WO2015194165A1 - 血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬 - Google Patents

血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬 Download PDF

Info

Publication number
WO2015194165A1
WO2015194165A1 PCT/JP2015/003003 JP2015003003W WO2015194165A1 WO 2015194165 A1 WO2015194165 A1 WO 2015194165A1 JP 2015003003 W JP2015003003 W JP 2015003003W WO 2015194165 A1 WO2015194165 A1 WO 2015194165A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
blood coagulation
particles
reagent
acid
blood
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2015/003003
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
浩平 白石
こずえ 岡野
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
NOF Corp
Kindai University
Yamaguchi University NUC
Original Assignee
NOF Corp
Kindai University
Yamaguchi University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by NOF Corp, Kindai University, Yamaguchi University NUC filed Critical NOF Corp
Priority to JP2016529048A priority Critical patent/JP6692023B2/ja
Publication of WO2015194165A1 publication Critical patent/WO2015194165A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors

Definitions

  • the present disclosure relates to a blood coagulation promoter and a blood coagulation function test drug using the same.
  • Blood coagulation is a complex mechanism involving various factors, and whether these mechanisms are functioning normally is determined by screening tests prior to surgery and screening tests for abnormal blood coagulation such as hemophilia. Etc. are important.
  • Activating partial thromboplastin time is a test of the intrinsic coagulation system with improved sensitivity and accuracy.
  • blood coagulation reaction is promoted by adding a phospholipid called partial thromboplastin fraction together with calcium and an active agent composed of ellagic acid and the like.
  • the examination of the exogenous coagulation system includes prothrombin time (PT) using a protein called tissue thromboplastin and calcium.
  • composition of the test agent for the purpose of improving the accuracy or sensitivity of the test relating to blood coagulation (see, for example, Patent Document 1).
  • test drugs basically use components derived from living bodies as drugs that promote blood coagulation, which is the main component. For this reason, the dispersion
  • An object of the present disclosure is to realize a blood coagulation promoter exhibiting a stable blood coagulation action and a blood coagulation function test drug using the same.
  • the first aspect of the blood coagulation promoter of the present disclosure includes particles having carboxyl groups oriented on the surface.
  • the surface density of carboxyl groups in the particles 0.5 [mu] mol / m 2 or more, can be 50 [mu] mol / m 2 or less.
  • the particles can be a resin.
  • the resin may include a monomer unit derived from a monomer having a carboxyl group.
  • the monomer having a carboxyl group can be at least one of itaconic acid, acrylic acid and methacrylic acid.
  • the resin can be a polymer containing 10 mol% or more of monomer units derived from a monomer having a carboxyl group.
  • the particles may be cellulose having a carboxyl group.
  • the particles may have an amino group on the surface.
  • the second aspect of the blood coagulation promoter contains sponge-like titanium oxide particles.
  • the particles of sponge-like titanium oxide, surface area 50 m 2 / g or more may be 1000 m 2 / g or less.
  • the particles may have an average particle diameter of 10 nm or more and 10 ⁇ m or less.
  • the blood coagulation function test drug contains at least one of the blood coagulation promoters of the first aspect and the second aspect of the present disclosure.
  • a stable blood coagulation action can be realized, and a stable blood coagulation function test drug can be realized.
  • FIG. 1 (a) and 1 (b) are diagrams for explaining the promotion of blood coagulation by a surface in which carboxyl groups are oriented
  • FIG. 1 (a) is a diagram showing a surface in which carboxyl groups are oriented
  • 1 (b) is a view showing a surface in which carboxyl groups are not oriented.
  • FIG. 2 is an electron micrograph of plasma coagulated with particles having carboxyl groups oriented on the surface.
  • FIG. 3 is an electron micrograph of plasma coagulated with particles having carboxyl groups oriented on the surface.
  • FIG. 4 is an electron micrograph of plasma coagulated with sponge-like titanium oxide particles.
  • FIG. 5 is an electron micrograph of plasma coagulated with particles having PMPC fixed on the surface.
  • FIG. 6 is an electron micrograph of plasma coagulated by the addition of calcium.
  • the blood coagulation promoter of the present disclosure includes particles having carboxyl groups oriented on the surface.
  • a blood coagulation promoter is a drug that promotes the coagulation reaction more than calcium alone by adding it together with calcium to whole blood or plasma containing an anticoagulant having a decalcification action.
  • the particle having a carboxyl group oriented on the surface is a particle in which the carboxyl group is oriented outward and the carboxyl group is exposed on the particle surface.
  • Surface density of carboxyl groups is not particularly limited, 0.5 [mu] mol / m 2 or more, preferably 1.0 [mu] mol / m 2 or more, more preferably 5.0 ⁇ mol / m 2 or more, 50 [mu] mol / m 2 or less, preferably 25 ⁇ mol / M 2 or less, more preferably 10 ⁇ mol / m 2 or less.
  • the amount of the carboxyl group can be determined by an electric conductivity titration method.
  • the surface density of the carboxyl group can be obtained by dividing the amount of the carboxyl group by the value of the specific surface area measured by the BET (Brunauer, Emmet and Teller) method or the like.
  • the average particle diameter of the particles is not particularly limited, but may be 0.01 ⁇ m or more, preferably 0.05 ⁇ m or more, more preferably 0.1 ⁇ m or more, 10 ⁇ m or less, preferably 5 ⁇ m or less, more preferably 1 ⁇ m or less. .
  • the average particle diameter can be measured by a laser diffraction particle size distribution measuring device or the like.
  • the particles may be spherical, flaky, scaly, or nanofibers. Further, it may be solid, hollow, or a porous shape having pores. The surface of the particles may be smooth or uneven.
  • the particles may be any particles as long as they can stably obtain the same characteristics.
  • industrially produced particles can be used. It may be derived from plants, animals or microorganisms as long as the same properties can be obtained stably.
  • the particles may be an organic substance such as a resin or an inorganic substance such as silica.
  • the particles may be solid or may be a material having a certain degree of fluidity such as hydrogel or liposome.
  • Examples of industrially produced particles include synthetic polymers.
  • the synthetic polymer can be, for example, a polymer including a monomer unit having a carboxyl group.
  • a polymer including monomer units derived from monomers such as acrylic acid, methacrylic acid, or itaconic acid may be used.
  • the polymer may be a homopolymer composed of a monomer having a carboxyl group, or may be a binary or higher copolymer.
  • the polymer may be cross-linked or non-cross-linked as long as it can be made into particles having a predetermined particle size.
  • the polymer may contain any other monomer unit as long as it contains a monomer unit having a carboxyl group.
  • the monomer unit derived from styrene may be included. It may contain a monomer unit derived from a hydrophobic monomer such as acrylic acid or methacrylic acid ester such as methyl acrylate or methyl methacrylate.
  • a hydrophobic monomer such as acrylic acid or methacrylic acid ester such as methyl acrylate or methyl methacrylate.
  • Contains monomer units derived from hydrophilic monomers such as N-vinylpyrrolidone, 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC), 2-dimethylaminoethyl methacrylate, 2-hydroxyethyl methacrylate, allylamine, or polyethylene glycol macromonomer You may go out.
  • the monomer unit which has a sulfonic acid group or a phosphoric acid group etc. may be included.
  • a monomer unit having a functional group having a positive charge such as an amino group may be included instead of the functional group having a negative charge.
  • the content of the monomer unit having a carboxyl group in the polymer is not particularly limited, but can be 10 mol% or more, preferably 20 mol% or more, more preferably 50 mol% or more. Since the aggregation promoting effect is considered to be higher as the surface density of the carboxyl group is higher, a polymer in which all the monomer units are monomer units having a carboxyl group may be used. Further, the content of the monomer unit having a carboxyl group in the polymer may be 95 mol% or less, 90% or less, or 80% or less. By adjusting the content of the monomer unit having a carboxyl group, the density of the carboxyl group on the surface of the particle can be easily adjusted.
  • a carboxyl group may be introduced into the particle after forming the particle.
  • the amino group is reacted with a dicarboxylic acid such as oxalic acid or a tricarboxylic acid such as citric acid to thereby form particles having carboxyl groups oriented on the surface. It may be formed. In this case, amino groups may remain on the surface of the particles.
  • maleic anhydride can be hydrolyzed to introduce a carboxyl group.
  • Natural polymers or modified ones may be used instead of synthetic polymers.
  • cellulose introduced with a carboxyl group can be used.
  • the cellulose for example, cellulose nanofibers crushed so as to have a length of several ⁇ m to several tens of ⁇ m can be used.
  • Cellulose can be crushed using physical methods, chemical methods, or both.
  • Introduction of a carboxyl group into cellulose can be performed, for example, by oxidizing a hydroxyl group. Of these, oxidation using 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl radical (TEMPO) is preferable.
  • the introduction of the carboxyl group may be performed after pulverization of cellulose or before pulverization. Moreover, you may perform crushing and introduction
  • the concentration in the blood of particles having carboxyl groups oriented on the surface is not particularly limited, but is 0.5 ⁇ g / mL or more, preferably 5 ⁇ g / mL or more, more preferably 50 ⁇ g / mL or more, It can be 1000 ⁇ g / mL or less, preferably 500 ⁇ g / mL or less, more preferably 250 ⁇ g / mL or less.
  • the concentration of calcium in the blood is 0.5 mmol / L or more, preferably 1 mmol / L or more, more preferably 5 mmol / L or more, 100 mmol / L or less, preferably 50 mmol / L or less, more preferably 25 mol. / L or less may be added.
  • Calcium can be added to blood as an inorganic or organic salt.
  • Blood can be coagulated, whether it is whole blood or plasma. Blood can be coagulated even if it contains an anticoagulant having a decalcifying action such as citrate or ethylenediaminetetraacetic acid.
  • an anticoagulant having a decalcifying action such as citrate or ethylenediaminetetraacetic acid.
  • the blood coagulation promoter containing particles having carboxyl groups oriented on the surface can be used as a blood coagulation function test agent used for hemostasis function test and the like. Similar to the prothrombin time (PT) reagent or the activated partial thromboplastin time (APTT) reagent, the function of the coagulation system can be examined by measuring the coagulation time.
  • PT prothrombin time
  • APTT activated partial thromboplastin time
  • the first reagent containing the blood coagulation promoter and the sample are mixed, then the second reagent containing calcium is mixed, and the coagulation time until fibrin is precipitated is measured. do it.
  • the time until fibrin precipitates can be measured visually or by a change in absorbance.
  • the first reagent can be a suspension containing particles in which carboxyl groups are oriented.
  • grains in which the carboxyl group in the 1st reagent was orientated should just be a density
  • the concentration of the particles in which the carboxyl group is oriented in the first reagent is 1.5 ⁇ g / mL or more, preferably 10 ⁇ g / mL or more, more preferably 50 ⁇ g / mL or more, particularly preferably 150 ⁇ g / mL or more, 3000 ⁇ g / mL.
  • the second reagent is, for example, calcium 1.5 mmol / L or more, preferably 3 mmol / mL or more, more preferably 15 mmol / L or more, 300 mmol / L or less, preferably 150 mmol / mL or less, more preferably 75 mmol / L or less. It can be set as the solution containing.
  • a first reagent containing calcium may be prepared.
  • the coagulation time may be measured by mixing the first reagent and the specimen.
  • the particles having a carboxyl group oriented on the surface have a coagulation promoting function similar to that of tissue thromboplastin in PT reagent or partial thromboplastin fraction and activator in APTT reagent.
  • the first reagent does not contain tissue thromboplastin or partial thromboplastin fractions but promotes blood coagulation.
  • Platelets activated by bleeding or the like and exposed to phosphatidylserine promote blood coagulation.
  • the particles having carboxyl groups oriented on the surface may promote the blood coagulation reaction by a mechanism similar to that of activated platelets exposed to phosphatidylserine.
  • phosphatidylserine On the surface of the activated platelet cell membrane, phosphatidylserine is considered to be oriented and exposed outward.
  • a weakly acidic substance or a complex thereof may be added to the blood coagulation function test drug.
  • one or more of the following drugs can be added.
  • Sugar derivatives such as glucuronic acid, uronic acid, mannuronic acid, aldonic acid, aldaric acid, hyaluronic acid, or carboxylic acid-containing sugar chains.
  • a dicarboxylic acid such as oxalic acid or malonic acid, an acidic protein, or an acidic peptide, a monoanion, or a polyanion.
  • Nucleic acids such as deoxyribonucleic acid or ribonucleic acid, peptide nucleic acids, fumaric acid, maleic acid, phthalic acid, isophthalic acid, terephthalic acid, pyromellitic acid, citric acid, malic acid, or polybasic acids such as ethylenediaminetetraacetic acid.
  • Phospholipids such as phosphatidylinositol or phosphatidylserine.
  • Acidic amino acids such as aspartic acid or glutamic acid.
  • Blood coagulation factors such as tissue factor or thrombin.
  • These agents may be added in a state of being bound to a carrier.
  • a carrier for example, one or more of the following can be used.
  • Metal particles such as gold or silver, inorganic particles such as kaolin, monolithic silica or colloidal silica, carbon particles such as carbon black, fullerene and fullerene nanotubes, inclusion compounds such as cyclodextrin or calixarene, pullulan, mannan, dextran or Polysaccharides such as amylopectin, liposomes, vesicles, calcium phosphate, hydroxyapatite, magnetic particles, multifunctional envelope-type nanostructures, polymer micelles, polyion complexes, polycyclic aromatic compounds, viruses, cells, microorganisms, brain sulfide, Or fibrin etc.
  • drugs or drugs supported on a carrier can be added to the first reagent and mixed with the specimen together with the first reagent. Moreover, you may mix with a test substance separately from a 1st reagent. Further, it may be added to the second reagent.
  • the first reagent and the second reagent may further contain a component contained in a general test agent such as a preservative.
  • Spongy titanium oxide particles can be used as a blood coagulation promoter instead of particles having carboxyl groups oriented on the surface.
  • Sponge-like titanium oxide particles are titanium oxide particles having a three-dimensional network structure.
  • Sponge-like titanium oxide particles have a large number of Lewis acid sites on the surface. This Lewis acid site is considered to act in the same manner as the carboxyl group.
  • the titanium oxide may be a rutile type or an anatase type.
  • Sponge-like titanium oxide particles are not particularly limited, but the surface area is 50 m 2 / g or more, preferably 100 m 2 / g or more, more preferably 200 m 2 / g or more, 1000 m 2 / g or less, preferably 800 m 2 / g. More preferably 500 m 2 / g or less.
  • the average particle diameter of the sponge-like titanium oxide particles is not particularly limited, but is 0.01 ⁇ m or more, preferably 0.05 ⁇ m or more, more preferably 0.1 ⁇ m or more, 100 ⁇ m or less, similarly to the particles having a carboxyl group on the surface. Preferably it is 50 micrometers or less, More preferably, it can be 10 micrometers or less.
  • the sponge-like titanium oxide particles are not particularly limited, and those formed by entanglement of fibrous titanium oxide so as to form pores of about several nm to 100 nm can be used. Moreover, what was formed by the hydrothermal synthesis method etc. can be used.
  • the concentration of the sponge-like titanium oxide particles in the final blood is 0.2 ⁇ g / mL or more, Preferably, it can be 1 ⁇ g / mL or more, more preferably 2 ⁇ g / mL or more, 400 ⁇ g / mL or less, preferably 100 ⁇ g / mL or less, more preferably 40 ⁇ g / mL or less.
  • the concentration of calcium in the blood is 0.5 mmol / L or more, preferably 1 mmol / L or more, more preferably 5 mmol / L or more, 100 mmol / L or less, preferably 50 mmol / L or less, more preferably 25 mol / L or less. can do.
  • the concentration of the sponge-like titanium oxide particles contained in the first reagent is 0.6 ⁇ g / mL or more, preferably 3 ⁇ g / mL or more, more preferably 6 ⁇ g / mL or more, 1200 ⁇ g / mL or less, preferably 300 ⁇ g / mL.
  • it can be more preferably 120 ⁇ g / mL or less.
  • it can be made to be the same as that of the particle
  • a sodium hydroxide aqueous solution was used as a titrant for titration of carboxyl groups and sulfonic acid groups. Dilute hydrochloric acid was used for the titration of amino groups.
  • the electrical conductivity was titrated under a nitrogen stream using a commercially available electrical conductivity meter (manufactured by Toa Decay Co., Ltd .: CM-60S).
  • the surface area of the particle was calculated from the formula of the surface area of the sphere using the catalog value of the particle diameter. It was confirmed that the catalog value of the particle diameter almost coincided with the value measured by a laser diffraction light scattering photometer (manufactured by Shimadzu Corporation: SALD-2300).
  • the reaction time (corresponding to the calcium re-coagulation time) when physiological saline was added instead of the reagent was defined as the blank time, and the value obtained by dividing the reaction time by the blank time was defined as the reaction rate index.
  • a smaller reaction rate index indicates that the coagulation reaction is promoted by the reagent.
  • the value obtained by dividing the final absorbance when the reagent was added by the final absorbance when physiological saline was added was defined as the absorbance change rate. The larger the absorbance change rate, the more the fibrin network grows. For all measurements, duplicate measurements were taken.
  • sample> The specimen was normal human plasma collected from a healthy person. Blood was collected using a vacuum blood collection tube (Becton Dickinson) containing a sodium citrate buffer and a 21 gauge blood collection needle. After blood collection, it was centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes to separate plasma and blood cells.
  • a vacuum blood collection tube Becton Dickinson
  • Reagent 1 A 2.5 w / v% suspension of resin particles (Poly Science: 15913-10) having an average particle diameter of 0.05 ⁇ m made of a copolymer of polystyrene, acrylic acid and methacrylic acid was used. The particle concentration was 3.6 ⁇ 10 14 particles / mL. The surface density of the carboxyl group was 2.3 ⁇ 10 ⁇ mol / m 2 .
  • Reagent 2 The same procedure as in Reagent 1 was repeated except that resin particles having an average particle diameter of 0.1 ⁇ m made of a copolymer of polystyrene, acrylic acid and methacrylic acid (Poly Science: 16688-15) were used. Particle concentration was 4.6 ⁇ 10 13 cells / mL.
  • Reagent 3 The procedure was the same as that of Reagent 1 except that the resin particles were made of a copolymer of polystyrene, acrylic acid and methacrylic acid and had an average particle size of 0.5 ⁇ m (manufactured by Poly Science: 09836-15). The particle concentration was 3.6 ⁇ 10 11 particles / mL. The surface density of the carboxyl group was 1.5 ⁇ 10 ⁇ mol / m 2 .
  • Reagent 4 The procedure was the same as that of Reagent 1 except that resin particles made of a copolymer of polystyrene, acrylic acid and methacrylic acid and having an average particle diameter of 1.0 ⁇ m (manufactured by Poly Science: 08226-15) were used. The particle concentration was 4.6 ⁇ 10 10 particles / mL. The surface density of the carboxyl group was 8.0 ⁇ 10 ⁇ mol / m 2 .
  • mercerized cellulose is dispersed in 100 mL of water, 25 mg of TEMPO catalyst, 0.25 g of sodium bromide (NaBr) and 9.27% sodium hypochlorite (NaClO) aqueous solution as an oxidizing agent 10 mL And oxidation treatment was performed at room temperature and pH 10 for 2 hours. Thereafter, the reaction was stopped by adding a small amount of ethanol, and centrifuged at 10,000 g for 10 minutes to remove impurities, and then methanol was further added to the supernatant to precipitate COOH-CNF. The resulting precipitate was further centrifuged to recover COOH-CNF. The recovered COOH-CNF was dried at 80 ° C.
  • the average particle diameter of COOH-CNF in water was 5.4 ⁇ m.
  • the length of COOH-CNF was 2 ⁇ m to 5 ⁇ m and the width was 100 nm to 200 nm.
  • the length and width of COOH-CNF were the average of the lengths of 10 COOH-CNFs in the field of view observed with an electron microscope (manufactured by JEOL Ltd .: Jsm-6510, magnification 10,000).
  • the average particle diameter was measured with a laser diffraction light scattering photometer (manufactured by Shimadzu Corporation: SALD-2300).
  • the surface density of the carboxyl group was 1.2 ⁇ mol / m 2 .
  • Reagent 6 An aqueous suspension of sponge-like titanium oxide having an average particle size of 0.1 ⁇ m (manufactured by Erscreen Tohoku Co., Ltd .: PW116-3) was used.
  • the specific surface area of the sponge-like titanium oxide was 400 m 2 / g.
  • the particle concentration was 0.1 w / v%.
  • Reagent 7 Sponge-like titanium oxide used for reagent 6 was the same as reagent 5 except that it was heat-treated at 500 ° C. for 2 hours.
  • Reagent 8 The same procedure as in Reagent 1 except that resin particles having an amino group on the surface and an average particle size of 0.1 ⁇ m (Poly Science: 16586-5) was used. The particle concentration was 4.6 ⁇ 10 13 particles / mL. The surface density of the amino group was 14 ⁇ 10 ⁇ mol / m 2 .
  • Reagent 9 Reagent 1 was used except that resin particles having a sulfonic acid group on the surface and an average particle size of 0.5 ⁇ m (Poly Science Co., Ltd .: 19403-15) were used.
  • the surface density of the sulfonic acid group was 0.64 ⁇ 10 ⁇ mol / m 2 .
  • Reagent 10 The procedure was the same as that of Reagent 1 except that resin particles having a sulfonic acid group on the surface and having an average particle diameter of 1.0 ⁇ m (Poly Science, 19404-15) were used.
  • Reagent 11 The procedure was the same as that of Reagent 1 except that the resin particles were fixed with poly (2-methacryloyloxyethylphoshoryl choline) (PMPC).
  • the resin particles were resin particles having an amino group bonded through a linker having 3 carbon atoms and having an average particle size of 0.1 ⁇ m (manufactured by Poly Science: 16586-5).
  • the fixation of PMPC was performed via a succinimidyl group.
  • Reagent 12 It replaced with PMPC and was carried out similarly to the reagent 10 except having set it as the resin particle which fixed the block copolymer of MPC and acrylic acid shown in Formula 1. However, in Formula 1, m is 90 and n is 10 as preparation ratio.
  • Reagent 13 instead of PMPC, the same procedure as in Reagent 10 was performed except that resin particles fixed with block copolymers of MPC, acrylic acid and dimethylsiloxane shown in Formula 2 were used. However, in Formula 2, as the preparation ratio, (m + n) is 50, l is 50, m is 90, and n is 10.
  • Reagent 14 An aqueous suspension of cellulose nanofiber (Sugino Machine Co., Ltd .: BiNFi-s) was used. The particle concentration was 0.1 w / v%.
  • Reagent 15 A commercially available PT reagent (Sysmex Corporation: Thrombocheck PT) was used after dissolving in purified water according to the dosage.
  • Reagent 16 A commercially available APTT reagent (manufactured by SIEMENS: ACTIN) was used.
  • Table 1 shows the reaction rate index for each reagent.
  • the reaction rate indices at 100-fold dilution (250 ⁇ g / mL) for reagents 1 to 4 consisting of particles having carboxyl groups oriented on the surface were 0.59, 0.56, 0.49 and 0.60, respectively.
  • the reaction rate index at 100-fold dilution of the reagent 14 which is a commercially available PT reagent and the reagent 15 which is an APTT reagent was 0.55 and 0.49, respectively.
  • the reaction rate index of Reagents 1 to 4 is comparable to that of commercially available PT reagents and APTT reagents.
  • Reagents 1 to 4 promote the coagulation of plasma in the same manner as commercially available PT reagents and APTT reagents, and have the same blood coagulation promoting function as these reagents.
  • the reaction rate index was smaller than 1, and blood coagulation was promoted.
  • Reagent 5 consisting of COOH-CNF showed a reaction rate index of 0.88 at 10-fold dilution (100 ⁇ g / mL) and 0.74 at 100-fold dilution (10 ⁇ g / mL).
  • COOH-CNF also has a blood coagulation promoting function.
  • the reagent 6 composed of sponge-like titanium oxide showed a reaction rate index of 0.71 at 10-fold dilution (100 ⁇ g / mL) and 0.80 at 100-fold dilution (10 ⁇ g / mL).
  • the reaction rate index of the reagent 7 made of heat-treated sponge-like titanium oxide was 0.70 at 10-fold dilution and 0.81 at 100-fold dilution, indicating almost the same reaction rate index as that without heat treatment. It was.
  • the blood coagulation promoting function was recognized also about sponge-like titanium oxide particle.
  • Reagents 6 and 7 had a reaction rate index smaller than 1 even at 1000-fold dilution (1 ⁇ g / mL), and promoted blood coagulation.
  • the reaction rate index was 0.94 at a 100-fold dilution of Reagent 8 consisting of particles having amino groups on the surface, and a slight promotion of blood coagulation was observed.
  • the reaction rate index was larger than 1, and the blood coagulation accelerating function was not observed when the surface did not contain particles having carboxyl groups oriented or sponge-like titanium oxide particles.
  • Table 2 shows the absorbance change rate for each reagent.
  • Reagent 1 to Reagent 8 having a reaction rate index of less than 1 Reagent 1 consisting of particles having an average particle diameter of 0.05 ⁇ m had an absorbance change rate of 1 or less at 100-fold dilution.
  • Reagent 3 composed of particles having an average particle diameter of 0.5 ⁇ m and Reagent 4 composed of particles having an average particle diameter of 1.0 ⁇ m also had a slightly smaller absorbance change rate at 100-fold dilution than other reagents.
  • Reagent 9 composed of particles having an average particle diameter of 0.5 ⁇ m and Reagent 10 composed of particles having an average particle diameter of 1.0 ⁇ m are other reagents.
  • the rate of change in absorbance at 100-fold dilution was slightly smaller than that of.
  • FIGS. 2 to 6 show SEM photographs of the fibrin network obtained when the reagents 1, 3, 6, and 11 were diluted 100 times and in the blank, respectively.
  • fibrin fibers are finer than other reagents and blanks.
  • reagent 1 also has a sufficient blood coagulation promoting function and is useful as a blood coagulation promoter.
  • the blood coagulation promoter of the present disclosure exhibits a stable blood coagulation function and is useful as a blood coagulation function test agent or the like.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

　血液凝固促進剤及び血液凝固機能検査薬は、表面にカルボキシル基が配向された粒子、又はスポンジ状酸化チタン粒子を含む。

Description

血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬
　本開示は、血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬に関する。
　血液中のフィブリノーゲンがフィブリンとなり、フィブリンネットワークが生成されることにより血液は凝固する。血液の凝固は種々の因子が関係する複雑な機構であり、これらの機構が正常に機能しているかどうかの検査は、手術前のスクリーニング検査や、血友病等の血液凝固異常症のスクリーニング検査等として重要である。
　血液凝固の検査として、クエン酸ナトリウム等の抗凝固剤を添加して採取した血液に、血液凝固の第IV因子であるカルシウムを加え、フィブリンが析出するまでの時間を測定する、カルシウム再加時間がある。カルシウム再加時間は、内因性凝固系の検査として容易であるが、感度及び精度が低い等の問題がある。
　感度及び精度を向上させた内因性凝固系の検査として、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）がある。ＡＰＴＴにおいては、カルシウムと共に部分トロンボプラスチン分画と呼ばれるリン脂質と、エラジン酸等からなる活性剤とを加えることにより、血液凝固反応を促進している。外因性凝固系の検査としては、組織トロンボプラスチンと呼ばれる蛋白質と、カルシウムとを用いるプロトロンビン時間（ＰＴ）がある。
　血液凝固に関する検査の精度向上又は感度向上を目的として検査薬の組成等について種々の改良が行われている（例えば、特許文献１を参照。）。
特開２００９－０５８３９３号公報
　しかしながら、これらの検査薬は基本的に主要成分である血液の凝固を促進する薬剤として生体由来の成分を用いている。このため、検査薬ごとの測定値のばらつき及びロットごとの測定値のばらつきが問題となっている。
　これらの問題を解決するために、国際感度指数を用いた標準化も行われているが、国際感度指数を求めるためには大きな労力が必要である。また、不安定な成分が多く、経時的な変化も生じやすいため、使用現場において毎回校正が必要となる。
　本開示の課題は、安定した血液凝固作用を示す血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬を実現できるようにすることである。
　本開示の血液凝固促進剤の第１の態様は、表面にカルボキシル基が配向された粒子を含んでいる。
　血液凝固促進剤の第１の態様において、粒子におけるカルボキシル基の表面密度は、０．５μｍｏｌ／ｍ2以上、５０μｍｏｌ／ｍ2以下とすることができる。
　血液凝固促進剤の第１の態様において、粒子は樹脂とすることができる。
　血液凝固促進剤の第１の態様において、樹脂は、カルボキシル基を有するモノマーに由来するモノマー単位を含んでいる構成とすることができる。
　血液凝固促進剤の第１の態様において、カルボキシル基を有するモノマーは、イタコン酸、アクリル酸及びメタアクリル酸の少なくとも一つとすることができる。
　血液凝固促進剤の第１の態様において、樹脂は、カルボキシル基を有するモノマーに由来するモノマー単位を１０ｍｏｌ％以上含む重合体とすることができる。
　血液凝固促進剤の第１の態様において、粒子は、カルボキシル基を有するセルロースであってもよい。
　血液凝固促進剤の第１の態様において、粒子は、表面にアミノ基を有していてもよい。
　血液凝固促進剤の第２の態様は、スポンジ状酸化チタンの粒子を含んでいる。
　血液凝固促進剤の第２の態様において、スポンジ状酸化チタンの粒子は、表面積が５０ｍ2／ｇ以上、１０００ｍ2／ｇ以下とすることができる。
　血液凝固促進剤の第１の態様及び第２の態様において、粒子は、平均粒径が１０ｎｍ以上、１０μｍ以下とすることができる。
　血液凝固機能検査薬は、本開示の第１の態様及び第２の態様の血液凝固促進剤の少なくとも一方を含んでいる。
　本開示の血液凝固促進剤によれば、安定した血液凝固作用を実現することができ、安定した血液凝固機能検査薬を実現できる。
図１（ａ）及び図１（ｂ）は、カルボキシル基が配向した表面による血液凝固の促進を説明する図であり、図１（ａ）はカルボキシル基が配向した表面を示す図であり、図１（ｂ）はカルボキシル基が配向していない表面を示す図である。 図２は表面にカルボキシル基が配向された粒子を用いて凝固させた血漿の電子顕微鏡写真である。 図３は表面にカルボキシル基が配向された粒子を用いて凝固させた血漿の電子顕微鏡写真である。 図４はスポンジ状酸化チタン粒子を用いて凝固させた血漿の電子顕微鏡写真である。 図５は表面にＰＭＰＣを固定した粒子を用いて凝固させた血漿の電子顕微鏡写真である。 図６はカルシウム添加により凝固させた血漿の電子顕微鏡写真である。
　本開示の血液凝固促進剤は、表面にカルボキシル基が配向された粒子を含む。血液凝固促進剤とは、脱カルシウム作用のある抗凝固剤を含む全血又は血漿に、カルシウムと共に加えることにより、カルシウム単独の場合よりも凝固反応を促進する薬剤である。表面にカルボキシル基が配向された粒子とは、外側に向けてカルボキシル基が配向し、粒子表面にカルボキシル基が露出している粒子である。
　カルボキシル基の表面密度は、特に限定されないが、０．５μｍｏｌ／ｍ2以上、好ましくは１．０μｍｏｌ／ｍ2以上、より好ましくは５．０μｍｏｌ／ｍ2以上、５０μｍｏｌ／ｍ2以下、好ましくは２５μｍｏｌ／ｍ2以下、より好ましくは１０μｍｏｌ／ｍ2以下とすることができる。カルボキシル基の量は、電気伝導度滴定法により求めることができる。カルボキシル基の量をＢＥＴ（Brunauer, Emmet and Teller）法等により測定した比表面積の値で割ることによりカルボキシル基の表面密度を求めることができる。
　粒子の平均粒径は、特に限定されないが、０．０１μｍ以上、好ましくは０．０５μｍ以上、より好ましくは０．１μｍ以上、１０μｍ以下、好ましくは５μｍ以下、より好ましくは１μｍ以下とすることができる。平均粒径は、レーザ回折式粒度分布測定装置等により測定することができる。
　粒子は、球形であっても、フレーク状、鱗片状又はナノファイバ等であってもよい。また、中実であっても、中空であってもよく、細孔を有するポーラスな形状であってもよい。粒子の表面は平滑であっても、凹凸があってもよい。
　粒子は、安定して同一の特性のものが得られればどのようなものであってもよい。例えば、工業的に製造した粒子を用いることができる。安定して同一の特性のものが得られるのであれば、植物、動物又は微生物由来であってもよい。粒子は、樹脂等の有機物であっても、シリカ等の無機物であってもよい。また、粒子は固体であっても、ハイドロゲル又はリポソーム等のある程度の流動性を持った材料であってもよい。工業的に製造した粒子としては例えば合成高分子等が挙げられる。合成高分子は、例えばカルボキシル基を有するモノマー単位を含む重合体とすることができる。例えば、アクリル酸、メタクリル酸又はイタコン酸等のモノマーに由来するモノマー単位を含む重合体とすればよい。重合体は、カルボキシル基を有するモノマーからなるホモポリマーとしてもよく、２元又はそれ以上の共重合体としてもよい。重合体は、所定の粒径の粒子とすることができれば、架橋されていても、架橋されていなくてもよい。
　重合体は、カルボキシル基を有するモノマー単位を含んでいれば、他にどのようなモノマー単位を含んでいてもよい。例えば、スチレンに由来するモノマー単位を含んでいてもよい。アクリル酸メチル又はメタクリル酸メチル等のアクリル酸又はメタクリル酸のエステル等の疎水性のモノマーに由来するモノマー単位を含んでいてもよい。Ｎ－ビニルピロリドン、２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）、メタクリル酸２－ジメチルアミノエチル、メタクリル酸２－ヒドロキシエチル、アリルアミン、又はポリエチレングリコールマクロモノマー等の親水性のモノマーに由来するモノマー単位を含んでいてもよい。また、スルホン酸基又はリン酸基等を有するモノマー単位を含んでいてもよい。また、負電荷を有する官能基ではなく、アミノ基等の正電荷を有する官能基を有するモノマー単位を含んでいてもよい。
　重合体におけるカルボキシル基を有するモノマー単位の含有量は、特に限定されないが１０ｍｏｌ％以上、好ましくは２０ｍｏｌ％以上、より好ましくは５０ｍｏｌ％以上とすることができる。カルボキシル基の表面密度が高いほど、凝集促進効果が高くなると考えられるため、すべてのモノマー単位がカルボキシル基を有するモノマー単位である重合体としてもよい。また、重合体におけるカルボキシル基を有するモノマー単位の含有量を９５ｍｏｌ％以下としてもよく、９０％以下としてもよく、８０％以下としてもよい。カルボキシル基を有するモノマー単位の含有量を調整することにより、粒子の表面におけるカルボキシル基の密度を容易に調整することができる。
　カルボキシル基を有するモノマーを重合して、カルボキシル基を有する重合体とするのではなく、粒子を形成した後、粒子にカルボキシル基を導入してもよい。例えば、末端がアミノ基となったポリマーからなる粒子を形成した後、アミノ基をシュウ酸等のジカルボン酸又はクエン酸等のトリカルボン酸と反応させることにより、表面にカルボキシル基が配向された粒子を形成してもよい。この場合には、粒子の表面にアミノ基が残存してもかまわない。また、無水マレイン酸とスチレン等との共重合体を形成した後、無水マレイン酸を加水分解してカルボキシル基を導入することができる。
　合成高分子に代えて天然高分子又はそれを修飾したもの用いることもできる。例えば、カルボキシル基を導入したセルロースを用いることができる。セルロースとしては、例えば長さが数μｍ～数十μｍとなるように解砕したセルロースナノファイバを用いることができる。セルロースの解砕は、物理的方法、化学的方法又はその両方を用いることができる。セルロースへのカルボキシル基の導入は、例えば水酸基を酸化することにより行うことができる。中でも2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシルラジカル（ＴＥＭＰＯ）を用いた酸化が好ましい。カルボキシル基の導入は、セルロースの解砕後に行っても、解砕前に行ってもよい。また、解砕とカルボキシル基の導入とを同時に行ってもよい。
　表面にカルボキシル基が配向された粒子は、カルシウムと共に血液に添加することにより、血液の凝固反応をカルシウム単独の場合よりも促進することができる。血液の凝固を促進させる場合、表面にカルボキシル基が配向された粒子の血液中における濃度は、特に限定されないが０．５μｇ／ｍＬ以上、好ましくは５μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは５０μｇ／ｍＬ以上、１０００μｇ／ｍＬ以下、好ましくは５００μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは２５０μｇ／ｍＬ以下とすることができる。この場合、カルシウムは、血液中における濃度が、０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは２５ｍｏｌ／Ｌ以下となるように添加すればよい。カルシウムは無機塩又は有機塩として血液に添加することができる。
　血液は、全血であっても血漿であっても凝固させることができる。血液は、クエン酸塩、又はエチレンジアミン４酢酸等の脱カルシウム作用を有する抗凝固剤を含んでいても凝固させることができる。
　表面にカルボキシル基が配向された粒子を含む血液凝固促進剤は、止血機能検査等に用いる血液凝固機能検査薬として用いることができる。プロトロンビン時間（ＰＴ）試薬、又は活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）試薬と同様に、凝固時間を測定することにより、凝固系の機能を検査することが可能となる。
　血液凝固機能検査薬として用いる場合には、血液凝固促進剤を含む第１の試薬と検体とを混合した後、カルシウムを含む第２の試薬を混合し、フィブリンが析出するまでの凝固時間を測定すればよい。フィブリンが析出するまでの時間は、目視又は吸光度変化等により測定することができる。
　第１の試薬はカルボキシル基が配向された粒子を含む懸濁液とすることができる。第１の試薬におけるカルボキシル基が配向された粒子の濃度は、最終的な血中濃度を先に示した好適な濃度とすることができる濃度であればよい。例えば、第１の試薬におけるカルボキシル基が配向された粒子の濃度は、１．５μｇ／ｍＬ以上、好ましくは１０μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは５０μｇ／ｍＬ以上、特に好ましくは１５０μｇ／ｍＬ以上、３０００μｇ／ｍＬ以下、好ましくは１５００μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは１０００μｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは７５０μｇ／ｍＬ以下とすることができる。第２の試薬は、例えばカルシウムを１．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは３ｍｍｏｌ／ｍＬ以上、より好ましくは１５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、３００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１５０ｍｍｏｌ／ｍＬ以下、より好ましくは７５ｍｍｏｌ／Ｌ以下含む溶液とすることができる。
　カルシウムを第２の試薬として加えるのではなく、カルシウムを含む第１の試薬を調製してもよい。この場合には、第１の試薬と検体とを混合して、凝固時間を測定すればよい。
　表面にカルボキシル基が配向された粒子は、ＰＴ試薬における組織トロンボプラスチン、又はＡＰＴＴ試薬における部分トロンボプラスチン分画及び活性化剤と同様の凝固促進機能を有していると考えられる。従って、第１の試薬は、組織トロンボプラスチン又は部分トロンボプラスチン分画を含んでいないが血液の凝固反応を促進する。出血等により活性化されフォスファチジルセリンが露出した血小板は、血液の凝固反応を促進する。表面にカルボキシル基が配向された粒子は、活性化されフォスファチジルセリンが露出した血小板と同様の機構で、血液の凝固反応を促進している可能性がある。活性化された血小板の細胞膜の表面において、フォスファチジルセリンは外側に向かって配向して、露出していると考えられる。
　図１（ａ）に示すように、外側に向けてカルボキシル基が配向してカルボキシル基が露出している表面においては、カルボキシル基と結合した凝固活性因子も配列され、凝固活性複合体を容易に形成することができる。これにより、血液の凝固反応が促進されると考えられる。従って、外側に向けてカルボキシル基が配向し、粒子表面にカルボキシル基が露出している粒子も、血液の凝固反応を促進できると考えられる。一方、図１（ｂ）に示すような、カルボキシル基が配向していない表面においては、カルボキシル基に凝固活性因子が結合しても、凝固活性複合体を形成しにくい。このため、外側に向けてカルボキシル基が配向していない粒子の場合には、カルボキシル基が存在していても、凝固反応の促進効果がほとんど認められないと考えられる。
　血液凝固機能検査薬には、弱酸性物質又はその複合体等を添加してもよい。例えば、以下の薬剤の１種以上を加えることができる。アルギン酸、キチン（ナノ）ファイバー、キトサン（ナノ）ファイバー、オゾン酸化処理セルロース（ナノ）ファイバー、天然ゴムラテックス、若しくはポリ（メタ）アクリル酸、又はこれらのゲル化物。グルクロン酸、ウロン酸、マンヌロン酸、アルドン酸、アルダル酸、ヒアルロン酸、又はカルボン酸含有糖鎖等の糖誘導体。シュウ酸、又はマロン酸等のジカルボン酸、酸性タンパク質、又は酸性ペプチド等、モノアニオン、又はポリアニオン等。デオキシリボ核酸若しくはリボ核酸等の核酸、ペプチド核酸、フマル酸、マレイン酸、フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、ピロメリット酸、クエン酸、リンゴ酸、又はエチレンジアミン４酢酸等の多塩基酸。フォスファチジルイノシトール、又はフォスファチヂルセリン等のリン脂質。アスパラギン酸、又はグルタミン酸等の酸性アミノ酸。ポリフェノール、ピロガロール、ピロカテコール、タンニン酸、エピカテキン、エピガロカテキン、エラジン酸、エラグ酸二水和物、アスコルビン酸、グルタチオン、α-トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール、カテキン、クエルセチン、尿酸、又はビリルビン等。末端反応性ポリエチレングリコールとポリスチレン又はポリイミンとの反応混合物。組織因子又はトロンビン等の血液凝固因子。
　これらの薬剤は担体に結合された状態で添加してもよい。担体には例えば以下の１種以上を用いることができる。金若しくは銀等の金属粒子、カオリン、モノリス型シリカ若しくはコロイダルシリカ等の無機粒子、カーボンブラック、フラーレン、フラーレンナノチューブ等のカーボン粒子、シクロデキストリン若しくはカリックスアレーン等の包接化合物、プルラン、マンナン、デキストラン若しくはアミロペクチン等の多糖類、リポソーム、ベシクル、リン酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、磁性粒子、多機能性エンベローブ型ナノ構造体、高分子ミセル、ポリイオンコンプレックス、多環芳香族化合物、ウイルス、細胞、微生物、脳硫化物、又はフィブリン等。
　これらの薬剤又は担体に担持された薬剤は、第１の試薬に添加し、第１の試薬と共に検体と混合することができる。また、第１の試薬とは別に検体と混合してもよい。さらに、第２の試薬に添加してもよい。
　第１の試薬及び第２の試薬は、防腐剤等の一般的な検査薬に含まれる成分をさらに含んでいてもよい。
　表面にカルボキシル基が配向された粒子に代えて、スポンジ状酸化チタン粒子を血液凝固促進剤とすることもできる。スポンジ状酸化チタン粒子とは、３次元網目構造を有する酸化チタンの粒子である。スポンジ状酸化チタン粒子は、表面に多数のルイス酸サイトを有している。このルイス酸サイトが、カルボキシル基と同様に作用すると考えられる。酸化チタンはルチル型であっても、アナターゼ型であってもよい。
　スポンジ状酸化チタン粒子は、特に限定されないが表面積が５０ｍ2／ｇ以上、好ましくは１００ｍ2／ｇ以上、より好ましくは２００ｍ2／ｇ以上、１０００ｍ2／ｇ以下、好ましくは８００ｍ2／ｇとすることができる、より好ましくは５００ｍ2／ｇ以下とすることができる。
　スポンジ状酸化チタン粒子の平均粒径は、特に限定されないが、カルボキシル基を表面に有する粒子と同様に、０．０１μｍ以上、好ましくは０．０５μｍ以上、より好ましくは０．１μｍ以上、１００μｍ以下、好ましくは５０μｍ以下、より好ましくは１０μｍ以下とすることができる。
　スポンジ状酸化チタン粒子は、特に限定されないが、数ｎｍ～１００ｎｍ程度の細孔を形成するように繊維状の酸化チタンが絡み合って形成されているものを用いることができる。また、水熱合成法等により形成したものを用いることができる。
　スポンジ状酸化チタン粒子を表面にカルボキシル基が配向された粒子に代えて血液凝固機能検査薬として用いる場合には、最終的な血中におけるスポンジ状酸化チタン粒子の濃度を０．２μｇ／ｍＬ以上、好ましくは１μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは２μｇ／ｍＬ以上、４００μｇ／ｍＬ以下、好ましくは１００μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは４０μｇ／ｍＬ以下とすることができる。血中におけるカルシウムの濃度は、０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは２５ｍｏｌ／Ｌ以下とすることができる。また、第１の試薬に含まれるスポンジ状酸化チタン粒子の濃度は、０．６μｇ／ｍＬ以上、好ましくは３μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは６μｇ／ｍＬ以上、１２００μｇ／ｍＬ以下、好ましくは３００μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは１２０μｇ／ｍＬ以下とすることができる。他の条件については、表面にカルボキシル基が配向された粒子と同様にすることができる。
　スポンジ状酸化チタンとカルボキシル基が配向された粒子との両方を含む血液基凝固機能検査薬とすることもできる。
　以下に、実施例を用いて本開示の血液凝固剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬についてさらに詳細に説明する。
　＜官能基密度＞
　粒子表面の官能基密度は、電気伝導度滴定法により測定した。カルボキシル基及びスルホン酸基の滴定には、滴定剤として水酸化ナトリウム水溶液を用いた。アミノ基の滴定には、希塩酸を用いた。電気伝導度は、市販の電気伝導度計（東亜ディケーケー社製：CM-60S）を用い、窒素気流下で滴定を行った。粒子の表面積は、粒径のカタログ値を利用して球体の表面積の式から算出した。粒径のカタログ値が、レーザ回折光散乱光度計（島津製作所社製：SALD-2300）による測定値とほぼ一致することを確認した。
　＜血液凝固促進機能の評価＞
　９６穴マイクロプレートのウェルに、検体４０μＬと、イオン交換水により所定の倍率に希釈した試薬４０μＬとを入れた後、塩化カルシウム溶液（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）４０μＬを添加し、添加直後からマイクロプレートリーダー（PerkinElmer社製：2030 ARVO X）を用いて攪拌及び反応させ、６３０ｎｍの吸光度を測定した。吸光度はプラトーに達するまで測定した。吸光度変化が最大となった時間を反応時間とし、プラトーに達した吸光度を最終吸光度とした。試薬に代えて生理食塩水を加えた場合の反応時間（カルシウム再加凝固時間に相当）をブランク時間とし、反応時間をブランク時間で割った値を反応速度指数とした。反応速度指数が小さいほど試薬により凝固反応が促進されていることを示す。また、試薬を加えた場合の最終吸光度を、生理食塩水を加えた場合の最終吸光度で割った値を吸光度変化率とした。吸光度変化率が大きいほどフィブリンネットワークが成長していることを示す。すべての測定について、二重測定を行った。
　＜フィブリンネットワークの観察＞
　凝固反応を測定した検体について、収束イオンビーム走査型電子顕微鏡（ＦＩＢ－ＳＥＭ、ＦＥＩ社製：Qunta3D FEG(FIB、クライオ装置、OmniProbe,Gas injection、EDAXを使用)）によりフィブリンネットワークの形成を確認した。
　＜検体＞
　検体は、健常人から採血した正常ヒト血漿とした。採血は、クエン酸ナトリウム緩衝液入り真空採血管（ベクトンディッキンソン社製）と２１ゲージ採血針を用いて行った。採血後、３０００ｒｍｐで１０分間遠心して、血漿と血球とを分離した。
　＜試薬＞
　（試薬１）
　ポリスチレンとアクリル酸及びメタクリル酸との共重合体からなる平均粒径０．０５μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：15913-10）の２．５ｗ／ｖ％懸濁液を用いた。粒子濃度は、３．６×１０14個／ｍＬであった。カルボキシル基の表面密度は、２．３×１０μｍｏｌ／ｍ2であった。
　（試薬２）
　ポリスチレンとアクリル酸及びメタクリル酸との共重合体からなる平均粒径０．１μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：16688-15）とした以外は試薬１と同様にした。粒子濃度は、４．６×１０13個／ｍＬであった。
　（試薬３）
　ポリスチレンとアクリル酸及びメタクリル酸との共重合体からなる平均粒径０．５μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：09836-15）とした以外は試薬１と同様にした。粒子濃度は、３．６×１０11個／ｍＬであった。カルボキシル基の表面密度は、１．５×１０μｍｏｌ／ｍ2であった。
　（試薬４）
　ポリスチレンとアクリル酸及びメタクリル酸との共重合体からなる平均粒径１．０μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：08226-15）とした以外は試薬１と同様にした。粒子濃度は、４．６×１０10個／ｍＬであった。カルボキシル基の表面密度は、８．０×１０μｍｏｌ／ｍ2であった。
　（試薬５）
　カルボキシル基を導入したセルロースナノファイバ（ＣＯＯＨ－ＣＮＦ）を用いた。粒子濃度は１ｗ／Ｖ％とした。カルボキシル基の導入は以下のようにした。まず、市販のセルロース（日本製紙ケミカル社製：セルロース粉末ＫＣフロックＷ－４００Ｇ）を、水酸化ナトリウムを用いてマーセル化した。この後、マーセル化したセルロース１ｇを１００ｍＬの水に分散させ、２５ｍｇのＴＥＭＰＯ触媒、０．２５ｇの臭化ナトリウム（ＮａＢｒ）及び酸化剤として９．２７％の次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ）水溶液１０ｍＬを加え、室温、ｐＨ１０で２時間、酸化処理を行った。この後、少量のエタノールを加えて反応を停止し、１０，０００ｇで１０分間遠心分離して不純物を除去した後、上澄みにさらにメタノールを加え、ＣＯＯＨ－ＣＮＦを沈殿させた。得られた沈殿物をさらに遠心分離して、ＣＯＯＨ－ＣＮＦを回収した。回収したＣＯＯＨ－ＣＮＦを８０℃～１０５℃で乾燥させた後、水に再分散させた。ＣＯＯＨ－ＣＮＦの水中における平均粒径は５．４μｍであった。ＣＯＯＨ－ＣＮＦの長さは２μｍ～５μｍで、幅は１００ｎｍ～２００ｎｍあった。ＣＯＯＨ－ＣＮＦの長さ及び幅は、電子顕微鏡（日本電子社製：Ｊｓｍ－６５１０、倍率１００００）により観察した視野内におけるＣＯＯＨ－ＣＮＦ、１０本の長さの平均とした。なお、平均粒径は、レーザ回折光散乱光度計（島津製作所社製：ＳＡＬＤ－２３００）により測定した。カルボキシル基の表面密度は、１．２μｍｏｌ／ｍ２であった。
　（試薬６）
　平均粒径０．１μｍのスポンジ状酸化チタン（アースクリーン東北社製：PW116-3）の水懸濁液を用いた。スポンジ状酸化チタンの比表面積は４００ｍ2／ｇであった。粒子濃度は、０．１ｗ／ｖ％とした。
　（試薬７）
　試薬６に用いたスポンジ状酸化チタンを５００℃で、２時間熱処理した他は試薬５と同様にした。
　（試薬８）
　表面にアミノ基を有する、平均粒径０．１μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：16586-5）とした以外は試薬１と同様にした。粒子濃度は、４．６×１０13個／ｍＬであった。アミノ基の表面密度は、１４×１０μｍｏｌ／ｍ2であった。
　（試薬９）
　表面にスルホン酸基を有する、平均粒径０．５μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：19403-15）とした以外は試薬１と同様にした。スルホン酸基の表面密度は、０．６４×１０μｍｏｌ／ｍ2であった。
　（試薬１０）
　表面にスルホン酸基を有する、平均粒径１．０μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：19404-15）とした以外は試薬１と同様にした。
　（試薬１１）
　poly(2-methacryloyloxyethylphoshoryl choline）（ＰＭＰＣ）を固定した樹脂粒子とした以外は試薬１と同様にした。樹脂粒子は、炭素数３のリンカーを解して結合されたアミノ基を有する、平均粒径０．１μｍの樹脂粒子（Poly Science社製：16586-5）とした。ＰＭＰＣの固定は、スクシイミジル基を介して行った。
　（試薬１２）
　ＰＭＰＣに代えて、式１に示す、ＭＰＣとアクリル酸とのブロックコポリマーを固定した樹脂粒子とした以外は試薬１０と同様にした。但し、式１において、仕込み比としてｍは９０、ｎは１０である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　（試薬１３）
　ＰＭＰＣに代えて、式２に示す、ＭＰＣ、アクリル酸及びジメチルシロキサンのブロックコポリマーを固定した樹脂粒子とした以外は試薬１０と同様にした。但し、式２において、仕込み比として（ｍ＋ｎ）は５０、lは５０であり、ｍは９０、ｎは１０である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　（試薬１４）
　セルロースナノファイバ（スギノマシン社製：BiNFi-s）の水懸濁液を用いた。粒子濃度は、０．１ｗ／ｖ％とした。
　（試薬１５）
　市販のＰＴ試薬（シスメックス社製：トロンボチェックＰＴ）を用法用量に従い、精製水に溶解させて用いた。
　（試薬１６）
　市販のＡＰＴＴ試薬（SIEMENS社製：ACTIN）を用いた。
　表１に各試薬についての反応速度指数を示す。表面にカルボキシル基が配向された粒子からなる試薬１～４についての１００倍希釈（２５０μｇ／ｍＬ）における反応速度指数は、それぞれ０．５９、０．５６、０．４９及び０．６０となった。市販のＰＴ試薬である試薬１４及びＡＰＴＴ試薬である試薬１５の１００倍希釈における反応速度指数は、それぞれ０．５５及び０．４９であった。このように、試薬１～４の反応速度指数は、市販のＰＴ試薬及びＡＰＴＴ試薬と同程度である。従って、試薬１～４は、市販のＰＴ試薬及びＡＰＴＴ試薬と同様に血漿の凝固を促進しており、これらの試薬と同様の血液凝固促進機能を有している。また、試薬１～３については１００００倍希釈（２．５μｇ／ｍＬ）した場合においても、反応速度指数が１よりも小さく、血液凝固を促進した。
　ＣＯＯＨ－ＣＮＦからなる試薬５は、１０倍希釈（１００μｇ／ｍＬ）で０．８８、１００倍希釈（１０μｇ／ｍＬ）で、０．７４という反応速度指数を示した。このように、ＣＯＯＨ－ＣＮＦについても、血液凝固促進機能が認められた。
　また、スポンジ状酸化チタンからなる試薬６は、１０倍希釈（１００μｇ／ｍＬ）では０．７１、１００倍希釈（１０μｇ／ｍＬ）では０．８０という反応速度指数を示した。また、熱処理したスポンジ状酸化チタンからなる試薬７においても、反応速度指数は、１０倍希釈で０．７０、１００倍希釈で０．８１となり、熱処理していない場合とほぼ同じ反応速度指数を示した。このように、スポンジ状酸化チタン粒子についても、血液凝固促進機能が認められた。さらに、試薬６及び７は、１０００倍希釈（１μｇ／ｍＬ）においても、反応速度指数が１より小さく、血液凝固を促進した。
　一方、試薬８～１４については、表面にアミノ基を有する粒子からなる試薬８の１００倍希釈において反応速度指数が０．９４となり、若干の血液凝固の促進が認められた。しかし、これ以外は、いずれも反応速度指数が１よりも大きく、表面にカルボキシル基が配向された粒子又はスポンジ状酸化チタン粒子を含まない場合には、血液凝固促進機能は認められなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　表２に各試薬についての吸光度変化率を示す。反応速度指数が１未満であった、試薬１～試薬８において、平均粒径が０．０５μｍの粒子からなる試薬１については、１００倍希釈において吸光度変化率が１以下となった。平均粒径が０．５μｍの粒子からなる試薬３、平均粒径が１．０μｍの粒子からなる試薬４についても他の試薬と比べて１００倍希釈における吸光度変化率が若干小さかった。また、反応速度指数が１以上であった試薬９～試薬１４においても、平均粒径が０．５μｍの粒子からなる試薬９、平均粒径が１．０μｍの粒子からなる試薬１０では他の試薬と比べて１００倍希釈における吸光度変化率が若干小さかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　図２～図６にそれぞれ試薬１、３、６、１１を１００倍希釈した場合及びブランクにおいて得られたフィブリンネットワークのＳＥＭ写真を示す。試薬１の場合には他の試薬及びブランクと比べてフィブリン繊維が細かくなっている。しかし、試薬１も十分な血液凝固促進機能を有しており血液凝固促進剤として有用である。
　本開示の血液凝固促進剤は、安定した血液凝固機能を示し、血液凝固機能検査薬等として有用である。

Claims (12)

  1. 　表面にカルボキシル基が配向された粒子を含む血液凝固促進剤。
  2. 　前記粒子におけるカルボキシル基の表面密度は、０．５μｍｏｌ／ｍ2以上、５０μｍｏｌ／ｍ2以下である、請求項１に記載の血液凝固促進剤。
  3. 　前記粒子は樹脂からなる、請求項１又は２に記載の血液凝固促進剤。
  4. 　前記樹脂は、カルボキシル基を有するモノマーに由来するモノマー単位を含む、請求項３に記載の血液凝固促進剤。
  5. 　前記カルボキシル基を有するモノマーは、イタコン酸、アクリル酸及びメタアクリル酸の少なくとも一つである、請求項４に記載の血液凝固促進剤。
  6. 　前記樹脂は、前記カルボキシル基を有するモノマーに由来するモノマー単位を１０ｍｏｌ％以上含む共重合体である、請求項４又は５に記載の血液凝固促進剤。
  7. 　前記粒子は、カルボキシル基を有するセルロースである、請求項１又は２に記載の血液凝固促進剤。
  8. 　前記粒子は、表面にアミノ基を有する請求項１～７のいずれか１項に記載の血液凝固促進剤。
  9. 　スポンジ状酸化チタンの粒子を含む血液凝固促進剤。
  10. 　前記スポンジ状酸化チタンの粒子は、表面積が５０ｍ2／ｇ以上、１０００ｍ2／ｇ以下である、請求項９に記載の血液凝固促進剤。
  11. 　前記粒子は、平均粒径が１０ｎｍ以上、１０μｍ以下である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の血液凝固促進剤。
  12. 　請求項１～１１のいずれか１項に記載の血液凝固促進剤を含む、血液凝固機能検査薬。
PCT/JP2015/003003 2014-06-18 2015-06-16 血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬 Ceased WO2015194165A1 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016529048A JP6692023B2 (ja) 2014-06-18 2015-06-16 血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2014124960 2014-06-18
JP2014-124960 2014-06-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015194165A1 true WO2015194165A1 (ja) 2015-12-23

Family

ID=54935170

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2015/003003 Ceased WO2015194165A1 (ja) 2014-06-18 2015-06-16 血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP6692023B2 (ja)
WO (1) WO2015194165A1 (ja)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018012629A1 (ja) * 2016-07-14 2018-01-18 東洋製罐グループホールディングス株式会社 セルロースナノファイバー含有セルロース繊維及び製造方法
JP2021050976A (ja) * 2019-09-24 2021-04-01 シスメックス株式会社 活性化部分トロンボプラスチン時間測定用試薬及び試薬キット、並びにエラグ酸化合物の沈殿を抑制する方法
CN114599973A (zh) * 2019-10-17 2022-06-07 诺尔生物医药有限公司 凝血测定装置及其方法
JP2023113734A (ja) * 2017-10-11 2023-08-16 マイクロベンション インコーポレイテッド ホスホネート及びその使用
WO2024080373A1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-18 積水メディカル株式会社 活性化部分トロンボプラスチン時間測定のための試薬、及びループスアンチコアグラント陽性血液検体又はヘパリン含有血液検体の血液凝固時間調節剤
WO2024080371A1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-18 積水メディカル株式会社 凝固第ｘｉｉ因子欠乏血液検体の血液凝固時間短縮剤
WO2024080372A1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-18 積水メディカル株式会社 凝固第ｖｉｉｉ、ｉｘ又はｘｉ因子欠乏血液検体の血液凝固時間調節剤、及び活性化部分トロンボプラスチン時間測定のための試薬

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08154697A (ja) * 1994-12-08 1996-06-18 Sekisui Chem Co Ltd 血液検査用容器
JP2006200997A (ja) * 2005-01-19 2006-08-03 Sekisui Chem Co Ltd 血液凝固促進剤
WO2012156216A1 (en) * 2011-05-16 2012-11-22 The Swatch Group Research And Development Ltd Increase in storage lifetime of a thrombin sensor

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI20095620A0 (fi) * 2009-06-04 2009-06-04 Valtion Teknillinen Menetelmä vasta-aineiden immobilisoimiseksi

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08154697A (ja) * 1994-12-08 1996-06-18 Sekisui Chem Co Ltd 血液検査用容器
JP2006200997A (ja) * 2005-01-19 2006-08-03 Sekisui Chem Co Ltd 血液凝固促進剤
WO2012156216A1 (en) * 2011-05-16 2012-11-22 The Swatch Group Research And Development Ltd Increase in storage lifetime of a thrombin sensor

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KOZUE OKANO ET AL.: "Kobunshi Gosei Kagobutsu o Mochiita Gyoko Sokutei Shiyaku no Kaihatsu", JOURNAL OF THE JAPANESE SOCIETY FOR LABORATORY HEMATOLOGY, vol. 15, 20 June 2014 (2014-06-20), pages S160 *
SOMNATH C. ROY ET AL.: "The effect of Ti02 nanotubes in the enhancement of blood clotting for the control of hemorrhage", BIOMATERIALS, vol. 28, no. Issues 31, November 2007 (2007-11-01), pages 4667 - 4672, XP022207007, ISSN: 0142-9612 *
WEI-EN YANG ET AL.: "Nano/submicron-scale TiO2 network on titanium surface for dental implant application", JOURNAL OF ALLOYS AND COMPOUNDS, vol. 479, no. Issues 1-2, 24 June 2009 (2009-06-24), pages 642 - 647, XP026108891, ISSN: 0925-8388 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018012629A1 (ja) * 2016-07-14 2018-01-18 東洋製罐グループホールディングス株式会社 セルロースナノファイバー含有セルロース繊維及び製造方法
JP2023113734A (ja) * 2017-10-11 2023-08-16 マイクロベンション インコーポレイテッド ホスホネート及びその使用
JP7642715B2 (ja) 2017-10-11 2025-03-10 マイクロベンション インコーポレイテッド ホスホネート及びその使用
US12227665B2 (en) 2017-10-11 2025-02-18 Microvention, Inc. Phosphonates and uses thereof
US12140600B2 (en) 2019-09-24 2024-11-12 Sysmex Corporation Method for measuring activated partial thromboplastin time
CN112630452A (zh) * 2019-09-24 2021-04-09 希森美康株式会社 活化部分凝血活酶时间测定用试剂及试剂盒、测定方法、及抑制鞣花酸化合物沉淀的方法
JP7444572B2 (ja) 2019-09-24 2024-03-06 シスメックス株式会社 活性化部分トロンボプラスチン時間測定用試薬及び試薬キット、並びにエラグ酸化合物の沈殿を抑制する方法
JP2021050976A (ja) * 2019-09-24 2021-04-01 シスメックス株式会社 活性化部分トロンボプラスチン時間測定用試薬及び試薬キット、並びにエラグ酸化合物の沈殿を抑制する方法
JP7573605B2 (ja) 2019-10-17 2024-10-25 ノヴァ バイオメディカル コーポレイション 凝血アッセイ装置およびその方法
JP2023502568A (ja) * 2019-10-17 2023-01-25 ノヴァ バイオメディカル コーポレイション 凝血アッセイ装置およびその方法
JP2024156800A (ja) * 2019-10-17 2024-11-06 ノヴァ バイオメディカル コーポレイション 凝血アッセイ装置およびその方法
CN114599973A (zh) * 2019-10-17 2022-06-07 诺尔生物医药有限公司 凝血测定装置及其方法
JP2024161443A (ja) * 2019-10-17 2024-11-19 ノヴァ バイオメディカル コーポレイション 凝血アッセイ装置およびその方法
JP7732719B2 (ja) 2019-10-17 2025-09-02 ノヴァ バイオメディカル コーポレイション 凝血アッセイ装置およびその方法
JP7841035B2 (ja) 2019-10-17 2026-04-06 ノヴァ バイオメディカル コーポレイション 凝血アッセイ装置およびその方法
WO2024080372A1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-18 積水メディカル株式会社 凝固第ｖｉｉｉ、ｉｘ又はｘｉ因子欠乏血液検体の血液凝固時間調節剤、及び活性化部分トロンボプラスチン時間測定のための試薬
JP7473282B1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-23 積水メディカル株式会社 凝固第ｘｉｉ因子欠乏血液検体の血液凝固時間短縮剤
JP7473281B1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-23 積水メディカル株式会社 凝固第ｖｉｉｉ、ｉｘ又はｘｉ因子欠乏血液検体の血液凝固時間調節剤、及び活性化部分トロンボプラスチン時間測定のための試薬
JP7473283B1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-23 積水メディカル株式会社 活性化部分トロンボプラスチン時間測定のための試薬、及びループスアンチコアグラント陽性血液検体又はヘパリン含有血液検体の血液凝固時間調節剤
WO2024080371A1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-18 積水メディカル株式会社 凝固第ｘｉｉ因子欠乏血液検体の血液凝固時間短縮剤
WO2024080373A1 (ja) * 2022-10-14 2024-04-18 積水メディカル株式会社 活性化部分トロンボプラスチン時間測定のための試薬、及びループスアンチコアグラント陽性血液検体又はヘパリン含有血液検体の血液凝固時間調節剤

Also Published As

Publication number Publication date
JP6692023B2 (ja) 2020-05-13
JPWO2015194165A1 (ja) 2017-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6692023B2 (ja) 血液凝固促進剤及びそれを用いた血液凝固機能検査薬
Liu et al. In vitro hemocompatibility and cytotoxicity evaluation of halloysite nanotubes for biomedical application
Hua et al. Translational study between structure and biological response of nanocellulose from wood and green algae
Cheng et al. General and biomimetic approach to biopolymer-functionalized graphene oxide nanosheet through adhesive dopamine
Lin et al. Stability of small mesoporous silica nanoparticles in biological media
Kaloti et al. Kinetics of coacervation transition versus nanoparticle formation in chitosan–sodium tripolyphosphate solutions
Zheng et al. Study on hemostatic effect and mechanism of starch-based nano-microporous particles
Feng et al. Impact of graphene oxide on the structure and function of important multiple blood components by a dose‐dependent pattern
Kaur et al. Tailoring in vitro biological and mechanical properties of polyvinyl alcohol reinforced with threshold carbon nanotube concentration for improved cellular response
Pinto et al. Polymer surface adsorption as a strategy to improve the biocompatibility of graphene nanoplatelets
Qin et al. Cellulose nanofibril reinforced functional chitosan biocomposite films
Sun et al. Mesoporous silica nanoparticles carried on chitosan microspheres for traumatic bleeding control
da Silva et al. Preparation and characterization of polysaccharide-based nanoparticles with anticoagulant activity
Peng et al. Supramolecular polymeric vesicles formed by p-sulfonatocalix [4] arene and chitosan with multistimuli responses
Wang et al. Microfibers synthesized by wet-spinning of chitin nanomaterials: mechanical, structural and cell proliferation properties
Mohamed et al. Non-oxidized cellulose nanofibers as a topical hemostat: In vitro thromboelastometry studies of structure vs function
Demirci et al. Chemically cross-linked poly (β-cyclodextrin) particles as promising drug delivery materials
Cho et al. Cellulose nanofiber-reinforced silk fibroin composite film with high transparency
Rabbi et al. Biocomposites of synthetic polymer modified microcrystalline jute cellulose particles and their hemolytic behavior
Arunagiri et al. Preparation of physically crosslinked polyelectrolyte gelatin-tannic acid-κ-carrageenan (GTC) microparticles as hemostatic agents
Shakya et al. Preparation and assessment of agar/TEMPO-oxidized bacterial cellulose cryogels for hemostatic applications
Liu et al. Preparation and characterisation of a novel polylactic acid/hydroxyapatite/graphene oxide/aspirin drug-loaded biomimetic composite scaffold
Zhang et al. Injectable hydrogel based on short-peptide RG5 combined with halloysite nanotubes for rapid hemostasis
Aneem et al. Antimicrobial peptide immobilization on catechol-functionalized PCL/alginate wet-spun fibers to combat surgical site infection
Yu et al. Nanofiber membrane prepared from a marine organism-based material cuttlebone combined with gelatin for rapid hemostasis

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15810472

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016529048

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 15810472

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1