WO2016092828A1 - 藻類の破砕方法 - Google Patents

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WO2016092828A1
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heat treatment
treatment
algae
crushing
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隆史 植松
皓卓 湯浅
紗輝 濱田
渡邉　高明
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花王株式会社
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Definitions

  • the present disclosure relates to a method for crushing algae and a method for extracting lipids from algae using the algae.
  • Algae are known to produce lipids. If lipids produced by algae can be extracted efficiently, it can be an energy source to replace fossil fuels. In addition to energy sources, it can be a raw material for various products. However, when extracting lipids from algae, the cell wall is a major obstacle. In general, algae cell walls are hard and flexible and cannot be easily crushed. For this reason, it is not easy to efficiently recover products such as lipids from algae.
  • Patent Document 1 discloses a method in which a non-polar solvent is brought into contact with a biomass suspension whose pH is adjusted, and a cell product is recovered from the non-polar solvent and the polar biomass solution. Is described.
  • Patent Document 1 has a problem that the lipid yield is not sufficient. It is also shown that in order to obtain a high lipid yield, conditions of pH 1 and a processing temperature of 120 ° C. or higher are necessary. Therefore, very special equipment that can withstand strong acid conditions at high temperatures is required and it is extremely difficult to commercialize.
  • the algae can be crushed efficiently, it is expected that the lipid yield from the algae can be greatly improved.
  • the problem of the present disclosure is to enable efficient crushing of microalgae belonging to unequal hairy plants.
  • One aspect of the method for crushing algae is that after heat-treating microalgae belonging to the hairless plant gate at a temperature of 40 ° C. or more and 65 ° C. or less under conditions of pH 3.5 or more and 9.5 or less, Physical processing is performed using a distributed device.
  • the algal crushing method of the present disclosure it is possible to efficiently crush microalgae belonging to unequal plant gates.
  • the microalgae belonging to the hairless plant gate refers to those belonging to the hairless plant gate among the microalgae.
  • the microalgae refers to those having a cell size of 1 ⁇ m to 100 ⁇ m in the rest of the organisms that perform photosynthesis that generates oxygen, excluding moss plants, fern plants, and seed plants.
  • the cell size is the major axis diameter of a cell measured with an optical microscope at an observation magnification of 400 times.
  • Specific examples of the microalgae belonging to the trichomes include the Bacillariophyceae class and the Eustigmatophyceae class.
  • microalgae of the class Bacillariophyceae include the genus Chaetoceros, the genus Nitzschia, the genus Skeletonema, and the like.
  • microalgae of the Eustigmatophyceae class include the genus Nannochloropsis.
  • Eustigmatophyceae class microalgae are preferable, and among them, the genus Nannochloropsis is more preferable.
  • the algae belonging to the genus Nannochloropsis include Nannochloropsis oculata, Nannochloropsis salina, Nannochloropsis gaditana, and the like.
  • the microalgae may be collected from swamps, ponds, etc., cultured, or commercially obtained.
  • the algal crushing method of the present embodiment uses a high-pressure dispersion device after heat-treating microalgae belonging to the unequal hairy plant in a predetermined hydrogen ion concentration (pH) range within a predetermined temperature range. Do physical processing.
  • the crushing method of the present embodiment can crush the algae in a state dispersed in a dispersion medium obtained by collection or culture. Moreover, you may process after performing operation, such as dilution or concentration for adjusting the density
  • ⁇ Algae concentration is not particularly limited. From the viewpoint of improving productivity, algal crushability, and lipid recoverability, 0.5 g / L or more is preferable, 0.8 g / L or more is more preferable, 5 g / L or more is more preferable, and 10 g / L or more is preferable. Is even more preferable. In addition, from the viewpoints of algae crushability, lipid recovery and fluidity of the treatment liquid, it is preferably 200 g / L or less, more preferably 100 g / L or less, further preferably 50 g / L or less, and more preferably 30 g / L or less. More preferably, it is more preferably 20 g / L or less.
  • the method for adjusting the concentration is not particularly limited.
  • the concentration method include methods such as filtration, squeezing, centrifugation, gravity sedimentation, coagulation sedimentation, pressurized flotation, and evaporation of the dispersion medium.
  • a flocculant such as aluminum sulfate
  • the heat treatment and the physical treatment may be performed at different concentrations.
  • the dilution method include a method of adding a liquid such as water.
  • concentration of the micro algae in a process liquid is the value measured by the method described in the Example.
  • the dispersion medium of the treatment liquid is not particularly limited as long as it can be in a predetermined pH range, but water is preferable from the viewpoint of economy.
  • the water may be purified or may contain impurities. Moreover, seawater may be sufficient.
  • the treatment liquid is an additive comprising one or more of a salt such as sodium chloride, a compound containing nitrogen or phosphorus, a trace metal, an inorganic flocculant, an organic flocculant, a chelating agent, and a buffer. May be included.
  • a salt such as sodium chloride, a compound containing nitrogen or phosphorus, a trace metal, an inorganic flocculant, an organic flocculant, a chelating agent, and a buffer. May be included.
  • the treatment solution may contain various components contained in a normal culture solution.
  • water or an aqueous solution containing a predetermined additive can be used.
  • the culture solution may be replaced with water or an aqueous solution containing a predetermined additive before treatment.
  • the heat treatment is performed at a pH of 3.5 or higher, preferably 3.8 or higher, more preferably 4.0 or higher, still more preferably 4.5 or higher, even more preferably 5.0 or higher.
  • the pH is 9.5 or less, preferably 9.0 or less, more preferably 8.5 or less, further preferably 8.0 or less, and even more preferably 7.5 or less. More preferably, it is 7.0 or less, More preferably, it is 6.5 or less, More preferably, it is 6.0 or less.
  • the pH can be determined by measuring the pH of the treatment liquid at 25 ° C. by a measurement method according to JIS Z8802.
  • the temperature of the heat treatment is 40 ° C. or higher, preferably 42 ° C. or higher, more preferably 43 ° C. or higher, more preferably 45 ° C. or higher, from the viewpoint of efficiently crushing microalgae. From the viewpoint of well crushing, it is 65 ° C. or less, preferably 62 ° C. or less, more preferably 60 ° C. or less, more preferably 57 ° C. or less, still more preferably 55 ° C. or less, even more preferably 52 ° C. or less, even more preferably. It is 50 degrees C or less.
  • the heat treatment time represents the time during which the temperature of the treatment liquid is maintained within the temperature range of the heat treatment, and from the viewpoint of efficiently crushing microalgae, preferably 0.5 hours or more, more preferably 1 hour. Or more, more preferably 3 hours or more, even more preferably 5 hours or more, even more preferably 8 hours or more, even more preferably 10 hours or more, still more preferably 20 hours or more, even more preferably 24 hours or more, more More preferably, it can be 48 hours or more.
  • the upper limit of the treatment time is preferably 96 hours or less, more preferably 72 hours or less, from the viewpoint of production efficiency.
  • the heat treatment may be performed continuously for a predetermined time, but may be performed in a plurality of times so that the total is a predetermined time.
  • the pH, temperature, and time can be freely combined within the above conditions, but from the viewpoint of efficiently crushing microalgae, the pH is 5.0 or more and 7.5 or less, and the temperature is 45 ° C or more. It is preferable that the temperature is 60 ° C. or less and the time is 10 hours or more.
  • the heat treatment can be performed in an open or sealed treatment tank. What is necessary is just to control the temperature in a processing tank by a known method.
  • a heat source and a control device that turns on and off the heat source so as to reach a predetermined temperature can be provided.
  • the temperature control may be performed with the accuracy of normal industrial processing, and is preferably controlled to ⁇ 5 ° C. or less, more preferably ⁇ 3 ° C. or less, and further preferably ⁇ 1 ° C. or less. If control is difficult, the total time during which the temperature of the processing liquid is within the predetermined temperature range may be the predetermined time.
  • the heat source may be provided inside or outside the processing tank.
  • the treatment tank may be a batch type or a flow type. In the case of a flow type, it may be a passage-shaped treatment tank through which the treatment liquid flows.
  • the heat treatment can be performed at normal pressure, but can also be performed in a pressurized or reduced pressure environment.
  • the treatment temperature can be measured, for example, by inserting a thermometer or a temperature sensor into the treatment liquid. It is also possible to measure the liquid temperature of the processing liquid using a non-contact temperature sensor. Instead of directly measuring the temperature of the treatment liquid, the atmosphere temperature or the external temperature of the treatment tank may be measured. In this case, a correlation coefficient between the ambient temperature or the like and the temperature of the processing liquid may be obtained in advance, and the ambient temperature or the like may be converted into the temperature of the processing liquid. Further, by connecting the output of a thermometer or a temperature sensor to a recording device and recording the temperature continuously or periodically, it becomes possible to accurately manage the heat treatment time.
  • the pH of the treatment liquid is not a predetermined value
  • the pH can be adjusted by adding acid or alkali to the treatment liquid.
  • the acid is not particularly limited, and an organic acid, a mineral acid, or a mixture thereof can be used.
  • acetic acid, citric acid, phosphoric acid, hydrochloric acid, nitric acid or sulfuric acid can be used.
  • the alkali is not particularly limited, and sodium carbonate, ammonia, sodium hydroxide, or the like can be used.
  • the dispersion medium may be a buffer solution.
  • the buffer solution may be selected according to the required pH, but a buffer solution containing acetic acid, citric acid, phosphoric acid, sodium carbonate, or the like can be used.
  • any additive may be added to the treatment liquid during the heat treatment.
  • an enzyme having a cell wall decomposing action such as hemicellulase, cellulase, pectinase, laminarinase and the like.
  • a drug having an action of decomposing cell walls such as salt, alkali, surfactant, and detergent.
  • these enzymes or chemicals may be contained in the treatment liquid.
  • the physical treatment can be performed by a high-pressure dispersing device.
  • the high-pressure disperser basically passes through a narrow flow path in a pressurized state with a treatment liquid containing dispersoids such as solid particles and droplet particles, and then suddenly depressurizes the solid particles and droplet particles. Is a device for further dispersing or pulverizing the dispersoid.
  • the high-pressure dispersion device is also preferable from the viewpoint that mass processing is possible in industrialization.
  • a high-pressure pump can be used for pressurizing the treatment liquid.
  • the flow path having a narrow gap through which the processing liquid passes may have any structure as long as a predetermined pressure or the like can be applied.
  • the value of the gap width or the like may be appropriately changed depending on the required pressure or the like.
  • the flow path can be a straight pipe having a diameter of 1 ⁇ m to 2000 ⁇ m.
  • an orifice having a hole of 1 ⁇ m to 2000 ⁇ m may be arranged in the middle of the straight pipe flow path. It is also possible to adopt a structure in which a slit having a gap of 1 ⁇ m to 2000 ⁇ m is disposed in the middle of the straight pipe flow path.
  • the gap may be set to 1 ⁇ m to 2000 ⁇ m by forming a flow path in the gap between the valve tip and the valve receiver and adjusting the opening of the valve.
  • the processing liquids may collide with each other by arranging the flow paths in the gap of 1 ⁇ m to 2000 ⁇ m to face each other.
  • the treatment liquid may collide with the wall surface of the flow path by rapidly changing the flow path direction, for example, by bending the flow path at right angles.
  • FIG. 1 shows an example of a homogeneous valve 100.
  • the homogeneous valve 100 includes a homogeneous valve seat (valve receptacle) 101 in which a discharge hole is formed, a homogeneous valve main body 102 disposed at a position facing the discharge port of the homogeneous valve seat 101, and an impact ring surrounding the homogeneous valve main body 102. 103.
  • a large pressure is applied to the processing liquid, and after passing through the gap, the pressure is rapidly reduced.
  • the dispersoid in the processing liquid discharged from the discharge hole collides with the homogeneous valve main body 102 and the impact ring 103. Dispersoids are crushed by shear stress when passing through the gap, impact force due to impact, and cavitation due to pressure drop after passing through the gap.
  • the shear force applied to the dispersoid can be adjusted by changing the size of the gap formed by the homogeneous valve seat 101, the homogeneous valve body 102, and the impact ring 103.
  • the surface where the homogeneous valve seat 101 and the homogeneous valve body 102 face each other can be a smooth surface.
  • a chamber type high-pressure dispersion device can be used for physical treatment.
  • the chamber-type high-pressure dispersion device includes a type in which treatment liquids collide with each other or collide with a wall surface, and a type in which the processing liquids do not collide.
  • a chamber-type high-pressure dispersion apparatus that collides treatment liquids has a chamber 110 as shown in FIG.
  • a plurality of processing liquid inflow pipes 111, the same number of shear pipes 112 as the inflow pipes 111, and a single outflow pipe 113 are sequentially connected.
  • the ends closer to the path 113 are connected at one place, and the treatment liquids collide with each other at the connection place.
  • the dispersoid is crushed by shear stress in the shear pipe 112 that is narrower than the inflow pipe 111 and the outflow pipe 113, the impact force due to the collision between the processing liquids, and cavitation due to the pressure drop in the outflow pipe 113.
  • a chamber-type high-pressure dispersion apparatus that collides a processing liquid with a wall surface has a chamber 120 as shown in FIG. 3, for example.
  • a single liquid inflow conduit 121, a shear conduit 122, and an outflow conduit 123 are sequentially connected.
  • the angle formed by the shear line 122 and the outflow line 123 is a right angle, and the liquid flow in the shear line 122 collides with the inner wall of the outflow line 123.
  • the dispersoid is crushed by the shear stress in the shear pipe 122, the impact force caused by the collision between the treatment liquid and the wall surface, and the cavitation caused by the pressure drop in the outflow pipe 123.
  • a chamber type high-pressure dispersion device that does not collide with the treatment liquid has a narrow shear line in the flow path, for example, and it is dispersed by shear stress in the shear line and cavitation due to pressure drop in the expanded outflow line. The quality is crushed.
  • the pressure (inlet pressure) applied to the treatment liquid is 10 MPa or more in terms of gauge pressure from the viewpoint of efficiently crushing algae, preferably It is 30 MPa or more, more preferably 50 MPa or more, and further preferably 80 MPa or more. From the viewpoint of economy, it is preferably 200 MPa or less, more preferably 150 MPa or less, and further preferably 120 MPa or less. From the viewpoint of efficiently crushing algae and from the viewpoint of economy, the pressure (exit pressure) after the pressure reduction can be set to atmospheric pressure (0.1 MPa in absolute pressure).
  • the outlet pressure is an absolute pressure, preferably 0.3 MPa or less, more preferably 0.2 MPa or less, still more preferably 0.15 MPa or less, even more Preferably it is 0.11 MPa or less.
  • the homogeneous valve type high-pressure dispersion device examples include a pressure-type homogenizer (SMT Co., Ltd.), a high-pressure homogenizer (Izumi Food Machinery Co., Ltd.), and a minilab 8.3H type (Rannie).
  • chamber-type high-pressure dispersers include microfluidizers (Microfluidics), Nanoveita (S.G. Company), Genus PY (Hakusui Chemical Co., Ltd.), DeBEE2000 (Nippon BB Co., Ltd.) and the like.
  • a nano vater is preferable from the viewpoint that a small amount can be processed
  • a pressure homogenizer is preferable from the viewpoint that a large amount can be processed in industrialization.
  • the combination of heat treatment and physical treatment as described above can greatly improve the crushing efficiency over the case of physical treatment alone. it can.
  • the temperature of the heat treatment is about 40 ° C. to 65 ° C. At such a temperature, the energy required for heat treatment for several hours to 10 hours is small, and the cost can be kept very low. For this reason, as compared with the case of physical processing alone, not only the crushing rate is improved, but also the substantial efficiency considering the required energy and cost is greatly improved.
  • Physical treatment may be repeated multiple times after heat treatment. After the heat treatment, physical processing can be performed without performing other processing. Although the physical treatment can be performed immediately after the heat treatment, the physical treatment can be performed after the heat treatment is temporarily stored after the heat treatment. When storing the treatment liquid, it is preferably at a room temperature of about 15 to 25 ° C. from the viewpoint of reducing the required energy, and it is stored at a low temperature of about 5 to 15 ° C. from the viewpoint of suppressing lipid alteration. It is preferable to do. It can also be stored frozen. After the heat treatment, operations such as concentration of the treatment liquid, dilution or replacement of the dispersion medium, and pH adjustment of the treatment liquid can be performed before physical treatment.
  • the crushing method of the present embodiment can be combined with a process for recovering lipid to extract a lipid.
  • the higher the crushing rate the higher the yield of lipid from the microalgae treatment solution. Therefore, the yield of lipid can be greatly improved by crushing the microalgae belonging to the barrenaceous plant by extracting and recovering the lipid by the crushing method of the present embodiment that can efficiently crush. Further, by increasing the crushing rate in the crushing process, it is possible to obtain an advantage that the amount of the solvent used for extraction can be reduced and energy and cost required for the extraction can be reduced.
  • lipids include simple lipids, complex lipids and derived lipids.
  • Simple lipids include esters of fatty acids such as fats and oils or fatty acid esters and various alcohols.
  • the complex lipid includes a phospholipid containing a fatty acid, alcohol and phosphoric acid, and a glycolipid containing a fatty acid, alcohol and sugar.
  • Derived lipids are hydrolysis products of simple lipids or complex lipids, and include water-insoluble fatty acids, higher alcohols, sterols, terpenes, and fat-soluble vitamins. From the viewpoint of lipid recoverability, simple lipids or complex lipids are preferable, simple lipids are more preferable, and fats and oils are more preferable.
  • Oils and fats mean esters of fatty acids and glycerin, specifically, neutral lipids such as monoglycerides, diglycerides, and triglycerides.
  • the fatty acid which comprises fats and oils may not be single.
  • the fatty acid may be any of short chain fatty acids having 2 to 4 carbon atoms, medium chain fatty acids having 5 to 12 carbon atoms, and long chain fatty acids having 12 or more carbon atoms.
  • saturated fatty acid or unsaturated fatty acid may be sufficient.
  • Specific examples of the saturated fatty acid include decanoic acid, dodecanoic acid, tetradecanoic acid, hexadecanoic acid, octadecanoic acid, and icosanoic acid.
  • Specific examples of the monovalent unsaturated fatty acid include 9-hexadecenoic acid and 9-octadecenoic acid.
  • polyunsaturated fatty acids include 9,12-octadecadienoic acid, 6,9,12-octadecatrienoic acid, 5,8,11,14-icosatetraenoic acid, 9,12,15-octa Examples include decatrienoic acid, 5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid, and 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid.
  • -Fatty acid ester- Fatty acid esters are esters of fatty acids and alcohols other than fats and oils, waxes that are esters of long-chain fatty acids and mono- or divalent higher alcohols, and esters of medium-chain fatty acids and lower or higher alcohols. Includes medium chain fatty acid esters and the like.
  • the treatment for collecting the lipid is not particularly limited as long as the lipid can be separated from the treatment liquid containing the crushed fine algae.
  • solvent extraction, centrifugation, stationary treatment, column chromatography and the like can be mentioned. These 1 type (s) or 2 or more types can be combined and applied.
  • one or a combination of two or more selected from solvent extraction, centrifugation, and stationary treatment is preferable, and in particular, a combination of solvent extraction and centrifugation, or solvent extraction and stationary treatment. The combination with is preferable.
  • Solvent extraction may be performed by adding an extraction solvent to the treatment solution after crushing microalgae. Stirring may be performed after adding the solvent. Since the lipid eluted from the microalgae is dissolved in the solvent, the lipid can be recovered by separating the solvent phase from the aqueous phase and recovering the solvent phase.
  • solvent used for solvent extraction examples include esters such as methyl acetate and ethyl acetate; chain and cyclic ethers such as tetrahydrofuran and diethyl ether; polyethers such as polyethylene glycol; dichloromethane, chloroform, and tetrachloride.
  • Halogenated hydrocarbons such as carbon; hydrocarbons such as hexane, cyclohexane, and petroleum ether; aromatic hydrocarbons such as benzene and toluene; pyridines; butanol, pentanol, hexanol, and isopropyl alcohol (2- Alcohols such as propanol); polyhydric alcohols such as butylene glycol; ketones such as methyl ethyl ketone; and supercritical carbon dioxide. These may be used alone or in combination of two or more.
  • nonpolar solvents are preferred from the viewpoint of lipid recoverability.
  • the nonpolar solvent include halogenated hydrocarbons, hydrocarbons, or aromatic hydrocarbons. Among them, hydrocarbons are preferable, and hexane is more preferable.
  • a solvent compatible with water such as methanol, ethanol, propanol, ethylene glycol, propylene glycol, and acetone can be supplementarily added to the nonpolar solvent.
  • supercritical extraction using supercritical carbon dioxide or the like can also be used. Further, dipping, decoction, leaching, reflux extraction, subcritical extraction, or the like can be used. For example, the method described in “Biochemical Experimental Method 24, Plant Lipid Metabolism Experimental Method” (edited by Akihiro Yamada, Society of Sciences Publishing Center, p. 3-4) can be referred to.
  • the temperature for solvent extraction is not particularly limited, but is preferably 10 ° C. or higher, more preferably 20 ° C. or higher, from the viewpoint of lipid recovery. Further, from the viewpoints described above and economical viewpoints such as heating of the solvent, it is preferably 60 ° C. or lower, more preferably 50 ° C. or lower, and even more preferably 40 ° C. or lower.
  • solvent extraction may be performed once or twice or more. When solvent extraction is performed twice or more, it may be performed with the same solvent or different solvents.
  • Centrifugation can be performed using general equipment such as a separation plate type, a cylindrical type, or a decanter type.
  • the centrifugal force in this case is preferably 500 G or more, more preferably 1000 G or more, from the viewpoint of lipid recoverability.
  • Preferably it is 10,000 G or less, More preferably, it is 5000 G or less, More preferably, it can be 2000 G or less.
  • the treatment time for the centrifugation is preferably 1 minute or more, more preferably 5 minutes or more, and even more preferably 10 minutes or more, from the viewpoint of lipid recoverability. Moreover, from an economical viewpoint, Preferably it is 80 minutes or less, More preferably, it is 40 minutes or less, More preferably, it can be 20 minutes or less.
  • the temperature at the time of centrifugation is not particularly limited, but is preferably 10 ° C. or higher, more preferably 15 ° C. or higher, preferably 50 ° C. or lower, more preferably 40 ° C. or lower, from the viewpoint of lipid recovery and economy. It is.
  • the solvent phase and aqueous phase can be separated quickly by centrifugation.
  • reaction solution may be placed in a static state until the lipid and the aqueous phase are separated.
  • solvent extraction it may be kept stationary until the solvent phase and the aqueous phase are separated.
  • lipids can be extracted at a high recovery rate from microalgae that have accumulated lipids in the body by such a simple operation.
  • Lipids extracted from microalgae can be used as biofuel such as biodiesel fuel directly or after being subjected to purification treatment or decomposition treatment. Further, it can be used as a raw material for functional foods or pharmaceuticals, a raw material for chemical products, and a raw material for cosmetics.
  • the present disclosure further discloses a method for crushing the following algae and a method for extracting lipids from the algae.
  • the pH is 3.5 or more, preferably 3.8 or more, more preferably 4.0 or more, still more preferably 4.5 or more, and even more preferably 5.0 or more, with respect to microalgae belonging to the trichomes. 9.5 or less, preferably 9.0 or less, more preferably 8.5 or less, even more preferably 8.0 or less, even more preferably 7.5 or less, even more preferably 7.0 or less, more More preferably 6.5 or less, still more preferably 6.0 or less, 40 ° C. or more, preferably 42 ° C. or more, more preferably 43 ° C. or more, more preferably 45 ° C. or more and 65 ° C. or less, preferably A temperature of 62 ° C.
  • ⁇ 2> The method for disrupting algae according to ⁇ 1>, wherein the microalga is a genus Nannochloropsis.
  • the heat treatment is preferably 0.5 hours or more, more preferably 1 hour or more, still more preferably 3 hours or more, still more preferably 5 hours or more, still more preferably 8 hours or more, even more preferably 10 hours or more,
  • the algal crushing method according to ⁇ 1> or ⁇ 2> further preferably 20 hours or longer, more preferably 24 hours or longer, and even more preferably 48 hours or longer.
  • ⁇ 4> The method for crushing algae according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 3>, wherein the heat treatment is preferably 96 hours or less, more preferably 72 hours or less.
  • the physical treatment is performed using the high-pressure dispersion apparatus, and preferably has a gauge pressure of 10 MPa or more, more preferably 30 MPa or more, still more preferably 50 MPa or more, still more preferably 80 MPa or more, preferably 200 MPa or less, more preferably 150 MPa or less, More preferably, after a pressure of 120 MPa or less is applied, the absolute pressure is preferably 0.3 MPa or less, more preferably 0.2 MPa or less, still more preferably 0.15 MPa or less, even more preferably 0.11 MPa or less, and even more.
  • the method for disrupting algae according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 4>, wherein the pressure is preferably reduced to atmospheric pressure (0.1 MPa).
  • ⁇ 6> The method for disrupting algae according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, wherein the heat treatment is performed without intentional addition of an enzyme that degrades a cell wall.
  • the heat treatment is performed at a temperature of 45 ° C. or higher and 60 ° C. or lower at a pH of 5.0 or higher and 7.5 or lower for 10 hours or longer, and any one of the above items ⁇ 1> to ⁇ 6>
  • ⁇ 8> The algal crushing method according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 7>, wherein the high-pressure dispersion apparatus is a homogeneous valve type high-pressure dispersion apparatus or a chamber type high-pressure dispersion apparatus.
  • ⁇ 9> A method for extracting lipid from algae, wherein the lipid is recovered from a crushed alga obtained by the algae crushing method described in any one of ⁇ 1> to ⁇ 8>.
  • the treatment for recovering the lipid is one or a combination of two or more selected from solvent extraction, centrifugation, stationary treatment, and column chromatography, preferably selected from solvent extraction, centrifugation, and stationary treatment.
  • the lipid is extracted from the algae according to the above ⁇ 9>, which is a combination of one or more types, more preferably a combination of solvent extraction and centrifugation, or a combination of solvent extraction and stationary treatment Method.
  • the solvent used for solvent extraction is preferably a nonpolar solvent, more preferably a hydrocarbon, and even more preferably hexane, and the lipid from the algae according to ⁇ 10>. How to extract.
  • the temperature of solvent extraction is preferably 10 ° C. or higher, more preferably 20 ° C. or higher, preferably 60 ° C. or lower, more preferably 50 ° C. or lower, and even more preferably 40 ° C. or lower.
  • the centrifugal force of centrifugation is preferably 500 G or more, more preferably 1000 G or more, preferably 10,000 G or less, more preferably 5000 G or less, and further preferably 2000 G or less, ⁇ 10 >
  • the treatment time for centrifugation is preferably 1 minute or more, more preferably 5 minutes or more, further preferably 10 minutes or more, preferably 80 minutes or less, more preferably 40 minutes or less,
  • the centrifugation treatment temperature is preferably 10 ° C. or higher, more preferably 15 ° C. or higher, preferably 50 ° C. or lower, more preferably 40 ° C. or lower.
  • ⁇ Used alga body> Seawater samples containing algae were obtained from the coast near Ishigaki Island in Okinawa Prefecture. The obtained seawater sample was concentrated by a filter, and one algal cell strain was isolated by a micropipette. The isolated algal bodies were cultured in a culture solution (Daigo IMK medium, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and further the algal bodies were grown using the culture medium (f / 2 medium). A part of this alga body was requested to be analyzed by the University of Texas (UTEX Culture Collection) and identified as Nannochloropsis salina.
  • Nannochloropsis oculata “Yanmarine K-1” manufactured by Chlorella Kogyo Co., Ltd., liquid constituting the treatment liquid: seawater, algal body concentration: 50 g / L was obtained and used in the experiment.
  • the number of cells in 80 squares (16 squares ⁇ 5) of a 0.05 mm square block was counted.
  • the depth of the calculation room of the bacteria counter is 0.020 mm, and the volume per block of 0.05 mm square is 1/20000 mm 3 .
  • Daigo artificial seawater SP (made by Wako Pure Chemical Industries) was used for the dilution liquid.
  • ⁇ Calculation of cell disruption rate The number of cells in the treatment solution was measured by the method for measuring the number of cells described above. The number of cells after the crushing treatment was subtracted from the number of cells before the crushing treatment, divided by the number of cells before the crushing treatment, and a value multiplied by 100 was taken as the cell crushing rate (%).
  • the treatment liquid containing microalgae was centrifuged (15000 rpm, 5 minutes, 25 ° C.) with a centrifuge (manufactured by HITACHI, CR22GIII, rotor: 18A), the supernatant was discarded, and 0.125 M citric acid ⁇ Redispersed in disodium hydrogen phosphate buffer (pH 5).
  • the redispersed liquid was suction filtered with a filter (Nihon Pole, Supor-450, pore size 0.45 ⁇ m) and washed with an equal amount of distilled water.
  • the filter in which the algal bodies were collected was transferred to an aluminum cup and dried at 105 ° C. for 2 hours.
  • the weight after drying was measured, and the tare of the filter was subtracted to obtain the algal body concentration (g / L). Also, if the treatment liquid is difficult to filter by suction with a filter, dilute the treatment liquid to an appropriate concentration, measure the weight after drying, subtract the tare of the filter, and then multiply by the dilution factor to obtain the algal body concentration ( g / L). In addition, 0.125M citrate-disodium hydrogen phosphate buffer (pH 5) can be used as the diluent.
  • a treatment liquid containing a predetermined concentration of microalgae was placed in a polyethylene container and allowed to stand in a chamber of a vacuum dryer (manufactured by Yamato Kagaku Co., ADP300) set at a predetermined temperature in advance. The inside of the chamber was atmospheric pressure. After a predetermined time had elapsed, the sample was removed from the dryer and cooled at room temperature. In addition, when processing at 25 degreeC as a comparison, the temperature of the laboratory was set to 25 degreeC and the sample was left still in the laboratory. As a comparison, when processing at 4 ° C., the sample was left in a refrigerator (MPR-1411, manufactured by Sanyo Electric Co., Ltd.). After a predetermined time, the sample was removed from the refrigerator and returned to room temperature.
  • a vacuum dryer manufactured by Yamato Kagaku Co., ADP300
  • the physical treatment was performed with a high-pressure dispersing device.
  • a high-pressure dispersion device Nanovater “NM2-L200-D” (manufactured by Yoshida Kikai Kogyo Co., Ltd., cross-type nozzle: NVGL-XT160) or pressure homogenizer “LAB2000” (manufactured by SMT Co., Ltd.) was used.
  • the treatment pressure was 100 MPa as the inlet pressure and 0.1 Mpa (atmospheric pressure) as the absolute outlet pressure, and was obtained from the seventh shot for cutting off. The number of passes was one.
  • the treatment pressure was 100 MPa (gauge pressure) as the inlet pressure and 0.1 MPa (atmospheric pressure) as the absolute pressure as the outlet pressure.
  • the 300 cc processing liquid after the start of processing was discarded for cutting off, and a processing sample was obtained from 300 cc and thereafter. The number of passes was one.
  • lipid content in dry algae was analyzed according to the method for extracting lipids from biomaterials (Bligh & Dyer method) reported in 1959 by EGBligh and WJDyer (EGBligh, WJDyer, Canadian journal of biochemistry and physiology, 37 (1959 ), P.911-917).
  • This chloroform / methanol solvent extraction method is effective for simply measuring the amount of lipid in algal cells, but from the viewpoint of the safety, recoverability, and recyclability of the solvent used, it is not suitable for industrial practical use. This is not a suitable method.
  • Lipids were recovered by solvent extraction as shown below. The collected lipid was converted to methyl ester, and the amount of lipid was quantified by the above-mentioned GC.
  • Lipid recovery rate (%) lipid amount in hexane / lipid amount in dry alga body ⁇ 100 (1)
  • Nannochloropsis salina (Liquid constituting treatment liquid: artificial seawater (Daigo artificial seawater SP, manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd., alga body concentration: 1.0 g / L) ) was used.
  • the pH of the treatment liquid at 25 ° C. was 7.3.
  • 1M HCl was added dropwise to adjust the pH of the treatment solution to 5.0.
  • the solution whose pH was adjusted was heat-treated.
  • the treatment temperature was 50 ° C. and the treatment time was 1 hour.
  • the physical treatment was performed using a nano perennial under the condition where the inlet pressure was 100 MPa.
  • the cell disruption rate was 38.6%.
  • Example 2 Example 1 was repeated except that the heat treatment time was 2 hours. The cell disruption rate was 33.9%.
  • Example 3 Example 1 was repeated except that the heat treatment time was 3 hours. The cell disruption rate was 45.8%.
  • Example 4 Example 1 was repeated except that the heat treatment time was 5 hours. The cell disruption rate was 47.4%.
  • Example 5 Example 1 was repeated except that the heat treatment time was 10 hours. The cell disruption rate was 60.5%.
  • Example 6 Example 1 was repeated except that the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 87.0%. Moreover, the lipid recovery rate after crushing was 69%.
  • Example 7 The same procedure as in Example 6 was performed except that the inlet pressure in the physical treatment was 50 MPa. The cell disruption rate was 75.9%. Moreover, the lipid recovery rate after crushing was 70%.
  • Example 1 Example 1 was repeated except that the pH was not adjusted and no heat treatment was performed. That is, after obtaining a treatment liquid of Nannochloropsis salina (liquid constituting the treatment liquid: artificial seawater (Daigo Artificial Seawater SP, manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd., alga body concentration: 1.0 g / L)) With the pH of 7.3, physical treatment was performed with a high-pressure disperser Nanovaita within 30 minutes after the sample was obtained, with the inlet pressure being 100 MPa. The cell disruption rate was 16.9%.
  • Nannochloropsis salina liquid constituting the treatment liquid: artificial seawater (Daigo Artificial Seawater SP, manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd., alga body concentration: 1.0 g / L)
  • Example 2 Example 1 was repeated except that no heat treatment was performed. That is, the treatment liquid of Nannochloropsis salina (Nannochloropsis salina) (liquid constituting the treatment liquid: artificial seawater (Daigo Artificial Seawater SP, manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd., alga body concentration: 1.0 g / L)) After adjusting the pH to 5.0 at 25 ° C. using HCl, physical treatment was performed under a condition of an inlet pressure of 100 MPa using a high-pressure dispersion apparatus Nano perenniala without performing heat treatment within 30 minutes. The cell disruption rate was 18.7%. Moreover, the lipid recovery rate after crushing was 6%.
  • Example 3 (Comparative Example 3) Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 25 ° C. The cell disruption rate was 16.1%.
  • Example 4 (Comparative Example 4) Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 25 ° C. and the heat treatment time was 2 hours. The cell disruption rate was 11.9%.
  • Example 1 (Comparative Example 5) Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 25 ° C. and the heat treatment time was 3 hours. The cell disruption rate was 13.2%.
  • Example 1 (Comparative Example 6) Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 25 ° C. and the heat treatment time was 10 hours. The cell disruption rate was 18.5%.
  • Example 7 Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 25 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 16.1%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 80 ° C. The cell disruption rate was 21.8%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 80 ° C. and the heat treatment time was 2 hours. The cell disruption rate was 18.5%.
  • Example 1 (Comparative Example 10) Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 80 ° C. and the heat treatment time was 3 hours. The cell disruption rate was 24.8%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 80 ° C. and the heat treatment time was 10 hours. The cell disruption rate was 18.5%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 80 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 23.0%.
  • Comparative Example 13 After crushing as in Comparative Example 2, heat treatment was performed at 50 ° C. for 24 hours. The cell disruption rate was 19.3%.
  • Example 8 Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 40 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 49.5%. Moreover, the lipid recovery rate after crushing was 33%.
  • Example 9 Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 45 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 92.0%. Moreover, the lipid recovery rate after crushing was 74%.
  • Example 10 Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 55 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 81.2%. Moreover, the lipid recovery rate after crushing was 73%.
  • Example 11 Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 60 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 72.1%. Moreover, the lipid recovery rate after crushing was 55%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 4 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 19.9%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 37 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 19.0%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 70 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 29.4%.
  • Example 1 was repeated except that the heat treatment temperature was 80 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 23.0%.
  • Example 12 The same procedure as in Example 1 was performed except that the pH of the treatment solution was adjusted to 4.0 at 25 ° C. using 1 M HCl and the heat treatment time was 10 hours. The cell disruption rate was 40.3%.
  • Example 13 Example 12 was repeated except that the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 66.0%.
  • Example 14 The process was the same as Example 1 except that the pH of the treatment liquid was adjusted to 6.8 at 25 ° C. and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 53.5%.
  • Example 15 The procedure was the same as Example 1 except that the pH of the treatment liquid was not adjusted, the pH at 25 ° C. was kept at 7.3, and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 52.3%.
  • Example 16 Example 15 was repeated except that the heat treatment time was 48 hours. The cell disruption rate was 66.6%.
  • Example 17 The procedure was the same as Example 1 except that the pH of the treatment solution was adjusted to 9.0 at 25 ° C. using 1 M NaOH and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 47.4%.
  • Example 18 The procedure was the same as Example 1 except that the pH of the treatment solution was adjusted to 2.0 at 25 ° C. with 1M HCl and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 23.6%.
  • Example 19 The process was performed in the same manner as in Example 1 except that the pH of the treatment solution was adjusted to 3.0 at 25 ° C. with 1 M HCl and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 16.0%.
  • Example 20 The procedure was the same as Example 1 except that the pH of the treatment solution was adjusted to 10.0 at 25 ° C. with 1 M NaOH and the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 26.5%.
  • Example 21 The treatment solution was adjusted to 12.0 at 25 ° C. with 1 M NaOH, and the same treatment as in Example 1 was conducted except that the heat treatment time was 24 hours. The cell disruption rate was 18.6%.
  • Table 4 summarizes the working conditions and cell disruption rates for Examples 12 to 17 and Comparative Examples 18 to 21.
  • Example 18 Nannochloropsis oculata "Chilled Nanno Yanmarine K-1" (manufactured by Chlorella Kogyo Co., Ltd., liquid constituting seawater, alga body concentration: 50 g / L) It was used after returning to room temperature. Furthermore, this processing liquid was diluted with artificial seawater (manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd., Daigo artificial seawater SP for marine microalgae) to adjust the algal body concentration to 1.0 g / L. The pH of the treatment liquid at 25 ° C. was 5.0. The same treatment as in Example 1 was performed except that the heat treatment time was changed to 5 hours using the above treatment liquid. The cell disruption rate was 47.4%.
  • Example 19 Example 18 was repeated except that the heat treatment time was 10 hours. The cell disruption rate was 49.4%.
  • Example 22 The procedure was the same as Example 18 except that the pH was not adjusted and no heat treatment was performed.
  • the treatment solution of Nannochloropsis oculata “Refrigerated Nanno Yanmarine K-1” (algae concentration: 1.0 g / L) was heat-treated within 30 minutes after dilution while maintaining the pH at 25 ° C. at 6.8. Instead, physical treatment was performed in a high-pressure dispersion apparatus. The cell disruption rate was 19.6%.
  • Example 18 was the same as Example 18 except that the heat treatment temperature was 25 ° C. and the heat treatment time was 10 hours. The cell disruption rate was 22.7%.
  • Table 5 summarizes the working conditions and cell disruption rates for Examples 18 to 19 and Comparative Examples 22 to 23.
  • Nannochloropsis salina Liquid constituting treatment liquid: artificial seawater (Daigo artificial seawater SP, manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd., alga body concentration: 1.0 g / L) )
  • the pH of the treatment liquid was 7.3.
  • aluminum sulfate manufactured by Central Glass Co., Ltd., trade name “sulfuric acid band” is added to the treatment liquid. It added so that it might become 0.1%, and stirred for 5 minutes. Then, stirring was stopped and it left still at room temperature for 3 hours.
  • the algal bodies aggregated and settled. Thereafter, a part of the supernatant was discarded to adjust the algal cell concentration to 15.2 g / L. 1M HCl was added dropwise, and the pH of the treatment solution was adjusted to 5.0 at 25 ° C. The solution whose pH was adjusted was heat-treated. The treatment temperature was 50 ° C. and the treatment time was 24 hours. After the heat treatment, physical treatment was performed using a pressure homogenizer under the condition of an inlet pressure of 100 MPa. The cell disruption rate was 77.6%.

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Abstract

　藻類の破砕方法は、不等毛植物門に属する微細藻類に対し、ｐＨが３．５以上、９．５以下の条件で４０℃以上、６５℃以下の温度で熱処理した後、高圧分散装置を用いて物理的処理をする。

Description

藻類の破砕方法
　本開示は、藻類の破砕方法及びそれを用いた藻類から脂質を抽出する方法に関する。
　近年、地球温暖化を始めとする環境問題に対する意識や関心が高まっている。このため、二酸化炭素の排出量を低減することや、二酸化炭素の固定化により大気中の二酸化炭素濃度を低減することについて様々な検討が行われている。例えば、化石燃料に代えてカーボンニュートラルな資源であるバイオマスをエネルギー源として利用する試みが活発になされている。
　藻類は、脂質を産生することが知られている。藻類が産生した脂質を効率良く抽出することができれば、化石燃料に代わるエネルギー源となり得る。エネルギー源以外にも種々の製品の原材料となり得る。しかし、藻類から脂質を抽出する際には、細胞壁が大きな障害となる。一般的に藻類の細胞壁は、硬く且つ柔軟性を有するため、容易に破砕することができない。このため、藻類から脂質等の産生物を効率良く回収することは容易ではない。
　バイオマスから脂質等の油性化合物を回収する方法として、例えば特許文献１には、ｐＨを調整したバイオマス懸濁液に非極性溶媒を接触させ、非極性溶媒と極性バイオマス溶液から細胞産物を回収する方法が記載されている。
特表２０１２－５２００７６号公報
　しかし、特許文献１は、脂質収率が十分でないという問題がある。また、高い脂質収率を得るためには、ｐＨ１、処理温度１２０℃以上という条件が必要であることも示されている。従って、高温下の強酸条件に耐える非常に特殊な設備が必要となり、商業化することは極めて困難である。
　藻類を効率良く破砕することができれば、藻類からの脂質収率を大きく向上できると期待される。
　本開示の課題は、不等毛植物門に属する微細藻類を効率良く破砕できるようにすることである。
　藻類の破砕方法の一態様は、不等毛植物門に属する微細藻類に対し、ｐＨが３．５以上、９．５以下の条件で４０℃以上、６５℃以下の温度で熱処理した後、高圧分散装置を用いて物理的処理をする。
　本開示の藻類の破砕方法によれば、不等植物門に属する微細藻類を効率良く破砕することができる。
高圧分散装置の均質バルブの一例を示す断面図である。 高圧分散装置のチャンバの一例を示す斜視図である。 高圧分散装置のチャンバの一例を示す斜視図である。
　＜不等毛植物門に属する微細藻類＞
　本開示において、不等毛植物門に属する微細藻類とは、微細藻類のうち、不等毛植物門に属するものをいう。微細藻類とは、酸素を発生する光合成を行う生物の中からコケ植物、シダ植物、及び種子植物を除いた残りのうちの、細胞サイズが直径１μｍ～１００μｍのものをいう。なお、細胞サイズは、光学顕微鏡を用いて観察倍率４００倍で測定した細胞の長軸径である。不等毛植物門に属する微細藻類の具体例としてはBacillariophyceae綱、及びEustigmatophyceae綱等が挙げられる。Bacillariophyceae綱の微細藻類の具体例としては、Chaetoceros属、Nitzschia属、及びSkeletonema属等が挙げられる。Eustigmatophyceae綱の微細藻類の具体例としては、Nannochloropsis（ナンノクロロプシス）属が挙げられる。このうち、脂質の生産性及び脂質の回収性の観点から、Eustigmatophyceae綱の微細藻類が好ましく、中でもNannochloropsis属がより好ましい。Nannochloropsis属の藻類としては、Nannochloropsis oculata、Nannochloropsis salina、Nannochloropsis gaditanaなどが例示される。微細藻類は、沼や池等に生息するものを採取したものでも、培養したものでもよく、さらには商業的に入手したものでもよい。
　＜破砕方法＞
　本実施形態の藻類の破砕方法は、不等毛植物門に属する微細藻類に対して、所定の水素イオン濃度（ｐＨ）範囲で、所定温度範囲にて熱処理をした後、高圧分散装置を用いて物理的処理をする。
　本実施形態の破砕方法は、採取又は培養等により得られた、分散媒中に分散した状態の藻類をそのまま破砕処理することができる。また、処理液中に含まれる微細藻類の濃度（以下、藻体濃度ともいう。）を調整するための希釈又は濃縮等の操作を行ってから処理してもよい。さらに、分散媒の置換又は添加物の添加等の処理を行ってもよい。低温若しくは常温での保存又は凍結保存等の処理をすることもできる。破砕処理をする前に、微細藻類が８０℃以上の温度にさらされていないことが好ましい。
　藻体濃度は、特に限定されない。生産性の向上、藻類の破砕性、脂質の回収性の観点からは、０．５ｇ／Ｌ以上が好ましく、０．８ｇ／Ｌ以上がより好ましく、５ｇ／Ｌ以上がさらに好ましく、１０ｇ／Ｌ以上がよりさらに好ましい。また、藻類の破砕性、脂質の回収性及び処理液の流動性の観点から、２００ｇ／Ｌ以下が好ましく、１００ｇ／Ｌ以下がより好ましく、５０ｇ／Ｌ以下がさらに好ましく、３０ｇ／Ｌ以下がよりさらに好ましく、２０ｇ／Ｌ以下がよりさらに好ましい。
　濃度の調整方法は特に限定されない。濃縮方法としては例えばろ過、圧搾、遠心分離、重力沈降、凝集沈降、加圧浮上又は分散媒の蒸発等の方法が挙げられる。例えば、硫酸アルミニウム等の凝集剤を添加して、藻体を凝集沈降させた後、上清の一部を廃棄して濃縮したり、凝集沈降した藻体を回収して再懸濁して濃縮したりすることができる。また、複数の方法を組み合わせて多段階の濃縮を行ってもよい。熱処理と物理的処理をそれぞれ異なる濃度で行ってもよい。希釈方法としては例えば水等の液体を添加する方法が挙げられる。なお、処理液中の微細藻類の濃度は、実施例に記載された方法により測定された値である。
　処理液の分散媒は、所定のｐＨ範囲とすることができれば特に限定されないが、経済性の観点から水が好ましい。水は精製されていても、不純物を含んでいてもよい。また、海水であってもよい。処理液が、塩化ナトリウム等の塩、窒素若しくはリンを含む化合物、微量金属、無機系凝集剤、有機系凝集剤、キレート剤、及び緩衝剤等のいずれか１つ又は２つ以上からなる添加物を含んでいてもよい。水を主成分とする培養液により微細藻類を培養した場合には、微細藻類の培養液をそのまま又は希釈等をして熱処理することができる。培養液又はその希釈液を処理液とする場合には、処理液が通常の培養液に含まれる種々の成分を含んでいてかまわない。培養液を希釈する場合には、水又は所定の添加物を含む水溶液を用いることができる。また、培養液を水又は所定の添加物を含む水溶液に置換してから処理してもよい。
　－熱処理－
　・ｐＨ
　熱処理は、微細藻類を効率良く破砕する観点から、ｐＨ３．５以上、好ましくは３．８以上、より好ましくは４．０以上、さらに好ましくは４．５以上、よりさらに好ましくは５．０以上であり、そして、微細藻類を効率良く破砕する観点から、ｐＨ９．５以下、好ましくは９．０以下、より好ましくは８．５以下、さらに好ましくは８．０以下、よりさらに好ましくは７．５以下、よりさらに好ましくは７．０以下、よりさらに好ましくは６．５以下、よりさらに好ましくは６．０以下である。
　ｐＨは、JIS　Z8802に従った測定方法で、処理液のｐＨを２５℃で測定することにより求めることができる。
　・処理温度
　熱処理の温度は、微細藻類を効率良く破砕する観点から、４０℃以上、好ましくは４２℃以上、より好ましくは４３℃以上、さらに好ましくは４５℃以上であり、そして、微細藻類を効率良く破砕する観点から、６５℃以下、好ましくは６２℃以下、より好ましくは６０℃以下、さらに好ましくは５７℃以下、よりさらに好ましくは５５℃以下、よりさらに好ましくは５２℃以下、よりさらに好ましくは５０℃以下である。
　・処理時間
　熱処理の時間は、処理液の温度を上記の熱処理の温度範囲内で維持した時間を表し、微細藻類を効率良く破砕する観点から、好ましくは０．５時間以上、より好ましくは１時間以上、さらに好ましくは３時間以上、よりさらに好ましくは５時間以上、よりさらに好ましくは８時間以上、よりさらに好ましくは１０時間以上、よりさらに好ましくは２０時間以上、よりさらに好ましくは２４時間以上、よりさらに好ましくは４８時間以上とすることができる。処理時間の上限は、生産効率の観点から、好ましくは９６時間以下、より好ましくは７２時間以下とすることができる。
　熱処理は、所定の時間続けて行えばよいが、合計が所定の時間となるように複数回に別けて行うこともできる。
　以上の条件の範囲でｐＨ、温度及び時間を自由に組み合わせることができるが、微細藻類を効率良く破砕する観点から、中でもｐＨを５．０以上、７．５以下で、温度を４５℃以上、６０℃以下で、時間を１０時間以上とすることが好ましい。
　熱処理は、開放又は密閉された処理槽により行うことができる。処理槽内の温度は、既知の方法により制御すればよい。例えば、熱源と、所定の温度になるように熱源をオンオフする制御装置とを設けることができる。温度制御は、通常の工業的処理の精度で行えばよく、好ましくは±５℃以下、より好ましくは±３℃以下、さらに好ましくは±１℃以下に制御することができる。制御が困難である場合には、処理液の温度が所定の温度範囲内にある時間の合計が、所定の時間となればよい。熱源は処理槽の内部に設けても、外部に設けてもよい。処理槽はバッチ式であっても、フロー式であってもよい。フロー式の場合、処理液が流れる通路状の処理槽としてもよい。熱処理は常圧で行うことができるが、加圧又は減圧環境で行うこともできる。
　処理温度は、例えば温度計又は温度センサ等を処理液中に挿入して測定することができる。また、非接触の温度センサを用いて処理液の液温を測定することも可能である。処理液の温度を直接測定するのではなく、処理槽の雰囲気温度又は外部温度等を測定してもよい。この場合、雰囲気温度等と処理液の温度との相関係数を予め求めておき、雰囲気温度等を処理液の温度に換算してもよい。また、温度計又は温度センサ等の出力を記録装置に接続して、連続的に又は周期的に温度を記録することにより、熱処理の時間を精度良く管理することが可能となる。
　処理液のｐＨが所定の値ではない場合には、処理液に酸又はアルカリを加えることによりｐＨを調整することができる。酸は特に限定されず、有機酸、鉱酸又はこれらの混合物を用いることができる。例えば、酢酸、クエン酸、リン酸、塩酸、硝酸又は硫酸等を用いることができる。アルカリは特に限定されないが、炭酸ナトリウム、アンモニア又は水酸化ナトリウム等を用いることができる。また、分散媒を緩衝液としてもよい。緩衝液は必要とするｐＨに応じて選択すればよいが、酢酸、クエン酸、リン酸又は炭酸ナトリウム等を含む緩衝液を用いることができる。
　熱処理の際に処理液にどのような添加物を加えてもよい。但し、細胞壁の分解作用を有する酵素、例えば、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ及びラミナリナーゼ等を積極的に添加する必要はない。また、塩、アルカリ、界面活性剤及び洗剤等の細胞壁を分解する作用を有する薬剤を積極的に添加する必要もない。但し、これらの酵素又は薬剤が処理液に含まれていてもかまわない。
　－物理的処理－
　物理的処理は、高圧分散装置により行うことができる。高圧分散装置は、基本的に、固体粒子や液滴粒子等の分散質を含む処理液を加圧した状態で狭い流路を通過させ、その後急激に減圧することで固体粒子や液滴粒子等の分散質をさらに分散又は粉砕する装置である。高圧分散装置は、工業化において大量処理が可能であるという観点からも好ましい。
　処理液の加圧には高圧ポンプを用いることができる。処理液を通過させる狭い隙間を有する流路は、所定の圧力等を加えることができればどのような構造としてもよい。必要とする圧力等によって隙間の幅等の値は適宜変えればよいが、例えば、流路を直径が１μｍ～２０００μｍの直管とすることができる。また、１μｍ～２０００μｍの穴を有するオリフィスが直管の流路の途中に配置されている構造としてもよい。１μｍ～２０００μｍの隙間を有するスリットが直管の流路の途中に配置されている構造とすることもできる。また、バルブの先端とバルブ受けの隙間に流路を形成させ、バルブの開度を調整することで、隙間の間隔を１μｍ～２０００μｍとしてもよい。さらに、１μｍ～２０００μｍの隙間の流路を対向させて配置し、処理液同士を衝突させてもよい。流路の方向を例えば直角に曲げるなど急激に変化させて、流路の壁面に処理液を衝突させてもよい。
　このような処理を行う装置として種々の構成のものを用いることができるが、微細藻類を効率良く破砕する観点から、例えば均質バルブを有する均質バルブ式の高圧分散装置及びチャンバを有するチャンバ式の高圧分散装置等を用いることが好ましい。中でも、少量処理が可能である観点からチャンバ式の高圧分散装置が好ましく、工業化においては大量処理が可能である観点から均質バルブ式の高圧分散装置が好ましい。図１には均質バルブ１００の一例を示す。均質バルブ１００は、吐出孔が形成された均質バルブシート（バルブ受け）１０１と、均質バルブシート１０１の吐出口と対向する位置に配置された均質バルブ本体１０２と、均質バルブ本体１０２を囲むインパクトリング１０３とを有する。均質バルブシート１０１、均質バルブ本体１０２及びインパクトリング１０３が形成する間隙を通過する際に処理液には大きな圧力が加わり、間隙を通過した後は急激に減圧される。吐出孔から吐出された処理液中の分散質は、均質バルブ本体１０２及びインパクトリング１０３に衝突する。間隙を通過する際のせん断応力、衝突による衝撃力、及び間隙を通過した後の圧力降下によるキャビテーションにより、分散質が粉砕される。
　均質バルブシート１０１、均質バルブ本体１０２及びインパクトリング１０３が形成する間隙の大きさを変化させることにより分散質に加わるせん断力を調整できる。均質バルブシート１０１と均質バルブ本体１０２とが互いに対向する面は、平滑面とすることができる。また、流路を長くし、分散質に十分に強いせん断力を与えることを目的として、流路となる壁面に凹凸を形成することもできる。また、インパクトリング１０３が設けられていない構成とすることもできる。
　また、物理的処理にはチャンバ式の高圧分散装置を用いることもできる。チャンバ式の高圧分散装置は、処理液を互いに衝突させる又は壁面等と衝突させる形式ものと、衝突させない形式ものとがある。
　処理液同士を衝突させる形式のチャンバ式高圧分散装置は、例えば図２に示すようなチャンバ１１０を有している。チャンバ１１０は、複数の処理液の流入管路１１１と、流入管路１１１と同数のせん断管路１１２と、単一の流出管路１１３とが順次連結され、複数のせん断管路１１２の流出管路１１３に近い方の端が１カ所で接続されており、接続箇所において処理液同士を衝突させる。流入管路１１１及び流出管路１１３よりも細いせん断管路１１２におけるせん断応力、処理液同士の衝突による衝撃力、及び流出管路１１３における圧力降下によるキャビテーションにより、分散質が粉砕される。
　処理液と壁面とを衝突させる形式のチャンバ式高圧分散装置は、例えば図３に示すようなチャンバ１２０を有している。チャンバ１２０は、各々単一の、液体の流入管路１２１と、せん断管路１２２と、流出管路１２３とが順次連結されている。せん断管路１２２と流出管路１２３とのなす角度は直角となっており、せん断管路１２２の液体流を流出管路１２３の内壁に衝突させる。せん断管路１２２におけるせん断応力、処理液と壁面との衝突による衝撃力、及び流出管路１２３における圧力降下によるキャビテーションにより、分散質が粉砕される。
　処理液を衝突させない形式のチャンバ式高圧分散装置は、例えば流路中に狭いせん断管路が設けられており、せん断管路におけるせん断応力と、拡がった流出管路における圧力降下によるキャビテーションにより、分散質が粉砕される。
　これらの形式の高圧分散装置に限らず、他の形式の高圧分散装置を用いることもできる。
　いずれの形式の高圧分散装置についても、微細藻類の物理的処理に用いる場合には、処理液に加える圧力（入口圧）は、藻類を効率良く破砕する観点から、ゲージ圧で１０ＭＰａ以上、好ましくは３０ＭＰａ以上、より好ましくは５０ＭＰａ以上、さらに好ましくは８０ＭＰａ以上であり、経済性の観点から、好ましくは２００ＭＰａ以下、より好ましくは１５０ＭＰａ以下、さらに好ましくは１２０ＭＰａ以下である。藻類を効率良く破砕する観点及び経済性の観点から、減圧後の圧力（出口圧）は大気圧（絶対圧で０．１ＭＰａ）とすることができる。流路の構造等により完全に大気圧まで減圧されなくてもよく、出口圧は絶対圧で、好ましくは０．３ＭＰａ以下、より好ましくは０．２ＭＰａ以下、さらに好ましくは０．１５ＭＰａ以下、よりさらに好ましくは０．１１ＭＰａ以下である。
　均質バルブ式の高圧分散装置の具体例としては、圧力式ホモジナイザー（株式会社エスエムテー）、高圧ホモゲナイザー（株式会社イズミフードマシナリ）、及びミニラボ８．３Ｈ型（Ｒａｎｎｉｅ社）等が挙げられる。チャンバ式の高圧分散装置の例としては、マイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ社）、ナノヴェイタ（エス・ジーエンジニアリング株式会社、吉田機械工業株式会社）、スターバースト（スギノマシン株式会社）、アルティマイザー（スギノマシン株式会社）、ジーナスＰＹ（白水化学株式会社）、ＤｅＢＥＥ２０００（日本ビーイーイー株式会社）等が挙げられる。これらのうち、少量処理が可能である観点からナノヴェイタが好ましく、工業化においては大量処理が可能である観点から圧力式ホモジナイザーが好ましい。
　熱処理の後に物理的処理を行うことにより不等毛植物門に属する微細藻類を効率良く破砕することができる。不等毛植物門に属する微細藻類である場合には、先に示したような熱処理と物理的処理との組み合わせとすることにより、物理的処理単独の場合よりも破砕効率を大きく向上させることができる。本実施形態の破砕方法においては、熱処理の温度は４０℃～６５℃程度である。この程度の温度であれば数時間～十時間程度の熱処理に要するエネルギーは小さく、費用も非常に低く抑えられる。このため、物理処理単独の場合と比べて、単純に破砕率が向上するだけでなく、必要とするエネルギーや費用を考慮した実質的な効率についても大きく向上する。また、熱処理が数十時間～数日間に及んだとしても、この程度の温度範囲であれば大きなエネルギーは必要とせず、熱処理費用も低く抑えられる。また、サイクルタイムについても許容の範囲内であり、実質的な破砕率の向上効果が十分に得られる。
　熱処理の後に物理的処理を複数回繰り返してもよい。熱処理の後、他の処理を行うことなく物理的処理を行うことができる。熱処理の後すぐに物理的処理を行うことができるが、熱処理の後、処理液を一旦保存してから物理的処理を行うこともできる。処理液を保存する場合には、必要とするエネルギーを低減する観点から、１５～２５℃程度の常温であることが好ましく、また、脂質の変質を抑える観点から５～１５℃程度の低温で保存することが好ましい。凍結保存することもできる。熱処理の後、物理的処理の前に処理液の濃縮、希釈又は分散媒の置換、処理液のｐＨ調整等の操作を行うこともできる。
　＜脂質を抽出する方法＞
　本実施形態の破砕方法は、脂質を回収する処理と組み合わせて、脂質を抽出する方法とすることができる。破砕率が高いほど、微細藻類の処理液からの脂質の収率が向上する。従って、効率良く破砕できる本実施形態の破砕方法により、不等毛植物門に属する微細藻類を破砕してから脂質を抽出して回収することにより、脂質の収率を大きく向上することができる。また、破砕処理における破砕率を高くすることにより、抽出に用いる溶媒の量を低減できたり、抽出に必要とするエネルギーや費用を低減できたりするという利点も得られる。
　－脂質－
　本開示において、脂質には、単純脂質、複合脂質及び誘導脂質が含まれる。単純脂質には、油脂又は脂肪酸エステルなどの脂肪酸と各種アルコールとのエステル等が含まれる。複合脂質には、脂肪酸、アルコール及びリン酸を含むリン脂質、並びに脂肪酸、アルコール及び糖を含む糖脂質等が含まれる。誘導脂質には、単純脂質又は複合脂質の加水分解生成物であり、水に不溶性の脂肪酸、高級アルコール、ステロール、テルペン、及び脂溶性ビタミン等が含まれる。脂質の回収性の観点から、単純脂質又は複合脂質が好ましく、単純脂質がより好ましく、油脂がさらに好ましい。
　－油脂－
　油脂とは、脂肪酸とグリセリンとのエステルを意味し、具体的には、モノグリセリド、ジグリセリド、及びトリグリセリドのような中性脂質をいう。油脂を構成する脂肪酸は、単一でなくてよい。
　－脂肪酸－
　脂肪酸は、炭素数が２～４の短鎖脂肪酸、炭素数が５～１２の中鎖脂肪酸、及び炭素数が１２以上の長鎖脂肪酸のいずれであってもよい。また、飽和脂肪酸でも不飽和脂肪酸でもよい。飽和脂肪酸の具体例としては、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、及びイコサン酸が挙げられる。一価の不飽和脂肪酸の具体例としては、９－ヘキサデセン酸、及び９－オクタデセン酸等が挙げられる。多価の不飽和脂肪酸の具体例としては、９，１２－オクタデカジエン酸、６，９，１２－オクタデカトリエン酸、５，８，１１，１４－イコサテトラエン酸、９，１２，１５－オクタデカトリエン酸、５，８，１１，１４，１７－イコサペンタエン酸、及び４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸が挙げられる。
　－脂肪酸エステル－
　脂肪酸エステルとは、油脂以外の、脂肪酸とアルコールとのエステルであり、長鎖脂肪酸と１価又は２価の高級アルコールとのエステルである蝋、中鎖脂肪酸と低級又は高級アルコールとのエステルである中鎖脂肪酸エステル等を含む。
　－脂質を回収する処理－
　脂質を回収する処理は、微細藻類の破砕物を含む処理液から脂質を分取することができれば特に限定されない。例えば、溶媒抽出、遠心分離、静置処理、カラムクロマトグラフィー等が挙げられる。これらの１種又は２種以上を組み合わせて適用することができる。中でも、脂質の回収性の観点から、溶媒抽出、遠心分離及び静置処理から選ばれる１種又は２種以上の組み合わせが好ましく、中でも溶媒抽出と遠心分離との組み合わせ、又は溶媒抽出と静置処理との組み合わせが好ましい。
　溶媒抽出は、微細藻類を破砕した後の処理液に抽出用の溶媒を添加して混合すればよい。溶媒を添加した後、攪拌を行ってもよい。微細藻類から溶出した脂質は、溶媒に溶解するため、溶媒相と水相とを相分離させて、溶媒相を回収することにより、脂質を回収することができる。
　溶媒抽出に用いる溶媒としては、例えば、酢酸メチル、及び酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、及びジエチルエーテル等の鎖状並びに環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、及び四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、及び石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、及びトルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、及びイソプロピルアルコール（２－プロパノール）等のアルコール類；ブチレングリコール等の多価アルコール類；メチルエチルケトン等のケトン類；超臨界二酸化炭素等が挙げられる。これらは単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
　これらの溶媒の中でも、脂質の回収性の観点から、非極性溶媒が好ましい。非極性溶媒の具体例として、ハロゲン化炭化水素類、炭化水素類、又は芳香族炭化水素類が挙げられ、中でも、炭化水素類が好ましく、ヘキサンがより好ましい。また、メタノール、エタノール、プロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、及びアセトン等の水と相溶性のある溶媒を非極性溶媒に補助的に添加して用いることもできる。また、超臨界二酸化炭素等を用いた超臨界抽出を用いることもできる。さらに、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、又は亜臨界抽出等を用いることもできる。例えば、「生物化学実験法２４　植物脂質代謝実験法」（山田晃弘　編著、株式会社学会出版センター、ｐ３－４）に記載の方法を参考にすることができる。
　溶媒抽出の温度は特に限定されないが、脂質の回収性の観点から、好ましくは１０℃以上、より好ましくは２０℃以上である。また、上記観点及び溶媒を加温する等の経済性の観点から、好ましくは６０℃以下、より好ましくは５０℃以下、さらにより好ましくは４０℃以下である。
　また、溶媒抽出は１回でもよく、２回以上行ってもよい。溶媒抽出を２回以上行う場合は、同じ溶媒により行っても、異なる溶媒により行ってもよい。
　遠心分離は、分離板型、円筒型、又はデカンター型等の一般的な機器を使用することができる。この場合の遠心力は、脂質の回収性の観点から、好ましくは５００Ｇ以上、より好ましくは１０００Ｇ以上とすることができる。また、経済性の観点から、好ましくは１００００Ｇ以下、より好ましくは５０００Ｇ以下、さらに好ましくは２０００Ｇ以下とすることができる。
　遠心分離の処理時間は、脂質の回収性の観点から、好ましくは１分以上、より好ましくは５分以上、さらに好ましくは１０分以上とすることができる。また、経済性の観点から、好ましくは８０分以下、より好ましくは４０分以下、さらに好ましくは２０分以下とすることができる。
　遠心分離の際の温度は特に限定されないが、脂質の回収性及び経済性の観点から、好ましくは１０℃以上、より好ましくは１５℃以上であり、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４０℃以下である。
　溶媒抽出と遠心分離とを組み合わせる場合には、溶媒相と水相との分離を遠心分離により迅速に行うことができる。
　静置処理は、脂質と水相とが相分離するまで反応液を静止状態に置けばよい。溶媒抽出と組み合わせる場合には、溶媒相と水相とが相分離するまで静止状態とすればよい。
　本開示の藻類から脂質を抽出する方法によれば、このような簡便な操作により、体内に脂質を蓄積した微細藻類から高い回収率で脂質を抽出することができる。
　微細藻類から抽出された脂質は、直接又は精製処理若しくは分解処理等を行ってバイオディーゼル燃料等のバイオ燃料として用いることができる。また、機能性食品又は医薬品等の原料、化成品の原料、化粧品の原料として用いることができる。
　破砕した微細藻類から脂質を抽出・回収する方法について説明したが、糖質及び蛋白質等の脂質以外の生成物を抽出・回収して利用することもできる。これらの抽出・回収について既知の方法を用いることができる。
　上述した実施の形態に関し、本開示はさらに以下の藻類を破砕する方法及び藻類から脂質を抽出する方法を開示する。
　＜１＞
　不等毛植物門に属する微細藻類に対し、ｐＨが３．５以上、好ましくは３．８以上、より好ましくは４．０以上、さらに好ましくは４．５以上、よりさらに好ましくは５．０以上であり、９．５以下、好ましくは９．０以下、より好ましくは８．５以下、さらに好ましくは８．０以下、よりさらに好ましくは７．５以下、よりさらに好ましくは７．０以下、よりさらに好ましくは６．５以下、よりさらに好ましくは６．０以下の条件で、４０℃以上、好ましくは４２℃以上、より好ましくは４３℃以上、さらに好ましくは４５℃以上、６５℃以下、好ましくは６２℃以下、より好ましくは６０℃以下、さらに好ましくは５７℃以下、よりさらに好ましくは５５℃以下、よりさらに好ましくは５２℃以下、よりさらに好ましくは５０℃以下の温度で熱処理した後、高圧分散装置を用いて物理的処理をする、藻類の破砕方法。
　＜２＞
　前記微細藻類が、ナンノクロロプシス属である、前記＜１＞に記載の藻類の破砕方法。
　＜３＞
　前記熱処理は、好ましくは０．５時間以上、より好ましくは１時間以上、さらに好ましくは３時間以上、よりさらに好ましくは５時間以上、よりさらに好ましくは８時間以上、よりさらに好ましくは１０時間以上、よりさらに好ましくは２０時間以上、よりさらに好ましくは２４時間以上、よりさらに好ましくは４８時間以上である、前記＜１＞又は＜２＞に記載の藻類の破砕方法。
　＜４＞
　前記熱処理は、好ましくは９６時間以下、より好ましくは７２時間以下である、前記＜１＞～＜３＞のいずれか１つに記載の藻類の破砕方法。
　＜５＞
　前記物理処理は、前記高圧分散装置を用い、ゲージ圧で好ましくは１０ＭＰａ以上、より好ましくは３０ＭＰａ以上、さらに好ましくは５０ＭＰａ以上、よりさらに好ましくは８０ＭＰａ以上、好ましくは２００ＭＰａ以下、より好ましくは１５０ＭＰａ以下、さらに好ましくは１２０ＭＰａ以下の圧力を加えた後、絶対圧で、好ましくは０．３ＭＰａ以下、より好ましくは０．２ＭＰａ以下、さらに好ましくは０．１５ＭＰａ以下、よりさらに好ましくは０．１１ＭＰａ以下、よりさらに好ましくは大気圧（０．１ＭＰａ）に減圧する、前記＜１＞～＜４＞のいずれか１つに記載の藻類の破砕方法。
　＜６＞
　前記熱処理は、細胞壁を分解する酵素の意図的な添加なしに行う、前記＜１＞～＜５＞のいずれか１つに記載の藻類の破砕方法。
　＜７＞
　前記熱処理は、ｐＨが５．０以上、７．５以下の条件で、温度が４５℃以上、６０℃以下で、時間を１０時間以上行う、前記＜１＞～＜６＞のいずれか１つに記載の藻類の破砕方法。
　＜８＞
　高圧分散装置が、均質バルブ式の高圧分散装置又はチャンバ式の高圧分散装置である、＜１＞～＜７＞のいずれか１つに記載の藻類の破砕方法。
　＜９＞
　＜１＞～＜８＞のいずれか１つに記載された藻類の破砕方法により得られた藻類の破砕物から脂質を回収する、藻類から脂質を抽出する方法。
　＜１０＞
　前記脂質を回収する処理は、溶媒抽出、遠心分離、静置処理、及びカラムクロマトグラフィーから選ばれた１種又は２種以上の組み合わせであり、好ましくは溶媒抽出、遠心分離及び静置処理から選ばれる１種又は２種以上の組み合わせであり、より好ましくは溶媒抽出と遠心分離との組み合わせ、又は溶媒抽出と静置処理との組み合わせである、前記＜９＞に記載の藻類から脂質を抽出する方法。
　＜１１＞
　前記脂質を回収する処理における、溶媒抽出に用いる溶媒が、好ましくは非極性溶媒であり、より好ましくは炭化水素類であり、さらに好ましくはヘキサンである、前記＜１０＞に記載の藻類から脂質を抽出する方法。
　＜１２＞
　前記脂質を回収する処理における、溶媒抽出の温度が、好ましくは１０℃以上、より好ましくは２０℃以上であり、好ましくは６０℃以下、より好ましくは５０℃以下、さらにより好ましくは４０℃以下である、前記＜１０＞又は＜１１＞に記載の藻類から脂質を抽出する方法。
　＜１３＞
　前記脂質を回収する処理における、遠心分離の遠心力が、好ましくは５００Ｇ以上、より好ましくは１０００Ｇ以上であり、好ましくは１００００Ｇ以下、より好ましくは５０００Ｇ以下、さらに好ましくは２０００Ｇ以下である、前記＜１０＞～＜１２＞のいずれか１つに記載の藻類から脂質を抽出する方法。
　＜１４＞
　前記脂質を回収する処理における、遠心分離の処理時間が、好ましくは１分以上、より好ましくは５分以上、さらに好ましくは１０分以上であり、好ましくは８０分以下、より好ましくは４０分以下、さらに好ましくは２０分以下である、前記＜１０＞～＜１３＞のいずれか１つに記載の藻類から脂質を抽出する方法。
　＜１５＞
　前記脂質を回収する処理における、遠心分離の処理温度が、好ましくは１０℃以上、より好ましくは１５℃以上であり、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４０℃以下である、前記＜１０＞～＜１３＞のいずれか１つに記載の藻類から脂質を抽出する方法。
　本開示について実施例を用いてさらに詳細に説明する。以下の実施例は例示であり、本発明を限定するものではない。
　＜使用藻体＞
沖縄県石垣島近郊の沿岸から藻体含む海水サンプルを取得した。取得した海水サンプルをフィルタによって濃縮し、マイクロピペットにより一つの藻体株を単離した。この単離した藻体は、培養液（ダイゴＩＭＫ培地、和光純薬工業社製）によって培養を行い、さらに培養液（ｆ／２培地）を用いて藻体を増殖させた。この藻体の一部をテキサス大学（UTEX Culture Collection）に分析を依頼し、ナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）であることが同定された。
　また、ナンノクロロプシス・オキュラータ（Nannochloropsis oculata）「ヤンマリンＫ－１」（クロレラ工業製、処理液を構成する液体：海水、藻体濃度：５０ｇ／Ｌ）を入手し、実験に用いた。
　＜細胞数の計測＞
　希釈した処理液２μＬをバクテリアカウンター（サンリード硝子製）の計算室に注入した後、光学顕微鏡（Nikon製、ECLIPSE80i）を用いて観察倍率４００倍で観察し、ブロック内の細胞数をカウントした。バクテリアカウンターの計算室のうち、０．０５ｍｍ角のブロックを使用した。計算室には、０．０５ｍｍ角のブロック１６マス（縦４マス×横４マス）からなる集合体が、２５個（縦５個×横５個）並んでいる。これらの集合体のうち、顕微鏡の観察画面の右上から左下までの対角線上に存在する５個の集合体中に含まれる細胞数をカウントした。すなわち、０．０５ｍｍ角のブロックの８０マス（１６マス×５個）中の細胞数をカウントした。バクテリアカウンターの計算室の深さは０．０２０ｍｍであり、０．０５ｍｍ角のブロック１つあたりの体積は１／２００００ｍｍ3である。カウントした細胞の総数を、該当するブロックの体積（１／２００００ｍｍ3×８０マス）で除し、さらにカウントに用いた希釈液の希釈倍率をこれに乗ずることにより、希釈前のサンプル１ｍＬあたりの細胞数を求めた。なお、希釈液には、ダイゴ人工海水ＳＰ（和光純薬工業製）を用いた。
　＜細胞破砕率の算出＞
　前述の細胞数の測定方法により、処理液中の細胞数を測定した。破砕処理前の細胞数から破砕処理後の細胞数を引いて、破砕処理前の細胞数で除し、１００を乗じた値を細胞破砕率（％）とした。
　＜藻体濃度の測定＞
　微細藻類を含む処理液を遠心分離機（HITACHI社製、CR22GIII、ローター：18A）にて、遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分、２５℃）し、上清を捨てた後、０．１２５Ｍクエン酸-リン酸水素二ナトリウムバッファー（ｐＨ５）に再分散させた。再分散させた液をフィルタ（日本ポール製、Supor-450、孔径０．４５μｍ）にて吸引ろ過し、等量の蒸留水で掛け洗いした。藻体を捕集したフィルタをアルミカップに移して１０５℃で２時間乾燥させた。乾燥後の重量を測定し、フィルタの風袋を差し引いて藻体濃度（ｇ／Ｌ）とした。また、処理液がフィルタで吸引ろ過しにくい場合は、適当な濃度に処理液を希釈して、乾燥後の重量を測定し、フィルタの風袋を差し引いた後、希釈率を乗じて藻体濃度（ｇ／Ｌ）とした。なお、希釈液には、０．１２５Ｍクエン酸－リン酸水素二ナトリウムバッファー（ｐＨ５）を用いることができる。
　＜熱処理＞
　所定濃度の微細藻類を含む処理液を、ポリエチレン製の容器に入れ、予め所定の温度に設定した真空乾燥機（ヤマト科学社製、ADP300）のチャンバ内に静置した。チャンバ内は大気圧とした。所定の時間が経過した後、サンプルを乾燥機から取り出し、室温にて冷却した。なお、比較として２５℃で処理する場合は、実験室の温度を２５℃とし、実験室内にサンプルを静置した。また、比較として４℃で処理する場合は、冷蔵庫（三洋電機株式会社製、ＭＰＲ－１４１１）内にサンプルを静置した。所定の時間が経過した後、サンプルを冷蔵庫から取り出し、室温に戻した。
　＜物理的処理＞
　物理的処理は、高圧分散装置により行った。高圧分散装置には、ナノヴェイタ「NM2-L200-D」（吉田機械興業社製、クロス型ノズル：NVGL-XT160）又は圧力式ホモジナイザー「LAB2000」（株式会社エスエムテー社製）を用いた。ナノヴェイタを用いた場合は、処理圧力は、入口圧がゲージ圧で１００ＭＰａ、出口圧が絶対圧で０．１Ｍｐａ（大気圧）とし、端切りのために７ショット目から取得した。パス回数は１回とした。圧力式ホモジナイザーを用いた場合は、処理圧力は、入口圧がゲージ圧で１００ＭＰａ、出口圧が絶対圧で０．１Ｍｐａ（大気圧）とした。端切りのために処理開始後の３００ｃｃの処理液は廃棄し、３００ｃｃ以降から処理サンプルとして取得した。パス回数は１回とした。
　＜乾燥藻体中の脂質量の測定＞
　藻体の脂質の含量は、E.G.BlighとW.J.Dyerによって１９５９年に報告された生体材料からの脂質の抽出方法（Bligh ＆ Dyer法）に従って分析した（E.G.Bligh、W.J.Dyer、Canadian journal of biochemistry and physiology、37(1959)、p.911-917）。
　処理前の試料０．５ｍＬに、内部標準として１ｍｇ／ｍＬの７－ペンタデカノン（メタノール溶液）を１００μＬ添加した。次に、２ＮのＨＣｌを１０μＬ添加し、さらにクロロホルム５００μＬとメタノール０．９ｍＬを添加した。撹拌後、２５℃にて３０分間静置し、クロロホルム５００μＬと１．５％ＫＣｌを５００μＬ添加した。撹拌した後、遠心分離機、「himacCF7D2」（日立工機株式会社製）を用いて遠心分離（遠心力：１５００Ｇ、回転数：３０００ｒ／ｍｉｎ、温度：２５℃、時間：１５分間）した。次に、下層のクロロホルム相を採取し、窒素を用いて乾固した。次に、０．７ｍＬの０．５Ｎ ＫＯＨ－メタノール溶液（水酸化カリウム２．８ｇ、メタノール１００ｍＬ）を添加し、８０℃で３０分間保温してケン化を行った。さらに１ｍＬの１４％三フッ化ホウ素溶液を添加し、８０℃にて１０分間保温してメチルエステル化を行い、溶媒と飽和食塩水をそれぞれ１ｍＬ添加して撹拌した後、２５℃で３０分間放置して溶媒相を取得した。溶媒にはヘキサンを用いた。得られた溶媒相を回収し、脂肪酸エステルの同定及び定量を下記の条件のガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により行った。脂肪酸エステルの同定は、後述の標準物質とのリテンションタイムと同一かどうかにより判断した。またＧＣ分析にて検出した脂肪酸エステルの量を、内部標準を基準にして算出し、その総量を乾燥藻体中の脂質量として求めた。
　なお、このクロロホルム・メタノール溶媒抽出法は、単に藻体中の脂質量を測定するには有効であるが、使用する溶媒の安全性、回収性、リサイクル性の観点から、工業的な実用には適していない方法である。
　－ＧＣ分析－
装置：Agilent technology 7890A
カラム：ＤＢ１－ＭＳ（J&W scientific製、20m×100μm×0.1μm）
オーブン温度：１５０℃（0.5min hold）－[40℃/min]－２２０℃（0min hold）－[20℃/min]－３２０℃（2min hold）－post run2min
キャリアガス：水素
メイクアップガス：ヘリウム
サンプル注入量：５μＬ
注入法：スプリットモード（スプリット比＝７５：１）
注入口温度：３００℃
検出器：ＦＩＤ
カラム流量：０．２８ｍＬ／ｍｉｎコンスタント
圧力（ゲージ圧）：６２．４０３ｐｓｉ
標準物質：ＳＩＧＭＡ社製の下記脂肪酸エステルを用いた。
ラウリン酸メチル（Ｃ１２）、ミリスチン酸メチル（Ｃ１４）、パルミチン酸メチル（Ｃ１６）、ステアリン酸メチル（Ｃ１８）、パルミトレイン酸メチル（Ｃ１６：１）、オレイン酸メチル（Ｃ１８：１）、リノール酸メチル（Ｃ１８：２）、リノレン酸メチル（Ｃ１８：３）、エイコサペンタエン酸メチル（Ｃ２０：５）、ドコサヘキサエン酸メチル（Ｃ２２：６）
　＜脂質の回収率の測定＞
　脂質は以下に示す溶媒抽出により回収した。回収した脂質は、メチルエステル化した後、前述のＧＣにて脂質量を定量した。
　－ヘキサン抽出－
　処理後の試料０．５ｍＬに、ヘキサン１ｍＬを添加し、２５℃にて３分間撹拌した後、遠心分離機、「himacCF7D2」（日立工機株式会社製）を用いて遠心分離（遠心力：１５００Ｇ、回転数：３０００ｒ／ｍｉｎ、温度：２５℃、時間：１５分間）した。次に、上層のヘキサン相を４００μＬ採取し、内部標準として１ｍｇ／ｍＬの７－ペンタデカノン（メタノール溶液）を４０μＬ添加した後、窒素を用いて乾固した。次に、０．７ｍＬの０．５Ｎ ＫＯＨ－メタノール溶液（水酸化カリウム２．８ｇ、メタノール１００ｍＬ）を添加し、８０℃で３０分間保温してケン化を行った。さらに１ｍＬの１４％三フッ化ホウ素溶液を添加し、８０℃にて１０分間保温してメチルエステル化を行い、溶媒と飽和食塩水をそれぞれ１ｍＬ添加して撹拌した後、２５℃で３０分間放置して溶媒相を取得した。溶媒にはヘキサンを用いた。得られた溶媒相を回収し、脂肪酸エステルの同定及び定量を前述の条件のＧＣにより行った。またＧＣ分析にて検出した脂肪酸エステルの量を、内部標準を基準にして算出し、その総量をヘキサン中の脂質量として求めた。
　－脂質の回収率の算出－
　以下の式（１）によりヘキサン溶媒による脂質回収率を算出した。
脂質回収率（％）＝ヘキサン中の脂質量／乾燥藻体中の脂質量×１００・・・（１）
　（実施例１）
　不等毛植物門に属する微細藻類としてナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）（処理液を構成する液体：人工海水（ダイゴ人工海水SP、日本製薬株式会社製、藻体濃度：１．０ｇ／Ｌ））を用いた。２５℃における処理液のｐＨは７．３であった。１ＭのＨＣｌを滴下し、処理液のｐＨを５．０に調整した。ｐＨを調整した溶液に対して熱処理を行った。処理温度は５０℃とし、処理時間は１時間とした。熱処理後に、物理的処理をナノヴェイタを用いて入口圧が１００ＭＰａの条件で行った。細胞の破砕率は３８．６％であった。
　（実施例２）
　熱処理時間を２時間とした以外は実施例１と同様にした。細胞の破砕率は３３．９％であった。
　（実施例３）
　熱処理時間を３時間とした以外は実施例１と同様にした。細胞の破砕率は４５．８％であった。
　（実施例４）
　熱処理時間を５時間とした以外は実施例１と同様にした。細胞の破砕率は４７．４％であった。
　（実施例５）
　熱処理時間を１０時間とした以外は実施例１と同様にした。細胞の破砕率は６０．５％であった。
　（実施例６）
　熱処理時間を２４時間とした以外は実施例１と同様にした。細胞の破砕率は８７．０％であった。また、破砕後の脂質回収率は６９％であった。
　（実施例７）
　物理的処理における入口圧力を５０ＭＰａとした以外は実施例６と同様にした。細胞の破砕率は７５．９％であった。また、破砕後の脂質回収率は７０％であった。
　（比較例１）
　ｐＨの調整をせず、熱処理も行わなかったこと以外は、実施例１と同様にした。すなわちナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）（処理液を構成する液体：人工海水（ダイゴ人工海水SP、日本製薬株式会社製、藻体濃度：１．０ｇ／Ｌ））の処理液を得た後、ｐＨ７．３のまま、サンプル取得後３０分以内に熱処理を行わずに高圧分散装置ナノヴェイタにて物理的処理を入口圧１００ＭＰａの条件で行った。細胞の破砕率は１６．９％であった。
　（比較例２）
　熱処理を行わなかったこと以外は、実施例１と同様にした。すなわちナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）（処理液を構成する液体：人工海水（ダイゴ人工海水SP、日本製薬株式会社製、藻体濃度：１．０ｇ／Ｌ））の処理液を、１ＭのＨＣｌを用いて２５℃にてｐＨ５．０に調整した後、３０分以内に熱処理を行わずに高圧分散装置ナノヴェイタにて物理的処理を入口圧１００ＭＰａの条件で行った。細胞の破砕率は１８．７％であった。また、破砕後の脂質回収率は６％であった。
　（比較例３）
　熱処理温度を２５℃とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１６．１％であった。
　（比較例４）
　熱処理温度を２５℃とし、熱処理時間を２時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１１．９％であった。
　（比較例５）
　熱処理温度を２５℃とし、熱処理時間を３時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１３．２％であった。
　（比較例６）
　熱処理温度を２５℃とし、熱処理時間を１０時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１８．５％であった。
　（比較例７）
　熱処理温度を２５℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１６．１％であった。
　（比較例８）
　熱処理温度を８０℃とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は２１．８％であった。
　（比較例９）
　熱処理温度を８０℃とし、熱処理時間を２時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１８．５％であった。
　（比較例１０）
　熱処理温度を８０℃とし、熱処理時間を３時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は２４．８％であった。
　（比較例１１）
　熱処理温度を８０℃とし、熱処理時間を１０時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１８．５％であった。
　（比較例１２）
　熱処理温度を８０℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は２３．０％であった。
　（比較例１３）
　比較例２と同様にして破砕処理を行った後、５０℃で、２４時間の熱処理を行った。細胞の破砕率は１９．３％であった。
　（実施例８）
　熱処理温度を４０℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は４９．５％であった。また、破砕後の脂質回収率は３３％であった。
　（実施例９）
　熱処理温度を４５℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は９２．０％であった。また、破砕後の脂質回収率は７４％であった。
　（実施例１０）
　熱処理温度を５５℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は８１．２％であった。また、破砕後の脂質回収率は７３％であった。
　（実施例１１）
　熱処理温度を６０℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は７２．１％であった。また、破砕後の脂質回収率は５５％であった。
　（比較例１４）
　熱処理温度を４℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１９．９％であった。
　（比較例１５）
　熱処理温度を３７℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１９．０％であった。
　（比較例１６）
　熱処理温度を７０℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は２９．４％であった。
　（比較例１７）
　熱処理温度を８０℃とし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は２３．０％であった。
　実施例１～７及び比較例１～１３について、実施条件及び細胞の破砕率を表１及び表２にそれぞれ示す。実施例８～１１及び比較例１４～１７について、実施条件及び細胞の破砕率を表３にまとめて示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　（実施例１２）
　１ＭのＨＣｌを用いて処理液のｐＨを２５℃にて４．０に調整し、熱処理時間を１０時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は４０．３％であった。
　（実施例１３）
　熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１２と同様にした。細胞の破砕率は６６．０％であった。
　（実施例１４）
　処理液のｐＨを２５℃にて６．８に調整し、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は５３．５％であった。
　（実施例１５）
　処理液のｐＨの調整をせず、２５℃におけるｐＨを７．３のままとし、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は５２．３％であった。
　（実施例１６）
　熱処理時間を４８時間とした以外は、実施例１５と同様にした。細胞の破砕率は６６．６％であった。
　（実施例１７）
　１ＭのＮａＯＨを用いて処理液のｐＨを２５℃にて９．０に調整し、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は４７．４％であった。
　（比較例１８）
　１ＭのＨＣｌで処理液のｐＨを２５℃にて２．０に調整し、熱処理時間を２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は２３．６％であった。
　（比較例１９）
　１ＭのＨＣｌで処理液のｐＨを２５℃にて３．０に調整し、熱処理時間２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１６．０％であった。
　（比較例２０）
　１ＭのＮａＯＨで処理液のｐＨを２５℃にて１０．０に調整し、熱処理時間２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は２６．５％であった。
　（比較例２１）
　１ＭのＮａＯＨで処理液のｐＨを２５℃にて１２．０に調整し、熱処理時間２４時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は１８．６％であった。
　実施例１２～１７及び比較例１８～２１について、実施条件及び細胞の破砕率を表４にまとめて示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　（実施例１８）
　不等毛植物門に属する微細藻類としてナンノクロロプシス・オキュラータ（Nannochloropsis oculata）「冷蔵ナンノ　ヤンマリンＫ－１」（クロレラ工業製、処理液を構成する液体：海水、藻体濃度：５０ｇ／Ｌ）を室温に戻して用いた。さらにこの処理液を人工海水（日本製薬株式会社製、海産微細藻類用ダイゴ人工海水SP）で希釈し、藻体濃度を１．０ｇ／Ｌとした。処理液の２５℃におけるｐＨは５．０であった。以上の処理液を用いて、熱処理時間を５時間とした以外は、実施例１と同様にした。細胞の破砕率は４７．４％であった。
　（実施例１９）
　熱処理時間を１０時間とした以外は、実施例１８と同様にした。細胞の破砕率は４９．４％であった。
　（比較例２２）
　ｐＨの調整をせず、熱処理を行わなかったこと以外は、実施例１８と同様にした。すなわちナンノクロロプシス・オキュラータ「冷蔵ナンノ　ヤンマリンＫ－１」（藻体濃度：１．０ｇ／Ｌ）の処理液を、２５℃におけるｐＨを６．８としたまま、希釈後３０分以内に熱処理を行わずに高圧分散装置にて物理的処理を行った。細胞の破砕率は１９．６％であった。
　（比較例２３）
　熱処理温度を２５℃とし、熱処理時間を１０時間とした以外は、実施例１８と同様にした。細胞の破砕率は２２．７％であった。
　実施例１８～１９及び比較例２２～２３について、実施条件及び細胞の破砕率を表５にまとめて示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　（実施例２０）
　不等毛植物門に属する微細藻類としてナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）（処理液を構成する液体：人工海水（ダイゴ人工海水SP、日本製薬株式会社製、藻体濃度：１．０ｇ／Ｌ））を用いた。処理液のｐＨは７．３であった。この処理液に１ＭのＨＣｌを滴下し、処理液のｐＨを２５℃にて６．３に調整した後、硫酸アルミニウム（セントラル硝子株式会社社製、商品名「硫酸バンド」）を処理液に対し０．１％となるように添加して５分間撹拌した。その後、撹拌を停止し、室温で３時間静置した。この時藻体が凝集し、沈降した。その後、上清の一部を廃棄して藻体濃度を１５．２ｇ／Ｌとした。１ＭのＨＣｌを滴下し、処理液のｐＨを２５℃にて５．０に調整した。ｐＨを調整した溶液に対して熱処理を行った。処理温度は５０℃とし、処理時間は２４時間とした。熱処理後に、物理的処理を圧力式ホモジナイザーを用いて入口圧が１００ＭＰａの条件で行った。細胞の破砕率は７７．６％であった。
１００　　　均質バルブ
１０１　　　均質バルブシート
１０２　　　均質バルブ本体
１０３　　　インパクトリング
１１０　　　チャンバ
１１１　　　流入管路
１１２　　　せん断管路
１１３　　　流出管路
１２０　　　チャンバ
１２１　　　流入管路
１２２　　　せん断管路
１２３　　　流出管路

Claims (9)

  1. 　不等毛植物門に属する微細藻類に対し、ｐＨが３．５以上、９．５以下の条件で４０℃以上、６５℃以下の温度で熱処理した後、高圧分散装置を用いて物理的処理をする、藻類の破砕方法。
  2. 　前記微細藻類が、ナンノクロロプシス属である、請求項１に記載の藻類の破砕方法。
  3. 　前記熱処理は、前記ｐＨが、５．０以上、７．５以下の条件で行う、請求項１又は２に記載の藻類の破砕方法。
  4. 　前記熱処理は３時間以上行う、請求項１～３のいずれか１項に記載の藻類の破砕方法。
  5. 　前記熱処理は１０時間以上行う、請求項１～３のいずれか１項に記載の藻類の破砕方法。
  6. 　前記熱処理は４５℃以上、６０℃以下の温度で行う、請求項１～５のいずれか１項に記載の藻類の破砕方法。
  7. 　前記熱処理は、ｐＨが５．０以上、７．５以下の条件で、温度が４５℃以上、６０℃以下で、時間を１０時間以上行う、請求項１又は２に記載の藻類の破砕方法。
  8. 　前記高圧分散装置が、均質バルブ式の高圧分散装置又はチャンバ式の高圧分散装置である、請求項１～６のいずれか１つに記載の藻類の破砕方法。
  9. 　請求項１～８のいずれか１項に記載された藻類の破砕方法により得られた藻類の破砕物から脂質を回収する、藻類から脂質を抽出する方法。
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