WO2016075161A1 - Composition antimétastatique comprenant au moins un composé de type flavanol - Google Patents

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WO2016075161A1
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catechin
flavanol
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acid
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PCT/EP2015/076248
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Paul Niebes
Bronislav Henric May
Saïd RACHIDI
Julien Estager
Pierre Sonveaux
Thibaut VAZEILLE
Paolo Ettore PORPORATO
Valéry PAYEN
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Valore Sa
Université Catholique de Louvain
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    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Definitions

  • Antimetastatic composition comprising at least one flavanol-type compound
  • the present invention relates to a composition comprising at least one flavanol-type compound for use as a medicament.
  • Catechins are phytochemical molecules known for their antioxidative and chemoprotective properties. They are present in a large part of plant foods and in high concentrations in tea leaves. Epidemiological studies demonstrating the anti-carcinogenic effect of fruits and green tea have prompted investigations into their anti-tumorigenic activity. Nevertheless, their common general structure, important differences in their biochemical characteristics and the consequences of these on the bioavailability and stability of these compounds have meant that the results observed in vitro were not always representative.
  • the anti-metastatic activity of a composition comprising at least one flavanol-type compound is suggested in the Menon et al. (Cancer Letters 1999, 141: 159-165). This article indicates that melanoma cell invasion is inhibited in mice injected intravenously with cancer cells when treated with catechin, a flavanol-like compound. This study specifically proposes that the inhibition of melanoma cell invasion is due to a catechin inhibitory activity on the action of metalloproteinases, which would block the degradation of the connective tissue by these enzymes and what This would prevent tumor cells from entering a healthy organ and forming metastases.
  • metastatic progenitor cells that is to say the cells causing the metastases
  • the metabolic pathways controlling the dissemination of tumor cells during the metastatic process are still poorly understood.
  • increased production of superoxide radicals by metastastic progenitor cells has been shown to promote their migration.
  • ROS superoxide radical and reactive species derived from oxygen
  • antioxidants targeting selectively mitochondes of these cells as inhibitors of mitochondrial superoxide production.
  • inhibitors such as triphenylphosphonium salts of quinone (mitoQ) or piperidine-derived (mitoTEMPO) molecules are currently used, the triphenylphosphonium group permitting the penetration of these products into the mitochondes.
  • mitoQ quinone
  • mitoTEMPO piperidine-derived
  • non-targeted general antioxidants for mitochondria may promote tumor growth (Porporato PE and Sonveaux P, Mol Cell Oncol, 2015; 2: DOI 10.4161 / 23723548.2014.968043) and metastatic spread (Piskounova et al., Nature 2015 doi: 10.1038 / nature15726; Gai et al., Sci Transi Med. 2015; 7: 308re8).
  • the present invention relates to a composition
  • a composition comprising at least one flavanol compound which is characterized in that said at least one flavanol compound is present in the form of a complex formed by establishing coordination bonds with at least one basic amino acid or at least one derivative of a basic amino acid.
  • it is therefore a molecular complex formed between a flavanol-type compound and at least one basic amino acid or at least one derivative of a basic amino acid by establishing coordination bonds.
  • the present invention relates to a composition
  • a composition comprising at least one flavanol-type compound for use in the preventive and / or curative treatment of cancer metastases, characterized in that said at least one flavanol-type compound is present under the form of a complex formed by establishing coordination bonds with at least one basic amino acid or at least one derivative of a basic amino acid.
  • the composition is characterized in that said flavanol compound is selected from the group consisting of (+) - catechin, (-) - catechin, (+) - epicatechin, (-) - epicatechin, (+) - epigallocatechin, (-) - epigallocatechin, (+) - epicatechin gallate, (-) - epicatechin gallate, (+) - gallocatechin, (-) - epicatechin, (-) - ) -Gallocatechin, (+) - gallocatechin gallate, (-) - gallocatechin gallate, and mixtures thereof.
  • said flavanol compound is catechin or a catechin derivative.
  • the composition is characterized in that said complex has a molar equivalence ratio between said flavanol-type compound and said at least one basic amino acid or said at least one derivative of a basic amino acid between 1: 0.25 and 1: 5, preferably between 1: 1 and 1: 4, preferably between 1: 1 and 1: 3, preferably between 1: 1 and 1: 2.5, more preferably between 1: 1 and 1: 2.
  • the composition is characterized in that said complex has a molar equivalence ratio between said flavanol-type compound and said at least one basic amino acid or said at least one d-derivative. a basic amino acid of from 1: 2 to 1: 4, such as 1: 2.
  • the composition is characterized in that said at least one basic amino acid is selected from the group consisting of lysine, arginine, ornithine, citruline, histidine, pyrolysine, tryptophan, proline, and mixtures thereof.
  • said at least one basic amino acid is lysine.
  • the composition is characterized in that it further comprises at least one acid.
  • said at least one acid is selected from the group consisting of ascorbic acid, acetic acid, citric acid, hydrochloric acid, and mixtures thereof.
  • the composition is characterized in that said at least one flavanol compound present in the form of a complex is present in a molar concentration of between 0.01 ⁇ and 5000 ⁇ , preferably between 0. , 02 ⁇ and 2500 ⁇ , preferably between 0.1 ⁇ and 1000 ⁇ , preferably between 0.5 ⁇ and 500 ⁇ .
  • the composition is characterized in that it further comprises one or more biocompatible excipients.
  • the composition is characterized in that it is in liquid form or in solid form, preferably in water-soluble solid form such as powder or a tablet or an egg or suppository.
  • the composition is characterized in that it is formulated for oral, rectal, vaginal, injectable or cutaneous use.
  • the composition is characterized in that the content of at least one flavanol-like compound present in the form of a complex formed by establishing coordination bonds with at least one basic amino acid or at least one derivative a basic amino acid is between 15 and 95% by weight relative to the total weight of said composition, preferably between 60 and 90%, advantageously from 65 to 85% relative to the total weight of said composition.
  • the composition is characterized in that 0.01 molar solution at 25 ° C, it has a pH equal to or greater than 3, preferably between 4 and 1 1, advantageously between 4 , 5 and 9. In a preferred embodiment, it has a pH of between 7.2 and 7.4,
  • the cancer is cancer of the liver, prostate, breast, uterus, testes, bladder, kidneys, lungs, bronchi, bones, mouth, the esophagus, stomach, pancreas, colon-rectum, or brain.
  • the cancer is a hepatocellular cancer.
  • the cancer is leukemia, myeloma, lymphoma, or melanoma.
  • the invention relates to an antimetastatic composition
  • an antimetastatic composition comprising at least one flavanol-type compound for use as a medicament, characterized in that said at least one flavanol-type compound is present in the form of a complex formed by establishment. coordinating bonds with at least one basic amino acid or at least one derivative of a basic amino acid.
  • the composition is characterized in that said at least one flavanol compound present in the form of a complex is present in a molar concentration of between 0.01 ⁇ and 5000 ⁇ , preferably between 0. , 02 ⁇ and 2500 ⁇ , preferably between 0.1 ⁇ and 1000 ⁇ , preferably between 0.5 ⁇ and 500 ⁇ .
  • the composition is characterized in that said flavanol compound is selected from the group consisting of (+) - catechin, (-) - catechin, (+) - epicatechin, (-) - epicatechin, (+) - epigallocatechin, (-) - epigallocatechin, (+) - epicatechin gallate, (+) - epicatechin gallate, (+) - gallocatechin, (-) - epicatechin, (+) - gallocatechin gallate, (+) - gallocatechin gallate, (-) - gallocatechin gallate, (+) - gallocatechin gallate, (-) - gallocatechin gallate and mixtures thereof.
  • the composition is characterized in that said at least one basic amino acid is chosen in the group consisting of lysine, arginine, ornithine, citruline, histidine, pyrolysine, proline, and tryptophan, and mixtures thereof.
  • the composition is characterized in that said complex has a molar equivalence ratio between said flavanol-type compound and said at least one basic amino acid or said at least one derivative of a basic amino acid between 1: 0.25 and 1: 5, preferably between 1: 1 and 1: 4, preferably between 1: 1 and 1: 3, preferably between 1: 1 and 1: 2.5, more preferably between 1: 1 and 1: 2.
  • the composition is characterized in that it further comprises one or more biocompatible excipients. In one embodiment, the composition is characterized in that it may further comprise an acid. In one embodiment, the composition is characterized in that said acid is selected from the group consisting of ascorbic acid, acetic acid, citric acid, hydrochloric acid, and mixtures thereof. In one embodiment, the composition is characterized in that it is in liquid form or in solid form, preferably in water-soluble solid form such as powder or a tablet or an egg or suppository. In one embodiment, the invention comprises the composition as described above for oral, rectal, vaginal, injectable or cutaneous use.
  • the composition is characterized in that the content of at least one flavanol-like compound present in the form of a complex formed by establishing coordination bonds with at least one basic amino acid or at least one derivative of a basic amino acid is between 15 and 95% by weight relative to the total weight of said composition, preferably between 60 and 90%, advantageously from 65 to 85% relative to the total weight of said composition.
  • the composition is characterized in that, in 0.01 molar solution at 25 ° C., it has a pH equal to or greater than 3, preferably between 4 and 1 1, advantageously between 4 , 5 and 9.
  • the invention relates to the composition as described above for the preventive and / or curative treatment of cancers of the liver, prostate, breast, uterus, testes, bladder, kidneys, lungs, bronchi, bones, mouth, esophagus, stomach, pancreas, colon-rectum or brain.
  • the invention relates to the composition as described above for the preventive and / or curative treatment of cancer, preferably hepatocellular cancer.
  • the invention relates to the composition as described above for the preventive and / or curative treatment of leukemias.
  • the invention relates to the composition as described above for the preventive and / or curative treatment of myelomas.
  • the invention relates to the composition as described above for the preventive and / or curative treatment of lymphomas. In one embodiment, the invention relates to the composition as described above for the preventive and / or curative treatment of melanomas. The invention also relates to the use of a composition as described above for the manufacture of an antimetastatic drug.
  • the independent and dependent claims define the particular and preferred features of the invention. The features of the dependent claims may be combined with the features of the independent claims or other dependent claims as appropriate. The appended claims are also explicitly included by reference in this specification.
  • any reference in this description to "an embodiment” means that a particular function, structure or feature described with respect to the embodiment is included in at least one embodiment of the present invention.
  • the occurrences of the phrase “in one embodiment” in various places of this description do not necessarily all refer to the same embodiment, but can.
  • the particular functions, structures or features may be combined in any appropriate manner, as would be apparent to those skilled in the art upon reading this description, in one or more embodiments.
  • the combinations of features of the various embodiments fall within the scope of the invention, and form different embodiments, as would be understood by those skilled in the art.
  • any of the claimed embodiments may be used in any combination.
  • composition comprising at least one flavanol compound in the sense of the present invention refers to a composition comprising one or more flavanol compounds. This includes but is not limited to a composition consisting mainly or exclusively of at least one flavanol compound.
  • antimetastatic composition is intended to mean a composition preventing or at least minimizing the formation of metastases, that is to say preventing or at least minimizing the spread (migration) and / or the invasion and / or growth and / or proliferation of a tumor cell (metastatic progenitor cell) away from the site initially affected and in a tissue or organ reached by the blood or lymphatic system.
  • antimetastatic is intended to mean a treatment which prevents or at least minimizes the formation of metastases, that is to say, preventing or at least minimizing the spread (migration) and / or invasion and / or the growth and / or proliferation of a tumor cell (metastatic progenitor cell) away from the initially affected site and in an organ reached by the blood or lymphatic system.
  • patient any animal that is seeking a treatment according to the invention. This includes the animal, more particularly the mammalian animal, than the man.
  • metalastatic progenitor cells is intended to mean cells which are at the origin of metastases.
  • a derivative of a basic amino acid is meant in the sense of the present invention, any chemical derivation of a basic amino acid, such as an addition of a group -CH 3 , - C 2 H 5 or an amino group.
  • Flavanols, flavanols-3, flavan-3-ols or catechins are a sub-family of flavonoids which are secondary metabolites of plants, all sharing the same basic structure formed by two aromatic rings linked by three carbons: C 6 -C 3 -C 6 .
  • a catechin derivative is meant, within the meaning of the present invention, a catechin of which one or more of these OH functions is derivatized, for example by alkoxylation or by acylation, such as, for example, tetramethoxy-catechin, penta -acetoxy-catechin, and cyclic derivatives.
  • a flavanol-type compound in the form of a complex formed by establishing coordination bonds with at least one basic amino acid or at least one a derivative of a basic amino acid provides a composition that can be used as antimetastatic composition, that is to say that can be used as a medicament for inhibiting the migration of metastatic progenitor cells from a primary tumor.
  • this composition is not toxic, does not block the mitochondrial respiration of healthy cells and acts as a modulating agent for the production of superoxide and reactive oxygen species produced by metastatic progenitor cells, which constitutes a certain interest for use as a medicine, especially for humans.
  • a flavanol compound in the form of a complex according to the invention makes it possible to regulate (ie modulate) an excessive production by the metastatic progenitor cells, superoxide and reactive oxygen species without inhibiting or completely suppress their presence which is naturally required at the level of healthy cells, in particular to ensure proper communication between cells and the proper functioning of the latter.
  • a flavanol compound in the form of a complex according to the invention is capable of inducing a significant reduction in the number of metastatic progenitor cells migrating since a primary tumor to a healthy organ.
  • the term “migration” or “dissemination” means the displacement of progenitor cells. metastatic from an original site (primary tumor) to other parts of the body (using the lymphatic system and / or the blood system).
  • a flavanol-type compound in the form of a complex according to the invention has been identified as being an inhibitor which makes it possible to reduce at least 5 to 10%, preferably at least 20 to 40%, preferably at least 50 to 75% the number of metastatic progenitor cells migrating from a primary tumor to a healthy organ, this compound of type flavanol in the form of a complex according to the invention modulating the production of superoxide and reactive oxygen species (ROS) produced by these cancer cells.
  • ROS reactive oxygen species
  • a flavanol-type compound in the form of a complex formed by establishing coordination bonds with at least one basic amino acid or at least one derived from a basic amino acid, perfectly meets all these criteria.
  • a flavanol-type compound in the form of a complex according to the invention makes it possible to act directly and rapidly at the level of the primary tumor. adequately modulating the presence of mitochondrial superoxide radical and ROS produced by metastatic progenitor cells thereby significantly minimizing migration of these cells.
  • a flavanol compound in the form of a complex according to the invention is capable of penetrating through the mitochondrial membrane, this would allow this compound to capture an adequate proportion of the mitochondrial superoxide radical and ROS produced by the mitochondria of the metastatic progenitor cells.
  • the capture and modulation of the mitochondrial superoxide radical and the ROS are carried out adequately to respect the natural physiological balance of the presence of mitochondrial superoxide radical and ROS at the level of healthy cells.
  • compositions according to the invention have a pronounced antimetastatic effect in a recognized metastasis model.
  • a composition comprising a (+) catechin complex present in the form of a complex formed by establishing coordination bonds with at least one basic amino acid or at least one derivative of a basic amino acid has a particularly high anti-metastatic effect.
  • (+) catechin is present as a complex with a basic amino acid such as lysine or proline, or a derivative of lysine or proline.
  • basic amino acids play an essential role in the composition of collagen and are essential for the formation of cross-links of collagen.
  • the composition comprises a complex of a catechin with a basic amino acid, wherein the flavanol is selected from the group consisting of (+) - catechin, (-) - catechin, epicatechin, (-) - epicatechin, (+) - epi - gallocatechin, (-) - epigallocatechin, (+) - gallocatechin, (-) - gallocatechin, (+) - ) gallocatechin gallate, (-) - gallocatechin gallate and mixtures thereof.
  • the flavanol is selected from the group consisting of (+) - catechin, (-) - catechin, epicatechin, (-) - epicatechin, (+) - epi - gallocatechin, (-) - epigallocatechin, (+) - gallocatechin, (-) - gallocatechin gallate, (+) - gallocatechin gallate and mixtures thereof.
  • composition according to the invention that is to say comprising at least one flavanol-type compound in the form of a complex according to the invention, is much higher compared to epigallocatechin gallate, flavanol considered in the state of the art as the most powerful.
  • flavanol is (+) catechin.
  • the composition further comprises other active compounds, such as, for example, one or more other flavanols or other therapeutic compounds.
  • the complex formed between the flavanol-type compound and at least one basic amino acid or at least one derivative of a basic amino acid makes it possible to to improve, unexpectedly, the bioavailability of the composition according to the invention even if the solubility of the composition is also increased via the formation of such a complex.
  • the solubility in an aqueous medium is increased, it is expected that the ability of the complex to cross the lipid tissues is low, and, in the context of the present invention, it was determined, against all odds, that the bioavailability is still increased as well quite surprisingly despite the fact that the solubility is increased.
  • the invention therefore relates to compositions comprising at least one flavanol-type compound present in the form of a complex with a basic amino acid and / or at least one derivative of a basic amino acid and on their use.
  • said at least one flavanol-type compound present in the form of a complex is present in a molar concentration of between 0.01 ⁇ and 5000 ⁇ , preferably between 0.02 ⁇ and 2500 ⁇ , preferably between 0.1 ⁇ and 1000 ⁇ , preferably between 0.5 ⁇ and 500 ⁇ .
  • Such a molar concentration of the flavanol compound present in the form of a complex has been determined to be adequate for the latter to act as a modulating agent (regulator) for the presence of excess mitochondrial superoxide radical and ROS produced in excess by the cells. metastatic progenitor.
  • these molar concentrations correspond to a concentration of flavanol-type compound present in the form of a complex of between 0.0002 mg / ml and 400 mg / ml depending on the molecular weight of the flavanol-type compound under consideration.
  • said flavanol compound is selected from the group consisting of (+) - catechin, (-) - catechin, (+) - epicatechin, (-) - epicatechin, (+) epigallocatechin, (-) - epigallocatechin, (+) - epicatechin gallate, (-) - epicatechin gallate, (+) - epigallocatechin gallate, (-) - epigallocatechin gallate, (+) - gallocatechin , (-) - gallocatechin, (+) - gallocatechin gallate, (-) - gallocatechin gallate and mixtures thereof.
  • the flavanol is selected from the group consisting of (+) - catechin, (-) - catechin, (+) - epicatechin, (-) - epicatechin, (+) - epigallocatechin , (-) - epigallocatechin, (+) - epicatechin gallate, (+) - epicatechin gallate, (+) - gallocatechin, (-) - gallocatechin, (+) - gallocatechin gallate, (-) - gallocatechin gallate and mixtures thereof.
  • the flavanol type compound is (+) - catechin.
  • said at least one basic amino acid is chosen from the group consisting of lysine, arginine, ornithine, citruline, histidine, pyrolysine, tryptophan, proline and their derivatives. mixtures.
  • said at least one basic amino acid is selected from the group consisting of lysine, arginine and proline. More particularly, in one embodiment, the basic amino acid is lysine.
  • said molar equivalence ratio is less than or equal to 1: 3.
  • said molar equivalence ratio is less than 1: 2.
  • said molar equivalence ratio is greater than or equal to 1: 1 and less than or equal to 1: 1.5.
  • said acid is selected from the group consisting of ascorbic acid, acetic acid, citric acid, hydrochloric acid, and mixtures thereof.
  • said acid is hydrochloric acid.
  • the composition according to the invention is in liquid form or in solid form.
  • the composition is in a water-soluble solid form such as a powder or a tablet or an egg or suppository.
  • the composition is provided as a combined preparation of the constituents (flavanol, amino acid, and acid option and excipients) for simultaneous use or combination directly prior to administration. More particularly, this kind of formulation is intended for oral administration.
  • the composition may be formulated as a tablet. In these embodiments, said complex is formed post-administration.
  • the composition according to the invention is used for the preventive and / or curative treatment of lymphomas.
  • the present invention also relates to the use of a composition according to the invention for the prevention or treatment of cancer metastases.
  • the invention relates to the manufacture of an antimetastatic drug.
  • the tumor is a tumor of breast, liver, prostate, uterine, testes, bladder, kidney, lung, bronchial, bones, mouth cancer. , the esophagus, the stomach, the pancreas of the colon-rectum or the brain.
  • the tumor is a tumor expressing a metastasis marker.
  • a metastasis marker for example Ned9, Pyk2, CPE-delta, CAIX, and metal loproteases 2 and / or 9 and also CAIX or HIF-1alpha.
  • the treatment contemplated according to the invention is a combination with a compound with an antiproliferative action.
  • Figures 3A and 3B show graphs showing respectively the percentage of surviving SiHa-F3 (F3) tumor cells (Fig. 3A), the percentage of migrated cells (Fig. 3B) for treatment at varying concentrations of the complex (+ ) -catechin / lysine at a 1: 2 molar equivalence ratio.
  • FIGS. 4A, 4B, 4C and 4D are graphs which show cell survival (measured by the crystal violet technique [CV] and expressed in% of supermetastatic SiHa-F3 cells not treated) of tumor cells treated with epigallocatechin gallate (EGCG), (+) - catechin, (+) - catechin / LysineHCl 1: 1 or (+) - catechin / LysineHCl (1: 2) (concentrations of 100 nM, 1 ⁇ , 10 ⁇ , 100 ⁇ , o500 ⁇ or 1 mM).
  • FIGS. 8A and 8B are photographs (A) and a graph (B) demonstrating the effect of (+) - Catechin / LysineHCI 1: 2 on melanoma tumor cells treated with rotenone (Rot 20 nM + C / L 1: 2 10 ⁇ ) compared to the treatment of rotenone alone (Rot 20 nM) on the formation of pulmonary metastases in an experimental model.
  • rotenone Rot 20 nM + C / L 1: 2 10 ⁇
  • FIG. 1A shows that a molar concentration of 1 ⁇ of (+) - catechin (+ C) does not affect the survival of the tumor cells, indicating that at this concentration, the (+) - Catechin is not toxic.
  • FIG. 1B shows that a molar concentration of 1 ⁇ of (+) - catechin does not, however, make it possible to significantly reduce the number of tumor cells migrating from one compartment to the other of the Boyden cell.
  • Figure 1C shows that (+) - catechin at this same concentration of 1 ⁇ has no impact on the level of reactive oxygen species (ROS) observed.
  • ROS reactive oxygen species
  • a molar concentration of 1 ⁇ of the (+) - catechin / lysine complex at a 1: 1 molar equivalence ratio (C / L 1: 1) does not affect the survival of the cells. tumor cells, indicating that at this concentration, the 1: 1 C / L complex is not toxic.
  • Figure 2B shows that a molar concentration of 1 ⁇ l of 1: 1 C / L complex makes it possible to significantly reduce the number of tumor cells migrating from one compartment to the other of the Boyden cell by up to 30%.
  • FIG. 3A shows that a molar concentration of 1 ⁇ of the (+) - catechin / lysine complex at a 1: 2 molar equivalence ratio (C / L 1: 2) does not affect the survival of the cells. tumor cells, indicating that at this concentration the C / L complex 1: 2 is not toxic.
  • FIG. 3B shows that a molar concentration of 1 ⁇ l of C / L complex 1: 2 makes it possible to significantly reduce the number of tumor cells migrating from one compartment to another of Boyden's cell.
  • SiHa-F3 cells were initially generated as described in the recently published article in Cell Reports: Porporato PE and al., Cell Rep 2014, 8: 754-766.
  • Cells were maintained in culture and manipulated in DMEM, 4.5g / L glucose, glutaMAX (Gibco), supplemented with 10% fetal bovine serum
  • SiHa-F3 cells were inoculated and treated with the indicated compounds overnight (16h). The cells were then fixed for 3 min in methanol, stained with 0.23% crystal violet, and resuspended in DMSO for absorbance measurement at 595 nm (Victor X4 spectrophotometer, Perkin Elmer); or alternatively incubated for 3 h at 37 ° C. in a saturating solution of MTT in HBSS containing 10 mM Hepes, and resuspended in DMSO for measurement of the absorbance at 630 nm (Victor X4 spectrophotometer, Perkin Elmer) .
  • SiHa-F3 cells were treated overnight (16h) with epigallocatechin gallate (EGCG), (+) - catechin, (+) - catechin / LysineHCI 1: 1 or (+) - catechin / LysineHCI (1: 2) (concentrations of 100 nM, 1 ⁇ , 10 ⁇ , 100 ⁇ , 500 ⁇ or 1 mM) after which cell survival was measured by crystal violet labeling ( Figure 4) or MTT ( Figure 5) .
  • EGCG epigallocatechin gallate
  • (+) - catechin (+) - catechin / LysineHCI 1: 1
  • (+) - catechin / LysineHCI (1: 2) concentration of 100 nM, 1 ⁇ , 10 ⁇ , 100 ⁇ , 500 ⁇ or 1 mM
  • catechin derivatives are less cytotoxic than epigallocatechin gallate.
  • epigallocatechin gallate and (+) - catechin / LysineHCI complexes inhibit the migration of cancer cells. Only (+) - catechin / LysineHCI complex compounds inhibit tumor cell migration independently of cellular cytotoxicity that would have affected counting.
  • Example 7 (+) - catechin / LvsineHC1 1: 2 inhibits the formation of metastases
  • the B16F10 tumor cells come from the ATCC collection.
  • the male C57BL / 6 mice of 6 or 7 weeks were acquired from the January laboratories, and the protocols were applied with the agreement of the ethics committee of the UCL and in respect of the Belgian laws relating to animal care.
  • Model of experimental metastases B16F10 cells were pretreated with DMSO (0.5%, rotenone vehicle, negative control) or rotenone (inhibitor of the complex of the respiratory chain and mitochondrial superoxide inducer as described in Porporato PE et al., Cell Rep 2014, 8: 754-766, positive control), alone or in combination with the indicated compounds for 6 hours.
  • Figure 8 shows representative photographs (A) and a graph (B) quantifying the formation of pulmonary metastases 14 days after injection of 10 6 cells of B16F10 murine melanoma into the caudal vein of syngeneic mice.
  • the cells were previously treated with 0.5% DMSO (DMSO, negative control) or with the 20 nM mRNA alone (Rot 20 nM, positive control), or with the inhibitor of the respiratory chain complex and mitochondrial superoxide inducer 20 combination with (+) - Catechin / LysineHCI 1: 2 10 ⁇ (Rot 20 nM + C / L 1: 2 10 ⁇ ).
  • n 7-9, One-way ANOVA with Bonferroni test, ** p ⁇ 0.01.
  • (+) - catechin / LysineHCI 1: 2 inhibits the formation of metastases in an experimental model of intravenous injection.
  • Example 8 (+) - catechin / LvsineHCI 1: 2 but not epigallocatechin gallate reduces the formation of pulmonary metastases in an experimental model
  • the growth of the primary tumor is carefully monitored by repeated measurements (eg every 2-3 days) of the tumor diameter using a vernier caliper and / or luminescence or fluorescence imaging in vivo if the expression of a reporter by the tumor cells allows it.
  • the average tumor diameter reaches preferably 10 mm (typically between days 10 and 14 for the aforementioned tumor lines)
  • the primary tumor is excised with the dual objective of keeping the mouse alive and stimulating the development of metastases (Porporato PE et al., Cell Rep 2014, 8: 754-766, Gabri MR et al., Clin Cancer Res 2006; 12: 7092-7098).
  • the time interval between surgeries on the first and the last mouse to develop a primary tumor of required size is as small as possible (typically 5 days for the aforementioned tumor lines).
  • the excision of a possible regrowth of the primary tumor is performed as often as necessary, when this regrowth reaches the size of about 10 mm in diameter.
  • mice are sacrificed in the different groups when one of the following events occurs: 1 °) a first animal presents a state of suffering exceeding the ethical limits, 2 °) a first animal dies without preliminary symptoms and has numerous and / or large metastatic lesions, 3) monitoring of luminescence or fluorescence in vivo indicates significant metastatic spread, if cells express adequate reporter, 4 °) a period of typically 30 to 40 post-injection days for B16M4b, or typically 60 to 90 days for B16F10. In these melanoma models, metastases occur mainly in the lungs and lymph nodes (inguinal, axillary, mediastinal) and less frequently in the liver, peritoneum, and possibly the brain.
  • lung insufflation by intra-tracheal injection of saline is performed.
  • Pulmonary metastases positive spots for melanin black pigment
  • luminescence or ex vivo fluorescence imaging of the sampled organs and / or histological analysis are performed.
  • the results are normalized for each animal by the area under the growth curve of the primary tumor until resection thereof.
  • catechin derivatives according to the invention have an anti-metastatic effect.

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Abstract

La présente invention se rapporte à une composition antimétastatique comprenant au moins un composé de type flavanol pour un usage comme médicament, ledit au moins un composé de type flavanol étant présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique et/ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique.

Description

Composition antimétastatique comprenant au moins un composé de type flavanol
La présente invention se rapporte à une composition comprenant au moins un composé de type flavanol pour un usage comme médicament.
Les catéchines sont des molécules phytochimiques connues pour leurs caractéristiques anti-oxydatives et chimioprotectrices. Elles sont présentes dans une grande partie des aliments végétaux et en hautes concentrations dans les feuilles de thé. Les études épidémiologiques démontrant l'effet anti cancérogène des fruits et du thé vert ont incité des investigations sur leur activité anti-tumorigénique. Néanmoins leur structure générale commune, des différences importantes dans leurs caractéristiques biochimiques et les conséquences de celles-ci sur la biodisponibilité et la stabilité de ces composés ont fait que les résultats observés in vitro n'étaient pas toujours représentatifs.
L'activité anti métastatique d'une composition comprenant au moins un composé de type flavanol est suggérée dans l'étude de Menon et al. (Cancer Letters 1999, 141 :159-165). Cet article indique que l'invasion de cellules de mélanome est inhibée chez des souris ayant reçus par injection intraveineuse des cellules cancéreuses lorsqu'elles sont traitées avec de la catéchine, un composé de type flavanol. Cette étude propose plus particulièrement que l'inhibition de l'invasion de cellules de mélanome est due à une activité inhibitrice de la catéchine sur l'action des métalloprotéinases, ce qui permettrait de bloquer la dégradation de la trame conjonctive par ces enzymes et ce qui empêcherait ainsi les cellules tumorales de pénétrer dans un organe sain et d'y former des métastases.
Similairement, l'effet anti-tumorigénique d'une autre composition comprenant au moins un composé de type flavanol est décrit dans l'étude de Weyant et al. (Cancer Research 2001 , 61 :1 18-125). Cette étude émet l'hypothèse selon laquelle la (+)-catéchine modifierait l'adhésion des cellules épithéliales à la matrice extracellulaire et induirait des changements dans le cytosquelette des cellules tumorales, ce qui aurait pour conséquence de moduler la migration des cellules cancéreuses.
Néanmoins, des études plus récentes démontrent que l'effet antiprolifératif de la catéchine est négligeable comparé à celui de l'épigallocatechin-3-gallate (EGCG), le flavanol le plus abondant du thé vert (Du et al. 2012, Nutrients 4 :1679-1691 ). Il reste aussi beaucoup de questions concernant le mode d'action de ces composés pour pouvoir développer le potentiel de ces flavonoïdes comme agents thérapeutiques.
S'il est bien connu que les cellules progénitrices métastatiques, c'est-à-dire les cellules à l'origine des métastases, requièrent un très important approvisionnement en substrats énergétiques afin d'assurer leur survie et leur prolifération dans un environnement qui leur est hostile, les voies métaboliques contrôlant la dissémination des cellules tumorales lors du processus métastatique sont encore très peu connues. Toutefois, dans les travaux de Porporato et al. . Cell Reports 2014, 8:54-66), il a été démontré qu'une production accrue de radical superoxyde par les cellules progénitrices métastastiques favoriserait leur migration. Plus spécifiquement, il a été démontré, au niveau mitochondrial des cellules progénitrices métastatiques, qu'un déséquilibre entre un excès de production de radical superoxyde et d'espèces réactives dérivées de l'oxygène (ROS) et les systèmes antioxydants capables de détruire ceux-ci pourrait expliquer la possibilité pour ces cellules cancéreuses de se disséminer vers des tissus distants de la tumeur de départ qu'elles colonisent pour y développer des métastases.
Afin de contrôler cette surproduction mitochondriale de radical superoxyde et d'autres espèces réactives dérivées de l'oxygène (ROS) par les cellules progénitrices métastatiques et dans le but d'inhiber la migration de ces dernières, il a été envisagé d'utiliser des antioxydants ciblant sélectivement les mitochondhes de ces cellules comme inhibiteurs de la production mitochondriale de superoxyde. Sont par exemple actuellement utilisés des inhibiteurs comme des sels de triphénylphosphonium de molécules quinoniques (mitoQ) ou dérivées de la pipéridine (mitoTEMPO), le groupe triphénylphosphonium permettant la pénétration de ces produits dans les mitochondhes. Toutefois, la toxicité de ces sels de triphénylphosphonium de molécules quinoniques ou dérivées de la pipéridine est largement méconnue.
De plus, les antioxydants généraux à action non ciblée pour les mitochondhes, tels que la N-acétylcystéine, la vitamine C et le trolox, peuvent favoriser la croissance tumorale (Porporato PE et Sonveaux P, Mol. Cell Oncol. 2015 ;2: DOI:10.4161/23723548.2014.968043) et la dissémination métastatique (Piskounova et al, Nature 2015 doi:10.1038/nature15726 ; Le Gai et al, Sci Transi Med. 2015;7:308re8).
Malheureusement, les compositions antimétastatiques actuellement connues et comprenant des antioxydants ne permettent de minimiser la migration des cellules progénitrices métastatiques que de façon peu significative. Sommaire de l'invention
La présente invention se rapporte à une composition comprenant au moins un composé de type flavanol qui est caractérisée en ce que ledit au moins un composé de type flavanol est présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique. Suivant l'invention, il s'agit donc d'un complexe moléculaire formé entre un composé de type flavanol et au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique par établissement de liaisons de coordination. Selon un premier aspect, la présente invention concerne une composition comprenant au moins un composé de type flavanol pour une utilisation dans le traitement préventif et/ou curatif de métastases de cancer, caractérisée en ce que ledit au moins un composé de type flavanol est présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit composé de type flavanol est choisi dans le groupe constitué de la (+)-catéchine, de la (-)-catéchine, de la (+)-épicatéchine, de la (-)- épicatéchine, de la (+)-épigallocatéchine, de la (-)-épigallocatéchine, du (+)- épicatéchine gallate, du (-)-épicatéchine gallate, de la (+)-gallocatéchine, de la (-)-gallocatéchine, du (+)-gallocatéchine gallate, du (-)-gallocatéchine gallate, et de leurs mélanges. Dans un mode de réalisation préféré, la composition est caractérisée en ce que ledit composé de type flavanol est la catéchine ou un dérivé de la catéchine.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit complexe présente un ratio d'équivalence molaire entre ledit composé de type flavanol et ledit au moins un acide aminé basique ou ledit au moins un dérivé d'un acide aminé basique compris entre 1 : 0,25 et 1 : 5, de préférence entre 1 : 1 et 1 : 4, préférentiellement entre 1 : 1 et 1 : 3, de façon préférée entre 1 : 1 et 1 : 2,5, plus préférentiellement entre 1 : 1 et 1 : 2. Dans un mode de réalisation préféré, la composition est caractérisée en ce que ledit complexe présente un ratio d'équivalence molaire entre ledit composé de type flavanol et ledit au moins un acide aminé basique ou ledit au moins un dérivé d'un acide aminé basique compris entre 1 : 2 et 1 : 4, comme par exemple 1 : 2.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit au moins un acide aminé basique est choisi dans le groupe constitué de la lysine, de l'arginine, de l'ornithine, de la citruline, de l'histidine, de la pyrolysine, du tryptophane, de la proline, et leurs mélanges. Dans un mode de réalisation préféré ledit au moins un acide aminé basique est la lysine.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un acide. Dans un mode de réalisation préféré ledit au moins un acide est choisi dans le groupe constitué de l'acide ascorbique, de l'acide acétique, de l'acide citrique, de l'acide chlorhydrique, et de leurs mélanges.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit au moins un composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe est présent en une concentration molaire comprise entre 0,01 μΜ et 5000 μΜ, de préférence comprise entre 0,02 μΜ et 2500 μΜ, préférentiellement comprise entre 0,1 μΜ et 1000 μΜ, de préférence comprise entre 0,5 μΜ et 500 μΜ.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme liquide ou sous forme solide, de préférence sous forme solide hydrosoluble comme de la poudre ou un comprimé ou encore un ovule ou un suppositoire.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'elle est formulée pour une utilisation par voie orale, rectale, vaginale, injectable ou cutanée.
Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que la teneur en au moins un composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique est comprise entre 15 et 95% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre 60 et 90%, avantageusement de 65 à 85% par rapport au poids total de ladite composition. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'en solution 0,01 molaire à 25°C, elle présente un pH égal ou supérieur à 3, de préférence compris entre 4 et 1 1 , de manière avantageuse compris entre 4,5 et 9. Dans un mode de réalisation préféré, elle présente un pH compris entre 7,2 et 7,4,
Dans un mode de réalisation, le cancer est un cancer du foie, de la prostate, du sein, de l'utérus, des testicules, de la vessie, des reins, des poumons, des bronches, des os, de la bouche, de l'œsophage, de l'estomac, du pancréas, du colon-rectum, ou encore du cerveau. Dans un mode de réalisation, le cancer est un cancer hépatocellulaire. Dans un mode de réalisation, le cancer est une leucémie, un myélome, un lymphome, ou un mélanome.
Selon un autre aspect, l'invention concerne une composition antimétastatique comprenant au moins un composé de type flavanol pour un usage comme médicament, caractérisée en ce que ledit au moins un composé de type flavanol est présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit au moins un composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe est présent en une concentration molaire comprise entre 0,01 μΜ et 5000 μΜ, de préférence comprise entre 0,02 μΜ et 2500 μΜ, préférentiellement comprise entre 0,1 μΜ et 1000 μΜ, de préférence comprise entre 0,5 μΜ et 500 μΜ. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit composé de type flavanol est choisi dans le groupe constitué de la (+)- catéchine, de la (-)-catéchine, de la (+)-épicatéchine, de la (-)-épicatéchine, de la (+)-épigallocatéchine, de la (-)-épigallocatéchine, du (+)-épicatéchine gallate, du (-)-épicatéchine gallate, de la (+)-gallocatéchine, de la (-)- gallocatéchine, du (+)-gallocatéchine gallate, du (-)-gallocatéchine gallate et leurs mélanges. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit au moins un acide aminé basique est choisi dans le groupe constitué de la lysine, de l'arginine, de l'ornithine, de la citruline, de l'histidine, de la pyrolysine, de la proline, et du tryptophane, et de leurs mélanges. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit complexe présente un ratio d'équivalence molaire entre ledit composé de type flavanol et ledit au moins un acide aminé basique ou ledit au moins un dérivé d'un acide aminé basique compris entre 1 : 0,25 et 1 : 5, de préférence entre 1 : 1 et 1 : 4, préférentiellement entre 1 : 1 et 1 : 3, de façon préférée entre 1 : 1 et 1 : 2,5, plus préférentiellement entre 1 : 1 et 1 : 2. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'elle peut comprendre en outre un acide. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ledit acide est choisi dans le groupe constitué de l'acide ascorbique, de l'acide acétique, de l'acide citrique, de l'acide chlorhydrique, et leurs mélanges. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisées en ce qu'elle se présente sous forme liquide ou sous forme solide, de préférence sous forme solide hydrosoluble comme de la poudre ou un comprimé ou encore un ovule ou un suppositoire. Dans un mode de réalisation, l'invention comprend la composition comme décrite ci-dessus pour une utilisation par voie orale, rectale, vaginale, injectable ou cutanée. Dans un mode de réalisation, la composition est, caractérisée en ce que la teneur en au moins un composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique est comprise entre 15 et 95% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre 60 et 90%, avantageusement de 65 à 85% par rapport au poids total de ladite composition. Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que, en solution 0,01 molaire à 25°C, elle présente un pH égal ou supérieur à 3, de préférence compris entre 4 et 1 1 , de manière avantageuse compris entre 4,5 et 9. Dans un mode de réalisation, l'invention se rapporte à la composition comme décrite ci-dessus pour le traitement préventif et/ou curatif des cancers du foie, de la prostate, du sein, de l'utérus, des testicules, de la vessie, des reins, des poumons, des bronches, des os, de la bouche, de l'œsophage, de l'estomac, du pancréas, du colon-rectum ou encore du cerveau. Dans un mode de réalisation, l'invention se rapporte à la composition comme décrite ci-dessus pour le traitement préventif et/ou curatif du cancer, de préférence du cancer hépatocellulaire. Dans un mode de réalisation, l'invention se rapporte à la composition comme décrite ci-dessus pour le traitement préventif et/ou curatif des leucémies. Dans un mode de réalisation, l'invention se rapporte à la composition comme décrite ci-dessus pour le traitement préventif et/ou curatif des myélomes. Dans un mode de réalisation, l'invention se rapporte à la composition comme décrite ci-dessus pour le traitement préventif et/ou curatif des lymphomes. Dans un mode de réalisation, l'invention se rapporte à la composition comme décrite ci-dessus pour le traitement préventif et/ou curatif des mélanomes. L'invention se rapporte aussi à l'utilisation d'une composition comme décrite ci-dessus pour la fabrication d'un médicament antimétastatique. Les revendications indépendantes et dépendantes définissent les caractéristiques particulières et préférées de l'invention. Les caractéristiques des revendications dépendantes peuvent être combinées aux caractéristiques des revendications indépendantes ou à d'autres revendications dépendantes le cas échéant. Les revendications jointes sont également explicitement incluses par référence dans la présente description.
Description détaillée de l'invention.
Avant de décrire la présente invention plus en détail, il convient de comprendre que cette invention ne se limite pas aux compositions, utlisations, procédés particuliers, composants, produits ou combinaisons décrits, ces compositions, utlisations, procédés, composants, produits ou combinaisons pouvant, bien entendu, varier. Il est aussi entendu que la terminologie utilisée ici ne saurait être considérée comme restrictive, étant donné que le champ d'application de la présente invention n'aura de limite que les revendications jointes.
Telles qu'utilisées ici, les formes singulières «un», «une» et «le», «la» incluent les références singulières et plurielles sauf si le contexte indique clairement le contraire.
Les termes «comprenant», «comprend» et «composé de» tels qu'utilisés ici sont synonymes de «incluant», «inclus» ou «contenant», «contient», et sont inclusifs ou ouverts et n'excluent pas les membres, éléments ou étapes de procédé supplémentaires non évoqués. Il ne faut pas oublier que les termes «comprenant», «comprend» et «composé de» tels qu'utilisés ici comprennent les termes «constitué de», «consiste à» et «consiste en», ainsi que les termes «consistant essentiellement en», «consiste essentiellement à» et «consiste essentiellement en».
L'évocation de plages de valeur numériques par leurs points extrêmes inclut tous les nombres et fractions intégrés dans les plages respectives, ainsi que les points extrêmes récités.
Le terme « environ » ou « approximativement » tel qu'utilisé ici quand appliqué à une valeur mesurable telle qu'un paramètre, une quantité, une durée temporelle, et autres similaires, signifie qu'il y a un degré de variation de ± 20 % ou moins, de préférence de ± 10 % ou moins, plus préférentiellement de ± 5 % ou moins, et encore plus préférentiellement de ±1 % ou moins par rapport à la valeur spécifiée, dans la mesure où ces variations sont appropriées pour la réalisation de la présente invention. Il est entendu que la valeur à laquelle le qualificatif «environ» ou «approximativement» fait référence est elle-même également spécifiquement et de préférence, décrite.
Alors que les termes « un ou plusieurs » ou « au moins un », tel que un ou plusieurs ou au moins un membre(s) d'un groupe de membres, est clair en tant que tel, au moyen d'une démonstration par l'exemple, le terme inclut entre autres une référence à l'un quelconque desdits membres, ou à au moins deux quelconques desdits membres, comme par exemple, > 3, > 4, > 5, > 6 ou > 7 etc. desdits membres, et jusqu'à tous lesdits membres.
Toutes les références citées dans la présente description sont incorporées ici par référence dans leur intégralité. En particulier, les enseignements de toutes les références mentionnées expressément ici sont incorporés par référence.
À moins qu'ils ne soient définis autrement, tous les termes utilisés dans la description de l'invention, y compris les termes techniques et scientifiques, ont la signification communément comprise par toute personne versée dans l'art dont relève l'invention. En complément d'information, des définitions des termes sont incluses pour mieux appréhender l'enseignement de la présente invention.
Dans les paragraphes suivants, différents aspects de l'invention sont définis plus en détail. Chaque aspect ainsi défini peut être combiné avec un ou d'autres aspects quelconques sauf indication claire du contraire. En particulier, toute caractéristique indiquée comme étant préférée ou avantageuse peut être combinée avec une ou d'autres caractéristiques indiquées comme étant préférées ou avantageuses.
Toute référence dans cette description à « un mode de réalisation » signifie qu'une fonction, structure ou caractéristique particulière décrite relativement au mode de réalisation est incluse dans au moins un mode de réalisation de la présente invention. Ainsi, les occurrences de la phrase « dans un mode de réalisation » en divers endroits de cette description ne font pas toutes nécessairement référence au même mode de réalisation, mais le peuvent. Par ailleurs, les fonctions, structures ou caractéristiques particulières peuvent être combinées de toute manière appropriée, comme cela apparaîtrait évident à l'homme du métier à la lecture de cette description, dans un ou plusieurs modes de réalisation. Par ailleurs, alors que certains modes de réalisation décrits ici comprennent certaines mais pas d'autres caractéristiques incluses dans d'autres modes de réalisation, les combinaisons de caractéristiques des différents modes de réalisation relèvent du champ d'application de l'invention, et forment différents modes de réalisation, comme le comprendrait l'homme du métier. Par exemple, dans les revendications jointes, l'un quelconque des modes de réalisation revendiqués peut être utilisé dans n'importe quelle combinaison.
Dans la description détaillée suivante de l'invention, il est fait référence aux figures annexées qui font partie intégrante de l'invention, et dans lesquelles sont représentés, à titre d'illustration uniquement, les modes de réalisation spécifiques dans lesquels l'invention peut être pratiquée. Il est entendu que d'autres modes de réalisation peuvent être utilisés et des modifications structurales ou logiques peuvent être apportées sans sortir du champ d'application de la présente invention. La description détaillée suivante ne doit donc pas être considérée comme limitative, et le champ d'application de la présente invention est défini par les revendications jointes.
Telle qu'utilisée ici, l'expression « composition comprenant au moins un composé de type flavanol», en sens de la présente invention, fait référence à une composition comprenant un ou plusieurs composés de type flavanol. Ceci comprend mais n'est pas limité à une composition comprenant principalement ou constituée exclusivement d'au moins un composé de flavanol.
Par les termes « composition antimétastatique », on entend, au sens de la présente invention, une composition empêchant ou du moins minimisant la formation de métastases, c'est-à-dire empêchant ou du moins minimisant la dissémination (migration) et/ou l'invasion et/ou la croissance et/ou la prolifération d'une cellule tumorale (cellule progénitrice métastatique) à distance du site initialement affecté et dans un tissu ou un organe atteint par voie sanguine ou lymphatique. Similairement, telle qu'utilisée ici, par l'expression « une méthode de traitement antimétastatique » on entend, au sens de la présente invention, un traitement empêchant ou du moins minimisant la formation de métastases, c'est-à-dire empêchant ou du moins minimisant la dissémination (migration) et/ou l'invasion et/ou la croissance et/ou la prolifération d'une cellule tumorale (cellule progénitrice métastatique) à distance du site initialement affecté et dans un organe atteint par voie sanguine ou lymphatique.
Par le terme « patient » on entend tout animal qui est demandeur d'un traitement selon l'invention. Ceci comprend aussi bien l'animal, plus particulièrement l'animal mammifère, que l'homme.
Par les termes « cellules progénitrices métastatiques », on entend, au sens de la présente invention, des cellules qui sont à l'origine des métastases.
Par les termes « un dérivé d'un acide aminé basique », on entend, au sens de la présente invention, toute dérivation chimique d'un acide aminé basique, comme par exemple un ajout d'un groupement -CH3, - C2H5 ou encore d'un groupement aminé.
Les flavanols, flavanols-3, flavan-3-ols ou encore catéchines sont une sous-famille de flavonoïdes qui sont des métabolites secondaires des plantes partageant tous une même structure de base formée par deux cycles aromatiques reliés par trois carbones : C6-C3-C6.
Par le terme « un dérivé de catéchine » on entend, au sens de la présente invention, une catéchine dont une ou plusieurs de ces fonctions OH est dérivatisée, par exemple par alkoxylation ou par acylation, comme par exemple la tétraméthoxy-catéchine, la penta-acétoxy-catéchine, et des dérivés cycliques.
Les flavonols sont présents dans les compositions selon l'invention sous la forme d'un complexe formé par l'établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide basique. On fait référence à un complexe formé par l'établissement de liaisons de coordination car les acides et les bases faibles, comme la (+) catéchine, sont caractérisés par le fait qu' en solution, ils sont à plus de 99% de leur concentration sous forme non-ionique, ce qui veut dire, très peu d'ions en solution et donc pas de formation de sels.
Dans le cadre de la présente invention, il a été observé de façon tout à fait surprenante qu'un composé de type flavanol, sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique, permet de disposer d'une composition qui peut être utilisée comme composition antimétastatique, c'est à dire qui peut être utilisée comme médicament permettant d'inhiber la migration de cellules progénitrices métastatiques au départ d'une tumeur primaire.
Il a par ailleurs été montré que cette composition n'est pas toxique, ne bloque pas la respiration mitochondriale des cellules saines et agit comme agent modulateur de la production de superoxyde et d'espèces réactives de l'oxygène produites par les cellules progénitrices métastasiques, ce qui constitue un intérêt certain pour une utilisation comme médicament notamment pour l'être humain.
D'une part, il a été observé de façon surprenante qu'un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention permet de réguler (c'est-à-dire de moduler) une production excessive, par les cellules progénitrices métastatiques, de superoxyde et d'espèces réactives de l'oxygène sans pour autant inhiber ou supprimer complètement leur présence qui est naturellement requise au niveau des cellules saines, notamment pour assurer une communication correcte entre cellules et au bon fonctionnement des ces dernières.
D'autre part, il a été montré, pour la première fois, qu'un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention est à même d'induire une réduction significative du nombre de cellules progénitrices métastatiques migrant depuis une tumeur primaire jusqu'à un organe sain.
Par le terme « migration » ou « dissémination », on entend, au sens de la présente invention, le déplacement de cellules progénitrices métastatiques depuis un site originel (tumeur primaire) vers d'autres parties du corps (en utilisant le système lymphatique et/ou le système sanguin).
C'est dans le cadre de la présente invention que, de façon tout à fait surprenante et pour la première fois, un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention a été identifié comme étant un inhibiteur permettant de réduire d'au moins 5 à 10%, de préférence d'au moins 20 à 40%, préférentiellement d'au moins 50 à 75% le nombre de cellules progénitrices métastatiques migrant d'une tumeur primaire vers un organe sain, ce composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention modulant la production de superoxyde et d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) produites par ces cellules cancéreuses.
Sans vouloir être en aucune façon limité par la théorie, il est estimé qu'une partie de l'effet pourrait être attribué à l'effet sur la production de superoxyde et d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) par les mitochondries des cellules progénitrices métastatiques. Notons que l'art antérieur est totalement muet quant à ce mode d'action de modulation d'un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe sur une production de superoxyde et d'espèces réactives de l'oxygène par des cellules progénitrices métastatiques. Ce mode d'action est d'autant plus surprenant que, même si les composés de type flavanol sont connus comme étant des composés antioxydants particulièrement puissants même à faible concentration, ils sont également reconnus pour avoir une très faible capacité de pénétration membranaire. Par conséquent, il n'était certainement pas attendu que de tels composés de type flavanol, même sous la forme d'un complexe comme le prévoit la présente invention, puissent pénétrer au travers des membranes mitochondriales des cellules progénitrices métastatiques pour y moduler une production excessive de superoxyde et d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) et ainsi avoir un impact significatif sur la réduction du nombre de cellules progénitrices métastatiques migrantes, ce qui n'a été mis en évidence que dans le cadre de la présente invention. Dans tous les cas et en particulier dans le cas des métastases, il est préférable que le capteur et le modulateur de la production excessive de radicaux libres par les cellules progénitrices métastatiques arrive au bon endroit, au bon moment, à la bonne concentration et agisse suffisamment vite tout en étant non toxique pour la machinerie cellulaire. Dans le cadre de la présente invention, il a été déterminé, contre toute attente, qu'un composé de type flavanol, sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique, répond parfaitement à tous ces critères.
Plus particulièrement, il a été mis en évidence, dans le cadre de la présente invention, qu'un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention permet d'agir directement et rapidement au niveau de la tumeur primaire en modulant adéquatement la présence de radical superoxyde mitochondrial et de ROS produits par les cellules progénitrices métastatiques en minimisant ainsi significativement la migration de ces dernières. En supposant qu'un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention soit capable de pénétrer au travers de la membrane mitochondriale, ceci permettrait à ce composé de capter une proportion adéquate du radical superoxyde mitochondrial et des ROS produits par les mitochondries des cellules progénitrices métastatiques. Selon les observations des inventeurs, le captage et la modulation du radical superoxyde mitochondrial et des ROS s'effectuent de façon adéquate pour respecter l'équilibre physiologique naturel de la présence de radical superoxyde mitochondrial et de ROS au niveau des cellules saines.
Ceci est particulièrement avantageux puisque le problème de dissémination (migration) de ces cellules progénitrices métastatiques est attaqué à la source en ciblant les cellules tumorales circulantes et en inhibant par conséquent leur migration vers des organes et des tissus sains et la formation de métastases, ceci sans qu'aucune toxicité ne soit observée et sans affecter les cellules saines. Par conséquent, dès lors que l'action du composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe suivant l'invention s'effectue au moins en partie en ciblant des cellules progénitrices métastatiques dans le système sanguin ou lymphatique, le risque que ces dernières atteignent effectivement un organe ou un tissu sain est significativement minimisé.
Indépendamment de toute théorie, il a été établi que les compositions selon l'invention ont un effet antimétastatique prononcé dans un modèle de métastase reconnu. Dans un mode de réalisation, il a été établi qu'une composition comprenant un complexe de (+) catéchine présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique a un effet anti-métastatique particulièrement élevé. Dans un mode de réalisation particulièrement envisagé, la (+) catéchine est présente sous forme d'un complexe avec un acide aminé basique comme la lysine ou la proline, ou un dérivé de la lysine ou de la proline. En effet, les acides aminés basiques jouent un rôle essentiel dans la composition du collagène et sont essentiels pour la formation des cross- links du collagène.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend un complexe d'une catéchine avec un acide aminé basique, dans lequel le flavanol est choisi dans le groupe constitué de la (+)-catéchine, de la (-)- catéchine, de la (+)-épicatéchine, de la (-)-épicatéchine, de la (+)-épi- gallocatéchine, de la (-)-épigallocatéchine, de la (+)-gallocatéchine, de la (-)-gallocatéchine, du (+)-gallocatéchine gallate, du (-)-gallocatéchine gallate et de leurs mélanges. Il a été établi que l'effet antimétastatique d'une composition selon l'invention, c'est-à-dire comprenant au moins un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention, est beaucoup plus élevé comparé à l'épigallocatéchine gallate, le flavanol considéré dans l'état de la technique comme le plus puissant. Dans un mode de réalisation, le flavanol est la (+) catéchine. Dans un mode de réalisation, la composition comprend en outre d'autre composés actifs, comme par exemple, un ou plusieurs autres flavanols ou d'autres composés thérapeutiques.
Enfin, avant la présente invention rien ne laissait présager qu'un composé de type flavanol sous la forme d'un complexe suivant l'invention pourrait agir comme agent antimétastatique. Comme indiqué ci- dessus mais sans vouloir être limité par cette théorie, il est fort probable que ce complexe agisse au moins en partie comme modulateur de ce type de radicaux et sur les ROS issus de cellules progénitrices métastatiques de telle sorte que la migration de ces dernières soit inhibée.
Ces observations sont d'autant plus surprenantes qu'un composé de type flavanol est reconnu comme étant peu biodisponible et que, par conséquent, une action de ce composé non seulement dans l'organisme mais en outre ultérieurement à son assimilation via le tractus digestif, n'était certainement pas garantie. Il ne pouvait en effet pas être présagé de l'effet de modulation du composé de type flavanol, même présent sous la forme d'un complexe comme le prévoit la présente invention sur le radical superoxyde et sur les ROS issus des cellules progénitrices métastatiques puisque les composés de type flavanol sont reconnus comme étant particulièrement peu biodisponibles.
A ce sujet, dans le cadre de la présente invention, il a été également observé de façon surprenante que le complexe formé entre le composé de type flavanol et au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique permet d'améliorer, contre toute attente, la biodisponibilité de la composition selon l'invention même si la solubilité de la composition est également augmentée via la formation d'un tel complexe. En effet, dès lors que la solubilité dans un milieu aqueux est augmentée, il est attendu que la capacité du complexe à traverser les tissus lipidiques soit faible, or, dans le cadre de la présente invention, il a été déterminé, contre toute attente, que la biodisponibilité est quand même augmentée également de façon tout à fait surprenante malgré le fait que la solubilité soit augmentée.
L'invention porte donc sur les compositions comprenant au moins un composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe avec un acide aminé basique et/ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique et sur leur utilisation. De préférence, ledit au moins un composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe est présent en une concentration molaire comprise entre 0,01 μΜ et 5000 μΜ, de préférence comprise entre 0,02 μΜ et 2500 μΜ, préférentiellement comprise entre 0,1 μΜ et 1000 μΜ, de préférence comprise entre 0,5 μΜ et 500 μΜ. Une telle concentration molaire du composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe a été déterminé comme étant adéquate pour que ce dernier agisse comme agent modulateur (régulateur) de la présence de radical superoxyde mitochondrial et de ROS produits en excès par les cellules progénitrices métastatiques. De préférence, ces concentrations molaires correspondent à une concentration en composé de type flavanol présent sous la forme d'un complexe comprise entre 0,0002 mg/ml et 400 mg/ml selon le poids moléculaire du composé de type flavanol considéré.
Avantageusement, ledit composé de type flavanol est choisi dans le groupe constitué de la (+)-catéchine, de la (-)-catéchine, de la (+)- épicatéchine, de la (-)-épicatéchine, de la (+)-épigallocatéchine, de la (-)- épigallocatéchine, du (+)-épicatéchine gallate, du (-)-épicatéchine gallate, du (+)-épigallocatéchine gallate, du (-)-épigallocatéchine gallate, de la (+)- gallocatéchine, de la (-)-gallocatéchine, du (+)-gallocatéchine gallate, du (-)- gallocatéchine gallate et leurs mélanges. De préférence, le flavanol est choisi dans le groupe constitué de la (+)-catéchine, de la (-)-catéchine, de la (+)-épicatéchine, de la (-)-épicatéchine, de la (+)-épigallocatéchine, de la (-)-épigallocatéchine, du (+)-épicatéchine gallate, du (-)-épicatéchine gallate, de la (+)-gallocatéchine, de la (-)-gallocatéchine, du (+)- gallocatéchine gallate, du (-)-gallocatéchine gallate et de leurs mélanges. De préférence, le composé de type de flavanol est la (+)-catéchine. Avantageusement, ledit au moins un acide aminé basique est choisi dans le groupe constitué de la lysine, de l'arginine, de l'ornithine, de la citruline, de l'histidine, de la pyrolysine, du tryptophane, de la proline et leurs mélanges. De préférence, ledit au moins un acide aminé basique est choisi dans le groupe constitué de la lysine, de l'arginine et de la proline. Plus particulièrement, dans un mode de réalisation, l'acide aminé basique est la lysine.
De préférence, ledit complexe présente un ratio d'équivalence molaire entre ledit composé de type flavanol et ledit au moins un acide aminé basique ou ledit au moins un dérivé d'un acide aminé basique compris entre 1 : 0,25 et 1 : 5, de préférence entre 1 : 1 et 1 : 4, préférentiellement entre 1 : 1 et 1 : 3, de façon préférée entre 1 : 1 et 1 : 2,5, plus préférentiellement entre 1 : 1 et 1 : 2. De tels ratios d'équivalence molaire entre ledit composé de type flavanol et ledit au moins un acide aminé basique ont été déterminé, dans le cadre de la présente invention, comme permettant de disposer d'un complexe adéquat pour inhiber la migration des cellules progénitrices métastatiques.
De préférence, ledit ratio d'équivalence molaire est supérieur ou égal à 1 : 1 , en particulier supérieur à 1 : 1 .
Avantageusement, ledit ratio d'équivalence molaire est inférieur ou égal à 1 : 3.
Avantageusement, ledit ratio d'équivalence molaire est égal à 1 :2 ou compris entre 1 : 2 et 1 : 4, plus préférentiellement entre 1 : 2 et 1 : 3.
En particulier ledit ratio d'équivalence molaire est inférieur à
1 : 3, plus particulièrement inférieur ou égal à 1 : 2,5.
De manière préférentielle, ledit ratio d'équivalence molaire est inférieur à 1 : 2.
Alternativement, le ratio d'équivalence molaire est compris entre 1 : 1 ,5 et 1 : 2,5, de préférence entre 1 : 1 ,5 et 1 : 2 Avantageusement, ledit ratio d'équivalence molaire est supérieur ou égal à 1 : 1 et inférieur ou égal à 1 : 2,50.
Très avantageusement, ledit ratio d'équivalence molaire est supérieur ou égal à 1 : 1 et inférieur ou égal à 1 : 1 ,5.
De préférence, ledit ratio d'équivalence molaire est supérieur ou égal à 1 : 1 ,5 et inférieur ou égal à 1 : 2.
De préférence, ledit ratio d'équivalence molaire est supérieur ou égal à 1 : 1 ,5 et inférieur ou égal à 1 : 2,5.
Préférentiellement, ladite composition suivant l'invention comprend en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles. Par exemple, ladite composition peut comprendre un ou plusieurs lubrifiants, conservateurs, stabilisants, édulcorants, adhésifs, adjuvants, colorants, désagrégeants, agents de remplissage et activateurs de perméation. Les excipients sont bien connus par l'homme du métier.
Avantageusement, ladite composition suivant l'invention peut comprendre en outre un acide. La présence de cet acide permet d'ajuster le pH de la composition (comme formulée ou comme formée juste avant l'administration) à des valeurs basses, sensiblement inférieures à l'acidité naturelle du complexe. Dans un mode de réalisation, le pH de la composition est de l'ordre de 4,0 à 6,0 ce qui permet une stabilisation du complexe. Dans une mode de réalisation le pH de la composition est plus élevé, jusqu'à une valeur de pH physiologique de l'ordre de 7,2 à 7,4. Dans un mode de réalisation, le pH de la composition est ajusté permettant ainsi de stabiliser la composition sous sa forme galénique, par exemple en solution à une valeur de pH physiologique de l'ordre de 7,2 à 7,4. Le pH de la composition peut dépendre aussi de l'utilisation de la composition en tant que médicament, plus particulièrement il peut dépendre de la voie d'administration envisagée. Dans un mode de réalisation on prévoit par exemple la préparation du composé selon l'invention sous une forme injectable, qui peut être, optionnellement, à préparer extemporanément avant l'utilisation. L'acide envisagé pour réduire la valeur du pH dans ce contexte peut être un acide inorganique, qui peut être choisi dans le groupe constitué de l'acide hydrochlorique, l'acide sulfurique ou l'acide phosphorique ou peut être un acide organique comme les acides aliphatiques, cycloaliphatiques, aromatiques, ou hétérocycliques, carboxyliques or sulfoniques, par exemple l'acide acétique, l'acide propionique, l'acide succinique, l'acide glycolique, l'acide gluconique, l'acide lactique, l'acide malique, l'acide tartrique, l'acide citrique, l'acide ascorbique, l'acide glucuronique, l'acide maléique, l'acide fumarique, l'acide pyruvique, l'acide aspartique, l'acide glutamique, l'acide mandélique, l'acide méthanesulfonique, l'acide éthanesulflonique, l'acide panthoténique, l'acide beta-hydroxypropionique, l'acide beta-hydroxybutyrique, l'acide malonique, et l'acide galacturonique.
De préférence, ledit acide est choisi dans le groupe constitué de l'acide ascorbique, l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide chlorhydrique, et leurs mélanges. De préférence, ledit acide est l'acide chlorhydrique.
Dans un mode de réalisation, la composition peut comprendre, afin d'améliorer la solubilité et la stabilité des composés, un ou plusieurs sels d'addition acides ou basiques pharmaceutiquement acceptables ou des solvates de ceux-ci. Il peut être avantageux d'employer des cyclodextrines a ou γ ou leurs dérivés, en particulier les cyclodextrines substituées avec un hydroxyalkyle, par exemple, 2-hydroxypropyl- cyclodextrine ou bien sulfobutyl-cyclodextrine. Dans un mode de réalisation, la composition peut comprendre aussi des solvants tels que les alcools, qui peuvent améliorer la solubilité et/ou la stabilité des composés.
Avantageusement, la composition suivant l'invention se présente sous forme liquide ou sous forme solide. Dans un mode de réalisation, la composition se présente sous forme solide hydrosoluble comme de la poudre ou un comprimé ou encore un ovule ou un suppositoire. Dans un mode de réalisation, la composition est prévue en tant que préparation combinée des constituants (flavanol, acide aminé, et optionneNement acide et excipients) pour une utilisation simultanée ou pour une combinaison directement avant l'administration. Plus particulièrement, ce genre de formulation est prévu pour administration orale. Par exemple, la composition peut être formulée sous forme de comprimé. Dans ces modes de réalisation, ledit complexe se forme post-administration.
Avantageusement, ladite composition suivant l'invention est utilisée par voie orale, rectale, vaginale, injectable ou cutanée.
De préférence, la composition suivant l'invention est caractérisée en ce que la teneur en au moins un composé de type flavanol, présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique, est comprise entre 15 et 95% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre 60 et 90%, avantageusement de 65 à 85% par rapport au poids total de ladite composition.
Avantageusement, la composition suivant l'invention est caractérisée en ce que, en solution 0,01 molaire à 25°C, elle présente un pH égal ou supérieur à 3, de préférence compris entre 4 et 1 1 , de manière avantageuse compris entre 4,5 et 9.
Selon un autre aspect, la présente invention porte sur des utilisations de la composition suivant l'invention pour le traitement préventif et/ou curatif de maladies cancéreuses.
De préférence, la composition suivant l'invention est utilisée pour le traitement préventif et/ou curatif des cancers du foie, de la prostate, du sein, de l'utérus, des testicules, de la vessie, des reins, des poumons, des bronches, des os, de la bouche, de l'œsophage, de l'estomac, du pancréas du colon-rectum ou encore du cerveau. De préférence, la composition suivant l'invention est utilisée le traitement préventif et/ou curatif du cancer, de préférence du cancer hépatocellulaire.
De préférence, la composition suivant l'invention est utilisée pour le traitement préventif et/ou curatif des leucémies.
De préférence, la composition suivant l'invention est utilisée pour le traitement préventif et/ou curatif des myélomes.
De préférence, la composition suivant l'invention est utilisée pour le traitement préventif et/ou curatif des lymphomes.
De préférence, la composition suivant l'invention est utilisée pour le traitement préventif et/ou curatif des mélanomes.
La présente invention porte aussi sur l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la prévention ou le traitement des métastases du cancer. Donc, entre autre, l'invention porte sur la fabrication d'un médicament antimétastatique.
Dans un mode de réalisation, l'invention prévoit le traitement de patients qui souffrent ou risquent de souffrir de métastases de cancer. Plus particulièrement, dans un mode de réalisation, il s'agit de patients qui ont été diagnostiqués avec une tumeur.
Dans un mode de réalisation, la tumeur est une tumeur de cancer du sein, du foie, de la prostate, de l'utérus, des testicules, de la vessie, des reins, des poumons, des bronches, des os, de la bouche, de l'œsophage, de l'estomac, du pancréas du colon-rectum ou encore du cerveau.
Dans un mode de réalisation, l'invention envisage un traitement de cellules tumorales circulantes (CTC), c'est-à-dire les cellules tumorales présentes dans le sang et dans la lymphe. Préférentiellement, parmi les CTCs, la composition cible les cellules progénitrices métastatiques, c'est-à-dire les cellules en migration. Dans un mode de réalisation, l'invention envisage le traitement de patients qui ont été diagnostiqués avec une tumeur avec risque élevé de métastase.
Dans un mode de réalisation, la tumeur est une tumeur hypoxique. Le caractère hypoxique peut être démontré par voie histochimique, par détection de marqueurs d'hypoxie, comme par exemple CAIX ou HIF-1 alpha, ou par l'utilisation d'un indicateur d'hypoxie tel que EF5 ou d'un traceur d'hypoxie tel que le [18F]-fluoromisonidazole.
Dans un mode de réalisation, la tumeur est une tumeur exprimant un marqueur de métastase. Plusieurs marqueurs de métastases ont été décrits dans l'état de la technique, par exemple Ned9, Pyk2, CPE- delta, CAIX, et métal loprotéases 2 et/ou 9 et aussi CAIX ou HIF-1 alpha.
Dans un mode de réalisation, l'invention prévoit le traitement de patients qui ont été diagnostiqués avec une ou plusieurs métastases.
Dans un mode de réalisation, le traitement envisagé selon l'invention est une combinaison avec un ou plusieurs traitements anticancereux. Ces traitements comprennent par exemple mais ne sont pas limités à la chirurgie, la radiothérapie, la chimiothérapie, les traitements ciblés, l'hormonothérapie et l'immunothérapie. A savoir, la composition peut être administrée avant, pendant et/ou après un autre traitement anticancéreux.
Dans un mode de réalisation, le traitement envisagé selon l'invention est une combinaison avec un composé avec une action antiproliférative.
Dans un mode de réalisation, le traitement envisagé selon l'invention est une combinaison avec un médicament ou un traitement établi contre le cancer avec une action anti-oxydante et/ou qui a un effet sur la production de ROS.
Dans un mode de réalisation, le traitement envisagé comprend l'administration d'une composition selon l'invention par voie orale, rectale, vaginale, injectable ou cutanée. Dans un mode de réalisation préférée, l'administration est par voie orale.
Les compositions de l'invention peuvent être administrées préopérativement, périopérativement, ou postopérativement. Le dosage est généralement déterminé sur base de la taille, du poids et/ou de la surface corporelle du patient selon les régimes posologiques. Dans un mode de réalisation, la composition peut être administrée une fois par jour, deux fois par jour, trois fois par jour ou quatre fois par jour. Dans un mode de réalisation, l'administration d'un dosage de 50 mg à 2g/jour/patient peut être envisagée. Plus particulièrement, un dosage d'environ 250 mg à 750 mg/jour, par exemple 500 mg/jour peut être envisagé. Il est particulièrement avantageux de formuler les compositions pharmaceutiques envisagées sous forme posologique d'unité pour la facilité d'administration et d'uniformité de la posologie. La forme posologique d'unité dans le présent document se réfère à des unités physiquement distinctes pouvant servir de doses unitaires, chaque unité contenant une quantité prédéterminée d'ingrédient actif.
D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront des exemples donnés ci-après, à titre non limitatif et en faisant référence aux figures (graphes) annexées.
Brève description des figures :
Les figures 1A, 1 B et 1 C sont des graphes qui reprennent respectivement le pourcentage de cellules tumorales SiHa-F3 (F3) survivantes (fig. 1A), le pourcentage de cellules ayant migré (fig. 1 B) et le ratio fluorescence DCFDA/contenu protéique (fig. 1 C) pour un traitement à des concentrations variables de (+)-catéchine (+ C).
Les figures 2A, 2B et 2C sont des graphes qui reprennent respectivement le pourcentage de cellules tumorales SiHa-F3 (F3) survivantes (fig. 2A), le pourcentage de cellules ayant migré (fig. 2B) et le ratio fluorescence DCFDA/contenu protéique (fig. 2C) pour un traitement à des concentrations variables du complexe (+)- catéchine/lysine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :1 .
Les figures 3A et 3Bsont des graphes qui reprennent respectivement le pourcentage de cellules tumorales SiHa-F3 (F3) survivantes (fig. 3A), le pourcentage de cellules ayant migré (fig. 3B) pour un traitement à des concentrations variables du complexe (+)-caté- chine/lysine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :2.
Les figures 4A, 4B, 4C et 4D sont des graphes qui reprennent la survie cellulaire (mesurée par le technique du cristal violet [CV] et exprimée en % de cellules supermétastatiques SiHa-F3 non- traitées) de cellules tumorales traitées avec l'épigallocatéchine gallate (EGCG), la (+)-Catéchine, la (+)-catéchine/LysineHCI 1 :1 ou la (+)-caté- chine/LysineHCI (1 :2) (concentrations de 100 nM, 1 μΜ, 10μΜ, 100μΜ, o500 μΜ ou 1 mM).
Les figures 5A, 5B, 5C et 5D sont des graphes qui reprennent la survie cellulaire (mesurée par la technique du MTT et exprimée en % de SiHa-F3 non-traitées) de cellules tumorales traitées avec l'épigallocatéchine gallate (EGCG), la (+)-Catéchine, la (+)-caté- chine/LysineHCI 1 :1 ou la (+)-catéchine/LysineHCI (1 :2) (concentrations de 100 nM, 1 μΜ, 10μΜ, 100μΜ, 500 μΜ ou 1 mM).
Les figures 6A, 6B, 6C et 6D sont des graphes qui reprennent le ratio fluorescence DCFDA/contenu protéique pour un traitement des cellules tumorales SIHa-F3 avec l'épigallocatéchine gallate (EGCG), la (+)-Catéchine, la (+)-catéchine/LysineHCI 1 :1 ou la (+)-caté- chine/LysineHCI (1 :2) (concentrations de 100 nM, 1 μΜ, 10μΜ, 100μΜ, 500 μΜ ou 1 mM).
Les figures 7A, 7B, 7C et 7D sont des graphes qui reprennent la migration cellulaire (en % de SiHa-F3 non-traitées) de cellules tumorales traites avec l'épigallocatéchine gallate (EGCG), la (+)- Catéchine, la (+)-catéchine/LysineHCI 1 :1 ou la (+)-catéchine/LysineHCI (1 :2) (concentrations de 100 nM, 1 μΜ, 10μΜ, 10ΟμΜ, 500 μΜ ou 1 mM).
Les figures 8A et 8B sont des photographies (A) et un graphe (B) démontrant l'effet de la (+)-Catéchine/LysineHCI 1 :2 sur des cellules tumorales de mélanome traitées avec de la roténone (Rot 20 nM + C/L 1 :2 10μΜ) comparé au traitement de roténone tout seul (Rot 20 nM) sur la formation de métastases pulmonaires dans un modèle expérimental. Un groupe d'animaux a été traité avec du DMSO seul et sert de contrôle négatif.
Les figures 9A et 9B sont des photographies (A) et un graphe (B) montrant l'effet de la (+)-Catéchine/LysineHCI 1 :2 (Rot 20 nM + C/L 1 :2 10 μΜ) et l'épigallocatéchine-gallate/LysineHCI 1 :2 (Rot 20 nM + EGCG/L 1 :2 10 μΜ) sur des cellules tumorales de mélanome lors de la formation de métastases pulmonaires dans un modèle expérimental. Un groupe d'animaux a été traité avec de la roténone seule (Rot 20 nM) et sert de contrôle positif. Un groupe d'animaux a été traité avec du DMSO seul et sert de contrôle négatif.
Les figures 10A et 10B sont des photographies (A) et un graphe (B) montrant l'effet de catéchine/LysineHCI 1 :2 (Rot 10 nM + C/L 1 :2 10 μΜ) ou de l'épigallocatéchine-gallate (Rot 10 nM + EGCG 10 μΜ) sur la formation de métastases pulmonaires dans un modèle expérimental.
Exemples
Des essais de migration cellulaire et de survie des cellules traitées ont été effectués avec un modèle de cellules tumorales superinvasives obtenues à partir d'une lignée cellulaire d'un adénocarcinome humain du col de l'utérus, SiHa. La sélection des cellules superinvasives SiHa-F3 (F3 sur les graphiques) a été effectuée après trois invasions consécutives in vitro dans des supports perméables de type Transwell® recouverts de Matrigel® (Porporato PE et al., Cell Rep 2014, 8:754-766). Une telle sélection de cellules progénitrices métastasiques particulièrement agressives permet de valider d'autant mieux les produits antimétastatiques les plus actifs.
La migration proprement dite des cellules tumorales a été mesurée dans une chambre de Boyden avec 50 000 cellules par puits et 0,15% de sérum fœtal bovin (FBS) utilisé comme chimio-attractant. Les diamètres des pores de la membrane poreuse séparant les deux compartiments de là chambre de Boyden ont été fixés à 8 μιτι. Après 16 heures de migration, les cellules ont d'abord été fixées au méthanol durant 3 min puis colorées au Crystal Violet. Le milieu de culture utilisé était le DMEM 4,5 g/L de glucose, GlutaMAX®, 1 % d'une sumution de pénicilline/streptomycine et 10% de sérum bovin fœtal.
La survie des cellules, afin d'exclure tout effet toxique des produits testés, a été estimée soit sur base de la quantification des cellules colorées au crystal violet, soit par la mesure de l'activité de la succinate déshydrogénase (SDH) mitochondriale sur la réduction du sel de tétrazolium MTT (suspension du formazan obtenu dans du DMSO et mesure de l'absorbance à 570 nm).
Par ailleurs, une évaluation de l'impact des produits testés sur le niveau d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) observé a été réalisée selon la technique DCFDA après 60 minutes de prétraitement des cellules progénitrices métastasiques SiHa-F3 avec les produits testés.
Sur les figures, F3 signifie : contrôle (cellules non traitées) ; F3 + C x M signifie : cellules traitées avec la (+)-catéchine à une concentration de x molaire; F3 C/L 1 :1 x M signifie : cellules traitées avec le complexe (+)-catéchine/lysine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :1 à une concentration de x molaire ; F3 C/L 1 :2 x M signifie : cellules traitées avec le complexe (+)-catéchine/lysine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :2 à une concentration de x molaire. Afin de discuter les résultats obtenus, la concentration molaire de 1 μΜ a été considérée même si d'autres valeurs sont reprises sur les graphes. Cette concentration est la plus pertinente dans l'optique de la fabrication d'un médicament pour lequel on cherche systématiquement à minimiser la concentration en composé actif. Il n'en demeure pas moins que les autres concentrations molaires sont tout aussi adaptées à la fabrication d'un tel médicament d'autant plus que les composés de type flavanol sont peu toxiques et que ces concentrations font donc partie intégrante de la présente invention.
Exemple 1 : traitement à des concentrations variables de (+)-catéchine (+ C)
Comme on peut le constater à la figure 1A, une concentration molaire de 1 μΜ de (+)-catéchine (+ C) n'affecte pas la survie des cellules tumorales, ce qui indique qu'à cette concentration, la (+)-catéchine n'est pas toxique. La figure 1 B permet de constater qu'une concentration molaire de 1 μΜ de (+)-catéchine ne permet cependant pas de diminuer significativement le nombre de cellules tumorales migrant d'un compartiment à l'autre de la cellule de Boyden. Dans un même sens, la figure 1 C montre que la (+)-catéchine à cette même concentration de 1 μΜ n'a pas d'impact sur le niveau d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) observé.
Exemple 2 : traitement à des concentrations variables du complexe (+)-catéchine/lvsine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :1
Comme on peut le constater à la figure 2A, une concentration molaire de 1 μΜ du complexe (+)-catéchine/lysine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :1 (C/L 1 :1 ) n'affecte pas la survie des cellules tumorales, ce qui indique qu'à cette concentration, le complexe C/L 1 :1 n'est pas toxique. Par ailleurs, la figure 2B permet de constater qu'une concentration molaire de 1 μΜ de complexe C/L 1 :1 permet de diminuer significativement et jusqu'à 30% le nombre de cellules tumorales migrant d'un compartiment à l'autre de la cellule de Boyden.
Il a été déterminé que cette diminution du pourcentage de cellules tumorales migrantes est liée à une réduction d'environ et d'au moins 10% du niveau d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) produites par les cellules, ceci sous l'effet du complexe C/L 1 :1 .
Exemple 3 : traitement à des concentrations variables du complexe (+)-catéchine/lvsine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :2
Comme on peut le constater à la figure 3A, une concentration molaire de 1 μΜ du complexe (+)-catéchine/lysine selon un ratio d'équivalence molaire 1 :2 (C/L 1 :2) n'affecte pas la survie des cellules tumorales, ce qui indique qu'à cette concentration, le complexe C/L 1 :2 n'est pas toxique. Par ailleurs, la figure 3B permet de constater qu'une concentration molaire de 1 μΜ de complexe C/L 1 :2 permet de diminuer significativement et jusqu'à 40% le nombre de cellules tumorales migrant d'un compartiment à l'autre de la cellule de Boyden.
Il est bien entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.
Exemple 4 : Cvtotoxicité des dérivés (+)-catéchine/LvsineHCI comparés à l'épigallocatéchine qallate sur les cellules tumorales.
L'épigallo-catéchine gallate provient de chez Sigma Chemical Co, St Louis, la (+)-catéchine a été préparée pharmaceutiquement pure à partir de Bloc Gambir et ses complexes ont été obtenus en y associant du chlorhydrate de lysine en proportion molaire.
Les cellules SiHa-F3 ont été initialement générées comme décrit dans l'article récemment publié dans Cell Reports : Porporato PE et al., Cell Rep 2014, 8:754-766. Les cellules ont été maintenues en culture et manipulées dans du DMEM, 4,5g/L glucose, glutaMAX (Gibco), supplémenté avec 10% de sérum fœtal bovin
Mesure de la viabilité cellulaire: 20000 cellules SiHa-F3 ont été ensemencées et traitées par les composés indiquées pendant une nuit (16h). Les cellules ont ensuite été fixées pendant 3 min au méthanol, colorées au cristal violet 0,23%, et remises en suspension dans du DMSO pour mesure de l'absorbance à 595 nm (spectrophotomètre Victor X4, Perkin Elmer); ou alternativement incubées 3h à 37°C dans une solution saturante de MTT dans de l'HBSS contenant 10 mM d'Hepes, et remises en suspension dans du DMSO pour mesure de l'absorbance à 630 nm (spectrophotomètre Victor X4, Perkin Elmer).
Les cellules SiHa-F3 ont été traitées pendant une nuit (16h) par l'épigallocatéchine gallate (EGCG), la (+)-Catéchine, la (+)-caté- chine/LysineHCI 1 :1 ou la (+)-catéchine/LysineHCI (1 :2) (concentrations de 100 nM, 1 μΜ, 10μΜ, 100μΜ, 500 μΜ ou 1 mM) après quoi la survie cellulaire été mesurée par un marquage au cristal violet (Figure 4) ou au MTT (Figure 5).
Comme démontré dans les Figures 4 et 5, les dérivés de catéchines sont moins cytotoxiques que l'épigallocatéchine gallate.
Exemple 5 : Activité antioxydante des composés L'épigallo-catéchine gallate, la (+)-catéchine et ses complexes associés au chlorhydrate de lysine et la D,L-lysine ainsi que les cellules SiHa-F3 ont été obtenus comme décrit ci-dessus.
Mesure des ROS cellulaires totaux: 20 000 cellules SiHa-F3 ont été ensemencées avant d'être traitées pendant 1 h par les composés indiqués. Les cellules ont ensuite été incubées 30 min à 37°C dans une solution de H2-DCFDA 1 μΜ (Invitrogen) dans de l'HBSS contenant 10mM d'Hepes avant mesure de l'absorbance à 535nm (Spectrophotomètre Victor X4, Perkin Elmer).
Les cellules SiHa-F3 ont été traitées pendant 2h par l'épigallocatéchine gallate (EGCG), la (+)-Catéchine, la (+)-caté- chine/LysineHCI 1 :1 ou la (+)-catéchine/LysineHCI (1 :2) (concentrations de 100 nM, 1 μΜ, 10μΜ, 100μΜ, 500 μΜ ou 1 mM), après quoi la production cellulaire de ROS a été mesurée par fluorescence au DCFDA.
Comme on peut le constater à la figure 6, tous les dérivés de catéchines et l'épigallocatéchine gallate ont une activité antioxydante similaire sur les cellules tumorales.
Exemple 6 : Les complexes de (+)-catéchine/LvsineHCI inhibent la migration des cellules tumorales
L'épigallo-catéchine gallate, la (+)-catéchine et ses complexes associés au chlorhydrate de lysine et la D,L-lysine ainsi que les cellules SiHa-F3 ont été obtenus comme décrit ci-dessus.
Mesures de la migration cellulaire: Une chambre de Boyden réutilisable à 48 puits (Neuroprobe) a été utilisée selon les instructions du fabricant. Brièvement, du milieu contenant 0,15% de sérum fœtal bovin a servi de chimio-attractant dans le compartiment inférieur, une membrane de polycarbonate percée de pores de 8μηη de diamètre séparait les deux compartiments, et 50 000 cellules SiHa-F3 en suspension et en présence des composés indiqués ont été introduites dans le compartiment supérieur. La migration des cellules a été quantifiée après une nuit (16h). Les cellules ayant migré ont été fixées pendant 3 min dans du méthanol, colorées au cristal violet 0,23% pendant 30 min, et dénombrées sur des photographies réalisées à grossissement 2,5x grâce à un microscope à phase inversée (Axiovert et caméra Mrc, Zeiss).
Les cellules SiHa-F3 ont été traitées pendant une migration effectuée en chambre de Boyden par l'épigallocatéchine gallate (EGCG), la (+)-Catéchine, la (+)-catéchine/LysineHCI 1 :1 ou la (+)-catéchine/LysineHCI (1 :2) (concentrations de 100 nM, 1 μΜ, 10μΜ, 100μΜ, 500 μΜ ou 1 mM), après quoi le nombre de cellules ayant migré vers 0,15% de sérum ont été comptées. Résultats exprimés en % du contrôle.
Comme on peut le constater à la figure 7, l'épigallocatéchine gallate et les complexes de (+)-catéchine/LysineHCI, mais pas la (+)- catéchine, inhibent la migration des cellules cancéreuses. Seuls les composés complexes de (+)-catéchine/LysineHCI inhibent la migration des cellules tumorales indépendamment d'une cytotoxicité cellulaire qui aurait affecté le comptage.
Exemple 7 : La (+)-catéchine/LvsineHC1 1 :2 inhibe la formation de métastases
Les cellules tumorales B16F10 proviennent de la collection d'ATCC. Les souris C57BL/6 mâles de 6 ou 7 semaines ont été acquises auprès des laboratoires Janvier, et les protocoles ont été appliqués avec l'accord du comité d'éthique de l'UCL et en respect des lois belges relatives aux soins animaux. Modèle de métastases expérimentales : les cellules B16F10 ont été prétraitées avec du DMSO (0,5%, véhicule de la roténone, contrôle négatif) ou la roténone (inhibiteur du complexe I de la chaîne respiratoire et inducteur de superoxyde mitochondrial tel que décrit dans Porporato PE et al., Cell Rep 2014, 8:754-766, contrôle positif), seule ou en association avec les composés indiqués durant 6 h. Les cellules ont ensuite été détachées, comptées et remises en suspension à raison de 10*106 cellules/ml dans de l'HBSS sans calcium ni magnésium. 106 cellules (soit 100 μΙ de la suspension) ont ensuite été injectées dans la veine caudale de souris C57BL/6. 14 jours après injection des cellules, les souris ont été sacrifiées, les poumons isolés et les métastases (spots positifs pour la mélanine) dénombrées sous un microscope de dissection.
La figure 8 présente des photographies représentatives (A) et un graphique (B) quantifiant la formation de métastases pulmonaires 14 jours après injection de 106 cellules de mélanome murin B16F10 dans la veine caudale de souris syngéniques. Les cellules ont préalablement été traitées avec du DMSO 0,5% (DMSO, contrôle négatif) ou avec l'inhibiteur du complexe I de la chaîne respiratoire et inducteur de superoxyde mitochondrial roténone 20 nM seule (Rot 20 nM, contrôle positif) ou en association avec la (+)-Catéchine/LysineHCI 1 :2 10μΜ (Rot 20 nM + C/L 1 :2 10μΜ). n = 7-9, One-way ANOVA avec test de Bonferroni, ** p < 0,01 .
Il est constaté que la (+)-catéchine/LysineHCI 1 :2 inhibe la formation de métastases dans un modèle expérimental d'injection intraveineuse.
La figure 9 montre des photographies représentatives (A) et le graphique (B) quantifiant la formation de métastases pulmonaires 14 jours après injection de 106 cellules de mélanome murin B16F10 dans la veine caudale de souris syngéniques. Les cellules ont préalablement été traitées avec du DMSO 0,5% (DMSO, contrôle négatif) ou avec l'inhibiteur du complexe I de la chaîne respiratoire et inducteur de superoxyde mitochondrial roténone 20 nM seule (Rot 20 nM, contrôle positif) ou en association avec la (+)-Catéchine/LysineHCI 1 :2 10μΜ (Rot 20 nM + C/L 1 :2 10 μΜ) ou avec l'épigallocatéchine-gallate/LysineHCI 1 :2 (Rot 20nM + EGCG/L 1 :2 10 μΜ). n = 7-8, One-way ANOVA avec test de Bonferroni, ns p > 0,05, ** p < 0,01 .
Il été observé que, contrairement à l'épigallocatéchine gallate/LysineHCI 1 :2, la (+)-catéchine/LysineHCI 1 :2 inhibe la formation de métastases dans un modèle expérimental d'injection intraveineuse.
Exemple 8 : La (+)-catéchine/LvsineHCI 1 :2 mais pas l'épigallocatéchine-gallate réduit la formation de métastases pulmonaires dans un modèle expérimental
La figure 10 montre des photographies représentatives (A) et le graphique (B) quantifiant la formation de métastases pulmonaires 14 jours après injection de 106 cellules de mélanome murin B16F10 dans la veine caudale de souris syngéniques. Les cellules ont préalablement été traitées avec l'inhibiteur du complexe I de la chaîne respiratoire et inducteur de superoxyde mitochondrial roténone 10 nM en association avec l'épigallocatéchine-gallate (Rot 10 nM + EGCG 10 μΜ) ou avec la
(+)-Catéchine/LysineHCI 1 :2 10μΜ (Rot 10 nM + C/L 1 :2 10 μΜ). n = 5-9, test t de Student, ns p > 0,05, * p < 0,05.
Il été observé que la (+)-catéchine/LysineHCI 1 :2 inhibe la formation de métastases plus efficacement que l'épigallocatéchine gallate 1 :2 dans un modèle expérimental d'injection intraveineuse
STATISTIQUES:
Dans l'ensemble des expériences des exemples 1 à 8, One way-ANOVA a été appliquée suivie des tests de comparaisons multiples adéquats (Dunnett pour les essais in vitro, Bonferroni pour les essais in vivo), et le test t de Student pour la comparaison des deux conditions présentées à la figure 10 Une p-valeur < 0,05 a été considérée comme étant statistiquement significative (*); ** indique p < 0,01 ; *** p < 0,005. Ns (non significatif) indique que la p-valeur était > 0,05. Les colonnes des graphiques in vitro représentent la moyenne de chaque groupe, les points des graphiques in vivo représentent chacun une souris et la barre horizontale la moyenne de chaque groupe. N indique le nombre de fois que l'expérience a été reproduite de façon indépendente, et n le nombre de réplicats total. Exemple 9 : effet anti-métastatique dans un modèle de métastases spontanées
Afin d'étudier le processus métastatique dans son ensemble, on utilise un modèle de métastases spontanées à partir d'une tumeur primaire (Porporato PE et al. Cell Rep 2014; 8:754-766). Par exemple, dans un modèle, 1 000 000 de cellules de mélanome murin modérément
(B16F10) ou fortement (B16M4b, décrites dans Porporato PE et al., Cell Rep 2014, 8:754-766) métastatiques, éventuellement porteuses d'un rapporteur luminescent ou fluorescent, sont injectées en sous-cutané ou en intra-dermique dans le flanc de souris syngéniques C57BL/6. L'évaluation de l'activité anti-métastatique et/ou anti-tumorale d'un composé de type catéchine est évaluée en administrant ce composé aux animaux, par exemple par voie intra-péritonéale ou intraveineuse (injection) ou par voie orale (gavage, incorporation à la nourriture ou à l'eau de boisson) et en la comparant à son véhicule, selon un schéma posologique (dose et fréquence d'administration) défini.
La croissance de la tumeur primaire est soigneusement suivie par des mesures répétées (par exemple tous les 2-3 jours) du diamètre tumoral au moyen d'un pied à coulisse et/ou d'imagerie par luminescence ou fluorescence in vivo si l'expression d'un rapporteur par les cellules tumorales le permet. Lorsque le diamètre tumoral moyen atteint préférentiellement 10 mm (typiquement entre les jours 10 et 14 pour les lignées tumorales précitées), la tumeur primaire est excisée dans l'objectif double de maintenir la souris en vie et de stimuler le développement des métastases (Porporato PE et al., Cell Rep 2014, 8:754-766 ; Gabri MR et al., Clin Cancer Res 2006; 12:7092-7098). L'intervalle de temps entre les chirurgies sur la première et la dernière souris à développer une tumeur primaire de taille requise est aussi réduit que possible (typiquement 5 jours pour les lignées tumorales précitées). L'excision d'une éventuelle repousse de la tumeur primaire est effectuée aussi souvent que nécessaire, lorsque cette repousse atteint la taille d'environ 10 mm de diamètre. Afin d'évaluer la dissémination métastatique, les souris sont sacrifiées dans les différents groupes lorsqu'un des événements suivants survient: 1 °) un premier animal présente un état de souffrance dépassant les limites éthiques, 2°) un premier animal meurt sans symptômes préalables et présente des lésions métastatiques nombreuses et/ou volumineuses, 3°) le suivi de la luminescence ou de la fluorescence in vivo indique une dissémination métastatique importante, si les cellules expriment un rapporteur adéquat, 4°) une période de typiquement 30 à 40 jour post-injection pour les B16M4b, ou de typiquement 60 à 90 jours pour les B16F10. Dans ces modèles de mélanome, les métastases apparaissent essentiellement dans les poumons et les ganglions lymphatiques (inguinaux, axillaires, médiastinaux) et moins fréquemment dans le foie, sur le péritoine, et éventuellement le cerveau. Pour la quantification du nombre de métastases pulmonaires, une insufflation des poumons par injection intra-trachéale d'une solution saline est effectuée. Les métastases pulmonaires (spots positifs pour le pigment noir mélanine) sont dénombrées à l'aide d'un microscope de dissectionl . Alternativement, l'imagerie par luminescence ou par fluorescence ex vivo des organes prélevés et/ou une analyse histologique sont réalisées. Dans le cas d'une variabilité importante dans la taille de la tumeur primaire, les résultats sont normalisés pour chaque animal par l'aire sous la courbe de croissance de la tumeur primaire jusqu'à résection de celle-ci.
II est observé que les dérivés de type catéchines selon l'invention ont un effet anti-métastatique.

Claims

REVENDICATIONS
1 . Composition comprenant au moins un composé de type flavanol pour une utilisation dans le traitement préventif et/ou curatif de métastases de cancer, caractérisée en ce que ledit au moins un composé de type flavanol est présent sous la forme d'un complexe formé par établissement de liaisons de coordination avec au moins un acide aminé basique ou au moins un dérivé d'un acide aminé basique.
2. Composition pour l'utilisation selon la revendication 1 , caractérisée en ce que ledit complexe présente un ratio d'équivalence molaire entre ledit composé de type flavanol et ledit au moins un acide aminé basique ou ledit au moins un dérivé d'un acide aminé basique entre 1 :2 et 1 :4.
3. Composition pour l'utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit composé de type flavanol est choisi dans le groupe constitué de la (+)-catéchine, de la (-)-catéchine, de la (+)-épi- catéchine, de la (-)-épicatéchine, du (+)-épicatéchine gallate, du (-)-épi- catéchine gallate, de la (+)-gallocatéchine, de la (-)-gallocatéchine, du (+)-gallocatéchine gallate, du (-)-gallocatéchine gallate et leurs mélanges.
4. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit composé de type flavanol est la catéchine ou un dérivé de la catéchine.
5. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit au moins un acide aminé basique est la lysine.
6. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle peut comprendre en outre au moins un acide.
7. Composition pour l'utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que ledit acide est choisi dans le groupe constitué de l'acide ascorbique, de l'acide acétique, de l'acide citrique, de l'acide chlorhydrique, et de leurs mélanges.
8. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que, en solution 0,01 molaire à 25°C, elle présente un pH égal ou supérieur à 3, de préférence compris entre 4 et 1 1 , de manière avantageuse compris entre 4,5 et 7,5.
9. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce qu'elle se présente sous forme solide, de préférence sous forme solide hydrosoluble comme de la poudre ou un comprimé ou encore un ovule ou un suppositoire.
10. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle est administrée par voie orale.
1 1 . Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles.
12. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le traitement est en combinaison avec un traitement anticancereux.
13. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que le cancer est un cancer du foie, de la prostate, du sein, de l'utérus, des testicules, de la vessie, des reins, des poumons, des bronches, des os, de la bouche, de l'œsophage, de l'estomac, du pancréas, du colon-rectum ou encore du cerveau.
14. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que le cancer est un cancer hépatocellulaire.
15. Composition pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que le cancer est une leucémie, un myélome, un lymphome ou un mélanome.
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