WO2013154303A1 - 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 및 그의 용도 - Google Patents

신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 및 그의 용도 Download PDF

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WO2013154303A1
WO2013154303A1 PCT/KR2013/002873 KR2013002873W WO2013154303A1 WO 2013154303 A1 WO2013154303 A1 WO 2013154303A1 KR 2013002873 W KR2013002873 W KR 2013002873W WO 2013154303 A1 WO2013154303 A1 WO 2013154303A1
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methyl
alkoxy
morpholin
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PCT/KR2013/002873
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정희정
하재두
조성윤
김형래
이광호
최상운
박지훈
이정옥
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한국화학연구원
주식회사 한독약품
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    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
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    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
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    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to a novel hydrazine-substituted pyrimidine derivative having a tyrosine kinase inhibitory activity and a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of various hyperproliferative disorders comprising the same as an active ingredient.
  • Protein kinases are enzymes that catalyze the phosphorylation of hydroxy groups on tyrosine, serine and threonine residues of proteins.
  • the protein kinases play an important role in the growth factor signal transduction that causes cell growth, differentiation and proliferation, and thus the activity of protein kinases affects almost all aspects of cell life.
  • Protein kinases can be classified into tyrosine kinases (TK) and serine-threonine kinases (STK).
  • tyrosine kinases are cell surface proteins that, when bound to growth factor ligands, convert the growth factor receptors into active form and interact with proteins on the inner surface of the cell membrane, causing phosphorylation on tyrosine residues of these receptors and other proteins.
  • growth factor receptors are cell surface proteins that, when bound to growth factor ligands, convert the growth factor receptors into active form and interact with proteins on the inner surface of the cell membrane, causing phosphorylation on tyrosine residues of these receptors and other proteins.
  • complexes with various cytoplasmic signaling molecules are formed inside cells, resulting in numerous cellular responses, such as cell growth differentiation and proliferation, and expression of metabolic effects on extracellular microenvironments (Schleessinger and Ullrich, Neuron). 9: 303-391 (1992).
  • RTK receptor tyrosine kinase
  • Subtype receptor tyrosine kinases such as those previously termed 19 or more "HER RTKs" are known and the HER RTKs include epidermal growth factor receptor (EGFR), HER2, HER3 and HER4, etc.,
  • EGFR epidermal growth factor receptor
  • the receptor tyrosine kinases Consists of an extracellular glycosylated settlement bath domain, a transmembrane domain and an intracellular cytoplasmic domain capable of phosphorylating tyrosine residues on proteins.
  • the receptor tyrosine kinase subfamily consists of insulin receptor (IR), insulin like growth I receptor (IGF-1R) and insulin receptor related receptor (IRR).
  • IR and IGF-IR interact with insulin, IGF-I, and IGF-II to cross two cell membranes and contain two ⁇ -subunits and two completely extracellular glycosylated ⁇ subunits that contain the kinase domain. Forms heterotetramers;
  • the receptor tyrosine kinase subfamily includes PDGFR a, PDGFRp, CSFIR, c—Kit and c-Fms, designated as platelet induced growth factor receptor (PDGFR).
  • PDGFR platelet induced growth factor receptor
  • the receptor consists of a glycosylated extracellular domain consisting of a variable immunoglobulin-like loop and an intracellular domain. Due to its similarity to the PDGFR subfamily, fetal liver kinase (Flk) receptor subfamily belonging to the PDGFR group is known.
  • the Flk subfamily is a kinase insert domain-receptor fetal liver kinase-1 (KDR / Flk-1), Flk-1R, Flk-1, Fms-like tyrosine kinase 1 or 3 (FU-1 or FU-3), etc. Is done.
  • MET is named c ⁇ Met and is believed to play a role in primary tumor growth and metastasis as human hepatocyte growth factor receptor tyrosine kinase (hHGFR) (Plo ⁇ an et al., DN & P, 7 (6): 334-339 (1994)).
  • nonreceptor tyrosine kinases In addition to receptor tyrosine kinases, there is a specific family of complete intracellular TKs called nonreceptor tyrosine kinases or cellular tyrosine kinases (CTKs).
  • CTKs cellular tyrosine kinases
  • the non-receptor tyrosine kinase is transmembrane with extracellular domain It contains no domains and consists of the Src, Frk, Btk, Csk Abl, Zap70, Fes, Fak, Jak and Ack subfamily.
  • Src subfamily includes Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr, AURl (Aurora-B), AUR2 (Aurora-A), AUR3 (Aurora - C), Yrk and others (Bolen, Oncogene. 8: 2025-2031 (1993).
  • Pathogenic diseases associated with receptor tyrosine kinases and non-receptor tyrosine kinases include psoriasis, cirrhosis, diabetes, angiogenesis, recurrent stenosis, ophthalmic diseases, rheumatoid arthritis, autoimmune diseases, atherosclerosis, kidney disorders and the like.
  • receptor tyrosine kinases such as Bcr-Abl, EGFR, and VEGFR have been studied as a good anticancer target, and anticancer agents such as gleebag and iresa have been developed and marketed.
  • HGF / SF hepatocyte growth factor / scatter factor
  • c-Met is overexpressed or activated in many human cancers, including lung cancer, gastric cancer, skin cancer, kidney cancer, rectal cancer and pancreatic cancer, accompanied by tumor formation, tumor progression under increased cell motility and invasiveness (JG Christensen et al. al., Cancer Letters, 225: 1-26 (2005); ff.G. Jiang et al., Critical Reviews in Oncology / Hematology, 53: 35-69 (2005)).
  • c-Met and its ligand, HGF are expressed in many tissues, but are normally limited to cells of epithelial and mesenchymal origin, respectively.
  • HGF / SF is an angiogenesis factor and c-Met signaling in epithelial cells induces cell reactions (proliferation, motility, invasiveness, etc.) that are essential for angiogenesis.
  • c-Met and its ligand, HGF are co-expressed at increased levels in various human cancers.
  • receptors and ligands are usually expressed by different cell types, c-Met signaling is Most are commonly regulated by tumor-stroma interactions.
  • gene amplification, mutations and rearrangements of c ⁇ Met have been observed in various human cancers. Classes with germline mutations that activate c-Met kinase are susceptible to multiple kidney tumors and tumors of other tissues.
  • c-Met and / or HGF / SF are associated with disease progression in different types of cancer (lungs, colon, breast, prostate, liver, pancreas, brain, kidney, ovary, stomach, skin and bone)
  • Overexpression of c-Met or HGF / SF has been found to correlate with poor prognosis and disease outcome in many major human cancers including lung, liver, stomach and breast.
  • c-Met has been reported to be directly related to cancers without successful therapies such as pancreatic cancer, glioma and hepatocellular carcinoma, and lung cancer caused by ERBB3 signaling system activation due to overexpression of c-Met is Gefitinib (Gefitinib; It is reported that it is resistant to Irresa (trade name: Irresa) (JA Engelman, K. Zejnullahu et. Al. Science, 316: 1039-1043 (2007)).
  • HGF / SF binds to the extracellular domain of c-Met to activate c-Met, and activation of c-Met is tyrosine phosphorylation and downstream via Gabl and Grb2-mediated PI3-kinase and Ras / MAPK activation, respectively. Signaling to induce cell motility and proliferation.
  • c ⁇ Met has been shown to interact with other proteins leading to receptor activation, transformation and invasion, and c-Met also has an extracellular matrix such as ⁇ 6 4 integrin (laminin) that forms focal adhesion. It has been reported to promote HGF / SF dependent invasive growth by interacting with the receptor for the ECM) component.
  • laminin ⁇ 6 4 integrin
  • the present inventors made diligent research efforts to develop a composition for effectively preventing or treating various hyper proliferative disorders caused by abnormal tyrosine kinase activity by discovering compounds having inhibitory activity against tyrosine kinase.
  • a novel hydrazine-substituted pyrimidine derivative of formula (1) which has not been known until now, binds to hepatocyte growth factor (HGF) and activates phosphorylation, thereby proliferating, migrating, infiltrating and creating angiogenesis.
  • HGF hepatocyte growth factor
  • the present invention has been completed by discovering that it significantly inhibits the activity of c-Met kinase that triggers the formation of blood vessels.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for inhibiting c-Met tyrosine kinase activity comprising the novel hydrazine-substituted pyrimidine derivatives, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof as an active ingredient. .
  • Another object of the present invention is a pharmaceutical for the prevention or treatment of hyperproliferative disorders comprising the novel hydrazine-substituted pyrimidine derivatives, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof as an active ingredient. It is to provide a composition.
  • the present invention provides a method for producing bioethanol from the nettle family Hydrodictyaceae) comprising the following steps: to provide:
  • the present invention provides a pyrimidine derivative substituted with hydrazineone represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • Ri to 3 ⁇ 4 are each independently hydrogen; halogen; Hydroxy; Heterocycloalkyl of a pentagonal -hexagonal ring; Ci-C 3 alkoxy substituted with heterocycloalkyl of a pentagonal hexavalent ring; An aldehyde, Ci-C 5 alkyl substituted with a heterocycloalkyl of a pentagonal -hexagonal ring, dC 3 alkoxy substituted with a heterocycloalkyl of a pentagonal hexagonal ring, or phenyl substituted with a halogen; Heterocycloalkyl of a pentagonal -hexagonal ring, dC 3 alkoxy substituted with a heterocycloalkyl of the pentagonal -hexagonal ring, d—C 5 alkyl, heteroaryl of a pentagonal -hexagonal ring substituted with hydroxy or halogen ; Amino
  • R 4 is heteroaryl of a 5-6 hexacyclic ring unsubstituted or substituted with dC 5 alkyl; Or phenyl substituted with cyano, halogen, halo dC 5 alkyl or phenyl dC 3 alkoxy.
  • the present inventors made diligent research efforts to develop a composition for effectively preventing or treating various hyper proliferative disorders caused by abnormal tyrosine kinase activity by discovering compounds having inhibitory activity against tyrosine kinase.
  • a novel hydrazine-substituted pyrimidine derivative of Formula 1 which has not been known so far, significantly inhibits the activity of c-Met kinase.
  • the compound of formula 1 of the present invention binds to hepatocyte growth factor (HGF) to activate the phosphorylation of c-Met kinase that triggers cell proliferation, migration, invasion and formation of neovascularization Significantly inhibit activity.
  • HGF hepatocyte growth factor
  • the compounds of the present invention can be usefully used to treat or prevent various aproliferative diseases mediated by cell proliferation and excessive angiogenesis.
  • halogen herein refers to a halogen group element and includes, for example, fluoro, chloro, bromo and iodo.
  • heterocycloalkyl as used herein means a saturated carbon ring containing oxygen, sulfur or nitrogen in the ring as a heteroatom.
  • the heteroatom is nitrogen or oxygen.
  • the number of heteroatoms is 1-4, preferably 1-2.
  • Heterocycloalkyl of a pentagonal hexagonal ring means that the sum of the numbers of carbon and heteroatoms constituting the ring is 5-6.
  • alkoxy refers to a radical formed by removing hydrogen from an alcohol, and when dC 3 alkoxy is substituted, the carbon number of the substituent is not included.
  • alkyl refers to a straight or branched saturated hydrocarbon group, and includes, for example, methyl, ethyl, propyl, isobutyl, pentyl or nuclear chambers and the like.
  • CrCsalkyl means an alkyl group having an alkyl unit having 1 to 5 carbon atoms, and when CrC 5 alkyl is substituted, the carbon number of the substituent is not included.
  • d-Cs alkyl is preferably dC 3 alkyl, more preferably dC 2 alkyl.
  • heteroaryl refers to a heterocyclic aromatic group containing oxygen, sulfur or nitrogen in the ring as a heteroatom.
  • the heteroatom is nitrogen or oxygen, more preferably nitrogen.
  • the number of heteroatoms is 1-4, preferably 1-2.
  • heteroaryl aryl is preferably monoaryl or biaryl.
  • 3 ⁇ 4 and R 3 in formula 1 of the present invention are hydrogen, R 2 is halogen; Hydroxy; Morpholine; Piperidine; Piperazine; Morpholino dC 3 alkoxy; Piperazinyl C ⁇ C 3 alkoxy; Pyridinyl dC 3 alkoxy; Piperidinyl dC 3 alkoxy; Aldehydes, morpholino dC 3 alkoxy, Phenyl substituted with piperazinyl C ⁇ C 3 alkoxy, morpholino dC 5 alkyl or halogen; Piperidinyl pyrazole; Pyridine substituted with halogen, piperazine or morpholino dC 3 alkoxy; Amino dC 3 alkoxy; Or 1,2, 3, 6-tetrahydropyridine unsubstituted or substituted with dC 5 alkyl or CrC 4 alcohol.
  • R 4 of formula 1 of the present invention is pyrazole substituted with Ci-C 5 alkyl; Unsubstituted pyridine; Or phenyl substituted with cyano, halogen, halo Ci-C 5 alkyl or phenyl dC 3 alkoxy.
  • the hydrazine silver-substituted pyrimidine derivative represented by Formula 1 of the present invention is selected from the group consisting of compounds represented by the following Formulas 2 to 55:
  • the hydrazineone-substituted pyrimidine derivatives are selected from the group consisting of compounds represented by the formulas (6), (7), (12), (22), (23), (29), (32), (41) and (47).
  • the nine compounds listed above have very low IC 50 values of 0.01 ⁇ or less in c-Met kinase inhibitory activity. Thus, they can be used as very effective therapeutic compositions for various dysplastic diseases.
  • the pyrimidine derivatives substituted with the hydrazineone of the present invention can be used in the form of pharmaceutically acceptable salts, and acid salts formed by pharmaceutically acceptable free acids are useful as salts. With free acid Inorganic and organic acids can be used.
  • pharmaceutically acceptable salts of the hydrazineone-substituted pyrimidine derivatives of the present invention are hydrochloride, bromate, sulfate, phosphate, citrate, acetate, trifluoroacetate, lactate, tartarate, maleate, Fumarate, gluconate, methanesulfonate, glyconate, succinate, 4-luenesulfonate, gluturonate, temponate, glutamate, or aspartate And salts formed using various inorganic and organic acids conventionally used in the art.
  • hydrazineone-substituted pyrimidine derivatives of the present invention may also exist in the form of solvates (eg hydrates).
  • the present invention is for inhibiting c-Met tyrosine kinase activity comprising a pyrimidine derivative substituted with the above-described hydrazine silver, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a solvate thereof as an active ingredient. It provides a pharmaceutical composition.
  • the present invention provides a hyperproliferative disorder comprising the above-described pyrimidine-substituted hydrazine derivative of the present invention, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient. It provides a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of.
  • the novel hydrazinyl-substituted pyrimidine derivatives used in the present invention have already been described above, and are omitted in order to avoid excessive duplication.
  • the hydrazine-substituted pyrimidine derivative of the present invention is selected from the group consisting of compounds represented by the formula (6), (15), (16), (23), (32), (43), and (47).
  • hypo proliferative disorder refers to a pathological condition caused by excessive cell growth, division and migration that is not regulated by general limiting means in a normally growing animal.
  • Aberrant proliferative diseases that are prevented or treated with the compositions of the present invention include, for example, cancer, diabetic retinopathy, prematurity retinopathy, corneal graft rejection, neovascular glaucoma, melanoma, proliferative retinopathy, psoriasis, and rheumatism.
  • the cancer which is one of the aberrant proliferative diseases which can be prevented and treated with the composition of the present invention is lung cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, colon cancer, ovarian cancer, renal cell cancer, prostate cancer or brain tumor.
  • the pharmaceutical composition of the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical compositions of the present invention are those commonly used in the preparation, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbbi, manniol starch, acacia gum, phosphate, alginate, Gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyridone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil Including but not limited to.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include a lubricant, a humectant, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifier ⁇ suspending agent, a preservative, and the like.
  • a lubricant e.g., talc, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mann
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally, and in the case of parenteral administration, it may be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, transdermal administration, or the like.
  • Suitable dosages of the pharmaceutical compositions of the present invention vary depending on factors such as formulation method, mode of administration, age, weight, sex, morbidity, condition of food, time of administration, route of administration, rate of excretion, and reaction response. It may be prescribed.
  • the daily dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is, for example, 0.001-100 mg / kg.
  • compositions of the present invention may be formulated into conventional formulations using pharmaceutically acceptable carriers and / or excipients according to methods which can be easily carried out by those skilled in the art.
  • Conventional formulations include, for example, oral (tablets, capsules, powders), oral, sublingual, intrarectal, intravaginal, intranasal, topical or parenteral (intravenous, intracavernous, intramuscular, subcutaneous). And dosage forms).
  • the compounds according to the invention may be in the form of tablets containing starch or lactose, in the form of capsules alone or in the form of excipients, or in the form of elixirs or suspending agents containing chemicals to flavor or color. It can be administered orally, orally or sublingually.
  • Liquid formulations may include suspending agents (for example, a mixture of semisynthetic glycerides such as methylcellose, witepsol or apricot kernel oil and PEG-6 esters or PEG-8 and caprylic / And pharmaceutically acceptable additives such as glyceride mixtures such as those of capric glycerides.
  • a sterile aqueous solution when injected parenterally, for example, intravenously, intracavernosally, intramuscularly, subcutaneously and intratracheally, it is most preferably used as a sterile aqueous solution, wherein the solution is to have isotonicity with blood. It may also contain other substances (eg salts or manny, monosaccharides such as glucose).
  • the present invention is a novel hydrazine-substituted pyrimidine derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a pharmaceutical composition for inhibiting c-Met tyrosine kinase activity comprising them as an active ingredient and hyper proliferative disorder It provides a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of.
  • the present invention efficiently inhibits the activity of c-Met tyrosine kinase and thereby causes various dysplastic diseases associated with excessive cell proliferation and growth due to abnormal kinase activity, such as cancer, psoriasis, rheumatoid arthritis, diabetic retinopathy, etc. It can be usefully used as a therapeutic agent for.
  • Step 1 (S) -tert-butyl 4- (4- (2- (2- ((3- (3-cyanophenyl) -6 oxopyridazin-1 (6H) -yl) methyl) morpholino Preparation of Pyrimi 5-yl) -1 ⁇ -pyrazol-1-yl) piperidine-1-carboxylate
  • Acetyl 3-chloro-6- (3) fluorophenyl) pyridazine 109 (0.522 ⁇ 01) After dissolving in 2ml of acid and charged with nitrogen and stirred at 120 ° C. for 4 hours. After reaction, the acetic acid was concentrated under reduced pressure and when solid formed, washed with H20 20mK * 3) to obtain 83 mg (83%) of a pink solid.
  • Inhibitory activity against c-Met kinase was determined using Dissociation Enhanced Lanthanide Fluoro Inimiuio Assay (DELFIA; Perk in Elmer), a type of time-resolved fluorescence (TRF). Analyzed.
  • DELFIA Dissociation Enhanced Lanthanide Fluoro Inimiuio Assay
  • TRF time-resolved fluorescence
  • Anti-phosphotyrosine antibody with flow path product was diluted 1: 2,500, added to 100 mL per well, incubated under shaking, and washed 1 time after PBS-T complete solution (PBS 0.05% TR20). . Enhancement solution (100 mL) was added and shaken for 5 minutes, then read in the wavelength range of 615/665 ran with a Wallac Envision 2103 instrument. The IC 50 of the test compound which carried out the experiment was determined by two data sets and was obtained using Prism (version 5.01, GraphPad) software.
  • Cell culture medium RPMI 1640 medium, fetal bovine serum (FBS) and trypsin were purchased from Gibco (Grand Island, NY), and sodium hydrogen carbonate, amphotericin B and gentamicin were sig-chemical products.
  • reagents such as SRB (sulforhodamine) B, Trisma base, and trichloroacetic acid (TCA), which are reagents used in cytotoxicity measurement experiments, were purchased from Sigma Chemical.
  • SRB sulforhodamine
  • Trisma base trichloroacetic acid
  • TCA trichloroacetic acid
  • CellTiter 96R AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay was purchased from Promega.
  • T-25 culture vessels used for cell culture, 96-well plates and other disposable supernatants used for cell culture were manufactured by Lincoln Park (NJ).
  • the drug used in the experiment was diluted as a test medium to the desired concentration in the test, and the final dimethyl sulfoxide concentration was adjusted to 0.5% or less.
  • the cancer cell lines used in the experiment were all human-derived cancer cell lines, and gastric cancer cell lines Hs746T and MKN-45 were used. Cultures were incubated in 37 ° C and 5% carbon dioxide incubator using RPMI 1640 medium added with 10% FBS (fetal bovine serum), and maintained once every 3-4 days.
  • FBS fetal bovine serum
  • Hs746T dispenses 5X10 3 cells
  • MKN-45 dispenses IX 10 4 cells
  • the cells adhere to the bottom for 24 hours.
  • the culture solution was removed, treated with cold TCA solution in each well and left at 4 ° C for 1 hour to fix the cells.
  • the dye solution dissolved 0.4% SRB in 1% acetic acid solution was added and left for 30 minutes at room temperature to stain the cells.
  • Extra SRB that did not bind to cells was removed by washing with 1% acetic acid solution, and SRB was eluted by adding 10 ⁇ Tris unbuffered solution of H 10.3-10.5.
  • the absorbance of each well was measured in a wavelength range of 520 nm using a niicroplate reader.
  • the cytotoxicity of the drug was calculated by the formula [(T-Tz) / (Tz) xl00.
  • Cancer cell proliferation inhibition measurement using MTS assay was performed as follows. Specifically, after incubation with the compound of the present invention, 20 ⁇ L per well was added after mixing the PMS solution and MTS solution constituting the Promega CellTiter 96 R AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay product. After leaving for 4 hours in the incubator was taken out and left for 10 minutes at room temperature. After measuring the absorbance at 490 nM using Molecular Device's SpectraMax250 model IC50 value was calculated.
  • Hs746T Cancer Cell
  • ICso iM IC 50 values of many compounds of Hs746T, which are cancer cells, were found to be less than 0,01 ⁇ . Showed very low values of 0.001 and 0.003 ⁇ , respectively. From this it can be seen that the novel hydrazine-substituted pyrimidine derivatives according to the present invention or pharmaceutically acceptable salts thereof have an excellent effect of inhibiting proliferation of cancer cells and the like.
  • the airtight cloth was filled to prepare a powder.
  • the capsules were prepared by layering the gelatine capsules according to a conventional method for preparing capsules.
  • the solution was layered in a 5 mi type I ampoule of clear glass, encapsulated under an upper grid of air by dissolving the glass, and sterilized by autoclaving at 120 ° C. for at least 15 minutes to prepare an injection solution.

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Abstract

본 발명은 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염, 이들을 유효성분으로 포함하는 c-Met 티로신 키나아제 활성 억제용 약제학적 조성물 및 이상증식성 질환(hyper proliferative disorder)의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 c-Met 티로신 키나아제의 활성을 효율적으로 억제함으로써 비정상적인 키나제의 활성으로 인한 과도한 세포 증식 및 성장과 관련된 다양한 이상증식성 질환, 예를 들어 암, 건선, 류마티스 관절염, 당뇨병성 망막증 등의 치료제로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 및 그의 용도
【기술 분야】
본 발명은 티로신 키나아제 억제활성을 가지는 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 다양한 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)의 예방 및 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
【배경 기술】
단백질 키나아제 (PK)는 단백질의 티로신， 세린 및 트레오닌 잔사 상의 히드록시 그룹의 인산화를 촉매하는 효소이다. 상기 단백질 키나아제는 세포 성장, 분화 및 증식을 야기하는 성장 인자 신호 전달에 중요한 역할을 하고, 따라서 단백질 키나아제의 활성은 세포 생명의 거의 모든 양태에 영향을 미친다.
단백질 키나아제의 돌연변이나 과발현에 의한 세포신호전달체계의 이상은 건선과 같이 비교적 생명에 위협적이지 않은 질환에서부터 암과 같은 독성 (병원성) 질환에 걸친 기질 (stroma) 질환에 밀접한 영향을 미친다. 단백질 키나아제는 티로신 키나아제 (TK) 및 세린-트레오닌 키나아제 (STK)로 분류할 수 있다.
티로신 키나아제의 활성의 주요 양태들 중의 하나는 이것이 성장 인자 수용체와 관련이 있다는 것이다. 성장 인자 수용체는 세포 표면 단백질로서, 성장 인자 리간드에 결합된 경우에는 성장 인자 수용체가 활성 형태로 전환되어 세포막의 내부 표면상의 단백질과 상호 작용하여, 상기 수용체와 기타 단백질의 티로신 잔사 상에서 인산화가 유발되고, 세포 내부에 각종 세포질성 시그널링 분자와의 복합체가 형성되어 궁극적으로는 수많은 세포 반응, 예를 들면, 세포 성장 분화 및 증식, 세포외 미소환경에 대한 대사성 효과 발현 등이 나타난다 (Schleessinger and Ullrich, Neuron. 9： 303-391(1992)). 티로신 키나아제의 활성을 지닌 성장 인자 수용체는 수용체 티로신 키나아제 (Receptor tyrosine kinase, RTK)로서 알려져 있다 . 상기 수용체 티로신 키나아제는 다양한 생물학적 활성을 나타내는 큰 계열의 막관통 (transmembrane) 수용체를 포함한다 .
종래에 19개 이상의 "HER RTK" 로 명 명되는 것과 같은 아계열의 수용체 티로신 키나아제가 알려져 있고 상기 HER RTK에는 상피 성장 인자 수용체 (EGFR) , HER2, HER3 및 HER4 등이 포함된다 , 상기 수용체 티로신 키나아제는 세포외 글리코실화리간드 결제조 도메인 , 막관통 도메 인 및 단백질 상의 티로신 잔사를 인산화시킬 수 있는 세포내 세포질성 도메인으로 이루어진다 .
또한, 수용체 티로신 키나아제 아계열은 인슐린 수용체 (IR) , 인슐린 유사 성장 I 수용체 ( IGF-1R) 및 인슐린 수용체 관련 수용체 (IRR)로 이루어진다 . IR 및 IGF-IR은 인술린， IGF-I 및 IGF-II와 상호 작용하여 , 세포막을 가로지르고 키나아제 도메 인을 함유하는 2개의 β 소단위체와 2개의 완전하게 세포외 글리코실화된 α소단위체의 이종사량체 (heterotetramer)를 형성한다 .
또한, 수용체 티로신 키나아제 아계열은 혈소판 유도된 성장 인자 수용체 (PDGFR)로서 명 명되는 PDGFR a , PDGFRp , CSFIR, c— Kit 및 c-Fms을 포함한다 . 상기 수용체는 가변수의 면역글로블린 유사 루프와 세포내 도메 인으로 구성된 글리코실화 세포외 도메인으로 이루어진다 . PDGFR 아계열과의 유사성으로 인해 상기 PDGFR 그룹에 포함되는 태아 간 키나아제 (Flk) 수용체 아계열이 알려져 있다. 상기 Flk 아계열은 키나아제 삽입물 도메 인-수용체 태아 간 키나아제 -1(KDR/Flk-1) , Flk-1R, Flk-1, Fms-유사 티로신 키나아제 1 또는 3(FU-1 또는 FU-3) 등으로 이루어진다. 티로신 키나아제 성장 인자 수용체 계열로서 MET은 cᅳ Met으로서 명명되고 사람 간세포 성장 인자 수용체 티로신 키나아제 (hHGFR)로서 1차적 종양 성장 및 전이 에 일정 역할을 하는 것으로 여겨지고 있다 (Plo丽 an et al . , DN&P, 7 (6) :334-339(1994)) .
수용체 티로신 키나아제 이외에도， 비수용체 티로신 키나아제 또는 세포성 티로신 키나아제 (CTK)로 불리우는 특정 계열의 완전한 세포내 TK가 존재한다 . 상기 비수용체 티로신 키나아제는 세포외 도메인과 막관통 도메인을 함유하지 않고， Src, Frk, Btk, Csk Abl, Zap70, Fes, Fak, Jak 및 Ack 아계열로 이루어진다. 이중 Src 아계열은 Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr, AURl(Aurora-B) , AUR2(Aurora-A) , AUR3(Aurora~C) , Yrk 등을 포함한다 (Bolen, Oncogene. 8： 2025-2031(1993)).
수용체 티로신 키나아제 및 비수용체 티로신 키나아제와 관련된 병원성 질환은 건선, 간경변, 당뇨병, 혈관형성, 재발 협착증， 안과질환， 류마티스성 관절염， 자가면역 질환, 죽상경화증, 신장 장애 등이 포함된다. 상기에서 살펴본 PK 중에서 Bcr-Abl, EGFR, VEGFR 등의 수용체 티로신 키나아제는 좋은 항암제 타겟으로 많이 연구되어 왔으며, 글리백， 이레사등의 항암제가 개발되어 시판되고 있다.
또한, 항암제 타겟으로 연구되고 있는 RTK 중에서도 간세포 성장인자 (Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor, HGF/SF) 수용체인 c- Met (Hepatocyte Growth Factor Receptor： HGFR)을 타겟으로 하는 항암제가 많이 개발되고 있다 (J. G. Christensen, J. Burrows et al . , Cancer Letters, 2005, 225, 1-26； W0 2004/076412； W0 2006/021881 A; W0 2006/021886； W02007/064797) .
c-Met은 종양 형성， 증대된 세포 운동성 및 침입성 하에서의 종양 진행, 및 전이에 수반되는 폐암， 위암, 피부암, 신장암, 직장암, 췌장암 등의 많은 인간 암에서 과발현 또는 활성화되어 있다 (J. G. Christensen et al. , Cancer Letters, 225:1-26(2005); ff. G. Jiang et al . , Critical Reviews in Oncology/Hematology, 53:35-69(2005)). c-Met 및 이의 리간드인 HGF는 많은 조직에서 발현되지만, 정상적으로는 주로 상피 및 간엽 기원의 세포 각각으로 한정되어 발현된다. c-Met 및 HGF/SF는 정상적인 포유동물의 발육에 필요하며, 세포 전이， 세포 증식 및 생존， 형태 형성성 분화 및 3-차원적 관상 구조물 (신 세뇨관 세포, 선 형성 등)의 조직화에서 중요한 것으로 밝혀졌다. HGF/SF는 신생혈관생성 인자이며， 상피 세포에서의 c-Met 신호전달은 신생혈관생성에 필수적인 세포 반웅 (증식, 운동성, 침입성 등)을 유도한다.
또한 c-Met 및 이의 리간드인 HGF는 다양한 인간 암에서 증가된 수준으로 공ᅳ발현되는 것으로 밝혀졌다. 그러나， 수용체 및 리간드는 통상적으로 상이한 세포 유형에 의해 발현되기 때문에， c-Met 신호전달은 대부분 보편적으로 종양-기질 (tumor-stroma) 상호작용에 의해 조절된다. 또한, cᅳ Met의 유전자 증폭， 돌연변이 및 재배열이 다양한 인간 암에서 관찰되었다. c-Met 키나아제를 활성화시키는 생식계 돌연변이를 갖는 부류는 다중 신장 종양 및 다른 조직의 종양에 걸리기 쉽다.
c-Met 및 /또는 HGF/SF의 발현은 상이한 유형의 암 (폐, 결장, 유방, 전립선， 간, 췌장， 뇌, 신장， 난소, 위, 피부 및 뼈 등의 암)의 질환 진행 상태와 연관되어 있으며, c-Met 또는 HGF/SF의 과발현은 폐, 간, 위 및 유방을 포함한 많은 주요 인간 암에서 나쁜 예후 및 질환 결과와 상관되는 것으로 밝혀졌다. 또한， c-Met은 췌장암， 신경교종 및 간세포암과 같은 성공적인 치료법이 없는 암에 직접 관련되어 있다고 보고되었으며 , c-Met이 과발현되면서 ERBB3 신호전달체계 활성화로 야기된 폐암이 게피티니브 (Gefitinib; 이레사 (상품명: Irresa))에 내성을 갖게 된다고 보고되었다 (J. A. Engelman, K. Zejnullahu et. al . Science, 316： 1039- 1043(2007)).
HGF/SF는 c-Met의 세포외 도메인에 결합하여 c-Met을 활성화시키며， c-Met의 활성화는 각각 Gabl 및 Grb2 매개된 PI3-키나제 및 Ras/MAPK 활성화를 통한 티로신 포스포릴화 및 다운스트림 시그널화를 이끌어, 세포 운동성 및 증식을 유도한다.
cᅳ Met은 수용체 활성화， 형질전환 및 침습을 이끄는 다른 단백질과 상호작용하는 것으로 밝혀졌고, 또한 c-Met은 초점부착 (focal adhesion)을 형성하는 α6 4 인테그린 (Integrin:라미닌과 같은 세포외 기질 (ECM) 성분에 대한 수용체)과 상호작용하여 HGF/SF 의존적 침습적 성장을 촉진하는 것으로 보고되었다.
이에, 본 발명자들은 단백질 키나아제 억제제를 개발하기 위한 연구를 수행하 던 중, 특정한 구조의 히드라진온이 치환된 모르폴리노 피리미딘 화합물이 c-Met , Ron, KDR, Lck, Fltl, Flt3, Tie2, TrkA, TrkB, b-Raf, Aurora-A 등과 같은 단백질 키나아제에 대한 우수한 억제효과를 가진다는 사실을 실험적으로 관찰함으로써 , 이들이 이상증식성 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
본 발명자들은 티로신 키나아제에 대한 억제활성을 가지는 화합물을 발굴함으로써 비정상적인 티로신 키나아제의 활성에 의해 유발되는 다양한 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)을 효율적으로 예방 또는 치료용 조성물을 개발하기 위하여 예의 연구 노력하였다. 그 결과， 지금까지 알려지지 않은 하기 화학식 1의 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체가 간세포 성장인자 (h印 atocyte growth factor, HGF)와 결합하여 인산화를 활성화시킴으로써 세포의 증식, 이동， 침윤 및 신생혈관의 형성올 촉발하는 c-Met 키나아제의 활성을 유의하게 억제시킨다는 사실을 발견함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체, 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 c-Met 티로신 키나아제 활성 억제용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체, 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)의 예방또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다. 본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
【기술적 해결방법】
본 발명의 일 양태에 따르면， 본 발명은 다음 단계를 포함하는 그물말 Family Hydrodictyaceae) 조류로부터 바이오에탄올의 제조방법을 제공한다:
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 하기의 화학식 1로 표시되는 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염을 제공한다:
화학식 1
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상기 화학식에서，
Ri 내지 ¾는 각각 독립적으로 수소; 할로겐; 하이드록시; 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬; 5각_6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 Ci-C3 알콕시; 알데하이드, 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 Ci-C5 알킬, 5각ᅳ 6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 d-C3 알콕시 또는 할로겐으로 치환된 페닐; 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬, 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 d-C3 알콕시 , d— C5 알킬， 하이드록시 또는 할로겐으로 치환된 5각 -6각 고리의 헤테로아릴; 아미노 d-C3 알콕시 ; 또는 비치환되거나 d-C5 알킬 또는 Crᅳ C4 알코을로 치환된 1，2,3，6_ 테트라하이드로피리딘이고, 내지 중 적어도 하나는 수소가 아니며 ;
R4는 비치환되거나 d-C5 알킬로 치환된 5각 -6각 고리의 헤테로아릴; 또는 시아노, 할로겐， 할로 d-C5 알킬 또는 페닐 d-C3 알콕시로 치환된 페닐이다.
본 발명자들은 티로신 키나아제에 대한 억제활성을 가지는 화합물을 발굴함으로써 비정상적인 티로신 키나아제의 활성에 의해 유발되는 다양한 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)을 효율적으로 예방 또는 치료용 조성물을 개발하기 위하여 예의 연구 노력하였다. 그 결과， 지금까지 알려지지 않은 상기 화학식 1의 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체가 c-Met 키나아제의 활성을 유의하게 억제시킨다는 사실을 발견하였다. 본 발명에 따르면， 본 발명의 화학식 1의 화합물은 간세포 성장인자 (hepatocyte growth factor, HGF)와 결합하여 인산화를 활성화시킴으로써 세포의 증식, 이동， 침윤 및 신생혈관의 형성을 촉발하는 c-Met 키나아제의 활성을 유의하게 억제한다. 따라서 , 본 발명의 화합물은 세포의 이상증식 및 과도한 혈관신생을 매개로 하는 다양한 이상증식성 질환을 치료 또는 예방하는 데에 유용하게 아용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "할로겐" 은 할로겐족 원소를 나타내며， 예컨대, 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 포함한다.
본 명세서에서 용어 "헤테로사이클로알킬" 은 헤테로원자로서 고리 내에 산소， 황 또는 질소를 포함하는 포화 탄소고리를 의미한다. 바람직하게는, 혜테로원자는 질소 또는 산소이다. 헤테로원자의 개수는 1- 4이며, 바람직하게는 1-2이다. "5각ᅳ 6각 고리의 헤테로사이클로알킬" 은 고리를 이루는 탄소 및 헤테로원자의 숫자의 합이 5-6개임을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "알콕시" 는 알코을에서 수소가 제거되어 형성된 라디칼올 의미하며， d-C3 알콕시가 치환된 경우 치환체의 탄소수는 포함되지 않은 것이다.
본 명세서에서 용어 "알킬" 은 직쇄 또는 분쇄의 포화 탄화수소기를 의미하며, 예를 들어, 메틸， 에틸， 프로필, 이소부틸， 펜틸 또는 핵실 등을 포함한다. CrCs알킬은 탄소수 1 내지 5의 알킬 유니트를 가지는 알킬기를 의미하며， CrC5 알킬이 치환된 경우 치환체의 탄소수는 포함되지 않은 것이다. 화학식 1에서, d-Cs 알킬은 바람직하게는 d-C3 알킬, 보다 바람직하게는 d-C2알킬이다.
본 명세서에서 용어 "헤테로아릴" 은 헤테로원자로서 고리 내에 산소， 황 또는 질소를 포함하는 헤테로사이클릭 방향족기를 의미한다. 바람직하게는, 헤테로원자는 질소 또는 산소이며， 보다 바람직하게는 질소이다. 헤테로원자의 개수는 1-4이며， 바람직하게는 1-2이다. 헤테로아릴에서 아릴은 바람직하게는 모노아릴 또는 비아릴이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면， 본 발명의 화학식 1의 ¾ 및 R3는 수소이고, R2는 할로겐; 하이드록시 ; 모르폴린; 피페리딘; 피페라진; 모르플리노 d-C3 알콕시; 피페라지닐 C厂 C3 알콕시; 피를리디닐 d-C3 알콕시; 피페리디닐 d-C3 알콕시; 알데하이드， 모르폴리노 d-C3 알콕시, 피페라지닐 Cᅳ C3 알콕시， 모르폴리노 d-C5 알킬 또는 할로겐으로 치환된 페닐; 피페리디닐 피라졸; 할로겐， 피페라진 또는 모르폴리노 d-C3 알콕시로 치환된 피리딘; 아미노 d-C3 알콕시; 또는 비치환되거나 d-C5 알킬 또는 CrC4 알코을로 치환된 1,2, 3, 6-테트라하이드로피리딘이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면， 본 발명의 화학식 1의 R4는 Ci-C5 알킬로 치환된 피라졸; 비치환된 피리딘; 또는 시아노, 할로겐， 할로 Ci-C5 알킬 또는 페닐 d-C3 알콕시로 치환된 페닐이다.
본 발명의 보다 바람직한 구현예에 따르면， 본 발명의 화학식 1로 표시되는 히드라진은이 치환된 피리미딘 유도체는 하기의 화학식 2 내지 55로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다:
화학식 2 화학식 3
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화학식 6 화학식 7
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화학식 8 화학식 9
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화학식 11
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화학식 12 화학식 13
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화학식 14 화학식 15
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화학식 16 화학식 17
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화학식 18 화학식 19
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화학식 20 화학식 21
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화학식 22 화학식 23
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화학식 26 화학식 27
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화학식 32 화학식 33
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화학식 34 화학식 35
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화학식 36 화학식 37
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화학식 38 화학식 39
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화학식 40 화학식 41
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화학식 42 화학식 43
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화학식 46 화학식 47
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가장 바람직하게는， 본 발명의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체는 상기의 화학식 6， 7， 12, 22, 23, 29, 32, 41 및 47 로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따르면 상기 나열한 9가지 화합물은 c-Met 키나아제 저해활성에 있어서 0.01 μΜ 이하의 매우 낮은 IC50 값을 가진다. 따라서 이들은 다양한 이상증식성 질환의 매우 효과적인 치료 조성물로 이용될 수 있다. 본 발명의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free 애시드)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 유리산으로는 무기산과 유기산을사용할수 있다.
바람직하게는， 본 발명의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체의 약제학적 허용 가능한 염은 염산염, 브름산염， 황산염, 인산염, 구연산염， 아세트산염, 트리플루오로아세트산염, 젖산염， 주석산염, 말레인산염, 푸마린산염， 글루콘산염， 메탄설폰산염， 글리콘산염， 숙신산염, 4- 를루엔설폰산염, 글루투론산염, 템본산염， 글루탐산염， 또는 아스파트산염으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않고 당업계에서 통상적으로 사용되는 다양한 무기산 및 유기산을 이용하여 형성되는 염이 모두 포함된다.
또한， 본 발명의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체는 용매화물 (예를 들면 수화물)의 형태로도 존재할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 히드라진은이 치환된 피리미딘 유도체 , 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 c-Met 티로신 키나아제 활성 억제용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체, 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명에서 사용되는 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체에 대해서는 이미 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위하여 이를 생략한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면， 본 발명의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체는 상기 화학식 6 7, 15, 16, 23, 32, 43 및 47로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 명세서에서 용어 "이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)" 은 정상적으로 성장 중인 동물체 내에서 일반적인 제한수단에 의해 조절되지 않는 과도한 세포의 성장， 분열 및 이동에 기인하여 유발되는 병적 상태를 의미한다. 본 발명의 조성물로 예방 또는 치료되는 이상증식성 질환에는 예를 들어 암， 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식 거부, 신생혈관성 녹내장， 홍색증， 증식성 망막증, 건선， 류마티스 관절염， 골관절염, 자가면역 질환, 크론씨병, 재발협착증， 아테름성 동맥경화, 장관 접착， 궤양， 간경병증, 사구체신염， 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 혈전성 미소혈관증, 기관 이식 거부 및 신사구체병증이 있으나, 이에 제한되지 않고 세포의 비정상적인 증식 및 신생혈관의 과도한 생성으로 인해 발생하는 모든 이상증식성 질환이 포함된다.
보다 바람직하게는, 본 발명의 조성물로 예방 및 치료할 수 있는 이상증식성 질환의 하나인 암은 폐암, 위암, 췌장암, 대장암， 난소암, 신장 세포암， 전립선암또는 뇌종양이다.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우， 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스， 솔비를， 만니를ᅳ 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슴, 알기네이트， 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀롤로스, 폴리비닐피를리돈, 셀를로스, 물, 시럽， 메틸 셀를로스, 메틸히드록시벤조에이트， 프로필히드록시벤조에이트， 활석 , 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제ᅳ 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed. , 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며， 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입， 근육 주입， 복강 주입， 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법， 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간， 투여 경로， 배설 속도 및 반웅 감웅성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 예컨대 0.001-100 mg/kg이다。
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라， 약제학적으로 허용되는 담체 및 /또는 부형제를 이용하여 통상적인 제제로 제형화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 통상적인 제형이라 함은 예를 들면 경구 (정제， 캡슐제, 분말제), 구강 내, 혀 밑, 직장 내， 질 내， 비강 내, 국소 또는 비경구 (정맥 내， 해면체 내, 근육 내, 피하 및 관 내를 포함) 투여 제형을 일컫는다. 예를 들면 본 발명에 따른 화합물은 전분 또는 락토오즈를 함유하는 정제 형태로, 또는 단독 또는 부형제를 함유하는 캡슐 형태로， 또는 맛을 내거나 색을 띄게 하는 화학 약품을 함유하는 엘릭시르 또는 현탁제 형태로 경구, 구강 내 또는 혀 밑 투여될 수 있다. 액체 제제는 현탁제 (예를 들면， 메틸셀를로오즈， 위템솔 (witepsol)과 같은 반합성 글리세라이드 또는 행인유 (apricot kernel oil)와 PEG-6 에스테르의 흔합물 또는 PEG-8과 카프릴릭 /카프릭 글리세라이드의 흔합물과 같은 글리세라이드 흔합물)와 같은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 제조된다. 또한, 비경구적으로 예를 들면， 정맥 내， 해면체 내, 근육 내, 피하 및 관내를 통하여 주사되는 경우 무균의 수용액 형태로서 사용하는 것이 가장 바람직하며， 이때 상기 용액은 혈액과의 등장성을 갖기 위하여 다른 물질들 (예를 들면 염 (salt) 또는 만니를， 글루코오스와 같은 단당류)를 함유할 수도 있다.
【유리한 효과】
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염, 이들을 유효성분으로 포함하는 c-Met 티로신 키나아제 활성 억제용 약제학적 조성물 및 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)의 예방또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
(b) 본 발명은 c-Met 티로신 키나아제의 활성을 효율적으로 억제함으로써 비정상적인 키나제의 활성으로 인한 과도한 세포 증식 및 성장과 관련된 다양한 이상증식성 질환， 예를 들어 암, 건선, 류마티스 관절염, 당뇨병성 망막증 등의 치료제로 유용하게 이용될 수 있다.
【발명의 실시를 위한 형태】
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로， 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다. 실시예
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "% "는 별도의 언급이 없는 경우, 고체 /고체는 (중량 /중량) , 고체 /액체는 (중량 /부피) %， 그리고 액체 /액체는 (부피 /부피) ¾)이다. 각 화합물의 제조방법 화합물 1: (S)-2-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(1- 메틸 -1H-피라졸 -4-일)피리다진 -3(2H)-은 단계 1: (S)-(4-벤질모르폴린 -2-일)메탄을의 제조
Figure imgf000020_0001
2- (벤질아미노)에탄올 (6.9 mL, 54 醒 ol)과 (?)-2- (클로로메틸)옥시란 (5 g, 54 mmol)을 물 (2 mL)/2-프로판올 (5 mL)에 녹이고, 상온에서 13시간 교반하였다. 반응 후， Et4N0H(35 wt, 70讓 ol)을 적가하고, 상온에서 4시간 추가로 교반하였다. 반응 종료 후, 염산 (1 N) 수용액으로 반웅액을 pH9로 맞춘 후, .CH2C12로 추출， 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하였다. 농축액을 관 크로마토크래피 (EtOAc r핵산 =6:4)로 정제하여 (S)-(4-벤질모르폴린 -2-일)메탄올 (5.7g, 50%)을수득하였다.
H-NMR(300 MHz, CDC13) δ δ 7.33-7.26(m, 5Η) , 3.89(dt, J = 11.2Hz, /= 2.4 Hz, 1H) , 3.70(dt, /= 11.2 Hz, / = 2.4 Hz, 1H), 3.67- 3.53(m, 3H), 2.70 - 2.64(m, 2H), 2.18(dt, / = 11.2 Hz, J= 3.3 Hz, 1H), 2.04-1.97(ιιι, 1H) 단계 2: (S)_모르폴린 -2-일메탄올의 제조
Figure imgf000021_0001
(5)-(4_벤질모르폴린 _2-일)메탄올 (5.5 g, 26 匪 ol)을 MeOH(50ml)에 녹인 후, Pd/C(10% Pd, 0.55g)를 가하고， ¾(gas)를 채운 후, 상은에서 12시간 교반하였다. 반웅 종료 후 셀라이트로 여과 및 감압 농축하여 (5)- 모르폴린 -2-일메탄올 (3.1 g, 99 %)을수득하였다.
H-NMR (300 匪 z, CDC13) δ δ 3.88 (d, J = 11.2 Hz, 1H) , 3.68 - 3.45 (m, 4H), 2.92 - 2.74 (m, 3H), 2.71 -2.58 (m, 1H) 단계 3: (S)ᅳ (4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메탄을의 제조
Figure imgf000021_0002
(5)-모르폴린_2-일메탄을(2.5 g, 21 腿 ol)을 EtOH (40ml)에 녹이고，
5一브로모 -2-클로로피리미딘 (4.5 g, 23 mmol)과 디이소프로필에틸아민 (7, 4 ml, 42腿 ol)을 가하고, 상온에서 12시간 교반하였다. 반웅 종료 후, 농축, 추출， 건조 (Na2S04), 여과한 다음, 감압 농축하였다. 농축액을 관 크로마토크래피 (EtOAc:핵산 =3:7)로 정제하여 (S)-(4-(5-브로모피리미딘 -2- 일)모르폴린 -2-일)메탄올 (5.09g, 87%)을수득하였다. Ή-NMR (300 MHz, CDC13) δ δ 8.31 (s, 2H), 4.46 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 4.02 (dd, 11.2 Hz, 2.5 Hz, 1H), 3.80 - 3.52 (m, 4H), 3.12 - 3.00 (m, 1H), 2.93 - 2.83 (m, 1H) 단계 4: (S)-(4-(5ᅳ브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸 4-메틸벤젠 설포네이트의 제조
Figure imgf000022_0001
(S)-(4-(5-브로모피리미딘 -2ᅳ일)모르폴린 -2-일)메탄을 (1.6 g, 5.8 画 1)을 CH2C12 (編)에 녹이고， 여기에 TsCl(1.7 g, 8.7 inmol), Et3N (1.6 ml, 11 画 ol), DMAP( 0.072 g, 0.58 國 ol)을 가한 다음， 상온에서 2시간 교반하였다. 반웅 종료 후， 물과 CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고， 잔여물을 관 크로마토크래피 (EtOAc/;? "핵산 =2:8)로 정제하여 (S)-(4ᅳ (5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸 4- 메틸벤젠설포네이트 (2.49 g, 99 %)을 수득하였다.
-讀 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8.29 (s, 2H), 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.49 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.14 - 4.05 (m, 2H), 3.93 (dd, / = 13.4 Hz, J = 7.6 Hz, 1H), 3.74 - 3.65 (m, 1H), 3.54 (dt, / = 11.2 Hz, J 2.5 Hz, 1H) , 3.08 ― 2.96 (in, 1H), 2.80 (dd, /= 13.4 Hz, J = 11.2 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H) 단계 5： (S)-2-( (4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일 )메틸) -6-(1- 메틸ᅳ 1H-피라졸 -4-일)피리다진ᅳ 3(2H)-온의 제조
Figure imgf000022_0002
(S)-(4-(5ᅳ브로모피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일)메틸 4ᅳ메틸벤젠설포 네이트 (2.5 g, 5.8隱 ol)을 DMF (20ml)에 녹인 후， (6-(1-메틸 -1H-피라졸- 4-일)피리다진 -3(2H)-온 (1.2 g, 6.9 mmol), Cs2C03(2.8 g, 8.7 隱 ol)을 가하고, 50°C에서 12시간 교반하였다ᅳ 반웅 종료 후, 물과 CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고， 잔여물을 관 크로마토크래피 (EtOAc//7~핵산 =2:8)로 정제하여 (S)_2-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린— 2-일)메틸 )-6-( 1-메틸 -1H-피라졸 -4-일)피리다진 -3(2H)-온 (1.51g, 60%)을 수득하였다. ᅳ賺 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.29 (s, 2H), 7.81 (s, IH), 7.77 (s
IH), 7.41 (d, 9.6Hz, IH), 6.98 (d, J = 9.6 Hz, IH) , 4.55 (d, J =
14.3 Hz, IH), 4.49 (dd, J = 13.4 Hz, J 7.6 Hz, IH) , 4.34 (d, J =
13.4 Hz, IH), 4.21 - 3.96 (m, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.57 (dt , J 11.2 Hz J = 2.4 Hz, IH), 3.25 - 3.10 (m, IH), 3.01 (dd, J 13.4 Hz, / = 11.2 Hz, IH) 화합물 2 ： (S)-2-((4-(5-하이드록시피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) - 6-( 1-메틸 -1H-피라졸 -4-일)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000023_0001
밀봉 튜브 (Sealed-tube )에 (S)-2-((4-(5-브로모피리미딘 -2- 일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-CL-메틸ᅳ 1H-피라졸ᅳ 4-일)피리다진 -3(2H)ᅳ온 (200 mg, 0.46 画 ol), 4，4,4'，4'，5,5,5' ,5'-옥타메틸— 2,2'_bi(l,3,2- 디옥사보로란 )(177 mg, 0.69 mmol), KOAc (182 mg, 1.9 mmol) 및 dppf(26 mg, 0.046 mmol)을 1，4ᅳ디옥산에 녹인 후, N2(gas) 충전하고， Pd(dppf)Cl2 (38 mg, 0.046 隱 ol)을 가하였다. 80°C에서 12시간 교반하였다. 반웅 종료 후, 물과 CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하였다. 이를 H20(1.6ml), THF(l,6ml)에 녹인 후 NaB03(69mg, 0.6940瞧01)을 넣고 상은에서 4시간 교반하였다. 반웅 종료 후, 물과 CH2C12을 이용하여 추출， 건조 (Na2S04 여과 및 감압 농축하고 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MO7:93)로 정제하여 (3)-2ᅳ((4ᅳ(5-하이드록시피리미딘-2- 일)모르폴린 -2-일 )메틸 )-6-( 1-메틸 -1H-피라졸 -4-일)피리다진 -3(2H)-온 (50mg , 30%)을 노란색 고체로 수득하였다ᅳ ᅳ證 (300 MHz, CDC13) δ 68.11(s, 2H), 7.83(s, IH) , 7.81(s, IH),
7.44(d, =9.3 Hz, IH), 7.49(d, 7=9.3 Hz, IH), 4.48-3.90 (m, 6H) , 3.94(s, 3H), 3.58(t, J=10.3 Hz, IH), 3.07(t, J=10.3 Hz, IH), 2.91 (t , J=10.3 Hz, IH) 화합물 3 ： (S)_6-(l-메틸 -IH-피라졸 -4-일) -2-((4-(5-(2-모르폴리노에특시) 피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000024_0001
2-((4-(5-하이드록시피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(1- 메틸 -1H-피라졸ᅳ4-일)피리다진 -3(2H)_온 (12 mg, 0.032 薩 ol)을 DMF(lml)에 가하고 여기에 4ᅳ(2-클로로에틸)모르폴린 하이드로클로라이드 (12 mg, 0.064 mol)와 2C03 ( 22 mg, 0.16 瞧 ol)을 가한 다음, 80°C에서 9시간 동안 교반하였다. 반웅 종료 후 물과 CH2C12을 이용하여 추출， 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고， 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:19)로 정제하고 (S)_6-(l-메틸 -1H-피라졸 -4-일) -2-((4— (5-(2- 모르폴리노에록시)피리미딘 -2—일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온 (16 mg, 58 %) 노란색 고체로 얻을 수 있다. -賺 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8.09 (s, 2Η), 7.79 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.39 (d, J = 9.4 Hz, 1H) , 6.96 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.53 - 4.40 (HI, 2H), 4.27 - 3.94 (m, 6H), 3.93 (s, 3H), 3.72 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.58 (dt, J 11.2 Hz, J 1.9 Hz, 1H), 3.18 - 3.05 (m, 1H), 2,94 (dd, J 13.0 Hz, J = 10.1 Hz, 1H), 2.74 (t, / = 5.4 Hz, 2H), 2.54 (t, J 4.4 Hz, 4H) 화합물 4 ： (S)-6-(l-메틸 -1H-피라졸 -4-일) -2-((4-(5-(4-((4-메틸피페 라진 -1-일)메틸)페닐)피리미딘— 2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온 단계 1: (S)-4-(2-(2— ((3-(1-메틸 -1H-피라졸 4-일) -6-옥소피리다진 - 6H) 일)메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일)벤즈알데하이드의 제조
Figure imgf000025_0001
밀봉 류브에 (5)— 2-((4-(5-브로모피리미딘— 2-일)모르폴린 -2- 일)메틸 )ᅳ6-(1-메틸 -1H-피라졸 -4-일)피리다진 -3(2H)-온 (30 mg, 0.069 隱 ol) (4-포르밀페닐)보로닉 애시드 (12 mg, 0.076 隱 ol), K2C03 (20 mg, 0.13 隱 ol)을 1,4-디옥산 (2ml)/H20(lml)에 녹인 후, 질소 층전 후 Pd(PPh3)4(4 mgᅳ 0.0035 隱 ol) 넣고 100 °C에서 2시간 교반하였다. 반웅 종료 후， 물과 CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:19)로 정제하여 (S)-4-(2-(2-((3-(l-메틸 -1H- 피라졸 -4-일 )-6-옥소피리다진 -1(6H)일 )메틸)모르폴리노)피리미딘 -5- 일)벤즈알데하이드 (25 mg, 80 %)을 갈색 고체로 얻을 수 있었다.
H-NMR 300 顧 z, CDCls) δ δ 10.0(s, 1H), 8.60(s, 2H), 7.80(s, 1H) 7.77 (s, 1H), 7.40(d, 7=9.7 Hz, 1H), 6.98(d, 9.7 Hz, 1H), 4.48(d, J=14.3 Hz, 1H), 4.21(dd, J=13.4 Hz, 7=7.6 Hz, 1H), 3.94(s, 3H), 3.60(dt, 11.2 Hz, 2.4 Hz, 1H), 3.32-3.18(m, 1H), 3.10(dd, J = 13.4 Hz, J=11.2 Hz, 1H) 단계 2: (5)-6ᅳ(1ᅳ메틸-11ᅳ피라졸-4-일)-2-((4-(5—(4-((4—메틸피페라진—1— 일)메틸)페닐)피리미딘— 2-일)모르폴린 -2—일)메틸)피리다진— 3(2H)-온의 제조
Figure imgf000026_0001
(5)-4-(2-(2-( (3-(1-메틸 -1H-피라졸 -4-일 )-6-옥소피리다진- 1(6H)일)메틸)모르폴리노)피리미딘 -5—일)벤즈알데하이드 (32 mg, 0.069 隱 ol)을 CH2C12 (2ml)에 녹인 후, 1-메틸피페라진 (16 l , 0.13 mmol), NaBH(0Ac)3 (23 mg, 0.10 mmol), ΑοΟΗ(5μ 1, 0.083 讓 ol)을 가한 다음, 상온에서 3시간 교반하였다, 반웅 종료 후, K2C03(5%)로 용액을 pH 8로 맞춘 후, 물과 C¾C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고, 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:19)로 정제하여 (S)-6-(l-메틸 -1H- 피라졸ᅳ 4-일) -2-((4ᅳ(5-(4-((4-메틸피페라진 -1-일)메틸)페닐)피리미딘 -2- 일)모르폴린ᅳ 2ᅳ일)메틸)피리다진 -3(2H)-온 (8m 21%)을 갈색 고체로 수득하였다. -腿 (300 MHz, CDC13) δ δ 8.55 (s, 2H), 7.82 (s, 1H), 7.78 (s
1H), 7.45 - 7.36 (m, 5H), 6.99 (d, / = 6.9 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.53(dd, J=13.0 Hz, 8.2 Hz, 1H), 4.44(d, 7=13.2 Hz, 1H), 4.24-4.00(m, 4H), 3.95(s, 3H), 3.62(dt, J=11.2 Hz, J=1.9 Hz, 1H), 3.56(s, 2H), 3.21(m, 1H), 3.08(dd, =43.2 Hz, 7=10.1 Hz, 1H), 2.69- 2.45(m, 8H), 2.36 (s, 3H) 화합물 5: (S)-3-(6-옥소 -l-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4- 일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -16-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴 하이드로클로라이드
단계 1: (S)-tert-부틸 4-(4-(2-(2-( (3-(3-시아노페닐 )-6 옥소피리다진 -1(6H)-일 )메틸) 모르폴리노)피리미 5-일 )-1Η-피라졸 -1- 일)피페리딘 -1-카르복실레이트의 제조
Figure imgf000027_0001
밀봉 류브에 )-2-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2- 일)메틸) 6 (1-메틸 -1H-피라졸 -4-일)피리다진 -3(2H)-온 (100 nig, 0.22 ol), tert-부틸 4-(4-(44,5, 5-테트라메틸 _1 3 2-디옥사보로란 -2-일 )-1Η-피라졸- 1-일)피페리딘 -1-카르복실레이트 (167 nig, 0.44 mol), Cs2C03(216 mg, 0.66 ol)을 DME (3ml)/H20(lml)에 가하고， N2(gas) 층전 후, Pd(PPh3)2Cl2(16 mg, 0.022 ol)을 넣은 후 80°C에서 3시간 교반하였다. 반웅 종료 후, 물과 CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04 여과 및 감압 농축하고, 잔여물을 관 크로마토크래피 (MeOH/MC=l:19)로 정제하여 (S)— tert-부틸 4-(4-(2-(2-((3_ (3-시아노페닐)— 6-옥소피리다진 -1(6H)_일 )메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일 ) - 1H 피라졸 -1-일)피페리딘 -1-카르복실레이트 (90mg, 64%) 노란색 고체로 수득하였다.
Έ-NMR (300 MHz, CDC13) δ 58.44 (s, 2H), 8.13 (s, 1H), 8.01 (d, 7.9 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 2H), 7.61 7.55 (in, 2H), 7.09 (d, J 9.7 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.58 (dd, / - 13.2 Hz, 7.9 Hz, 1H) , 4.40 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 13.2 Hz, J = 4.4 Hz, 1H), 4.28-4.22(m, 1H), 4.16-4.09 (m 1H), 4.02(dt, J=11.2 Hz, J=2.5 Hz, 1H) ' 3.61(dt, J - 11.2 Hz, 7=2.5 Hz 1H), 3.30-3.19 (m, 3H), 3.07(dd, J=13.0 Hz, J=10.0 Hz, 1H), 2.79(dt, J=12.0 Hz, J = 2.0 Hz, 2H), 2.30-2.16 (m, 2H), 1.94 dt , J = 12.3 Hz, J = 3.9 Hz, 2H), 1.49(s, 9H) 단계 2: (S)-3-(6—옥소 -l-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -IH-피라졸 -4-일) 피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일)메틸) -1 , 6—디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴 하이드로클로라이드의 제조
Figure imgf000028_0001
C)-tert-부틸 4ᅳ(4-(2— (2-((3-(3-시아노페닐) -6-옥소피리다진-
1(6H)-일)메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일) -1H-피라졸 -1-일)피페리딘 -1- 카르복실레이트 (33 nig, 0.052 画 ol)를 CH2Cl2에 가하고, 1,4- 디옥산 (O.liiil)에 용해된 4N-HC1를 넣고 밤새 교반하였다. 반웅 종료 후, CH2C12을 농축하고， 에테르로 웅고시켜 (S)-3-(6-옥소 -1-((4-(5-(1- (피페리딘ᅳ4-일 )-1Ηᅳ피라졸 -4-일)피리미딘— 2-일 )모르폴린 -2-일)메틸) -1 ,6- 디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 하이드로클로라이드 (22mg, 90%)를 노랜색 고체로 얻을 수 있었다. 隱 (300 匪 z, CDCls) δ 8.44 (s, 2H), 8.13 (sᅳ 1H) , 8.01 (d, J = 7.9 Hz, IH), 7.70 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 2H), 7.61 - 7.55 (in, 2H), 7.09 (d, J = 9.7 Hz, IH) , 4.64 (d, / = 13.2 Hz, 1H)' 4.58 (dd, / = 13.2 Hz, 7.9 Hz, IH) , 4.40 (d, 13.2 Hz, IH) , 4.29 (dd, J = 13.2 Hz, J = 4.4 Hz, IH), 4.28 - 4.22 (m, IH), 4.16 - 4.09 (m, IH), 4.02 (dt , J - 11.2 Hz, J = 2.5 Hz, IH), 3.61 (dt, J -- 11.2 Hz, J = 2.5 Hz, IH), 3.30 - 3.19 (m, 3H), 3.07 (dd, J = 13.0 Hz, J = 10.0 Hz, 1H), 2.79 (dt , / = 12.0 Hz, J = 2.0 Hz, 2H), 2.30 - 2.16 (m, 2H), 1.94 (dt, / = 12.3 Hz, J 3.9 Hz, 2H) 화합물 6 ： (S)— 3-(6-옥소 -l-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -IH-피라졸 -4- 일)피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일 )메틸) -1 , 6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴 하이드로클로라이드
Figure imgf000029_0001
(S)-3-(6-옥소 1ᅳ((4-(5ᅳ (1- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일) 피리미 딘 -2-일 )모르폴린 -2-일)메틸 )-1ᅳ 6-디하이드로피리다진— 3-일)밴조니트릴하이 드로클로라이드 (57mg, 0.0913睡 ol)을 35¾> HCH0(0.1ml HC00H(0.5ml ))에 녹인 후， 95°C에서밤새 교반하였다. 2N N C03를 넣어 pH 10-11로 맞춘 후, CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고, 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:15)로 정제하여 (S)-3-(6-옥소 -1-( (4-(5-(1_ (피페리딘 -4ᅳ일) -1H-피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -1,6- 디하이드로피리다진—3-일)벤조니트릴 하이드로클로라이드 (29nig, 6 )를 노란색 고체로 얻을 수 있었다. ᅳ NMR(300 MHz, CDC13) δ 58.43(s, 2H), 8.13(s, IH), 8.01(d, J=7.8 Hz, IH), 7.70(d, J=7.8 Hz, IH) , 7.68-7.65(m, 2H), 7.60-7.55(m, 2H), 7.08 (d, J = 9.7 Hz, IH), 4.64(d, J = 13.2 Hz, IH), 4.58(dd, J=13.2 Hz, / = 7.9 Hz, IH), 4.29(dd, 13.2 Hz, J=8.8 Hz, IH), 4.17- 4.12(111, 2H), 4.02(dt, =11.2 Hz, J=2.5 Hz, IH), 3.61(dt, 7=11.2 Hz, J=2.5 Hz, IH), 3.26-3.19(m, IH), 3.07(dd, J=13.0 Hz, J=10.0 Hz, IH) , 3.05-2.96(m, 2H), 2.21-2.05(m, 6H) 화합물 7: (3)-3-(1-((4-(5-(1-(2-하이드록시에틸)-1,2，3,6-테트라 하이드로피리딘 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-옥소 -1， 6- 디하이드로피리다진 -3—일)벤조니트릴
Figure imgf000030_0001
(S)-3-(6-옥소 -1-((4-(5-(1，2，3,6-테트라하 o드로피리딘 -4- 일)피리미딘ᅳ 2—일 )모르폴린 -2-일 )메틸 )-1 , 6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴 하이드로클로라이드 (190in 0.3860画 ol), DMF(3ml)에 녹인 후, 2-브로모에탄올 (으1½1， 1.9310隱 ol), Et3N(0.59nil, 4.2482隱 ol), K2C03(0.24g, 1.7379mmol)을 넣고 60 0(：에서 3시간 교반하였다. 반웅 종료 후, CH2C12을 이용하여 추출， 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고ᅳ 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:15) 정제하여 (S)-3-(l-((4-(5-(l- (2-하이드특시에틸) -1， 2 , 3ᅳ 6-테트라하이드로피리딘ᅳ 4-일)피리미딘 -2- 일 )모르폴린 -2-일 )메틸) -6-옥소 -1 , 6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴 (148mg, 77%)을 노란색 고체로 얻을 수 있었다.
H-NMR (300 MHz, CDC13) δ δ 8.36 (s, 2H)， 8.12 (s, 1H), 8.10 (d / = 7.8 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.66 (d, / = 9.7 Hz, 1H) , 7.08 (d, / = 9.7 Hz, 1H), 5.97 ᅳ 5.94 (m, 1H), 4.64 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.57 (dd, / = 8.0, J = 13.0 Hz, 1H), 4.40 (d, / = 13.0 Hz, 1H), 4.28 (dd, J= 4.3 Hz, J = 13.0 Hz, 1H), 4.15 - 4.09 (in, 1H), 4.02 (dt, / = 2.6 Hz, J = 11.3 Hz, 1H), 3.70 (t, / = 5.3 Hz, 1H), 3.59 (dt, J = 2.6 Hz, / = 11.3 Hz, 1H) , 3.23 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.22 - 3.18 (m, 1H), 3.06 (dd, /= 10.0 Hz, J 13.0 Hz, 1H), 2.80 (t, J 5.3 Hz, 2H) 2.69 (t, J= 5.3 Hz, 2H), 2.52 - 2.48 (m, 1H) 화합물 8 ： (S)-3-(l-((4-(5-(6-플루오로피리딘 -3-일)피리미딘 -2-일) 모르폴린 -2-일 )메틸) -6-옥소 -1， 6-디하이드로피리다진 -3-일 )벤조니트릴
Figure imgf000031_0001
밀봉 류브에 (S)-3ᅳ (1-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르플린 -2- 일)메틸) -6-옥소 -1,6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 (50mg, 0.1103画 ol), (6-플루오로피리딘 -3-일)보로닉 애시드 (19mg, 0.1324nimo 1 ) , Cs2C03(5½g, 0.1655隱01)을 DME(2ml )/H20(0.5ml )에 녹인 후， N2(gas) 층전 후 Pcl(dppf)2Cl2(4.5mg, 0.0055議 ol) 넣고 80 0C에서 4시간 교반하였다. 반웅 종료 후， 물과 CH2C12을 이용하여 추출， 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고， 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:15) 정제하여 (S)ᅳ 3-(1- ((4-(5-(6-플루오로피리딘 -3-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6ᅳ 옥소ᅳ 1,6—디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 (36mgᅳ 70%) 하얀색 고체로 얻을 수 있었다. -丽 (300 MHz, CDC13) δ δ 8.51 (s, 2H) , 8.32 (s, 1H), 8.14 (s
1H), 8.01 (d, /= 8.1 Hz, 1H), 7.87 (dt, J = 2.7 Hz, J = 7.8 Hz, 1H), 7.71 (d, / - 7.8 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.58 (t, 7.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.02 (dd, 2.7 Hz, / = 8.1 Hz, 1H), 4.721 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.67 Hz, IM) , 5.3Hz, 1H), 7.58 (t, J = 781 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.3.8 H, 1H), 7.02 (dd, J = 2.7 Hz, J = 8.17Hz, 1H), 4.721 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.67Hz, 1H), 5.1H), 3.62 (dt , J 2.7 Hz, / = 11.3 Hz, 1H)， 3.31 - 3.24 (ni, 1H) , 3.12 (dd, / = 10.0 Hz, 13.0 Hz, 1H) 화합물 9： (S)-3-( 1-( (4-(5-(6-(4-메틸피페라진 -1-일)피리딘 -3-일 ) 피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일 )메틸) -6-옥소 -1 , 6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴
Figure imgf000032_0001
밀봉 튜브에 (S)-3-(lᅳ ((4-(5-(6ᅳ플루오로피리딘 -3-일)피리미딘 -2ᅳ 일 )모르폴린 -2-일 )메틸 )-6-옥소 -1 , 6-디하이드로피리다진 -3-일 )벤조니트릴 (20mg, 0.0426隱 ol)을 NMP에 녹인 후, 1-메틸피페라진 (0.010ml , 0.0852瞧01), 디 PEA (0.02 ᅵ1， 0.1278瞧01)을 넣고 150°C에서 밤새 교반하였다. 반응 종료 후, 물과 CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고, 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:20) 정제하여 (S)ᅳ 3— (1-((4-(5ᅳ(6-(4-메틸피페라진 -1-일)피리딘 -3-일)피리미딘ᅳ 2-일)모르폴린ᅳ 2-일)메틸 )-6-옥소 -1，6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 (lOmg, 43%) 노란색 고체로 얻을 수 있었다. -羅 (300 MHz, CDCI3) δ 58.48(s, 2H), 8.23(s, 1H), 8.13(s, 1H) , 8.03 (d, =7.8 Hz, 1H), 7.73-7.64(m, 2H), 7.64-7.55(m, 2H), 7.09(d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.72(d, J=8.7 Hz, 1H), 4.67(d, J-13.0 Hz, 1H), 4.54 (dd, J=13.0 Hz, J=8.1 Hz, 1H), 4.43(d, J=13.0 Hz, 1H), 4.28(dd, J=13.0 Hz, J=9.6 Hz, 1H), 4.20-4.10(m, 1H)ᅳ 4.03(d, / = 11.2 Hz, 1H), 3.61 (m, 5H), 3.24(t, J = 11.2 Hz, 1H), 3.08(t, J=11.2 Hz, 1H), 2.55(m, 4H), 2.36(s, 3H) 화합물 10: (S)-3-(l-((4-(5-(6-(2-모르폴리노에톡시)피리딘 -3-일)피리미딘-
2-일)모르폴린 -2ᅳ일 )메틸 )— 6-옥소 -1， 6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴
Figure imgf000033_0001
질소 충전하에서 0°C 에서 NaH(60%, 2mg, 0.0480mmol)을 THF(lml)에 녹인 후, 천천히 넣어 주었다. 20분 후， 2-모르폴리노에탄을 (0.005ml, 0.0384mol)을 THF(lml)에 녹인 후 ( C 에서 NaH(60%, 2mg; 0.0480瞧()1)을 THF(lml)을 천천히 넣어 주었다. 20분 후 (S)-3-(l-((4-(5ᅳ (6- 폴루오로피리딘ᅳ 3-일)피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2ᅳ일)메틸 )-6-옥소 -1 , 6- 디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 (15mg, 0.0320讓 ol)을 THF(lml)애 녹인 후 천천히 넣어 준 후 rt에서 3시간 교반하였다. NaBC03을넣어 NaH를 중화 시킨 후 물과 CH2C12을 이용하여 추출, 건조 (Na2S04), 여과 및 감압 농축하고, 잔여물을 관 크로마토크래피 (Me0H/MOl:20) 정제하여 (S)-3-(lᅳ ((4-(5-(6-(2ᅳ모르폴리노에특시)피리딘 -3-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2- 일)메틸)ᅳ 6ᅳ옥소ᅳ 1，6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 (9,2mg, 50%) , 노란색 고체로 얻을 수 있었다.
Έ-NMR (300 MHz, CDC13) δ δ 8.48(s, 2H), 8.24(s, 1H), 8.13(s, 1H), 8.01(dᅳ J=7,8 Hz, 1H) , 7.73-7.61 (m, 3H), 7.60-7.55(m, 1H), 7.09(d, / = 9.7 Hz, 1H), 6.84 (d, J=8.2 Hz, 1H)， 4.69(d, 7=13.0 Hz, 1H), 4.56 (dd, 7=13.0 Hz, 7=8.2 Hz, 1H)ᅳ 4.47(t, 7=5.7 Hz, 2H), 4.46- 4.42 (m, 1H), 4.29 (dd, J = 13.0 Hz, J=9.3 Hz, 1H), 4.20-4.09 (m, 1H), 4.03(d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.74 (t, J=4.3 Hz, 4H), 3.61(dt, J=11.2 Hz, J=1.9 Hz, 1H), 3.09(dd, =13.0 Hz, 10.1 Hz, 1H), 2.81(t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.62 - 2.56(iii, 4H) 화합물 11: (S)-3-(l-((4-(5-(l-(l-(2-하이드록시에틸)피페리딘 -4-일)— 1H- 피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일 )메틸 )-6-옥소 -1 , 6- 디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴
Figure imgf000034_0001
(3)-3-(1-((4-(5-(1ᅳ(2-하이드록시에틸)-1,2,3ᅳ6-테트라하이드로피 리딘 -4-일)피리미딘 -2ᅳ일)모르폴린ᅳ 2-일)메틸) -6-옥소 -1 ,6-디하이드로피리 다진— 3-일)벤조니트릴 합성 과정과 동일하게 제조하여 노란색 고체 (77%)를 수득하였다. -賺 (300 MHz, CDC13) δ δ 8.44(s, 2H)， 8.13 (d, J = 8.2 Hz,
1H), 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.68 -7.64(m, 2H), 7.60 - 7.55 (m, 2H), 7.08 (d, J 9.7 Hz, 1H) , 4.64 (d, J 12.0 Hz, 1H) , 4.50 (dd, J 13.2 Hz, / - 7.9 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 13.2 Hz, J - 4.4 Hz, 1H), 4.22 - 4.09 (m, 3H), 4.02 (dt, J = 11.2 Hz, J = 2.5 Hz, 1H), 3.26 - 3.19 (m, 1H), 3.10 - 3.04 (m, 3H) , 2.60 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 2.28 (dt, / = 11.2 Hz, 1.8 Hz, 2H), 2.23 - 2.16 (m, 2H), 2.14― 2.06 (m, 2H)
C25H28FN902 의 LCMS 계산값 = 505.23, 관찰값 ： 505.8 화합물 12 ： (S)-6-(3-플루오로페닐 )-2-((4-(5-(1- (피페리딘 -4-일) -1H- 피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-은 단계 1: 3-클로로 -6-(3-플루오로페닐)피리다진
Figure imgf000035_0001
3，6-디클로로피리다진 10( 0.6기隱01)을 디옥산 3 ml와 H20 1ml에 녹인 후 3-플루오로페닐보로닉 애시드 115mg(0.738 瞧 ol)과 K2C03 140 mg (1.006 mmol), Pd(dppf)2Cl2 27 mg( 0.033 隱 ol)을 가한 뒤 질소 층전 후 90 °C에서 3시간 교반하였다. 반응 후 MC와 K2C03 (aq) 로 추출한 후 유기층을 MgS04로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (핵산 : 에틸아세테이트 = 2 ： 3)로 분리하여 114 mg (81%)을 수득하였다.
C10¾C1FN2의 LCMS 계산값 = 208.02, 관찰값 ： 209.1 단계 1-2: 3-클로로 -6-(3-클로로페닐)피리다진
Figure imgf000035_0002
C10H6C12N2의 LCMS 계산값 = 223.99, 관찰값 = 224.9 단계 1-3: 3-클로로 -6-(3-클로로 -4-플루오로페닐)피리다진
Figure imgf000035_0003
C10 Cl2f 의 LCMS 계산값 = 241.98, 관찰값 ： 242.8 단계 1-4: 3ᅳ클로로 -6ᅳ (3- (트리플루오로메 ¾)페닐)피리다진
Figure imgf000036_0001
CuHeClFsN의 LCMS 계산값 = 258.02， 관찰값 ： 259.0 단계 1-5. 3-클로로ᅳ 6- (피리딘ᅳ 3-일 )피리다진
Figure imgf000036_0002
^-NMR (300 MHz, CDC13) δ δ 9.20(d, J=1.8Hz, IH)ᅳ 8.76(d,
J=3.9Hz, IH), 8.46(m, IH) , 7.89(d, J=9.0Hz, IH) , 7.64(d, J=8.8Hz, IH), 7.49(m, IH) 단계 1-6. 3-클로로 -6- (피리딘 -4-일)피리다진
Figure imgf000036_0003
CDC13) δ δ 8.81(d, J=5.5Hz,
J=5.5Hz, 2H), 7.92(d, J=9.0Hz, IH), 7.67(d, J=9.0Hz, IH) 단계 1-7. 3-클로로 -6-(3，4-디플루오로페닐)피리다진
Figure imgf000037_0001
J=8.7Hz, 1H), 7.59(d, 9.0Hz, 1H)
C10H5C1F2N2의 LCMS 계산값 = 226.01, 관찰값 = 227.0 단계 1ᅳ 8. 3-클로로 -6-(3 , 4 , 5-트리플루오로페닐)피리다진
Figure imgf000037_0002
H-NMR (300 MHz, CDC13) δ δ 7.77 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.9 Hz,
1H) 단계 2-1. 6-(3-플루오로페닐)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000037_0003
3-클로로 -6-(3ᅳ플루오로페닐)피리다진 109 (0.522睡01)을 아세틱 애시드 2ml에 녹인 후 질소 충전 하여 120°C에서 4시간 교반하였다. 반웅 후 아세틱 애시드를 감압 농축한 뒤 고형이 생기면 H20 20mK*3)로 세척하여 분홍색 고체 83mg (83%)을 수득하였다.
ᅳ丽 (300 丽 z, MeOD4) δ 68.16(s, 1H), 7.94(d, J=9.8Hz, 1H), 7.39(dd, J=14.1Hz, J=8.1Hz, 1H), 7.21(m, 1H), 7.09(m, 1H), 6.96(d, 9.8Hz, 1H) 단계 2-2. 6-(3-클로로페닐)피리다진ᅳ 3(2H)-온
Figure imgf000038_0001
¾-NMR (300 MHz, MeOD4) δ δ 8.14(d, 7=15.7Hz, 1H), 7.94(d, 9.9Hz, 1H), 7.81(s, 1H), 7.70(m, 1H), 7.47(m, 1H), 6.97(d, 7-9.9Hz, 1H) 단계 2-3. 6— (3ᅳ클로로ᅳ 4ᅳ플루오로페닐)피리다진 -3(2H)ᅳ온
Figure imgf000038_0002
ᅳ證 (300 MHz, MeOD4) δ δ 8.22 (dd, J = 7.1, J = 2.1 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.35 (t, J = 8.8， 8.8 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.8, 8.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 9.9 Hz, 1H) 단계 2-4. 6-(3ᅳ (트리플루오로메틸)페닐)피리다진 -3(2H)-온
) δ δ 8.40 (s, IH), 8.30 (d, J = 7.0 Hz, IH), 8. H), 6.98 (d, = 9.8 Hz, IH) 단계 )피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000039_0001
¾-NMR (300 MHz, Aceton-d6) δ δ 8.19(m, IH)， 7.81(m, 7.22(t, J=8.6Hz, IH), 7.12(t, J=8.6Hz, IH), 6.84(d, J=9.9Hz IH) 단계 2-6. 6ᅳ (3 , 5-디플루오로페닐)피리다진 -3(2Η)-온
(81%)
Figure imgf000039_0002
¾- MR (300 MHz, Aceton-d6) δ δ 7.92(d, 7=9.9Hz, IH), 7.42(d,
7=7.2Hz, 2Η), 6.99(m, IH), 6.88(d, J=10.2Hz, IH) 단계 2ᅳ그 6- (피리딘 -3-일)피리다진 _3(2H)-온
9.9
단
2H),
Figure imgf000040_0001
단계 2-9. 6-(3，4ᅳ디플루오로페닐)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000040_0002
¾-NMR (300 MHz, CDC13) δ δ 7.96 (m, IH), 7.90 (s, IH) , 7.79 (d,
J-8.7Hz, 2H), 7.59 (d, 7-0.0Hz, 2H) (HI 'ZH 0·ε=/ 'ZH Z'Ol=f 'VW£ (HI 'ω)6Τ"ε '(HI 'ZH L'TFT 'ZH f TT- P S '(HI ' ^·Π=/ 'P)CO (HI 'ω)ΟΤ *(HT 'ΖΗ갸 / ·ετ=/ ' Ρ)^2 '(ΗΤ Z" T= ' )^S Ζ (ίΚ '(HS 'ω)80"Ζ '(ΗΙ 'ΖΗ 0" -/ 'V) fl '(Η2 'ZH Z F/ 'Ρ) .Ζ
'(ΗΙ <ΖΗ 9*6- 'Ρ)99"Ζ ' (HS 's)0S'8 S S (2ΐθαϋ 'ZHW OOe) 丽-
Figure imgf000041_0001
-S)-9-(milii(f0-Z-¾#s-5(po-S-t¾lcita i¾:^ -9)-^))-2-(S) 'I-S
(HI 'ZH 6'6= 'P) 0I"Z '(HZ ) WL '(HI <ZH 6 "6=/ 'Ρ) 99"Z 9 S (SKXD 'z匪 00ε) 丽 -Ητ
Figure imgf000041_0002
긍 -(ίΚ)ε- tsb C i ^万^릎 tSs-S' S)ᅳ 9 ΌΙ-2 lt^i¾
C.8Z00/CT0ZH¾/13d COCt'Sl/CTOZ ΟΛ\ 단계 3ᅳ2. (S)-2-((4ᅳ (5—브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6_(3- 클로로페닐)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000042_0001
¾—證 (300丽 z, CDCls) δ δ 8.29(s, 2H), 7.80(s, IH), 7.65(d, J = 9.6 Hz, 2H), 7.39(d, Hz, 2H), 7.05(d, J-9.6 Hz, IH), 4,56(m,
IH), 4.33(d, J-13.2 Hz, IH), 4.24(dd, 7=13.2 Hz, J=4.5 Hz, IH), 4.10(m, IH), 4.01(d, J-11.7 Hz, IH), 3.58(dt, 7=11.4 Hz, J=2.7 Hz, IH), 3.20(m, IH), 3.04(dd, 7-10.2 Hz, J=3.0 Hz, IH) 단계 3ᅳ 3. (S)-2-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6— (3- 클로로 -4-플루오로페닐)피리다진 -3(2H)_온
Figure imgf000042_0002
—匿 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.23(s, 2H), 7.79(dd, 7-6.9 Hz, J = 2.1 Hz, IH), 7.56(m, IH), 7.15 (m, IH), 6.97(d, J 二 9.9 Hz, IH), 4,56(m, IH), 4.33(d, J - 13.2 Hz, IH), 4.24(dd, J = 13.2 Hz, J = 4.5 Hz, IH), 4.10(m, IH), 4.01(d, J = 11.7 Hz, IH), 3.50(dt, / = 11.4 Hz, / = 2.7 Hz, IH), 3.20(m, IH)， 3.04(dd, / = 10.2 Hz, / = 3.0 Hz, IH) 단계 3-4. (S)-2ᅳ ((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(3- (트리플루오로메틸)페닐)피리다진 -3(2H)ᅳ온
Figure imgf000043_0001
-賺 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8.29(s, 2H) , 8.04(m, 1H) , 7.98(d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.69(m, 2H), 7.59(t, / = 7.8 Hz, 1H), 7.08(d, / = 9.6 Hz, 1H), 4, 55(m, 2H), 4.34(d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.24(dd, J = 13.2 Hz, J = 4.5 Hz, 1H), 4.10(m, 1H), 4.03(d, J - 11.4 Hz, 1H), 3.57(dt, J = 11.4 Hz, J - 2.7 Hz, 1H), 3.19(m, 1H) , 3.04(dd, J = 10.2 Hz, J = 3.0 Hz, 1H) 단계 3-5. (S)-2— ((4ᅳ (5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(4- 플루오로페닐)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000043_0002
-瞧 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8.30(s, 2H) , 7.71(dd, / = 5.1 Hz, J
= 2.1 Hz, 2H), 7.66(d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.14(t, / = 8.7Hz, 2H) , 7.04(cl, J = 9.6 Hz, 1H), 4ᅳ 55(m, 2H), 4.34(d, J = 13.2 Hz, 1H) , 4.23(dd, J = 13.2 Hz, J = 4.5 Hz, 1H), 4.10(m, 1H), 4.03(d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.57(dt, / = 11.4 Hz, J - 2.7 Hz, 1H), 3.19(m, 1H), 3.04(dd, J = 10.2 Hz, J = 3.0 Hz, 1H) 단계 3-6. (S)-2ᅳ ((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸 )一6- (3, 5-디플루오로페닐)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000044_0001
一賺 (300 MHz, CDC13) δ δ 8.31 (s, 2Η) , 7.58 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.33(dd, J = 8.4Hz, J = 2.1 Hz 2H), 7.06(d, J - 9.6 Hz, 1H), 6.87(tt, J = 8.7 Hz, J = 2.4 Hz, 1H), 4,55(ηι, 2H), 4.34(d, J = 13.5 Hz, 1H), 4.25(dd, / = 13.2 Hz, J = 4.5 Hz, 1H), 4.09(m, 1H), 4.01(m, 1H)， 3.58(dt, / - 11.4 Hz, / - 3.0 Hz, 1H), 3.20(m, 1H), 3.07(dd, J = 13.2 Hz, J = 9.6 Hz, 1H) 단계 3-7. (S)_2-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-
(피리딘 -3-일)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000044_0002
ᅳ赚 (300 MHz, CDCI3) δ δ 9.06(s, 1H), 8.56(m, 1H), 8.29(s,
2H), 7.78(dd, J= 5.1 Hz, J= 2.1Hz, 1H), 7.66(d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.45(m, 1H), 7.04(d, J= 9.6 Hz, 1H) , 4,55(m, 2H), 4.34(d, J= 13.2Hz, 1H), 4.24(dd, J= 13.2 Hz, J= 4.5 Hz, 1H), 4.10(m, 1H) , 4.03(d, J= 11.4 Hz, 1H), 3.57(dt, J= 11.4 Hz, J= 2.7 Hz, 1H), 3.19(m, 1H), 3.04(dd, J= 10.2Hz, J= 3.0 Hz, 1H) 단계 3-8. (S)ᅳ 2-((4-(5—브로모피리미딘 -2-일)모르플린 -2-일)메틸) -6-
(피리딘 -4-일)피리다진 -3(2H)_온
Figure imgf000045_0001
ᅳ丽 (300 MHz, CD δ δ 8.74(m, 2H), 8.29(s, 2H), 8.05(m, 2H), 7.77(s, 1H), 7.80(d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4,55(111, 2H), 4.34(d, J = 13.2 Hz, 1H) , 4.24(dd, J = 13.2 Hz, J = 4.5 Hz, 1H), 4.K)(iii, 1H), 4.03(d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.57(dt, J = 11.4 Hz, / = 2.7 Hz, 1H), 3.19(ni, 1H), 3.04(dd, / - 10.2 Hz, / - 3.0 Hz, 1H) 단계 3-9. (S)_2-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)ᅳ 6ᅳ
(3,4-디플루오로페닐)피리다진 -3(2H)ᅳ은
Figure imgf000045_0002
¾一匿 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8,29(s, 2H) , 7.76(s, 2H) , 7.62(d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.58(s, 1H), 7.14(m, 1H), 7.05(d, J = 9.6 Hz, 1H), 4, 55(m , 2H), 4.34(d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.24(dd, J = 13.2 Hz, J = 4.5 Hz, 1H), 4.10(m, 1H), 4.03(d, J = 11.4 Hz, 1H) , 3.57(dt, J = 11.4 Hz, J = 2.7 Hz, 1H), 3.19(iii, 1H) , 3.04(dd, / = 10.2 Hz, J = 3.0 Hz, 1H) 단계 3-10. (S)-2-((4~(5—브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)ᅳ 6ᅳ
(3,4, 5-트리플루오로페닐)피리다진 -3(2H)_온
Figure imgf000046_0001
-匿 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.31 (s, 2H) , 7.52(m, 1H), 7.44 (m, 2H), 7.06(d, J = 9.6 Hz, 1H), 4,55(m( 2H), 4.34(d, J = 13.5 Hz, 1H) , 4.25(dd, J 二 13.2 Hz, J = 4.5 Hz, 1H), 4.09(m, 1H), 4.01(m, 1H), 3.58(dt, / - 11.4 Hz, J = 3.0 Hz, 1H) , 3.20(m, 1H), 3.07(dd, / = 13.2 Hz, J = 9.6 Hz, 1H) 단계 4-1. (S)ᅳ tert—부틸 4-(4-(2-(2ᅳ((3-(3-플루오로페닐)_6ᅳ옥소피리 다진— 1(6H)-일 )메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일 )-1Η-피라졸 -1-일)피페리딘- 1-카르복실레이트
Figure imgf000046_0002
(S)-2-( (4-(5-브로모피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일 )메틸 )-6-(3- 플루오로페닐)피리다진 -3(2H)-은 52.2mg (0.116隱 ol)에 테트라하이드로퓨란 1.5ml와 증류수 1 ml에 녹인 후 tertᅳ부틸 4-(4ᅳ (4,4，5,5-테트라메틸- l,3,2-디옥사보로란— 2-일 )-1Η-피라졸 -1-일)피페리딘 -1-카르복실레이트 66mg (0.175 誦 ol)과 Na2C03 46 mg( 0.350 mmol), Pd(pph)3Cl2 3.6 mg( 0.003 隱 ol)을 가하고 질소 층전 후 80 0C에서 2시간 교반하였다. 반웅 후 EA와 브라인으로 추출 한 후 유기층을 MgS04로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (핵산 ： 에틸아세테이트 = 1 ： 2)로 분리하여 86 mg(119%)을 수득하였다. -赚 (300 MHz, CDCls) δ δ 8,43(s, 2H), 7.67(d, J = 8.4 Hz, 2H)' 7.58(s, 2H)' 7.54(sᅳ 1H), 7.43 (111 , 1H), 7.10(m,2H), 4,60(m, 2H), 4.42(d, J = 13.8 Hz, 2H), 4.29(d, J = 4.2 Hz, 2H), 4.25(d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.61(m, 1H), 3.24(m, 1H), 3.09 (dd, J = 13.2 Hz, J = 10.2 Hz, 1H) , 2.16(d, J = 11.7 Hz, 2H), 1.96(m, 4H), 1.48(s, 9H) 단계 5. (S)-6-(3-플루오로페닐 )-2-((4-(5ᅳ (1- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온 의 HC1 염
Figure imgf000047_0001
(S)-tert-부틸 4-(4-(2-(2ᅳ ((3-(3-플루오로페닐 )-6-옥소피리다진-
1(6H)_일)메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일) -1H-피라졸 -1-일)피페리딘 -1- 카르복실레이트 30mg (으048隱01)을 메틸렌클로라이드 3nil에 녹인 후 1,4- 디옥산 3ml (과량)에 용해된 4M HC1를 가하고 질소 층전 후 실온에서 18시간 교반하였다. 반웅 후 메틸렌클로라이드와 디옥산 을 감압 농축 하여 노란색 고체 19ing(72%)을 수득하였다.
C27H29FN80^ LC S 계산값 = 516.24， 관찰값 =516.7 (유리형태의 분자량) 화합물 13: (S)-6-(3-클로로페닐) -2-((4-(5-(1- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸- 4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-은 의 HC1 염 형태
Figure imgf000048_0001
C27H29C1N802의 LCMS 계산값 = 532.21, 관찰값 = 532.8 (유리형태의 분자량) 화합물 14: (S)-6-(3-클로로 -4-플루오로페닐 )-2-((4-(5-(1- (피페리딘 -4-일) - 1H-피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2ᅳ일)메틸)피리다진 -3(2H)-온 의 HC1 염 형태
Figure imgf000048_0002
C27H28C1FN802의 LCMS 계산값 = 550.2, 관찰값 = 550.8 (유리 형태의 분자량) 화합물 15: (S)-2-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일)피리미딘 -2- 일)모르폴린 -2-일)메틸) -6ᅳ(3- (트리플루오로메틸)페닐)피리다진 -3(2H)-온 의 HC1 염 형태
Figure imgf000049_0001
C28H29F3N802 의 LCMS의 계산값 = 566.24, 관찰값 = 566.8(유리 형태의 분자량) 화합물 16: S)-6-(4-플루오로페닐 )-2-((4-(5-(1- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸-
4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온 의 HC1 염 형태
HCI
Figure imgf000049_0002
C27H29FN802의 LCMS 계산값 = 516.24, 관찰값 = 516.8 (유리 형태의 분자량) 화합물 17: (S)-6-(3,5-디플루오로페닐) -2-((4-(5-(1- (피페리딘ᅳ 4ᅳ일) -1H- 피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-은 의 HC1 염 형태
Figure imgf000050_0001
C27H28F2N802의 LCMS 계산값 = 534.23, 관찰값 = 534.8 (유리 형태의 분자량) 화합물 18: (S)-2-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일)피리미딘 -2- 일)모르폴린 -2-일)메틸) -6- (피리딘 -3-일)피리다진 -3(2H)-온 HC1 염 형태
Figure imgf000050_0002
C26H29N902의 LCMS 계산값 = 499.24, 관찰값 = 499.8 (유리 형태의 분자량) 화합물 19: (S)-2-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일)피리미딘 -2- 일)모르플린 -2-일)메틸) -6- (피리딘 -4-일)피리다진 -3(2H)-온 HC1 염 형태 HCI
Figure imgf000051_0001
C26H29N902의 LCMS 계산값 = 499.24, 관찰값 = 499.7 (유리 형태의 분자량) 화합물 20: (S)-2-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일)피리미딘— 2- 일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(3,4，5-트리플루오로페닐)피리다진 -3(2H)-은 HC1 염 형태
HCI
Figure imgf000051_0002
C27 7F3N802의 LCMS 계산값 =552.22, 관찰값 =: 522.8 화합물 21: (S)-6-(3-플투오로페닐 )-2-((4-(5-(1-(1-메틸피페리딘 -4-일) -1H- 피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000052_0001
(S)-tert-부틸 4-(4— (2-(2-((3-(3-플루오로페닐 )-6-옥소피리다진- 1(6H)-일)메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일) -1H—피라졸 -1-일)피페리딘 -1- 카르복실레이트 56mg (0.090麵01)을 35¾> 포름알데하이드 0.1ml와 포르믹 애시드 0.5ml에 녹이고 질소 충전 후 90°C 에서 18시간 교반하였다. 반웅 후 얼음조 (ice bath)에서 NaOH 용액을 이용해서 pH 10정도로 냉각시킨 뒤, EA와 브라인으로 추출 한 후 유기층을 MgS04로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 =10 ： 1) 로 분리하여 18 mg(36%)을 얻었다
C28H31FN802의 LCMS 계산값 = 530.26, 관찰값 = 530.8 화합물 22: (S)-6-(3-클로로 -4-플루오로페닐 )-2-((4_(5-(1-(1-메틸피페리딘- 4-일) -1H-피라졸—4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000052_0002
화합물 23: (S)-2-((4-(5-(l-(l-메틸피페리딘ᅳ4-일) -IH-피라졸 -4-일)피리미 딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6- (피리딘 -3-일)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000053_0001
의 LCMS 계산값 C27H31N902= 513.26, 관찰값 = 513.8 화합물 24: (S)-2-((4-(5-(l-(l-메틸피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일) 피리 ' 딘 -2-일)모르폴린 -2-일 )메틸 )-6- (피리딘 -4-일)피리다진 -3(2H)-은
Figure imgf000053_0002
(22%)
C27H31N902의 LCMS 계산값 = 513.26, 관찰값 = 513.6 화합물 25: (S)-6-(3,4-디플루오로페닐) -2-((4-(5-(1-(1ᅳ메틸피페리딘ᅳ4- 일) -1H-피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000054_0001
C28H30F2N802의 LCMS 계산값 = 548.25， 관찰값 = 548.7 화합물 26: (S)-2-((4-(5-(l-(l-메틸피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일)피리미 딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(3，4ᅳ5-트리플루오로페닐)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000054_0002
-腿 (500 MHz, CDCls) δ 68.43(s, 2H), 7.67(sᅳ 1H), 7.58(d, 7=8.4 Hz, 2H), 7.46(t, 7=9.5 Hz, 2H), 7.07(d, J=Q.9 Hz, 1H) , 4,65(m; 1H), 4.58(dd, J= 13.0 Hz, J^7.5 Hz, 1H) , 4.42(d, /-14.0 Hz, 1H) 4.31(111, 3H), 4.29(m, 1H), 4.05(m, 1H), 3.63(dt, J= 11.0 Hz, J^.5 Hz: 1H), 3.26(m, 1H), 3.10(dd, J= 13.5 Hz, J=10.0 Hz, 1H), 2.92(s, 2H) 2.18(d, J = 13.0 Hz, 2H), 1.97 (in, 2H)
C28H29F3N802의 LCMS 계산값 = 566.24， 관찰값 = 566.7 화합물 27: (S)— 6-(3-플루오로페닐 )-2-((4-(5-(1-(1ᅳ(2-하이드록시에틸) 피페리딘 -4-일 )-1Η-피라졸 -4-일 )피리미딘 -2-일)모르폴린 -2—일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000055_0001
(S)-6-(3-플루오로페닐 )-2-( (4-(5-(1- (피페리딘 -4-일 )-1Η-피라졸 -4- 일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2—일)메틸)피리다진— 3 ( 2H )—온 100mg( 0.18 画 o 1 ) 을 디메틸포름아마이드 5ml에 녹이고 2-브로모에탄올 3½g(0.2기画 ol)과 K2C0375mg (0.540睡01)을 가하고 질소 층전 후 600C 에서 4시간 교반하였다, 반응 후디메틸포름아마이드 감압 농축 후 EA와 브라인으로 추출 한 후 유기층을 MgS04로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 =10 ： 1) 로 분리하여 56 mg(55%)을 얻었다
¾一腿 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.43(s, 2H), 7.66(d, J=Q.6 Hz, 2H)， 7.57(m, 3H), 7.42(m, IH), 7.13(m, IH), 7.06(d, J=9.6 Hz, IH), 4.60(d, J-13.5 Hz, IH)ᅳ 4.55(d, M .8 Hz, IH), 4.39(d, /-13.5 Hz, IH), 4.29(d, J = 4.2 Hz, IH), 4.25(d, Hz, IH)， 4.17(m, 2H), 4.03 (d, J=11.7
Hz, IH)ᅳ 3.75(m, IH), 3.65(t, J=5.1 Hz, 2H), 3.49(s, 2H), 3.23(m, IH), 3.07(ni, 3H), 2.62(t, J=5.1 Hz, 2H), 2.30(m, 2H) 화합물 28: (S)-6-(3-클로로 -4-플루오로페닐 )-2-((4-(5-(1ᅳ(1-(2-하이드록시 에틸)피페리딘 -4-일 )-1Η-피라졸 -4-일 )피리미딘 -2-일)모르폴린 -2- 일)메틸)피리다진 -3(2H)-은 2 Hz,
J=2, Λ 1 (d,
J^, ,0 ,55(df
M, ,8 .25(d,
J= . ,2 ; ， 3.65
(t, J-
Figure imgf000056_0001
.62(t,
.1 Hz, 2H), 2.30(111， 2H) 화합물 29: (S)-2-((4-(5-(l-(l-(2-하이드록시에틸)피페리딘 -4-일) -1H- 피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6- (피리딘 -3-일)피리다진- 3(2H)-온
Figure imgf000056_0002
C28H33N903의 LCMS 계산값 = 543.27, 관찰값 = 542.9 화합물 30: (S)-2-((4-(5-(l-(l-(2-하이드록시에틸)피페리딘 -4-일) -1H- 피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6- (피리딘 -4-일)피리다진- 3(2H)-온
Figure imgf000057_0001
C28H33N903의 LCMS 계산값 = 543.27, 관찰값 = 542.9 화합물 31: (S)-2-((4-(5-(l-(l-(2-하이드록시에틸)피페리딘 -4-일) -1H- 피라졸 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(3,4, 5-트리플루오로페닐) 피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000057_0002
Ή-NMR (300 MHz, CDC13) δ δ 8.43(s, 2H)ᅳ 7.67(s, 1Η)' 7.58(d, J -9.3 Hz, 2H), 7.45 (t, M .b Hz, 2H) , 7.06(d, J-9.6 Hz, IH) , 4.60(d, J-13.5 Hz, IH), 4.55(d, 7.8 Hz, IH) ' 4.39(d, J-13.5 Hz, IH) , 4.29(d, J- .2 Hz, IH), 4.25(d, J-4.2 Hz, IH), 4.17(m, 2H), 4.03 (d, J-11.7 Hz, IH)ᅳ 3.75(111， IH), 3.65(t, J^.l Hz, 2H), 3.61(m, IH) , 3.23(m, IH), 3.07(m, 3H), 2.62(1; , J-5.1 Hz, 2H), 2.30(m, 2H) 화합물 32 ： 6-(1-메틸 -1H-피라졸 -4-일) -2-((4-(5-(2-(4-메틸피페라진 -1- 일)에록시)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-은의 합성
Figure imgf000058_0001
2-((4ᅳ (5-(2-클로로에록시)피리미딘 -2ᅳ일)모르폴린 -2ᅳ일)메틸) -6ᅳ (1- 메틸 -1^피라졸 -4ᅳ일)피리다진 -3(2^-온 20 mg (0.0463 麵 ol)을 DMF 1 ml에 녹인 후 1—메틸피페라진 18.5 mg (0.185 mmol)과 KI 8.5 mg(0.0509 画 ol)을 가한다. 70°C에서 밤새 교반하였다. 반웅이 종결되면 에틸아세테이트와 소금물로 여러 번 추출한 후 유기층은 Na2S04로 건조시켰다. 5% MeOH/MC조건에서 Pi p LC로 분리하여 13 mg (56%)을 수득하였다. 一腿 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8.10(s, 2H), 7.81(s, 1H) , 7.76(s, 1H), 7.40(d, J=9.4Hz, 1H), 6.97(d, J=9.4Hz, 1H) , 4.54-4.44(m, 2H), 4.22-4.19(m, 1H), 4.06(t, J=5.4Hz, 2H), 3.95(s, 3H), 3.60(dt, J=11.2, 2.5Hz, 1H)ᅳ 3.18-3.08(m, 1H), 2.97(dd, J=13.0, ΙΟ.ΙΗζ,ΙΗ), 2.78(t, J=5.4Hz, 2H), 2.62-2.52(m, 7H), 2.32(sᅳ 3H), 2.03-1.96(m, 4H) 화합물 33: 2-((4-(5-(2- (디메틸아미노)에록시)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2- 일 )메틸) -6-( 1-메틸 -1H—피라졸 -4-일 )피리다진 -3(2H)-온의 합성
Figure imgf000058_0002
2-((4-(5-하이드록시피리미딘 2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-(l-메틸- 피라졸 -4ᅳ일)피리다진 -3(2 )-온 20 mg (0.0541 mmol)과 2- (디메틸아미노)에틸 하이드로클로라이드 23 mg (0.162 瞧 ol), Cs2C0322 mg (0.162 瞧 ol), I 9 mg (0.0541 隱 ol)을 DMF 1 ml에 가하였다. 90°C에서 밤새 교반하고 반응이 종결되면 에틸아세테이트와 소금물로 여러번 추출한 후 유기층은 Na2S04로 건조시켰다. 10% MeOH/MC조건에서 Prep LC로 분리하여 16.6 mg (7 )을 수득하였다. -證 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.12(s, 2H), 7.81(s, 1H) , 7.77(s, 1H), 7.40(d, J=9.4Hz, 1H), 6.98(d, J-9.4Hz, 1H)ᅳ 4.54-4.44(m, 2H) , 4.27-4.14(m, 3H), 4.02(t, J=5.4Hz, 2H) , 3.95(s, 3H), 3.67-3.64(m( 1H) 3.60(dt, J=11.2, 2.5Hz, 1H), 3.17-3.08(m, 1H), 2.96(dd, J=13.0, 10.1Hz 1H), 2.70(t, 7=5.4Hz, 2H), 2.33(s, 6H) 화합물 34 ： 6-(l-메틸 -1H-피라졸 -4-일) -2-((4-(5-(2-(pyrroli 디 n-1-일) 에록시)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온의 합성
Figure imgf000059_0001
2-((4-(5-(2-클로로에록시)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸 )ᅳ6-(1- 메틸 -1^피라졸ᅳ 4-일)피리다진 -3(2 )-온 12 mg( 0.028 隱 ol)을 DMF 1 nil에 녹인 후 피를리딘 8 mg (0.112 画 ol)과 ί(Ι 5 mg (0.0308 画 ol)을 가하고 70°C에서 밤새 교반하였다. 반웅이 종결되면 에틸아세테이트와 소금물로 여러 번 추출한 후 유기층은 Na2S04로 건조시켰다. 7% MeOH/MC조건에서 Prep LC로 분리하여 7.5 mg (57%)을 수득하였다. -丽 (300 MHz, CDC13) δ δ 8.11(s, 2Η) , 7.81(s, 1Η) , 7.77(s, 1H), 7.40(d, 7=9.4Hz, 1H) , 6.98(d, J=9.4Hz, 1H) , 4.55-4.45 (111, 2H) , 4.27-4.22(111, 1H), 4.10(t, J=5.4Hz, 2H), 3.95(s, 3H), 3.61(dt, 7=11.2, 2.5Hz, 1H), 3.18-3.09 (ni, 1H), 2.95(dd, J=13.0, 10.1Hz, 1H), 2.67(t,
SS J=5.4Hz' 2H), 2.28-2.07(m, 7H), 1.94-1.78(m, 4H) 화합물 35: 6-(l-메틸 -1H-피라졸 -4-일) -2-((4-(5- (피페리딘 -4-일메록시) 피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000060_0001
er -부틸 4ᅳ ( (2-(2-( (3_(1-메틸 피라졸 -4-일) -6-옥소피리다진- 1(6^)-일)메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일옥시)메틸)피페리딘 -1- 카르복실레이트 5.7mg (0.0101 隱 ol)을 MC 1 ml에 녹인 후트리플투오로 아세틱 애시드 0.5ml를 가하였다. 실온에서 밤새 교반하고 반웅이 종결되면 용매를 감압 농축하여 제거한 후 에테르를 가하여 고체로 떨어뜨렸다. 용기를 옮기고 에테르를 제거하여 3 mg (52%)를 수득하였다.
¾-賺 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.10(s, 2Η)' 7.82(s, 1H), 7.77(s, 1H), 7.41(d, J=9.4Hz, 1H), 7.00(d, 7=9.4Hz, 1H), 4.52-4.40 (111, 2H), 4.30-4.16(m, 1H), 4.03(t, J=5.4Hz, 2H), 3.95(s, 3H), 3.63-3.55 (m, 2H), 3.28-3.18 (m, 4H) , 3.00-2.95 (m, 1H) , 2.14-2.03 (m, 8H) 화합물 36: 6-(l-메틸 -1H-피라졸 -4-일) -2-((4-(5-((l-메틸피페리딘 -4-일) 메특시)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000060_0002
부틸 4-( (2-(2-((3-( 1-메틸 -L 피라졸 -4-일 )-6-옥소피리다진ᅳ 1(6H)-일)메틸)모르폴리노)피리미딘 -5-일옥시)메틸)피페리딘 -1- 카르복실레이트 8.6 nig (0.0152 睡 ol)을 포르믹 애시드 1 nil에 녹인후 포름알데하이드 17.2 μ ΐ를 가하였다. 95°C에서 밤새 교반하고 반응이 종결되면 IN NaOH로 pH 10-11로 맞춘 후 EA로 추출하였다. 유기층을 Na2S04로 건조시키고 8% MeOH/MC조건에서 Prep LC로 분리하여 4.5 nig (61%)을 수득하였다. -賺 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.09(sᅳ 2H), 7.81(s, 1H)， 7.76(s, 1H), 7.39(d, J=9.4Hz, 1H), 6.97(d, J=9.4Hz, 1H)ᅳ 4.54-4.47(m, 2H), 4.28-4.23 (m, 1H) , 4.06(t, J=5.4Hz, 2H), 3.95(s, 3H), 3.66-3.59 (m, 2H)ᅳ 3.18-3.09(m, 1H), 2.97(q, J-7.6Hz, 1H), 2.72-2.65(m, 2H), 2.29(s, 3H) , 2.28-2.18(iii, 2H) , 2.04-1.93(m, 5H), 1.82-173(m, 2H) 화합물 37 ： 6-(4- (벤질옥시)페닐) -2-((4-(5-(l-메틸 -1H-피라졸 -4- 일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온
Figure imgf000061_0001
6-(4- (벤질옥시)페닐 )-2-( (4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2- 일)메틸)피리다진 -3(2 -은 100 mg (0.187 隱 ol)과 1-메틸피라졸 -4-보로닉 애시드 피나콜 에스터 58 mg (0.281 匪 ol), Cs2C03 201 mg (0.617 nuiiol), PdCl2(dppf)2을 디메록시에탄 3 ml와 증류수 1 ml에 녹였다. N2(기체)를 층전한 후 80°C에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응이 종결되면 에틸아세테이트와 소금물로 추출한 후 유기층은 N S04로 건조시켰다. 80% EA/Hex 조건에서 컬럼크로마토그래피로 분리하여 50 mg (50%)을 수득하였다.
¾-醒 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8.42(s, 2H) , 7.74(d, J=8.6Hz, 2H), 7.64(d, 7Hz, 2H), 7.52(s, 1H), 7.45-7.33(m, 5H), 7.04(d, J=8.6Hz, 2H), 7.02(d, J=9.0Hz, 1H), 4.61(dd, J=13.2, 4.6Hz, 2H), 4.39(d, /= 13.0Hz, 1H), 4.23(dd, J-13.2, 4.6Hz, 1H)ᅳ 4.15-4.10(m, 1H), 4.03(d, 7=11.3Hz, 1H), 3.94(s, 3H), 3.61(dt, J=11.2, 2.4Hz, 1H), 3.22(p, J=16.2, 6.8Hz, 1H), 3.07(q, J=7.7Hz, 1H) 화합물 38: (S)-3-(l-((4-(5-(4-(2-모르폴리노에특시)페닐)피리미딘 -2- 일)모르폴린 -2-일 )메틸 )-6-옥소 -1,6—디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴
Figure imgf000062_0001
(S)-3-(l-( (4ᅳ (5-브로모피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일 )메틸) -6-옥소- 1,6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 20 mg (0.0441 麵 ol)과 4-(2-(4- (4ᅳ 4 , 5ᅳ 5-테트라메틸 -1， 3 , 2-디옥사보로란 -2-일 )페녹시 )에틸)모르폴린 29 mg( 0.0882 隱 ol), Cs2C0343 mg( 0.132 mmol), PdCl2(dppf )2 3 mg(0.00441 mmol)을 디메록시에탄 1.5 nil와 증류수 0.5 i 에 가했다. N2(기체)를 층전한 후 80 °C에서 2시간 동안 교반하고 반웅이 종결되면 에틸아세테이트와 소금물로 추출한 후 유기층은 Na2S04로 건조시켰다. Ί Me0H/MC 조건에서 Prep LC로 분리하여 19 nig(76%)을 수득하였다. ¬ᅳ -匿 (300 MHz, CDCls) δ δ 8.52(s, 2H), 8.13(s, 1H) , 8.02(d
J=8.6Hzᅳ 1H)ᅳ 7.68(d, J=9.4Hz, 1H), 7.58(t, J=7.7Hz, 1H), 7.46(d
J=8.6Hz, 1H), 7.39(d, 7=8.6Hz, 2H), 7.09(d, 7=9.4Hz, 1H), 6.99(d
J=8.6Hz, 2H), 4.68(d, J=12.5Hz, 1H), 4.60(q, J=8.0Hz, 1H), 4.44(d
J= 12.5Hz, 1H) , 4.30(dd, J=13.1, 4.1Hzᅳ 1H), 4.15(t, J=5.5Hz, 3H) 4.04(d, J=ll.lHz, 1H), 3.75(t r=4.4Hz, 4H), 3.62(dt, J=11.0, 1.8Hz 1H), 3.21(dt, J=11.0, 1.8Hz LH), 3.09(q, J=8.0Hz, 1H), 2.83(t J=5.5Hz, 2H), 2.61(t, J=4.4Hz, 4H) 화합물 39: (S)-3-(l-((4-(5-(3-클로로 -4-(2-모르폴리노에특시) 페닐) 피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일 )메틸) -6-옥소 -1 , 6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴
Figure imgf000063_0001
(S)_3-(l-((4-(5-브로모피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-옥소- 1，6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 20 nig (0.0441 隱 ol)과 4-(2-(2- 클로로 -4-(4ᅳ 4 , 5 , 5-테트라메틸 -1 , 3 , 2-디옥사보로란 -2- 일)페녹시 )에틸)모르폴린 32 mg (0.0882 睡 ol)ᅳ Cs2C03 43 mg (0.132 mmol), PdCl2(dppf)2 3 mg (0.00441 麵 ol)을디메특시에탄 1.5 ml와 증류수 0.5 nil에 가한다. N2(기체)를 충전한 후 80°C에서 2시간 동안 교반하였다, 반웅이 종결되면 에틸아세테이트와 소금물로 추출한 후 유기층은 Na2S04로 건조시켰다. 7% Me0H/MC 조건에서 Prep LC로 분리하여 18 mg (66%)을 수득하였다.
¾-騰 (300 MHz, CDC13) δ δ 8.49(s, 2H), 8.14(s, IH), 8.02(d, J=8.6Hz, IH), 7.68(d, 7=9.4Hz, IH), 7.61(t, J=7.7Hz, IH)， 7.50(dd, J=ll.l, 2.0Hzᅳ IH), 7.09(d, J=8.6Hzᅳ IH) , 6.99(1: , J=6.8Hz, 2H) , 4.69(d J= 12.5Hz, IH), 4.59(q, J=8.0Hz, IH), 4.45(d, 12.5Hz, IH), 4.30(dd, J=13.1, 4.1Hz, IH), 4.21(t, 7=5.5Hz, 3H), 4.04(d, 7=11.1Hz, IH), 3.74(t, J=4.4Hz, 4H), 3.61(dt, /=11.0， 1.8Hz, IH) , 3.25(dt, J=11.0, 1,8Hz, IH), 3.09(q, J=8.0Hz, IH), 2.89(t, J=5.5Hz, 2H), 2.65(t, J=4.4Hz, 4H) 화합물 40: (S)-3-(l-((4-(5-(lᅳ (2-하이드특시에틸) -IH-피라졸 -4-일) 피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일 )메틸) -6-옥소 -1， 6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴 하이드로클로라이드
Figure imgf000064_0001
3-(6ᅳ옥소 -1-( ( (2S)_4-(5-( 1ᅳ (2ᅳ(테트라하이드로 -2그피란 -2- 일옥시)에틸) " 피라졸 -4—일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -1,6- 디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 16 mg (0.0281 瞧 ol)을 MC 1 ml에 녹인 후 디옥산 0.4 ml에 용해된 4M HC1를 가했다. 실온에서 4시간 동안 교반하고 반웅 종결 후 용매를 감압 농축하여 제거한 후 에테르를 가하여 고체로 떨어뜨렸다. 용기를 옮기고 에테르를 제거하여 13 mg (92%)를 수득하였다. ᅳ靈 (300 MHz, DMS0) δ δ 8.64(s, 2H) , 8.39(s, IH), 8.26(d, J=8.6Hz, IH), 8.17(d, J=9.4Hz, IH), 8.11(s, IH), 7.94(d, 7=8.6Hz, IH) , 그 85(s, IH), 7.72(t, J=7.7Hz, IH), 7.14(d, J=9.4Hz, IH), 4.52(d, J=12.5Hz, IH), 4.47(q, J=8,0Hz, IH), 4.31(d, J=12.5Hz, 2H) , 4.23(dd, J=13.1, 4.1Hz, IH), 4.04-4.00(m, IH)ᅳ 3.93(d, J=12.5Hz, IH), 3.74- 3.67(m, 4H), 3,13-3.06(ni, IH), 3.01-2.94(m, IH) 화합물 41: (3)-3ᅳ(6-옥소-1-((4-(5-(1，2,3，6-테트라하이드로피리딘-4- 일)피리미딘 -2-일)모르폴린— 2—일)메틸) -1，6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴 하이드로클로라이드
Figure imgf000065_0001
(S)- er -부틸 4-(2-(2-((3-(3-시아노페닐) -6-옥소피리다진 -1(6; - 일)메틸) moiᅳ pho-lino)피리미딘 -5-일)— 5，6ᅳ디하이드로피리딘e-l(2^- 카르복실레이트 115 nig (0.207匪 ol)을 MC 3 nil에 녹인 후 디옥산 0.4 ml에 용해된 4M HC1를 가했다. 실온에서 4시간 동안 교반하고 반웅 종결 후 용매를 감압 농축하여 제거한 후 에테르를 가하여 고체로 떨어뜨렸다. 용기를 옮기고 에테르를 제거하여 96 mg (94%)를 수득하였다. -賺 (300 MHz, MeOD) δ δ 8.54(s, 1Η)， 8.51(s, IH), 8.31(s,
IH), 8.22(d, J=8.6Hz, IH), 8.09(d, J=9.4Hz, IH) , 7.83(d, J=8.6Hz, IH) , 7.690;， J=8.6Hz, IH), 7.14(d, J=9.4Hz, IH), 6.15(d, J=12.5Hz, IH)ᅳ 4.63ᅳ 4.54(mᅳ 2H), 4.38-4.32(m, 2H), 4.06-4.01(m, 2H), 3.84(s, IH), 3.67(s, 3H), 3.46(t, 5.5Hz, IH), 3.25-3.12(m, 2H), 2.76(brs, IH), 2.47(brs, IH) 화합물 42: (S)-6-(l-메틸 -IH-피라졸 -4-일) -2-((4ᅳ(5-(1，2，3，6-테트라 하이드로피리딘 -4-일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸)피리다진 -3(2H)-온 하이드로클로라이드
Figure imgf000065_0002
(S)ᅳ ter t-부틸 4-(2-(2-( (3-( 1-메틸 -1H_피라졸 -4-일 )-6-옥소피리다진 -K6H)ᅳ일)메틸) 모르폴리노) 피리미딘 -5-일) -5ᅳ 6-디하이드로피리딘 -1(2 )- 카르복실레이트 84 mg (0.157 薩 ol)을 MC 5 ml 에 녹인 후 디옥산 3 ml 에 용해된 4M HC1 를 가했다. 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 반웅 종결 후 용매를 감압 농축하여 제거한 후 에테르를 가하여 고체로 떨어트린다, 용기를 옮기고 에테르를 제거하여 62 mg (83%)를 수득하였다. -賺 (300 MHz, MeOD) δ δ 8.52(s, 2Η) , 8.13(s, 1Η) , 7.95(s, 1H), 7.78(d, J=9.4Hz, 1H), 7.03(d, J=9.4Hz, 1H), 6.14(s, 1H), 4.62(d, J= 12.5Hz, 1H), 4.48(q, 7=6.6Hz, 1H)ᅳ 4.25(dd, J=13.1, 4.1Hz, 1H) , 4.08-4.00(m, 3H), 3.94(s, 3H), 3.84(s, 2H), 3.57(d, J=12.5Hz, 1H) , 3.46(dt, J=11.0, 1.8Hz, 2H), 3.10(q, J=6.6Hz, 2H), 2.78-2.72(m, 2H) 화합물 43: (3)-2-((4-(5-(1-메틸-1,2,3，6-테트라하이드로피리딘-4_일) 피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일 )메틸 )-6-( 1-메틸 -1H-피라졸 -4-일 )피리다진-
3(2H)-온
Figure imgf000066_0001
(S)-^ /-부틸 4-(2-(2— ( (3-(1—메틸 -L 피라졸 -4-일 )-6- 옥소피리다진 -1(6^)-일)메틸) 모르폴리노) 피리미딘 -5-일) -5ᅳ 6- 디하이드로피리딘 -1(2^)ᅳ카르복실레이트 20 mg (0.0374 隱 ol)을 포르믹 애시드 3 ml에 녹인 후 포름알데하이드 0.1 nil를 가했다. 95°C에서 밤새 교반하고 반응이 종결되면 IN NaOH로 pH 10-11로 맞춘 후 EA로 추출하였다. 유기층은 Na2S04로 건조시켰다. 7% MeOH/MC조건에서 Prep LC로 분리하여 12 mg (71%)을 수득하였다. 一腹 (300 MHz, CDCI3) δ 5 8.35(s, 2Η), 7.81(sᅳ IH) , 그 77(s, IH), 7.40(d, 7=9.4Hz, IH), 6.97(d, 7=9.4Hz, IH) , 5.94(s, IH) , 4.61(d, 12.5Hz, IH), 4.51(q, J=6.6Hz, IH), 4.39(d, J=12.5Hz, IH), 4.17(dd, J=13.1, 4.1Hz, IH), 4.11(t, J=5.5Hz, IH), 4.01(d, J=12.5Hz, IH), 3.95(s, 3H), 3.59(dt, J=11.0, 1.8Hz, IH), 3.19(dt, J=11.0, 1.8Hz, IH), 3.10(s, 2H), 3.02(q, J=6.6Hz, IH), 2.67(1;， J=5.5Hz, IH), 2.50(s, 2H), 2.41(s, 3H) 화합물 44: (S)-3-(l-((4-(5-(l-((l-메틸피페리딘 -4-일)메틸) -IH-피라졸 -4- 일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -6-옥소 -1， 6-디하이드로피리다진 -3- 일)벤조니트릴
Figure imgf000067_0001
(S)- erᅳ부틸 4-( (4-(2-(2-( (3-(3-시아노페닐 )-6-옥소피리다진- 일 )메틸 )모르폴리노)피리미딘 -5-일 )-L 피라졸 -1ᅳ일 )메틸)피페리딘- 1-카르복실레이트 40 nig (0.0627 麵 ol)을 포르믹 애시드 2.5 nil와 35 % 포름알데하이드 0.5 ml로 녹인 후 95 °C에서 밤새 교반하였다. 반웅이 종결되면 IN NaOH로 pH 10-11로 맞춘 후 EA로 추출하였다. 유기층은 Na2S04로 건조시켰다. Ί MeOH/MC조건에서 Prep LC로 분리하여 14 nig (41%)을 수득하였다. ᅳ匿 (300 MHz, CDCI3) δ δ 8.44(s, 2H), 8.14(sᅳ IH), 8.02(d, J=8.6Hz, IH), 7.69(q, J=8.0Hz, 3H), 7.59(t, J=7.7Hz, IH), 7.53(s, IH), 7.09(d, J=9.4Hz, IH), 4.65(d, J=12.5Hz, IH), 4.59(q, 7.1Hz, IH), 4.41(d, J=12.5Hz, 1H) , 4.30(dd, J=13.1, 4.1Hz, 1H), 4.17-4.12 (m, 1H), 4.02(d, J=6.6Hz, 3H), 3.61(t, 12.0Hz, 1H) , 3.23(dt, J=11.2, 2.5Hz, 1H), 3.07(t, J=12.0Hz, 1H), 2.87(d, J=12.5Hz, 2H), 2.27(s, 3H) , 1.93(t, J= 12.0Hz, 4H), 1.62(d, J=12.5Hz, 2H), 1.39(dt, 7=11.2, 2.5Hz, 1H) 화합물 45: (S)-3-(6-옥소 -l-((4-(5-(l- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4- 일)피리미딘 -2-일)모르폴린 -2-일)메틸) -1,6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조 니트릴 bis(2, 2,2-트리플투오로아세테이트)의 합성
Figure imgf000068_0001
(S)- e/' -부틸 4-(4-(2-(2ᅳ ( (3-(3-시아노페닐 )-6-옥소피리다진- l(6y -일)메틸)모르폴리노)피리미딘ᅳ 5-일 피라졸 -1-일 )피페리딘ᅳ 1- 카르복실레이트 103 iTig (0.165 瞧 ol)을 MC 5 ml에 녹인 후 트리플루오로아세틱애시드 1 ml를 가한다. 실온에서 밤새 교반하였다. 반웅 종결 후 용매를 감압 농축하여 제거한 후 에테르를 가하여 고체로 떨어트린다. 용기를 옮기고 에테르를 제거하여 119 nig (96%)를 수득하였다.
H-NMR (500 MHz, CDC13) δ δ 8.45(s, 2Η), 8,15(s, 1H), 8.04(d, J=8.0Hz, 1H), 7.72(t, J=8.6Hz, 2H), 7.68(s, 1H), 7.63(s, 1H), 7.60(t, J=8.0Hz, 1H), 7.11(d, J=8.6Hz, 1H), 4.66(d, 12.5Hz, 1H) , 4.61(q, J=7.1Hz, 1H), 4.42(d, J=12.5Hz, 1H), 4.31(dd, J=13.1, 4.1Hz, 1H), 4.18-4.13(m, 1H) , 4.08-4.03(m, 3H), 3.98(td, J=11.6, 4.2Hz, 1H) , 3,48(q, J=7.1Hz, 1H), 3.18-3.14(m, 1H) ' 2.61(brs, 1H), 2.41(brs, 1H) , 2.27(brs, 1H), 1.92(t, J=12.5Hz, 2H), 1.82(d, J-12.5Hz, 2H) 화합물 46: (S)-3-(6-옥소 -l-((4-(5-(l-(l- (테트라하이드로 -2H-피란 -4- 일)피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일 )피리미딘 -2-일 )모르폴린 -2-일 )메틸) -1， 6- 디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴의 합성
Figure imgf000069_0001
(S)-3-(6-옥소 -1-( (4-(5-(1- (피페리딘 -4-일) -1H-피라졸 -4-일 ) 피리미 딘 -2ᅳ일 )모르폴린 -2-일)메틸) -1，6-디하이드로피리다진 -3-일)벤조니트릴 bis (2ᅳ 2,2-트리플루오로아세테이트) 119 mg (0.158 画 ol)과 테트라하이드로 -4^ 피란 -4-온 17 mg (0.174 隱 ol)을 MC 2ml와 아세틱 애시드 9 μ 1로 녹인후 0.5시간동안 실온에서 교반하였다. 소듐 트리아세록시 보로하이드라이드 67 mg(0.316 隱 ol)을 서서히 가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 종결되면 소금물로 추출한 후 유기층은 N S04로 건조시켰다. Ί MeOH/MC조건에서 Prep LC로 분리하여 17 mg (18%)을 수득하였다.
¾-證 (500 MHz, CDC13) δ δ 8.45(s, 2H), 8.15(s, 1H) , 8.04(d, J=8.0Hz, 1H), 7.72(t, 7=8.6Hz, 2H), 7.68(s, 1H), 7.63(s, 1H), 그 60(t, J=8.0Hz, 1H), 그 ll(d, J=8.6Hz, 1H), 4.66(d, J=12.5Hz, 1H), 4.61(q, 7=7.1Hz, 1H), 4.42(d, 7=12.5Hz, 1H), 4.31(dd, =13.1， 4.1Hz, 1H), 4.18-4.13(m, 1H) , 4.08-4.03(m, 3H), 3.98(td, J=11.6, 4.2Hz, 1H) , 3.63(dt, =11.2， 2.5Hz, 1H) , 3.48(q, 7=7.1Hz, 1H), 3.41(t, J=11.6Hz, 1H), 3.25(dt, il.2, 2.5Hz, 1H), 3.18-3.14(m, 1H), 3.09(q, J=7.1Hz, 1H), 2.61(brs, 1H), 2.41(brs, 1H), 2.27(brs, 1H)， 2.09(d, J=11.5Hz, 2H), 1.92(t, J=12.5Hz, 2H), 1.82(d, J=12.5Hz, 2H), 1.67(d, =11.5Hz, 2H). 실험예
실험예 1. c-Met 키나아제 억제활성 실험
본 발명에 따른 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 이상세포의 증식억제활성을 세포단계에서 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
c-Met 키나아제에 대한 저해활성을 시간분해형광도 (Time-resolved fluorescence, TRF)의 일종인 분리 증강된 란탄족플루오로 면역 분석 (Dissociation Enhanced Lanthanide Fluoro Inimiuio Assay, DELFIA; Perk in Elmer)을 이용하여 분석하였다.
그레이너 96웰 V형 바닥 플레이트에 시험화합물로서 실시예 4~6, 8~12에서 제조된 화합물 10 mL을 가하고 c-Met 효소를 섞은 티로신 키나아제 버퍼 (20 niL)를 가한 후 , 상기 효소 및 시험화합물을 15분 동안 흔합하여 배양하였다. 여기에 ATP용액 (10 mL)을 가하여 상온에서 30분 동안 키나아제 반응을 시킨후, 50 niM 에틸렌다이아민테트라아세트산 용액 (EDTA, 40 niL)을 가하여 반웅을 중지시켰다. 이후 스트랩트아비딘이 코팅된 플레이트에 반응물을 옮기고 진탕하에 배양하고 2시간 후 PBS-T 완층액 (PBS 0.05%트원 20)으로 3회 세척하였다.
유로품이 붙은 항-포스포타이로신 항체를 1:2，500으로 희석시켜 웰 당 100 mL씩 가하고 진탕하에 배양하고 1시간 후， PBS-T 완층액 (PBS 0.05% 트뷘 20)으로 5회 세척하였다. 개선제 (enhancement solution, 100 mL)을 가하고 5분 동안 진탕배양한 후, 왈락 인비전 2103(Wallac Envision 2103) 기기로 615/665 ran의 파장 범위에서 판독하였다. 상기 실험을 수행한 시험화합물의 IC50는 2개씩의 데이터 세트로 결정하였고 프리즘 (버전 5.01, 그래프패드) 소프트웨어를 이용하여 구하였다.
c-Met 키나아제 효소활성을 50%로 감소시키는 상기 화합물의 IC50 값을 하기 표 1에 나타내었다. 【표 1】
Figure imgf000071_0001
화합물 5, 6， 11, 21, 22, 28， 31， 40 및 46(화학식 6， 7, 12, 22， 23, 29, 32， 41 및 47)은 c— Met에 대해 우수한 인 비트로 활성을 보이고 있다. 실험예 2. 암세포 증식억제 실험
본 발명에 따른 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 및 이의 약제학적 허용 가능한 염의 암세포 증식 억제능을 알아보기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
<2-1> 실험 재료
세포배양액인 RPMI 1640 배지, FBS (fetal bovine serum) 및 트립신은 Gibco사 (Grand Island, NY)로부터 구입하였으며， 탄산수소나트륨， 암포테리신 B 및 겐타마이신은 시그마케미컬 제품을 사용하였다. 또한, 세포독성 측정 실험에 사용한 시약인 SRB (sulforhodamine) B, 트리스마 염기 (Trisma base), 트리클로로아세트산 (TCA) 등의 시약은 시그마케미컬 사로부터 구입하였다. MTS 분석을 위해서는 CellTiter 96R AQueous Non- Radioactive Cell Proliferation Assay 제품을 프로메가 (Promega)사로부터 구입하였다. 또한， 세포배양을 위해 사용한 T-25 배양용기， 96-웰 (well) 플레이트 및 기타 세포배양에 사용한 일회용 초자류는 팔콘사 (Lincoln Park, NJ) 제품을 사용하였다.
세포독성 측정을 위한 엘라이자 리더기 (niicroplate reader)는 Molecular Devices사 (Sunnyvale, CA)의 E-max나 SpectraMax250 기종을 사용하였다.
<2-2>실험방법
실험에 사용한 약물은 시험에 원하는 농도까지 실험용 배지로서 희석하여 사용하였고, 최종 다이메틸설폭사이드 농도는 0.5% 이하가 되도록 하였다.
실험에 사용한 암세포주는 모두 인체기원 암세포주들로서, 위암 세포주인 Hs746T, 및 MKN-45를 사용하였다. 배양액으로는 10% FBS (fetal bovine serum)가 첨가된 RPMI 1640 배지를 사용하여 37°C 및 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 배양하였고, 3-4일에 한번 씩 계대 유지하였다.
96 웰 (well)의 평평한 바닥 마이크로플레이트 (flat-bottom microplate)의 각 웰에 Hs746T는 5X103 cell을 분주하고， MKN-45는 IX 104 cells를 분주하고， 세포가 바닥면에 부착하도록 24시간 동안 배양한 후, 배양액을 제거하고, 여기에 본 발명의 화합물이 각각 포함된 배양액을 가하고 72시간 동안 배양하였다. 상기 화합물과의 배양이 종료된 후, 세포독성의 측정은 단백질 염색 시약인 SRB를 이용하여 측정하거나 MTS 분석법을 이용하여 측정하였다.
구체적으로, 본 발명의 화합물과의 배양이 종료된 후， 배양액을 제거하고 각 웰에 차가운 TCA 용액을 처리하고 4°C에서 1시간 동안 방치하여 세포들을 고정시켰다. 상기 TCA 용액을 제거하고 실온에서 건조시킨 후， 1% 아세트산 용액에 0.4% SRB를 녹인 염색용액올 가하여 실온에서 30분 동안 방치하여 세포를 염색하였다. 세포와 결합하지 않은 여분의 SRB를 1% 아세트산 용액으로 세척하여 제거하고, 염색된 세포들에 H 10.3~10.5의 10 ιιιΜ 트리스 완층용액 (Trisma base; unbuffered)을 가하여 SRB를 용출시켰다. 각 웰의 흡광도는 엘라이자 리더기 (niicroplate reader)를 이용하여 520 nm의 파장 범위에서 측정하였다.
약물을 가하지 않은 웰 (C)과 약물을 가한 각 웰 (T) 및 약물을 처음 가할 때의 웰 (well)CTz)의 0D값으로부터，
12^인 경우에는 [(T-Tz)/(C-Tz)]Xl00의 수식에 의해 또는
Τζ>Ί^ 경우에는 [(T-Tz)/(Tz)xl00 의 수식에 의해 약물의 세포독성을 계산하였다.
MTS 분석법을 이용한 암세포 증식억제 측정은 다음과 같이 실험하였다. 구체적으로， 본 발명의 화합물과의 배양이 종료된 후, 프로메가사의 CellTiter 96R AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay 제품을 구성하고 있는 PMS 용액과 MTS 용액을 섞은 후 웰당 20 uL를 넣어주었다. 4시간 동안 배양기에 놓아둔 후 꺼내어 상온에서 10분간 방치하였다. Molecular Device사의 SpectraMax250 기종을 이용하여 490 nM에서의 흡광도를 측정한 후 IC50 값을 계산하였다.
암세포 (Hs746T) 증식을 50%로 억제하는 상기 화합물의 IC50는 하기 표 2에 나타내었다. 【표 2】
Figure imgf000074_0001
각 화합물의 암세포 (Hs746T) 증식 억제 분석 [ICso iM)] 표 2에 나타난 바와 같이， 암세포인 Hs746T에 대한 다수 화합물의 IC50 값은 0,01 μΜ 이하로 나타났으며 특히 화학식 7과 32의 화합물은 각 0.001, 0.003 μΜ의 매우 낮은 값을 나타내었다. 이로부터 본 발명에 따른 신규한 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염은 암세포 등의 증식을 억제하는 우수한 효과가 있음을 알 수 있다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
<제제예 > 약학적 제제의 제조
<1>산제의 제조
히드라진은이 치환된 피리미딘 유도체 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 흔합한 후， 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<2> 정제의 제조
히드라진은이 치환된 피리미딘 유도체 100 mg
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다ᅳ <3> 캡슐제의 제조
히드라진은이 치환된 피리미딘 유도체 100 nig
옥수수전분 100 mg
유 당 100 rag
스테아린산 마그네슴 2 mg
상기의 성분을 흔합한 후, 통상의 캡슬제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 층전하여 캡슐제를 제조하였다.
<4>주사액제의 제조
히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 10 /ig/
묽은 염산 8? 3.5로 될 때까지
주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ^
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체를 용해시키고， 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고， 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 층분히 흔합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 mi 타입 I 앰플 중에 층전시키고， 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고， 120 °C에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다. 이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바， 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며， 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

【특허청구범위】
【청구항 1]
하기의 화학식 1로 표시되는 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염:
화학식 1
Figure imgf000076_0001
상기 화학식에서,
Ri 내지 ¾는 각각 독립적으로 수소; 할로겐; 하이드록시; 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬; 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 Ci-C3 알콕시; 알데하이드, 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 CrC5 알킬, 5각ᅳ 6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 d-C3 알콕시 또는 할로겐으로 치환된 페닐; 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬， 5각 -6각 고리의 헤테로사이클로알킬로 치환된 d-C3 알콕시， d-C5 알킬， 하이드록시 또는 할로겐으로 치환된 5각 -6각 고리의 헤테로아릴; 아미노 알콕시; 또는 비치환되거나 d-C5 알킬 또는 d- 알코을로 치환된 1,2,3,6- 테트라하이드로피리딘이고， ¾내지 R3 중 적어도 하나는 수소가 아니며 ;
R4는 비치환되거나 Cr"C5 알킬로 치환된 5각 -6각 고리의 헤테로아릴; 또는 시아노, 할로겐, 할로 d-C5 알킬 또는 페닐 C厂 C3 알콕시로 치환된 페닐이다.
【청구항 2]
제 1 항에 있어세 상기 화학식 1의 Ri 및 R3는 수소이고, R2는 할로겐; 하이드록시; 모르폴린; 피페리딘; 피페라진; 모르폴리노 d-Cs 알콕시 ; 피페라지닐 CrC3 알콕시 ; 피롤리디닐 d-C3 알콕시 ; 피페리디닐 d- C3 알콕시; 알데하이드, 모르폴리노 d-C3 알콕시, 피페라지닐 C :3 알콕시， 모르폴리노 d-C5 알킬 또는 할로겐으로 치환된 페닐; 피페리디닐 피라졸; 할로겐, 피페라진 또는 모르폴리노 d-Qj 알콕시로 치환된 피리딘; 아미노 C1-C3 알콕시 ; 또는 비치환되거나 C厂 C5 알킬 또는 C广 c4 알코을로 치환된 1,2,
3, 6-테트라하이드로피리딘인 것을 특징으로 하는 모로폴리노 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염. 【청구항 3】
제 1 항에 있어서， 상기 화학식 1의 R4는 알킬로 치환된 피라졸; 비치환된 피리딘; 또는 시아노， 할로겐 할로 d-Cs 알킬 또는 페닐 d-C3 알콕시로 치환된 페닐인 것을 특징으로 하는 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염.
【청구항 4】
저 1 1 항에 있어세 상기 화학식 1로 표시되는 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체는 하기의 화학식 2 내지 55로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 : 화학식 2 화학식 3
Figure imgf000077_0001
Figure imgf000077_0002
Figure imgf000078_0001
화학식 8 화학식 9
Figure imgf000078_0002
화학식 10 화학식 11
Figure imgf000078_0003
Figure imgf000079_0001
Figure imgf000079_0002
Figure imgf000079_0003
화학식 20 화학식 21
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화학식 32
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화학식 34 화학식 35
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화학식 36 화학식 37
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화학식 38
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화학식 40
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화학식 44 화학식 45
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【청구항 5]
제 4 항에 있어서, 상기 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체는 상기 화학식 6 7, 12, 22, 23, 29 32, 41 및 47 로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염.
【청구항 6]
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 c-Met 티로신 키나아제 활성 억제용 약제학적 조성물.
【청구항 7】
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 히드라진온이 치환된 피리미딘 유도체, 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
【청구항 8】
제 7 항에 있어서, 상기 히드라진은이 치환된 피리미딘 유도체는 상기 화학식 6ᅳ 7, 15, 16， 23, 32, 43 및 47로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
【청구항 9】
제 7 항에 있어서， 상기 이상증식성 질환 (hyper proliferative disorder)은 암， 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식 거부， 신생혈관성 녹내장, 홍색증, 증식성 망막증， 건선, 류마티스 관절염， 골관절염， 자가면역 질환, 크론씨병, 재발협착증, 아테롬성 동맥경화， 장관 접착, 궤양, 간경병증 사구체신염 당뇨병성 신장병증 악성 신경화증ᅳ 혈전성 미소혈관증 기관 이식 거부 및 신사구체병증으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
【청구항 10】
제 9 항에 있어서, 상기 암은 폐암, 위암， 췌장암， 대장암, 난소암， 신장 세포암 전립선암 또는 뇌종양인 것을 특징으로 하는 조성물.
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