WO2013129973A1 - 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение - Google Patents

2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение Download PDF

Info

Publication number
WO2013129973A1
WO2013129973A1 PCT/RU2013/000156 RU2013000156W WO2013129973A1 WO 2013129973 A1 WO2013129973 A1 WO 2013129973A1 RU 2013000156 W RU2013000156 W RU 2013000156W WO 2013129973 A1 WO2013129973 A1 WO 2013129973A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
radical
carbon atoms
nitro
saturated
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
PCT/RU2013/000156
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Светлана Юрьевна РЯБОВА
Виктор Васильевич СУРОВЦЕВ
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Метаген"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2012107786/04A external-priority patent/RU2475481C1/ru
Priority claimed from RU2012157036/04A external-priority patent/RU2504541C1/ru
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Метаген" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Метаген"
Priority to EA201391552A priority Critical patent/EA201391552A1/ru
Publication of WO2013129973A1 publication Critical patent/WO2013129973A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/47—One nitrogen atom and one oxygen or sulfur atom, e.g. cytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/56—One oxygen atom and one sulfur atom

Definitions

  • the invention relates to the use of 2-nitroheterylthiocyanates, such as derivatives of 4-rhodo-5-nitropyrimidines and 2-rhodano-3-nitropyridines, having activity against human fungal infections, for the prevention and treatment of fungal infections in humans and animals.
  • mycoses fungal infections
  • An increase in the proportion of fungal complications is noted in the general statistics on the structure of infectious diseases.
  • Mycoses have become very important due to the widespread use of powerful antibiotics, decreased immunity, malnutrition, environmental degradation, as well as the widespread development of resistance of mycosis pathogens to drugs on the market.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) toxic, moreover, many strains of pathogens become resistant to drugs of the azole group.
  • the mechanisms that ensure the antimicrobial effect of drugs can be summarized as follows: 1) the effect on the synthesis of nucleic acids and proteins, 2) the effect on the formation of mucopeptides, which disrupts the construction of a new cell wall, 3) damage to the plasma membrane of microbes JMFostel, PALartey, Drug Disc. Today, 2000, 5, 25).
  • the rational approaches to the search for antifungal agents include the synthesis of heterocyclic compounds - in particular, analogues of nucleic acid bases containing sulfur containing fragments as functional groups.
  • the objective of the present invention was to find new derivatives of heterocyclic compounds that would have high activity against fungal infections, including strains resistant to currently existing drugs (N. Berila, J. Subik., Epidemiol Mikrobiol Imunol. 2010, 59 (2), 67-79; R. Di Santo, Nat. Prod. Rep., 2010, 27 (7), 1084-98; R. Musiol, M. Serda, S. Hensel-Bielowka, J. Polanski. Curr. Med. Chem. 2010, 17 (18), 1960-73)
  • R 1 means hydrogen, a saturated or unsaturated linear alkoxy radical having 2-5 carbon atoms; cycloalkyloxy radical having up to 6 carbon atoms; a saturated linear alkyl mercapto radical having 1-3 carbon atoms; an amino radical having 1-10 carbon atoms selected from a saturated or unsaturated linear mono- or dialkylamino radical or cycloalkylamino radical, a cyclic amino radical, wherein each of the cyclic groups may be substituted with 1-2 methyl groups; or a benzylamino group;
  • R 2 means hydrogen, a saturated or unsaturated, linear alkyl radical having 1-5 carbon atoms, or a cyclic aliphatic radical having up to 6 carbon atoms, trifluoromethyl, styryl or methyl mercapto group;
  • R 3 means trifluoromethyl, formyl, acetyl, nitro, benzoyl, a cyano group or an alkoxycarbonyl substituent having 1-3 carbon atoms in an alkoxy group,
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) with the exception of the following known compounds 4-isoprops-amino-5-nitro-6-thiocyanopyrgtidine (Demina GR et al, PLoS One, 2009, 4 (12), 8174), 4-azocano-5-nitro-6-thiocyanopyrimidine (C A # 847188-01-6), 2-methstio-4-methoxy-5-nitro-6-thiociano-pyrimidine (US 2007/0270433), 4-methoxy-5-nitro-6-thiociano-pyrimidine (RU 2312104 CI ), 2-thiocyanato-3-nitropyridine (Ulrich H. Sci.
  • the compounds represented by general formula (I) are capable of forming acid addition salts.
  • Salts with pharmaceutically active non-toxic acids can be formed by treating the compound in the form of bases represented by the general formula (I) with suitable acids selected from inorganic acids, for example: hydrohalic acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric or phosphoric acids; organic acids, for example: acetic acid, hydroxyacetic acid, propionic acid, lactic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malonic acid, maleic and fumaric acids, malic, tartaric or citric acids.
  • suitable acids selected from inorganic acids, for example: hydrohalic acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric or phosphoric acids
  • organic acids for example: acetic acid, hydroxyacetic acid, propionic acid, lactic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malonic acid, maleic and fumaric acids, malic,
  • the compounds represented by the general formula (I) containing acidic protons can also be converted to their pharmaceutically active base addition salt forms by treatment with suitable organic and inorganic bases.
  • suitable salt forms include, for example, ammonium salts, alkali and alkaline earth metal salts, in particular sodium, potassium, magnesium and calcium salts, salts with organic bases, for example guanidine,
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) triethylamine, and salts with amino acids, for example with arginine or lysine.
  • addition salt includes various solvates that are capable of forming compounds of general formula (I).
  • the compounds may be in amorphous form or in the form of crystals.
  • the invention also relates to the use of compounds of the general formula (I),
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition suitable for use as an antifungal agent, which contains, as an active component, a compound of general formula (I) or a pharmaceutically acceptable addition salt thereof with an acid or base in a pharmacologically effective amount.
  • the composition comprises, as an active ingredient, 3,5-dinitro-2-thiocyanopyridine or a pharmaceutically acceptable acid or base addition salt thereof.
  • the pharmaceutical composition also typically contains a pharmaceutically acceptable carrier and adjuvants.
  • the pharmaceutical composition may be in the form suitable for enteral and parenteral administration, including rectal, vaginal trans buccal and sublingual administration forms, in a form suitable for injection, as well as in a form suitable for topical administration.
  • forms can be tablets, capsules, suppositories, injections, creams, ointments, pastes, lotions, nail polishes, gels, liniment, plasters, shampoos, emulsions, etc., placed in a package or in the form of a prolonged release of the active component , for example, in the form of a liposome form.
  • the invention may relate to the use of the compounds of the present invention, possibly in crystalline form, or their pharmaceutically acceptable acid or base addition salts or pharmaceutical composition for the preparation of a medicament for the treatment and prevention of fungal infections.
  • the invention also relates to the use of the compounds of the present invention or their pharmaceutically acceptable acid or base addition salts or a pharmaceutical composition in an effective amount for the treatment and prevention of fungal infections in humans and animals.
  • An object of the invention is a method of treating or preventing a fungal infection in a human or animal, comprising administering or applying to a subject who needs said treatment an effective amount of a compound or a pharmaceutically acceptable additive thereof
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) salts with an acid or base or pharmaceutical composition in an effective amount.
  • an effective amount means an amount of an active ingredient that, when administered to patients, provides the prevention, amelioration, or elimination of symptoms of diseases to be prevented or treated.
  • the compounds or their pharmaceutically acceptable salts, a pharmaceutical composition based on them in the form of tablets, capsules, injections, suppositories, ointments, creams and other formulations, (see below), can be used to treat and prevent diseases or disorders in humans and animals caused by strains of pathogens of fungal infections (mycoses), including those resistant to currently existing drugs.
  • enteral administration form for example, in the form of tablets, granules, dragees, spheres, powders, capsules, suspensions, syrups, emulsions, rectal suppositories, including transbuccal and sublingual administration forms, etc .;
  • parenteral administration in the form of an injection, for example, in the form of solutions, emulsions, suspensions, powders and tablets to obtain solutions and implants, lyophilized drugs administered parenterally (subcutaneously, intramuscularly, intravenously, intraarterially, into various cavities) and etc.; in the form of non-injection forms of administration, for example, in the form of suppositories for vaginal administration, aerosol, spray, gels, suspensions,
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) emulsions, liniments, solutions, drops, adhesives, powders, powders, powders, lotions, etc.
  • any pharmaceutically acceptable components that are compatible with the active ingredient and do not harm patients can be used such as camphor, triphenyl phosphate or pentanyl diisobutyrate, diisobutyl phthalate, etc., pigments, solubilizing agents, with glidants, stabilizers, diluents, adjuvants, preservatives, components of buffer systems, solvents, dispersants, preservatives, lubricants, flavors, thickeners, food colors, emulsifiers, film-forming substances such as hydroxyethyl or propyl cellulose, hydroxypropylchitosan, prolongators, substances that contribute to improving the penetration of the drug, for example, benzyl alcohol, prolonged delivery regulators, etc.
  • compositions are, for example, lactose, inositol, glucose, mannitol, dextran, cyclodextrin, sorbitol, starch and its modifications, sucrose, magnesium aluminosilicate, synthetic aluminosilicate, crystalline cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, hydroxypropylated starch, carboxymethyl cellulose ion exchange methyl cellulose, gelatin, gum arabic, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) alcohol, alginic acid, sodium alginate, anhydrous silicic acid, magnesium stearate, talc, carboxyvinyl polymer, titanium oxide, fatty acid ester of sorbitol, sodium lauryl sulfate, glycerin, glycerol fatty acid ester, lanolin, glycerol gelatin, oil grinder, vegetable salt wax, paraffins, propylene glycol, polyethylene glycol, water, ethanol, polyalcohols, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, sodium chloride, sodium hydroxide, hydrochloric acid, dibasic sodium phosphate, monobasic sodium phosphate, citric acid acid, glutamic acid, benzyl alcohol, methyl p-hydroxybenzoate, ethyl p-hydroxybenzoate, etc.
  • compositions in the form of suppositories are, for example, natural or hardened oils, for example, cocoa butter, waxes, fats, glycerol and saturated fatty acid esters, glycerolatin, macrogol, semi-liquid or liquid polyols, triglycerides, etc.
  • suppositories may also include a surfactant or stabilizer.
  • Solubilizers help to increase the solubility of sparingly soluble substances in water. With their help, you can adjust the viscosity of the solution, produce products in other forms (liquid instead of solid), develop new formulations, improve the quality of cosmetics.
  • solubilizers you can use any acceptable and compatible solubilizers commonly used in the cosmetics industry for shampoos, shower gels, bath foams for creams, lotions, such as oil / water, co-emulsifiers for emulsions. These include, for example, glyceride derivatives, polysorbate 80, ethoxylated hydrogenated castor oil, pegylated oils such as castor oil or pegylated hydrogenated castor oil and water or propylene glycol.
  • the topical composition may also contain, as an additive, oils such as vegetable oil, jojoba oil, olive oil, sunflower oil, soybean oil, peanut oil, rapeseed oil, almond oil, palm oil, coconut oil or palm kernel oil.
  • oils such as vegetable oil, jojoba oil, olive oil, sunflower oil, soybean oil, peanut oil, rapeseed oil, almond oil, palm oil, coconut oil or palm kernel oil.
  • composition according to the invention may also contain such components that will provide a quick, sustained or delayed release of the active ingredient after use by patients.
  • the prolonged action of the composition can be achieved using agents that slow down the absorption of the active principle, for example aluminum monostearate and gelatin.
  • the compounds of the invention of formula (I) can be obtained from the corresponding intermediate compound containing a mobile halogen atom by a known nucleophilic substitution reaction, where the thiocyanate ion acts as the nucleophile, and which can be introduced into the reaction in the form of its sodium, potassium or ammonium salt (scheme one ).
  • the reaction takes place in a suitable solvent, for example lower alcohols, acetone, ethyl methyl ketone. All radicals are defined as in formula (I). Stirring may increase the reaction rate.
  • the reaction can be easily carried out at a temperature in the range from +10 to -Y00 ° C.
  • the resulting product can be purified by crystallization, for example, from lower alcohols. In this case, it is possible to obtain various crystalline modifications.
  • the starting and intermediate compounds of formula (II) are compounds that are either commercially available or can be obtained by conventional methods well known in the literature.
  • Compound 2 was synthesized analogously to compound 1, but using a 40% aqueous solution of methylamine as the amine.
  • Compound 3 was synthesized according to the method described in Demina G.R. et al, PLoS One, 2009, 4 (12), 8174 and its spectral and analytical characteristics corresponded to those indicated in the literature.
  • Compound 4 was synthesized analogously to compound 1, but using the prepared aqueous solution of hexahydromethyleneimine as an amine.
  • Compound 6 was synthesized analogously to compound 1, but using the prepared aqueous solution of 3,5-dimethylpiperidine as an amine.
  • Compound 8 was synthesized analogously to compound 1, but using a prepared 40% aqueous diethylamine solution as an amine.
  • Compound 10 was synthesized analogously to compound 1, but using the prepared aqueous solution of N-methyl-1M-benzylamine as an amine.
  • Compound 11 was synthesized analogously to compound 1, but using the prepared aqueous solution of ⁇ -methylcyclohexylamine as an amine.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) filtered off, washed with water and used in the next step without further purification.
  • Compound 14 was synthesized similarly to compound 12, but using the prepared 40% aqueous methylamine solution as an amine.
  • Compound 15 was synthesized analogously to compound 12, but using the prepared aqueous pyrrolidine solution as an amine.
  • Compound 16 was synthesized analogously to compound 12, but using a prepared 40% aqueous solution of diethylamine as an amine.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) The obtained compounds of general formula (I) showed marked activity against pathogenic fungi and yeast, as well as against clinically isolated strains of fungi, including those sensitive to fluconazole, as well as against cultures resistant to antifungal drugs.
  • the activity of the test compounds was determined by the method of double serial dilutions (micromethod) in a liquid nutrient medium with the detection of the minimum inhibitory concentration (MIC) for various laboratory and clinical strains of fungi [National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1997. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts. Approved standard M27-A. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, PA, USA .; National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2002. Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Conidium-Forming Filamentous Fungi: Approved Standard M38-A. NCCLS, Wayne, PA, USA].
  • a suspension of yeast cells and a suspension of fungal spores in sterile physiological saline (0.85% NaCl) were used.
  • the density of the suspensions was controlled spectrophotometrically.
  • the initial suspension of yeast and fungal spores was diluted with standard medium (RPMI 1640).
  • the final cell concentration in the experiment was (1-5) x 10 cells / ml for yeast and (0.4-5) x 10 4 cells / ml for fungi.
  • the number of cells in the inoculum was checked by plating on Saburo agar and counting the grown colonies.
  • Test substances were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) with an initial concentration of 1600 ⁇ g / ml, and a series of dilutions of 1600 to 3.13 ⁇ g / ml were prepared in the same solvent.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the resulting solutions were diluted 50 times in standard RPMI 1640 medium used for the experiment. All solutions of the tested preparations were prepared immediately before use.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) The experiments were performed in sterile 96-well flat-bottomed plates in RPMI 1640 medium in wells containing 200 ⁇ l of culture medium. The final concentration of drugs in the experiment after the introduction of microbial inoculum ranged from 16 to 0.03 ⁇ g / ml with a solvent concentration (DMSO) of 1%. Each drug in the experiment was present in at least three repetitions. Wells that did not contain the test drugs were included in the experiment panel as a control.
  • DMSO solvent concentration
  • the minimum inhibitory concentration (MIC) of antifungal drugs was read at 24 hours of cultivation for Candida albicans and Cryptococcus humicolus and 48 hours of cultivation for Aspergillus niger and Fusarium oxysporum.
  • Table 1 The activity of compounds of General formula (I) against laboratory strains of pathogenic fungi and yeast. The minimum inhibitory concentration is indicated in ⁇ g / ml.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) ⁇ - dimorphic (in the yeast phase, Y): Candida albicans, strain 1244, C. albicans, strain 1242, C. tropicalis, strain 531, C. krusei, strain 526, C. parapsilosis, strain 897, C. guilliermondii, strain 594, C. glabrata, strain 1188; filamentous (F): Aspergillus fumigatus, strain 1248, A. niger, strain 1249, A. flavus, strain 1247. All test cultures are clinical isolates from the corresponding patients, pathogen isolates are stored in the Russian collection of pathogenic fungi at the Scientific Research Institute of Medical Mycology named after P.N. Kashkina SPb MAPO.
  • Culture media Saburo agarized and liquid culture medium. Solvents and suspension media; distilled water, dimethyl sulfoxide (DMSO), phosphate buffered saline. The antifungal activity of the above substances was determined using the macro method ( ⁇ , issue 2, 2002) at successive two-fold dilutions. Suspensions of yeast species of the genus Candida were prepared from two day old cultures grown at 37 ° C on Saburo agar in test tubes. The cultures were washed off with a phosphate buffered saline solution, the density of the suspensions was adjusted to 10 Units according to the turbidity standard.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the prepared suspension of the test culture was diluted 100 times with the same phosphate buffered solution, and 0.1 ml (2 drops) of the working suspension of the cell suspension was added to each tube of the dilution series of the test substances in the liquid medium Saburo.
  • Filamentous fungal cultures were grown for 2–3 days at 37 ° ⁇ on Saburo agar in test tubes, then the cell mass was collected from the surface of the agar, placed in a sterile tube and ground, gradually adding a phosphate buffered solution to a density of working suspensions of 5 Units according to the turbidity standard.
  • the amount of working suspension added to each row tube was also 0.1 ml.
  • test organism (1 ml of culture medium + OD ml of the working suspension of micromycete; the test substance was absent here);
  • test substance (0.9 ml of culture medium + 0.1 ml of the initial dilution of the test substance, that is, 100 ⁇ g of this substance was contained in 1 ml).
  • All series of dilutions prepared in test tubes with test cultures and control were kept at a temperature of 37 ° C until the growth of the fungus in the first control.
  • the minimum fungistatic concentration of antimycotics is considered to be dilution in the last tube in which micromycete growth is not visually observed.
  • the dilution will be 214 * 10 4 (2140000) times when the concentration of the substance decreased to 0.39 ⁇ g / ml, in the remaining five tubes the growth of the culture was almost (or equal ) is the same as in the first control.
  • the indicated concentration of 0.39 ⁇ g / ml is the fungistatic titer (or concentration).
  • microbial loops are sown with strokes on the sectors of the Saburo agar medium in Petri dishes from each tube in which culture growth is not visually observed, and from the first control tube. After this, cups with sectoral seeding are left in the thermostat at the required temperature for the period until the growth of colonies in the control sector. If the seeds were also positive, for example, from the 7th-9th test tubes, this means that the fungicidal effect is manifested when the antimycotic concentration is 3.14 ⁇ g / ml.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) Table 2. - The activity of compounds of General formula I in relation to clinical strains of fungi of the genus Aspergillus. The minimum inhibitory concentration is indicated in ⁇ g / ml.
  • Table 3 Activity of compounds of the general formula I in relation to clinical strains of fungi of the genus Candida. The minimum inhibitory concentration is indicated in ⁇ g / ml.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) The following are examples of the preparation of pharmaceutical compositions in the form of various forms suitable For use as a medicine.
  • Example A Preparation of tablets containing 50-500 mg of active ingredient.
  • the active ingredient is mixed with 1600 mg of starch, 1600 mg of crushed lactose, 400 mg of talc and pressed into a block.
  • the resulting bar is crushed into granules and sieved through sieves, collecting granules
  • the granules obtained are tabletted into a suitable tablet form weighing 560 mg each.
  • Example B Capsules containing 50-500 mg of the active ingredient according to the invention are prepared by thoroughly mixing the active compound with lactose powder in a ratio of 2: 1. The resulting powder mixture is packaged in 300 mg in gelatin capsules of the appropriate size.
  • Example B Injectable compositions for intramuscular, intraperitoneal or subcutaneous injection can be prepared by mixing 50-500 mg of the active compound with 300 mg of chlorobutanol, 2 ml of propylene glycol and 100 ml of injection water. The resulting solution is filtered and placed in 1 ml ampoules, which are sealed and sterilized in an autoclave.
  • Example D Candles can be made as follows: the active substance is melted in a small amount of a candle base. The resulting melt is thoroughly mixed with the required amount of base warmed up to (35-80) ° C. The resulting mixture
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) homogenize.
  • the finished mixture in the melted state is used for the manufacture of candles.
  • Example D Preparation of a pharmaceutical composition in the form of an ointment or cream.
  • Ointment and cream can be made as follows: 0.5-3% weight. from the total mass of the active substance is melted in a small amount of ointment, cream or candle base. The resulting melt is thoroughly mixed with the required amount of base warmed up to (35-80) ° C, adding the required amount of distilled water heated to 50 ° C. The resulting mixture is homogenized. The melted mixture is poured into tubes.
  • Example E Pharmaceutical composition in the form of a gel.
  • the compound of formula I is 3% by mass, citric acid - * 5%, hydroxyethyl cellulose-4%, glycerol 2.5%, sodium hydroxide-0.9%, water up to 100%.
  • Dissolve citric acid and sodium hydroxide add glycerin, acetone and the active substance. With vigorous stirring, hydroxyethyl cellulose is added and then allowed to swell. Get a gel, which can then be used as an antifungal agent.

Abstract

Изобретение относится к новым 2-нитрогетерилтиоцианатам общей формулы (I), или их фармацевтически приемлемым аддитивным солям с кислотами или основаниями, возможно в кристаллическом виде, обладающих противогрибковой активностью, их применению для лечения грибковых инфекций, а также фармацевтической композиции на их основе, и приготовлению лекарственных средств для лечения и предупреждения грибковых инфекций. В формуле (I) X = N или C-R3 R1 означает водород, насыщенный или ненасыщенный линейный алкокси радикал, имеющий 2-5 атомов углерода; циклоалкилокси радикал, имеющий до 6 атомов углерода; насыщенный линейный алкилмеркапто радикал, имеющий 1-3 атомов углерода; амино радикал, имеющий 1-10 атомов углерода, выбранный из насыщенного или не насыщенного линейного моно- или диалкиламино радикала, или циклоалкиламино радикала, циклического амино радикала, при этом каждая из циклических групп может быть замещена 1-2 метальными группами; или бензиламиногруппу; R2 означает водород, насыщенный или ненасыщенный, линейный алкилрадикал, имеющий 1-5 атомов углерода, или циклический алифатический радикал, имеющий до 6 атомов углерода, трифторметил, стирил или метилмеркаптогруппу; R3 означает трифторметил, формил, ацетил, нитро, бензоил, цианогруппу или алкоксикарбонильный заместитель, имеющий 1-3 атомов углерода в алкоксигруппе.

Description

2-НИТРОГЕТЕРИЛТИОЦИАНАТЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГРИБКОВЫХ ИНФЕКЦИЙ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ИХ
ПРИМЕНЕНИЕ
Описание
Изобретение относится к применению 2-нитрогетерилтиоцианатов, таких как производные 4-родано-5-нитропиримидины и 2-родано-З- нитропйридины, обладающих активностью в отношении грибковых инфекций человека, для предупреждения и лечения грибковых инфекций человека и животных.
Проблема поиска новых противогрибковых средств обусловлена значительным распространением грибковых инфекций (микозов) у людей и животных. Отмечается рост удельного веса грибковых осложнений в общей статистике по структуре инфекционных заболеваний. Микозы приобрели очень большую актуальность в связи с широким применением мощных антибиотиков, снижением иммунитета, неполноценным питанием, ухудшением экологии, а так же с широким развитием резистентности у возбудителей микозов к имеющимся на рынке лекарственным препаратам.
Правильное проведение лечения и профилактики с применением антимикотических препаратов, различающихся по механизму и спектру действия, является одной из важнейших задач, связанной с грибковой патологией человека и животных.
Именно поэтому во всем мире проводится интенсивный поиск и разработка новых эффективных лекарственных соединений. Особая трудность в лечении грибковых инфекций обусловлена сильным сходством грибов и млекопитающих, как на биохимическом, так и на клеточном уровне.
Имеющиеся в настоящее время противогрибковые препараты - полиены и азолы, влияющие на главный компонент мембраны грибов - эргостерол, не обеспечивают должной избирательности действия. Они весьма
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) токсичны, более того многие штаммы возбудителей приобретают резистентность к препаратам группы азолов. На сегодняшний день механизмы, обеспечивающие реализацию антимикробного действия лекарственных препаратов можно кратко сформулировать следующим образом: 1) влияние на синтез нуклеиновых кислот и белков, 2) воздействие на образование мукопептидов, нарушающее построение новой клеточной стенки, 3) повреждение плазматической мембраны микробов J.M.Fostel, P.A.Lartey, Drug Disc. Today, 2000, 5, 25). Исходя из этого, к числу рациональных подходов к поиску противогрибковых средств, следует отнести синтез гетероциклических соединений - в частности, аналогов оснований нуклеиновых кислот, содержащих в качестве функциональных групп фрагменты, содержащие серу. Эти группировки способны к взаимодействию с эндогенными нуклеофилами, такими как белки, аминокислоты, гликозидные фрагменты, тиолы, создавать дисульфидные мостики и вообще активно участвовать в образовании новых ковалентных и слабых (Н-связи, связи диполь- диполь и др.) связей с эндогенными системами.
Задача настоящего изобретения состояла в изыскании новых производных гетероциклических соединений, которые бы обладали высокой активностью в отношении грибковых инфекций, в том числе к штаммам резистентным к существующим в настоящее время лекарственным препаратам (N.Berila, J.Subik., Epidemiol Mikrobiol Imunol. 2010, 59(2), 67-79; R. Di Santo, Nat. Prod. Rep., 2010, 27(7), 1084-98; R. Musiol, M.Serda, S.Hensel- Bielowka, J.Polanski. Curr. Med. Chem. 2010, 17(18), 1960-73)
Результатом решения данной задачи явился синтез серии производных 4-родано-5-нитропиримидинов и 2-родано-З-нитропиридинов, содержащих в своем составе ортонитротиоцианатный фрагмент. Была исследована их активность в отношении патогенных грибковых инфекций с целью создания на их основе нового противогрибкового препарата.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Согласно изобретению предлагаются новые соединения формулы (I):
Figure imgf000005_0001
где X = N или C-R3
R1 означает водород, насыщенный или ненасыщенный линейный алкокси радикал, имеющий 2-5 атомов углерода; циклоалкилокси радикал, имеющий до 6 атомов углерода; насыщенный линейный алкилмеркапто радикал, имеющий 1-3 атомов углерода; амино радикал, имеющий 1-10 атомов углерода, выбранный из насыщенного или не насыщенного линейного моно- или диалкиламино радикала или циклоалкиламино радикала, циклического амино радикала, при этом каждая из циклических групп может быть замещена 1-2 метальными группами; или бензиламиногруппу;
R2 означает водород, насыщенный или ненасыщенный, линейный алкилрадикал, имеющий 1-5 атомов углерода, или циклический алифатический радикал, имеющий до 6 атомов углерода, трифторметил, стирил или метилмеркаптогруппу;
R3 означает трифторметил, формил, ацетил, нитро, бензоил, цианогруппу или алкоксикарбонильный заместитель, имеющий 1-3 атомов углерода в алкоксигруппе,
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) за исключением следующих известных соединений 4-изопропш-амино- 5-нитро-6-тиоцианопиргтидин (Demina G.R. et al, PLoS One, 2009, 4(12), 8174), 4-азокано-5-нитро-6-тиоцианопиримидин (С A # 847188-01-6), 2- метштио-4-метокси-5-нитро-6-тиоциано-пиримидин (US 2007/0270433), 4- метокси-5-нитро-6-тиоциано-пиримидин (RU 2312104 CI), 2-тиоцианато-З- нитропиридин (Ulrich H. Sci. Synth., 202, 11, 835), 4-тиоцианато-5- нитропиримидин и 2-этг меркапто-4-тиоцианато-5-нитропиримидин (Takahashi Н., Torizo I. Che. Phar. Bull., 1958, 6, 334) и 3,5-динитро-2- тиоцианопиридина (Talik Z., Plazek E. Bulletin de'Academie Polonaise des Sciences, Serie des Sciences Chimiques, 1960, 8(5), 219).
Соединения, представленные общей формулой (I) способны образовывать аддитивные соли с кислотами. Соли с фармацевтически активными нетоксичными кислотами могут быть образованы обработкой соединения в виде оснований, представленных общей формулой (I), подходящими кислотами, выбранными из неорганических кислот, например: галоидводородной кислотой, хлористоводородной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, азотной или фосфорной кислотами; органических кислот, например: уксусной кислотой, гидроксиуксусной кислотой, пропионовой кислотой, молочной кислотой, пировиноградной кислотой, щавелевой кислотой, малоновой кислотой, малеиновой и фумаровой кислотами, яблочной, винной или лимонной кислотами.
Соединения, представленные общей формулой (I), содержащие кислые протоны, могут также быть преобразованы в их фармацевтически активные аддитивные солевые формы с основаниями путем обработки подходящими органическими и неорганическими основаниями. Подходящие солевые формы включают, например, соли аммония, соли щелочных и щелочноземельных металлов, в частности, соли натрия, калия, магния и кальция, соли с органическими основаниями, например, гуанидином,
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) триэтиламином, и соли с аминокислотами, например с аргинином или лизином.
Используемый в рамках данного изобретения термин «аддитивная соль» включает различные сольваты, которые способны образовывать соединения общей формулой (I). Соединения могут в аморфном виде или в виде кристаллов.
Изобретение также относится к применению соединений общей формулы (I),
Figure imgf000007_0001
где значения X, R1, R2 указаны выше, включая известные соединения, указанные в дисклейме, или их фармацевтически приемлемых аддитивных солей с кислотой или основанием, возможно в кристаллическом виде, для получения фармацевтических композиций, обладающих активностью в отношении Штаммов грибов, возбудителей грибковых инфекций, в том числе к штаммам резистентным к существующим в настоящее время лекарственным препаратам.
Ранее не было известно использование известных соединений, указанных в дисклейме, по указанному назначению.
Изобретение также относится к фармацевтической композиции, пригодной для использования в качестве противогрибкового средства, которая содержит в качестве активного компонента соединение общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемую аддитивную соль с кислотой или основанием в фармакологически эффективном количестве.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Предпочтительно композиция содержит в качестве активного компонента 3,5-динитро-2-тиоцианопиридина или его фармацевтически приемлемую аддитивную соль с кислотой или основанием.
Фармацевтическая композиция также обычно содержит фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательные добавки.
Фармацевтическая композиция может быть выполнена в форме пригодной для энтерального и парентерального введения, включающих ректальное, вагинальное трансбукальные и сублингвальные формы введения, в форме пригодной для инъекции, а также в форме пригодной для местного способа применения. Примерами таких форм могут быть таблетки, капсулы, свечи, инъекции, кремы, мази, пасты, лосьоны, лаки для ногтей, гели, линименты, пластыри, шампуни, эмульсии и др., помещенные в упаковку или в виде формы с длительным высвобождением активного компонента, например, в виде липосомальной формы.
Таким образом, изобретение может относиться к применению соединений настоящего изобретения, возможно в кристаллическом виде, или их фармацевтически приемлемых аддитивных солей с кислотами или основаниями или фармацевтической композиции для приготовления лекарственного средства для лечения и предупреждения грибковых инфекций.
Изобретение также относится к применению соединений настоящего изобретения или их фармацевтически приемлемых аддитивных солей с кислотами или основаниями или фармацевтической композиции в эффективном количестве для лечения и предупреждения грибковых инфекций у людей и животных.
Объектом изобретения является способ лечения или предупреждения грибковой инфекции у человека или животного, включающий введение или нанесение субъекту, который нуждается в указанном лечении, эффективного количества соединения или их фармацевтически приемлемой аддитивной
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) соли с кислотой или основанием или фармацевтической композиции в эффективном количестве.
Термин «эффективное количество» означает количество активного ингредиента, которое при введении пациентам обеспечивает предупреждение, ослабление или устранение симптомов заболеваний, подлежащих профилактике или лечению.
Соединения или их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическая композиция на их основе в виде таблеток, капсул, инъекций, свечей, мазей, кремов и других готовых форм, (см. ниже), могут быть использованы для лечения и предупреждения заболеваний или расстройств у людей и животных, вызванных штаммами возбудителей грибковых инфекций (микозов), в том числе резистентных к существующим в настоящее время лекарственным препаратам.
Введение или нанесение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой соли, фармацевтической композиции или лекарственного средства на их основе при лечении или профилактике людей или животных может осуществляться обычными методами в том числе:
- энтеральной формой введения, например, в форме таблеток, гранул, драже, шариков, порошков, капсул, суспензий, сиропов, эмульсий, ректальных свечей, включая трансбукальные и сублингвальные формы введения и др.;
- парентеральной формой введения, в виде инъекционной формы введения, например, в форме растворов, эмульсий, суспензий, порошков и таблеток для получения растворов и имплантаций, лиофилизированных препаратов, вводимых в организм парентерально (подкожно, внутримышечно, внутривенно, внутриартериально, в различные полости) и др.; в виде неинъекционных форм введения, например, в форме суппозиториев для вагинального введения, аэрозоля, спрея, гелей, суспензий,
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) эмульсий, линиментов, растворов, капель, пластырей, присыпок, порошков, пудр, примочек, и др.
- в виде форм, пригодных для наружного применения например, в форме мазей, кремов, паст, лосьонов, лаков для ногтей и линиментов, помещенных в упаковку или пластырей.
В качестве фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ в составе фармацевтической композиции согласно изобретения могут быть использованы любые фармацевтически приемлемые компоненты, которые совместимы с активным ингредиентом и не наносят вреда пациентам, традиционно используемые для приготовления лекарственных форм, например, наполнители, связующие агенты, гранулирующие агенты, пластифицирующие агенты, такие как камфора, трифенилфосфат или пентанил диизобутират, диизобутилфталат и др., пигменты, солюбилизирующие агенты, средства для скольжения, стабилизаторы, разбавители, адъюванты, консерванты, компоненты буферных систем, растворители, диспергирующие агенты, консерванты, смазывающие агенты, вкусовые добавки, загустители, пищевые красители, эмульгаторы, пленкообразующие вещества, такие как гидроксиэтил или пропилцеллюлоза, гидроксипропилхитозан, пролонгаторы, вещества, способствующие улучшению проникновения лекарственного средства, например, бензиловый спирт, регуляторы пролонгированной доставки и др.
Фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами являются, например, лактоза, инозит, глюкоза, маннит, декстран, циклодекстрин, сорбит, крахмал и его модификации, сахароза, алюмосиликат магния, синтетический алюмосиликат, кристаллическая целлюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия, гидроксипропилированный крахмал, карбоксиметилцеллюлоза кальция, ионообменные смолы, метилцеллюлоза, желатин, гуммиарабик, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, поливиниловый
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) спирт, альгйновая кислота, альгинат натрия, безводная кремниевая кислота, стеарат магния, тальк, карбоксивиниловый полимер, оксид титана, эфир жирной кислоты и сорбита, натрия лаурилсульфат, глицерин, глицериновый эфир жирной кислоты, ланолин, глицерожелатин, полисорбат, макроголь, растительное масло, воск, парафины, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, вода, этанол, полиспирты, полиоксиэтиленгидрированное касторовое масло, хлорид натрия, гидроксид натрия, соляная кислота, двухосновный фосфат натрия, моноосновный фосфат натрия, лимонная кислота, глутаминовая кислота, бензиловый спирт, метил п-оксибензоат, этйл п-оксибензоат и др.
Фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами при получении фармацевтической композиции в форме суппозиториев являются, например, природные или отвержденные масла, например, масло какао, воска, жиры, эфир глицерина и насыщенной жирной кислоты, глицерожелатин, макрогол, полужидкие или жидкие полиолы, триглицериды и др. Основа суппозиториев может включать также поверхностно-активное вещество или стабилизатор.
Солюбилизаторы помогают повысить растворимость труднорастворимых веществ в воде. С их помощью можно регулировать вязкость раствора, выпускать продукцию в иных формах (жидкое состояние взамен твердому), разрабатывать новые рецептуры, повышать качество косметических средств. В качестве солюбилизаторов можно использовать любые приемлемые и совместимые солюбилизаторы обычно используемые в косметической промышленности для шампуней, гелей для душа, пен для ванн для кремов, лосьонов, типа масло/вода, со-эмульгаторов для эмульсий. К ним относятся, например, производные глицеридов, полисорбат 80, этоксилированное гидрогенизированное касторовое масло, пэгилированные масла, такие как касторовое масло или пэгилированное гидрогенизированное касторовое масло и вода или пропиленгликоль.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Композиция для местного применения может также содержать в качестве добавки масла, такие как: растительное масло, масло жожоба, оливковое масло, подсолнечное масло, соевое масло, арахисовое масло, рапсовое масле, миндальное масло, пальмовое масло, кокосовое масло или косточковое пальмовое масло.
Композиция по изобретению может содержать также такие компоненты, которые обеспечат быстрое продолжительное или замедленное высвобождение активного ингредиента после применения пациентами. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например моностеарат алюминия и желатин.
Осуществление изобретения
Соединения по изобретению формулы (I) могут быть получены из соответствующего промежуточного соединения содержащего подвижный атом галогена по известной реакции нуклеофильного замещения, где в качестве нуклеофила выступает ион тиоцианата, и который может быть введен в реакцию в виде его натриевой, калиевой или аммониевой соли (схема 1 ). Реакция проходит в подходящем растворителе, например в низших спиртах, ацетоне, этилметилкетоне. Все радикалы имеют определения как в формуле (I). Перемешивание может увеличить скорость реакции. Реакция может быть легко проведена при температуре в интервале от +10 до -Ы00°С. Полученный продукт может быть очищен путем кристаллизации, например, из нйзших спиртов. При этом возможно получение различных кристаллических модификаций.
Схема 1
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Figure imgf000013_0001
Исходные и промежуточные соединения формулы (II) являются соединениями, которые либо коммерчески доступны, либо могут быть получены обычными широко известными методами описанными в литературе.
Ниже показаны примеры получения соединений по изобретению, которые не ограничивают рамки настоящего изобретения.
Пример 1.
4-Диметиламино-5-нитро-6-тиоцианатопиримидйн (соединение 1)
Figure imgf000013_0002
Раствор 2 г (9 ммоль) 4,6-дихор-5-нитропиримидина (Girard F., Demaison С, Lee M.-G., Agrofoglio L. A. Tetrahedron, 54 (1998) 30, 8745-8952; Scharn Dirk, Germeroth Lothar, Schneider-Mergener Jens, Wenschuh Holger, J. Org. Chem., 66 (2001) N 2, 507-513) в 40 мл диоксана был обработан предварительно приготовленным раствором ацетата диметиламина, содержащего 2,9 мл водного 40% диметиламина (22 ммоль) и Нейтрализованного уксусной кислотой до рН 7. Реакционную массу выдерживают 3 часа при комнатной температуре и медленно разбавляют 200 мл холодной воды. Выпавший осадок 4-диметиламино-5-нитро-6-
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) хлорпиримидина отфильтровывают, промывают водой и используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
Раствор 1,3 г (6,4 ммоль) 4-диметиламино-5-нитро-6-хлорпиримидина в 30 мл этанола был обработан 0,7 г (7 ммоль) тиоцианата калия при комнатной температуре. Реакционную массу кипятят в течении 4 часов, обрабатывают 0,1 г активированного угля и в горячем виде фильтруют. Фильтрат охлаждают и разбавляют 100 мл воды. Выпавший светло желтый осадок 4-диметиламино-5-нитро-6-тиоцианатопиримидина (соединение 1 ) промывают холодной водой и перекристаллизовывают из этанола.
Выход: 78%.
Т пл.: 142-144°С (Е Н)
MS (m/z): 225 (М4)
1 NMR (DMSO-d6): δ 8.37 (Ш, s, Н), 3.48(6Н, s, N(CH3)) ppm
Элементный анализ C7H7N502S:
Calc.: C, 37.33; Н, 3.13; N, 31.09
Found: С, 37.23; H, 3.27; N, 29.97
Пример 2.
4-Метиламино-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин (соединение 2)
Соединение 2 было синтезировано аналогично соединению 1 , но с использованием в качестве амина 40% водного раствора метиламина.
Выход: 64%.
Т пл.: 187-189°С (ЕЮН)
MS (m/z): 211 (М+)
*Н NMR (DMSO-d6): δ 13.03 (IH, broad s, NH), 8.22 (IH, s, H), 3.12 (3H, s, CH3) ppm
Элементный анализ C6H5N502S:
Calc: C, 34.12; H, 2.39; N, 33.16
Found: C, 34.31 ; H, 2.41 ; N, 33.15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 3.
4-Изопропиламино-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин (соединение 3)
Соединение 3 было синтезировано по методу описанному в Demina G.R. et al, PLoS One, 2009, 4(12), 8174 и его спектральные и аналитические характеристики соответствовали указанным в литературе.
Выход: 81%.
Т пл.: 151-153°С (Е Н)
MS (m/z): 239 (М+)
!Н NMR (DMSO-d6): δ 13.16 (IH, broad s, NH), 8.16 (IH, s, H), 4.86 (Ш, m, CH), 1.37 (6H, s, 3CH3) ppm
Элементный анализ C6H5N5O2S:
Calc: С, 40.16; H, 3.79; N, 29.27
Found: С, 40.03; H, 3.88; N, 29.11
Пример 4.
4-Гексагидрометиленимино-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин
(соединение 4)
Соединение 4 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора гексагидрометиленимина.
Выход: 48%.
Т пл.: 107-109°С (Этилацетат)
MS (m/z): 279 (М+)
*Н NMR (DMSO-d6): δ 8.32 (IH, s, H), 3,85 (4H, m, N(CH2)2), 1.95 (4H, m, 2CH2), 1.57 (4H, m, CH2CH2) ppm
Элементный анализ CnHi3N502S:
Calc: C, 47.30; H, 4.69; N, 25.07
Found: C, 47.18; H, 4.53; N, 24.92
Пример 5.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 4-М-азокан-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин (соединение 5) Соединение 5 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора азокана.
Выход: 76%.
Т пл.: 95-98°С (метанол)
MS (m/z): 293 (М+)
'H NMR (DMSO-d6): δ 8.27 (1Η, s, H), 3.91 (2H, broad s, N(CH2)2), 1.18- 1.82 (ЮН, broad m, 5CH2) ppm
Элементный анализ Ci2Hi5N502S:
Calc: C, 49.13; H, 5.15; N, 23.87
Found: C, 49.01 ; H, 5.26; N, 23.94
Пример 6.
4-(3 ,5-Диметилпиперидин- 1 -ил)-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин
(соединение 6)
Соединение 6 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора 3,5- диметилпиперидина.
Выход: 67%.
Т пл.: 123-125°С (метанол)
MS (m/z): 293 (М+)
'Н NMR (DMSO-d6): δ 8.34 (Ш, s, Н), 3.97 и 3.02 (4Н, 2 broad m,
N(CH2)2), 1.97 (2Н, m, 2 СН), 1, 21 (2Н, m, СН2), 0.88 (6Н, s, 2СН3) ppm
Элементный анализ Ci2H]5N502S:
Calc: С, 49.13; Н, 5.15; N, 23.87
Found: С, 49.13; Н, 5.23; N, 23.97
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 7.
4-(2-Метйлпиперидин- 1 -ил)-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин
(соединение 6)
Соединение 6 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора 2-метилпиперидина,
Выход: 54%.
Т пл. : 158-160°С (Этанол)
MS (m/z): 293 (М+)
]Н NMR (DMSO-d6): δ 8.21 (IH, s, H), 3,65 и 1,70 (9H, two broad m, CH(CH2)4), 1.33 (3H, s, CH3) ppm
Элементный анализ C11H13N5O2S:
Calc: С, 47.30; H, 4.69; N, 25.07
Found: С, 47.1 1 ; H, 4.54; N, 25.12
Пример 8.
4-Диэтиламино-5-нитро-6-тиоцианатопирймйдйн (соединение 8)
Соединение 8 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина готового 40% водного раствора диэтиламина.
Выход: 74%.
Т пл.: 1 14-116°С (метанол)
MS (m/z): 253 (М+)
JH NMR (DMSO-d6): δ 8.31 (IH, s, H), 3,46 (4H, m, 2CH2), 1.01 (6H, m, 2CH3) ppm
Элементный анализ C9H11N5O2S:
Calc: С, 42.68; H, 4.38; N, 27.65
Found: С, 42.60; H, 4.33; N, 27.74
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 9.
4-Н-БензилаМйно-5-нитро-6-тиоцианатопирймидин (соединение 9) Соединение 9 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора бензиламина.
Выход: 43%.
Т пл.: 144-146°С (изопропанол)
MS (m/z): 287 (М+)
*Н NMR (DMSO-d6): δ 8.38 (1Н, s, H), 7.38-7.25 (5H, m, Ph), 4.41 (2H, s, CH2) ppm
Элементный анализ C12H9N5O2S:
Calc: С, 50.17; H, 3.16; N, 24.38
Found: С, 50.29; H, 3.24; N, 24.29
Пример 10.
4-(М-бензил- -метиламино)-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин
(соединение 10)
Соединение 10 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора N- метил-1М-бензиламина.
Выход: 46%.
Т пл.: 127-129°С (этанол)
MS (m/z): 301 (М+)
*Н NMR (DMSO-d6): δ 8.31 (1H, s, H), 7.4-7.20 (5H, m, Ph), 4.34(2H, s, CH2). 3.15 (3H, s, CH3) ppm
Элементный анализ C13H11N5O2S:
Calc: С, 51.82; H, 3.68; N, 23.24
Found: С, 51.76; H, 3.57; N, 23.19
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 11.
4- -метилциклогексиламино-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин
(соединение 11)
Соединение 11 было синтезировано аналогично соединению 1, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора Ν-метилциклогексиламина.
Выход: 34%.
Т пл.: 112-114°С (этанол)
MS (m/z): 293 (М+)
Ή NMR (DMSO-d6): δ 8.32 (Ш, s, CH), 3,64 (1H, m, CH), 3,12 (3H, s, CH3), 2.0-1.0 (10H, broad m, 5CH2) ppm
Элементный анализ Ci2H15N502S:
Calc: C, 49.13; H, 5.15; N, 23.87
Found: C, 49.17; H, 5.08; N, 23.84
Пример 12.
Figure imgf000019_0001
Раствор 3,8 г (16,8 ммоль) 4,6-дихор-2-метил-5-нитропиримидина (Hurst Derek Т., J. Heterocycl. Chem., 32, 1995, 697-699) в 40 мл диоксана был обработан предварительно приготовленным раствором ацетата диметиламина, содержащего 5,1 мл водного 40% диметиламина (42 ммоль) и нейтрализованного уксусной кислотой до рН 7, при температуре реакционной массы не выше 15°С. Реакционную массу выдерживают 3 часа при комнатной температуре и медленно разбавляют 200 мл холодной воды. Выпавший осадок 4-диметиламино-2-метил-5-нитро-6-хлорпиримидина
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) отфильтровывают, промывают водой и используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
Раствор 2,7 г (12,5 ммоль) 4-диметйламино-2-метил-5-нитро-6- хлорпиримйдийа в 30 мл этанола был обработан 1,3 г (13 ммоль) тиоцианата калия при комнатной температуре. Реакционную массу кипятят в течение 4 часов, обрабатывают 0,1 г активированного угля и в горячем виде фильтруют. Фильтрат охлаждают и разбавляют 100 мл воды. Выпавший светло желтый осадок 4-диметйламино-2-метйл-5-нитро-6- тиоцйанатопирймидина (соединение 12) промывают холодной водой и перекристаллизовывают из этанола.
Выход: 86%.
Т пл.: 159-161°С (этанол)
MS (m/z): 239 (М+)
Ή NMR (DMSO-d6): δ 3.48 (6H, s, 2СН3), 2.36 (ЗН, s, СН3) ppm
Элементный анализ C8H9N5O2S:
Calc: С, 40.16; Н, 3.79; N, 29.27
Found: С, 40.26; Н, 3.88; N, 29.34
Пример 13.
4-Амино-2-метил-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин (соединение 13) (Соединение 13 было синтезировано аналогично соединению 12, но с использованием в качестве амина готового 25% водного раствора аммиака.
Выход: 39%.
Т пл . : 209-212°С (этанол)
MS (m/z): 211 (М+)
]Н NMR (DMSO-d6): δ 8.19 (2Н, broad s, NH2), 2.43 (ЗН, s, CH3) ppm Элементный анализ C6H5N502S:
Calc: С, 34.12; H, 2.39; N 33.16
Found: С, 34.25; H, 2.47; N, 33.04
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 14.
4-Метиламино-2-метил-5-нитро-6-тйоцианатопиримидин
(соединение 14)
Соединение 14 было сйнтезйровано аналогично соединению 12, но с использованием в качестве амина готового 40% водного раствора метиламина.
Выход: 76%.
Т пл.: 200-202°С (метанол)
MS (m/z): 225 (М+)
]Н NMR (DMSO-d6): δ 3.12 (ЗН, s, СН3), 2.35(ЗН, s, CH3) ppm
Элементный анализ C6H5N5O2S:
Calc: С, 37.33; Н, 3.13; N, 31.09
Found: С, 37.21; Н, 3.27; N, 31.22
Пример 15.
4-Пирролйдино-2-метил-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин (соединение
15)
Соединение 15 было синтезировано аналогично соединению 12, но с использованием в качестве амина приготовленного водного раствора пирролидина.
Выход: 68%.
Т пл.: 142-144°С (метанол)
MS (m/z): 265 (М+)
1Н NMR (DMSO-d6): δ 3.50 (4Н, m, N(CH2)2), 2.41 (ЗН, s, СН3), 1.91 (4H, m, CH2CH2) ppm
Элементный анализ ^οΗπΝ5028:
Calc: С, 45.27; Н, 4.18; N, 26.40
Found: С, 45.29; Н, 4.34; N, 26.43
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 16.
4-Дйэтиламино-2-метйл^5-нитро-6-тйоцйанатопиримидин
(соединение 16)
Соединение 16 было синтезировано аналогично соединению 12, но с использованием в качестве амина готового 40% водного раствора дйэтйламина.
Выход: 53%.
Т пл.: 69-70°С (метанол)
MS (m/z): 267 (М+)
'Η KMR (DMSO-d6): δ 3.44 (4H, m, N(CH2)2), 2.56 (3H, s, CH3), 1.10 (6H, m, 2СН3) ppm
Элементный анализ CioHnN502S:
Calc: С, 44.93; Н, 4.90; N, 26.20
Found: С, 45.08; Н, 4.93; N, 26.32
Пример 17.
Figure imgf000022_0001
Раствор 4,0 г (19,2 ммоль) 4,6-дихор-2-метил-5-нитропиримидина (Hurst Derek Т., J. Heterocycl. Chem., 32, 1995, 697-699) в 40 мл безводного этанола был обработан 20 мл предварительно приготовленного раствора этилата натрия (из 0,4 г (19,2 ммоль) металлического натрия и 20 мл безводного этанола), при температуре реакционной массы не выше 0°С. После прибавления всего объема метилата натрия реакционную массу выдерживают 2 часа при комнатной температуре и медленно разбавляют 200
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) мл холодной воды. Выпавший осадок 4-этокси-2-метил-5-нитро-6- хлорпиримидина отфильтровывают, промывают водой и перекристаллизовывают из бензола.
Раствор 3,2 г (14,7 ммоль) 4-этокси-2-метил-5-нитро-6- хлорпиримидина в 30 мл этанола был обработан 1,5 г (15 ммоль) тиоцйаната калия при комнатной температуре. Реакционную массу кипятят в течение 4 часов, обрабатывают 0,1 г активированного угля и в горячем виде фильтруют. Фильтрат Охлаждают и разбавляют 100 мл воды. Выпавший белый осадок 4-этокси-2-метил-5-нитро-6-тйоцианатопиримидина (соединение 17) промывают холодной водой и перекристаллизовывают из этанола.
Выход: 42%.
Т пл.: 60-62°С (этанол)
MS (m/z): 240 (М+)
*Н NMR (DMSO-d6): δ 4.64 (2Н, q, СН2), 2.66 (ЗН, s, СН3), 1.43 (ЗН, t, СН3) ррт
Элементный анализ C8H8N4O3S:
Calc: С, 40.00; Н, 3.36; N, 23.32
Found: С, 39.93; Н, 3.46; N, 23.31
Пример 18.
4-Пропокси-2-метил-5-нитро-6-тиоцианатопиримидин (соединение 18) Соединение 18 было синтезировано аналогично соединению 17, но с использованием на всех этапах н-пропилового спирта взамен этанола.
Выход: 26%.
Т пл.: 50-52°С (метанол)
MS (m/z): 254 (М+)
'Η NMR (DMSO-d6): δ 4.32 (2H, t, ОСН2), 2.58 (ЗН, s, СН3), 1.77 (2Н, т, СН2), 1.17 (3H, t, CH3) ррт
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 6
22
Элементный анализ C9H10N4O3S:
Calc: С, 42.51; Н, 3.96; N, 23.03
Found: С, 42.45; Н, 3.89; N, 23.09
Пример 19.
3,5-Динитро-2-тиоцианатопиридин (соединение 19)
Figure imgf000024_0001
Соединение 19 было получено по известной методике Talik Z., Plazek Е. Roczniki Chemii (1960), 34, 165-75 в соответствии со следующей процедурой: раствор 2,0 г (9,8 ммоль) коммерчески доступного 3,5-динитро- 2-хлорпиридина в смеси 20 мл этанола и 20 мл ацетона был обработан 1 , 1 г (1 1 ммоль) тиоцианата калия при комнатной температуре. Реакционную массу кипятят в течение 8 часов, обрабатывают 0, 1 г активированного угля и в горячем виде фильтруют. Фильтрат охлаждают и разбавляют 100 мл воды.
Выход: 55%.
Т пл.: 160-62°С (этанол)
MS (m/z): 226 (М+)
JH NMR (DMSO-d6): δ 9.42 and 9.15 (two 1H, two s, 2CH) ppm
Элементный анализ C8H8N4O3S:
Calc: С, 31.86; H, 0.89; N, 24.77
Found: С, 31.71; H, 1.01 ; N, 24.70
Пример 20.
5-Метил-3-нитро-2-тиоцианатопиридин (соединение 20)
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Соединение 20 было синтезировано аналогично соединению 19 исходя из коммерчески доступного 5-метил-3-нитро-2-хлорпиридина.
Выход: 53%.
Т пл.: 135-139°С (метанол)
MS (m/z): 195 (Μ")
lH NMR (DMSO-d6): δ 8.37 and 8.08 (two Ш, two s, 2CH), 2.43 (3H, s, CH3) ppm
Элементный анализ C7H5N3O2S:
Calc: С, 43.07; H, 2.58; N, 21.53
Found: С, 43.21 ; H, 2.52; N, 21.70
Пример 21.
6-Метокси-3-нитро-2-тиоцианатопиридин (соединение 21)
Соединение 21 было синтезировано аналогично соединению 19 исходя из коммерчески доступного 6-метокси-3-нитро-2-хлорпиридина.
Выход: 42%.
Т пл.: 121-123°С (метанол)
MS (m/z): 211 (М+)
Ή NMR (DMSO-d6): δ 8.41 (Ш, d, CH), 6.89 (1H, d, CH), 3.91 (3H, s, CH3) ppm
Элементный анализ C7H5N3O3S:
Calc: С, 39.81; H, 2.39; N, 19.90
Found: С, 39.68; H, 2.47; N, 19.92
Описание противогрибковой активности соединений
по изобретению.
1. Активность соединений общей формулы (I) в отношении патогенных грибов и дрожжей.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Полученные соединения общей формулы (I) показали заметную активность в отношении патогенных грибов и дрожжей, а так же в отношении клинически изолированных штаммов грибов, в том числе, чувствительных к флуконазолу, а также в отношении резистентных к противогрибковым препаратам культур.
Активность испытуемых соединений определяли методом двукратных серийных разведений (микрометодом) в жидкой питательной среде с выявлением минимальной подавляющей концентрации (МПК) в отношении различных лабораторных и клинических штаммов грибов [National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1997. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts. Approved standard M27-A. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, PA, USA.; National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2002. Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Conidium-Forming Filamentous Fungi: Approved Standard M38-A. NCCLS, Wayne, PA, USA].
Для приготовления инокулята использовали суспензию клеток дрожжей и суспензию спор грибов в стерильном физиологическом растворе (0,85 % NaCl). Плотность суспензий контролировали спектрофотометрически. Для получения инокулята исходные суспензии дрожжей и спор грибов разводили стандартной средой (RPMI 1640). Конечная концентрация клеток в опыте составляла (1-5)х 10 клеток/мл для дрожжей и (0,4-5)х 104 клеток/мл для грибов. Количество клеток в инокуляте проверяли путем высева на агар Сабуро и подсчета выросших колоний. Тестируемые вещества растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO) с начальной концентрацией 1600 мкг/мл и в том же растворителе готовили серии разведений от 1600 до 3,13 мкг/мл. Для постановки эксперимента полученные растворы разводили в 50 раз в стандартной используемой для опыта среде RPMI 1640. Все растворы тестируемых препаратов готовили непосредственно перед использованием.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Эксперименты проводили в стерильных 96-луночных плоскодонных планшетах в среде RPMI 1640 в лунках, содержащих 200 мкл питательной среды. Конечная концентрация препаратов в опыте после внесения микробных инокулятов составляла от 16 до 0,03 мкг/мл при концентрации растворителя (DMSO) 1%. Каждый препарат в эксперименте присутствовал не менее чем в трех повторах. В панель эксперимента в качестве контроля были включены лунки, не содержащие тестируемых препаратов.
Планшеты инкубировали При 35°С (Candida albicans и грибы), или 25 °С (Cryptococcus humicolus) без встряхивания. Оценку роста культур проводили визуально, применяя 4-х-ступенчатую шкалу: 0 = оптическая прозрачность, полное отсутствие роста, 1 = слабый рост (25% от уровня контроля), 2 = существенное подавление роста (50% от уровня контроля), 3 = слабое подавление роста (75% от уровня контроля), 4 = отсутствие подавления роста. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) противогрибковых препаратов считывали при 24 час культивирования для Candida albicans и Cryptococcus humicolus и 48 час культивирования для Aspergillus niger и Fusarium oxysporum.
МПК определяли как минимальную концентрацию препарата, полностью предотвращающую рост тест-организма (шкала роста = 0).
В результате проведенного эксперимента изучена способность соединений общей формулы (I) производных группы 2-нитроарилтиоцианатов к подавлению роста патогенных грибов и дрожжей и выявлены значения их МПК (табл.1).
Таблица 1 - Активность соединений общей формулы (I) в отношении лабораторных штаммов патогенных грибов и дрожжей. Минимальная подавляющая концентрация указана в мкг/мл.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Номер Candida albicans Candida Aspergilus niger Fusarium соединения АТСС 14053 humicolus АТСС АТСС 16404 oxysporum (пример N°) 9949 VKM F-140
1 4 4 1 2
2 4 4 8 2
3 2 8 2 2
4 16 16 1 4
5 >16 8 2 8
6 16 16 2 4
7 >16 8 4 8
8 2 8 2 4
9 2 4 8 2
10 2 0,5 2 4
1 1 4 0,5 2 4
12 4 8 2 4
13 4 16 2 2
14 4 4 1 1
15 >16 >16 2 >16
16 4 16 4 8
17 2 4 1 2
18 4 2 4 4
19 1 0,5 2 1
Амфотерйцин В 0,5 0,25 1 2
2. Активность соединений общей формулы (I) в отношении клинически изолированных резистентных штаммов дрожжей, лабораторных штаммов грибов.
Для определения активности соединений общей формулы (I) в отношении клинически изолированных мультирезистентных штаммов патогенных грибов и дрожжей использовались тест-культуры грибов из
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) ΡΚΠΓ - диморфных (в дрожжевой фазе, Y): Candida albicans, штамм 1244, С. albicans, штамм 1242, С. tropicalis, штамм 531, С. krusei, штамм 526, С. parapsilosis, штамм 897, С. guilliermondii, штамм 594, С. glabrata, штамм 1188; нитчатых (F): Aspergillus fumigatus, штамм 1248, A. niger, штамм 1249, A. flavus, штамм 1247. Все тест-культуры являются клиническими изолятами от соответствующих больных, изоляты патогенов сохраняются в Российской коллекции патогенных грибов при НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина СПб МАПО.
Питательные среды: агаризованная и жйдкая питательная среда Сабуро. Растворители и суспензионные среды; вода дистиллированная, диметилсульфоксид (ДМСО), раствор буферный фосфатный. Определение противогрибковой активности указанных выше субстанций проводили макрометодом (ΓΦΧΙ, вып. 2, 2002) при последовательных двукратных разведениях. Взвеси дрожжевых организмов рода Candida приготавливали из двухсуточных культур, выросших при 37°С на агаре Сабуро в пробирках. Культуры смывали раствором буферным фосфатным, густоту взвесей доводили до 10 Ед по стандарту мутности. Приготовленную взвесь тест- культуры разводили в 100 раз тем же раствором буферным фосфатным и в каждую пробирку рядов разведений испытуемых веществ в жидкой среде Сабуро вносили по 0,1 мл (2 капли) рабочей взвеси суспензии клеток. Культуры нитчатых грибов выращивали в течение 2-3 дней при 37°С на агаре Сабуро в пробирках, затем клеточную массу собирали с поверхности агара, помещали в стерильную пробирку и растирали, постепенно добавляя раствор буферный фосфатный до густоты рабочих взвесей 5 Ед по стандарту мутности. Количество вносимой рабочей взвеси в каждую пробирку ряда также было 0,1 мл.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) В каждом опыте ставили контроли:
1. культуры тест-организма (1 мл питательной среды + ОД мл рабочей взвеси микромицета; здесь отсутствовала испытуемая субстанция);
2. питательной среды (1 мл среды без культуры и без субстанции);
3. испытуемой субстанции (0,9 мл питательной среды + 0,1 мл исходного разведения испытуемой субстанции, то есть в 1 мл содержалось 100 мкг данной субстанции).
Все ряды подготовленных в пробирках разведений с тест-культурами и контрольные выдерживали при температуре 37°С до появления роста гриба в первом контроле. Минимальной фунгистатической концентрацией антимикотика принято считать разведение в той последней пробирке, в которой визуально не наблюдают рост микромицета. Например, рост отсутствует в 1-9-й пробирках и в последней из них разведение будет 214* 104 (2140000) раз, когда концентрация субстанции снижалась до 0,39 мкг/мл, в оставшихся пяти пробирках рост культуры был почти (или равно) такой же, как в первом контроле. Тогда указанная концентрация 0,39 мкг/мл и есть фунгистатический титр (или концентрация).
При необходимости определения цидного действия антимикотика делают высев штрихами микробиологической петлёй на секторы агаризованной среды Сабуро в чашках Петри из каждой пробирки, в которой визуально не отмечен рост культуры, и из первой контрольной пробирки. После этого чашки с секторальными высевами оставляют в термостате при необходимой температуре на срок до появления роста колоний в контрольном секторе. Если высевы оказались также позитивными, например, из 7-9-й пробирок, то это означает, что фунгицидное действие проявляется при концентрации антимикотика 3,14 мкг/мл.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Таблица 2. - Активность соединений общей формулы I в отношении клинических штаммов грибов рода Aspergillus. Минимальная подавляющая концентрация указана в мкг/мл.
Figure imgf000031_0001
Таблица 3 - Активность соединений общей формулы I в отношении клинических штаммов грибов рода Candida. Минимальная подавляющая концентрация указана в мкг/мл.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Штаммы Соединение 3 Соединение 14 Соединение 19 грибов рода
МПК МФК МПК МФК МПК
Candida МФК
С. albicans 1,56 3,13 0,39 0,78 0,78 0,78
YU29/13
С. albicans 3,13 3,13 3,13 6,25 1,56 1,56
Yl 353/1277
C.albicans 6,25 12,5 1,56 3,13 0,78 0,78
Y 12741248
C.glabrata 12,5 12,5 6,25 6,25 1,56 1,56
Y1188/1062
C.glabrata 12,5 25 3,13 6,25 1,56 6,25
Yl 352/373
C.glabrata 12,5 25 6,25 6,25 1,56 3,13
Y1311/1452
C.krusei 1,56 3,13 0,78 1,56 0,78 1,56
Y1198
C.krusei 1,56 3,13 0,78 1,56 1,56 1,56
Y1319/2046
C.krusei 0,78 1,56 0,78 1,56 1,56 1,56
Y1200
Ctropicalis 0,39 0,78 0,39 0,78 0,2 0,78
Yl 351/17
C.parapsilosis 12,5 25 12,5 12,5 3,13 3,13
Y1321
В соответствии с приведенными данными об активности соединений общей формулы (I), наиболее активным в отношении патогенных грибов и дрожжей, а так же в отношении клинически изолированных штаммов грибов, в том числе, чувствительных к флуконазолу, а также в отношении резистентных к противогрибковым препаратам культур является 3,5-динитро-2-тиоцианатопиридин (соединение 19).
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Ниже приводятся примеры получения фармацевтических композиций в виде различных форм, пригодных Для использования в качестве лекарственного средства.
Пример А. Приготовление таблеток, содержащих 50-500 мг активного ингредиента. Активный ингредиент смешивают с 1600 мг крахмала, 1600 мг измельченной лактозы, 400 мг талька и спрессовывают в брусок. Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы
размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 560 мг каждая.
Пример Б. Капсулы содержащие 50-500 мг активного ингредиента согласно изобретению получают тщательным смешиванием активного соединения с порошком лактозы в соотношении 2: 1. Полученную порошкоообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.
Пример В. Инъекционные композиции для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций могут быть приготовлены смешиванием 50-500 мг активного соединения с 300 мг хлорбутанола, 2 мл пропил енгликоля и 100 мл инъекционной воды. Полученный раствор фильтруют и помещают по 1 мл в ампулы, которые запаивают и стерилизуют в автоклаве.
Пример Г. Свечи могут быть изготовлены следующим образом: активное вещество расплавляют в небольшом количестве свечной основе. Получившийся расплав тщательно перемешивают с необходимым количеством основы разогретой до (35-80)°С. Полученную смесь
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) гомогенизируют. Готовую смесь в растопленном состоянии используют для изготовления свечей.
Пример Д. Приготовление фармацевтической композиции в форме мази или крема.
Мазь и крем могут быть изготовлены следующим образом: 0,5-3% вес. от общей массы активного вещества расплавляют в небольшом количестве мазевой, кремовой или свечной основе. Получившийся расплав тщательно перемешивают с необходимым количеством основы разогретой о (35-80)°С, добавляя необходимое количество разогретой до 50 °С дистиллированную воду. Полученную смесь гомогенизируют. Готовую смесь в растопленном состоянии разливают в тубы.
Пример Е. Фармацевтическая композиция в виде геля.
Соединение формулы I -3% масс, лимонная кислота-* 5%, гидрокстиэтилцеллюлоза-4%, глицерин 2,5%, гидроксид натрия-0,9%, вода до 100%.
Растворяют лимонную кислоту и гидроксид натрия, добавляют глицерин, ацетон и активное вещество. При энергичном перемешивании добавляют гидроксиэтилцеллюлозу и затем выдерживают для разбухания. Получают гель, который далее может быть использован в качестве противогрибкового средства.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединения общей формулы (I)
Figure imgf000035_0001
где X = N или C-R3
R1 означает водород, насыщенный или ненасыщенный линейный алкокси радикал, имеющий 2-5 атомов углерода; циклоалкилокси радикал, имеющий до 6 атомов углерода; насыщенный линейный алкилмеркапто радикал, имеющий 1-3 атомов углерода; амино радикал, имеющий 1-10 атомов углерода, выбранный из насыщенного или не насыщенного линейного моно- или диалкиламино радикала, или циклоалкиламино радикала, циклического амино радикала, при этом каждая из циклических групп может быть замещена 1-2 метальными группами; или бензиламиногруппу;
R означает водород, насыщенный или ненасыщенный, линейный алкилрадикал, имеющий 1-5 атомов углерода, или циклический алифатический радикал, имеющий до 6 атомов углерода, трифторметил, стирил или метилмеркаптогруппу;
R Означает трифторметил, формил, ацетил, нитро, бензоил, цианогруппу или алкоксикарбонильный заместитель, имеющий 1-3 атомов углерода в алкоксигруппе, возможно в кристаллическом виде, или их фармацевтически приемлемые аддитивные соли с кислотами или основаниями,возможно в кристаллическом виде,
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) за исключением следующих соединений 4-изопропил-амино-5-нитро-6- тиоцианопиримидина, 4-азокано-5-нитро-6-тиоцианопиримидина, 2-метилтио- 4<-метокси-5-нитро-6-тйоциано-пиримидина, 4-метокси-5-нитро-6-тиоциано- пйримйдина, 2-тиоцианато-З-нйтропирйдина, 4-тиоцианато-5- нйтропиримидина, 2-этилмеркапто-4-тиоцианато-5-нитропиримидина, 3,5- динйтр0-2-тйоцианопирйдйна, 4-тйОцйано-5-нитро-6-(диметиламино)- пиримидина и 4-тиоциано-5-нитро- 6-(3,5^дйметил-Ьпйперидинил)- пиримидина.
2. Применение соединений общей формулы (I):
Figure imgf000036_0001
где X = N или C-R3
R1 означает водород, насыщенный или ненасыщенный линейный алкокси радикал, имеющий 1-5 атомов углерода; циклоалкилокси радикал, имеющий до 6 атомов углерода; насыщенный линейный алкилмеркапто радикал, имеющий 1-3 атомов углерода; амино радикал, имеющий 1-10 атомов углерода, выбранный из насыщенного или не насыщенного линейного моно- или диалкиламино радикала, или циклоалкиламино радикала, циклического амино радикала, при этом каждая из циклических групп может быть замещена 1-2 метальными группами; или бензиламиногруппу;
R означает водород, насыщенный или ненасыщенный, линейный алкилрадикал, имеющий 1-5 атомов углерода, или циклический
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) алифатический радикал, имеющий до 6 атомов углерода, трифторметил, стирил или метилмеркаптогруппу;
R3 означает трифторметил, формил, ацетил, нитро, бензоил, цианогруппу или аЛкоксикарбонильный заместитель, имеющий 1-3 атомов углерода в алкоксйгруппе, возможно в кристаллическом виде, или их фармацевтически приемлемых аддитивных солей с кислотами или основаниями,
для получения фармацевтических композиций, обладающих активностью в отношении штаммов грибов, возбудителей грибковых инфекций.
3. Фармацевтическая композиция, обладающая Противогрибковой активностью, содержащая в качестве активного компонента соединение общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемую аддитивную соль с кислотой или основанием как определено в п.2 в фармакологически эффективном количестве, за исключением следующих соединений, 4- азокано-5-нитро-б-тиоцианопиримидина, 4-метокси-5-нитро-6-тиоциано- пиримидина.
4. Фармацевтическая композиция по п.З, где соединение формулы (I) представляет собой 3,5-динитро-2-тиоцианопиридин или его фармацевтически приемлемую аддитивную соль с кислотой или основанием в фармакологически эффективном количестве.
5. Фармацевтическая композиция по п.З или п.4 в форме пригодной для энтерального, парентерального, ректального, вагинального введения, включая трансбукальные и сублингвальные формы введения, в форме пригодной для инъекции, в форме для местного способа применения.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
6. Фармацевтическая композиция по п.5 в форме таблетки, гранул, драже, порошка, присыпок, пудры, суспензии, сиропа, раствора, капель, капсулы, свечи, суппозитория, инъекции, мази, крема, пасты, лосьона, аэрозоля, спрея, лака для ногтей, геля, пластыря, шампуня, эмульсии или линимента помещенной в упаковку.
7. Применение соединений общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемых аддитивных солей с кислотами или основаниями как определено в п.2 или фармацевтической композиции по п.5 для приготовления лекарственных средств для лечения и предупреждения грибковых инфекций.
8. Применение соединений общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемых аддитивных солей с кислотами или основаниями как определено в п.2 или фармацевтической композиции по п.5 в эффективном количестве для лечения и предупреждения грибковой инфекции.
9. Способ лечения или предупреждения грибковой инфекции у человека или животного, включающий введение или нанесение субъекту, который нуждается в указанном лечении, эффективного количества соединений общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемых аддитивных солей с кислотами или основаниями как определено в п.2 или фармацевтической композиции по п.5 в эффективном количестве.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
PCT/RU2013/000156 2012-03-01 2013-02-27 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение WO2013129973A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA201391552A EA201391552A1 (ru) 2012-03-01 2013-02-27 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012107786 2012-03-01
RU2012107786/04A RU2475481C1 (ru) 2012-03-01 2012-03-01 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение
RU2012157036/04A RU2504541C1 (ru) 2012-12-26 2012-12-26 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция для местного применения
RU2012157036 2012-12-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013129973A1 true WO2013129973A1 (ru) 2013-09-06

Family

ID=49083049

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2013/000156 WO2013129973A1 (ru) 2012-03-01 2013-02-27 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение

Country Status (2)

Country Link
EA (1) EA201391552A1 (ru)
WO (1) WO2013129973A1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070270433A1 (en) * 2006-05-18 2007-11-22 Brinkman John A Thiazolo-pyrimidine/pyridine urea derivatives
RU2312104C1 (ru) * 2006-04-27 2007-12-10 Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева (РХТУ им. Д.И. Менделеева) 4-метокси-5-нитро-6-тиоцианопиримидин, обладающий фунгицидной активностью, и способ его получения

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2312104C1 (ru) * 2006-04-27 2007-12-10 Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева (РХТУ им. Д.И. Менделеева) 4-метокси-5-нитро-6-тиоцианопиримидин, обладающий фунгицидной активностью, и способ его получения
US20070270433A1 (en) * 2006-05-18 2007-11-22 Brinkman John A Thiazolo-pyrimidine/pyridine urea derivatives

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE CA accession no. 39:52895 *
DATABASE CA accession no. 4:38140 *
DATABASE REGISTRY 2012, accession no. 136585-72-2 *
DATABASE S A accession no. 3:7082 *
DEMINA, GALINA R. ET AL.: "Finding of the low molecular weight inhibitors of resuscitation promoting factor enzymatic and resuscitation activity.", PLOS ONE, vol. 4, no. 12, 2009, pages 1 - 8, Retrieved from the Internet <URL:http:www.plosone.org> *
HENSEKE, GUNTER ET AL.: "Heterocyclic compounds. IV. The reactivity of methyl groups in the quinoxaline system.", CHEMISCHE BERICHTE, vol. 91, 1958, pages 605 - 611 *
LACK, NATHAN A. ET AL.: "Targeting the Binding Function 3 (BF3) Site of the Human Androgen Receptor through Virtual Screening", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 54, no. 24, 2011, pages 8563 - 8573 *
TAKAHASHI, TORIZO ET AL.: "Pyridine derivatives containing sulfur. XXX. Synthesis of 2-(alkylmercapto)pyridines, pyridothiazoles, and related compounds.", YAKUGAKU ZASSHI, vol. 70, 1950, pages 187 - 90 *
TAKAHASHI, TORIZO ET AL.: "Pyrimidine derivatives. . Synthesis of thiazolo[5,4-d]-pyrimidines and related compounds.", CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, 1958, pages 334 - 338, XP001005473 *
TALIK, Z. ET AL.: "Untersuchungen uber 2-Chloro-3,5-dinitropyridine. . Austauschreaktionen des Halogenatoms.", BULLETINE DE L'ACADEMIE POLONAISE DES SCIENCES, vol. VIII, no. 5, 1960, pages 219 - 222 *
ULRICH, H.: "Product class 18: Benzothiazoles and related compounds.", SCIENCE OF SYNTHESIS, vol. 11, 2002, pages 835 - 912, XP008145976 *

Also Published As

Publication number Publication date
EA201391552A1 (ru) 2014-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2978069C (en) Crystalline form of nicotinamide riboside
CN104884434B (zh) 用于治疗病毒感染和另外的疾病的酰氨基嘧啶衍生物
JP2019527717A (ja) アミノピリミジンｓｓａｏ阻害剤
JP2023512666A (ja) Ｎ４－ヒドロキシシチジンおよび誘導体ならびにそれらに関連する抗ウイルス用途
CA2954751A1 (en) Indoles for use in influenza virus infection
CN104193761A (zh) 多环化合物及其使用方法
US20200048262A1 (en) Pyrrolopyrimidine itk inhibitors
DE10216145A1 (de) Verwendung von Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase zur Behandlung von Glaukom
WO2012046030A2 (en) Phosphodiesterase inhibitors
EP2826780B1 (en) Thieno[2,3-d]pyridazine derivatives and therapeutic use thereof for protein kinase inhibition
CN111902408B (zh) 杂芳基取代的吡唑化合物及其药物用途
DE60307875T2 (de) Imidazopyrin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende pharmazeutische zusamensetzungen
CN112047993A (zh) 一种α-葡萄糖苷酶抑制剂及其用途
EP4015508A1 (en) Methods for preparing substituted 5,6-dihydro-6-phenylbenzo[f]isoquinolin-2-amine
JP6586416B2 (ja) 新規大環状アミジノ尿素誘導体、その調製方法及びキチナーゼ阻害剤としてのその使用
DE60129174T2 (de) Neue pleuromutilinderivate
DE4342024A1 (de) Kombinationspräparate, enthaltend ein Chinoxalin und ein Nukleosid
AU2016269359B2 (en) Sodium salt of uric acid transporter inhibitor and crystalline form thereof
RU2475481C1 (ru) 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение
WO2013129973A1 (ru) 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция и их применение
CA3229401A1 (en) 6-aminopyrazolopyrimidine compounds and medical use thereof
CN110950845B (zh) 甲酰乙酰胺唑类衍生物及其用途
CN110981888B (zh) N-芳基二硫吡咯酮脲类和氨基酯类衍生物及其制备和应用
RU2487132C1 (ru) Производные циклических 5-нитропиридин-2-ил-тиоалкенил-4-дитиокарбаматов, обладающие противогрибковой активностью, и их применение
US20070179144A1 (en) 5(Z)-5-(6-Quinoxalinylmethylidene)-2-[(2,6-dichlorophenyl)amino]-1,3-thiazol-4(5H)-one

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13755218

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201391552

Country of ref document: EA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 13755218

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1