WO2014014314A1 - 이중 저해 활성을 갖는 헤테로고리 유도체 - Google Patents

이중 저해 활성을 갖는 헤테로고리 유도체 Download PDF

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WO2014014314A1
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dimethyl
butanoyl
methylamino
methoxyphenyl
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PCT/KR2013/006498
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배인환
김호석
전승아
변은영
안영길
서귀현
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한미약품 주식회사
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    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala

Definitions

  • the present invention relates to heterocyclic derivatives having a prophylactic or therapeutic effect against abnormal cell growth diseases and pharmaceutical compositions comprising the same.
  • Background Apoptosis or programmed cell death plays a key role in maintaining homeostasis in epithelial animals. Such apoptosis maintains life by regulating cell growth and death, but when this system is inhibited by a number of factors, it can induce pathological diversity, including cancer, autoimmune diseases or neurodegenerative disorders [Thompson, CB Science, 267, 1456-1462 (1995); Hanahan, D. & Weinberg, RA, Cell, 100, 57-70 (2000).
  • mutant cells that accumulate IAP protein in the cell due to overexpression of apoptosis protein (IAP), and thus undergo apoptosis By inhibiting the cellular apoptosis of human cancer cells, they inhibit the mechanism of natural cell death in the development, growth, and metastasis of cancer cells by various apoptosis signals (eg DNA damage, chemical agents and stimuli such as UV light).
  • IAP apoptosis protein
  • the IAP protein binds to caspase, a cysteine protease involved in cell death, and inhibits cell death. Caspase binds to more than 70 amino acids, including zinc, called the baculovirus inhibitory repeat (BIR) of the IAP protein.
  • BIR baculovirus inhibitory repeat
  • XIAP is the most effective caspase inhibitor of the IAP protein family and binds via the BIR-3 domain and the BIR-2 domain to cascade-9, the initiation-caspase, and caspase 3/7, respectively.
  • cIAP-1 and -2 are still well known for their role in cell death. Although not known, they all bind to the TNF—receptor 1 signal complex.
  • SMAC / Diablo the second mitochondrial activator of apoptosis I direct IAP-binding protein with low pi (SMAC / Diablo) protein, which is released during apoptosis signaling in mitochondria, is a cascade of IAP proteins from natural IAP proteins. The activity of these IAP proteins is regulated by binding to the same site that binds to the phase. In addition, gene amplification of IAP and overexpression of IAP protein are found in many cancer cells.
  • protein kinases are enzymes that catalyze the phosphorylation of hydroxy groups at amino acid tyrosine, serine, and threonine residues in substrate proteins, and play an important role in the growth factor signaling and processes that cause cell growth, differentiation and proliferation.
  • Targeted therapy refers to specific target molecules, such as protein kinases, which are necessary for carcinogenic activity and tumor growth, whereas conventional chemotherapy simply displays inhibitory effects on rapidly dividing cells. Means a treatment that inhibits the proliferation of tumor cells by interfering with the molecule.
  • targeted therapies are more species-specific than conventional systemic chemotherapy. Its advantage is that it is both specific and effective and has little effect on normal cells. Since protein kinase dysregulation is commonly found in cancer cells, protein kinases are attractive targets for anticancer drug development.
  • the dual inhibitory treatment method that induces apoptosis mechanism and inhibits protein kinase may suggest new possibilities as one of new therapeutic strategies.
  • Protein tyrosine kinases are divided into subclasses according to the type of growth factor of the receptor. Among them, epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinases, fibroblasts, which are specifically targeted by drugs such as iresa and taseva. Cell growth factor receptor (FGFR) tyrosine kinase [Hubbard, Progress in Biophysics &. Molecular Biology 1999; 71: 343], Vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR) tyrosine kinase targeted by Avastin to inhibit neovascularization of cancer cells [Schenone et al., Cum Med. Chem.
  • EGFR epidermal growth factor receptor
  • FGFR Cell growth factor receptor
  • VEGFR Vascular endothelial growth factor receptor
  • RETCrearranged during transfection occurs in the cytoplasm of receptor tyrosine kinases, expressed in the protooncogen in the nerves and excretory system, and integrins in the cell membrane bind to proteins present in the ECM and then dimerize.
  • focal adhesion kinase FAK
  • focal adhesion complexes are divided into various classification criteria such as metastatic target kinases that are involved in various cell division and migration.
  • the present inventors search for a substance having the characteristics of AVPI, which is a natural IAP inhibitory protein sequence, and which can be used as a prophylactic or therapeutic agent for abnormal cell growth diseases caused by overexpression of apoptosis inhibitory protein and excessive activity of protein kinases.
  • the searched compound was used to find out whether the activity against abnormal cell growth disease.
  • An object of the present invention is to provide a novel compound having a prophylactic or therapeutic effect of abnormal cell growth disease caused by overexpression of apoptosis inhibiting protein and excessive activity of protein kinases and a pharmaceutical composition containing the same.
  • the present invention provides a compound selected from a heterocyclic derivative having a structure of Formula 1, its pharmaceutically acceptable salts, isomers, hydrates and solvates:
  • X is -S-, -U, -NH-, or
  • R 1 is C 3 - 8 cycloalkyl, heterocycloalkyl of 3-8 won, C 6 - 10 aryl, or a 5-10 won H. Tero aryl;
  • R 2 is C 3 - 8 cycloalkylene, hetero cycloalkylene of 3-8 won, C 6 - 10 arylene group, or a 5-10 membered heteroaryl and alkylene;
  • R 3 is H, d- 9 alkoxy, C 3 - 6 cycloalkyloxy, C 3 - 6 cycloalkyl, - d- 3 Al skill oxy, 3-9 round of H.
  • Tero cycloalkyloxy, heterocycloalkyl of 3-9 won alkyl, -d-3 alkyloxy, C 6 - 10 aryloxy, C 6 - 10 aryl -d- 3 alkyloxy, heteroaryl -d- of the 5-10 membered heteroaryl oxy, or 5- to 10-membered 3 alkyloxy ego;
  • R 4 is H, C 1H5 alkyl, C 3 - 6 cycloalkyl, or C 3 - 6 alkynyl oxy eu ⁇ alkyl;
  • R 5 is H or d- 3 alkyl
  • R 6 is H, d- 3 alkyl, or carbonyl _C 2 - 3 alkenyl
  • R A and R B are each independently H, halogen, -CF 3, -N0 2, -CN , d- 6 alkyl or -NR3 ⁇ 4 9, or combined with each other to an aromatic or non-aromatic C 5 - 6 carbon ring or Aromatic or non-aromatic 5-6 membered heterocyclic ring may be formed, wherein the carbon ring and heterocyclic ring are each independently H, halogen, -CF 3 , -N0 2 C -CN, -N 3 ( - Can be substituted with one or more substituents selected from the group consisting of NH 2 , -OH, -4 alkyl, d-3 alkoxy, d- ⁇ : kilothio and d- 3 alkylsulfonyl;
  • q is an integer from 0 to 3;
  • R 1 and R 2 may be each independently substituted with 1 to 3 W A ,
  • Tero cycloalkyl, C 6 - 10 aryl or heteroaryl of 5 to 10 W where said cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl and heteroaryl are each independently selected from halogen, -CF 3, -NO 2, - CN, -N 3) - NH 2 , -OH, d- 6 alkyl, C 3 - 6 cycloalkyl may be substituted by alkyl, and one to three substituents selected from the group consisting of H.
  • R 8, R 9, R 10 , R 11 and R 12 are each independently H, halogen, - CF 3, - N0 2, -CN, d- 6 alkyl, C 2 - 6 alkenyl, or - ( CH 2) P - connected to, C 3 - 6 cycloalkenyl Kiel, heterocycloalkyl of 3-6 won, d- 6 alkanoyl, C 2 - 6 alkenyl alkanoyl i 3 ⁇ 4- alkynyl 6 alkanoyl, C 6 - 10 aryl, or 5-10 membered heteroaryl, where p is an integer from 0 to 3 R 8 and R 9 may be bonded to each other to form a 5- to 6-membered ring, and the heteroaryl, heteroarylene, heterocycloalkyl, heterocycloalkylene, and heterocycle may each independently be N, -Contains 1 to 3 heteroatoms selected from the group consisting of and S; According to another object of the present invention, the present invention is
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine unless stated otherwise. .
  • alkyl refers to a straight, cyclic or branched hydrocarbon moiety unless stated otherwise.
  • 'cycloalkyl 1 refers to cyclic alkyl, including cyclopropyl and the like.
  • aryl refers to aromatic groups including phenyl, naphthyl and the like.
  • heterocycloalkyl denotes monocyclic or bicyclic or higher cyclic alkyl containing one or more heteroatoms selected from 0, N and S.
  • mono heterocycloalkyls include, but are not limited to, piperidinyl, morpholinyl, thiamofolinyl, pyridinyl, imidazolidinyl, tetrahydrofuranyl, piperazinyl, and similar groups. It is not limited.
  • heteroaryl means a monocyclic or bicyclic or more aromatic group containing a heteroatom selected from 0, N and S, unless otherwise indicated.
  • monocyclic heteroaryls include thia Zolyl, oxazolyl, thiophenyl, furanyl, pyryl, imidazolyl, isoxazolyl, pyrazolyl, triazolyl, thiadiazolyl, tetrazolyl, oxadiazolyl, pyridinyl, pyridazineyl, pyrimi Dinyl, pyrazinyl, and the like, but are not limited to these.
  • bicyclic heteroaryl examples include indolyl, benzothiophenyl, benzofuranyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzisoxazolyl, benzthiazolyl, vanzthiadiazolyl, benztriazolyl, quinolinyl, isoquinoline Work, purinyl, furypyridinyl, and the like, but are not limited to these.
  • X may be -0-, -NH, or -N (d- 3 alkyl)-.
  • the R 1 and R 2 are each substituted with the substituent W A independently of the other, it is an unsubstituted C 5 - and can be a heteroaryl group of 10 aryl or 5- to 10-membered;
  • R 3 may be H, phenyloxy, or benzyloxy;
  • R 4 may be t_butyl, cyclonuclear chamber, or propazyloxyethyl;
  • R 5 may be methyl;
  • R 6 may be H or methyl;
  • R 7 may be H or methyl.
  • the p may be an integer of 0 to 2
  • the q may be 1 or 2.
  • R A and R B are each independently H, halogen, -CF 3 , -NO 2,-
  • an aromatic C 5 - 6 may form a 5-6 membered heterocyclic aromatic or sogori shots, where each said carbocyclic and heterocyclic rings independently H, halogen, - CF 3> -CN, -NH 2 ,-OH, d- 4 alkyl, d-3 alkoxy, d-3 alkylthio and d- 3 alkylsulfonyl can be substituted with 1 to 3 substituents selected from the group consisting of And the heterocycle includes 1 to 3 heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S. Specific examples of more preferable compounds of the present invention are as follows.
  • Pharmaceutically acceptable salts are less toxic to humans and do not adversely affect the biological activity and physicochemical properties of the parent compound.
  • Pharmaceutically acceptable salts include acid addition salts of pharmaceutically acceptable free acids and base compounds of formula (1), alkali metal salts (sodium salts, etc.) and alkaline earth metal salts (such as chalcates), organic bases and organic salts of carboxylic acids of formula (1). Base salts, amino acid addition salts, and the like.
  • Preferred salt forms of the compounds according to the invention include salts with inorganic or organic acids.
  • the inorganic acid may be used hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, perchloric acid, bromic acid.
  • organic acids include acetic acid, methane hexaphonic acid, ethanesulfonic acid P-luluenesulfonic acid, fumaric acid, maleic acid, malonic acid, phthalic acid, succinic acid, lactic acid, citric acid Acids, citric acid, gluconic acid, tartaric acid, salicylic acid, malic acid, oxalic acid, banjoic acid, embonic acid, aspartic acid, glutamic acid and the like can be used.
  • Organic bases that can be used for the preparation of organic base addition salts are tris (hydroxymethyl) methylamine, dicyclonuclear amine, and the like.
  • Amino acids that can be used for the production of amino acid addition bases are natural amino acids such as alanine and glycine. Of the preferred salts of the compounds according to the invention, hydrochloride in particular is preferred.
  • Such salts can be prepared by conventional methods.
  • the compound of the formula (I) in methanol, ethanol, acetone, 1, 4 can be prepared is dissolved in a solvent which may be the mixed water, such as dioxane, and then the crystallization after adding a free acid or free base.
  • the present invention also includes an isomer of the compound of Formula 1 in the scope.
  • the compounds of the present invention may have an asymmetric carbon center and therefore may exist as R or S isomers, racemic compounds, individual enantiomers or mixtures, individual diastereomers or mixtures, all of which optics Properties and combinations are included within the scope of the present invention.
  • solvate and hydrate forms of the compound of formula 1 are also included within the scope of the present invention.
  • These hydrates or solvates can be prepared by a known method, and ', non-toxic and soluble in water is preferred, and water or an alcohol-based solvent (in particular, ethanol or the like), a hydrate or solvate molecules are bonded one to five of Is preferably.
  • the present invention also provides a compound library comprising at least one of the compound of Formula 1, a pharmaceutically acceptable salt thereof, an isomer, a hydrate, and a solvate thereof.
  • Such compounds of the present invention are excellent in both inhibitory activity against apoptosis inhibitory protein (IAP) and protein kinases.
  • IAP apoptosis inhibitory protein
  • the compounds of the present invention can be used for the prevention or treatment of abnormal cell growth diseases caused by overexpression of apoptosis inhibiting proteins and excessive activity of protein kinases.
  • the present invention prevents or inhibits abnormal cell growth diseases caused by overexpression of apoptosis inhibiting proteins and excessive activity of protein kinases of the compound of Formula 1, its pharmaceutically acceptable salts, isomers, hydrates or solvates thereof.
  • protein kinase examples include ALK, AMPK, Aurora A, Aurora B,
  • Examples of more preferred protein kinases are EGFR, VEGFR, FLT-3, Bcr-Abl 'ALK, IGF-1R, JAK, PDGFR, FGFR, FAK and combinations thereof.
  • the present invention comprises administering a compound of Formula 1, a pharmaceutically acceptable salt thereof, an isomeric hydrate or solvate thereof to a mammal, the overexpression of apoptosis inhibiting protein in mammals and excessive kinase
  • a compound of Formula 1 a pharmaceutically acceptable salt thereof, an isomeric hydrate or solvate thereof
  • an isomeric hydrate or solvate thereof to a mammal, the overexpression of apoptosis inhibiting protein in mammals and excessive kinase
  • Dosage of the active ingredient may be subject to the subject being treated, the severity of the disease or condition, the rate of administration and the judgment of the prescribing physician.
  • the compound of formula 1 may be used once or twice a day in an amount of 0.01 to 200 mg / kg (body weight), preferably 10 to 100 mg / kg (body weight), in mammals including humans. It can be administered via the oral or non-oral route with the / Off schedule. In some cases, lower dosage values than the above-mentioned ranges may be more suitable, higher dosages may be used without causing adverse side effects, and higher dosages may be several smaller dosages throughout the day. Can be dispensed in an amount.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one of the compound of Formula 1, a pharmaceutically acceptable salt, isomer, hydrate and solvate thereof as an active ingredient.
  • Such pharmaceutical compositions inhibit apoptosis It can be used for the prophylaxis or treatment of abnormal cell growth diseases caused by overexpression of proteins and excessive activity of protein kinases.
  • protein kinase and abnormal cell diseases are as described above.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated according to a conventional method by adding a conventional pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant and excipient in addition to the active ingredient.
  • compositions of the present invention may be prepared in various oral dosage forms such as sperm, pills, powders, capsules, syrups, emulsions, microemulsion dogs, or parenteral dosage forms such as intramuscular, intravenous or subcutaneous administration. .
  • Excipients that may be used in the pharmaceutical compositions of the present invention include sweeteners, binding crabs, solubilizers, dissolution aids, wetting agents, emulsifiers, isotonic agents, adsorbents, disintegrants, antioxidants, preservatives, suspending agents, fillers, fragrances, and the like. Can be.
  • lactose for example, lactose, dextrose, sucrose, mantle, sorbbi, cellulose, glycine, silica, talc, stearic acid, sterin, magnesium stearate, magnesium aluminum silicate, starch, gelatin, tragacanth rubber, Alginate, sodium alginate, methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, agar, water, ethanol, polyethylene glycol, polyvinylpyridone, sodium chloride, calcium chloride, orange essence, strawberry essence, vanilla flavor Can be mentioned.
  • the carrier used include cellulose, silicate, corn starch, lactose, sucrose, dextrose, calcium phosphate, stearic acid, magnesium stearate, stearic acid. Calcium acid, gelatin, talc, surfactant, suspending agent, emulsifier, diluent and the like.
  • the carrier may include water, saline solution, aqueous glucose solution, pseudoglucose solution, alcohol, glycol ether (eg polyethylene glycol 400), oil, fatty acid, fatty acid ester, glycerol. Ride, surfactant, suspension 1, emulsifier, etc. are mentioned.
  • a method for preparing the compound of formula 1 according to the present invention will be described. In the following preparation methods and examples, the following abbreviations are used:
  • DIPEA ⁇ , ⁇ —diisopropylethylamine
  • DMAP ⁇ , ⁇ -dimethylaminopyridine
  • THF Tetrahydrofuran
  • TLC Thin Film Chromatography
  • EDCI 1 ⁇ ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride
  • HATU 2- 1H-9-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3 ⁇ tetramethyluroni Um Nuclear Safluorophosphate.
  • the order of the five stage reactions can be reversed.
  • the reaction process is illustrated in step by step.
  • the equivalent weight is specified as the equivalent ratio of the reference substance (starting substance). It is indicated by L.
  • Iron (4-5eq) is diluted in 50% aqueous ethanol solution (40-50L / mol), added to concentrated aqueous hydrochloric acid solution (0.03 ⁇ 0.06L / mol), and activated by heating. To this is added the compound of formula 5 (leq) and refluxed at 80-120 ° C for 0.5-1.5 hours. When the reaction is complete, the mixture is filtered, washed, and distilled to separate and purify the organic layer, thereby obtaining a compound of Formula 4.
  • Step 4 t-butyl ((S) -l-(((S) -l-((S) -2-((3—methoxy— 4-((4-((2— (methyl carbamoyl)) Phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) phenyl) carbamoyl) pyridin ⁇ 1-yl) -3,3_dimethyl- 1-oxobutan-2-yl) amino)-1-oxopropane- 2-yl) (methyl) carbamate
  • Compound obtained in step 3 (288 mg, 0.79 mmol)
  • compound obtained in Preparation Example 1 (490 mg, 1.19 mmol)
  • DIPEA 0.70 mL, 3.95 mmol
  • reaction solution was diluted with MC and washed with saturated NaHC0 3 aqueous solution and brine.
  • the organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and distilled under reduced pressure, and then purified by column chromatography to obtain the title compound (264 mg ⁇ 44%).
  • Step 4 t-butyl ((S) -l-(((S) -l-((S) -2-((3-methoxy-4-((4-((3-methoxy phenyl) amino)) ) Pyrimidin- 2-yl) amino) phenyl) carbamoyl) pyridin-1-yl) -3,3-dimethyl- 1-oxobutan-2-yl) amino) -1-oxopropane- 2- 1) (methyl) carbamate
  • Step 5 (S) -1-((S) — 3,3—Dimethyl-2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) -N- (3-methoxy ⁇ 4-((4-((3-methoxyphenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) phenyl) pyrrolidine-2-carboxamide hydrochloride
  • Step 5 of Example 1 The same procedure as in Step 5 of Example 1 was repeated except that the compound obtained in the previous step 4 was used as the starting material and ethyl acetate was used instead of MC to obtain the title compound (33 mg, 29%). .
  • Step 2 3-methoxy-4 _ ((4_ (3-nitrophenoxy) pyrimidin-2-yl) amino) benzo
  • the compound obtained in the previous step 1 (2.6 g, 10.33 mmol), .4-amino- 3-methoxy benzoic acid (1.7 g, 10.33 mmol), and trifluoroacetic acid (0.767 mL, 10.33 mmol) were added to 2-butane and stirred at 10 C C for 4 hours. The reaction temperature was cooled to room temperature and washed with NaHC0 3 aqueous solution and brine.
  • Step 5 t-Butyl ((S) -1-(((S) -1 — ((S) — 2— ((3-methoxy— 4-((4- (3-nitrophenoxy) pyrimidine -2-yl) amino) phenyl) carbamoyl) pyrrolidin-1-yl) -3,3 ⁇ dimethyl-l-oxobutan-2-yl) amino) ⁇ 1-oxopropane-2-yl) (methyl Carbamate
  • Step 4 of Example 1 The same procedure as in Step 4 of Example 1 was repeated except that the compound obtained in Step 4 was used as a starting material, to obtain the title compound (434 mg, 60%).
  • Example 4 the compound (200 mg, 0.28 mmol) and DIPEA (0.145 mL, 0.84 mmol) obtained in step 5 were dissolved in MC (5 mL), where acryloyl chloride (0.033 mL, 0.42 mmol) was added at 0 °. At C. The reaction solution was stirred at room temperature for 14 hours, diluted with EtOAc, and washed with water and brine. The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and distilled under reduced pressure and purified by column chromatography to give the title compound (50 mg, 23%).
  • Step 5 of Example 1 The same procedure as in Step 5 of Example 1 was repeated except that the compound obtained in Step 1 was used as a starting material, to obtain the title compound (39 mg, 85%).
  • Example 6 (S) -N- ⁇ 4- [4- (2,3-dimethyl-2H-indazol-6-ylamino) -pyrimidin-2-ylamino-3-methoxyphenyl ⁇ -l -[(S) — 3,3-Dimethyl-2-((S) -2-methylamino-propaneamido) butanoyl] -Priridine-2-carboxamide hydrochloride Step 1 to 2 of Example 1 The same procedure as in steps 1 to 5 of Example 1 was repeated, except that 2, 3-dimethyl-2H-indazol-6-ylamine was used instead of -amino-N-methylbenzamide. 30 mg, 52%) was obtained.
  • Example 8 (S) —l-((S) -3,3-Dimethyl-2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) -N- (4-(( 4-((4- (4-ethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxamide hydrochloride
  • 4- (4-ethylpiperazin-1-yl) aniline was used instead of 2-amino-N ⁇ methylbenzamide, and K 2 C0 3 was used instead of NaHC0 3 , and EtOH
  • DMSO was used instead of / THF to afford the title compound (130 mg, 82%).
  • Step 2-1 ((S) -1-((S) ⁇ 3,3-dimethyl-2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) -N- (2-methic Citrine 4-nitrophenyl) pyridine-2-carboxamide
  • Step 2-2 (S) —N- (4-amino-2-methoxyphenyl) ⁇ l-((S) —3,3 ⁇ dimethyl 2-((S) -2— (methylamino) propaneami Butanoyl) pyridine-2-carboxamide
  • Step 3 t ⁇ butyl ((S) -l-(((S) -l-((S) -2-((4 ⁇ ((4-((3-chloro-4- (4- Tilpiperazine- 1-yl) phenyl) amino) pyrimidin- 2-yl) amino) -2-methoxyphenyl) carbamoyl) pyridin-1xyl) -3,3-dimethyl-1-oxobutane —2-yl) amino) -1-oxopropan-2-yl) (methyl) carbamate
  • Step 4 (S) -N- (4 _ ((4— ((3-chloro-4- (4-ethylpiperazin _1-yl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) —2 Methoxyphenyl) _l-((S) -3,3—dimethyl-2 — ((S) -2— (methylamino) propaneamido) butanoyl) pyridine-2-carboxamide hydrochloride
  • Example 11 (S) -l-((S) -3,3-dimethyl-2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) -N- (4-((4 -((4- (4—ethylpiperazin-1-yl) -3-fluorophenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -2-methoxyphenyl) pyridine— 2-carbox Amide Hydrochloride In step 1 of Example 10, 4- (4-ethylpiperazin-1-yl) -3-fluoroaniline was used instead of 3 ⁇ chloro-4- (4-ethylpiperazin-1-yl) aniline.
  • Example 12 (S) -l-[(S) -3,3-dimethyl 2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl]- ⁇ 4- [6- (3- Methoxyphenylamino) -pyrimidin-4-ylamino] -3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxamide hydrochloride 4,6 instead of 2,4 ⁇ dichloropyrimidine in step 1 of Example 1
  • the same procedure as in steps 1 to 5 of Example 1 was repeated except that -dichloropyrimidine was used and 3-anisidine was used instead of 2-amino-N-methylbenzamide. 100 mg, 77%) was obtained.
  • Example 13 (S) -1-[(S) — 3,3-Dimethyl-2-((S) -2-methylaminopropaneamido) -butanoyl] -N- (4- ⁇ 6- [ 3-chloro-4- (4-isopropylpiperazin-1-yl) -phenylamino] -pyrimidin-4-ylamino ⁇ -3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxamide hydrochloride
  • Step 1 of Example 1 4,6-dichloropyrimidine was used instead of 2,4 ⁇ dichloropyrimidine, and 3-chloro-4- (4-isopropylpiperazine instead of 2-amino-N-methylbenzamide -1-yl) -Except for using -phenylamine, the same procedure as in steps 1 to 5 of Example 1 was repeated to obtain the title compound (145 mg, 82%).
  • the compound (193 mg, 0.245 mmol) obtained in the previous step 2 was dissolved in MC (lmL) and TFA (lmL) was added dropwise. After stirring for 1 hour at room temperature, the mixture was extracted with MC and saturated aqueous NaHC0 3 solution. The separated organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and distilled under reduced pressure, and then purified by column chromatography to obtain the title compound (5.8 mg, 4%).
  • Step 2 t-butyl ((S) — 1— ((S) — 2-((6— ((4-((3_methoxyphenyl) amino) thieno “3,2—d] pyrimidine- 2 ⁇ yl) amino) pyridin-3-yl) carbamoyl) pyridin-1 yl) -3,3-dimethyl- 1-oxobutanyl 2-yl) amino) —1 oxopropan-2-yl) ( Methyl) carbamate
  • Step 3 (S) -l-((S) -3,3 Dimethyl-2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) — N_ (6-((4-(( 3-methoxyphenyl) amino) thieno [3,2-d] pyrimidin-2-yl) amino) pyridin-3-yl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • the compound (40 mg, 0.05 mmol) obtained in the previous step 2 was dissolved in MC (lmL) and TFA (lmL) was added dropwise. After stirring for 1 hour at room temperature, the mixture was extracted with MC and saturated aqueous NaHC0 3 solution. The separated organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and distilled under reduced pressure, and then purified by column chromatography to obtain the title compound (4.8 mg, 14%).
  • Example 16 (S) -l-((S) -3,3-Dimethyl-2 — ((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) -N- (4-((4 -((3-Methoxyphenyl) amino) thieno [3,2-d] pyrimidin-2-yl) amino) phenyl) pyridine—2-carboxamide
  • Steps 1 to 3 of Example 15 was repeated except that 4-nitroaniline was used instead of 5-nitropyridin-2-amine in Step 1 of Example 15 to obtain the title compound (3 mg, 3 %) Was obtained.
  • Example 17 (S) -l-((S) -3,3'dimethyl-2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) -N- (3-methoxy- 4-((4-((3-methoxyphenyl) amino) thieno [3,2-d] pyrimidin-2-yl) amino) phenyl) pyridine-2-carboxamide hydrochloride
  • Step 1 2 -Chloro-N '(3'methoxyphenyl) thieno [3,2'd] pyrimidin-4-amine 2,4-dichlorothieno [3,2-d] pyrimidine (500 mg, 2.44 mmolo and 3-methoxy aniline (0.3 mL, 2.68 mmol) was added dropwise to 1-propanol (5 mL), and DIPEA (0.85 mL, 4.88 mmol) was added dropwise The reaction solution was stirred at 60-7 CTC for 3 hours.
  • Step 3 N 2 - (4_ Ami no-2-methoxy-phenyl) - N 4 - (3- methoxyphenyl) T in the furnace [3,2- d] blood limiter-2,4-diamine Dilute iron (231 mg, 3.73 mmol) in 50% ethane in an aqueous solution (16 mL), add concentrated hydrochloric acid solution (0.02 mL), and activate the reaction by raising the reaction temperature to KX C. Compounds obtained at (316 mg, 0.746 mmol) were added and refluxed at 100 ° C for 2.5 h.
  • reaction solution was filtered under reduced pressure through a solution pad, washed with chloroform / isopropyl alcohol (3: 1, v / v) solution, and the filtrate obtained was distilled under reduced pressure.
  • the obtained solid was dissolved in a chloroform / isopropyl alcohol (3: 1, v / v) solution, and then washed with saturated NaHC0 3 aqueous solution and brine.
  • the organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and distilled under reduced pressure and purified by column chromatography to give the title compound (208 nig, 71%).
  • Step 4 t-butyl ((S) -1-(((S) —1-((S) ⁇ 2-((3-methoxy-4-((4-((3-methoxy phenyl) amino) ) Thieno [3,2-d] pyrimidin-2-yl) amino) phenyl) carbamoyl) pyridin-1-yl) -3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl) Amino) -1-oxopropan-2-yl) (methyl) carbamate
  • Step 5 (S) -l-((S) -3,3-Dimethyl— 2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) -N- (3-methoxy -4 _ ((4— ((3-Methoxyphenyl) amino) thieno [3,2-d] pyrimidin-2-yl) amino) phenyl) pyridine-2_carboxamide hydrochloride
  • the compound (100 mg, 0.127 mmol) obtained in the previous step 4 was dissolved in ethyl acetate (3 mL), and hydrochloric acid solution (0.3 mL, 4M 1,4-dioxane solution) was added dropwise. The reaction solution was stirred at room temperature for 12 hours, and the resulting solid was washed with ethyl acetate and diethyl ether and filtered to give the title compound (91 mg, 99%).
  • the compound (4.7 g, 29 mmol) obtained in the previous step 1 was dissolved in POCl 3 (87.7 mL, 928 mmol) and stirred at 1 K C for 24 h.
  • the reaction solution was distilled under reduced pressure and the residue was washed with toluene and distilled under reduced pressure twice.
  • the residue was extracted with MC and saturated aqueous NaHC0 3 solution, and the separated organic layer was dried over Na 2 SO 4 and distilled under reduced pressure to obtain the title compound (5.7 g, 99%).
  • Step 4 t-butyl ((S) _1-(((S) ⁇ 1— ((S) — 2 _ ((4-((4— ((3—chloro-2,4-difluorophenyl) amino) ) Quinazolinin-2-yl) amino) -2-methoxyphenyl) carbamoyl) pyridin-1-yl) -3,3-dimethyl ⁇ 1-oxobutan-2-yl) amino) -1-oxo Propane 2-yl) (methyl) carbamate
  • step 3 The compound obtained in step 3 (104 mg, 0.319 mmol) and the compound prepared in step 2-2 of Example 10 (170 mg, 0.319 mmol) were dissolved in 1-butanol (ImL), and DIPEA (0.05 mL) was added thereto. , a319 mmol) was added dropwise.
  • the reaction solution was stirred at 100 ° C for 24 h.
  • the reaction solution was extracted with ethyl acetate and saturated aqueous NaHC0 3 solution, and the separated organic layer was dried over Na 2 SO 4 and distilled under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography to give the title compound (125 mg, 48%).
  • Step 5 (S) -N- (4-((4-((3-chloro—2,4-difluorophenyl) amino) quinazolin-2-yl) amino) — 2-methoxy Phenyl) -l-((S) -3,3-dimethyl-2-((S) -2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) pyridine-2-carboxamide hydrochloride
  • the compound (125 mg, O.152 mmol) obtained in the previous step 4 was dissolved in MC (1 mL), and TFA (0.2 mL, 3.04 mmol) was added dropwise.
  • the reaction solution was stirred at room temperature for 12 hours, extracted with MC and saturated aqueous NaHC0 3 solution, and the separated organic layer was dried over Na 2 S0 4 and distilled under reduced pressure.
  • the residue was purified by column chromatography, and the obtained compound was ethyl. Dilute to acetate.
  • Hydrochloric acid solution (0.03 mL, 4M 1,4-dioxane solution) was added thereto and stirred at room temperature for 12 hours.
  • the resulting solid was washed with ethyl acetate and ethyl ether and filtered under reduced pressure to give the title compound (98 mg, 85%).
  • Example 20 (S) -N- (4-((4-((4-bromo-3-chloro-2-fluorophenyl) amino) quinazoline-2-yl) amino) -2-methoxy Phenyl) -1 — ((S) -3,3-dimethyl-2-((S) — 2- (methylamino) propaneamido) butanoyl) pyridine-2-carboxamide hydrochloride
  • Example 19 The same procedure as in Steps 1 to 5 of Example 19 was repeated except that 4-bromo-3-chloro-2-fluoroaniline was used instead of 3-chloro-2,4-difluoroaniline in Step 3 of Repeated to give the title compound (83 mg, 30%).
  • MDA-MB-231 breast cancer cells (ATCC # HTB-26) were seeded in a 96 well plate at a density of 1.0-1.5 ⁇ 10 4 cells / well and the drug was treated after 24 hours.
  • the drug was treated with ⁇ , 0.5 ⁇ , ⁇ and 5 ⁇ concentrations for 12 hours for caspase 3/7 and 16 hours for caspase 9, then the media was removed and MDA-MB-231 breast cancer cells (ATCC # ⁇ — 26).
  • XIAP BIR diluted to 1.25 ⁇ in a black round bottom 96-well plate was added to 5 ⁇ ! After dispensing the wells, 4F (AbuRPF-K (5-Fam) -NH 2 ) diluted to 0.0625yM was added by lOuL / well while blocking the light.
  • XIAP BIR-3 is the 241-356th amino acid residue of the human XIAP protein, and standard DNA cloning of the pET28a vector (Novagen) is performed.
  • the recombinant vector was transformed into E. coli BL2KDE3) cells using the procedure and PCR method (see Sambrook & Russell., Molecular cloning., Chapter 1. Third edition).
  • Plasmids used in the present invention were prepared by standard DNA cloning procedures and PCR methods (see Molecular cloning. Chapter 1. Sambrook & Russell. Third edition).
  • PET28a (+) (Novagen) was used to construct a vector used for the introduction and targeting of genes expressing human XIAP BIR-3 protein.
  • PCR amplification was performed using cDNA lliL of human blood lympoblast-like leukemia (K562) as a template, 1.5 mM MgCl 2 , 0.2 mM dNPTs, 0.4 mM gene specific sense and antisense primer pairs, and 2.0 units of taq polymerase (Elpis). biotech, Daejeon, Korea).
  • Sikyeotgo banung common compound repeated for 35 cycles with one cycle of 30 seconds, 94 ° 30 seconds C, 30 sec and 72 ° C to 52 ° C after denaturing 5 minutes banung was elongation for 7 min 72 ° C.
  • the base sequences of the primers used are shown in Table 3 below. TABLE 3
  • the PCR amplified human XIAP BIR-3 domain was inserted into a PET28a (+) vector by genetic cloning, and then transformed into E. coli BL2KDE3) cells.
  • O.lmM IPTG was added to overexpress human XIAP BIR-3 protein.
  • the amino acid sequence of the overexpressed human XIAP BIR-3 protein is shown in SEQ ID NO: 3, expressed using a pET28a (+) vector to bind six histidines (His-tag) to the ends of the human XIAP BIR-3 protein. to be. .
  • the positive control ARPF-NH 2 (alanine-arginine-proline-phenylalanine-NH 2 ) and the experimental drug were sequentially distilled at a concentration of 0.01 to 1000 ⁇ M and added to 5 ⁇ 7 wells. Instead, DMSO was added to the 0% and 100% inhibitory controls.
  • Test Example 4 Evaluation of cell growth inhibition (in-vitro)
  • MDA-MB-231 breast cancer cells (ATCC # HTB-26), reported to overexpress XIAP, were selected from ATCCCAmerican type culture collection; Rockville, MD) was used for the experiment.
  • MDA-MB-231 cell lines were cultured in T-75 cm 2 growth flasks under L-15 medium conditions containing 10% FBS and 1% penicillin / straptomycin (Gibco BRL).
  • Fibroblast lines Hs27 (ATCC # CRL 1634) and Balb / c3t3 (ATCC # CCL 163) were used for toxicological experiments on normal cells.
  • MDA-MB-231 cells were cultured under atmospheric conditions. The test material was treated at a concentration of 10 ⁇ M ⁇ 0.1 ⁇ , and the MDA-MB-231 cell line was incubated for 120 hours and the normal cell line for 72 hours.
  • Cell viability of MDA-MB-231 cell line is Celta data 96 TM (CellTiter 96 AQueous One Solution, MTS, Promega, Inc.) by using the measured at 490nm with the absorption, cell to cell survival in the normal cell line was 10% TCACtrichloroacetic acid) was fixed and then stained with a solution of sulforhodamine B (SRB) was measured by absorbance at 540nm. The absorbance results yielded an IC 50 value, the concentration at which the drug reduced cancer cell growth by 50%. Cancer cell growth rate was calculated by the following equation (1) or (2).
  • Tz is the absorbance in the 0% cell growth group, the cell density immediately before the test drug treatment, and C is the cell density cultured by adding only the medium as the absorbance in the 100% cell growth group.
  • Ti means the cell density of the test drug.
  • IC 50 value is the test drug treatment concentration when the value of Equation 1 is 50, which means a concentration that inhibits cancer cell growth by 50%. In each measurement, a comparison and equalization experiment of each cell line was performed in comparison with the control.
  • IC 50 values (nM) for the representative compounds obtained in the examples are shown in Table 6 below, and LBW-242 from Novartis was used as a control. Table 6
  • the compounds of Formula 1 of the present invention inhibited the growth of the MDA-MB-231 cell line overexpressing IAP even at low drug concentrations. That is, the compound of Formula 1 of the present invention showed low growth inhibitory activity against Balb / C, a mouse normal cell line, and Hs27, a human normal cell line, and high growth inhibitory activity against a cell line overexpressing IAP.
  • the compound of the present invention selectively acts on apoptosis inhibiting proteins IAP and protein kinases, which do not affect normal cells, and enable a normal mechanism of apoptosis of tumors and abnormal cells, It can be seen that it can be used alone or in combination therapy for the prevention or treatment of abnormal cell growth disease caused by overexpression of inhibitory protein and excessive activity of protein kinase, and has the advantage of minimizing side effects. Or more, which has been described by the present invention Focusing on the above-described embodiment shall only, when for example, the present invention provides embodiments of the various modifications and equivalent other apparent to those who have the ordinary knowledge in the art Attached to It should be understood that it can be carried out within the scope of the claims.

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Abstract

화학식 1의 구조를 갖는 헤테로고리 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 세포사멸 저해 단백질 및 단백질 키나제를 동시에 저해하는 작용을 하면서 부작용도 적으므로, 이들을 함유하는 약학적 조성물은 세포사멸 저해 단백질 및 단백질 키나제의 과도한 활동으로 유발되는 비정상 세포 성장 질환에 선택적이고 효과적인 예방 또는 치료제로 활용될 수 있다.

Description

명세서 이중 저해 활성을 갖는 헤테로고리 유도체 기술분야 본 발명은 비정상 세포 성장 질환에 대해 예방 또는 치료 효과를 갖 는 헤테로고리 유도체 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 배경기술 세포사멸 (apoptosis) 혹은 세포 예정사 (programmed cell death)는 후 생 동물의 항상성 유지 등에 핵심적인 역할을 수행한다. 이러한 세포사멸은 세포의 성장과 사멸을 조절함으로써 생명체를 유지하나 이러한 체계가 여러 요인들로 저해를 받을 경우 암이나 자가면역질환 또는 퇴행성 신경장애 등 을 포함하는 병리학적 다양성을 유발할 수 있다 [Thompson, C. B. Science, 267, 1456-1462(1995)； Hanahan, D. & Weinberg, R. A., Cell, 100, 57- 70(2000) 참조].
암세포 발생단계에서의 이러한 세포사멸의 조절 단계는， 세포사멸 저 해 단백질 (inhibition of apoptosis protein; IAP)의 과발현으로 인하여 세포내 에 IAP 단백질이 축적되고， 이를 통하여 세포사멸 단계를 거쳐야 하는 돌연 변이 세포인 암세포의 세포 예정사를 저해함으로써, 다양한 세포사멸 신호 (예를 들어 DNA의 손상, 화학적 작용제 및 자외선과 같은 자극)에 의한 암 세포의 발생과 성장 그리고 전이과정에서의 자연적 세포사멸의 기작을 저해 하게 된다 [George L. M., Biochemistry, 41, 7344-7349(2002)； Yigong Shi, Nature Rev. Mol. Cell. Bio., 5， 897—907,(2004) 참조].
IAP 단백질은 세포 예정사에 관여하는 시스테인 프로테아제인 캐스페 이즈 (caspase)에 결합하여 세포 예정사를 저해한다. 캐스페이즈는 IAP 단백 질의 BIR(baculovirus inhibitory repeat)이라 불리는 아연을 포함하는 70여 개의 아미노산으로 구성된 부분에 결합한다. XIAPChuman X chromosomeencoded IAP), cIAP_l(cellular IAP 1) 및 cIAP— 2(cellular IAP 2)는 3개의 나란히 연결된 BIR 도메인을 N—말단에 가지고 있으며， 다른 포 유류 IAP는 한 개의 BIR 도메인을 가지고 있다. XIAP는 IAP 단백질군 중 가장 효과적인 캐스페이즈 저해제이며， 개시-캐스페이즈인 캐스페이즈 -9와 실행—캐스페이즈인 캐스페이즈 3/7에 각각 BIR-3 도메인과 BIR-2 도메인 을 통해 결합한다. cIAP-1과 -2는 아직까지 세포예정사에서의 역할이 잘 알 려져 있지 않지만 이들 모두 TNF—수용체 1 신호 복합체와 결합한다.
미토콘드리아에서 세포사멸 신호전달 과정에서 방출되어 나오는 스맥 / 디아블로 (SMAC/Diablo: the second mitochondrial activator of apoptosis I direct IAP-binding protein with low pi) 단백질은， 자연 상태에서의 IAP 단 백질에서 IAP 단백질이 캐스페이즈와 결합하는 동일한 부위에 결합함으로써 이러한 IAP 단백질의 활성을 조절한다. 또한， IAP의 유전자 증폭과 IAP 단 백질의 과발현은 많은 암세포에서 발견되고 있다.
이러한 이유로 세포사멸에 대한 저항성이 암으로 진행되는데 있어 중 요한 메커니즘으로 부각되었으며， 이에 따라 종양세포에서의 정상세포에서와 다른 세포사멸 메커니즘을 표적으로 하는 것이 효과적인 항암제 치료 전략 으로 제시되어 왔다. 또한， 이러한 약물들은 정상세포에는 영향이 없으며， 암 세포에 특이적으로 작용하여 활성을 나타내어 단독 혹은 병용 요법으로 사 용시 부작용을 최소화할 수 있는 장점을 갖는 것으로 보고되고 있다.
노바티스 (Novartis)사의 국제 특허공개 WO 2008/073305 Al, WO 2008/073306 Al, W0 2008/016893 A2, W0 2006/107963 Al, WO 2006/113376 A1 및 W0 2005/097791 A1, 제넨텍 (Genetech)사의 국제 특 허공개 W0 2009/089502 A1 및 WO 2008/079735 A1, 에이게라 (Aegera) 사의 국제 특허공개 WO 2007/131366 A1, 테트라로직 (TetraLogic)사의 국 제 특허공개 W0 2008/014252 A2 등과 같이 다국적 제약회사에서도 관심 있게 연구를 진행 중에 있다.
IAP를 저해하기 위한 방법으로 천연 IAP 저해 단백질인 스맥 /디아블 로의 구조를 모방한 연구가 진행 중이다. 이러한 연구 결과 특히 N-말단기 의 알라닌-발린-프롤린 -이소루이신 (Ala— Val-Pr으 lie, AVPI)의 핵심 서열이 IAP 단백질에 결합하는 필수 단백질임이 밝혀지게 되었다 [Yigong Shi, Nature structural biology, 8， 394-401,(2001) 참조]. 이러한 핵심 서열 (AVPI 또는 AVPF)은 in vitro 활성 시험에서도 120—500 nM의 활성을 보 여 약리 활성이 있을 것으로 기대가 되었으나 세포 투과성이 없어 약물 개 발에는 이를 수가 없었다.
아울러 단백질 키나제는 기질 단백질의 아미노산인 티로신， 세린 및 트레오닌 잔기에 위치하는 하이드록시 그룹의 인산화를 촉매하는 효소로서 세포의 성장， 분화 및 증식을 유발하는 성장 인자 신호 전달 및 과정에 중요 한 역할을 담당하고 있다ᅳ 표적치료 (targeted therapy)란 기존의 항암요법이 단순히 빠르게 분열하는 세포들에 대한 억제효과를 나타내는 것과는 달리 발암작용과 종양의 성장에 필요한 단백질 키나제 (protein kinase) 등의 특정 표적분자 (target molecule)를 방해함으로써 종양세포의 증식을 억제하는 치 료를 의미한다. 따라서 표적치료는 기존의 전신항암치료와 비교해서 보다 종 양 특이적이고 효과적이며 정상세포에 미치는 영향이 적은 것을 장점으로 한다. 단백질 키나제의 조절 이상은 암세포에서 흔하게 발견되므로 항암약제 개발에 있어서 단백질 카나제는 매력적인 표적이 된다.
따라서， 세포사멸의 기전을 유도하고， 단백질 키나제를 저해하는 이중 저해 작용의 치료 방법은 새로운 치료 전략의 하나로 새로운 가능성을 제시 할 수 있다.
표적치료의 저항성을 예방하거나 극복하기 위한 효과적인 치료전략을 수립하기 위해서는 지속적으로 저항성 발현의 기전을 밝혀내기 위해 노력해 야 하고 저항성 발현을 최소화하기 위한 방법을 추구해야 한다. 이를 위해서 는 무작위적인 표적치료제의 조합보다는 각 유전자형 (genotype)에 따라 다 른 조합을 이용한 임상연구 시도가 절실하다. 이를 위해서는 가장 설득력있 는 전임상연구들이 표적치료를 위한 환자 선택에 있어서 도움을 줄 것이며 이를 통하여 가장 효과적인 표적치료 연구에 우선 순위를 정할 수 있을 것 이다. 기대하던 표적치료가 효과적이지 못할 때는 그 이유를 규명해야 한다. 즉， 표적치료제가 그 해당 표적을 w vivo 에서 억제하지 못하는 것은 아닌지 혹은 효과적인 표적억제가 기대한 결과를 유도하지 못하는지에 대한 분석이 필요하다. 이를 위해서는 표적치료 후 암조직의 직접적인 채취나 비 침습적으로 순환 종양세포 (circulating tumor cell)를 이용하여 표적억제에 대 한 약력학 (pharmacodynamic)적인 분석이 요구된다. 이와 동시에 특정 표적 치료에 가장 반웅이 좋을 것으로 예상되는 환자들을 선별할 수 있는 신빙성 있는 생체지표 (biomarker)의 규명 또한 이루어져야 한다.
한가지 표적만을 특이적으로 억제하는 약제는 더이상 표적치료의 왕 도가 아님이 밝혀졌고 한 개 이상의 신호전달 경로에서 한 개 이상의 표적 을 억제하는 것이 가장 효과적인 표적치료제일 가능성이 있다. 따라서 되먹 임 기전을 회피하고 여러 신호 전달체계에서의 교차 작용 (cross talk)을 배 제시킨 근거에 입각한 병합 표적치료가 효과적인 항암능을 발휘할 수 있을 것이다.
단백질 티로신 키나제는 수용체의 성장인자의 종류에 따라 하위분류 로 나누어지고， 이들 중 특히 이레사， 타세바 등의 약물이 타겟으로 하는 상 피세포 성장 인자 수용체 (epidermal growth factor receptor, EGFR) 티로신 키나제， 섬유모 세포 성장인자 수용체 (fibroblast growth factor receptor, FGFR) 티로신 키나제 [Hubbard, Progress in Biophysics &. MolecularBiology 1999； 71： 343 참조]， 암세포의 신생 혈관 형성을 억제하 기 위한 아바스틴이 타겟으로 하는 혈관 내피세포 성장인자 (vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR) 티로신 키나제 [Schenone et al., Cum Med. Chem. 2007； 14： 2495 참조] 등의 성장인자 키나제 등과 RETCrearranged during transfection)은 신경 및 배출 시스템 내의 원발암 유전자 (protooncogen)로부터 발현되는 수용체 티로신 키나제， 세포막에 있 는 인테그린 (integrin)이 ECM에 존재하는 단백질과 결합한뒤 이합체화 (dimerization)되면서 세포질에 존재하는 초점 접착 키나제 (focal adhesion kinase, FAK)와 결합하여， 초점 접착 복합체 (focal adhesion complex)를 이 루어 다양한 세포 분열 및 이동에 관여하게 되는 전이성 타겟 키나제 등 다 양한 분류 기준으로 나뉜다.
이에 본 발명자들은， 천연 IAP 저해 단백질 서열인 AVPI의 특성을 갖고， 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제의 과도한 활동을 원 인으로 하는 비정상 세포 성장 질환의 예방 또는 치료제로 활용될 수 있는 물질을 검색하고， 탐색된 화합물을 이용하여 비정상 세포 성장 질환에 대한 활성 여부를 찾고자 노력하였다. 그 결과, AVPI 모방 구조로 활성 및 효력 검색을 통하여， IAP와 키나제에 대한 선택성이 뛰어난 헤테로고리 유도체를 개발해 낼 수 있었다. 발명의 요약 본 발명의 목적은 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제 의 과도한 활동을 원인으로 하는 비정상 세포 성장 질환의 예방 또는 치료 효과를 갖는 신규의 화합물 및 이를 함유하는 약학적 조성물을 제공하는 것 이다. 상기 목적에 따라， 본 발명은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 헤테로고 리 유도체， 이의 약학적으로 허용가능한 염， 이성질체， 수화물 및 용매화물로 부터 선택되는 화합물을 제공한다:
Figure imgf000005_0001
상기 식에서，
X는 -S -， -으， -NH-, 또는
Figure imgf000005_0002
Zi 은 _N= 또는 CH= 이고; Z2 는 -N=, -CH= 또는 _C(RA)= 이 고;
R1 은 C3-8사이클로알킬， 3— 8원의 헤테로사이클로알킬, C6-10아릴， 또 는 5— 10원의 헤 테로아릴이고;
R2 는 C3-8사이클로알킬렌， 3—8원의 헤테로사이클로알킬렌, C6— 10아릴 렌， 또는 5-10원의 헤테로아릴렌이고;
R3 는 H, d-9알콕시， C3-6사이클로알킬옥시， C3— 6사이클로알킬— d-3알 킬옥시， 3-9원의 헤 테로사이클로알킬옥시， 3-9원의 헤테로사이클로알킬—d-3 알킬옥시， C6—10아릴옥시， C6-10아릴 -d— 3알킬옥시， 5-10원의 헤테로아릴옥시， 또는 5-10원의 헤테로아릴 -d-3알킬옥시 이고;
R4 는 H, C1H5알킬， C3-6사이클로알킬, 또는 C3-6알킨일옥시ᅳ^^알킬 이고;
R5 는 H 또는 d-3알킬이고;
R6 은 H, d— 3알킬， 또는 카보닐 _C2-3알켄일이고;
RA 및 RB 는 각각 독립적으로 H, 할로겐， -CF3, -N02, -CN, d-6알킬 또는 -NR¾9이거나， 또는 서로 결합하여 방향족 또는 비 방향족의 C5-6탄소 고리 또는 방향족 또는 비 방향족의 5-6원의 헤테로고리를 형성 할 수 있고， 여 기서 상기 탄소고리 및 헤테로고리는 각각 독립적으로 H, 할로겐， -CF3, - N02ᅳ -CN, -N3( -NH2, -OH, -4알킬, d-3알콕시， d-^ :킬티오 및 d— 3알 킬설포닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있고;
q 는 0 내지 3 의 정수이고;
상기 R1 및 R2 는 각각 독립적으로 1 내지 3 개의 WA 로 치환될 수 있고，
상기 WA 는 H, 할로겐, -CF3, -NO2, -CN, -N3( -OH, d-6알킬， 또는， -(CH2)e-로 연결된， -NR8R9, -NR8C(=0)R9, -NR8C(=0)NR8R9, -OR10, - C(=0)Rn, -C(=0)OR10, -C(=0)NR8R9, -NR8C(=0)Rn, -SR12, -S(=0)Rn, ᅳ S(=0)2Ru, C3-6사이클로알킬， 3-6원의 헤 테로사이클로알킬, C6-10아릴 또는 5-10원의 헤테로아릴이고， 여 기서 상기 사이클로알킬， 헤테로사이클로알킬， 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 할로겐, -CF3, -NO2, -CN, -N3) - NH2, -OH, d-6알킬， C3-6사이클로알킬 및 3-6원의 헤 테로사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3 개의 치환기로 치환될 수 있고， 상기 ^ 은 0 내지 3 의 정수이고;
상기 R8, R9, R10, R11 및 R12 는 각각 독립적으로 H, 할로겐， — CF3, - N02, -CN, d-6알킬, C2-6알켄일， 또는， -(CH2)P-로 연결된， C3-6사이클로알 킬， 3-6원의 헤테로사이클로알킬， d-6알카노일， C2-6알케노일ᅵ ¾-6알키 노일， C6-10아릴 또는 5-10원의 헤 테로아릴이고， 이 때， p 는 0 내지 3 의 정수이 고ᅳ 상기 R8 및 R9는 서로 결합하여 5원 내지 6원의 고리를 형성할 수 있고， 상기 헤테로아릴, 헤테로아릴렌, 헤테로사이클로알킬， 헤테로사이클로 알킬렌 및 헤테로고리는 각각 독립적으로 N, ◦ 및 S 로 이루어진 군으로부 터 선택된 1 내지 3 개의 헤테로원자를 포함한다. 상기 다른 목적에 따라， 본 발명은 상기 본 발명의 화합물을 유효성분 으로 포함하고 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제의 과도한 활동을 원인으로 하는 비정상 세포 성장 질환의 예방 또는 치료에 사용되는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 화학식 1의 헤테로고리 유도체 화합물， 이의 약학적으 로 허용가능한 염， 이성질체， 수화물 또는 용매화물은 세포사멸 저해 단백질
(IAP) 및 단백질 키나제를 동시에 저해하는 작용을 하면서 부작용도 적으므 로， 이들을 함유하는 약학적 조성물은 세포사멸 저해 단백질 및 단백질 키나 제의 과도한 활동으로 유발되는 비정상 세포 성장 질환에 선택적이고 효과 적인 예방또는 치료제로 활용될 수 있다. 발명의 상세한설명 본 명세서에 사용되는 용어 '할로겐'은 다른 언급이 없으면, 불소， 염 소， 브롬 또는 요오드를 의미한다. .
본 명세서에 사용되는 용어 '알킬 '은 다른 언급이 없으면， 직쇄형， 고 리형 또는 분지형의 탄화수소 잔기를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 용어 '사이클로알킬1은 다른 언급이 없으면 사 이클로프로필 등을 포함한 환상 알킬을 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 용어 1아릴'은 다른 언급이 없으면 페닐， 나프틸 등을 포함하는 방향족 그룹을 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 용어 '헤테로사이클로알킬'은 다른 언급이 없으 면 0， N 및 S중에서 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 함유하는 모노사이클 릭 또는 바이사이클릭 이상의 환상 알킬을 나타낸다. 모노 헤테로사이클로알 킬의 예로는 피페리딘일, 모폴린일， 티아모폴린일， 피를리딘일， 이미다졸리딘 일， 테트라하이드로퓨란일， 피페라진일 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 사용되는 용어 '헤테로아릴 '은 다른 언급이 없으면 0， N 및 S 중에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 모노사이클릭 또는 바이사이클 릭 이상의 방향족 그룹을 의미한다. 모노사이클릭 헤테로아릴의 예로는 티아 졸릴， 옥사졸릴， 티오펜일， 퓨란일， 피를릴， 이미다졸릴， 이소옥사졸릴， 피라 졸릴， 트리아졸릴， 티아디아졸릴， 테트라졸릴， 옥사디아졸릴， 피리딘일， 피리 다진일， 피리미딘일， 피라진일 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다. 바이사이클릭 헤테로아릴의 예로는 인돌릴, 벤조티오 펜일， 벤조퓨란일, 벤즈이미다졸릴， 벤즈옥사졸릴， 벤즈이속사졸릴， 벤즈티아 졸릴， 밴즈티아디아졸릴， 벤즈트리아졸릴, 퀴놀린일， 이소퀴놀린일， 퓨린일， 퓨로피리딘일 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 화학식 1의 헤테로고리 유도체 화합물에 있어서， 바람직하 게는， 상기 X가 -0-, -NH, 또는 -N(d-3알킬) - 일 수 있다.
또한 바람직하게는， 상기 R1 및 R2 가 각각 독립적으로 상기 치환기 WA 로 치환되거나 비치환된 C5-10아릴 또는 5-10원의 헤테로아릴일 수 있 고; 상기 R3 가 H, 페닐옥시， 또는 벤질옥시일 수 있고; 상기 R4 가 t_부틸， 사이클로핵실， 또는 프로파질옥시에틸일 수 있고; 상기 R5 가 메틸일 수 있 고; 상기 R6 이 H 또는 메틸일 수 있고; 상기 R7 이 H 또는 메틸일 수 있 다.
또한， 상기 p 가 0 내지 2 의 정수일 수 있고， 상기 q 가 1 또는 2 일 수 있다.
또한， 상기 RA 및 RB 가 각각 독립적으로 H, 할로겐， -CF3, -NO2, -
CN, d-4알킬 또는 NR¾9 이거나 (여기서 R8 및 R9 는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같음); 또는 상기 RA 및 RB 가 서로 결합하여 방향족의 C5-6탄 소고리 또는 방향족의 5-6원 헤테로고리를 형성할 수 있으며， 이 때 상기 탄소고리 및 헤테로고리가 각각 독립적으로 H, 할로겐， -CF3> -CN, -NH2, - OH, d-4알킬， d-3알콕시， d— 3알킬티오 및 d-3알킬설포닐로 이루어지는 군 으로부터 선택되는 1 내지 3 개의 치환기로 치환될 수 있고, 상기 헤테로고 리가 N， ᄋ 및 S 로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3 개의 헤테로원자 를 포함한다. 본 발명의 보다 바람직한 화합물의 구체적인 예는 다음과 같다.
1) (S)-l-((S)-3,3ᅳ디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) -
N-(3-메톡시 _4-((4-((2- (메틸카바모일)페닐)아미노)피리미딘— 2-일)아 미노)페닐)피롤리딘— 2-카복스아마이드 염산염;
2) (R)-1-((R)— 3，3-디메틸 -2-((R)-2—(메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N_(4-((4-((4-플루오로 -2-메틸ᅳ 1H—인돌— 5-일)옥시)피리미딘—
2-일)아미노 )-3-메톡시페닐)피를리딘— 2—카복스아마이드 염산염; 3) (S)ᅳ l-((S)-3,3-디메틸ᅳ 2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) -
N-(3-메록시 -4-((4_((3-메록시페닐)아미노)피리미딘— 2-일)아미노)페 닐)피롤리딘— 2-카복스아마이드 염산염;
4) (S)-N-(4-((4— (3—아미노페녹시)피리미딘ᅳ 2-일)아미노) -3-메록시페 닐) -l-((S)-3,3-디메틸—2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
5) (S)-N-(4-((4-(3-아크릴아미도페녹시)피리미딘— 2—일)아미노 )-3-메록 시페닐 )-l-((S)— 3，3-디메틸—2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
6) (S)-N-{4_[4— (2,3ᅳ디메틸 -2H-인다졸 6-일아미노) -피리미딘 -2—일아 미노 -3 메톡시페닐 }—l-[(S)-3,3-디메틸 2— ((S)-2-메틸아미노 -프로 판아미도)부타노일] -피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
7) (S)-N— {4-[4-(2，3-디메틸 -2H-인다졸 -6ᅳ일) -메틸아미노]—피리미딘- 2—일아미노ᅳ 3-메톡시페닐 }-l-[(S)-3,3-디메틸 _2-((S)ᅳ 2-메틸아미노 -프로판아미도)부타노일] -피롤리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
8) (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) -
N-(4-((4-((4-(4ᅳ에틸피페라진 -1 일)페닐)아미노)피리미딘 -2-일)아 미노) -3-메톡시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
9) (S)-l-[(S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2—메틸아미노프로판아미도)부타노일] - N— (4-{4_[4-(4-에틸피페라진 1-일) -3-플루오로ᅳ페닐아미노] -피리 미딘—2-일)아미노) -3—메특시페닐)피를리딘 -2ᅳ카복스아마이드 염산염；
10) (S)-N-(4— ((4-((3-클로로 -4-(4-에틸피페라진 -1-일)페닐)아미노)피리 미딘 -2-일)아미노 )-2-메특시페닐) -l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메 틸아미노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염; 11) (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N— (4-((4-((4-(4-에틸피페라진 -1 일) -3-플루오로페닐)아미노)피 리미딘 -2-일)아미노 )-2_메특시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산 염；
12) (S)— l-[(S)-3,3-디메틸ᅳ 2— ((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일] -{4- [6-(3-메록시페닐아미노) -피리미딘 -4-일아미노] -3-메톡시페 닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
13) (S)-1-[(S)— 3，3-디메틸 -2-((S)-2-메틸아미노프로판아미도) -부타노 일] -N-(4-{6— [3-클로로 -4-(4-이소프로필피페라진 -1 일) -페닐아미 노] -피리미딘 -4-일아미노}-3-메록시페닐)피롤리딘 -2ᅳ카복스아마이드 염산염;
14) (S)-l_((S)-3,3-디메틸 -2ᅳ ((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N— (2-메록시 4-((4-((3—메톡시페닐)아미노)티에노 [3,2ᅳ d]피리미 딘 -2—일)아미노)페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드;
15) (S)-l-((S)-3,3_디메틸 2-((S)— 2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N— (6— ((4-((3-메특시페닐)아미노)티에노 [3ᅳ 2-d]피리미딘 -2-일) 아미노)피리딘 -3-일)피를리딘 -2ᅳ카복스아마이드;
16) (S)-lᅳ ((S)— 3,3-디메틸ᅳ 2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N-(4-((4— ((3 메록시페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘— 2-일) 아미노)페닐)피를리딘 -2ᅳ카복스아마이드;
17) (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N-(3-메록시 -4-((4-((3-메톡시페닐)아미노)티에노 [3,2_d]피리미 딘— 2-일)아미노)페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염；
18) (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N-(4-((4-((4— (4-에틸피페라진 1-일) -3—플루오로페닐)아미노)티 에노 [3,2-d]피리미딘 -2-일)아미노) -2—메톡시페닐)피롤리딘 -2—카복스 아마이드 염산염;
19) (S)— N-(4— ((4-((3-클로로 -2,4-디플루오로페닐)아미노)퀴나졸린 -2-일) 아미노 )— 2-메톡시페닐) -l-((S)-3,3-디메틸 -2— ((S)-2- (메틸아미노)프 로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염; 및
20) (S)-N-(4-((4-((4-브로모 -3-클로로 -2-플루오로페닐)아미노)퀴나졸린 -2-일)아미노 )_2，—메특시페닐) -1— ((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아 미노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2—카복스아마이드 염산염. 또한， 상기 화학식 1의 화합물들의 약학적으로 허용가능한 염， 이성질 체， 수화물 또는 용매화물도 가능하다. 본 발명은 또한 상기 화학식 1로 표시되는 피리미딘 접합고리 유도체 의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 약학적으로 허용가능한 염은 인체 에 독성이 낮고 모화합물의 생물학적 활성과 물리화학적 성질에 악영향을 주지 않는 것이 좋다. 약학적으로 허용가능한 염은 약학적으로 허용가능한 유리산과 화학식 1의 염기 화합물의 산부가염， 알칼리 금속염 (나트륨염 등) 과 알칼리 토금속염 (칼슴염 등)， 유기염기와 화학식 1의 카복실산의 유기염 기부가염， 아미노산부가염 등이 가능하다.
본 발명에 따르는 화합물의 바람직한 염의 형태로는 무기산 또는 유 기산과의 염을 들 수 있다. 이 때， 무기산은 염산, 황산， 질산， 인산， 과염소 산， 브롬산 등이 사용될 수 있다. 또한， 유기산은 초산, 메탄혈폰산， 에탄설 폰산 P-를루엔설폰산， 푸마린산， 말레산， 말론산， 프탈산， 숙신산， 젖산， 구연 산， 시트르산， 글루콘산， 타타르산， 살리실산， 말산， 옥살산， 밴조산， 엠본산， 아스파르트산， 글루탐산 등이 사용될 수 있다. 유기염기부가염 제조에 사용 될 수 있는 유기염기는 트리스 (하이드록시메틸)메틸아민， 다이사이클로핵실 아민 등이다. 아미노산부가염기 제조에 사용될 수 있는 아미노산은 알라닌， 글라이신 등의 천연아미노산이다. 본 발명에 따르는 화합물의 바람직한 염 중 특히 염산염이 바람직하다.
이와 같은 염은 통상적인 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어 상기한 화학식 1의 화합물을 메탄올， 에탄을， 아세톤， 1，4-다이옥산과 같은 물과 섞 일 수 있는 용매에 녹인 다음에 유리산 또는 유리염기를 가한 후에 결정화 시켜 제조할 수 있다.
한편, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물의 이성질체도 범주에 포함한 다. 예를 들어， 본 발명의 화합물은 비대칭 탄소중심을 가질 수 있으므로 R 또는 S 이성질체， 라세믹 화합물, 개개의 거울상이성질체 또는 흔합물， 개개 의 부분입체이성질체 또는 흔합물로서 존재할 수 있으며, 이들 모든 광학이 성질체 및 흔합물은 본 발명의 범위에 포함된다.
그 외에도， 화학식 1의 화합물의 용매화물 및 수화물 형태도 본 발명 의 범위에 포함된다. 이러한 수화물 또는 용매화물은 공지의 방법으로 제조 될 수 있으며'， 비독성 및 수용성인 것이 바람직하고, 물 또는 알코올계 용매 (특히, 에탄올 등)의 분자가 1개 내지 5개 결합된 수화물 또는 용매화물인 것이 바람직하다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물， 이의 약학적으로 허용가능 한 염， 이성질체， 수화물 및 용매화물 중 하나 이상을 포함하는 화합물 라이 브러리를 제공한다. 이와 같은 본 발명의 화합물은 세포사멸 저해 단백질 (IAP) 및 단백질 키나제에 대한 저해 활성이 모두 우수하다.
따라서， 본 발명의 화합물은 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백 질 키나제의 과도한 활동을 원인으로 하는 비정상 세포 성장 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
즉， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물， 이의 약학적으로 허용가능한 염， 이성질체， 수화물 또는 용매화물을 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제의 과도한 활동을 원인으로 하는 비정상 세포 성장 질환을 예 방 또는 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용하는 용도를 제공한다.
상기 단백질 키나제의 예로는 ALK, AMPK, Aurora A, Aurora B,
Aurora C, Axl, Blk, Bmx, BTK, CaMK, CDK2/cyclinE, CDK5/p25, CHKl, CK2, c-RAF, DMPK，- EGFR1, Her2, Her4, EphAl, EphBl, FAK, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, Fitᅳ 1, Flt-3, Fitᅳ 4， Fms, Fyn, GSK3beta, HIPKl, IKKbeta, IGFR-1R, IR, Itk, JAK2, JAK3, KDR, Kit, Lck, Lyn, MAPK1, MAPKAP-K2, MEKl, Met, MKK6, MLCK, NEK2, P70S6K, PAK2, PDGFR alpha, PDGFR beta, PDKl, Pim-1, PKA, PKBalpha, PKCalph, Plkl, Ret, ROCKᅳ I, Rskl, SAPK2a, SGK, Src, Syk, Tie-2, Tec, Trk, ZAP— 70 및 이 들의 조합이 가능하다.
이들 중 보다 바람직 한 단백질 키 나제의 예로는 EGFR, VEGFR, FLT-3, Bcr-Abl' ALK, IGF-1R, JAK, PDGFR, FGFR, FAK 및 이들의 조합 이 가능하다.
또한， 상기 비정상 세포 성 장 질환은， 위암， 폐암， 간암， 대장암， 소장 암， 췌장암， 뇌 암， 뼈 암， 흑색종， 유방암, 경화성선종， 자궁암， 자궁경부암， 두 경부암， 식도암， 갑상선암， 부갑상선암， 신장암, 육종， 전립선암， 요도암, 방광 암， 혈액암, 림프종， 섬유선종， 염증， 당뇨， 비만， 건선， 류마티스성 관절염， 혈관종, 급성 또는 만성 신장병， 관상동맥 재협착증， 자가면역 질환， 천식， 신 경 변성 질환， 급성 감염 및 혈관 분열로 인한 안구질환으로 이루어진 군으로 부터 선택될 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물， 이 의 약학적으로 허용가능 한 염， 이성 질체 수화물 또는 용매화물을 포유류에 투여하는 것을 포함하는， 포유류에서 의 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제의 과도한 활동을 원인으로 하는 비 정상 세포 성장 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명 의 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 등의 유효성분의 투여 량은 처 리되는 대상, 질병 또는 상태의 심각도， 투여 의 속도 및 처 방 의사의 판단에 따를 수 있다. 유효성분으로서 화학식 1의 화합 물은 사람을 포함하는 포유동물에 하루 0.01 내지 200 mg/kg (체중)， 바람직 하게는 10 내지 100 mg/kg (체중)의 양으로 1일 1~2회 또는 On/Off 스케줄 로 경구 또는 비 경구적 경로를 통해 투여 할 수 있다. 일부 경우에 있어서， 상기 언급된 범위 보다 적은 투여 량 수치가 보다 적합할 수 있고， 해로운 부 작용을 일으키지 않으면서도 보다 많은 투여 량이 사용될 수도 있으며， 보다 많은 투여량의 경우는 하루에 걸쳐 수회 의 적은 투여 량으로 분배될 수 있다. 나아가， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물， 이 의 약학적으로 허용가 능한 염， 이성 질체， 수화물 및 용매화물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함 하는 약학적 조성물을 제공한다. 이와 같은 약학적 조성물은 세포사멸 저 해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제의 과도한 활동을 원인으로 하는 비정상 세포 성장 질환의 예방 또는 치료의 용도로써 사용될 수 있다.
상기 단백질 키나제 및 비정상 세포질환의 구체적인 예는 앞서 예시 한 바와 같다.
본 발명의 약학적 조성물은 유효성분 외에 통상의 약학적으로 허용가 능한 담체， 보강제 및 부형제 등이 첨가되어 통상적인 방법에 따라 제제화될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 정게, 환제， 산제， 캅셀제, 시럽， 에멀젼, 마이크로에멀견 등의 다양한 경구 투여 형태， 또는 근육내， 정맥내 또는 피 하 투여와 같은 비경구 투여 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에 사용될 수 있는 부형제로는 감미제， 결합 게， 용해제， 용해보조제， 습윤제， 유화제， 등장화제， 흡착제， 붕해제， 산화방지 제， 방부제， 활탁제， 충진제, 방향제 등이 포함될 수 있다. 예를 들면 락토스, 덱스트로스, 슈크로스， 만니틀， 솔비를， 셀를로오스， 글라이신， 실리카， 탈크， 스테아린산， 스테린， 마그네슘 스테아린산염， 마그네슘 알루미늄 규산염， 녹 말, 젤라틴， 트라가칸트 고무， 알지닌산， 소듐 알진산염,， 메틸셀를로오스， 소 듐 카복실메틸셀를로오스, 아가， 물， 에탄올, 폴리에틸렌글리콜， 폴리비닐피 를리돈, 염화나트륨， 염화칼슘, 오렌지 엣센스， 딸기 엣센스， 바닐라 향 등을 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물이 경구 투여 형태로 제제화되는 경우， 사용 되는 담체의 예로는 셀를로오스， 규산칼슴， 옥수수전분， 락토오스， 수크로스， 덱스트로스， 인산칼슘， 스테아르산， 스테아르산 마그네슘， 스테아르산 칼슘， 젤라틴， 탈크， 계면활성제， 현탁제， 유화제， 희석제 등을 들 수 있다. 본 발명 의 약학적 조성물이 주사제 형태로 제제화되는 경우 상기 담체로는 물， 식염 수， 포도당 수용액， 유사 당수용액， 알콜， 글리콜 에테르 (예: 폴리에틸렌글리 콜 400)， 오일， 지방산， 지방산에스테르， 글리세라이드, 계면활성제， 현탁거 1， 유화제 등을 들 수 있다. 이하， 본 발명에 따르는 화학식 1의 화합물의 제조방법을 설명한다. 이하의 제조방법 및 실시예에서 다음 하기의 약자가사용된다:
Boc-: t-부특시카보닐 Cbz-: 2-벤질옥시카보닐아미노
DIPEA: Ν,Ν—디이소프로필에틸아민 DMAP: Ν,Ν-디메틸아미노피리딘
DMF: Ν,Ν-디메틸 포름아마이드 DMSO： 디메틸 설폭사이드
EtOAc: 에틸 아세테이트 Fmoc-: 9-플루오레닐옥시카보닐 Hex.: 핵산 HOBT: N-히드록시벤조트리아졸
Mass: 질량분석 크로마토그램 MC: 메틸렌클로라이드
MeOH: 메탄올 —OBn:ᅳ으벤질
THF: 테트라하이드로퓨란 TLC: 박막 크로마토그래피
Tie: t-부틸글라이신 Chg: 사이클로핵실글라이신
Ala: 알라닌 MeAla: 메틸알라닌
EDCI: 1ᅳ에틸 -3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 HATU: 2- 1H-9-아자벤조트리아졸 -1-일) -1，1，3,3ᅳ테트라메틸우로니움 핵 사플루오로포스페이트.
■ 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 하기 반웅식 1에 나타낸 합성 방법에 따라 제조할 수 있다. 반응식 1
Figure imgf000014_0001
상기 식 에서 , X， Zi, Z2) R1 내지 R6ᅳ RB, 및 Q은 명세서에서 정 의 한 바 와 같으며， PG는 보호기 (protection group)이다. 상기 반웅식 1에서， Y 그룹의 잔기 에 따라서 제 4 단계의 반웅 및 제
5 단계 반웅의 순서 가 바뀌어 진행될 수 있다. 상기 반웅과정을 단계별로 하 기에 예시 한다. 단계별 예시 에서 당량은 기준 물질 (출발 물질)의 당량 비율 로 명시하였고， 용매의 경우는 기준 물질의 mol 당. L로 표시하였다. 제 1 단계
화학식 7의 화합물 (l.eq), R^XH 화합물 (0.5~leq), 및 NaHC03(2~2.5eq)을 에 탄올 (0.2~0.3L/mol)과 THF(0.5~1.5L/mol)의 흔합 용매 하에서 75~95°C에서 40~60시 간 반웅시 킨다. 반응이 종료되면 반웅 용액을 식히고 유기 층을 분리하고 정 제하여 화학식 6의 화합물을 얻을 수 있다.
제 2 단계
화학식 6의 화합물 (leq), R2-NH2(0.1~0.2eq),
Pd(OAc)2(0.01~0.02eq), 잔트포스 (0.02~0.03eq) 및 Cs2CO3(0.2~0.3eq)를 1，4-다이옥산 (l~2L/mol) 용매 중에서 100~140°C에서 0.5 1.5시간 동안 교반한다. 반웅이 종료되면 반웅 용액을 식히고 유기층을 분리 하고 정 제하여 화학식 5의 화합물을 얻을 수 있다.
제 3 단계
철 (4~5eq)을 50% 에탄올 수용액 (40~50L/mol)에 묽히고 진한 염산 수용액 (0.03~0.06L/mol)에 첨가한 뒤 가열하여 활성화시 킨다. 여기 에 화학 식 5의 화합물 ( leq)을 첨가하고 0.5~1.5시 간 동안 80~120°C에서 환류시 킨 다. 반웅이 완결되면 여과 및 세척 한 후 증류하여， 유기층을 분리하고 정 제 하여 화학식 4의 화합물을 얻을 수 있다.
제 4 단계
화학식 4의 화합물 (leq), 화학식 3의 화합물 (l~2eQ) 및 HATU(2~4eq), DIPEA(4~5eq)를 MC(20~30L/mol) 용매 중에 상온에서 0.5~1.5시간 동안 반웅시 킨다. 반웅 용액을 세척 및 건조하고 정 제하여 화 학식 2의 화합물을 얻을 수 있다. 여 기서 상기 화학식 3의 화합물은 하기 제조예 1의 방법 에 따라 제조될 수 있다.
제 5 단계
화학식 2의 화합물 (leq)을 MC(50~70L/mol)에 녹인 후 염산 용액
(8~12eq)을 첨가하고 상온에서 3~5시 간 동안 반응시 킨다. 생성 된 고체를 여과하고 세척 한 후 감압 건조하여 최종적으로 화학식 1의 화합물을 얻을 수 있다. 이하， 본 발명을 실시 예에 의 해 상세히 설명 한다. 단 하기 실시 예는 본 발명을 예시하는 것 일 뿐， 본 발명 이 하기 실시 예에 의해 한정되는 것은 아니다. 이하에서 질량 분석은 워터스 (Waters)사의 MicroMass ZQTM를 사 용하였다. 제조예 1: (S)-l— ((S)-2-((S)-2-(t-부특시카보닐 (메틸)아미노)프로판아미도) - 3,3-디메틸부타노일)피를리딘— 2-카복실산 단계 1: (S)-2-벤질 1-t-부틸 피를리 딘ᅳ 1,2—디카복실레이트
Boc-Pro-OH(50.0g, 0.23mol)를 디클로로메탄 (500mL)에 용해한 후， 여 기 에 EDCI(89.1g, 0.46mol), DMAP(5.7g, 0.05mol), DIPEA(162mL, 0.93mol) 및 밴질알콜 (48mL, 0.46mol)을 적가하였다. 반웅 용액을 상온에서 12시간 동안 교반하고， 5% 시트르산 수용액으로 여 러 번 세척 하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조한 후， 감압하에 여과 및 증류하여 노란색 오일상 의 표제 화합물 (70.0g, 99%)을 수득하였다.
lH NMR(300 MHz, CDC13): 57.32(m, 5H), 5.20(m, 2H), 4.27(d, 1H), 3.52(m, 2H), 1.91(m, 4H), 1.35(s, 9H).
MS(ESI+， m/z) : 306 [M+ H]+ . 단계 2: (S)-벤질 피를리딘 -2-카복실레이트 염산염
이 전 단계 1에서 수득한 화합물 (70.0g, 0.23mol)을 4M 염산 /다이옥산 용액 (175mL)에 녹인 후， 상온에서 1시 간 동안 교반하였다. 반웅 후 용액을 감압 농축하고， 디에 틸 에 테르로 재결정하여， 흰색 고체상의 표제 화합물 (42.6g, 77%)을 수득하였다.
:H NMRC300 MHz, CDC13): ( 7.32(m, 5H), 5.20(m, 2H), 4.27(d, 1H), 3.52(m, 2H), 1.91(m, 4H).
MS(ESI+， m/z)： 206 [M+ H ] + . 단계 3: (S)-벤질 l-((S)-2-(t-부톡시카보닐아미노 )ᅳ3，3-디 메틸부타 노일 )피롬리 딘ᅳ 2-카복실레이트
이 전 단계 2에서 수득한 화합물 (30.0g, 0.12mol)을 디클로로메탄 (300mL)에 용해한 후， 여 기에 Boc-Tle-OH(26.7g, 0.12mol), HATU(56.6g, 0.15mol) 및 DIPEA(43mL, 0.25mol)을 적 가하였다. 상기 반웅 용액을 상온 에서 4시간 동안 교반하고， 불용 성분을 여과를 통해 제거한 뒤， 5% 시트르 산 수용액으로 여러 번 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조하고， 감 압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 크로마토그래피 (이동상 MC/메탄올)로 정제 하여, 투명한 오일상의 표제 화합물 (47.0g, 91%)을 수득하였다.
XH NMR(300 MHz, CDC13): ^7.33(m, 5H), 5.15(m, 2H), 4.61(m, 2H),
3.84(m, 2H), 2.25(m, 2H), 1.98(m, 2H), 1.43(s, 9H), 0.98(s, 9H).
MS(ESI+ , m/z): 419 [M+H]+. 단계 4: (S)_벤질 l-((S)-2-아미노 -3,3-디메틸부타노일)피를리딘— 2- 카복실레이트 염산염
이전 단계 3에서 수득한 화합물 (47.0g, ailmol)을 4M염산 /다이옥산 용액 (115mL)에 녹인 후 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료된 후 용액을 감압 농축하여， 투명한 오일상의 표제 화합물 (39.0g, 98%)을 수득하 였다.
¾ NMR(300 MHz, CDC13): 57.35(s, 5H), 5.18(q, 2H), 4.67(t, IH),
4.02(m, 2H), 3.56(m, IH), 2.32(m, IH), 1.93(m, 3H), 1.13(s, 9H).
MS(ESI+, m/z): 319 [M+ H]+. 단계 5: (S)—벤질 l-((S)-2-((S)— 2— (t_부톡시카보닐 (메틸)아미노)프로 판아미도) -3,3-디메틸부타노일)피를리딘 -2-카복실레이트
이전 단계 4에서 수득한 화합물 (29.0g, 0.08mol)을 디클로로메탄 (300mL)에 용해한 후， 여기에 Bocᅳ MeAla-OH(24.9g, 0.12mol), EDCI(23.5g, 0.12mol) 및 DIPEA(43mL, 0.25mol)를 적가하였다. 상기 반응 용액을 상온에서 12시간 동안 교반하고， 5% 시트르산 수용액으로 여러 번 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조하고， 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여， 투명한 오일상의 표제 화합물 (30.0g, 72%)을 수득하였다.
¾ NMRC300 MHz, CDC13): ^7.33(m, 5H), 5.16 ， 2H), 4.16(m, IH), 4.54(m, IH), 3.84(m, IH), 3.66(m, IH), 2.77(s, 3H), 2.18(m, IH), 1.95(m, 3HX 1.47(s, 9H), 1.29(m, 5H), 0.96(s, 9H).
MS(ESI+, m/z): 504 [M+H]+. 단계 6: (S)_l-((S)-2— ((S)— 2-(t-부톡시카보닐 (메틸)아미노)프로판아 미도) -3,3-디메틸부타노일)피를리딘 -2-카복실산
이전 단계 5에서 수득한 화합물 (28.0g, 0.06mol)을 메탄올 (300mU에 용해한 후， 10% Pd/C(2.8g)를 넣고 수소화 반웅 상태에서 1.5시간 동안 교 반하였다. 불용 성분을 여과를 통해 제거하고， 용액을 감압 농축한 후， 컬럼 크로마토그래피로 정제하여， 흰색 고체상의 표제 화합물 (21.0g, 91%)을 수득 하였다.
lH NMRO00 MHz, CDC13): <54.57(m, 3H), 3.83(m, 1H), 3.65(m, 1H), 2.75(s, 3H), 2.31(m, 1H), 2.01(m, 3H), 1.46(s, 9H), 1.29(d, 3H), 0.98(s, 9H).
S(ESI+, m/z): 414 [M+H]+. 실시예 1: (S)— l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N-(3-메록시 -4-((4-((2- (메틸카바모일)페닐)아미노)피리미딘 -2-일)아미 노)페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드염산염 단계 1: 2-((2-클로로피리미딘 -4-일)아미노) -N-메틸벤즈아마이드
2-아미노ᅳ N-메틸벤즈아마이드 (l.Og, 6.66mmol), 2, 4-디클로로피리미 딘 (1.5g, 9.99mmol), 및 NaHC03(1.7g, 19.98mmol)를 에탄올 (2.5mL)/THF(10mL) 흔합 용매에 첨가하고 85°C에서 48시간 동안 교반하 였다. 반웅 온도를 상온으로 식힌 후 반웅 용액을 에틸 아세테이트로 희석한 다음， 1N 염산 수용액， 물 및 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (560mg, 32%)을 수득하였다.
NMRO00 MHz, CDC13): ^11.00(s, 1H), 8.49(d, 1H), 8.10(m, 2H), 7.48-7.40(m, 2H), 6.99(t, 1H), 6.67(br, 1H), 6.56(d, 1H), 2.98(d, 3H).
MS(ESI+, m/z): 263 [M+H]+. 단계 2: 2-((2-((2-메톡시 -4-니트로페닐)아미노)피리미딘 -4-일)아미 노) -N-메틸벤즈아마이드
이전 단계 1에서 얻은 화합물 (0.56g, 9.99mmol), 2-메특시 -4-니트로 아닐린 (239mg, 1.42mmol), Pd(OAc)2(32mg, 0.14匪 ol), 잔트포스 (164mg, 0.28mmol), 및 Cs2C03(926mg, 2.84mmol)를 1,4ᅳ다이옥산 (15mL)에 용해 시키고， 120°C에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 온도를 상은으로 식힌 후 반웅 용액을 클로로포름 /이소프로필알콜 (3:1， v/v) 용액으로 희석한 다음， 물 과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (379mg, 45%)을 수득하였다.
¾ NMRC300 MHz, CDC13): δ 10.51(s, 1H), 8.72(d, 1H), 8.45(d, 1H),
8.15(d, 1H), 7.89(m, 2H), 7.75(d, 1H), 7.54-7.48(m, 2H), 7.10(t, 1H), 6.33(d, IH), 6.24(br, IH)ᅳ 4.01(s, 3H), 3.02(d, 3H).
MS(ESI+, m/z): 395 [M+H]+. 단계 3: 2-((2-((4ᅳ아미노 _2_메톡시페닐)아미노)피리미딘 -4ᅳ일)아미 노)— N-메틸벤즈아마이드
철 262mg(4.69mmol)을 50% 에탄을 수용액 (40mL)에 묽히고 진한 염산 수용액 (0.04mL)을 첨가한 후 반웅 온도를 10CTC로 올려서 활성화시켰 다. 여기에 이전 단계 2에서 얻은 화합물 (370mg, 0.94mmol)을 첨가하고 1 시간 동안 100°C에서 환류시켰다. 반웅이 완결되면 반웅 용액을 샐라이트 패드에 감압 여과하고， 클로로포름 /이소프로필알콜 (3:1, v/v) 용액 80mL로 세척한 후 얻어진 여과액을 감압 증류하였다. 얻어진 고체를 클로로포름 /이 소프로필알콜 (3:1， v/v) 용액에 녹인 후 포화 NaHC03 수용액과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류하 여 표제 화합물 (288 rag, 84%)을 수득하였다.
:H NMR(300 MHz, CDC13): δ 10.32(br, IH), 8.56(d, IH), 8.01-
7.95(m, 2H), 7.42-7.37(m, 2H), 7.13(br, IH), 6.99(t, IH), 6.35(br, IH), 6.30—6.27(m, 2H), 6.10(d, IH), 3.80(s, 3H), 2.97(d, 3H).
MS(ESI+, m/z): 365 [M+H]+. 단계 4: t-부틸 ((S)-l-(((S)-l-((S)-2-((3—메톡시ᅳ 4-((4-((2— (메틸 카바모일)페닐)아미노)피리미딘 -2—일)아미노)페닐)카바모일)피를리딘ᅳ1—일) - 3, 3_디메틸— 1-옥소부탄 -2-일)아미노 )— 1-옥소프로판 -2-일) (메틸)카바메이트 이전 단계 3에서 얻은 화합물 (288mg, 0.79mmol), 상기 제조예 1에서 얻은 화합물 (490mg, 1.19mmol), HATU(902mg, 2.37mmol), 및 DIPEA(0.70mL, 3.95mmol)를 MC(20mL)에 첨가하고， 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반웅 용액을 MC로 묽힌후 포화 NaHC03 수용액과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여， 표제 화합물 (264mgᅳ 44%)를 수득하였 다.
lU NMR(300 MHz, CDC13): δ 10.18(br, IH), 9.46(br, IH), 8.45(d,
IH), 8.18(d, IH), 7.96(d, IH), 7.45ᅳ 7.37(m, 3H), 7.22(br, IH), 7.00(br, IH), 6.90-6.83(m, 2H), 6.66(br, IH), 6.03(d, IH), 4.76(m, 2H), 4.65(d, IH), 3.86(m, IH), 3.82(s, 3H), 3.71(m, IH), 2.98(d, 3H), 2.77(s, 3H), 2.19-2.00(m, 4H), 1.44(s, 9H), 1.32(d, 3H), 1.00(s, 9H).
MS(ESI+, m/z): 760 [M+H]+. 단계 5: (S)-l-((S)-3.3-디 메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도) 부타노일) -N-(3-메톡시 ~4-((4-((2- (메틸카바모일 )페닐)아미노)피 리 미 딘 -2- 일)아미노)페닐)피롤리 딘— 2-카복스아마이 드 염산염
이 전 단계 4에서 얻은 화합물 (260mg, 0.34mmol)을 MC(20mL)에 녹 인 후 염산 용액 (0.9mL, 3.42mmol, 4N 다이옥산 용액)을 첨가하였다. 반웅 용액을 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 생성 된 고체를 감압 여과하고 MC 와 디에 틸 에 테르로 세척 한 후 감압 건조하여 표제 화합물 (202mg, 85%)을 수득하였다.
¾ NMR(300 MHz, CDC13): 10.37(s, IH), 9.38(s, IH), 8.51(d, IH), 8.24(d, IH), 8.01(d, IH), 7.89(d, IH), 7.50(s, IH), 7.45— 7.39(m, 3H), 6.97(t, IH), 6.80(dd, IH), 6.55(m, IH), 6.12(d, IH), 4.81(m, IH), 4.61(d, IH), 3.89(m, IH), 3.85(s, 3H), 3.68(m, IH), 2.98(d, IH), 2.55(m, IH), 2.40(s, 3H), 2.14—1.86(m, 4H), 1.32(d, 3H), 1.02(s, 9H).
MS(ESI+ , m/z): 660 [M+ H]+ . 실시예 2: (R)-l-((R)-3,3-디메틸 -2-((R)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일) -N-(4-((4-((4-플루오로— 2-메틸 -1H-인돌 -5-일)옥시)피리미딘 -2-일) 아미노 )-3-메록시페닐)피를리딘 -2—카복스아마이드 염산염 실시 예 1의 단계 1에서 2-아미노 -N-메틸벤즈아마이드 대신 4ᅳ플루 오로 -2-메틸 - 1H—인돌 -5ᅳ올을 사용하는 것을 제외하고는， 실시 예 1의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (120mg, 94%)을 수득하였 다.
MS(ESI+ , m/z): 675 [M+ H]+ . 실시예 3: (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N-(3- 록시 -4-((4— ((3-메록시페닐)아미노)피리미딘 -2-일)아미노)페닐) 피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 단계 1 : 2-클로로—N-(3-메톡시페닐)피 리미딘ᅳ 4-아민
2-아미노 -N-메틸벤즈아마이드 대신 3-메톡시 아닐린을 사용한 것을 제외하고는， 실시 예 1의 단계 1과 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (1.96g, 96%)을 수득하였다.
:H NMR(300 MHz, CDC13): δ 8.15-8.13(d, IH), 7.34-7.28(t, IH), 6.94(brs, IH), 6.89-6.85(m, 2H), 6.81-6.77(dd, IH), 6.65— 6.63(d, IH), 3.83(s, 3H). 단계 2: N2-(2-메톡시 -4-니트로페닐) -N4-(3-메톡시페닐)피리미딘ᅳ 2,4-디아민
이전 단계 1에서 얻은 화합물 (500mg, 2.12mmol), 및 2—메록시—4-니 트로아닐린 (364mg, 2.12mmol)을 2-부탄올 (5mL)에 녹이고 TFA(0.16mL, 2.12mmol)을 적가하였다. 반웅 온도를 100~120°C까지 가열하고 12시간 교 반하였다. 반웅 온도를 상온으로 식힌 후 2-부탄을로 세척하며 고체를 여과 하여， 표제 화합물 (484mg, 62%)을 수득하였다.
:H NMR(300 MHz, DMSO): δ SAOis, 1Η)' 8.13-8.11W, IH), 7.86(s, IH), 7.84-7.81(d, IH), 7.34-7.29(t, IH), 7.20(s, IH), 7.13-7.10(d, IH), 6.79-6.77(d, IH), 6.50-6.48(d, IH), 4.02(s, 3H), 3.74(s, 3H). 단계 3: N2-(4_아미노 2-메록시페닐) N4-(3—메톡시페닐)피리미딘— 2,4-디아민
2-((2-((2-메록시 -4-니트로페닐)아미노)피리미딘 -4-일)아미노) -N-메 틸벤즈아마이드 대신 이전 단계 2에서 얻은 화합물을 사용한 것을 제외하고 는， 실시예 1의 단계 3과 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (341.9mg, 77%)을 수득하였다.
λΗ NMRO00 MHz, CDC13): δ 8.07(s, IH), 8.04ᅳ 8.02(d, IH), 7.28- 7.22(t, IH), 7.13(brs, IH), 6.96-6.90(t, IH), 6.95(s, IH), 6.70-6.66(dd, IH), 6.54(brs, IH), 6.33(s, IH), 6.30(s, IH), 6.17-6.15(d, IH), 3.83(s, 3H), 3.80(s, 3H), 3.53(brs, 2H). 단계 4: t-부틸 ((S)-l-(((S)-l-((S)-2-((3-메톡시 -4-((4-((3-메톡시 페닐)아미노)피리미딘— 2-일)아미노)페닐)카바모일)피를리딘 -1—일) -3,3-디메 틸— 1-옥소부탄 -2-일)아미노 )-1-옥소프로판— 2-일) (메틸)카바메이트
이전 단계 3에서 얻은 화합물 (340mg, l.Olmmol), 제조예 1에서 얻은 화합물 (1.25g, 3.02匪 ol), 및 EDCI(966mg, 5.04mmol)을 피리딘 /Ν,Ν-디메 틸포름아마이드 (10:1) 용액에 적가한 후， 40°C에서 12시간 교반하였다. 반웅 용액을 상온으로 식힌 후 포화 황산구리 수용액과 에틸 아세테이트로 추출 하였다. 분리된 유기층을 포화 NaHC03 수용액과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류하고 컬럼 크로 마토그래피로 정제하여， 표제 화합물 (123mg, 56%)을 수득하였다.
lW NMRC300 MHz, CDC13): δ 9.05(brs, IH), 8.15-8.13(d, IH), 7.46(s, IH), 7.33-7.26(d, IH), 7.18-7.13(t, IH), 6.93— 6.90(d, IH), 6.81— 6.78(d, IH), 6.73(s, IH), 6.65-6.63(d, IH), 6.41-6.39(d, IH), 4.83- 4.81(d, IH), 4.71(brs, IH), 4.66— 4.62(m, IH), 3.86-3.84(m, 2H), 3.77(s 3H), 3.73(s, 3H), 2.80(s, 3H), 2.57(m, IH), 2.21-2.06(m, 4H), 1.50(s, 9H) 1.29-1.27(d, 3H), 1.00(s, 9H). 단계 5: (S)-1-((S)— 3,3—디 메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도) 부타노일) -N-(3-메톡시ᅳ4-((4-((3—메톡시페닐)아미노)피 리미 딘 -2—일)아미 노)페닐)피롤리딘 -2-카복스아마이드 염산염
출발 물질로서 이 전 단계 4에서 얻은 화합물을 사용하고， MC 대신 에 틸 아세테이트를 사용한 것을 제외하고는， 실시 예 1의 단계 5과 동일한 절 차를 반복하여 표제 화합물 (33mg, 29%)을 수득하였다.
MS(ESI+ , m/z): 633 [M+ H]+ . 실시예 4: (S)-N— (4— ((4— (3-아미노페녹시)피리미딘— 2-일)아미노 )-3-메록시 페닐) -l-((S)-3,3—디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로관아미도)부타노일)피를 리딘 -2-카복스아마이드 염산염 단계 1: 2-클로로 -4— (3-니트로페녹시 )피 리미딘
2,4-디클로로피 리 미딘 (3.0g, 20.14mmol), 3-니트로페놀 (2.8g, 20.14mmol), 및 Cs2C03(15.7g, 48.33mmol)를 DMSO(35mL)에 첨가하고 상온에서 2시 간 동안 교반하였다. 반웅 용액에 물 (35mL)을 첨가하고 30분 간 교반한 후 생성된 고체를 감압 여과하고 물과 핵산으로 세척하였다. 얻어 진 화합물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (3.9g, 77%)을 수 득하였다.
¾ NMRC300 MHz, DMSO-c/6 : (？ 8.67(d, IH), 8.20(m, 2H), 7.79(m, 2H), 7.30(d, 2H).
MS(ESI+ , m/z): 252 [M+ H]+ . 단계 2: 3-메톡시 -4_((4_(3-니트로페녹시 )피 리미딘 -2—일)아미노)벤조 이 전 단계 1에서 얻은 화합물 (2.6g, 10.33mmol), .4-아미노 -3-메톡시 벤조산 (1.7g, 10.33mmol), 및 트리플루오로아세트산 (0.767mL, 10.33mmol) 을 2-부탄을에 첨가하고， 10C C에서 4시간 동안 교반하였다. 반웅 온도를 상온으로 식힌 후 NaHC03 수용액과 브라인으로 세척 하였다. 물층을 EtOAc 로 3희 추출한 후 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음 감압 증류하였다. 얻머 진 고체를 EtOAc 하에서 30분간 교반한 후 감압 여과하여 표제 화합물 (l.Og, 25%)을 수득하였다. Ή NMRO00 MHz, DMS으 c/6): δ 8A6(d, 1H), 8.20(m, 3H), 7.79(m, 3H), 7.42(d, 1H), 7.21(dd, 1H), 6.69(d, 1H), 3.85(s, 3H).
MS(ESI+, m/z): 383 [M+H]+. 단계 3: t-부틸 (3-메톡시 -4-((4-(3-니트로페녹시)피리미딘 -2—일)아 미노)페닐)카바메이트
이전 단계 2에서 얻은 화합물 (l.Og, 2.62mmol), DPPA(0.85mL, 3.92mmol), 및 TEA(0.55mL, 3.92mmol)을 t—부탄을에 첨가하고， 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 온도를 상온으로 식힌 후 EtOAc로 묽힌 다음， NaHC03 수용액과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다 음 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여， 표제 화 합물 (470mg, 40%)을 수득하였다. .
lH NMRC300 MHz, DMS으 ^9.17(br, 1H), 8.31(d, 1H), 8.14(m, 1H), 8.10(d, 1H), 8.04(s, 1H), 7.73(d, 2H), 7.32(m, 1H), 7.21(s, 1H), 6.65(m, 1H), 6.47(d, 1H), 3.69(s, 3H), 1.45(s, 9H).
MS(ESI+, m/z): 454 [M+H] + . 단계 4: 2-메톡시ᅳ N1— (4— (3-니트로페녹시)피리미딘ᅳ 2-일)벤젠— 1,4- 디아민
이전 단계 3에서 얻은 화합물 (470mg, 1.04mmol) 및 TFA(1.54mL,
20.73mmol)를 MC(5mL)에 첨가하고， 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반 웅 용액을 NaHC03 수용액과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음 감압 하에 여과 및 증류하여 표제 화합물 (343mg, 97%)을 수득 하였다.
lH NMR(300 MHz, DMSO-c6): δ 8.24(d, 1H), 8.12(m, 1H), 8.07(s,
1H), 7.88(s, 1H), 7.71(m, 2H)ᅳ 6.99(d, 1H), 6.36(d, 1H), 6.18(d, 1H), 5.87(m, 1H), 4.87(br, 2H), 3.63(s, 3H).
MS(ESI+, m/z): 354 [M+H]+. 단계 5: tᅳ부틸 ((S)-1-(((S)-1—((S)— 2— ((3-메톡시— 4-((4-(3-니트로 페녹시)피리미딘 -2-일)아미노)페닐)카바모일)피롤리딘 -1-일) -3，3ᅳ디메틸- 1-옥소부탄 -2-일)아미노 )ᅳ1—옥소프로판 -2—일) (메틸)카바메이트
이전 단계 4에서 얻은 화합물을 출발물질로 사용하는 것을 제외하고 는， 실시예 1의 단계 4와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (434mg, 60%)을 수득하였다.
l NMR(300 MHz, OMSO-d ): δ 9.91(s, 1Η), 8.33(d, 1H), 8.15- 8.11(m, 2H), 8.07(s, IH), 7.74-7.73(m, 2H), 7.68(d, IH), 7.41(d, 2H), 7.32(d, IH), 6.50(d, IH), 4.57(m, IH), 4.50(d, IH), 4.39(m, IH), 3.71(s, 3H), 3.69(m, 2H), 2.74(s, 3H), 2.13(m, 2H), 1.86(m, 2H), 1.38(s, 9H), 1.20(d, 3H), 0.95(s, 9H).
MS(ESI+， m/z)： 749 [M+ H ] + . 단계 6: (S)_N— (4-((4_(3-아미노페녹시 )피리미딘 -2-일)아미 노 )_3—메 톡시페닐)— l-((S)-3,3—디 메틸 -2ᅳ ((S)-2— (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염
이 전 단계 5에서 얻은 화합물 (49mg, 0.07mmol) 및 염산 용액 (0.4mL,
1.36mmol, 4N 다이옥산 용액 )을 MC(5mL)에 첨 가하고, 상온에서 1시간 동 안 교반하였다. 생성 된 고체를 감압 여과한 후 디 에 틸 에 테르로 세척 한 다음 감압 건조하여 표제 화합물 (42mg, 89%)을 수득하였다.
:H NMR(300 MHz, DMSO-i 6): δ 10.28(s, IH), 9.52(br, IH), 8.89(br, IH), 8.56(d, IH), 8.35(d, IH), 7.55-7.44(m, 2H), 7.36(d, IH), 7.16-7.06(m, 3H), 7.01(d, IH), 6.65(d, IH), 4.51-4.44(m, 2H), 3.96(m, IH), 3.74(s, 3H), 3.67(m, IH), 2.44(s, 3H), 2.14-1.86(m, 4H), 1.32(d, 3H), 1.00(s, 9H).
MS(ESI+ , m/z): 619 [M+ H]+ . 실시예 5: (S)-N-(4— ((4— (3-아크릴아미도페녹시)피리미딘 -2-일)아미노 )-3- 메록시페닐) -1— ((S)— 3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 단계 1: t-부틸 ((S)- l-(((S)- l-((S)-2-((4-((4-(3-아크릴아미도페녹 시 )피 리미딘 -2-일)아미노 )-3_메톡시 페닐)카바모일)피롤리딘 1-일) -3，3-디 메틸 -1-옥소부탄 -2-일)아미 노) -1-옥소프로판— 2-일) (메 틸)카바메 이트
실시 예 4에서 단계 5에서 얻은 화합물 (200mg, 0.28mmol) 및 DIPEA(0.145mL, 0.84 mmo)를 MC(5mL)에 용해시 키고， 여기에 아크릴로일 클로라이드 (0.033mL, 0.42mmol)를 0°C에서 첨가하였다. 반응 용액을 상온 에서 14시간 동안 교반한 후 EtOAc로 희석하고 물과 브라인으로 세척 하였 다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음 감압 하에 여 과 및 증류한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여， 표제 화합물 (50mg, 23%)을 수득하였다.
MS(ESI+ , m/z): 773 [Μ+ Η]+ · 단계 2: (S)ᅳ Ν-(4-((4-(3-아크릴아미도페녹시 )피 리 미 딘 ᅳ 2-일)아미 노) -3-메톡시페닐) -l-((S)-3,3—디메틸 -2-((S)— 2- (메틸아미노)프로판아미 도)부타노일)피롤리딘 -2-카복스아마이드 염산염
이 전 단계 1에서 얻은 화합물을 출발물질로 사용하는 것을 제외하고， 실시 예 1의 단계 5와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (39mg, 85%)을 수득하였다.
MS(ESI+ , m/z): 673 [M+ H]+ . 실시예 6: (S)-N-{4-[4-(2,3-디메틸 -2H-인다졸 -6-일아미노) -피리미딘 -2- 일아미노 -3-메톡시페닐 }-l-[(S)— 3，3-디메틸 -2-((S)-2-메틸아미노-프로판아 미도)부타노일] -피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 실시 예 1의 단계 1에서 2-아미노 -N-메틸벤즈아마이드 대신 2, 3-디 메틸 -2H-인다졸 -6—일아민을 사용하는 것을 제외하고는, 실시 예 1의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (30mg, 52%)을 수득하였 다.
MS(ESI+ , m/z): 671 [M+ H]+ . 실시예 7: (S)-N-{4-[4-(2,3-디메틸 -2H-인다졸 -6-일) -메틸아미노] -피리미 딘 -2-일아미노 -3-메특시페닐 }-l-[(S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2-메틸아미노-프 로판아미도)부타노일 ] -피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 실시 예 1의 단계 1에서 2—아미노 -N-메틸벤즈아마이드 대신 2，3-디 메틸 -2H-인다졸ᅳ 6-일메틸아민을 사용하는 것을 제외하고는， 실시 예 1의 단 계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (43mg, 62%)을 수득하 였다.
lH NMR(300 MHz, DMSO- c/6): δ 10.20(s, 1H), 9.27(br, 1H), 8.89(brᅳ 1H), 7.74(d, 1H), 7.62(d, 1H), 7.48(s, 1H), 7.37(s, 1H), 6.95- 6.88(m, 2H), 6.80(d, 1H), 5.83(d, 1H), 4.83-4.64(m, 3H), 4.12(s, 3H), 3.88(m, 1H), 3.85(s, 3H), 3.70-3.68(m, 1H), 3.55(s, 3H), 2.79(s, 3H), 2.64(s, 3H), 2.48-2.44(m, 1H), 2.19-2.00(m, 3H), 1.33(d, 3H), l.OKs, 9H).
MS(ESI+ , m/z): 685 [M+ H] + . 실시예 8: (S)— l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노 일) -N-(4-((4-((4-(4-에틸피페라진 -1-일)페닐)아미노)피리미딘 -2-일)아미 노) -3-메록시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 실시 예 1에서 단계 1에서， 2-아미 노 -Nᅳ메 틸벤즈아마이드 대신 4-(4— 에 틸피페라진— 1—일)아닐린을 사용하고, NaHC03 대신 K2C03을 사용하고， EtOH/THF 대신 DMSO를 사용하는 것을 제외하고는， 실시 예 1의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (130mg, 82%)을 수득하였 다.
¾ NMR(300 MHz, CDC13): (？ 9.49(s, IH), 7.99(d, IH), 7.87(d, 1H)' 7.72(d, IH), 7.41(br, IH), 7.22(m, IH), 7.05(d, 2H), 6.90(m, IH), 6.80(d, 2H), 6.17(d, IH), 5.42(br, IH), 4.80(d, IH), 4.61(t, 2H), 3.88(m, 2H), 3.66(s, 3H), 3.20(m, 4H), 2.65(m, 4H), 2.52(q, 2H), 1.88(m, 4H), 1.31(d, 3H), 1.15(t, 3H), l.OKs, 9H).
MS(ESI+ , m/z): 715 [M+ H] + . 실시예 9: (S)— l-[(S)-3,3—디메틸 2-((S)-2-메틸아미노프로판아미도)부타노 일 ] -N— (4— {4- [4-(4-에틸피페라진 - 1-일) -3—플루오로-페닐아미노] -피리미딘 -2-일)아미노 )-3-메특시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 실시 예 1에서 단계 1에서 2-아미노 -N-메틸벤즈아마이드 대신 4-(4- 에 틸피페라진 -1-일) -3-플루오로 -페닐아민을 사용하는 것을 제외하고는， 실 시 예 1의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (130mg, 70%)을 수득하였다.
¾ NMR(300 MHz, DMSO-d6):^ 9.22(s, IH), 8.16(d, IH), 7.75(d, IH), 7.51 (br, IH), 7.25(s, IH), 7.03-6.92(m, 3H)7 6.72-6.62(m, 2H), 4.81-4.63(m, 3H), 3.92-3.86(m, 2H), 3.83(s, 3H), 3.70-3.64(m, 2H), 3.35-3.25(m, 3H), 2.92-2.80(m, 2H), 2.79(s, 3H), 2.70-2.69(m, IH), 2.47-2.44(m, IH), 2.18-2.00(m, 4H), 1.43(d, 3H), 1.37(d, 3H), l.OO s, 9H).
MS(ESI+ , m/z): 733 [M+ H]十. 실시예 10: (S)— N-(4-((4-((3-클로로 4-(4-에틸피페라진 -1-일)페닐)아미노) 피리미딘 -2-일)아미노 )-2-메록시페닐) -l-((S)-3,3-디메틸 -2— ((S)-2- (메틸아 미노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 단계 1 : 2-클로로 N-(3-클로로 -4-(4-에 틸피 페라진 -1-일)페닐)피 리 미딘— 4-아민
2,4-디클로로피 리미 딘 (323mg, 2.17mmol)과 3—클로로 4-(4-에 틸피 페라진 -1-일)아닐린 (520mg, 2.17mmol)을 1-부탄올 (7mL)에 용해한 후 DIPEA(0.76mL, 4.34mmol)을 적가하였다. 반웅 은도를 100~120°C로 높여 12시간 교반하였다. 반웅 온도를 상온으로 식힌 후， 에틸 아세테이트와 물로 추출하고 분리된 유기층은 Na2S04로 건조하여 감압 증류하였다. 수득한 잔 류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (500mg, 65%)을 수득 하였다.
:H NMRO00 MHz, CDC13): δ 8.14-8.12(d, IH), 7.34-7.33(d, IH), 7.21-7.17(dd, IH), 7.09-7.07(d, IH), 6.91(brs, IH), 6.53-6.51(d, IH), 3.12(br, 4H), 2.67(br, 4H), 2.56-2.49(q, 2H), 1.17-1.12(t, 3H). 단계 2-1: ((S)-1-((S)ᅳ 3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미 도)부타노일) -N-(2-메특시ᅳ4ᅳ니트로페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드
제조예 1에서 얻은 화합물 (500mg, 2.97mmol), 2-메특시 -4—니트로아 닐린 (1.85g, 4.46匪。1)， 및 EDCI(2.85g, 14.85mmol)을 피리딘 (lOmL)에 녹 이고 45°C에서 12시간 교반하였다. 온도를 상온으로 식히고 에틸 아세테이 트와 포화 NaHC03 수용액으로 추출하였다. 분리된 유기층을 Na2S04로 건 조하고 감압 증류 및 감압 여과하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (777mg, 58%)을 수득하였다.
lU NMR(300 MHz, DMSO): ^9.79(s, IH), 8.39(d, IH), 7.88(dd, IH), 7.81(s, IH), 4.76(m, IH), 4.59(m, IH), 4.50(d, IH), 3.98(s, 3H), 3.68(m, 2H), 2.74(s, 3H), 1.97(m, 4H), 1.38(s, 9H), 1.21(d, 3H), 0.94(s, 9H). 단계 2-2: (S)— N-(4-아미노 -2-메톡시페닐)ᅳ l-((S)—3,3ᅳ디메틸 2- ((S)-2— (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드
철 (832mg, 14.9mmol)을 50% 에탄올 수용액 (15mL)에 묽히고 진한 염산 수용액 (5요)을 첨가한 후 반웅 은도를 10C C로 올려서 활성화시켰다. 여기에 상기 단계 2-1에서 얻은 화합물 (777mgᅳ 1.49mmol)을 첨가하고 1시 간 동안 10CTC에서 환류시켰다. 반응이 완결되면 반응 용액을 셀라이트 패 드에 감압 여과하고， 클로로포름 /이소프로필알콜 (3:1, v/v) 용액으로 세척한 후 얻어진 여과액을 감압 증류하였다. 얻어진 고체를 클로로포름 /이소프로필 알콜 (3:1， v/v) 용액에 녹인 후 포화 NaHC03수용액과 브라인으로 세척하였 다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류하여 표제 화합물 (464 mg, 72%)을 수득하였다.
MS(ESI+ , m/z): 434 [M+H]+. 단계 3: tᅳ부틸 ((S)-l-(((S)-l-((S)-2-((4ᅳ ((4-((3-클로로 -4-(4-에 틸피페라진— 1-일)페닐)아미노)피리미딘— 2-일)아미노 )-2-메톡시페닐)카바모 일)피를리딘 -1ᅳ일) -3,3-디메틸 -1-옥소부탄—2-일)아미노 )-1-옥소프로판- 2-일) (메틸)카바메이트
이전 단계 1에서 얻은 화합물 (200mg, 0.568mmol) 및 이전 단계 2-2 에서 얻은 화합물 (303mg, 0.568mmol)을 2ᅳ부탄을 (2mL)에 녹이고 TFA(0.04mL, 0.568mmol)을 적가하였다. 반웅 온도를 100~120°C로 높이고 12시간 교반하였다. 반웅 온도를 상온으로 식힌 후 클로로포름 /이소프로필알 콜 (3:1， v/v) 용액과 포화 NaHC03 수용액으로 추출하였다. 분리된 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류하고 컬럼 크로마토그래피 로 정제하여 표제 화합물 (306mg, 63%)을 수득하였다.
¾ NMR(300 MHz, CDC13): 59.03(brs, IH), 8.27-8.24(d, IH), 8.03ᅳ 8.02(d, IH), 7.46-7.45(d, IH), 7.39-7.38(d, IH), 7.23-7.19(dd, IH), 7.05-6.99(m, 2H), 6.95— 6.91(dd, IH), 6.57(brs, IH), 6.10_6.08(d, IH), 4.81-4.79(d, IH), 4.66-4.63(d, IH), 3.86-3.83(m, IH), 3.80(s, 3H), 3.71- 3.66(m, IH), 3.10(m, 4H), 2.80(s, 3H), 2.68(m, 4H), 2.60-2.50(q, 2H), 2.50(m, IH), 2.17-1.89(m, 4H), 1.50(s, 9H), 1.34-1.32(d, 3H), 1.18- 1.13(t, 3H), 1.00(s, 9H). 단계 4: (S)-N-(4_((4— ((3-클로로 -4-(4-에틸피페라진 _1-일)페닐)아 미노)피리미딘 -2—일)아미노 )— 2ᅳ메톡시페닐 )_l-((S)-3,3—디메틸 -2— ((S)-2— (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염
이전 단계 3에서 얻은 화합물 (306mg, 0.36mmol)을 에틸 아세테이트 (9mL)에 용해하고， 여기에 염산 용액 (1.8mL, 7.2mmol, 4N 다이옥산 용액) 을 첨가하였다. 반웅 용액을 상온에서 12시간 교반하였다. 생성된 고체를 감 압 여과하고 에틸 아세테이트와 디에틸 에테르로 세척한 후 감압 건조하여， 표제 화합물 (200mg, 96%)올 수득하였다.
MS(ESI+, m/z): 749 [M+H]+. 실시예 11: (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일) -N-(4-((4-((4-(4—에틸피페라진 -1-일) -3-플루오로페닐)아미노)피리미 딘 -2-일)아미노 )-2-메록시페닐)피를리딘— 2-카복스아마이드 염산염 실시예 10의 단계 1에서 3ᅳ클로로 -4-(4-에틸피페라진 -1-일)아닐린 대신 4-(4-에틸피페라진 -1-일) -3-플루오로아닐린을 사용한 것을 제외하고 는, 실시예 10의 단계 1 내지 4와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (400mg, 23%)을 수득하였다. MS(ESI+ , m/z): 733 [M+ H]+ . 실시예 12: (S)-l-[(S)-3,3-디메틸 2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일] -{4-[6-(3-메특시페닐아미노) -피리미딘 -4-일아미노] -3-메특시페닐)피 를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 실시 예 1의 단계 1에서 2,4ᅳ디 클로로피 리미 딘 대신 4,6-디클로로피리 미딘을 사용하고， 2-아미노 -N-메틸벤즈아마이드 대신 3-아니시 딘을 사용하 는 것을 제외하고는, 실시 예 1의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (l lOmg, 77%)을 수득하였다.
¾ NMRC300 MHz, DMSO-d6):<5 9.50(brs, 1H), 8.30(s, 1H), 7.64(d, 1H), 7.38(brs, 1H), 6.92(brs, 1H), 6.86-6.82(m, 1H), 6.66(d, 1H), 6.13(s, 1H), 4.82-4.62(m, 3H), 3.88—3.66(m, 8H)ᅳ 2.79(s, 3H), 2.56-2.54(m, 1H), 2.15-1.92(m, 4H), 1.34(d, 3H), l.OKs, 9H).
MS(ESI+， m/z): 633 [M+ H]+ . 실시예 13: (S)-1-[(S)— 3，3-디메틸 -2-((S)-2-메틸아미노프로판아미도) -부타 노일] -N-(4-{6-[3-클로로 -4-(4-이소프로필피페라진 -1-일)—페닐아미노] -피 리미딘 -4-일아미노}-3-메록시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 실시 예 1의 단계 1에서 2，4ᅳ디 클로로피 리미 딘 대신 4，6-디클로로피 리 미딘을 사용하고， 2-아미노 -N—메틸벤즈아마이드 대신 3-클로로 -4-(4-이소 프로필피페라진 -1-일) -페닐아민을 사용하는 것을 제외하고는, 실시 예 1의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (145mg, 82%)을 수 득하였다.
MS(ESI+ , m/z): 763 [M+ H]+ . 실시예 14: (S)-l— ((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일) -N-(2-메록시 -4-((4-((3-메톡시페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2- 일)아미노)페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 단계 1 : 2-클로로—N-(3-메톡시페닐)티 에노 [3,2-d]피 리미 딘ᅳ 4ᅳ아민 2，4—디클로로티 에노 [3,2-d]피 리 미 딘 (3g, 14.63mmol)을 1-프로판을
(50mL)에 적가한 후， 여 기에 3-메특시 아닐린 (1.64mL, 14.63mmol) 및 DIPEA(5mL, 29.26mmol)을 첨가하였다. 반웅 온도를 70°C로 가열하여 3시 간 교반하였다. 반웅 용액을 상온으로 식히고 에 틸 아세테이트와 물로 추출 하였다. 분리된 유기층을 Na2S04로 건조하고 여 액을 감압 증류하여 컬럼 크 로마토그래피로 정 제하여 , 표제 화합물 (4.1g, 96%)을 수득하였다.
¾ NMR(300 MHz, DMSO): δ lO.Ks, IH), 8.26(d, IH), 7.40(s, 2H), 7.31(s, 2H), 6.75(brd, IH), 3.76(s, 3H). 단계 2: t-부틸 ((S)-l_(((S)-l-((S)-2-((2-메톡시 4ᅳ ((4-((3-메톡시 페닐)아미노)티 에노 [3,2— d]피 리미딘 2—일)아미노)페닐)카바모일)피롤리 딘-
1-일) -3,3—디 메틸 -1-옥소부탄 -2-일)아미노 )- 1-옥소프로판—2-일) (메틸)카 바메이트
이 전 단계 1에서 얻은 화합물 (178mg, 0.61mmol), 실시 예 10의 단계
2— 2에서 얻은 화합물 (200mg, 0.407mmol), Pd(OAc)2(18mg, 0.08mmol), 잔 트포스 (94mg, 0.16mmol), 및 Cs2C03(265mg, 0.81mmol)를 1,4—다이옥산 (2mL)에 첨가하고ᅳ 12C C에서 1시 간 동안 교반하였다. 반웅 온도를 상온으 로 식힌 후 반응 용액을 클로로포름 /이소프로필알콜 (3:1， v/v) 용액으로 희석 한 다음, 물과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 트로마토그래피로 정 제하여 표제 화합물 (193mg, 60%)을 수득하였다.
MS(ESI+ , m/z): 789 [M+ H]+ . ' 단계 3: (S)-l-((S)-3,3-디 메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도) 부타노일) -N-(2—메특시 -4-((4-((3-메록시페닐)아미노)티 에노 [3,2— d]피 리 미 딘 -2ᅳ 일 )아미노)페닐)피롤리 딘 -2-카복스아마이드
이 전 단계 2에서 얻은 화합물 (193mg, 0.245mmol)을 MC(lmL)에 용 해하고 TFA(lmL)를 적가하였다. 실온에서 1시 간 동안 교반 후 MC와 포화 NaHC03 수용액으로 추출하였다. 분리 된 유기층을 Na2S04으로 건조한 다 음ᅤ 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 트로마토그래피로 정 제하여 표제 화 합물 (5.8mg, 4%)을 수득하였다.
¾ NMRC300 MHz, DMSO): 9.88(s, IH), 9.40(s, IH), 9.07(s, IH),
8.06(d, IH), 7.85(d, IH), 7.69(d, 2H), 7.46(m, 2H), 7.37(s, IH), 7.20(m, 2H), 6.67(d, IH), 4.52(m, IH), 4.41(m, IH), 3.75(s, 3H), 3.66(m, IH),
2.98(s, 2H), 2.01(s, 3H), 1.98(m, 4H), 1.21(d, 3H), 0.99(s, 9H). 실시예 15: (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일) -N-(6-((4-((3-메록시페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2-일)아미노) 피리딘—3-일)피를리딘 -2-카복스아마이드 단계 1: N4-(3-메톡시페닐) N2-(5-니트로피리딘 -2ᅳ일)티에노 [3,2- d]피리미딘 -2,4-디아민
실시예 14의 단계 2에서 (S)-Nᅳ (4-아미노 -2-메특시페닐) -1ᅳ ((S)- 3,3-디메틸ᅳ 2-((S)— 2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복 스아마이드 대신 5-니트로피리딘 -2-아민을 사용한 것을 제외하고는， 실시예 14의 단계 1 및 2와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (203mg, 90%)을 수득하였다.
¾ NMROOO MHz, DMSO): δ lO.Ks, IH), 8.26(d, IH), 7.40(s, 2H), 7.31(s, 2H), 6.75(brd, IH), 3.76(s, 3H). 단계 2: t-부틸 ((S)— 1— ((S)— 2-((6— ((4-((3_메톡시페닐)아미노)티에노 「3,2— d]피리미딘 -2ᅳ일)아미노)피리딘 -3-일)카바모일)피를리딘 -1 일) -3,3- 디메틸— 1-옥소부탄ᅳ 2-일)아미노 )—1ᅳ옥소프로판 -2-일) (메틸)카바메이트
실시예 3의 단계 3에서 N2-(2-메록시 -4-니트로페닐) -N4-(3-메톡시 페닐)피리미딘— 2,4-디아민 대신 이전 단계 1에서 얻은 N4-(3-메톡시페닐)ᅳ N2-(5-니트로피리딘 -2-일)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2，4-디아민을 사용한 것 을 제외하고는， 실시예 3의 단계 3 및 4와 동일한 절차를 반복하여 표제 화 합물 (40mg, 11%)을 수득하였다.
MS(ESI+, m/z): 760 [M+H] + . 단계 3: (S)-l-((S)-3,3 디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도) 부타노일)— N_(6-((4-((3-메록시페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2-일) 아미노)피리딘 -3-일)피롤리딘 -2-카복스아마이드
이전 단계 2에서 얻은 화합물 (40mg, 0.05mmol)을 MC(lmL)에 용해 하고 TFA(lmL)를 적가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반 후 MC와 포화 NaHC03 수용액으로 추출하였다. 분리된 유기층을 Na2S04으로 건조한 다 음， 감압 하에 여과 및 증류한 후 컬럼 트로마토그래피로 정제하여 표제 화 합물 (4.8mg, 14%)을 수득하였다.
1H NMRC300 MHz, DMSO): ^ 9.88(s, IH), 9.40(s, IH), 9.07(s, IH), 8.06(d, IH), 7.85(d, IH), 7.70(d, 2H), 7.46(m, 2H), 7.37(s, IH), 7.23(m, 2H), 6.67(d, IH), 4.51(d, IH), 4.41(m, IH), 3.75(s, 3H), 3.65(m, IH), 2.97(m, 2H), 2.18(s, 3H), 1.98(m, 4H), l.lKd, 3H), 0.99(s, 9H). 실시예 16: (S)-l-((S)-3,3-디메틸 -2— ((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일) -N-(4-((4-((3-메특시페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2—일)아미노) 페닐)피를리딘— 2-카복스아마이드 실시 예 15의 단계 1에서 5-니트로피 리 딘 -2-아민 대신 4-니트로아닐 린을 사용한 것을 제외하고는， 실시 예 15의 단계 1 내지 3 과 동일한 절차 를 반복하여 표제 화합물 (3mg, 3%)을 수득하였다.
lH NMRC300 MHz, DMSO): 5 9.87(s, 1H), 9.39(s, 1H), 9.05(s, 1H),
8.05(d, 1H), 7.83(d, 1H), 7.68(d, 2H), 7.43(m, 3H), 7.36(s, 1H), 7.22(m, 2H), 6.65(d, 1H), 4.51 (d, 1H), 4.42(m, 1H), 3.74(s, 3H), 3.66(m, 1H), 2.96(m, 2H), 2.17(s, 3H), 1.99(m, 4H), 1. 12(d, 3H), 0.97(s, 9H). 실시예 17: (S)-l-((S)-3,3ᅳ디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일) -N-(3-메톡시 -4-((4-((3-메톡시페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2- 일)아미노)페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 단계 1 : 2-클로로 -Nᅳ (3ᅳ메록시페닐)티 에노 [3,2ᅳ d]피 리미딘 -4-아민 2，4-디클로로티 에노 [3,2-d]피 리미 딘 (500mg, 2.44mmo0과 3-메톡시 아닐린 (0.3mL, 2.68mmol)을 1—프로판올 (5mL)에 적가하고， 여 기에 DIPEA(0.85mL, 4.88mmo0을 적가하였다. 반웅 용액을 60-7CTC에서 3시간 교반하였다. 반응 용액을 상온으로 식힌 후 에 틸 아세테이트와 물로 추출하 여， 분리 된 유기층을 Na2S04로 건조한 후 감압 증류하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (683mg, 96%)을 수득하였다.
¾ NMR(300 MHz, CDC13): δ 7.75-7.73(d, 1Η), 7.37-7.34(m, 1 H), 7.31 (s, 1H), 7.18(s, 1H), 7.0그 7.01 (m, 2H), 6.91 -6.88(d, 1H), 3.85(s, 3H). 단계 2: N2-(2-메톡시 -4-니트로페닐) -N4-(3-메톡시 페닐)티 에노 [3，2- d]피 리 미 딘 -2,4-디아민
이 전 단계 1에서 얻은 화합물 (683mg, 2.34mmol)을 2-부탄을 (7mL)에 적가하고, 여 기 에 2—메특시 ᅳ 4-니트로아닐린 (402mg, 2.34mmol)와 TFA(0.17mL, 2.34mmol)을 적가하였다. 반웅 용액을 10C C에서 12시간 교 반하였다. 반웅 용액을 상온으로 식힌 후 2—부탄을로 세척하며 고체를 감압 여과하여， 표제 화합물 (316mg, 32%)을 수득하였다.
¾ NMRO00 MHz, DMSO): ^ 8.62(s, 1H), 8.25-8.23(d, 1H), 7.82(s, 1H), 7.76-7.72(d, 1H), 7.57(s, 1H), 7.37-7.35(d, 1H), 7.32-7.29(m, 1H), 6.83-6.82(d, 1H), 6.67-6.64(d, 1H), 4.03(s, 3H), 3.84(s, 3H). 단계 3: N2-(4_아미 노 -2—메톡시 페닐)— N4-(3-메톡시 페닐)티 에 노 [3,2- d]피 리미 딘 -2,4-디아민 철 (231mg, 3.73mmol)을 50% 에 탄을 수용액 (16mL)에 묽히고 진한 염산 수용액 (0.02mL)을 첨가한 후， 반웅 온도를 KX C로 올려서 활성화시 켰 다ᅳ 여기에 이 전 단계 2에서 얻은 화합물 (316mg, 0.746mmol)를 첨가하고 2.5시 간 동안 100°C에서 환류시 켰다. 반응이 완결되 면 반웅 용액을 샐라이 트 패드에 감압 여과하고， 클로로포름 /이소프로필알콜 (3: 1， v/v) 용액으로 세 척 한 후 얻어진 여 과액을 감압 증류하였다. 얻어진 고체를 클로로포름 /이소 프로필알콜 (3: 1， v/v) 용액에 녹인 후， 포화 NaHC03 수용액과 브라인으로 세척하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여 과 및 증류하 고 컬럼 크로마토그래피로 정 제하여 표제 화합물 (208 nig, 71%)을 수득하였 다.
XH NMRO00 MHz, CDCI3): δ 8.20-8.17(d, IH), 7.63-7.61(d, IH), 7.31-7.26(t, IH), 7.21-7.19(d, IH), 7.14ᅳ 7.12(d, IH), 6.77-6.74(d, IH), 6.54(s, IH), 6.33-6.31(m, 2H), 3.84(s, 3H), 3.51(brs, 2H). 단계 4: t-부틸 ((S)-1-(((S)—1-((S)ᅳ 2-((3-메톡시—4-((4-((3-메톡시 페닐)아미노)티 에노 [3,2-d]피 리미 딘 -2-일)아미노)페닐)카바모일)피를리딘 - 1—일) -3,3—디 메틸 -1—옥소부탄 -2-일)아미노 )-1-옥소프로판 -2-일) (메틸)카 바메 이트
이 전 단계 3에서 얻은 화합물 (208mg, 0.527mmol), 제조예 1에서 얻 은 화합물 (654mg, 1.581mmol), 및 EDCI(505mg, 2.635mmol)을 피 리 딘 /Ν,Ν-디 메틸포름아마이드 (10: 1) 용액에 적 가하고， 반응 온도 70°C에서 12시 간 동안 교반하였다. 반웅 용액을 상온으로 식힌 후 포화 황산구리 수용액과 에틸 아세테이트로 추출하였다. 분리 된 유기층은 포화 NaHC03 수용액과 브 라인으로 세척 하였다. 유기층을 Na2S04으로 건조한 다음， 감압 하에 여과 및 증류하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여， 표제 화합물 (lOOmg, 24%)를 수득하였다.
1H NMR 300 MHz, CDC13): <? 9.35(brs, IH), 8.47-8.44(d, IH), 7.65- 7.63(d, IH), 7.50-7.48(m, IH), 7.33_7.28(t, IH), 7.24-7.22(d, IH), 7.16- 7,13(d, IH), 6.79-6.76(m, 2H), 6.60(s, IH), 4.86-4.83(d, IH), 4.74- 4.72(brs, IH), 4.65—4.62 1， IH), 3.89(s, 3H), 3.82(s, 3H), 3.68(m, 2H), 2.81(s, 3H), 2.59-2.56(m, IH), 2.18_ 1.81(m, 4H), 1.52(s, 9H), 1.36ᅳ 1.33(d, 3H)ᅳ 1.00(s, 9H). 단계 5: (S)- l-((S)-3,3-디 메틸— 2-((S)-2- (메틸아미 노)프로판아미도) 부타노일) -N-(3-메톡시 -4_((4— ((3-메특시 페닐)아미노)티 에노 [3,2-d]피 리 미 딘 -2-일)아미노)페닐)피를리딘 -2_카복스아마이드 염산염 이전 단계 4에서 얻은 화합물 (lOOmg, 0.127mmol)을 에틸 아세테이트 (3mL)에 용해하고， 여기에 염산 용액 (0.3mL, 4M 1，4—다이옥산 용액)을 적가 하였다. 반응 용액을 상온에서 12시간 동안 교반한 후 생성된 고체를 에틸 아세테이트와 디에틸 에테르로 세척하며 여과하여 표제 화합물 (91mg, 99%) 을 수득하였다.
¾ NMR(300 MHz, DMSO): δ 10.78(brs, 1Η), 10.30(s, 1H), 9.31- 9.22(m, 1H), 8.87-8.86(m, 1H), 8.59-8.56(d, 1H), 8.31-8.30(m, 1H), 7.50(s, 2H), 7.13(m, 1H), 6.79(m, 1H), 4.56-4.49(m, 2H), 3.96-3.95(m, 2H), 3.77-3.75(d, 6H), 2.50(s, 3H), 2.19(m, 1H), 2.04-1.87(m, 4H), 1.35- 1.32(d, 3H), 1.04(s, 9H).
MS(ESI+, m/z): 689.3 [M+H]+ . 실시예 18: (S)-l-((S)-3,3-디메틸 2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타 노일) -N-(4-((4-((4-(4-에틸피페라진 -1-일) -3-플루오로페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2-일)아미노 )-2-메록시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염 산염 실시예 17의 단계 1에서 3-메록시아닐린 대신 4-(4-에틸피페라진-
1-일) -3-플루오로아닐린을 사용한 것을 제외하고는， 실시예 17의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (lmg, 1%)을 수득하였다.
MS(ESI+, m/z): 789 [M+H]+. 실시예 19: ((S)-N-(4-((4-((3-클로로 -2，4-디플루오로페닐)아미노)퀴나졸린-
2-일)아미노 )-2-메록시페닐) -l-((S)-3,3—디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로 판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 단계 1: 퀴나졸린 -2,4(1H,3H)-디온
2-아미노벤조산 (5g, 36.5mmol)을 아세트산 (12mL)에 용해하고 물 170mL에 용해된 KOCN(5.9g, 73mmol)을 천천히 적가하였다. 반웅 용액을 상온에서 30분 교반한 뒤， IN NaOH 수용액으로 pH 13이 되게 조정하였다. 이후 90°C에서 3시간 추가 교반하였다. 반웅 용액을 상온으로 식힌 후， 3N 염산 수용액으로 pH 6을 조정하였다. 0°C에서 30분 교반한 뒤 생성된 고체 를 디에틸 에테르로 세척하며 감압 여과하여, 표제 화합물 (4/7g, 79%)을 수 득하였다.
lW NMRC300 MHz, DMSO): δ 11.22(brs, 2Η), 7.90-7.87(d, 1H),
7.66-7.60(t, 1H), 7.20-7.14(t, 2H). 단계 2: 2,4ᅳ디클로로퀴나졸린
이전 단계 1에서 얻은 화합물 (4.7g, 29mmol)을 POCl3(87.7mL, 928mmol)에 용해하고 1K C에서 24시간 동안 교반하였다. 반웅 용액을 갑 압 증류하고 잔류물을 를루엔으로 세척하여 두 번 더 감압 증류하였다. 잔류 물을 MC와 포화 NaHC03 수용액으로 추출하여 분리된 유기층을 Na2S04로 건조하고 감압 증류하여 표제 화합물 (5.7g, 99%)을 수득하였다.
¾ NMR(300 MHz, DMSO): 68.29-8.27(d, IH), 8.04-7.98(m, 2H), 7.79-7.73(m, IH). 단계 3: 2-클로로 -N-(3-클로로 -2,4—디플루오로페닐)퀴나졸린— 4-아 이전 단계 2에서 얻은 화합물 (500mg, 2.51mmol)과 3-클로로 _2，4-디 플루오로아닐린 (492mg, 3.04mmol)을 이소프로판올 (10mL)에 용해하고， 여 기에 염산 (0.02mL, 0.251mmol)을 적가하였다. 반웅액을 상온에서 24시간 교반하고， 생성된 고체를 이소프로판올로 세척하며 감압 여과하여 표제 화합 물 (770mg, 94%)을 수득하였다.
l NMR(300 MHz, DMSO): δ 8.51ᅳ 8.49(d, IH), 7.93-7.90(t, IH), 7.77-7.69(m, 2H), 7.49-7. 2(t, 2H). 단계 4: t-부틸 ((S)_1-(((S)ᅳ 1— ((S)— 2_((4-((4— ((3—클로로 -2,4-디플 루오로페닐)아미노)퀴나졸린ᅳ 2—일)아미노 )-2-메톡시페닐)카바모일)피를리딘 -1-일) -3,3-디메틸ᅳ1-옥소부탄 -2-일)아미노 )-1-옥소프로판ᅳ 2-일) (메틸)카 바메이트
이전 단계 3에서 얻은 화합물 (104mg, 0.319mmol)과 실시예 10의 단 계 2-2에서 제조한 화합물 (170mg, 0.319mmol)을 1-부탄올 (ImL)에 용해하 고, 여기에 DIPEA(0.05mL, a319mmol)를 적가하였다. 반웅 용액을 100°C 에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트와 포화 NaHC03 수용액으로 추출하고 분리된 유기층을 Na2S04로 건조하여 감압 증 류하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (125mg, 48%)을 수득하였다.
lW NMRO00 MHz, CDC13): δ 9.10(brs, 1Η)' 8.39— 8.34(m, IH), 8.29-8.26(d, IH), 7.77-7.61(m, 4H), 7.43(s, IH), 7.33-7.30(t, IH), 7.04- 6.92(m, 3H), 4.83— 4.81(d, IH), 4.67-4.64(d, IH), 3.86(s, 3H), 3.72- 3.70(m, 2H), 2.81(s, 3H), 2.52-2.51(m, IH), 2.17-1.92(m, 4H), 1.51(s, 9H), 1.35-1.33(d, 3H), 1.02(s, 9H). 단계 5: (S)-N-(4-((4-((3-클로로—2,4-디플루오로페닐)아미 노)퀴 나졸 린 -2-일)아미 노 )— 2-메톡시 페닐) - l-((S)-3,3-디 메틸 -2-((S)-2- (메틸아미 노) 프로판아미도)부타노일)피를리 딘—2-카복스아마이드 염산염
이 전 단계 4에서 얻은 화합물 (125mg, O.152mmol)을 MC( lmL)에 용 해한 후 TFA(0.2mL, 3.04mmol)을 적가하였다. 반웅 용액을 상온에서 12시 간 교반한 뒤 MC와 포화 NaHC03 수용액으로 추출하고 분리 된 유기층을 Na2S04로 건조하여 감압 증류하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정 제 하고， 수득한 화합물을 에 틸. 아세테이트에 ·희석하였다. 여 기 에 염산용액 (0.03mL, 4M 1 ,4-다이옥산 용액)을 첨가하고 12시 간 상온에서 교반하였다. 생성 된 고체를 에 틸 아세테 이트와 디 에 틸 에 테르로 세척하고 감압 여 과하여， 표제 화합물 (98mg, 85%)을 수득하였다.
1H NMR(300 MHz, CDC13): δ 9.02(s, IH), 8.36-8.34(m, IH), 8.29- 8.26(d, IH), 7.88— 7.84(d, IH), 7.75-7.61 (m, 4H), 7.47(brs, IH), 7.33- 7.28(t, IH), 7.05-7.01(td, IH), 6.95-6.92(dd, IH), 4.81 -4.79(d, IH),
4.66- 4.63(d, IH), 3.97-3.89(m, IH), 3.86(s, 3H), 3.74一 3.69(m, IH), 3.13- 3.06(q, IH), 2.53-2.49(m, IH), 2.41(s, 3H), 2.28- 1.87(m, 4H), 1.34- 1.32(d, 3H), 1.06(s, 9H). 실시예 20: (S)-N-(4-((4-((4-브로모 -3-클로로 -2—플루오로페닐)아미노)퀴나 졸린 -2-일)아미노 )-2-메록시페닐) -1— ((S)-3,3-디메틸 -2-((S)— 2- (메틸아미 노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 실시 예 19의 단계 3에서 3-클로로 -2,4-디플루오로아닐린 대신 4-브 로모 -3—클로로 -2-플루오로아닐린을 사용한 것을 제외하고는， 실시 예 19의 단계 1 내지 5 와 동일한 절차를 반복하여 표제 화합물 (83mg, 30%)을 수득 하였다.
lH NMRC300 MHz, CDC13): <? 9.04(brs, IH), 8.46-8.40(t, IH), 8.31— 8.28(d, IH), 7.84-7.78(d, IH), 7.74-7.62(m, 4H), 7.55(brs, IH), 7.46- 7.42(dd, IH), 7.32-7.26(t, IH), 6.96-6.93(dd, IH), 4.82-4.81 (d, IH),
4.67- 4.63(d, IH), 3.94-3.88(m, IH), 3.88(s, 3H), 3.75-3.70(m, IH), 3.13- 3.06(q, IH), 2.48(m, IH), 2.41 (s, 3H), 2.27- 1.87(m, 4H), 1.34- 1.32(d, 3H), 1.07(s, 9H). 상기 실시 예 1 내지 20 에서 얻어 진 화합물들의 구조식을 하기 표 1 에 나타내었다.
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000041_0001
상기 실시예에서 제조된 화합물들에 대하여 다음과 같이 생물검정 ¬시하였다. 시험예 1: 캐스페이즈 (caspase) 활성도 평가
MDA-MB-231 유방암 세포 (ATCC # HTB— 26)를 96 웰 배양판 (well plate)에 1.0~1.5 x 104 세포 /웰의 밀도로 접종하고 24시 간 후 약물을 처 리 하였다.
약물은 ΟμΜ, 0.5μΜ, ΙμΜ 및 5μΜ 농도로 캐스페이즈 3/7에 대하여는 12시간, 캐스페이즈 9에 대하여는 16시간 처리 한 다음 배지를 걷어내고 MDA-MB-231 유방암 세포 (ATCC # ΗΤΒ— 26)를 4 °C의 PBS로 2회 씻어 낸 후 실험에 사용하였다. 프로메가 (Promega)사의 캐스페 이즈 -글로 ™(Caspase-Glo™) 9 분석 키트 (Cat#. G8210)와 캐스페 이즈—글로™ 3/7 분 석 키트 (Cat#. G8090)를 이용하여 분석 시료와 배지를 1: 1 비율로 섞은 용액 을 140μΐ 웰씩 셀 시료에 첨가하였다. 37°C에서 2시 간 동안 반웅시 킨 다음 테칸 (Tecan)사의 인피니트 TM M1000 멀티 리더기 (Infinite™ M1000 multi- reader)를 이용해 발광 (luminescence)을 측정하였다.
실시 예에서 얻은 대표적 인 화합물의 0.5μΜ 농도의 측정값을 하기 표
2에 나타내었으며， 대조 물질로는 노바티스사의 LBW-242를 사용하였다. 표 2
Figure imgf000042_0001
상기 표 2에 나타낸 바와 같이， 본 발명의 화학식 1의 화합물들은 암 세포주의 세포사멸 기 작의 중요한 단백질인 캐스페이즈의 활성도를 증가시 켜 세포사멸을 유도함을 알 수 있다. 시험예 2: 친화력 (binding) 평가
BIR-3 도메인과의 친화력을 분석하기 위하여， 검은색의 둥근 바닥 96-웰 플레이트에 1.25μΜ로 희석 해 둔 XIAP BIR을 5μ! 웰씩 분주한 후 0.0625yM로 희석 해둔 4F(AbuRPF-K(5-Fam)-NH2)를 빛을 차단한 상태에 서 lOuL/웰씩 첨가하였다. 이 때， XIAP BIR-3은 인간 XIAP 단백질의 241- 356번째 아미 노산 잔기로서， pET28a 백터 (노바겐사)를 표준 DNA 클로닝 과정과 PCR 방법 (Sambrook & Russell., Molecular cloning., Chapter 1. Third edition 참고)을 이용하여 재조합한 백터를 E. coli BL2KDE3) 세포에 형질전환시켜 생산하였다.
본 발명에 사용된 플라스미드들은 표준 DNA 클로닝 과정과 PCR 방 법에 의해 제작하였다 (Molecular cloning. Chapter 1. Sambrook & Russell. Third edition 참조). 인간 XIAP BIR-3 단백질을 발현하는 유전자의 도입 및 적중에 사용되는 백터를 제작하기 위해 pET28a(+)(노바겐사)를 사용하 였다. PCR증폭은 K562(Human blood lympoblast-like leukemia)의 cDNA lliL를 주형으로 하여 1.5mM의 MgCl2, 0.2mM의 dNPTs, 0.4mM의 유전자 특이적 센스 및 안티센스 프라이머쌍 및 2.0 단위의 taq 중합효소 (Elpis biotech사, 대전， 대한민국)를 사용하여 수행하였다.
반웅 흔합물을 5분간 변성시킨 후 94°C로 30초, 52°C로 30초 및 72°C로 30초를 1 사이클로 하여 35 사이클을 반복 반웅시켰고, 72°C로 7분 간 신장시켰다. 사용한 프라이머의 염기서열을 하기 표 3에 나타내었다. 표 3
Figure imgf000043_0001
PCR 증폭된 인간 XIAP BIR-3 도메인을 유전 클로닝 방법으로 PET28a (+ ) 백터 내로 삽입시킨 후， 상기 백터로 E. coli BL2KDE3) 세포를 형질전환시켜 배양하였다. 상기 배양액의 OD 값이 0.6이 됐을 때 O.lmM의 IPTG를 첨가하여 사람 XIAP BIR-3 단백질을 과발현시켰다. 상기 과발현된 인간 XIAP BIR-3 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 3에 나타나 있으며， pET28a(+) 백터를 사용해 발현되어 인간 XIAP BIR-3 단백질의 말단에 6 개의 히스티딘 (His-tag)이 결합된 상태이다. .
상기 과발현된 단백질이 포함된 세포를 초음파 분쇄기로 초음파 분쇄
(ultrasonication)한 후 원심분리기로 원심분리하였다. 이때， 과발현된 단백질 대부분은 수용성 분획에 존재하므로， 상층액만올 회수하였다. 상기 회수한 상층액을 His-tag과 특이적으로 결합할 수 있는 친화성 비드 (affinity bead) 에 반웅시켜 다른 단백질과 분리한 후 20mM Tris, 10mM NaCKpH 8.0) 및 lOOmM 이미다졸 완충액을 이용하여 상기 친화성 비드로부터 XIAP BIR-3 단백질을 용출시켰다. lOOmM 인산칼륨 (pH 7.5)， lOOyg/mL 소 글로불린 및 0.02% 아지 드화 나트륨으로 이루어진 결합분석 완층액을 105μΐ 웰씩 첨가한 후 상온에 서 15분간 교반하여 반응시 켰다. 이어 , 양성 대조물질 ARPF-NH2(알라닌-알 기닌-프롤린 -페닐알라닌 -NH2)와 실험 약물을 0.01 내지 1000 μΜ 농도에서 순차적으로 회석하여 5μΐ7웰씩 첨가하였다. 대신에， 0% 및 100% 억 제 대조 군에는 DMSO를 첨가하였다. 빛을 차단한 상태로 3시간 반웅시 킨 후 테칸사 의 인피니트 M1000 멀티 리더를 이용하여 여 기 파장 (excitation wavelength) 485nm 및 ¾"출 파장 (emission wavelength) 53ᄋ11111에 :|의 형 광 편광 (fluorescense polarization) 값을 측정한 후， 이로부터 얻어 낸 각 약 물의 IC50값 및 4F(ARPF-NH2)의 Kd값을 이용하여 각 약물의 Ki값을 계산 하였다. 상기 값을 하기 표 4에 나타내었다. 하기 표 4에서 얻어 진 값을 표시하였으며， 대조 물질로는 노바티스사의 LBW-242를 사용하였다. 표 4
Figure imgf000044_0002
본 발명 의 화학식 1의 화합물들은 상기 표 4에 나타난 것처 럼 세포사 멸 저해 단백질인 IAP의 BIR-3 도메 인에 높은 친화력을 보여줌으로써 선택 적 작용 기 전을 갖고 있음을 확인할 수 있다. 시험예 3: 단백질 키나제 억제 평가 (in-vitro) 또한 상기 한 바와 같이， 인비트로젠 (Invitrogen)사의 키 나제 스크리 닝 & 프로파일링 서 비스 (Screening and Profiling Service)를 이용하여 실시 예 1에서 제조된 화합물의 키 나제 저해 활성 에 대한 IC50 값을 측정하였으며， 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000044_0003
시험예 4: 세포성장 억제 평가 (in-vitro)
XIAP를 과발현하는 것으로 보고된 MDA-MB-231 유방암 세포 (ATCC # HTB-26)를 ATCCCAmerican type culture collection; Rockville, MD)에서 구입하여 실험에 사용하였다. MDA-MB-231 세포주는 10% FBS 및 1% 페니실린 /스트랩토마이신 (Gibco BRL)을 포함하는 L-15 배지 조건하 에 T-75 cm2성장 플라스크에서 배양하였다. 정상세포에 대한 독성 실험을 위하여 섬유아세포주인 Hs27(ATCC # CRL 1634) 및 Balb/c3t3(ATCC # CCL 163)를 사용하였다. 성장 배지에서 키운 여러 세포주를 3，000~5，000 세포 /10요 밀도로 96 웰 배양판에 옮긴 후 37 °C, 5% C02, 95% 공기 및 100% 상대 습도에서 24시간 동안 배양하였다. 단， MDA-MB-231 세포는 대기 조건에서 배양하였다. 여기에 10μΜ~0.1ηΜ의 농도로 시험 물질을 처 리하고， MDA— MB-231 세포주는 120시간， 정상 세포주는 72시간 동안 배양 하였다.
MDA-MB-231 세포주의 세포 생존율은 셀타이터 96TM(CellTiter 96 AQueous One Solution, MTS, 프로메가사)을 이용하여 490nm에서 흡광도 로 측정하고, 정상세포주의 세포 생존율은 10% TCACtrichloroacetic acid)로 세포를 고정한 다음 SRB(sulforhodamine B) 용액으로 염색하여 540nm에서 흡광도로 측정하였다. 상기 흡광도 결과로부터 약물이 암세포 성장을 50% 감소시키는 농도인 IC50값을 산출하였다. 암세포 성장율은 하기 수학식 1 또 는 2에 의해 산출되었다.
수학식 1
[(Ti— T2) I (C-Tz)] x 100 (Ti>Tz일 경우)
수학식 2
[(Ti-Tz) I Τζ] χ 100 (Ti<Tz일 경우)
상기 수학식 1 및 2에서， Tz는 0% 세포성장군에서의 흡광도로서 시 험약물 처리 직전 세포 밀도를 의미하고， C는 100% 세포성장군에서의 흡광 도로서 배지만을 첨가하여 배양된 세포 밀도를 의미하며， Ti는 시험약물을 처리한 세포 밀도를 의미한다.
IC50 값은 상기 수학식 1의 값이 50일 때의 시험약물 처리농도이며， 이는 암세포 성장을 50% 저해하는 농도를 의미한다. 매 측정시 대조물질과 비교하여 각 세포주의 비교 및 균등 실험을 수행하였다.
실시예에서 얻은 대표적인 화합물에 대한 IC50 값 (nM)을 하기 표 6에 나타내었으며, 대조 물질로는 노바티스사의 LBW-242를 사용하였다. 표 6
Figure imgf000046_0001
상기 표 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 화합물들은 IAP가 과발현되어 있는 MDA-MB-231 세포주의 성장을 낮은 약물농도에서 도 매우 효과적으로 억제하였다. 즉， 본 발명의 화학식 1의 화합물은 마우스 정상 세포주인 Balb/C와 인간 정상 세포주인 Hs27에 대하여는 성장 억제 활성이 낮은 반면， 상대적 으로 IAP가 과발현된 세포주에 대하여는 높은 성장 억제 활성을 나타내었 다. 상기 시험예의 결과들로부터 본 발명의 화합물은 세포사멸 저해 단백 질인 IAP와 단백질 키나제에 선택적으로 작용하여 정상세포에는 영향이 없 으며， 종양 및 비정상 세포들의 세포사멸의 정상 기작을 가능하게 하므로， 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제의 과도한 활동을 원인으 로 하는 비정상 세포 성장 질환의 예방 또는 치료에 단독 흑은 병용 요법으 로 사용 가능하며， 부작용을 최소화할 수 있는 장점을 가지고 있음을 알 수 있다. 이상， 본 발명을 상기 실시예를 중심으로 하여 설명하였으나 이는 예 시에 지나지 '아니하며， 본 발명은 본 발명의 기술분야에서 통상의 지식을 가 진 자에게 자명한 다양한 변형 및 균등한 기타의 실시예를 이하에 첨부한 청구범위 내에서 수행할 수 있다는 사실을 이해하여야 한다.

Claims

특허청구범위
1. 하기 화학식 1의 헤 테로고리 유도체， 이 의 약학적으로 허 용가능한 염， 이성 질체， 수화물 및 용매화물로부터 선택되는 화합물:
Figure imgf000048_0001
상기 식에서，
X 는 ᅳ S -， -0-, -NH-, 또는 -N d— 3알킬)― 이고;
Zi 은 -N= 또는 CH= 이고;
Z2 는 N= -CH= 또는 C(RA)= 이고;
R1 은 C3-8사이클로알킬， 3-8원의 헤테로사이클로알킬， C6-10아릴， 또는 5-
10원의 헤테로아릴이고;
R2 는 C3-8사이클로알킬렌， 3— 8원의 헤테로사이클로알킬렌， 06-10아릴렌， 또 는 5- 10원의 헤테로아릴렌이고;
R3 는 H, d-9알콕시， C3— 6사이클로알킬옥시， C3-6사이클로알킬—d-s알킬옥 시， 3-9원의 헤테로사이클로알킬옥시， 3-9원의 헤테로사이클로알킬 -d-s 알킬옥시， C6-10아릴옥시， C6-10아릴ᅳ d-3알킬옥시， 5-10원의 헤테로아릴 옥시 , 또는 5-10원의 헤테로아릴 -Cu알킬옥시 이고;
R4 는 H, d-6알킬， C3-6사이클로알킬 또는 C3-6알킨일옥시— d-4알킬이고; R5 는 H 또는 d-3알킬이고;
R6 은 H, d-3알킬， 또는 카보닐 -C2— 3알켄일이고;
RA 및 는 각각 독립적으로 H, 할로겐, -CF3, -N02) -CN, d-6알킬 또는 -NR8R9이거나， 또는 서로 결합하여 방향족 또는 비 방향족의 C5-6탄소고 리 또는 방향족 또는 비방향족의 5— 6원의 헤테로고리를 형성 할 수 있고， 여 기서 상기 탄소고리 및 헤테로고리는 각각 독립적으로 H, 할로겐， - CF3, -N02, -CN, — N3, -NH2, -OH, d— 4알킬， d— 3알콕시， d— 3알킬티오 및 d-3알킬설포닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환 기로 치환될 수 있고;
q 는 0 내지 3 의 정수이고;
상기 R1 및 R2 는 각각 독립적으로 1 내지 3 개의 WA 로 치환될 수 있고， 상기 WA 는 H, 할로겐， -CF3, -N02> -CN, -N3, -OH, d— 6알킬, 또는 ᅳ (CH2)e-로 연결된, -NR8R9, -NR8C(=0)R9, -NR8C(=0)NR8R9, -OR10, C(=0)Ru, -C(=0)OR10, -C(=0)NR8R9, _NR8C(=0)Ru, -SR12, S(=0)Rn, -S(=0)2Rn, C3-6사이클로알킬， 3-6원의 헤테로사이클로알킬， C6-10아릴 또는 5-10원의 헤테로아릴이고, 여기서 상기 사이클로알킬， 헤 테로사이클로알킬， 아릴 및 헤테로아릴은 각각 독립적으로 할로겐， -CF3, -NO2, -CN, — N3, NH2, -OH, Ci-6알킬， C3 6사이클로알킬 및 3— 6원의 헤 테로사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3 개의 치환 기로 치환될 수 있고， 상기 은 0 내지 3 의 정수이고;
상기 R8, R9, R10, R11 및 R12 는 각각 독립적으로 Η, 할로겐， -CF3, -N02, - CN, d— 6알킬， C2-6알켄일， 또는， -(CH2)P-로 연결된， C3— 6사이클로알킬， 3 6원의 해테로사이클로알킬， d-6알카노일， C2-6알케노일， C2— 6알키 노일， C6-10아릴 또는 5- 10원의 헤테로아릴이고， 이 때， p 는 0 내지 3 의 정수 이고， 상기 R8 및 R9는 서로 결합하여 5원 내지 6원의 고리를 형성할 수 있고,
상기 헤테로아릴， 해테로아릴렌, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬렌 및 헤테로고리는 각각 독립적으로 N, ◦ 및 S 로 이루어진 군으로부터 선 택된 1 내지 3 개의 헤 테로원자를 포함한다.
2. 제 1 항에 있어서，
상기 X 가 -0-, -NH, 또는 -N(d-3알킬) - 인 것을 특징으로 하는 화합물.
3. 제 1 항에 있어서，
상기 R1 및 R2 가 각각 독립적으로 상기 치환기 WA 로 치환되거나 비 치환 된 C5-10아릴 또는 5-10원의 헤테로아릴인 것을 특징으로 하는 화합물.
4. 제 1 항에 있어서，
상기 R3 가 H, 페닐옥시， 또는 벤질옥시 인 것을 특징으로 하는 화합물.
5. 제 1 항에 있어서，
상기 R4 가 t-부틸， 사이클로핵실， 또는 프로파질옥시 에 틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
6. 제 1 항에 있어서 ,
상기 R5 가 메틸인 것을 특징 으로 하는 화합물.
7. 제 1 항에 있어서 , 상기 R6 이 H 또는 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
8. 제 1 항에 있어서，
상기 R7 이 H 또는 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
9. 게 1 항에 있어서，
상기 p 가 0 내지 2 의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물.
10. 게 1 항에 있어서，
상기 RA 및 가 각각 독립 적으로 H, 할로겐， -CF3, -N02, -CN, d-4알킬 또는 -NR8R9 인 것을 특징으로 하는 화합물.
11. 제 1 항에 있어서，
상기 RA 및 RB 가 서로 결합하여 방향족의 C5-6탄소고리 또는 방향족의 5-6원 헤테로고리를 형성 하며，
상기 탄소고리 및 헤테로고리가 각각 독립적으로 H, 할로겐, -CF3ᅳ -CN, - NH2, -OH, d-4알킬， d-3알콕시， d-3알킬티오 및 d-3알킬설포닐로 이루어 지는 군으로부터 선택되는 1 내지 3 개의 치환기로 치환될 수 있고， 상기 헤테로고리 가 N, 0 및 S 로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3 개의 헤테로원자를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
12. 제 1 항에 있어서，
상기 q 가 1 또는 2 인 것을 특징으로 하는 화합물.
13. 제 1 항에 있어서，
하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
1) (S)— 1-((S)— 3,3—디 메틸 -2— ((S)— 2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) - N— (3—메록시 -4-((4— ((2—(메틸카바모일)페닐)아미노)피 리 미딘 -2-일)아미 노)페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염 ;
2) (R)-l-((R)-3,3-디메틸 -2-((R)-2- (메틸아미 노)프로판아미도)부타노일) - N-(4-((4— ((4-플루오로—2-메 틸ᅳ 1H-인돌 -5—일)옥시 )피 리미 딘 -2—일)아 미 노) -3-메특시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염；
3) (S)-l-((S)-3,3-디 메틸 -2-((S)—2- (메틸아미 노)프로판아미도)부타노일)― N-(3-메특시 -4ᅳ ((4-((3ᅳ메록시페닐)아미 노)피 리미 딘 -2-일)아미노)페닐) 피를리 딘ᅳ 2-카복스아마이드 염산염 ;
4) (S)— N_(4_((4-(3-아미노페녹시 )피 리미딘 -2-일)아미노 )-3-메특시페닐) - 1- ((S)-3,3-디메틸 -2-((S)— 2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피를리 딘 -2-카복스아마이드 염산염;
5) (S)-N-(4— ((4-(3-아크릴아미도페녹시)피리미딘— 2ᅳ일)아미노 )-3—메특시페 닐) -1ᅳ ((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)피 를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
6) (S)-N-{4-[4-(2,3—디메틸 -2H-인다졸 -6-일아미노) -피리미딘— 2-일아미 노 -3—메록시페닐 }-l-[(S)-3,3-디메틸 -2— ((S)— 2-메틸아미노—프로판아 미도)부타노일] -피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
7) (S)-N-{4— [4-(2，3—디메틸 -2H—인다졸 -6-일) -메틸아미노]—피리미딘 -2- 일아미노 -3—메톡시페닐 }-l-[(S)—3,3-디메틸—2-((S)-2-메틸아미노-프 로판아미도)부타노일 ] -피롤리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
8) (S)-l— (( -3，3—디메틸 -2-((S)— 2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) - N-(4-((4— ((4-(4-에틸피페라진 -1—일)페닐)아미노)피리미딘— 2-일)아미 노) -3-메특시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염；
9) ( -1-[( -3，3-디메틸-2-(( —2-메틸아미노프로판아미도)부타노일]- -
(4-{4-[4-(4-에틸피페라진 -1-일) -3-플루오로-페닐아미노] -피리미딘-
2-일)아미노 )-3-메록시페닐)피롤리딘— 2-카복스아마이드 염산염;
10) (S)-N— (4— ((4-((3—클로로 -4-(4-에틸피페라진— 1-일)페닐)아미노)피리미 딘 -2-일)아미노 )-2ᅳ메톡시페닐 )-l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아 미노)프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염；
11) (S)-l— ((S)—3,3-디메틸 _2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)一 N-(4-((4-((4-(4-에틸피페라진— 1-일 )ᅳ3—플루오로페닐)아미노)피리미딘 -2-일)아미노 )-2-메특시페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염;
12) (S)-1-[(S)— 3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일] - {4_[6-(3ᅳ메톡시페닐아미노) -피리미딘 -4-일아미노] -3-메특시페닐)피를 리딘 -2ᅳ카복스아마이드 염산염;
13) (S)-l-[(S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2-메틸아미노프로판아미도) -부타노일] - N-(4ᅳ {6— [3—클로로 -4-(4-이소프로필피페라진— 1-일)ᅳ페닐아미노] -피 리미딘ᅳ 4-일아미노}-3—메특시페닐)피를리딘— 2—카복스아마이드 염산염；
14) (S)—l-((S)-3,3ᅳ디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) - N-(2-메록시 -4-((4— ((3_메록시페닐)아미노)티에노 [3,2-d]피리미딘 -2— 일)아미노)페닐)피를리딘 -2-카복스아마이드;
15) (S)— l-((S)-3,3-디메틸 _2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)― N-(6-((4-((3-메톡시페닐)아미노)티에노 [3,2— d]피리미딘— 2-일)아미노) 피리딘—3—일)피롤리딘— 2-카복스아마이드;
16) (S)-l— ((S)ᅳ 3,3-디메틸 -2-((S)ᅳ 2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일)― N-(4-((4-((3_메록시페닐)아미노)티 에노 [3,2-d]피 리 미 딘 -2-일)아미노) 페닐)피를리 딘— 2-카복스아마이드;
17) (S)-l-((S)-3,3—디 메틸 -2-((S)-2— (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) - N_(3_메록시— 4-((4-((3-메특시페닐)아미노)티에노 [3,2— d]피 리 미 딘— 2ᅳ 일)아미 노)페닐)피롤리딘 _2_카복스아마이드 염산염；
18) (S)-1-((S)— 3,3-디메틸 -2-((S)-2- (메틸아미노)프로판아미도)부타노일) - N-(4-((4-((4-(4-에 틸피 페라진 _1ᅳ 일 ) -3-플루오로페닐)아미노)티 에노 [3,2-d]피 리 미 딘 -2-일)아미 노 )-2-메록시페닐)피롤리 딘 -2-카복스아마이 tr crf
~ - ᄆ사아
ᄆ '
19) (S)— Ν-(4-((4-((3—클로로 -2,4—디플루오로페 닐)아미노)퀴나졸린 -2—일)아 미노) -2-메특시 페닐) -l-((S)-3,3-디메틸 -2-((S)-2— (메틸아미노)프로판 아미도)부타노일)피를리 딘 -2ᅳ카복스아마이드 염산염 ; 및
20) (S)-N-(4-((4-((4—브로모 -3-클로로— 2-플루오로페닐)아미노)퀴 나졸린- 2—일)아미 노 )-2-메록시 페닐)—l-((S)-3,3-디 메틸 -2— ((S)— 2— (메틸아미노) 프로판아미도)부타노일)피를리딘 -2-카복스아마이드 염산염ᅳ
14. 제 1 항에 있어서，
상기 약학적으로 허용가능한 염 이 염산염 인 것을 특징으로 하는 화합물.
15. 제 1 항의 화합물을 유효성분으로 포함하는, 세포사멸 저해 단백질의 과발 현 및 단백질 키 나제의 과도한 활동을 원인으로 하는 비 정상 세포 성장 질 환의 예방 또는 치료용 약학적 조성 물.
16. 제 15 항에 있어서，
상기 단백질 키 나아제가 ALK, AMPK, Aurora A, Aurora B, Aurora C, Axl, Blk, Bmx, BTK, CaMK, CDK2/cyclinE, CDK5/p25, CHK1, CK2, c-RAF, DMPK, EGFR1, Her2, Her4, EphAl, EphBl, FAK, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, Flt-1, Flt-3, Flt-4, Fms, Fyn, GSK3beta, HIPK1, IKKbeta, IGFR-IR, IR, Itk, JAK2, JAK3, KDR, Kit, Lck,L/yn, MAPKl, MAPKAP-K2, MEKl, Met, MKK6, MLCK, NEK2, P70S6K, PAK2, PDGFR alpha, PDGFR beta, PDK1, Pim-1, PKA, PKBalpha, PKCalph, Plkl, Ret, ROCK-I, Rskl, SAPK2a, SGK, Src, Syk, Tie-2, Tec, Trk, ZAP- 70 및 이 들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
17. 제 15 항에 있어서， 상기 비정상 세포 성장 질환이 위암， 폐암， 간암, 대장암， 소장암, 췌장암, 뇌암, 뼈암， 혹색종， 유방암， 경화성선종， 자궁암， 자궁경부암， 두경부암, 식 도암, 갑상선암， 부갑상선암， 신장암， 육종， 전립선암， 요도암， 방광암， 혈액 암， 림프종， 섬유선종, 염증， 당뇨， 비만， 건선, 류마티스성 관절염， 혈관종， 급성 또는 만성 신장병， 관상동맥 재협착증， 자가면역질환， 천식， 신경변성 질환， 급성감염， 및 혈관 분열로 인한 안구질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
18. 제 1 항에 따르는 화합물을 포유류에 투여하는 것을 포함하는， 포유류에서 의 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키나제의 과도한 활동을 원 인으로 하는 비정상 세포 성장 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
19. 제 1 항에 따르는 화합물을 세포사멸 저해 단백질의 과발현 및 단백질 키 나제의 과도한 활동을 원인으로 하는 비정상 세포 성장 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용하는 용도.
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