WO2015120737A1 - 取代的吡啶并嘧啶化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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WO2015120737A1
WO2015120737A1 PCT/CN2014/093541 CN2014093541W WO2015120737A1 WO 2015120737 A1 WO2015120737 A1 WO 2015120737A1 CN 2014093541 W CN2014093541 W CN 2014093541W WO 2015120737 A1 WO2015120737 A1 WO 2015120737A1
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cancer
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mmol
etoac
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PCT/CN2014/093541
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易崇勤
许恒
韩方斌
林松文
陶晶
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北大方正集团有限公司
方正医药研究院有限公司
北大医疗产业集团有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • This invention relates to the field of medicinal chemistry, and in particular to a class of substituted pyridopyrimidine compounds, to processes for their preparation and to their use as PI3-K and/or mTOR kinase inhibitors.
  • Molecularly targeted drugs are a key mode of action for receptors or transduction processes in the process of cell carcinogenesis, and a therapeutic mode that inhibits tumor growth at the molecular level. Targeting the characteristic molecules of tumor cells, it exerts anti-tumor effects while reducing the toxic side effects on normal cells.
  • Phosphoinositide 3-kinase catalyzes the synthesis of phosphatidylinositol (PI) second messenger PI(3)P, PI(3,4)P2 and PI(3,4,5)P3(PIP3) . Under the proper cellular environment, these three lipids control a variety of physiological processes including cell growth, survival, differentiation, and chemotaxis.
  • the major PI3-kinase isoform in cancer is a class I PI3-K ⁇ consisting of a catalytic (p110 ⁇ ) subunit and a adaptor (p85) subunit.
  • PI3-K/Akt/PTEN pathway Several components of the PI3-K/Akt/PTEN pathway are involved in tumor formation and play an important role in the regulation of many cellular processes including cell cycle regulation, proliferation, survival, apoptosis, and exercise, and are such as cancer, diabetes, and An important component of the molecular mechanism of diseases such as immune inflammation.
  • mTOR belongs to a serine-threonine protein kinase group in the PI3K superfamily, also Known as type IV PI3-K. mTOR is responsible for monitoring nutrient availability, cellular energy levels, oxygen levels and mitotic signaling, and plays a crucial regulatory role in cell growth and proliferation. mTOR has two complexes of mTORC1 and mTORC2.
  • AKT also known as protein kinase B (PKB)
  • PKA protein kinase B
  • AKT is a serine-threonine protein kinase encoded by the proto-oncogene c-akt, which is the core of the PI3K/AKT signal transduction pathway and its sustained activation. It is closely related to the occurrence and development of tumors.
  • AKT can attenuate the inhibition of mTORC1 by phosphorylating PRAS40 and the tumor suppressor protein TSC2, thereby activating mTOR, increasing the efficiency of mRNA translation, thereby increasing the expression of a series of proteins related to cell growth and differentiation, and accelerating tumorigenesis.
  • the mTORC2 complex has PDK2 activity and can phosphorylate and activate AKT.
  • PI3-K ⁇ and mTOR kinase are attractive and promising targets for the development of cancer drugs, which will inhibit the proliferation of cancer cells, and avoid damage to the body caused by cytotoxic agents, and the resistance of cancer cells to cytotoxic agents. Accepted. Novel PI3-K ⁇ inhibitors and mTOR kinase inhibitors are needed for use as cancer therapeutics in the field of cancer therapy.
  • the present invention provides substituted pyridopyrimidine compounds, as well as processes for their preparation and their use as PI3-K and/or mTOR kinase inhibitors.
  • the substituted pyridopyrimidine compound provided by the present invention has the structure shown in the following formula I:
  • Ar is:
  • X is C or N;
  • Y is a substituted or unsubstituted five-membered aromatic heterocyclic group, a substituted or unsubstituted six-membered aromatic heterocyclic group, a substituted or unsubstituted phenyl group, or a substituted or unsubstituted C1- 4 alkyl.
  • the above five-membered aromatic heterocyclic group is, for example, a thienyl group; the above-mentioned six-membered aromatic heterocyclic group is, for example, a pyridyl group; and the above C1-4-alkyl group is, for example, a methyl group, an ethyl group, a propyl group or a hexyl group.
  • the above substituted five-membered aromatic heterocyclic group, substituted six-membered aromatic heterocyclic group, substituted phenyl group and substituted C1-4 alkyl group may have one or more substituents, and the substituent may be hydrogen or halogen.
  • a cyano group, a C1-4 alkyl group, a C1-4 alkoxy group, or a C1-4 alkyl group substituted by one or more halogens specifically, for example, H, F, Cl, OCH 3 , CN, CF 3 Wait.
  • Y is an unsubstituted or substituted phenyl group, an unsubstituted or substituted pyridyl group, or an unsubstituted or substituted thienyl group, ie, the group shown below
  • R 1 represents a substituent, and R 1 is independently hydrogen, halogen, cyano, C1-4 alkyl, C1-4 alkoxy, C1-4 alkyl substituted by one or more halogens; n represents a substitution
  • the number of bases is an integer from 0 to 5 (for example, 0, 1, 2, 3, 4 or 5).
  • R 1 is independently H, F, Cl, OCH 3 , CN or CF 3 ; n is 0, 1 or 2.
  • independently means that among the three groups selected from the above Y, R 1 may be the same or different; and/or in each group, if n is 2, 3, 4 or 5, R 1 can be the same or different.
  • R 1 may be in the ortho, meta or para position of the phenyl group or in the ortho or meta position of the thienyl or pyridyl group.
  • the substituted pyridopyrimidine compound of the present invention is selected from one of the following compounds I-1 to I-14:
  • the present invention also provides a method for preparing the substituted pyridopyrimidine compound, which is reacted with a compound of the formula 1 and a compound of the formula 2 in the presence of a palladium catalyst to form a formula I.
  • Compound, the reaction formula is as follows:
  • R 3 is a halogen, preferably bromine; and Ar-R 2 is a compound represented by the following formula 3 or formula 4:
  • Ar is:
  • X is C or N;
  • Y is a substituted or unsubstituted five-membered aromatic heterocyclic group, a substituted or unsubstituted six-membered aromatic heterocyclic group, a substituted or unsubstituted phenyl group, or a substituted or unsubstituted C1- 4 alkyl.
  • the compound of the above formula 1 can be prepared by the following steps:
  • a compound represented by Formula 7 is condensed with N,O-dimethylhydroxylamine hydrochloride in the presence of a carbonyldiimide condensing agent to obtain a compound represented by Formula 6:
  • the carbonyldiimide-based condensing agent is preferably 1-ethyl-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride.
  • R3 and R4 are each independently halogen, R3 is preferably bromine, and R4 is preferably fluorine or chlorine.
  • the compound of the above formula 4 can be produced by reacting a compound of the formula 8 with a compound of the formula 9 in the presence of a palladium catalyst to obtain a compound of the formula 4.
  • R5 is a halogen, preferably bromine.
  • the compound represented by the above formula 8 may have a structure represented by the following formula 10 or formula 11:
  • R 5 is a halogen, preferably bromine.
  • the compound represented by Formula 10 can be produced by the following steps:
  • R 5 is a halogen, preferably bromine.
  • the compound represented by the above formula 11 can be produced by subjecting a compound represented by the formula 15 to a sulfonylation reaction to obtain a compound represented by the formula 11.
  • R 5 is a halogen, preferably bromine.
  • the compound of the formula I has the structure shown in the above formula I-3, and the preparation method comprises the following steps:
  • R 3 and R 6 are each independently halogen, preferably bromine; and PMB represents p-methoxybenzyl.
  • the palladium catalyst used in the above preparation method may be tetrakis(triphenylphosphine)palladium, bis(triphenylphosphine)palladium dichloride or [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloride. Palladium.
  • the substituted pyridopyrimidine compound of the present invention is a multi-kinase inhibitor capable of simultaneously inhibiting a variety of kinases present in cells and on the cell surface, including PI3-K and/or mTOR kinase.
  • the PI3-K priority refers to PI3-K ⁇ .
  • each subtype of PI3-K is highly homologous, and they have substantially the same inhibitory site of action.
  • the compound and a pharmaceutically acceptable salt thereof are useful for the preparation of a medicament for treating and/or preventing a disease caused by PI3-K and/or mTOR kinase.
  • the pharmaceutically acceptable salts include: hydrochloride, hydrobromide, sulfate, phosphate, methanesulfonate, triflate, besylate, p-toluenesulfonate, 1- Naphthalene sulfonate, 2-naphthalene sulfonate, acetate, trifluoroacetate, malate, tartrate, citrate, lactate, oxalate, succinate, fumarate, Maleate, benzoate, salicylate, phenylacetate, mandelate, and the like.
  • the invention also provides a pharmaceutical composition for treating and/or preventing a disease caused by PI3-K and/or mTOR kinase, the pharmaceutical composition comprising the substituted pyridopyrimidine compound of the invention and a medicinal adjuvant .
  • the pharmaceutical composition is an injection, Oral preparations, transdermal absorbents or suppositories.
  • the disease caused by PI3-K and/or mTOR kinase is cancer, for example: brain cancer, glioblastoma, head and neck cancer, lung cancer, melanoma, liver cancer, kidney cancer, acute leukemia, chronic leukemia, non-small cell lung cancer, prostate Cancer, thyroid cancer, skin cancer, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, breast cancer, abnormal bone marrow hyperplasia syndrome, esophageal cancer, sarcoma, osteosarcoma or rhabdomyosarcoma.
  • cancer for example: brain cancer, glioblastoma, head and neck cancer, lung cancer, melanoma, liver cancer, kidney cancer, acute leukemia, chronic leukemia, non-small cell lung cancer, prostate Cancer, thyroid cancer, skin cancer, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, breast cancer, abnormal bone marrow hyperplasia syndrome, esophageal cancer, sarcoma, osteo
  • the substituted pyridopyrimidine compound of the present invention and a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used for the preparation of a medicament for treating and/or preventing a tumor disease.
  • prostate cancer thyroid cancer
  • skin cancer colon cancer
  • rectal cancer pancreatic cancer
  • ovarian cancer breast cancer
  • abnormal bone marrow hyperplasia syndrome esophageal cancer
  • sarcoma sarcoma
  • osteosarcoma sarcoma
  • rhabdomyosarcoma rhabdomyosarcoma
  • the invention further relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I according to any one of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and optionally a pharmaceutically acceptable excipient (such as a carrier or excipient) .
  • the pharmaceutical compositions of the invention contain from 0.1% to 90% by weight of a compound of the invention and/or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Pharmaceutical compositions can be prepared according to methods known in the art.
  • the compound of the invention and/or its pharmaceutically acceptable salt can be combined with one or more solid or liquid pharmaceutical excipients to provide a suitable administration form or dosage for human use. form.
  • the compound of the present invention or a pharmaceutical composition containing the same may be administered in a unit dosage form, which may be enterally or parenterally, such as orally, muscle, subcutaneous, nasal, oral mucosa, skin, peritoneum or rectum.
  • a unit dosage form which may be enterally or parenterally, such as orally, muscle, subcutaneous, nasal, oral mucosa, skin, peritoneum or rectum.
  • Formulations such as tablets, capsules, pills, aerosols, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, liposomes, transdermal agents, buccal tablets, suppositories, lyophilized powders Wait. It may be a general preparation, a sustained release preparation, a controlled release preparation, and various microparticle delivery systems.
  • the present invention can be widely used.
  • Various vectors are known in the art.
  • carriers are, for example, diluents and absorbents such as starch, dextrin, calcium sulfate, lactose, mannitol, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, calcium carbonate, kaolin, microcrystalline cellulose, silicic acid.
  • diluents and absorbents such as starch, dextrin, calcium sulfate, lactose, mannitol, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, calcium carbonate, kaolin, microcrystalline cellulose, silicic acid.
  • wetting agent and binder such as water, glycerin, polyethylene glycol, ethanol, propanol, starch slurry, dextrin, syrup, honey, glucose solution, gum arabic, gelatin paste, sodium carboxymethyl cellulose , shellac, methyl cellulose, potassium phosphate, polyvinyl pyrrolidone, etc.
  • disintegrating agents such as dried starch, alginates, agar powder, brown algae starch, sodium bicarbonate and tannic acid, calcium carbonate, polyoxyethylene, Sorbitol fatty acid ester, sodium dodecyl sulfate, methyl cellulose, ethyl cellulose, etc.
  • disintegration inhibitors such as sucrose, glyceryl tristearate, cocoa butter, hydrogenated oil, etc.
  • absorption promotion Agents such as quaternary ammonium salts, sodium lauryl sulfate, and the like
  • lubricants such as talc, silica,
  • Tablets may also be further formed into coated tablets, such as sugar coated tablets, film coated tablets, enteric coated tablets, or bilayer tablets and multilayer tablets.
  • various carriers known in the art can be widely used.
  • the carrier are, for example, diluents and absorbents such as glucose, lactose, starch, cocoa butter, hydrogenated vegetable oil, polyvinylpyrrolidone, Gelucire, kaolin, talc, etc.; binders such as acacia, tragacanth, gelatin , ethanol, honey, liquid sugar, rice paste or batter; etc.; disintegrating agents, such as agar powder, dried starch, alginate, sodium dodecyl sulfate, methyl cellulose, ethyl cellulose, and the like.
  • the active ingredient compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed with the various carriers described above, and the mixture thus obtained is placed in a hard gelatin capsule or a soft capsule.
  • the active ingredient compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof may also be formulated as a microcapsule, suspended in an aqueous medium to form a suspension, or may be enclosed in a hard capsule or used as an injection.
  • an injection preparation such as a solution, an emulsion, a lyophilized powder injection and a suspension
  • all diluents conventionally used in the art for example, water, ethanol, polyethylene glycol, 1, 3 may be used.
  • an appropriate amount of sodium chloride, glucose or glycerin may be added to the preparation for injection, and a conventional auxiliary solvent may also be added.
  • coloring agents may also be added to the pharmaceutical preparations as needed.
  • the invention further relates to the use of a compound of the formula I according to any one of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation or as a PI3-K inhibitor and/or an inhibitor of mTOR kinase; in particular, said PI3- K is PI3-K ⁇ .
  • the invention also relates to a method of inhibiting tumor cells in vivo or in vitro comprising the step of using an effective amount of a compound of formula I according to any one of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; in particular, said tumor cells
  • the cells of the following tumors brain cancer, glioblastoma, head and neck cancer, lung cancer, melanoma, liver cancer, kidney cancer, acute leukemia, chronic leukemia, non-small cell lung cancer, prostate cancer, thyroid cancer, skin cancer, colon cancer , rectal cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, breast cancer, abnormal bone marrow hyperplasia syndrome, esophageal cancer, sarcoma, osteosarcoma or rhabdomyosarcoma.
  • the invention further relates to a method of inhibiting or blocking the PI3-K/Akt/PTEN pathway comprising the step of using an effective amount of a compound of formula I according to any one of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the invention also relates to a method of treating and/or preventing and/or adjunctively treating cancer comprising the step of using an effective amount of a compound of formula I according to any one of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
  • the cancer is selected from the group consisting of: brain cancer, glioblastoma, head and neck cancer, lung cancer, melanoma, liver cancer, kidney cancer, acute leukemia, chronic leukemia, non-small cell lung cancer, prostate cancer, thyroid cancer, skin cancer, colon cancer. , rectal cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, breast cancer, abnormal bone marrow syndrome, esophageal cancer, sarcoma, osteosarcoma and rhabdomyosarcoma.
  • the dose of the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof depends on many factors such as the nature and severity of the disease to be prevented or treated, the sex, age, body weight and individual response of the patient or animal, and the specific compound used, The route of administration and the number of administrations, etc.
  • the above dosages may be administered in a single dosage form or divided into several, for example two, three or four dosage forms.
  • each active ingredient in the pharmaceutical compositions of the invention may be varied so that the amount of active compound obtained is effective to the particular patient, composition and mode of administration required Therapeutic response.
  • the dosage level will be selected based on the activity of the particular compound, the route of administration, the severity of the condition being treated, and the condition and past medical history of the patient to be treated. However, it is the practice in the art that the dosage of the compound be started from a level lower than that required to achieve the desired therapeutic effect, and the dosage is gradually increased until the desired effect is obtained.
  • the total daily usage of a compound or pharmaceutical composition of the invention will be determined by the attending physician within the scope of sound medical judgment.
  • the particular therapeutically effective dosage level for any particular patient will depend on a number of factors, including the disorder being treated and the severity of the disorder; the activity of the particular compound employed; the particular composition employed; The age, weight, general health, sex and diet of the patient; the time of administration, the route of administration and the rate of excretion of the particular compound employed; the duration of treatment; the drug used in combination or concurrent with the particular compound employed; Similar factors are known in the medical field.
  • the dosage of the compound be started from a level lower than that required to achieve the desired therapeutic effect, and the dosage is gradually increased until the desired effect is obtained.
  • the dose of the compounds of the invention for use in mammals, especially humans may range from 0.001 to 1000 mg/kg body weight per day, for example between 0.01 and 100 mg/kg body weight per day, for example between 0.01 and 10 mg per kg body weight. /day.
  • the compounds according to the invention are effective in preventing and/or treating various diseases or conditions described herein.
  • C1-4 alkyl means a straight or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl Base, tert-butyl.
  • C1-4 alkoxy refers to a straight or branched alkoxy group having from 1 to 4 carbon atoms, such as methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, n-butoxy , sec-butoxy, tert-butoxy.
  • halogen refers to fluoro, chloro, bromo and iodo.
  • the term "effective amount” refers to a dose that can achieve a treatment, prevention, alleviation, and/or alleviation of a disease or condition described herein in a subject.
  • Diisopropylethylamine (14.7 g, 114 mmol) was added dropwise at 0 ° C to 2-chloro-5-bromonicotinic acid (9.0 g, 38 mmol), 1-ethyl-(3-dimethylaminopropyl) Carbodiimide hydrochloride (10.92 g, 57 mmol), N,O-dimethylhydroxylamine hydrochloride (4.45 g, 45.6 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (300 mg, 2.45 mmol) in dichloro In a mixture of methane (100 mL). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature overnight.
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine 80 mg, 0.33 mmol
  • 6-methoxypyridin-3-ylboronic acid 77 mg, 0.50 mmol
  • potassium carbonate 420 mg, 3.0 mmol
  • bis(triphenylphosphine)palladium dichloride (20 mg, 0.028 mmol
  • Step 4 N-(5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrrolo[2,3-b] Synthesis of pyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide
  • N-(5-Bromo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide 300 mg, 0.77 mmol
  • anhydrous potassium acetate (228 mg, 2.32) Methanol
  • a mixture of diboronic acid pinacol ester (236 mg, 0.93 mmol) in dioxane (7 mL) degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene] Palladium chloride (50 mg, 0.077 mmol) was added to the mixture.
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 5 N-(5-(2-Amino-8-cyclopentyl-4-methyl-7-oxo-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl) Synthesis of -1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine 72 mg, 0.30 mmol
  • N-(5-(4,4,5,5-tetramethyl-1, 3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide 575 mg, 0.36 mmol
  • Potassium carbonate 420 mg, 3.0 mmol
  • a mixture of N,N-dimethylformamide 5 mL
  • water 1 mL
  • bis(triphenylphosphine)palladium dichloride 20 mg, 0.028 mmol
  • Step 4 N-(1-(4-Methoxybenzyl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl) Synthesis of -1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide
  • N-(5-Bromo-1-(4-methoxybenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide (1.05 g, 2.06 mmol)
  • [1,1 Bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (0.73 mg, 0.1 mmol) was added to the mixture.
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (78 mg, 0.32 mmol), N-(1-(4-methoxybenzyl)-5-(4, 4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolanpentan-2-yl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-3-yl)-2,4 a mixture of difluorobenzenesulfonamide (217 mg, 0.39 mmol) and potassium carbonate (420 mg, 3.0 mmol) in N,N-dimethylformamide (5 mL) and water (1 mL).
  • Phenylphosphine)palladium dichloride (24 mg, 0.033 mmol) was added to the mixture.
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 2 hours under an argon atmosphere. After cooling to room temperature, the reaction mixture was diluted with EtOAc (EtOAc) The combined organic layers were washed with EtOAc EtOAc. The residue was purified by column chromatography (EtOAc mjjjjjjjjjjjj -yl)-1-(4-methoxybenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyrimidin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide as a yellow solid (53 mg) .
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide (576 mg, 1.52 mmol), anhydrous potassium acetate (300 mg, 3.04 mmol) and boronic acid a mixture of ketone ester (466 mg, 1.84 mmol) in dioxane (7 mL), and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (56 mg, 0.076 mmol) was added to the mixture.
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (68 mg, 0.28 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)-2,4-difluorobenzenesulfonamide (145 mg, 0.34 mmol) and potassium carbonate (420 mg, 3.0 mmol) a mixture of N,N-dimethylformamide (5 mL) and water (1 mL), and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride ( 20 mg, 0.028 mmol) was added to the mixture.
  • reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere. After cooling to room temperature, use 30 mL of water The reaction mixture was diluted and extracted with ethyl acetate (30 mL ⁇ 3). The combined organic layers were washed with EtOAcq. The residue was purified with EtOAc EtOAcjjjjjj
  • Step 2 N-(2-Methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridine-3- Synthesis of phenylsulfonamide
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)benzenesulfonamide (580 mg, 1.69 mmol), anhydrous potassium acetate (332 mg, 3.38 mmol) and diboronic acid pinacol ester (515 mg, 2.03) Ment)
  • the mixture in dioxane (10 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (62 mg, 0.0845 mmol) was added to the mixture. .
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 3 Synthesis of N-(5-(2-amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)benzenesulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)benzenesulfonamide (188 mg, 0.48 mmol, 1.2 eq) and a mixture of potassium carbonate (168 mg, 1.2 mmol) in N,N-dimethylformamide (5 mL) and water (1 mL), and [1,1]- Phenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (29 mg, 0.04 mmol) was added to the mixture.
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-4-methoxybenzenesulfonamide (373 mg, 1.0 mmol), anhydrous potassium acetate (196 mg, 2 mmol) and diboronic acid pinacol
  • ester (304 mg, 1.2 mmol) in dioxane (7 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (62 mg, 0.0845 mmol) ) is added to the mixture.
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 h under argon atmosphere.
  • Step 3 N-(5-(2-Amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)-4-methoxy Benzenesulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)-4-methoxybenzenesulfonamide (202 mg, 0.48 mmol) and potassium carbonate (237 mg, 1.7 mmol)
  • a mixture of N,N-dimethylformamide (4.25 mL) and water (0.85 mL) was degassed, and bis(triphenylphosphine)palladium dichloride (28 mg, 0.04 mmol) was added to the mixture.
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-4-cyanobenzenesulfonamide (368 mg, 1.0 mmol), anhydrous potassium acetate (196 mg, 2 mmol) and diboronic acid pinacol ester (304 mg, 1.2 mmol) of the mixture in dioxane (7 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (37 mg, 0.05 mmol) Add to the mixture. The resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 3 N-(5-(2-Amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)-4-cyanobenzene Sulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (100 mg, 0.42 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)-4-cyanobenzenesulfonamide (410 mg, 0.48 mmol) and potassium carbonate (247 mg, 1.8 mmol)
  • a mixture of N,N-dimethylformamide (4.5 mL) and water (0.9 mL) was degassed and bis(triphenylphosphine)palladium dichloride (28 mg, 0.04 mmol) was added to the mixture.
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-4-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (411 mg, 1.0) (mmol), a mixture of anhydrous potassium acetate (196 mg, 2 mmol) and diboronic acid pinacol ester (304 mg, 1.2 mmol) in dioxane (7 mL), and [1,1'-bis (two) Phenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (37 mg, 0.05 mmol) was added to the mixture. The resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 3 N-(5-(2-Amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)-4-(trifluoro Synthesis of methyl)benzenesulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)-4-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (220 mg, 0.48 mmol) and potassium carbonate (237 mg, 1.72 mmol) degassed a mixture of N,N-dimethylformamide (4.5 mL) and water (0.9 mL) and added bis(triphenylphosphine)palladium dichloride (28 mg, 0.04 mmol) In the mixture.
  • Step 2 N-(2-Methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl) Synthesis of pyridin-3-yl)-2-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-4-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (411 mg, 1.0 mmol), anhydrous potassium acetate (196 mg, 2 mmol) and diboronic acid
  • pinacol ester 304 mg, 1.2 mmol
  • dioxane 7 mL
  • [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride 37 mg
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 3 N-(5-(2-Amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)-2-(trifluoro Synthesis of methyl)benzenesulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)-2-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (220 mg, 0.48 mmol) and potassium carbonate (237 mg, 1.72 mmol) degassed a mixture of N,N-dimethylformamide (4.5 mL) and water (0.9 mL) and added bis(triphenylphosphine)palladium dichloride (28 mg, 0.04 mmol) In the mixture.
  • Step 1 Synthesis of N-(5-bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-4-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide
  • Step 2 N-(2-Methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)- 4-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-4-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (429 mg, 1.0 mmol), anhydrous potassium acetate (196 mg, 2 mmol And dehydrogenation of a mixture of diboronic acid pinacol ester (304 mg, 1.2 mmol) in dioxane (7 mL) and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloride Palladium (37 mg, 0.05 mmol) was added to the mixture. The resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 3 N-(5-(2-Amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)-4-fluoro-3 -(trifluoromethyl)benzenesulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)-4-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (229 mg, 0.48 mmol) and carbonic acid
  • Degassed mixture of potassium (237 mg, 1.72 mmol) in N,N-dimethylformamide (4.5 mL) and water (0.9 mL) and bis(triphenylphosphine)palladium dichloride (28 mg, 0.04) Methyl) is added to the mixture.
  • Step 1 Synthesis of N-(5-bromo-2-methoxypyridin-3-yl)pyridine-3-sulfonyl chloride
  • Step 2 N-(2-Methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)pyridine Synthesis of -3-sulfonamide
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)pyridine-3-sulfonamide (345 mg, 1.0 mmol), anhydrous potassium acetate (197 mg, 2 mmol) and diboronic acid pinacol ester (305 mg) , 1.2 mmol) of the mixture in dioxane (7 mL) was degassed, and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (37 mg, 0.05 mmol) was added. In the mixture. The resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)pyridine-3-sulfonamide (188 mg, 0.48 mmol) and potassium carbonate (168 mg, 1.2 mmol) in N
  • the mixture in N-dimethylformamide (2 mL) and water (0.4 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (29 mg, 0.04) Methyl) is added to the mixture.
  • Step 2 N-(2-Methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)thiophene Synthesis of -2-sulfonamide
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)thiophene-2-sulfonamide (349 mg, 1.0 mmol), anhydrous potassium acetate (196 mg, 2 mmol) and diboronic acid pinacol ester (304 mg) , 1.2 mmol) of the mixture in dioxane (7 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene] Palladium dichloride (37 mg, 0.05 mmol) was added to the mixture. The resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)thiophene-2-sulfonamide (191 mg, 0.48 mmol) and potassium carbonate (168 mg, 1.2 mmol) in N
  • the mixture in N-dimethylformamide (2 mL) and water (0.4 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (29 mg, 0.04) Methyl) is added to the mixture.
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)-5-chlorothiophene-2-sulfonamide (595 mg, 1.55 mmol), anhydrous potassium acetate (306 mg, 3.1 mmol) and bisboronic acid a mixture of the alcohol ester (472 mg, 1.86 mmol) in dioxane (10 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (60 mg, 0.08 mmol) was added to the mixture. The resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 3 N-(5-(2-Amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)-5-chlorothiophene- 2-sulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine (96 mg, 0.4 mmol), N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)-5-chlorothiophene-2-sulfonamide (207 mg, 0.48 mmol) and potassium carbonate (168 mg, 1.2 mmol) a mixture of N,N-dimethylformamide (2 mL) and water (0.4 mL), and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (29 mg, 0.04 mmol) was added to the mixture.
  • Step 2 N-(2-Methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl) Synthesis of pyridin-3-yl)methanesulfonamide
  • N-(5-Bromo-2-methoxypyridin-3-yl)methanesulfonamide (490 mg, 1.74 mmol), anhydrous potassium acetate (315 mg, 3.20 mmol) and diboronic acid pinacol ester (531 mg, 2.09)
  • Degassed mixture in dioxane (10 mL) and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (64 mg, 0.087 mmol) was added to the mixture. .
  • the resulting reaction mixture was degassed and stirred at 100 ° C for 3 hours under an argon atmosphere.
  • Step 3 N-(5-(2-Amino-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl)-2-methoxypyridin-3-yl)methanesulfonamide
  • 6-Bromo-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-2-amine 72 mg, 0.20 mmol
  • N-(2-methoxy-5-(4,4,5,5-) Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin-3-yl)methanesulfonamide 119 mg, 0.36 mmol, 1.2 eq
  • potassium carbonate 125 mg, 0.90 mmol
  • the mixture in N-dimethylformamide (4 mL) and water (0.45 mL) was degassed and [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride (24 mg, 0.03) Methyl) is added to the mixture.
  • the potency of the compounds of the invention against PI3-K[alpha] was assessed using an in vitro kinase assay.
  • the kinase activity of PI3K- ⁇ was determined by detecting the level of ADP produced in the kinase reaction using luciferase-based luminescence detection.
  • ADP-Glo TM kinase assay kit was purchased from Promega. All assays were performed at room temperature using a Corning 3674 white 384 well plate.
  • PI3K-alpha kinase is from BPS Biosciences.
  • the substrate was PIP2/PS (Invitrogen).
  • the assay buffer included 40 mM Tris-HCl (pH 7.5), 3 mM MgCl 2 and 0.01% BSA.
  • a PI3K-alpha kinase solution was prepared by diluting PI3K-alpha kinase to 4 nM in assay buffer.
  • the substrate solution included 100 ⁇ M PIP 2/PS and 100 ⁇ M ATP.
  • the test compound was diluted to 500 ⁇ M in 100% DMSO and then serially diluted 3 times in 100% DMSO to 10 different concentrations. Compounds diluted in 100% DMSO were then diluted 5 fold in assay buffer.
  • 0.5 ⁇ L of the diluted compound and 2 ⁇ L of PI3-K ⁇ kinase solution were added to each well of a 384-well plate, shaken and mixed, and incubated in the dark for 15 min at room temperature.
  • the reaction was started by adding 2.5 ⁇ L of the substrate solution per well, and the final reaction volume was 5 ⁇ L.
  • the plate was capped and the reaction was allowed to proceed for 45 min at room temperature, then the reaction was stopped by the addition of 5 [mu]L of Kinase Glo (TM) reagent.
  • the plates were incubated for 40 min and then 10 [mu]L of Kinase Assay Buffer was added.
  • the plates were then equilibrated in the dark for 30 min and then luminescence was read on an Envision plate reader.
  • the percent inhibition is calculated based on the following formula:
  • Inhibition % [1-(RLU compound -RLU min )/(RLU max -RLU min )] ⁇ 100
  • RLU compounds are cold light readings at a given compound concentration
  • RLU min is a cold light reading without the addition of a kinase
  • RLU max is a cold light reading without the addition of a compound.
  • Compound IC 50 values were calculated by using the Microsoft Excel XLfit program. The experimental results are shown in Table 1.
  • the potency of the compounds of the invention for mTOR was assessed using an in vitro kinase assay.
  • the kinase activity of mTOR was determined by measuring the phosphorylation level of the kinase substrate 4E-BP1.
  • the mTOR, GFP-4E-BP1 and TR-FRET kinase assay kits were purchased from Invitrogen.
  • the assay buffer included 50 mM HEPES (pH 7.5), 5 mM MgCl 2 , 0.01% BSA, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, and 0.01% Triton.
  • the mTOR kinase reaction solution was prepared by diluting mTOR to 0.31 ng/ ⁇ L in assay buffer.
  • the substrate solution included 0.8 ⁇ M GFP-4E-BP1 and 60 ⁇ M ATP.
  • the TR-FRET assay buffer included 4 nM of Tb-chelating labeled anti-4E-BP1 [pT46] and 30 mM EDTA.
  • test compound was diluted to 500 ⁇ M in 100% DMSO and then serially diluted 3 times in 100% DMSO to 10 different concentrations. Compounds diluted in 100% DMSO were then diluted 5 fold in assay buffer. 0.5 ⁇ L of the diluted compound and 2 ⁇ L of mTOR kinase solution were added to each well of a 384-well plate, shaken and mixed, and incubated in the dark for 15 min at room temperature. The reaction was started by adding 2.5 ⁇ L of the substrate solution per well, and the final reaction volume was 5 ⁇ L. The reaction was allowed to proceed at room temperature for 40 min, followed by the addition of 5 ⁇ L of TR-FRET assay buffer to stop the reaction. The plate was incubated for 60 minutes in the dark. The FRET signals at 495 nm and 520 nm were measured after excitation at 340 nm on an Envision plate reader.
  • the percent inhibition is calculated based on the following formula:
  • FRET compound is the ratio of the FRET signal at 520 nm to the FRET signal at 495 nm for a given compound concentration
  • FRET min is the ratio of the FRET signal at 520 nm to the mTOR reaction without kinase and compound
  • FRET max The ratio of the FT at 520 nm to the FRET signal at 495 nm for the mTOR reaction without the compound.
  • Compound IC 50 values were calculated by using the Microsoft Excel XLfit program. The experimental results are shown in Table 1.
  • the compounds of formula I of the present invention have significant inhibitory effects on PI3-K?.
  • the compound I-1 IC 50 values and I-14 to reach 100-500 nM; compound I-2, I-3, I-5, I-6, I-7, I-10, IC 50 I-12 of the value reaches 10-100 nM; compounds I-4, I-8, I-9, I-11, IC 50 values of I-13 reaches 1-10nM.
  • the compounds of the formula I according to the invention also have a pronounced inhibitory effect on mTOR.
  • Compound I-1 has an IC 50 value of 2.794 ⁇ M
  • Compounds I-2, I-3, I-6, I-11, and I-12 have IC 50 values of 100-600 nM
  • Compounds I-4 and I-5 The IC 50 values of I-7, I-8, I-9, I-10, and I-13 reached 10-100 nM.
  • the compound of the present invention has a significant inhibitory effect on PI3-K ⁇ and mTOR, and the compound of the present invention can be used for the preparation of a medicament for treating and preventing cancer and tumor diseases.

Abstract

本发明公开了一种取代的吡啶并嘧啶化合物及其制备方法和应用。所示取代的吡啶并嘧啶化合物的结构通式如式I所示，其中Ar为取代的吡啶基。本发明的研究发现这类化合物是一种多激酶抑制剂，能同时抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶，包括PI3-K和/或mTOR激酶。由此，这类化合物及其药学上可接受的盐可用于制备治疗和/或预防PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病(癌症)的药物。

Description

取代的吡啶并嘧啶化合物及其制备方法和应用 技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类取代的吡啶并嘧啶化合物，以及它们的制备方法和其作为PI3-K和/或mTOR激酶抑制剂的用途。
背景技术
抗肿瘤药物的研究与开发是当今生命科学中极富挑战性且意义重大的领域。近年来，随着分子生物学的飞速发展以及人们对癌症发生、发展、作用机制的进一步认识，恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期的调控、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正在被逐步阐明。因此寻找和发现选择性作用于特定靶点的高效、低毒、特异性强的新型抗肿瘤药物已成为当前药物研究开发的重要领域之一。由此产生了一个新的抗癌药物领域-分子靶向药物。
分子靶向药物是指针对细胞癌变过程的受体或转导过程中关键的酶，从分子水平抑制肿瘤生长的治疗模式。以肿瘤细胞的特征分子为靶点，在发挥抗肿瘤作用的同时，减少了对正常细胞的毒副作用。
磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)催化磷脂酰肌醇(PI)第二信使PI(3)P、PI(3，4)P2及PI(3，4，5)P3(PIP3)的合成。在适当的细胞环境下，这三种脂质控制多种包括细胞生长、存活、分化及趋化性的生理学过程。癌症中的主要PI3-激酶同功异型物为由催化性(p110α)亚单元及转接子(p85)亚单元组成的I类PI3-Kα。PI3-K/Akt/PTEN通路的数种组分涉及肿瘤形成，在包括细胞周期调节、增生、存活、细胞凋亡及运动的许多细胞过程的调控中发挥重要作用，且为诸如癌症、糖尿病及免疫性炎症等疾病的分子机制的重要组分。
mTOR属于PI3K超家族中的一个丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶组，也 被称为IV型PI3-K。mTOR负责监测营养可获得性，细胞能量水平，含氧量和有丝分裂信号，在细胞的生长和增殖中起着至关重要的调节作用。mTOR存在mTORC1和mTORC2两种复合物。
AKT，又称为蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)，是原癌基因c-akt编码表达的一种丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，作为PI3K/AKT信号转导通路的核心，其持续活化与肿瘤的发生发展密切相关。AKT可以通过磷酸化PRAS40和肿瘤抑制蛋白TSC2，减轻二者对mTORC1的抑制作用，从而激活mTOR，提高mRNA翻译的效率，从而增加一系列与细胞生长和分化相关蛋白的表达，加快了肿瘤的发生。mTORC2复合物具有PDK2活性，可以磷酸化并激活AKT。
因此，PI3-Kα以及mTOR激酶是开发癌症药物的具有吸引力和前景的靶标，此类药剂将抑制癌细胞增生，且避免了细胞毒制剂对机体的损伤，及癌细胞对细胞毒制剂的耐受。人们需要新颖的PI3-Kα抑制剂以及mTOR激酶抑制剂，以作为癌症治疗药物应用于癌症治疗领域。
发明内容
本发明提供一种取代的吡啶并嘧啶化合物，以及它们的制备方法和其作为PI3-K和/或mTOR激酶抑制剂的用途。
本发明所提供的取代的吡啶并嘧啶化合物具有如下式I所示的结构：
Figure PCTCN2014093541-appb-000001
式I中，Ar为：
Figure PCTCN2014093541-appb-000002
其中，X为C或N；Y为取代或未取代的五元芳杂环基、取代或未取代的六元芳杂环基、取代或未取代的苯基、或者取代或未取代的C1-4烷基。
上述五元芳杂环基例如噻吩基等；上述六元芳杂环基例如吡啶基等；上述C1-4烷基例如：甲基、乙基、丙基、己基。
上述取代的五元芳杂环基、取代的六元芳杂环基、取代的苯基和取代的C1-4烷基上可具有一个或多个取代基，所述取代基可以是氢、卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、或者是被一个或多个卤素取代的C1-4烷基，具体的例如：H、F、Cl、OCH3、CN、CF3等。
在本发明的一些取代的吡啶并嘧啶化合物中，上述Y为未取代的或取代的苯基，未取代的或取代的吡啶基，或者未取代的或取代的噻吩基，即为下列所示基团之一：
Figure PCTCN2014093541-appb-000003
其中，R1代表取代基，R1独立地为氢、卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、被一个或多个卤素取代的C1-4烷基；n代表取代基数目，为0～5的整数(例如0、1、2、3、4或5)。优选的，R1独立地为H、F、Cl、OCH3、CN或CF3；n为0、1或2。其中，独立地含义是，在上述Y所选自的三个基团之中，R1可以相同或者不同；和/或在每一个基团中，如果 n为2、3、4或5，R1可以相同或者不同。此外，R1可以位于苯基的邻位、间位或者对位，或者位于噻吩基或吡啶基的邻位或者间位。
特别优选的，本发明所述的取代的吡啶并嘧啶化合物选自下列化合物I-1至I-14之一：
Figure PCTCN2014093541-appb-000004
Figure PCTCN2014093541-appb-000005
本发明还提供了所述取代的吡啶并嘧啶化合物的制备方法，将式1所示化合物与式2所示化合物在钯催化剂的存在下反应生成式I所示的 化合物，反应式如下：
Figure PCTCN2014093541-appb-000006
其中，R3为卤素，优选为溴；Ar-R2为如下式3或式4所示的化合物：
Figure PCTCN2014093541-appb-000007
Ar为：
Figure PCTCN2014093541-appb-000008
其中，X为C或N；Y为取代或未取代的五元芳杂环基、取代或未取代的六元芳杂环基、取代或未取代的苯基、或者取代或未取代的C1-4烷基。
上述式1所示化合物可以通过如下步骤制备得到：
1)将式7所示的化合物与N，O-二甲基羟胺盐酸盐在碳酰二亚胺类缩合剂的存在下发生缩合反应，得到式6所示的化合物：
Figure PCTCN2014093541-appb-000009
所述碳酰二亚胺类缩合剂优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。
2)使式6所示的化合物与甲基溴化镁发生亲核取代反应，得到式5所示的化合物：
Figure PCTCN2014093541-appb-000010
3)式5所示的化合物与碳酸胍发生合环反应，得到式1所示化合物：
Figure PCTCN2014093541-appb-000011
其中，R3和R4各自独立为卤素，R3优选为溴，R4优选为氟或氯。
上述式4所示化合物可以通过如下方法制备得到：使式8所示的化合物与式9所示的化合物在钯催化剂存在下反应，得到式4所示的化合物。
Figure PCTCN2014093541-appb-000012
式8中，R5为卤素，优选为溴。
上述式8所示的化合物可以具有下述式10或式11所示的结构：
Figure PCTCN2014093541-appb-000013
式10和式11中，R5为卤素，优选为溴。
其中，式10所示的化合物可以通过如下步骤制备得到：
i)使式14所示的化合物发生硝化反应，得到式13所示的化合物；
Figure PCTCN2014093541-appb-000014
ii)式13所示的化合物在氯化亚锡的存在下发生还原反应，得到式12所示的化合物；
Figure PCTCN2014093541-appb-000015
iii)使式12所示的化合物发生磺酰化反应，得到式10所示的化合物；
Figure PCTCN2014093541-appb-000016
其中，R5为卤素，优选为溴。
上述式11所示的化合物可以通过如下方法制备得到：使式15所示的化合物发生磺酰化反应，得到式11所示的化合物。
Figure PCTCN2014093541-appb-000017
式11和式15中，R5为卤素，优选为溴。
在本发明的一个实施例中，所述式I化合物结构如上述式I-3所示，其制备方法包括如下步骤：
a)使式20所示的化合物在钠氢的存在下发生亲核取代反应，得到式19所示的化合物；
Figure PCTCN2014093541-appb-000018
b)使式19所示的化合物在丁基锂的存在下发生磺酰化反应，得到式18所示的化合物；
Figure PCTCN2014093541-appb-000019
c)使式18所示的化合物与联硼酸频哪醇酯在钯催化剂的存在下反应，得到式16所示的化合物；
Figure PCTCN2014093541-appb-000020
d)式1所示的化合物与式16所示的化合物在钯催化剂的存在下发生Suzuki反应，其反应产物直接在三氟乙酸回流中除去对甲氧基苄基，得到式I-3所示的化合物；
Figure PCTCN2014093541-appb-000021
上述各式中，R3和R6各自独立为卤素，优选为溴；PMB表示对甲氧基苄基。
上述制备方法中所用钯催化剂可以是四(三苯基磷)钯，二(三苯基膦)二氯化钯或[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯。
本发明取代的吡啶并嘧啶化合物是一种多激酶抑制剂，能同时抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶，包括PI3-K和/或mTOR激酶。所述PI3-K优先指PI3-Kα。不拘于理论的限制，PI3-K的各个亚型同源性较强，它们具有基本相同的抑制剂作用位点。该化合物及其药学上可接受的盐可用于制备治疗和/或预防PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病的药物。所述药学上可接受的盐包括：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、苯基乙酸盐、杏仁酸盐等。
发明还提供了一种治疗和/或预防PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病的药物组合物，所述的药物组合物中含有本发明所述的取代的吡啶并嘧啶化合物及药用辅料。优选地，所述的药物组合物为注射剂、 口服制剂、透皮吸收剂或栓剂。
PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病为癌症，例如：脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤或横纹肌瘤。
因此，本发明所述的取代的吡啶并嘧啶化合物及其药学上可接受的盐可用于制备治疗和/或预防肿瘤疾病的药物。
根据本发明任一项所述式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗和/或预防和/或辅助治疗PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病；具体地，所述PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病为癌症，所述癌症是脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤或横纹肌瘤。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含本发明中任一项所述式I化合物或其药学上可接受的盐，以及任选的药学上可接受的辅料(例如载体或赋形剂)。
通常本发明药物组合物含有0.1％-90重量％的本发明化合物和/或其药学上可接受的盐。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明化合物和/或其药学上可接受的盐与一种或多种固体或液体药物辅料结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明的化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本 领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分化合物或其可药用盐与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分化合物或其可药用盐制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓 冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明还涉及本发明中任一项所述式I化合物或其药学上可接受的盐在制备或者作为PI3-K抑制剂和/或mTOR激酶抑制剂中的用途；具体地，所述PI3-K为PI3-Kα。
本发明还涉及一种在体内或体外抑制肿瘤细胞的方法，包括使用有效量的本发明中任一项所述式I化合物或其药学上可接受的盐的步骤；具体地，所述肿瘤细胞为如下肿瘤的细胞：脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤或横纹肌瘤。
本发明还涉及一种抑制或者阻断PI3-K/Akt/PTEN通路的方法，包括使用有效量的本发明中任一项所述式I化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
本发明还涉及一种治疗和/或预防和/或辅助治疗癌症的方法，包括使用有效量的本发明中任一项所述式I化合物或其药学上可接受的盐的步骤；具体地，所述癌症选自：脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤和横纹肌瘤。
本发明的化合物或其可药用盐的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。
可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需 的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
但应认识到，本发明化合物或药物组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明的化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001-1000mg/kg体重/天，例如介于0.01-100mg/kg体重/天，例如介于0.01-10mg/kg体重/天。
根据本发明的化合物可以有效地预防和/或治疗本发明所述的各种疾病或病症。
本发明中，术语“C1-4烷基”是指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基。
术语“C1-4烷氧基”是指具有1-4个碳原子的直链或支链烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基。
术语“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴和碘。
术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。在本发明说明书和权利要求中，化合物的命名都是依据化学结构式，如果表示同一化合物时化合物的命名与化学结构式不符，以化学结构式或化学反应式为准。本领域技术人员能够理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：6-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000022
步骤1：5-溴-2-氯-N-甲氧基-N-甲基烟酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000023
0℃下将二异丙基乙基胺(14.7g，114mmol)滴加到2-氯-5-溴烟酸(9.0g，38mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(10.92g，57mmol)，N，O-二甲基羟胺盐酸盐(4.45g，45.6mmol)和4-二甲氨基吡啶(300mg，2.45mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物中。将产生的反应混合物在室温下搅拌过夜。用100mL水洗涤反应混合物，用二氯甲烷(50mL×2)萃取水层。用水(100mL×2)、饱和食盐水(100mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(8.5g，产率为79％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.67(s，1H)，8.41(s，1H)，3.50(s，3H)， 3.30(s，3H)
步骤2：1-(5-溴-2-氯吡啶-3-基)乙酮的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000024
氩气气氛中，将甲基溴化镁的无水四氢呋喃溶液(1M，8mL，8mmol)滴加到在0℃下的2-氨基-5-溴-N-甲氧基-N-甲基烟酰胺(2.0g，7.15mmol)的无水四氢呋喃(20mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后在0℃下用饱和氯化铵溶液淬灭。将产生的混合物用50mL水稀释，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)。用水(50mL×2)、饱和食盐水(50mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝6∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(1.5g，产率为90％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.71(d，J＝2.5Hz，1H)，8.46(d，J＝2.5Hz，1H)，2.62(s，3H)
步骤3：6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000025
氩气气氛中，将1-(5-溴-2-氯吡啶-3-基)乙酮(1.0g，4.26mmol)和碳酸胍(1.04g，8.52mmol)于N，N-二甲基乙酰胺(25mL)中的混合物在135℃下搅拌3小时。冷却至室温后，加入100mL水，用乙酸乙酯萃取产生的混合物(50mL×3)。用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为褐色固体(340mg，产率为42％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.87(d，J＝2.6Hz，1H)，8.61(d，J＝2.6Hz，1H)，7.29(s，2H)，2.72(s，3H).
步骤4：6-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000026
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(80mg，0.33mmol)，6-甲氧基吡啶-3-基硼酸(77mg，0.50mmol)和碳酸钾(420mg，3.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)和水(1mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基膦)二氯化钯(20mg，0.028mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌2小时。冷却至室温后，用30mL水稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝60∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(71mg，产率为81％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.17(d，J＝2.6Hz，1H)，8.66(d，J＝2.3Hz，1H)，8.58(d，J＝2.6Hz，1H)，8.21(dd，J＝8.6，2.6Hz，1H)，7.17(s，2H)，6.97(d，J＝8.6Hz，1H)，3.92(s，3H)，2.80(s，3H).
MS(ESI+)m/z 268.0[M+H]+.
实施例2：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-1H-吡咯并 [3，4-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000027
步骤1：5-溴-3-硝基-7-氮杂吲哚的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000028
将5-溴-7-氮杂吲哚(2.0g，10.2mmol)分批加到0℃下的发烟硝酸(15mL)中并将反应混合物在10-15℃中搅拌30分钟。将反应混合物缓慢倒入冰水(100mL)中，并将产生的混悬液搅拌30分钟。抽滤收集固体，水洗，烘干得到产物为黄色固体(2.2g，收率为89.1％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.50(s，1H)，8.90(s，1H)，8.56(d，J＝2.3Hz，1H)，8.55(d，J＝2.2Hz，1H).
步骤2：3-氨基-5-溴-7-氮杂吲哚的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000029
在氩气气氛中，将氯化亚锡二水合物(4.6g，20.75mmol)于浓盐酸(4mL)中的溶液滴加到于85℃下的5-溴-3-硝基-7-氮杂吲哚(1.0g，4.15mmol)于冰乙酸(35mL)中的澄清溶液中。将反应混合物在85℃搅拌3小时，然后减压浓缩。将残留物分配于水(100mL)和乙酸乙酯(50mL)中，用氢氧化钠水溶液碱化至pH为11。将产生的混悬液经硅藻土过滤，水层用乙酸乙酯萃取(50mL×2)。用水和饱和食盐水洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(519mg，收率为59％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.87(s，1H)，8.16(d，J＝2.1Hz，1H)，8.13(d，J＝2.2Hz，1H)，6.72(d，J＝2.2Hz，1H)，4.34(br s，2H).
步骤3：N-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000030
将3-氨基-5-溴-7-氮杂吲哚(60.0mg，0.28mmol)，吡啶(41.4mg，0.56mmol)和2，4-二氟苯磺酰氯(66.0mg，0.31mmol)依次加到二氯甲烷(5mL)中并将反应混合物在室温搅拌2小时。用二氯甲烷(20mL)稀释反应混合物，用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓 缩。用柱色谱(硅胶，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(52mg，收率47.7％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.91(s，1H)，10.20(s，1H)，8.24(d，J＝2.2Hz，1H)，7.80(d，J＝2.1Hz，1H)，7.69(td，J＝8.6，6.4Hz，1H)，7.59-7.46(m，1H)，7.32(d，J＝2.7Hz，1H)，7.15(td，J＝8.5，2.1Hz，1H).
步骤4：N-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000031
将N-(5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺(300mg，0.77mmol)，无水醋酸钾(228mg，2.32mmol)和联硼酸频哪醇酯(236mg，0.93mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(50mg，0.077mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝2∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(235mg，产率为70％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.77(s，1H)，10.11(s，1H)，8.38(d，J＝1.5Hz，1H)，7.88(d，J＝1.5Hz，1H)，7.66(td，J＝8.6，6.5Hz，1H)，7.52-7.42(m，1H)，7.29(d，J＝2.5Hz，1H)，7.12(td，J＝8.5，2.1Hz，1H)，1.36-1.27(m，12H).
步骤5：N-(5-(2-氨基-8-环戊基-4-甲基-7-氧代-7，8-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000032
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(72mg，0.30mmol)，N-(5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺(575mg，0.36mmol)和碳酸钾(420mg，3.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)和水(1mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基膦)二氯化钯(20mg，0.028mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌2小时。冷却至室温后，用30mL水稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝60∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(38mg，产率为27％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.79(s，1H)，10.25(s，1H)，9.05(d，J＝2.5Hz，1H)，8.64(d，J＝2.1Hz，1H)，8.49(d，J＝2.6Hz，1H)，8.06(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76-7.08(m，1H)，7.53(td，J＝9.8，2.5Hz，1H)，7.2S(d，J＝2.6Hz，1H)，7.17(s，2H)，7.12-7.15(m，1H)，2.83(s，3H).
MS(ES1+)m/z 467.9[M+H]+.
实施例3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000033
步骤1：5-溴-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000034
将5-溴-2-氯烟腈(10g，46mmol)和水合肼(10mL)在正丁醇(150mL)中的混合物回流4小时。冷却至室温后，抽滤收集产生的黄色固体。将黄色固体混悬于无水乙醇中并将混悬液搅拌30分钟。抽滤收集黄色固体，用水洗涤，烘干得到产物(8.0g，产率为82％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.19(s，1H)，8.40(d，J＝2.2Hz，1H)，8.38(d，J＝2.2Hz，1H)，5.68(s，2H).
步骤2：5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000035
0℃下将NaH(60％于矿物油中的分散物，59mg，2.47mmol)加到5-溴-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(500mg，2.36mmol)于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中，并将产生的反应混合物搅拌30分钟。加入4-甲氧基氯苄(423mg，2.47mmol)，并将产生的反应混合物在0℃下搅拌30分钟。用水(25mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取(25mL×3)。用水和饱和食盐水洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝1∶2，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(430mg，产率为55％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.46(d，J＝2.1Hz，1H)，8.39(d，J＝2.1Hz，1H)，7.14(d，J＝8.5Hz，2H)，6.83(d，J＝8.5Hz，2H)，5.82(s，2H)，5.26(s，2H)，3.69(s，3H).
步骤3：N-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000036
-78℃下，将正丁基锂(2.4M于正己烷中的溶液，0.55mL，1.32mmol)滴加到5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(420mg，1.26mmol)于无水四氢呋喃(10mL)中的溶液中。将产生的反应混合物在78℃下搅拌20分钟。滴加2，4二氟苯磺酰氯(282mg，1.32mmol)的无水四氢呋喃(3mL)溶液，并将产生的反应混合物在78℃下搅拌30分钟。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(25mL×3)。用水和饱和食盐水洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝9∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(85mg，产率为28％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.43(s，1H)，8.65(d，J＝2.1Hz，1H)，8.39(d，J＝2.2Hz，1H)，7.81(dd，J＝14.9，8.7Hz，1H)，7.58-7.38(m，1H)，7.21(t，J＝8.5Hz，1H)，6.94(d，J＝8.6Hz，2H)，6.78(d，J＝8.6Hz，2H)，5.40(s，2H)，3.70(s，3H).
步骤4：N-(1-(4-甲氧基苄基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊烷-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000037
将N-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺(1.05g，2.06mmol)，无水醋酸钾(405mg，4.12mmol)和联硼酸频哪醇酯(627mg，2.47mmol)在二氧六环(10mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.73mg，0.1mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30 mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(715mg，产率为62％)。
步骤5：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000038
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(78mg，0.32mmol)，N-(1-(4-甲氧基苄基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊烷-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺(217mg，0.39mmol)和碳酸钾(420mg，3.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)和水(1mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基磷)二氯化钯(24mg，0.033mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌2小时。冷却至室温后，用15mL水稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)。用水(10mL×2)、饱和食盐水(10mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/甲醇＝40∶1，v/v)纯化残留物得到N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]嘧啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺为黄色固体(53mg)。将此黄色固体在5mL三氟乙酸中的溶液回流16小时。减压蒸干反应混合物，分散于20mL水中，用饱和碳酸氢钠溶液调中和，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)。用水(10mL×2)、饱和食盐水(10mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/甲醇＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为白色固体(20mg，产率为13％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.44(s，1H)，11.32(s，1H)，9.18(d，J＝2.5Hz，1H)，8.99(d，J＝2.1Hz，1H)，8.65(d，J＝2.6Hz，1H)，8.51(d，J＝2.0Hz，1H)，7.92-7.86(m，1H)，7.59-7.50(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，7.21 (s，1H)，2.84(s，3H).
实施例4：N-(5-(2-氨基-4-甲氧基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基-3- 基)-2，4-二氟苯磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000039
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000040
将2，4-二氟苯磺酰氯(510mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将25mL水加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(590mg，产率为78％)
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.46(s，1H)，8.13(d，J＝2.3Hz，1H)，7.84-7.70(m，2H)，7.64-7.51(m，1H)，7.23(td，J＝8.5，2.0Hz，1H)，3.61(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000041
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺(576mg，1.52mmol)，无水醋酸钾(300mg，3.04mmol)和联硼酸频哪醇酯(466mg，1.84mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(56mg，0.076mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(480mg，产率为74％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.18(s，1H)，8.20(d，J＝1.5Hz，1H)，7.80-7.63(m，2H)，7.56(dd，J＝14.3，5.5Hz，1H)，7.20(t，J＝7.5Hz，1H)，3.61(s，3H)，1.29(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲氧基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000042
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(68mg，0.28mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-2，4-二氟苯磺酰胺(145mg，0.34mmol)和碳酸钾(420mg，3.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)和水(1mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(20mg，0.028mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却至室温后，用30mL水 稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝60∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(70mg，产率为54％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.31(s，1H)，9.12(d，J＝2.6Hz，1H)，8.52(d，J＝2.4Hz，1H)，8.49(d，J＝2.4Hz，1H)，8.08(d，J＝2.2Hz，1H)，7.76(m，1H)，7.59(m，1H)，7.21(s，1H)，7.19(s，2H)，3.64(s，3H)，2.81(s，3H).
MS(ESI+)m/z 458.8[M+H]+.
实施例5：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000043
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000044
将苯磺酰氯(424mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸 钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(580mg，产率为85％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.16(s，1H)，8.05(d，J＝2.2Hz，1H)，7.81-7.38(m，6H)，3.62(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000045
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)苯磺酰胺(580mg，1.69mmol)，无水醋酸钾(332mg，3.38mmol)和联硼酸频哪醇酯(515mg，2.03mmol)在二氧六环(10mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(62mg，0.0845mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝9∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(470mg，产率为71％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.86(s，1H)，8.15(d，J＝1.3Hz，1H)，7.77-7.49(m，6H)，3.60(s，3H)，1.29(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000046
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)苯磺酰胺(188mg， 0.48mmol，1.2eq)和碳酸钾(168mg，1.2mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)和水(1mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(30mg，产率为18％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.92(d，J＝2.4Hz，1H)，8.18(d，J＝2.1Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.82-7.73(m，2H)，7.54(s，1H)，7.48-7.41(m，3H)，7.12(s，2H)，3.74(s，3H)，2.76(s，3H).
实施例6：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000047
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000048
将4-甲氧基苯磺酰氯(496mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3 mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(668mg，产率为90％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.99(s，1H)，8.02(d，J＝2.4Hz，1H)，7.70(d，J＝9.0Hz，2H)，7.67(d，J＝2.4Hz，1H)，7.09(d，J＝9.0Hz，2H)，3.82(s，3H)，3.67(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000049
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺(373mg，1.0mmol)，无水醋酸钾(196mg，2mmol)和联硼酸频哪醇酯(304mg，1.2mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(62mg，0.0845mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3h。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(370mg，产率为88％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.67(s，1H)，8.13(d，J＝1.6Hz，1H)，7.72(d，J＝1.6Hz，1H)，7.61(d，J＝9.0Hz，2H)，7.05(d，J＝9.0Hz，2H)，3.80(s，3H)，3.65(s，3H)，1.29(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000050
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺(202mg，0.48mmol)和碳酸钾(237mg，1.7mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4.25mL)和水(0.85mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基膦)二氯化钯(28mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(58mg，产率为32％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.83(s，1H)，9.06(d，J＝2.4Hz，1H)，8.44(d，J＝2.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，7.93(s，1H)，7.72(d，J＝8.8Hz，2H)，7.19(s，2H)，7.08(d，J＝8.8Hz，2H)，3.82(s，3H)，3.70(s，3H)，2.80(s，3H).
实施例7：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)-4-氰基苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000051
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-氰基苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000052
将4-氰基苯磺酰氯(482mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(699mg，产率为95％)
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.49(s，1H)，8.12(d，J＝2.3Hz，1H)，8.07(d，J＝8.5Hz，2H)，7.90(d，J＝8.5Hz，2H)，7.76(d，J＝2.3Hz，1H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-4-氰基苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000053
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-氰基苯磺酰胺(368mg，1.0mmol)，无水醋酸钾(196mg，2mmol)和联硼酸频哪醇酯(304mg，1.2mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(37mg，0.05mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝6∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(360mg，产率为87％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.22(s，1H)，8.24(d，J＝1.6Hz，1H)，7.73(d，J＝1.6Hz，1H)，7.30(d，J＝4.0Hz，1H)，7.21(d，J＝4.0Hz，1H)，3.71(s，3H)，1.30(s，12H).
MS(ESI+)m/z 333.9[M+H]+.
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-氰基苯磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000054
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(100mg，0.42mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-4-氰基苯磺酰胺(410mg，0.48mmol)和碳酸钾(247mg，1.8mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4.5mL)和水(0.9mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基膦)二氯化钯(28mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(88mg，产率为47％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.14(d，J＝2.5Hz，1H)，8.30(d，J＝2.6Hz，1H)，8.22(d，J＝2.3Hz，1H)，8.10(d，J＝2.3Hz，1H)，7.96(d，J＝8.4Hz，2H)，7.81(d，J＝8.4Hz，2H)，5.58(s，2H)，3.91(s，3H)，2.90(s，3H).
实施例8：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000055
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000056
将4-(三氟甲基)苯磺酰氯(587mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(690mg，产率为84％)
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.42(s，1H)，8.11(d，J＝2.4Hz，1H)，7.98(d，J＝8.8Hz，2H)，7.94(d，J＝8.8Hz，2H)，7.76(d，J＝2.4Hz，1H)，3.54(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000057
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺(411mg，1.0 mmol)，无水醋酸钾(196mg，2mmol)和联硼酸频哪醇酯(304mg，1.2mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(37mg，0.05mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(390mg，产率为85％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.14(s，1H)，8.20(d，J＝1.6Hz，1H)，7.96(d，J＝8.4Hz，2H)，7.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.69(d，J＝1.6Hz，1H)，3.54(s，3H)，1.29(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000058
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺(220mg，0.48mmol)和碳酸钾(237mg，1.72mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4.5mL)和水(0.9mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基膦)二氯化钯(28mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1∶2，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(55mg，产率为28％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.29(s，1H)，9.12(d，J＝2.6Hz，1H)，8.53(d，J＝2.6Hz，1H)，8.48(d，J＝2.3Hz，1H)，8.08(d，J＝2.3Hz，1H)，7.98(d，J＝8.8Hz，2H)，7.96(d，J＝8.8Hz，2H)，7.20(s，2H)，3.54(s，3H)，2.80(s，3H).
实施例9：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000059
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000060
将2-(三氟甲基)苯磺酰氯(587mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(660mg，产率为80％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.07-7.89(m，3H)，7.88-7.62(m，3H)，3.69(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000061
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺(411mg，1.0mmol)，无水醋酸钾(196mg，2mmol)和联硼酸频哪醇酯(304mg，1.2mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(37mg，0.05mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(349mg，产率为76％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.96(s，1H)，8.19(d，J＝1.6Hz，1H)，8.06-7.96(m，1H)，7.96-7.90(m，1H)，7.88-7.77(m，2H)，7.72(d，J＝1.6Hz，1H)，3.56(s，3H)，1.28(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000062
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺(220mg，0.48mmol)和碳酸钾(237mg，1.72mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4.5mL)和水(0.9mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基膦)二氯化钯(28mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气， 在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝20∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(41mg，产率为21％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.09(s，1H)，9.09(d，J＝2.4Hz，1H)，8.50(d，J＝2.4Hz，1H)，8.48(d，J＝2.0Hz，1H)，8.07-7.99(m，3H)，7.89-7.80(m，2H)，7.20(s，2H)，3.59(s，3H)，2.80(s，3H).
实施例10：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000063
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000064
将4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰氯(631mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。 用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(721mg，产率为84％)
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.13(dd，J＝6.4，2.1Hz，1H)，8.07-7.96(m，1H)，8.00(d，J＝2.4Hz，1H)，7.89(d，J＝2.4Hz，1H)，7.54-7.43(t，J＝9.6Hz，1H)，3.68(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000065
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰胺(429mg，1.0mmol)，无水醋酸钾(196mg，2mmol)和联硼酸频哪醇酯(304mg，1.2mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(37mg，0.05mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(413mg，产率为87％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.21(s，1H)，8.20(d，J＝1.6Hz，1H)，8.15-7.97(m，2H)，7.72(m，2H)，3.61(s，3H)，1.29(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000066
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰胺(229mg，0.48mmol)和碳酸钾(237mg，1.72mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4.5mL)和水(0.9mL)中的混合物脱气，并将二(三苯基膦)二氯化钯(28mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(92mg，产率为45％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.34(s，1H)，9.13(d，J＝2.8Hz，1H)，8.55(d，J＝2.8Hz，1H)，8.50(d，J＝2.4Hz，1H)，8.16(dd，J＝6.4，2.0Hz，1H)，8.11(d，J＝2.4Hz，1H)，8.10-8.05(m，1H)，7.79-7.67(t，J＝9.6Hz，1H)，7.19(s，2H)，3.60(s，3H)，2.81(s，3H).
实施例11：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶 -3-基)吡啶-3-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000067
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)吡啶-3-磺酰氯的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000068
将吡啶-3-磺酰氯(427mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(510mg，产率为74％)
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.42(s，1H)，8.94-8.85(m，1H)，8.82(dd，J＝4.8，1.5Hz，1H)，8.20-8.04(m，2H)，7.78(d，J＝2.3Hz，1H)，7.62(ddd，J＝8.1，4.8，0.7Hz，1H)，3.56(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)吡啶-3-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000069
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)吡啶-3-磺酰胺(345mg，1.0mmol)，无水醋酸钾(197mg，2mmol)和联硼酸频哪醇酯(305mg，1.2mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(37mg，0.05mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1.5∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固 体(140mg，产率为36％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.17(s，1H)，8.87-8.76(m，2H)，8.20(d，J＝1.7Hz，1H)，8.03(ddd，J＝8.1，2.3，1.6Hz，1H)，7.75(d，J＝1.7Hz，1H)，7.60(ddd，J＝8.1，4.8，0.7Hz，1H)，3.56(s，3H)，1.30(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)吡啶-3-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000070
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)吡啶-3-磺酰胺(188mg，0.48mmol)和碳酸钾(168mg，1.2mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)和水(0.4mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(30mg，产率为18％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.92-8.89(m，2H)，8.57(dd，J＝4.8，1.2Hz，1H)，8.18(d，J＝2.4Hz，1H)，8.08(d，J＝7.6Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.52(d，J＝2.0Hz，1H)，7.45(dd，J＝7.6，4.8Hz，1H)，7.11(s，2H)，3.75(s，3H)，2.77(s，3H).
实施例12：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)噻吩-2-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000071
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)噻吩-2-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000072
将噻吩-2-磺酰氯(438mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(546mg，产率为78％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.31(s，1H)，8.10(d，J＝2.4Hz，1H)，7.95(dd，J＝4.8，1.2Hz，1H)，7.74(d，J＝2.4Hz，1H)，7.54(dd，J＝3.6，1.2Hz，1H)，7.15(dd，J＝4.8，3.6Hz，1H)，3.68(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)噻吩-2-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000073
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)噻吩-2-磺酰胺(349mg，1.0mmol)，无水醋酸钾(196mg，2mmol)和联硼酸频哪醇酯(304mg，1.2mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁] 二氯化钯(37mg，0.05mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(320mg，产率为81％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.00(s，1H)，8.19(d，J＝1.6Hz，1H)，7.94-7.88(dd，J＝4.8，1.6Hz，1H)，7.77(d，J＝1.6Hz，1H)，7.43(dd，J＝3.6，1.6Hz，1H)，7.12(dd，J＝4.8，4.8Hz，1H)，3.68(s，3H)，1.30(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)噻吩-2-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000074
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)噻吩-2-磺酰胺(191mg，0.48mmol)和碳酸钾(168mg，1.2mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)和水(0.4mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(31mg，产率为18％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.17(s，1H)，9.10(d，J＝2.4Hz，1H)，8.50(d，J＝2.4Hz，1H)，8.47(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝2.0Hz，1H)， 7.94(dd，J＝4.8，，1.2Hz，1H)，7.53(dd，J＝3.6，1.2Hz，1H)，7.19(s，2H)，7.18-7.14(dd，J＝4.4，4.0Hz，1H)，3.71(s，3H)，2.81(s，3H).
实施例13：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)-5-氯噻吩-2-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000075
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-5-氯噻吩-2-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000076
将5-氯-噻吩-2-磺酰氯(521mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将水(25mL)加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(755mg，产率为98％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.01(d，J＝2.1Hz，1H)，7.88(d，J＝2.1Hz，1H)，7.33(d，J＝3.9Hz，1H)，7.02(d，J＝3.9Hz，1H)，3.79(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-5-氯噻吩-2-磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000077
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)-5-氯噻吩-2-磺酰胺(595mg，1.55mmol)，无水醋酸钾(306mg，3.1mmol)和联硼酸频哪醇酯(472mg，1.86mmol)在二氧六环(10mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(60mg，0.08mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝8∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(458mg，产率为69％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.22(s，1H)，8.24(d，J＝1.7Hz，1H)，7.73(d，J＝1.7Hz，1H)，7.30(d，J＝4.1Hz，1H)，7.21(d，J＝4.1Hz，1H)，3.71(s，3H)，1.30(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-5-氯噻吩-2-磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000078
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(96mg，0.4mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)-5-氯噻吩-2-磺酰胺(207mg，0.48mmol)和碳酸钾(168mg，1.2mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)和水(0.4mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反 应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝40∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(61mg，产率为33％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.36(s，1H)，9.13(d，J＝2.4Hz，1H)，8.54(d，J＝2.4Hz，1H)，8.52(d，J＝2.0Hz，1H)，8.06(d，J＝2.0Hz，1H)，7.40(d，J＝4.0Hz，1H)，7.24(d，J＝4.0Hz，1H)，7.20(br s，2H)，3.72(s，3H)，2.81(s，3H).
实施例14：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶 -3-基)甲烷磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000079
步骤1：N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)甲烷磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000080
将甲烷磺酰氯(275mg，2.4mmol，1.2eq)的二氯甲烷(5mL)溶液滴加到3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(0.406g，2mmol)和吡啶(237mg，3mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液中，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将25mL水加到反应混合物中，用二氯甲烷萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(498mg，产率为89％).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.49(s，1H)，8.09(d，J＝2.3Hz，1H)，7.78(d，J＝2.3Hz，1H)，3.91(s，3H)，3.10(s，3H).
步骤2：N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 吡啶-3-基)甲烷磺酰胺的合成
Figure PCTCN2014093541-appb-000081
将N-(5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基)甲烷磺酰胺(490mg，1.74mmol)，无水醋酸钾(315mg，3.20mmol)和联硼酸频哪醇酯(531mg，2.09mmol)在二氧六环(10mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(64mg，0.087mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌3小时。冷却后，将30mL水加到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝2∶1，v/v)纯化残留物得到产物黄色固体(410mg，产率为72％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.25(s，1H)，8.21(d，J＝1.7Hz，1H)，7.77(d，J＝1.7Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.01(s，3H)，1.30(s，12H).
步骤3：N-(5-(2-氨基-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲烷磺酰胺
Figure PCTCN2014093541-appb-000082
将6-溴-4-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-胺(72mg，0.20mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼环戊-2-基)吡啶-3-基)甲烷磺酰胺(119mg，0.36mmol，1.2eq)和碳酸钾(125mg，0.90mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4mL)和水(0.45mL)中的混合物脱气，并将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(24mg，0.03mmol)加到混合物中。将所得的反应混合物脱气，在氩气气氛中100℃下搅拌4小时。冷却后，将30mL水加 到反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物(30mL×3)。用水(30mL×2)饱和食盐水(30mL×3)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱(硅胶，二氯甲烷/10％氨水甲醇溶液＝50∶1，v/v)纯化残留物得到产物为黄色固体(14mg，产率为13％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(s，1H)，9.14(d，J＝2.3Hz，1H)，8.56(d，J＝2.2Hz，1H)，8.46(s，1H)，8.03(s，1H)，7.18(s，2H)，3.98(s，3H)，3.10(s，3H)，2.80(s，3H).
实施例15：生物化学检测PI3-Kα活性
使用体外激酶检测评估本发明的化合物对PI3-Kα的效能。使用基于荧光素酶的冷光检测，通过检测激酶反应中所产生的ADP水平来测定PI3K-α的激酶活性。ADP-GloTM激酶检测试剂盒购自Promega公司。所有检测均在室温下进行，使用Corning3674白色384孔板。PI3K-α激酶来自BPS Biosciences。底物为PIP2/PS(Invitrogen)。检测缓冲液包括40mM Tris-HCl(pH 7.5)，3mM MgCl2和0.01％BSA。通过在检测缓冲液将PI3K-α激酶稀释为4nM配制PI3K-α激酶溶液。底物溶液包括100μM PIP2/PS和100μM ATP。将待测化合物在100％DMSO中稀释至500μM，然后在100％DMSO按3倍连续稀释成10个不同浓度。然后将稀释于100％DMSO中的化合物在检测缓冲液中稀释5倍。将0.5μL稀释的化合物和2μL的PI3-Kα激酶溶液加到384孔板的各孔中，振摇混合后室温在暗处孵育15min。通过加入每孔2.5μL的底物溶液开始反应，最终反应体积为5μL。将板盖住并将反应在室温进行45min，随后加入5μL的激酶GloTM试剂终止反应。将板孵育40min，然后加入10μL激酶检测缓冲液。然后将板在暗处平衡30min，随后在用Envision读板器上读取冷光。
抑制百分率基于以下公式计算：
抑制％＝[1-(RLU化合物-RLUmin)/(RLUmax-RLUmin)]×100
其中RLU化合物为给定化合物浓度下的冷光读数，RLUmin为不加入激酶的情况下的冷光读数，RLUmax为不加入化合物的情况下的冷光读数。通过使用Excel中XLfit程序中来计算化合物的IC50值。实验结果见表1。
实施例16：生物化学检测mTOR活性
使用体外激酶检测评估本发明的化合物对于mTOR的效能。通过检测激酶底物4E-BP1的磷酸化水平来测定mTOR的激酶活性。mTOR、GFP-4E-BP1和TR-FRET激酶检测试剂盒购自Invitrogen公司。
所有检测实验均在室温下进行，使用PE公司Greiner 784076黑色384孔板。检测缓冲液包括50mM HEPES(pH7.5)、5mM MgCl2、0.01％BSA、1mM DTT、1mM EGTA和0.01％Triton。通过在检测缓冲液中将mTOR稀释为0.31ng/μL配制mTOR激酶反应溶液。底物溶液包括0.8μM GFP-4E-BP1和60μM ATP。TR-FRET检测缓冲液包括4nM的Tb-螯合标记的抗-4E-BP1[pT46]和30mM EDTA。将待测化合物在100％DMSO中稀释至500μM，然后在100％DMSO按3倍连续稀释成10个不同浓度。然后将稀释于100％DMSO中的化合物在检测缓冲液中稀释5倍。将0.5μL稀释的化合物和2μL的mTOR激酶溶液加到384孔板的各孔中，振摇混合后在室温下在暗处孵育15min。通过加入每孔2.5μL的底物溶液开始反应，最终反应体积为5μL。将反应在室温进行40min，随后加入5μL的TR-FRET检测缓冲液终止反应。将板在暗处孵育60分钟。在Envision读板器上340nm激发后测量495nm和520nm处的FRET信号，
抑制百分率基于以下公式计算：
抑制％＝[1-(FRET化合物-FRETmin)/(FRETmax-FRETmin)]×100
其中“FRET化合物”为给定化合物浓度下的520nm处与495nm处的FRET信号的比值，“FRETmin”为没有激酶和化合物的mTOR反应的520nm处与495nm处的FRET信号的比值，“FRETmax”为没有化合物的mTOR反应的520nm处与495nm处的FRET信号的比值。通过使用Excel中XLfit程序中来计算化合物的IC50值。实验结果见表1。
表1.PI3-Kα和mTOR生物学数据
Figure PCTCN2014093541-appb-000083
Figure PCTCN2014093541-appb-000084
Figure PCTCN2014093541-appb-000085
从表1的数据可以看出，本发明的式I化合物对PI3-Kα均具有明显的抑制作用。其中，化合物I-1和I-14的IC50值达到100-500nM；化合物I-2、I-3、I-5、I-6、I-7、I-10、I-12的IC50值达到10-100nM；化合物I-4、I-8、I-9、I-11、I-13的IC50值达到1-10nM。
本发明的式I化合物对mTOR同样具有明显的抑制作用。其中，化合物I-1的IC50值2.794μM；化合物I-2、I-3、I-6、I-11、I-12的IC50值达到100-600nM；化合物I-4、I-5、I-7、I-8、I-9、I-10、I-13的IC50值达到10-100nM。
从上述实验中可以看出，本发明化合物对PI3-Kα和mTOR具有明显的抑制作用，本发明化合物可用于制备治疗和预防癌症、肿瘤疾病的药物。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (31)

  1. 式I化合物：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100001
    式I中，Ar为：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100002
    其中，X为C或N；Y选自取代或未取代的五元芳杂环基、取代或未取代的六元芳杂环基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的C1-4烷基。
  2. 如权利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述五元芳杂环基为噻吩基。
  3. 如权利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述六元芳杂环基为吡啶基。
  4. 如权利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述Y上具有一个或多个取代基，所述取代基选自下列基团中的一种或多种：氢、卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、被一个或多个卤素取代的C1-4烷基。
  5. 如权利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述Y上具有一个或多个取代基，所述取代基选自下列基团中的一种或多种：H、F、Cl、OCH3、CN、CF3。
  6. 如权利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述Y选自下列基团之一：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100003
    其中，R1代表取代基，独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、被一个或多个卤素取代的C1-4烷基；n代表取代基的数目，为0～5的整数。
  7. 如权利要求6所述的式I化合物，其特征在于，R1独立地选自下列基团的一种或多种：H、F、Cl、OCH3、CN、CF3。
  8. 如权利要求6所述的式I化合物，其特征在于，n为0、1或2。
  9. 如权利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述式I化合物选自下列化合物I-1至I-14之一：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100004
    Figure PCTCN2014093541-appb-100005
  10. 权利要求1所述式I化合物的制备方法，将式1所示化合物与式2所示化合物在钯催化剂的存在下反应，生成式I所示的化合物，如下反应式所示：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100006
    其中，R3为卤素；Ar-R2为如下式3或式4所示的化合物：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100007
    Ar定义见权利要求1。
  11. 如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，式1所示化合物通过如下步骤制备得到：
    1)将式7所示的化合物与N，O-二甲基羟胺盐酸盐在碳酰二亚胺类缩合剂的存在下发生缩合反应，得到式6所示的化合物：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100008
    2)使式6所示的化合物与甲基溴化镁发生亲核取代反应，得到式5所示的化合物：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100009
    3)式5所示的化合物与碳酸胍发生合环反应，得到式1所示化合物：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100010
    其中，R3和R4各自独立为卤素。
  12. 如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述碳酰二亚胺类缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。
  13. 如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，R4为氟或氯。
  14. 如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，式4所示化合物通过如下方法制备得到：使式8所示的化合物与式9所示的化合物在钯催化剂的存在下反应，得到式4所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100011
    其中，R5为卤素。
  15. 如权利要求14所述的制备方法，其特征在于，式8所示化合物具有如下式10所示的结构：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100012
    通过下述方法制备得到：
    i)使式14所示的化合物发生硝化反应，得到式13所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100013
    ii)式13所示的化合物在氯化亚锡的存在下发生还原反应，得到式12所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100014
    iii)使式12所示的化合物发生磺酰化反应，得到式10所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100015
    其中，R5为卤素。
  16. 如权利要求14所述的制备方法，其特征在于，式8所示化合物具有如下式11所示的结构：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100016
    其通过使式15所示的化合物发生磺酰化反应而得到：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100017
    其中，R5为卤素。
  17. 如权利要求14、15和16中任意一项所述的制备方法，其特征在于，R5为溴。
  18. 如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述式I化合物结构如下式I-3所示，其制备方法包括以下步骤：
    Figure PCTCN2014093541-appb-100018
    a)使式20所示的化合物在钠氢的存在下发生亲核取代反应，得到式
    19所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100019
    b)使式19所示的化合物在丁基锂的存在下发生磺酰化反应，得到式18所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100020
    c)使式18所示的化合物与联硼酸频哪醇酯在钯催化剂的存在下反应，得到式16所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100021
    d)式1所示的化合物与式16所示的化合物在钯催化剂的存在下发生Suzuki反应，其反应产物直接在三氟乙酸回流中除去对甲氧基苄基，得到式I-3所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093541-appb-100022
    上述各式中，R3为卤素；R6为卤素；PMB表示对甲氧基苄基。
  19. 如权利要求10、11和18中任意一项所述的制备方法，其特征在于，R3为溴。
  20. 如权利要求18所述的制备方法，其特征在于，R6为溴。
  21. 如权利要求10、14和18中任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述钯催化剂是四(三苯基磷)钯，二(三苯基膦)二氯化钯或[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯。
  22. 权利要求1～9任一所述式I化合物的药学上可接受的盐，所述药学上可接受的盐选自下列盐中的一种或多种：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、苯基乙酸盐和杏仁酸盐。
  23. 权利要求1～9任一所述式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病的药物中的应用。
  24. 如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述PI3-K指PI3-Kα。
  25. 如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病为癌症，所述癌症是脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤或横纹肌瘤。
  26. 根据权利要求1～9任一所述式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗和/或预防和/或辅助治疗PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病；具体地，所述PI3-K和/或mTOR激酶引起的疾病为癌症，所述癌症是脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤或横纹肌瘤。
  27. 一种药物组合物，其包含权利要求1～9任一所述式I化合物或其药学上可接受的盐，以及任选的药学上可接受的辅料。
  28. 权利要求1～9任一所述式I化合物或其药学上可接受的盐在制备或者作为PI3-K抑制剂和/或mTOR激酶抑制剂中的用途；具体地，所述PI3-K为PI3-Kα。
  29. 一种在体内或体外抑制肿瘤细胞的方法，包括使用有效量的权利要求1～9任一所述式I化合物或其药学上可接受的盐的步骤；具体地，所述肿瘤细胞为如下肿瘤的细胞：脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤或横纹肌瘤。
  30. 一种抑制或者阻断PI3-K/Akt/PTEN通路的方法，包括使用有效量的权利要求1～9任一所述式I化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
  31. 一种治疗和/或预防和/或辅助治疗癌症的方法，包括使用有效量的权利要求1～9任一所述式I化合物或其药学上可接受的盐的步骤；具体地，所述癌症选自：脑癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、慢性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓异常增生综合症、食管癌、肉瘤、骨肉瘤和横纹肌瘤。
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