WO2015144997A1 - Composition cosmetique et/ou dermatologique pour la coloration de la peau - Google Patents

Composition cosmetique et/ou dermatologique pour la coloration de la peau Download PDF

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Michaël PAILLASSE
Philippe De Medina
Sandrine Silvente-Poirot
Marc Poirot
Muriel Blanzat
Isabelle RICO -LATTES
Emile Perez
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Affichem
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Definitions

  • the invention relates to a cosmetic and / or dermatological composition for use in coloring the skin.
  • Tanning by the solar radiation generates, in the superficial layers of the skin, an increase in melanin, which is not the case with current self-tanning products; this results in a significant difference in the colorations obtained by self-tanning products, even homogeneous, those obtained under the effect of solar radiation.
  • melanocyte-stimulating hormone SSH
  • melanosomes which are matured in melanocytes and transported in multiple melanocyte indentations (see Nature Reviews, Molecular Cell Biology, Vol.2, October 2001, pp. 1-11).
  • the melanosomes thus transported are transferred to the keratinocytes of the skin, which allows the migration of melanin in the successive layers of the skin to the stratum corneum and a subsequent browning of the skin. It therefore appears that, in order to increase the browning of the skin, it is preferable to stimulate the natural production of melanin and to act on the transfer of melanosomes from the melanocytes to the keratinocytes.
  • the implementation of a catanionic combination according to the patent application WO 2011/039379, in which the aforementioned sterol derivative is associated to a surfactant, the association between the two molecules being obtained by acid-base reaction and the asset constituting an amphiphilic counterion with therapeutic properties.
  • the carrier / active association is linked by electrostatic interactions, which allows easy release of the active agent into the tissues and spreading of the cosmetic effect by a delay relative to the separation of the active ingredient.
  • the carrier can play a triple role: facilitate the passage of the asset, have a clean cosmetic action on the skin cells and have a delay action for the release of the asset.
  • the carrier / active assembly associates a positive ionization group of the active with the acid group of the carrier.
  • the active agent may therefore be associated with the carrier by the substituent R 3 carried by the carbon 6 of the cholesterol skeleton of the compound of formula (I) defined below.
  • the subject of the present invention is therefore a cosmetic composition that can be applied topically to brown the skin of a human subject, with or without irradiation with ultraviolet rays, characterized in that it contains, in a cosmetically transported vehicle. acceptable, an aqueous solution of at least one compound of formula (I):
  • Ri represents a hydrogen atom or Ri 0 -CO, Rio representing H, CH 3 or C 2 H 5 ,
  • R 2 represents a hydrogen atom or OH
  • R 3 is X- (CH 2 ) n -Y, where n is an integer of 1 to 4, X is S, O or NH, and Y is NH 2 , imidazol-5-yl, indol-3-yl; , piperidine-2- yl, piperidin-3-yl, piperidin-4-yl, piperazin-2-yl, piperazin-3-yl, pyridin-2-yl, pyridin-3-yl or pyridin-4-yl,
  • R 4 represents a hydrogen atom or OH in positio 20, 22, 24, 25, 26 or 27 on the core shown above to define the formula (I), OH being positioned so as to obtain an asymmetric center of conformation R or S, ⁇ and Z 2 represent the possibility of having between the carbons C7 and. C8, on the one hand, and the carbons C22 and C23, on the other hand, single or double bonds,
  • Ti, T 2 , T 3 are, independently of one another, H or CH 3 in O or S, T is H, CH 3 or C 2 H 5 positioned to form an asymmetrical center of conformation R or S.
  • the composition contains from 0.01 to 500 g / l of compound (s) of formula (I).
  • the composition contains at least one browning compound other than the compound (s) of formula (I).
  • the browning compound (s) it contains, independently of the compound (s) of formula (I), is dihydroxyacetone and / or Erythrulose and / or at least one water-soluble dye.
  • the composition contains at least one activating compound for melanogenesis other than the compound (s) of formula (I) chosen from the group formed by the substrates of the biosynthesis of melanin and biological activators of melanogenesis capable of acting by stimulating melanin synthesis and / or melanosome transfer from melanocytes to keratinocytes.
  • said activator (s) is (or are) chosen from the group formed by L-tyrosine, or its derivatives such as N-acetyl-L-tyrosine, L-dihydrophenylalanine, aliphatic diols such as propylene glycol, cyclic diols, adenosine-1 receptor agonists, adenosine-2 receptor agonists, ⁇ -hydroxy acids and their derivatives, ⁇ -hyroxyacids and their derivatives, retinoids or their derivatives, pro-opiomelanocortic peptides, ⁇ ' ⁇ -MSH or its analogs, MC1R receptor agonists, cAMP analogues, psoralens, activators of PAR-2 receptor activity.
  • L-tyrosine or its derivatives such as N-acetyl-L-tyrosine, L-dihydrophenylalanine, aliphatic diols such as propylene glycol, cyclic
  • the composition is applied to the skin in an amount of between 0.0001 and 100 mg / cm 2 / day of compound (s) of formula (I).
  • the invention also proposes to improve the. transporting the compound (s) of formula (I) to the keratinocytes of the skin by associating with this compound (s) at least one acidic amphiphilic transporter (T), to constitute catanionic association complexes by electrostatic interactions.
  • the composition therefore contains an ionic solution of catanionic association complexes, each association of which consists of a molecule of formula (I) and one or two molecules of an acidic amphiphilic transporter (T).
  • a catanionic association is carried out by at least one acid-base reaction carried out between the acid group of a transporter (T) and an amino group of the substituent R 3 of the carbon in position 6 of the formula (I).
  • the transporter (T) is a sugar-derived bolaforme surfactant comprising within its structure an acid function.
  • the acid function of the transporter (T) is chosen from the group consisting of carboxylic acids COOH, sulfuric acid 0- SO 3 H, sulphonic acid SO 3 H, phosphoric acid OP (O) (R 5 0 ) OH, where R 5 is a C 1 -C 6 alkyl, phosphine O-P (O) R 6 OH and phosphinic chain P (O) R 6 OH where R 6 is H or a C 1 -C 6 alkyl chain .
  • the sugar derivative is a monosaccharide or polysaccharide derivative.
  • the sugar derivative contained in the composition is a glucose or lactose derivative.
  • the acid derivative of sugar consists of a sugar structure to which is connected by a group H, a linear or branched aliphatic chain (CH 2 ) P , the opposite end of which at the sugar structure carries a acid group, p being an integer having a value of between 4 and 10.
  • the ratio of the weight amounts A of compound (s) of formula (I) and B of the carrier (s) (T) is between 0.001 and 1000.
  • the composition contains from 0.01 to 150 g of all the constituents A and B per liter of composition.
  • the composition comprises at least one adjuvant taken from the group consisting of at least one thickener and / or a water-soluble dye and / or a perfume and / or an alcohol and / or a vitamin and / or an emulsifier, used alone or in a mixture with optionally a co-emulsifier, and / or an oil or other fatty substance and / or a preservative and / or an antioxidant and / or a bactericide.
  • at least one adjuvant taken from the group consisting of at least one thickener and / or a water-soluble dye and / or a perfume and / or an alcohol and / or a vitamin and / or an emulsifier, used alone or in a mixture with optionally a co-emulsifier, and / or an oil or other fatty substance and / or a preservative and / or an antioxidant and / or a bactericide.
  • the composition contains at least one chemical or physical solar filter, or a mixture of such filters.
  • ⁇ the composition is packaged in nanocapsules or catanionic vesicles nanosized suspended in a liquid medium.
  • the composition is packaged in the form of hydrogels, creams, lotions, emulsions or aerosols.
  • FIG. 1 represents the IR spectrum corresponding to the product obtained in example 3;
  • FIG. 2 represents the NMR spectrum corresponding to the product obtained in example 3;
  • FIG. 3 illustrates the results obtained in example 5.
  • FIG. 4 illustrates the results obtained in example 6
  • FIGS. 5a, 5b, 5c show a visualization of melanosomes in treated cells according to Example 7;
  • FIG. 6 shows the result of a treatment according to example 8 for the expression of the genes in the treated cells
  • FIG. 7 shows the result of a treatment according to Example 9 as regards the modulation of proteins, this result being visualized by a "Western Blot” technique
  • FIGS. 8 and 9 show the result of a treatment with compositions according to the invention on a reconstituted skin
  • FIG. 10 shows the result of a treatment according to example 10 on the modulation of proteins involved in melanogenesis
  • FIG. 11 shows the quantities of melanin synthesized on a reconstituted skin sample after application of a composition according to Examples 12 and 13, said quantities and skin samples being defined as described in Example 10.
  • DDA dexadazol-4-yl
  • Meta-chloro-peroxybenzoic acid (0.73 g, 4.25 mmol, purity 70-75% by weight) is dissolved in methylene chloride (10 ml) and added dropwise, with stirring, to a mixture of cholesterol (1 g, 2.5 mmol) dissolved in methylene chloride (25 ml). The agitation is maintained all night.
  • the reaction mixture is washed with an aqueous solution of sodium sulphite (10% by weight) and sodium hydrogen carbonate (5% by weight) and a saturated solution of a mixture of sodium chloride and potassium chloride.
  • the organic phase is dried over anhydrous magnesium sulfate. The evaporation under vacuum of the organic solvent makes it possible to obtain 0.7 g of white needles (yield 70%).
  • the solution is pre-purified on a grafted silica cartridge ("sep-pack cartridge RP C18", 500 mg, Waters); the excess polyamine is removed by passing water on the cartridge (5 ml); the product is eluted with a mixture CH 3 CN 1 / H 2 0 1 (5 ml).
  • the product obtained is first characterized by thin layer chromatography (methanol). Then, a high performance chromatography (HPLC) was carried out on a "Perkin-Elmer LC200 series" apparatus equipped with an "Ultrasep ES100RP10" column (particles of 6 ⁇ ), with a length of 250 mm and a diameter of 8 mm. manufactured by the company "Bishoff".
  • step a) of Example 1 a mixture of sitosterol and campesterol (70/30 by weight). The same amine as in example 1, step b) is used for the reaction on the epoxysterol obtained.
  • R 3 ⁇ 4 (300MHz, MeOD) ⁇ ppm: 1, 05-2, 15 (m, 10H, CH 2E, 2Y CH, CH 25, CH 2 £, ⁇ 2 ⁇ ); 2.17 (t, 2H, CH 2 - );
  • the product obtained is a pale yellow powder; it is hereinafter called L7DDA since it consists of an L7 molecule associated with a DDA molecule.
  • the NMR spectrum is provided in Figure 2; it shows the formation of the ion pair which associates an L7 molecule and a DDA molecule.
  • the chemical shift of the CH 2 group in alpha to COOH carboxylic acid moiety is different from the alpha carboxylate group COO "in this example, CH 2 -COOH present a chemical shift of 2,17ppm, while CH 2 -COO " has a chemical shift of 2.21ppm.
  • step b) causes the characteristic band of the carboxylic acid function to disappear between 1800 and 1650 cm -1 in favor of two new bands in the 1610-1550 cm -1 region. (asymmetric elongation of COO " (carboxylate group)) and 1450-1400 cm “ 1 (symmetrical elongation of COO " (carboxylate group).)
  • Figure 1 the disappearance of the characteristic band of the carboxylic acid function at 1726 cm “1 and the appearance of bands of symmetrical and asymmetrical stretching of the carboxylate group respectively to 1549 cm" 1 and 1403 cm "1.
  • CAC ritical Aggregation Concentration
  • Example 3 The same process as that of step b) of Example 3 can be used to form an association complex between an acidic amphiphilic carrier according to Example 3a2) and any one of the compounds of formula (I) since all these compounds comprise at least one NH group allowing a bond with the acid function of the carrier.
  • a mixture of complexes was obtained by combining the product of Example 2 with that of Example 3a2): this mixture was designated hereinafter under the name L7AF130.
  • the carrier / active assembly associates a positive ionization group of the active with the acid group of the carrier.
  • the active agent may therefore associate with the transporter by the substituent R 3 carried by the carbon 6 of the compound of formula (I).
  • two L7 transporter molecules can be associated with two amino functions of the substituent R 3 . From the process for obtaining Example 3b, it is sufficient to mix, in water at room temperature, two equivalents of L7 molecule for one equivalent of the active agent, in the same way as described above. in example 3b. Again, the mixture is initially a suspension, but becomes a clear solution, which shows that the resulting complex, hereinafter referred to as (L7) 2 (AF130) or (L7) 2 (DDA) according to the active ingredient, is water-soluble .
  • the cells are inoculated and are treated for 24 hours with the tested product or the vehicle used (ethanol) and with, as a positive control, exposure to a dose of ultraviolet radiation of 20 mJ / cm 2 .
  • the results are provided in FIG. 4. It is seen that the tyrosinase activity in the cells is, when compared to the control, increased when the cells have been treated with a composition containing the DDA active, with or without an associated L7 transporter or containing the associated AF130 active for each molecule with two L7 carrier molecules. It is also seen that an increase in tyrosinase activity goes hand in hand with an increase in melanin synthesis in the cell.
  • Healthy murine melanocytes were treated as shown in Example 6 using untreated or treated cells with ⁇ AF130 or ⁇ (L7) 2 AF130.
  • the synthesis of melanin was visualized by a staining according to the DAPI technique: the nuclei of the fluorescent cells in blue and, in contrast, the melanosomes, which are visualized in black, are highlighted.
  • Figure 5a corresponds to the visualization of untreated cells 5b in the display cells treated ⁇ of AF130 and 5c, visualization of cells treated with ⁇ of (L7) 2 AF130 is evident that the amount melanosomes and thus the melanin synthesis is considerably increased by a treatment according to Example 6 (comparison with Figure 5a).
  • the DAPI technique is implemented as follows: the cells are seeded on slides previously sterilized by washing with ethanol; they are treated with the active molecule studied or with a vehicle used (ethanol). After 24h treatment, the cells are fixed with a solution of formaldehyde diluted to one tenth (3.7% by weight) in PBS, for 15 minutes, at room temperature. The formaldehyde is then removed and the cells are washed with PBS. ⁇ a DAPI solution at l / 500th the Mowiol (mounting solution) are deposited on a slide. The coverslip is placed on the drop, the cells to be between blade and coverslip. The slides are placed at 4 ° C for the night before being observed. For each sample, a snapshot in "DAPI" mode is performed, allowing only the visualization of the cores as well as the same snapshot in "visible” mode. The two shots are then superimposed.
  • the cells are seeded and treated for 24 hours with the molecules whose action we want to study, that is to say here, with the DDA ( ⁇ ), on the one hand, and with the L7DDA (0.1 or 1 or 2.5 or 5 ⁇ ), on the other hand.
  • the results were compared with ultraviolet-irradiated cells as in Example 6.
  • Figure 6 shows the ordinate expression of genes corresponding to tyrosinase, TRP-1 and TRP-2.
  • RNA is extracted from the cells.
  • the melanocytes are treated for 24 hours with the active molecule or with the control agent.
  • LmL of Trizol- 8 is added after 5 minutes at room temperature, the whole is recovered in an Eppendorf tube.
  • 200 ⁇ l of CHCl 3 are added at 4 ° C.
  • the Eppendorf tubes are manually shaken, inverted for 15 seconds, left for 5 minutes at room temperature, and then centrifuged at 16000 g at 4 ° C for 10 minutes.
  • the colorless aqueous phase is isolated.
  • 500 L of isopropanol (-20 ° C) are added.
  • the Eppendorf tubes are manually shaken, inverted for 15 seconds, left for 15 minutes at room temperature, and then centrifuged at 16200 g at 4 ° C for 10 minutes. The supernatant is removed. The pellet is washed with 1 mL of 75% ethanol (-20 ° C). After centrifugation at 16000g at 4 ° C for 5 minutes, the supernatant is removed. After 10 min of drying, the pellet is taken up with 30 L of water without RNase. The quantity and purity of the RNAs is estimated spectrophotometrically (230, 260 and 280 nm).
  • RT-qPCR is performed; in an Eppendorf tube, the following are introduced: ⁇ , reverse transcriptase, 4 ⁇ L of 5x reaction mixture "iScript®5x", the amount of water without RNase necessary to arrive at an overall volume of 20 / L and the corresponding volume at 1 g of RNA.
  • the Eppendorf tubes are then vortexed, centrifuged for a few seconds and then placed in the thermal cycler (program: 5 minutes at 25 ° C., then 30 minutes at 42 ° C., then 5 minutes at 85 ° C. and then return at 4 ° C.).
  • the reference genes are: glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase and Cyclophilin A1.
  • the genes of interest are Tyrosinase, TRP-1 and TRP-2.
  • a mixture is prepared with RNase-free water, Sybr Green® and the corresponding primer.
  • the cDNAs previously obtained are taken up with 18 C ⁇ L of water without RNase.
  • Five ⁇ L of cDNA are introduced at the bottom of each well. 20 liters of mixture are introduced at the edge of each well.
  • the plate is then covered with a sticky plastic and centrifuged at 4000 rpm until there is no bubble.
  • the plate is then placed in the thermocycler: 95 ° C. for 3 minutes, followed by 50 cycles of dry amplification at 95 ° C. then one minute at 60 ° C. At the end of these 50 cycles, the melting curves are generated at 95 ° C for 1 min and 95 ° C for 10 sec (80 cycles). It is thus possible to show, in FIG. 6, the stimulation of the expression of genes for the various products studied. The numerical results obtained are given in the table below.
  • DDA and L7DDA cell treatments provide results showing that the enzymes involved in melanogenesis are stimulated as much as with UV irradiation.
  • Example 9 Effect on Modulation of Proteins Involved in Melanogenesis (Western Blot)
  • the treatment to be studied is performed on healthy murine melanocytes.
  • the treatments are carried out with the compound DDA at ⁇ and with the compounds L7DDA, (L7) 2 DDA and (L7) 2 AF130 at ⁇ also.
  • the positive control is carried out with cells having received a UV radiation dose of 20mJ / cm 2 .
  • the reference protein is actin (43KDa). After 24 hours of treatment, the cells are scraped in cold PBS (4 ° C.) and then centrifuged at 1500 rpm at 4 ° C. for 5 minutes. The supernatant is removed.
  • samples are prepared for deposition on SDS-PAGE gel (samples prepared at 10 ⁇ L): 10 ⁇ L, ie 10 ⁇ g of proteins are deposited, for each sample.
  • membranes After transferring the liquid phase freeze proteins on a membrane of polyvinylidene fluoride, membranes are incubated with the primary antibody of interest (Tyrosinase: l / 2000th, Actin: l / e 10000, TRP-2: l / 2000 e ), then with the secondary antibody directed against the gene of interest (in all cases, at 1/1000 e ), coupled HRP (horseradish proxidase). Finally, after a 5mn incubation with lml / ECL membrane (enhanced chemiluminescence), the membranes are revealed in a dark room. This information is identically used for carrying out the tests detailed in Example 11 below (results in FIG. 10).
  • Example 10 Treatment on reconstituted skin
  • the epidermis is changed medium every day before the treatment to be studied.
  • the treatment consists in adding in the medium, twice a day for five days, ⁇ of the treatment product.
  • the epidermis is isolated and placed in an Eppendorf tube with 400 ⁇ of a "Solvable" reagent (supplied by Perkin-Elmer), then heated at 100 ° C for 1h.
  • the absorbance is measured at 490 nm.
  • the brownings of the epidermis at the end of treatment are studied by histology by highlighting the melanin deposits in the treated epidermis.
  • the tissues are placed in a solution of formaldehyde at 4% and then included in paraffin and cut. Fontana-Masson staining (silver-based silver nitrate method) evidence in black melanin deposits. Observation of the sections under an optical microscope makes it possible to obtain the snapshots of FIG.
  • Example 11 Study of the modulation of different proteins involved in melanogenesis on a reconstituted skin model.
  • Example 9 Details of the method used have already been provided in Example 9 (GP100: 1/500 e , TRP-1: 1/1000 e , Rab27a: 1/500 e ).
  • results are shown in FIG. 10 and show that the tyrosinase and the proteins involved in melanogenesis TRP-1 and GP100 (key protein of the biogenesis of melanosomes) are more strongly stimulated by the treatment with a composition according to the invention than by UV exposure.
  • Rab27a a protein involved in the transfer of melanosomes, from melanocytes to keratinocytes is more strongly stimulated by treatment with catanionic associations.
  • Examples 12 to 22 describe compositions according to the invention used in application on reconstituted human skins such as those used in Examples 10 and 11.
  • the compounds are, depending on the case, indicated in chemical names or INCI names (International Nomenclature of Cosmetic Ingredients) and the quantities indicated are percentages by weight (percentage in active ingredient for DDA and catanionic associations).
  • the reconstituted skin models are treated twice daily for three days with 2 mg / cm 2 of the formulations described below (Examples 12 to 22). The results are shown in Figure 11.
  • EXAMPLE 12 The composition, the formulation of which is given below, is a hydroalcoholic gel prepared as follows: water and ethanol are first mixed, hydroxypropylcellulose is introduced therein, stirred until dissolution is complete. then the other constituents are added with stirring.
  • EXAMPLE 13 The composition, the formulation of which is given below, is a hydroalcoholic gel prepared and used as in Example 12:
  • EXAMPLE 14 The composition, the formulation of which is given below, is a hydrogel prepared as in Example 12, excluding ethanol, which is absent in the formulation. Hydroxyethylcellulose (sold under the name
  • Example 15 The composition, the formulation of which is given below, is a hydrogel prepared as in Example 14.
  • EXAMPLE 16 The composition, the formulation of which is given below, is a hydrogel prepared as in Example 14.
  • EXAMPLE 17 The composition, the formulation of which is given below, is a hydrogel prepared as in Example 14.
  • EXAMPLE 18 The composition, the formulation of which is given below, is a hydrogel prepared as in Example 14.
  • EXAMPLE 19 The composition, the formulation of which is given below, is a hydrogel prepared as in Example 14.
  • Example 20 The composition, the formulation of which is given below, is an emulsion prepared as follows; An aqueous phase A is prepared:
  • An oil phase B is prepared: Paraffin oil 7.5
  • Coco caprylate (sold under the name
  • a phase C is prepared
  • Phase B is heated to 80 ° C and phase A is heated to the same temperature. Phase B is slowly introduced with rapid stirring into phase A. The mixture is homogenized and cooled with slow stirring: phase C is added when the temperature is below 40.degree.
  • Example 21 The composition, the formulation of which is given below, is an emulsion prepared as follows; An aqueous phase A is prepared:
  • An oil phase B is prepared:
  • Coco caprylate (sold under the name
  • phase C is prepared:
  • Phase B is heated to 70 ° C and phase A is heated to the same temperature. Phase B is slowly introduced with rapid stirring into phase A. The mixture is homogenized and cooled with slow stirring. Phase C is added when the temperature is below 40 ° C.
  • Example 22 The composition, the formulation of which is given below, is a dry oil prepared as follows:
  • phase A is prepared:
  • Cocoglycerides sold under the name
  • phase B is prepared:
  • Phase B is introduced into phase A with stirring and homogenized.
  • the skin samples have a natural, tanned, homogeneous and durable color.
  • the intensities of self-tanning effects are obtained by Fontana-Masson staining of histological sections and are summarized in the table below.

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Abstract

Cette composition contient une solution aqueuse de certains éléments d'une famille de dérivés stérol, qui apportent une amélioration du brunissement de la peau grâce à une pénétration importante de leurs molécules. De préférence, la composition contient aussi une solution ionique de complexes d'association catanionique constituant un transporteur amphiphile acide.

Description

COMPOSITION COSMETIQUE ET/OU DERMATOLOGIQUE POUR LA
COLORATION DE LA PEAU
L' invention concerne une composition cosmétique et/ou dermatologique destinée à être utilisée pour la coloration de la peau.
Les bienfaits du soleil sont bien connus : il dope le moral et favorise la synthèse de la vitamine D. Cependant, on sait également que toutes les expositions au soleil non protégées constituent un danger pour la peau. C'est pourquoi on a fait en sorte qu'il ne soit plus nécessaire de s'exposer au soleil ou de procéder à des séances d' irradiation aux rayons ultra-violets dans des cabines appropriées pour obtenir une peau bronzée ; on a donc proposé des produits pour préserver le « capital soleil » du corps humain, c'est-à-dire la quantité de rayonnement qu' il peut supporter sans dommage irréversible .
Pour répondre à cette demande de l'industrie cosmétique, on a proposé de nombreuses solutions topiques de produits autobronzants tels que la dihydroxyacétone (DHA) ou l' érythrulose , qui permet d'obtenir une peau bronzée, sans exposition aux rayonnements nocifs. La coloration obtenue résulte de la combinaison entre le produit autobronzant et les acides aminés constitutifs des protéines des cornéocytes de la couche cornée de la peau selon la réaction de Maillard (réaction non enzymatique) induisant à la surface de la peau, la formation de produits colorés. Ces colorations apparaissent au bout de quelques heures mais disparaissent assez rapidement et ne sont pas, en général, réparties de façon homogène sur la peau. Le bronzage par le rayonnement solaire génère, dans les couches superficielles de la peau une augmentation de la mélanine, ce qui n'est pas le cas avec les produits autobronzants actuels ; il en résulte une différence sensible des colorations obtenues par les produits autobronzants, même homogènes, de celles obtenues sous l'effet du rayonnement solaire.
On sait, par ailleurs, que le brunissement dû à l'augmentation de la mélanine dans l'ensemble des couches superficielles de la peau réduit l'impact des brûlures de la peau des sujets ayant déjà subi une exposition excessive. On a déterminé que, sous l'effet des ultraviolets, les kératinocytes sécrètent l'hormone aMSH (melanocyte-stimulating hormone) , qui se fixe aux mélanocytes via des récepteurs, ce qui a pour conséquence une augmentation de l'AMP cyclique intracellulaire et stimule la production de mélanine. La mélanine est stockée dans des structures vésiculaires appelées mélanosomes, qui subissent une maturation dans les mélanocytes et sont transportés dans les multiples indentations des mélanocytes (voir Nature Reviews, Molecular Cell Biology, Vol. 2, Octobre 2001, p. 1-11). Les mélanosomes ainsi transportés sont transférés vers les kératinocytes de la peau, ce qui permet la migration de la mélanine dans les couches successives de la peau jusqu'au stratum corneum et un brunissement consécutif de la peau. Il apparaît donc que, pour augmenter le brunissement de la peau, il est préférable de stimuler la production naturelle de mélanine et d'agir sur le transfert des mélanosomes depuis les mélanocytes vers les kératinocytes . Concernant le premier mode d'action susmentionné, on a déjà proposé d'appliquer sur la peau par voie topique un lait cosmétique enrichi en acide glycyrrhétinique . L'effet d'un tel produit est cependant limité car la stimulation de la mélanogénèse est très faible, voire nulle, sur un modèle in vitro (Jung et al, Exp. Mol. Med. 2001, 33, 131). On a également proposé, pour augmenter la synthèse de mélanine, d'utiliser un implant sous -cutané constitué par un analogue de l'hormone -MSH précitée, à savoir 1 ' afamélanotide , mais cette mise en œuvre par implant ne peut pas être considérée comme compatible avec un usage usuel en cosmétique : il s'agit en fait d'un dispositif médical, utile notamment pour traiter le vitiligo.
Dans la demande de brevet WO 03/089449, on a décrit de nouveaux dérivés de stérols ; cette demande de brevet indique que les composés nouveaux qu'elle décrit tendent à redifférencier des cellules tumorales, qui se sont dédifférenciées au cours de leur transformation maligne. L'homme du métier en déduit donc que ces composés ont une action qui n'a aucun intérêt si l'on cherche à agir sur une cellule normale différenciée ; il ne chercherait donc pas à les utiliser en cosmétique pour obtenir le brunissement d'une peau ne comportant aucune transformation maligne, bien que l'on ait mentionné que certains de ces dérivés étaient efficaces pour stimuler la sécrétion de mélanine dans des cellules de mélanomes (de Médina et al. J.Med.Chem., 2009, 52, 7765). Or, on a constaté maintenant, selon l'invention, que si l'on utilisait les composés susmentionnés dans des compositions délivrées par voie topique et bien que la peau constitue un obstacle majeur à la pénétration de molécules actives, on obtenait, de façon surprenante, une amélioration sensible du brunissement de la peau grâce à une pénétration importante de certaines molécules de la demande de brevet WO 03/089449, à leur stabilité après pénétration et à leur photo- stabilité après une exposition solaire.
Néanmoins, pour améliorer la pénétration cutanée de ces dérivés de stérols, on a également proposé selon l'invention, la mise en œuvre d'une association catanionique selon la demande de brevet WO 2011/039379, dans laquelle le dérivé de stérol susmentionné est associé à un tensioactif, l'association entre les deux molécules étant obtenue par réaction acido-basique et l'actif constituant un contre-ion amphiphile doté de propriétés thérapeutiques. L'association transporteur/actif est liée par des interactions électrostatiques, ce qui permet un relarguage facile de l'actif dans les tissus et un étalement de l'effet cosmétique par un retard relatif à la séparation de l'actif. En d'autres termes, le transporteur peut jouer un triple rôle : faciliter le passage de l'actif, avoir une action cosmétique propre sur les cellules de peau et avoir une action retard pour le relarguage de l'actif. L'assemblage transporteur/actif permet d'associer un groupe à ionisation positive de l'actif avec le groupe acide du transporteur. L'actif peut donc s'associer au transporteur par le substituant R3 porté par le carbone 6 du squelette cholestérol du composé de formule (I) ci- après défini.
II convient, au surplus, de mettre en lumière le fait que les composés décrits dans la demande de brevet WO 03/089449 ont une action anticancéreuse et que ceux d'entre eux qui, selon l'invention, sont susceptibles d'entraîner un brunissement comme ci-dessus indiqué, se trouvent dans les zones de peau soumises à l'exposition, solaire et sont donc en place dans les sites irradiés où un accident pourrait se produire, ce qui leur permettrait alors de jouer, le cas échéant, leur rôle anticancéreux.
La présente invention a, en conséquence, pour objet une composition cosmétique applicable par voie topique pour assurer un brunissement de la peau d'un sujet humain, avec ou sans irradiation aux rayons ultraviolets, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un véhicule cosmétiquement acceptable, une solution aqueuse d'au moins un composé de formule (I) :
Figure imgf000006_0001
formule dans laquelle
Ri désigne un atome d'hydrogène ou Ri0-CO, Rio représentant H, CH3 ou C2H5,
R2 représente un atome d'hydrogène ou OH,
R3 représente un groupe X-(CH2)n-Y, n étant un entier compris entre 1 et 4, X représentant S,0 ou NH, et Y représentant NH2, imidazol-5-yl, indol-3-yl, pipéridin-2- yl, pipéridin-3 -yl , pipéridyn-4 -yl , pipérazin-2-yl, pipérazin-3-yl, pyridin-2-yl, pyridin-3-yl ou pyridin-4- yi,
R4 représente un atome d'hydrogène ou OH en positio 20 , 22 , 24 , 25 , 26 ou 27 sur le noyau représenté ci-dessus pour définir la formule (I), OH étant positionné de façon à obtenir un centre asymétrique de conformation R ou S, χ et Z2 représentent la possibilité d'avoir entre les carbones C7 et. C8, d'une part, et les carbones C22 et C23, d'autre part, des liaisons simples ou doubles,
Ti , T2 , T3 sont, indépendamment l'un de l'autre, H ou CH3 en OÎ ou S, T est H, CH3 ou C2H5 positionné de façon à former un centre asymétrique de conformation R ou S .
Selon un premier aspect de l'invention, la composition contient un mélange des deux composés de formule (I) dans la formule desquels R1=R4=Ti=T2=T3=H, R2=OH, R3=NH- (CH2) 2 - imidazol - 5 -yl et T4=CH3 ou C2H5.
Selon un autre aspect de l'invention, la composition contient de 0,01 à 500 g/L de composé (s) de formule (I) .
Selon un autre aspect de l'invention, la composition contient au moins un composé brunissant autre que le (s) composé (s) de formule (I) .
Selon un autre aspect de l'invention, le (s) composé (s) brunissant (s) qu'elle contient, indépendamment du (ou des) composé(s) de formule (I), est de la dihydroxyacétone et/ou de 1 ' érythrulose et/ou au moins un colorant hydrosoluble .
Selon un autre aspect de l'invention, la composition contient au moins un composé activateur de la mélanogénèse autre que le (s) composé (s) de formule (I) choisi dans le groupe formé par les substrats de la biosynthèse de la mélanine et les activateurs biologiques de la mélanogénèse capables d'agir en stimulant la synthèse de mélanine et/ou le transfert des mélanosomes des mélanocytes vers les kératinocytes .
Selon un autre aspect de l'invention, lorsque la composition contient un (ou des) activateur (s) de la mélanogénèse indépendamment du (ou des) composé (s) de formule (I) , ledit (ou lesdits) activateur (s) est (ou sont) choisi (s) dans le groupe formé par la L-tyrosine, ou ses dérivés comme la N-acétyl-L-tyrosine, la L- dihydrophénylalanine , les diols aliphatiques comme le propylène glycol, les diols cycliques, les agonistes des récepteurs adénosine-1, les agonistes des récepteurs adénosine-2, les α-hydroxyacides et leurs dérivés, les β- hyroxyacides et leurs dérivés, les rétinoides ou leurs dérivés, les peptides pro-opiomélanocortiques , Ι'α-MSH ou ses analogues, les agonistes du récepteur MC1R, les analogues de l'AMPc, les psoralènes, les activateurs de l'activité des récepteurs PAR-2.
Selon un autre aspect de l'invention, la composition est appliquée sur la peau en une quantité comprise entre 0,0001 et 100 mg/cm2/jour de composé (s) de formule (I) .
Comme précédemment indiqué, l'invention propose également d'améliorer le. transport du (ou des) composé(s) de formule (I) vers les kératinocytes de la peau en associant à ce (s) composé (s) au moins un transporteur amphiphile acide (T) , pour constituer des complexes d'association catanionique par interactions électrostatiques.
Selon un autre aspect de l'invention, la composition contient donc une solution ionique de complexes d'association catanionique , dont chaque association est formée d'une molécule de formule (I) et d'une ou deux molécules d'un transporteur (T) amphiphile acide .
Selon un autre aspect de l'invention, une association catanionique est réalisée par au moins une réaction acido-basique effectuée entre le groupe acide d'un transporteur (T) et un groupe aminé du substituant R3 du carbone en position 6 du composé de formule (I) .
Selon un autre aspect de l'invention, le transporteur (T) est un tensioactif bolaforme dérivé de sucre comprenant au sein de sa structure une fonction acide .
Selon un autre aspect de l'invention, la fonction acide du transporteur (T) est choisie dans le groupe formé par les acides carboxylique COOH, sulfurique 0- S03H, sulfonique S03H, phosphorique O-P (O) (R50) OH, où R5 est une chaîne alkyle en Ci-C6, phosphonique 0-P(0)R6OH et phosphinique P(0)R60H, où R6 est H ou une chaîne alkyle en Ci-C6.
Selon un autre aspect de l'invention, le dérivé de sucre est un dérivé de monosaccharide ou de polysaccharide .
Selon un autre aspect de l'invention, le dérivé de sucre que contient la composition est un dérivé de glucose ou de lactose.
Selon un autre aspect de l'invention, le dérivé acide de sucre est constitué d'une structure de sucre sur laquelle est reliée, par un groupe H, une chaîne aliphatique (CH2)P, linéaire ou ramifiée, dont l'extrémité opposée à la structure de sucre porte un groupe acide, p étant un entier ayant une valeur comprise entre 4 et 10.
Selon un autre aspect de l'invention, le rapport des quantités pondérales A de composé (s) de formule (I) et B du (ou des) transporteur (s) (T) est compris entre 0,001 et 1000.
Selon un autre aspect de l'invention, la composition contient de 0,01 à 150 g de l'ensemble des constituants A et B par litre de composition.
Selon un autre aspect de l'invention, la composition comporte au moins un adjuvant pris dans le groupe formé par au moins un épaississant et/ou un colorant hydrosoluble et/ou un parfum et/ou un alcool et/ou une vitamine et/ou un émulsionnant , utilisé seul ou en mélange avec éventuellement un co-émulsionnant , et/ou une huile ou autre corps gras et/ou un conservateur et/ou un antioxydant et/ou un bactéricide.
Selon un autre aspect de l'invention, la composition contient au moins un filtre solaire chimique ou physique, ou un mélange de tels filtres.
Selon un autre aspect de l'invention, la ■ composition est conditionnée en nanocapsules ou en vésicules catanioniques de taille nanométrique suspendues dans un milieu liquide.
Selon un autre aspect de l'invention, la composition est conditionnée sous forme d' hydrogels, de crèmes, de lotions, d'émulsions ou d'aérosols.
Pour mieux faire comprendre l'objet de l'invention, on va en décrire maintenant, à titre d'exemples purement illustratifs et non limitatifs, plusieurs modes de réalisation. Les résultats des exemples ci-après détaillés ont été représentés sur les figures du dessin. Sur ce dessin :
-la figure 1 représente le spectre IR correspondant au produit obtenu à l'exemple 3 ;
-la figure 2 représente le spectre RMN correspondant au produit obtenu à l'exemple 3 ;
-la figure 3 illustre les résultats obtenus à l'exemple 5 ;
-la figure 4 illustre les résultats obtenus à l'exemple 6 ;
-les figures 5a, 5b, 5c montrent une visualisation des mélanosomes dans des cellules traitées selon l'exemple 7 ;
-la figure 6 montre le résultat d'un traitement selon l'exemple 8 pour l'expression des gènes dans les cellules traitées ;
-la figure 7 montre le résultat d'un traitement selon l'exemple 9 quant à la modulation de protéines, ce résultat étant visualisé par une technique de « Western Blot » ;
-les figures 8 et 9 montrent le résultat d'un traitement avec des compositions selon l'invention sur une peau reconstituée ;
-la figure 10 montre le résultat d'un traitement selon l'exemple 10 sur la modulation de protéines impliquées dans la mélanogénèse ;
-la figure 11 montre les quantités de mélanine synthétisée sur un échantillon de peau reconstituée après application d'une composition selon les exemples 12 et 13, lesdites quantités et les échantillons de peau étant définis comme décrit à l'exemple 10. Exemple 1 : Synthèse du composé de formule (I) pour lequel T4=H et Zi=Z2=liaison simple
Le procédé ci -après décrit est extrait de la demande de brevet publiée WO03/089449. Le composé (ci-après dénommé DDA) correspond au nom systématique de : 5a-hydroxy- 6β- [2- (lH-imidazol-4-yl) éthylamino] cholestan-3S-ol
a) préparation du 5 , 6-a-époxycholestan-3S-ol :
De l'acide méta-chloro-peroxybenzoïque (0,73 g, 4,25 mmol, pureté de 70-75 % en poids) est dissous dans du chlorure de méthylène (10 ml) et ajouté goutte à goutte, sous agitation, à un mélange de cholestérol (1 g, 2,5 mmol) dissous dans du chlorure de méthylène (25 ml) . L'agitation est maintenue toute la nuit. Le mélange réactionnel est lavé avec une solution aqueuse de sulfite de sodium (10 % en poids) et d' hydrogénocarbonate de sodium (5 % en poids) et une solution saturée d'un mélange de chlorure de sodium et de chlorure de potassium. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium anhydre. L' évaporation sous vide du solvant organique permet l'obtention de 0,7 g d'aiguilles blanches (rendement 70 %) .
La proportion des isomères a et β de l'époxyde a été déterminée par RMN du proton : on trouve 78 % d'a- époxyde, 22 % de β-époxyde.
Caractérisation du produit : RMN ¾ ( 200MHz , MeOD) δ ppm 2,89 (d, 1H, J=4,37 Hz, H-6) ; 3,04 (d, J=2,43 Hz, H-6) 3,91 (m, 1H, H- 3) ; SM DCI/NH3MH+ 403]
DCI/MNH4 +,m/z :403 [MNH4] +. Les isomères a et β ont été séparés par chromatographie liquide sur silice (toluène/éther éthylique, 85/15). L'isomère a a pour point de fusion Pf=141-142°C ; l'isomère β a pour point de fusion Pf=131-132°C. Pour compléter la caractérisation, on a effectué une chromatographie sur couche mince (acétate d'éthyle) ; on a obtenu : Rf=0,69 (couleur marron après révélation avec le mélange acide suifurique-méthanol) .
b) synthèse du stérol aminé à partir de l'a-époxy- stérol obtenu à l'étape a)
On dissout dans de l'éthanol anhydre (1 ml) du perchlorate de lithium (0,75 mmol) et une aminé sous sa forme basique (1 mmol) , à savoir la 2- (lH-imidazol-4yl) - éthylamine. On ajoute cette solution sous flux d'argon à une solution éthanolique (3 ml) de l' a-époxy-stérol obtenu selon a) ci-dessus (100 mg, 0,25 mmol). Le mélange réactionnel est maintenu sous agitation et à reflux, pendant 6 jours. L'avancée de la réaction est contrôlée par chromatographie sur couche mince (CCM) . Le solvant est éliminé par évaporation et le résidu est lavé avec de l'éther éthylique (5 x 3 ml) et de l'hexane (5 x 20 ml) . Le résidu est solubilisé dans l'eau et acidifié avec HC1 2M(2 ml) .
La solution est pré-purifiée sur cartouche de silice greffée (« sep-pack cartridge RP C18 », 500 mg, Waters) ; l'excès de polyamine est éliminé par passage d'eau sur la cartouche (5 ml) ; le produit est élué avec un mélange CH3CN 1/H20 1 (5 ml) . Le produit est purifié par HPLC en phase inverse grâce à un gradient linéaire d'un mélange de départ H20 95/CH3CN 5/TFA 0,1 % jusqu'à un mélange CH3CN 95/H20 5/TFA 0,1 % atteint en 60 minutes (débit = 1 ml/min ; X = 210 nm) . La fraction d'intérêt a été repurifiée dans des conditions isocratiques en utilisant une phase mobile composée d'un mélange (CH3CN 95/H20 5/TFA 0,1 %) 44 % (H20 95/CH3CN 5/TFA 0,1 %) 56 % (débit = 1 ml/min ; λ = 210 nm) . Le produit obtenu est d'abord caractérisé par chromatographie en couche mince (méthanol) . Puis, on a effectué une chromatographie à haute performance (HPLC) sur un appareil « Perkin-Elmer LC200 séries » équipé d'une colonne « Ultrasep ES100RP10 » (particules de 6 μιη) , de 250 mm de longueur et 8 mm de diamètre, fabriquée par la société « Bishoff ».
HPLCprofil : 44 % B # = 220 nm tr = 44-50 mn
Caractérisation du produit : ESI-MS,m/z : 514,5 [M+H]+. Exemple 2 : Synthèse des composés de formule (I) pour lesquels T4 = CH3/C2H5 (en mélange 70/30) et
Zi = Z2 = simple liaison
On utilise comme stérol, dans l'étape a) de l'exemple 1, un mélange de sitostérol et de campestérol (70/30 en masse) . On utilise, pour la réaction sur 1 ' -époxystérol obtenu, la même aminé qu'à l'exemple 1 étape b) .
On obtient un mélange des 2 composés suivants :
5a-hydroxy-6S- [2- (lH-imidazol-4yl) éthylamino] sitostan- 3S-ol et
5a-hydroxy-6S- [2- (lH-imidazol-4yl) éthylamino] campestan- 3S-ol.
Le produit obtenu (ci-après dénommé « AF130 ») est caractérisé par chromatographie en couche mince (acétate d'éthyle) : Rf = 0,69
Caractérisation du produit:
ESI-HRMS m/z : 528 , 8323 [M+H] + (Am=0 , 3 mDa) (dérivé campestérol) et 524, 8590 [M+H] + (Am=0, 4 mDa) (dérivé sitostérol)
Exemple 3 :
a) Préparation du transporteur amphiphile utilisé pour constituer un complexe d'association catanionique mis en œuvre dans les exemples ultérieurs. On fait réagir directement l'acide lactobionique avec l'acide 8- aminooctanoique (voir demande de brevet publiée
WO 2011/039379) .
1) Synthèse du 8-lactobionamidooctanpate de sodium A une solution de soude (300 mg soit 5,59 mmol) dans 50 mL de méthànol sont ajoutés successivement l'acide 8 -aminooctanoique (888 mg soit 5,59 mmol) et l'acide lactobionique (2,00 g soit 5,59 mmol) . Le milieu est placé sous agitation à 50 °C pendant 24 h ; le solvant est ensuite évaporé sous pression réduite ; le résidu obtenu est purifié par chromatographie colonne sur gel de silice (éluant : CHCI3/CH3OH/H2O : 2, 5/7/0, 5,R'f = 0,8). Un solide blanc est recueilli avec un rendement de 56 %.
Caractérisation du produit :
IR (neat) cnf1 : 1643 (vc=o (amide) st) ;
1547 (vc=o (carboxylate) asymétrique);
1405 (vc=0 (carboxylate) symétrique)
ESI- S,m/z : 498 [M+Na]+.
Le produit obtenu a la formule suivante :
Figure imgf000015_0001
) Synthèse de l'acide 8 -lactobionamidooctanoique A une solution de 8-lactobionamidooctanoate de sodium (1,00 g soit 2 mmol) dans 30 mL de H20, on ajoute environ 2 g de résine échangeuse de protons (Dowex 50WX8) . Le mélange réactionnel est placé sous agitation pendant 2 h à température ambiante, puis filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie colonne sur gel de silice (éluant : acétone/H20 : 9/1 ; Rf : 0,5). Un solide blanc est recueilli avec un rendement de 57 %.
Caractérisation du produit :
R ¾ (300MHz, MeOD) δ ppm : 1 , 05-2 , 15 (m, 10H, CH2E, CH2Y, CH25, CH2£, Οί2ζ) ; 2,17 (t,2H,CH2«) ;
3, 12 (m,2H,CH2n) ; 3 , 46-4 , 12 (m, 10H, CH et CH2 du motif sucre) ; 4,28(m,lH,H) 4,30(m,lH,H en alpha du CONH) ; 4,54 (d,-J = 9Hz , 1Ή, H anomérique)
IR (neat ) cm'1 : 1645 (vc=o (amide) st) ;
1726 (vc=0 (acide) st)
ESI-HR S, m/z : 522 , 2162 [M+Na] + (Διτι = 0,1 mDa).
produit obtenu est ci -après appelé L7 et correspond à formule suivante :
Figure imgf000016_0001
b) Préparation d'un complexe d'association catanionique entre le transporteur amphiphile de l'étape a2) du présent exemple et le produit de l'exemple 1.
A une solution d'acide 8-lactobionamidooctanoique (330 mg soit 0,66 mmol) dans 30 mL de H20 déminéralisée, on ajoute 339 mg du produit de l'exemple 1 (soit 0,66 mmol) . Le mélange réactionnel est ensuite placé sous agitation à température ambiante pendant 24 h. On obtient alors une solution homogène, qui après concentration, conduit de façon quantitative au produit dont la formule est donnée ci-dessous :
Figure imgf000017_0001
Le produit obtenu est une poudre jaune pâle ; il est ci- après appelé L7DDA puisqu'il est constitué d'une molécule L7 associée à une molécule DDA.
Caractérisation du produit obtenu :
RMN 1H (300MHz , MeOD) δ ppm: 0 , 75 ( s , 3H, CH3 (19) ); 0 , 89 (m, 3H, CH3 ) ; 0,91(m,3H,CH3) ; 1,05-2,15 (m, 45H, CH2S, CH2y, CH25 , CH2£ , 0Η2ζ , 35H pour CH et CH2 de la DDA) ; 2,21(t,2H, CH2a) ; 3,14(m,2H, CH2 ) ; 3 , 42-4 , 10 (m, 12H, CH et CH2 du motif sucre, + CH3 et CH6) ; 4,21(m,lH,H) ; 4, 34 (m, 1H,H en alpha du CONH) ; 4,50(d,J = 9Hz,lH,H anomérique) ; 6 , 92 ( s , 1H, C=CH (NH) ; 7,80 (s, 1H,HN-CH=N) .
Le spectre RMN est fourni en figure 2 ; il permet de constater la formation de la paire d'ions qui associe une molécule L7 et une molécule DDA. Le déplacement chimique du groupement CH2, en alpha d'un groupement acide carboxylique COOH est différent de celui en alpha d'un groupement carboxylate COO" ; dans cet exemple, CH2-COOH présente un déplacement chimique de 2,17ppm, alors que CH2-COO" a un déplacement chimique de 2,21ppm. IR(neat) cm'1 : 1643 ('vc=p (ami-dé) st) ; 1549 (vc=o (carboxylate asymétrique)) ; 1403 (vc=0 (carboxylate symétrique)).
Le spectre IR, fourni en figure 1, montre que l'étape b) provoque la disparition de la bande caractéristique de la fonction acide carboxylique entre 1800 et 1650 cm"1 au profit de deux nouvelles bandes dans la région 1610-1550 cm"1 (élongation asymétrique de COO" (groupement carboxylate) ) et 1450-1400 cm"1 (élongation symétrique de COO" (groupement carboxylate) ). Ainsi, on remarque sur la figure 1 la disparition de la bande caractéristique de la fonction acide carboxylique à 1726 cm"1 et l'apparition des bandes d' élongation symétrique et asymétrique du groupement carboxylate respectivement à 1549 cm"1 et 1403 cm"1.
CAC (Concentration d'Agrégation Critique) (solution aqueuse, 25°C) : 2,6.10"5M.
Exemple 4 :
Le même procédé que celui de l'étape b) de l'exemple 3 peut être utilisé pour former un complexe d'association entre un transporteur amphiphile acide selon l'exemple 3a2) et un quelconque des composés de formule (I) étant donné que tous ces composés comportent au moins un groupement NH permettant une liaison avec la fonction acide du transporteur. Notamment, un mélange de complexes a été obtenu en associant le produit de l'exemple 2 avec celui de l'exemple 3a2) : ce mélange a été désigné ci- après sous la dénomination L7AF130.
L'assemblage transporteur/actif permet d'associer un groupe à ionisation positive de l'actif avec le groupe acide du transporteur. L'actif peut donc s'associer au transporteur par le substituant R3 porté par le carbone 6 du composé de formule (I) . Dans le cas des actifs AF130 ou DDA, on peut associer deux molécules de transporteur L7 sur deux fonctions aminé du substituant R3. A partir du procédé d'obtention de l'exemple 3b, il suffit de mélanger, dans l'eau à température ambiante, deux équivalents de molécule L7 pour un équivalent de l'actif, de la même façon qu'on l'a décrit à l'exemple 3b. Là encore, le mélange est initialement une suspension, mais devient une solution limpide, ce qui montre que le complexe obtenu, dénommé ci-après (L7)2(AF130) ou (L7)2(DDA) selon l'actif, est hydrosoluble .
Exemple 5 : Stimulation de la synthèse de mélanine par un composé de formule (I) dénommé DDA et un complexe d'association selon l'exemple 3a2).
La quantification de la mélanine synthétisée par des mélanocytes murins sains a été réalisée selon le protocole décrit par Ando et al (J.Lipid Res., 1999, 40, 1312) .
Les cellules sont ensemencées et sont traitées pendant 24h avec le produit testé ou le véhicule utilisé (éthanol) et avec, comme contrôle positif, une exposition à une dose de rayonnement ultraviolet de 20mJ/cm2.
5 millions de cellules sont isolées après centrifugation à 1500 tours/mn pendant 5mn, à 4°C. Le culot est lavé deux fois avec du PBS puis transféré dans un tube Eppendorf et centrifugé à 5000g pendant 5mn. Le surnageant est éliminé. 200pL d'eau et lmL d'un mélange EtOH/Ether (1/1) sont ajoutés (la mélanine est insoluble dans ce mélange) . Après 15mn à température ambiante, le tout est de nouveau centrifugé à 5000g pendant 5mn ; le surnageant est éliminé. Le culot est alors repris avec 300 L d'une solution de NaOH(lM) dans un mélange H2Û/DMSO 90/10 et placé à 80°C pendant une heure. L'absorbance est mesurée à 470nm. La quantité de mélanine synthétisée est exprimée par rapport au contrôle (=100%) .
Les résultats sont représentés sur la figure 3. On voit que l'addition du composé DDA de formule (I), avec ou sans transporteur, entraine une augmentation de la synthèse de mélanine dans les cellules étudiées.
Exemple 6 : Etude de la synthèse de mélanine par étude de la stimulation de l'activité tyrosinase.
L'étude a été menée sur des mélanocytes raurins sains. Les résultats ont été comparés à ceux obtenus sur un témoin positif soumis à une dose de rayonnement ultraviolet de 20mJ/cm2. Les cellules ont été traitées pendant 24h soit avec le véhicule utilisé (éthanol) soit avec le produit testé. L'activité tyrosinase est quantifiée selon le protocole décrit par Ando et al (J.Lipid Res . , 1999, 40, 1312) comme explicité ci-après.
5 millions de cellules sont isolées après centrifugation à 1500 tours/mn pendant 5mn, à 4°C. Le culot est lavé deux fois avec du PBS puis transféré dans un tube Eppendorf et centrifugé à 5000g pendant 5mn. Le surnageant est éliminé. lmL d'une solution de déoxycholate de sodium à 0,5% massique est ajoutée (lyse des cellules) . Après 15mn à 0°C, 3mL d'une solution de L- DOPA à 0,1% massique dans un tampon phosphate à 0,1M (pH 6,8) sont ajoutés. Le tout est placé à 37°C pendant lOmn. L'activité tyrosinase est analysée par spectrophotométrie en suivant l'oxydation de la L-DOPA en DOPAchrome . L'absorbance est mesurée à 475nm. L'activité tyrosinase est exprimée par rapport au contrôle (=100%) , qui détermine l'activité tyrosinase basale des cellules. Les résultats sont fournis sur la figure 4. On voit que l'activité tyrosinase dans les cellules est, par rapport au contrôle, augmentée lorsque les cellules ont été traitées par une composition contenant l'actif DDA, avec ou sans transporteur L7 associé ou contenant l'actif AF130 associé pour chaque molécule à deux molécules de transporteur L7. On voit également qu'une augmentation de l'activité tyrosinase va de pair avec une augmentation de la synthèse de mélanine dans la cellule.
Exemple 7 : Etude de la synthèse de mélanine par visualisation de mélanosomes.
On a traité des mélanocytes murins sains comme indiqué dans l'exemple 6 en mettant en œuvre des cellules non traitées ou traitées avec ΙμΜ de AF130 ou ΙμΜ de (L7)2AF130. On a visualisé la synthèse de mélanine par une coloration selon la technique DAPI : les noyaux des cellules fluorescent en bleu et, par contraste, on met en évidence les mélanosomes, qui sont visualisés en noir. La figure 5a correspond à la visualisation de cellules non traitées, la figure 5b à la visualisation de cellules traitées par ΙμΜ de AF130 et la figure 5c, à la visualisation de cellules traitées par ΙμΜ de (L7)2AF130 : on voit que la quantité de mélanosomes et donc la synthèse de mélanine est considérablement augmentée par un traitement selon l'exemple 6 (comparaison avec la figure 5a) .
La technique DAPI est mise en œuvre de la façon suivante : les cellules sont ensemencées sur des lamelles préalablement stérilisées par un lavage d' éthanol ; elles sont traitées avec la molécule active étudiée ou avec un véhicule utilisé (éthanol) . Après 24h de traitement, les cellules sont fixées à l'aide d'une solution de formaldéhyde diluée au dixième (à 3,7% massique) dans le PBS, pendant 15mn, à température ambiante. Le formaldéhyde est ensuite éliminé et les cellules sont lavées au PBS. ΙΟμΙ d'une solution de DAPI au l/500e dans le Mowiol (solution de montage) sont déposées sur une lame. La lamelle est placée sur la goutte, les cellules devant se trouver entre lame et lamelle. Les lames sont placées à 4°C pour la nuit avant d'être observées. Pour chaque échantillon, un cliché en mode « DAPI » est réalisé, permettant uniquement la visualisation des noyaux ainsi que le même cliché en mode « visible ». Les deux clichés sont ensuite superposés. Exemple 8 :
Dans cet exemple, on a montré, sur des mélanocytes murins sains, qu'un traitement par des compositions selon l'invention permet d'augmenter l'expression de gènes correspondant à la tyrosinase et aux enzymes TRP-1 et TRP-2 (TRP = Tyrosinase Related Protein) , qui sont impliqués dans la mélanogénèse .
Les cellules sont ensemencées et traitées pendant 24h avec les molécules, dont on veut étudier l'action, c'est- à-dire ici, avec la DDA (ΙμΜ) , d'une part, et avec la L7DDA (0,1 ou 1 ou 2,5 ou 5μΜ) , d'autre part. On a comparé les résultats avec des cellules irradiées aux ultraviolets comme dans l'exemple 6. La figure 6 représente en ordonnée l'expression des gènes correspondant à la tyrosinase, à TRP-1 et TRP-2.
Pour quantifier l'expression de ces gènes, on procède à l'extraction de l'ARN des cellules. Les mélanocytes sont traités pendant 24h avec la molécule active ou avec l'agent de contrôle. On ajoute lmL de Trizol"8 ; après 5mn à température ambiante, on récupère le tout dans un tube Eppendorf. On ajoute 200^L de CHC13 à 4°C. Les tubes Eppendorf sont agités manuellement, par retournement pendant 15sec, sont laissés pendant 5mn à température ambiante, puis sont centrifugés à 16000g à 4°C pendant lOmn. La phase aqueuse incolore est isolée. On ajoute 500 L d' isopropanol (-20°C) . Les tubes Eppendorf sont agités manuellement, par retournement pendant 15sec, sont laissés pendant 15mn à température ambiante, puis sont centrifugés à 16200g à 4°C pendant lOmn. Le surnageant est éliminé. Le culot est lavé avec lmL d'éthanol à 75% (-20°C) . Après une centrifugation à 16000g à 4°C pendant 5mn, le surnageant est éliminé. Après lOmn de séchage, le culot est repris avec 30 L d'eau sans ARNase. La quantité et la pureté des ARN est estimée par spectrophotométrie (230, 260 et 280nm) .
On effectue une RT-qPCR ; dans un tube Eppendorf, on introduit : Ιμΐ, de transcriptase inverse, 4^L de 5x mélange de réaction « iScript®5x », la quantité d'eau sans ARNase nécessaire pour arriver à un volume global de 20/L et le volume correspondant à l g d'ARN. Les tubes Eppendorf sont ensuite vortexés, centrifugés pendant quelques secondes puis placés dans le thermocycleur (programme : 5mn à 25°C, puis 30mn à 42°C, ensuite 5mn à 85°C puis retour à 4°C) .
On effectue alors une amplification. Les gènes de référence sont : glycéraldéhyde 3 -phosphate déshydrogénase et Cyclophiline Al. Les gènes d'intérêt sont : Tyrosinase, TRP-1 et TRP-2. Pour chaque gène (référence ou intérêt) , on prépare un mélange avec de l'eau sans ARNase, le Sybr Green^ et l'amorce correspondante . Les ADNc précédemment obtenus sont repris avec 18C^L d'eau sans ARNase. On introduit au fond de chaque puits 5μL d'ADNc. On introduit au bord de chaque puits 20 L de mélange. La plaque est ensuite recouverte d'un plastique collant et centrifugée à 4000 tours/mn jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de bulle.
La plaque est ensuite placée dans le thermocycleur : 95°C pendant 3mn, suivi de 50 cycles d'amplification 15 sec à 95°C puis une minute à 60°C. A la fin de ces 50 cycles, les courbes de fusion sont générées à 95°C pendant lmn et 95°C pendant 10 sec (80 cycles) . On peut ainsi reporter, sur la figure 6, la stimulation de l'expression des gènes pour les différents produits étudiés. Les résultats numériques obtenus sont fournis dans le tableau ci- dessous .
Figure imgf000024_0001
On constate que les traitements des cellules par les produits DDA et L7DDA fournissent des résultats montrant que les enzymes impliqués dans la mélanogénèse sont autant stimulés qu'avec l'irradiation aux UV.
Exemple 9 : Effet sur la modulation de protéines impliquées dans la mélanogénèse (Western Blot) Dans cet exemple, on effectue le traitement à étudier, sur des mélanocytes murins sains . Les traitements sont effectués avec le composé DDA à ΙμΜ et avec les composés L7DDA, (L7)2DDA et (L7)2AF130 à ΙμΜ également. Le contrôle positif est effectué avec des cellules ayant reçu une dose de rayonnement UV de 20mJ/cm2. La protéine de référence est de l' actine (43KDa) . Après 24 heures de traitement, les cellules sont grattées dans le PBS froid (4°C) , puis centrifugées à 1500 tours/mn, à 4°C, pendant 5mn. Le surnageant est éliminé.
Le culot est repris avec 100 L de tampon de lyse (0,1M de TRIS-HC1, pH=7,4, 1% Igepal , 0,01% SDS , mélange auquel on ajoute des inhibiteurs de protéases (à raison de 1% en volume du mélange) ) et vortexé pendant plusieurs secondes. Après 30mn à 4°C, on a vortexé de nouveau et soumis aux ultrasons pendant 5sec. Les tubes Eppendorf sont enfin centrifugés à 10000 tours/mn à 4°C pendant 10 mn. Le surnageant (=extrait prôtéique) est transféré dans un nouveau tube Eppendorf . Un dosage de Bradford est réalisé afin de quantifier les protéines.
Sur la base des résultats de ce dosage, les échantillons sont préparés pour le dépôt sur gel SDS-PAGE (échantillons préparés à ^g^L) : 10μL soit 10μg de protéines sont déposés, pour chaque échantillon.
Après un transfert en phase liquide des protéines du gel sur une membrane en polyfluorure de vinylidène, les membranes sont incubées avec les anticorps primaires d'intérêt (Tyrosinase : l/2000e, Actine : l/10000e, TRP- 2 : l/2000e) , puis avec l'anticorps secondaire dirigé contre le gène d'intérêt (dans tous les cas, au l/1000e) , couplé HRP (horseradish proxidase) . Enfin, après une incubation de 5mn avec lml/membrane d'ECL (enhanced chemiluminescence) , les membranes sont révélées en chambre noire. Ces informations sont identiquement utilisées pour la réalisation des essais détaillés à l'exemple 11 ci-après (résultats sur la figure 10).
Le résultat du Western Blot ainsi réalisé est représenté sur la figure 7. On voit que le traitement des cellules par les compositions selon l'invention génère une stimulation de la production de tyrosinase analogue à celle obtenue avec une irradiation aux ultra-violets ; la stimulation est plus forte pour le traitement avec (L7)2AF130. Ce résultat confirme celui décrit à l'exemple 8.
Exemple 10 : Traitement sur peau reconstituée
Dans cet exemple, on effectue le traitement à étudier sur des épidermes de peau reconstituée « RHE/MEL light tanned » commercialisés par la société « StratiCELL° » . L'épiderme est changé de milieu tous les jours avant le traitement à étudier. Le traitement consiste à ajouter dans le milieu, deux fois par jour pendant cinq jours, ΙμΜ du produit de traitement. Les épidermes sont isolés et placés dans un tube Eppendorf avec 400μΙ d'un réactif « Solvable » (fourni par Perkin-Elmer) , puis chauffés à 100°C pendant lh. L'absorbance est mesurée à 490nm. La quantité de mélanine synthétisée est exprimée par rapport au contrôle ( =100%) . Les résultats sont représentés sur la figure 8. Les brunissements des épidermes en fin de traitement sont étudiés par histologie en mettant en évidence les dépôts de mélanine dans les épidermes traités. Dès la fin du traitement, les tissus sont placés dans une solution de formaldéhyde à 4% puis inclus en paraffine et coupés. Une coloration Fontana-Masson (méthode argentaffine à base de nitrate d'argent) met en évidence en noir les dépôts de mélanine. L'observation des coupes au microscope optique permet d'obtenir les clichés de la figure 9.
Exemple 11 : Etude de la modulation de différentes protéines impliquées dans la mélanogénèse sur un modèle de peau reconstituée.
On a utilisé des échantillons de peau reconstituée « RHE/MEL light tanned » commercialisés par la société « StratiCELL* ». On a traité l'échantillon selon la procédure de l'exemple 9 avec le même contrôle positif aux UV et le même contrôle avec l'actine. L'échantillon a subi l'action bi-journalière de ΙμΜ des produits DDA, L7DDA, (L7)2 DDA et (L7)2 AF130.
Les détails de la méthode utilisée ont déjà été fournis à l'exemple 9 (GPlOO : l/500e, TRP-1 : 1/I000e, Rab27a: l/500e) .
Les résultats sont représentés sur la figure 10 et montrent que la tyrosinase et les protéines impliquées dans la mélanogénèse TRP-1 et GPlOO (protéine clé de la biogénèse des mélanosomes) sont plus fortement stimulées par le traitement avec une composition selon l'invention que par une exposition aux UV. De plus, Rab27a, protéine impliquée dans le transfert des mélanosomes, des mélanocytes vers les kératinocytes est plus fortement stimulée par le traitement avec les associations catanioniques .
Les exemples 12 à 22 décrivent des compositions selon l'invention utilisées en application sur des peaux humaines reconstituées telles que celles utilisées dans les exemples 10 et 11. Les composés sont, selon les cas, indiqués en noms chimiques ou noms INCI (International Nomenclature of Cosmetic Ingrédients) et les quantités indiquées sont des pourcentages en poids (pourcentage en matière active pour la DDA et les associations catanioniques) . Les modèles de peau reconstituée sont traités deux fois par jour, pendant trois jours, avec 2mg/cm2 des formulations décrites ci-dessous (exemples 12 à 22) . Les résultats sont présentés sur la figure 11.
Exemple 12 : La composition, dont la formulation est donnée ci-dessous, est un gel hydroalcoolique préparé comme suit : on mélange d'abord l'eau et l'éthanol, on y introduit l' hydroxypropylcellulose, on agite jusqu'à dissolution complète puis on ajoute les autres constituants sous agitation.
Ethanol 50 Glycérine (vendue sous la dénomination
« Pricerine 9091s » par la société « Croda ») 5 Hydroxypropylcellulose (vendue sous la
dénomination « Klucel H CS® » par la société « IMCD » 1 Poudre de DDA dilactate (en molécule active) 1 Eau qsp 100
Exemple 13 : La composition, dont la formulation est donnée ci-dessous, est un gel hydroalcoolique préparé et utilisé comme à l'exemple 12 :
Ethanol 50 Glycérine (vendue sous la dénomination
« Pricerine 9091* » par la société « Croda ») 5 Hydroxypropylcellulose (vendue sous la dénomination
« Klucel H CS® » par la société « IMCD ») 1 Poudre de (L7)2(DDA) (en molécule active) 1 Eau qsp 100
Exemple 14 : La composition, dont la formulation est donnée ci-dessous, est un hydrogel préparé comme à l'exemple 12 en excluant l'éthanol, absent dans la formulation. Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR* » par la société « IMCD ») 1,5 Glycérine (vendue sous la dénomination
« Pricerine 9091® » par la société « Croda ») 5 Poudre de DDA dilactate (en molécule active) 1 Eau qsp 100
Exemple 15 : La composition, dont la formulation est donnée ci-dessous, est un hydrogel préparé comme à 1 ' exemple 14.
Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR® » par la société « IMCD ») 1,5 Glycérine (vendue sous la dénomination
« Pricerine 9091* » par la société « Croda ») 5 Propylène glycol 5 Poudre de DDA dilactate (en molécule active) 1 Eau qsp 100
Exemple 16 : La composition, dont la formulation est donnée ci -dessous, est un hydrogel préparé comme à l'exemple 14.
Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR® » par la société « IMCD ») 1,5 Glycérine (vendue sous la dénomination
« Pricerine 9091® » par la société « Croda ») 5 Propylène glycol 5 Poudre de L7DDA (en molécule active) 1 Eau qsp 100
Exemple 17 : La composition, dont la formulation est donnée ci-dessous, est un hydrogel préparé comme à 1' exemple 14.
Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR® » par la société « IMCD ») 1,5 Glycérine (vendue sous la dénomination « Pricerine 9091* » par la société « Croda ») 5
Propylène glycol 5
Poudre de (L7)2(DDA) (en molécule active) 1
Eau qsp 100
Exemple 18 : La composition, dont la formulation est donnée ci -dessous, est un hydrogel préparé comme à 1' exemple 14.
Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR® » par la société « IMCD ») 1,5 Glycérine (vendue sous la dénomination
« Pricerine 9091* » par la société « Croda ») 5
Propylène glycol 5
Poudre de (L7)2(AF130) (en molécule active) 1
Eau qsp 100
Exemple 19 : La composition, dont la formulation est donnée ci -dessous, est un hydrogel préparé comme à l'exemple 14.
Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR* » par la société « IMCD ») 1,5 Ethanol 5
Glycérine (vendue sous la dénomination
« Pricerine 9091" » par la société « Croda ») 5
Propylène glycol 5
Poudre de DDA dilactate (en molécule active) 1
Eau qsp 100
Exemple 20 : La composition, dont la formulation est donnée ci -dessous, est une émulsion préparée comme suit ; On prépare une phase aqueuse A :
Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR* » par la société « IMCD ») 1,5 Eau qsp 100
On prépare une phase huileuse B : Huile de paraffine 7,5
Dicaprylyl carbonate (vendu sous la dénomination
« Cétiol CC° » par la société « BASF ») 4
Coco caprylate (vendu sous la dénomination
Cetiol C5 » par la société « BASF 4
Sorbitan sterate and sucrose cocoate (vendu
la dénomination « Arlacel 2121* » par la
société « CRODA ») 3
On prépare une phase C
Poudre de DDA dilactate (en molécule active) 0,5
Eau qsp 100
On chauffe la phase B à 80°C et la phase A à la même température. On introduit lentement sous agitation rapide la phase B dans la phase A. On homogénéise et on refroidit sous agitation lente : on ajoute la phase C quand la température est inférieure à 40°C.
Exemple 21 : La composition, dont la formulation est donnée ci-dessous, est une émulsion préparée comme suit ; On prépare une phase aqueuse A :
Hydroxyéthylcellulose (vendue sous la dénomination
« Natrosol 250 HR* » par la société « IMCD ») 1,5 Eau qsp 100
On prépare une phase huileuse B :
Vegetable oil (vendue sous la dénomination
« Cegesoft ΡΞδ® » par la société « BASF » 5
Dicaprylyl carbonate (vendu sous la dénomination
« Cétiol Ce"5 » par la société « BASF ») 3
Coco caprylate (vendu sous la dénomination
« Cétiol C5* » par la société « BASF ») 5
Cocoglycerides (vendus sous la dénomination
« Myritol 331* » par la société « BASF ») 3
Isoceteth-3- Acétate (vendu sous la dénomination « Hetester PHA* » par la
société « SACI-CFPA ») 8
On prépare une phase C :
Poudre de DDA dilactate (en molécule active) 1 ou 0,1
Eau qsp 100
On chauffe la phase B à 70°C et la phase A à la même température. On introduit lentement sous agitation rapide la phase B dans la phase A. On homogénéise et on refroidit sous agitation lente. On ajoute la phase C quand la température est inférieure à 40°C.
Exemple 22 : La composition, dont la formulation est donnée ci-dessous, est une huile sèche préparée comme suit :
On prépare une phase A :
Propylène glycol 5 Dicaprylyl carbonate (vendu sous la dénomination
« Cétiol CCS » par la société « BASF ») 34,5 Coco caprylate (vendu sous la dénomination
« Cetiol C5 » par la société « BASF ») 30 Propylheptyl Caprylate (vendu sous la dénomination
« Cétiol Sensoft8 par la société « BASF ») 5 Cocoglycerides (vendus sous la dénomination
« Myritol 331" » par la société « BASF ») 10 Vegetable oil (vendue sous la dénomination
« Cegesoft ΡΞβ^ » par la société « BASF ») 10 Passiflora incarnata (vendu sous la dénomination
« Cegesoft PFO* par la société « BASF ») 2 On prépare une phase B :
Ethanol 4 , 5 Poudre de DDA basique (en molécule active) 1
On introduit la phase B dans la phase A sous agitation et on homogénéise. Dans tous les cas correspondant aux exemples 12 à 22, les échantillons de peau présentent une coloration naturelle bronzée, homogène et durable. Les intensités des effets autobronzants sont obtenues par la coloration Fontana-Masson de coupes histologiques et sont récapitulées dans le tableau ci-dessous.
Exemples Effet autobronzant
DDA 1% massique dans H20 Solution aqueuse +
UV OmJ/cm ) / +
12 Gel hydroalcoolique +
13 Gel hydroalcoolique +
14 hydrogel +
15 hydroge1 ++
16 hydrogel ++
17 hydroge1 +++
18 hydrogel +++
19 hydrogel ++
20 émulsion +
21 émulsion +
22 huile sèche ++

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition cosmétique applicable par voie topique pour assurer un brunissement de la peau d'un sujet humain, avec ou sans irradiation aux rayons ultraviolets, contenant, dans un véhicule cosmétiquement acceptable, une solution aqueuse d'au moins un composé de formule (
Figure imgf000034_0001
formule dans laquelle
Ri désigne un atome d'hydrogène ou Ri0-CO, Rio représentant H, CH3 ou C2H5/
R2 représente un atome d'hydrogène ou OH,
R3 représente un groupe X-(CH2)n-Y, n étant un entier compris entre 1 et 4, X représentant S,0 ou NH, et Y représente NH2, imidazol-5-yl, indol-3-yl, pipéridin-2- yl, pipéridin-3-yl, pipéridyn- -yl , pipérazin-2-yl , pipérazin-3-yl, pyridin-2-yl , pyridin-3-yl ou pyridin-4- yl,
R4 représente un atome d'hydrogène ou OH en position 20,22,24,25,26 ou 27 sur le noyau représenté ci-dessus pour définir la formule (I) , OH étant positionné de façon à obtenir un centre asymétrique de conformation R ou S,
Z et Z2 représentent la possibilité d'avoir entre les carbones C7 et C8, d'une part, et les carbones C22 et C23, d'autre part, des liaisons simples ou doubles,
Ti, T2, T3 sont, indépendamment l'un de l'autre, H ou CH3 en a ou S, T4 est H, CH3 et/ou C2H5 positionné (s) de façon à former un centre asymétrique de conformation R ou S, caractérisée en ce qu'elle contient une solution ionique de complexes d'association catanionique, dont chaque molécule est formée d'une molécule de formule (I) et d'une ou deux molécules d'un transporteur (T) amphiphile acide, biodégradable et biocompatible..
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu' elle contient un mélange des deux composés de formule (I) dans la formule desquels Ri=R4=Ti=T2=T3=H, R2=OH, R3=NH- (CH2) 2-imidazol-5-yl et T4=CH3 ou C2H5.
3. Composition selon l'une, des revendications .1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,01 à 500 g/L de composé (s) de formule (I) .
4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un composé brunissant autre que le (s) composé (s) de formule (I) .
5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le (s) composé (s) brunissant ( s ) qu'elle contient, indépendamment du (ou des) composé (s) de formule (I) , est de la dihydroxyacétone , et/ou de 1' érythrulose et/ou au moins un colorant hydrosoluble.
6. Composition selon l'une des revendication 1. à 5, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un composé activateur de la mélanogénèse autre que le (s) composé (s) de formule (I) choisi dans le groupe formé par les substrats de la biosynthèse de la mélanine et les activateurs biologiques de la mélanogënèse capables d'agir en stimulant la synthèse de. mélanine . et/ou le transfert des mélanosomes des mélanocytes vers les kératinocytes .
7. Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'activateur de la mélanogénèse qu'elle contient, indépendamment du (ou des) composé (s) de formule (I) , est choisi dans le groupe formé par la L- tyrosine, ou ses dérivés comme la N-acétyl-L-tyrosine , la L-dihydrophénylalanine, les diols aliphatiques comme le propylène glycol, les diols cycliques, les agonistes des récepteurs adénosine-1, les agonistes des récepteurs adénosine-2, les α-hydroxyacides et leurs dérivés, les β- hyroxyacides et leurs dérivés, les rétinoïdes ou leurs dérivés, les peptides pro-opiomélanocortiques, Ι'α-MSH ou ses analogues, les agonistes du récepteur MC1R, les analogues de l'AMPc, les psoralènes, les activateurs de l'activité des récepteurs PAR-2.
8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu' elle est appliquée sur la peau en une quantité comprise entre 0,0001 et 10 mg/cm2/jour de composé (s) de formule (I) .
9. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'une association catanionique est réalisée par au moins une réaction acido-basique effectuée entre le groupe acide d'un transporteur (T) et un groupe aminé du substituant R3 du carbone en position 6 du composé de formule (I) .
10. Composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que le transporteur (T) est un tensioactif bolaforme dérivé de sucre comprenant au sein de sa structure une fonction acide.
11. Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce que la fonction acide du transporteur (T) est choisie dans le groupe formé par les acides carboxylique COOH, sulfurique 0-S03H, sulfonique S03H, phosphorique O-P(O) (R50)OH, où R5 est une chaîne alkyle en Ci-C6, phosphonique 0-P(0)R6OH et phosphinique P(0)R6OH où R6 est H ou une chaîne alkyle en Ci-C6.
12. Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce que le tensioactif dérivé de sucre est un dérivé de monosaccharide ou de polysaccharide .
13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce que le dérive de sucre est un dérivé de glucose ou de lactose.
14. Composition selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que le dérivé acide de sucre est constitué d'une structure de sucre sur laquelle est reliée, par un groupe NH, une chaîne aliphatique (CH2)P, linéaire ou ramifiée, dont l'extrémité opposée à la structure de sucre porte un groupe acide, p ayant une valeur comprise entre 4 et 10.
15. Composition selon l'une des revendications 1 à 14 , caractérisée en ce que le rapport des quantités pondérales A de composé (s) de formule (I) et B du (ou des) transporteur (s) (T) est compris entre 0,001 et 1000.
16. Composition selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,01 à 150 g de l'ensemble des constituants A et B par litre de composition.
17. Composition selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un adjuvant pris dans le groupe formé par au moins un épaississant et/ou un colorant hydrosoluble et/ou un parfum et/ou un alcool et/ou une vitamine et/ou un émulsionnant , utilisé seul ou en mélange avec éventuellement un co- émulsionnant , et/ou une huile ou autre corps gras et/ou un conservateur et/ou un antioxydant et/ou un bactéricide .
18. Composition selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un filtre solaire chimique ou physique ou un mélange de tels filtres .
19. Composition selon l'une des revendications 1 à 18, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée en nanocapsules ou vésicules de taille nanométrique suspendues dans un milieu liquide.
20. Composition selon l'une des revendications 1 à 18, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée sous forme d' hydrogels, de crèmes, de lotions, d'émulsions ou d' aérosols .
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