WO2015178806A1 - Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия - Google Patents

Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия Download PDF

Info

Publication number
WO2015178806A1
WO2015178806A1 PCT/RU2015/000317 RU2015000317W WO2015178806A1 WO 2015178806 A1 WO2015178806 A1 WO 2015178806A1 RU 2015000317 W RU2015000317 W RU 2015000317W WO 2015178806 A1 WO2015178806 A1 WO 2015178806A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
insulin
polymer
preparation
preparations
drug
Prior art date
Application number
PCT/RU2015/000317
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Владимир Андреевич САБЕЦКИЙ
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Биосабтек"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Биосабтек" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Биосабтек"
Priority to CN201580039533.3A priority Critical patent/CN106794226A/zh
Priority to US15/313,356 priority patent/US20170136096A1/en
Priority to EP15795367.0A priority patent/EP3254688A4/en
Priority to RU2016121001A priority patent/RU2676101C2/ru
Publication of WO2015178806A1 publication Critical patent/WO2015178806A1/ru
Priority to HK18107670.2A priority patent/HK1248118A1/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics

Definitions

  • the invention relates to the field of biotechnology and medicine, namely to insulin-containing preparations used, in particular, for the treatment of diabetes mellitus.
  • diabetes mellitus drugs for the treatment of diabetes mellitus (usually also called “diabetes”) are one of the most significant pharmaceutical drugs on the world market. So in 2012, sales of insulin products alone amounted to $ 20.8 billion and it is estimated that it will reach 32.5 billion in 2018. Around the world, in 2013, 382 million people suffered from diabetes and, according to forecasts, by 2030 their number will increase to 592 million.
  • Diabetes is a metabolic disorder caused by an absolute or relative insulin deficiency, which is the only hypoglycemic hormone, and the main symptom of diabetes is persistent hyperglycemia due to the rapid loss of pancreatic beta-cells producing insulin in diabetes mellitus type or slow loss of beta cells in type 2 diabetes mellitus. Diabetes is also associated with a number of chronic complications, including microvascular diseases such as retinopathy, nephropathy and neuropathy, and macrovascular diseases such as heart attacks and strokes. [RU2358738, 2009].
  • hypoglycemic agents for the treatment of diabetes mellitus, in addition to insulin, various hypoglycemic agents are offered, such as stimulants of insulin secretion, drugs that sensitize tissues to the action of insulin, and also inhibit ⁇ -glucosidase tori, preventing the breakdown of sugars in the intestine [RU2358738, 2009].
  • Insulin was first isolated from the dog’s pancreas in Canada in 1921 by F. Bunting and C. Best, laboratory staff of J. Macleod. Studies have shown that the molecule of human insulin consists of two amino acid chains; The A-chain contains 21 amino acids, the B-chain - 30. The chains are interconnected by two disulfide bridges and the third disulfide bridge connects two distant amino acids of the A-chain. The linked chains fold into a globular structure necessary for the manifestation of its biological activity. Methods for producing insulin were originally developed using extracts from the pancreas of cattle and pigs.
  • human insulin differs from bovine insulin in two A-chain positions and from porcine insulin in one B-chain position, which led to the occurrence of negative side effects in patients, in particular, allergies.
  • a technology was developed for the production of protein preparations by creating recombinant DNA and introducing they are produced in cells by producers, mainly bacterial or yeast.
  • the production of high-quality recombinant human insulin began and the main problem in the development of drugs based on it was the creation of drugs with optimal pharmacokinetics.
  • treatment of patients with diabetes mellitus includes, as a rule, the use of a combination of human insulin preparations of quick (short) and long (prolonged) action.
  • Short-acting insulin should quickly reach a peak in activity in accordance with the rise in glucose level associated with food intake and cease its effect after its fall.
  • prolonged-acting insulin should provide for a long time a certain basic level of glucose in between meals.
  • “fast” insulins are produced commercially, such as Lispro (human insulin LysB28, ⁇ Albany ⁇ 29), in which the residues of proline-B28 and lysine-B29, “Glulysin” (LysB3) are inverted in the amino acid sequence of the B-chain , GluB29 human insulin) and Aspart (human insulin AspB28), in the molecule of which the proline residue at position B28 of the B chain is replaced by an aspartic acid residue.
  • Such modifications of the human insulin molecule have made it possible to reduce the tendency of human insulin molecules to aggregate and to reduce the time of hormone absorption from the injection site [Setter SM, Corbett CF, Campbell RK, White JR Ann. Pharmacother., 2000; v.
  • Glargin is Sanofi-Aventis human insulin, in which the replacement of amino acids allowed the protein isoelectric point to be shifted towards neutral pH values.
  • Glargin injection solution with pH 4 when injected under the skin, forms a slowly soluble micro-precipitate, the slow dissolution of which provides a flat profile of the time-concentration curve for 24 hours.
  • Novo-Nordisk has developed the insulin Degludec (Tresiba U100, Tresiba U200), which is an insulin analogue modified with C16 fatty acid via a linker. After subcutaneous administration, insulin Degludec forms soluble multihexamers, the slow dissolution of which leads to an ultra-prolonged action. The drug is registered in Europe and Japan, but the FDA (US Food and Drug Administration) denied the registration of the antidiabetic drugs Tresiba (insulin degludec) and Ryzodeg (insulin degludec / in-sulinaspart) to the Danish pharmaceutical company Novo Nordisk. in the USA, justifying this with an unfavorable security profile.
  • Tresiba insulin degludec
  • Ryzodeg insulin degludec / in-sulinaspart
  • ELi Lilly currently produces two quick-acting insulin preparations by modifying Kispro insulin by pegylation or as a suspension with protamine [ Caparrotta TM, Evans M., "PEGylated insulin Lispro, (LY2605541) -a new basal insulin analogues Diabetes ObesMetab. 2014 May; 16 (5): 388-95); Diabetes Dario Giugliano, Katherine Esposito “Efficacy and Safety of Insulin Lispro Protamine Suspension as Basal Supplementation in Patients With Type 2,” Adv in Endo and Metab. 2012; 3 (3): 99-108].
  • the main disadvantage of such drugs is the impossibility of creating a flat (peakless) profile of the pharmacokinetic curve, which leads to an increase in cases of hypoglycemia with an increase in the dose necessary for the long-term effect of the drug.
  • the total period of action is from 10 to 14 hours, therefore, in order to maintain the required amount of insulin during the day, it is necessary to make 2 injections - usually in the morning, before breakfast, and in the evening, before dinner, and in the case of an early dinner - before bedtime .
  • the duration of action of this group of insulins is proportional to their dose. Peak action occurs after about 6-8 hours.
  • the disadvantages of the preparation obtained were the rather high viscosity of the suspension and, as a result, the need to use a large diameter injection needle, as well as the very slow (months) biodegradation of the microspheres.
  • the problem solved by the author was the creation of insulin-containing drugs that have a prolonged effect due to the introduction of a component into the injectable compositions that slows down the depot after subcutaneous or intramuscular administration of both natural insulin and insulin analogues, including their versions of semi- readable with the help of other producers (biosimilars), as well as chemically or physically modified insulins.
  • COD colloidal osmotic pressure
  • both human recombinant insulin and its genetic engineering analogues can be used.
  • a sustained release preparation is prepared by mixing the ingredients or their solutions or suspensions containing them. The optimal ratio of ingredients is selected experimentally on the basis of the particular insulin and polymer used, however, as a rule, the polymer content is 5-10% by weight of the total preparation.
  • the preparations prepared by the claimed method do not contain potentially hazardous components and the use of sophisticated equipment is not required when they are received, which can significantly reduce the time and costs required to bring new drugs to the market and introduce them into medical practice. Industrial applicability
  • Example 1 0.6 g of dextran (dextran 70 kDa, Pharmacosmos, Denmark) was dissolved in 9.4 g of Astrapid HM, UOME / ml (Novo Nordisk), filtered through a 0.22 ⁇ m sterilizing membrane and poured into 1 ml into sterile eppendorfs with a capacity of 2 ml.
  • the dynamic viscosity of the solution is 5 MPa-s
  • the colloidal osmotic pressure of the CODE is 58 mm Hg
  • the hydrodynamic diameter is 6.5 nm.
  • the prepared 6% solution is designated AD70.
  • the experiment involved 4 Chinchilla rabbits (weight 3.5 +/- 0.2 kg, males), designated as K1, K2, KZ, K4. Rabbits were injected subcutaneously with 50 ⁇ l of preparations (4.6 +/- 0.1 ME), K1 - initial insulin Actrapid NM (control), K2 - AD40, KZ - AD70, K4 - AP20. After 15 minutes and 180 minutes after administration, 1 ml of blood was taken from the ear vein from rabbits to determine the content of human insulin by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • the results can be interpreted as confirming the prolonged effect.
  • the effect itself does not depend on the type of insulin used, although its value may depend on the difference in the equilibrium concentrations of the monomer, dimer and zinc-stabilized hexamer and affect the pharmacokinetics of insulin. This effect can be explained by the fact that the diffusion rate of monomers and dimers from the depot is higher than that for hexamers and they quickly leave the depot and are absorbed by capillaries located outside the high COD zone.
  • Example 2 1.0 g of dextran (dextran 40 kDa, Pharmacosmos, Denmark) was dissolved in 9.0 g of a long-acting insulin preparation Humulin NPH, 1 OOME / ml (Lilly) (since the drug is a suspension, filter it through a sterilizing membrane 0.22 ⁇ m impossible) and poured 1 ml into sterile eppendorfs with a capacity of 2 ml.
  • the dynamic viscosity of the solution is 7 MPa-s
  • the colloidal osmotic pressure of the CODE is 90 mm Hg
  • the hydrodynamic diameter is 4.8 nm.
  • the prepared 10% solution is designated HD40.
  • the experiment involved 6 Chinchilla rabbits (weight 3.5 +/- 0.2 kg, males), designated as Kl, K2, KZ, K4, K5, Kb.
  • Rabbits K1, K2, KZ were injected subcutaneously with 50 ⁇ l (4.6 +/- 0.1 ME) of Humulin NPH preparation (control), rabbits K4, K5, Kb were subcutaneously administered with 50 ⁇ l (4.6 +/- 0.1 ME) pre- Parata HD40.
  • 1 ml of blood was taken from the ear vein from rabbits to determine the content of human insulin by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
  • the content of human insulin in the blood of rabbits K1, K2, KZ was 53 +/- 7 ⁇ IU / ml, and in the blood of rabbits K4, K5, KB 31 +/- 1 1 ⁇ I / ml.
  • the blood of rabbits K1, K2, KZ did not contain human insulin at all, while in the blood of rabbits K4, K5, KB the insulin content was at the level of 14 +/- 5 ⁇ MU / ml.
  • HD40 has a significantly longer duration than Humulin NPH (control), the duration of which is 14-16 hours.
  • Example 3 0.5 g of dextran (dextran 70 kDa, Pharmacosmos, Denmark) was dissolved in 9.5 g of NovoRapid insulin preparation, 100 IU / ml (Novo Nordisk), filtered through a 0.22 ⁇ m sterilizing membrane and 1 ml was poured into 2 ml sterile vials.
  • the dynamic viscosity of the solution is 5 MPa-s
  • the colloidal osmotic pressure of the CODE is 58 mm Hg
  • the hydrodynamic diameter is 6.5 nm.
  • the prepared solution is designated ND70.
  • Rabbits were injected subcutaneously with 50 ⁇ l (4.6 +/- 0.1 ME), K5 - the initial insulin NovoRapid (control), Kb - ND40, K7 - ND70, K8 - NP20. 15 minutes and 180 minutes after the administration, 1 ml of blood was taken from the ear vein from rabbits to determine the content of human insulin by ELISA.
  • insulin Aspart is an analog of fast acting insulin obtained by the recombinant technology in which the amino acid proline at position B28 is substituted for aspartic acid.
  • the purpose of such a replacement is the faster dissociation of zinc-stabilized hexamers to dimers and monomers.
  • Example 4 Of the three polymers used in the experiment, dextrans with MM 40 kDa and 70 kDa were selected for further experiments. This choice is due to the possibility of determining the effect of COD and MM on the effect of prolongation in humans.
  • 0.1 ml (10 ME) of the resulting solutions was administered subcutaneously (thigh) to a healthy volunteer (28.5 G needle). Blood glucose was monitored every 15 minutes using a Contour TS (Bayer) portable glucose meter.
  • the initial blood glucose level (after 12 hours without food intake) was 4.9 mmol / L on the day of the experiment with the drug D40 n0 and 5.0 mmol / L with fl70ZnO. Both drugs began to act 60 minutes after administration.
  • the drug fl40Zn0 (CODE 90 mmHg) demonstrated the maintenance of the level of 3.8 +/- 0.5 mmol / L for 10 hours, the drug D70 n0 (CODE 58 mmHg) 4.0 +/- 0.6 mmol / L for 8 hours. Based on the result, it can be concluded that the CODE of the polymer affects the prolonged effect. It should be noted such an important feature of the pharmacodynamics of both drugs as the complete absence of low peak glucose values.
  • Example 4 Under the conditions of Example 3, a dose of 15 ME (0.15 ml) of the D402 ⁇ 0 preparation was introduced to assess the effect of the volume and dose on the duration and nature of the action of the drug. In parallel with the pharmacodynamics assessment, pharmacokinetics were evaluated, for which the level of insulin and C-peptide was determined in a clinical laboratory.
  • Example 5 The drug AD40 (Example 1) differs from the commercial product Actrapid NM only in the presence of pharmacopeia dextran with 40 kDa MM, which does not interact with the components of the product. The aim of the experiment was to compare the pharmacokinetics and pharmacodynamics of the AD40 preparation with the properties of the initial preparation Actrapid NM and the results of the previous example. We used two doses of the drug AD40 - 10 and 15 ME.
  • a dose of 10 ME of AD40 showed the onset of action 60 minutes after administration and maintenance of a peakless glucose level of 3.3 +/- 0.3 mmol / L for 14 hours.
  • the pharmacokinetics data are presented in Table 4.
  • the Actrapid NM used in the experiment is a preparation of insulin rapid action produced by recombinant DNA technology.
  • the maximum concentration (C max ) of insulin in plasma is achieved within 1.5-2.5 hours after subcutaneous administration.
  • the drug begins after 30 minutes. Maximum action is achieved between 2.5-5 hours after administration.
  • the drug lasts 7-8 hours (manufacturer data http://www.medicinform.net/spravka/c/c41.htm).
  • the use of the above polymers provides the prolonged effect of insulin preparations without the use of chemical or genetic engineering methods for modifying the insulin molecule. Since the method is not specific, it can be used for a wide range of therapeutic proteins.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к инсулинсодержащим препаратам, используемым, в частности для лечения сахарного диабета. Препарат представляет собой смесь инсулина с фармакологически приемлемым полимером с гидродинамическим диаметром более 4,5+/-0.5 нанометров. В качестве такого полимера оптимально может быть использован по крайней мере один полимер с молекулярной массой 20-70 кДа, выбранный из группы, в которую входят: декстран, полиэтиленгликоль, альбумин. В качестве препаратов инсулина, входящих в состав препарата, может использоваться как человеческий рекомбинантный инсулин, так и его генно-инженерные аналоги, используемые в виде коммерческих препаратов. Как показали проведенные эксперименты, применение вышеуказанных полимеров обеспечивает наличие пролонгированного эффекта препаратов инсулина без использования химических или генно-инженерных методов модификации молекул инсулина. Поскольку метод не является специфичным, его можно использовать для широкого спектра терапевтических протеинов.

Description

ИНСУЛИНСОДЕРЖАЩИЙ ПРЕПАРАТ ПРОЛОНГИРОВАННОГО
ДЕЙСТВИЯ
Область техники
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к инсулинсодержащим препаратам, используемым, в частности, для лечения сахарного диабета.
Предшествующий уровень техники
В настоящее время препараты для лечения сахарного диабета (обычно также называемого «диабет») являются одними из наиболее значимых фар- мацевтических препаратов на мировом рынке. Так в 2012 году объем продаж только инсулиновых препаратов составил 20.8 млрд долларов и предполага- ется, что он достигнет 32.5 млрд в 2018 году. Во всем мире в 2013 году от сахарного диабета страдали 382 миллиона человек и, согласно прогнозам, к 2030 году их число возрастет до 592 млн.
Диабет представляет собой метаболическое расстройство, вызванное аб- солютным или относительным дефицитом инсулина, который представляет собой единственный гипогликемический гормон, и основным признаком са- харного диабета является постоянная гипергликемия вследствие быстрой по- тери синтезирующих инсулин бета-клеток поджелудочной железы при са- харном диабете первого типа или медленной потери бета-клеток при сахар- ном диабете второго типа. Диабет ассоциирован также с целым рядом хро- нических осложнений, включающих микрососудистые заболевания, такие как ретинопатия, нефропатия и невропатия, и макрососудистые заболевания, такие как инфаркты и инсульты. [RU2358738, 2009].
Для лечения сахарного диабета кроме инсулинов предлагаются различ- ные гипогликемические средства такие как стимуляторы секреции инсулина, средства, сенсибилизирующие ткани к действию инсулина, а также ингиби- торы α-глюкозидазы, предотвращающие расщепление Сахаров в кишечнике [RU2358738, 2009].
Хотя возможность применения указанных гипогликемических средств подтверждена в клинической практике, их практическое применение связано с целым рядом проблем. Поскольку у больных сахарным диабетом значи- тельно снижается способность поджелудочной железы секретировать инсу- лин, эффективность средств, стимулирующих секрецию инсулина, и средств, сенсибилизирующих к инсулину, постепенно уменьшается и, в конце концов, полностью прекращается и основным препаратом, применяемым для лечения диабета, остается только инсулин. (V. Sabetsky, J. Ekblom "Insulin: A new era for an old hormone", Pharmacological Research 61 (2010), 1-4).
Инсулин был впервые выделен из поджелудочной железы собаки в Канаде в 1921 Ф.Бантингом и Ч.Бестом, сотрудниками лаборатории Дж. Маклеода. Исследования показали, что молекула человеческого инсулина состоит из двух аминокислотных цепей; А-цепь содержит 21 аминокислоту, Б-цепь - 30. Цепи соединены между собой двумя дисульфидными мостиками и третий дисульфидный мостик связывает две отдаленные аминокислоты А-цепи. Со- единенные цепи сворачиваются в глобулярную структуру, необходимую для проявления его биологической активности. Способы получения инсулина первоначально были разработаны на основе использования экстрактов поджелудочных желез крупного рогатого скота и свиней. Однако, по составу аминокислот, человеческий инсулин отличается от бычьего инсулина по двум позициям А- цепи и от свиного инсулина по одной позиции в В-цепи, что вело к возникновению у больных негативных побочных эффектов, в частности, аллергии. Благодаря успехам генной инже- нерии в 70-х годах прошлого столетия была разработана технология получе- ния белковых препаратов с помощью создания рекомбинантных ДНК и вве- дения их в клетки продуценты, в основном, бактериальные или дрожжевые. В 80-х годах началось производство рекомбинантного человеческого инсу- лина высокого качества и основной проблемой при разработке препаратов на его основе стало создание препаратов, имеющих оптимальную фармакоки- нетику.
Как правило, лечение больных сахарным диабетом включает, как пра- вило, использование комбинации препаратов инсулина человека быстрого (короткого) и длительного (пролонгированного) действия. Короткодейст- вующий инсулин должен быстро достигать пика активности в соответствии с подъемом уровня глюкозы, связанным с приемом пищи, и прекращать свое действие после его падения. Инсулин пролонгированного действия, напро- тив, должен в течение длительного времени обеспечивать определенный ба- зовый уровень глюкозы в промежутках между приемами пищи.
В настоящее время в промышленных масштабах производят «быстрые» инсулины, такие как «Lispro» (инсулин человека LysB28, РгоВ29), у которого в аминокислотной последовательности В-цепи инвертированы остатки про- лина-В28 и лизина-В29, «Glulysin» (LysB3, GluB29 человеческий инсулин) и «Aspart» (инсулин человека AspB28), в молекуле которого остаток пролина в положении В28 В-цепи заменен остатком аспарагиновой кислоты. Такие мо- дификации молекулы человеческого инсулина позволили снизить склонность молекул инсулина человека к агрегации и уменьшить время абсорбции гор- мона из места инъекции [Setter S.M., Corbett C.F., Campbell Р.К., White J.R. Ann. Pharmacother., 2000; v.34, p.1423-1431]. Это привело к значительному снижению времени начала действия препаратов, увеличению максимально достижимой концентрации препаратов в крови и более быстрому восстанов- лению исходного уровня гормона в крови. [Simpson K.L., Spenser СМ. Drugs, 1999, v.57, р.759-765]. Было показано, что пролонгированным действием обладают аналоги ин- сулина в которых, по меньшей мере, одна аминокислота в положениях В 1 -В 6 заменена лизином или аргинином [WO 92/00321, ЕР0368187]. Наиболее эф- фективным из этой группы препаратов является инсулин с увеличенной про- должительностью действия Гларгин - человеческий инсулин компании Sano- fi-Aventis, в котором замена аминокислот позволила сдвинуть изоэлектриче- скую точку белка в сторону нейтральных значений рН. Инъекционный рас- твор Гларгина с рН 4 при введении под кожу образует медленно раствори- мый микро-преципитат медленное растворение которого обеспечивает пло- ский профиль кривой «время - концентрация» в течение 24 часов. Гларгин появился в 2000 году и доминирует на рынке инсулинов длительного дейст- вия в течение последних 10 лет.
Компания Novo-Nordisk, разработала инсулин Деглюдек (Tresiba U100, Tresiba U200), который представляет собой аналог инсулина, модифициро- ванный С16 жирной кислотой через линкер. Инсулин Деглюдек после под- кожного введения образует растворимые мультигексамеры, медленное рас- творение которых приводит к ультра пролонгированному действию. Препа- рат зарегистрирован в Европе и Японии, однако FDA (Управление по кон- тролю пищевых и лекарственных продуктов США) отказало датской фарма- цевтической компании Novo Nordisk в регистрации противодиабетических препаратов Tresiba (insulin degludec) и Ryzodeg (insulin degludec/in-sulinaspart) в США, обосновав это неблагоприятным профилем их безопасности. [FDA Rejects Novo Nordisk's Insulin Degludec [http://www.medscape.com/viewar- ticle/779077 ] ELi Lilly в настоящее время выпускает два препарата инсулина быстрого действия, модифицировав инсулин Киспро методом пегилирования или в ви- де суспензии с протамином [Caparrotta ТМ, Evans М., «PEGylated insulin Lispro, (LY2605541)-a new basal insulin analogues Diabetes ObesMetab. 2014 May; 16(5):388-95); Diabetes Dario Giugliano, Katherine Esposito «Efficacy and Safety of Insulin Lispro Protamine Suspension as Basal Supplementation in Pa- tients With Type 2», Adv in Endo and Metab. 2012;3(3):99-108].
Недостатком генно-инженерных аналогов инсулина является их неполное соответствие структуре человеческого инсулина.
Проводимые исследования для достижения пролонгирования действия человеческого инсулина можно подразделить на два основных направле- ния: получение препаратов в результате применения химических и генно- инженерных методов, приводящих к модификации молекулы инсулина и использование физико-химических методов приводящих к пролонгирова- нию действия без изменения молекулы инсулина.
Использование методов химической модификации инсулина (пегилирова- ние, ацилирование жирными кислотами) для пролонгировании действия наи- более ярко проявилось в разработке технологии TransCon, позволяющей до- биться сверх длительного выделения инсулина из подкожного депо.
В 2007 году компания Sanofi-Aventis подала заявку [US20120183616, 2013] на применение технологии химической модификации препарата инсулина за счет присоединения пегилированного инсулина к биодеградируемому гидро- гелю с помощью линкера (TransConLinkerandHydrogellnsulin). В эксперимен- те на крысах была продемонстрирована продолжительность выделения инсу- лина из подкожного депо в течение двух недель. Однако надо отметить, что неизбежное использование больших доз инсулина и их продолжительного нахождения в месте инъекции препаратов сверх длительного действия, осо- бенно в виде суспензий, чревато возможностью поглощения крупных частиц суспензий макрофагами, что может привести к осложнениям и невозможно- сти подбора оптимального режима дозирования. Кроме того, увеличение продолжительности действия на срок более суток приводит к необходимости обучения больных тщательному подбору дозы и строгому соблюдению ре- жима введения препарата.
Физико-химические методы продления действия инсулина основывались на том, что при физиологических значениях рН молекула инсулина заряжена отрицательно. Поэтому перспективным представлялось получение комплек- сов инсулина с органическими поликатионами и катионами двухвалентных металлов для замедления образования мономеров инсулина и их быстрой аб- сорбции. Данная группа представлена на рынке препаратами Протафан, Ху- мулин НПХ, Ленте, Семиленте, Инсулонг, Актрафан. В отличие от Гларгина, представляющего собой прозрачный раствор, эти препараты выпускаются в виде суспензий, что осложняет их точное дозирование.
Основным недостатком таких препаратов является невозможность созда- ния плоского (безпикового) профиля фармакокинетической кривой, что при- водит к увеличению случаев гипогликемии при повышении дозы, необходи- мой для длительного действия препарата. Общий период действия составляет от 10 до 14 часов, поэтому, для поддержания необходимого количества инсу- лина в течение суток, необходимо делать 2 инъекции - как правило, утром, перед завтраком, и вечером, перед ужином, а в случае раннего ужина - перед сном. Длительность действия данной группы инсулинов пропорциональна их дозе. Пиковое действие наступает примерно через 6-8 часов.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является разработанный ранее автором (US7544656, 2009) инсулинсодержа- щий препарат пролонгированного действия, представляющий собой смесь инсулина и биодеградируемых высокопористых микросфер. Микросферы вносились в раствор инсулина и полученная суспензия вводилась с помощью шприца подкожно или внутримышечно экспериментальным животным (мы- шам и кроликам). Выход инсулина из депо существенно замедлялся, по- скольку молекулам инсулина приходилось двигаться сквозь высокопористую структуру, образованную микросферами. Эффект пролонгирования был до- казан в экспериментах на животных и также была показана идеальная биосо- вместимость микросфер с тканями.
Недостатками полученного препарата были довольно высокая вязкость суспензии и, как следствие, необходимость использования иглы для инъек- ций большого диаметра, а также очень медленная (месяцы) биодеградация микросфер. Задачей, решаемой автором, являлось создание инсулин-содержащих препаратов, обладающих пролонгированным действием за счет введения в состав инъекционных композиций компонента, обеспечивающего замедление выхода из депо после подкожного или внутримышечного введения как при- родных инсулинов, так и инсулиновых аналогов, включая их версии полу- чаемые с помощью других продуцентов (biosimilars), а так же химически или физически модифицированных инсулинов.
Сущность изобретения
В основу решаемой задачи было положено предположение автора о воз- можности использования эффекта, обнаруженного Старлингом в 1896 году. В экспериментах на собаках Старлинг показал, что введение изотонического физиологического раствора поваренной соли (физраствора) в межтканевую жидкость на задней ноге животного приводило к разбавлению крови в вене ноги, в то время как введение сыворотки крови вместо физраствора такого действия не оказывало. Старлинг объяснял это тем, что сыворотка содержит компоненты, которые удерживают воду и обладают размером, препятст- вующим их всасыванию в кровь через капилляры [Starling EH. On the absorp- tion of fluids from the connective tissue spaces. J Physiol 1896; 19: 312-326]. Объяснение открытому явлению было дано с использованием понятия о кол- лоидном осмотическом давлении (КОД) растворов полимеров. Так, присут- ствующие в плазме высокомолекулярные белки (в частности, альбумины) создают КОД (называемое также онкостическим давлением), удерживающее воду в крови. В случае снижения онкостического давления вследствие кро- вепотери или других причин инфузионное введение растворов биосовмести- мых полимеров с высоким КОД помогает осуществить реабсорбцию воды из тканей и восстановить гемодинамику крови.
Автор предположил, что введение в состав жидких инъекционных препа- ратов биосовместимых инертных полимеров в концентрации, обеспечиваю- щей выравнивание КОД между плазмой и межклеточной жидкостью в месте инъекции, может существенно замедлить выход лекарственных препаратов из подкожного депо и их абсорбцию в кровь.
Проведенные эксперименты показали, что технический результат может быть достигнут при введении в организм раствора инсулина вместе с фарма- кологически приемлемым полимером с гидродинамическим диаметром более 5 нанометров. Было показана, что такая величина диаметра препятствует его абсорбции в кровь через стенки капилляров в тканях. В качестве такого по- лимера может быть использован практически любой биосовместимый водо- растворимый полимер с молекулярной массой 20-100 кДа, например декст- раны, полиэтиленгликоли, поливинилпирролидон, альбумины.
Выбор указанных полимеров обусловлен наряду с их гидродинамическими характеристиками тем, что они используются для производства коллоидных плазмозамещающих растворов (КПР) и при приготовлении модифицирован- ных препаратов инсулина [ADOCIA, US20120094902; препарат компании Eli Lilly LY2605541]. При этом о пролонгирующем воздействии таких декстра- нов на инсулин информации в просмотренной литературе не отмечено.
В качестве инсулина, входящего в состав заявляемого препарата, может использоваться как человеческий рекомбинантный инсулин, так и его генно- инженерные аналоги. Препарат пролонгированного действия получают смешением ингредиентов или их растворов или суспензий их содержащих. Оптимальное соотношение ингредиентов подбирают экспериментально ис- ходя из особенности используемых инсулина и полимера, однако, как прави- ло, содержание полимера составляет 5-10% масс от массы всего препарата. Приготовленные заявляемым способом препараты не содержат потенци- ально опасных компонентов и при их получении не требуется использование сложного оборудования, что позволяет существенно сократить время и за- траты, необходимые для вывода новых препаратов на рынок и внедрения их в лечебную практику. Промышленная применимость
Сущность и преимущества заявляемого изобретения иллюстрируются сле- дующими примерами.
Пример 1. 0,6 г декстрана (декстран 70 кДа, Pharmacosmos, Denmark) раство- рили в 9,4 г препарата Астрапид НМ, ЮОМЕ/мл (Novo Nordisk), профильтро- вали через стерилизующую мембрану 0.22 мкм и разлили по 1 мл в стериль- ные эппендорфы емкостью 2 мл. Динамическая вязкость раствора 5 мПа-с, коллоидно-осмотическое давление КОД 58 мм рт.ст., гидродинамический диаметр 6,5 нм. Приготовленный 6% раствор обозначен АД70. 1,0 г декстрана (декстран 40 кДа, Pharmacosmos, Denmark) растворили в 9,0 г препарата Актрапид НМ, профильтровали через стерилизующую мембрану 0.22 мкм и разлили по 1 мл в стерильные эппендорфы емкостью 2 мл. Дина- мическая вязкость раствора 7 мПа-с, коллоидно-осмотическое давление КОД 90 мм рт.ст., гидродинамический диаметр 4,8 нм. Приготовленный 10% рас- твор обозначен АД40.
0,8 г ПЭГ 20 кДа (BioUltra, 20,000, Sigma-Aldrich.) растворили в 9,2 г препа- рата Астрапид НМ, профильтровали через стерилизующую мембрану 0.22 мкм и разлили по 1 мл в стерильные эппендорфы емкостью 2 мл. Динамиче- екая вязкость раствора 1 1 мПа-с, коллоидно-осмотическое давление КОД 40 мм рт.ст., гдродинамический диаметр 4,9 нм. Приготовленный раствор обо- значен АП20.
В эксперименте участвовали 4 кролика Шиншилла (вес 3,5+/-0,2 кг, самцы), обозначенные как К1, К2, КЗ, К4. Кроликам подкожно вводили по 50 мкл препаратов (4,6+/-0.1 ME), К1 - исходный инсулин Актрапид НМ (контроль), К2 - АД40, КЗ - АД70, К4 - АП20. Через 15 минут и через 180 минут после введения у кроликов брали 1 мл крови из ушной вены для определения со- держания человеческого инсулина методом иммуно-ферментного анализа (ИФА). В случае признаков гипогликемии содержание глюкозы в крови определяли с помощью переносного глюкометра «ContourTS» (Bayer) и если содержание было ниже 2.0 ммль/л., то животному вводили внутривенно 10 мл 20% рас- твора глюкозы и выводили из эксперимента. Полученные в результате экспе- риментов данные приведены в Таблице 1 Таблица 1. Влияние полимеров на пролонгирующий эффект препарата Ак- трапид НМ опыт Препарат Инсулин( 15мин), Инсулин( 180мин),
мкМЕ/мл мкМЕ/мл
Kl Актрапид НМ 1 17.0 36.8
K2 АД40 59.0 44.1
КЗ АД70 50.9 42.1
К4 АП20 47.8 39.3
Полученные результаты можно интерпретировать как подтверждающие про- лонгированный эффект. Сам эффект не зависит от типа применяемого инсу- лина, хотя его величина может зависеть от разности равновесных концентра- ций мономера, димера и стабилизированного цинком гексамера и оказывать влияние на фармакокинетику инсулина. Это влияние можно объяснить тем, что скорость диффузии мономеров и димеров из депо выше чем таковая для гексамеров и они быстрее покидают депо и абсорбируются капиллярами, расположеными за пределами зоны действия высокого КОД.
Пример 2. 1,0 г декстрана (декстран 40 кДа, Pharmacosmos, Denmark) раство- рили в 9,0 г препарата инсулина пролонгированного действия Хумулин НПХ, 1 ООМЕ/мл (Lilly) (поскольку препарат представляет собой суспензию, профильтровать его через стерилизующую мембрану 0.22 мкм невозможно) и разлили по 1 мл в стерильные эппендорфы емкостью 2 мл. Динамическая вязкость раствора 7 мПа-с, коллоидно-осмотическое давление КОД 90 мм рт.ст., гидродинамический диаметр 4,8 нм. Приготовленный 10% раствор обозначен ХД40.
В эксперименте участвовали 6 кроликов Шиншилла (вес 3,5+/-0,2 кг, самцы), обозначенные как Kl, К2, КЗ, К4, К5, Кб. Кроликам К1,К2,КЗ под- кожно вводили по 50 мкл (4,6+/-0.1 ME) препарата Хумулин НПХ (кон- троль), кроликам К4, К5, Кб подкожно вводили по 50 мкл (4,6+/-0.1 ME) пре- парата ХД40. Через 60 минут и через 1440 минут после введения у кроликов брали 1 мл крови из ушной вены для определения содержания человеческого инсулина методом иммуно-ферментного анализа (ИФА).
Через 60 минут в крови кроликов К1,К2,КЗ содержание человеческого ин- сулина составило 53+/-7 мкМЕ/мл, а в крови кроликов К4, К5, Кб 31 +/-1 1 мкМЕ/мл. Через сутки (1440 минут) кровь кроликов К1,К2,КЗ не содержала человеческого инсулина совсем, в то время как в крови кроликов К4, К5, Кб содержание инсулина было на уровне 14+/-5 мкМЕ/мл.
На основании полученных результатов можно сделать вывод о том, что ХД40 обладает значительно более продолжительным действием, чем Хуму- лин НПХ (контроль) время действия которого составляет 14-16 часов.
Пример 3. 0,5 г декстрана (декстран 70 кДа, Pharmacosmos, Denmark) раство- рили в 9,5 г препарата инсулина НовоРапид, 100 МЕ/мл (Novo Nordisk), профильтровали через стерилизующую мембрану 0.22 мкм и разлили по 1 мл в стерильные флаконы емкостью 2 мл. Динамическая вязкость раствора 5 мПа-с, коллоидно-осмотическое давление КОД 58 мм рт.ст., гидродинамиче- ский диаметр 6,5 нм. Приготовленный раствор обозначен НД70.
1 ,0 г декстрана (декстран 40 кДа, Pharmacosmos, Denmark) растворили в 9,0 г препарата инсулина НовоРапид, профильтровали через стерилизующую мембрану 0.22 мкм и разлили по 1 мл в стерильные флаконы емкостью 2 мл. Динамическая вязкость раствора 7 мПа-с, коллоидно-осмотическое давление КОД 90 мм рт.ст., гидродинамический диаметр 4,8 нм. Приготовленный рас- твор обозначен НД40.
1 ,0 г ПЭГ 20 кДа (BioUltra, 20,000, Sigma-Aldrich) растворили в 9,0 г препа- рата инсулина НовоРапид, профильтровали через стерилизующую мембрану 0.22 мкм и разлили по 1 мл в стерильные флаконы емкостью 2 мл. Динамиче- ская вязкость раствора 10 мПа-с, коллоидно-осмотическое давление КОД 40 мм рт.ст., гидродинамический диаметр 4.9 нм. Приготовленный раствор обо- значен НП20. В эксперименте участвовали 4 кролика Шиншилла (вес 3,5 кг, самцы), обозначенные как К5, Кб, К7, К8. Кроликам подкожно ввели по 50 мкл (4,6+/-0,1 ME), К5 - исходный инсулин НовоРапид (контроль), Кб - НД40, К7 - НД70, К8 - НП20. Через 15 минут и через 180 минут после введения у кроликов брали 1 мл крови из ушной вены для определения содержания че- ловеческого инсулина методом ИФА.
В случае признаков гипогликемии содержание глюкозы в крови определя- ли с помощью переносного глюкометра «ContourTS» (Bayer) и если содер- жание было ниже 2.0 ммоль/л., то животному вводили внутривенно 10 мл 20% раствора глюкозы и выводили из эксперимента. Полученные в результа- те экспериментов данные приведены в Таблице 2
Таблица 2 Влияние полимера на время действия препарата инсулина Ново- Рапид
Figure imgf000014_0001
Полученные результаты можно интерпретировать как подтверждающие пролонгированный эффект. В отличие от человеческого рекомбинантного инсулина входящего в состав препарата Актрапид НМ, инсулин Аспарт явля- ется аналогом инсулина быстрого действия, полученным методом рекомби- нантной технологии, в котором аминокислота пролин в положении В28 за- мещена на аспарагиновую кислоту. Целью такой замены является более бы- страя диссоциация стабилизированных цинком гексамеров до димеров и мо- номеров.
Пример 4. Из трех использованных в эксперименте полимеров для дальней- ших экспериментов были выбраны декстраны с ММ 40кДа и 70 кДа. Такой выбор обусловлен возможностью определения влияния КОД и ММ на эф- фект пролонгирования на человеке.
Для оценки влияния КОД на эффект пролонгации была выделена чистая субстанция инсулина препарата Актрапид НМ. Были приготовлены растворы содержащие фосфатный буфер, хлористый натрий (изтонический раствор, рН 7,2 - 7,4), ЮОМЕ/мл субстанции, 60 мг/мл декстрана ММ 70 кДа и 100 мг/мл декстрана ММ 40 кДа. Растворы были обозначены fl70ZnO и Д40 п0 соот- ветственно.
0,1 мл (10 ME) полученных растворов вводились подкожно (бедро) здоро- вому добровольцу (игла 28.5 G). Контроль уровня глюкозы в крови осущест- влялся каждые 15 минут с помощью переносного глюкометра Contour TS (Bayer).
Исходный уровень глюкозы в крови (после 12 часов без приема пищи) со- ставлял 4.9 ммоль/л в день эксперимента с препаратом Д40 п0 и 5.0 ммоль/л с fl70ZnO. Оба препарата начинали действовать через 60 минут после введе- ния. Препарат fl40Zn0 (КОД 90 мм рт.ст.) продемонстрировал поддержание уровня 3.8+/-0.5 ммоль/л в течение 10 часов, препарат Д70 п0 (КОД 58 мм рт.ст.) 4.0+/-0.6 ммоль/л в течение 8 часов. На основании полученного результата можно сделать вывод о влиянии КОД полимера на пролонгированный эффект. Следует отметить такую важную особенность фармакодинамики обоих препаратов как полное отсутствие низ- ких пиковых значений уровня глюкозы.
Пример 4. В условиях примера 3 для оценки влияния величины объема и до- зы на продолжительность и характер действия препарата была введена доза 15 ME (0,15 мл) препарата Д402п0. Параллельно с оценкой фармакодинами- ки проводилась оценка фармакокинетики, для чего уровень инсулина и С- пептида определялся в клинической лаборатории.
Препарат начинал действовать через 60 минут. Глюкоза поддерживалась на уровне 3,6+/-0,3 ммоль/л в течение 12 часов при отсутствии пиковых зна- чений. Данные по фармакокинетике приведены в Таблице 3.
Таблица 3 Влияние препарата Д40 п0 на фармакокинетику инсулина и С- пептида
Figure imgf000016_0001
Данные по фармакокинетике демонстрируют отсутствие пиковых значений инсулина, что находится в полном согласии с данными по фармакодинамике. Следует отметить, что увеличение дозы не привело к значительному сниже- нию поддерживаемого уровня глюкозы но значительно увеличило эффект пролонгирования по сравнению с дозой 10 ME. Пример 5 . Препарат АД40 (Пример 1) отличается от коммерческого продук- та Актрапид НМ только присутствием фармакопейного декстрана с ММ 40 кДа, который не взаимодействует с компонентами продукта. Целью экспери- мента было сравнить фармакокинетику и фармакодинамику препарата АД40 со свойствами исходного препарата Актрапид НМ и результатами предыду- щего примера. Использовались две дозы препарата АД40 - 10 и 15 ME.
Доза 10 ME препарата АД40 показала начало действия через 60 мин после введения и поддержание безпикового уровня глюкозы 3.3+/-0.3 ммоль/л в те- чение 14 часов. Данные по фармакокинетике представлены в Таблице 4. Таблица 4 Влияние 10 ME препарата АД40 на фармакокинетику инсулина и С-пептида
Figure imgf000017_0001
Доза 15 Ед начала действовать через 60 мин и в течение 22 часов глюкоза поддерживалась на уровне 3.7 +/-0.3 ммоль/л затем в течение 3 часов верну- лась к исходному уровню. Данные по фармакокинетике представлены в Таб- лице 5.
Таблица 5 Влияние 15 ME препарата АД40 на фармакокинетику инсулина и С-пептида
Figure imgf000017_0002
Использованный в эксперименте Актрапид НМ - препарат инсулина ко- роткого действия, произведенный методом технологии рекомбинантной ДНК. Максимальная концентрация (Стах) инсулина в плазме достигается в течение 1.5-2.5 ч после подкожного введения Действие препарата начинается через 30 мин. Максимум действия достигается между 2,5-5 часами после вве- дения. Действие препарата продолжается 7 - 8 часов (данные производителя http://www.medicinform.net/spravka/c/c41.htm).
Анализ полученных результатов показал, что фармакокинетика и фармако- динамика препарата АД40 существенно отличаются от таковых инсулина Актрапид НМ. После введения декстрана ММ 40 кДа раствор стал обладать коллоидным осмотическим давлением (КОД) 90 мм рт.ст., оставаясь изото- ническим раствором по низкомолекулярным компонентам. Это привело к пролонгации действия в два раза для дозы 10 Ед и в три раза для дозы 15 Ед препарата АД40 при полном отсутствие пиковых концентраций.
Как показали вышеприведенные эксперименты, применение вышеука- занных полимеров обеспечивает наличие пролонгированного эффекта препа- ратов инсулина без использования химических или генно-инженерных мето- дов модификации молекулы инсулина . Поскольку метод не является специ- фичным, его можно использовать для широкого спектра терапевтических протеинов.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия, состоящий из препарата инсулина и пролонгирующего агента, отличающийся тем, что в
5 качестве пролонгирующего агента он содержит фармацевтически приемле- мый водорастворимый полимер с гидродинамическим диаметром более 4,5+/-0,5 нанометров.
2. Инсулинсодержащий препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве полимера содержит по крайней мере один полимер с молекулярной массой ю 20-70 кДа, выбранный из группы, в которую входят: декстран, полиэтиленг- ликоль, альбумин.
3. Инсулинсодержащий препарат по п.1, отличающийся тем, что содержание полимера составляет 5-10% масс от массы препарата.
4. Инсулинодержащий препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве 15 препарата инсулина он содержит рекомбинантный человеческий инсулин.
5. Инсулинсодержащий препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве препарата инсулина он содержит рекомбинантный аналог человеческого ин- сулина.
6. Инсулин содержащий препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве 20 препарата инсулина он содержит комплекс рекомбинантного человеческого инсулина с цинком и протамином.
PCT/RU2015/000317 2014-05-22 2015-05-19 Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия WO2015178806A1 (ru)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201580039533.3A CN106794226A (zh) 2014-05-22 2015-05-19 含胰岛素的长效制剂
US15/313,356 US20170136096A1 (en) 2014-05-22 2015-05-19 Insulin-Containing Prolonged-Action Preparation
EP15795367.0A EP3254688A4 (en) 2014-05-22 2015-05-19 Insulin-containing prolonged-action preparation
RU2016121001A RU2676101C2 (ru) 2014-05-22 2015-05-19 Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия
HK18107670.2A HK1248118A1 (zh) 2014-05-22 2018-06-13 含胰島素的長效製劑

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014120626/15A RU2014120626A (ru) 2014-05-22 2014-05-22 Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия
RU2014120626 2014-05-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015178806A1 true WO2015178806A1 (ru) 2015-11-26

Family

ID=54554358

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2015/000317 WO2015178806A1 (ru) 2014-05-22 2015-05-19 Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20170136096A1 (ru)
EP (1) EP3254688A4 (ru)
CN (1) CN106794226A (ru)
HK (1) HK1248118A1 (ru)
RU (2) RU2014120626A (ru)
WO (1) WO2015178806A1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2389503C2 (ru) * 2004-10-05 2010-05-20 Ново Нордиск А/С Фармацевтический препарат, содержащий кристаллический инсулин и растворенный инсулин
RU2508093C2 (ru) * 2008-07-01 2014-02-27 Нитто Денко Корпорейшн Фармацевтическая композиция, содержащая микрочастицы с поверхностным покрытием

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4908350A (en) * 1985-10-31 1990-03-13 The Regents Of The University Of California Hyperosmotic/hyperoncotic solutions for resuscitation of hypodynamic shock
JPH01287041A (ja) * 1988-05-13 1989-11-17 Rooman Kogyo:Kk 徐放性製剤
GB2237510B (en) * 1989-11-04 1993-09-15 Danbiosyst Uk Small particle drug compositions for nasal administration
US5416071A (en) * 1991-03-12 1995-05-16 Takeda Chemical Industries, Ltd. Water-soluble composition for sustained-release containing epo and hyaluronic acid
US6284727B1 (en) * 1993-04-07 2001-09-04 Scios, Inc. Prolonged delivery of peptides
US7303768B2 (en) * 1998-07-24 2007-12-04 Seo Hong Yoo Preparation of aqueous clear solution dosage forms with bile acids
SE9904121D0 (sv) * 1999-11-15 1999-11-15 Gustaf Jederstroem Hydrophobe biomolecular structure
CN100345535C (zh) * 2000-06-27 2007-10-31 株式会社Mitech 胰岛素控释制剂及其方法
FR2822834B1 (fr) * 2001-04-02 2005-02-25 Flamel Tech Sa Suspension colloidale de nanoparticules a base de copolymeres amphiphile pour la vectorisation de principes actifs et leur mode de preparation
AU2002346491A1 (en) * 2001-12-19 2003-07-09 Eli Lilly And Company Crystalline compositions for controlling blood glucose
US20030211976A1 (en) * 2002-03-07 2003-11-13 Andreasen Kasper Huus Polyamino acid-based particle insulin formulation
US20040005999A1 (en) * 2002-03-07 2004-01-08 Andreasen Kasper Huus Polyamino acid-based particle insulin preparation
US20040234615A1 (en) * 2003-03-04 2004-11-25 The Technology Development Company Ltd. Oral insulin composition and methods of making and using thereof
US8679540B2 (en) * 2006-06-09 2014-03-25 Flamel Technologies Pharmaceutical formulations for the prolonged release of active principle(s), and their applications, especially therapeutic applications
EP2017288A1 (en) * 2007-07-16 2009-01-21 Novo Nordisk A/S Protease stabilized, pegylated insulin analogues
EA013569B1 (ru) * 2009-02-24 2010-06-30 Ооо "Научно-Производственный Комплекс "Наносистема"" Фармацевтическая композиция рифабутина для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных helicobacter pylori, способ ее получения и способ лечения
US20120094902A1 (en) * 2009-03-27 2012-04-19 Adocia Fast-acting insulin formulation
CN102397535B (zh) * 2010-09-15 2013-08-28 中国科学院生物物理研究所 胰岛素结晶微球、其混悬剂、以及制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2389503C2 (ru) * 2004-10-05 2010-05-20 Ново Нордиск А/С Фармацевтический препарат, содержащий кристаллический инсулин и растворенный инсулин
RU2508093C2 (ru) * 2008-07-01 2014-02-27 Нитто Денко Корпорейшн Фармацевтическая композиция, содержащая микрочастицы с поверхностным покрытием

Also Published As

Publication number Publication date
RU2014120626A (ru) 2015-11-27
RU2676101C2 (ru) 2018-12-26
RU2016121001A3 (ru) 2018-06-22
HK1248118A1 (zh) 2018-10-12
EP3254688A1 (en) 2017-12-13
US20170136096A1 (en) 2017-05-18
EP3254688A4 (en) 2018-03-14
RU2016121001A (ru) 2018-06-22
CN106794226A (zh) 2017-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10335489B2 (en) Injectable solution at pH 7 comprising at least one basal insulin the pi of which is between 5.8 and 8.5 and a substituted co-polyamino acid
RU2533217C2 (ru) Препарат, содержащий инсулин, никотинамид и аминокислоту
Gilroy et al. Controlled release of biologics for the treatment of type 2 diabetes
EP1965823B1 (en) Methods for administering hypoglycemic agents
ES2397659T3 (es) Mezclas de amilina e insulina
CN104080473A (zh) 包含胰岛素氨基酸序列的治疗剂
BR122013025625A2 (pt) combinação de uma insulina e um agonista de glp-1, medicamento, kit, uso e dispositivo
ES2886837T3 (es) Composiciones farmacéuticas que contienen insulina
WO2012080320A1 (en) Fast-acting insulin in combination with long-acting insulin
JP2021185201A (ja) コラーゲン７組成物及びそれを用いる方法
KR20140030125A (ko) 인슐린, 니코틴아미드 및 아미노산을 포함하는 제제
RU2676101C2 (ru) Инсулинсодержащий препарат пролонгированного действия
Chen et al. An overview of hypoglycemic biological drugs
EA031390B1 (ru) Система длительного высвобождения гидрофобных белков на основе амида гиалуроновой кислоты
Niloy et al. Injectable systems for long-lasting insulin therapy
KR20230078942A (ko) 인슐린을 포함하는 초 장시간 작용형 의약 조성물
Oak et al. Quest for superior insulins
Brown Biomaterials in Their Role in Creating New Approaches for the Delivery of Drugs, Proteins, Nucleic Acids, and Mammalian Cells in Safety Pharmacology
KR20140015264A (ko) 서방성 의약 조성물
Erkekoglu et al. Toxicological Evaluation of Insulin Detemir/TÜRKÇE BASLIK EKSIK

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15795367

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15313356

Country of ref document: US

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2015795367

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016121001

Country of ref document: RU

Kind code of ref document: A