い、取得した上記の抗体クローンのFSTL1に対する反応性を評価した。
　（表２　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗ジニトロフェニル（DNP）抗体（ネガティブコントロール）、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　結果、ヒトFSTL1に対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#7-34、#5-10＞#5-3＞#5-8＞#5-43　となった（図９５A）。また、抗体クローンの中で＃6-55と＃7-34はヒトおよびマウスFSTL1の両方に特異的かつ同程度の強い結合活性を示した（図９５B）。
　図９６および図９７では、スクリーニングおよび抗体精製の時期が異なるクローンに関しても表３の条件で結合活性を評価した結果を示した。
　（表３　精製抗体の結合活性評価のELISA条件）
使用した抗体；抗DNP抗体、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8、#7、#10、#13、#22,#33
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　（結果）
　ヒトFSTLに対して特異的な結合活性が認められ、結合活性の強さを比較すると、#6-55、#8-1＞#8-7＞#8-4＞#8-8　となった（図９６）。更に、ヒトおよびマウスFSTL1に対する結合活性を評価した結果、（図９７A）ヒトFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#13＞#8-1、#10＞#8-4＞#7、#33＞#5-8＞#22となった。（図９７B）マウスFSTL1に対する結合活性の強さは、#6-55、#7-34、#10、#13＞#22＞#７＞#33＞#8-1となり、#8-1はごくわずかに結合活性を示した。#5-8、#8-4はマウスFSTL1に対して全く結合活性を示さなかった。
　＜実施例３＞抗体のエピトープマッピング
　本実施例では、上記実施例で得られた抗体のエピトープマッピングを行った。
　＜遺伝子合成＞
　ヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の合成にあたり、ヒトFSTL1遺伝子はNM_007085.4（配列番号７５８）を、マウスFSTL1遺伝子はNM_008047.5（配列番号７６０）の配列情報を参考に、C末端にアラニン残基3個とヒスチジン残基10個を付加したHisタグ付きのヒトおよびマウスFSTL1遺伝子の配列設計を行った。更に、哺乳類細胞での発現を考慮して、コドンの最適化を行い、各遺伝子の両末端にプラスミド挿入用の核酸配列（配列番号８３２および８３３）をそれぞれ付加した遺伝子を設計し、合成はLife　Technologies社に外注した。元になったヒトおよびマウスFSTL1の核酸およびアミノ酸配列（配列番号７５８，７５９，７６０、７６１）および実際に遺伝子合成した核酸配列および翻訳後のアミノ酸配列（配列番号８２６，８２７，８２８，８２９）を下記に示す。
プラスミドへの挿入用の配列：N末側　5’-CGAACCCTTAAGCTTG-3’（配列番号８３２）
　　　　　　　　　　　　　　C末側　5’-CGTGGCATCTAGACA-3（配列番号８３３）
・ヒトFSTL1核酸配列（配列番号７５８）＜以下下線はリーダー配列である。＞
atgtggaaacgctggctcgcgctcgcgctcgcgctggtggcggtcgcctgggtccgcgccgaggaagagctaaggagcaaatccaagatctgtgccaatgtgttttgtggagccggccgggaatgtgcagtcacagagaaaggggaacccacctgtctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaactgcatcgagatgcctgcctcactggatccaaaatccaggttgattacgatggacactgcaaagagaagaaatccgtaagtccatctgccagcccagttgtttgctatcagtccaaccgtgatgagctccgacgtcgcatcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagcaactacagtgaaatcctagacaagtattttaagaactttgataatggtgattctcgcctggactccagtgaattcctgaagtttgtggaacagaatgaaactgccatcaatattacaacgtatccagaccaggagaacaacaagttgcttaggggactctgtgttgatgctctcattgaactgtctgatgaaaatgctgattggaaactcagcttccaagagtttctcaagtgcctcaacccatctttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggatgaaacgtatgcagatggagctgagaccgaggtggactgtaaccgctgtgtctgtgcctgtggaaattgggtctgtacagccatgacctgtgacggaaagaatcagaagggggcccagacccagacagaggaggagatgaccagatatgtccaggagctccaaaagcatcaggaaacagctgaaaagaccaagagagtgagcaccaaagagatctaa
・マウスFSTL1核酸配列（配列番号７６０）
atgtggaaacgatggctggcgctctcgctggtgaccatcgccctggtccacggcgaggaggaacctagaagcaaatccaagatctgcgccaatgtgttttgtggagctggcagggaatgtgccgtcacagagaagggggagcccacgtgcctctgcattgagcaatgcaaacctcacaagaggcctgtgtgtggcagtaatggcaagacctacctcaaccactgtgaacttcatagagatgcctgcctcactggatccaagatccaggttgattatgatgggcactgcaaagaaaagaagtctgcgagtccatctgccagcccagttgtctgctatcaagctaaccgcgatgagctccgacggcgcctcatccagtggctggaagctgagatcattccagatggctggttctctaaaggcagtaactacagtgagatcctagacaagtactttaagagctttgataatggcgactctcacctggactccagtgaattcctgaaattcgtggagcagaatgaaacagccatcaacatcaccacttatgcagatcaggagaacaacaaactgctcagaagcctctgtgttgacgccctcattgaactgtctgatgagaacgctgactggaaactcagcttccaagagttcctcaagtgcctcaacccatccttcaaccctcctgagaagaagtgtgccctggaggacgaaacctatgcagatggagctgagactgaggtggactgcaatcgctgtgtctgttcctgtggccactgggtctgcacagcaatgacctgtgatggaaagaatcagaagggggtccagacccacacagaggaggagaagacaggatatgtccaggaactccagaagcaccagggcacagcagaaaagaccaagaaggtgaacaccaaagagatctaa
・実施例で用いたヒトＦＳＴＬ１の核酸配列（配列番号８２６）
atgtggaagagatggctggccctggctctggcactggtggctgtggcttgggtgcgcgccgaggaagaactgcggagcaagagcaagatctgcgccaacgtgttctgcggagccggcagagaatgtgccgtgaccgagaagggcgagcctacctgcctgtgcatcgagcagtgcaagccccacaagaggcctgtgtgcggcagcaacggcaagacctacctgaaccactgcgagctgcaccgggatgcctgtctgaccggcagcaagatccaggtggactacgacggccactgcaaagaaaagaaaagcgtgtcccccagcgccagccccgtcgtgtgttaccagagcaacagggacgagctgcggcggagaatcatccagtggctggaagccgagatcatccccgacggctggttcagcaagggcagcaactacagcgagatcctggacaagtacttcaagaacttcgacaacggcgacagcagactggacagcagcgagttcctgaagttcgtggaacagaacgagacagccatcaacatcaccacctaccccgaccaggaaaacaacaagctgctgcggggcctgtgcgtggacgccctgattgagctgagcgacgagaacgccgactggaagctgagctttcaggaatttctgaagtgcctgaaccccagcttcaacccccccgagaagaagtgcgccctggaggacgagacatacgccgatggcgccgagacagaggtggactgcaacagatgcgtgtgcgcctgcggcaactgggtgtgcaccgccatgacctgcgacggcaagaatcagaagggcgcccagacccagaccgaagaagagatgaccagatacgtgcaggaactgcagaagcaccaggaaaccgccgaaaagaccaagcgggtgtccaccaaagagatcgccgctgcccaccaccatcaccatcatcaccaccaccattga
・実施例で用いたマウスFSTL1の核酸配列（配列番号８２８）
atgtggaagcggtggctggccctgagcctcgtgacaattgctctggtgcacggcgaggaagaacccagaagcaagagcaagatctgcgccaacgtgttctgcggagccggcagagaatgtgccgtgaccgagaagggcgagcctacctgcctgtgcatcgagcagtgcaagccccacaagaggcctgtgtgcggcagcaacggcaagacctacctgaaccactgcgagctgcaccgggatgcctgtctgaccggcagcaagatccaggtggactacgacggccactgcaaagagaagaagtccgccagccctagcgccagcccagtcgtgtgttaccaggccaaccgggacgagctgcggcggagactgattcagtggctggaagccgagatcatccccgacggctggttcagcaagggcagcaactacagcgagatcctggacaagtacttcaagagcttcgacaacggcgacagccacctggacagcagcgagttcctgaagttcgtggaacagaacgagacagccatcaacatcaccacctacgccgaccaggaaaacaacaagctgctgagaagcctgtgcgtggacgccctgatcgagctgagcgacgagaacgccgactggaagctgagctttcaggaatttctgaagtgcctgaaccccagcttcaacccccccgagaagaaatgcgccctggaagatgagacatacgccgacggcgccgagacagaggtggactgcaatagatgcgtgtgcagctgcggccactgggtgtgcaccgccatgacctgcgacggcaagaaccagaaaggcgtgcagacccacaccgaggaagagaaaaccggctacgtgcaggaactgcagaagcaccagggcaccgccgaaaagaccaagaaagtgaacaccaaagagatcgccgctgcccaccaccatcaccatcatcaccaccaccattga
・ヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号７５９）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEI
・マウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号７６１）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEI
・実施例で用いたヒトFSTL1アミノ酸配列（配列番号８２７）
MWKRWLALALALVAVAWVRAEEELRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSVSPSASPVVCYQSNRDELRRRIIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKNFDNGDSRLDSSEFLKFVEQNETAINITTYPDQENNKLLRGLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCACGNWVCTAMTCDGKNQKGAQTQTEEEMTRYVQELQKHQETAEKTKRVSTKEIAAAHHHHHHHHHH
・実施例で用いたマウスFSTL1アミノ酸配列（配列番号８２８）
MWKRWLALSLVTIALVHGEEEPRSKSKICANVFCGAGRECAVTEKGEPTCLCIEQCKPHKRPVCGSNGKTYLNHCELHRDACLTGSKIQVDYDGHCKEKKSASPSASPVVCYQANRDELRRRLIQWLEAEIIPDGWFSKGSNYSEILDKYFKSFDNGDSHLDSSEFLKFVEQNETAINITTYADQENNKLLRSLCVDALIELSDENADWKLSFQEFLKCLNPSFNPPEKKCALEDETYADGAETEVDCNRCVCSCGHWVCTAMTCDGKNQKGVQTHTEEEKTGYVQELQKHQGTAEKTKKVNTKEIAAAHHHHHHHHHH
　＜発現ベクター構築＞
　次に、pcDNA3.4TOPO（登録商標）へのマルチクローニングサイトの挿入、およびFSTL1遺伝子の挿入方法を説明する。
　以下のマルチクローニングサイトを有する配列を、ファスマック社へ外注し、一本鎖DNAの合成を行った。それぞれの一本鎖DNAは相補的であり、合成した一本鎖DNAを二本鎖にした後に、pcDNATM3.4-TOPO（登録商標）　TA　Cloning　Kit　(Life　Technologies,　Cat#　A14697)を用いてpcDNA　3.4　TOPO（登録商標）　vectorに挿入した。
・マルチクローニングサイト配列
5‘-AAGCTTGGATCCACTAGTGAATTCATCTACCAGCTAGCGTGGCATCTAGACACTCTCGA　GA-3’　（配列番号８３０）
5‘CTCGAGAGTGTCTAGATGCCACGCTAGCTGGTAGATGAATTCACTAGTGGATCCAAGCTT　A-3’　（配列番号８３１）
　マルチクローニングサイトを挿入して得られたプラスミドを大腸菌に形質転換し、大腸菌を培養してPureYieldTM　Plasmid　Midiprep　System（Promega社、Cat#　A2492）を用いてプラスミドを精製した。精製したプラスミドを制限酵素BamHI-HF（BioLabs社　Cat#　R3136L）およびNheI-HF（BioLabs社　Cat#R3131L）で処理し、１％アガロース電気泳動を行った。泳動後にエチジウムブロマイドで染色し、プラスミドのバンドを切り出しNucleoSpin　Gel　and　PCR　Clean-up（TAKARA社、Cat#　740609.250）を用いてゲルからプラスミドを精製した。
　合成したヒトFSTL1（配列番号８２６）またはマウスFSTL1遺伝子（配列番号８２８）をGeneArt　Seamless　Cloning　and　Assembly　Enzyme　Mix（Invitrogen社、Cat#A14606）を用いて、上記制限酵素処理済みプラスミドに組込み、そのプラスミドを大腸菌に形質転換した。形質転換した大腸菌を培養し、大腸菌からプラスミドを抽出・精製してDNAシーケンスを確認した。DNAシーケンスの結果、目的のヒトおよびマウスFSTL1遺伝子配列が確認できたプラスミドを発現プラスミドとした。得られたヒトおよびマウスFSTL1発現ベクターを用いて、Expi293TM　Expression　system（Life　Technologies社,　Cat#　A14635）で一過性発現を行った。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resin(Thermo　Scientific社、Cat#　89964)を用いて精製を行い、ELISAおよびエピトープマッピングELISA用の抗原とした。
　＜FSTL1欠損体の作製＞
　次に、各種欠損体作製方法を示す。上記で作製したヒトFSTL1発現プラスミドをテンプレートとして、以下に示す欠損体作製用プライマーおよびKOD　-Plus-　Mutagenesis　Kit(TOYOBO社、Cat#　SMK-101)を用いて欠損体の発現ベクターを構築した。欠損させる箇所は、Uniprotの　No.Q12841を参考にして立体構造に重要なジスルフィド結合が多く含まれる箇所以外を選択し（図９８A参照）、、21番目から53番目のアミノ酸欠損体（Δ21-53）、100番目から140番目のアミノ酸欠損体（Δ100-140）、148目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ148-170）、148番目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163番目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）、181番目から190番目のアミノ酸欠損体（Δ181-190）、193番目から228番目のアミノ酸欠損体（Δ193-228）および233番目から289番目のアミノ酸欠損体（Δ233-289）の発現ベクターを作製した。各種欠損体はExpi293TM　Expression　systemで一過性発現を行った。発現後の培養上清をHisPur　Cobalt　Resinを用いて精製を行い、エピトープマッピ
ングELISA用の抗原とした。
Δ21-53　(Forward　primer)
5’-TGCATCGAGCAGTGCAAGCCCCACA-3’（配列番号８３４）
Δ21-53(Reverse　primer)
5’-GGCGCGCACCCAAGCCACAGCCACC-3’　（配列番号８３５）

Δ100-140(Forward　primer)
5’-AAGGGCAGCAACTACAGCGAGATCC-3’　（配列番号８３６）
Δ100-140(Reverse　primer)
5’-TTTGCAGTGGCCGTCGTAGTCCACC-3’　（配列番号８３７）

Δ148-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号８３８）
Δ148-170(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号８３９）

Δ181-190(Forward　primer)
5’-AAGCTGCTGCGGGGCCTGTGCGTGG-3’　（配列番号８４０）
Δ181-190(Reverse　primer)
5’-GTTGATGGCTGTCTCGTTCTGTTCC-3’　（配列番号８４１）

Δ193-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG-3’　（配列番号８４２）
Δ193-228(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG-3’　（配列番号８４３）

Δ233-289(Forward　primer)
5’-CTGCAGAAGCACCAGGAAACCGCCG-3’　（配列番号８４４）
Δ233-289(Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG-3’　（配列番号８４５）

Δ148-154(Forward　primer)
5’-AACTTCGACAACGGCGACAGCAGACT-3’　（配列番号８４６）
Δ148-154(Reverse　primer)
5’-CTCGCTGTAGTTGCTGCCCTTGCTG-3’　（配列番号８４７）

Δ155-162(Forward　primer)
5’-CTGGACAGCAGCGAGTTCCTGAAGT-3’　（配列番号８４８）
Δ155-162(Reverse　primer)
5’-CTTGAAGTACTTGTCCAGGATCTCG-3’　（配列番号８４９）

Δ163-170(Forward　primer)
5’-TTCGTGGAACAGAACGAGACAGCCA-3’　（配列番号８５０）
Δ163-170(Reverse　primer)
5’-TCTGCTGTCGCCGTTGTCGAAGTTC-3’　（配列番号８５１）
Δ193-204(Forward　primer)
5’-AGCGACGAGAACGCCGACTGG -3’　（配列番号９７３）
Δ193-204(Reverse　primer)
5’-CAGCTTGTTGTTTTCCTGGTCGGGG -3’　（配列番号９７４）

Δ205-216(Forward　primer)
5’-GAATTTCTGAAGTGCCTGAAC -3’　（配列番号９７５）
Δ205-216 (Reverse　primer)
5’-CAGCTCAATCAGGGCGTCCAC -3’　（配列番号９７６）

Δ217-228(Forward　primer)
5’-CCCGAGAAGAAGTGCGCCCTGGAGG -3’　（配列番号９７７）
Δ217-228 (Reverse　primer)
5’-CTGAAAGCTCAGCTTCCAGTC -3’　（配列番号９７８）

Δ233-251(Forward　primer)
5’-AGATGCGTGTGCGCCTGCGGC -3’　（配列番号９７９）
Δ233-251 (Reverse　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号９８０）

Δ252-270(Forward　primer)
5’-AATCAGAAGGGCGCCCAGACC -3’　（配列番号９８１）
Δ252-270 (Reverse　primer)
5’-GTTGCAGTCCACCTCTGTCTCG -3’　（配列番号９８２）

Δ271-289(Forward　primer)
5’-CTTCTTCTCGGGGGGGTTGAAGCTG -3’　（配列番号９８３）
Δ271-289 (Reverse　primer)
5’-CTTGCCGTCGCAGGTCATGGCG -3’　（配列番号９８４）

Δ48-100(Forward　primer)
5’-AAGAAAAGCGTGTCCCCCAGC -3’　（配列番号９８５）
Δ48-100 (Reverse　primer)
5’-CTTCTCGGTCACGGCACATTC -3’　（配列番号９８６）

　＜エピトープマッピングELISA＞
上記で調整した抗原と以下の抗体を用いてエピトープマッピングELISAを行った。
使用した抗体；実施例1で得られた各種ニワトリ-マウスキメラ抗体、特許WO2009/028411の実施例で評価されているラット抗　FSTL1抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)ネガティブコントロールとして抗DNP抗体およびラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061、clone　141945)
　（表４　エピトープマッピングELISA条件）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
　Ｏ／Ｎは一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）を意味する。
　図９８の上段でヒトFSTL1の模式図（Uniprot,　No.Q12841参考）と調製したそれぞれの欠損体の欠損部位を示す。エピトープマッピングELISAの結果、各抗体のエピトープ箇所は図９８下段で示すように、#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#8-1、#8-2、#8-4、#8-7は233番目から289番目のアミノ酸配列に含まれる配列、、#7、#10、#22は193番目から228番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定される。また、R&D社製のラット抗FSLT1抗体のエピトープは21番目から53番目のアミノ酸配列に含まれる配列と推定され、実施例１で得られた抗体各種とは異なるエピトープであることが分かった。また、#6-55、#7-34、#13は148番目から170番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定され、更にこれらのクローンは後述のin　vitro　評価によって有望な抗体クローンとして判断されたため、エピトープが含まれる148番目から170番目のアミノ酸配列についてエピトープ配列の絞り込みを行った。具体的には、148目から154番目のアミノ酸欠損体（Δ148-154）、155番目から162番目のアミノ酸欠損体（Δ155-162）、163目から170番目のアミノ酸欠損体（Δ163-170）を作製し、上記と同様にエピトープマッピングELISAを行った。結果、#6-55、#7-34、#13のエピトープ箇所は図９８下段で示すように148番目から162番目のアミノ酸配列に含まれる配列をエピトープとして認識すると推定された。
　＜エピトープのさらなる絞り込み＞
　１４８－１７０番目のアミノ酸配列（＃６－５５、＃７－３４、＃１３のエピトープ）、１９３－２２８番目のアミノ酸配列（＃７、＃１０、＃２２のエピトープ）および２３３－２８９番目のアミノ酸配列（＃５－２、＃５－３、＃５－８、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－８のエピトープ）について、更に欠損配列を細分化し、エピトープ配列の絞り込みを行った。＃３３のクローンについてエピトープの同定を行った。
　図９８下段には、これらの結果をまとめたものも反映されている。＃３３のエピトープは、４８～１００番目のアミノ酸配列に、＃７、＃１０のエピトープは、２０５～２２８番目のアミノ酸配列に、＃２２のエピトープは、１９３～２１６位のアミノ酸配列に、＃５－２、＃５－３、＃５－１０、＃５－４３、＃８－１、＃８－４、＃８－７、＃８－１０のエピトープは、２７２～２８９番目のアミノ酸配列にあるものと推定された。
　＜実施例４：間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　骨髄細胞をFSTL1で刺激すると、多分化能や自己増殖能を備えた間葉系幹細胞　(MSC)が増殖することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、C57BL/6マウスの大腿骨より採取した2x107個/wellの骨髄細胞を3mL/wellの2%ウシ胎児血清含有RPMI1640　(GIBCO社、Cat.　No.　C11875500BT)培地に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D　Systems社　Cat#　1694-FN-050)と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その11日後、細胞数を計数するとともに、MSCマーカーの発現を調べるためにPE標識抗ALCAM抗体　(eBiosciences社、Cat.　No.12-1661-82)およびPE標識抗PDGFRA抗体(eBiosciences社、Cat＃12-1401-81)を用いて染色して、ALCAM陽性細胞およびPDGFR陽性細胞の含有率をFACScan　(BD　社、Code.　BECTON-DICKINSON-FACSCAN)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の各陽性細胞の数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるALCAM陽性細胞およびPDGFRA陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。他と比べ、#5‐43、#6-55、#7‐34は若干阻害活性が強い傾向が見られた。
　＜実施例５：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　FSTL1で刺激活性化された腫瘍細胞は、骨転移を促す分子群を高発現し、転移浸潤能を亢進することが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、ヒト膵癌細胞株Panc1を、それぞれ2x107個/wellずつ1mL/wellの10%　ウシ胎児血清含有D-MEM培地(GIBCO社　Cat.　No.　C11885500BT)に浮遊させ、最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10　μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）またはそのアイソタイプであるマウスIgG(抗DNP抗体)を対照抗体「Control」として添加して刺激培養した(6-wellプレート)。その3日後、細胞数を計数するとともに、骨転移性を示すマーカーの発現を調べるためにPE標識抗RANKL抗体(eBiosciences社　Cat.　No.12-6619)およびPE標識抗CCR2抗体　(R&D社　Cat.　No.　FAB151P)を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体（抗DNP抗体）と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるRANKL陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。本実験結果から、RANKL陽性細胞の含有率と1培養中の細胞数とでは、細胞数がより評価に適切であることが判明したので、以下の実施例では細胞数を指標として判断を行った。
　＜実施例６：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、実施例４と同様の実験を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#7-34）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その11日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体(BD　Pharmingen社、Cat.　No.555484)を用いて染色して、一般的にMSCを高率に含むと報告されているCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図９９A）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8、#7-34、#5‐43がより高い阻害活性を示し、FSTL1の作用をほぼ完全に阻害した。
　＜実施例７：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価をRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞で行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1(R&D社)と10μg/mLの抗FSTL1抗体（実施例６と同じクローン）または対照抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図９９B）。結果、コントロール抗体と比較して、全ての抗体クローンがRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。その中でも、#5-3、#5-8がより高い阻害活性を示した。
　＜実施例８：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、濃度を変更して、実施例４、６と同様にFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-3、#5-8、#5-10、#5-43、#6-55、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）または対照抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図１００A）。結果、コントロール抗体と比較して、#5-8、#5‐43、#6‐55、#8‐1、#8‐4がFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例９：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、低濃度で、FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-8、#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した（図１００B）。結果、最終濃度20ng/mLの濃度でも、コントロール抗体と比較して、#5-8と#6-55がRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して阻害活性を示した。
　＜実施例１０：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価＞
　本実施例では、新たに取得したクローンも含めFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性
評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μｇ/mLの抗FSTL1抗体(#5-2、#5-3、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、#5-2、#6‐55、#8‐4、#8‐7はRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対して高い阻害活性を示した（図１００C）。
　＜実施例１１：FSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害活性評価(用量依存試験)＞
　本実施例では、低用量を含むよう用量を変動させてFSTL1による腫瘍細胞活性化の阻害
活性評価を行った。
　実施例５と同様に、ヒト膵癌細胞株Panc1に最終濃度50ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体(#6-55)またはコントロール抗体を添加して刺激培養した。その3日後、細胞数を計数するとともに、PE標識抗RANKL抗体とPE標識抗CCR2抗体を用いて染色し、RANKL陽性細胞やCCR2陽性細胞の含有率をFACScan　(BD社)を用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中の細胞数を算出した。結果、コントロール抗体と比較して、抗体の用量依存性は認められなかったが、試験した#6-55は試験したすべての用量（５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ）でRANKL陽性細胞およびCCR2陽性細胞の増加に対してほぼ１００％の阻害活性を示した（図１００Ｄ）。
　＜実施例１２：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、さらなるクローンを含めてFSTL1による間葉系幹細胞(MSC)誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調整したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#5-2、#5-8、#6-55、#7-34、#8-1、#8-4、#8-7、#8-8）またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、PE-Cy5標識抗CD45抗体を用いて染色してCD45陰性細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析し、1培養中のMSC割合および数を算出した（図１０１）。結果、Control　と
比較して、全てのクローンがFSTL1によるCD45陰性細胞の増加に対して阻害活性を示した。特に、#7‐34、#5-2、#6‐55、#8‐7の順で高い阻害活性が認められた。
　＜実施例１３：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例４と同様に調製したマウス骨髄細胞に、最終濃度20ng/mLのFSTL1と10μg/mLの抗FSTL1抗体（#6-55、#7-34、#8-1、#8-4）、免疫抑制解除の効果が報告されている抗PD-L1抗体またはコントロール抗体の抗DNP抗体を添加して刺激培養した。その8日後、細胞数を計数するとともに、MSC（CD45陰性細胞）、癌転移に伴って増加するMSCである癌関連MSC（CD45陰性、ALCAM陽性、CD271陽性細胞）、癌関連MSCと共に増加する単球系骨髄由来免
疫抑制性細胞（M-MDSC：CD11b陽性、Gr1陽性、ALCAM陽性細胞）を検出するため、PE-Cy5標識抗CD45抗体、PE標識抗ALCAM抗体、FITC標識抗CD271抗体　(Abcam社、Cat.　No.　AB62122)、FITC標識抗CD11b抗体(BD　Pharmingen社、Cat.No.553310)、PE-Cy5標識抗Gr1抗体（eBioscience社、Cat.　No.15-5931）を用いて染色し、上述の細胞の含有率をFACScanを用いてフローサイトメトリー解析して1培養中のMSC数および割合を算出した（図１０２）。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して高い阻害活性を示した。また、PD-L1はMSCに発現しておりMSCの誘導に影響を及ぼすことは予想していたが、阻害活性は抗FSTL1抗体の方が強かった。
　＜実施例１４：FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価および脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞(MSC)、癌関連MSC、骨髄由来免疫抑制性細胞（MDSC）誘導の阻害活性評価を行った。
　実施例１３と同様の試験方法によって抗体クローン（#6-55、#7、#10、#13、#22）について活性評価を行った。#6-55は活性のポジティブコントロールとして設置した。結果、コントロール抗体と比較して、全てのクローンがFSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対して阻害活性を示し、中でも、#13はポジティブコントロールと同等以上の阻害活性を示した（図１０３A）。#13と#6‐55はエピトープが同じ領域であるため、妥当な結果と思われる。図１０３Bは、脂肪細胞への分化能を有するMSC誘導の阻害活性を解析した結果を示す。マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した。グラフにおいて、左端に何も加えないもの、左から２番目にコントロール抗体、続いて抗FSLT１抗体クローンを示す。いずれの抗FSLT１抗体でも脂肪細胞は認められず、大元となるMSCへの分化誘導が阻害されていることが理解される。
　＜実施例１５：従来の抗体との比較＞
　本実施例では、特許文献１（WO2009/028411）の実施例で評価されているR&D　Systems社製の抗FSTL1抗体との活性比較を行った。
　特許文献１（WO2009/028411）において免疫抑制に重要な制御性T細胞の誘導阻害活性を示したR&D　Systems社製のラット抗FSTL1抗体(Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)と本発明の#6‐55のFSTL1阻害活性の比較を行った。
　実施例４と同様に調整した骨髄細胞マウス骨髄細胞に最終濃度20ng/mLのFSTL1におよび、最終濃度20.0、10.0、5.0、2.5　μg/mlでラット抗FSTL1抗体および#6‐55をマウス骨髄細胞に添加した。また、それぞれのコントロール抗体となるラットIgG2bアイソタイプコントロール(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB0061　、clone　141945)および抗DNP抗体は最終濃度が20.0　μg/ml　でマウス骨髄細胞に添加して8日間培養し、実施例１３と同様にして、FSTL1によるMSC、癌関連MSC、M-MDSCの誘導に対する各抗体の阻害活性を評価した（図１０４A）。結果、ラット抗FSTL1抗体と#6‐55の抗体の阻害活性は同等レベルであった。一方、用量依存性は認められなかった。特許文献１（WO2009/028411）において示されている制御性T細胞の阻害はMSC誘導阻害を介した結果だったと推測される。
　＜実施例１６：FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)誘導の阻害活性評価（脂肪細胞への分化能の評価）＞
　本実施例では、FSTL1による間葉系幹細胞　(MSC)免疫抑制を誘導する効果についての阻害活性評価として、脂肪細胞への分化能の評価を行った。
　実施例１５と同様に、マウス骨髄細胞にFSTL1　と濃度を振った各抗体を添加して8日間培養し、各培養系から5x104個/wellずつ分取し「Mesenchymal　Stem　Cell　Functional　Identification　Kit　(R&D　Systems社、Cat.　No.　SC010)」に含まれる脂肪細胞分化試薬を用いて脂肪細胞への分化能を評価した。評価方法は、脂肪細胞分化試薬を添加して培養8日後に、1　培養系における脂肪細胞を顕微鏡下で計数することで評価した(図１０４B)。結果、抗DNP抗体（マウスIgGコントロール群）と比較し、脂肪細胞に分化する細胞は#6-55の添加によって用量依存的に減少した。一方、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体の添加した場合、脂肪細胞への分化に対して全く影響が認められず、いずれの用量でもラットIgG2bアイソタイプコントロール群と同様に多数の脂肪細胞が観察された。つまり、CD45陰性細胞集団全てがMSCというわけではなく、MSCを高率に含む細胞集団に過ぎないのだが、R&D　Systems社のラット抗FSTL1抗体では、CD45陰性細胞数は減少するものの、そこには脂肪細胞に分化するMSCがまだ多数残存していることを示している。
　＜実施例１７：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腫瘍内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた腫瘍内投与による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　＜方法および材料＞
　抗体3　種について、Snail　強制発現マウスメラノーマ細胞B16-F10　をC57BL/6N　マウスの皮下・静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。
１．実験群(n=5)
1.　　No　treatment
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
2.　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞（皮下移植5x105個＆静脈内移植1x105個）
Day　7　抗体の腫瘍内投与（200μg/0.1mL/tumor）
Day　14　各種アッセイ（フローサイトメトリー解析を中心に）
　3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図１０５Ｃ）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞）（図１０５Ａ）
◆間葉系幹細胞の増加に対する効果（骨髄内と脾臓内のCD45陰性細胞）（図１０５Ｂ、Ｄ）
◆免疫抑制性Treg　細胞の増加に対する効果（骨髄や脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図１０５Ｄ）
◆その他の免疫抑制性（図１０５Ｄ）
　（説明）
　in　vivoにおける抗体活性評価を示すために、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。被験対象である抗FSTL1抗体は、腫瘍内へ投与した。0日目にGFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞（皮下5x105個＆静脈内1x105個）を移植し、7日目に抗体を皮下腫瘍内に投与（200μg/0.1mL/tumor）、14日目に各種アッセイを行った。
　Snail陽性腫瘍細胞をマウスの皮下または静脈内へ移植すると、様々な臓器の他、骨髄に優位に転移し、これが骨髄を起点とした間葉系幹細胞　(MSC)の増加を招いて全身的に強く抗腫瘍免疫の誘導が抑制されてしまうことが知られている(Cancer　Research　73:6185,2013)。そこで、GFP遺伝子とマウスSnail遺伝子を導入して強制発現させたGFP陽性Snail陽性　B16-F10腫瘍細胞を皮下に5x105個、尾静脈内に1x105移植し、その7日後に生理食塩水で1　mg/ml　に調製した抗FSTL1抗体　(＃6-55,＃7-34,＃8-1)またはそのアイソタイプであるマウスIgG　(抗DNP抗体)をコントロール抗体として10mg/kgで腫瘍内に接種した
　(5匹／群)。まずは、アッセイまでの間、皮下腫瘍径を測定して腫瘍体積を算出し、皮下腫瘍増殖に対する阻害効果を評価した（図１０５C（各個体の推移を示す。））。抗体投与から7日後　(腫瘍移植14日後)は、マウスから骨髄細胞や脾臓細胞を採取して1匹当たりの細胞数を計数するとともに、FACScan(BD社)を用いたフローサイトメトリー解析により、さらに詳細に薬効を比較解析した。すなわち、a)骨髄細胞中のGFP陽性Snail陽性　B16-F10腫瘍細胞含有率を解析して、骨転移に対する阻害効果を評価し（図１０５A）、骨髄細胞中におけるCD45-細胞の割合％をフローサイトメトリーで解析した後、このデータをもとにマウス１匹当たりのCD45陰性骨髄細胞数（×１０6細胞）を計数し（図１０５B）、骨髄中のMSC増加に対する各種抗体の効果を示するものである。b)脾臓内のCD45陰性細胞含有率を解析して(PE-Cy5標識抗CD45抗体,BD社)、MSC増加に対する阻害効果を評価し（図１０５D左）、c)MSCが誘導するとされている免疫抑制性CD4陽性Foxp3陽性細胞(PE標識抗CD4抗体,BD社;FITC標識抗Foxp3抗体,eBiosciences社)　（図１０５D中）や、疲弊して機能不全に陥ったCD8陽性Tim3陽性T細胞(CyChrome標識抗CD8抗体,　BD社;　FITC標識抗Tim3抗体,　R&D社)の含有率（図１０５D右）を骨髄や脾臓において解析して、免疫抑制解除効果を評価した。
　（結果）
　結果を図１０５に示す。Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いた、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果などを比較解析した。なお、被験対象である抗FSTL1抗体の投与法として、腫瘍内投与を行った。3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した。しかし、骨転移は、#6-55と#8-1によってのみ抑制され、#7-34による抑制効果は全く見られなかった。図１０５Dでは脾臓内の細胞集団の変化を示すが、腫瘍内という局所に抗体を投与しても、全身的に修飾／影響を受けることが示されている。図１０５D左では、　CD45陰性細胞数が示され、脾臓内でもMSCが減少することが示されており、図１０５D中央では、CD4陽性Foxp3陽性T細胞数が減少することが示されており、Treg（制御性T細胞）が減少していることが示されている。また、図１０５D右では、CD8陽性Tim3陽性T細胞数が示され、疲弊CD8陽性T細胞が減少することが実証されている。ここで、「疲弊」とは、機能が低下あるいは不全に陥っている状態を示し、Tim3はその状態を反映するマーカーの一つである。腫瘍細胞を殺傷すべきCD8陽性T細胞が疲弊状態に陥れば、癌細胞は生体内から排除できないということになる。したがって、本発明の効果は、このような免疫抑制の増強を抑制するという点でも顕著な効果を奏しているといえる。
　＜実施例１８：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～腹腔内投与＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた全身投与（腹腔内投与）による抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．実験群(n=5)
1.No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
2.　Control　IgG　(anti-DNP)
3.　Anti-FSTL1　Clone　#6-55
4.　Anti-FSTL1　Clone　#7-34
5.　Anti-FSTL1　Clone　#8-1
　2.実験手順
Day　0:　GFP陽性Snail陽性B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　5:　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　10:　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
＊腹腔内投与と静脈内投与は、全身投与術として薬理的に同義で用いられる。
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した（図１０６B）
◆骨転移に対する効果（骨髄や脾臓内のGFP陽性腫瘍細胞）（図１０６A、C）
◆MSC増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45陰性細胞）（図１０６A、C）
◆体重喪失に対する効果（図１０６A）
◆免疫抑制性Treg細胞の増加に対する効果（脾臓におけるCD4陽性Foxp3陽性細胞）（図１０６C）
◆その他の免疫抑制性（図１０６C）
　（説明）
　実施例１７では、本発明者らがこれまで行ってきた「原発から骨への転移を阻害する」という目的に準じて抗体は腫瘍内へ投与したが、本実施例では、実施例１７の条件を変更して、抗体薬が一般的に全身投与されていることを考慮し、マウス実験で一般的に行われている腹腔内投与を採用した。抗体投与法以外は、上記実施例１７と全て同様に行った。具体的には、Snail強制発現マウスメラノーマ細胞（B16-F10）をC57BL/6Nマウスの皮下および静脈内に移植した骨転移モデルを用いて、抗FSTL1抗体を腹腔内投与し（全身投与）、抗腫瘍効果ならびに免疫抑制解除効果を比較解析した。
　また、アッセイも腫瘍移植14日後に行った。抗体は、腫瘍移植5日後と10日後に2回、10mg/kgずつをマウス腹腔内に投与した。
　（結果）
　結果を図１０６に示す。なお、今回の被験対象である抗FSTL1抗体の投与法は、腹腔内投与にて行った。in　vivo評価は実施例１７と同様に、3種の抗FSTL1抗体ともにコントロール抗体に対して有意に皮下腫瘍の増殖を抑制した（図１０６Ｂ）。加えて、#6-55および#8-1の投与により、体重減少抑制効果（図１０６Ａ右）が認められた。これらの機能解析結果を考察すると、従来免疫抑制で注目されてきたTregを減少・除去したとしても癌治療上は十分な治療とは言えず、やはり免疫抑制カスケード全体の制圧を考えるべきであり、その最上流に位置するMSCを標的とすることがより有効であることが期待される。また、MSCを減らす（図１０６Ａ左）と同時に、癌転移をも阻害する（図１０６Ａ中央）ことがさらに効果的であることも再確認でき、FSTL1を標的とした阻害治療が癌治療上有効である可能性が期待される。図１０６Ｃは脾臓内の細胞集団の変化を示す。図１０６Ｃ左上は、GFP陽性腫瘍細胞数であり、脾臓内への転移も調べた結果、これも抑制されていたことを示す。これは、その他の臓器への転移を示す。上右は、CD45陰性細胞数であり、脾臓内でもMSCが減少することを示す。下左はCD4陽性Foxp3陽性T細胞数であり、Tregが減少することを示す。
下右は　CD8陽性Tim3陽性T細胞数であり、疲弊CD8陽性T細胞が減少することを示す。
　＜実施例１９：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～既存薬との比較＞
　本実施例では、マウスメラノーマSnail強制発現B16-F10細胞移植骨転移モデルを用いた既存の免疫抑制解除抗体薬と抗FSTL1抗体との薬効比較を行った。
　（説明）
　実験の手順や方法は実施例１７および１８とほぼ同様であり、アッセイは腫瘍移植15日後に行った。
　既存薬として下記抗体を腫瘍移植4日後と8日後に2回、10mg/kg（200μg/mouse）ずつをマウス腹腔内に投与した。
　本実施例では、抗FSTL1抗体の作用機序の一つである「免疫抑制解除」の目的で既に臨床で使用されている抗体薬と、Snail陽性腫瘍骨転移モデルを用いて治療効果を比較検討した。抗体は、抗体薬を用いた一般的な動物試験に準じて、前回同様に全身的に２回投与した。
　1　実験群(n=5)
１　No　treatment　(0.9%　NaCl　as　a　sham)
２　Control　IgG　(anti-DNP)
３　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55)
４　Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
５　Anti-PD-1　mAb　(Clone　29F.1A12,　BioLegend)
６　Anti-PD-L1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
７　Naive　(no　tumors,　no　treatment)　
　2　実験手順
Day　0　GFP陽性Snail陽性B16-F10　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内1x105個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　8　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種アッセイ
　3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植８、１１、１４日後に測定した。（図１０７A）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP陽性腫瘍細胞量）（図１０７B）
◆骨髄におけるMSC増加に対する効果（図１０７B）
◆体重減少に対する効果（図１０７B）
　（結果）
　結果を図１０７に示す。いずれの治療群においても皮下腫瘍増殖や骨転移、骨転移に伴って増加する間葉系幹細胞（MSC）の増加は全てコントロール抗体投与群に比較して有意に抑制され、抗FSTL1抗体も既存薬と同等の抗腫瘍効果を発揮することがわかった。しかし、抗CTLA4抗体投与群と抗PD-1抗体投与群では、骨転移によって生じる著しい毛羽立ちや運動量低下、体重減少などの衰弱は改善されず、抗FSTL1抗体投与群、抗PD-L1抗体投与群との間に肉眼的にも大きな差が見られた。
　＜実施例２０：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～大腸癌モデル＞
　本実施例では、マウス大腸癌CT26細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　骨転移を評価しないこと以外、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～１９の骨転移モデル実験とほぼ同じ条件で行った。すなわち、Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。腫瘍移植量、抗体投与のタイミング、アッセイのタイミングのみ変更して行った。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖（図１０８Ａ）、肺転移（図１０８Ｂ））
　肺転移は、肺における腫瘍結節数を肉眼的に計数した。マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図１０８に示す。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6　とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。また、肺転移結節数に関する結果は図１０８Ｂに示される。左から、処置なし、中央はアイソタイプコントロール（抗DNP抗体）、右は抗ＦＳＴＬ１抗体を示す。縦軸は肺転移結節数を示す。縦軸の数値には標準偏差バーを示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)は、CT26皮下腫瘍の増殖や肺転移を極めて強い抑制し、5　匹中3匹のマウスで固形腫瘍は消失し、肺転移結節数もごくわずかであった(コントロール抗体群平均で１４個vs.抗FSTL1抗体群はおよそ0-3個)。この結果から、「骨」への転移だけでなく、「肺」への転移も阻害するというデータも示されたことから、本発明の抗体は、癌転移一般に有効であるものと理解される。
　＜実施例２１：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～乳癌モデル＞
　本実施例では、マウス乳癌4T1細胞移植モデルを用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　実施例１７～２０に準じて行い、実験の手順や方法は、基本的に実施例１７～２０の骨転移モデル実験とほぼ同じように行った。Snail陽性腫瘍骨転移モデル以外のマウス腫瘍モデルを用いて薬効評価を行った。なお、これまで使用してきたマウスであるC57BL/6とは系統が異なるBALB/cマウスの担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効を評価した。変更点は、以下のとおりである。
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下5x105個＆静脈内5x105個）
Day　4,　7:　抗体の腹腔内投与（10mg/kg）
Day　14:　薬効評価（皮下腫瘍増殖）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植４、７、１１、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図１０９に示す。抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、4T1皮下腫瘍の増殖を有意に抑制できた。
　＜実施例２２：ｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、Snail陽性腫瘍骨転移モデルと同じC57BL/6　マウス系の他の担癌モデルを用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。なお、『マウスメラノーマB16-F10』は、これまで用いていた骨転移モデルで移植していたSnail　強制発現細胞株の親株である。
　１．実験群(n=5)
1.マウスメラノーマB16-F10+Control　IgG　(anti-DNP　mAb)
2.マウスメラノーマB16-F10+Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106個＆静脈内1x106個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200　μg/mouse=10　mg/kg　相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。（図１１０A）
◆体重減少に対する効果（図１１０B）。
　（結果）
　結果を図１１０に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。また、抗FSTL1抗体投与群では、体重減少についても抑制活性を示し（図１１０Ａ）、著しい痩せや毛羽立ちなどは全く観察されず（図１１０Ｂ）、全例元気だった。本モデルでは通常、移植20-30　日後に肺転移が観察されるが、今回はこれまでのタイミングに合わせて約２週間後に評価したため、肺転移結節は肉眼的に観察されなかった。
　＜実施例２３：in　vivoにおける抗体活性評価～リンパ腫＞
　本実施例では、マウスリンパ腫EL4を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、FSTL1　発現が増強されている癌種の一つであるマウスリンパ腫EL4を用いて、抗FSTL1抗体の薬効評価を行った。
　１．　実験群(n=5)
1.マウスリンパ腫EL4+Control　IgG(anti-DNPmAb)
２.マウスリンパ腫EL4+Anti-FSTL1　mAb(#6-55)
　２．実験手順
Day　0:　腫瘍細胞の移植（皮下1x106個＆静脈内1x106個）
Day　3　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　6　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植３、６、１０日後に測定した
　（結果）
　結果を図１１１に示す。コントロール抗体投与群と比較し、抗FSTL1抗体(＃6-55)の投与によって、皮下腫瘍増殖は強く抑制された。本モデルでは、他の腫瘍モデルと比較して皮下腫瘍は極めてaggressiveな増殖を示すが、それでも抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比し有意に抑制した。乳癌と並んでFSTL1　高発現癌種の一つであるリンパ腫において有効性を提示できたことは、臨床試験展開上、大変有用なデータであるといえる。
　＜実施例２４：in　vivoにおける抗体活性評価～メラノーマＢ１６－１０、皮下移植＞
　本実施例では、マウスメラノーマB16-F10を用いた抗FSTL1抗体の薬効評価を示す。
　実施例１７～２０に準じて行い、実施例２２と同様の試験系にて、抗FSTL1抗体の薬効の評価を行った。ただし、今回はよりクリアな反応性を評価するために皮下移植のみ行った。
　1.　実験群　(n=5)
1.　Control　IgG　(anti-DNP),10mg/kg
2.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),1mg/kg
3.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),3mg/kg
4.　Anti-FSTL1　mAb　(＃6-55),10mg/kg
　2.　実験手順
Day　0　マウスメラノーマB16-F10細胞の皮下移植（1x106個）
Day　4　抗体の腹腔内投与-1
Day　8　抗体の腹腔内投与-2
Day　15　各種免疫学的アッセイ
　３．薬効評価の指標
◆　皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）：腫瘍移植６、１０、１４日後に測定した。
　（結果）
　結果を図１１２に示す。検討したいずれの用量でも、抗FSTL1抗体投与はコントロール抗体投与群に比較して皮下腫瘍増殖を強く抑制し、3mg/kg投与群と10mg/kg投与群では腫瘍消失マウスが観察され、ほぼ用量依存的な薬効が観察された。
　＜実施例２５：ヒト末梢血細胞を用いた抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性＞
　本実施例では、ヒト末梢血細胞を用いて抗FSTL1 抗体のTreg 誘導阻害活性を評価した
。
　FSTL1(5ng/ml)を用いてヒト末梢血細胞(1x106　cells)を刺激し、そこに抗体(5μg/mL)を添加して3日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をフローサイトメトリーで解析した。フローサイトメトリーの条件は以下のとおりである。
　健常人から１／１０量の４％クエン酸ナトリウムを加えて採血後、フィコール（比重1.090）に重層して遠心分離（１５００rpm、２０分、室温）し、中間層に存在する細胞分画を「PBMC」として使用した。このPBMC(1x106個)を24穴プレートにおいてFSTL1(5ng/ml)で３日間刺激培養する系に抗体(5μg/mL)を添加した。その培養系から回収したPBMCについて、抗CD4抗体(BD PharMingen社)、抗CD25抗体(BD PharMingen社)、抗FoxP3抗体(eBioscience社)を用いて、４℃で１時間インキュベート後、フローサイトメーターFACScan（Becton,Dickinson and Company社）を使用して、そこに含まれるCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.1)またはCD4+Foxp3+CTLA4+細胞分画(Exp.2)の割合をTreg細胞として解析した。
　図１１３にこれらのデータ、結果をまとめた表を提示する◎、○および△は統計学的有意であり、それぞれ３０％以上の減少、１０％～３０％の減少および１０％未満の減少を示し、×は統計学的には有意差はなかったことを示す。その結果、TGFb などと同様に、FSTL1刺激によってもTreg は顕著に増加し、それが本発明の抗体＃6-55 添加によって有意に抑制されることが分かった（Exp.1とExp.2、3 との違いは、末梢血ドナーの違いによる）。他方既知抗体であるR&D抗体(R&D　Systems社、Cat.　No.　MAB1694、clone　229007)はほとんど阻害せず、ここでもまた本発明の抗体＃6-55の優位性が確認された。以上の結果から、FSTL1 が引き起こすTreg 誘導に関しては、本発明の抗体＃6-55 は顕著に阻害できることが示された。
　＜実施例２６：様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響等＞
　本実施例では、様々なヒト腫瘍細胞の増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響、FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用およびSnail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用を調べた。
　具体的には、Snail やFSTL1 の発現有無に関わらず様々なヒト腫瘍細胞を用いて、その増殖能と浸潤能に及ぼす抗FSTL1 抗体の影響を検討した。すなわち、膵癌細胞株Panc1（ATCC社#CRL-1469）、そのSnail強制発現細胞株であるPanc1-snail+、膵癌細胞株MIAPaCa（ATCC社 #CRL-1420）、骨転移性乳癌細胞株MDA231（ATCC社#HTB-26）、メラノーマ細胞株Hs294T（ATCC社 #HTB-140） をそれぞれ1x105個培養する系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema:マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体,5μg/ml)を添加して3 日間培養後、一培養系における細胞数を計数して細胞増殖能を評価した。更に、計数した後の細胞(5x104個)をMatrigel コートtranswell chamber (Corning社 #354480)に播種し、4 時間培養後に膜を外してクリスタルバイオレット固定液で染色固定した後、膜を透過した細胞数を顕微鏡下でカウントして細胞浸潤能を評価した。その結果、特にSnailを高発現する高転移性の腫瘍細胞株で増殖能、浸潤能ともに強く抑制された。このことから、抗FSTL1 抗体は、EMT を呈してFSTL1 を高発現している腫瘍細胞に特に作用することが示された（図１１４Ａ）。
　（FSTL1 刺激下における抗FSTL1 抗体の作用）
　次に、Snail/FSTL1 発現細胞が産生するFSTL1 を受けた周囲の腫瘍細胞が癌微小環境においてどのように変化し、かつ、抗FSTL1 抗体がどう作用するかを調べるため、SnailやFSTL1をわずかにしか発現しないことが分かっているヒト膵癌細胞株Panc1 をFSTL1で3 日間刺激し、この培養系に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)を加えて、その後の細胞機能の変化を前項と同様の方法で解析した。その結果、以前論文（Cancer Res; 73(20); 6185-93.2013）でも報告しているように、FSTL1は腫瘍増殖にはあまり影響／寄与しないが、FSTL1 とともに抗FSTL1 抗体を添加することによって、細胞増殖は低下した。また、FSTL1は浸潤能を増強することも同様に報告しているが、その作用を打ち消すことが明らかとなった（図１１４Ｂ）。
　（Snail 強制発現細胞に対する抗FSTL1 抗体の作用）
　前項のFSTL1 刺激腫瘍細胞の代わりにSnail 強制発現細胞株Panc1-snail+を用いて、chamber 内に抗FSTL1 抗体(#6-55,5μg/ml)または対照抗体(aHema,5μg/ml)が存在下での細胞浸潤を評価した。その結果は前項の結果と酷似しており6-55については抑制活性が確認できた（図１１４Ｃ)）。
　また、本実施例では、Panc1-snail+細胞を上記抗体添加下で3 日間培養した後で、骨転移マーカーとして知られる分子の中からCCR2 とRANKL の発現をフローサイトメトリーで解析した。その結果、CCR2とRANKL ともに抗FSTL1 抗体によっても強く抑制され、抗FSTL1 抗体は細胞浸潤に対して阻害活性を有していると推測される（図１１４Ｄ）。
　＜実施例２７：マウス骨髄細胞を用いたMSC誘導阻害試験＞
　本実施例では抗FSTL1 抗体の阻害活性を間葉系幹細胞誘導実験系で確認するとともに、FSTL1 だけではなく、Snail+腫瘍細胞によって誘導されるMSC増加に対するFSTL1 阻害効果も併せて評価した。具体的な操作としては、C57/BL/6 マウス由来骨髄細胞をFSTL1(20ng/mL)または腫瘍細胞の培養上清で刺激する状況下に各抗体(10μg/mL)を添加し、8日間刺激培養後、MSC を高率に含む細胞分画CD45(-)細胞(MSC)と、癌転移に伴って増加するCD45(-)CD146(+)ALCAM(+)細胞(sMSC)を実施例１４と同様にしてフローサイトメトリーで解析し、一培養系当たりの細胞数を計数した。本実施例では、コントロール抗体としてBioLegend 社製のマウスイムノグロブリン(#401408, Cone MG1-45)を使用した。
　結果を図１１５に示す。図１１５Ａに示すように、本実施例のMSC 誘導阻害試験では、#7,#10,#13,#33 がフローサイトメトリー解析で#6-55 と同等あるいはそれ以上の強い阻害効果を示した。その結果、#7,#10,#33が#6-55 と同等あるいはそれ以上の高いMSC 誘導阻害活性を示し、この３クローンについては再現性が確認できた。
　（腫瘍細胞が誘導するMSC 増加に及ぼす影響）
　本実施例では、骨髄細胞を用いたMSC誘導系において、Snail+腫瘍細胞の培養上清が誘導するMSC 増加を抗FSTL1 抗体で阻害できるか否かを評価した。C57/BL/6 マウス由来骨髄細胞にSnail+腫瘍細胞の培養上清と各抗体(10μg/mL)を添加して8日間刺激培養後、以下の2種の細胞群についてフローサイトメトリーで解析した。
1)MSCを高率に含む一般的な細胞分画『CD45(-)細胞』
2)癌転移に伴って増加する『CD45(-)ALCAM(+)CD271(+)細胞(＝sMSC)』
また、sphere コロニーの形成を、50個以上の細胞数でコロニーを形成しているlargeとそれ以下で形成されているsmallとに区別し、培養8日目に顕微鏡下で観察した。その結果、図１１５Ｂ～Ｄに示すように、MSC/sMSCの誘導は顕著に阻害され、幹細胞性を代表する自己複製能を示すsphere コロニーの形成も強く抑制された。つまり、FSTL1 抗体は、癌転移下で増幅されるMSC誘導を阻害することで、in　vivo において抗腫瘍効果を発揮している可能性が示唆された。
　＜実施例２８：マウス脾臓細胞を用いたTreg誘導阻害試験＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、Treg 誘導に対する阻害活性をマウスの系で評価した。
　（材料および方法）
　本実施例では実施例１７に準じて実験を行った。具体的には、C57/BL/6 マウス由来の脾臓細胞(2x106)を5ng/ml のFSTL1 で刺激する系に、各抗体を5μg/mL 添加して3 日間培養し、Treg 細胞としてCD4+T 細胞中のFoxp3+CTLA4+細胞分画の割合(%)をフローサイトメトリーで解析して、これまで検討してきた#6-55と活性を比較した。
　(結果)
　その結果、図１１６に示されるように、新規3 クローンともに対照抗体と比べてTreg 誘導を抑制し、特に、#7 と#10 では#6-55 以上に強い抑制活性を示した。他の実施例でもヒト末梢血細胞を用いたヒト評価系では抗FSTL1抗体のTreg誘導阻害活性をきちんと確認できていたが、本マウス評価系では本実施例でより明確にインパクトある阻害活性を観察したことになる。#7 と#10 はともにFSTL1 の205-228a.a.を認識するクローンであることから、#6-55が認識する148-162a.a.に次いで205-228a.a.もまたFSTL1 活性において重要な領域であることも示された。
　＜実施例２９：新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性＞
　本実施例では、新たに作製されたエピトープの異なる抗FSTL1抗体3 種について、マウス腫瘍活性化に対する阻害活性を評価した。
　（材料および方法）
　マウスSnail 強制発現メラノーマ細胞株F10-snail+に5μg/ml の抗FSTL1 抗体または対照抗体(抗DNP 抗体)を添加して3日間培養し、各種アッセイで腫瘍細胞の性状変化を解析した。細胞接着能は、Fibronectinコートプレートを用いて2 時間培養後、プレートに接着している細胞数をカウントして評価した。細胞浸潤能は、Matrigel コートtranswell　chamberを用いて4 時間培養後、membrane を透過した細胞数をカウントして評価した。骨転移関連分子発現について、代表的な分子マーカーであるCCR2 とRANKLの発現をフローサイトメトリーで解析した。
　（結果）
　図１１７に示されるように、いずれの新規クローン抗体も対照抗体と比べて有意にCCR2 やRANKL の発現や細胞浸潤能を低下させ、細胞接着は増強した。つまり、上皮系の細胞に変化したことを意味する。各活性ともにほぼ#6-55と同等であり、大きな差は見られなかった。
　＜実施例３０：Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1 抗体とのinvivo 薬効比較＞
　抗CTLA4 抗体などの免疫解除薬を腫瘍内に投与することで、癌細胞に有利に作用する腫瘍内の免疫抑制環境を直接改善でき、抗腫瘍免疫を効果的に増強できると注目されている(Clin Cancer Res20:1747,2014)。そこで、Snail+腫瘍骨転移モデルを用いて、既に臨床で使用されている免疫解除薬抗体と抗FSTL1抗体とのin vivo 薬効を比較した。
　（材料および方法）
1.実験プロトコール
1-1.実験群(n=5)
1.Notreatment(0.9%NaCl as a sham)
2.Control　mouse　IgG　(マウスキメラ抗ヘマグルチニン抗体、aHemaとも記載する)
3.Anti-CTLA4　mAb　(Clone　9H10,　BioLegend)
4.　Anti-PD1　mAb　(Clone　9F.1A12,　BioLegend)
5.　Anti-PDL1　mAb　(Clone　10F.9G2,　BioLegend)
6.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
7.　Naive　(no　tumors,　no　treatment)
1-2.　実験手順
Day　0:　GFP+Snail+B16-F10腫瘍細胞の移植（皮下3x105＆静脈内2x104）
Day　5:　抗体の腫瘍内投与（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種アッセイ
1-3.薬効評価の指標
　以下を薬効評価の指標として用いた。
◆皮下腫瘍の増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆骨転移に対する効果（骨髄内のGFP+腫瘍細胞量）
◆骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果
◆免疫系に及ぼす影響
　（手順）
　マウスの腫瘍体積は、腫瘍移植５、７、１０、１４日後に測定した。皮下腫瘍の増殖、骨転移および骨髄・脾臓内におけるsMSC 増加に対する効果の評価方法は実施例１７と同様に行った。免疫系に及ぼす影響を評価するため、腫瘍内に浸潤した抗腫瘍免疫を担う細胞群であるCD4+T 細胞（CD45+CD3+CD4+;FITC標識抗CD3抗体, PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、腫瘍特異的CD8+T 細胞（CD45+CD8+Tetramer+；BD社製FITC標識抗CD8抗体,MBL社製PE標識Tetramer, Cy5標識抗CD45抗体）、活性化NK 細胞（CD45+NK1.1+NKG2D+；FITC標識抗NK1.1抗体,PE標識抗NKG2D抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社）、免疫抑制性T 細胞（CD45+CD4+FOXP3+Tregs；eBiosciencess社製FITC標識抗Foxp3抗体,PE標識抗CD4抗体, Cy5標識抗CD45抗体）、MDSCs(CD45+CD11b+Gr1+MDSCs；FITC標識抗CD11b抗体,PE標識抗Gr1抗体, Cy5標識抗CD45抗体, いずれもBD社)の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。また、皮下腫瘍内における高転移性腫瘍細胞（Snail+CD44+tumors；eBiosciencess社製PE標識抗Snail抗体,BD社製Cy5標識抗CD44抗体）の含有率と細胞数をフローサイトメトリーにより解析した。
　（結果）
　皮下腫瘍の増殖は、対照抗体投与群に比し、全治療群において有意に抑制され、各治療群間に有意差は認められなかった(図１１８－1)。しかし、骨転移や骨髄と脾臓内でのMSC 誘導が、FSTL1 抗体によって有意に抑制されたのに対し、CTLA4 抗体とPDL1抗体では逆に骨転移は増強され、PDL1 抗体では骨髄内のMSC 誘導も阻害されなかった(図１１８－1)。骨髄細胞を培養した結果、そこに存在する腫瘍細胞の性状は両群で異なっており、CTLA4抗体投与群では多数のsphere　colony を形成したが、PDL1 抗体投与群では強接着性を示した。
　一方、抗体を投与した皮下腫瘍内に浸潤した免疫細胞群(TIL)を解析したところ、いずれの治療群でもCD4+T 細胞、腫瘍特異的CD8+T 細胞、活性化NK 細胞がともに多数浸潤していた(図１１８－２)。特に、CTLA4抗体の腫瘍内投与では、これらの抗腫瘍エフェクター細胞群が極めて顕著に増加することが分かった。興味深いのは、これまで注目されておらず、解析してこなかった活性化NK細胞が、このCTLA4 抗体群と同様にFSTL1 抗体群においても腫瘍特異的CD8+T 細胞以上に多数浸潤していたことである(図１１８－２)。NK 細胞は、MSCと同様に自然免疫系の主要なエフェクター細胞であり、MSC による抑制作用を最も受け易い細胞としても報告されている。したがって、おそらくはFSTL1 抗体投与によってMSCが激減したことから、NK 細胞の数や機能が大幅に改善・増強されたと推測される。
　前述のように、抗腫瘍エフェクター細胞群は、いずれの治療群においても増加していたが、免疫抑制性の細胞群を見てみると、既存抗体薬投与群の腫瘍内にはTreg やMDSC が逆に増加しており、特にMDSCの増加については、CTLA4 抗体投与群とPDL1 抗体投与群で顕著に見られた(図１１８－3)。また、CTLA4抗体では、脾臓内のTreg 増加も抑制できず、さらには、CD8+Treg が増加していた(図１１８－4)。これはおそらく、投与後日数が経過した後のリバウンド効果か、CD4+Tregが減少した部分を他の免疫抑制性細胞群が補おうとするフィードバック現象なのかも知れない。また、腫瘍内環境では、例えば、浸潤した免疫細胞が放出するサイトカインなどによって腫瘍細胞が刺激され、EMT などが誘導されてしまう可能性も考えられるので腫瘍細胞側の変化も確認した。まずは、主要なEMT マーカーであるSnail/CD44発現を解析してみた。その結果、移植に用いた腫瘍細胞はもともとSnail+CD44+ではあるが、皮下腫瘍から分離した腫瘍細胞ではそれらの発現強度がさらに増強されているsubpopulation分画が見られ、治療によって逆にEMT が促進されていることが分かった(図１１８－3)。このdenovo　EMT は、MDSC が増加して骨転移も悪化したCTLA4抗体投与群とPDL1 抗体投与群で、特に顕著に見られた。以上の結果から、CTLA4 抗体とPDL1 抗体は、確かに抗腫瘍免疫を増強するメンバーを腫瘍内に動員して腫瘍増殖を抑制できるものの、免疫抑制性細胞群の増加や腫瘍細胞側におけるde　novoEMTなどは抑制できないため、全身性の抗腫瘍免疫までは改善されず、その結果、骨転移は十分に阻害できなかったと推測される。一方、PD1 抗体については、データとしては大きな弱点は見られないが、特に骨転移量やsMSC量については、骨髄細胞数が極めて激減していたことに起因すると考えられる。つまり、PD1 抗体投与群の骨髄細胞を培養すると、CTLA4 抗体投与群と同様に多数の腫瘍細胞がコロニーを形成した。おそらく、実際には骨転移は逆に悪化しており、骨環境内に腫瘍細胞が多量に集積あるいは過剰に増殖したことで、骨髄細胞の増殖は抑制されて細胞数が激減したと推測される。なお、CTLA4 抗体は、全身投与時と比べて今回の腫瘍内投与では、抗腫瘍エフェクター細胞を腫瘍内に効果的に動員することが分かった。一方、FSTL1抗体は、悪い部分を抑制する効果は高いものの、抗腫瘍エフェクター細胞の動員効果はそれほど高くはない。
　＜実施例３１：マウス肺癌モデル＞
　本実施例では、肺癌治療薬として抗FSTL1 抗体を開発することを見据えて、マウス肺癌モデルを用いて薬効を評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
1.Isotyoe　mouse　IgG　(aHema)
2.　Anti-FSTL1　mAb　(#6-55)
3.　正常マウス
1-2.　実験手順
Day　0:　マウス肺癌3LL細胞の移植（皮下1x106 cells＆静脈内5x105 cells）
Day　3:　抗体の腹腔内投与-1（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　7:　抗体の腹腔内投与-2（200μg/mouse=10mg/kg相当）
Day　14:　各種免疫学的アッセイ
1-3.薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖に対する効果（腫瘍径測定による腫瘍体積の算出）
◆マウス衰弱に対する改善効果（マウス体重の測定）
◆MSC 増加に対する効果（骨髄内や脾臓内のCD45-細胞）
◆免疫反応に及ぼす影響など
　(手順)
　皮下腫瘍増殖の測定は移植後3,5,7,10,14日目に測定を行った。体重の測定、MSC増加に対する効果、免疫反応に及ぼす影響は14日目に上記実施例と同様に測定を実施した。
　（結果）
　図１１９に示すように、対照抗体投与群と比較して、抗FSTL1 抗体投与によって皮下腫瘍増殖は強く抑制され、5 匹中2 匹のマウスで腫瘍は消失した。本モデルでは、いずれの臓器にも腫瘍の転移は肉眼的に観察されない。腫瘍移植14日後、腫瘍移植後早期にも関わらず、これまで用いてきた骨転移モデルと同様に歩行もできないほど著しく衰弱した。しかし、抗FSTL1 抗体投与群では、体重減少や痩せ、毛羽立ちなどは一切観察されず、全マウスが元気であった。
　他方、腫瘍内浸潤細胞や骨髄細胞、脾臓細胞について、MSC をはじめ、Treg やMDSC など様々な免疫細胞を解析した。しかし、唯一大きな変化が見られたのは骨転移モデルで注目している癌転移関連sMSCであるCD45-ALCAM+細胞であった。本モデルでは骨転移を生じないことを確認しているが、なぜか骨髄内にのみsMSCが増加し、それが抗FSTL1 抗体投与によって減少した。3LL 細胞はSnail を高発現していることも判明し、これがsMSC 増加を招いたと推測される。
　以上の結果から、3LL などのように「Snail」や「sMSC」などを共通項とする癌種では、FSTL1 阻害治療が有効であることが改めて提示され、肺癌は臨床治療でもFSTL1抗体投与の対象癌種になり得ると期待される。
　＜実施例３２：抗FSTL1 抗体別のクローンのin vivo 薬効評価＞
　本実施例では、in vitro 薬効スクリーニングで有効性を確認した新規クローン抗体4 
種(#7,#10,#13,#33)について、これまで用いてきた#6-55を陽性対照として用いてin　vivo治療効果を比較評価した。
　（材料および方法）
実験プロトコール
実験群(n=5)
ControlIgG (anti-DNP mAb)
#6-55
#7
#10
#13
#33
1-2.　実験手順
Day　0:GFP+F10-snail+腫瘍細胞の移植（皮下3x105cells＆静脈内2x104 cells）
Day　4:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-1
Day　7:抗体(10mg/kg)の腹腔内投与-2
1-3.　薬効評価の指標
◆皮下腫瘍増殖の抑制
◆マウス生存期間の延長
　（手順）
　皮下腫瘍の測定は腫瘍細胞移植4, 7, 10, 14, 17, 20, 23日後に実施した。
　（結果）
　図１２０に示すように、皮下腫瘍増殖は、#13 を除く全てのクローンが#6-55 と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な抑制活性を示し、#6-55 との間に有意差は見られなかった。一方、図１２１に示すように、マウス生存期間については、いずれのクローンも#6-55と同様に対照抗体投与群に比し統計学的有意な延命効果を示し、特に、#10 と#33 は#6-55 以上の高い治療効果を示した。なお、#6-55ではｎ＝１０で行った試験でも統計学的有意が12日目においてｐ＜０．００１のレベルで示されている。以下に、P 値を基にまとめた各クローン活性順位を示す。
皮下腫瘍増殖抑制効果：
#7＝#10＞#6-55＞＞#33＞＞#13
マウス延命効果：
#33＝#10＞#6-55＞#13＞#7
以上の結果を総合的に評価すると、『#10』が#6-55 を上回る高い抗腫瘍活性を有している可能性が示された。
　データは示さないが、FSTL1 阻害による抗腫瘍免疫反応には、CD4+細胞、CD8+細胞、NK細胞と幅広い免疫細胞が関与しているが、特に、細胞障害活性を示すCD8+細胞とNK細胞は必須の役割を果たしていることも確認している。一般的な免疫療法では、抗腫瘍エフェクター細胞は主にCD8+T 細胞であり、NK は担癌初期にのみ関与する重要性の低い細胞群であることが多く、Tregなどを含むCD4+T 細胞はむしろ除去した方が治療効果はさらに増強されることなどが示されている。一方、本発明のFSTL1 阻害治療では、CD8+細胞に限らず様々な免疫細胞を動員して抗腫瘍効果を発揮するようである。これは、FSTL1ならびにFSTL1 が作用して増幅するMSC は、癌関連異常免疫機構の最上流キー因子であり、FSTL1阻害によって、MSCをはじめ、その下流で負に制御される様々な免疫反応を一斉に抗腫瘍方向へ転じさせた結果と考えられる。つまり、開発当初からのコンセプトを再確認でき、本発明の抗FSTL1抗体は、従来の免疫修飾薬とは作用機序が大きく異なり、宿主免疫全体を根底から改善して適切に賦活化できる新たな癌治療薬となり得ると期待される。
　すなわち、FSTL1阻害により、MSC分化誘導阻害が起こり、免疫抑制性細胞群（MDSC,Treg）阻害が起こることで、抗腫瘍免疫細胞群の活性化が起こると予想される。本実施例において、最後の段階まで達成し得ることが確認され、ＦＳＴＬ１を抑制することで一般に、抗体で示される効果と同様の効果が抑制剤によって達成されることが期待される。
　＜実施例３３：マウスキメラの特徴づけ＞
　本実施例では、製造したマウスキメラ抗体のヒトFSTL１抗原に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)に Mouse Antibody CaptureKit（GE Healthcare、 BR-1008-38）を用いてマウスキメラ抗体を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacore T-200(GE Healthcare) によって算出した。
　（結果）
　まず、ヒトFSTL1濃度を10 μg/mlに固定し、取得抗体の網羅的な活性比較を行った（表３３－１、図１２２）。 
　図１２２の縦軸は抗体に対する抗原の結合量、横軸は抗体に対する抗原の解離量を示す。抗原の結合量が高く、解離量が低いほど親和性が示唆される（図の左上に位置するほど親和性が高い）。次に、図１２２の中で親和性の高いと想定されるクローン#6-55、#7-34および#13について、抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD値を算出した(表３５－２)。結果、表面プラズモン共鳴を用いた測定系でも、クローン#6-55、#7-34および#13を含め、＃７、＃１０、＃３３等が強い親和性を有することが示された。
　（表３３－１）マウスキメラ抗体に対する抗原の結合量および解離量
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000030
　（表３３－２）マウスキメラ抗体のＫＤ値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000031
　＜実施例３４：ヒト化抗体の開発および親和性測定＞
　＜ヒト化抗体の親和性：Biacore T-200 による測定＞ 
　本実施例では、ヒト化抗体を開発し、開発した抗体のヒトFSTL1に対する親和性を測定した。
　（材料および方法）
　Sensor Chip CM5(GE Healthcare、BR-1005-30)にHuman Antibody Capture Kit（GEHealthcare、 BR-1008-38）を用いて、9種のIgG1型ヒト化#6-55を固相化し、ヒトFSTL1に対する親和性をBiacoreT-200 (GE Healthcare) によって算出した。抗原濃度を0～20μg/mlに調整し、KD 値を算出した(表３４－１)。9種のIgG1型ヒト化#6-55の中で、KD 値が高かった「H（２）‐L（１）」の組み合わせのクローンをリード抗体に選んだ。
（表３４－１）表．ヒト化6-55抗体（IgG1型）のH鎖とL鎖の組み合わせによる親和性（KD値）比較
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000032
　＜ヒト化抗体の作製＞
　松田らのMolecular Immunology 43(2006)634-642 の報告に基づき、クローン#6-55のH鎖およびL鎖の可変領域にあるフレーム領域をニワトリ配列からヒト配列に置換した遺伝子を設計し、遺伝子合成を行った。1クローンにつき、H鎖およびL鎖を3種類ずつ設計して合成した（ヒト化H鎖（１）、（２）、（３）、ヒト化L鎖（１）、（２）、（３）；なお、Ｈ鎖（１）はＨ（１）やＨ１等と記載されることもあるがいずれも同じクローンを指すことが理解される。Ｈ鎖（２）、Ｈ鎖（３）、Ｌ鎖（１）、（２）、（３）も同様である。）。Ｈ（１）重鎖の全長配列は、IgG1型が配列番号９４９および９５０（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号９５５および９５６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（２）重鎖の全長配列は、配列番号９５１および９５２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号９５７および９５８（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG1型がＨ（３）重鎖の全長配列は、配列番号９５３および９５４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、IgG４型が配列番号９５９および９６０（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（１）軽鎖の全長配列は、配列番号９６１および９６２（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（２）軽鎖の全長配列は、配列番号１００３および１００４（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示され、Ｌ（３）軽鎖の全長配列は、配列番号１００５および１００６（それぞれ核酸およびアミノ酸の配列を示す）で示される。合成した可変領域の遺伝子をPCRによって増幅した後、制限酵素処理を行い、ニワトリ抗体のリーダー配列およびヒトIgG1の定常領域が組込まれたL鎖またはH鎖発現カセットベクター（制限酵素処理されたベクター）に導入した。構築した各クローンのH鎖（１）～（３）およびL鎖（１）～（３）の発現ベクターの合計9種類の組み合わせをHEK293細胞に導入し、培養上清からProtein A Sepharose を用いてヒト化抗体の精製を行った。精製したIgG1型ヒト化抗体のヒトFSTL1に対する結合活性を確認するためにELISAを行った結果、いずれのクローンも一定程度の結合活性が確認できた(図１２３)。このうち、Ｈ（２）－Ｌ（１）のヒト化クローンが、他のクローンに比べて、１桁高い数値を示した（表３４－１参照）ことから、次の実験は、このクローンについて行った。
　＜ヒト化抗体の結合活性：ELISA＞ 
　IｇG1型ヒト化#6-55H鎖（２）＋L鎖（１）の精製抗体のヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性をELISAによって確かめた(図１２４）。図１２４の結果から、本発明の抗体は、ヒトFSTL1およびマウスFSTL1に対する結合活性は同様であり、ヒトFSTL1に対する活性が保有されていることが確認できた。
　（実施例３５：マウス肺癌3LL 皮下移植モデルにおけるCPA との併用効果）
　化学療法剤と抗FSTL1 抗体との併用効果を評価する実験系として、本実施例において、マウス肺癌3LL 移植モデルを用いて検討を行った。化学療法剤は、肺癌に適用が認められているものの中から、最も広範に使用されているアルキル化薬シクロホスファミド（通称CPA、「注射用エンドキサン（塩野義製薬）」を使用）を選択し、臨床投与量を基準にした用量を抗FSTL1抗体と併用した。投与タイミングについては、Immune　Checkpoint　Inhibitorの臨床試験に準じて、抗FSTL1 抗体は化学療法後に投与した。
　1.実験群(n=5)
1.Vehicle(0.9%NaCl)+Control　mouseIgG(anti-DNP)
2.CPA+Control　Mouse　IgG
3.Vehicle+Anti-FSTL1　mAb(#6-55)
4.CPA+Anti-FSTL1　mAb
　2.実験スケジュール
Day0:BALB/cマウスにおけるCT26 腫瘍細胞の皮下移植（2x105）
Days4,5,6,7:CPAの腹腔内投与x4 回（2mg/mouse/day）
Days8,11:抗FSTL1抗体の腹腔内投与
x2回（5mg/kg←通常の半量）
Day20:各種免疫学的アッセイ
　3.結果＆考察
　CPA 投与だけでも皮下腫瘍増殖は強く抑制され、対照抗体投与群と比較して有意な抗腫瘍効果が見られた。一方、抗FSTL1 抗体投与群では、他の実施例で示されるような単剤で実施した量の半量を投与したことから、治療効果は低かったものの、対照抗体投与群と比較して統計学的に有意な抗腫瘍効果が見られた。この抗FSTL1抗体にCPA を併用すると、単剤治療の場合と比較して抗腫瘍効果は統計学的に有意に増強され、5 匹中3 匹のマウスで腫瘍は消失した。CPA単剤治療の場合と比較しても、統計学的有意性が認められた。
　以上の結果は両者の相乗効果を示しており、臨床においてもCPA治療の際に抗FSTL1 抗体を併用することで、より高い抗腫瘍効果が得られる可能性が示唆された。
　以上のように、化学療法剤と抗FSTL1 抗体等のＦＳＴＬ１抑制剤とを併用すると、種々の側面で抗腫瘍効果が相乗的に増強されることが判明し、抗FSTL1 抗体は、種々の化学療法剤の効果を相加効果を超える効果を提供することが期待される。
　以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
［産業上の利用可能性］
　免疫抑制等の免疫破綻の解除によるがんの予防および治療剤、および転移、特に骨転移を抑制する技術が提供され、特に予想外に顕著な効果を奏する併用効果により、がん治療および予防に関連する技術に関与する産業（試薬、製薬等）において利用可能な技術が提供される。
［配列表フリーテキスト］
配列番号７５８：ヒトＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号７５９：ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号７６０：マウスＦＳＴＬ１の核酸配列
配列番号７６１：マウスＦＳＴＬ１のアミノ酸配列
配列番号７６２：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７６３：抗体クローン＃５－２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７６４：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７６５：抗体クローン＃５－２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７６６：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７６７：抗体クローン＃５－３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７６８：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７６９：抗体クローン＃５－３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７７０：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７７１：抗体クローン＃５－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７７２：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７７３：抗体クローン＃５－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７７４：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７７５：抗体クローン＃５－１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７７６：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７７７：抗体クローン＃５－１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７７８：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７７９：抗体クローン＃５－４３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７８０：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７８１：抗体クローン＃５－４３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７８２：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７８３：抗体クローン＃６－５５の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７８４：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７８５：抗体クローン＃６－５５の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７８６：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７８７：抗体クローン＃７－３４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７８８：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７８９：抗体クローン＃７－３４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７９０：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７９１：抗体クローン＃８－１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７９２：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７９３：抗体クローン＃８－１の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７９４：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７９５：抗体クローン＃８－４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７９６：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号７９７：抗体クローン＃８－４の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号７９８：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号７９９：抗体クローン＃８－７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８００：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８０１：抗体クローン＃８－７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８０２：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号８０３：抗体クローン＃８－８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８０４：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８０５：抗体クローン＃８－８の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８０６：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号８０７：抗体クローン＃７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８０８：抗体クローン＃７の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８０９：抗体クローン＃７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８１０：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号８１１：抗体クローン＃１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８１２：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８１３：抗体クローン＃１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８１４：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号８１５：抗体クローン＃１３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８１６：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８１７：抗体クローン＃１３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８１８：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号８１９：抗体クローン＃２２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８２０：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８２１：抗体クローン＃２２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８２２：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域の核酸配列
配列番号８２３：抗体クローン＃３３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８２４：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域の核酸配列
配列番号８２５：抗体クローン＃３３の重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号８２６：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号８２７：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（ヒト；コドン最適化後のヒトFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号８２８：実施例で用いたＦＳＴＬ１の核酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配列を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号８２９：実施例で用いたＦＳＴＬ１のアミノ酸配列（マウス；コドン最適化後のマウスFSTL1遺伝子＋両末端に組換え用の配（赤色）を付加した配列＋C末端に３ｘアラニン+６ｘヒスチジンを付加した配列）
配列番号８３０：MCS配列
配列番号８３１：MCS配列（相補鎖）
配列番号８３２：挿入用の配列
配列番号８３３：挿入用の配列
配列番号８３４：Δ21-53(Forward　primer)
配列番号８３５：Δ21-53(Reverseprimer)
配列番号８３６：Δ100-140(Forward　primer)
配列番号８３７：Δ100-140(Reverseprimer)
配列番号８３８：Δ148-170(Forward　primer)
配列番号８３９：Δ148-170(Reverseprimer)
配列番号８４０：Δ181-190(Forward　primer)
配列番号８４１：Δ181-190(Reverseprimer)
配列番号８４２：Δ193-228(Forward　primer)
配列番号８４３：Δ193-228(Reverseprimer)
配列番号８４４：Δ233-289(Forward　primer)
配列番号８４５：Δ233-289(Reverseprimer)
配列番号８４６：Δ148-154(Forward　primer)
配列番号８４７：Δ148-154(Reverse　primer)
配列番号８４８：Δ155-162(Forward　primer)
配列番号８４９：Δ155-162(Reverse　primer)
配列番号８５０：Δ163-170(Forward　primer)
配列番号８５１：Δ163-170(Reverse　primer)
配列番号８５２：抗体クローン＃５－２の軽鎖核酸全長配列
配列番号８５３：抗体クローン＃５－２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８５４：抗体クローン＃５－２の重鎖核酸全長配列
配列番号８５５：抗体クローン＃５－２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８５６：抗体クローン＃５－３の軽鎖核酸全長配列
配列番号８５７：抗体クローン＃５－３軽鎖のアミノ酸全長配列
配列番号８５８：抗体クローン＃５－３の重鎖核酸全長配列
配列番号８５９：抗体クローン＃５－３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８６０：抗体クローン＃５－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号８６１：抗体クローン＃５－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８６２：抗体クローン＃５－８の重鎖核酸全長配列
配列番号８６３：抗体クローン＃５－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８６４：抗体クローン＃５－１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号８６５：抗体クローン＃５－１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８６６：抗体クローン＃５－１０の重鎖核酸全長配列
配列番号８６７：抗体クローン＃５－１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８６８：抗体クローン＃５－４３の軽鎖核酸全長配列
配列番号８６９：抗体クローン＃５－４３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８７０：抗体クローン＃５－４３の重鎖核酸全長配列
配列番号８７１：抗体クローン＃５－４３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８７２：抗体クローン＃６－５５の軽鎖核酸全長配列
配列番号８７３：抗体クローン＃６－５５の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８７４：抗体クローン＃６－５５の核酸全長配列
配列番号８７５：抗体クローン＃６－５５のアミノ酸全長配列
配列番号８７６：抗体クローン＃７－３４の軽鎖核酸全長配列
配列番号８７７：抗体クローン＃７－３４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８７８：抗体クローン＃７－３４の重鎖核酸全長配列
配列番号８７９：抗体クローン＃７－３４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８８０：抗体クローン＃８－１の軽鎖核酸全長配列
配列番号８８１：抗体クローン＃８－１の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８８２：抗体クローン＃８－１の重鎖核酸全長配列
配列番号８８３：抗体クローン＃８－１の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８８４：抗体クローン＃８－４の軽鎖核酸全長配列
配列番号８８５：抗体クローン＃８－４の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８８６：抗体クローン＃８－４の重鎖核酸全長配列
配列番号８８７：抗体クローン＃８－４の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８８８：抗体クローン＃８－７の軽鎖核酸全長配列
配列番号８８９：抗体クローン＃８－７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８９０：抗体クローン＃８－７の重鎖核酸全長配列
配列番号８９１：抗体クローン＃８－７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８９２：抗体クローン＃８－８の軽鎖核酸全長配列
配列番号８９３：抗体クローン＃８－８の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８９４：抗体クローン＃８－８の重鎖核酸全長配列
配列番号８９５：抗体クローン＃８－８の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号８９６：抗体クローン＃７の軽鎖核酸全長配列
配列番号８９７：抗体クローン＃７の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号８９８：抗体クローン＃７の重鎖核酸全長配列
配列番号８９９：抗体クローン＃７の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号９００：抗体クローン＃１０の軽鎖核酸全長配列
配列番号９０１：抗体クローン＃１０の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号９０２：抗体クローン＃１０の重鎖核酸全長配列
配列番号９０３：抗体クローン＃１０の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号９０４：抗体クローン＃１３の軽鎖核酸全長配列
配列番号９０５：抗体クローン＃１３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号９０６：抗体クローン＃１３の重鎖核酸全長配列
配列番号９０７：抗体クローン＃１３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号９０８：抗体クローン＃２２の軽鎖核酸全長配列
配列番号９０９：抗体クローン＃２２の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号９１０：抗体クローン＃２２の重鎖核酸全長配列
配列番号９１１：抗体クローン＃２２の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号９１２：抗体クローン＃３３の軽鎖核酸全長配列
配列番号９１３：抗体クローン＃３３の軽鎖アミノ酸全長配列
配列番号９１４：抗体クローン＃３３の重鎖核酸全長配列
配列番号９１５：抗体クローン＃３３の重鎖アミノ酸全長配列
配列番号９１６：Novoprotein社のFSTL１のアミノ酸配列
配列番号９１７：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号９１８：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９１９：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号９２０：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９２１：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号９２２：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号９２３：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号９２４：ヒト化配列のＨ（１）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号９２５：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号９２６：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９２７：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号９２８：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９２９：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号９３０：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号９３１：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号９３２：ヒト化配列のＨ（２）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号９３３：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号９３４：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９３５：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号９３６：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９３７：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号９３８：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号９３９：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号９４０：ヒト化配列のＨ（３）重鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号９４１：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号９４２：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９４３：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号９４４：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９４５：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号９４６：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号９４７：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号９４８：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号９４９：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号９５０：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号９５１：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号９５２：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号９５３：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号９５４：ヒト化配列のIgG1型Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号９５５：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長核酸配列
配列番号９５６：ヒト化配列のIgG4型Ｈ（１）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号９５７：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長核酸配列
配列番号９５８：ヒト化配列のIgG4Ｈ（２）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号９５９：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長核酸配列
配列番号９６０：ヒト化配列のIgG4Ｈ（３）重鎖の全長アミノ酸配列
配列番号９６１：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長核酸配列
配列番号９６２：ヒト化配列のＬ（１）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号９６３：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９６４：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９６５：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号９６６：参照用のニワトリ配列の重鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号９６７：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９６８：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９６９：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３アミノ酸配列
配列番号９７０：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク４アミノ酸配列
配列番号９７１：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク２の代替アミノ酸配列
配列番号９７２：参照用のニワトリ配列の軽鎖配列フレームワーク３の代替アミノ酸配列
配列番号９７３：Δ193-204(Forward　primer)
配列番号９７４：Δ193-204(Reverse　primer)
配列番号９７５：Δ205-216(Forward　primer)
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配列番号９８７：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号９８８：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９８９：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号９９０：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９９１：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号９９２：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号９９３：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号９９４：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号９９５：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１核酸配列
配列番号９９６：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク１アミノ酸配列
配列番号９９７：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２核酸配列
配列番号９９８：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク２アミノ酸配列
配列番号９９９：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３核酸配列
配列番号１０００：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク３アミノ酸配列
配列番号１００１：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４核酸配列
配列番号１００２：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖のフレームワーク４アミノ酸配列
配列番号１００３：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長核酸配列
配列番号１００４：ヒト化配列のＬ（２）軽鎖の全長アミノ酸配列
配列番号１００５：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長核酸配列
配列番号１００６：ヒト化配列のＬ（３）軽鎖の全長アミノ酸配列
＜ＰＡＲＴ５＞
　本発明は、さらに以下を提供する。
（１２３）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であって、該抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域に含まれる１アミノ酸以上をエピトープに含むことを特徴とする、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
（１２４）ＦＳＴＬ１抑制剤と別のがん治療との組み合わせ物。
（１２５）前記別のがん治療は、がん免疫療法、分子標的療法および化学療法から選択される少なくとも１つである項目１２４に記載の組み合わせ物。
（１２６）前記がん免疫療法は、免疫抑制解除薬投与、がんワクチン投与および免疫細胞療法から選択される少なくとも１つである項目１２５に記載の組み合わせ物。
（１２７）前記免疫抑制解除薬は、ＰＤ－Ｌ１抑制剤、ＣＴＬＡ４抑制剤、ＰＤ－１抑制剤、４－１ＢＢ抑制剤、４－１ＢＢ促進剤、ＯＸ４０促進剤、ＧＩＴＲ抑制剤、ＣＤ２７抑制剤、ＣＤ４０促進剤、ＬＡＧ３抑制剤、Ｂ７－Ｈ３抑制剤、ＫＩＲｓ抑制剤、ＮＫＧ２Ａ抑制剤、ＣＳＦ１Ｒ抑制剤、ＩＤＯ抑制剤、ＴＧＦβ抑制剤、ＣＸＣＲ４抑制剤、Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ抑制剤、ＣＤ４７抑制剤、ＶＥＧＦ抑制剤およびＮｅｕｒｏｐｉｌｉｎ抑制剤から選択される少なくとも１つである項目１２６に記載の組み合わせ物。
（１２８）前記免疫細胞療法は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞療法、樹状細胞療法および活性化リンパ球療法から選択される少なくとも１つである項目１２６に記載の組み合わせ物。
（１２９）前記分子標的療法に用いる分子標的薬は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＤ３３抗体（calicheamicin連結）、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＤ１９／ＣＤ３抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗葉酸受容体抗体、抗グリピカン抗体、抗ＣＤ２６抗体、抗ＩＧＦ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＥＰＨＡ抗体、抗ＩＧＦＲ１抗体、抗ＧＤ２（ガングリオシド）抗体、抗ＥＤｂ（フィブロネクチン）抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ－２抗体、抗ＣＤ４抗体、抗Ｍｅｔ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗Ｇ２５０抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎ（ＣＤ５１）抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎαｖ抗体、抗ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ／ｓｃａｔｔｅｒ ｆａｃｔｏｒ抗体、抗ＰＤＧＦＲα抗体、抗ＨＧＦ（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｏ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体、抗ＰＬＧＦ（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体、抗ｃ－Ｍｅｔ抗体、抗ｍｙｏｓｔａｔｉｎ抗体、抗ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）抗体、抗ＥＧＦＬ７（Epidermal Growth Factor Domain-Like 7）抗体、抗ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３バイスペシフィック抗体、抗ＬＯＸＬ２（ｌｙｓｙｌ ｏｘｉｄａｓｅ－ｌｉｋｅ－２）抗体、抗ＴＲＡＩＬ Ｒ１抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＩＬ－６抗体、抗ＧＤ３抗体、抗ＦＡＰ（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）抗体、抗ＣＤ２２１（ｉｎｓｕｌｉｎ・ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）抗体、抗ＣＤ１９／Ｔ ｃｅｌｌバイスペシフィック抗体、抗ＤＫＫ－１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ－１）抗体、抗ＤＮＡ ｈｉｓｔｏｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘ抗体、抗ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ ｓｅｒｉｎｅ抗体、抗Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２抗体、抗ＲＩ（１３１Ｉ）抗体、抗ＩＬ－２抗体、抗ＴＮＦ－α抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＩＬ－１α抗体、抗ＰＳＣＡ抗体、抗メソセリン抗体、抗ＴＥＭ－１抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗ＤＲ５抗体、抗ＴＦ－ＶＩＩａ抗体、抗ＣＤ２００（ＯＸ－２）抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３バイスペシフィック抗体、抗ＩＬ－１３抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ｈＰＡＭ４抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体および抗ＣＤ４０抗体から選択される少なくとも１つである項目１２５に記載の組み合わせ物。
（１３０）前記化学療法に用いる化学療法剤は、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖蛋白阻害剤および白金錯体誘導体からなる群より選択される少なくとも１つである項目１２５に記載の組み合わせ物。
（１３１）前記ＦＳＴＬ１抑制剤は、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される項目１２４に記載の組み合わせ物。
（１３２）前記ＦＳＴＬ１抑制剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である項目１２４に記載の組合せ物。
（１３３）抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、ＰＡＲＴ１の項目Ａ１～Ａ１８に記載のいずれかである項目１３２に記載の組み合わせ物。
（１３４）項目１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
（１３５）項目１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
（１３６）項目１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
（１３７）項目１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む肺癌の治療剤。
（１３８）項目１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
（１３９）項目１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
（１４０）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目１３９に記載の阻害剤。
（１４１）前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、項目１３９に記載の阻害剤。
（１４２）項目１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
（１４３）前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、項目１４２に記載の阻害剤。
（１４４）前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目１４２に記載の阻害剤。
（１４５）重鎖全長が配列番号１００８のアミノ酸配列を有し、軽鎖全長が配列番号１０１０のアミノ酸配列を有する抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
　本発明のＦＳＴＬ１抑制剤と別のがん治療との組み合わせ物における別のがん治療は、がんを治療対象とする治療であればどのような治療でもよく、特に限定されない。好ましくは、がん免疫療法、分子標的療法および化学療法から選択される少なくとも１つである。がん免疫療法は特に限定されないが、免疫抑制解除薬投与、がんワクチン投与および免疫細胞療法から選択される少なくとも１つであることが好ましい。
　免疫抑制解除薬としては、公知の免疫抑制解除薬および将来開発される免疫抑制解除薬を好適に使用することができる。例えば、ＰＤ－Ｌ１抑制剤、ＣＴＬＡ４抑制剤、ＰＤ－１抑制剤、４－１ＢＢ抑制剤、４－１ＢＢ促進剤、ＯＸ４０促進剤、ＧＩＴＲ抑制剤、ＣＤ２７抑制剤、ＣＤ４０促進剤、ＬＡＧ３抑制剤、Ｂ７－Ｈ３抑制剤、ＫＩＲｓ抑制剤、ＮＫＧ２Ａ抑制剤、ＣＳＦ１Ｒ抑制剤、ＩＤＯ抑制剤、ＴＧＦβ抑制剤、ＣＸＣＲ４抑制剤、Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ抑制剤、ＣＤ４７抑制剤、ＶＥＧＦ抑制剤およびＮｅｕｒｏｐｉｌｉｎ抑制剤から選択される少なくとも１つであることが好ましい。より好ましくは、ＰＤ－Ｌ１抑制剤およびＣＴＬＡ４抑制剤である。
　ＰＤ－Ｌ１抑制剤としては抗ＰＤ－Ｌ１抗体が挙げられ、例えばAtezolizumab、MEDI4736、Avelumab等が挙げられる。ＣＴＬＡ４抑制剤としては抗ＣＴＬＡ４抗体が挙げられ、例えばIpilimumab、Tremelimumab等が挙げられる。ＰＤ－１抑制剤としては抗ＰＤ－１抗体が挙げられ、例えばPembrolizumab、Nivolumab、PDR001等が挙げられる。４－１ＢＢ抑制剤としては抗４－１ＢＢ抗体が挙げられ、例えばUrelumab等が挙げられる。４－１ＢＢ促進剤としては４－１ＢＢアゴニスト抗体が挙げられ、例えばPF-05082566等が挙げられる。ＯＸ４０促進剤としてはＯＸ４０アゴニスト抗体が挙げられ、例えばMEDI6469等が挙げられる。ＧＩＴＲ抑制剤としては抗ＧＩＴＲ抗体が挙げられ、例えばTRX518等が挙げられる。ＣＤ２７抑制剤としては抗ＣＤ２７抗体が挙げられ、例えばVarlilumab等が挙げられる。ＣＤ４０促進剤としてはＣＤ４０アゴニスト抗体が挙げられ、例えばCP-870893等が挙げられる。ＬＡＧ３抑制剤としては抗ＬＡＧ３抗体が挙げられ、例えばBMS-986016等が挙げられる。Ｂ７－Ｈ３抑制剤としては抗Ｂ７－Ｈ３抗体が挙げられ、例えばEnoblituzumab等が挙げられる。ＫＩＲｓ抑制剤としては抗ＫＩＲｓ抗体が挙げられ、例えばLirilumab等が挙げられる。ＮＫＧ２Ａ抑制剤としては抗ＮＫＧ２Ａ抗体が挙げられ、例えばIPH2201等が挙げられる。ＣＳＦ１Ｒ抑制剤としては抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が挙げられ、例えばEmactuzumab等が挙げられる。ＩＤＯ抑制剤としてはＩＤＯ阻害剤が挙げられ、例えばINCB024360等が挙げられる。ＴＧＦβ抑制剤としてはＴＧＦβ阻害剤が挙げられ、例えばGalunisertib等が挙げられる。ＣＸＣＲ４抑制剤としては抗ＣＸＣＲ４抗体が挙げられ、例えばUlocuplumab等が挙げられる。また、ＣＸＣＲ４抑制剤としてはＣＸＣＲ４阻害剤が挙げられ、例えばBKT140等が挙げられる。Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ抑制剤としては抗Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ抗体が挙げられ、例えばBavituximab等が挙げられる。ＣＤ４７抑制剤としては抗ＣＤ４７抗体が挙げられ、例えばCC-90002等が挙げられる。ＶＥＧＦ抑制剤としては抗ＶＥＧＦ抗体が挙げられ、例えばBevacizumab等が挙げられる。Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ抑制剤としては抗Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ抗体が挙げられ、例えばMNRP1685A等が挙げられる。（参考文献：Kathleen M. Mahoney, Paul D. Rennert and Gordon J. Freeman“Combination cancer immunotherapy and new immunomodulatory targets” NATURE REVIEWS DRUG DISCOVERY　VOLUME 14、2015 : 561-584）
　がんワクチンとしては、公知のがんワクチンおよび将来開発されるがんワクチンを好適に使用することができる。例えばProvenge（商品名）、OncoVAX（商品名）、DCVax-L（商品名）、Stimuvax（商品名）、HyperAcute（商品名）、Prostvac-V/F-（商品名）、TRICOM（商品名）、ProstAtak（商品名）、Lucanix（商品名）、Sipuleucel T、GVAX、Theratope、Tecemotide、L-BLP25、GSK1572932A、Belagenpumatucel L、GSK 2132231A、GV1001、Gp100、AGS-003、Algenpantucel-L、Tergenpantucel-L、TG4010、MVA-MUC1-IL2、Rindopepimut、CDX-110、E75 peptide acetate、NeuVax、M-Vax、CimaVax-EGF、IMA901、POL-103A、pumatucel-L、MDX-1379、OCV-101、S-588410、WT4869、WT2725、WT4869、OCV-C02、ONO-7268MX1、ONO-7268MX2等が挙げられる。
　がん免疫療法に使用される免疫細胞療法は特に限定されないが、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞療法、樹状細胞療法および活性化リンパ球療法から選択される少なくとも１つであることが好ましい。キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞療法としては、例えば抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞療法等が挙げられる。樹状細胞療法および活性化リンパ球療法に好適に用いられる薬剤としては、例えばProvenge（商品名）、OncoVAX（商品名）、DCVax-L（商品名）、HyperAcute（商品名）、Lucanix（商品名）、GVAX、AGS-003、M-Vax等が挙げられる。
　分子標的療法において、公知の分子標的薬および将来開発される分子標的薬を好適に使用することができる。例えば、抗ＣＤ２０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＤ１９／ＣＤ３抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗葉酸受容体抗体、抗グリピカン抗体、抗ＣＤ２６抗体、抗ＩＧＦ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＥＰＨＡ抗体、抗ＩＧＦＲ１抗体、抗ＧＤ２（ガングリオシド）抗体、抗ＥＤｂ（フィブロネクチン）抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ－２抗体、抗ＣＤ４抗体、抗Ｍｅｔ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗Ｇ２５０抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎ（ＣＤ５１）抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎαｖ抗体、抗ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ／ｓｃａｔｔｅｒ ｆａｃｔｏｒ抗体、抗ＰＤＧＦＲα抗体、抗ＨＧＦ（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｏ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体、抗ＰＬＧＦ（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体、抗ｃ－Ｍｅｔ抗体、抗ｍｙｏｓｔａｔｉｎ抗体、抗ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）抗体、抗ＥＧＦＬ７（Epidermal Growth Factor Domain-Like 7）抗体、抗ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３バイスペシフィック抗体、抗ＬＯＸＬ２（ｌｙｓｙｌ ｏｘｉｄａｓｅ－ｌｉｋｅ－２）抗体、抗ＴＲＡＩＬ Ｒ１抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＩＬ－６抗体、抗ＧＤ３抗体、抗ＦＡＰ（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）抗体、抗ＣＤ２２１（ｉｎｓｕｌｉｎ・ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）抗体、抗ＣＤ１９／Ｔ ｃｅｌｌバイスペシフィック抗体、抗ＤＫＫ－１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ－１）抗体、抗ＤＮＡ ｈｉｓｔｏｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘ抗体、抗ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ ｓｅｒｉｎｅ抗体、抗Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２抗体、抗ＲＩ（１３１Ｉ）抗体、抗ＩＬ－２抗体、抗ＴＮＦ－α抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＩＬ－１α抗体、抗ＰＳＣＡ抗体、抗メソセリン抗体、抗ＴＥＭ－１抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗ＤＲ５抗体、抗ＴＦ－ＶＩＩａ抗体、抗ＣＤ２００（ＯＸ－２）抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３バイスペシフィック抗体、抗ＩＬ－１３抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ｈＰＡＭ４抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体および抗ＣＤ４０抗体から選択される少なくとも１つであることが好ましい。
　抗ＣＤ２０抗体としては、例えばRituximab、Ibritumomab tiuxetan、Tositumomab、Ofatumumab、Obinutuzumab、Obinutuzumab、veltuzumab等が挙げられる。抗ＨＥＲ２抗体としては、例えばTrastuzumab、Pertuzumab、Trastuzumab emtansine、RG3502、Rexomun等が挙げられる。抗ＨＥＲ３抗体としては、例えばPatritumab、AMG888、SAR256212等が挙げられる。抗ＥＧＦＲ抗体としては、例えばCetuximab、Panitumumab、Nimotuzumab、Sym004、Necitumumab、RG7160等が挙げられる。抗ＶＥＧＦ抗体としては、例えばBevacizumab、Ramucirumab等が挙げられる。抗ＣＤ３３抗体（calicheamicin連結）としては、例えばGemtuzumab ozogamicin等が挙げられる。抗ＣＤ５２抗体としては、例えばAlemtuzumab等が挙げられる。抗ＣＤ１９／ＣＤ３抗体としては、例えばBlinatumomab、MEDI-551、SAR3419等が挙げられる。抗ＲＡＮＫＬ抗体としては、例えばDenosumab等が挙げられる。抗ＣＤ３０抗体としては、例えばBrentuximab vedotin等が挙げられる。抗ＣＣＲ４抗体としては、例えばMogamulizumab等が挙げられる。抗葉酸受容体抗体としては、例えばFarletuzumab等が挙げられる。抗グリピカン抗体としては、例えばCodrituzumab等が挙げられる。抗ＣＤ２６抗体としては、例えばYS110等が挙げられる。抗ＩＧＦ抗体としては、例えばMEDI-573等が挙げられる。抗Ｂ７－Ｈ３抗体としては、例えばDS-5573等が挙げられる。抗ＥＰＨＡ抗体としては、例えばDS-8895等が挙げられる。抗ＩＧＦＲ１抗体としては、例えばGanitumab、Dalotuzumab等が挙げられる。抗ＧＤ２（ガングリオシド）抗体としては、例えばAPN311、APN301等が挙げられる。抗ＥＤｂ（フィブロネクチン）抗体としては、例えばL19-131I等が挙げられる。抗ＣＳ１抗体としては、例えばElotuzumab等が挙げられる。抗ＶＥＧＦＲ－２抗体としては、例えばRamucirumab等が挙げられる。抗ＣＤ４抗体としては、例えばZanolimumab等が挙げられる。抗Ｍｅｔ抗体としては、例えばOnartuzumab等が挙げられる。抗ＣＤ２２抗体としては、例えばInotuzumab、Ozogamicin等が挙げられる。抗Ｇ２５０抗体としては、例えばRencarex（商品名）、Girentuximab等が挙げられる。抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎ（ＣＤ５１）抗体としては、例えばEMD525797等が挙げられる。抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎαｖ抗体としては、例えばIntetumumab等が挙げられる。抗ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ／ｓｃａｔｔｅｒ ｆａｃｔｏｒ抗体としては、例えばRilotumumab等が挙げられる。抗ＰＤＧＦＲα抗体としては、例えばMEDI-575、Olaratumab等が挙げられる。抗ＨＧＦ（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｏ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体としては、例えばFiclatuzumab等が挙げられる。抗ＰＬＧＦ（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体としては、例えばTB-403等が挙げられる。抗ｃ－Ｍｅｔ抗体としては、例えばLY2875358等が挙げられる。抗ｍｙｏｓｔａｔｉｎ抗体としては、例えばLY2495655等が挙げられる。抗ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）抗体としては、例えばAdecatumumab、VB4-835等が挙げられる。抗ＥＧＦＬ７（Epidermal Growth Factor Domain-Like 7）抗体としては、例えばRG7414等が挙げられる。抗ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３バイスペシフィック抗体としては、例えばRG7597等が挙げられる。抗ＬＯＸＬ２（ｌｙｓｙｌ ｏｘｉｄａｓｅ－ｌｉｋｅ－２）抗体としては、例えばGS-6624等が挙げられる。抗ＴＲＡＩＬ Ｒ１抗体としては、例えばMapatumumab等が挙げられる。抗ＣＤ５６抗体としては、例えばLorvotuzumab mertansine等が挙げられる。抗ＣＤ２２抗体としては、例えばEpratuzumab、IMMU-102等が挙げられる。抗ＩＬ－６抗体としては、例えばSiltuximab、ALD518等が挙げられる。抗ＧＤ３抗体としては、例えばEcromeximab等が挙げられる。抗ＦＡＰ（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）抗体としては、例えばSibrotuzumab等が挙げられる。抗ＣＤ２２１（ｉｎｓｕｌｉｎ・ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）抗体としては、例えばRobatumumab等が挙げられる。抗ＣＤ１９／Ｔ ｃｅｌｌバイスペシフィック抗体としては、例えばBlinatumomab等が挙げられる。抗ＤＫＫ－１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ－１）抗体としては、例えばBHQ880等が挙げられる。抗ＤＮＡ ｈｉｓｔｏｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘ抗体としては、例えばCotara mAb TNT（商品名）等が挙げられる。抗ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ抗体としては、例えばTarvaci bavituximab（商品名）等が挙げられる。抗Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２抗体としては、例えばPF-04856884等が挙げられる。抗ＲＩ（１３１Ｉ）抗体としては、例えばRADRETUMAB等が挙げられる。抗ＩＬ－２抗体としては、例えばDARLEUKIN、TELEUKIN等が挙げられる。抗ＴＮＦ－α抗体としては、例えばFIBROMUN等が挙げられる。抗ＣＤ１０５抗体としては、例えばTRC105等が挙げられる。抗ＩＬ－１α抗体としては、例えばXILONIX等が挙げられる。抗ＰＳＣＡ抗体としては、例えばAGS-1C４D4等が挙げられる。抗メソセリン抗体としては、例えばAmatuximab等が挙げられる。抗ＴＥＭ－１抗体としては、例えばOntecizumab等が挙げられる。抗ＧＰＮＭＢ抗体としては、例えばGlembatumumab vedotin等が挙げられる。抗ＤＲ５抗体としては、例えばTigatuzumab等が挙げられる。抗ＴＦ－ＶＩＩａ抗体としては、例えばALT-836等が挙げられる。抗ＣＤ２００（ＯＸ－２）抗体としては、例えばSamalizumab等が挙げられる。抗ＣＤ１３８抗体としては、例えばBT-062等が挙げられる。抗ＣＤ２０／ＣＤ３バイスペシフィック抗体としては、例えばLymphomun等が挙げられる。抗ＩＬ－１３抗体としては、例えばRG3637等が挙げられる。抗ＣＤ３８抗体としては、例えばDaratuzumab等が挙げられる。抗ｈＰＡＭ４抗体としては、例えばIMMU-107等が挙げられる。抗ＣＤ７４抗体としては、例えばMilatuzumab等が挙げられる。抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体としては、例えばEnsituximab等が挙げられる。抗ＣＤ４０抗体としては、例えばLucatumumab等が挙げられる。
　化学療法において、公知の化学療法剤および将来開発される化学療法剤を好適に使用することができる。例えば化学療法剤は、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖蛋白阻害剤および白金錯体誘導体からなる群より選択される少なくとも１つであることが好ましい。
　化学療法剤としては、例えば以下のものが挙げられる：アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびメチルアメルアミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）；ＴＬＫ２８６（ＴＥＬＣＹＴＡ（商標））；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；δ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；β－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレチンおよび９－アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１ＩおよびカリケアマイシンωＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ　Ｉｎｔｌ．　Ｅｄ．　Ｅｎｇｌ．、３３巻：１８３～１８６頁（１９９４年）を参照のこと）並びにアントラサイクリン、例えば、アンナマイシン、ＡＤ　３２、アクラルビシン（ａｌｃａｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン、デクスラゾキサン、ＤＸ－５２－１、エピルビシン、ＧＰＸ－１００、イダルビシン、ＫＲＮ５５００、メノガリル、ダイネミシン、例えば、ダイネミシンＡ、エスペラミシン、ネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連クロモプロテイン系エジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモミシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、リポソームドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチンおよびゾルビシン；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、プテロプテリンおよびトリメトレキセート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリンおよびチオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビンおよびフロキシウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクトン；抗副腎薬（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌ）、例えば、アミノグルテチミド、ミトタンおよびトリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フォリン酸（ロイコボリン）；アセグラトン；葉酸代謝拮抗性抗悪性腫瘍薬、例えば、ＡＬＩＭＴＡ（登録商標）、ＬＹ２３１５１４ペメトレキセド、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、例えば、メトトレキサート、代謝拮抗薬、例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）とそのプロドラッグ例えば、ＵＦＴ、Ｓ－１およびカペシタビン、並びにチミジル酸シンターゼ阻害剤およびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ラルチトレキセド（ＴＯＭＵＤＥＸ（登録商標）、ＴＤＸ）；ジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、エニルウラシル；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エフロルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシノイド、例えば、マイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチラミン；トリコテセン（特にＴ－２トキシン、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標）；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキサン；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金；白金類似体または白金系類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；ビンカアルカロイド；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ　２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｌｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎ）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；前記の何れかの医薬として許容される塩、酸または誘導体；並びに前記の２種以上の組合せ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの併用療法の略語）、およびＦＯＬＦＯＸ（５－ＦＵおよびロイコボリンと併用されるオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）による治療レジメンの略語）。
　この定義には、以下のものも含まれる：腫瘍に対するホルモン作用を制御または阻害するように作用する抗ホルモン薬、例えば、抗エストロゲン薬および選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（例えば、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェン）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェン；アロマターゼ阻害剤；並びに抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリン；並びにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓおよび上皮成長因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）など；ワクチン、例えば、遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ－２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；並びに前記の何れかの医薬として許容される塩、酸または誘導体。
　「タキサン」は、有糸分裂を阻害しかつ微小管に干渉する化学療法剤である。タキサンの例としては、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）；クレモホアを含まない、パクリタキセルのアルブミン改変ナノ粒子製剤またはｎａｂ－パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）；およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）；Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられる。
　「アントラサイクリン」は、真菌ストレプトコッカス・ピウセチウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ）に由来する種類の抗生物質であり、例としては、ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびエピルビシンなどが挙げられる。
　「アントラサイクリン系化学療法（剤）」は、１種または複数のアントラサイクリンからなるまたはそれを含む化学療法（剤）レジメンを指す。例としては、５－ＦＵ、エピルビシンおよびシクロホスファミド（ＦＥＣ）；５－ＦＵ、ドキソルビシンおよびシクロホスファミド（ＦＡＣ）；ドキソルビシンおよびシクロホスファミド（ＡＣ）；エピルビシンおよびシクロホスファミド（ＥＣ）などが挙げられる。
　「カルボプラチン系化学療法（剤）」は、１種または複数のカルボプラチンからなるまたはそれを含む化学療法（剤）レジメンを指す。一例は、ＴＣＨ（ドセタキセル／ＴＡＸＯＬ（登録商標）、カルボプラチン、およびトラスツズマブ／ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））である。
　「アロマターゼ阻害剤」は、副腎においてエストロゲン産生を制御する酵素アロマターゼを阻害する。アロマターゼ阻害剤の例としては、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エクセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾールおよびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾールが挙げられる。一実施形態において、本明細書中のアロマターゼ阻害剤は、レトロゾールまたはアナストロゾールである。
　「代謝拮抗薬化学療法」は、代謝産物と構造的に類似しているが、身体が増殖性に使用することができない薬剤の使用である。多くの代謝拮抗薬化学療法は、核酸、ＲＮＡおよびＤＮＡの産生を妨げる。代謝拮抗薬である化学療法剤の例としては、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ），カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（商標））、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、６－チオグアニン、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、アラビノシルシトシンＡＲＡ－Ｃシタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ　Ｕ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－ＤＯＭＥ（登録商標））、アゾシトシン、デオキシシトシン、ピリドミデン（ｐｙｒｉｄｍｉｄｅｎｅ）、フルダラビン（ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標））、クラドリビン（ｃｌａｄｒａｂｉｎｅ）、２－デオキシ－Ｄ－グルコースなどが挙げられる。
＜実施例＞ヒト化抗FSTL1抗体の作製
＜抗体発現ベクターの構築＞
　リード抗体の最適化を目的として、ヒト化＃６－５５Ｈ（２）－Ｌ（１）について配列設計を行った。具体的には、H鎖、L鎖のシグナル配列にウシαラクトアルブミン配列を採用し、H鎖の定常領域にヒトIgG4、L鎖の定常領域にλ鎖を採用した。これら配列を有する抗体遺伝子の５’末端にHindIII、３’末端にXhoI制限酵素サイトを付加し、最適化ヒト化抗体として、H鎖およびL鎖の遺伝子を人工合成した（H鎖の塩基配列：配列番号1007、H鎖のアミノ酸配列：配列番号1008、L鎖の塩基配列：配列番号1009、L鎖のアミノ酸配列：配列番号1010）。合成した抗体遺伝子とPART1の実施例３で作製した、マルチクローニングサイトを挿入したpcDNA3.4発現ベクターについて、HindIII・XhoI処理した。Ligation high ver2(東洋紡、Cat. No. LGK-201)を用いて制限酵素処理した抗体遺伝子をpcDNA3.4発現ベクターに組込み、H鎖およびL鎖抗体発現ベクターを構築した。
・H鎖の塩基配列：配列番号1007（下線はウシαラクトアルブミン由来シグナル配列、二重下線は定常領域）
ATGATGTCCTTTGTCTCTCTGCTCCTGGTTGGCATCCTATTCCATGCCACCCAGGCCGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCGTGACAATGCAGTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATTTGTGTCCAGCGTGTGCAGCGGCAGCAGCACCTATTATGCCCCTGCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACAGCAAGAACACCGTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGATCGCCGGCAGAGCCCGGTGGTCTTGTACCAGCGCCGCCTACAACATCGACGCCTGGGGACAGGGAACCCTCGTGACAGTGTCTAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCTTGTAGCAGAAGCACCAGCGAGTCTACAGCCGCCCTGGGCTGCCTCGTGAAGGACTACTTTCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCTCTGACAAGCGGCGTGCACACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCTCTGAGCAGCGTCGTGACTGTGCCCAGCAGCTCTCTGGGCACCAAGACCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAATCTAAGTACGGCCCTCCCTGCCCTCCTTGCCCAGCCCCTGAATTTCTGGGCGGACCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCAGGAAGATCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTTCAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCTCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGCGAACCCCAGGTGTACACACTGCCTCCAAGCCAGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTCGTGAAAGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACAACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTGTACAGCAGACTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAAGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCTCTGAGCCTGGGCAAGTGA
・H鎖のアミノ酸配列：配列番号1008（下線はウシαラクトアルブミン由来シグナル配列、二重下線は定常領域）
MMSFVSLLLVGILFHATQAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSVTMQWVRQAPGKGLEFVSSVCSGSSTYYAPAVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAKIAGRARWSCTSAAYNIDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
・L鎖の塩基配列：配列番号1009（下線はウシαラクトアルブミン由来シグナル配列、二重下線は定常領域）
ATGATGTCCTTTGTCTCTCTGCTCCTGGTTGGCATCCTATTCCATGCCACCCAGGCCAGCTATGAGCTGACTCAGCCACCCAGCGTGTCCGTGTCTCCTGGCCAGACCGCCAGAATCACCTGTAGCGGCGGAGGCAACAACTACGGCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCTGTGACCGTGATCTACTACAACGACAACCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGATTCAGCGGCAGCAATAGCGGCTCCACCACCACCCTGACAATCAGCGGAGTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGATTACTACTGCGGCAGCTGGGACAGCAACACCGACTCCGGCATCTTTGGCGGCGGAACCAAGCTGACCGTCCTGGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAG
・L鎖のアミノ酸配列：配列番号1010（下線はウシαラクトアルブミン由来シグナル配列、二重下線は定常領域）
MMSFVSLLLVGILFHATQASYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGGNNYGWYQQKPGQAPVTVIYYNDNRPSGIPERFSGSNSGSTTTLTISGVQAEDEADYYCGSWDSNTDSGIFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
＜ヒト化抗体の製造＞
　最適化ヒト化抗体を大量に抗体を製造するため、作製したH鎖およびL鎖抗体発現ベクターをほ乳類培養細胞にExpiCHO Expression system (Invitrogen社、Cat#A29133)を利用しトランスフェクトした後培養上清を回収し、以下の表５に示したように精製を行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000033
＜結合活性測定＞
　得られた精製抗体のFSTL1に対する結合活性について、BLI法(BLItz, 日本ポール, 45-5000)を用いて測定した。抗原は、EZ-Link NHS-PEG4-Biotin(Thermo, 21329)を用いてビオチン化を行った。BLI法のセンサーチップはStreptavidin Tray(日本ポール,18-5019)を使用した。センサーチップはPBS(WAKO, 166-23555)で10分以上水和を行った。水和したセンサーチップに5 ug/mlのビオチン化した抗原を、300 秒固相化した。抗体は40、20、10、5、2.5、0 ug/mlに調製して120秒反応させ、解離は300秒測定した。抗体濃度が0 ug/mlのときをリファレンスとし、KD値を算出した。KD値を算出した結果、最適化ヒト化抗体のKD値は、1.09×10-8 Mであった。

Claims (145)

  1. 抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であって、該抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  2. 前記抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、２０５～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、請求項１に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  3. 前記抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸１４８～１６２位および２０５～２２８位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、請求項１に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  4. 抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  5. 前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  6. 前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  7. 前記抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号６；重鎖：配列番号８）、＃５－３（軽鎖：配列番号１０；重鎖：配列番号１２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１４；重鎖：配列番号１６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１８；重鎖：配列番号２０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号２２；重鎖：配列番号２４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃８－４（軽鎖：配列番号３８；重鎖：配列番号４０）、＃８－７（軽鎖：配列番号４２；重鎖：配列番号４４）、＃８－８（軽鎖：配列番号４６；重鎖：配列番号４８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）、＃２２（軽鎖：配列番号６２；重鎖：配列番号６４）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  8. 前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３０；重鎖：配列番号３２）、＃８－１（軽鎖：配列番号３４；重鎖：配列番号３６）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  9. 前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２６；重鎖：配列番号２８）、＃７（軽鎖：配列番号５０；重鎖：配列番号５２）、＃１０（軽鎖：配列番号５４；重鎖：配列番号５６）、＃１３（軽鎖：配列番号５８；重鎖：配列番号６０）および＃３３（軽鎖：配列番号６６；重鎖：配列番号６８）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  10. 前記抗体は、抗体＃５－２（軽鎖：配列番号９６；重鎖：配列番号９８）、＃５－３（軽鎖：配列番１００；重鎖：配列番号１０２）、抗体＃５－８（軽鎖：配列番号１０４；重鎖：配列番号１０６）、＃５－１０（軽鎖：配列番号１０８；重鎖：配列番号１１０）、＃５－４３（軽鎖：配列番号１１２；重鎖：配列番号１１４）、＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃８－４（軽鎖：配列番号１２８；重鎖：配列番号１３０）、＃８－７（軽鎖：配列番号１３２；重鎖：配列番号１３４）、＃８－８（軽鎖：配列番号１３６；重鎖：配列番号１３８）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１０（軽鎖：配列番号１４４；重鎖：配列番号１４６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）、＃２２（軽鎖：配列番号１５２；重鎖：配列番号１５４）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  11. 前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃８－１（軽鎖：配列番号１２４；重鎖：配列番号１２６）、＃７（軽鎖：配列番号１４０；重鎖：配列番号１４２）、＃１０（軽鎖：配列番号１４４；重鎖：配列番号１４６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  12. 前記抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号１１６；重鎖：配列番号１１８）、＃７－３４（軽鎖：配列番号１２０；重鎖：配列番号１２２）、＃１０（軽鎖：配列番号１４４；重鎖：配列番号１４６）、＃１３（軽鎖：配列番号１４８；重鎖：配列番号１５０）および＃３３（軽鎖：配列番号１５６；重鎖：配列番号１５８）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、請求項４に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  13. 前記抗体は、ヒト化抗体である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  14. 前記ヒト化抗体は、配列番号１６１、１６３、１６５および１６７（Ｈ（１）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列および配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（Ｌ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列、または該重鎖フレームワーク配列および該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ配列の重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（配列番号２０６、２０７、２０８および２０９）および軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（配列番号２１０、２１１もしくは２１４、２１２もしくは２１５および２１３）と相違するアミノ酸を１つ以上ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異（バックミューテーション）させた配列を有する、請求項１３に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  15. 前記ヒト化抗体は、配列番号１７１、１７３、１７５および１７７（それぞれヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号１６９、１７１、１７３および１７５（Ｈ（２）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号１７７、１７９、１８１および１８３（Ｈ（３）ヒト化重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む重鎖フレームワーク配列または該重鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ重鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８および２０９）と相違するアミノ酸を１個～８個ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有し、
    　配列番号１８５、１８７、１８９および１９１（それぞれＬ（１）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）、配列番号２３１、２３３、２３５および２３７（Ｌ（２）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）または配列番号２３９、２４１、２４３および２４５（Ｌ（３）ヒト化軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含む軽鎖フレームワーク配列または該軽鎖フレームワーク配列において、対応するニワトリ軽鎖配列ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号２１０、２１１もしくは２１４、２１２もしくは２１５および２１３）と相違するアミノ酸を１個～４個ニワトリ配列におけるアミノ酸に変異させた配列を有する、請求項１３に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  16. 前記相違するアミノ酸の少なくとも１つは、Ｖｅｒｎｉｅｒ残基から選択される、請求項１４または１５に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  17. 前記相違するアミノ酸のすべてが、Ｖｅｒｎｉｅｒ残基から選択される、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  18. 前記抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１６９、１７１、１７３および１７５）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号１８５、１８７、１８９および１９１）を有する、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  19. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む医薬。
  20. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤。
  21. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤。
  22. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、メラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
  23. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
  24. 前記転移は、骨転移または肺転移を含む、請求項２３に記載の阻害剤。
  25. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による免疫破綻の増強の阻害剤。
  26. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項２５に記載の阻害剤。
  27. 前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、請求項２５に記載の阻害剤。
  28. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
  29. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項２８に記載の阻害剤。
  30. 前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、請求項２８に記載の阻害剤。
  31. 別のがん治療と組み合わせることを特徴とする、請求項１９に記載の医薬、請求項２０に記載の抗がん剤、請求項２１もしくは２２に記載の治療剤、または請求項２３～３０のいずれかに記載の阻害剤。
  32. 前記別のがん治療は別の抗がん剤または放射線療法またはその両者を含む、請求項３１に記載の医薬、抗がん剤、治療剤または阻害剤。
  33. ＦＳＴＬ１抑制剤とＰＤ－Ｌ１抑制剤との組み合わせ物。
  34. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤および前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は、それぞれ独立して、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプ
    タマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される、請求項３３に記載の組み合わせ物。
  35. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、前記ＰＤ－Ｌ１抑制剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である、請求項３３に記載の組合せ物。
  36. 抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物との組み合わせ物。
  37. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号２５０（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位から１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  38. 前記抗体は抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  39. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号２７５；重鎖：配列番号２７７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号２７９；重鎖：配列番号２８１）、＃８－１（軽鎖：配列番号２８３；重鎖：配列番号２８５）、＃７（軽鎖：配列番号２９９；重鎖：配列番号３０１）、＃１０（軽鎖：配列番号３０３；重鎖：配列番号３０５）、＃１３（軽鎖：配列番号３０７；重鎖：配列番号３０９）および＃３３（軽鎖：配列番号３１５；重鎖：配列番号３１７）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  40. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号３６５；重鎖：配列番号３６７）、＃７－３４（軽鎖：配列番号３６９；重鎖：配列番号３７１）、＃８－１（軽鎖：配列番号３７３；重鎖：配列番号３７５）、＃７（軽鎖：配列番号３８９；重鎖：配列番号３９１）、＃１０（軽鎖：配列番号３９３；重鎖：配列番号３９５）、＃１３（軽鎖：配列番号３９７；重鎖：配列番号３９９）および＃３３（軽鎖：配列番号４０５；重鎖：配列番号４０７）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  41. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体である、請求項３５～４０のいずれか１項に記載の組合せ物。
  42. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４１８、４２０、４２２および４２４）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号４３４、４３６、４３８および４４０）を有する、請求項３５～４１のいずれか１項に記載の組合せ物。
  43. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１の結合阻害能を有する、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  44. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  45. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の可変領域の全長を含む、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  46. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体Clone MIH5またはClone　10F.9G2の全長またはそのヒト化配列を含む、請求項３５または３６に記載の組合せ物。
  47. 請求項３３～４６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
  48. 請求項３３～４６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
  49. 請求項３３～４６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む転移性悪性腫瘍の治療剤。
  50. 請求項３３～４６のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
  51. 請求項３３～４６のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
  52. 前記転移は、骨転移または肺転移を含む、請求項５１に記載の阻害剤。
  53. 請求項３３～４６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
  54. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項５３に記載の阻害剤。
  55. 前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、請求項５３に記載の阻害剤。
  56. 請求項３３～４６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
  57. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項５６に記載の阻害剤。
  58. 前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、請求項５６に記載の阻害剤。
  59. ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤はＰＤ－Ｌ１抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
  60. 抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
  61. ＰＤ－Ｌ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＰＤ－Ｌ１抑制剤はＦＳＴＬ抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
  62. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
  63. ＦＳＴＬ１抑制剤とＣＴＬＡ４抑制剤との組み合わせ物。
  64. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤および前記ＣＴＬＡ４抑制剤は、それぞれ独立して、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、siRNA、アプ
    タマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される、請求項６３に記載の組み合わせ物。
  65. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であり、前記ＣＴＬＡ４抑制剤は抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である、請求項６３に記載の組合せ物。
  66. 抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物との組み合わせ物。
  67. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号５０３（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位から１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  68. 前記抗体は抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  69. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号５２８；重鎖：配列番号５３０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号５３２；重鎖：配列番号５３４）、＃８－１（軽鎖：配列番号５３６；重鎖：配列番号５３８）、＃７（軽鎖：配列番号５５２；重鎖：配列番号５５４）、＃１０（軽鎖：配列番号５５６；重鎖：配列番号５５８）、＃１３（軽鎖：配列番号５６０；重鎖：配列番号５６２）および＃３３（軽鎖：配列番号５６８；重鎖：配列番号５７０）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  70. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号６１８；重鎖：配列番号６２０）、＃７－３４（軽鎖：配列番号６２２；重鎖：配列番号６２４）、＃８－１（軽鎖：配列番号６２６；重鎖：配列番号６２８）、＃７（軽鎖：配列番号６４２；重鎖：配列番号６４４）、＃１０（軽鎖：配列番号６４６；重鎖：配列番号６４８）、＃１３（軽鎖：配列番号６５０；重鎖：配列番号６５２）および＃３３（軽鎖：配列番号６５８；重鎖：配列番号６６０）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  71. 抗ＣＴＬＡ４抗体は、ＣＴＬＡ４とCD80および／またはCD86の結合阻害能を有する、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  72. 抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Clone 9H10（BioLegend）またはIpilimumabの重鎖ＣＤＲ１（
    配列番号７５６の３１～３５位）、重鎖ＣＤＲ２（配列番号７５６の５０～６６位）、重鎖ＣＤＲ３（配列番号７５６の９９～１０７位）、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号７５７の２４～３５位）、軽鎖ＣＤＲ２（配列番号７５７の５１～５７位）および軽鎖ＣＤＲ３（配列番号７５７の９０～９７位）を含む、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  73. 抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Clone 9H10またはIpilimumabの可変領域（重鎖（配列番号７５６）の１～１１８位および軽鎖（配列番号７５７）の１～１１０位）の全長を含む、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  74. 抗ＣＴＬＡ４抗体は、抗体Clone 9H10またはIpilimumabの全長（配列番号７５６および配列番号７５７）またはそのヒト化配列を含む、請求項６５または６６に記載の組合せ物。
  75. 前記抗ＦＳＴＬ１１抗体は、ヒト化抗体である、請求項６５～７４のいずれか１項に記載の組合せ物。
  76. 前記抗ＦＳＴＬ１１抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のH鎖FR1、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号６７１、６７３、６７５および６７７）ならびにL鎖FR1
    、FR2、FR3およびFR4（それぞれ配列番号６８７、６８９、６９１および６９３）を有す
    る、請求項６５～７５のいずれか１項に記載の組合せ物。
  77. 請求項６３～７６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
  78. 請求項６３～７６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
  79. 請求項６３～７６のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
  80. 請求項６３～７６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む大腸癌の治療剤。
  81. 請求項６３～７６のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
  82. 請求項６３～７６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
  83. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項８２に記載の阻害剤。
  84. 前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、請求項８２に記載の阻害剤。
  85. 請求項６３～７６のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
  86. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項８５に記載の阻害剤。
  87. 前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、請求項８５に記載の阻害剤。
  88. 抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
  89. ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤はＣＴＬＡ４抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
  90. 抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＣＴＬＡ４抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
  91. ＣＴＬＡ４抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＣＴＬＡ４制剤はＦＳＴＬ１抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
  92. 前記抗体は、腫瘍内または静脈内に投与されることを特徴とする、請求項７７に記載の医薬、請求項７８、８８～９１のいずれかに記載の抗がん剤、請求項７９もしくは８０に記載の治療剤、または請求項８１～８７のいずれかに記載の阻害剤。
  93. ＦＳＴＬ１抑制剤と化学療法剤との組み合わせ物。
  94. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤は、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される、請求項９３に記載の組み合わせ物。
  95. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤は抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である、請求項９３に記載の組合せ物。
  96. 抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と、化学療法剤との組み合わせ物。
  97. 前記化学療法剤はＤＮＡ合成阻害機能を有する、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の組合せ物。
  98. 前記化学療法剤は、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、　抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖蛋白阻害剤および白金錯体誘導体からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の組合せ物。
  99. 前記化学療法剤は、アルキル化剤を含む、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の組合せ物。
  100. 前記化学療法剤は、シクロフォスファミドまたはその誘導体を含む、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の組合せ物。
  101. 前記化学療法剤はシクロフォスファミドを含む、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の組合せ物。
  102. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、配列番号７５８（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位から１００位、１４８～１６２位、１９３～２２８位および２７２～２８９位からなる群より選択される領域にエピトープを有する、請求項９５または９６に記載の組合せ物。
  103. 前記抗体は抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３）、＃７（軽鎖：配列番号８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項９５または９６に記載の組合せ物。
  104. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号７８３；重鎖：配列番号７８５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号７８７；重鎖：配列番号７８９）、＃８－１（軽鎖：配列番号７９１；重鎖：配列番号７９３８０７；重鎖：配列番号８０９）、＃１３（軽鎖：配列番号８１５；重鎖：配列番号８１７）および＃３３（軽鎖：配列番号８２３；重鎖：配列番号８２５）からなる群より選択される抗体の可変領域の全長を含む、請求項９５または９６に記載の組合せ物。
  105. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、抗体＃６－５５（軽鎖：配列番号８７３；重鎖：配列番号８７５）、＃７－３４（軽鎖：配列番号８７７；重鎖：配列番号８７９）、＃８－１（軽鎖：配列番号８８１；重鎖：配列番号８８３）、＃７（軽鎖：配列番号８９７；重鎖：配列番号８９９）、＃１３（軽鎖：配列番号９０５；重鎖：配列番号９０７）および＃３３（軽鎖：配列番号９１３；重鎖：配列番号９１５）からなる群より選択される抗体の全長またはそのヒト化配列を含む、請求項９５または９６に記載の組合せ物。
  106. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体である、請求項９５～１０５のいずれか１項に記載の組合せ物。
  107. 前記抗ＦＳＴＬ１抗体は、ヒト化抗体であって、Ｈ（２）－Ｌ（１）のＨ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９２６、９２８、９３０および９３２）ならびにＬ鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４（それぞれ配列番号９４２、９４４、９４６および９４８）を有するを有する、請求項９５～１０６のいずれか１項に記載の組合せ物。
  108. 請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
  109. 請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
  110. 請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
  111. 請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の組合せ物を含む肺癌の治療剤。
  112. 請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
  113. 請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
  114. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項１１３に記載の阻害剤。
  115. 前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、請求項１１３に記載の阻害剤。
  116. 請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
  117. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項１１６に記載の阻害剤。
  118. 前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、請求項１１６に記載の阻害剤。
  119. ＦＳＴＬ１抑制剤を含む抗がん剤であって、該ＦＳＴＬ１抑制剤は化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
  120. 抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物を含む抗がん剤であって、該抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
  121. 化学療法剤を含む抗がん剤であって、該化学療法剤はＦＳＴＬ１抑制剤と組み合わせて投与されることを特徴とする抗がん剤。
  122. 化学療法剤を含む抗がん剤であって、該化学療法剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体またはそのフラグメントもしくは機能的等価物と組み合わせて投与されることを特徴とする、抗がん剤。
  123. 抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物であって、該抗体は、配列番号１（ヒトＦＳＴＬ１のアミノ酸配列）のアミノ酸４８位～１００位、１４８～１６２位、１９３～２１６位、２０５～２２８位、および２７２～２８９位からなる群より選択される領域に含まれる１アミノ酸以上をエピトープに含むことを特徴とする、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
  124. ＦＳＴＬ１抑制剤と別のがん治療との組み合わせ物。
  125. 前記別のがん治療は、がん免疫療法、分子標的療法および化学療法から選択される少なくとも１つである請求項１２４に記載の組み合わせ物。
  126. 前記がん免疫療法は、免疫抑制解除薬投与、がんワクチン投与および免疫細胞療法から選択される少なくとも１つである請求項１２５に記載の組み合わせ物。
  127. 前記免疫抑制解除薬は、ＰＤ－Ｌ１抑制剤、ＣＴＬＡ４抑制剤、ＰＤ－１抑制剤、４－１ＢＢ抑制剤、４－１ＢＢ促進剤、ＯＸ４０促進剤、ＧＩＴＲ抑制剤、ＣＤ２７抑制剤、ＣＤ４０促進剤、ＬＡＧ３抑制剤、Ｂ７－Ｈ３抑制剤、ＫＩＲｓ抑制剤、ＮＫＧ２Ａ抑制剤、ＣＳＦ１Ｒ抑制剤、ＩＤＯ抑制剤、ＴＧＦβ抑制剤、ＣＸＣＲ４抑制剤、Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ抑制剤、ＣＤ４７抑制剤、ＶＥＧＦ抑制剤およびＮｅｕｒｏｐｉｌｉｎ抑制剤から選択される少なくとも１つである請求項１２６に記載の組み合わせ物。
  128. 前記免疫細胞療法は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞療法、樹状細胞療法および活性化リンパ球療法から選択される少なくとも１つである請求項１２６に記載の組み合わせ物。
  129. 前記分子標的療法に用いる分子標的薬は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＤ３３抗体（calicheamicin連結）、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＤ１９／ＣＤ３抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗葉酸受容体抗体、抗グリピカン抗体、抗ＣＤ２６抗体、抗ＩＧＦ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＥＰＨＡ抗体、抗ＩＧＦＲ１抗体、抗ＧＤ２（ガングリオシド）抗体、抗ＥＤｂ（フィブロネクチン）抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ－２抗体、抗ＣＤ４抗体、抗Ｍｅｔ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗Ｇ２５０抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎ（ＣＤ５１）抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎαｖ抗体、抗ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ／ｓｃａｔｔｅｒ ｆａｃｔｏｒ抗体、抗ＰＤＧＦＲα抗体、抗ＨＧＦ（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｏ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体、抗ＰＬＧＦ（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）抗体、抗ｃ－Ｍｅｔ抗体、抗ｍｙｏｓｔａｔｉｎ抗体、抗ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）抗体、抗ＥＧＦＬ７（Epidermal Growth Factor Domain-Like 7）抗体、抗ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３バイスペシフィック抗体、抗ＬＯＸＬ２（ｌｙｓｙｌ ｏｘｉｄａｓｅ－ｌｉｋｅ－２）抗体、抗ＴＲＡＩＬ Ｒ１抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＩＬ－６抗体、抗ＧＤ３抗体、抗ＦＡＰ（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）抗体、抗ＣＤ２２１（ｉｎｓｕｌｉｎ・ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）抗体、抗ＣＤ１９／Ｔ ｃｅｌｌバイスペシフィック抗体、抗ＤＫＫ－１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ－１）抗体、抗ＤＮＡ ｈｉｓｔｏｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘ抗体、抗ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ ｓｅｒｉｎｅ抗体、抗Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２抗体、抗ＲＩ（１３１Ｉ）抗体、抗ＩＬ－２抗体、抗ＴＮＦ－α抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＩＬ－１α抗体、抗ＰＳＣＡ抗体、抗メソセリン抗体、抗ＴＥＭ－１抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗ＤＲ５抗体、抗ＴＦ－ＶＩＩａ抗体、抗ＣＤ２００（ＯＸ－２）抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３バイスペシフィック抗体、抗ＩＬ－１３抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ｈＰＡＭ４抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体および抗ＣＤ４０抗体から選択される少なくとも１つである請求項１２５に記載の組み合わせ物。
  130. 前記化学療法に用いる化学療法剤は、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖蛋白阻害剤および白金錯体誘導体からなる群より選択される少なくとも１つである請求項１２５に記載の組み合わせ物。
  131. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤は、抗体、その抗原結合フラグメント、それらの誘導体、機能的等価物、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、およびリボザイム、ならびにそれらの複合体からなる群より選択される請求項１２４に記載の組み合わせ物。
  132. 前記ＦＳＴＬ１抑制剤は、抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物である請求項１２４に記載の組合せ物。
  133. 抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物は、請求項１～１８に記載のいずれかである請求項１３２に記載の組み合わせ物。
  134. 請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む医薬。
  135. 請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む抗がん剤。
  136. 請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含むメラノーマ、大腸癌、乳癌、リンパ腫、肺癌、前立腺癌、腎癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、膵癌、膀胱癌、子宮頚部癌、脳中枢神経腫瘍、肉腫、白血病および多発性骨髄腫からなる群より選択される少なくとも１つの疾患の治療剤。
  137. 請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む肺癌の治療剤。
  138. 請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含むがん細胞の転移の阻害剤。
  139. 請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の免疫破綻の増強の阻害剤。
  140. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項１３９に記載の阻害剤。
  141. 前記免疫破綻の増強は、免疫抑制活性または免疫不全活性を有するＭＳＣ細胞の増殖、免疫活性または免疫不全抑制活性を有するＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の増強および免疫抑制活性または免疫不全活性を有しないＭＳＣ細胞の免疫抑制活性または免疫不全活性の獲得の少なくとも１つを含む、請求項１３９に記載の阻害剤。
  142. 請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の組合せ物を含む、免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強の阻害剤。
  143. 前記免疫破綻は免疫抑制および免疫不全を含む、請求項１４２に記載の阻害剤。
  144. 前記免疫関連細胞の免疫破綻活性の獲得および／または増強は、制御性Ｔ細胞の増殖、制御性Ｔ細胞の免疫抑制活性の増強、制御性Ｔ細胞への分化、制御性樹状細胞の増殖、制御性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、制御性樹状細胞への分化、寛容性樹状細胞の増殖、寛容性樹状細胞の免疫抑制活性の増強、寛容性樹状細胞への分化、骨髄由来免疫抑制性細胞の増殖、骨髄由来免疫抑制性細胞の免疫抑制活性の増強、骨髄由来免疫抑制性細胞への分化、疲弊Ｔ細胞の増殖、疲弊Ｔ細胞の免疫不全活性の増強、および疲弊Ｔ細胞の誘導からなる群より選択される少なくとも１つを含む、請求項１４２に記載の阻害剤。
  145. 重鎖全長が配列番号１００８のアミノ酸配列を有し、軽鎖全長が配列番号１０１０のアミノ酸配列を有する抗ＦＳＴＬ１抗体、またはそのフラグメントもしくは機能的等価物。
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