WO2013105696A1 - 체외 혈관성 조직 제작방법 - Google Patents

체외 혈관성 조직 제작방법 Download PDF

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    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing vascular tissues in vitro, and more particularly, to induce angiogenesis using vascular cells in vitro to induce angiogenesis by using vascular cells to study diseases of vascular tissues in vitro and develop a treatment method.
  • the present invention relates to an extracorporeal vascular tissue manufacturing method capable of obtaining a tissue.
  • Angiogenesis refers to the process by which new blood vessels are formed from existing blood vessels, and include tumor growth and metastasis, diabetic retinopathy, psoriasis, chronic inflammation, and ulcers. and various diseases such as ulcers (Carmeliet et al., Nature, 407, p249, 2000).
  • neovascularization such as cancer occurs, just suppressing such neovascularization can effectively inhibit tumor growth and metastasis.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • VEGFR vascular endothelial growth factor receptor
  • bFGF basic fibroblast growth factor
  • TGF- ⁇ , - ⁇ Conversion growth factor alpha and beta
  • EGF epidermal growth factor
  • PDGF platelet-derived growth factor
  • anticancer drugs When such anticancer drugs are administered to patients, the types and amounts of effective anticancer drugs differ from patient to patient, which makes it difficult to rely on doctor's experience or data known to academia.
  • the anticancer agent destroys not only cancer cells but also normal cells, it is impossible to test various types or dosages of the anticancer drugs because the patient is limited to the fourth dose at most.
  • the anticancer agent should be tested directly on the cancer cells of the patient, but at present, there is no method to solve this problem.
  • Cancer treatment by radiation utilizes the characteristics of normal cells that recover faster than cancer cells by irradiating normal tissues and cancer cells.
  • Radiation for treatment uses X-rays, gamma rays, electron beams, neutron beams, and proton beams of 1 million volts or more. In this case, the amount of radiation of the type of radiation to be irradiated varies according to the patient or the part of the body to which the radiation is irradiated.
  • the location of cancer cells can be determined by CT or MRI, but the exact amount of radiation depends on experience. Therefore, a situation in which cancer cells cannot be destroyed due to a lack of radiation or a normal dose due to an excessive dose of radiation can cause fatal damage to a patient.
  • An object of the present invention devised to solve the above-mentioned problems, in vitro vascular tissue by inducing neovascularization using vascular cells of the tissue in vitro so that it can be used to study diseases of vascular tissues in vitro and develop treatment methods To provide an extracorporeal vascular tissue manufacturing method can be obtained.
  • the present invention for achieving the above object, the step of supplying a hydrogel mixed vascular tissue cells to the tissue preparation container; Immersing the collecting tip to which the vascular cells are attached to the hydrogel; Curing the hydrogel; And it is an extracorporeal vascular tissue manufacturing method comprising the step of supplying a cell culture solution to the upper side of the hydrogel.
  • the vascular cells are characterized in that the collection tip is immersed in the cell culture medium mixed with blood vessel cells in the container for vascular cells and attached to the collection tip of the cell collecting member. Therefore, since a large amount of blood vessel cells can be prepared in advance, the time required for the production of extracorporeal vascular tissue can be shortened.
  • the container for vascular cells preferably has a slope so that the vascular cells are collected around the collection tip, it is more preferable that the collection groove is formed in the center of the slope is inserted into the collection tip.
  • the collecting tip is made of a porous material, characterized in that the collagen coating on the outer surface.
  • vascular tissue cells characterized in that any one or more selected from cancer cells, brain cells, hepatocytes.
  • the hydrogel has a cell binding domain and is characterized by biodegradability at the same time. Through this, it is possible to provide the vascular tissue with an environment similar to the body of the human body.
  • the hydrogel may be a natural hydrogel or a synthetic hydrogel.
  • the weight ratio of the vascular cells and the vascular tissue cells is characterized in that 1 to 10. That is, by allowing the vascular tissue cells to have a greater amount than the vascular cells, it is easy to grasp the generation of blood vessels by the vascular endothelial growth factor (VEGF) provided from the vascular tissue cells.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • cancer cells, hepatocytes, nerve cells and the like to generate neovascularization using vascular cells in vitro to produce cancer tissues, liver tissues, brain tissues and the like in large quantities simultaneously in vitro Can be.
  • extracorporeal vascular tissues obtained through the present invention can be used to study diseases related to vascular tissues in vitro and develop treatments, and to find a treatment suitable for a patient in a short time.
  • the present invention can be applied to determine the type and amount of radiation suitable for removing cancer cells by producing a large amount of cancer tissues in vitro.
  • the present invention can reduce the side effects due to the misuse of radiation can significantly improve the cancer treatment rate.
  • FIG. 1 is a process chart of vascular cell adhesion work in the extracorporeal vascular tissue manufacturing method according to the present invention.
  • Figure 2 is a process chart for curing by culturing the blood cells prepared in Figure 1 of the extracorporeal vascular tissue preparation method according to the invention in a hydrogel with the vascular tissue cells.
  • Figure 3 is a view of the drug experiment using the extracorporeal vascular tissue produced by the extracorporeal vascular tissue manufacturing method according to the present invention.
  • FIG. 4 is a perspective view of a cell collecting member.
  • vascular cells 32 are collected using this property.
  • the cell culture solution 30 and the vascular cells 32 are mixed and supplied to the container 10 for vascular cells. That is, the cell culture solution 30 may be injected into the vascular cells 32, or the blood vessel cells 32 may be supplied to the cell culture solution 30 and mixed. Then, the cell collecting member 20 is mounted in the container 10 for blood vessel cells.
  • a known cell culture solution may be used. For example, DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) or ⁇ -MEM ( ⁇ -Minimum Essential Medium) may be used.
  • the vascular cell container 10 has a shape in which the vascular cells 32 easily gather around the collecting tip 22 of the cell collecting member 20. That is, the bottom portion of the container 10 for blood vessel cells has an inclined portion 14 formed to have a low center. Therefore, it is collected at the center of the inclined portion 14 through the slope of the inclined portion 14.
  • a collection groove 12 is formed at the center of the inclined portion 14 to facilitate the contact of the blood vessel cells 32 to the collection tip 22.
  • the collection groove 12 may be inserted into the collection tip 22, the gap is formed around the vascular cell 32 is introduced into the gap. Therefore, in the state similar to the figure of the left side of FIG. 1, it will be in the state like the center figure.
  • the collection tip 22 may be made of a porous material, or may be coated with collagen.
  • the cell collecting member 20 thus obtained may be left in the container 10 for vascular cells or may be left in a state in which the cell culture solution is excluded in a separate container 40.
  • extracorporeal vascular tissue may be manufactured using the cell collecting member 20 to which the vascular cells 32 are attached.
  • the hydrogel 60 and the vascular tissue cells 62 are supplied to the tissue preparation container 50.
  • the hydrogel 60 and the vascular tissue cells 12 are well mixed as shown in the left side of FIG.
  • the tissue forming container 50 may be made of glass or plastic of a transparent material to observe the inside, there is no limitation on the shape.
  • the collection tip 22 is immersed in the hydrogel 60.
  • the collecting tip 22 may be immersed in the hydrogel 60 in a state coupled to the cell collecting member 20, as shown in FIG. 2, and spaced apart from the cell collecting member 20. Only 22 may be dipped into the hydrogel 60.
  • the weight ratio of the vascular cells 18 and the vascular tissue cells 12 is to be 1 ⁇ 10. That is, by allowing the vascular tissue cells to have a greater amount than the vascular cells, it is easy to grasp the generation of blood vessels by the vascular endothelial growth factor (VEGF) provided from the vascular tissue cells.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • the vascular cells 32 of the collection tip 22 is located in close proximity to the vascular tissue cells 62 in the hydrogel (60).
  • the vascular tissue cells 62 may be selected from cancer cells, brain cells, and hepatocytes.
  • the vascular tissue cells 62 may be taken from a patient. For example, when using cancer cells, approximately 20,000 to 40,000 cells may be supplied. do.
  • the vascular tissue cells can be cultured in a separate cell culture fluid, it is also possible to supply to the tissue preparation container 50 after removing the cell culture fluid.
  • a known cell culture solution may be used.
  • DMEM Dense-Coulfate's Medium
  • ⁇ -MEM ⁇ -Minimum Essential Medium
  • the hydrogel 60 has a cell binding domain and is required to be biodegradable at the same time. Therefore, the hydrogel 60 may be a natural hydrogel or a synthetic hydrogel. Collagen may be used as the natural hydrogel, and commercially available cugel (QGel TM, QGel SA, Switzerland) may be used as the synthetic hydrogel.
  • QGel TM, QGel SA, Switzerland commercially available cugel
  • an environment having the same moisture content as in the body may be provided to the vascular tissue cells 62 and the blood cells 32.
  • Curing of the hydrogel 60 may be performed by leaving the tissue preparation container 50 in a condition of about 35 to 40 ° C. and 3 to 10 wt% of carbon dioxide for 20 to 40 minutes.
  • the cell culture liquid 64 is injected above.
  • a known cell culture solution may be used.
  • DMEM Dense-Coulfate's Medium
  • ⁇ -MEM ⁇ -Minimum Essential Medium
  • neovascularization 66 is formed from the vascular cells 32 toward the vascular tissue cells 62 through the signaling material for neovascularization generated from the vascular breakfast cells 62, and the vascular cells ( 18) and the vascular tissue cells 12 can be obtained in vitro to connect the vascular tissue by the neovascularization 20.
  • the formation of the neovascularization 66 is formed as shown in Figure 2, gathered around the collection tip 22.
  • the appearance of the neovascularization 66 can be seen clearly, it is easy to observe the destruction of the neovascularization 66 during the chemical test.
  • vascular tissue In order to perform various tests such as drug tests on the obtained vascular tissue, a plurality of vascular tissues are simultaneously manufactured on the test panel 70 as shown in FIG. 3. That is, the tissue preparation container 50 is mounted on the test panel 70, and vascular tissue is formed in each tissue preparation container 50 through the above-described process. Thus, a large amount of vascular tissue can be produced in vitro.
  • vascular cell 40 container for mounting
  • tissue forming container 60 hydrogel
  • vascular tissue cell 66 neovascularization
  • test panel 80 chemical injection

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Abstract

본 발명은 혈관성 조직의 질병을 체외에서 연구하고 치료법을 개발하는데 사용될 수 있도록 체외에서 해당조직을 혈관세포를 이용하여 신생혈관형성을 유도하여 체외 혈관성 조직을 얻을 수 있는 체외 혈관성 조직 제작방법에 관한 것으로, 조직제작용 컨테이너에 혈관성 조직세포가 혼합된 하이드로젤을 공급하는 단계; 혈관세포가 부착된 수집팁을 상기 하이드로젤에 침지되는 단계; 상기 수집팁이 침지된 상태로 상기 하이드로젤을 경화시키는 단계; 및 상기 하이드로젤의 상측으로 세포배양액을 공급하는 단계를 포함한다.

Description

체외 혈관성 조직 제작방법
본 발명은 체외 혈관성 조직 제작방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 혈관성 조직의 질병을 체외에서 연구하고 치료법을 개발하는데 사용될 수 있도록 체외에서 해당조직을 혈관세포를 이용하여 신생혈관형성을 유도하여 체외 혈관성 조직을 얻을 수 있는 체외 혈관성 조직 제작방법에 관한 것이다.
최근 인구의 노령화, 흡연율 증가, 식생활의 변화, 운동 부족 등으로 암의 발병이 증가하고 있고, 이를 치료하기 위한 항암제의 개발이 활발히 진행되고 있다. 지금까지 개발된 항암제들은 대부분 그 효과와 함께 정상세포 파괴에 따른 독성, 항암제에 대한 내성 발생 및 재발 등의 문제점을 갖고 있어 새로운 기전을 바탕으로 한 항암제가 요구되어지고 있다. 따라서, 암의 발병원인과 진행과정의 원인을 밝혀 보다 근본적인 해결책을 제시하려는 노력이 진행되고 왔고, 1971년 J. Folkman에 의해 종양의 성장 및 전이를 막기 위하여 신생혈관생성억제제(anti-angiogenic agent)가 새로운 대안으로 제시 되었다[Folkman 등, N. Engl. J. Med., 285, p1182, 1971].
신생혈관생성(Angiogenesis)이란 기존의 혈관에서부터 새로운 혈관이 생성되는 과정을 의미하며, 종양의 성장과 전이(metastasis), 당뇨병성 망막증(diabetic retinopathy), 건선(psoriasis), 만성 염증(chronicinflammation), 궤양(ulcer)과 같은 다양한 질환의 원인이 되고 있다[Carmeliet 등, Nature, 407, p249, 2000]. 특히, 암과 같은 과도한 신생혈관생성이 일어나는 경우는, 이러한 신생혈관생성을 억제하는 것만으로도 종양의 성장과 전이를 효과적으로 억제할 수 있다.
신생혈관생성 억제를 통하여 항암제를 개발하기 위한 타깃으로 혈관 내피세포 성장인자(VEGF), 혈관 내피세포성장인자 수용체(VEGFR : vascular endothelial growth factor receptor), 염기성 섬유아세포 성장인자(bFGF :basic fibroblast growth factor), 전환 성장인자 알파 및 베타(TGF-α, -β), 표피 성장인자(EGF : epidermal growth factor), 혈소판 유래 성장인자(PDGF : platelet-derived growth factor)등을 들 수 있다.
이러한 항암제를 환자에게 투여할 경우, 환자에 따라 효과있는 항암제의 종류와 양이 서로 달라서 의사의 경험 또는 학계에 알려진 데이터에 의존하기에는 무리가 있다. 또한, 항암제는 암세포 뿐만 아니라 정상세포도 파괴시키므로, 환자에게 투여회수가 많아야 4차이내로 한정되므로, 항암제의 종류 또는 투여량을 다양하게 시험하는 것은 불가능하다.
따라서, 환자에게 적합한 항암제를 찾아내기 위해서는, 그 환자가 가지고 있는 암세포에 직접 항암제를 시험해야 하지만, 현재로서는 이를 해결할 수 있는 방법이 제시된 바 없다.
그러므로, 이러한 불확실하고, 성공확률이 낮은 항암제의 선택은 결국 수명이 얼마 남지 않은 암환자에게는 목숨을 담보로 하는 확률게임에 지나지 않는다. 그러나, 암환자는 이러한 불확실한 치료법을 신뢰하고 의사의 선택을 따를 수 밖에 없으며, 환자 또는 그 가족이 부담해야 하는 비용도 상당함에도 불구하고 치료결과는 낙관할 수 없는 것이 현실이다.
또한, 간, 뇌 등에서 발생되는 혈관성 조직의 질병의 경우에도 그 환자에게 적합한 치료법의 선택에 있어서, 암치료와 마찬가지로 이미 알려진 수많은 치료법 중에서 의사의 경험 또는 학계에 알려진 데이터에 의존할 수 밖에 없다.
또, 최근 암치료에 널리 사용되고 있는 방사선 조사방법에서도, 상술한 것과 마찬가지의 문제점이 발생할 수 있다. 방사선에 의한 암치료는, 정상조직과 암세포에 방사선을 조사하여 암세포에 비해 빠르게 회복하는 정상세포의 특성을 이용한 것으로, 치료를 위한 방사선에는 100만 볼트 이상의 X선, 감마선, 전자선, 중성자선, 양성자선, 중입자선 등이 사용되며, 이 때 환자마다 또는 방사선이 조사되는 신체부위에 따라 조사되는 방사선의 종류의 방사선량이 다르게 조사되어야 한다.
즉, 암세포의 위치는 CT 또는 MRI 등으로 파악할 수 있지만, 정확한 방사선 조사량은 경험에 의존할 수 밖에 없는 현실이다. 따라서, 방사선 조사량의 부족으로 암세포를 파괴하지 못하거나, 방사선 조사량의 과다로 정상세포를 파괴하여 환자에게 치명적인 손상을 가하는 상황이 발생할 수 있다.
상술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 본 발명의 목적은, 혈관성 조직의 질병을 체외에서 연구하고 치료법을 개발하는데 사용될 수 있도록 체외에서 해당조직을 혈관세포를 이용하여 신생혈관형성을 유도하여 체외 혈관성 조직을 얻을 수 있는 체외 혈관성 조직 제작방법을 제공하는 데에 있다.
상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 조직제작용 컨테이너에 혈관성 조직세포가 혼합된 하이드로젤을 공급하는 단계; 혈관세포가 부착된 수집팁을 상기 하이드로젤에 침지되는 단계; 상기 하이드로젤을 경화시키는 단계; 및 상기 하이드로젤의 상측으로 세포배양액을 공급하는 단계를 포함하는 체외 혈관성 조직 제작방법이다.
상기 혈관세포는, 혈관세포용 컨테이너에 혈관세포가 혼합된 세포배양액 내에 상기 수집팁을 침지시켜 상기 세포수집부재의 수집팁에 부착되는 것을 특징으로 한다. 따라서, 혈관세포를 미리 대량으로 준비할 수 있으므로, 체외 혈관성 조직 제작에 소요되는 시간을 단축할 수 있다.
여기서, 상기 혈관세포용 컨테이너는 혈관세포가 상기 수집팁의 주위로 모이도록 경사부를 가지는 것지는 것이 바람직하며, 상기 경사부의 중심에는 상기 수집팁이 삽입되는 수집홈이 형성되는 것은 더욱 바람직하다. 상기 수집팁은 다공성 재질로 이루어지거나, 외면에 콜라겐 코팅이 되는 것을 특징으로 한다.
또, 상기 혈관성 조직세포는, 암세포, 뇌세포, 간세포 중에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 한다.
또, 상기 하이드로젤은 세포결합역(cell binding domain)을 가지고, 동시에 생분해성인 것을 특징으로 한다. 이를 통해, 혈관성 조직에 인체의 체내와 유사한 환경을 제공할 수 있다. 그리고, 상기 하이드로젤은 천연하이드로젤 또는 합성하이드로젤일 수 있다.
또, 상기 혈관세포와 상기 혈관성 조직세포의 중량비율은 1~10인 것을 특징으로 한다. 즉, 혈관성 조직세포가 혈관세포보다 더 많은 양을 가지도록 함으로써, 혈관성 조직세포로부터 제공되는 혈관 내피세포 성장인자(VEGF)에 의한 혈관의 생성을 파악하기 용이해진다.
본 발명에 따른 체외 혈관성 조직 제작방법을 통하여, 암세포, 간세포, 신경세포 등을 체외에서 혈관세포를 이용하여 신생혈관을 생성시키는 것에 의해 암조직, 간조직, 뇌조직 등을 체외에서 동시에 대량으로 제작할 수 있다.
따라서, 본 발명을 통해 얻어진 체외 혈관성 조직에 의해, 혈관성 조직에 관련된 질병을 체외에서 연구하고 치료법을 개발하는데 사용될 수 있으며, 환자에게 적합한 치료법을 빠른 시간 내에 찾을 수 있다.
그러므로, 현존하는 항암제 또는 치료법에 의한 혈관성 조직에 관련된 암, 간질환, 뇌졸증, 치매 등과 같은 질병의 완치율을 높일 수 있다.
특히, 방사선에 의한 종양치료 또는 암치료에 있어서도, 본 발명을 적용하여, 체외에서 암조직을 대량으로 제작하여 해당 암세포를 제거하는데 적합한 방사선의 종류와 방사선량을 결정할 수 있다. 이 결과, 방사선에 의한 암치료에 있어서도 방사선의 오용에 따른 부작용을 줄여서 획기적으로 암치료율을 향상시킬 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 체외 혈관성 조직 제작방법 중 혈관세포 부착작업의 공정도이다.
도 2는 본 발명에 따른 체외 혈관성 조직 제작방법 중 도 1에 의해 준비된 혈액세포를 혈관성 조직세포와 함께 하이드로젤에서 경화시켜 배양하는 공정도이다.
도 3은 본 발명에 따른 체외 혈관성 조직 제작방법으로 제작된 체외 혈관성 조직을 이용하여 약물실험을 하는 모습의 도면이다.
도 4는 세포수집부재의 사시도이다.
이하, 본 발명을 바람직한 실시예를 첨부한 도면을 참조하여 설명하기로 한다. 하기의 각 도면의 구성 요소들에 참조 부호를 부가함에 있어서, 동일한 구성 요소들에 한해서는 비록 다른 도면상에 표시되더라도 가능한 한 동일한 부호를 가지도록 하며, 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 공지 기능 및 구성에 대한 상세한 설명은 생략한다.
도 1은 혈관세포(32)를 준비하기 위해 세포수집부재(20)의 수집팁(22)에 혈관세포(32)를 부착하는 공정을 도시한다. 상기 혈관세포(32)는 외력을 가하지 않으면, 상기 세포배양액(30) 내에서 가라앉게 된다. 본 발명에서는 이러한 성질을 이용하여 상기 혈관세포(32)를 수집한다.
혈관세포용 컨테이너(10)에 세포배양액(30)과 혈관세포(32)가 혼합하여 공급한다. 즉, 혈관세포(32)에 세포배양액(30)을 주입하거나, 반대로 세포배양액(30)에 혈관세포(32)를 공급하여 섞는 것도 가능하다. 그리고, 상기 혈관세포용 컨테이너(10) 내에 상기 세포수집부재(20)를 장착한다. 상기 세포배양액으로는 공지의 세포배양액을 사용할 수 있으며, 예를 들어, DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 또는 α-MEM(α-Minimum Essential Medium)를 사용할 수 있다.
반대로, 상기 세포수집부재(20)를 상기 혈관세포용 컨테이너(10)에 장착한 후에, 혈관세포(32)가 혼합된 세포배양액(30)을 주입하는 것도 가능하다.
상기 혈관세포용 컨테이너(10)는 상기 혈관세포(32)가 상기 세포수집부재(20)의 수집팁(22) 주위로 모이기 용이한 형상을 가진다. 즉, 상기 혈관세포용 컨테이너(10)의 바닥부는 중심이 낮도록 형성된 경사부(14)를 가진다. 따라서, 상기 경사부(14)의 사면을 통해 상기 경사부(14)의 중심에 모이게 된다.
또한, 상기 수집팁(22)에 상기 혈관세포(32)의 접촉을 용이하게 하도록 상기 경사부(14)의 중심에 수집홈(12)이 형성된다. 상기 수집홈(12)은 상기 수집팁(22)이 삽입될 수 있으며, 그 주위로 간극이 형성되어 상기 간극 내로 상기 혈관세포(32)가 유입된다. 따라서, 도 1의 좌측의 도면과 같은 상태에서, 가운데 도면과 같은 상태로 된다. 특히, 상기 수집팁(22)에 상기 혈관세포(32)의 부착성을 향상시키기 위해 상기 수집팁(22)을 다공성 재질로 하거나, 콜라겐 코팅을 할 수 있다.
이렇게 얻어진 세포수집부재(20)는 상기 혈관세포용 컨테이너(10)에 그대로 두거나, 별도의 거치용 컨테이너(40)에 세포배양액이 배제된 상태로 둘 수 있다.
다음으로 도 2에 도시된 바와 같이, 혈관세포(32)가 부착된 세포수집부재(20)를 이용하여 체외 혈관성 조직을 제작할 수 있다.
먼저, 조직제작용 컨테이너(50)에 하이드로젤(60) 및 혈관성 조직세포(62)를 공급한다. 상기 하이드로젤(60)과 상기 혈관성 조직세포(12)는 도 2의 좌측도면과 같이 잘 혼합되어 있는 상태이다. 상기 조직제작용 컨테이너(50)는 내부를 관찰할 수 있도록 투명재질의 유리 또는 플라스틱으로 이루어질 수 있으며, 그 형상의 제한은 없다.
그리고, 상기 하이드로젤(60) 내에 수집팁(22)을 침지시킨다. 상기 수집팁(22)은 도 2에 도시된 바와 같이 상기 세포수집부재(20)에 결합된 상태로 상기 하이드로젤(60) 내에 침지할 수 있으며, 상기 세포수집부재(20)로부터 이격되어 수집팁(22)만이 상기 하이드로젤(60) 내부로 침지되는 것도 가능하다. 이 때, 상기 혈관세포(18)와 상기 혈관성 조직세포(12)의 중량비율은 1~10이 되도록 한다. 즉, 혈관성 조직세포가 혈관세포보다 더 많은 양을 가지도록 함으로써, 혈관성 조직세포로부터 제공되는 혈관 내피세포 성장인자(VEGF)에 의한 혈관의 생성을 파악하기 용이해진다.
따라서, 상기 수집팁(22)의 혈관세포(32)는 상기 하이드로젤(60) 내의 혈관성 조직세포(62)에 근접하여 위치하게 된다.
상기 혈관성 조직세포(62)로는 암세포, 뇌세포, 간세포 중에서 선택할 수 있으며, 상기 혈관성 조직세포(62)는 환자로부터 체취할 수 있으며, 예를 들어 암세포를 사용하는 경우 대략적으로 2~4만개를 공급한다.
상기 혈관성 조직세포는 별도의 세포배양액에서 배양할 수 잇으며, 세포배양액을 제거한 후에 상기 조직제작용 컨테이너(50)에 공급하는 것도 가능하다. 상기 세포배양액으로는 공지의 세포배양액을 사용할 수 있으며, 예를 들어, DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 또는 α-MEM(α-Minimum Essential Medium)를 사용할 수 있다.
상기 하이드로젤(60)은 세포결합역(cell binding domain)을 가지고, 동시에 생분해성일 것이 요구된다. 따라서, 이러한 하이드로젤(60)로는 천연하이드젤 또는 합성하이드로젤을 사용할 수 있다. 상기 천연하이드로젤로는 콜라겐 등을 사용할 수 있으며, 합성하이드로젤로는 상용의 큐겔(QGel™, QGel SA, Switzerland)을 사용할 수 있다. 이러한 하이드로젤(60)을 이용하여 신체내와 같은 함수율을 가지는 환경을 혈관성 조직세포(62) 및 혈액세포(32)에 제공할 수 있다.
상기 하이드로젤(60)의 경화(curing)는, 대략 35~40℃ 및 이산화탄소 3~10중량%의 조건에서 상기 조직제작용 컨테이너(50)를 20~40분간 두는 것으로 이루어 질 수 있다.
그리고, 그 상측으로 세포배양액(64)을 주입한다. 상기 세포배양액(64)으로는 공지의 세포배양액을 사용할 수 있으며, 예를 들어, DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 또는 α-MEM(α-Minimum Essential Medium)를 사용할 수 있다.
따라서, 상기 혈관성 조식세포(62)로부터 발생되는 신생혈관생성을 위한 신호물질을 통해 상기 혈관세포(32)로부터 상기 혈관성 조직세포(62)를 향해 신생혈관(66)이 형성되며, 상기 혈관세포(18)와 상기 혈관성 조직세포(12)가 상기 신생혈관(20)에 의해 연결되는 혈관성 조직을 체외에서 얻을 수 있게 된다. 이 때 신생혈관(66)의 형성모습이 도 2에 도시된 바와 같이, 상기 수집팁(22)을 중심으로 모이는 형상을 이루게 된다. 이 결과, 상기 신생혈관(66)의 모습이 뚜렷하게 보일 수 있으며, 약액시험시 상기 신생혈관(66)의 파괴모습을 쉽게 관찰할 수 있다.
이렇게 얻어지는 혈관성 조직에 대하여 약물검사 등 다양한 시험을 하기 위하여, 도 3에 도시된 바와 같이 복수의 혈관성 조직을 시험패널(70) 상에서 동시에 제작한다. 즉, 상기 시험패널(70)에 상기 조직제작용 컨테이너(50)를 장착하고, 상술한 과정을 통해 각각의 조직제작용 컨테이너(50)에서 혈관성 조직이 형성되도록 한다. 따라서, 체외에서 혈관성 조직을 다량으로 제작가능하게 된다.
그리고, 각각의 조직제작용 컨테이너(50)에 약액주입기(80)를 통해 공지의 약액을 종류 또는 투여액을 달리하면서, 상기 신생혈관(66)의 파괴 또는 상기 혈관성 조직세포(62)의 파괴를 관찰한다. 이러한 관찰결과를 통해, 환자에게 적합한 치료법 또는 약액을 결정할 수 있게 된다.
특히, 상기 약액주입기(80)에 의한 약액의 공급을 용이하게 하기 위하여, 다양한 방법을 시도할 수 있으며, 그 일예로 도 4에 도시된 바와 같이 상기 세포수집부재(20)의 상부에는 오목부(24)를 형성하고, 상기 오목부(24)에는 관통홀(26)을 하나 이상 형성시키는 것이 바람직하다. 이를 통해, 상기 오목부(24)에 상기 약액주입기(80)에 의해 약액을 공급하면, 상기 관통홀(26)을 통해 아래로 낙하하여 체외 혈관성 조직에 직접 공급될 수 있다.
상기와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
<부호의 설명>
10: 혈관세포용 컨테이너 12: 수집홈
14: 경사부 20: 세포수집부재
22: 수집팁 24: 오목부
26: 관통홀 30,64: 세포배양액
32: 혈관세포 40: 거치용 컨테이너
50: 조직제작용 컨테이너 60: 하이드로젤
52: 혈관성 조직세포 66: 신생혈관
70: 시험패널 80: 약액주입기

Claims (9)

  1. 조직제작용 컨테이너에 혈관성 조직세포가 혼합된 하이드로젤을 공급하는 단계;
    혈관세포가 부착된 수집팁을 상기 하이드로젤에 침지되는 단계;
    상기 수집팁이 침지된 상태로 상기 하이드로젤을 경화시키는 단계; 및
    상기 하이드로젤의 상측으로 세포배양액을 공급하는 단계를 포함하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 혈관세포는, 혈관세포용 컨테이너에 혈관세포가 혼합된 세포배양액 내에 상기 수집팁을 침지시켜 상기 세포수집부재의 수집팁에 부착되는 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 혈관세포용 컨테이너는 혈관세포가 상기 수집팁의 주위로 모이도록 경사부를 가지는 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 경사부의 중심에는 상기 수집팁이 삽입되는 수집홈이 형성되는 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 수집팁은 다공성 재질로 이루어지거나, 외면에 콜라겐 코팅이 되는 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 혈관성 조직세포는, 암세포, 뇌세포, 간세포 중에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 하이드로젤은 세포결합역(cell binding domain)을 가지고, 동시에 생분해성인 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 혈관세포와 상기 혈관성 조직세포의 중량비율은 1~10인 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
  9. 제1항에 있어서, 상기 하이드로젤은 천연하이드로젤 또는 합성하이드로젤인 것을 특징으로 하는 체외 혈관성 조직 제작방법.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100921487B1 (ko) * 2007-07-11 2009-10-13 고려대학교 산학협력단 ３차원 패터닝을 이용한 조직재생용 하이드로젤 제조방법

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CARMELIET ET AL., NATURE, vol. 407, 2000, pages 249
FOLKMAN ET AL., N. ENGL. J. MED., vol. 285, 1971, pages 1182
MOON ET AL.: "Biomimetic hydrogels with pro-angiogenic properties", BIOMATERIALS, vol. 31, 24 February 2010 (2010-02-24), pages 3840 - 3847, XP026947557 *
SAIK ET AL.: "Biomimetic hydrogels with immobilized EphrinAl for therapeutic angiogenesis", BIOMACROMOLECULES, vol. 12, 6 June 2011 (2011-06-06), pages 2715 - 2722, XP055081312 *
See also references of EP2738249A4 *
TSANG ET AL.: "Three-dimensional tissue fabrication", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, vol. 56, 19 July 2004 (2004-07-19), pages 1635 - 1647, XP004550361 *

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