WO2016104777A1 - がんの処置のための方法 - Google Patents

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WO2016104777A1
WO2016104777A1 PCT/JP2015/086383 JP2015086383W WO2016104777A1 WO 2016104777 A1 WO2016104777 A1 WO 2016104777A1 JP 2015086383 W JP2015086383 W JP 2015086383W WO 2016104777 A1 WO2016104777 A1 WO 2016104777A1
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fbxw7
cancer
cells
mice
ccl2
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敬一 中山
功士 三森
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Kyushu University NUC
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Kyushu University NUC
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology

Definitions

  • the present invention relates to cancer treatment.
  • Metastasis is a major cause of death in cancer patients, and elucidation of the genes and mechanisms underlying this process is expected to provide the basis for the development of new cancer therapies. Because metastases are complex, including the detachment of cancer cells from the primary tumor, followed by infiltration of the cells into the surrounding tissue, entry into the circulatory system, and invasion and proliferation in distal organs, An understanding of these mechanisms remains unsatisfactory. In addition to genomic variation between malignant tumor cells, recent research has focused on the link between cancer and the host environment.
  • T cells B cells, granulocytes and monocytic bone marrow derived suppressor cells (G- and Mo-MDSC, respectively), macrophages, bone marrow derived stromal cells (BMSC), hematopoietic progenitor cells (HPC) and endothelial progenitor cells (EPC) Bone marrow derived cells (BMDC), including), play a central role in promoting metastasis, including promoting tumor cell growth and invasion and angiogenesis.
  • G- and Mo-MDSC monocytic bone marrow derived suppressor cells
  • macrophages macrophages
  • BMSC bone marrow derived stromal cells
  • HPC hematopoietic progenitor cells
  • EPC endothelial progenitor cells
  • BMDC bone marrow derived cells
  • Non-Patent Documents 1 and 2 Tumor cells and surrounding stromal cells secrete various growth factors, cytokines, and chemokines that promote cancer development.
  • Chemokines promote tumor development and progression in addition to recruitment of immune cells to the tumor site.
  • Chemokine CC motif ligand 2 (CCL2) [also known as monocyte chemotactic protein (MCP) -1], through its interaction with its receptor CCR2, monocytes, macrophages and other inflammatory cells The replenishment to the inflammatory site is controlled (Non-patent Document 3).
  • CCL2 also contributes to monocyte-macrophage recruitment to the site of lung metastases and then promotes tumor growth in breast cancer mice (4).
  • Systemic administration of neutralizing antibodies against CCL2 in mouse cancer models has resulted in marked attenuation of tumor growth, decreased tumor vessel density, and inhibition of metastasis (Non-Patent Documents 4-8).
  • Fbxw7 (also known as Fbw7, Sel-10, hCdc4, or hAgo) is the F box protein component of the SCF (Skp1-Cul1-F box protein) type ubiquitin ligase, in which ligase It functions as a receptor involved.
  • SCF Skp1-Cul1-F box protein
  • Most of the substrates of Fbxw7 are growth promoting factors, which include c-Myc (Non-Patent Documents 9 and 10), Notch (Non-Patent Documents 11 to 13), and Cyclin E (Non-patent Documents 14 to Non-Patent Documents).
  • Non-Patent Document 16 Analysis of FBXW7 in many primary human tumors revealed that ⁇ 6% of tumors have mutations in this gene (Non-Patent Document 22). Mutations were most frequently detected in cholangiocarcinoma (35%) and T cell acute lymphocytic leukemia (T-ALL, 31%). Of note, about half (43%) of the identified mutations are missense mutations that result in amino acid substitutions at key arginine residues (Arg 465 and Arg 479 ) within the WD40 domain involved in substrate recognition. It was found to be a mutation.
  • Fbxw7-null mice (Fbxw7 ⁇ / ⁇ / Apc min / + ) having a mutation in the colorectal adenomatous polyposis (APC) gene show an increase in both the number and size of intestinal tumors, compared to Apc min / + mice Resulted in decreased survival (Non-patent Document 26).
  • Chemokine (C-C motif) ligand 2 engages CCR2 + stromal cells of monocytic origin to promote breast cancer metastasis to lung and bone. J Biol Chem. 2009; 284 (42): 2908796. Welcker M, et al. The Fbw7 tumor suppressor regulates glycogen synthase kinase 3 phosphorylation-dependent c-Myc protein degradation. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004; 101 (24): 9085-90. Yada M, et al. Phosphorylation-dependent degradation of c-Myc is mediated by the F-box protein Fbw7. EMBO J. 2004; 23 (10): 2116-25.
  • Fbxw7 is a potent tumor suppressor in mice and in humans.
  • the combined role of Fbxw7 in mice with conditional deletion of Fbxw7 in various tissues confirms the central role of Fbxw7 in suppressing tumor development in vivo.
  • Fbxw7 expression in the host environment is an important determinant of cancer metastasis.
  • metastasis was found to be enhanced in mice lacking Fbxw7 in the bone marrow compared to control mice.
  • deletion of Fbxw7 is the accumulation of Notch in bone marrow mesenchymal stromal cells (BMSC) and consequently the activity of CCL2 gene transcription Has occurred.
  • BMSC bone marrow mesenchymal stromal cells
  • CCL2 gene transcription Has occurred Increased production of CCL2 by these cells appeared to promote metastatic niche formation through Mo-MDSC and macrophage recruitment.
  • Inhibition of CCL2-CCR2 signaling reduced the frequency of metastasis in Fbxw7-deficient mice.
  • Our results therefore suggest that the Fbxw7-Notch-CCL2 pathway plays a central role in cancer metastasis control.
  • the present invention provides the following.
  • [1] A method for predicting the prognosis of cancer or for early detection of cancer, comprising a step of detecting the expression level of FBXW7 in a subject.
  • [2] A method for selecting a method for treating cancer in a cancer patient, comprising a step of detecting the expression level of FBXW7 in the cancer patient.
  • [3] The method according to 1 or 2, wherein the cancer is breast cancer.
  • the CCR2 antagonist has the following general formula (I) [(O 1/2 ) 3 Ge-A-COOH] n (I) (In the formula, n represents an integer of 100 to 1000, and A represents a lower alkylene group.) 6.
  • the pharmaceutical composition according to 8, wherein the cancer is breast cancer.
  • a CCR2 antagonist is represented by the following general formula (I): [(O 1/2 ) 3 Ge-A-COOH] n (I) (In the formula, n represents an integer of 100 to 1000, and A represents a lower alkylene group.) 11.
  • a method for selecting a patient to be treated with a pharmaceutical composition comprising a CCR2 antagonist comprising a step of detecting the FBXW7 gene or an expression product thereof.
  • the CCR2 antagonist has the following general formula (I) [(O 1/2 ) 3 Ge-A-COOH] n (I) (In the formula, n represents an integer of 100 to 1000, and A represents a lower alkylene group.) 16.
  • the present invention also provides the following.
  • a method for predicting a prognosis after administering an anticancer drug to a patient or for early detection of cancer comprising a step of detecting the expression level of FBXW7 in a cancer patient.
  • a method for determining whether or not to administer an anticancer agent to a patient comprising the step of detecting the expression level of FBXW7 in a cancer patient.
  • the method according to 1 or 2 wherein the cancer patient is a patient with breast cancer.
  • a CCR2 antagonist is represented by the following general formula (I): [(O 1/2 ) 3 Ge-A-COOH] n (I) (In the formula, n represents an integer of 100 to 1000, and A represents a lower alkylene group.) 6.
  • a custom-made medicine for the treatment of cancer wherein the presence or absence and / or the amount of at least one anticancer agent is adjusted according to the expression level of FBXW7 detected in cancer patients Product.
  • the anticancer agent is a pharmaceutical composition containing a CCR2 antagonist.
  • a CCR2 antagonist is represented by the following general formula (I): [(O 1/2 ) 3 Ge-A-COOH] n (I) (In the formula, n represents an integer of 100 to 1000, and A represents a lower alkylene group.) 11.
  • the product according to 10 which is a pharmaceutical composition comprising the organic acid polymer represented by the formula: [12] The product according to 11, wherein the organic acid polymer represented by the general formula (I) is propagermanium. [13] Use of the FBXW7 gene or an expression product thereof as a marker for predicting a prognosis after administration of an anticancer drug to a patient or for early detection of cancer. [14] The use according to 13, wherein the cancer patient is a patient with breast cancer. [15] The use according to any one of 12 to 14, wherein the anticancer agent is a pharmaceutical composition comprising a CCR2 antagonist.
  • a CCR2 antagonist is represented by the following general formula (I): [(O 1/2 ) 3 Ge-A-COOH] n (I) (In the formula, n represents an integer of 100 to 1000, and A represents a lower alkylene group.) 15.
  • Fbxw7 deletion in bone marrow (BM) promotes cancer metastasis in an intravenous tumor cell transplant model.
  • Gross lung findings (A) and occupancy with tumor colonies (B) were examined. Horizontal bars in B show mean values.
  • E Total tumor area
  • F number of tumor nodules
  • G tumor mean area
  • HJ WT mice were reconstituted with the mouse BM cells shown and with tdTomato labeled E0771 cells.
  • tumor cells and cell nuclei stained with Hoechst 33238
  • lungs were subjected to fluorescence microscopy (H)
  • the box plot in J shows the minimum, lower quartile, median, upper quadrant.
  • TCR (A), B220 (B), Ly6G (C), Ly6C (D), F4 / 80 (E), and FSP (F)
  • Representative immunohistofluorescence staining (left panel) is shown, intrinsic fluorescence of EGFP, tdTomato, and Hoechst 33258 was also imaged.
  • Be. Scale bar 100 [mu] m. In both peritumoral area and the non-peripheral region, to quantify the percentage of EGFP + BMDC positive for each marker (right panel).
  • * P ⁇ 0.05, *** P ⁇ 0.001 one-way ANOVA and Bonferroni test).
  • C Luciferase assay of CCL2 gene in BMSCs infected with NICD1, c-Myc, or KLF5 retroviruses.
  • D CAG-Cre-ER T2 / Fbxw7 ( / (Relative abundance of CCL2 mRNA in BMSC.
  • E WT and mutant schematics of mouse CCL2 gene promoter fused to firefly luciferase gene) The consensus binding sequence of Notch-RBP-J ⁇ is shown in bold.In G, the proximal and distal amplicons are shown.
  • Bone marrow cells, HPC, and EPC in the microenvironment of metastatic tumors in mouse lung reconstituted with Fbxw7-deficient bone marrow cells.
  • Representative immunohistofluorescence staining (left panel) for Mac1 (A), c-Kit (B), and VE-cadherin (C) is shown for lung sections from WT mice.
  • Serum was mixed with a biotinylated detection antibody cocktail and then incubated with panel A (ARY006) (A) and panel B (ARY015) (B). The array was then incubated with streptavidin labeled horseradish peroxidase and subjected to chemiluminescence based detection. Image J was used to quantify the optical density of cytokines in two different exposures of a representative array. Solid circles indicate points analyzed with respect to FIG. 4A. The average relative intensity in Panel A and Panel B is shown in FIG. 4A for CCL2, CCL3, CXCL1, CXCL10, CXCL12, GM-CSF, IL-1 ⁇ , IL-10, and TIMP-1.
  • the position of the capture antibody for each analyte is shown in the table on the right. Fbxw7 deficiency in bone marrow cells, T cells, or B cells does not affect the metastasis of intravenously injected B16F10 melanoma cells.
  • treatment includes diagnosis, prevention, treatment, suppression of progression, and suppression of metastasis, unless otherwise specified.
  • treatment includes diagnosis, prevention, treatment, suppression of progression, and suppression of metastasis, unless otherwise specified.
  • the present invention relates to a method for treating cancer, comprising a step of detecting the expression level of FBXW7 in a cancer patient.
  • Cancer treatment methods include diagnostic methods (including companion diagnostic methods), early detection methods, prognosis prediction methods, cancer metastasis suppression methods, treatment methods (including individual treatment methods), and the like.
  • the present invention relates to a prognosis of cancer comprising the step of detecting the expression level of FBXW7 (F-box / WD repeat-containing protein 7, also known as Fbw7, Sel-10, hCdc4, or hAgo) in a subject.
  • a method for selecting a method for treating cancer in a cancer patient comprising: a method for predicting cancer, or for early detection of cancer, and detecting the expression level of FBXW7 in the cancer patient provide.
  • Fbxw7 is a molecule with many mutations found in cancer.
  • the present inventors examined the blood cells of breast cancer patients and found that people with low expression levels of Fbxw7 tend to relapse cancer. It was also found that when a gene is artificially disrupted in a mouse, metastasis of cancer cells is likely to occur.
  • CCL2 chemokine CC motif ligand 2. also known as monocyte chemotactic protein (MCP) -1
  • MCP monocyte chemotactic protein
  • the expression level of Fbxw7 refers to the amount of mRNA, which is a transcription product from the FBXW7 gene, or a polypeptide, which is its translation product, unless otherwise specified. The amount may be expressed as a concentration. Expression can occur in cancer cells, in a niche, or in peripheral blood. According to the study by the present inventors, in the present invention, the expression level of Fbxw7 in a niche or peripheral blood can be used as an index. In a particularly preferred embodiment, the expression level of Fbxw7 in peripheral blood is used as an index. And
  • Whether the expression level of Fbxw7 is low or high may be determined by setting a standard in advance and comparing it with the standard.
  • the standard can be, for example, a median value obtained from statistical data of FBXW7 expression levels of a plurality of cancer patients.
  • the expression level of a protein that is constitutively expressed for example, Glyceraldehyde (3-phosphate dehydrogenase, GAPDH) may be determined as a relative amount.
  • the reference may be a value based on a quantitative ratio with a constitutively expressed protein.
  • the expression level of Fbxw7 when it is referred to as low FBXW7 expression, unless otherwise specified, when the expression level of Fbxw7 is 1 or less with respect to the expression level of GAPDH, it is preferably 0.7 or less More preferably, it is when it is 0.5 or less.
  • selection of cancer treatment method for cancer patients In the method for selecting a cancer treatment method in a specific cancer patient of the present invention, for example, administration of a pharmaceutical composition containing a CCR2 antagonist is selected as the treatment method.
  • CCR2 antagonists include CCR2 antagonists, CCR2 antagonists, CCR2 antagonists, CCR2 blockers, CCR2 blockers, MCP-1 receptor antagonists, MCP-1 receptor antagonists (JP 2000-136139 A), MCP- 1 receptor antagonist, MCP-1 receptor blocker, MCP-1 receptor blocker, etc.
  • a CCR antagonist binds to CCR2 or inhibits binding of CCR to a ligand of CCR2, and thereby inhibits the biological function of CCR2.
  • Antagonists include antibodies, synthetic or native sequence peptides, and small molecule antagonists.
  • antagonists are those that bind to the receptor (eg, antibodies, natural ligand variants, small molecular weight organic molecules, other competitive inhibitors of ligand binding), and receptor function without binding to the receptor. It refers to a substance that includes an inhibitory substance (eg, an anti-idiotype antibody).
  • CCR2 antagonist examples include the following general formula (I) [(O 1/2 ) 3 Ge-A-COOH] n (I) (Wherein n represents an integer of 100 to 1000, and A represents a lower alkylene group) It is an organic acid polymer shown by.
  • the lower alkylene group of A is preferably a lower alkylene group having 1 to 3 carbon atoms.
  • Particularly preferred is a 3-oxygermylpropionic acid polymer in which A is an ethylene group.
  • n representing the degree of polymerization is preferably an integer of 200 to 900.
  • the 3-oxygermylpropionic acid polymer a 3-oxygermylpropionic acid polymer having a polymerization degree n of 200 to 900 is well known. Its three-dimensional structure is
  • R represents —CH 2 CH 2 COOH
  • m represents a weight average degree of polymerization converted from the weight average molecular weight of the 3-oxygermylpropionic acid propyl ester polymer, 137 ⁇ 84 (average ⁇ standard
  • the minimum structural unit is (O 1/2 ) 3 GeCH 2 CH 2 COOH, and the empirical formula is C 6 H 10 Ge 2 O 7 , Presumed to be a structure.
  • the 3-oxygermylpropionic acid polymer can be produced by the method described in JP-A-2003-81843. Further, in JP-A-2003-81843, the 3-oxygermylpropionic acid polymer is described as having physical property values shown in Tables 1 and 2 below. Table 1 shows the results of molecular weight measurement by the light scattering method, and Table 2 shows the lattice constants determined by powder X-ray analysis.
  • a 3-oxygermylpropionic acid polymer can be specified as a compound having the following physical property values from FIGS. 1 to 3 of JP-A No. 54-115324. That is, there is a large diffraction peak around 6.5 °, and relatively large diffraction peaks around 11.6 °, 13.8 °, 18.4 °, 21.2 °, and 22.4 °. A characteristic powder X-ray diffraction spectrum is shown.
  • IR infrared absorption
  • a relatively large absorption band 560cm -1, 705cm -1, 760cm -1 , 780cm -1 , 1250 cm ⁇ 1 , 1350 cm ⁇ 1 , and 1400 cm ⁇ 1 are present in the vicinity (however, the absorption band near 1400 cm ⁇ 1 is a doublet).
  • a preferred embodiment of the 3-oxygermylpropionic acid polymer has the following general formula (II) (C 3 H 5 GeO 3.5 ) n (II) (In the formula, n represents a weight average degree of polymerization of 548 ⁇ 337.) And 3-oxygermylpropionic acid polymer having a weight average molecular weight of 9.29 ⁇ 10 4 ⁇ 5.72 ⁇ 10 4 (average value ⁇ standard error).
  • the 3-oxygermylpropionic acid polymer may be referred to as propagermanium, bis (2-carboxyethylgermanium) sesquioxide, or 2-carboxyethylgermane sesquioxide.
  • the pharmaceutical composition containing a CCR2 antagonist may optionally contain formulation adjuvants such as pharmaceutically acceptable excipients, carriers and diluents.
  • the pharmaceutical composition is in accordance with conventional methods, tablets, capsules, powders, syrups, granules, pills, suspensions, emulsions, solutions, powder formulations, suppositories, eye drops, nasal drops, ear drops. It can be in a dosage form such as a patch, ointment or injection, and can be administered orally or parenterally. Preferably it is administered orally.
  • the administration method, the dosage, and the number of administrations can be appropriately selected according to the age, weight and symptoms of the patient. For example, for an adult, 1 to 1000 mg / day, preferably 10 to 500 mg / day may be divided into 1 to several times by oral administration. When administration is combined with surgery, it can be performed before that, for example, 1 day to several weeks before surgery.
  • a pharmaceutical composition comprising a CCR2 antagonist can be performed in combination with other therapies for the treatment of cancer, such as surgery, chemotherapy, and / or radiation therapy.
  • anticancer agents that can be used in combination are not particularly limited as long as the desired effect is obtained.
  • alkylating agents, platinum compounds, antimetabolites, topoisomerase inhibitors, microtubule inhibitors, Any of antibiotics, hormone agents, antibodies and the like may be used. More specific examples include gemcitabine, tegafur uracil, and fluorouracil.
  • a pharmaceutical composition comprising a CCR2 antagonist can be for the treatment of cancer in a cancer patient with low FBXW7 expression.
  • it is preferably used for the treatment of cancer in cancer patients with low FBXW7 expression, and more preferably used for the treatment of triple negative breast cancer in cancer patients with low FBXW7 expression.
  • the present invention provides the use of the FBXW7 gene or its expression product as a marker for predicting the prognosis of cancer or for early detection of cancer.
  • the present invention is intended for those who are in a disease or condition associated with FBXW7 expression levels or associated with suppression of cancer niche formation, a cancer patient, or a person who may have cancer, Can be used to predict whether or not to benefit from treatment with the above-described pharmaceutical composition) and to predict the response or prognosis of the subject receiving / receiving the drug treatment.
  • the present invention can be used for selection of a patient to be treated with a specific drug (for example, the above-described pharmaceutical composition) including a step of detecting the FBXW7 gene or an expression product thereof. That is, according to the present invention, a patient can be selected for treatment of a specific drug (for example, the above-described pharmaceutical composition). As such, the present invention provides for the use of certain drugs in novel indications. For example, the present invention proposes the use of the above-described pharmaceutical composition for the treatment of cancer in cancer patients with low expression levels of FBXW7.
  • a specific drug for example, the above-described pharmaceutical composition
  • Cancers to which the present invention can be applied include various solid cancers.
  • solid cancers are pancreatic cancer, glioblastoma, esophageal cancer, stomach cancer, colon cancer, lung cancer, kidney cancer, thyroid cancer, parotid gland cancer, head and neck cancer, bone / soft tissue sarcoma Ureteral cancer, bladder cancer, uterine cancer, liver cancer, breast cancer, prostate cancer, ovarian cancer, fallopian tube cancer and the like.
  • the diseases listed here are exemplifications, and in addition to these, the effects of the present invention can be expected for various cancers related to the expression level of FBXW7 or related to suppression of cancer niche formation.
  • cancers for which the effect of the present application can be particularly expected are breast cancer, melanoma, and lung cancer, preferably breast cancer.
  • Breast cancer mainly includes three types of hormone receptor positive breast cancer, HER2 positive breast cancer, and triple negative breast cancer. Of these, hormone therapy is used for hormone receptor-positive breast cancer and Herceptin is used for HER2-positive breast cancer, which is very effective. However, a definitive treatment for triple-negative breast cancer has been established. There wasn't. The present inventors have found that patients with higher malignancy can be selected among triple negative breast cancers by measuring the expression level of Fbxw7 in blood cells. In addition, for the patient thus selected, the present invention proposes administration of a pharmaceutical composition containing, for example, a CCR2 antagonist.
  • the present invention also provides a companion diagnostic method and a diagnostic product, and a companion for a person having a disease or condition associated with the expression level of FBXW7, a cancer patient, or a person who may have cancer
  • a companion diagnostic method and a diagnostic product for a person having a disease or condition associated with the expression level of FBXW7, a cancer patient, or a person who may have cancer
  • products for use in personalized therapy custom-made therapy
  • Products for diagnosis are, for example, probes, probe and primer sets, kits, and the like.
  • Products for use in personalized therapy (custom-made therapy) include a specific drug (for example, the above-described pharmaceutical composition) as a result of companion diagnosis, and the drug is effective. If not, the drug is not included.
  • a product can be a combination of multiple drugs.
  • Fbxw7 F / F mice are also RbpJ ⁇ F / F (44) or c-Myc F / F (45) mice, or Lck-Cre (46), LysM-Cre (47), CD19-Cre (48), CAG -Cre-ER T2 (49) or CAG-EGFP (50) transgenic mice were also crossed.
  • C57BL / 6 or other recipient mice (8 weeks old) are irradiated with a lethal dose (11 Gy) of gamma radiation and through the tail vein, 8 weeks old CAG-EGFP, CAG-EGFP / Fbxw7 F / F , or BM cells (2.0 ⁇ 10 6 in 100 ⁇ l phosphate buffered saline) isolated from CAg-EGFP / Mx1-Cre / Fbxw7 F / F mice were injected.
  • BM cells 2.0 ⁇ 10 6 in 100 ⁇ l phosphate buffered saline
  • recipients Two months after transplantation, recipients were injected with poly (I: C) as described above to delete the loxP-introduced Fbxw7 allele, and 3 days after the last poly (I: C) injection, they were B16F10, LLC, or E0771 cells were injected as described below.
  • the peripheral blood cells of the recipients were examined for chimerism by flow cytometry.
  • Tumor volume (mm 3 ) is measured using calipers and calculated as (W 2 ⁇ L) / 2, where W is the width and L is the length.
  • B16F10 (provided by Tohoku University Cell Resource Center), LLC (provided by Tohoku University Cell Resource Center), B16F1 (donated by Kyushu University, S. Okano), and E0771 cells (purchased from CH3 BioSystems) 10% fetal bovine serum (Invitrogen) in RPMI 1640 medium (Sigma) supplemented with 1 mM sodium pyruvate, penicillin (100 U / ml), streptomycin (100 ⁇ g / ml), 2 mM L-glutamine, and non-essential amino acids (10 ml / l, Gibco). Maintained.
  • BMSCs were isolated from BM collected from the tibia and femur of 8-10 week old mice and these were isolated from 10% fetal calf serum, 10% horse serum, 2 mM L-glutamine, penicillin (100 U / ml), And cultured in RPMI 1640 medium supplemented with streptomycin (100 ⁇ g / ml). After 24 hours, non-adherent cells were removed and adherent cells were maintained with medium replenishment every 3 days. In order to delete the loxP-introduced Fbxw7 allele, BMSCs were treated with 10 ⁇ M tamoxifen (Sigma) for 2 days. They were also treated with DAPT (Calbiochem) for 2 days to inhibit Notch signaling.
  • MEFs were prepared and maintained from embryos at embryonic stage 13.5 (51) and these were treated with 2 ⁇ M tamoxifen (Sigma) to delete the loxP-introduced Fbxw7 allele. Treated for 2 days.
  • erythrocytes were lysed with hemolysis buffer (0.14M NH 4 Cl and 0.01M Tris-HCl, pH 7.5) and an antibody against F4 / 80 (BM8, eBioscience), The remaining cells were stained with an antibody against CD115 (AFS98, eBioscience), an antibody against Mac1 (M1 / 70, eBioscience), an antibody against Ly6G (1A8, BD Biosciences), and an antibody against Ly6C (AL-21, BD Biosciences). Stained cells were analyzed on a FACSCalibur flow cytometer (Becton Dickinson).
  • the tissue was fixed with 4% paraformaldehyde in 0.1M phosphate buffer, embedded in 30% sucrose overnight, and cryostated as described above. Sectioned at 15 ⁇ m thickness and stained (52).
  • Antibodies against TCR ⁇ H57-597
  • antibodies against B220 RA3-6B2
  • antibodies against Mac1 M1 / 70
  • antibodies against c-Kit (2B8) were obtained from eBioscience; against Ly6C (AL-21) For Ly6G (1A8) and for VE-cadherin (11D4.1) from BD Biosciences; for F4 / 80 (A3-1) from Sertec; and for FSP (D9F9D) Obtained from Cell Signaling Technology.
  • Immune complexes were detected with secondary antibodies labeled with 1: 2000 dilutions of Alexa 633 or Alexa 405 (Molecular Probes), respectively. Sections were mounted in Fluoromount (Diagnostic BioSystems) and examined with a laser scanning confocal microscope (LSM700, Carl Zeiss).
  • Lysis buffer [50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 10 mM NaF, 10 mM Na 4 P 2 O 7 , 0.4 mM Na 3 VO 4 , 0.4 mM EDTA, Total protein extract was prepared from BMSC using leupeptin (20 ⁇ g / ml), aprotinin (10 ⁇ g / ml), 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride]. The extract (20 ⁇ g protein) was subjected to immunoblot analysis as previously described (53).
  • Antibodies against Notch3 M-20 and antibodies against KLF5 (BTEB2, H-300) were obtained from Santa Cruz Biotechnology; one against cleaved Notch1 (D1E11), one against Notch2 (D76A6), one against c-Jun (60A8) , For p100-p52 (catalog number 4882), and for mTOR (7C10) are from Cell Signaling Technology; for c-Myc are from Abcam; and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ( For GAPDH, loading control) was from BD Biosciences.
  • Retrovirus expression system Complementary DNA encoding hemagglutinin epitope-tagged mouse NICD1, mouse c-Myc, mouse KLF5, or FLAG epitope-tagged Fbxw7 ⁇ (or its ⁇ F mutant) was donated by pMX-puro (University of Tokyo, T. Kitamura) ) And the resulting vector was used to transfect Plat E cells (54), thereby producing recombinant retroviruses.
  • BMSCs were infected with recombinant retrovirus and subjected to selection in medium containing puromycin (10 ⁇ g / ml). Cells stably expressing each recombinant protein were pooled for experiments.
  • RNAi 1.10 RNAi.
  • shRNA vector construction and RNAi were performed as previously described (55).
  • the sequence targeting mouse CCL2 was 5'-GGTTATTCCCTTTCATGAATAC-3 '(SEQ ID NO: 1).
  • An EGFP RNAi vector was used as a control.
  • RT and real-time PCR analysis Total RNA (1 ⁇ g) isolated from mouse cells using Isogen (Nippon Gene) was subjected to reverse transcription (RT) using QuantTect reverse transcription kit (Qiagen), and the resulting cDNA was transferred to the StepOnePlus real-time PCR system (Applied). Biosystems) was subjected to real-time PCR analysis using SYBR green PCR master mix and specific primers.
  • sequences of the PCR primers are 5′-CAGCAGCAGGTGTCCCCAAAG-3 ′ (SEQ ID NO: 2) and 5′-TGTCTGGACCCATTCCTTCTG-3 ′ (SEQ ID NO: 3), and Rps18 for CCL2.
  • 5′-GAGGACCTGGAGAGGCTGAAG-3 ′ SEQ ID NO: 4
  • 5′-CTGCGGCAGTGGTCTTG-3 ′ SEQ ID NO: 5
  • the amount of CCL2 mRNA was normalized by the amount of Rps18 mRNA.
  • RNA 2.7 ⁇ g isolated from cells using Isogen-LS (Nippon Gene) was subjected to RT using Moloney leukemia virus reverse transcriptase (BRL) and the resulting cDNA was , Subjected to real-time PCR using SYBR-green I dye and specific primers in the LightCycler system (Roche Applied Science).
  • sequences of the PCR primers are 5′-CCTCCAGGAATGGCTAAAA-3 ′ (SEQ ID NO: 6) and 5′-AAGAGTTCATCATAAGCAAGCAA-3 ′ (SEQ ID NO: 7) for Fbxw7, and GAPDH
  • 5′-AGCCACATCGCTCAGACAC-3 ′ SEQ ID NO: 8
  • 5′-GCCCAATACGACCAAATCC-3 ′ SEQ ID NO: 9
  • the amount of Fbxw7 mRNA was normalized by the amount of GAPDH mRNA.
  • Luciferase reporter assay 1.12 Luciferase reporter assay.
  • the promoter region of the mouse CCL2 gene and deletion mutants thereof were subcloned into pGL2-Basic (Promega) encoding firefly luciferase.
  • FuGENE HD reagent Promega
  • BMSCs were transfected 24 hours before transfection with the promoter construct for Renilla luciferase (0.25 ⁇ g) and the internal control vector pRL-TK (0.25 ⁇ g, Promega). Planted at a density of 2 ⁇ 10 4 per well in a 24-well plate.
  • luciferase activity was measured using a dual luciferase reporter assay system (Promega) and a Lumat LB9507 luminometer (EG & G Berthold). Firefly luciferase activity was normalized by that of Renilla luciferase.
  • Nucleosomes were incubated with 2 ⁇ g of antibody against Notch1 (C-20, Santa Cruz Biotechnology) conjugated to 20 ⁇ l of Dynabeads-Protein G (Veritas, Japan) at 4 ° C. for 6 hours. The immunoprecipitated material was washed, the chromatin was eluted and the cross-linking was reversed. DNA fragments were purified by phenol-chloroform extraction followed by precipitation with isopropanol, and these were then used as templates for real-time PCR analysis using the SYBR select PCR system (Applied Biosystems).
  • sequences of the PCR primers are 5′-GCTCACATCCAGCTAAATACTCT-3 ′ (SEQ ID NO: 10) and 5′-GAGTATTGTTCGTTTCCCTCTCA-3 ′ (SEQ ID NO: 11) for CCL2 (distal) And for CCL2 (proximal), 5'-TTACTGGGGGTCCTTTCCCA-3 '(SEQ ID NO: 12) and 5'-GGAGTGGCTCTGCTTTCACT-3' (SEQ ID NO: 13).
  • the degree of chromatin concentration was normalized by the input.
  • T cell receptor ⁇ for T cells (FIG. 3A), B220 for B cells (FIG. 3B), Ly6G for G-MDSC (FIG. 3C), Ly6C for Mo-MDSC (FIG. 3D), for monocyte-macrophages F4 / 80 (FIG. 3E), fibroblast specific protein (FSP) for stromal cells (FIG. 3F), Mac1 for bone marrow cells (FIG. 11A), c-Kit for HPC (FIG.
  • CCL2 and CCL12 induce monocyte-macrophage migration by binding to the common receptor CCR2.
  • CCL12 is secreted mainly from macrophages, but disappearance of Fbxw7 in these cells of LysM-Cre / Fbxw7 F / F mice has no effect on metastasis frequency (FIGS. 13, A and B). It was suggested that it is not greatly involved in the promotion of metastasis. We have therefore concentrated on CCL2 and found that the serum concentration of CCL2 is greater in Mx1-Cre / Fbxw7 ⁇ / ⁇ mice than in control mice, both before and after transplantation of E0771 cells. (FIG. 4B).
  • the CCL2 gene is activated in Fbxw7-deficient BMSCs.
  • Fbxw7-deficient BMSCs We next examined which cells of BM are responsible for promoting metastasis and increasing CCL2 serum levels in Fbxw7-deficient mice.
  • the abundance of CCL2 mRNA was increased in CAG-Cre-ER T2 / Fbxw7 ⁇ / ⁇ BMSC compared to control cells (FIG. 5C).
  • the amount of CCL2 released from the CAG-Cre-ER T2 / Fbxw7 ⁇ / ⁇ BMSC into the medium was also substantially higher than that released from the control cells (FIG. 5D).
  • WT Fbxw7 ⁇ cDNA is introduced into CAG-Cre-ER T2 / Fbxw7 ⁇ / ⁇ BMSC
  • the abundance of CCL2 mRNA is significantly reduced, while a mutant ( ⁇ F) cDNA of Fbxw7 ⁇ lacking the F box domain is generated. There was no such effect when introduced (FIG. 5E), suggesting that Fbxw7 negatively regulates CCL2 production in BMSC.
  • BMSCs small hairpin RNA (shRNA) -mediated RNA interference (RNAi).
  • shRNA small hairpin RNA
  • RNAi RNA interference
  • -ER T2 / Fbxw7 ⁇ / ⁇ BCL was depleted of CCL2 (FIG. 5F) and these cells were then transferred into the recipient mice through the tail vein along with B16F10 melanoma cells.
  • BMSC has been shown to be detected in many tissues such as bone marrow and lung even after 4 months of transplantation (33).
  • the degree of lung metastasis in recipient mice was increased by co-infusion of melanoma cells and Fbxw7 ⁇ / ⁇ BMSC compared to that seen after co-infusion of control BMSC (FIGS. 5, G and H).
  • Fbxw7 deletion was abolished by CCL2 depletion in BMSC, suggesting that increased CCL2 production by Fbxw7-deficient BMSC contributed to the promotion of metastasis.
  • Notch accumulation in Fbxw7-deficient BMSCs promotes metastasis by increasing CCL2 production.
  • Immunoblot analysis revealed that, among the Fbxw7 substrates examined, Notch1 intracellular domain (NICD1), c-Myc, and KLF5 accumulate at high levels in Fbxw7-deficient BMSCs (FIG. 6A).
  • Notch1 intracellular domain NICD1
  • c-Myc c-Myc
  • FIG. 7F Immunohistochemical analysis of Fbxw7 in primary tumor lesions
  • FIG. 7G shows that the abundance of Fbxw7 mRNA in peripheral blood is not significantly correlated with Fbxw7 expression in tumor cells (FIG. 7G), but surrounding stromal cells was found to be highly correlated with (Fig. 7H).
  • FIG. 7I shows that the abundance of Fbxw7 mRNA in peripheral blood is a marker of Fbxw7 expression in stromal cells surrounding tumor cells.
  • the inventors have also found that a negative correlation is apparent between the abundance of Fbxw7 mRNA in peripheral blood (FIG. 7I).
  • High serum levels of CCL2 correlate with poor prognosis in breast cancer patients (SA and KM, unpublished data).
  • the Fbxw7 gene is due to a number of corresponding mutations associated with human cancer (noted 22), as well as tumor formation observed in conditional knockout mice (noted 23, 24, 26). ) As demonstrated, it is a powerful tumor suppressor.
  • the anti-cancer function of Fbxw7 is a growth-promoting oncoprotein such as c-Myc (Non-Patent Documents 9 and 10), Notch (Non-Patent Documents 11, 12, and 35), Cyclin E (Non-Patent Documents).
  • CCL2 is thought to be secreted from both cancer cells and non-cancer cells in the tumor environment.
  • administration of an antibody specific for human CCL2 or an antibody specific for mouse CCL2 inhibits tumor growth and metastasis and is secreted from both the tumor and host environment.
  • CCL2 plays an important role in tumor development (Non-Patent Documents 4 and 6).
  • the Fbxw7-Notch1-CCL2 axis in cancer cells also appears to play an important role in metastasis.
  • FBXW7 expression levels in peripheral blood are associated with prognosis in breast cancer patients.
  • CXCL13 also known as trigger receptor 1, expressed on bone marrow cells, TREM-1
  • CXCL2 epidermal growth factor
  • platelet derived growth factor-AA Suggests an effect on tumor growth. Serum levels of these proteins increased or decreased more than 2-fold in Mx1-Cre / Fbxw7 ⁇ / ⁇ mice after E0771 cell transplantation compared to controls. Further studies are needed to elucidate the molecular mechanisms responsible for increased tumor cell engraftment in Fbxw7-deficient mice.
  • chemokines such as CCL2 in Fbxw7-deficient mice.
  • BMSC may be a major source of CCL2 production, the possible contribution of other BMDCs cannot be excluded.
  • CCL2 produced from other cell types such as fibroblasts, endothelial cells, and smooth muscle cells is also thought to promote cancer metastasis (39-42).
  • Fbxw7 and Notch as upstream regulators of CCL2 expression, thereby providing both important insights into the mechanisms by which this chemokine production is controlled, as well as the development of new strategies for cancer treatment. Provided.
  • SCFFBW7 regulates cellular apoptosis by targeting MCL1 for ubiquitylation and destruction.Nature. 2011; 471 (7336): 104-9. 37. Wertz IE, et al. Sensitivity to antitubulin chemotherapeutics is regulated by MCL1 and FBW7. Nature. 2011; 471 (7336): 110-4. 38. Balamurugan K, et al. The tumour suppressor C / EBP ⁇ inhibits FBXW7 expr ession and promotes mammary tumour metastasis.EMBO J. 2010; 29 (24): 4106-17. 39. Cushing SD, et al.
  • Minimally modified low density lipoprotein induces monocyte chemotactic protein 1 in human endothelial cells and smooth muscle cells.Proc Natl Acad Sci U S A. 1990; 87 (13): 5134-8. 40. Standiford TJ, Kunkel SL, Phan SH, Rollins BJ, Strieter RM.Alveolar macrophage-derived cytokines induce monocyte chemoattractant protein-1 expression from human pulmonary type II-like epithelial cells.J Biol Chem. 1991; 266 (15): 9912-8. 41. Lu Y, et al.
  • Kamura T et al. Degradation of p57Kip2 mediated by SCFSkp2-dependent ubiquitylation. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100 (18): 10231-6. 54. Morita S, Kojima T, Kitamura T. Plat-E: an efficient and stable system for transient packaging of retroviruses. Gene Ther. 2000; 7 (12): 1063-6. 55. Kamura T, et al. Cytoplasmic ubiquitin ligase KPC regulates proteolysis of p27Kip1 at G1 phase. Nat Cell Biol. 2004; 6 (12): 1229-35.

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Abstract

　本発明は、対象においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、がんの予後を予測するための、またはがんの早期発見のための方法、およびがん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、該がん患者におけるがんの処置方法を選択するための方法を提供する。癌の処置方法の好適な例は、プロパゲルマニウムを含む医薬組成物の投与である。本発明はまた、低ＦＢＸＷ７発現性のがん患者におけるがんの処置のための、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物、およびＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物を検出する工程を含む、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物による処置の対象となる患者の選択方法も提供する。

Description

がんの処置のための方法
　本発明は、がん治療に関する。
　転移は、がん患者における主な死因であり、そしてこのプロセスの根底にある遺伝子および機構の解明は、新規がん治療の発展に関する基礎を提供すると期待される。転移は、原発性腫瘍からのがん細胞の剥離、その後、該細胞の周囲組織内への浸潤、循環系への進入、ならびに遠位臓器における浸潤および増殖を含む、複雑なものであるため、こうした機構の理解は十分になされないままである。悪性腫瘍細胞間でのゲノム変動に加えて、近年の研究は、がんおよび宿主環境の間の関連に重点を置いてきている。Ｔ細胞、Ｂ細胞、顆粒球および単球性骨髄由来サプレッサー細胞（それぞれ、Ｇ－およびＭｏ－ＭＤＳＣ）、マクロファージ、骨髄由来間質細胞（ＢＭＳＣ）、造血前駆細胞（ＨＰＣ）および内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を含む、骨髄由来細胞（ＢＭＤＣ）は、腫瘍細胞増殖および浸潤ならびに血管新生の促進を含めて、転移促進において中心的な役割を果たす。
　腫瘍細胞および周囲の間質細胞は、がん発展を促進する多様な増殖因子、サイトカインおよびケモカインを分泌する（非特許文献１、２）。ケモカインは、免疫細胞の腫瘍部位への補充に加えて、腫瘍発展および悪化を促進する。ケモカインＣ－Ｃモチーフリガンド２（ＣＣＬ２）［単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）－１としてもまた知られる］は、その受容体ＣＣＲ２との相互作用を通じて、単球、マクロファージおよび他の炎症性細胞の炎症部位への補充を制御する（非特許文献３）。ＣＣＬ２はまた、乳がんのマウスにおいて、肺転移の部位への単球－マクロファージの補充にも寄与し、そして次いで、腫瘍増殖を促進する（非特許文献４）。マウスがんモデルにおける、ＣＣＬ２に対する中和抗体の全身投与は、腫瘍増殖の顕著な減弱、腫瘍血管密度の減少、および転移の阻害を生じてきている（非特許文献４～８）。
　Ｆｂｘｗ７（Ｆｂｗ７、Ｓｅｌ－１０、ｈＣｄｃ４、またはｈＡｇｏとしてもまた知られる）は、ＳＣＦ（Ｓｋｐ１－Ｃｕｌ１－Ｆボックスタンパク質）型ユビキチン・リガーゼのＦボックスタンパク質構成要素であり、該リガーゼにおいて、基質認識に関与する受容体として機能する。Ｆｂｘｗ７の基質の大部分は、増殖促進因子であり、これには、ｃ－Ｍｙｃ（非特許文献９、１０）、Ｎｏｔｃｈ（非特許文献１１～１３）、サイクリンＥ（非特許文献１４～非特許文献１６）、ｃ－Ｊｕｎ（非特許文献１７、１８）、ＫＬＦ５（非特許文献１９、２０）、およびｍＴＯＲ（非特許文献２１）が含まれる。多くの原発性ヒト腫瘍におけるＦＢＸＷ７の分析によって、腫瘍の～６％がこの遺伝子において突然変異を有することが明らかになった（非特許文献２２）。突然変異は、胆管細胞がん（３５％）およびＴ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ、３１％）において、最も頻繁に検出された。注目すべきことに、同定された突然変異のうち約半分（４３％）は、基質認識に関与するＷＤ４０ドメイン内の重要なアルギニン残基（Ａｒｇ465およびＡｒｇ479）でのアミノ酸置換を生じるミスセンス突然変異であることが見出された。
　マウスのＴ細胞系譜におけるＦｂｘｗ７の条件付き不活性化は、ｃ－Ｍｙｃの過剰な集積の結果として胸腺リンパ腫の発展を誘導した（非特許文献２３）。半数より多くの骨髄特異的Ｆｂｘｗ７欠損マウスが、１６週以内にＴ－ＡＬＬを発展させ、Ｎｏｔｃｈ１およびｃ－Ｍｙｃタンパク質の顕著な集積を示した（非特許文献２４、２５）。大腸腺腫様ポリポーシス（ＡＰＣ）遺伝子に突然変異を有するＦｂｘｗ７－ヌルマウス（Ｆｂｘｗ７Δ/Δ／Ａｐｃmin/+）は、腸腫瘍の数およびサイズの両方に増加を示し、Ａｐｃmin/+マウスに比較して、減少した生存率を生じた（非特許文献２６）。
Balkwill F. Cancer and the chemokine network. Nat Rev Cancer. 2004;4(7):540-50. Mukaida N, Baba T. Chemokines in tumor development and progression. Exp Cell Res. 2011;318(2):95-102. Van Coillie E, Van Damme J, Opdenakker G. The MCP/eotaxin subfamily of CC chemokines. Cytokine Growth Factor Rev. 1999;10(1):61-86. Qian BZ, et al. CCL2 recruits inflammatory monocytes to facilitate breast-tumour metastasis. Nature. 2011;475(7355):222-5. Salcedo R, et al. Human endothelial cells express CCR2 and respond to MCP-1: direct role of MCP-1 in angiogenesis and tumor progression. Blood. 2000;96(1):34-40. Loberg RD, et al. Targeting CCL2 with systemic delivery of neutralizing antibodies induces prostate cancer tumor regression in vivo. Cancer Res. 2007;67(19):9417-24. Zhu X, Fujita M, Snyder LA, Okada H. Systemic delivery of neutralizing antibody targeting CCL2 for glioma therapy. J Neurooncol. 2011;104(1):83-92. Lu X, Kang Y. Chemokine (C-C motif) ligand 2 engages CCR2+ stromal cells of monocytic origin to promote breast cancer metastasis to lung and bone. J Biol Chem. 2009;284(42):29087-96. Welcker M, et al. The Fbw7 tumor suppressor regulates glycogen synthase kinase 3 phosphorylation-dependent c-Myc protein degradation. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004;101(24):9085-90. Yada M, et al. Phosphorylation-dependent degradation of c-Myc is mediated by the F-box protein Fbw7. EMBO J. 2004;23(10):2116-25. Hubbard EJ, Wu G, Kitajewski J, Greenwald I. sel-10, a negative regulator of lin-12 activity in Caenorhabditis elegans, encodes a member of the CDC4 family of proteins. Genes Dev. 1997;11(23):3182-93. Gupta-Rossi N, et al. Functional interaction between SEL-10, an F-box protein, and the nuclear form of activated Notch1 receptor. J Biol Chem. 2001;276(37):34371-8. Oberg C, et al. The Notch intracellular domain is ubiquitinated and negatively regulated by the mammalian Sel-10 homolog. J Biol Chem. 2001;276(38):35847-53. Koepp DM, et al. Phosphorylation-dependent ubiquitination of cyclin E by the SCFFbw7 ubiquitin ligase. Science. 2001;294(5540):173-7. Moberg KH, Bell DW, Wahrer DC, Haber DA, Hariharan IK. Archipelago regulates Cyclin E levels in Drosophila and is mutated in human cancer cell lines. Nature. 2001;413(6853):311-6. Strohmaier H, et al. Human F-box protein hCdc4 targets cyclin E for proteolysis and is mutated in a breast cancer cell line. Nature. 2001;413(6853):316-22. Nateri AS, Riera-Sans L, Da Costa C, Behrens A. The ubiquitin ligase SCFFbw7 antagonizes apoptotic JNK signaling. Science. 2004;303(5662):1374-8. Wei W, Jin J, Schlisio S, Harper JW, Kaelin WG, Jr. The v-Jun point mutation allows c-Jun to escape GSK3-dependent recognition and destruction by the Fbw7 ubiquitin ligase. Cancer Cell. 2005;8(1):25-33. Liu N, et al. The Fbw7/human CDC4 tumor suppressor targets proproliferative factor KLF5 for ubiquitination and degradation through multiple phosphodegron motifs. J Biol Chem. 2010;285(24):18858-67. Zhao D, Zheng HQ, Zhou Z, Chen C. The Fbw7 tumor suppressor targets KLF5 for ubiquitin-mediated degradation and suppresses breast cell proliferation. Cancer Res. 2010;70(11):4728-38. Mao JH, et al. FBXW7 targets mTOR for degradation and cooperates with PTEN in tumor suppression. Science. 2008;321(5895):1499-502. Akhoondi S, et al. FBXW7/hCDC4 is a general tumor suppressor in human cancer. Cancer Res. 2007;67(19):9006-12. Onoyama I, et al. Conditional inactivation of Fbxw7 impairs cell-cycle exit during T cell differentiation and results in lymphomatogenesis. J Exp Med. 2007;204(12):2875-88. Matsuoka S, et al. Fbxw7 acts as a critical fail-safe against premature loss of hematopoietic stem cells and development of T-ALL. Genes Dev. 2008;22(8):986-91. Thompson BJ, et al. The SCFFBW7 ubiquitin ligase complex as a tumor suppressor in T cell leukemia. J Exp Med. 2007;204(8):1825-35. Babaei-Jadidi R, et al. FBXW7 influences murine intestinal homeostasis and cancer, targeting Notch, Jun, and DEK for degradation. J Exp Med. 2011;208(2):295-312.
　上述のような多様な観察は、Ｆｂｘｗ７が、マウスにおいて、およびヒトにおいて、強力な腫瘍サプレッサーであることを示唆する。また、多様な組織において、Ｆｂｘｗ７が条件付きで欠失されているマウスの遺伝子分析を合わせると、ｉｎ　ｖｉｖｏでの腫瘍発生の抑制におけるＦｂｘｗ７の中枢的な役割が裏付けられる。
　本発明者らは本願で、宿主環境におけるＦｂｘｗ７発現が、がん転移の重要な決定要因であることを示す。こうして、転移は、対照マウスに比較して、骨髄においてＦｂｘｗ７を欠くマウスにおいて、増進していることが見出された。本発明者らは、転移のこの増進の根底にある機構を特徴付けた：Ｆｂｘｗ７の欠失は、骨髄間葉系間質細胞（ＢＭＳＣ）におけるＮｏｔｃｈの集積、そしてその結果としてＣＣＬ２遺伝子転写の活性化を生じた。これらの細胞によるＣＣＬ２の産生増加は、Ｍｏ－ＭＤＳＣおよびマクロファージの補充を通じて、転移ニッチの形成を促進するようであった。ＣＣＬ２－ＣＣＲ２シグナル伝達の阻害は、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおいて、転移頻度を減少させた。本発明者らの結果は、したがって、Ｆｂｘｗ７－Ｎｏｔｃｈ－ＣＣＬ２経路が、がん転移制御において、中心的な役割を果たすことを示唆する。
　本発明は、以下を提供する。
[１]対象においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、がんの予後を予測するための、またはがんの早期発見のための方法。
[２]がん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、該がん患者におけるがんの処置方法を選択するための方法。
[３]がんが、乳がんである、１または２に記載の方法。
[４]対象またはがん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程が、対象またはがん患者の末梢血におけるＦＢＸＷ７の発現レベルを検出することによって行われる、１～３のいずれか１項に記載の方法。
[５]治療方法が、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物の投与である、２～４のいずれか１項に記載の方法。
[６]ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
（式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
で示される有機酸重合体である、５に記載の方法。
[７]一般式（Ｉ）で示される有機酸重合体が、プロパゲルマニウムである、６に記載の方法。
[８]低ＦＢＸＷ７発現性のがん患者におけるがんの処置のための、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物。
[９]がんが、乳がんである、８に記載の医薬組成物。
[１０]乳がんが、トリプルネガティブ乳がんである、８または９に記載の医薬組成物。
[１１]ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
（式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
で示される有機酸重合体である、１０に記載の医薬組成物。
[１２]一般式（Ｉ）で示される有機酸重合体が、プロパゲルマニウムである、１１に記載の医薬組成物。
[１３]ＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物の、がんの予後を予測するための、またはがんの早期発見のための、マーカーとしての使用。
[１４]がんが、乳がんである、１３に記載の使用。
[１５]ＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物を検出する工程を含む、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物による処置の対象となる患者の選択方法。
[１６]ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
（式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
で示される有機酸重合体である、１５に記載の方法。
　本発明は、また以下を提供する。
[１]  がん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、抗がん剤を患者に投与した後の予後を予測するための、またはがんの早期発見のための方法。
[２]  がん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、抗がん剤を患者へ投与する／投与しないを決定するための方法。
[３]  がん患者が、乳がんの患者である、１または２に記載の方法。
[４]  がん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程が、患者の末梢血におけるＦＢＸＷ７の発現レベルを検出することによって行われる、１～３のいずれか１項に記載の方法。
[５]  抗がん剤が、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物である、１～４のいずれか１項に記載の方法。
[６]  ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
（式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
で示される有機酸重合体を含む医薬組成物である、５に記載の方法。
[７]  一般式（Ｉ）で示される有機酸重合体が、プロパゲルマニウムである、６に記載の方法。
[８]  がん患者において検出されたＦＢＸＷ７の発現レベルに応じて少なくとも１つの抗がん剤の含有・非含有および／またはその量が調整される、がんの処置のための、オーダーメイド医薬製品。
[９]  がん患者が、乳がんの患者である、８に記載の製品。
[１０]  抗がん剤が、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物である、８または９に記載の製品。
[１１]  ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
（式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
で示される有機酸重合体を含む医薬組成物である、１０に記載の製品。
[１２]  一般式（Ｉ）で示される有機酸重合体が、プロパゲルマニウムである、１１に記載の製品。
[１３]  ＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物の、抗がん剤を患者に投与した後の予後を予測するための、またはがんの早期発見のための、マーカーとしての使用。
[１４]  がん患者が、乳がんの患者である、１３に記載の使用。
[１５] 
抗がん剤が、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物である、１２～１４のいずれか１項に記載の使用。
[１６]  ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
（式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
で示される有機酸重合体を含む医薬組成物である、１５に記載の使用。
[１７]  一般式（Ｉ）で示される有機酸重合体が、プロパゲルマニウムである、１６に記載の使用。
[１８]  検出結果を、予め決定した基準と対比する工程を含む、１～５のいずれか１項に記載の方法。
骨髄（ＢＭ）におけるＦｂｘｗ７欠失は、静脈内腫瘍細胞移植モデルにおいて、がん転移を促進する。（ＡおよびＢ）Ｂ１６Ｆ１０細胞をＦｂｘｗ７+/F（ｎ＝７）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝８）、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/(（ｎ＝１１）、およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝１２）マウス内に移植した。肺の肉眼所見（Ａ）および腫瘍コロニーでの占有（Ｂ）を調べた。Ｂ中の水平バーは、平均値を示す。（Ｃ）Ｂ１６Ｆ１０細胞注入後のＦｂｘｗ７F/F（ｎ＝１０）またはＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝１２）に関するカプラン・マイヤー生存曲線。（ＤおよびＥ）ＬＬＣ細胞を、Ｆｂｘｗ７+/F（ｎ＝４）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝５）、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/(（ｎ＝５）、およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝１２）マウスに移植した。（ＦおよびＧ）Ｂ１６Ｆ１細胞を、Ｆｂｘｗ７+/F（ｎ＝９）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝８）、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/(（ｎ＝８）、およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝８）マウス内に移植した。肺をヘマトキシリン－エオジン染色に供し（Ｄ、Ｆ）、そしてその総重量を決定した（Ｅ、Ｇ）。（Ｈ～Ｊ）ＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝８）またはＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝７）ドナーＢＭで再構成した野生型（ＷＴ）マウスにおいて、転移アッセイを行った。（Ｋ～Ｍ）ＷＴドナーＢＭで再構成したＦｂｘｗ７F/F（ｎ＝１０）またはＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝１２）マウスにおいて、転移アッセイを行った。模式図（Ｈ、Ｋ）、肺の肉眼所見（Ｉ、Ｌ）、および腫瘍コロニーでの占有（Ｊ、Ｍ）を示した。スケールバー、１０ｍｍ（Ａ、Ｉ、Ｌ）または２ｍｍ（Ｄ、Ｆ）。***一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定（Ｂ、Ｅ、Ｇ）または両側スチューデントｔ検定（Ｊ）によってＰ＜０．００１。 骨髄におけるＦｂｘｗ７欠失は、同所性乳がん移植モデルにおいて、がん転移を促進する。（ＡおよびＢ）Ｅ０７７１細胞をＦｂｘｗ７F/F（ｎ＝１１）およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝１３）マウスの乳房脂肪体内に移植した。原発性腫瘍の３２日後の肉眼所見（Ａ）および示す時点での腫瘍体積（Ｂ）を決定した。データは平均±ＳＥＭである。（Ｃ～Ｇ）Ｅ０７７１細胞を、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝１２）およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝１６）マウスの乳房脂肪体内に移植した。３２日後、肺をヘマトキシリン－エオジン染色に供し（Ｃ）そして総重量を決定した（Ｄ）。腫瘍総面積（Ｅ）、腫瘍小結節数（Ｆ）、および腫瘍平均面積（Ｇ）を染色肺切片より計算した。スケールバー、２ｍｍ。（Ｈ～Ｊ）ＷＴマウスを、示すマウスのＢＭ細胞で再構成し、そしてｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞での同所性移植に供した。ＢＭＤＣ、腫瘍細胞および細胞核（Ｈｏｅｃｈｓｔ　３３２３８で染色）の検出のため、肺を蛍光顕微鏡に供し（Ｈ）、そして腫瘍小結節数（Ｉ）および腫瘍平均面積（Ｊ）を、腫瘍細胞移植の１６日後（ｎ＝８マウス）または２０日後（ｎ＝９マウス）に決定した。Ｊにおける箱髭図は、最小値、下位四分位点、中央値、上位四分位点、および最大値を示す。スケールバー、１００μｍ。**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１（両側スチューデントｔ検定）（Ｂ、Ｄ～Ｇ、Ｉ、Ｊ）。 Ｌｙ６Ｃ+　Ｍｏ－ＭＤＳＣおよびＦ４／８０+単球－マクロファージは、Ｆｂｘｗ７欠損骨髄細胞で再構成したマウス肺において、転移性腫瘍の微小環境中に集積する。ＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｆｂｘｗ７F/F（Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅにおいてｎ＝１０；Ｃにおいてｎ＝９；Ｆにおいてｎ＝１１）またはＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（Ａ、Ｃ、Ｅにおいてｎ＝１０；Ｂにおいてｎ＝１２；Ｄにおいてｎ＝１４；Ｆにおいてｎ＝１１）ＢＭ細胞で再構成し、そして図２Ｈにおけるように、ｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞での同所性移植に供した（分析の２０日前）ＷＴマウス由来の肺切片に関して、ＴＣＲ(（Ａ）、Ｂ２２０（Ｂ）、Ｌｙ６Ｇ（Ｃ）、Ｌｙ６Ｃ（Ｄ）、Ｆ４／８０（Ｅ）、およびＦＳＰ（Ｆ）の代表的な免疫組織蛍光染色（左パネル）を示す。ＥＧＦＰ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、およびＨｏｅｃｈｓｔ　３３２５８の固有の蛍光もまた画像化した。より高い倍率の画像を差し込み図に示す。スケールバー、１００μｍ。腫瘍周囲領域および非周囲領域の両方において、各マーカーに関して陽性であるＥＧＦＰ+　ＢＭＤＣの割合を定量化した（右パネル）。*Ｐ＜０．０５、***Ｐ＜０．００１（一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定）。 ＣＣＬ２の産生増加は、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおいて転移を促進する。（Ａ）ｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞の同所性移植後のＦｂｘｗ７F/FおよびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(マウスまたは非移植対照における血清サイトカインレベル。サイトカインの光学密度を色スケールにしたがって示す。図１３もまた参照されたい。（Ｂ）ｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞を移植した、示すマウスにおいて、ＥＬＩＳＡで決定した際のＣＣＬ２の血清濃度。データは平均±ＳＤである（ｎ＝４マウス）。（ＣおよびＤ）Ｂ１６Ｆ１０細胞を注入し、そしてＣＣＲ２アンタゴニスト、プロパゲルマニウムで処置した（または処置していない）、Ｆｂｘｗ７F/F（処置なし、ｎ＝５；処置あり、ｎ＝８）およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（処置なし、ｎ＝８；処置あり、ｎ＝６）マウスに関する、肺の肉眼所見（Ｃ）および可視Ｂ１６Ｆ１０腫瘍コロニーでの占有（Ｄ）。スケールバー、１０ｍｍ。（Ｅ～Ｉ）ＷＴマウスを、ＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(骨髄細胞で再構成し、ｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞での同所性移植に供し、そしてプロパゲルマニウムで処置した（または処置しなかった）（ｎ＝７マウス）。肺を蛍光顕微鏡に供し（Ｅ）、そして腫瘍細胞移植の２０日後、腫瘍小結節数（Ｆ）および腫瘍平均面積（Ｇ）を決定した。スケールバー、１００μｍ。（Ｈ）Ｅ～Ｉにおけるようなマウスの腫瘍所持肺において、Ｌｙ６Ｃに関して陽性であるＥＧＦＰ+　ＢＭＤＣの割合を、免疫組織蛍光分析によって決定した。一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定（ＢおよびＤ）または両側スチューデントｔ検定（Ｆ～Ｈ）によって、*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１。 Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２遺伝子発現増加は、がん転移を促進する。（Ａ）示すＢＭ細胞で再構成し、そしてｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞での同所性移植に供した（分析の２０日前）ＷＴマウス由来の肺切片におけるＬｙ６ＣおよびＦＳＰの代表的な免疫組織蛍光染色。（Ｂ）示すマウス由来であり、そして１０μＭタモキシフェンの非存在下または存在下でインキュベーションした、ＢＭＳＣのゲノムＰＣＲ分析。ｌｏｘＰ導入およびエクソン５欠失（ΔＥ５）Ｆｂｘｗ７アレルに対応する増幅断片の位置を示す。（Ｃ）示すマウス由来のＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２　ｍＲＮＡの相対存在量。（Ｄ）示すＢＭＳＣ由来の培養上清内に放出されるＣＣＬ２の濃度。（Ｅ）Ｆｂｘｗ７αのＷＴまたはΔＦ突然変異型をコードするレトロウイルス、あるいは空ウイルス（偽）に感染させたＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７(/(  ＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２　ｍＲＮＡの相対存在量。（Ｆ）タモキシフェンで処置し、そしてＥＧＦＰ（対照）またはＣＣＬ２をターゲティングするｓｈＲＮＡベクターを用いたＲＮＡｉに供したＦｂｘｗ７F/F（ＷＴ）またはＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７F/F（ＫＯ）マウス由来のＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２　ｍＲＮＡの相対存在量。（ＧおよびＨ）Ｂ１６Ｆ１０細胞、および示すマウスから単離され、そしてＦにおけるように処置したＢＭＳＣ（ｎ＝１０マウス）の両方を注入した２週間後の、ＷＴマウスに関する、肺の肉眼所見（Ｇ）および可視Ｂ１６Ｆ１０コロニーでの占有（Ｈ）。データは平均±ＳＤである。（Ｃ～Ｆ）スケールバー、１０μｍ（Ａ）、１０ｍｍ（Ｇ）。一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定（Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｈ）または両側スチューデントｔ検定（Ｄ）によって、*Ｐ＜０．０５、***Ｐ＜０．００１。 Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＳＣにおけるＮｏｔｃｈ集積は、ＣＣＬ２発現およびがん転移を促進する。（Ａ）示すＢＭＳＣにおけるＦｂｘｗ７基質のイムノブロット分析。（Ｂ）ＮＩＣＤ１、ｃ－Ｍｙｃ、またはＫＬＦ５をコードするレトロウイルスに感染させたＷＴ　ＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２　ｍＲＮＡの相対存在量。（Ｃ）ＮＩＣＤ１、ｃ－Ｍｙｃ、またはＫＬＦ５のレトロウイルスに感染しているＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２遺伝子のルシフェラーゼアッセイ。（Ｄ）ＤＡＰＴとインキュベーションしたＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７(/(  ＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２　ｍＲＮＡの相対存在量。（Ｅ）ホタル・ルシフェラーゼ遺伝子に融合したマウスＣＣＬ２遺伝子プロモーターのＷＴおよび突然変異型の模式図。Ｎｏｔｃｈ－ＲＢＰ－Ｊκのコンセンサス結合配列を太字で示す。Ｇにおいて、近位および遠位単位複製配列を示す。（Ｆ）ＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７(/(  ＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２遺伝子に関するルシフェラーゼアッセイ。（Ｇ）ＣＣＬ２遺伝子プロモーターのＣｈＩＰ分析。Ｎｏｔｃｈ１に対する抗体で（または対照ＩｇＧで）免疫沈降を行った。（Ｈ、Ｉ）Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝８）、Ｆｂｘｗ７F/F／ＲｂｐＪ(F/F（ｎ＝１１）、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝５）、およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(／ＲｂｐＪκ(/(（ｎ＝８）マウスに関するＢ１６Ｆ１０細胞での静脈内移植。（Ｊ、Ｋ）Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝８）、Ｆｂｘｗ７F/F／ｃ－ＭｙｃF/F（ｎ＝７）、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(（ｎ＝６）、およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７(/(／ｃ－Ｍｙｃ(/(（ｎ＝８）マウスに関するＢ１６Ｆ１０細胞での静脈内移植。肺の肉眼所見（Ｈ、Ｊ）およびＢ１６Ｆ１０コロニーでの占有（Ｉ、Ｋ）を示した。（Ｌ）ＥＬＩＳＡによって決定した際のＣＣＬ２の血清濃度。スケールバー、１０ｍｍ（Ｈ、Ｊ）。データは平均±ＳＤである（ｎ＝３）（Ｂ～Ｄ、Ｆ、Ｌ）。**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１（一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定）（Ｂ～Ｄ、Ｉ～Ｌ）。 乳がん患者におけるＦｂｘｗ７発現の臨床的関連性。（ＡおよびＢ）末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量にしたがって分類した、乳がん患者（ｎ＝４０６）の全体（Ａ）および無病（Ｂ）生存に関するカプラン・マイヤー曲線。（Ｃ～Ｅ）末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量にしたがって分類した、管腔（Ｃ）、Ｈｅｒ２+（Ｄ）、またはＥＲ-ＰＲ-Ｈｅｒ２-（Ｅ）腫瘍を有する乳がん患者の無病生存に関するカプラン・マイヤー曲線。*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１（ログランク検定）。ＮＳ、有意差なし。（Ｆ）乳がん患者におけるＦｂｘｗ７の代表的な免疫組織化学染色パターン：原発性腫瘍細胞および間質の両方において陽性（上部左）、腫瘍細胞において陽性（上部右）、間質において陽性（下部左）、ならびに腫瘍細胞および間質において陰性（下部右）。Ｔ、腫瘍細胞；Ｓ、周囲間質細胞、スケールバー、１００μｍ。（ＧおよびＨ）示す数の乳がん患者（ｎ＝２２）に関する、末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量、および腫瘍細胞（Ｇ）または周囲間質（Ｈ）におけるＦｂｘｗ７発現を要約するモザイクプロット。これらのパラメータ間の関連に関するＰ値をカイ二乗検定で計算した。（Ｉ）乳がん患者（ｎ＝５７）における末梢血中のＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量およびＣＣＬ２の血清濃度間の相関。 宿主環境におけるＦｂｘｗ７の喪失によるがん転移促進のモデル。ＢＭＳＣにおけるＦｂｘｗ７の喪失は、ＮＩＣＤ１の集積およびＣＣＬ２分泌増加を生じ、これが次に、Ｍｏ－ＭＤＳＣおよびマクロファージの補充を促進する。次いで、これらの細胞は、肺にすでにコロニー形成している腫瘍の増殖を促進する。ＴＡＭ、腫瘍関連マクロファージ。 静脈内腫瘍細胞移植モデルの詳細な分析。（Ａ～Ｃ）マウスＬＬＣ細胞（５ｘ１０5）をＦｂｘｗ７+/F（ｎ＝４）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝５）、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/Δ（ｎ＝５）、およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ（ｎ＝１２）マウスの尾静脈内に注入した（図２ｄ、ｅを参照されたい）。腫瘍総面積（Ａ）、腫瘍小結節数（Ｂ）、および腫瘍平均面積（Ｃ）を、ヘマトキシリン－エオジンで染色した肺切片から計算した。***Ｐ＜０．００１（一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定）。（Ｄ～Ｆ）マウスＢ１６Ｆ１細胞（２ｘ１０5）を、Ｆｂｘｗ７+/F（ｎ＝９）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝８）、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/Δ（ｎ＝８）、およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ（ｎ＝８）マウスの尾静脈内に注入した（図１、ＦおよびＧを参照されたい）。腫瘍総面積（Ｄ）、腫瘍小結節数（Ｅ）、および腫瘍平均面積（Ｆ）を、ヘマトキシリン－エオジンで染色した肺切片から計算した。*Ｐ＜０．０５、***Ｐ＜０．００１（一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定）。（ＧおよびＨ）図１ＨにおけるようにＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝６）またはＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ（ｎ＝８）骨髄細胞で再構成し、そしてＬＬＣ細胞（５ｘ１０5）を注入したＷＴマウスの肺に関するヘマトキシリン－エオジン染色（Ｇ）および総重量（Ｈ）。スケールバー、２ｍｍ。**Ｐ＜０．０１（スチューデントｔ検定）。 Ｅ０７７１乳がん細胞の同所性移植後の多様な時点での、Ｆｂｘｗ７欠損骨髄を持つマウスの骨髄、末梢血および肺の詳細な分析。（Ａ～Ｃ）ＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝９）またはＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ（ｎ＝９）骨髄細胞で再構成したＷＴマウスの肺を、Ｅ０７７１細胞（５ｘ１０5）の同所性移植後の示す時点で、ＥＧＦＰ陽性ＢＭＤＣおよび細胞核（Ｈｏｅｃｈｓｔ　３３２５８で染色）の蛍光顕微鏡に供した（Ａ）。スケールバー、１００μｍ。肺における、ＥＧＦＰ陽性ＢＭＤＣクラスターの数（Ｂ）および総細胞核の割合としてのＥＧＦＰ陽性ＢＭＤＣの数（Ｃ）を決定した。定量的データは平均±ＳＤである。*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１（スチューデントｔ検定）。（Ｄ～Ｆ）ｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞（５ｘ１０5）の同所性移植後の示す時点での、示す遺伝子型のマウスの末梢血における、Ｍａｃ１+Ｌｙ６Ｇ-Ｌｙ６Ｃ+細胞（Ｄ）、Ｍａｃ１+Ｆ４／８０+ＣＤ１１５+細胞（Ｅ）、およびＭａｃ１+Ｌｙ６Ｇ+Ｌｙ６Ｃ+細胞（Ｆ）の割合。データは平均±ＳＤである。Ｆｂｘｗ７F/Fマウスに関する対応する値に対する、*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１（スチューデントｔ検定）。（ＧおよびＨ）２０日前にｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞（５ｘ１０5）を移植されている（Ｈ）かまたはされていない（Ｇ）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝３）またはＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ（ｎ＝３）マウス由来の骨髄細胞上のＭａｃ１、Ｌｙ６Ｇ、およびＬｙ６Ｃ発現のフローサイトメトリー分析に関する代表的なドットプロット。平均±ＳＤ値もまた示す。 Ｆｂｘｗ７欠損骨髄細胞で再構成したマウス肺における転移性腫瘍の微小環境における骨髄細胞、ＨＰＣ、およびＥＰＣ。ＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｆｂｘｗ７F/FまたはＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ骨髄細胞で再構成し、そして図３ＨにおけるようにｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞での同所性移植に供した（分析の２０日前）ＷＴマウス由来の肺切片に関して、Ｍａｃ１（Ａ）、ｃ－Ｋｉｔ（Ｂ）、およびＶＥ－カドヘリン（Ｃ）に関する代表的な免疫組織蛍光染色（左パネル）を示す。ＥＧＦＰ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、およびＨｏｅｃｈｓｔ　３３２５８の固有の蛍光もまた画像化した。より高い倍率の画像を差し込み図に示す。スケールバー、１００μｍ。腫瘍周囲領域および非周囲領域の両方において、各マーカーに関して陽性であるＥＧＦＰ+　ＢＭＤＣの割合を定量化した（右パネル）。***Ｐ＜０．００１（一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定）。 ｔｄＴｏｍａｔｏ標識Ｅ０７７１細胞（５ｘ１０5）の同所性移植の２０日後のＦｂｘｗ７F/FおよびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスの血清における、または非移植対照における、サイトカインレベル。血清をビオチン化検出抗体カクテルと混合し、そして次いで、パネルＡ（ＡＲＹ００６）（Ａ）およびパネルＢ（ＡＲＹ０１５）（Ｂ）とインキュベーションした。次いで、アレイを、ストレプトアビジン標識西洋ワサビペルオキシダーゼとインキュベーションし、そして化学発光に基づく検出に供した。Ｉｍａｇｅ　Ｊを用いて、代表的なアレイの２つの異なる曝露におけるサイトカインの光学密度を定量化した。黒塗りの円は、図４Ａに関して分析した点を示す。ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１０、およびＴＩＭＰ－１に関して、パネルＡおよびパネルＢにおける相対強度の平均を図４Ａに示す。各分析物に関する捕捉抗体の位置を右の表に示す。 骨髄細胞、Ｔ細胞、またはＢ細胞におけるＦｂｘｗ７欠損は、静脈内注入したＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞の転移に影響を及ぼさない。（ＡおよびＢ）Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞（２ｘ１０5）の尾静脈を通じた注入の２週間後の、Ｆｂｘｗ７+/F（ｎ＝２０）、Ｆｂｘｗ７-/F（ｎ＝６）、ＬｙｓＭ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/Δ（ｎ＝２１）、およびＬｙｓＭ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７-/Δ（ｎ＝１４）マウスに関する、肺の肉眼所見（Ａ）および可視Ｂ１６Ｆ１０腫瘍コロニーでの占有。スケールバー、１０ｍｍ。ＮＳ、一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定。（ＣおよびＤ）Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞（２ｘ１０5）の尾静脈を通じた注入の２週間後の、Ｆｂｘｗ７+/F（ｎ＝１８）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝２８）、Ｌｃｋ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/Δ（ｎ＝１８）、およびＬｃｋ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ（ｎ＝１２）マウスに関する、肺の肉眼所見（Ｃ）および可視Ｂ１６Ｆ１０腫瘍コロニーでの占有（Ｄ）。スケールバー、１０ｍｍ。ＮＳ、一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定。（ＥおよびＦ）Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞（２ｘ１０5）の尾静脈を通じた注入の２週間後の、Ｆｂｘｗ７+/F（ｎ＝１０）、Ｆｂｘｗ７F/F（ｎ＝１０）、ＣＤ１９－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７+/Δ（ｎ＝１０）、およびＣＤ１９－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ（ｎ＝８）マウスに関する、肺の肉眼所見（Ｅ）および可視Ｂ１６Ｆ１０腫瘍コロニーでの占有（Ｆ）。スケールバー、１０ｍｍ。ＮＳ、一方向ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ検定。 ＣＣＬ２は骨髄細胞に由来しない。（Ａ）ＥＬＩＳＡによって決定した際の８週齢Ｆｂｘｗ７-/F（ｎ＝３）およびＬｙｓＭ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７-/Δ（ｎ＝３）マウスにおけるＣＣＬ２の血清濃度。データは平均±ＳＤである。ＮＳ、スチューデントｔ検定。（Ｂ）８週齢Ｆｂｘｗ７-/FおよびＬｙｓＭ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７-/Δマウスの末梢血におけるＭａｃ１+Ｆ４／８０+単球－マクロファージのフローサイトメトリー分析に関する代表的なドットプロット。 乳がん患者におけるＦｂｘｗ７発現の臨床的関連性の詳細な分析。（Ａ～Ｃ）末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量にしたがって分類した、それぞれ組織学的グレード１、２、または３の腫瘍を有する乳がん患者の無病生存に関するカプラン・マイヤー曲線。*Ｐ＜０．０５（ログランク検定）。（Ｄ～Ｆ）末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量にしたがって分類した、それぞれ、ステージＩ、ＩＩ、またはＩＩＩ／ＩＶの腫瘍を有する乳がん患者の無病生存に関するカプラン・マイヤー曲線。**Ｐ＜０．０１（ログランク検定）。（Ｇ）末梢血中のＦＢＸＷ７発現レベルにしたがった、３８７人の乳がん患者の臨床病理学的特徴。カイ二乗検定またはスチューデントｔ検定でＰ値を決定した。（Ｈ）乳がん患者の末梢血に関する、総単核細胞数および循環腫瘍（ＥｐＣＡＭ+ＣＤ４５-）細胞の比率。
　数値範囲「Ｘ～Ｙ」は、特に記載した場合を除き、両端の値を含む。Ａおよび／またはＢというときは、特に記載した場合を除き、Ａ、Ｂのうち少なくとも一方を含むことを指す。疾患または状態に関し、処置というときは、特に記載した場合を除き、診断、予防、治療、進行の抑制および転移の抑制を含む。本発明は、がん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、がんの処置方法に関する。がんの処置方法には、診断方法（コンパニオン診断方法を含む。）、早期発見方法、予後の予測方法、がん転移の抑制方法、治療方法（個別治療方法を含む。）等が含まれる。
［ＦＢＸＷ７］
　本発明は、対象においてＦＢＸＷ７（F-box/WD repeat-containing protein 7。Ｆｂｗ７、Ｓｅｌ－１０、ｈＣｄｃ４、またはｈＡｇｏとしてもまた知られる。）の発現レベルを検出する工程を含む、がんの予後を予測するための、またはがんの早期発見のための方法、およびがん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、該がん患者におけるがんの処置方法を選択するための方法を提供する。Ｆｂｘｗ７はがんで多く変異が見つかっている分子である。本発明者らは、乳がん患者の血液細胞を調べ、Ｆｂｘｗ７の発現量が低い人はがんが再発しやすくなることを見出した。またマウスで人工的に遺伝子を破壊すると、がん細胞の転移が起こりやすくなることを見出した。
　Ｆｂｘｗ７の発現レベルが低い状態では、がん周囲にいる線維芽細胞からＣＣＬ２（ケモカインＣ－Ｃモチーフリガンド２。単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）－１としてもまた知られる。）が過剰に分泌され、それががん細胞の周りに単球細胞を異常に呼び寄せ、がんニッチを作り上げる。そこでマウスに抗がん剤（具体的には、ＣＣＬ２アンタゴニスト。より特定すると、プロパゲルマニウム）を投与すると、単球細胞の集積がみられなくなり、転移先でのがん細胞の増殖が抑制された。本願は、Ｆｂｘｗ７ががんニッチ形成抑制に重要な役割を担うことを示した初めての報告でもある。
　Ｆｂｘｗ７の発現量というときは、特に記載した場合を除き、ＦＢＸＷ７遺伝子からの転写産物であるｍＲＮＡ、またはその翻訳産物であるポリペプチドの、全部または一部の、量をいう。量は濃度で表されることもある。発現は、がん細胞中、ニッチ中または末梢血中で生じうる。本発明者らの検討によると、本発明においては、ニッチ中または末梢血中でのＦｂｘｗ７の発現量を指標として用いることができ、特に好ましい態様では、末梢血中でのＦｂｘｗ７の発現量を指標とする。
　Ｆｂｘｗ７の発現レベルが低いか高いかは、予め基準を設けておき、その基準との比較により、決定してもよい。基準は、例えば、複数のがん患者のＦＢＸＷ７発現量の統計データから得られる中央値とすることができる。Ｆｂｘｗ７の発現量を求める際には、構成的に発現しているタンパク質（例えば、Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase、ＧＡＰＤＨ））の発現量を基準に、相対量として求めてもよい。あるいは、基準は、構成的に発現しているタンパク質との量比に基づく値としてもよい。より具体的には、Ｆｂｘｗ７の発現量が、ＧＡＰＤＨの発現量に対して一定値以下であるとき、Ｆｂｘｗ７の発現レベルが低い、すなわち「低ＦＢＸＷ７発現性」と判断することができる。本発明に関し、ある対象において、低ＦＢＸＷ７発現性というときは、特に記載した場合を除き、Ｆｂｘｗ７の発現量が、ＧＡＰＤＨの発現量に対して１以下であるとき、好ましくは０．７以下であるとき、より好ましくは０．５以下であるときをいう。
［がん患者におけるがんの処置方法の選択］
　本発明の、特定のがん患者におけるがんの処置方法を選択するための方法においては、処置方法として、例えばＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物の投与が選択される。
　ＣＣＲ２アンタゴニストは、ＣＣＲ２拮抗薬、ＣＣＲ２拮抗剤、ＣＣＲ２拮抗物質、ＣＣＲ２遮断薬、ＣＣＲ２ブロッカー、ＭＣＰ－１受容体拮抗薬、ＭＣＰ－１受容体拮抗剤（特開２０００－１３６１３９号公報）、ＭＣＰ－１受容体拮抗物質、ＭＣＰ－１受容体遮断薬、ＭＣＰ－１受容体ブロッカー等ということもある。ＣＣＲアンタゴニストは、ＣＣＲ２と結合するか、またはＣＣＲとＣＣＲ２のリガンドとの結合を阻害し、そしてそれによりＣＣＲ２の生物学的機能を阻害する。アンタゴニストは、抗体、合成または天然の配列のペプチド、および小分子アンタゴニストを含む。したがって、アンタゴニストは、受容体に結合するもの（例えば抗体、天然のリガンドの変異体、小分子量有機分子、リガンド結合の他の競合的阻害剤）、および受容体に結合することなく受容体機能を阻害する物質（例えば抗イディオタイプ抗体）を包含する物質を指す。
　ＣＣＲ２アンタゴニストの好ましい例は、以下の一般式（Ｉ）
［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
（式中、ｎは１００～１０００の整数を表わし、およびＡは低級アルキレン基を表わす）
で示される有機酸重合体である。
　ここで、Ａの低級アルキレン基としては、炭素数１から３の低級アルキレン基が好ましい。特に、Ａがエチレン基である３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体が好ましい。また、重合度を表わすｎは２００～９００の整数が好ましい。特に前記３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体においては、重合度ｎが２００～９００の３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体がよく知られている。その立体構造は、以下式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
［式中、Ｒは－ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＯＨを表わし、およびｍは３－オキシゲルミルプロピオン酸プロピルエステル重合体の重量平均分子量から換算した重量平均重合度で、１３７±８４（平均値±標準誤差３σ）の整数を表わす］を示し、その最小構成単位は（Ｏ1/2）3ＧｅＣＨ2ＣＨ2ＣＯＯＨであり、実験式はＣ6Ｈ10Ｇｅ2Ｏ7にて示される、８員環構造体であろうと推測されている。
　３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体については、特開２００３-８１８４３号公報等に記載されている方法により、製造することができる。また、当該特開２００３-８１８４３号公報に、３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体は、下記表１および２の物性値を示すものとして記載されている。表１は光散乱法による分子量測定結果を示し、表２は粉末Ｘ線解析により求めた格子定数を示す。
　３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体は、特開昭５４－１１５３２４号公報の図１～３から、次のような物性値を示す化合物として特定することができる。すなわち、大きい回折ピークが６．５°付近にあり、比較的大きい回折ピークが、１１．６°、１３．８°、１８．４°、２１．２°、および２２．４°の各付近にあるという特徴的な粉末Ｘ線回折スペクトルを示す。赤外吸収（ＩＲ）スペクトルについて、大きい吸収バンドが８００ｃｍ-1、９００ｃｍ-1、および１７００ｃｍ-1の各付近にあり、比較的大きい吸収バンドが５６０ｃｍ-1、７０５ｃｍ-1、７６０ｃｍ-1、７８０ｃｍ-1、１２５０ｃｍ-1、１３５０ｃｍ-1、および１４００ｃｍ-1の各付近にある（但し、１４００ｃｍ-1付近の吸収バンドはダブレットである）という特徴的な吸収を示す。ＤＳＣチャートについて、ピーク開始点が２３７℃付近にあり、ピーク頂点が２５６℃付近にあり、ピーク終了点が２７６℃付近にあり、および、熱量ΔＨがほぼ５９ｍｃａｌ／ｍｇであるという特徴的なチャートを示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　すなわち、３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体の好ましい態様は、以下の一般式（ＩＩ）
（Ｃ3Ｈ5ＧｅＯ3.5）n　（ＩＩ）
（式中、ｎは５４８±３３７の重量平均重合度を表わす。）
で示され、および、重量平均分子量が９．２９×１０4±５．７２×１０4（平
均値±標準誤差）である、３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体である。
　３－オキシゲルミルプロピオン酸重合体は、プロパゲルマニウム、ビス（２－カルボキシエチルゲルマニウム）三二酸化物、または２－カルボキシエチルゲルマン三二酸化物ということもある。
　ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物は、医薬として許容される賦形剤、担体および希釈剤などの製剤補助剤を適宜含んでいてもよい。医薬組成物は常法にしたがい、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、液剤、粉体製剤、坐剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、貼付剤、軟膏剤または注射剤などの剤形とすることができ、経口または非経口で投与することができる。好ましくは経口で投与する。投与方法、投与量および投与回数は、患者の年齢、体重および症状に応じて適宜選択することができる。例えば、成人に対しては、経口投与により、１～１０００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは１０～５００ｍｇ／ｄａｙを、１回から数回に分割して投与すればよい。投与の開始時は、手術と組み合わせる場合は、その前、例えば手術前１日～数週間前時とすることができる。
　ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物の投与は、がんの処置のための他の療法、例えば手術、化学療法、および／または放射線療法と組み合わせて行うことができる。化学療法に関し、組み合わせて用いることのできる抗がん剤は、目的の効果が得られる限り特に限定されず、例えば、アルキル化薬、白金化合物、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼ阻害薬、微小管阻害薬、抗生物質、ホルモン剤、抗体等のいずれであってもよい。より具体的な例として、ゲムシタビン、テガフール・ウラシル、およびフルオロウラシル等が挙げられる。
　ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物は、低ＦＢＸＷ７発現性のがん患者におけるがんの処置のためものとすることができる。特に、低ＦＢＸＷ７発現性のがん患者におけるがんの処置のために用いられることが好ましく、低ＦＢＸＷ７発現性のがん患者におけるトリプルネガティブ乳がんの処置のために用いられることがより好ましい。
［予後の予測、患者の選択］
　本発明は、ＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物の、がんの予後を予測するための、またはがんの早期発見のための、マーカーとしての使用を提供する。本発明は、ＦＢＸＷ７の発現レベルに関連した、またはがんニッチ形成抑制に関連した疾患または状態にある者、がん患者、またはがんを患う可能性のある者が、特定の薬物（例えば、上述の医薬組成物）での治療の恩恵に浴するかどうかを予測するために、および薬物治療を受ける／受けている対象者の薬物に対する応答または予後を予想するために、用いることができる。本発明者らの検討によると、もっとも悪性度の高いトリプルネガティブ乳がんを持つ患者のうち、Ｆｂｘｗ７が高い人の再発は１割にも満たないが、低い人は５割の確率で再発する。この結果は、Ｆｂｘｗ７量を測定することで、がん患者の予後が予測可能であることを示している。
　そのため本発明を、ＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物を検出する工程を含む、特定の薬物（例えば、上述の医薬組成物）による処置の対象となる患者の選択のために用いることができる。すなわち本発明に基づき、特定の薬物（例えば、上述の医薬組成物）治療において、患者を選択することができる。そのため、本発明は、特定の薬物の新規な適応症における使用を提供する。例えば、本発明は、上述の医薬組成物の、ＦＢＸＷ７が低発現レベルにあるがん患者におけるがんの処置のための使用を提案する。
　本発明が適用可能ながんには、各種固形がんが含まれる。固形がんの例は、膵臓がん、膠芽腫、食道がん、胃がん、結腸がん、肺がん、腎がん、甲状腺がん、耳下腺がん、頭頚部がん、骨・軟部肉腫、尿管がん、膀胱がん、子宮がん、肝がん、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、卵管がん等である。ここで列挙した疾患は、例示であり、これらの他、ＦＢＸＷ７の発現レベルに関連した、またはがんニッチ形成抑制に関連した各種がんに対して、本発明の効果が期待できる。本願の効果が特に期待できるがんの例は、乳がん、メラノーマ、肺がんであり、好ましくは乳がんである。
　乳がんには、主にホルモン受容体陽性乳がん、ＨＥＲ２陽性乳がん、トリプルネガティブ乳がんの３つのタイプが含まれる。これらのうち、ホルモン受容体陽性乳がんにはホルモン療法が、ＨＥＲ２陽性乳がんにはハーセプチンがそれぞれ用いられ、著効を示しているが、トリプルネガティブ乳がんに対しては決定的な治療法が確立されていなかった。本発明者らは、血液細胞中のＦｂｘｗ７の発現量を測定することで、トリプルネガティブ乳がんの中でもより悪性度の高い患者を選択できることを見出した。なお、このように選択された患者に対しては、本発明は、例えばＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物の投与を提案する。
［コンパニオン診断薬］
　本発明はまた、ＦＢＸＷ７の発現レベルに関連した疾患または状態にある者、がん患者、またはがんを患う可能性のある者を対象とする、コンパニオン診断方法および診断のための製品、ならびにコンパニオン診断の結果、対象者の個別化療法（オーダーメイド療法）に用いるための製品を提供する。診断ための製品は、例えば、プローブ、プローブおよびプライマーのセット、キット等である。個別化療法（オーダーメイド療法）に用いるための製品は、コンパニオン診断の結果、特定の薬物（例えば、上述の医薬組成物）が有効であると判断される場合はその薬物を含み、薬物が有効でないと判断される場合は、その薬物を含まない。製品は、複数の薬物の組み合わせでありうる。
1.　方法
1.1  ヒト臨床標本の分析。
　本研究におけるすべての臨床結果は、後向き研究由来である。末梢血標本は、日本・福岡の国立九州がんセンターで２０００年～２００５年の間に手術を受けた、乳がんを患う４０６人の日本人女性から得られた。すべての患者は、臨床病理学的知見に基づいて、乳がんを有することが明らかに同定されており、そしていずれも、手術前に化学療法または放射線療法を受けていなかった。Ｆｂｘｗ７　ｍＲＮＡの測定のため、静脈カテーテルを通じた末梢血の収集を、全身麻酔下にある患者から、手術直前に行った。皮膚細胞による混入を回避するため、末梢血の最初の１．０ｍｌを廃棄した；次の１．０ｍｌを、総ＲＮＡの抽出のため、４．０ｍｌのＩｓｏｇｅｎ－ＬＳ（ニッポンジーン）と混合した。
1.2  マウス。
　ｌｏｘＰ導入Ｆｂｘｗ７アレルに関してホモ接合性であるマウス（Ｆｂｘｗ７F/Fマウス）（前掲非特許文献23）を、Ｍｘ１－Ｃｒｅトランスジェニックマウス（43）と交配し、そして生じた子孫において、体重グラムあたり２０μｇのポリイノシン酸：ポリシチジン酸［ポリ（Ｉ：Ｃ）］（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）で、１日ごとに全部で６回腹腔内注射することによって、ｌｏｘＰ導入アレルの欠失を誘導した。ｌｏｘＰ導入Ｆｂｘｗ７アレルのエクソン５の欠失を、先に記載されるように、ゲノムＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析（前掲非特許文献23）によって確認した。Ｆｂｘｗ７F/Fマウスをまた、ＲｂｐＪκF/F（44）またはｃ－ＭｙｃF/F（45）マウス、あるいはＬｃｋ－Ｃｒｅ（46）、ＬｙｓＭ－Ｃｒｅ（47）、ＣＤ１９－Ｃｒｅ（48）、ＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2（49）、またはＣＡＧ－ＥＧＦＰ（50）トランスジェニックマウスとも交配した。
1.3  骨髄移植。
　Ｃ５７ＢＬ／６または他のレシピエントマウス（８週齢）に致死用量（１１Ｇｙ）のγ線を照射し、そして尾静脈を通じて、８週齢のＣＡＧ－ＥＧＦＰ、ＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｆｂｘｗ７F/F、またはＣＡｇ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７F/Fマウスから単離したＢＭ細胞（１００μｌのリン酸緩衝生理食塩水中の２．０ｘ１０6）を注入した。移植２ヶ月後、レシピエントに、上述のようにポリ（Ｉ：Ｃ）を注入して、ｌｏｘＰ導入Ｆｂｘｗ７アレルを欠失させ、そして最後のポリ（Ｉ：Ｃ）注入の３日後、これらに、以下に記載するように、Ｂ１６Ｆ１０、ＬＬＣ、またはＥ０７７１細胞を注入した。ＢＭ移植後の各月、ならびに肺切開時点で、フローサイトメトリーにより、レシピエントの末梢血細胞をキメラ現象に関して調べた。
1.4  腫瘍転移アッセイ。
　リン酸緩衝生理食塩水中のＢ１６Ｆ１０（２．０ｘ１０5）、Ｂ１６Ｆ１（２．０ｘ１０5）、またはＬＬＣ（５．０ｘ１０5）細胞の懸濁物を、８～１１週齢の宿主マウスの尾静脈内に注入した。２週間後、動物を屠殺し、そして肺を取り除き、そしてブアン溶液または４％パラホルムアルデヒド中で固定した。ＮＩＨ　Ｉｍａｇｅ　Ｊソフトウェアを用いて、可視Ｂ１６Ｆ１０腫瘍コロニーでの肺占有を分析した。Ｅ０７７１細胞（５．０ｘ１０5）を乳房脂肪体内に皮下注入した。ノギスを用いて腫瘍体積（ｍｍ3）を測定し、そして（Ｗ2ｘＬ）／２として計算する、式中、Ｗは幅でありそしてＬは長さである。ｔｄＴｏｍａｔｏの安定発現のため、Ｅ０７７１細胞を、Ｍｙｃエピトープタグ化ｔｄＴｏｍａｔｏをコードするレンチウイルスに、２日間感染させた。プロパゲルマニウム（３－オキシゲミルプロピオン酸（ｏｘｙｇｅｍｙｌｐｒｏｐｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）ポリマー）は、三和化学研究所（日本・名古屋）によって寄贈され、そしてマウスには、がん細胞注射の１日前に始まり、０．００５％プロパゲルマニウムを含まないか、またはこれを補充した、正常固形飼料を与えた。実験をランダム化した。研究者は、動物研究における実験中、盲検化された。
1.5  細胞培養。
　Ｂ１６Ｆ１０（東北大学細胞資源センターによって提供）、ＬＬＣ（東北大学細胞資源センターによって提供）、Ｂ１６Ｆ１（九州大学、Ｓ．　Ｏｋａｎｏによって寄贈）、およびＥ０７７１細胞（ＣＨ３　ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓより購入）を、１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、２ｍＭ　Ｌ－グルタミン、および非必須アミノ酸（１０ｍｌ／ｌ、Ｇｉｂｃｏ）を補充したＲＰＭＩ　１６４０培地（Ｓｉｇｍａ）中で維持した。８～１０週齢のマウスの脛骨および大腿骨から収集したＢＭより、ＢＭＳＣを単離し、そしてこれらを、１０％ウシ胎児血清、１０％ウマ血清、２ｍＭ　Ｌ－グルタミン、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補充したＲＰＭＩ　１６４０培地中で培養した。２４時間後、非接着細胞を取り除き、そして３日ごとに培地を補充しながら、接着細胞を維持した。ｌｏｘＰ導入Ｆｂｘｗ７アレルを欠失させるため、ＢＭＳＣを１０μＭタモキシフェン（Ｓｉｇｍａ）で２日間処理した。これらをまた、ＤＡＰＴ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）でも２日間処理して、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を阻害した。先に記載されるように、胎性期第１３．５日に胚からＭＥＦを調製し、そして維持し（51）、そしてｌｏｘＰ導入Ｆｂｘｗ７アレルを欠失させるため、これらを２μＭタモキシフェン（Ｓｉｇｍａ）で２日間処理した。
1.6  フローサイトメトリー。
　乳がん患者の末梢血細胞をソーティングするため、本発明者らは、再発乳がんおよび転移を伴う４人の患者からヘパリン処理末梢血６ｍｌを得た。１８００ｒｐｍ、４℃で２５分間のＦｉｃｏｌｌ（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）密度遠心分離によって、血液から単核細胞を単離した。１ｘＢＤ　Ｐｈａｒｍ　Ｌｙｓｅ緩衝液（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で赤血球を溶解した。次いで、細胞ソーターＳＨ８００（Ｓｏｎｙ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）での分析のため、ＣＤ４５に対する抗体（ＨＩ１００、Ｓｏｎｙ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）およびＣＤ３２６に対する抗体（９Ｃ４、Ｓｏｎｙ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で、単離細胞を染色した。マウスＢＭおよび末梢血の分析のため、溶血緩衝液（０．１４Ｍ　ＮＨ4Ｃｌおよび０．０１Ｍ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５）で赤血球を溶解し、そしてＦ４／８０に対する抗体（ＢＭ８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ１１５に対する抗体（ＡＦＳ９８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｍａｃ１に対する抗体（Ｍ１／７０、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｌｙ６Ｇに対する抗体（１Ａ８、ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＬｙ６Ｃに対する抗体（ＡＬ－２１、ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で残りの細胞を染色した。染色した細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で分析した。
1.7  組織学的、免疫組織化学的、および免疫組織蛍光分析。
　ヘマトキシリン－エオジン染色のため、先に記載されるように、組織をブアン溶液中で固定し、パラフィン中に包埋し、厚さ４μｍの連続切片に切り、そして染色した（52）。免疫組織化学分析のため、九州大学別府病院（日本・別府）から得た乳房組織マイクロアレイスライドを、Ｆｂｘｗ７に対する抗体（３Ｄ１、Ａｂｎｏｖａ）で、そしてＥｎｖｉｓｉｏｎ免疫染色系（ＤＡＫＯ）を使用して染色した。切片をヘマトキシリンで対比染色した。乳がん領域および周囲の間質の免疫組織化学染色強度を、陰性（低）または陽性（高）としてスコア付けした。免疫組織蛍光分析のため、先に記載されるように、組織を０．１Ｍリン酸緩衝液中の４％パラホルムアルデヒドで固定し、３０％スクロース中に一晩包埋し、クリオスタットを用いて１５μｍの厚さで切片作製し、そして染色した（52）。ＴＣＲβに対する抗体（Ｈ５７－５９７）、Ｂ２２０に対する抗体（ＲＡ３－６Ｂ２）、Ｍａｃ１に対する抗体（Ｍ１／７０）、およびｃ－Ｋｉｔに対する抗体（２Ｂ８）をｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから得て；Ｌｙ６Ｃに対するもの（ＡＬ－２１）、Ｌｙ６Ｇに対するもの（１Ａ８）、そしてＶＥ－カドヘリンに対するもの（１１Ｄ４．１）をＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得て；Ｆ４／８０に対するもの（Ａ３－１）をＳｅｒｅｔｅｃから得て；そしてＦＳＰに対するもの（Ｄ９Ｆ９Ｄ）をＣｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから得た。各々、１：２０００の希釈のＡｌｅｘａ　６３３またはＡｌｅｘａ　４０５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ）で標識した二次抗体で、免疫複合体を検出した。切片をＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）中にマウントし、そしてレーザー走査型共焦点顕微鏡（ＬＳＭ７００、Ｃａｒｌ　Ｚｅｉｓｓ）で調べた。
1.8  イムノブロット分析。
　溶解緩衝液［５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、０．５％　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００、１０ｍＭ　ＮａＦ、１０ｍＭ　Ｎａ4Ｐ2Ｏ7、０．４ｍＭ　Ｎａ3ＶＯ4、０．４ｍＭ　ＥＤＴＡ、ロイペプチン（２０μｇ／ｍｌ）、アプロチニン（１０μｇ／ｍｌ）、１ｍＭフェニルメチルスルホニルフロリド］を用いて、ＢＭＳＣから総タンパク質抽出物を調製した。先に記載されるように、抽出物（タンパク質２０μｇ）をイムノブロット分析に供した（53）。Ｎｏｔｃｈ３に対する抗体（Ｍ－２０）およびＫＬＦ５に対する抗体（ＢＴＥＢ２、Ｈ－３００）をＳａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから得て；切断Ｎｏｔｃｈ１に対するもの（Ｄ１Ｅ１１）、Ｎｏｔｃｈ２に対するもの（Ｄ７６Ａ６）、ｃ－Ｊｕｎに対するもの（６０Ａ８）、ｐ１００－ｐ５２に対するもの（カタログ番号４８８２）、およびｍＴＯＲに対するもの（７Ｃ１０）は、Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙからであり；ｃ－Ｍｙｃに対するものはＡｂｃａｍからであり；そしてグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ、装填対照）に対するものはＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからであった。
1.9  レトロウイルス発現系。
　赤血球凝集素エピトープタグ化マウスＮＩＣＤ１、マウスｃ－Ｍｙｃ、マウスＫＬＦ５、またはＦＬＡＧエピトープタグ化Ｆｂｘｗ７α（またはそのΔＦ突然変異体）をコードする相補ＤＮＡを、ｐＭＸ－ｐｕｒｏ（東京大学、Ｔ．　Ｋｉｔａｍｕｒａにより寄贈）内にサブクローニングし、そして生じたベクターを用いて、Ｐｌａｔ　Ｅ細胞（54）をトランスフェクションし、そしてそれによって組換えレトロウイルスを生成した。ＢＭＳＣを組換えレトロウイルスに感染させ、そしてピューロマイシン（１０μｇ／ｍｌ）を含有する培地中での選択に供した。各組換えタンパク質を安定発現している細胞を、実験のためにプールした。
1.10　ＲＮＡｉ。
　ｓｈＲＮＡベクターの構築およびＲＮＡｉを、先に記載されるように行った（55）。マウスＣＣＬ２をターゲティングする配列は、５’－ＧＧＴＡＴＴＣＣＣＴＴＴＣＡＴＧＡＡＴＡＣ－３’（SEQ ID NO: 1）であった。ＥＧＦＰのＲＮＡｉベクターを対照として用いた。
　ＲＴおよびリアルタイムＰＣＲ分析。マウス細胞からＩｓｏｇｅｎ（ニッポンジーン）を用いて単離した総ＲＮＡ（１μｇ）を、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ逆転写キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて逆転写（ＲＴ）に供し、そして生じたｃＤＮＡを、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓリアルタイムＰＣＲ系（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）中のＳＹＢＲ緑色ＰＣＲマスターミックスおよび特異的プライマーを用いてリアルタイムＰＣＲ分析に供した。ＰＣＲプライマーの配列（それぞれ、センスおよびアンチセンス）は、ＣＣＬ２に関しては、５’－ＣＡＧＣＡＧＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＡＡＡＧ－３’（SEQ ID NO: 2）および５’－ＴＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＡＴＴＣＣＴＴＣＴＴＧ－３’（SEQ ID NO: 3）、そしてＲｐｓ１８に関しては、５’－ＧＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧ－３’（SEQ ID NO: 4）および５’－ＣＴＧＣＧＧＣＣＡＧＴＧＧＴＣＴＴＧ－３’（SEQ ID NO: 5）であった。ＣＣＬ２　ｍＲＮＡの量を、Ｒｐｓ１８　ｍＲＮＡの量によって標準化した。ヒト臨床標本に関しては、Ｉｓｏｇｅｎ－ＬＳ（ニッポンジーン）を用いて細胞から単離した総ＲＮＡ（２．７μｇ）を、モロニー白血病ウイルス逆転写酵素（ＢＲＬ）を用いたＲＴに供し、そして生じたｃＤＮＡを、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ系（Ｒｏｃｈｅ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）中のＳＹＢＲ－緑色Ｉ色素および特異的プライマーを用いたリアルタイムＰＣＲに供した。ＰＣＲプライマーの配列（それぞれ、センスおよびアンチセンス）は、Ｆｂｘｗ７に関しては５’－ＣＣＴＣＣＡＧＧＡＡＴＧＧＣＴＡＡＡＡＡ－３’（SEQ ID NO: 6）および５’－ＡＡＧＡＧＴＴＣＡＴＣＴＡＡＡＧＣＡＡＧＣＡＡ－３’（SEQ ID NO: 7）、そしてＧＡＰＤＨに関しては５’－ＡＧＣＣＡＣＡＴＣＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣ－３’（SEQ ID NO: 8）および５’－ＧＣＣＣＡＡＴＡＣＧＡＣＣＡＡＡＴＣＣ－３’（SEQ ID NO: 9）であった。Ｆｂｘｗ７　ｍＲＮＡの量を、ＧＡＰＤＨ　ｍＲＮＡの量によって標準化した。
1.11　抗体アレイおよびＥＬＩＳＡ。
　ケモカインおよびサイトカインの血清濃度を、プロテオーム・プロファイラー・キット（ＡＲＹ００６およびＡＲＹ０１５、Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析した。マウスまたはヒト血清およびマウスＢＭＳＣまたはＭＥＦ培養上清におけるＣＣＬ２レベルもまた、ＥＬＩＳＡ（Ｒｅａｄｙ－ＳＥＴ－Ｇｏキット、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって測定した。ＢＭＳＣまたはＭＥＦによるＣＣＬ２放出の測定のため、細胞（２４ウェルプレート中、ウェルあたり１×１０4）を４８時間培養した。
1.12　ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイ。
　マウスＣＣＬ２遺伝子のプロモーター領域およびその欠失突然変異体を、ホタル（ｆｉｒｅｆｌｙ）・ルシフェラーゼをコードするｐＧＬ２－Ｂａｓｉｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）内にサブクローニングした。ＦｕＧＥＮＥ　ＨＤ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、レニラ属（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼに関するプロモーター構築物（０．２５μｇ）および内部対照ベクターｐＲＬ－ＴＫ（０．２５μｇ、Ｐｒｏｍｅｇａ）でトランスフェクションする２４時間前に、ＢＭＳＣを２４ウェルプレート中、ウェルあたり２ｘ１０4の密度で植え付けた。トランスフェクションの４８時間後、二重ルシフェラーゼレポーターアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＬｕｍａｔ　ＬＢ９５０７ルミノメーター（ＥＧ＆Ｇ　Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を用いて、ルシフェラーゼ活性を測定した。ホタル・ルシフェラーゼ活性を、レニラ属ルシフェラーゼのものによって標準化した。
1.13　ＣｈＩＰ。
　ＢＭＳＣ（２ｘ１０7）を、ＲＰＭＩ１６４０培地中の０．５％ホルムアルデヒドで５分間固定した。最終濃度０．１２５Ｍまでグリシンを添加することによって、固定を終結させ、そして次いで、細胞を氷冷リン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、５ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ－ＮａＯＨ（ｐＨ８．０）、２００ｍＭ　ＫＣｌ、１ｍＭ　ＣａＣｌ2、１．５ｍＭ　ＭｇＣｌ2、５％スクロースおよび０．５％ノニデットＰ－４０を含有する２ｍｌの溶解緩衝液で溶解して、そして次いで、小球菌ヌクレアーゼ（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ）に曝露して、１～５のヌクレオソームを含む、クロマチン断片を得た。ヌクレオソームを、２０μｌのＤｙｎａｂｅａｄｓ－プロテインＧ（ベリタス、日本）にコンジュゲート化された、Ｎｏｔｃｈ１に対する抗体（Ｃ－２０、Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）２μｇと、４℃で６時間インキュベーションした。免疫沈降物質を洗浄し、クロマチンを溶出させ、そして架橋を逆転させた。フェノール－クロロホルム抽出、その後、イソプロパノールを用いた沈殿によって、ＤＮＡ断片を精製し、そして次いで、これらを、ＳＹＢＲセレクトＰＣＲ系（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いたリアルタイムＰＣＲ分析のテンプレートとして用いた。ＰＣＲプライマーの配列（それぞれ、センスおよびアンチセンス）は、ＣＣＬ２（遠位）に関しては５’－ＧＣＴＣＡＣＡＴＴＣＣＡＧＣＴＡＡＡＴＡＴＣＴＣＴ－３’（SEQ ID NO: 10）および５’－ＧＡＧＴＴＡＴＴＧＴＣＴＧＴＴＴＣＣＣＴＣＴＣＡ－３’（SEQ ID NO: 11）、そしてＣＣＬ２（近位）に関しては５’－ＴＴＡＣＴＧＧＧＧＧＴＣＣＴＴＴＣＣＣＡ－３’（SEQ ID NO: 12）および５’－ＧＧＡＧＴＧＧＣＴＣＴＧＣＴＴＴＣＡＣＴ－３’（SEQ ID NO: 13）であった。クロマチン濃縮の度合いを投入量によって標準化した。
1.14　統計分析。
　示すように、定量的データを統計分析に供した。＜０．０５のＰ値は、統計的に有意であると見なされた。
1.15　研究認可。
　すべての動物実験は、九州大学の施設動物飼育および使用委員会によって認可され、そして動物飼育は、施設のガイドラインにしたがった。すべての臨床試料は、国立病院機構九州がんセンターの倫理委員会（第２００１－１５号；２００１年１０月１６日）、九州大学倫理委員会（第３０２号；２００６年２月９日）によって分析に関して認可された。本研究で分析したがん患者すべてから、書面のインフォームドコンセントを得た。
2.　結果
2.1  マウスにおいて、骨髄（ＢＭ）におけるＦｂｘｗ７の欠失は、がん転移を促進する。
　Ｆｂｘｗ７の大部分の研究は、腫瘍細胞におけるその機能に重点を置いてきており（28～30）、腫瘍発展に関連して、宿主微小環境におけるこのタンパク質の役割に関してはほとんど知られていない。宿主微小環境におけるＦｂｘｗ７の役割を調べるため、本発明者らは、ＢＭにおいて選択的にｌｏｘＰ導入（ｆｌｏｘｅｄ）（Ｆ）Ｆｂｘｗ７アレルを欠失させるため、ポリイノシン酸：ポリシチジン酸［ポリ（Ｉ：Ｃ）］を注入したＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７F/Fマウス（以後、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスと称する）の尾静脈内に、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞をトランスファーした。黒色腫細胞の肺への転移頻度は、対照マウスに比較して、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスで顕著に増加しており（図１、ＡおよびＢ）、そしてこの転移増加には、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスの早期の死亡が伴った（図１Ｃ）。ルイス肺がん腫（ＬＬＣ）細胞（図１、ＤおよびＥ、ならびに図９、Ａ～Ｃ）または低転移性潜在的Ｂ１６Ｆ１黒色腫細胞（図１、ＦおよびＧ、ならびに図９、Ｄ～Ｆ）をこれらのマウスの尾静脈内に注入した際にも、同様の結果が得られた。したがって、ＢＭにおけるＦｂｘｗ７のレベルは、マウスにおけるがん転移の重要な決定要因であることが見出された。
　ＢＭにおける特異的なＦｂｘｗ７の消失が、実際にＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおける転移増進の原因であるのかどうかを調べるため、本発明者らは、ＣＡＧプロモーターの調節下の増進緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）の導入遺伝子もまた有するＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７F/FまたはＦｂｘｗ７F/F（対照）マウス由来のＢＭ細胞を、放射線照射したＣ５７ＢＬ／６マウスに移植した（図１Ｈ）。レシピエントマウスには、続いて、ポリ（Ｉ：Ｃ）を注射して、Ｆｂｘｗ７のｌｏｘＰ導入アレルを欠失させ、そしてポリ（Ｉ：Ｃ）注射３日後に、がん細胞（Ｂ１６Ｆ１０またはＬＬＣ）を、これらのマウスにトランスファーした。肺への転移は、対照細胞を移植されたものよりも、ＣＡＧ－ＥＧＦＰ／Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７F/F　ＢＭ細胞を移植されたマウスにおいて、より顕著であった（図１、ＩおよびＪ、ならびに図９、ＧおよびＨ）。対照的に、ＣＡＧ－ＥＧＦＰマウス由来のＢＭの移植に供し、そしてポリ（Ｉ：Ｃ）を注射したＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７F/Fマウスにおいては、転移のこうした増進はまったく見られなかった（図１、Ｋ～Ｍ）。これらの結果はしたがって、ＢＭにおけるＦｂｘｗ７の喪失が、実際に、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスで観察される転移の頻度増加の原因であることを確認した。
　本発明者らはまた、Ｅ０７７１マウス乳がん細胞の同所性移植後の、対照およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおける転移性腫瘍増殖も調べた。原発性腫瘍の増殖は、第１７日および第２０日に、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおいて促進されたが、増殖促進の効果は、より後の時期には観察されなかった（図２、ＡおよびＢ）。肺への転移は、突然変異マウスにおいて、顕著に増進された（図２、ＣおよびＤ）。肺重量（図２Ｄ）に加え、肺における総腫瘍面積（図２Ｅ）、腫瘍小結節数（図２Ｆ）、および小結節あたりの平均面積（図２Ｇ）は、対照に関するよりも、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスに関してより高かった。本発明者らは、次に、このモデルにおいて、転移性腫瘍の進行を監視した。細胞移植の１２日後、肺においていかなる腫瘍細胞も検出されなかったが、第１６日、対照およびＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウス両方において、Ｅ０７７１細胞の転移が見られた（図２、Ｈ～Ｊ）。腫瘍小結節数および小結節あたりの平均面積は、移植の１６日後、２つの遺伝子型間で異ならなかったが、第２０日には、対照におけるよりもＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおいて、有意により高かった。転移前（ｐｒｅｍｅｔａｓｔａｔｉｃ）ニッチは、ＢＭＤＣのクラスターによって形成されることが先に示された（27）が、本発明者らは、こうしたＥＧＦＰ+クラスターが、ＥＧＦＰ標識Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δまたは対照ＢＭ細胞で再構成した野生型（ＷＴ）マウスの肺において、第０日（Ｅ０７７１細胞移植前）に、すでに存在していたことを見出した（図１０Ａ）。これらのクラスターの数は、Ｅ０７７１細胞移植後の時間によって実質的に変化はなく、そして２つの遺伝子型間で異ならなかった（図１０Ｂ）。対照的に、肺における分散浸潤ＢＭＤＣの数は、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭ細胞で再構成したマウスにおいて特異的に、腫瘍細胞移植後に増加した（図１０、ＡおよびＣ）。Ｔ細胞に関するＴ細胞受容体β（ＴＣＲβ）（図３Ａ）、Ｂ細胞に関するＢ２２０（図３Ｂ）、Ｇ－ＭＤＳＣに関するＬｙ６Ｇ（図３Ｃ）、Ｍｏ－ＭＤＳＣに関するＬｙ６Ｃ（図３Ｄ）、単球－マクロファージに関するＦ４／８０（図３Ｅ）、間質細胞に関する線維芽細胞特異的タンパク質（ＦＳＰ）（図３Ｆ）、骨髄細胞に関するＭａｃ１（図１１Ａ）、ＨＰＣに関するｃ－Ｋｉｔ（図１１Ｂ）、およびＥＰＣに関するＶＥ－カドヘリン（図１１Ｃ）に対する抗体を用いた免疫蛍光分析によって、Ｌｙ６Ｃ+、Ｆ４／８０+、およびＭａｃ１+細胞の数が腫瘍周囲ＢＭＤＣの間で増加している一方、非周囲ＢＭＤＣの間では、Ｂ２２０+細胞の数が中程度に増加しているのみであることが明らかになった。これらの結果は、Ｍｏ－ＭＤＳＣまたはより分化したマクロファージの集積が、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおける転移の促進の原因となっている可能性があることを示唆した。
　本発明者らはまた、腫瘍細胞移植の２日前から３２日後までの多様な時点で、マウスの末梢血における細胞を特徴付けた。末梢血におけるＭａｃ１+Ｌｙ６Ｇ-Ｌｙ６Ｃ+　Ｍｏ－ＭＤＳＣ（図１０Ｄ）およびＭａｃ１+Ｆ４／８０+ＣＤ１１５+単球－マクロファージ（図１０Ｅ）の頻度は、腫瘍細胞移植前には、対照マウスに比較して、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスで増加していたが、この時点では、Ｍａｃ１+Ｌｙ６Ｇ+Ｌｙ６Ｃ+未成熟ＭＤＳＣの頻度は、２つの遺伝子型間で異ならなかった（図１０Ｆ）。しかし、末梢血におけるこれらの後者の細胞の頻度は、第１６日～第２４日の間で、対照マウスにおけるよりもＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおいて、より大きな度合いに一過性に増加した。対照的に、ＢＭにおけるＭａｃ１+Ｌｙ６Ｇ-Ｌｙ６Ｃ+　Ｍｏ－ＭＤＳＣの頻度は、第０日（図１０Ｇ）または第２０日（図１０Ｈ）で、２つの遺伝子型間で異ならなかった。総合すると、これらの結果は、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおける肺への転移の初期には、ＢＭＤＣの浸潤増加が、ＢＭにおけるＭｏ－ＭＤＳＣおよびマクロファージの分化よりも、これらの細胞の遊走または補充の増加を示す可能性があることを示唆した。
2.2  骨髄においてＦｂｘｗ７を欠くマウスでは、血清ケモカインレベルが増加する。
　Ｆｂｘｗ７欠損によって誘導されるＭｏ－ＭＤＳＣおよびマクロファージの可動化増加の原因となる機構を調べるため、本発明者らは、Ｅ０７７１細胞移植前および移植後の多様なサイトカインの血清濃度を調べた。サイトカインアレイ分析によって、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１２（ＭＣＰ－５としてもまた知られる）、およびケモカインＣ－Ｘ－Ｃモチーフリガンド１３（ＣＸＣＬ１３、Ｂリンパ球走化性因子またはＢＬＣとしてもまた知られる）のレベルが、Ｅ０７７１細胞移植前および移植後の両方で、対照マウスに比較して、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおいて２倍以上増加することが明らかになった（図４Ａおよび図１２）。ＣＣＬ２およびＣＣＬ１２はどちらも、共通の受容体ＣＣＲ２に結合することによって、単球－マクロファージの遊走を誘導する。ＣＣＬ１２は、主にマクロファージから分泌されるが、ＬｙｓＭ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７F/Fマウスのこれらの細胞においてＦｂｘｗ７を消失させても転移頻度には影響がなく（図１３、ＡおよびＢ）、ＣＣＬ１２が転移の促進に大きくは関与していないことが示唆された。本発明者らはしたがって、ＣＣＬ２に集中し、そしてＣＣＬ２の血清濃度が、Ｅ０７７１細胞移植前および移植後の両方で、対照マウスにおけるよりＭｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおいて、より大きいことを見出した（図４Ｂ）。
　Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおいて見られる転移増進が、ＣＣＬ２－ＣＣＲ２経路に依存するかどうかを調べるため、本発明者らは、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/ΔマウスをＣＣＲ２アンタゴニスト（プロパゲルマニウム）で処置した。Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/ΔマウスにおけるＢ１６Ｆ１０またはＥ０７７１細胞転移の度合いは、ＣＣＲ２アンタゴニストの投与によって、有意に減弱した（図４、Ｃ～Ｈ）。ＥＧＦＰ標識Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭ細胞で再構成し、そしてＥ０７７１細胞を注入したＷＴマウスの肺におけるＥＧＦＰ+Ｌｙ６Ｃ+細胞の頻度もまた、プロパゲルマニウムでの処置によって有意に減少した（図４Ｈ）。予期せぬことに、肺における腫瘍小結節の数は、処置によって影響を受けず（図４Ｆ）、一方、各小結節のサイズは、処置マウスにおいて顕著に減少した（図４Ｇ）。総合すると、これらの結果は、Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＤＣによるＣＣＬ２の産生増加が、肺にすでに転移していた腫瘍の増殖を促進することを示唆した。
2.3  ＣＣＬ２遺伝子は、Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＳＣにおいて活性化される。
　本発明者らは次に、ＢＭのどの細胞が、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおいて、転移の促進およびＣＣＬ２血清濃度の増加の原因となるかを調べた。これらの実験のため、本発明者らは、異なる系譜でＦｂｘｗ７に欠損を持つマウスを利用した。Ｃｒｅ遺伝子が活性化されて、顆粒球－マクロファージ系譜においてのみ、ｌｏｘＰ導入Ｆｂｘｗ７アレルが欠失している、ＬｙｓＭ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７-/Δマウスは、対照マウスに比較して、転移の頻度の増加を示さなかった（図１３、ＡおよびＢ）。さらに、Ｌｃｋ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウス（Ｆｂｘｗ７のＴ細胞特異的欠失）もまたＣＤ１９－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウス（Ｆｂｘｗ７のＢ細胞特異的欠失）もいずれも、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスで見られるものと類似の転移増進を示さなかった（図１３、Ｃ～Ｆ）。これらの結果は、骨髄系譜（顆粒球およびマクロファージ）もまたリンパ系譜（Ｔ細胞およびＢ細胞）もいずれも、ＢＭにおけるＦｂｘｗ７の消失による転移の促進には関与しないことを示唆した。
　ＣＣＬ２の血清レベル（図１４Ａ）もまた末梢血におけるＭａｃ１+Ｆ４／８０+単球－マクロファージの頻度（図１４Ｂ）もいずれも、ＬｙｓＭ－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７-/Δマウスおよび対照マウスの間で異ならず、単球－マクロファージがＦｂｘｗ７喪失に反応して産生されるＣＣＬ２の主要供給源ではないことが示唆された。本発明者らは、ＦＳＰ+　ＢＭＳＣが、Ｅ０７７１細胞の同所性移植後、マウス肺において、転移性腫瘍細胞およびＭｏ－ＭＤＳＣと共存することを見出した（図５Ａ）。以前、ＢＭＳＣがＣＣＬ２を分泌し、そしてＢＭからの単球の遊出に寄与することが示されたことを考慮し（31、32）、本発明者らは、本発明者らのモデルにおいて、ＢＭＳＣがＣＣＬ２産生の主要供給源であるという仮説を立てた。この仮説を試験するため、本発明者らは、ＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７F/Fマウス（または対照Ｆｂｘｗ７F/Fマウス）のＢＭからＢＭＳＣを単離し、そしてこれらを１０μＭタモキシフェンで処理して、ｌｏｘＰ導入Ｆｂｘｗ７アレルの欠失を誘導した（図５Ｂ）。ＣＣＬ２　ｍＲＮＡの存在量は、対照細胞と比較して、ＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭＳＣで増加していた（図５Ｃ）。ＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭＳＣから培地へ放出されるＣＣＬ２の量もまた、対照細胞から放出されるものよりも実質的に多かった（図５Ｄ）。さらに、ＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭＳＣにＷＴ　Ｆｂｘｗ７α　ｃＤＮＡを導入すると、ＣＣＬ２　ｍＲＮＡの存在量の顕著な減少が生じる一方、Ｆボックスドメインを欠くＦｂｘｗ７αの突然変異型（ΔＦ）のｃＤＮＡを導入してもこうした効果はなく（図５Ｅ）、Ｆｂｘｗ７が、ＢＭＳＣにおいてＣＣＬ２産生を負に制御することが示唆された。
　ＢＭＳＣによるＣＣＬ２産生増加が、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおけるがん転移の促進に関与するかどうかを調べるため、本発明者らは、小分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）仲介性ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によって、ＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＥＲT2／Ｆｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭＳＣからＣＣＬ２を枯渇させ（図５Ｆ）、そして次いでこれらの細胞を、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞と一緒に、尾静脈を通じてレシピエントマウス内にトランスファーした。ＢＭＳＣは、移植の４ヶ月後であっても、骨髄および肺などの多くの組織で検出されることが示された（33）。レシピエントマウスにおける肺転移の度合いは、対照ＢＭＳＣの同時注入後に見られるものと比較して、黒色腫細胞とＦｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭＳＣの同時注入によって増加した（図５、ＧおよびＨ）。しかし、Ｆｂｘｗ７欠失のこの効果は、ＢＭＳＣにおけるＣＣＬ２の枯渇によって無効になり、Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＳＣによるＣＣＬ２産生増加が、転移促進に寄与していることが示唆された。
2.4  Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＳＣにおけるＮｏｔｃｈ集積は、ＣＣＬ２産生増加によって転移を促進する。
　イムノブロット分析によって、調べたＦｂｘｗ７基質のうち、Ｎｏｔｃｈ１細胞内ドメイン（ＮＩＣＤ１）、ｃ－Ｍｙｃ、およびＫＬＦ５が、Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＳＣにおいて、高レベルに集積することが明らかになった（図６Ａ）。ＷＴ　ＢＭＳＣにおいて、ＮＩＣＤ１を強制的に発現させた結果、ＣＣＬ２　ｍＲＮＡ存在量およびＣＣＬ２遺伝子プロモーター活性の両方が顕著に増加し、一方、ｃ－ＭｙｃまたはＫＬＦ５のものはこうした効果を持たなかった（図６、ＢおよびＣ）。γ－セクレターゼ阻害剤Ｎ－［Ｎ－（３，５－ジフルオロフェンアセチル）－Ｌ－アラニル］－Ｓ－フェニルグリシンｔ－ブチルエステル（ＤＡＰＴ）に曝露することによって、Ｆｂｘｗ７欠損ＢＭＳＣにおけるＮｏｔｃｈシグナル伝達を阻害した結果、ＣＣＬ２　ｍＲＮＡ量の濃度依存性減少が生じた（図６Ｄ）。マウスＣＣＬ２遺伝子のプロモーターは、Ｎｏｔｃｈ結合に関する４つのコンセンサス配列を含有し（34）（図６Ｅ）、そしてこのプロモーターのＷＴまたは突然変異型のルシフェラーゼレポーターアッセイによって、完全プロモーター活性のためには、最初の２つの上流要素が必要であることが示された（図６Ｆ）。この発見は、Ｆｂｘｗ７Δ/Δ　ＢＭＳＣにおいて、ＮＩＣＤ１がＣＣＬ２遺伝子プロモーターの遠位領域と会合することを示すクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）分析の結果と一致した（図６Ｇ）。総合すると、これらの観察は、ＢＭＳＣにおけるＮｏｔｃｈ－ＣＣＬ２経路が、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおける転移促進に寄与することを示唆した。
　本発明者らは、この知見をさらに、遺伝子分析によって評価した。Ｎｏｔｃｈ依存性トランス活性化に必須の補因子であるＲＢＰ－Ｊκのさらなる消失は、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおいて見られる転移増進の顕著な減弱を生じた（図６、ＨおよびＩ）。対照的に、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおけるｃ－Ｍｙｃの不活性化は、こうした効果を持たなかった（図６、ＪおよびＫ）。ＲＢＰ－Ｊκのさらなる消失はまた、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/ΔマウスにおいてＣＣＬ２の血清濃度を対照レベルまで減少させたが、ｃ－Ｍｙｃの消失ではこうした現象は起こらなかった（図６Ｌ）。
2.5  宿主微小環境におけるＦＢＸＷ７の低発現は、乳がん患者における劣った予後と関連する。
　マウスにおける観察をヒトにも広げるため、本発明者らは、乳がん標本の末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量を測定し、そしてＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量および予後の間の関連を調べた。末梢血においてＦＢＸＷ７が低発現である個体の予後は、対応するＦＢＸＷ７高群におけるものより、有意に劣っており（図７、ＡおよびＢ）、本発明者らのモデルと一致した。これらの２つの群間の予後の相違は、エストロゲン（ＥＲ）およびプロゲステロン（ＰＲ）受容体の両方ならびにＨｅｒ２に関して三重陰性である腫瘍を持つ患者に（図７、Ｃ～Ｅ）、あるいは高い組織学的グレードまたは低いステージの腫瘍を持つ患者に（図１５、Ａ～Ｇ）、分析を限定した際に、さらにより顕著であった。ＣＤ４５-ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）+循環腫瘍細胞の頻度は、最大で、総血液単核細胞の０．００３％であり（図１５Ｈ）、末梢血において、こうした細胞のＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの総存在量への寄与は無視できる程度であることが示唆された。
　原発性腫瘍病変におけるＦｂｘｗ７の免疫組織化学的分析（図７Ｆ）によって、末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量が、腫瘍細胞におけるＦｂｘｗ７発現と有意には相関しない（図７Ｇ）が、周囲の間質細胞におけるものとは非常に相関する（図７Ｈ）ことが明らかになった。これらの結果によって、末梢血におけるＦｂｘｗ７ある　ｍＲＮＡの存在量は、腫瘍細胞周囲の間質細胞におけるＦｂｘｗ７発現のマーカーでことが示唆された。本発明者らはまた、末梢血におけるＦｂｘｗ７　ｍＲＮＡの存在量の間で、負の相関が明らかであることも見出した（図７Ｉ）。ＣＣＬ２の高い血清レベルは、乳がん患者において、劣った予後と相関する（Ｓ．Ａ．およびＫ．Ｍ．、未公表データ）。これらのデータは、Ｆｂｘｗ７消失が、転移性腫瘍増殖を促進するＣＣＬ２の産生増加を生じさせるという本発明者らのモデルを裏付ける（図８）。
3.　考察
　Ｆｂｘｗ７遺伝子は、ヒトがんと関連する多くの対応する突然変異によって（前掲非特許文献22）、ならびに条件付きノックアウトマウスにおいて観察される腫瘍形成によって（前掲非特許文献23、24、26）立証されるように、強力な腫瘍サプレッサーである。Ｆｂｘｗ７の抗がん機能は、増殖促進性腫瘍性タンパク質、例えばｃ－Ｍｙｃ（前掲非特許文献9、10）、Ｎｏｔｃｈ（前掲非特許文献11、12、および35）、サイクリンＥ（前掲非特許文献14～16）、ｃ－Ｊｕｎ（前掲非特許文献17、18）、ＫＬＦ５（前掲非特許文献19、20）、およびｍＴＯＲ（前掲非特許文献21）、ならびに抗アポトーシス分子Ｍｃｌ－１（36、37）の両方の特異的ユビキチン化によって仲介されると考えられる。以前の研究の大部分は、腫瘍細胞自体におけるＦｂｘｗ７の腫瘍抑制的な役割に重点を置いてきた。推定上の腫瘍サプレッサーＣ／ＥＢＰδは、腫瘍細胞において、Ｆｂｘｗ７発現を阻害し、そしてｍＴＯＲのＦｂｘｗ７依存性分解の減弱を通じて、乳房腫瘍転移を促進することが示された（38）。本発明者らはここで、腫瘍抑制におけるＦｂｘｗ７機能の新規側面、すなわち、宿主微小環境においてがん転移を抑制するその役割を発見した。本発明者らのデータはまた、Ｆｂｘｗ７によるがん転移の抑制に関する機構的洞察も提供する。本発明者らは、Ｆｂｘｗ７の主要基質の１つであるＮｏｔｃｈが、がん発展に関して最もよく特徴付けられているケモカインの１つであるＣＣＬ２の遺伝子の転写を活性化することを見出した。乳がん患者においては、末梢血におけるＦＢＸＷ７の発現減少が、劣った予後と関連することを示す本発明者らのヒト臨床データは、マウスにおける本発明者らの実験結果と一致するようである。本発明者らは、したがって、宿主微小環境におけるＦｂｘｗ７－Ｎｏｔｃｈ－ＣＣＬ２軸ががん転移を制限することを提唱する。
　ＣＣＬ２は、腫瘍環境において、がん細胞および非がん細胞の両方から分泌されると考えられる。ヒトがん細胞をマウス内に移植する異種移植モデルにおいて、ヒトＣＣＬ２に特異的な抗体またはマウスＣＣＬ２に特異的な抗体の投与は、腫瘍増殖および転移を阻害し、腫瘍および宿主環境の両方から分泌されるＣＣＬ２が、腫瘍発展において重要な役割を果たすという知見を支持する（前掲非特許文献4、6）。がん細胞におけるＦｂｘｗ７－Ｎｏｔｃｈ１－ＣＣＬ２軸はまた、転移においても重要な役割を果たすようである。本発明者らはここで、末梢血におけるＦＢＸＷ７発現レベルが、乳がん患者における予後と関連することを示した。これらの結果は、したがって、ＦＢＸＷ７発現における体質的な（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ）変動が、予後の重要な決定要因でありうることを示唆する。本発明者らは、ＦＢＸＷ７発現レベルが、潜在的に、がん患者一般の強力な予後マーカーであり、そしてＣＣＬ２－ＣＣＲ２系のターゲティングが、がん転移防止への合理的なアプローチであることが立証されうることを提唱する。実際、本発明者らは、ＣＣＲ２アンタゴニスト、プロパゲルマニウムが、マウスにおいて、がん転移に対して顕著な阻害効果を有することを見出した。プロパゲルマニウムは、現在、Ｂ型肝炎ウイルス感染を有する個体の治療に臨床的に投与されており、そしてその長期安全性はよく立証されてきている。本発明者らの結果は、この薬剤を、ヒトにおいてがん転移を阻害する能力に関して評価することが正当であることを示唆する。
　本発明者らは、肺における腫瘍小結節数および小結節あたりの平均面積が、乳がん細胞の同所性移植に供した対照におけるよりも、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおいて、より大きいことを示した。しかし、予期せぬことに、腫瘍小結節数は、プロパゲルマニウムでの処置によっては影響を受けず、一方、各小結節のサイズおよび関連するＭｏ－ＭＤＳＣの頻度は、こうした処置によって顕著に減少した。総合すると、これらの結果は、肺におけるＭｏ－ＭＤＳＣのＣＣＬ２依存性浸潤が、ＣＸＣＬ１３（骨髄細胞上に発現される誘発受容体１、ＴＲＥＭ－１としてもまた知られる）、上皮増殖因子、ＣＸＣＬ２（マクロファージ炎症性タンパク質２－アルファまたはＭＩＰ－２αとしてもまた知られる）および血小板由来増殖因子－ＡＡなどの他の因子によって制御されうる肺への腫瘍細胞の補充よりも、むしろ、確立された転移性腫瘍の増殖に影響を及ぼすことを示唆する。これらのタンパク質の血清レベルは、Ｅ０７７１細胞移植後、対照と比較して、Ｍｘ１－Ｃｒｅ／Ｆｂｘｗ７Δ/Δマウスにおいて、２倍以上増加するかまたは減少した。Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおける腫瘍細胞生着の増加の原因となる分子機構を解明するには、さらなる研究が必要である。
　本研究において、Ｍｏ－ＭＤＳＣおよびマクロファージの転移性腫瘍病変内への浸潤は、Ｆｂｘｗ７欠損マウスにおいて、ＣＣＬ２などのケモカイン産生増加によって促進された。本発明者らは、ＢＭＳＣがＣＣＬ２産生の主要供給源である可能性もあることを見出したが、他のＢＭＤＣのありうる寄与は排除できない。ヒトにおいて、線維芽細胞、内皮細胞、および平滑筋細胞などの他の細胞タイプから産生されるＣＣＬ２もまた、がん転移を促進すると考えられる（39～42）。本発明者らは、ＣＣＬ２発現の上流制御因子として、Ｆｂｘｗ７およびＮｏｔｃｈを同定し、これによって、このケモカイン産生が制御される機構に関する重要な洞察、ならびにがん治療の新規戦略開発に関する基礎の両方が提供される。
4.　実施例の項で引用した文献等
27.  Kaplan RN, et al. VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche. Nature. 2005;438(7069):820-7.
28.  Nakayama KI, Nakayama K. Ubiquitin ligases: cell-cycle control and cancer. Nat Rev Cancer. 2006;6(5):369-81.
29.  Welcker M, Clurman BE. FBW7 ubiquitin ligase: a tumour suppressor at the crossroads of cell division, growth and differentiation. Nat Rev Cancer. 2008;8(2):83-93.
30.  Wang Z, et al. Tumor suppressor functions of FBW7 in cancer development and progression. FEBS Lett. 2012;586(10):1409-18.
31.  Molloy AP, et al. Mesenchymal stem cell secretion of chemokines during differentiation into osteoblasts, and their potential role in mediating interactions with breast cancer cells. Int J Cancer. 2009;124(2):326-32.
32.  Shi C, et al. Bone marrow mesenchymal stem and progenitor cells induce monocyte emigration in response to circulating toll-like receptor ligands. Immunity. 2011;34(4):590-601.
33.  Allers C, et al. Dynamic of distribution of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells after transplantation into adult unconditioned mice. Transplantation. 2004;78(4):503-8.
34.  Ling PD, Rawlins DR, Hayward SD. The Epstein-Barr virus immortalizing protein EBNA-2 is targeted to DNA by a cellular enhancer-binding protein. Proc Natl Acad Sci U S A. 1993;90(20):9237-41.
35.  Ross DA, Kadesch T. The notch intracellular domain can function as a coactivator for LEF-1. Mol Cell Biol. 2001;21(22):7537-44.
36.  Inuzuka H, et al. SCFFBW7 regulates cellular apoptosis by targeting MCL1 for ubiquitylation and destruction. Nature. 2011;471(7336):104-9.
37.  Wertz IE, et al. Sensitivity to antitubulin chemotherapeutics is regulated by MCL1 and FBW7. Nature. 2011;471(7336):110-4.
38.  Balamurugan K, et al. The tumour suppressor C/EBP δ inhibits FBXW7 expr
ession and promotes mammary tumour metastasis. EMBO J. 2010;29(24):4106-17.
39.  Cushing SD, et al. Minimally modified low density lipoprotein induces monocyte chemotactic protein 1 in human endothelial cells and smooth muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990;87(13):5134-8.
40.  Standiford TJ, Kunkel SL, Phan SH, Rollins BJ, Strieter RM. Alveolar macrophage-derived cytokines induce monocyte chemoattractant protein-1 expression from human pulmonary type II-like epithelial cells. J Biol Chem. 1991;266(15):9912-8.
41.  Lu Y, et al. PTHrP-induced MCP-1 production by human bone marrow endothelial cells and osteoblasts promotes osteoclast differentiation and prostate cancer cell proliferation and invasion in vitro. Int J Cancer. 2007;121(4):724-33.
42.  Silzle T, et al. Tumor-associated fibroblasts recruit blood monocytes into tumor tissue. Eur J Immunol. 2003;33(5):1311-20.
43.  Kuhn R, Schwenk F, Aguet M, Rajewsky K. Inducible gene targeting in mice. Science. 1995;269(5229):1427-9.
44.  Tanigaki K, et al. Regulation of δ/δ T cell lineage commitment and peripheral T cell responses by Notch/RBP-J signaling. Immunity. 2004;20(5):611-22.
45.  de Alboran IM, et al. Analysis of C-MYC function in normal cells via conditional gene-targeted mutation. Immunity. 2001;14(1):45-55.
46.  Wolfer A, Wilson A, Nemir M, MacDonald HR, Radtke F. Inactivation of Notch1 impairs VDJδ rearrangement and allows pre-TCR-independent survival of early δ lineage thymocytes. Immunity. 2002;16(6):869-79.
47.  Clausen BE, Burkhardt C, Reith W, Renkawitz R, Forster I. Conditional gene targeting in macrophages and granulocytes using LysMcre mice. Transgenic Res. 1999;8(4):265-77.
48.  Rickert RC, Roes J, Rajewsky K. B lymphocyte-specific, Cre-mediated mutagenesis in mice. Nucleic Acids Res. 1997;25(6):1317-8.
49.  Hayashi S, McMahon AP. Efficient recombination in diverse tissues by a tamoxifen-inducible form of Cre: a tool for temporally regulated gene activation/inactivation in the mouse. Dev Biol. 2002;244(2):305-18.
50.  Okabe M, Ikawa M, Kominami K, Nakanishi T, Nishimune Y. 'Green mice' as a source of ubiquitous green cells. FEBS Lett. 1997;407(3):313-9.
51.  Nakayama K, et al. Mice lacking p27Kip1 display increased body size, multiple organ hyperplasia, retinal dysplasia, and pituitary tumors. Cell. 1996;85(5):707-20.
52.  Nakayama K, et al. Targeted disruption of Skp2 results in accumulation of cyclin E and p27Kip1, polyploidy and centrosome overduplication. EMBO J. 2000;19(9):2069-81.
53.  Kamura T, et al. Degradation of p57Kip2 mediated by SCFSkp2-dependent ubiquitylation. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100(18):10231-6.
54.  Morita S, Kojima T, Kitamura T. Plat-E: an efficient and stable system for transient packaging of retroviruses. Gene Ther. 2000;7(12):1063-6.
55.  Kamura T, et al. Cytoplasmic ubiquitin ligase KPC regulates proteolysis of p27Kip1 at G1 phase. Nat Cell Biol. 2004;6(12):1229-35.
SEQ ID NO.:1 Mouse CCL2 targeting sequence
SEQ ID NO.:2 PCR Primer for CCL2
SEQ ID NO.:3 PCR Primer for CCL2
SEQ ID NO.:4 PCR Primer for Rps18
SEQ ID NO.:5 PCR Primer for Rps18
SEQ ID NO.:6 PCR Primer for Fbxw7
SEQ ID NO.:7 PCR Primer for Fbxw7
SEQ ID NO.:8 PCR Primer for GAPDH
SEQ ID NO.:9 PCR Primer for GAPDH
SEQ ID NO.:10 PCR Primer for CCL2(distal)
SEQ ID NO.:11 PCR Primer for CCL2(distal)
SEQ ID NO.:12 PCR Primer for CCL2(proximal)
SEQ ID NO.:13 PCR Primer for CCL2(proximal)

Claims (16)

  1. 対象においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、がんの予後を予測するための、またはがんの早期発見のための方法。
  2. がん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程を含む、該がん患者におけるがんの処置方法を選択するための方法。
  3. がんが、乳がんである、請求項１または２に記載の方法。
  4. 対象またはがん患者においてＦＢＸＷ７の発現レベルを検出する工程が、対象またはがん患者の末梢血におけるＦＢＸＷ７の発現レベルを検出することによって行われる、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 該がん患者におけるがんの処置方法として、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物の投与を選択する、請求項２～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
    ［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
    （式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
    で示される有機酸重合体である、請求項５に記載の方法。
  7. 一般式（Ｉ）で示される有機酸重合体が、プロパゲルマニウムである、請求項６に記載の方法。
  8. 低ＦＢＸＷ７発現性のがん患者におけるがんの処置のための、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物。
  9. がんが、乳がんである、請求項８に記載の医薬組成物。
  10. 乳がんが、トリプルネガティブ乳がんである、請求項８または９に記載の医薬組成物。
  11. ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
    ［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
    （式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
    で示される有機酸重合体である、請求項１０に記載の医薬組成物。
  12. 一般式（Ｉ）で示される有機酸重合体が、プロパゲルマニウムである、請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. ＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物の、がんの予後を予測するための、またはがんの早期発見のための、マーカーとしての使用。
  14. がんが、乳がんである、請求項１３に記載の使用。
  15. ＦＢＸＷ７遺伝子またはその発現産物を検出する工程を含む、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む医薬組成物による処置の対象となる患者の選択方法。
  16. ＣＣＲ２アンタゴニストが、以下の一般式（Ｉ）
    ［（Ｏ1/2）3Ｇｅ－Ａ－ＣＯＯＨ］n　（Ｉ）
    （式中、ｎは１００～１０００の整数を表し、およびＡは低級アルキレン基を表す。）
    で示される有機酸重合体である、請求項１５に記載の方法。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018174053A1 (ja) * 2017-03-22 2018-09-27 学校法人兵庫医科大学 標準化学療法に不応又は不耐で治癒切除不能な進行又は再発癌患者の治療のための医薬
WO2020213665A1 (ja) * 2019-04-17 2020-10-22 国立大学法人広島大学 Ｉｌ－６阻害剤及びｃｃｒ２阻害剤を組み合わせて投与することを特徴とする泌尿器がんの治療剤
JP2022537532A (ja) * 2019-06-19 2022-08-26 インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレーション 低温デバイスの熱化のための極低温包装
US11692037B2 (en) 2017-10-20 2023-07-04 Hyogo College Of Medicine Anti-IL-6 receptor antibody-containing medicinal composition for preventing post-surgical adhesion
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
EP4319752A4 (en) * 2021-04-07 2025-03-26 Repare Therapeutics Inc. Carboxamide-pyrolopyrazine and pyridine compounds as MYT1 inhibitors and use thereof in the treatment of cancer
US12600772B2 (en) 2018-01-31 2026-04-14 Motokazu Kato Therapeutic agent for asthma containing IL-6 inhibitor

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5916825A (ja) * 1983-01-31 1984-01-28 Ryuichi Sato 有機ゲルマニウム重合体を主剤とする癌用薬剤
WO2010030865A2 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 The Regents Of The University Of California Loss of fbxw7 is a biomarker of sensitivity to treatment of tumors with inhibitors of mtor
CN103191443A (zh) * 2012-10-18 2013-07-10 山东大学 抑癌基因fbxw7在制备预防或治疗乳腺肿瘤药物中的应用、表达载体和诊断药物
JP2013538838A (ja) * 2010-09-27 2013-10-17 プロクシマゲン リミテッド ７−ヒドロキシ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン化合物およびｃｃｒ２レセプターアンタゴニストとしてのその使用
WO2015020040A1 (ja) * 2013-08-06 2015-02-12 国立大学法人九州大学 有機酸重合体を有効成分とする癌細胞の生着予防又は生着抑制のための医薬

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5916825A (ja) * 1983-01-31 1984-01-28 Ryuichi Sato 有機ゲルマニウム重合体を主剤とする癌用薬剤
WO2010030865A2 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 The Regents Of The University Of California Loss of fbxw7 is a biomarker of sensitivity to treatment of tumors with inhibitors of mtor
JP2013538838A (ja) * 2010-09-27 2013-10-17 プロクシマゲン リミテッド ７−ヒドロキシ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン化合物およびｃｃｒ２レセプターアンタゴニストとしてのその使用
CN103191443A (zh) * 2012-10-18 2013-07-10 山东大学 抑癌基因fbxw7在制备预防或治疗乳腺肿瘤药物中的应用、表达载体和诊断药物
WO2015020040A1 (ja) * 2013-08-06 2015-02-12 国立大学法人九州大学 有機酸重合体を有効成分とする癌細胞の生着予防又は生着抑制のための医薬

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
IBUSUKI, MUTSUKO. ET AL.: "Reduced expression of ubiquitin ligase FBXW7 mRNA is associated with poor prognosis in breast cancer patients", CANCER SCI., vol. 102, no. 2, 2011, pages 439 - 445, ISSN: 1347-9032 *
KANAE YUMIMOTO ET AL.: "Gan Shui no Bisho Kankyo ni Okeru Fbxw7 no Hatsugenryo ga Gan Ten'ino o Kitei suru", ANNUAL MEETING OF THE MOLECULAR BIOLOGY SOCIETY OF JAPAN PROGRAM YOSHISHU, vol. 37, 7 November 2014 (2014-11-07) *
SAYURI AKIYOSHI ET AL.: "Nyugan Kanja no Masshoketsu ni Okeru Saibo Shuki Chosetsu Inshi Fbxw7 Hatsugen no Igi", JOURNAL OF JAPAN SURGICAL SOCIETY, vol. 110, no. issue (2, 2009, pages 333, ISSN: 0301-4894 *
TAKASHI WADA ET AL.: "MCP-1-CCR2 in renal fibrosis", INFLAMMATION AND REGENERATION, vol. 24, no. 5, 2004, pages 567 - 572, ISSN: 1346-8022 *
YUMIMOTO, KANAE. ET AL.: "F-box protein FBXW7 inhibits cancer metastasis in a non- cell autonomous manner", J. CLIN. INVEST., vol. 125, no. 2, February 2015 (2015-02-01), pages 621 - 635, XP055281240, ISSN: 0021-9738, DOI: doi:10.1172/JCI78782 *

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2018174053A1 (ja) * 2017-03-22 2019-12-12 学校法人兵庫医科大学 標準化学療法に不応又は不耐で治癒切除不能な進行又は再発癌患者の治療のための医薬
WO2018174053A1 (ja) * 2017-03-22 2018-09-27 学校法人兵庫医科大学 標準化学療法に不応又は不耐で治癒切除不能な進行又は再発癌患者の治療のための医薬
US12509511B2 (en) 2017-05-02 2025-12-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
US11692037B2 (en) 2017-10-20 2023-07-04 Hyogo College Of Medicine Anti-IL-6 receptor antibody-containing medicinal composition for preventing post-surgical adhesion
US12600772B2 (en) 2018-01-31 2026-04-14 Motokazu Kato Therapeutic agent for asthma containing IL-6 inhibitor
CN114072173A (zh) * 2019-04-17 2022-02-18 国立大学法人广岛大学 以联合施用il-6抑制剂和ccr2抑制剂为特征的泌尿系统癌症治疗剂
US20220204608A1 (en) * 2019-04-17 2022-06-30 Hiroshima University Therapeutic agent for urological cancer which is characterized by being administered with il-6 inhibitor and ccr2 inhibitor in combination
JP7501876B2 (ja) 2019-04-17 2024-06-18 国立大学法人広島大学 Ｉｌ－６阻害剤及びｃｃｒ２阻害剤を組み合わせて投与することを特徴とする泌尿器がんの治療剤
IL287220B1 (en) * 2019-04-17 2025-11-01 Univ Hiroshima Therapeutic agent for urological cancer which is characterized by being administered with il-6 inhibitor and ccr2 inhibitor in combination
JPWO2020213665A1 (ja) * 2019-04-17 2020-10-22
IL287220B2 (en) * 2019-04-17 2026-03-01 Univ Hiroshima A therapeutic agent for urological cancer characterized by administering an IL-6 inhibitor in combination with a CCR2 inhibitor
US12583918B2 (en) 2019-04-17 2026-03-24 Tokyo Women's Medical University Therapeutic agent for urological cancer which is characterized by being administered with IL-6 inhibitor and CCR2 inhibitor in combination
WO2020213665A1 (ja) * 2019-04-17 2020-10-22 国立大学法人広島大学 Ｉｌ－６阻害剤及びｃｃｒ２阻害剤を組み合わせて投与することを特徴とする泌尿器がんの治療剤
JP2022537532A (ja) * 2019-06-19 2022-08-26 インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレーション 低温デバイスの熱化のための極低温包装
JP7479404B2 (ja) 2019-06-19 2024-05-08 インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレーション 低温デバイスの熱化のための極低温包装
US12219737B2 (en) 2019-06-19 2025-02-04 International Business Machines Corporation Cryogenic packaging for thermalization of low temperature devices
EP4319752A4 (en) * 2021-04-07 2025-03-26 Repare Therapeutics Inc. Carboxamide-pyrolopyrazine and pyridine compounds as MYT1 inhibitors and use thereof in the treatment of cancer

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