WO2015033874A1 - 男性型脱毛症評価モデル - Google Patents

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明子 中尾
康嗣 植田
史朗 槇原
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大正製薬株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to an effective evaluation method for a hair growth agent or a hair restoration agent using an animal model.
  • Non-patent Document 1 As a means for estimating the effectiveness of drugs such as hair growth agents and hair growth agents in humans, evaluation of hair growth / hair growth using an animal model has been performed.
  • animals used for the evaluation rabbits, rats, mice, red-tailed macaques, etc. are known (Non-patent Document 1).
  • the pathology similar to human androgenetic alopecia is “shortening the growth period due to the effects of male hormones (promoting the transition from the growth stage to the regression stage)” The only recognized animal was the red-tailed macaque.
  • An object of the present invention is to provide a new animal model in which the transition from the growth phase to the regression phase in the hair cycle is promoted, which is a disease state similar to human male pattern alopecia. Furthermore, it aims at providing the method of performing evaluation of drugs, such as a hair growth agent and a hair growth agent in the said pathological model efficiently in a short period of time.
  • the transition from the growth phase to the regression phase in a rodent's hair cycle is unexpectedly promoted by administering a male hormone to a rodent.
  • the present invention is as follows. (1) A method of promoting transition from a growth phase to a regression phase in the hair cycle of a rodent, comprising a step of administering a male hormone to a rodent.
  • the male hormone is one or more selected from testosterone, dihydrotestosterone, dehydroepiandrosterone, androsterone, androstenedione, gonadotropin releasing hormone and derivatives thereof, (1) to (3) The method according to any one. (5) Evaluating the transition from the growth phase to the regression phase using one or more selected from histological evaluation of hair follicles, skin lightness, skin saturation, and TGF- ⁇ expression level, (1) to (4 ) Any one of the methods.
  • One aspect of the present invention is a method of promoting the transition from the growth phase to the regression phase in the rodent hair cycle, comprising the step of administering a male hormone to the rodent.
  • rodents include mice, rats and hamsters, preferably mice, and C57BL mice, C3H mice and CBA mice are particularly preferred.
  • male hormones include testosterone, dihydrotestosterone, dehydroepiandrosterone, androsterone, androstenedione, gonadotropin releasing hormone and derivatives thereof, preferably testosterone or dihydrotestosterone, particularly preferably testosterone. It is.
  • These male hormones may be used alone or in combination of two or more male hormones.
  • the method for administering the male hormone may be either oral or parenteral, but is preferably parenteral, and particularly preferably applied directly to the site for evaluating the hair cycle.
  • the male hormone administration start time (administration period), when applied directly to the site where the hair cycle is evaluated, is preferably after inducing a synchronized growth phase by removing body hair during the rest period of the hair cycle.
  • the male hormone is applied directly to the site for evaluating the hair cycle, it is preferably a 0.01% to 0.5% solution, and preferably 10 ⁇ L to 200 ⁇ L.
  • Another aspect of the present invention is as follows: In rodents, (A) inducing a synchronized growth phase in the resting phase of the hair cycle; (B) administering a male hormone; (C) a step of administering a drug, and (d) a step of evaluating the degree to which the transition from the growth phase to the regression phase in the rodent hair cycle promoted by male hormone administration is suppressed by the drug administration, Is a method for evaluating the efficacy of a drug containing male pattern alopecia.
  • the drug is a drug having a hair growth action or a hair growth action, and examples thereof include minoxidil, finasteride, dutasteride, latanoprost, bimatoprost, ketoconazole, cyclosporine, FK506, and the like. Further, since the method of the present invention can also be used as a method for screening a drug having a hair growth action or a hair growth action, it is unclear whether the drug has an effect such as a hair growth action or a hair growth action. Drugs are also included.
  • the hair cycle it is preferable to forcibly synchronize the hair cycle with the growth phase during the rest period of the hair cycle.
  • the method for forcibly synchronizing the hair cycle to the growth phase during the rest period of the hair cycle is not particularly limited, and for example, the hair cycle can be forcibly synchronized to the growth phase by removing body hair.
  • the extraction method include a method of directly pulling out the hair at the evaluation site by hand, a method of pulling out the hair using forceps and a hair removal wax, and the like.
  • the evaluation of the efficacy of the drug of the present invention against male pattern baldness is based on the fact that the male hormone is administered in combination with the drug administration on the action of transition from the growth phase to the regression phase in the rodent hair cycle by male hormone administration. It is carried out from the viewpoint of how much the transition promoting action is suppressed.
  • the promotion of the transition from the growth phase to the regression phase in the hair cycle by male hormone administration is thought to reflect symptoms similar to those observed in male pattern alopecia. It is a favorable environment for evaluation.
  • the period of the growth period is shortened by promoting the transition from the growth phase to the regression phase in the hair cycle by the administration of male hormones, the period of action on the growth phase of the drug compared to the case where male hormones are not administered It becomes easy to detect (the action of delaying the transition from the growth phase to the regression phase).
  • the drug administration method may be either oral or parenteral, and an appropriate administration route for the drug to be used may be selected.
  • the drug administration period may be the same period as the male hormone administration period, or may be around a certain period.
  • administration at the same time there is no particular limitation on the administration time of the day, and it may be administered at the same time as the male hormone, or may be administered after a certain period of time.
  • the observation period of hair growth / hair growth effect is preferably from the late growth phase to the regression phase from the viewpoint that the hair follicle morphology changes greatly from the late growth phase to the regression phase.
  • a time corresponding to the regression phase in the male hormone single administration group is preferable in that it is easy to detect the difference in effect.
  • the observation time of a preferable effect is 15 days to 22 days after removal of body hair, and more preferably 17 days to 20 days after removal of body hair.
  • the shortening of the growth period of the hair cycle or the promotion of the transition to the regression stage is evaluated by measuring histological evaluation of hair follicles, skin lightness, skin saturation, or changes in the expression level of TGF- ⁇ .
  • histological evaluation of hair follicles is based on the fact that hair follicle morphology changes with hair cycle (Sven Muller-Rover et al. The Journal of Investigative Dermatology 117 (2001), 3-15) be able to.
  • histological evaluation is easy because hair follicle regression is prominently observed during the transition from the growth phase to the regression phase in the hair cycle.
  • changes in the shape of the hair follicle can be indirectly evaluated by an index such as changes in skin lightness or skin saturation. When retraction of the hair follicle is remarkably observed, the color of the skin after shaving of the site tends to exhibit a bright pink color compared to the growth period.
  • the rodent is preferably an animal having colored hair, particularly preferably a colored hair mouse.
  • colored hair mice include C57BL mice, C3H mice, and CBA mice.
  • TGF- ⁇ increases in the region around the hair follicle as the transition from the hair growth phase to the regression phase progresses, so shortening the hair cycle growth phase or promoting the transition to the regression phase Can also be evaluated by measuring changes in the expression level of TGF- ⁇ in the tissue around the hair follicle.
  • Methods for evaluating the expression level of TGF- ⁇ include homogenizing the skin containing the hair follicle at the evaluation site and measuring the amount of TGF- ⁇ mRNA using the RT-PCR method, and TGF- ⁇ using the ELISA method. Examples thereof include a method of measuring the amount of protein.
  • Evaluation of the effectiveness of a drug can be performed by performing the process of (d) after performing the processes of (a) to (c) described above once, but cannot be judged by a single process. If sufficient determination cannot be made, steps (a) to (c) can be performed in the second and subsequent hair cycles. After performing the steps (a) to (c) in two or more hair cycles, the step (d) is finally performed, so that the sensitivity for detecting the effect of the drug can be improved.
  • the administration timing of the male hormone and the drug there is no particular limitation on the administration timing of the male hormone and the drug, but it is preferable to continuously administer the male hormone and the drug from the start of the first step to immediately before the final effect determination timing.
  • Test Example 1 Preparation of male hormone-loaded mouse regression phase inhibition evaluation model ⁇ Test method> The dorsal body hair of C57BL / 6 mice (8 weeks old, female) was removed during the rest period to induce a synchronized growth phase. From 10 days after hair removal, 0.05%, 0.15%, or 0.5% testosterone dissolved in ethanol was applied once a day at 0.1 mL per animal until the day before the measurement day. A group of 5 mice was used. The mice were sacrificed 18 and 19 days after removal of the body hair, and then the evaluation site was shaved, the lightness of the back skin was measured with a colorimeter (CR-400, Konica Minolta), and the lightness was measured as a Luminescence value (L Value).
  • CR-400 colorimeter
  • Konica Minolta Konica Minolta
  • Test Example 2 Examination of TGF- ⁇ amount in skin in male hormone-loaded mouse regression phase inhibition evaluation model The back hair of C57BL / 6 mice (8 weeks old, female) was removed to induce a synchronized growth phase. From 10 days after body hair removal, 0.15% or 0.5% testosterone dissolved in ethanol was applied once a day at 0.1 mL per animal until the day before the measurement day. A group of 5 mice was used. After 17 days from the removal of the hair, the mice were sacrificed, the back skin was collected, the protein was extracted, and the amounts of TGF- ⁇ 1 and TGF- ⁇ 2 were measured by ELISA. For ELISA, Emax ImmunoAssay System manufactured by Promega was used.
  • TGF- ⁇ is a factor that has been reported to be deeply involved in the transition of the hair follicle from the growth phase to the regression phase on the hair cycle.
  • testosterone By applying testosterone, the hair follicle becomes faster than usual. It was suggested that the transition to the regression phase.
  • Test Example 3 Male hormone-loaded mouse regression phase inhibition evaluation test (1) ⁇ Test method> The back hair of C57BL / 6 mice (8 weeks old, female) was removed to induce a synchronized growth phase. Apply 10 ml of solvent, 5% minoxidil lotion or 5% flutamide lotion once a day until the day before the measurement 10 days after removing the hair, and 30 minutes later, 0.15% testosterone dissolved in ethanol or ethanol. 0.1 mL was applied per animal. Application of the above-mentioned drugs and the like was performed until the day before the measurement date. A group of 5 mice was used.
  • Test Example 4 Male Hormone-Loaded Mice Regression Suppression Evaluation Test (2) ⁇ Test method> The back hair of C57BL / 6 mice (8 weeks old, female) was removed to induce a synchronized growth phase. The dorsal body hair of the mice that entered the rest period 30 days after the first hair removal was again removed to induce a synchronized growth phase. Apply 10 ml of solvent or 5% minoxidil lotion once a day from 10 days after the first hair removal, and 30 minutes later, 0.1 ml of 0.01% testosterone dissolved in ethanol or ethanol Applied. Application of the above-mentioned drugs and the like was performed until the day before the measurement date. A group of 7 mice was used.

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Abstract

　げっ歯類に男性ホルモンを投与する工程を含む、げっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行を促進する方法を提供する。さらには、げっ歯類において、（ａ）毛周期の休止期において、同調した成長期を誘導する工程、（ｂ）男性ホルモンを投与する工程、（ｃ）薬剤を投与する工程、及び（ｄ）男性ホルモン投与により促進されるげっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行が薬剤投与により抑制される程度を評価する工程、を含む薬剤の有効性を評価する方法を提供する。本発明により簡便なｉｎ　ｖｉｖｏ男性型脱毛症モデルにおいて、発毛剤、育毛剤等の有効性を効果的に評価が可能となる。

Description

男性型脱毛症評価モデル
　本発明は動物モデルを用いた発毛剤又は育毛剤等の効果的な評価方法に関する。
　発毛剤や育毛剤等の薬剤のヒトにおける有効性を推測する手段として、動物モデルを使用した発毛・育毛作用の評価が行われている。当該評価に用いる動物としては、ウサギ、ラット、マウス、ベニガオザル等が知られている（非特許文献１）。
　しかしながら、動物を用いた評価方法の中でヒトの男性型脱毛症に類似した病態である「男性ホルモンの影響に起因する成長期期間の短縮（成長期から退行期への移行の促進）」が認められる動物はベニガオザルのみであった。また、ベニガオザルを用いた薬剤の評価はフォトトリコグラム法やフォリクログラム法を用いており、薬剤による成長期間の延長作用や、成長期から退行期への移行の遅延化作用等を評価することは不可能であった。更に評価期間が６ヶ月程度必要であるため、薬剤のスクリーニングには不向きであった。他の動物では、ゴールデンシリアンハムスターが男性ホルモン投与により体毛の再成長が抑制されること、Ｂ６ＣＢＡＦ１マウスが男性ホルモン投与によって脱毛を生じることが報告されているものの、男性ホルモンが成長期から退行期への移行を促進することについて何ら報告はない（非特許文献２、３）。従って、ヒトの男性型脱毛症に類似した病態である毛周期における成長期から退行期への移行が促進された新たな動物モデルを作成する必要があった。
小友進. 日薬理誌 119 (2002), 167-174 J A Merzick et al. British Journal of Dermatology 140 (1999), 1100-1104 John P Sundberg et al. European Journal of Dermatology 11 (2001), 321-325
　本発明は、ヒトの男性型脱毛症に類似した病態である、毛周期における成長期から退行期への移行が促進された新たな動物モデルを提供することを目的とする。更には、当該病態モデルにおける発毛剤や育毛剤等の薬剤の評価を短期間で効率的に行う方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題を達成すべく検討したところ、意外にもげっ歯類に男性ホルモンを投与することにより、げっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行が促進されることを見いだした。
　すなわち、本発明は以下の通りである。
（１）げっ歯類に男性ホルモンを投与する工程を含む、げっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行を促進する方法。
（２）げっ歯類において、
　（ａ）毛周期の休止期において、同調した成長期を誘導する工程、
　（ｂ）男性ホルモンを投与する工程、
　（ｃ）薬剤を投与する工程、及び
　（ｄ）男性ホルモン投与により促進されるげっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行が薬剤投与により抑制される程度を評価する工程、
を含む薬剤の男性型脱毛症への有効性を評価する方法。
（３）げっ歯類が有色毛マウスである、（１）又は（２）に記載の方法。
（４）男性ホルモンが、テストステロン、ジヒドロテストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステロン、アンドロステンジオン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン及びこれらの誘導体から選ばれる１種以上である、（１）～（３）のいずれかに記載の方法。
（５）毛包の組織学的評価、皮膚明度、皮膚彩度及びＴＧＦ－β発現量から選ばれる１種以上を用いて成長期から退行期への移行を評価する、（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（６）（ａ）～（ｃ）を含む工程を複数回繰り返した後に、（ｄ）男性ホルモン投与により促進されるげっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行が薬剤投与により抑制される程度を評価する工程を行うことを特徴とする、（２）～（５）のいずれかに記載の薬剤の男性型脱毛症への有効性を評価する方法。
　本発明において、ヒトの男性型脱毛症に類似した病態である毛周期における成長期から退行期への移行が促進された新たな動物モデルが見いだされ、また、発毛作用又は育毛作用等を有する薬剤の効率的な評価を行うことが可能となった。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、メス）の背部皮膚切片のヘマトキシリン・エオジン染色像である。
　本発明の１つの態様は、げっ歯類に男性ホルモンを投与する工程を含む、げっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行を促進する方法である。
　げっ歯類とは、例えばマウス、ラット及びハムスターが挙げられ、好ましくはマウスであり、Ｃ５７ＢＬ系マウス、Ｃ３Ｈ系マウス及びＣＢＡ系マウスが特に好ましい。
男性ホルモンとは、例えばテストステロン、ジヒドロテストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステロン、アンドロステンジオン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン及びこれらの誘導体が挙げられ、好ましくは、テストステロン又はジヒドロテストステロンであり、特に好ましくはテストステロンである。これらの男性ホルモンは単独で使用しても良く、２種以上の男性ホルモンを組み合わせても良い。
　男性ホルモンの投与方法は、経口又は非経口のいずれでも良いが、好ましくは非経口であり、毛周期を評価する部位に直接塗布するのが特に好ましい。男性ホルモンの投与開始時期（投与期間）は、毛周期を評価する部位に直接塗布する場合、好ましくは毛周期の休止期に体毛を抜去して同調した成長期を誘導した後である。男性ホルモンの投与量は、毛周期を評価する部位に直接塗布する場合、好ましくは０．０１％～０．５％の溶液であり、１０μＬ～２００μＬの範囲で塗布するのが好ましい。
　また、本発明の他の１つの態様は、
げっ歯類において、
（ａ）毛周期の休止期において、同調した成長期を誘導する工程、
（ｂ）男性ホルモンを投与する工程、
（ｃ）薬剤を投与する工程、及び
（ｄ）男性ホルモン投与により促進されるげっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行が薬剤投与により抑制される程度を評価する工程、
を含む薬剤の男性型脱毛症への有効性を評価する方法である。
　薬剤とは、発毛作用又は育毛作用等を有する薬剤であり、例えばミノキシジル、フィナステリド、デュタステリド、ラタノプロスト、ビマトプロスト、ケトコナゾール、シクロスポリン、ＦＫ５０６等が挙げられる。また、本発明の方法は発毛作用又は育毛作用等を有する薬剤をスクリーニングする方法としても利用可能であるため、該薬剤には発毛作用又は育毛作用等の効果を有するか否かが不明な薬剤も含まれる。
　上記の方法では、毛周期の休止期に毛周期を成長期に強制同調させることが好ましい。成長期への移行時期が同調されることにより、成長期から退行期への移行時期の動物個体ごとのばらつきが小さくなり、薬剤の効果の評価が容易となる。毛周期の休止期に毛周期を成長期に強制同調させる方法は特に限定されず、例えば体毛の抜去により毛周期を成長期に強制同調させることが可能である。抜去の方法としては、手で直接評価部位の毛を引き抜く方法、鉗子や脱毛ワックスを用いて毛を引き抜く方法等が挙げられる。
　本発明の薬剤の男性型脱毛症に対する有効性の評価は、男性ホルモン投与によるげっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行の作用に対して、薬剤投与を併用することにより男性ホルモンの移行促進作用がどの程度抑制されるかという視点から行われる。男性ホルモン投与による毛周期における成長期から退行期への移行促進は、男性型脱毛症で認められる病態に近い症状を反映していると考えられ、薬剤の男性型脱毛症に対する予防又は治療効果を評価するのに好ましい環境となる。また、男性ホルモン投与により毛周期における成長期から退行期への移行を促進することにより成長期の期間が短縮されるため、男性ホルモンを投与しない場合と比較して薬剤の成長期に対する期間延長作用（成長期から退行期への移行遅延作用）を検出することが容易になる。薬剤の投与方法は、経口又は非経口のいずれでも良く、使用する薬剤にとって適切な投与ルートを選択すればよい。
　薬剤の投与時期は、男性ホルモンの投与時期と同時期でも良く、また一定期間前後しても良い。同時期に投与される場合、１日の投与時期に特に制限は無く、男性ホルモンと同時に投与しても良く、一定期間時間を前後させて投与させても良い。
　発毛・育毛効果の観察時期としては、毛包の形態が成長期後期から退行期にかけて大きく変化する観点から成長期後期から退行期が望ましい。薬剤投与の有無による効果の比較という観点からは、効果の差を検出しやすい点で男性ホルモン単独投与群における退行期に相当する時期が好ましい。マウスを用いる場合、好ましい効果の観察時期は、体毛の抜去後１５日目～ ２２日目であり、さらに好ましくは体毛の抜去後１７日目～ ２０日目に設定される。
　毛周期の成長期の短縮または退行期への移行促進は、毛包の組織学的評価、皮膚明度、皮膚彩度又はＴＧＦ－β発現量の変化を測定することにより評価する。
　毛包の組織学的評価は、毛包の形態が毛周期に伴って変化する（Sven Muller-Rover et al. The Journal of Investigative Dermatology 117 (2001), 3-15）という事実を利用して行うことができる。特に毛周期における成長期から退行期への移行時期には毛包の退縮が顕著に認められるため、組織学的評価が容易である。また、毛包の形態の変化は皮膚明度や皮膚彩度の変化といった指標で間接的に評価することが可能である。毛包の退縮が顕著に認められると当該部位の剃毛後の皮膚の色が成長期と比較して明るいピンク色を呈する傾向がある。このような皮膚明度や皮膚彩度の変化を測定する手段としては色査計による数値化、写真を撮影し画像処理技術を用いた数値化、肉眼観察によるスコア化等が挙げられる。皮膚明度や皮膚彩度を指標として評価する場合、動物を屠殺する必要がないため、少ない動物数で経時的評価が可能であり、成長期から退行期への移行をより詳細に評価できる。当該評価方法を使用する場合、げっ歯類は有色毛を有する動物が好ましく、特に好ましくは有色毛マウスである。有色毛マウスとしては、例えば、Ｃ５７ＢＬ系マウス、Ｃ３Ｈ系マウス、ＣＢＡ系マウスが挙げられる。
　毛周期の成長期から退行期への移行が進むに従い毛包周辺部位におけるＴＧＦ－βの発現量が増大することが知られているため、毛周期の成長期の短縮または退行期への移行促進は、毛包周辺組織におけるＴＧＦ－β発現量の変化を測定することでも評価可能である。ＴＧＦ－β発現量を評価する方法としては、評価部位の毛包を含む皮膚をホモジネートし、ＲＴ－ＰＣＲ法を用いてＴＧＦ－βのｍＲＮＡ量を測定する方法、ＥＬＩＳＡ法を用いてＴＧＦ―βタンパク量を測定する等の方法が挙げられる。
　薬剤の有効性の評価は、上述の（ａ）～（ｃ）の工程を１回行った後、（ｄ）の工程を行うことで実施可能であるが、１回の工程で判定出来ない場合、又は十分な判定ができない場合は、２回目以降の毛周期においても（ａ）～（ｃ）の工程を行うことが可能である。２回以上の毛周期において（ａ）～（ｃ）の工程を行った後に、最終的に（ｄ）の工程を行うことにより、薬剤の効果を検出する感度を向上させることが可能となる。この場合、男性ホルモン及び薬剤の投与時期に特に限定はないが、１回目の工程における男性ホルモン及び薬剤の投与開始から、最終的な効果判定時期の直前まで継続的に投与することが好ましい。
　以下に、試験例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。なお、本発明はこれら実施例に限定されるものでは無い。
試験例１：男性ホルモン負荷マウス退行期抑制評価モデルの作成
＜試験方法＞
　Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、メス）の背部体毛を休止期に抜去し、同調した成長期を誘導した。体毛抜去１０日後よりエタノールに溶解した０．０５％、０．１５％或いは０．５％テストステロンを１日１回、１匹当たり０．１ｍＬを測定日の前日まで塗布した。マウスは一群５匹使用した。体毛抜去から１８日及び１９日後にマウスを屠殺した後、評価部位を剃毛し、背部皮膚の明度を色彩色査計（ＣＲ－４００、コニカミノルタ）にて測定し、明度をＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ値（Ｌ値）として数値化した。更に評価部位の病理切片を作成し、ヘマトキシリン・エオジン染色を実施した後組織学的に観察し、毛周期の判定を行った。
＜試験結果＞
　表１に示すとおり、体毛抜去１８日後、１９日後共にテストステロン塗布によりＬ値が上昇し、評価部位の毛周期がより早く退行期に移行していることが示唆された。また、病理組織学的観察の結果、図１に示すとおり、テストステロン塗布群の毛包に退行期特有の退縮が認められることから、毛周期がより早く退行期に移行していることを確認した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
（平均±Ｓ．Ｅ．）
ｎ．ｓ．：有意差なし
＊＊＊：ｐ＜０．００１　ｖｓ　エタノール（Ｄｕｎｎｅｔｔ　ｔｙｐｅ　多重比較検定）
試験例２：男性ホルモン負荷マウス退行期抑制評価モデルにおける皮膚内ＴＧＦ－β量の検討
＜試験方法＞
　Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、メス）の背部体毛を抜去し、同調した成長期を誘導した。体毛抜去１０日後よりエタノールに溶解した、０．１５％或いは０．５％テストステロンを１日１回、１匹当たり０．１ｍＬを測定日の前日まで塗布した。マウスは一群５匹使用した。体毛抜去から１７日後にマウスを屠殺した後、背部皮膚を採取して蛋白を抽出し、ＥＬＩＳＡによりＴＧＦ－β１およびＴＧＦ－β２量を測定した。ＥＬＩＳＡはＰｒｏｍｅｇａ社のＥｍａｘ ＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍを用いた。
＜試験結果＞
　表２に示すとおり、０．１５％以上のテストステロン塗布により、ＴＧＦ－β１、β２いずれもエタノールの塗布に比べて有意に増加した。ＴＧＦ－βは、毛包が毛周期上の成長期から退行期へ移行する際に、深く関与していることが報告されている因子であり、テストステロンの塗布により、毛包が通常よりも早く退行期に移行することが示唆された．
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
（平均±Ｓ．Ｅ．　（ｐｇ／ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ））
＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１　ｖｓ　エタノール（Ｄｕｎｎｅｔｔ　ｔｙｐｅ　多重比較検定）
試験例３：男性ホルモン負荷マウス退行期抑制評価試験（１）
＜試験方法＞
　Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、メス）の背部体毛を抜去し、同調した成長期を誘導した。体毛抜去１０日後より溶媒、５％ミノキシジルローション或いは５％フルタミドローションを１日１回、測定前日まで１匹当たり０．１ｍＬ塗布し、その３０分後にエタノール或いはエタノールに溶解した０．１５％テストステロンを１匹当たり０．１ｍＬ塗布した。上記薬剤等の塗布は測定日の前日まで行った。マウスは一群５匹使用した。体毛抜去から１７日後にマウスを屠殺した後、評価部位を剃毛し、背部皮膚の明度を色彩色査計（ＣＲ－４００、コニカミノルタ）にて測定し、Ｌ値として数値化した。
＜試験結果＞
　表３に示すとおり、テストステロン塗布によりＬ値が上昇し、評価部位の毛周期がより早く退行期に移行していることが示唆された。更に５％ミノキシジルローション及び５％フルタミドローションの塗布によりテストステロンによるＬ値の上昇が有意に抑制され、退行期への移行が抑制された。本結果から、５％ミノキシジルローション及び５％フルタミドローションに退行期移行抑制作用があることが分かった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
（平均±Ｓ．Ｅ．）
＊＊＊：ｐ＜０．００１　ｖｓ　溶媒＋エタノール（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ－Ｔｅｓｔ）
＃：ｐ＜０．０５　ｖｓ　溶媒＋０．１５％テストステロン（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ－Ｔｅｓｔ）
試験例４：男性ホルモン負荷マウス退行期抑制評価試験（２）
＜試験方法＞
　Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、メス）の背部体毛を抜去し、同調した成長期を誘導した。最初の体毛抜去から３０日後に再び休止期に入ったマウスの背部体毛を再度抜去し、再び同調した成長期を誘導した。最初の体毛抜去１０日後より溶媒或いは５％ミノキシジルローションを１日１回、１匹当たり０．１ｍＬ塗布し、その３０分後にエタノール或いはエタノールに溶解した０．０１％テストステロンを１匹当たり０．１ｍＬ塗布した。上記薬剤等の塗布は測定日の前日まで行った。マウスは一群７匹使用した。１回目の体毛抜去から４７日後にマウスを屠殺した後、評価部位を剃毛し、背部皮膚の明度を色彩色査計（ＣＲ－４００、コニカミノルタ）にて測定し、Ｌ値として数値化した。
＜試験結果＞
　表４に示すとおり、テストステロン塗布によりＬ値が上昇し、評価部位の毛周期がより早く退行期に移行していることが示唆された。更に５％ミノキシジルローションの塗布によりテストステロンによるＬ値の上昇が有意に抑制され、退行期への移行が抑制された。本結果から、５％ミノキシジルローションは継続投与により複数の毛周期に渡って退行期移行抑制作用が持続することが分かった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
（平均±Ｓ．Ｅ．）
＊＊＊：ｐ＜０．００１　ｖｓ　溶媒＋エタノール（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ－Ｔｅｓｔ）
＃＃：ｐ＜０．０１　ｖｓ　溶媒＋０．０１％テストステロン（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ－Ｔｅｓｔ）
　本発明により発毛剤、育毛剤等の毛周期における成長期期間の延長作用及び退行期への移行の遅延作用の評価する簡便なｉｎ　ｖｉｖｏ男性型脱毛症モデルを提供することが可能になった。

Claims (6)

  1. げっ歯類に男性ホルモンを投与する工程を含む、げっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行を促進する方法。
  2. げっ歯類において、
    （ａ）毛周期の休止期において、同調した成長期を誘導する工程、
    （ｂ）男性ホルモンを投与する工程、
    （ｃ）薬剤を投与する工程、及び
    （ｄ）男性ホルモン投与により促進されるげっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行が薬剤投与により抑制される程度を評価する工程、
    を含む薬剤の男性型脱毛症への有効性を評価する方法。
  3. げっ歯類が有色毛マウスである、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 男性ホルモンが、テストステロン、ジヒドロテストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステロン、アンドロステンジオン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン及びこれらの誘導体から選ばれる１種以上である、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
  5. 毛包の組織学的評価、皮膚明度、皮膚彩度及びＴＧＦ－β発現量から選ばれる１種以上を用いて成長期から退行期への移行を評価する、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
  6. （ａ）～（ｃ）を含む工程を複数回繰り返した後に、（ｄ）男性ホルモン投与により促進されるげっ歯類の毛周期における成長期から退行期への移行が薬剤投与により抑制される程度を評価する工程を行うことを特徴とする、請求項２～５のいずれかに記載の薬剤の男性型脱毛症への有効性を評価する方法。
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Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BROUWER B. ET AL.: "A controlled study of the effects of RU 58841, a non-steroidal antiandrogen, on human hair production by balding scalp grafts maintained on testosterone-conditioned nude mice", BRITISH JOURNAL OF DERMATOLOGY, vol. 137, no. 5, 1997, pages 699 - 702 *
DHANOTIA RENUKA ET AL.: "Effect of Citrullus colocynthis Schrad fruits on testosterone- induced alopecia", NATURAL PRODUCT RESEARCH, vol. 25, no. 15, 2011, pages 1432 - 1443 *
JUNKUN BAI ET AL.: "The Effect of Teststerone and Fleece-Flower Root on Mouse Hair", JPN. J. CLIN. PHARMACOL. THER., vol. 25, no. 1, 1994, pages 247 - 248 *
KEI KURITA ET AL.: "Shinkei Eiyo Inshi 4 o Kaishita Dansei Hormone ni yoru Hatsumo Chien Sayo to sono Yokusei Busshitsu no Tansaku", ABSTRACTS OF ANNUAL MEETING OF PHARMACEUTICAL SOCIETY OF JAPAN, vol. 127, no. 2, 2007, pages 146 *
KIM YOUNG YOON ET AL.: "Effects of topical application of EGCG on testosterone-induced hair loss in a mouse model", EXPERIMENTAL DERMATOLOGY, vol. 20, no. 12, 2011, pages 1015 - 1017 *
NORIHIRO BANNO ET AL.: "Promotion of hair growth by JIOU with the combination of anti- androgenic effect and improved blood circulation", FRAGRANCE JOURNAL, vol. 33, no. 12, 2005, pages 73 - 78 *
PANDIT SHWETA ET AL.: "Effect of Cuscuta reflexa Roxb on androgen-induced alopecia", JOURNAL OF COSMETIC DERMATOLOGY, vol. 7, no. 3, 2008, pages 199 - 204 *
SATOSHI ITAMI ET AL.: "Danseigata Datsumosho no Byotai to Chiryo Senryaku", EXPERIMENTAL MEDICINE, vol. 25, no. 16, 2007, pages 2563 - 2567 *
TETSUSHI SERIZAWA: "Danseigata Datsumosho to Dansei Hormone Izonsei Datsumo Signal", HIFU TO BIYO, vol. 40, no. 3, 2008, pages 19 - 24 *

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