WO2014021464A1 - 水酸化ｋｒｎ７０００類縁体及びその用途 - Google Patents

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汐崎　正生
卓哉 田代
森　謙治
智邦 重浦
渡会　浩志
克 谷口
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独立行政法人理化学研究所
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    • C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere

Definitions

  • the present invention relates to a novel hydroxylated KRN7000 analog and its use. More specifically, the present invention relates to a hydroxylated KRN7000 analog having a hydroxyl group introduced into the phytosphingosine and / or amide side chain, a method for producing the same, and a pharmaceutical use thereof.
  • ⁇ -Galactosylceramide represented by Agerasfins, is a glycolipid isolated from an extract of Agelas mauritianus, a type of sponge, and has been reported to strongly activate natural killer T cells (NKT cells).
  • KRN7000 is taken up on the cell membrane by a CD1d protein similar to the major histocompatibility complex (MHC) class I molecule after being taken up by antigen-presenting cells (APC) represented by dendritic cells (DC) and the like.
  • APC antigen-presenting cells
  • DC dendritic cells
  • NKT cells are activated by recognizing the thus-presented complex of CD1d protein and ⁇ -galactosylceramide using TCR, and produce cytokines of the immune control system.
  • Th1-type cytokines mainly interferon (IFN) - ⁇
  • Th2-type cytokines mainly interleukin (IL) -4
  • IFN interferon
  • IL interleukin
  • Many researchers can expect anticancer agents or immunosuppressive agents depending on the bias of Th1 and Th2 cytokine secretion from NKT cells, ie, Th1 or Th2 type.
  • This indicator is now widely recognized as an early indicator of application development worldwide. So far, various ⁇ -galactosylceramide analogues have been synthesized, and the correlation between their structure and activity has been investigated.
  • KRN7000 Non-patent Document 3
  • Kirin Brewery Co., Ltd. through research on the synthesis of Agerasfins and has a very strong antitumor activity. Show.
  • CsA corticosteroids, antimetabolites, alkylating agents, alkaloids, antibiotics, anti-lymphocyte globulin, anti-CD3 monoclonal antibodies, and the like are known as immunosuppressive agents, autoimmune diseases, allergic diseases, organ transplantation It is used as a therapeutic agent.
  • cyclosporin A CsA
  • FK506 tacrolimus hydrate
  • CsA and FK506 act by preventing the body's immune system from acting on a number of natural protective substances to reject transplanted foreign proteins.
  • CsA is also used for the treatment of severe psoriasis and the treatment of atopic dermatitis.
  • CsA and FK506 are effective in combating transplant rejection but are known to cause several undesirable side effects including nephrotoxicity, neurotoxicity, and gastrointestinal discomfort.
  • FTY720 is a pharmaceutical product that is expected to provide a new treatment for multiple sclerosis, but its effectiveness for other autoimmune diseases is limited. That is, conventional immunosuppressive agents are not always satisfactory in terms of efficacy, persistence, side effects, etc., and have a different mechanism of action from superior immunosuppressive agents, preferably conventional immunosuppressive agents. There is a need for immunosuppressants.
  • the present invention has been made in view of such circumstances, and a problem to be solved is to provide a novel ⁇ -galactosylceramide analog biased to the Th2 type that can be expected to have an immunosuppressive effect. Another object of the present invention is to provide a medicament containing such an ⁇ -galactosylceramide analog.
  • compound OCH which is a truncated analog of KRN7000.
  • Compound OCH is a promising candidate drug for the treatment of autoimmune diseases, immunosuppression associated with organ transplantation, and the treatment of inflammatory conditions. It is considered that the lipophilicity of the compound OCH is decreasing, and if so, the hydrophilicity is conversely increasing. That is, the KRN7000 analog with improved hydrophilicity may be useful for treatment of autoimmune diseases, immunosuppression related to organ transplantation, and treatment of inflammatory conditions, etc., which are biased to the Th2 type, like the compound OCH.
  • KRN7000 contains phytosphingosine and forms a hydrogen bond between the amide NH hydrogen on the phytosphingosine and the oxygen of the 156th threonine of mouse CD1d (154th threonine in human CD1d) It is known.
  • a critical hydrogen bond is formed between Arg79 residue of mouse CD1d and 3′-OH of KRN7000 phytosphingosine, and Asp80 residue is 3′-OH of phytosphingosine and It is known to form hydrogen bonds with 4′-OH (Natur Immunol. 2005, 6, 810-818; Natur Immunol. 2005, 6, 819-826; Nature 2007, 448, 44-49; -J. Immunity, 2009, 31, 47-59).
  • R 1 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group
  • Two R 2 s are the same or different and each represents a hydrogen atom or a hydroxyl group
  • R 3 represents an optionally substituted hydrocarbon group having 8 to 14 carbon atoms
  • R 4 represents a hydrocarbon group having 18 to 24 carbon atoms which may have a substituent, or a salt thereof (hereinafter also referred to as compound (I)).
  • R 3 may have a substituent, a C 8 ⁇ 14 alkyl group, C 8 ⁇ 14 alkenyl or C 8 ⁇ 14 alkynyl group, the above-mentioned [1] or a salt thereof, wherein .
  • a therapeutic agent for an autoimmune disease comprising the human dendritic cell according to [12] above.
  • a method for promoting Th2-type cytokine secretion comprising administering an effective amount of the compound or salt thereof according to any one of [1] to [7] above to a patient in need thereof.
  • a method for treating an autoimmune disease comprising administering an effective amount of the compound or salt thereof according to any one of [1] to [7] above to a patient in need thereof.
  • An immunosuppressive method comprising administering an effective amount of the compound or salt thereof according to any one of [1] to [7] above to a patient in need thereof.
  • An immunosuppressive method comprising administering the human dendritic cell according to the above [12] to a patient in need thereof.
  • a method for treating an autoimmune disease comprising administering the human dendritic cell according to [12] above to a patient in need thereof.
  • hydroxylated KRN7000 analogs in which one or a plurality of hydroxyl groups are introduced into the main chain phytosphingosine and / or amide side chain exhibit Th2 type biased cytokine secretion.
  • the compound of the present invention in which the ratio of IFN- ⁇ / IL-4 is biased to IL-4, which is important for the immunosuppressive effect, is useful as an autoimmune disease therapeutic agent or an immunosuppressive agent.
  • IFNg IFN- ⁇
  • R 1 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group.
  • R 2 s are the same or different and each represents a hydrogen atom or a hydroxyl group.
  • R 3 represents a hydrocarbon group having 8 to 14 carbon atoms.
  • the "hydrocarbon group having 8 to 14 carbon atoms", C 8-14 alkyl, C 8-14 alkenyl, C 8-14 alkynyl, C 8-14 cycloalkyl, C 8-14 cycloalkenyl group is a concept also includes aryl group of C 8 ⁇ 14, linear, may be in any form of branched and cyclic, and may be saturated hydrocarbons unsaturated hydrocarbon group with a group, an unsaturated A bond may be present either in the molecule or at the end.
  • R 3 C 8 ⁇ 14 alkyl group, C 8 ⁇ 14 alkenyl, and C 8 ⁇ 14 alkynyl groups are preferable, C 11 ⁇ 13 alkyl group is more preferable.
  • Specific examples of R 3 include —C 12 H 25 and the like.
  • R 4 represents a hydrocarbon group having 18 to 24 carbon atoms.
  • “C18-24 C hydrocarbon group” means C 18-24 alkyl group, C 18-24 alkenyl group, C 18-24 alkynyl group, C 18-24 cycloalkyl group, C 18-24 cycloalkenyl group.
  • R 4 C 19 ⁇ 23 alkyl group, C 19 ⁇ 23 alkenyl, and C 19 ⁇ 23 alkynyl group are preferred, C 21 ⁇ 23 alkyl group is more preferable.
  • Specific examples of R 4 include —C 22 H 45 and the like.
  • the hydrocarbon group represented by R 3 and R 4 is preferably linear.
  • the hydrocarbon groups represented by R 3 and R 4 may each independently have a substituent.
  • an acyl group having 2 to 25 carbon atoms Preferably an alkyl-carbonyl group in which the alkyl moiety is a linear or branched alkyl group having 1 to 24 carbon atoms), carbamoyl, trifluoromethyl, etc.
  • An electron withdrawing group is exemplified.
  • the position and number of substituents are not particularly limited, and one to the maximum number of substituents that can be substituted may be present at substitutable positions. When one or more substituents are present, they may be the same or different.
  • the hydrocarbon groups represented by R 3 and R 4 are preferably unsubstituted.
  • the R 3, preferably an unsubstituted C 8 ⁇ 14 alkyl group, a C 8 ⁇ 14 alkenyl or C 8 ⁇ 14 alkynyl group, more preferably an unsubstituted C 8 ⁇ 14 alkyl group.
  • R 4 is preferably an unsubstituted C 18-24 alkyl group, a C 18-24 alkenyl group or a C 18-24 alkynyl group, and more preferably an unsubstituted C 18-14 alkyl group.
  • acyl group means, for example, formyl; an acyl group having 2 to 25 carbon atoms [an alkyl-carbonyl group (for example, an alkyl moiety having 1 to 24 carbon atoms (preferably 1 to 12 carbon atoms)).
  • alkyl-carbonyl group (eg, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, valeryl, pivaloyl, hexanoyl)) which is a linear or branched alkyl group; a cycloalkyl-carbonyl group (eg, a cycloalkyl moiety having 3 carbon atoms)
  • An alkenyl-carbonyl group for example, an alkenyl moiety is a linear or branched alkenyl group having 2 to 12 carbon atoms, for example, an alkenyl-carbonyl group (for example, Acryloyl, methacryloyl)); aryl-carbonyl groups (eg Aryl moiety is an aryl group having 6 to 14 carbon atoms, aryl - carbonyl group (e.g., benzoyl, naphthoyl)) refers to such.
  • the aryl group in the aryl-carbonyl group represents, for example, a monocyclic to tricyclic aromatic hydrocarbon group, and specific examples thereof include phenyl, naphthyl, anthryl, and phenanthryl.
  • acyl group formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, benzoyl, naphthoyl and the like are preferable, and acetyl and benzoyl are more preferable.
  • alkyl moiety of the alkylamino group and alkylcarbonylamino group examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl.
  • Examples of the cycloalkyl part of the cycloalkylamino group and cycloalkylcarbonylamino group include cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl (preferably having 3 to 24 carbon atoms, more preferably 3 to 16 carbon atoms, still more preferably 3 carbon atoms). To 10 and particularly preferably 3 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the alkoxy moiety of the alkoxycarbonyl group include those similar to the alkoxy group.
  • substituents are further substituted at a substitutable position among halogen, alkyl group, cycloalkyl group, alkenyl group, alkynyl group, phenyl group, alkoxy group, hydroxyl group, amino group, alkylamino group and cycloalkylamino group. May be substituted with at least one of the above.
  • Examples of the halogen, alkoxy group, alkylamino group and cycloalkylamino group are the same as those described above.
  • alkyl group examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, Examples include alkyl groups such as pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl (preferably having 1 to 24 carbon atoms, more preferably 1 to 16 carbon atoms, still more preferably 1 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 1 to 4 carbon atoms).
  • the Examples of the cycloalkyl group include cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl (preferably having 3 to 24 carbon atoms, more preferably 3 to 16 carbon atoms, still more preferably 3 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 3 to 6 carbon atoms). ) Is exemplified.
  • Examples of the alkenyl group include alkenyl groups such as vinyl, propenyl and butenyl (preferably having 2 to 24 carbon atoms, more preferably 2 to 16 carbon atoms, still more preferably 2 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 2 to 4 carbon atoms). ) Is exemplified.
  • alkynyl group examples include alkynyl groups such as ethynyl, propargyl, butynyl and pentynyl (preferably having 2 to 24 carbon atoms, more preferably 2 to 16 carbon atoms, still more preferably 2 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 2 carbon atoms).
  • alkynyl groups such as ethynyl, propargyl, butynyl and pentynyl (preferably having 2 to 24 carbon atoms, more preferably 2 to 16 carbon atoms, still more preferably 2 to 10 carbon atoms, and particularly preferably 2 carbon atoms).
  • ⁇ -isomer is adopted among stereoisomers derived from the cyclic structure of sugar (galactopyranose).
  • compound (I) has a stereoisomer derived from the structure of an aglycon moiety other than the sugar cyclic structure (for example, an asymmetric carbon of the aglycon moiety other than the sugar cyclic structure).
  • any isomer is present. It is included in the invention and may be a mixture (including a racemate) of any ratio of two or more isomers.
  • compound (I) has optical isomers derived from asymmetric carbons of the aglycon moiety other than the cyclic structure of the sugar.
  • there are two kinds of optical isomers even if they are single optically active substances. A mixture (including a racemate) of any ratio of the above optically active substances may be used.
  • the salt of compound (I) is preferably a pharmaceutically acceptable salt, for example, an inorganic acid salt such as hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, sulfate, nitrate, phosphate; Organic acid salts such as succinate, fumarate, acetate, methanesulfonate and toluenesulfonate; alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as magnesium salt and calcium salt; Examples thereof include ammonium salts such as ammonium salts and alkylammonium salts.
  • an inorganic acid salt such as hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, sulfate, nitrate, phosphate
  • Organic acid salts such as succinate, fumarate, acetate, methanesulfonate and toluenesulfonate
  • alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt
  • alkaline earth metal salts such as
  • RCAI-147 and RCAI-160 More preferred are RCAI-147 and RCAI-160.
  • Compound (I) can be produced according to the method described in the following scheme or a method analogous thereto, but is not limited thereto, and can be appropriately modified as desired. Such modifications include alkylation, acylation, amination, imination, halogenation, reduction, oxidation and the like, and reactions or methods usually used in the art are used. In this case, depending on the type of functional group, it is effective in terms of production technology to replace the functional group with an appropriate protecting group (a group that can be easily converted into the functional group) at the raw material or intermediate stage. There is. The chemical properties of protecting groups, the method of their introduction, and their removal are described in detail, for example, in T. Greene and P.
  • a hydroxyl protecting group is used in the present invention.
  • the protecting group is appropriately selected depending on the desired reaction.
  • hydroxyl protecting groups include benzyl, 4-methoxybenzyl (ie, p-methoxybenzyl (PMB)), methoxyethoxymethyl, tetrahydropyranyl, trimethylsilyl (TMS), t-butyldimethylsilyl (TBS or TBDMS), t -Butyldiphenylsilyl (TBDPS), t-butoxycarbonyl, trichloroethoxycarbonyl, acetyl, pivaloyl and the like.
  • TMS trimethylsilyl
  • TBS or TBDMS t-butyldimethylsilyl
  • TDPS t -Butyldiphenylsilyl
  • t-butoxycarbonyl trichloroethoxycarbonyl
  • acetyl pivaloyl and the like.
  • the adjacent hydroxyl group may be protected as an acetal or silyl acetal.
  • a generally known solvent may be used during the reaction.
  • solvents include, for example, aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, ligroin and petroleum ether; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; methylene chloride, chloroform and carbon tetrachloride.
  • Halogenated hydrocarbons such as dichloroethane, chlorobenzene, dichlorobenzene; esters such as ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, diethyl carbonate; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, diethylene glycol Ethers such as dimethyl ether; methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamyl alcohol, diethylene glycol, glycol Alcohols such as phosphorus, octanol, cyclohexanol, methyl cellosolve; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, isophorone, cyclohe
  • the solvent used in the reaction may be a single solvent or a mixture of two to six solvents.
  • the reaction may be carried out in the presence of an amine such as triethylamine, N, N-diisopropylamine, pyridine, N-methylmorpholine, or a base such as sodium hydroxide or potassium carbonate.
  • the reaction may be carried out in the presence of an acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, or acetic acid.
  • Step a is a step of obtaining compound 2 by introducing a hydroxyl group into the double bond of compound 1 (diolation). Specifically, compound 1 is reacted in a solvent in the presence of an acid with a catalytic amount of osmium tetroxide and an oxidizing agent such as N-methylmorpholine N-oxide.
  • the acid strong acids such as trifluoroacetic acid, p-toluenesulfonic acid and hydrochloric acid can be used, and p-toluenesulfonic acid is preferred. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but a mixed solvent of acetone and water is preferable.
  • the amount of the oxidizing agent to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound 1.
  • the amount of the acid to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound 1.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 1.
  • the reaction temperature is usually from 0 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually from 1 to 24 hours.
  • Compound 1 can be synthesized by a method known in the literature (Tetrahedron, 63, 4310-4318 (2007)).
  • Step b is a step in which compound 3 is obtained by protecting the hydroxyl group of compound 2.
  • compound 2 is reacted with a protecting reagent in a solvent in the presence of a base.
  • the base include amino compounds such as pyridine, 2,6-lutidine and triethylamine, and 2,6-lutidine is preferable.
  • an organosilicon reagent is suitable, and examples thereof include tert-butyldimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (TBDMSOTf), tert-butyldimethylsilyl chloride, and the like, preferably TBDMSOTf.
  • the amount of the base to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound 2.
  • the amount of the protective reagent used is usually 1 to 5 equivalents per hydroxyl group of compound 2.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 2.
  • the reaction temperature is usually from 0 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually from 1 to 24 hours.
  • Step c is a step of obtaining compound 4 by reducing the ketone of compound 3.
  • compound 3 is reacted with a reducing agent in a solvent.
  • the reducing agent include lithium aluminum hydride (LiAlH 4 ), sodium borohydride (NaBH 4 ), diisobutylaluminum hydride (DIBAH) and the like, preferably DIBAH. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but toluene is preferred.
  • the amount of the reducing agent to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound 3.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 3.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 78 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 0.1 to 24 hours.
  • Step d is a step of obtaining compound 5 by cleaving the ring of compound 4 and introducing a hydrocarbon group.
  • the hydrocarbon group to be introduced is an alkyl group
  • the compound 4 is converted to an alkyl-triphenylphosphonium halide (preferably bromide) and a base [for example, lithium bis (trimethylsilyl) amide (LiN (TMS) 2 )], and Wittig reaction with the resulting phosphorane gives compound 5.
  • the halogenated hydrocarbon group can be appropriately selected according to the hydrocarbon group to be introduced. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but THF is preferred.
  • the amount of alkyl-triphenylphosphonium halide used is usually 2 to 4 equivalents relative to compound 4.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 4.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 78 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 0.1 to 24 hours.
  • Step e is a step of obtaining compound 6 by mesylating the hydroxyl group of compound 5.
  • compound 5 is reacted with a mesylating agent in a solvent in the presence of a base.
  • the base include triethylamine, pyridine, dimethylaminopyridine and the like, and pyridine is preferable.
  • the mesylating agent include methanesulfonic anhydride, methanesulfonyl chloride, methanesulfonyl fluoride, and the like, and methanesulfonic anhydride is preferable. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, and methylene chloride is preferred.
  • the amount of the base used is usually a catalytic amount to 5 equivalents relative to compound 5.
  • the amount of the mesylating agent to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound 5.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 5.
  • the reaction temperature is usually from 0 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually from 0.1 to 24 hours.
  • Step f is a step of obtaining compound 7 by deprotecting a part of the hydroxyl group of compound 6.
  • Deprotection methods may be selected from known methods depending on the type of protecting group, for example, the protecting group is a strong acid need to be selectively deprotected only TBDMS group C 1 position primary For TBDMS groups can not be used So, using compound 6 in solvent, hydrogen fluoride-pyridine or tetrabutylammonium fluoride (TBAF). Preferred is hydrogen fluoride-pyridine.
  • the solvent a mixed solvent of tetrahydrofuran and pyridine is preferable.
  • the amount of hydrogen fluoride-pyridine used is usually a catalytic amount to 10 equivalents, preferably 1 to 2 equivalents, relative to compound 6.
  • the amount of tetrabutylammonium fluoride used is usually 2 to 20 equivalents relative to compound 6.
  • the amount of the solvent used is usually 1 to 100 times the volume of Compound 6.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 to 60 ° C., and the reaction time is usually 1 to 24 hours.
  • Step g is a step of obtaining compound 8 by reducing the double bond in compound 7.
  • compound 7 is reacted in the presence of hydrogen and a reduction catalyst in a solvent.
  • Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but hexane and ethyl acetate are preferred.
  • the reduction catalyst include palladium-carbon, palladium hydroxide, palladium hydroxide-activated carbon, platinum oxide, Raney nickel, and preferably palladium-carbon.
  • the amount of solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 7. With respect to the amount of the reduction catalyst used, a catalytic amount is usually sufficient with respect to compound 7.
  • the reaction temperature is usually from 0 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually from 0.1 to 24 hours.
  • Step h is a step of obtaining compound 9 by azidating the methanesulfonyloxy group (OMs) in compound 8 and converting it to N 3 .
  • OMs methanesulfonyloxy group
  • Sodium azide is usually used for azidation, and the amount used is usually 5 to 20 equivalents relative to compound 8.
  • R 4 ' is R 4 is one more carbon atoms, R 4 "is two small R 4 carbon atoms, R 4 represents an above synonymous.
  • Step a is a step of obtaining compound 11 by subjecting compound 10 to isopropylidene reaction.
  • the isopropylidene reaction is carried out by reacting compound 10 with 2,2-dimethoxypropane in a solvent. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but DMF is preferred.
  • the reaction may be performed in the presence of an acid catalyst.
  • the acid catalyst include inorganic acids such as hydrochloric acid and sulfuric acid, organic acids such as methanesulfonic acid and p-toluenesulfonic acid, and ion exchange resins (H + type).
  • the amount of 2,2-dimethoxypropane used is usually 1 to 10 equivalents relative to compound 10.
  • the amount of the acid catalyst to be used is generally 0.01-1 equivalent with respect to compound 10.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of the compound 10.
  • the reaction temperature is usually room temperature to 100 ° C.
  • the reaction time is usually 0.5 to 24 hours.
  • Compound 10 can be synthesized by techniques known in the literature or is commercially available.
  • Step b is a step of obtaining compound 12 by cleaving the ring of compound 11 and introducing a hydrocarbon group.
  • the hydrocarbon group to be introduced is an alkyl group
  • the compound 11 is converted to an alkyl-triphenylphosphonium halide (preferably bromide) and a base [for example, lithium bis (trimethylsilyl) amide (LiN (TMS) Compound 12 is obtained by Wittig reaction with phosphorane obtained by reaction with 2 )].
  • TMS lithium bis (trimethylsilyl) amide
  • the halogenated hydrocarbon group can be appropriately selected according to the hydrocarbon group to be introduced. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but THF is preferred.
  • the amount of alkyl-triphenylphosphonium halide to be used is generally 2 to 4 equivalents relative to compound 11.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of the compound 11.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 78 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 1 to 24 hours.
  • Step c is a step of obtaining compound 13 by reducing the double bond in compound 12. This step can be carried out in the same manner as step g in Scheme 1.
  • Step d is a step of obtaining compound 14 by oxidizing the hydroxyl group of compound 13 to a carboxyl group. Specifically, compound 13 is reacted with a catalytic amount of an oxidizing agent in the presence of excess sodium periodate in a solvent.
  • the oxidizing agent include ruthenium tetroxide, ruthenium dioxide, ruthenium trichloride and hydrates thereof, ruthenium compounds such as ruthenium-phosphine complex, ruthenium-carbon monoxide complex, preferably ruthenium trichloride and water thereof. It is a Japanese product.
  • Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but a mixed solvent of carbon tetrachloride, acetonitrile and water is preferred.
  • the amount of the oxidizing agent to be used is generally a catalytic amount to 1 equivalent with respect to compound 13.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 13.
  • the reaction temperature is usually from 0 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually from 0.1 to 24 hours.
  • Step a is a step of obtaining compound 16 by reacting compound 15 and compound 9 with trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate or silver trifluoromethanesulfonate as a catalyst in a solvent in the presence of molecular sieve.
  • the raw material compound 15 can be synthesized by a method known in the literature (Carbohydr. Res. 345, 1663-1684 (2010)).
  • Compound 15 needs to be converted to an imidate form before the reaction with Compound 9.
  • the amount of compound 15 to be used is generally 0.1-10 equivalents relative to compound 9.
  • the amount of trifluoromethanesulfonate used is usually 0.01 to 3 equivalents relative to Compound 15.
  • the amount of molecular sieve used is usually 1 to 2 g per 1 mmol of compound 15.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 15.
  • the reaction temperature is usually from 0 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually from 0.1 to 24 hours.
  • Step b is a step of obtaining compound 17 by reducing the azido group of compound 16 to an amino group.
  • compound 16 is reacted with a reducing agent in a solvent.
  • the reducing agent include catalytic hydrogen reduction catalysts such as trimethylphosphine, tributylphosphine, triphenylphosphine, hydrogen and palladium-carbon, palladium black, palladium hydroxide, platinum oxide and the like.
  • it is a reaction in which trimethylphosphine in THF is converted to iminophosphorane (—N ⁇ PMe 3 ), and this P ⁇ N double bond is hydrolyzed with an aqueous sodium hydroxide solution to give amine 17.
  • Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, and examples thereof include methanol, ethanol, THF, dioxane, DMF, water, or a mixed solvent of these organic solvents and water. Is THF.
  • the amount of the reducing agent to be used is generally 1-10 equivalents relative to compound 16.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 16.
  • the reaction temperature is usually 10 to 30 ° C., and the reaction time is usually 0.5 to 8 hours.
  • Step c is a step of obtaining compound 18 by dehydration condensation of the amine of compound 17 and the carboxylic acid of compound 14. Specifically, compound 17 is reacted with compound 14 in the presence of a condensing agent in a solvent. If necessary, 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) and DMAP are added.
  • a condensing agent water-soluble carbodiimide, particularly 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride is preferably used. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, and THF and methylene chloride are used. A mixed solvent of THF and methylene chloride is preferred.
  • the amount of compound 14 to be used is generally 1-5 equivalents relative to compound 17.
  • the amount of the condensing agent to be used is generally 1 to 20 equivalents relative to compound 17.
  • HOBt or DMAP is added, the amount used is usually 5 to 20 equivalents relative to compound 17.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 17.
  • the reaction temperature is usually 10-30 ° C., and the reaction time is usually 0.5-24 hours.
  • Step d is a step of obtaining compound 19 by deprotecting the hydroxyl-protecting group of compound 18.
  • the deprotection method is selected from known methods depending on the type of the protecting group. For example, when the protecting group is a PMB group, compound 18 in 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4 in a solvent is used. React with a deprotecting agent which is an oxidizing agent such as benzoquinone (DDQ).
  • DDQ benzoquinone
  • As the solvent a mixed solvent of halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and water is preferably used.
  • the amount of the deprotecting agent to be used is generally 1 to 10 equivalents relative to compound 18.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 18.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 20 ° C. to 100 ° C., and the reaction time is usually 0.5 to 20 hours.
  • Step e is a step in which compound 20 is obtained by deprotecting the protecting group for the hydroxyl group of compound 19.
  • the deprotection method is selected from known methods depending on the type of the protecting group.
  • the protecting group is a silyl group such as a di- (t-butyl) -silylene group (DTBS group) over two hydroxyl groups on the sugar structure.
  • compound 19 is mixed with HF-pyridine, tetrabutylammonium fluoride (TBAF), hydrofluoric acid (HF), cesium fluoride (CsF) in a solvent. React with a deprotecting agent.
  • Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but THF, pyridine, or a mixed solvent of THF and pyridine is preferable.
  • the amount of the deprotecting agent to be used is generally 0.5 to 20 equivalents relative to compound 19.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 19.
  • the reaction temperature is usually 10 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 1 to 5 hours.
  • Step f is a step of obtaining compound 21 by deprotecting the isopropylidene group and the TBDMS group as the hydroxyl-protecting group in compound 20.
  • compound 20 is reacted in a solvent with a deprotecting agent such as hydrofluoric acid (HF), hydrochloric acid, p-toluenesulfonic acid, acetic acid water and the like. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction, but a mixed solvent of methylene chloride and acetonitrile is preferably used.
  • the amount of the deprotecting agent to be used is generally 0.5 to 20 equivalents relative to compound 20.
  • the amount of the solvent used is usually 50 to 500 times the volume of Compound 20.
  • the reaction temperature is usually 10 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 0.1 to 24 hours.
  • R 3 is two more R 3 carbon atoms, R 3 represents an above synonymous.
  • Step a is a step of obtaining compound 23 by dehydration condensation of the amine of compound 22 and the carboxylic acid of compound 14. This step can be performed in the same manner as in step c of Scheme 3 except that compound 22 is used instead of compound 17.
  • the raw material compound 22 can be synthesized by a method known in the literature (Bioorg. & Med. Chem. 2008, 16, 8896-8906).
  • Step b is a step of obtaining compound 24 by deprotecting the hydroxyl-protecting group of compound 23.
  • the deprotection method is selected from known methods depending on the type of protective group.
  • compound 23 is reacted in a solvent in the presence of hydrogen and a reduction catalyst.
  • the reduction catalyst include palladium hydroxide, palladium hydroxide-activated carbon, platinum oxide, Raney nickel and the like.
  • the solvent methanol, ethanol, chloroform, ethyl acetate, acetic acid, and THF are preferably used.
  • the amount of the reduction catalyst used is usually a sufficient amount for the compound 23.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 23.
  • the reaction temperature is usually room temperature, and the reaction time is usually 1 to 24 hours.
  • Step c is a step of obtaining compound 25 by deprotecting the isopropylidene group and the TBDMS group as the hydroxyl-protecting group in compound 24. This step can be performed in the same manner as Step f in Scheme 3.
  • Step a is a step of obtaining compound 27 by cleaving the ring of compound 26 and introducing a hydrocarbon group.
  • the hydrocarbon group to be introduced is an alkyl group
  • the compound 26 is converted to an alkyl-triphenylphosphonium halide (preferably bromide) and a base [for example, n-butyllithium (n-BuLi)].
  • Compound 27 is obtained by Wittig reaction with the phosphorane obtained by the reaction.
  • the halogenated hydrocarbon group can be appropriately selected according to the hydrocarbon group to be introduced. Any solvent may be used as long as it does not inhibit this reaction.
  • the amount of alkyl-triphenylphosphonium halide to be used is generally 2-4 equivalents relative to compound 26.
  • the amount of solvent used is usually 10 to 100 times the volume of compound 26.
  • the reaction temperature is usually ⁇ 78 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 0.1 to 24 hours.
  • the raw material compound 26 can also be synthesized by a method known in the literature.
  • Step b is a step of obtaining compound 28 by reducing the double bond in compound 27. This step can be carried out in the same manner as step g in Scheme 1.
  • Step c is a step of obtaining compound 29 by protecting the hydroxyl group of compound 28. This step can be performed in the same manner as in step b of Scheme 1.
  • Step d is a C 1-position hydroxyl group of compound 29 is selectively deprotected to give compound compound 30.
  • compound 29 is reacted with a deprotecting agent such as tetrabutylammonium fluoride (TBAF), hydrofluoric acid (HF) -pyridine, or cesium fluoride (CsF) in a solvent.
  • the deprotecting agent is preferably HF-pyridine.
  • As the solvent a mixed solvent of pyridine and THF is preferably used.
  • the amount of the deprotecting agent to be used is generally 0.5 to 20 equivalents relative to compound 29.
  • the amount of the solvent used is usually 10 to 100 times the volume of Compound 29.
  • the reaction temperature is usually 10 ° C. to room temperature, and the reaction time is usually 0.1 to 24 hours. After completion of the reaction, the reaction solution is concentrated under reduced pressure, and the residue is purified by column chromatography to isolate compound 29, compound 30, and compound 31 as starting compounds.
  • Step e is a step of obtaining compound 32 by oxidizing the hydroxyl group of compound 30 to a carboxyl group. This step can be performed in the same manner as in step d of Scheme 2.
  • Step a is a step of obtaining compound 33 by dehydration condensation of the amine of compound 22 and the carboxylic acid of compound 32. This step can be performed in the same manner as in step a of Scheme 4.
  • Step b is a step in which compound 34 is obtained by deprotecting the hydroxyl-protecting group of compound 33. This step can be performed in the same manner as in step b of Scheme 4.
  • Step c is a step in which compound 35 is obtained by deprotecting the isopropylidene group and TBDMS group as the hydroxyl-protecting group in compound 34. This step can be performed in the same manner as in step c of Scheme 4.
  • NKT cells are activated to selectively select Th2-type cytokines, It becomes possible to guide with priority.
  • the human dendritic cell used here is not particularly limited as long as it is a human-derived dendritic cell (hDC) capable of activating NKT cells via the hydroxyglycolipid of the present invention, and myeloid dendritic cells. (DC1) and lymphoid dendritic cells (DC2) may be used, but DC1 is preferred.
  • hDC human-derived dendritic cell
  • DC1 lymphoid dendritic cells
  • hDC may be prepared by any method known per se, and can be isolated from human epidermis, T cell region of lymphoid tissue, peripheral non-lymphoid tissue, imported lymph, dermis, etc. Monocytes, myeloid cells, and the like can be separated from human peripheral blood and the like by density gradient centrifugation and cultured in the presence of GM-CSF and IL-4 for about 7 to about 10 days.
  • the hDC pulse with the hydroxylated glycolipid of the present invention may be carried out by a well-known and conventional technique.
  • a medium containing the glycolipid of the present invention at a concentration of about 100 to about 200 ng / ml for example, RPMI-1640 medium etc.
  • culturing hDC for about 12 to about 48 hours.
  • the pulse may be performed by adding the glycolipid of the present invention to the medium in the process of culturing and maturing the immature hDC from monocytes in the presence of GM-CSF and IL-4.
  • the presence or absence of NKT cells and the degree thereof can be measured by any method known per se.
  • the activation of NKT cells is evaluated using the amount of cytokine produced by activated NKT cells as an index. can do.
  • Cytokines produced by activated NKT cells include IFN- ⁇ , IL-4, GM-CSF, IL-10, etc., but the hydroxylated glycolipids of the present invention are selectively Th2-type cytokines (eg, IL-4) production is induced.
  • preferred examples of the hydroxylated glycolipid of the present invention do not promote the production of Th1-type cytokines (eg, IFN- ⁇ ) as well as the secretion of cytokines being biased toward Th2-type.
  • the production of cytokines in NKT cells can be measured using, for example, an antibody against the cytokines.
  • the activation of NKT cells can be evaluated by a conventional immunoassay such as ELISA method, RIA method, FIA method, EIA method using cell culture supernatant.
  • anti-cytokine antibody is used.
  • a method is used in which an NKT cell-containing sample is brought into contact with an immobilized solid phase, and cytokines bound to the solid phase after solid-liquid separation are detected and counted by a sandwich method using a labeled anti-cytokine antibody.
  • the labeling agent include enzymes, fluorescent substances, luminescent substances, dyes, and radioisotopes.
  • a biotinylated anti-cytokine antibody and (strept) avidin bound with a labeling agent may be used.
  • An assay system using an enzyme such as alkaline phosphatase as a labeling agent is known as ELISPOT for detection of cytokine-producing cells.
  • the disease that can be prevented or treated by the hydroxylated glycolipid of the present invention is not particularly limited as long as a preventive or therapeutic effect is expected directly or indirectly by increasing IL-4 production.
  • Examples include autoimmune diseases and allergies in mammals (eg, mice, cats, cows, dogs, horses, goats, monkeys, humans).
  • Autoimmune diseases include systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, type 1 and type 2 diabetes, inflammatory bowel disease, biliary cirrhosis, uveitis, multiple sclerosis, and Crohn's disease, ulcerative colitis, blistering Examples include pemphigoid, sarcoidosis, psoriasis, ichthyosis, Graves eye disease, and asthma. Furthermore, since an excessive immune response such as rejection in organ transplantation can be suppressed, it can also be used as an immunosuppressant.
  • the hydroxyglycolipid of the present invention can be used in combination with other drugs, for example, existing autoimmune disease therapeutic agents, antiallergic agents, immunosuppressive agents, etc., as long as the drug efficacy is not impaired.
  • the administration time is not limited, and these may be administered simultaneously to the administration subject or may be administered with a time difference.
  • the dose can be appropriately selected based on the clinically used dose.
  • the mixing ratio of the hydroxyglycolipid of the present invention and the concomitant drug can be appropriately selected according to the administration subject, administration route, target disease, symptom, combination and the like.
  • autoimmune disease therapeutic agents and / or immunosuppressive agents examples include steroids such as prednisolone, gold preparations such as gold sodium thiomalate and auranofin, SH preparations such as D-penicillamine and bucillamine, and salazosulfa Examples include pyridine, actarit, lopenzalit sodium and the like.
  • immunosuppressive agents such as mizolipin, methotrexate, cyclophosphamide, azathioprine, FK-506, leflumanoid, anti-TNF- ⁇ antibody, soluble TNF- ⁇ receptor, anti-IL-6 antibody, IL-6 receptor antibody, etc.
  • cytokine therapeutic agents examples include cytokine therapeutic agents.
  • Antiallergic agents include, for example, astemizole, amlexanox, ibudilast, ebastine, azelastine hydrochloride, epinastine hydrochloride, ozagrel hydrochloride, cetirizine hydrochloride, oxatomide, sodium cromoglycate, seratrodast, tazanolast, terfenadine, suplatast tosylate, tranilast, fumarate emedas Examples thereof include ketotifen fumarate, pranlukast hydrate, pemirolast potassium, repirinast, and derivatives thereof.
  • the hydroxyglycolipid of the present invention When administering the hydroxyglycolipid of the present invention to humans, it is mixed with itself or a pharmacologically acceptable carrier, excipient, diluent and the like, and orally administered (for example, powder, granule, It can be safely administered orally or parenterally as pharmaceutical compositions such as tablets, capsules), parenteral agents (eg, injections), suppositories (eg, rectal suppositories, vaginal suppositories). . These preparations can be produced by a conventionally known method.
  • the injection examples include subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, and infusion.
  • the glycolipid of the present invention is solubilized (for example, ⁇ -cyclodextrins), a dispersant (for example, carboxymethylcellulose, sodium alginate), a preservative (for example, methylparaben, propylparaben, benzyl alcohol, chlorobutanol). ), Isotonic agents (for example, sodium chloride, glycerin, sorbitol, glucose) and the like, and can be made into an aqueous injection according to a conventional method. Moreover, it can also be dissolved, suspended or emulsified in vegetable oils (for example, olive oil, sesame oil, peanut oil, cottonseed oil, corn oil), propylene glycol, etc. to make oily injections.
  • vegetable oils for example, olive oil, sesame oil, peanut oil, cottonseed oil, corn oil
  • An oral administration agent is prepared by adding, for example, an excipient (eg, lactose, sucrose, starch), a disintegrant (eg, starch, calcium carbonate), a binder (eg, starch, gum arabic, Carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylcellulose) or lubricants (eg, talc, magnesium stearate, polyethylene glycol), etc. are added as appropriate and compression molded, followed by coating with hydroxypropylmethylcellulose as necessary. Can also be manufactured.
  • the suppository can be produced by mixing the compound (1) and the like with a non-irritating excipient (for example, polyethylene glycol, glyceride of higher fatty acid).
  • the dose of the hydroxyglycolipid of the present invention varies depending on age, body weight, symptoms, dosage form, administration method, administration period, etc.
  • per patient adult, body weight of about 60 kg
  • the present invention provides a selective Th2-type cytokine production inducer (particularly an IL-4 production inducer) containing dendritic cells pulsed with the hydroxylated glycolipid of the present invention.
  • the agent can be produced as an oral / parenteral preparation by mixing an effective amount of the above-mentioned hDC pulsed with the hydroxylated glycolipid of the present invention with a pharmaceutically acceptable carrier according to conventional means.
  • the agent is usually produced as a parenteral preparation such as an injection, a suspension, an infusion.
  • Examples of pharmaceutically acceptable carriers that can be included in the parenteral preparation include isotonic solutions (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.) containing physiological saline, glucose and other adjuvants.
  • An aqueous liquid for injection can be mentioned.
  • the agent of the present invention includes, for example, a buffer (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer), a soothing agent (eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.), a stabilizer (eg, human serum albumin, Polyethylene glycol, etc.), preservatives, antioxidants and the like.
  • hDC pulsed with the hydroxyglycolipid of the present invention is suspended in the aqueous solution so as to be about 5 ⁇ 10 6 to about 1 ⁇ 10 7 cells / ml. You can do it. Since the preparation thus obtained is stable and has low toxicity, it can be safely administered to humans.
  • the subject of administration is preferably the patient from whom hDC is derived (that is, autotransplantation), but is not limited to this as long as it is predicted to be compatible with the administered hDC.
  • the method of administration is not particularly limited and can be administered orally or parenterally, but is preferably injection or infusion, intravenous administration, subcutaneous administration, intradermal administration, intramuscular administration, intraperitoneal administration, affected area Direct administration etc. are mentioned.
  • the dose of the agent of the present invention varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, etc., but usually in an adult patient (with a body weight of 60 kg), for example, parenteral administration, Conveniently, about 6 ⁇ 10 5 to about 1 ⁇ 10 7 cells as hDC dose are administered about 4 to about 8 times at intervals of about 1 to about 2 weeks.
  • Step a (3R, 4S, 5R, 6S, 7R) -7-[(tertiarybutyldimethylsilyloxy) methyl] -5,6-O-isopropylidene-3,4- (dihydroxy) oxepan-2-one
  • Synthetic compound (1) (3.00 g, 9.13 mmol) [CW. Chang; YN. Chen; AK Adak; KH. Lin; DL. M. Tsou; CC.
  • Step b (3R, 4R, 5S, 6S, 7R) -7-[(tertiarybutyldimethylsilyloxy) methyl] -5,6-O-isopropylidene-3,4-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) )
  • Synthesis of Oxepan-2-one [Compound (3)] CH 2 Cl 2 (30 mL) solution containing 2,6-lutidine (1.72 g, 16.0 mmol) of Compound (2) (580 mg, 1.60 mmol) To the mixture was added tertiary butyldimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (TBDMSOTf) (2.54 g, 9.60 mmol), and the mixture was stirred for 16 hours.
  • TDMSOTf tertiary butyldimethylsilyl trifluoromethanesulfonate
  • Step c (3R, 4R, 5S, 6S, 7R) -7-[(tertiarybutyldimethylsilyloxy) methyl] -5,6-O-isopropylidene-3,4-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) )
  • Compound (3) (5.97 g, 10.1 mmol) in toluene (180 mL) in diisobutylaluminum hydride (DIBAH) (toluene 1.0 M solution, 10.8 mL, 10.8 mmol) ) was added at ⁇ 78 ° C. under an argon stream.
  • DIBAH diisobutylaluminum hydride
  • Step d (2R, 3S, 4S, 5R, 6S) -1,5,6-tri (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O-isopropylideneoctade-7-sen-2-ol
  • nC 11 H 23 P (Ph) 3 Br 9.46 g, 19.0 mmol
  • Compound (4) (2.82 g, 4.76 mmol) in THF (23 mL)
  • the solution was added at ⁇ 30 ° C. under an argon stream, and LiN (TMS) 2 (THF 1 M solution, 28 mL) was further added with stirring.
  • Step e (2R, 3R, 4S, 5R, 6S) -1,5,6-tri (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O-isopropylidene-2-methanesulfonyloxyoctade-7- Synthesis of cene [compound (6)]
  • Compound (5) (840 mg, 1.15 mmol) in CH 2 Cl 2 (40 mL) was added pyridine (4 mL) and methanesulfonic anhydride (840 mg, 4.82 mmol). In addition, the mixture was stirred at room temperature for 45 minutes and then diluted with CH 2 Cl 2 .
  • Step f (2R, 3R, 4S, 5R, 6S) -5,6-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O-isopropylidene-2-methanesulfonyloxyoctade-7-cene- Synthesis of 1-ol [compound (7)]
  • Compound (6) (128 mg, 0.158 mmol) and pyridine (1.0 mL) in THF (1.7 mL) in HF • pyridine (HF: ⁇ 70%; pyridine: ⁇ 30 %, 0.34 mL) was added at 0 ° C. under a stream of argon. After 5 minutes, the mixture was stirred at room temperature for 5 hours.
  • Step h (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -2-azido-5,6-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O-isopropylidene-octadecane [compound (9)]
  • a DMF (2 mL) solution of the synthetic compound (8) (20 mg, 0.03 mmol) and NaN 3 (20 mg, 0.31 mmol) was heated and stirred at 100 ° C. for 14 hours. The solution was concentrated under reduced pressure, diluted with ethyl acetate, washed with water, and dried over magnesium sulfate. Filtration, concentration under reduced pressure, and purification by silica gel column chromatography.
  • Step a Synthesis of 2-deoxy-3,4 -O-isopropylidene-L-ribose [compound (11)]
  • Compound (10) (2-deoxy-L-ribose, 5.29 g, 39.44 mmol) in DMF (40
  • 2,2-dimethoxypropane (6.16 g, 59.2 mmol)
  • Amberlyst 15 ion exchange resin (395 mg) were added and stirred at room temperature for 18 hours. The resin was removed and the mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography.
  • Step b Synthesis of (2S, 3R) -2,3-O-isopropylidene-5-hexacocen-1-ol
  • Compound (12) Heicosyl triphenylphosphonium bromide; C 21 H 43 P (Ph) 3 LiN (TMS) 2 (THF 1 M solution, 20.4 mL) was added to a THF (19 mL) solution of Br (5.62 g, 8.81 mmol), and the mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour under an argon stream.
  • Step c Synthesis of (2S, 3R) -2,3-O- (isopropylidene) hexacosan-1-ol [compound (13)]
  • Compound (12) (270 mg, 0.596 mmol) was converted from compound (7) to compound Compound (13) (246 mg, 91%) was obtained by reducing (8) as synthesized and further column chromatography.
  • the column chromatography was eluted with hexane-ethyl acetate (19: 1, further 4: 1).
  • Step d Synthesis of (2R, 3R) -2,3-O- (isopropylidene) hexacosanoic acid
  • Compound (13) 50 mg, 0.11 mmol
  • NaIO 4 (236 mg, 1.10 mmol
  • RuCl 3 ⁇ n—H 2 O (3 mg) in CCl 4 —CH 3 CN—H 2 O (2: 2: 3, 7 mL) were stirred at room temperature for 3 hours, diluted with CHCl 3 , And dried over magnesium sulfate. Filtration, concentration under reduced pressure, and purification by silica gel column chromatography.
  • Step a (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -2-azido-5,6-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O- (isopropylidene) octadecyl 2,3-di- Synthesis of O- (4-methoxybenzyl) -4,6-O- (ditertiarybutyl) silylene- ⁇ -D-galactopyranoside [Compound (16)] (1) Compound (15) (225 mg, 0.40 mmol) [M. Shiozaki; T. Tashiro; H. Koshino; R. Nakagawa; S. Inoue; T. Shigeura; H.
  • Step b (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -2-amino-5,6-di (tertiary butyldimethylsilyloxy) -3,4-O- (isopropylidene) octadecyl 2,3-di- Synthesis of O- (4-methoxybenzyl) -4,6-O- (ditertiarybutyl) silylene- ⁇ -D-galactopyranoside [compound (17)] of compound (16) (180 mg, 0.152 mmol) Trimethylphosphine (1M THF solution, 0.8 mL) was added to a THF (3 mL) solution, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours, and then sodium hydroxide (1M aqueous solution, 2.9 mL) was added.
  • Step c (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -5,6-di (tertiary-butyldimethylsilyloxy) -2-[(2′R, 3′R) -2 ′, 3′-O— (Isopropylidene) hexacosanoylamino] -3,4-O- (isopropylidene) octadecyl 2,3-O- (4-methoxybenzyl) -4,6-O- (di-tert-butyl) silylene- ⁇
  • Synthesis of —D-galactopyranoside [Compound (18)] Compound (17) (103 mg, 0.089 mmol) and Compound (14) (125 mg, 0.266 mmol, 3 eq) in THF-CH 2 Cl 2 (1 : 1, 10 mL) solution to 4-dimethylaminopyridine (DMAP) (130 mg, 1.06 mmol, 12 eq
  • Step d (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -5,6-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -2-[(2′R, 3′R) -2 ′, 3′-O— (Isopropylidene) hexacosanoylamino] -3,4- (O-isopropylidene) octadecyl 4,6-O- (di-tert-butyl) silylene- ⁇ -D-galactopyranoside
  • Compound (19) compound of (18) (124 mg, 0.077 mmol) CH 2 Cl 2 -H 2 O of (10: 1, 19.8 mL) was added 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone ( (DDQ, 124 mg, 0.546 mmol) was added and stirred for 2 hours and diluted with CH 2 Cl 2 .
  • Step e (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -5,6-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -2-[(2′R, 3′R) -2 ′, 3′-O— Synthesis of (isopropylidene) hexacosanoylamino] -3,4-O- (isopropylidene) octadecyl ⁇ -D-galactopyranoside [compound (20)] (19) (96 mg, 0.070 mmol) Hydrofluoric acid-pyridine (HF: ⁇ 70%; pyridine: ⁇ 30%, 45 mg) was added to a solution of (60 mg, 0.76 mmol) in THF (7.5 mL) at room temperature under a stream of argon.
  • HF Hydrofluoric acid-pyridine
  • Step f (2S, 3S, 4S, 5S, 6S) -2-[(2′R, 3′R) -2 ′, 3 ′-(dihydroxy) hexacosanoylamino] -3,4,5,6 Synthesis of — (tetrahydroxy) octadecyl ⁇ -D-galactopyranoside [compound (21); RCAI-147] (20) (56 mg, 0.070 mmol) of CH 2 Cl 2 —CH 3 CN (3: 2 28 mL), H 2 O (423 mg) and 46% HF water (423 mg) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours.
  • Step a (2S, 3S, 4R) -3,4- (ditertiarybutyldimethylsilyloxy) -2-[(2′R, 3′R) -2 ′, 3′-O-isopropylidenehexacosanoyl Amino] octadecyl 2,3,4,6-tetra-O-benzyl- ⁇ -D-galactopyranoside [Compound (23)] Compound (22) (160 mg, 0.15 mmol) [Tashiro, T .; Hongo, N .; Nakagawa, R .; Seino, K .; Watarai, H .; Ishii, Y .; Taniguchi, M .; Mori, K.
  • Step b (2S, 3S, 4R) -3,4- (ditertiary butyldimethylsilyloxy) -2-[(2′R, 3′R) -2 ′, 3′-O-isopropylidenehexacosanoyl Synthesis of amino] octadecyl ⁇ -D-galactopyranoside [compound (24)] in a solution of compound (23) (160 mg, 0.105 mmol) in THF (40 mL) in 20% Pd (OH) 2 / C (300 mg ) And stirred at room temperature under a hydrogen stream for 16 hours. The catalyst was removed and the mixture was concentrated under reduced pressure and purified by silica gel column chromatography.
  • Step c (2S, 3S, 4R) -3,4-dihydroxy-2-[(2′R, 3′R) -2 ′, 3′-dihydroxyhexacosanoylamino] octadecyl ⁇ -D-galactopyrano Synthesis of Sid [Compound (25) (RCAI-151)] Compound (24) (80 mg, 0.071 mmol) was treated as if compound (21) was synthesized from compound (20) to give compound (25) (40 mg, 63%) was obtained. The column chromatography was eluted with CHCl 3 -MeOH (9.1, further 6: 1). The obtained compound (25) was named RCAI-151.
  • Step a Synthesis of (2S, 3S, 4R, 5EZ) -1- (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O-isopropylidene-5-hexacocenyl-2-ol
  • siltriphenylphosphonium bromide 638 mg, 1.00 mmol
  • n-BuLi 1.57 M hexane solution, 1.20 mL, 1.88 mmol
  • Step b Synthesis of (2S, 3S, 4R) -1- (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O-isopropylidene-5-hexacosan-2-ol [compound (28)]
  • E Z isomerism Compound (27) (3.45 g, 5.92 mmol) in ethyl acetate (120 ml) as a body mixture was mixed with 20% Pd (OH) 2 / C (1.3 g) to form a double bond at room temperature for 1 hour in a hydrogen stream. Reduced. The catalyst was removed by filtration and concentrated to quantitatively obtain Compound (28) (3.45 g).
  • Step c Synthesis of (2S, 3R, 4R) -1,2-di (tertiarybutyldimethylsilyloxy) -3,4-O-isopropylidenehexacosane
  • Compound (29) Compound (28) (3.45 g , 5.90 mmol) in methylene chloride (0.99 ml) in 2,6-lutidine (3.17 g, 29.6 mmol), and tert-butyldimethylsilyl trifluoromethane sulfonates over preparative (4.69 g, 1 hour at room temperature was added a 17.8 mmol) Stir with.
  • Step d (2S, 3R, 4R) -2-tertiarybutyldimethylsilyloxy-3,4-O-isopropylidenehexacosan-1-ol [compound (30)] and (2S, 3S, 4R) -1 , 2-Dihydrooxy-3,4-O-isopropylidenehexacosane [Compound (31)]
  • Compound (29) (100 mg, 0.14 mmol) in pyridine (0.9 ml) and THF (1 ml) in HF- Pyridine (0.2 ml; HF: ⁇ 70%, pyridine: ⁇ 30%) was added and stirred for 16 hours at room temperature.
  • Step e Synthesis of (2R, 3R, 4R) -2-tertiarybutyldimethylsilyloxy-3,4-O-isopropylidenehexacosanoic acid
  • Compound (32) Compound (30) (66 mg, 0.113 mmol) in CCl 4 —CH 3 CN—H 2 O (2: 2: 3, 7 mL), and NaIO 4 (242 mg, 1.13 mmol) and RuCl 3 ⁇ nH 2 O (3 mg) were added at room temperature. Stir for hours and dilute with CHCl 3 . This solution was washed with water and dried over MgSO 4 . After filtration and concentration, the residue was purified by silica gel column chromatography.
  • Step b (2S, 3S, 4R) -2-[(2′R, 3′R, 4′R) -2′-tertiarybutyldimethylsilyloxy-3 ′, 4′-O-isopropylidenehexacosa Noyl] amino-3,4-di- (tertiarybutyldimethylsilyloxy) octadecyl- ⁇ -D-galactopyranoside [Synthesis of Compound (34)] Hydrogenolysis was performed for 16 hours using Pd (OH) 2 / C (200 mg) using a solution of compound (33) (116 mg, 0.041 mmol) in tetrahydrofuran (30 mL) as a catalyst.
  • Step c (2S, 3S, 4R) -2-[(2′R, 3′R, 4′R) -2 ′, 3 ′, 4′-trihydroxyhexacosanoyl] amino-3,4-di -Synthesis of Hydroxyoctadecyl ⁇ -D-Galactopyranoside [Compound (35) (RCAI-160)]
  • Compound (34) (46 mg, 0.04 mmol) was obtained from compound (24) as compound (25).
  • Compound (35) was named RCAI-160.
  • Test Example 1 Bioactivity test of hydroxylated glycolipid of the present invention
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Phosphate buffer containing 0.5% tween20 Bio-Rad
  • tween20 Bio-Rad
  • mice per group Three C57BL / 6 mice per group were each injected with 200 ⁇ L of the prepared RCAI-147, RCAI-151 and RCAI-160 solutions into the tail vein (approximately 2 ⁇ g administered per mouse).
  • KRN7000 as a control substance
  • 200 ⁇ L of a solution of KRN7000 prepared so as to have a dose of 100 ⁇ g / kg body weight by the same method was injected into the tail vein.
  • 80 ⁇ L of blood was collected from the inferior venous plexus immediately before administration and 1, 3, 6, 12, 24, 32, 48, and 60 hours after administration to prepare plasma.
  • FIG. 1 shows the measurement results (mean value) and standard deviation (STDEV) of the IFN- ⁇ content in plasma immediately before administration and after 3, 6, 12, 24, 32, 48, and 60 hours.
  • FIG. 2 shows the measurement results (average value) and standard deviation (STDEV) of the content of IL-4 in plasma immediately before administration and 1, 3, 6, 12, 24 hours after administration. From the above results, it was shown that RCAI-147, RCAI-151 and RCAI-160 have cytokine production-inducing activity biased toward IL-4 compared to KRN7000. That is, it was confirmed that these glycolipids, which are hydroxylated analogs of KRN7000, can induce the production of cytokines biased toward Th2.
  • Test Example 2 Effect of hydroxylated glycolipid of the present invention on the development of EAE (experimental encephalomyelitis)
  • EAE experimental encephalomyelitis
  • C57BL / 6J female mice were given 200 ⁇ l of pertussis toxin (5 ⁇ g / ml) subcutaneously.
  • the hydroxylated KRN7000 analog developed by the present invention can induce the production of cytokines that are biased toward the Th2 type, such as IL-4, than the KRN7000, and the production of Th1 type cytokines is suppressed.
  • the present invention can also provide its use as an autoimmune disease therapeutic agent, antiallergic agent, and immunosuppressive agent.
  • IL-4 production can be further enhanced by pulsing dendritic cells with the hydroxylated glycolipid of the present invention and administering the dendritic cells.

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Abstract

　本発明は、免疫抑制効果が期待できるＴｈ２型に偏った新規なＫＲＮ７０００類縁体、及びそれを含有する医薬を提供することを目的とする。　式（Ｉ） （式中、 Ｒ１は水素原子又は水酸基を示し； ２個のＲ２は同一又は異なって、水素原子又は水酸基を示し； Ｒ３は置換基を有していてもよい炭素数８～１４の炭化水素基を示し； Ｒ４は置換基を有していてもよい炭素数１８～２４の炭化水素基を示す）で表される化合物、又はその塩。

Description

水酸化ＫＲＮ７０００類縁体及びその用途
　本発明は、新規な水酸化ＫＲＮ７０００類縁体及びその用途に関する。より詳細には、本発明は、フィトスフィンゴシン及び／又はアミド側鎖に水酸基が導入されている、水酸化ＫＲＮ７０００類縁体、その製造方法、及びその医薬用途に関する。
　アゲラスフィン類に代表されるα－ガラクトシルセラミドは、海綿の一種であるAgelas mauritianusの抽出液より単離された糖脂質であり、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）を強く活性化することが報告されている（非特許文献１）。
　ＫＲＮ７０００は、樹状細胞（ＤＣ）などに代表される抗原提示細胞（ＡＰＣ）に取り込まれた後、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子に類似したＣＤ１ｄタンパク質によって細胞膜上に提示される。ＮＫＴ細胞は、こうして提示されたＣＤ１ｄタンパク質とα－ガラクトシルセラミドとの複合体を、ＴＣＲを用いて認識することにより活性化され、免疫制御系のサイトカインを産生する。当該サイトカインとしては、免疫賦活作用を亢進させるＴｈ１型サイトカイン（主にインターフェロン（ＩＦＮ）－γ）、免疫抑制作用を亢進させるＴｈ２型サイトカイン（主にインターロイキン（ＩＬ）－４）が知られている（非特許文献２）。多くの研究者は、ＮＫＴ細胞からのＴｈ１型とＴｈ２型サイトカイン分泌の偏り、即ち、Ｔｈ１型に偏っているか、Ｔｈ２型に偏っているかで、制癌剤として期待できるか、免疫抑制剤として期待できるかが決定されると考えており、この指標は現在、広く世界で用途開発の初期の指標として認められつつある。
　これまでに様々なα－ガラクトシルセラミド類縁体が合成され、その構造と活性との相関関係が調査されてきている。α－ガラクトシルセラミドの一つであるＫＲＮ７０００として知られている化合物（非特許文献３）は、アゲラスフィン類の合成研究を経てキリンビール株式会社によって開発された化合物であり、非常に強い抗腫瘍活性を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　一方、ＫＲＮ７０００のトランケート類縁体であるＯＣＨ（非特許文献４～８）、ＫＲＮ７０００のエステル化類縁体であるＲＣＡＩ－８０（非特許文献９）は、Ｔｈ２型に偏り、免疫抑制剤としての効果が期待されている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　現在、免疫抑制剤として、副腎皮質ホルモン、代謝拮抗剤、アルキル化剤、アルカロイド、抗生物質、抗リンパ球グロブリン、抗ＣＤ３モノクローナル抗体等が知られており、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植等の治療薬として用いられている。
　例えば、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、現在、移植された臓器の拒絶を予防するために使用される優れた薬剤である。ＦＫ５０６（タクロリムス水和物）は、肝移植拒絶の予防のために使用されている。ＣｓＡ及びＦＫ５０６は、身体の免疫系が移植された外来タンパク質を拒絶するための多数の天然の保護物質が働くことを阻止することによって作用する。ＣｓＡは、重度の乾癬の治療やアトピー性皮膚炎の治療のためにも使用されている。ＣｓＡ及びＦＫ５０６は移植拒絶と戦うのに効果的であるが、腎毒性、神経毒性、及び胃腸不快感を含む幾つかの所望しない副作用を起こすことが知られている。ＦＴＹ７２０は多発性硬化症の新しい治療法を提供しうると期待される医薬品であるが、その他の自己免疫疾患への有効性は限られている。すなわち、従来の免疫抑制剤は、有効性、持続性、副作用等の点で必ずしも満足されるものではなく、さらに優れた免疫抑制剤、好ましくは従来の免疫抑制剤とは異なる作用機序を有する免疫抑制剤が求められている。
Science, 1997, 278, 1626-1629 Science, 1997, 277, 339-345 J. Med. Chem. 1995, 38, 2176-2187 Nature, 2001, 413, 531-534 Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4, 561-567 J. Clin. Invest. 2004, 113, 1631-1640 J. Org. Chem. 2005, 70, 10260-10270 J. Org. Chem. 2005, 70, 2398-2401 Carbohydr. Res. 2010, 1663-1684
　本発明はこのような実情に鑑みてなされたものであり、その解決しようとする課題は免疫抑制効果が期待できるＴｈ２型に偏った新規なα－ガラクトシルセラミド類縁体を提供することにある。また、かかるα－ガラクトシルセラミド類縁体を含有する医薬を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題を解決するため、ＫＲＮ７０００のトランケート類縁体である、化合物ＯＣＨに注目した。化合物ＯＣＨは自己免疫疾患の治療、臓器移植に関連した免疫抑制、及び炎症状態の治療等の有力な候補薬剤である。化合物ＯＣＨの親油性は減少していると考えられ、そうであれば逆に親水性が増加していると考えられる。すなわち、親水性が向上したＫＲＮ７０００類縁体は、化合物ＯＣＨ同様、Ｔｈ２型に偏った、自己免疫疾患の治療、臓器移植に関連した免疫抑制、及び炎症状態の治療等に有用であり得る。ＫＲＮ７０００はフィトスフィンゴシンを含有し、該フィトスフィンゴシン上のアミドＮ－Ｈ水素とマウスＣＤ１ｄの１５６残基目のスレオニン（ヒトＣＤ１ｄでは１５４残基目のスレオニン）の酸素との間で水素結合を形成することが知られている。既にＸ線結晶学的解析により、決定的な水素結合がマウスＣＤ１ｄのＡｒｇ７９残基とＫＲＮ７０００フィトスフィンゴシンの３’－ＯＨとの間に形成され、そしてＡｓｐ８０残基がフィトスフィンゴシンの３’－ＯＨ及び４’－ＯＨと水素結合を形成することが知られている(Natur Immunol. 2005, 6, 810-818; Natur Immunol. 2005, 6, 819-826; Nature 2007, 448, 44-49; J. Immunity, 2009, 31, 47-59)。ＫＲＮ７０００とＣＤ１ｄとの間での水素結合からの類似性により、化合物ＯＣＨもＣＤ１ｄの間に同様の水素結合を有することが十分に予測された。本発明者らはＫＲＮ７０００の主鎖であるフィトスフィンゴシン及び／又はアミド側鎖に１又は複数の水酸基を導入した種々の水酸化ＫＲＮ７０００類縁体を合成し、親水性を増加させることができるのかどうかを調べた。さらに、得られた類縁体について、そのＴｈ２偏向性を調べ、結果、サイトカインの分泌がＴｈ２型に偏った化合物、特にＴｈ１型サイトカインの産生が抑えられつつＴｈ２型に偏ったサイトカイン分泌を示す化合物を得、当該化合物が免疫抑制効果を有することを確認して本発明を完成するに到った。
　即ち、本発明は、以下を提供する。
［１］式(Ｉ)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
（式中、
Ｒ１は水素原子又は水酸基を示し；
２個のＲ２は同一又は異なって、水素原子又は水酸基を示し；
Ｒ３は置換基を有していてもよい炭素数８～１４の炭化水素基を示し；
Ｒ４は置換基を有していてもよい炭素数１８～２４の炭化水素基を示す）で表される化合物（以下、化合物（Ｉ）ともいう）、又はその塩。
［２］Ｒ３がそれぞれ置換基を有していてもよい、Ｃ８～１４アルキル基、Ｃ８～１４アルケニル基又はＣ８～１４アルキニル基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［３］Ｒ４がそれぞれ置換基を有していてもよい、Ｃ１８～２４アルキル基、Ｃ１８～２４アルケニル基又はＣ１８～２４アルキニル基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［４］Ｒ１が水素原子であり、２個のＲ２がともに水酸基であり、Ｒ３がＣ８～１４アルキル基であり、Ｒ４がＣ１８～２４アルキル基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［５］Ｒ１が水素原子であり、２個のＲ２がともに水素原子であり、Ｒ３がＣ８～１４アルキル基であり、Ｒ４がＣ１８～２４アルキル基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［６］Ｒ１が水酸基であり、２個のＲ２がともに水素原子であり、Ｒ３がＣ８～１４アルキル基であり、Ｒ４がＣ１８～２４アルキル基である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［７］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
である、上記［１］記載の化合物又はその塩。
［８］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩を含有する、医薬。
［９］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩を含有する、Ｔｈ２型サイトカイン分泌促進剤。
［１０］自己免疫疾患治療薬である、上記［８］記載の医薬。
［１１］免疫抑制剤である、上記［８］記載の医薬。
［１２］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩でパルスしたヒト樹状細胞。
［１３］上記［１２］記載のヒト樹状細胞を含有する、免疫抑制剤。
［１４］上記［１２］記載のヒト樹状細胞を含有する、自己免疫疾患治療薬。
［１５］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、Ｔｈ２型サイトカイン分泌促進方法。
［１６］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患の治療方法。
［１７］上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、免疫抑制方法。
［１８］上記［１２］に記載のヒト樹状細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む、免疫抑制方法。
［１９］上記［１２］に記載のヒト樹状細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患の治療方法。
［２０］Ｔｈ２型サイトカイン分泌を促進するための、上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩。
［２１］免疫抑制のための、上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩。
［２２］自己免疫疾患を治療するための、上記［１］～［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩。
　主鎖であるフィトスフィンゴシン及び／又はアミド側鎖に１又は複数の水酸基を導入した種々の水酸化ＫＲＮ７０００類縁体は、Ｔｈ２型に偏ったサイトカイン分泌を示す。ＩＦＮ－γ／ＩＬ－４の比率が免疫抑制効果等に重要なＩＬ－４に偏った本発明化合物は、自己免疫疾患治療薬や免疫抑制剤として有用である。
各種糖脂質をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＦＮ－γ（ＩＦＮｇ）濃度の変化を示すグラフである。 各種糖脂質をマウスに静脈内投与した後の、表示時間経過後におけるマウス血漿中のＩＬ－４濃度の変化を示すグラフである。 ＥＡＥ評価系のスキームを示す図である。当該評価系を用いて、各種糖脂質でパルスした樹状細胞を投与したマウスのクリニカルスコアを測定する。 各種糖脂質でパルスした樹状細胞を投与した場合のＥＡＥ評価系におけるクリニカルスコアを示すグラフである。
　以下、本発明をその好適な実施形態に即して詳細に説明する。
　先ず、本明細書において使用する式中の記号の定義を説明する。
　Ｒ１は水素原子又は水酸基を示す。
　２個のＲ２は同一又は異なって、水素原子又は水酸基を示す。
　Ｒ３は炭素数８～１４の炭化水素基を示す。「炭素数８～１４の炭化水素基」とは、Ｃ８～１４アルキル基、Ｃ８～１４アルケニル基、Ｃ８～１４アルキニル基、Ｃ８～１４シクロアルキル基、Ｃ８～１４シクロアルケニル基、Ｃ８～１４のアリール基をも包含する概念であり、直鎖状、分岐状及び環状のいずれの形態であってもよく、また飽和炭化水素基でも不飽和炭化水素基でもよく、不飽和結合を分子内及び末端のいずれに有していても良い。中でも、Ｒ３としては、Ｃ８～１４アルキル基、Ｃ８～１４アルケニル基、及びＣ８～１４アルキニル基が好ましく、Ｃ１１～１３アルキル基が更に好ましい。Ｒ３としては、具体的には、例えば、－Ｃ１２Ｈ２５等が挙げられる。
　Ｒ４は炭素数１８～２４の炭化水素基を示す。「炭素数１８～２４の炭化水素基」とは、Ｃ１８～２４アルキル基、Ｃ１８～２４アルケニル基、Ｃ１８～２４アルキニル基、Ｃ１８～２４シクロアルキル基、Ｃ１８～２４シクロアルケニル基、Ｃ１８～２４アリール基をも包含する概念であり、直鎖状、分岐状及び環状のいずれの形態であってもよく、また飽和炭化水素基でも不飽和炭化水素基でもよく、不飽和結合を分子内及び末端のいずれに有していても良い。中でも、Ｒ４としては、Ｃ１９～２３アルキル基、Ｃ１９～２３アルケニル基、及びＣ１９～２３アルキニル基が好ましく、Ｃ２１～２３アルキル基が更に好ましい。Ｒ４としては、具体的には、例えば、－Ｃ２２Ｈ４５等が挙げられる。
　Ｒ３及びＲ４で示される炭化水素基としては直鎖状であることが好ましい。
　Ｒ３及びＲ４で示される炭化水素基は、それぞれ独立して置換基を有していても良い。Ｒ３及びＲ４で示される炭化水素基が置換基を有する場合、置換基としては、ハロゲン原子（好ましくは塩素原子、フッ素原子）；メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ等のアルコキシ基（好ましくは炭素数１～２４、より好ましくは炭素数１～１６、更に好ましくは炭素数１～１０、特に好ましくは炭素数１～４）；フェノキシ等のアリールオキシ基（好ましくは炭素数６～１４）；水酸基；アミノ基；メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ等のアルキルアミノ基；シクロアルキルアミノ基；アセトアミド等のアルキルカルボニルアミノ基；シクロアルキルカルボニルアミノ基；ベンゾイルアミノ等のアリールカルボニルアミノ基（好ましくは、アリール部分の炭素数が６～１４のアリール基である、炭素数７～１５のアリールカルボニルアミノ基）等の電子供与性基、更にはカルボキシル基；アルコキシカルボニル基；アシル基（アシル基としては後述の通りである。好ましくは炭素数２～２５のアシル基であり、より好ましくはアルキル部分が炭素数１～２４の直鎖又は分岐状のアルキル基である、アルキル－カルボニル基）；カルバモイル；トリフルオロメチル等の電子求引性基が例示される。置換基の位置及び数は特に限定されず、置換可能な位置に、１個～置換可能な最大数の置換基を有していても良い。置換基が１以上存在する場合には、それらは同一であっても異なっていても良い。
　Ｒ３及びＲ４で示される炭化水素基は好ましくは無置換である。
　Ｒ３としては、好ましくは無置換のＣ８～１４アルキル基、Ｃ８～１４アルケニル基又はＣ８～１４アルキニル基であり、より好ましくは無置換のＣ８～１４アルキル基である。
　Ｒ４としては、好ましくは無置換のＣ１８～２４アルキル基、Ｃ１８～２４アルケニル基又はＣ１８～２４アルキニル基であり、より好ましくは無置換のＣ１８～１４アルキル基である。
　本明細書において「アシル基」とは、例えば、ホルミル；炭素数２～２５のアシル基［アルキル－カルボニル基（例えば、アルキル部分が、炭素数１～２４（好ましくは炭素数１～１２）の直鎖若しくは分岐状のアルキル基である、アルキル－カルボニル基（例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ピバロイル、ヘキサノイル））；シクロアルキル－カルボニル基（例えば、シクロアルキル部分が、炭素数３～１０のシクロアルキル基である、シクロアルキル－カルボニル基）；アルケニル－カルボニル基（例えば、アルケニル部分が炭素数２～１２の直鎖若しくは分岐状のアルケニル基である、アルケニル－カルボニル基（例えば、アクリロイル、メタクリロイル））；アリール－カルボニル基（例えば、アリール部分が、炭素数６～１４のアリール基である、アリール－カルボニル基（例えば、ベンゾイル、ナフトイル））］等をいう。アリール－カルボニル基におけるアリール基とは、例えば、単環～３環式芳香族炭化水素基を示し、具体的に例えば、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリルが例示される。中でも、アシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、ナフトイル等が好ましく、アセチル、ベンゾイルがより好ましい。
　上記アルキルアミノ基、アルキルカルボニルアミノ基のアルキル部分としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等の直鎖又は分岐状のアルキル基（好ましくは炭素数１～２４、より好ましくは炭素数１～１６、更に好ましくは炭素数１～１０、特に好ましくは炭素数１～４）が例示される。
　上記シクロアルキルアミノ基、シクロアルキルカルボニルアミノ基のシクロアルキル部分としては、シクロペンチル、シクロヘキシル等のシクロアルキル基（好ましくは炭素数３～２４、より好ましくは炭素数３～１６、更に好ましくは炭素数３～１０、特に好ましくは炭素数３～６）が例示される。
　上記アルコキシカルボニル基のアルコキシ部分としては上記アルコキシ基と同様のものが例示される。
　上記した置換基は、置換可能な位置に、更に、ハロゲン、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、フェニル基、アルコキシ基、水酸基、アミノ基、アルキルアミノ基及びシクロアルキルアミノ基のうちの少なくとも１種で置換されていても良い。
　該ハロゲン、アルコキシ基、アルキルアミノ基、シクロアルキルアミノ基としては上記と同様のものが例示される。
　該アルキル基としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等のアルキル基（好ましくは炭素数１～２４、より好ましくは炭素数１～１６、更に好ましくは炭素数１～１０、特に好ましくは炭素数１～４）が例示される。
　該シクロアルキル基としては、シクロペンチル、シクロヘキシル等のシクロアルキル基（好ましくは炭素数３～２４、より好ましくは炭素数３～１６、更に好ましくは炭素数３～１０、特に好ましくは炭素数３～６）が例示される。
　該アルケニル基としては、ビニル、プロペニル、ブテニル等のアルケニル基（好ましくは炭素数２～２４、より好ましくは炭素数２～１６、更に好ましくは炭素数２～１０、特に好ましくは炭素数２～４）が例示される。
　該アルキニル基としては、エチニル、プロパルギル、ブチニル、ペンチニル等のアルキニル基（好ましくは炭素数２～２４、より好ましくは炭素数２～１６、更に好ましくは炭素数２～１０、特に好ましくは炭素数２～４）が例示される。
　本発明においては、糖（ガラクトピラノース）の環状構造に由来する立体異性体の中でα－体を採用する。
　化合物（Ｉ）が糖の環状構造以外のアグリコン部分の構造（例えば、糖の環状構造以外のアグリコン部分の不斉炭素等）に由来する立体異性体を有する場合には、いずれの異性体も本発明に包含され、２種以上の異性体の任意の割合の混合物（ラセミ体を含む）であっても良い。
　特に、化合物（Ｉ）には、糖の環状構造以外のアグリコン部分の不斉炭素に由来する光学異性体が存在するが、本発明においては、単一の光学活性体であっても、２種以上の光学活性体の任意の割合の混合物（ラセミ体を含む）であっても良い。
　化合物（Ｉ）の塩としては、薬学的に許容され得る塩が好ましく、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；コハク酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩等の有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩等のアンモニウム塩等を挙げることができる。
　本発明における好適な化合物（Ｉ）の具体例は以下の通りであるが、これらに限定されるものではない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　より好ましくは、ＲＣＡＩ－１４７及びＲＣＡＩ－１６０である。
　次に、本発明の化合物（Ｉ）の製造方法について説明する。
　化合物（Ｉ）は下記スキームに記載の方法又はこれに準ずる方法に従って製造することが可能であるが、これらに限定されるものではなく、所望に応じて適宜修飾できる。かかる修飾としては、アルキル化、アシル化、アミノ化、イミノ化、ハロゲン化、還元、酸化等が挙げられ、通常当分野で用いられる反応又は方法が利用される。その際、官能基の種類によっては、当該官能基を原料もしくは中間体の段階で適当な保護基（容易に当該官能基に転化可能な基）に置き換えておくことが製造技術上効果的な場合がある。保護基の化学的特性、その導入の手法、及びその除去は例えばT. Greene and P. Wuts “ProtectiveGroups in Organic Synthesis” (3rded.), John Wiley & Sons NY (1999)に詳述されている。
　特に、本発明においては、水酸基の保護基が用いられる。該保護基は所望する反応に応じて適宜選択される。水酸基の保護基としては、ベンジル、４－メトキシベンジル（即ち、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ））、メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ又はＴＢＤＭＳ）、ｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔ－ブトキシカルボニル、トリクロロエトキシカルボニル、アセチル、ピバロイル等が挙げられる。
　隣接水酸基は、アセタール、シリルアセタールとして保護してもよい。
　原料化合物は、特に述べない限り、市販されているものを容易に入手できるか、あるいは、自体公知の方法又はこれらに準ずる方法に従って製造することができる。
　又、各反応および原料化合物合成の各反応において、反応中に一般的に知られる溶媒を用いる場合がある。一般的に知られる溶媒としては、例えば、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；ギ酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、ｎ－ブタノール、イソブタノール、ｔ－ブタノール、イソアミルアルコール、ジエチレングリコール、グリセリン、オクタノール、シクロヘキサノール、メチルセロソルブ、のようなアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；ニトロエタン、ニトロベンゼンのようなニトロ化合物類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；ジメチルスルホキシドのようなスルホキシド類およびこれらと水との混合溶媒が挙げられる。
　又、反応において用いられる溶媒は、単一の溶媒を用いる場合も、２種類から６種類の溶媒を混合して用いる場合もある。
　又、反応において、例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミン、ピリジン、Ｎ－メチルモルホリン等のアミン類や水酸化ナトリウムや炭酸カリウム等の塩基を共存させて行なう場合がある。
　又、反応において、例えば、塩酸、硫酸、酢酸等の酸を共存させて行なう場合がある。
　本発明化合物の合成スキームを以下に示す（詳細な反応は実施例に準じる）。尚、スキーム中、具体的な基、化合物で記載されている場合があるが、代替可能な基、化合物が用いられ得ることは当業者には明らかである。
スキーム１
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
（各式中、ＴＢＤＭＳはｔ－ブチルジメチルシリル基を示し、Ｍｓはメシル基を示し、Ｒ３’は炭素数が２個少ないＲ３であり、その他の記号は前述と同義を示す。）
［工程ａ］
　工程ａは、化合物１の二重結合に水酸基を導入し化合物２を得る工程である（ジオール化）。具体的には化合物１を溶媒中、酸の存在下、触媒量の四酸化オスミウムとＮ－メチルモルホリン　Ｎ－オキシド等の酸化剤と反応させる。酸としては、トリフルオロ酢酸、ｐ－トルエンスルホン酸、塩酸等の強酸が使用され得るが、好ましくはｐ－トルエンスルホン酸である。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくはアセトンと水との混合溶媒である。
　酸化剤の使用量は、化合物１に対し、通常１～１０当量である。酸の使用量は、化合物１に対し、通常１～１０当量である。溶媒の使用量は、化合物１に対して通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常０℃～室温であり、反応時間は通常１～２４時間である。
　化合物１は、文献既知の手法（Tetrahedron, 63, 4310-4318 (2007)）により合成することができる。
［工程ｂ］
　工程ｂは、化合物２の水酸基を保護し化合物３を得る工程である。具体的には化合物２を塩基の存在下、溶媒中で保護化試薬と反応させる。塩基としてはピリジン、２，６－ルチジン、トリエチルアミン等のアミノ化合物が挙げられるが、好ましくは２，６－ルチジンである。保護化試薬としては、有機ケイ素試薬が好適であり、トリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳＯＴｆ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド等が挙げられるが、好ましくはＴＢＤＭＳＯＴｆである。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくは塩化メチレンである。
　塩基の使用量は、化合物２に対し、通常１～１０当量である。保護試薬の使用量は、化合物２の水酸基１個当り、通常１～５当量である。溶媒の使用量は、化合物２に対して通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常０℃～室温であり、反応時間は通常１～２４時間である。
［工程ｃ］
　工程ｃは、化合物３のケトンを還元し化合物４を得る工程である。具体的には、化合物３を、溶媒中で還元剤と反応させる。還元剤としては、水素化リチウムアルミニウム（ＬｉＡｌＨ４）、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）、ジイソブチルアルミニウムハイドライド（ＤＩＢＡＨ）等が挙げられるが、好ましくはＤＩＢＡＨである。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくはトルエンである。
　還元剤の使用量は、化合物３に対し、通常１～１０当量である。溶媒の使用量は、化合物３に対して通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常－７８℃～室温であり、反応時間は通常０．１～２４時間である。
［工程ｄ］
　工程ｄは、化合物４の環を開裂し、炭化水素基を導入して化合物５を得る工程である。具体的には、例えば導入する炭化水素基がアルキル基である場合には、化合物４を、アルキル－トリフェニルホスホニウムハライド（好ましくはブロミド）と塩基［例えばリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＮ（ＴＭＳ）２）］と反応させ、得られるホスホランとＷｉｔｔｉｇ反応させることにより化合物５が得られる。ハロゲン化された炭化水素基は、導入する炭化水素基に応じて適宜選択することができる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくはＴＨＦである。
　アルキル－トリフェニルホスホニウムハライドの使用量は、化合物４に対し、通常２～４当量である。溶媒の使用量は、化合物４に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常－７８℃～室温、反応時間は、通常０．１～２４時間である。
［工程ｅ］
　工程ｅは、化合物５の水酸基をメシル化して化合物６を得る工程である。具体的には、化合物５を、溶媒中、塩基の存在下、メシル化剤と反応させる。塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、ジメチルアミノピリジン等が挙げられるが、好ましくはピリジンである。メシル化剤としては、メタンスルホン酸無水物、塩化メタンスルホニル、フッ化メタンスルホニル等が挙げられるが、好ましくはメタンスルホン酸無水物である。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくは塩化メチレンである。
　塩基の使用量は、化合物５に対し、通常触媒量～５当量である。メシル化剤の使用量は、化合物５に対し、通常１～１０当量である。溶媒の使用量は、化合物５に対して通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常０℃～室温であり、反応時間は通常０．１～２４時間である。
［工程ｆ］
　工程ｆは、化合物６の水酸基の一部を脱保護し化合物７を得る工程である。脱保護方法は、保護基の種類により公知の方法から選択されるが、例えば保護基がＴＢＤＭＳ基の場合はＣ１位一級のＴＢＤＭＳ基のみを選択的に脱保護する必要があり強酸は使用できないので、溶媒中で化合物６をフッ化水素－ピリジン又はテトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）を使用する。好ましくはフッ化水素－ピリジンである。溶媒としてはテトラヒドロフランとピリジンの混合溶媒が好ましい。
　フッ化水素－ピリジンの使用量は、化合物６に対し、通常触媒量～１０当量、好ましくは１～２当量である。テトラブチルアンモニウムフルオリドの使用量は、化合物６に対し、通常２当量～２０当量である。溶媒の使用量は、化合物６に対し、通常１～１００倍容量である。
　反応温度は通常－２０～６０℃であり、反応時間は通常１～２４時間である。
［工程ｇ］
　工程ｇは、化合物７中の二重結合を還元し化合物８を得る工程である。具体的には、化合物７を溶媒中で水素及び還元触媒の存在下に反応させる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくはヘキサン、酢酸エチルである。還元触媒としては、パラジウム－炭素、水酸化パラジウム、水酸化パラジウム－活性炭、酸化白金、ラネーニッケル等が挙げられるが、好ましくはパラジウム－炭素である。
　溶媒の使用量は、化合物７に対して通常１０～１００倍容量である。還元触媒の使用量は、化合物７に対して通常触媒量で十分である。
　反応温度は通常０℃～室温であり、反応時間は通常０．１～２４時間である。
［工程ｈ］
　工程ｈは、化合物８中のメタンスルホニルオキシ基（ＯＭｓ）をアジド化してＮ３に変換することにより化合物９を得る工程である。アジド化には通常アジ化ナトリウムが用いられ、その使用量は、化合物８に対して通常５～２０当量である。
スキーム２
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
（各式中、Ｒ４’は炭素数が１個多いＲ４であり、Ｒ４”は炭素数が２個少ないＲ４であり、Ｒ４は前述と同義を示す。）
［工程ａ］
　工程ａは、化合物１０をイソプロピリデン化反応に付し化合物１１を得る工程である。イソプロピリデン化反応は、溶媒中、化合物１０を２，２－ジメトキシプロパンと反応させることで行なう。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくはＤＭＦである。
　当該反応は、酸触媒の存在下で行なってもよい。酸触媒としては、塩酸、硫酸等の無機酸、又はメタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸等の有機酸、又はイオン交換樹脂（Ｈ＋型）が挙げられる。
　２，２－ジメトキシプロパンの使用量は、化合物１０に対して通常１～１０当量である。酸触媒の使用量は、化合物１０に対して通常０．０１～１当量である。溶媒の使用量は、化合物１０に対して通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常室温～１００℃である。反応時間は通常０．５～２４時間である。
　化合物１０は、文献既知の手法により合成することもできるし、商業的に入手可能である。
［工程ｂ］
　工程ｂは、化合物１１の環を開裂し、炭化水素基を導入して化合物１２を得る工程である。具体的には、例えば導入する炭化水素基がアルキル基である場合には、化合物１１を、アルキル－トリフェニルホスホニウムハライド（好ましくはブロミド）と塩基［例えばリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＮ（ＴＭＳ）２）］と反応させ得られるホスホランとＷｉｔｔｉｇ反応させることにより化合物１２が得られる。ハロゲン化された炭化水素基は、導入する炭化水素基に応じて適宜選択することができる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくはＴＨＦである。
　アルキル－トリフェニルホスホニウムハライドの使用量は、化合物１１に対し、通常２～４当量である。溶媒の使用量は、化合物１１に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常－７８℃～室温、反応時間は、通常１～２４時間である。
［工程ｃ］
　工程ｃは、化合物１２中の二重結合を還元し化合物１３を得る工程である。本工程はスキーム１の工程ｇと同様にして行なうことができる。
［工程ｄ］
　工程ｄは、化合物１３の水酸基をカルボキシル基に酸化して化合物１４を得る工程である。具体的には化合物１３を溶媒中過剰の過ヨウ素酸ナトリウムの存在下触媒量の酸化剤と反応させる。酸化剤としては、四酸化ルテニウム、二酸化ルテニウム、三塩化ルテニウムおよびそれらの水和物、ルテニウム－ホスフィン錯体、ルテニウム－一酸化炭素錯体などのルテニウム化合物が挙げられ、好ましくは三塩化ルテニウムおよびそれらの水和物である。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくは四塩化炭素、アセトニトリル及び水の混合溶媒である。
　酸化剤の使用量は、化合物１３に対し、通常触媒量～１当量である。溶媒の使用量は化合物１３に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常０℃～室温であり、反応時間は通常０．１～２４時間である。
スキーム３
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
（各式中、各記号の定義は前述と同義を示す。）
［工程ａ］
　工程ａは、化合物１５と化合物９とを、溶媒中、モレキュラーシーブの存在下、触媒としてトリメチルシリル　トリフルオロメタンスルホネート、又は銀トリフルオロメタンスルホネートを使用し、反応させることにより化合物１６を得る工程である。原料化合物１５は、文献既知の手法（Carbohydr. Res. 345, 1663-1684 (2010)）により合成することができる。
　化合物１５は、化合物９との反応の前に、イミデート体に変換しておくことが必要である。
　化合物１５の使用量は、化合物９に対して、通常０．１～１０当量である。トリフルオロメタンスルホネートの使用量は、化合物１５に対して、通常０．０１～３当量である。モレキュラーシーブの使用量は、化合物１５　１ｍｍｏｌに対して、通常１～２ｇである。溶媒の使用量は、化合物１５に対して、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常０℃～室温であり、反応時間は通常０．１～２４時間である。
［工程ｂ］
　工程ｂは、化合物１６のアジド基をアミノ基に還元して化合物１７を得る工程である。具体的には化合物１６を溶媒中、還元剤と反応させる。還元剤としては、トリメチルホスフィン、トリブチルホスフィン、トリフェニルホスフィン、水素およびパラジウム－炭素、パラジウムブラック、水酸化パラジウム、酸化白金などのような接触水素還元触媒等が挙げられる。好ましくはＴＨＦ中トリメチルホスフィンでイミノホスホラン（－Ｎ＝ＰＭｅ３）にし、このＰ＝Ｎ二重結合を水酸化ナトリウム水溶液で加水分解しアミン１７にする反応である。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよく、メタノール、エタノール、ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＦ、水またはこれらの有機溶媒と水との混合溶媒などが挙げられるが、好ましくはＴＨＦである。
　還元剤の使用量は、化合物１６に対し、通常１～１０当量である。溶媒の使用量は化合物１６に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常１０～３０℃であり、反応時間は通常０．５～８時間である。
［工程ｃ］
　工程ｃは、化合物１７のアミンと化合物１４のカルボン酸とを脱水縮合して化合物１８を得る工程である。具体的には化合物１７を溶媒中、縮合剤の存在下、化合物１４と反応させる。必要に応じて１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）やＤＭＡＰを加える。
　縮合剤としては、水溶性のカルボジイミド、特に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩が好ましく用いられる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいがＴＨＦや塩化メチレンである。好ましくはＴＨＦと塩化メチレンの混合溶媒である。
　化合物１４の使用量は化合物１７に対し、通常１～５当量である。縮合剤の使用量は化合物１７に対し、通常１～２０当量である。ＨＯＢｔやＤＭＡＰを加える場合には、その使用量は化合物１７に対し、通常５～２０当量である。溶媒の使用量は化合物１７に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常１０～３０℃であり、反応時間は通常０．５～２４時間である。
［工程ｄ］
　工程ｄは、化合物１８の水酸基の保護基を脱保護して化合物１９を得る工程である。脱保護方法は、保護基の種類により公知の方法から選択されるが、例えば保護基がＰＭＢ基の場合は、化合物１８を溶媒中、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）等の酸化剤である脱保護剤と反応させる。溶媒としては、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類と水との混合溶媒が好ましく用いられる。
　脱保護剤の使用量は、化合物１８に対し、通常１～１０当量である。溶媒の使用量は化合物１８に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常－２０℃～１００℃であり、反応時間は通常０．５～２０時間である。
［工程ｅ］
　工程ｅは、化合物１９の水酸基の保護基を脱保護して化合物２０を得る工程である。脱保護方法は、保護基の種類により公知の方法から選択されるが、例えば保護基が、糖構造上の２つの水酸基にわたって、ジ－（ｔ－ブチル）－シリレン基（ＤＴＢＳ基）等のシリルアセタール構造の保護基を環状に形成したものである場合には、化合物１９を溶媒中、ＨＦ－ピリジン、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、フッ化水素酸（ＨＦ）、フッ化セシウム（ＣｓＦ）等の脱保護剤と反応させる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、好ましくはＴＨＦ、ピリジン又はＴＨＦとピリジンの混合溶媒である。
　脱保護剤の使用量は、化合物１９に対し、通常０．５～２０当量である。溶媒の使用量は化合物１９に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常１０℃～室温であり、反応時間は通常１～５時間である。
［工程ｆ］
　工程ｆは、化合物２０において水酸基の保護基としてのイソプロピリデン基とＴＢＤＭＳ基を脱保護して化合物２１を得る工程である。具体的には、化合物２０を溶媒中、フッ化水素酸（ＨＦ）、塩酸、ｐ－トルエンスルホン酸，酢酸水、等の脱保護剤と反応させる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよいが、塩化メチレンとアセトニトリルの混合溶媒が好ましく用いられる。
　脱保護剤の使用量は、化合物２０に対し、通常０．５～２０当量である。溶媒の使用量は化合物２０に対し、通常５０～５００倍容量である。
　反応温度は通常１０℃～室温であり、反応時間は通常０．１～２４時間である。
スキーム４
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
（各式中、Ｒ３”は炭素数が２個多いＲ３であり、Ｒ３は前述と同義を示す。）
［工程ａ］
　工程ａは、化合物２２のアミンと化合物１４のカルボン酸とを脱水縮合して化合物２３を得る工程である。本工程は化合物１７の代わりに化合物２２を用いること以外は、スキーム３の工程ｃと同様にして行なうことができる。原料化合物２２は、文献既知の手法（Bioorg. & Med. Chem. 2008, 16, 8896-8906）により合成することができる。
［工程ｂ］
　工程ｂは、化合物２３の水酸基の保護基を脱保護して化合物２４を得る工程である。脱保護方法は保護基の種類により公知の方法から選択されるが、例えば、ベンジル基の場合は、化合物２３を溶媒中で水素及び還元触媒の存在下に反応させる。還元触媒としては、水酸化パラジウム、水酸化パラジウム－活性炭、酸化白金、ラネーニッケル等が挙げられる。溶媒としてはメタノール、エタノール、クロロホルム、酢酸エチル、酢酸、ＴＨＦが好ましく用いられる。
　還元触媒の使用量は、化合物２３に対して通常触媒量で十分である。溶媒の使用量は、化合物２３に対して通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常室温であり、反応時間は通常１～２４時間である。
［工程ｃ］
　工程ｃは、化合物２４において水酸基の保護基としてのイソプロピリデン基とＴＢＤＭＳ基を脱保護して化合物２５を得る工程である。本工程はスキーム３の工程ｆと同様にして行なうことができる。
スキーム５
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
（各式中、各記号の定義は前述と同義を示す。）
［工程ａ］
　工程ａは、化合物２６の環を開裂し、炭化水素基を導入して化合物２７を得る工程である。具体的には、例えば導入する炭化水素基がアルキル基である場合には、化合物２６を、アルキル－トリフェニルホスホニウムハライド（好ましくはブロミド）と塩基［例えばｎ－ブチルリチウム（ｎ－ＢｕＬｉ）］と反応させ得られるホスホランとＷｉｔｔｉｇ反応させることにより化合物２７が得られる。ハロゲン化された炭化水素基は、導入する炭化水素基に応じて適宜選択することができる。溶媒としては、本反応を阻害しない溶媒であればいずれを使用してもよい。
　アルキル－トリフェニルホスホニウムハライドの使用量は、化合物２６に対し、通常２～４当量である。溶媒の使用量は、化合物２６に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常－７８℃～室温、反応時間は、通常０．１～２４時間である。
　原料化合物２６は、文献既知の手法により合成することもできる。
［工程ｂ］
　工程ｂは、化合物２７中の二重結合を還元し化合物２８を得る工程である。本工程はスキーム１の工程ｇと同様にして行なうことができる。
［工程ｃ］
　工程ｃは、化合物２８の水酸基を保護し化合物２９を得る工程である。本工程はスキーム１の工程ｂと同様にして行なうことができる。
［工程ｄ］
　工程ｄは、化合物２９のＣ１位水酸基を選択的に脱保護し、化合物３０を得る工程である。具体的には化合物２９を溶媒中、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、フッ化水素酸（ＨＦ）－ピリジン、フッ化セシウム（ＣｓＦ）等の脱保護剤と反応させる。脱保護剤は好ましくはＨＦ－ピリジンである。溶媒としては、ピリジンとＴＨＦの混合溶媒が好ましく用いられる。
　脱保護剤の使用量は、化合物２９に対し、通常０．５～２０当量である。溶媒の使用量は化合物２９に対し、通常１０～１００倍容量である。
　反応温度は通常１０℃～室温であり、反応時間は通常０．１～２４時間である。
　反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製することで原料化合物である化合物２９、ならびに化合物３０及び化合物３１を単離することができる。
［工程ｅ］
　工程ｅは、化合物３０の水酸基をカルボキシル基に酸化して化合物３２を得る工程である。本工程はスキーム２の工程ｄと同様にして行なうことができる。
スキーム６
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
（各式中、各記号の定義は前述と同義を示す。）
［工程ａ］
　工程ａは、化合物２２のアミンと化合物３２のカルボン酸とを脱水縮合して化合物３３を得る工程である。本工程はスキーム４の工程ａと同様にして行なうことができる。
［工程ｂ］
　工程ｂは、化合物３３の水酸基の保護基を脱保護して化合物３４を得る工程である。本工程はスキーム４の工程ｂと同様にして行なうことができる。
［工程ｃ］
　工程ｃは、化合物３４において水酸基の保護基としてのイソプロピリデン基とＴＢＤＭＳ基を脱保護して化合物３５を得る工程である。本工程はスキーム４の工程ｃと同様にして行なうことができる。
　本発明に係る式（Ｉ）で表される化合物（化合物（１）、以下、本発明の水酸化糖脂質とも称する）を投与することにより、ＮＫＴ細胞を活性化してＴｈ２型サイトカインを選択的、優先的に誘導することが可能となる。
　本発明の水酸化糖脂質でヒト樹状細胞をパルスし、該樹状細胞を対象に投与することにより、より強力なＴｈ２型サイトカイン産生誘導作用を得ることができる。ここで使用されるヒト樹状細胞は、本発明の水酸化糖脂質を介してＮＫＴ細胞を活性化し得るヒト由来の樹状細胞（ｈＤＣ）であれば特に制限はなく、ミエロイド系の樹状細胞（ＤＣ１）、リンパ系の樹状細胞（ＤＣ２）のいずれであってもよいが、好ましくはＤＣ１である。ｈＤＣは自体公知のいかなる方法によって調製されてもよく、ヒトの表皮、リンパ系組織のＴ細胞領域、末梢非リンパ系組織、輸入リンパ、真皮などから分離することもできるが、好ましくは、例えば、ヒト末梢血等から密度勾配遠心法などにより単球、骨髄球などを分離し、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４存在下で約７～約１０日間培養して、調製することができる。
　本発明の水酸化糖脂質によるｈＤＣのパルスは周知慣用の手法により行えばよく、例えば、本発明の糖脂質を約１００～約２００ｎｇ／ｍｌの濃度で含有する培地（例えば、ＲＰＭＩ－１６４０培地等）中で、ｈＤＣを約１２～約４８時間培養することにより実施することができる。当該パルスは、上記未成熟のｈＤＣをＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４存在下で単球より培養・成熟させる過程で、培地に本発明の糖脂質を添加することにより行ってもよい。
　ＮＫＴ細胞の活性化の有無およびその程度は、自体公知のいかなる方法によっても測定することができるが、例えば、活性化したＮＫＴ細胞が産生するサイトカインの量を指標として、ＮＫＴ細胞の活性化を評価することができる。活性化したＮＫＴ細胞が産生するサイトカインとしては、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０等が挙げられるが、本発明の水酸化糖脂質は選択的にＴｈ２型サイトカイン（例、ＩＬ－４）の産生を誘導する。また本発明の水酸化糖脂質の好適な例は、サイトカインの分泌がＴｈ２型に偏っているのみならずＴｈ１型サイトカイン（例、ＩＦＮ－γ）の産生を促進しない。
　ＮＫＴ細胞におけるサイトカインの産生は、例えば、該サイトカインに対する抗体を用いて測定することができる。例えば、細胞培養上清を用いてＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、ＦＩＡ法、ＥＩＡ法などの慣用のイムノアッセイによりＮＫＴ細胞の活性化を評価することもできるが、好ましい一実施態様においては、抗サイトカイン抗体を固定化した固相にＮＫＴ細胞含有試料を接触させ、固液分離後に固相に結合したサイトカインを、標識した抗サイトカイン抗体を用いてサンドイッチ法により検出・計数する方法が用いられる。標識剤としては酵素、蛍光物質、発光物質、色素、放射性同位元素などが挙げられる。ビオチン化した抗サイトカイン抗体と標識剤を結合した（ストレプト）アビジンとを用いてもよい。標識剤としてアルカリフォスファターゼ等の酵素を用いたアッセイ系は、ＥＬＩＳＰＯＴの名で、サイトカイン産生細胞の検出用として知られている。
　本発明の水酸化糖脂質により予防又は治療可能な疾患としては、ＩＬ－４の産生増大によって直接的または間接的に予防又は治療的効果が期待されるものであれば特に限定はなく、例えば、哺乳動物（例えば、マウス、ネコ、ウシ、イヌ、ウマ、ヤギ、サル、ヒト）の自己免疫疾患やアレルギー等が挙げられる。自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス、慢性リウマチ関節炎、１型及び２型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ぶどう膜炎、多発性硬化症、並びにクローン病、潰瘍性大腸炎、水泡性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、魚鱗癬、グレーブス眼疾患、及び喘息等が挙げられる。さらに臓器移植での拒絶反応などの過剰な免疫応答を抑制し得ることから、免疫抑制剤としての使用することもできる。
　また、本発明の水酸化糖脂質は、その薬効を損なわない限り、他の薬剤、例えば、既存の自己免疫疾患治療薬や抗アレルギー剤、免疫抑制剤等と併用することができる。この際、投与時期は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、本発明の水酸化糖脂質と併用薬の配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組み合わせ等に応じて適宜選択することができる。
　既存の自己免疫疾患治療薬及び／又は免疫抑制剤としては、例えば、プレドニゾロンなどのステロイド剤、金チオリンゴ酸ナトリウム、オーラノフィンなどの金製剤、Ｄ－ペニシラミン、ブシラミンなどのＳＨ製剤、サラゾスルファピリジン、アクタリット、ロペンザリットナトリウム等が挙げられる。また、ミゾリピン、メソトレキサート、シクロホスファミド、アザチオプリン、ＦＫ－５０６、レフルマノイドなどの免疫抑制剤、抗ＴＮＦ－α抗体、可溶性ＴＮＦ－αレセプター、抗ＩＬ－６抗体、ＩＬ－６レセプター抗体などの抗サイトカイン療法剤などが挙げられる。
　抗アレルギー剤としては、例えば、アステミゾール、アンレキサノクス、イブジラスト、エバスチン、塩酸アゼラスチン、塩酸エピナスチン、塩酸オザグレル、塩酸セチリジン、オキサトミド、クロモグリク酸ナトリウム、セラトロダスト、タザノラスト、テルフェナジン、トシル酸スプラタスト、トラニラスト、フマル酸エメダスチン、フマル酸ケトチフェン、プランルカスト水和物、ペミロラストカリウム、レピリナスト等、又はそれらの誘導体等が挙げられる。
　本発明の水酸化糖脂質をヒトに投与する場合、それ自体又はそれを薬理学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤等と混合し、経口投与剤（例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤）、非経口投与剤（例えば、注射剤）、坐剤（例えば、直腸坐剤、膣坐剤）等の医薬組成物として経口的又は非経口的に安全に投与することができる。これらの製剤は、従来公知の方法により製造することができる。
　注射剤としては、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射又は点滴剤等が挙げられる。注射剤は、本発明の糖脂質を可溶化剤（例えば、β－シクロデキストリン類）、分散剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム）、保存剤（例，メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール、クロロブタノール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、ソルビトール、ブドウ糖）等とともに常法にしたがって水性注射剤にすることもできる。また、植物油（例えば、オリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、綿実油、コーン油）、プロピレングリコール等に溶解、懸濁又は乳化して油性注射剤にすることもできる。
　経口投与剤は、本発明の水酸化糖脂質に、例えば、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、デンプン）、崩壊剤（例えば、デンプン、炭酸カルシウム）、結合剤（例えば、デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース）又は滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール）等を適宜添加して圧縮成形し、次いで必要に応じてヒドロキシプロピルメチルセルロース等のコーティングを施すことにより製造することもできる。坐剤は、化合物（１）等と、非刺激性の賦形剤（例えば、ポリエチレングリコール、高級脂肪酸のグリセライド）とを混合して製造することができる。
　本発明の水酸化糖脂質の投与量は、年齢、体重、症状、剤形、投与方法、投与期間などにより異なるが、例えば、患者（成人、体重約６０ｋｇ）一人あたり、通常、１日０．１～１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５～１ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．８～１ｍｇ／ｋｇを１回から数回に分けて経口又は非経口投与される。
　Ｔｈ２型サイトカイン産生を誘導する為に、本発明の水酸化糖脂質で樹状細胞をパルスし、該樹状細胞を患者に投与することもできる。従って、本願発明は、本発明の水酸化糖脂質をパルスした樹状細胞を含有する選択的Ｔｈ２型サイトカイン産生誘導剤（特にＩＬ－４産生誘導剤）を提供する。
　該剤は、常套手段にしたがって、本発明の水酸化糖脂質でパルスした有効量の上記ｈＤＣを医薬として許容される担体と混合するなどして、経口／非経口製剤として製造することができる。該剤は、通常は、注射剤、懸濁剤、点滴剤等の非経口製剤として製造される。当該非経口製剤に含まれ得る医薬上許容される担体としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムなど）などの注射用の水性液を挙げることができる。本発明の剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤、酸化防止剤などと配合しても良い。該剤を水性懸濁液剤として製剤化する場合、上記水性液に約５×１０６～約１×１０７細胞／ｍｌとなるように、本発明の水酸化糖脂質でパルスしたｈＤＣを懸濁させればよい。このようにして得られる製剤は、安定で低毒性であるので、ヒトに対して安全に投与することができる。投与対象はｈＤＣの由来する患者本人であること（即ち、自家移植）が好ましいが、投与されるｈＤＣに対して適合性があることが予測されるヒトであれば、これに限定されない。投与方法は特に限定されず、経口又は非経口的に投与することができるが、好ましくは注射もしくは点滴投与であり、静脈内投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、患部直接投与などが挙げられる。本発明の剤の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、通常、成人の患者（体重６０ｋｇとして）においては、例えば、非経口投与の場合、１回につきｈＤＣ量として約６×１０５～約１×１０７細胞を、約１～約２週間隔で、約４～約８回投与するのが好都合である。
　以下、本発明を実施例、試験例によって更に具体的に説明するが、本発明は以下に限定されるものではない。
実施例１：ＲＣＡＩ－１４７の合成および精製方法
スキーム１
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
工程ａ：（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ，７Ｒ）－７－［（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル］－５，６－Ｏ－イソプロピリデン－３，４－（ジヒドロキシ）オキセパン－２－オン［化合物（２）］の合成
　化合物（１）(3.00 g, 9.13 mmol)[C-W. Chang; Y-N. Chen; A. K. Adak; K-H. Lin; D-L. M. Tsou; C-C. Lin, Tetrahedron, 63, 4310-4318 (2007)]、４－メチルモルホリン　Ｎ－オキサイド(1.28 g, 11.0 mmol)とパラトルエンスルフォン酸(2.07 g, 10.9 mmol)のアセトン－Ｈ２Ｏ(4:1, 150 mL)の溶液に四酸化オスミウム(t-BuOH 1%溶液, 30 mL)を０℃で加え、１６時間室温で撹拌した。反応溶液は２５℃で半量減圧濃縮した。酢酸エチル(500 mL)で希釈し飽和食塩水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（４：１、更に２：１）で溶出すると化合物（２）(2.10 g, 63%)が得られた。
mp 107-108℃（綿状、室温不安定）．
IRνmax(KBr) 3390 (br), 3000-2858, 1725, 1472 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.089 (3H, s), 0.092 (3H, s), 0.90 (9H, s), 1.38 (3H, s), 1.50 (3H, s), 2.72 (1H, d, J 3.9 Hz, OH), 3.51 (1H, s, OH), 3.81 (1H, dd, J 9.3, 9.6 Hz), 3.94 (1H, dd, J 5.6, 9.5 Hz), 4.24 (1H, m, changed to dd, J 1.5, 3.9 Hz, on addition of D2O), 4.44 (1H, dd, J 4.3, 7.6 Hz), 4.52 (1H, bs, changed to doublet, J 1.5 Hz, on addition of D2O), 4.70 (1H, d, J 7.6 Hz), 4.85 (1H, dd, J 5.6, 9.3 Hz).
FABMS: m/z 363.2 [M+H]+.
HRFABMS: calcd for C16H31O7Si: 363.1839; observed: 363.1853.
工程ｂ：（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）－７－［（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル］－５，６－Ｏ－イソプロピリデン－３，４－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）オキセパン－２－オン［化合物（３）］の合成
　化合物（２）(580 mg, 1.60 mmol)の２，６－ルチジン(1.72 g, 16.0 mmol)を含有するＣＨ２Ｃｌ２(30 mL)溶液にターシャリーブチルジメチルシリル　トリフルオロメタンスルフォネート（ＴＢＤＭＳＯＴｆ）(2.54 g, 9.60 mmol)を加え、１６時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（９：１）で溶出すると化合物（３）(908 mg, 96%)が得られた。
IRνmax(KBr) 2990-2858, 1732, 1471, 1464 cm-1. 
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.07 (6H, s), 0.10 (3H, s), 0.11 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.14 (3H, s), 0.88 (9H, s), 0.89 (9H, s), 0.91 (9H, s), 1.36 (3H, s), 1.48 (3H, s), 3.80 (1H, dd, J 8.3, 9.8 Hz), 3.87 (1H, dd, J 6.2, 8.7 Hz), 3.88 (1H, d, J 6.4 Hz), 4.22 (1H, dd, J 6.4, 6.6 Hz), 4.49 (1H, d, J 1.0 Hz), 4.51 (1H, dd, J 1.0, 6.6 Hz), 5.14 (1H, dd, J 6.4, 8.3 Hz).
ESIMS: m/z 613.34 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C28H58O7Si3Na: 613.3383; observed: 613.3381.
工程ｃ：（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，７Ｒ）－７－［（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル］－５，６－Ｏ－イソプロピリデン－３，４－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）オキセパン－２－オール［化合物（４）］の合成
　化合物（３）(5.97 g, 10.1 mmol)のトルエン(180 mL)溶液にジイソブチルアルミニウムハイドライド（ＤＩＢＡＨ）(トルエン　1.0 M溶液， 10.8 mL, 10.8 mmol)をアルゴン気流下－７８℃で加えた。４５分間撹拌後ＭｅＯＨ(15 mL)を加え、更に３０分間－７８℃で撹拌し反応を終えた。室温で、酢酸エチルで希釈し水洗し有機層をセライトろ過した。硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に１４：１）で溶出すると油状の２：１アノマー混合物として化合物（４）(5.77 g, 96%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3440, 2954, 2930, 2887, 2858, 1748 (w), 1472, 1464, 1389, 1379, 1362, 1255 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.05-0.06 (6H, m), 0.10-0.14 (12H, m), 0.87-0.93 (27H, m), 1.33 (2/3H, s), 1.34 (1/3H, s), 1.56 (3H, s), 2.63 (2/3H, d, J 4.2 Hz, OH), 3.68-3.74 (3H, m), 3.92-3.97 (1H, m), 4.22 (2/3H, m), 4.26-4.37 (2H, m), 4.55 (1/3H, m), 4.88 (2/3H, dd, J 4.4, 6.8 Hz, changed to doublet, J 6.8 Hz, on addition of D2O), 5.06 (1/3H, m), 5.53 (1/3H, m, OH).
ESIMS: m/z 615.35 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C28H60O7Si3Na: 615.3539; observed: 615.3540. 
工程ｄ：（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－１，５，６－トリ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデンオクタデ－７－セン－２－オール［化合物（５）］の合成
　ｎ－Ｃ１１Ｈ２３Ｐ（Ｐｈ）３Ｂｒ(9.46 g, 19.0 mmol)のＴＨＦ(47 mL)溶液に化合物（４）(2.82 g, 4.76 mmol)のＴＨＦ(23 mL)溶液をアルゴン気流下－３０℃にて加え、更にＬｉＮ（ＴＭＳ）２(ＴＨＦ　1 M溶液，28 mL)を撹拌しながら加えた。５分後２０分かけて－１０℃まで昇温した。この温度で１５分撹拌した後、室温で３時間撹拌を続けＭｅＯＨ(4 mL)を０℃で加え更に酢酸エチルで希釈した。水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル(40:1)で溶出すると化合物（５）(1.88 g, 54%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3484, 2927, 2856 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.03 (3H, s), 0.05 (3H, s), 0.07 (6H, s), 0.08 (3H, s), 0.09 (3H, s), 0.87-0.91 (30H, m, containing 9H singlet and 18H singlet at 0.87 and 0.90 ppm, respectively), 1.26-1.40 (19H, m, containing 3H singlet at 1.32 ppm), 1.48 (3H, s), 1.98 (1H, m), 2.06 (1H, m), 2.23 (1H, d, J 6.1 Hz, OH), 3.58 (1H, d, J 1.7 Hz), 3.59 (1H, s), 3.71 (1H, q, J 6.1 Hz), 3.99 (1H, dd, J 6.5, 9.7 Hz), 4.14 (1H, d, J 6.4 Hz), 4.23 (1H, dd, J 2.7, 9.8 Hz), 4.27 (1H, dd, J 2.6, 8.4 Hz), 5.44-5.53 (2H, m).
ESIMS: m/z 753.5 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C39H82O6Si3Na: 753.5311; observed: 753.5314. 
工程ｅ：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－１，５，６－トリ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデン－２－メタンスルホニルオキシオクタデ－７－セン［化合物（６）］の合成
　化合物（５）(840 mg, 1.15 mmol)のＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)溶液にピリジン(4 mL)とメタンスルホン酸無水物(840 mg, 4.82 mmol)を加え、室温４５分間撹拌後、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。飽和重曹水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル(30:1)で溶出すると化合物（６）(719 mg, 77%)が得られた。
IRνmax(KBr) 2929, 2857, 1471, 1345, 1254, 1178 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.04 (3H, s), 0.088 (6H, s), 0.093 (3H, s), 0.10 (3H, s), 0.11 (3H, s), 0.88 (9H, s), 0.89 (3H, m), 0.90 (9H, s), 0.91 (9H, s), 1.25-1.40 (19H, m, containing 3H singlet at 1.30 ppm), 1.45 (3H, s), 1.99 (1H, m), 3.08 (3H, s), 3.84 (1H, dd, J 7.5, 10.0 Hz), 3.97-4.02 (2H, m), 4.21 (1H, dd, J 2.2, 9.7 Hz), 4.25 (1H, d, J 6.1 Hz), 4.31 (1H, dd, J 2.2, 8.5 Hz), 4.77 (1H, t, J 6.5 Hz), 5.44-5.53 (2H, m).
ESIMS: m/z 831.5 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C40H84O8Si3SNa: 831.5087; observed: 831.5088.
工程ｆ：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－５，６－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデン－２－メタンスルホニルオキシオクタデ－７－セン－１－オール［化合物（７）］の合成
　化合物（６）(128 mg, 0.158 mmol)とピリジン(1.0 mL)のＴＨＦ(1.7 mL)溶液にＨＦ・ピリジン(ＨＦ：～７０％；ピリジン：～３０％，0.34 mL)をアルゴン気流下０℃で加えた。５分後室温で５時間撹拌した。酢酸エチルで希釈し、飽和重曹水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル(9:1)で溶出すると化合物（７）(68 mg, 62%)が二重結合の（Ｅ，Ｚ）混合物として得られた。
IRνmax(KBr) 3540, 2927, 2856, 1466, 1342, 1253 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.05 (3H, s), 0.06 (3H, s), 0.07 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.88 (18H, s, and 3H, t, J 7.1 Hz), 1.25-1.40 (19H, m, containing 3H singlet at 1.33 ppm), 1.49 (3H, s), 2.02 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.87 (1H, dd, dd, J 4.7, 7.9 Hz), 3.16 (3H, s), 3.94-3.99 (2H, m), 4.08 (1H, dd J 6.1, 9.6 Hz), 4.17 (1H, dd J 4.8, 9.5 Hz), 4.25 (1H, dd J 1.3, 6.3 Hz), 4.32 (1H, dd J 4.6, 9.0 Hz), 5.00 (1H, t J 4.4 Hz), 5.40 (1H, m), 5.48 (1H, m).
ESIMS: m/z 717.4 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C34H70O8Si2SNa: 717.4222; observed: 717.4224.
工程ｇ：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－５，６－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデン－２－（メタンスルホニルオキシ）オクタデカン－１－オール［化合物（８）］の合成
　化合物（８）(68 mg, 0.10 mmol)の酢酸エチル(7 mL)の溶液に１０％　Ｐｄ炭素(50 mg)を加え、水素中、室温で１６時間撹拌した。触媒を濾去し減圧濃縮すると化合物（８）(68 mg, 定量的)が得られた。
IRνmax(KBr) 3526, 2928, 2856, 1517 (w), 1471, 1465, 1361, 1255, 1219, 1175 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.10 (6H, s), 0.12 (6H, s), 0.87-0.90 (21H, m, containing two 9H singlets at 0.88 and 0.90 ppm), 1.26 (18H, bs), 1.33 (3H, s), 1.38-1.49 (2H, m), 1.51 (3H, s), 1.73-1.77 (2H, m), 3.03 (1H, dd, J 3.0, 9.4 Hz, OH), 3.16 (3H, s), 3.65 (1H, m), 3.94 (1H, m), 4.00-4.07 (2H, m), 4.22 (1H, m), 4.30 (1H, d, J 6.4 Hz), 4.90 (1H, m).
ESIMS: m/z 719.4 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C34H72O8Si2SNa: 719.4379; observed: 719.4380. 
工程ｈ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－２－アジド－５，６－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデン－オクタデカン［化合物（９）］の合成
　化合物（８）(20 mg, 0.03 mmol)とＮａＮ３(20 mg, 0.31 mmol)のＤＭＦ(2 mL)溶液を１００℃で１４時間加熱撹拌した。そのまま減圧濃縮し酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル(9:1)で溶出すると化合物（９）(14 mg, 76%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3470, 2927, 2856, 2100, 1518 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.09 (3H, s), 0.11 (6H, s), 0.14 (3H, s), 0.87-0.92 (21H, m, containing two 9H singlets at 0.90 and 0.92 ppm), 1.26 (18H, bs), 1.32 (3H, s), 1.41 (2H, m), 1.47 (3H, s), 1.52-1.65 (2H, m), 2.03 (1H, t, J 6.1 Hz, OH), 3.66 (3H, m), 3.71 (1H, quintet, J 3.4 Hz), 3.92 (1H, m), 3.98-4.01 (2H, m), 4.08-4.12 (2H, m).
ESIMS: m/z 666.5 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C33H69N3O5Si2Na: 666.4668; observed: 666.4667. 
スキーム２
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
工程ａ：２－デオキシ－３，４－Ｏ－イソプロピリデン－Ｌ－リボース［化合物（１１）］の合成
　化合物（１０）(２－デオキシ－Ｌ－リボース， 5.29 g, 39.44 mmol)のＤＭＦ(40 mL)溶液に２，２－ジメトキシプロパン(6.16 g, 59.2 mmol)とアンバーリスト１５　イオン交換樹脂(395 mg)を加え、室温１８時間撹拌した。樹脂を除き減圧濃縮を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（３：２、更に２：３）で溶出するとアノマー位の４：１の混合物として化合物（１１）(3.41 g, 50%)が得られた。
多い方のアノマーの物理恒数：
IRνmax(KBr) 3534 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ1.35 (3H, s), 1.51 (3H, s), 1.79 (1H, m), 2.25 (1H, ddd, J 4.1, 4.4, 14.8 Hz), 2.69 (1H, d, J 3.9 Hz, OH), 3.70 (1H, dd, J 3,4, 12.7 Hz), 3.95 (1H, dd, J 3.4, 12.7 Hz), 4.17 (1H, m), 4.48 (1H, m), 5.27 (1H, m, changed to dd, J 4.3, 7.0 Hz, on addition of D2O).
EIMS: m/z 159.0 [M-Me]・+.
HREIMS: calcd for C7H11O4: 159.0657; observed: 159.0663. 
工程ｂ：（２Ｓ，３Ｒ）－２，３－Ｏ－イソプロピリデン－５－ヘキサコセン－１－オール［化合物（１２）］の合成
　ヘンイコシルトリフェニルホスホニウム　ブロミド；Ｃ２１Ｈ４３Ｐ（Ｐｈ）３Ｂｒ(5.62 g, 8.81 mmol)のＴＨＦ(19 mL)溶液にＬｉＮ（ＴＭＳ）２(ＴＨＦ　1 M溶液， 20.4 mL)を加え、アルゴン気流下１時間０℃で撹拌した。この赤色溶液に化合物（１１）(1.03 g, 5.91 mmol)のＴＨＦ(11 mL)溶液を０℃で加え、室温で２時間撹拌した後、飽和塩化アンモニア水で中和しＣＨＣｌ３で希釈した。水洗、１％過酸化水素水で洗い、更に水洗し硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に９：１、最後に４：１）で溶出するとアノマー位の混合物として化合物（１２）(1.35 g, 50%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3536, 2918, 2850, 1468 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.88 (3H, t, J 7.0 Hz), 1.25 (36H, m), 1.38 (3H, s), 1.49 (3H, s), 1.84 (1H, dd, J 5.4, 6.6 Hz), 2.04 (1H, m), 2.28 (1H, m), 2.38 (1H, m), 3.62-3.68 (2H, m), 4.15-4.23 (2H, m), 5.38 (1H, m), 5.52 (1H, m).
ESIMS: m/z 475.41 [M+Na] +.
HRESIMS: calcd for C29H56O3Na: 475.4127; observed: 475.4127. 
工程ｃ：（２Ｓ，３Ｒ）－２，３－Ｏ－（イソプロピリデン）ヘキサコサン－１－オール［化合物（１３）］の合成
　化合物（１２）(270 mg, 0.596 mmol)を化合物（７）から化合物（８）を合成したように還元し、更にカラムクロマト処理することにより化合物（１３）(246 mg, 91%)が得られた。尚、カラムクロマトグラフィーはヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に４：１）で溶出した。
IRνmax(KBr) 3458, 2924, 2848, 1468 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.88 (3H, t, J 7.0 Hz), 1.23-1.61 (50H, m, containing two 3H singlets at 1.37 and 1.48 ppm), 1.82 (1H, dd, J 4.9, 7.3 Hz, OH), 3.59-3.63 (2H, m), 4.13-4.17 (2H, m).
ESIMS: m/z 477.4 [M+Na] +. HRESIMS: calcd for C29H58O3Na: 477.4284; observed: 477.4298. 
工程ｄ：（２Ｒ，３Ｒ）－２，３－Ｏ－（イソプロピリデン）ヘキサコサン酸［化合物（１４）］の合成
　化合物（１３）(50 mg, 0.11 mmol)、ＮａＩＯ４(236 mg, 1.10 mmol)とＲｕＣｌ３・ｎ－Ｈ２Ｏ(3 mg)のＣＣｌ４－ＣＨ３ＣＮ－Ｈ２Ｏ(2:2:3, 7 mL)溶液を室温３時間撹拌した後、ＣＨＣｌ３で希釈し、水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（６：１、更に１：２）で溶出すると化合物（１４）(41 mg, 80%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3290-2560, 1728, 1469 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.88 (3H, t, J 7.0 Hz), 1.23-1.71 (50H, m, containing two 3H singlets at 1.40 and 1.61 ppm), 4.38 (1H, m), 4.55 (1H, d, J 7.3 Hz).
ESIMS: m/z 467.4 [M-H]-.
HRESIMS: calcd for C29H55O4: 467.4100; observed: 467.4107.
スキーム３
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
工程ａ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－２－アジド－５，６－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－（イソプロピリデン）オクタデシル　２，３－ジ－Ｏ－（４－メトキシベンジル）－４，６－Ｏ－（ジターシャリーブチル）シリレン－α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（１６）］の合成
（１）化合物（１５）(225 mg, 0.40 mmol)[M. Shiozaki; T. Tashiro; H. Koshino; R. Nakagawa; S. Inoue; T. Shigeura; H. Watarai; M. Taniguchi; K. Mori, Carbohydr. Res. 345, 1663-1684 (2010)]とトリクロロアセトニトリル(580 mg, 4.01 mmol)の脱水塩化メチレン(5 ml)溶液に炭酸セシウム(200 mg)を加え室温で一夜撹拌した。塩化メチレンで希釈し水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮し生成するイミデートを精製することなく次の反応に使用した。
（２）上記イミデートと化合物（９）(127 mg, 0.20 mmol)を脱水塩化メチレン(6 ml)に溶解しここに乾燥したモレキュラーシーブ４Å(640 mg)を加え、室温３０分撹拌した後、銀トリフルオロメタンスルホネート(ＡｇＯＴｆ， 60 mg)を加え０℃で６０分、室温で１．５時間撹拌した。反応物を濾過し塩化メチレンで洗浄して得られた溶液を、飽和重曹水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に９：１）で溶出すると化合物（１６）(184 mg, 78%)が得られた。
IRνmax(KBr) 2928, 2857, 2099, 1513 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.08 (6H, s), 0.09 (3H, s), 0.13 (3H, s), 0.86-0.89 (12H, m, containing 9H singlet at 0.88 ppm), 0.91 (9H, s), 0.99 (9H, s), 1.05 (9H, s), 1.25 (18H, bs), 1.29 (3H, s), 1.38-1.44 (5H, m, containing 3H singlet at 1.43 ppm), 1.54 -1.59 (2H, m), 3.61 (1H, s), 3.65 (1H, m), 3.68-3.70 (2H, m), 3.78-3.81 (7H, m, containing 6H singlet at 3.80 ppm), 3.94-3.98 (2H, m), 4.04-4.06 (2H, m), 4.09-4.13 (2H, m), 4.18 (1H, dd, J 2.0, 12.5 Hz), 4.43 (1H, d, J 3.7 Hz, galactose C4-H), 4.61, 4.74 (2H, AB-q, J 11.6 Hz), 4.63, 4.66 (2H, AB-q, J 11.7Hz), 4.75 (1H, d, J 3.4 Hz, anomeric H), 6.83-6.86 (4H, m), 7.30-7.33 (4H, m).
ESIMS: m/z 1208.7 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C63H111N3O12Si3Na: 1208.7368; observed: 1208.7362. 
工程ｂ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－２－アミノ－５，６－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－（イソプロピリデン）オクタデシル　２，３－ジ－Ｏ－（４－メトキシベンジル）－４，６－Ｏ－（ジターシャリーブチル）シリレン－α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（１７）］の合成
　化合物（１６）(180 mg, 0.152 mmol)のＴＨＦ(3 mL)溶液にトリメチルホスフィン(1M ＴＨＦ溶液， 0.8 mL)を加え２時間室温撹拌した後、水酸化ナトリウム（1M 水溶液， 2.9 mL)を加えた。２時間室温で撹拌しクロロホルム（ＣＨＣｌ３）で希釈した。水洗、ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（９：１、更に２：１）で溶出すると化合物（１７）(136 mg, 77%)が得られた。
IRνmax(KBr) 2928, 2856, 1613, 1513, 1472, 1464, 1250 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.03 (3H, s), 0.056 (3H, s), 0.061 (3H, s), 0.10 (3H, s), 0.86-0.89 (21H, m, containing two 9H singlets at 0.88 and 0.89 ppm), 1.00 (9H, s), 1.06 (9H, s), 1.25-1.29 (21H, bs, containing 3H singlet at 1.29 ppm), 1.39-1.42 (5H, m, containing 3H singlet at 1.42 ppm), 1.54-1.57 (4H, m, containing NH2), 3.08 (1H, m), 3.28 (1H, dd, J 7.8, 10.0 Hz), 3.59 (1H, s), 3.67 (1H, m), 3.77 (1H, dd, J 2.8, 9.9 Hz), 3.79 (3H, s), 3.80 (3H, s), 3.89 (1H, m), 3.94-3.98 (3H, m), 4.03 (1H, m), 4.11 (1H, dd, J 1.6, 12.4 Hz), 4.18 (1H, dd, J 2.0, 12.4 Hz), 4.48 (1H, d, J 2.5 Hz), 4.59, 4.74 (2H, AB-q, J 11.4 Hz), 4.63, 4.66 (2H, AB-q, J 11.4 Hz), 4.76 (1H, d, J 3.4 Hz), 6.83-6.87 (4H, m), 7.26-7.34 (4H, m).
ESIMS: m/z 1160.8 [M+H]+.
HRESIMS: calcd for C63H114NO12Si3: 1160.7643; observed: 1160.7644.
工程ｃ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－５，６－ジ（ターシャリ－ブチルジメチルシリルオキシ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ）－２’，３’－Ｏ－（イソプロピリデン）ヘキサコサノイルアミノ］－３，４－Ｏ－（イソプロピリデン）オクタデシル　２，３－Ｏ－（４－メトキシベンジル）－４，６－Ｏ－（ジ－ターシャリーブチル）シリレン－α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（１８）］の合成
　化合物（１７）(103 mg, 0.089 mmol)と化合物（１４）(125 mg, 0.266 mmol, 3 eq)のＴＨＦ－ＣＨ２Ｃｌ２(１：１， 10 mL)溶液に４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）(130 mg, 1.06 mmol, 12 eq)、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）(205 mg, 1.06 mmol, 12 eq)を加え室温１６時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水洗、飽和食塩水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に６：１）で溶出すると化合物（１８）(129 mg, 90%)が得られた。
IRνmax(KBr) 2925, 2855, 1684 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.05 (3H, s), 0.06 (3H, s), 0.09 (3H, s), 0.13 (3H, s), 0.87-0.89 (24H, m, containing two 9H, singlets at 0.88 and 0.89 ppm), 0.98 (9H, s), 1.05 (9H, s), 1.22-1.36 (71H, m, containing two 3H singlets at 1.28 and 1.31 ppm), 1.42-1.62 (7H, m, containing 3H singlet at 1.44 ppm), 3.51 (1H, m), 3.61 (1H, s), 3.72-3.78 (2H, m), 3.78-3.82 (7H, m), 3.86 (1H, m), 3.93 (1H, dd, J 3.4, 10.0 Hz), 4.06-4.11 (2H, m), 4.12-4.16 (2H, m), 4.20 (1H, m), 4.30 (1H, m), 4.38 (1H, d, J 7.3 Hz), 4.44 (1H, d, J 2.9 Hz), 4.58, 4.70 (2H, AB-q, J 11.4 Hz), 4.67 (1H, d, J 3.9 Hz, anomeric H), 6.79-6.87 (5H, m, containing NH), 7.26-7.34 (4H, m).
ESIMS: m/z 1633.15 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C92H167NO15Si3Na: 1633.1541; observed: 1633.1559.
工程ｄ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－５，６－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ）－２’，３’－Ｏ－（イソプロピリデン）ヘキサコサノイルアミノ］－３，４－（Ｏ－イソプロピリデン）オクタデシル　４，６－Ｏ－（ジ－ターシャリーブチル）シリレン－α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（１９）］の合成
　化合物（１８）(124 mg, 0.077 mmol)のＣＨ２Ｃｌ２－Ｈ２Ｏ(１０：１， 19.8 mL)溶液に２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン(ＤＤＱ、124 mg, 0.546 mmol)を加え、２時間撹拌しＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。飽和重曹水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（６：１、更に３：１）で溶出すると化合物（１９）(99 mg, 94%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3405 (br), 2926, 2855, 1680, 1518, 1470 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.05 (3H, s), 0.07 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.13 (3H, s), 0.88 (6H, m), 0.89 (9H, s), 0.90 (9H, s), 1.01 (9H, s), 1.06 (9H, s), 1.25 (64H, bs), 1.31 (3H, s), 1.37 (3H, s), 1.57 (3H, s), 2.52 (1H, d, J 9.5 Hz, OH), 3.39 (1H, t, J 9.8 Hz), 3.59 (1H, m), 3.62-3.73 (4H, m), 3.87 (1H, m), 4.06-4.18 (4H, m), 4.22-4.26 (2H, m), 4.34 (1H, m), 4.41 (1H, m), 4.46 (1H, d, J 7.8 Hz), 4.86 (1H, d, J 3.9 Hz, anomeric H), 6.94 (1H, d, J 8.8 Hz, NH).
ESIMS: m/z 1393.05 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C76H151NO13Si3Na: 1393.0385; observed: 1393.0405.
工程ｅ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－５，６－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ）－２’，３’－Ｏ－（イソプロピリデン）ヘキサコサノイルアミノ］－３，４－Ｏ－（イソプロピリデン）オクタデシル　α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（２０）］の合成
　化合物（１９）(96 mg, 0.070 mmol)をピリジン(60 mg, 0.76 mmol)のＴＨＦ(7.5 mL)溶液にフッ化水素酸－ピリジン(ＨＦ：～７０％；ピリジン：～３０％， 45 mg)をアルゴン気流下室温で加えた。５０分後、反応混合物をＣＨＣｌ３で希釈し、重曹水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（２：３、更に１：３）で溶出すると化合物（２０）(67 mg, 78%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3418 (br), 2925, 2854, 1676, 1516, 1461, 1381 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.08 (3H, s), 0.10 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.15 (3H, s), 0.88 (6H, t, J 7.0 Hz), 0.89 (9H, s), 0.91 (9H, s), 1.25 (60H, bs), 1.31 (3H, s), 1.38 (3H, s), 1.42-1.73 (14H, m, containing two 3H singlets at 1.43 and 1.58 ppm), 2.46 (1H, dd, J 4.2, 8.4 Hz, OH), 2.63 (1H, d, J 2.5 Hz, OH), 2.68 (1H, d, J 11.5 Hz, OH), 2.83 (1H, s, OH), 3.38 (1H, dd, J 9.3, 10.8 Hz), 3.56 (1H, m), 3.69-3.79 (3H, m), 3.85-3.98 (3H, m), 4.03-4.12 (3H, m), 4.18 (1H, m), 4.25 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.45 (1H, d, J 7.6 Hz), 4.88 (1H, d, J 3.7 Hz, anomeric H), 7.03 (1H, d, J 9.3 Hz, NH).
ESIMS: m/z 1252.93 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C68H135NO13Si2Na: 1252.9370; observed: 1252.9390.
工程ｆ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ）－２’，３’－（ジヒドロキシ）ヘキサコサノイルアミノ］－３，４，５，６－（テトラヒドロキシ）オクタデシル　α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（２１）；ＲＣＡＩ－１４７］の合成
　化合物（２０）(56 mg, 0.070 mmol)のＣＨ２Ｃｌ２－ＣＨ３ＣＮ(3:2, 28 mL)溶液にＨ２Ｏ(423 mg)と４６％ＨＦ水(423 mg)を加え、室温で１６時間撹拌した。目的物が析出しているのでそのまま濾取し、飽和重曹水と水でよく洗浄した。最後に少量のＣＨＣｌ３－ＣＨ３ＣＮ（１：１）で洗浄し減圧下乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ＣＨＣｌ３－ＭｅＯＨ（９：１、更に７：１、最後に５：１）で溶出すると化合物（２１）(20 mg, 48%)が得られた。化合物（２１）をＲＣＡＩ－１４７と命名した。
[α]D 28+49.6(c 0.52, ピリジン).
IRνmax(KBr) 3361 (br), 2920, 2851, 1646, 1542, 1468 cm-1.
1H NMR (500 MHz, pyridine-d5, one drop of 1%TMS in CDCl3):δ0.87 (6H, t, J 7.0 Hz), 1.22-1.33 (60H, m), 1.53-1.62 (2H, m), 1.80-2.02 (5H, m), 2.26 (1H, m), 4.31-4.40 (4H, m), 4.43-4.48 (3H, m), 4.51-4.55 (2H, m), 4.63 (1H, dd, J 3.7, 9.8 Hz), 4.70 (1H, d, J 5.1 Hz), 4.73 (1H, dd, J 6.2, 10.8 Hz), 4.83 (1H, dd, J 3.1, 8.5 Hz), 4.99 (1H, m), 5.40 (1H, m), 5.57 (1H, d, J 3.7 Hz), 8.71 (1H, d, J 9.5 Hz, NH). 
13C NMR (125 MHz, pyridine-d5): 14.26, 22.91, 26.42, 26.45, 29.58, 29.89, 29.95, 29.98, 30.02, 30.13, 30.16, 30.18, 30.32, 32.09, 32.69, 35.16, 50.89, 62.58, 67.89, 70.24, 70.91, 71.31, 71,59, 72.72, 72.73, 72.97, 73.49, 73.80, 76.02, 101,08, 173.98.
ESIMS: m/z 944.70 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C50H99NO13Na: 944.7014; observed: 944.7007. 
実施例２：ＲＣＡＩ－１５１の合成および精製方法
スキーム４
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
工程ａ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－３，４－（ジターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ）－２’，３’－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサノイルアミノ］オクタデシル　２，３，４，６－テトラ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（２３）］の合成
　化合物（２２）(160 mg, 0.15 mmol)[Tashiro, T.; Hongo, N.; Nakagawa, R.; Seino, K.; Watarai, H.; Ishii, Y.; Taniguchi, M.; Mori, K. Bioorg. & Med. Chem. 2008, 16, 8896-8906]のＴＨＦ－ＣＨ２Ｃｌ２(1:1, 16 mL)溶液に４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）(220 mg, 1.80 mmol)、化合物（１４）(210mg, 0.45 mmol)とＥＤＡＣ(345 mg, 1.80 mmol)を加え室温で１５時間撹拌した。減圧下、濃縮しＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に６：１）で溶出すると化合物（２３）(177 mg, 78%)が得られた。
IRνmax(KBr) 2925, 2853, 1686 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.047 (3H, s), 0.054 (3H, s), 0.055 (3H, s), 0.11 (3H, s), 0.87-0.90 (24H, m), 1.20 (3H, s), 1.25 (62H, bs), 1.31-1.40 (4H, m), 1.44 (3H, s), 1.46-1.60 (2H, m), 1.65-1.70 (2H, m), 3.47 (1H, dd, J 5.7, 9.1 Hz), 3.54 (1H, t, J 8.4 Hz), 3.69-3.72 (2H, m), 3.81-3.85 (2H, m), 3.91-3.95 (2H, m), 3.99 (1H, d, J 1.7 Hz), 4.04 (1H, d, J 3.5, 10.1 Hz), 4.18 (1H, m), 4.27 (1H, m), 4.37, 4.48 (2H, AB-q, J 11.7 Hz), 4.40 (1H, d, J 7.6 Hz), 4.55, 4.91 (2H, AB-q, J 11.3 Hz), 4.70, 4.74 (2H, AB-q, J 11.7 Hz), 4.70-4.81 (2H, AB-q, J 11.7 Hz), 4.87 (1H, d, J 3.5 Hz), 6.80 (1H, d, J 9.5 Hz, NH), 7.24-7.36 (20H, m).
ESIMS: m/z 1541.10 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C93H155NO11Si2Na: 1541.1036; observed: 1541.0992.
工程ｂ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－３，４－（ジターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ）－２’，３’－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサノイルアミノ］オクタデシル　α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（２４）］の合成
　化合物（２３）(160 mg, 0.105 mmol)のＴＨＦ(40 mL)溶液に２０％　Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ(300 mg)を加え室温、水素気流下１６時間撹拌した。触媒を除き減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１：１、更に１：４）で溶出すると化合物（２４）(94 mg, 77%)が得られた。
IRνmax(KBr) 3415, 2925, 2854, 1667, 1523, 1466 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.07 (3H, s), 0.08 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.14 (3H, s), 0.88 (6H, t, J 7.0 Hz), 0.91 (9H, s), 0.92 (9H, s), 1.25 (62H, bs), 1.37 (3H, s), 1.45-1.67 (11H, m, containing 3H singlet at 1.53 ppm), 2.25 (1H, d, J 10.8 Hz, OH), 2.46 (1H, dd, J 4.8, 7.7 Hz, OH), 2.61 (1H, d, J 3.7 Hz, OH), 2.84 (1H, s, OH), 3.50 (1H, dd, J 8.3, 11.0 Hz), 3.67-3.87 (6H, m), 3.92 (1H, m), 4.09 (1H, s), 4.15 (1H, dd, J 3.2, 10.8 Hz), 4.34-4.40 (2H, m), 4.52 (1H, d, J 7.4 Hz), 4.90 (1H, d, J 3.6 Hz), 671 (1H, d, J 9.8 Hz, NH).
ESIMS: m/z 1180.91 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C65H131NO11Si2Na: 1180.9158; observed: 1180.9149. 
工程ｃ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－３，４－ジヒドロキシ－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ）－２’，３’－ジヒドロキシヘキサコサノイルアミノ］　オクタデシル　α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（２５）（ＲＣＡＩ－１５１）］の合成
　化合物（２４）(80 mg, 0.071 mmol)を化合物（２０）から化合物（２１）を合成したように処理することにより化合物（２５）(40 mg, 63%)が得られた。尚、カラムクロマトグラフィーはＣＨＣｌ３－ＭｅＯＨ（９．１、更に６：１）で溶出した。得られた化合物（２５）をＲＣＡＩ－１５１と命名した。
[α]D 29+62.4 (c 1.04, ピリジン).
IRνmax(KBr) 3364, 2918, 2850, 1646, 1636, 1541, 1469 cm-1.
1H NMR (500 MHz, pyridine-d5, one drop of 1%TMS in CDCl3):δ0.88 (6H, t, J 6.8 Hz), 1.20-1.34 (60H, m), 1.34-1.49 (2H, m), 1.60-1.71 (2H, m), 1.82-1.96 (3H, m), 2.00-2.08 (2H, m), 2.31 (1H, m), 4.27 (1H, m), 4.32-4.43 (4H, m), 4.47-4.57 (4H, m), 4.64-4.70 (2H, m), 4.74 (1H, m), 5.33 (1H, m), 5.61 (1H, d, J 3.7 Hz), 8.65 (1H, d, J 9.5 Hz, NH).
13C NMR (125 MHz, pyridine-d5): 14.31, 22.96, 26.48, 26.55, 29.64, 29.65, 29.94, 29.97, 30.01, 30.03, 30.05, 30.09, 30.19, 30.22, 30.30, 30.47, 32.15, 32.16, 32.64, 34.62, 50.57, 62.67, 67.99, 70.24, 71.02, 71.65, 72.37, 73.13, 73.55, 76.21, 76.55, 101,20, 173.79.
ESIMS: m/z 912.72 [M+Na]+.
HRESIMS: calcd for C50H99NO11Na: 912.7116; observed: 912.7134. 
実施例３：ＲＣＡＩ－１６０の合成および精製方法
スキーム５
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
工程ａ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５ＥＺ）－１－（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデン－５－ヘキサコセニル－２－オール［化合物（２７）］の合成
　ヘンイコシルトリフェニルホスホニウム　ブロマイド(638 mg, 1.00 mmol)の乾燥ＴＨＦ(3 ml)溶液にｎ－ＢｕＬｉ(1.57 Mヘキサン溶液, 1.20 mL, 1.88 mmol)の溶液を－１０℃でアルゴン気流下撹拌しつつ加えた。この温度で３０分間撹拌した後、この溶液に５－Ｏ－ターシャリーブチルジメチルシリル－２，３－Ｏ－イソプロピリデン－Ｌ－リボフラノース(化合物（２６）, 152 mg, 0.50 mmol)の乾燥ＴＨＦ(2 mL)溶液を加えた。この溶液を室温で４時間撹拌し氷冷下メタノ－ルで処理して酢酸エチルで希釈した。この希釈液を水と飽和食塩水で洗浄しＭｇＳＯ４で乾燥した。ろ過、濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘキサン－酢酸エチル（３９：１、更に１９：１）で溶出するとＥ，Ｚ－幾何異性体の混合物である化合物（２７）(183 mg, 63%)が得られた。
IRνmax(KBr):3540, 2926, 2855, 1465 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.09 (6H, s), 0.88 (3H, t, J 6.8 Hz), 0.91 (9H, s), 1.25-1.44 (41H, m, containing 3H, s, at 1.34 ppm), 1.45 (3H, s), 2.02-2.20 (2H, m), 2.45 (1H, d, J 4.6 Hz, OH), 3.66-3.71 (2H, m), 3.81 (1H, m), 3.83-4.03 (1H, m), 4.64 (0.6H, m), 5.00 (0.4H, dd, J 7.1, 8.8 Hz), 5.51-5.85 (2H, m).
ESMS: m/z 605.49 [M+Na]+.
HRESMS: Calcd for C35H70O4SiNa: 605.4941; observed, 605.4952.
工程ｂ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－１－（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデン－５－ヘキサコサン－２－オール［化合物（２８）］の合成
　Ｅ，Ｚ異性体混合物である化合物（２７）(3.45 g, 5.92 mmol)の酢酸エチル（１２０ｍｌ）溶液を２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ(1.3 g)を用いて水素気流下二重結合を室温で１時間還元した。触媒を濾去し濃縮すると定量的に化合物（２８）(3.45 g)が得られた。
IRνmax(KBr):3539 (br), 2923, 2853, 1518, 1464 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ0.09 (6H, s), 0.88 (3H, t, J=6.8 Hz), 0.91 (9H, s), 1.26 (38H, bs), 1.32 (3H, s), 1.40 (3H, s), 1.50-1.80 (4H, m), 2.57 (1H, d, J 3.9 Hz), 3.64-3.69 (2H, m), 3.82 (1H, m), 3.91 (1H, dd, J 5.7, 8.8 Hz), 4.17 (1H, m).
ESMS: m/z 607.51 [M+Na]+.
HRESMS: calcd. for C35H72O4SiNa: 607.5098; observed, 607.5100. 
工程ｃ：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－１，２－ジ（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）－３，４－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサン［化合物（２９）］の合成
　化合物（２８）(3.45 g, 5.90 mmol)の塩化メチレン溶液(150 ml)に２，６－ルチジン(3.17 g, 29.6 mmol)、とターシャリーブチルジメチルシリル　トリフルオロメタンスルホネート(4.69 g, 17.8 mmol)を加え１時間室温で撹拌した。塩化メチレンで希釈し飽和重曹水と食塩水で洗浄しＭｇＳＯ４で乾燥した。ろ過、濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘキサン－酢酸エチル（３９：１）で溶出すると化合物（２９）(3.71 g, 90%)が得られた。
IRνmax(KBr):2925, 2855, 1464, 1254 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ0.06 (6H, s), 0.09 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.87 (9H, s), 0.88 (3H, t, J=7.0 Hz), 0.91 (9H, s), 1.26 (40H, bs), 1.31 (3H, s), 1.40 (3H, s), 1.52-1.54 (2H, m), 3.72 (1H, m), 3.76-3.81 (2H, m), 4.03-4.10 (2H, m).
ESMS: m/z 641.58, 659.58, 721.60 [M+Na]+.
HRESMS: calcd for C41H86O4Si2Na: 721.5962; observed: 721.5974.
工程ｄ：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－２－ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ－３，４－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサン－１－オール［化合物（３０）］及び（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－１，２－ジヒドロオキシ－３，４－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサン［化合物（３１）］の合成
　化合物（２９）(100mg, 0.14 mmol)のピリジン(0.9 ml)とＴＨＦ(1 ml)溶液にＨＦ－ピリジン(0.2 ml；ＨＦ：～７０％，ピリジン：～３０％)を加え１６時間室温で撹拌した。酢酸エチルで希釈し飽和重曹水と食塩水で洗浄しＭｇＳＯ４で乾燥した。ろ過、濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に４：１、最後に１：１）で溶出した。原料回収(32mg,32%)、化合物（３０）(39mg, 46%)及び化合物（３１）(10 mg, 15%)が得られた。
化合物（３０）
IRνmax(KBr):3496 (br), 2925, 3854 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ0.11 (3H, s), 0.13 (3H, s), 0.87-0.89 (12H, m), 1.25-1.34 (40H, m), 1.35 (3H, s), 1.43 (3H, s), 1.50-1.58 (2H, m), 2.27 (1H, dd, J=3.7, 9.1 Hz, OH), 3.68-3.77 (2H, m), 3.83 (1H, m), 4.07 (1H, dd, J=5.7, 8.2 Hz), 4.13 (1H, m).
TOFESMS: m/z 607.51 [M＋Na]+.
HRESMS: calcd. for C35H72O4SiNa: 607.5098; observed, 607.5090.
化合物（３１）
IRνmax(KBr):3355, 2917, 2850, 1472 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ0.88 (3H, t, J=7.0 Hz), 1.24-1.75 (48H, m, containing two 3H singlets at 1.34 and 1.42 ppm), 1.91 (1H, m, OH), 2.18 (1H, d, J=5.6 Hz, OH), 3.72-3.76 (2H, m), 3.82 (1H, m), 3.96 (1H, m), 4.20 (1H, m).
TOFESMS: m/z 493.42 [M＋Na]+.
HRESMS: calcd. for C29H58O4Na: 493.4233; observed, 493.4227.
工程ｅ：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）－２－ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ－３，４－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサノイックアシッド［化合物（３２）］の合成
　化合物（３０）(66 mg, 0.113 mmol)のＣＣｌ４－ＣＨ３ＣＮ－Ｈ２Ｏ(2:2:3, 7 mL)溶液にＮａＩＯ４(242 mg, 1.13 mmol)及びＲｕＣｌ３・ｎＨ２Ｏ(3 mg)を加え室温で３時間撹拌し、ＣＨＣｌ３で希釈した。この溶液を水洗しＭｇＳＯ４で乾燥した。ろ過、濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に４：１）で溶出した。化合物（３２）(52mg, 77%)が得られた。
IRνmax(KBr):2924, 2853, 1725, 1465 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.11 (3H, s), 0.14 (3H, s), 0.88 (3H, t, J 6.8 Hz), 0.92 (9H, s), 1.25 (40H, bs), 1.34 (3H, s), 1.45 (3H, s), 1.54-1.66 (2H, m), 4.19-4.20 (2H, m), 4.30 (1H, d, J 6.1 Hz).
ESMS: m/z 621.49 [M+Na]+.
HRESMS: calcd for C35H70O5SiNa: 621.4890; observed: 621.4877.
スキーム６
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
工程ａ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ，４’Ｒ）－２’－ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ－３’，４’－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサノイル］アミノ－３，４－ジ－（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）オクタデシル－２，３，４，６－テトラ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（３３）の合成］
　アミン化合物（２２）(200 mg, 0.19 mmol)、４－ジメチルアミノピリジン(320 mg, 2.62 mmol)、及びカルボン酸化合物（３２）(336 mg, 0.56 mmol)のＴＨＦ－ＣＨ２Ｃｌ２(1:1, 20 ml)　溶液に１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩(ＥＤＡＣ、503 mg, 2.62 mmol)を加え室温で３２時間撹拌し、減圧下溶媒を留去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、この溶液を水洗しＭｇＳＯ４で乾燥した。ろ過、濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘキサン－酢酸エチル（１９：１、更に９：１）で溶出して化合物（３３）(116 mg, 38%)が得られた。
IRνmax(KBr):2925, 2854, 1685 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.05 (3H, s), 0.06 (3H, s), 0.068 (3H, s), 0.072 (3H, s), 0.10 (6H, s), 0.87-0.90 (33H, m), 1.25 (67H, bs), 1.40 (3H, s), 1.44-1.54 (4H, m), 3.48 (1H, m), 3.58 (1H, t, J 8.5 Hz), 3.71-3.77 (3H, m), 3.90 (1H, dd, J 2.8, 10.3 Hz), 3.98-4.07 (5H, m), 4.22-4.27 (2H, m), 4.33 (1H, m), 4.37, 4.88 (2H, AB-q, J 11.7 Hz), 4.49, 4.53 (2H, AB-q, J 11.5 Hz), 4.69, 4.74 (2H, AB-q, J 12.0 Hz), 4.69, 4.75 (2H, AB-q, J 12.0 Hz), 4.87 (1H, d, J 3.4 Hz, anomeric H), 6.62 (1H, d, J 8.3 Hz, NH), 7.24-7.35 (20H, m).
TOFESMS: m/z 1650.21 [M+H]+.
HRESMS: calcd for C99H170NO12Si3: 1649.2031; observed: 1649.2056.
工程ｂ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ，４’Ｒ）－２’－ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ－３’，４’－Ｏ－イソプロピリデンヘキサコサノイル］アミノ－３，４－ジ－（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）オクタデシル－α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（３４）の合成］
　化合物（３３）(116 mg, 0.041 mmol)のテトラヒドロフラン(30 mL)溶液を触媒としてＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ(200 mg)を用いて１６時間加水素分解を行った。ろ過濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘキサン－酢酸エチル（２：１、更に１：２）で溶出すると化合物（３４）(68mg, 73%)が得られた。
IRνmax(KBr):3419 (br), 2925, 2854, 1684, 1465 cm-1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ0.08 (3H, s), 0.09 (3H, s), 0.12-0.13 (12H, m), 0.88 (6H, t, J 7.1 Hz), 0.90 (9H, s), 0.92 (9H, s), 0.93 (9H, s), 1.25 (64H, bs), 1.31(3H, s), 1.42 (3H, s), 1.50-1.62 (4H, m), 2.45 (1H, bs, OH), 2.61-2.80 (3H, m, OH), 3.42 (1H, t, J 10.5 Hz), 3.65 (1H, t, J 2.7 Hz), 3.68-3.75 (3H, m), 3.83-3.87 (2H, m), 3.92 (1H, m), 4.08 (1H, m), 4.12 (1H, m), 4.21 (2H, s), 4.30 (1H, m), 4.49 (1H, m), 4.88 (1H, d, J 3.4 Hz), 6.46 (1H, d, J 10.0 Hz, NH).
TOFESMS: m/z 1289.01 [M+H]+. 1290.02, 1291.02.
HRESMS: calcd for C71H146NO12Si3: 1289.0153; observed: 1289.0162. 
工程ｃ：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）－２－［（２’Ｒ，３’Ｒ，４’Ｒ）－２’，３’，４’－トリヒドロキシヘキサコサノイル］アミノ－３，４－ジ－ヒドロキシオクタデシル　α－Ｄ－ガラクトピラノシド［化合物（３５）（ＲＣＡＩ－１６０）］の合成
　化合物（３４）(46 mg, 0.04 mmol)を化合物（２４）から化合物（２５）を得たように処理し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ＣＨＣｌ３－ＭｅＯＨ（９：１、更に６：１）で溶出すると化合物（３５）(16 mg, 48%)が得られた。化合物（３５）をＲＣＡＩ－１６０と命名した。
[α]D 25+56.2 （c 0.75，ピリジン）．
IRνmax(KBr):3372 (br), 2920, 2851, 1638, 1541, 1469 cm-1.
1H NMR (500 MHz, pyridine-d5, one drop of 1%TMS in CDCl3):δ0.88 (6H, t, J 6.9 Hz), 1.20-1.45 (60H, m), 1.58-1.69 (2H, m), 1.79 (1H, m), 1.85-1.97 (3H, m), 2.20-2.29 (2H, m), 4.26-4.35 (3H, m), 4.36-4.41 (2H, m), 4.43-4.52 (4H, m), 4.55 (1H, s), 4.66 (1H, dd, J 3.8, 9.9 Hz), 4.70 (1H, dd, J 5.8, 10.7 Hz), 5.05 (1H, s), 5.32 (1H, m), 5.60 (1H, d, J 3.7 Hz, anomeric H), 6.11 (1H, bs, OH), 6.16 (1H, bs, OH), 6.35 (1H, bs, OH), 6.56 (1H, bs, OH), 6.66 (1H, bs, OH), 6.67 (1H, bs, OH), 6.73 (1H, bs, OH), 7.05 (1H, bs, OH), 7.66 (1H, bs, OH), 8.70 (1H, d, J 9.0 Hz, NH).
13C NMR (125 MHz, pyridine-d5, one drop of 1%TMS in CDCl3): 14.39, 23.05, 26.45, 26.58, 29.71, 29.73, 30.02, 30.04, 30.07, 30.09, 30.10, 30.11, 30.14, 30.26, 30.46, 30.51, 32.22, 32.23, 34.63, 34.81, 51.15, 62.74, 67.84, 70.34, 71.09, 71.70, 72.39, 73.06, 73.14, 74.37, 76.16, 77.77, 101,24, 174.29.
TOFESMS: m/z 928.70 [M+Na]+.
HRESMS: calcd for C50H99NO12Na: 928.7065; observed: 928.7056. 
試験例１：本発明の水酸化糖脂質の生物活性試験
　ＫＲＮ７０００、ＲＣＡＩ－１４７、ＲＣＡＩ－１５１、及びＲＣＡＩ－１６０のそれぞれについて、１ｍｇ／ｍＬの濃度のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を調製した。１匹のマウスにつき２００μＬを尾静脈内に投与した際、投与量が１００μｇ／ｋｇ体重になるように、上記のＤＭＳＯ溶液を０．５％のｔｗｅｅｎ２０（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を含有するリン酸緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて５倍に希釈し、さらにリン酸緩衝液を用いて２０倍に希釈した。
　１群３匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、調製したＲＣＡＩ－１４７、ＲＣＡＩ－１５１、及びＲＣＡＩ－１６０の溶液２００μＬをそれぞれ尾静脈内に注射した（１匹あたり約２μｇ投与）。対照物質としてＫＲＮ７０００を用い、同様の方法により投与量が１００μｇ／ｋｇ体重となるように調製したＫＲＮ７０００の溶液２００μＬを尾静脈内に注射した。投与直前、および投与後１、３、６、１２、２４、３２、４８、６０時間経過後の血液を眼下静脈叢より８０μＬ採取し、血漿を調製した。
　各糖脂質の投与直前、および投与後の血漿中の各サイトカインの含有量を、ＥＬＩＳＡ法の１つであるＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ　Ｂｅａｄ　Ａｒｒａｙ　（ＣＢＡ）システム（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。
　投与直前、および３、６、１２、２４、３２、４８、６０時間経過後の血漿中のＩＦＮ－γの含有量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図１に示す。投与直前、および投与後１、３、６、１２、２４時間経過後の血漿中のＩＬ－４の含有量の測定結果（平均値）及びその標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を図２に示す。
　上記結果より、ＲＣＡＩ－１４７、ＲＣＡＩ－１５１、及びＲＣＡＩ－１６０は、ＫＲＮ７０００に比べてＩＬ－４に偏ったサイトカイン産生誘導活性を有することが示された。即ち、ＫＲＮ７０００の水酸化類縁体であるこれらの糖脂質はＴｈ２型に偏ったサイトカインの産生を誘導できることが確認された。
試験例２：本発明の水酸化糖脂質のＥＡＥ（実験的脳脊髄炎）発症に及ぼす効果
（１）ＥＡＥ発症誘導
　Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（雌）マウスに、百日咳毒素（５μｇ／ｍｌ）を２００μｌ皮下投与し、及びＭＯＧペプチドエマルジョン〔ラットＭＯＧ部分ペプチド（３５ｔｈ～５５ｔｈ）６ｍｇ／ｍｌ：ＣＦＡ（コンプリートフロインドアジュバント）＝１：１〕１００μｌを２回腹腔内投与し、更に４８時間後に百日咳毒素のみを投与することによりＥＡＥ発症を誘導する。
（２）各種糖脂質でパルスした樹状細胞の前投与
　図３に示すスケジュールで、ＥＡＥ発症を誘導する前のマウスに各種糖脂質（ＫＲＮ－７０００、ＲＣＡＩ－１４７、ＲＣＡＩ－１５１、ＲＣＡＩ－１６０）でパルスした樹状細胞を静脈内投与した。
（３）発症抑制効果の評価
　各種糖脂質でパルスした樹状細胞を投与した際のＥＡＥ発症抑制の効果を調べた。評価は、投与開始から連日発症症状を観察することにより行った。評価は以下の基準に従ってスコアを付けた。
０：樹状細胞を投与していないマウスと比較して運動機能に明らかな変化はない
１：しっぽの緊張がなくなる
２：しっぽの緊張がなくなり、後肢弱体化
３：しっぽの緊張がなくなり、後肢の完全な麻痺
　　しっぽの緊張がなくなり、１前肢１後肢の麻痺
４：しっぽの緊張がなくなり、後肢の完全な麻痺と前肢の部分的な麻痺
５：前後肢の完全な麻痺、ケージのまわりを動かない
　　ケージの中で不随意的に転がる
　　麻痺により死亡するマウスも出現する
（４）結果
　百日咳毒素とＭＯＧペプチドとで感作した後１日目から３０日目までのクリニカルスコアの結果を図４に示した。
　本発明によって開発された、水酸化ＫＲＮ７０００類縁体は、ＫＲＮ７０００よりもＩＬ－４等のＴｈ２型に偏ったサイトカインの産生を誘導することができ、しかもＴｈ１型サイトカインの産生が抑制されているため、本発明は自己免疫疾患治療薬や抗アレルギー薬、ならびに免疫抑制剤としてもその用途を提供することができる。
　さらに本発明の水酸化糖脂質を樹状細胞にパルスし、その樹状細胞を投与することにより、ＩＬ－４産生をより増強することができる。
　本出願は、日本で出願された特願２０１２－１７３２７８（出願日２０１２年８月３日）を基礎としておりそれらの内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (14)

  1. 　式(Ｉ)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、
    Ｒ１は水素原子又は水酸基を示し；
    ２個のＲ２は同一又は異なって、水素原子又は水酸基を示し；
    Ｒ３は置換基を有していてもよい炭素数８～１４の炭化水素基を示し；
    Ｒ４は置換基を有していてもよい炭素数１８～２４の炭化水素基を示す）で表される化合物、又はその塩。
  2. 　Ｒ３がそれぞれ置換基を有していてもよい、Ｃ８～１４アルキル基、Ｃ８～１４アルケニル基又はＣ８～１４アルキニル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  3. 　Ｒ４がそれぞれ置換基を有していてもよい、Ｃ１８～２４アルキル基、Ｃ１８～２４アルケニル基又はＣ１８～２４アルキニル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  4. 　Ｒ１が水素原子であり、２個のＲ２がともに水酸基であり、Ｒ３がＣ８～１４アルキル基であり、Ｒ４がＣ１８～２４アルキル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  5. 　Ｒ１が水素原子であり、２個のＲ２がともに水素原子であり、Ｒ３がＣ８～１４アルキル基であり、Ｒ４がＣ１８～２４アルキル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  6. 　Ｒ１が水酸基であり、２個のＲ２がともに水素原子であり、Ｒ３がＣ８～１４アルキル基であり、Ｒ４がＣ１８～２４アルキル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  7. Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     である、請求項１記載の化合物又はその塩。
  8. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を含有する、医薬。
  9. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を含有する、Ｔｈ２型サイトカイン分泌促進剤。
  10. 　自己免疫疾患治療薬である、請求項８記載の医薬。
  11. 　免疫抑制剤である、請求項８記載の医薬。
  12. 　請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩でパルスしたヒト樹状細胞。
  13. 　請求項１２記載のヒト樹状細胞を含有する、免疫抑制剤。
  14. 　請求項１２記載のヒト樹状細胞を含有する、自己免疫疾患治療薬。
     
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH059193A (ja) * 1990-11-08 1993-01-19 Kirin Brewery Co Ltd 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用
JPH0559081A (ja) * 1991-08-29 1993-03-09 Kirin Brewery Co Ltd 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用
WO1994009020A1 (en) * 1992-10-22 1994-04-28 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Novel shingoglycolipid and use thereof

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5936076A (en) 1991-08-29 1999-08-10 Kirin Beer Kabushiki Kaisha αgalactosylceramide derivatives
KR100868959B1 (ko) 2006-12-30 2008-11-17 재단법인서울대학교산학협력재단 알파-갈락토실세라마이드 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는면역보조용 약학적 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH059193A (ja) * 1990-11-08 1993-01-19 Kirin Brewery Co Ltd 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用
JPH0559081A (ja) * 1991-08-29 1993-03-09 Kirin Brewery Co Ltd 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用
WO1994009020A1 (en) * 1992-10-22 1994-04-28 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Novel shingoglycolipid and use thereof

Non-Patent Citations (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIOORG. & MED. CHEM., vol. 16, 2008, pages 8896 - 8906
CARBOHYDR. RES., 2010, pages 1663 - 1684
CARBOHYDR. RES., vol. 345, 2010, pages 1663 - 1684
CURR. TOP. MED. CHEM., vol. 4, 2004, pages 561 - 567
C-W. CHANG; Y-N. CHEN; A. K. ADAK; K-H. LIN; D-L. M. TSOU; C-C. LIN, TETRAHEDRON, vol. 63, 2007, pages 4310 - 4318
J. CLIN. INVEST., vol. 113, 2004, pages 1631 - 1640
J. IMMUNITY, vol. 31, 2009, pages 47 - 59
J. MED. CHEM., vol. 38, 1995, pages 2176 - 2187
J. ORG. CHEM., vol. 70, 2005, pages 10260 - 10270
J. ORG. CHEM., vol. 70, 2005, pages 2398 - 2401
LA CLAIR, J. J. ET AL.: "Isolation of the beta-galactosphingolipid coniferoside using a tumor cell proteome reverse affinity protocol", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 19, no. 22, 2011, pages 6645 - 6653, XP028328565 *
M. SHIOZAKI; T. TASHIRO; H. KOSHINO; R. NAKAGAWA; S. INOUE; T. SHIGEURA; H. WATARAI; M. TANIGUCHI; K. MORI, CARBOHYDR. RES., vol. 345, 2010, pages 1663 - 1684
NATUR IMMUNOL., vol. 6, 2005, pages 810 - 818
NATUR IMMUNOL., vol. 6, 2005, pages 819 - 826
NATURE, vol. 413, 2001, pages 531 - 534
NATURE, vol. 448, 2007, pages 44 - 49
SCIENCE, vol. 277, 1997, pages 339 - 345
SCIENCE, vol. 278, 1997, pages 1626 - 1629
See also references of EP2881400A4
T. GREENE; P. WUTS: "Protective Groups in Organic Synthesis", 1999, JOHN WILEY & SONS
TASHIRO, T.; HONGO, N.; NAKAGAWA, R.; SEINO, K.; WATARAI, H.; ISHII, Y.; TANIGUCHI, M.; MORI, K., BIOORG. & MED. CHEM., vol. 16, 2008, pages 8896 - 8906
TETRAHEDRON, vol. 63, 2007, pages 4310 - 4318
ZHAN, Z-J. ET AL.: "New glycosphingolipids from the fungus Catathelasma ventricosa", JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS, vol. 66, no. 7, 2003, pages 1013 - 1016, XP055189802 *

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