WO2013081371A1 - 인간 ｂ 세포에서 생산된 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 활성을 가지는 결합 분자 - Google Patents

인간 ｂ 세포에서 생산된 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 활성을 가지는 결합 분자 Download PDF

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장신재
정준호
이계숙
김효리
김민수
윤애린
전재원
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(주)셀트리온
서울대학교산학협력단
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    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present invention relates to human monoclonal antibodies having neutralizing activity against influenza A virus selected from the blood of volunteers vaccinated with the flu shot.
  • Influenza virus is a disease caused by infection of the respiratory tract, which is common in winter, and is highly infectious and spreads easily to all age groups, especially those who are vulnerable (Treanor J, 2004, N Engl J). Med. 350 (3): 218-20).
  • Enveloped virus belonging to the Orthomyxoviridae an influenza virus whose genome contains eight-segment negative-sense and single-strand RNA (ribonucleic acid) Influenza A virus is divided into several subtypes according to major surface proteins HA (hemaggutinin) and NA (neuraminidase). To date, 16 HA and 9 NA are known (Cheung TK and Poon LL 2007, Ann NY Acad Sci. 1102: 1-25).
  • Influenza viruses can infect birds, pigs and humans depending on their type, and due to their genome consisting of RNA fragments, strains of viruses continue to develop due to combinations and mutations of various genes (Treanor J, 2004. N Engl J Med). 350 (3): 218-20). Because of this persistent variation, it is difficult to obtain permanent immunity, so the most effective way to prevent it now is to inoculate a vaccine against influenza virus, which is expected to spread every year, to form a yearly immunity for a particular type.
  • Vaccines against influenza viruses are usually produced using eggs, which is an inefficient method that requires a lot of time. Therefore, problems arise in producing a sufficient amount of vaccine in a short time almost every year.
  • a vaccine production method using cell culture is actively progressed in various pharmaceutical companies (GSK, Baxter).
  • GSK, Baxter a vaccine production method using cell culture
  • rapid pandemic development of pandemic infection of influenza virus is causing a very difficult time.
  • Antiviral drugs are also not 100% reliable because of the emergence of mutation resistant viruses.
  • the blood products of recovered patients have been used to treat patients infected with various viruses and have been used to treat pandemic flu infections.
  • pandemic flu infections For example, when patients infected with Spanish influenza virus had symptoms of pneumonia, blood products from patients recovered after the flu infection were used for treatment (Luke et al ., 2006. A nnals of internal medicine.145 : 599).
  • hyper immune globulin IgIv is purified from human plasma and used to treat patients infected with various viruses, but the above-produced products are not safe for potential infectious agents and are inefficient for mass production.
  • Non-Patent Document 1 Reed L.J. and Muench H (1938). A simple method of estimating fifty percent endpoints. The American Journal of Hygiene, 27 (493-497)
  • An object of the present invention is to provide a binding molecule that specifically binds to influenza A virus and has neutralizing activity, and a method for preventing, treating, and detecting infection of influenza A virus using the binding molecule.
  • an antibody exhibiting neutralizing activity against influenza A virus is provided.
  • the influenza A virus is an H3 subtype virus of influenza A, and an embodiment of the present invention.
  • the antibody is obtained by Kabat numbering system, which is L (24) -L (25) -L (26) -L (27) -L (27A) -L (27B) -L ( Light chain CDR1 region represented by 27C) -L (28) -L (29) -L (30) -L (31) -L (32) -L (33) -L (34); Light chain CDR2 region represented by L (50) -L (51) -L (52) -L (53) -L (54) -L (55) -L (56); L (89) -L (90) -L (91) -L (92) -L (93) -L (94) -L (95) -L (95A) -L (95B) -L (95C
  • the antibody may include a light chain variable region comprising one of SEQ ID NOs: 85 to 98 and SEQ ID NOs: 99 to 112; Including an heavy chain variable portion comprising one, according to an embodiment of the present invention, the antibody comprises an amino acid sequence of any one group selected from the following group:
  • the first group is SEQ ID NO: A light chain variable portion comprising 85 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 99;
  • the second group comprises a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 86 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 100;
  • the third group comprises a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 87 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 101;
  • the fourth group comprises a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 88 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 102;
  • the fifth group includes a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 89 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO
  • a vector comprising a gene encoding the antibody is provided.
  • a cell line comprising the vector, and according to an embodiment of the present invention, the cell line is F2N, HEK293, CHOK1, DG44, DXB11, CHO-S, BHK, Sp2 / 0, or NS, but is not limited thereto.
  • the cell line is F2N, HEK293, CHOK1, DG44, DXB11, CHO-S, BHK, Sp2 / 0, or NS, but is not limited thereto.
  • PBMC peripheral blood
  • H3 subtype virus of influenza A separating mononuclear cells
  • Preparing an antibody library using the separated PBMC Selecting an antibody that binds to the H3 subtype virus of influenza A in the antibody library; And cloning the selected antibody into a vector.
  • the antibody may include a light chain variable region comprising one of SEQ ID NOs: 85 to 98 and SEQ ID NOs: 99 to 112; Including an heavy chain variable portion comprising one, according to an embodiment of the present invention, the antibody comprises an amino acid sequence of any one group selected from the following group:
  • the first group is SEQ ID NO: A light chain variable portion comprising 85 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 99;
  • the second group comprises a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 86 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 100;
  • the third group comprises a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 87 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 101;
  • the fourth group comprises a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 88 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 102;
  • the fifth group includes a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 89 and a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO
  • the selected antibody is a HA protein of H3 subtype virus of influenza A.
  • the PBMC comprises at least one of B cells, T cells, macrophages, dendritic cells and NK cells, according to one embodiment of the invention, the mammal is Rats, dogs, pigs, cattle, horses, rabbits, llamas, ferrets or humans.
  • a drug is further attached to the antibody.
  • a composition for treating H3 subtype virus of influenza A comprising the above antibody, and according to one embodiment of the present invention, according to one embodiment of the present invention, the therapeutic The composition is administered from 0.001 to 100mg / kg, according to one embodiment of the present invention, the therapeutic composition is for rats, dogs, pigs, cattle, horses, rabbits, llama, ferret or human, one embodiment of the present invention According to an example, the therapeutic composition is in an oral dosage form, external preparation, pre-filled syringe solution, suppository, sterile injectable solution or lyophilized form.
  • the therapeutic composition is administered 0.001 ⁇ 100mg / kg, according to an embodiment of the present invention, the mammal is a rat, dog, pig, cow, horse, rabbit, llama, ferret or human,
  • the therapeutic composition is in an oral dosage form, an external preparation, a pre-filled syringe solution, a suppository, a sterile injectable solution or a lyophilized form.
  • a method for providing information on the presence of the H3 subtype virus of influenza A comprising the step of reacting the antibody with the desired sample.
  • a diagnostic kit of H3 subtype virus of influenza A comprising the above antibody.
  • the binding molecule of the present invention has binding and neutralizing activity against influenza A virus, it is useful for preventing and treating diseases caused by the influenza A virus, and is also useful for a method of diagnosing the influenza A virus for infection.
  • H3 hemagglutinin hereinafter referred to as "HA"
  • pac gene which encodes a Puromycin N-acetyl-tranferase (PAC);
  • DS dyad symmetry sequence
  • EBNA1 binds to the dyad symmetry (DS) element in oriP).
  • 3 is a current vector map expressing the binding molecule of the present invention.
  • Figure 4 is a graph verifying the binding capacity of the first selected binding molecules to bind to H3 hemagglutinin by ELISA method.
  • 5 and 6 are animal test results using the binding molecule of the present invention.
  • HA-ELISA was performed by securing monomer HA, its subunit (HA1), and trimer HA in the HA of H3N2 influenza virus.
  • Recombinant monomers HA (11056-V08H) and HA1 subunit (11056-V08H1) of influenza A virus were purchased from Sino Biological Inc. (China).
  • the purchased HA originally consisted of amino acid sequences from Met 1 to 531 Ile of HA and the HA1 subunit consists of the N-terminal segment of HA (Met1-Arg345). They contain polyhistidine residues at the C-terminus and were produced in transfected human cells.
  • MN microneutralization
  • Example 7-1 MDCK Cell Line Culture and Virus Concentration Determination
  • the cultured MDCK cell line to trypsin was separated from the culture vessel, and then treated with MDCK culture medium to neutralize the trypsin. After washing twice with phosphate buffer, the cell pellet was diluted with virus diluent and adjusted to 5 ⁇ 10 5 cells / ml. After adding 3-4 ⁇ g / ml TPCK-trypsin (Sigma, USA) to a 96 well plate containing the virus, 100 ⁇ l of the MDCK cell line was added immediately, and then 20 hours in a 37% 5% CO 2 humidified cell culture incubator. Reacted.
  • Each antibody was first adjusted to a concentration of 10 ⁇ g / ml using virus diluent. Using this concentration as the initial concentration, dilute serially twice with a virus diluent and add 50 ⁇ l per well of a 96 well plate, and add 50 ⁇ l of virus corresponding to 100 TCID 50 per well to 37 ° C. The reaction was carried out for 1 hour in a 5% CO 2 humidified cell incubator. Then, 3-4 ⁇ g / ml TPCK-trypsin (Sigma, USA, T1426) was added to each well and 100 ⁇ l of the treated MDCK cell line, followed by 5% CO 2 wet at 37 ° C. The reaction was carried out for 20 hours in a cell incubator.
  • Example 4-1 MN analysis was performed in the same manner as the method used for virus quantification mentioned in Example 4-1, and the OD 490 value was measured. Wells showing higher than OD 490 levels of wells containing only cells were determined to be virus infected. Among the various OD 490 values in which no viral antigen is detected for each antibody, the lowest concentration ( ⁇ g / ml) of the antibody is shown in Table 1, and the lower the concentration of the antibody, the higher the neutralizing activity of the virus.
  • MN assay Micromeutralization assay (MN assay) using selected antibodies and various H3N2 viruses (unit: ⁇ g / ml) mab ID A / Hong Kong / 68 A / Brisbane / 10/07 A / Puerto Rico / 8/34 CT 301 > 80 0.039 > 80 CT 302 > 80 0.039 > 80 CT 303 > 80 0.156 > 80 CT 305 > 80 0.078 > 80 CT 308 > 80 0.039 > 80
  • Each test group consisted of 9 animals and was inoculated into the nasal cavity and trachea with 1 ⁇ 10 6 TCID 50 / ml of H3N2 (A / Brisbane / 10/07) influenza virus.
  • TCID 50 / ml of H3N2 A / Brisbane / 10/07 influenza virus.
  • TCID 50 / ml of H3N2 A / Brisbane / 10/07 influenza virus
  • the virus titer was measured in the nasal wash of experimental animals ferrets treated with CT-P6 and CT302. Virus titers of at least 4 TCID 50 / ml were observed and virus titers were maintained in nasal wash until 3 days after inoculation. After 5 days the virus was reduced (approximately log 3.2 TCID 50 / ml) and on day 9 no virus was detected. In the group treated with CT302, the virus titer was similar to that in the group treated with CT-P6 after 1 day of virus inoculation, but after 3 days, the virus was significantly decreased, and on day 9, no virus was detected. The removal was confirmed to occur quickly.
  • the binding molecule of the present invention has binding and neutralizing activity against influenza A virus, it is useful for preventing and treating diseases caused by the influenza A virus, and is also useful for a method of diagnosing the influenza A virus for infection.
  • SEQ ID NOs: 1 to 112 relate to binding molecules that specifically bind to influenza H3 subtype viruses.

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Abstract

본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 가진 결합 분자에 관한 것으로, 본 발명의 인플루엔자 A 바이러스에 중화 활성을 가지는 결합 분자는 인플루엔자 예방접종을 한 건강한 성인의 혈액에서 선별된 결합 분자로서 인플루엔자 A 바이러스 대하여 중화 활성을 가지고 있으므로 인플루엔자 A 바이러스 유래 질환의 예방 및 치료에 유용하며, 본 발명의 결합 분자를 이용하여 인플루엔자 A 바이러스의 진단에도 유용하게 이용될 수 있다.

Description

인간 Ｂ 세포에서 생산된 인플루엔자 Ａ 바이러스 중화 활성을 가지는 결합 분자
본 발명은 독감 예방주사를 접종 한 자원자의 혈액에서 선별된 인플루엔자 A 바이러스에 대하여 중화 활성을 가지는 인간 단일클론 항체에 관한 것이다.
독감은 인플루엔자 바이러스(Influenza virus)가 호흡기에 감염되며 나타나는 질병으로 겨울철에 흔하게 나타나며, 감염성이 매우 높아 전 연령층을 대상으로 쉽게 전파되는데 특히 노약자층이 취약한 것으로 알려져 있다(Treanor J, 2004, N Engl J Med. 350(3):218-20). 오르쏘믹소바이러스(Orthomyxoviridae)에 속하는 외피 보유 바이러스(enveloped virus)로 8개의 분절로 된 음성-극성 및 단일 가닥(Negative-sense, single-strand)의 RNA(ribonucleic acid)를 유전체로 가지는 인플루엔자 바이러스는 A, B 및 C 그룹으로 분류되며 인플루엔자 A 바이러스(influenza A virus)의 경우 주요 표면 단백질인 HA(hemaggutinin)와 NA(neuraminidase)에 따라 다시 여러 서브타입(subtype)으로 나뉜다. 현재까지 16 종의 HA와 9 종의 NA가 알려져 있다(Cheung TK and Poon LL 2007, Ann N Y Acad Sci. 1102:1-25). 인플루엔자 바이러스는 종류에 따라 조류, 돼지 및 사람에 감염될 수 있다는 특성과 RNA 분절로 되어 있는 유전체로 인하여 다양한 유전자의 조합과 돌연변이로 계속해서 변종 바이러스가 발생한다 (Treanor J, 2004. N Engl J Med. 350(3):218-20). 이런 지속적인 변이로 인하여 영구적인 면역력을 얻기가 힘들므로 현재 가장 효과적이라고 생각되는 예방법은 매년 유행할 것으로 예측되는 인플루엔자 바이러스에 대한 백신을 접종하여 특정 타입에 맞는 면역력을 매년 형성시키는 것이다.
인플루엔자 바이러스에 대한 백신은 일반적으로 계란을 이용하여 생산되는데, 이는 많은 시간을 요하게 되는 비효율적 방법이다. 그러므로 거의 매년 짧은 시간에 충분한 양의 백신을 생산하는데 문제점이 발생한다. 이러한 문제를 해결하고자 세포 배양을 이용한 백신 생산 방법이 여러 제약회사(GSK, Baxter)에서 활발히 진행되고 있는 실정이다. 또한 인플루엔자 바이러스의 대유행성 감염(pandemic infection)이 유발될 경우 이에 대한 신속한 백신 개발은 시간상 극히 어려움을 초래하고 있는 실정이다. 항 바이러스제(antiviral drug) 또한 돌연변이로 저항성을 갖는 바이러스의 출현 문제로 인하여 100% 신뢰할 수 없다.
이러한 문제점을 보완하기 위하여 인플루엔자 바이러스에 대한 항체의 사용 및 개발이 수행되었으며, 근래에 활발하게 진행되고 있다(Throsby et al, 2008, PloS One 3 (e3942); Sui et al., 2009, Nature structural & molecular biology. 16 (265-273); Simmons et al, 2007, PloS Medicine 4 (e178); Wrammert et al., 2011, J Exp Med. 208 (181-193); Corti et al., 2011, Science 333 (850-856)).
회복된 환자의 혈액 생산물은 다양한 바이러스에 감염된 환자의 치료에 이용되어 왔으며 대유행성 독감 감염(pandemic flu infection)의 치료에도 쓰여왔다. 예로서, 스페인 독감 바이러스(Spanish influenza virus)에 감염된 환자들이 폐렴 증상을 수반한 경우 상기 독감에 감염된 후 회복된 환자들로부터 채취한 혈액 생산물(blood product)을 치료에 사용하였다(Luke et al., 2006. Annals of internal medicine. 145:599). 이처럼 하이퍼 면역글로블린(Hyper immune globulin:IgIv)은 인간 혈장에서 정제되어 다양한 바이러스에 감염된 환자의 치료에 이용되나, 상기와 같이 제조된 생산물은 잠정적 감염원에 대하여 안전하지 않고, 대량 생산에 비효율적이다.
1975년 Kohler와 Milstein에 의해서 하이브리도마(hybridoma) 기술이 개발되면서(Kohler, G and Milstein, C., 1975. Nature 256, 495-497 ) 항체의 대량 생산이 가능해 졌다. 이 기술을 이용하여 연구용의 다양한 마우스 단일 클론 항체가 개발되었으며 치료용으로도 개발이 되었다. 그러나 쥐의 항체를 이용할 경우 인체 내에서 항 마우스 항체 (HAMA, human anti mouse antibody)가 생성되는 부작용이 있다. 유전자 재조합 기술의 발달과 다양한 항체의 유전자 정보가 밝혀지면서 이를 이용하여 항체를 발현, 선별하는 방법이 개발되었다. 파지디스플레이(phage display) 기술은 항체 분절을 박테리오파아지의 표면에 발현시켜 항원에 결합할 수 있는 항체를 선별하는 기술로 (McCafferty et al., 1990. Nature 348, 552-554; Barbas et al., 1991, PNAS 88, 7978-7982) 다양한 항체의 선별에 이용되고 있다. 특히 인간의 항체 유전자를 이용한 항체가 디스플레이된 파지 라이브러리를 제작하여 선별할 경우, 특정 항원에 대해 반응할 수 있는 인간의 항체 유전자를 얻을 수 있다. 인간의 항체 유전자는 유전자 재조합 방법을 이용하여 동물세포에서 항체를 발현할 경우 인간 항체를 대량 생산할 수 있다.
(비특허문헌 1)Reed L.J. and Muench H (1938). A simple method of estimating fifty percent endpoints. The American Journal of Hygiene, 27 (493-497)
본 발명은 인플루엔자 A 바이러스에 대하여 특이적으로 결합하고 중화 활성을 가지는 결합 분자, 상기 결합 분자를 이용한 인플루엔자 A 바이러스의 예방, 치료 및 감염 여부 진단 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 인플루엔자 H3 서브타입 바이러스에 특이적으로 결합하는 결합 분자에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 인플루엔자 A 바이러스에 특이적으로 결합하는 결합 분자를 제공하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 인플루엔자 A 바이러스는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스이며, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 결합 분자는 서열번호 1 내지 서열번호 14 중 하나, 서열번호 15 내지 서열번호 28 중 하나, 서열번호 29 내지 서열번호 42 중 하나, 서열번호 43 내지 서열번호 56 중 하나, 서열번호 57 내지 서열번호 70 중 하나 및 서열번호 71 내지 서열번호 84 중 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합 분자이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 결합 분자는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 결합 분자:제 1군은 서열번호 1, 서열번호 15, 서열번호 29, 서열번호 43, 서열번호 57, 및 서열번호 71; 제 2군은 서열번호 2, 서열번호 16, 서열번호 30, 서열번호 44, 서열번호 58, 및 서열번호 72; 제 3군은 서열번호 3, 서열번호 17, 서열번호 31, 서열번호 45, 서열번호 59, 및 서열번호 73; 제 4군은 서열번호 4, 서열번호 18, 서열번호 32, 서열번호 46, 서열번호 60, 및 서열번호 74; 제 5군은 서열번호 5, 서열번호 19, 서열번호 33, 서열번호 47, 서열번호 61, 및 서열번호 75; 제 6군은 서열번호 6, 서열번호 20, 서열번호 34, 서열번호 48, 서열번호 62, 및 서열번호 76; 제 7군은 서열번호 7, 서열번호 21, 서열번호 35, 서열번호 49, 서열번호 63, 및 서열번호 77; 제 8군은 서열번호 8, 서열번호 22, 서열번호 36, 서열번호 50, 서열번호 64, 및 서열번호 78; 제 9군은 서열번호 9, 서열번호 23, 서열번호 37, 서열번호 51, 서열번호 65, 및 서열번호 79; 제 10군은 서열번호 10, 서열번호 24, 서열번호 38, 서열번호 52, 서열번호 66, 및 서열번호 80; 제 11군은 서열번호 11, 서열번호 25, 서열번호 39, 서열번호 53, 서열번호 67, 및 서열번호 81; 제 12군은 서열번호 12, 서열번호 26, 서열번호 40, 서열번호 54, 서열번호 68, 및 서열번호 82; 제 13군은 서열번호 13, 서열번호 27, 서열번호 41, 서열번호 55, 서열번호 69, 및 서열번호 83; 및 제 14군은 서열번호 14, 서열번호 28, 서열번호 42, 서열번호 56, 서열번호 70, 및 서열번호 84 이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 결합 분자는 서열번호 85 내지 서열번호 98 중 하나 및 서열번호 99 내지 서열번호 112 중 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합분자이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 결합 분자는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 결합 분자: 제 1군은 서열번호 85 및 서열번호 99; 제 2군은 서열번호 86 및 서열번호 100; 제 3군은 서열번호 87 및 서열번호 101; 제 4군은 서열번호 88 및 서열번호 102; 제 5군은 서열번호 89 및 서열번호 103; 제 6군은 서열번호 90 및 서열번호 104; 제 7군은 서열번호 91 및 서열번호 105; 제 8군은 서열번호 92 및 서열번호 106; 제 9군은 서열번호 93 및 서열번호 107; 제 10군은 서열번호 94 및 서열번호 108; 제 11군은 서열번호 95 및 서열번호 109; 제 12군은 서열번호 96 및 서열번호 110; 제 13군은 서열번호 97 및 서열번호 111; 및 제 14군은 서열번호 98 및 서열번호 112이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 인플루엔자 A 바이러스에 중화활성을 나타내는 항체를 제공하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 인플루엔자 A 바이러스는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는, 카밧 방법(Kabat numbering system)에 의하며, L(24)-L(25)-L(26)-L(27)-L(27A)-L(27B)-L(27C)-L(28)-L(29)-L(30)-L(31)-L(32)-L(33)-L(34)로 표시되는 경쇄 CDR1 영역; L(50)-L(51)-L(52)-L(53)-L(54)-L(55)-L(56)로 표시되는 경쇄 CDR2 영역; L(89)-L(90)-L(91)-L(92)-L(93)-L(94)-L(95)-L(95A)-L(95B)-L(95C)-L(96)-L(97)로 표시되는 경쇄 CDR3 영역; H(31)-H(32)-H(33)-H(34)-H(35)로 표시되는 중쇄 CDR1 영역; H(50)-H(51)-H(52)-H(52A)-H(53)-H(54)-H(55)-H(56)-H(57)-H(58)-H(59)-H(60)-H(61)-H(62)-H(63)-H(64)-H(65)로 표시되는 중쇄 CDR2 영역; 및 H(95)-H(96)-H(97)-H(98)-H(99)-H(100)-H(100A)-H(100B)-H(100C)-H(100D)-H(100E)-H(100F)-H(100G)-H(100H)-H(100I)-H(100J)-H(100K)-H(101)-H(102)로 표시되는 중쇄 CDR3 영역을 포함하고, 상기 L(24)는 T, S, G 또는 A; L(25)는 G 또는 A; L(26)는 S, Y 또는 T; L(27)는 S, K, T 또는 Q; L(27A)는 S; L(27B)는 N 또는 D; L(27C)는 I 또는 V; L(28)는 G, L 또는 D; L(29)는 A, G 또는 I; L(30)는 D, Y 또는 S; L(31)는 Y, Q, K 또는 N; L(32)는 A, Y 또는 D; L(33)는 V, T 또는 L; L(34)는 H, S 또는 N; L(50)는 A, Q, G, A 또는 D; L(51)는 N, D, V 또는 A; L(52)는 T, S 또는 N; L(53)는 N, Q 또는 H; L(54)는 R 또는 L; L(55)는 P 또는 E; L(56)는 S 또는 T; L(89)는 Q 또는 N; L(90)는 S, A 또는 Q; L(91)는 Y, G, F 또는 H; L(92)는 D, H 또는 T; L(93)는 N, T, R 또는 S; L(94)는 I, S, N, G 또는 F; L(95)는 L, N 또는 S; L(95A)는 S, N 또는 T; L(95B)는 G 또는 L; L(95C)는 S 또는 F; L(96)는 W, V, E 또는 P; L(97)는 V, I, L 또는 T; H(31)는 S, T, D, N, I 또는 L; H(32)는 H, Y 또는 F; H(33)는 A, P, E 또는 G; H(34)는 I, V 또는 M; H(35)는 S, T, H 또는 N; H(50)는 D, E, G, n, R, L 또는 V; H(51)는 I; H(52)는 L, I, S, M 또는 A; H(52A)는 P, W, Y 또는 F; H(53)는 G, T 또는 D; H(54)는 F, S 또는 G; H(55)는 G, E 또는 S; H(56)는 S, T, A 또는 N; H(57)는 P, A, K 또는 E; H(58)는 I, K, N, D, E, F, Y 또는 S; H(59)는 Y 또는 S; H(60)는 A; H(61)는 P, Q, D 또는 E; H(62)는 N, K, R, S, E, Q 또는 N; H(63)는 L, F 또는 V; H(64)는 K, Q, R 또는 L; H(65)는 G, A 또는 P; H(95)는 Q, E, D 또는 A; H(96)는 D, Y, K, P, F, A 또는 V; H(97)는 P, V 또는 G; H(98)는 I, L 또는 G; H(99)는 K, M, N, L, S 또는 A; H(100)는 I, Y, S 또는 A; H(100A)는 F, S, D, L, G 또는 H; H(100B)는 G 또는 S; H(100C)는 V, Y, G 또는 T; H(100D)는 V, S, Y 또는 W; H(100E)는 I, Y, F, S, G 또는 V; H(100F)는 S, N, T, F 또는 P; H(100G)는 P, S 또는 F; H(100H)는 P 또는 R; H(100I)는 A, H 또는 S; H(100J)는 L, F 또는 G; H(100K)는 M; H(101)는 D; H(102)는 R, P, V 또는 Y인 것을 특징으로 하는 항체이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 서열번호 1 내지 서열번호 14 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR1 영역; 서열번호 15 내지 서열번호 28 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR2 영역; 서열번호 29 내지 서열번호 42 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR3 영역; 서열번호 43 내지 서열번호 56 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR1 영역; 서열번호 57 내지 서열번호 70 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR2 영역; 및 서열번호 71 내지 서열번호 84 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체이며, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체: 제 1군은 서열번호 1을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 15를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 29를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 43을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 57을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 71을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 2군은 서열번호 2를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 16을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 30을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 44를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 58을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 72를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 3군은 서열번호 3을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 31을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 45를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 59를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 73을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 4군은 서열번호 4를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 32를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 46을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 60을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 74를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 5군은 서열번호 5를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 19를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 33을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 47을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 61을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 75를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 6군은 서열번호 6을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 20을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 34를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 48을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 62를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 76을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 7군은 서열번호 7을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 21을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 35를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 49를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 63을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 77을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 8군은 서열번호 8을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 22를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 36을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 64를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 78을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 9군은 서열번호 9를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 23을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 37을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 51을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 65를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 79를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 10군은 서열번호 10을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 24를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 38을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 52를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 66을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 80을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 11군은 서열번호 11을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 25를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 39를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 53을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 67을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 81을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 12군은 서열번호 12를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 26을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 40을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 54를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 82를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 13군은 서열번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 27을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 55를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 69를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 83을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 및 제 14군은 서열번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 28을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 42를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 56을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 70을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 84를 포함하는 중쇄 CDR3 영역이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는, 서열번호 85 내지 98 중 하나를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99 내지 112 중 하나를 포함하는 중쇄 가변부를 포함하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체: 제 1군은 서열번호 85를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99를 포함하는 중쇄 가변부; 제 2군은 서열번호 86을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 100을 포함하는 중쇄 가변부; 제 3군은 서열번호 87을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 101을 포함하는 중쇄 가변부; 제 4군은 서열번호 88을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 102를 포함하는 중쇄 가변부; 제 5군은 서열번호 89를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 103을 포함하는 중쇄 가변부; 제 6군은 서열번호 90을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 104를 포함하는 중쇄 가변부; 제 7군은 서열번호 91을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 105를 포함하는 중쇄 가변부; 제 8군은 서열번호 92를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 106을 포함하는 중쇄 가변부; 제 9군은 서열번호 93을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 107을 포함하는 중쇄 가변부; 제 10군은 서열번호 94를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 108을 포함하는 중쇄 가변부; 제 11군은 서열번호 95를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 109를 포함하는 중쇄 가변부; 제 12군은 서열번호 96을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 110을 포함하는 중쇄 가변부; 제 13군은 서열번호 97을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 111을 포함하는 중쇄 가변부; 및 제 14군은 서열번호 98을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 112를 포함하는 중쇄 가변부이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 항체에 약물이 추가로 부착되어 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 항체를 코딩하는 유전자를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 벡터를 포함하는 세포주를 제공하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 세포주는 F2N, HEK293, CHOK1, DG44, DXB11, CHO-S, BHK, Sp2/0, 또는 NS일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 벡터를 세포주에 형질 감염시켜 상기 항체를 생산하는 방법을 제공하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 세포주는 F2N, HEK293, CHOK1, DG44, DXB11, CHO-S, BHK, Sp2/0, 또는 NS일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스에 결합하는 결합분자를 발현하는 벡터의 제조 방법에 있어서, 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 예방접종을 한 포유동물로부터 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)를 분리하는 단계; 상기 분리된 PBMC를 이용하여 항체 라이브러리(library)를 제작하는 단계; 상기 항체 라이브러리 중 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스에 결합하는 항체를 선별하는 단계; 및 상기 선별된 항체를 벡터에 클로닝하는 단계를 포함하는 재조합 벡터의 제조 방법을 제공하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는, 카밧 방법(Kabat numbering system)에 의하며, L(24)-L(25)-L(26)-L(27)-L(27A)-L(27B)-L(27C)-L(28)-L(29)-L(30)-L(31)-L(32)-L(33)-L(34)로 표시되는 경쇄 CDR1 영역; L(50)-L(51)-L(52)-L(53)-L(54)-L(55)-L(56)로 표시되는 경쇄 CDR2 영역; L(89)-L(90)-L(91)-L(92)-L(93)-L(94)-L(95)-L(95A)-L(95B)-L(95C)-L(96)-L(97)로 표시되는 경쇄 CDR3 영역; H(31)-H(32)-H(33)-H(34)-H(35)로 표시되는 중쇄 CDR1 영역; H(50)-H(51)-H(52)-H(52A)-H(53)-H(54)-H(55)-H(56)-H(57)-H(58)-H(59)-H(60)-H(61)-H(62)-H(63)-H(64)-H(65)로 표시되는 중쇄 CDR2 영역; 및 H(95)-H(96)-H(97)-H(98)-H(99)-H(100)-H(100A)-H(100B)-H(100C)-H(100D)-H(100E)-H(100F)-H(100G)-H(100H)-H(100I)-H(100J)-H(100K)-H(101)-H(102)로 표시되는 중쇄 CDR3 영역을 포함하고, 상기 L(24)는 T, S, G 또는 A; L(25)는 G 또는 A; L(26)는 S, Y 또는 T; L(27)는 S, K, T 또는 Q; L(27A)는 S; L(27B)는 N 또는 D; L(27C)는 I 또는 V; L(28)는 G, L 또는 D; L(29)는 A, G 또는 I; L(30)는 D, Y 또는 S; L(31)는 Y, Q, K 또는 N; L(32)는 A, Y 또는 D; L(33)는 V, T 또는 L; L(34)는 H, S 또는 N; L(50)는 A, Q, G, A 또는 D; L(51)는 N, D, V 또는 A; L(52)는 T, S 또는 N; L(53)는 N, Q 또는 H; L(54)는 R 또는 L; L(55)는 P 또는 E; L(56)는 S 또는 T; L(89)는 Q 또는 N; L(90)는 S, A 또는 Q; L(91)는 Y, G, F 또는 H; L(92)는 D, H 또는 T; L(93)는 N, T, R 또는 S; L(94)는 I, S, N, G 또는 F; L(95)는 L, N 또는 S; L(95A)는 S, N 또는 T; L(95B)는 G 또는 L; L(95C)는 S 또는 F; L(96)는 W, V, E 또는 P; L(97)는 V, I, L 또는 T; H(31)는 S, T, D, N, I 또는 L; H(32)는 H, Y 또는 F; H(33)는 A, P, E 또는 G; H(34)는 I, V 또는 M; H(35)는 S, T, H 또는 N; H(50)는 D, E, G, n, R, L 또는 V; H(51)는 I; H(52)는 L, I, S, M 또는 A; H(52A)는 P, W, Y 또는 F; H(53)는 G, T 또는 D; H(54)는 F, S 또는 G; H(55)는 G, E 또는 S; H(56)는 S, T, A 또는 N; H(57)는 P, A, K 또는 E; H(58)는 I, K, N, D, E, F, Y 또는 S; H(59)는 Y 또는 S; H(60)는 A; H(61)는 P, Q, D 또는 E; H(62)는 N, K, R, S, E, Q 또는 N; H(63)는 L, F 또는 V; H(64)는 K, Q, R 또는 L; H(65)는 G, A 또는 P; H(95)는 Q, E, D 또는 A; H(96)는 D, Y, K, P, F, A 또는 V; H(97)는 P, V 또는 G; H(98)는 I, L 또는 G; H(99)는 K, M, N, L, S 또는 A; H(100)는 I, Y, S 또는 A; H(100A)는 F, S, D, L, G 또는 H; H(100B)는 G 또는 S; H(100C)는 V, Y, G 또는 T ; H(100D)는 V, S, Y 또는 W; H(100E)는 I, Y, F, S, G 또는 V; H(100F)는 S, N, T, F 또는 P; H(100G)는 P, S 또는 F; H(100H)는 P 또는 R; H(100I)는 A, H 또는 S; H(100J)는 L, F 또는 G; H(100K)는 M; H(101)는 D; H(102)는 R, P, V 또는 Y이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는, 서열번호 1 내지 서열번호 14 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR1 영역; 서열번호 15 내지 서열번호 28 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR2 영역; 서열번호 29 내지 서열번호 42 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR3 영역; 서열번호 43 내지 서열번호 56 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR1 영역; 서열번호 57 내지 서열번호 70 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR2 영역; 및 서열번호 71 내지 서열번호 84 중 하나를 포함하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체: 제 1군은 서열번호 1을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 15를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 29를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 43을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 57을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 71을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 2군은 서열번호 2를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 16을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 30을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 44를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 58을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 72를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 3군은 서열번호 3을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 31을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 45를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 59를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 73을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 4군은 서열번호 4를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 32를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 46을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 60을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 74를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 5군은 서열번호 5를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 19를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 33을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 47을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 61을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 75를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 6군은 서열번호 6을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 20을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 34를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 48을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 62를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 76을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 7군은 서열번호 7을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 21을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 35를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 49를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 63을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 77을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 8군은 서열번호 8을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 22를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 36을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 64를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 78을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 9군은 서열번호 9를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 23을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 37을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 51을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 65를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 79를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 10군은 서열번호 10을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 24를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 38을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 52를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 66을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 80을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 11군은 서열번호 11을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 25를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 39를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 53을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 67을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 81을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 12군은 서열번호 12를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 26을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 40을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 54를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 82를 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 제 13군은 서열번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 27을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 55를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 69를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 83을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 및 제 14군은 서열번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 28을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 42를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 56을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 70을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 84를 포함하는 중쇄 CDR3 영역이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는, 서열번호 85 내지 98 중 하나를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99 내지 112 중 하나를 포함하는 중쇄 가변부를 포함하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체: 제 1군은 서열번호 85를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99를 포함하는 중쇄 가변부; 제 2군은 서열번호 86을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 100을 포함하는 중쇄 가변부; 제 3군은 서열번호 87을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 101을 포함하는 중쇄 가변부; 제 4군은 서열번호 88을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 102를 포함하는 중쇄 가변부; 제 5군은 서열번호 89를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 103을 포함하는 중쇄 가변부; 제 6군은 서열번호 90을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 104를 포함하는 중쇄 가변부; 제 7군은 서열번호 91을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 105를 포함하는 중쇄 가변부; 제 8군은 서열번호 92를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 106을 포함하는 중쇄 가변부; 제 9군은 서열번호 93을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 107을 포함하는 중쇄 가변부; 제 10군은 서열번호 94를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 108을 포함하는 중쇄 가변부; 제 11군은 서열번호 95를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 109를 포함하는 중쇄 가변부; 제 12군은 서열번호 96을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 110을 포함하는 중쇄 가변부; 제 13군은 서열번호 97을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 111을 포함하는 중쇄 가변부; 및 제 14군은 서열번호 98을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 112를 포함하는 중쇄 가변부이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 선별된 항체는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 HA 단백질에 결합하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 PBMC는 B 세포, T 세포, 대식세포, 수지상세포 및 NK 세포 중 적어도 하나를 포함하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 포유동물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 항체에 약물이 추가로 부착되어 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 항체를 포함하는 인플루엔자 H3 서브타입 바이러스 예방용 조성물을 제공하고, 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 예방용 조성물은 0.001~100 mg/kg을 투여하며, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 예방용 조성물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람용이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 예방용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 예방용 조성물을 포유 동물에 투여하여 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 예방하는 방법을 제공하고 본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 예방용 조성물을 0.001~100mg/kg을 투여하며, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 포유동물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 예방용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 항체를 포함하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 치료용 조성물을 제공하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 치료용 조성물은 0.001~100mg/kg을 투여하며, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 치료용 조성물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람용이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 치료용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 치료용 조성물을 포유 동물에 투여하여 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 치료하는 방법을 제공하고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 치료용 조성물을 0.001~100mg/kg을 투여하며, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 포유동물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람이고, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 치료용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태이다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 항체를 목적하는 시료와 반응시키는 과정을 포함하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 존재 여부에 관한 정보제공 방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 항체를 포함하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 진단 키트를 제공한다.
본 발명의 결합 분자는 인플루엔자 A 바이러스에 대하여 결합 및 중화 활성을 가지므로 상기 인플루엔자 A 바이러스로 인한 질환에 대하여 예방 및 치료에 유용하며, 인플루엔자 A 바이러스의 감염 여부 진단 방법에도 유용하다.
도1은 본 발명에서 선별된 항체분절들의 H3 헤마글루티닌(Hemaglutinin; 이하 "HA"라 칭함)에 대한 결합력을 검증한 그래프이다
도 2는 pCT145(A)와 pCT147(B)의 벡터 지도이다:
A: pCT145 벡터;
B; pCT147 벡터;
pac: gene which encodes a Puromycin N-acetyl-tranferase (PAC); 및
DS: dyad symmetry sequence (EBNA1 binds to the dyad symmetry (DS) element in oriP).
도 3는 본 발명의 결합 분자를 발현하는 현 벡터 지도이다.
도 4은 H3 헤마글루티닌에 대하여 결합하는 것으로 일차 선별된 결합 분자들의 결합력을 ELISA 방법으로 검증한 그래프이다.
도 5와 도 6은 본 발명의 결합 분자를 이용한 동물실험 결과이다.
이하 본 발명의 단어를 다음과 같이 정의한다.
본 발명에서 사용되는 "인플루엔자 A 바이러스 (influenza A virus)"는 오르쏘믹소바이러스(Orthomyxoviridae)에 속하는 외피 보유 바이러스(enveloped virus)로 8개의 분절로 된 음성-극성 및 단일 가닥(Negative-sense, single-strand)의 RNA (ribonucleic acid)를 유전체로 가지고, A, B 및 C 그룹으로 분류되며, 주요 표면 단백질인 HA (hemaggutinin)와 NA (neuraminidase)에 따라 다시 여러 서브타입(subtype)으로 나뉜다. 현재까지 16종의 HA와 9종의 NA가 알려져 있다.
본 발명에서 사용되는 "H3 서브타입 바이러스"로 표기된 것은 H3 서브타입의 HA를 가지고 있는 바이러스를 지칭하므로 H3N1, H3N2, H3N3, H3N4, H3N5, H3N6, H3N7, H3N8 및 H3N9 바이러스가 포함된다.
본 발명에서 사용되는 "헤마글루티닌 (hemaggutinin, 이하 "HA"라 칭함)"은 인플루엔자 바이러스의 외피 (envelope) 당단백질을 나타낸다. HA는 인플루엔자 바이러스가 숙주 세포에 흡착하여 관통하는 것을 매개한다. 현재까지 16 종류의 서브타입이 보고되어 있다.
본 발명에서 사용되는 “결합 분자”는 키메라, 인간화 또는 인간 단일클론 항체와 같은 단일클론 항체를 포함하는 온전한(intact) 이뮤노글로블린(immunoglobulin), 또는 항원에 결합하는 이뮤노글로믈린, 예를 들면 인플루엔자 A 바이러스의 단량체 HA 또는 삼량체 HA와의 결합을 위해 온전한(intact) 이뮤노글로블린과 경쟁하는 이뮤노글로블린 단편을 포함하는 가변성 도메인 또는 기질과 결합 가능한 효소, 수용체, 단백질을 뜻한다. 구조와는 상관없이 항원-결합 단편은 온전한(intact) 이뮤노글로블린에 의해 인식된 동일한 항원과 결합된다. 항원-결합 단편은 결합 분자의 아미노산 서열의 2개 이상의 연속기, 20개 이상의 연속 아미노산 잔기, 25개 이상의 연속 아미노산 잔기, 30개 이상의 연속 아미노산 잔기, 35개 이상의 연속 아미노산 잔기, 40개 이상의 연속 아미노산 잔기, 50개 이상의 연속 아미노산 잔기, 60개 이상의 연속 아미노산 잔기, 70개 이상의 연속 아미노산 잔기, 80개 이상의 연속 아미노산 잔기, 90개 이상의 연속 아미노산 잔기, 100개 이상의 연속 아미노산 잔기, 125개 이상의 연속 아미노산 잔기, 150개 이상의 연속 아미노산 잔기, 175개 이상 연속 아미노산 잔기, 200개 이상의 연속 아미노산 잔기, 또는 250개 이상의 연속 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. “항원-결합 단편”은 특히 Fab, F(ab'), F(ab')2, Fv, dAb, Fd, 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일-쇄 항체(scFv), 2가(bivalent) 단일-쇄 항체, 단일-쇄 파지 항체, 디아바디(diabody), 트리아바디, 테트라바디, 폴리펩티드로의 특정 항원에 결합하기에 충분한 이뮤노글로브린의 하나 이상의 단편을 함유하는 폴리펩티드 등을 포함한다. 상기 단편은 합성으로 또는 완전한 이뮤노글로블린의 효소적 또는 화학적 분해에 의해 생성되거나, 재조합 DNA 기술에 의해 유전공학적으로 생성될 수 있다. 생성 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
본 발명에서 사용되는 “약제학적으로 허용가능한 부형제”라는 용어는 용인가능한 또는 편리한 투약 형태를 제조하기 위한 약물, 제제 또는 결합 분자와 같은 활성 분자로 조합되는 불활성 물질을 의미한다. 약제학적으로 허용가능한 부형제는 비독성이거나, 적어도 독성이 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 이의 의도된 용도를 위해 허용될 수 있는 부형제이고, 약물, 제제 또는 결합 분제를 포함하는 제형화의 다른 성분과 양립할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 “치료학적으로 유효한 양”이라는 용어는 인플루엔자 A 바이러스의 노출 전 또는 노출 후에 예방 또는 치료에 유효한 본 발명의 결합 분자의 양을 나타낸다.
본 발명에 따른 물질을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 멸균 주사용액, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제의 형태 또는 동결건조(lyophilized)된 형태로 제형화할 수 있다. 상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물, 특히 본 발명의 결합 분자들은 인플루엔자 A의H3서브타입 바이러스를 검출하는데 있어서 진단 시약으로서 특히 유용하다.
진단 조성물에 사용되는 본 발명의 상기 화합물들은 검출가능하게 표식되는 것이 바람직하다. 생분자들을 표식시키는데 사용가능한 다양한 방법들이 당업자에게 잘 알려져 있고, 본 발명의 범주내에서 고려된다. 상기 방법들은 Tijssen, 'Practice and theory of enzyme immuno assays', Burden, RH and von Knippenburg (Eds), Volume 15 (1985), 'Basic methods in molecular biology'; Davis LG, Dibmer MD; Battey Elsevier (1990), Mayer et al., (Eds) 'Immunochemical methods in cell and molecular biology' Academic Press, London (1987), or in the series 'Methods in Enzymology', Academic Press, Inc에 기술되어 있다.
당업자에게 공지되어 있는 표식 방법과 많은 다른 표식들이 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 표식 종류의 예로는 효소, 방사성 동위원소, 콜로이드 금속, 형광 화합물, 화학발광 화합물 및 생발광 화합물이 있다.
통상적으로 사용되는 표식들은 형광물질(가령, 플루레신, 로다민, 텍사스 레드 등), 효소(가령, 고추냉이 퍼옥시다아제, β-갈락토시다아제, 알칼리 포스파타 아제), 방사성 동위원소(가령, 32 P 또는 125I), 바이오틴, 디곡시게닌, 콜로이드 금속, 화학발광 또는 생발광 화합물(가령, 디옥세탄, 루미놀 또는 아크리디늄)을 포함한다. 효소 또는 바이오티닐기의 공유 결합법, 요오드화법, 인산화법, 바이오틴화법 등과 같은 표식 방법들이 당 분야에 잘 알려져 있다.
검출 방법들로는 오토라디오그래피, 형광 현미경, 직접 및 간접 효소반응 등이 있으며, 이에 제한되지는 않는다. 통상적으로 사용되는 검출 분석법으로는 방사성 동위원소 또는 비-방사성 동위원소 방법이 있다. 이들은 그중에서도 웨스턴블롯팅, 오버레이-분석법, RIA(Radioimmuno Assay) 및 IRMA(Immune Radioimmunometric Assay), EIA(Enzyme Immuno Assay), ELISA(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), FIA(Fluorescent Immuno Assay) 및 CLIA(Chemioluminescent Immune Assay)이 있다.
본 발명에 따른 항체는 약제가 결합된 항체-약물 접합체의 형태로 사용될 수 있다. 약물을 국소 전달하기위해 항체-약물 접합체 (ADC), 즉 면역접합체를 사용하게 되면 상기 약물 모이어티를 감염된 세포에 표적화 전달할 수 있는데, 상기 약물 작용제를 접합시키지 않은 채로 투여하게 되면, 정상 세포에 대해서도 허용될 수 없는 수준의 독성이 야기될 수 있기 때문이다. 약물-연결성 및 약물-방출성 뿐만 아니라 폴리클로날 및 모노클로날 항체 (mAb)의 선택성을 높임으로써 ADC의 최대 효능과 최소 독성을 개선할 수 있다.
약물 모이어티를 항체에 부착시키는, 즉 공유 결합을 통하여 연결시키는 통상적인 수단으로는, 일반적으로 약물 모이어티가 항체 상의 수 많은 부위에 부착되는 불균질한 분자 혼합물이 유발된다. 예를 들어, 세포독성 약물을 전형적으로, 종종 항체의 수 많은 리신 잔기를 통하여 항체와 접합시켜 불균질한 항체-약물 접합체 혼합물을 생성킬 수 있다. 반응 조건에 따라서, 이러한 불균질한 혼합물은 전형적으로, 약물 모이어티에 부착된 항체 분포도가 0 내지 약 8 이상이다. 또한, 특별한 정수 비의 약물 모이어티 대 항체를 수반한 접합체의 각 아군은, 약물 모이어티가 항체 상의 각종 부위에 부착되는 잠재적으로 불균질한 혼합물이다. 항체는 크고, 복잡하며 구조적으로 다양한 생체 분자이고, 종종 많은 반응성 관능기를 갖고 있다. 링커 시약 및 약물-링커 중간체와의 반응성은 pH, 농도, 염 농도 및 조용매와 같은 요인들에 의해 좌우된다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다. 그러나 하기 실시예들은 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서 인용된 문헌은 본 발명의 명세서에 참조로서 통합된다.
실시예
실시예 1: 인플루엔자 예방접종자의 혈액으로부터 PBMC 분리 준비
본 실험에서 지원자들은 인플루엔자 예방접종을 한 건강한 성인으로 구성되었으며 이는 임상시험심사 위원회(IRB)의 승인을 받고 이루어졌다. 지원자들의 특징은 다음과 같다. (1) 지난 2년간 독감에 감염되지 않았으며 계절 독감에 대한 백신을 접종 받지 않았다. (2) 다른 전염성 바이러스 즉 VDRL과 HBsAg 에 대하여 음성 반응을, anti-HCV 항체 및 anti-HIV 항체에 대하여 음성 반응을 보인다. 지원자들로부터 약 100 ㎖의 전혈을 수득하여 Ficoll-Paque PLUS (GE Healthcare) 방법을 사용하여 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)를 분리하였다. 분리된 PBMC는 인산 완충용액으로 3회 세척한 후, RNA 분리에 사용하였다.
실시예 2: 항체 library 제작
실시예 1 에서 분리한 PBMC에서 TriReagent (Molecular Research Center)를 이용하여 전체 RNA를 추출한 후 the SuperScriptTM First-Strand cDNA synthesis system (Invitrogen, USA)을 이용하여 cDNA를 합성하였다.
합성된 cDNA로부터 항체 라이브러리(library)의 제작은 선행문헌을 참고하였다 (Barbas C. et. al. Phage display a laboratory manual. 2001. CSHL Press). 간단히 기술하면 합성된 cDNA로부터 High fidelity Taq polymerase (Roche)와 degenerative primer set을 이용하여 항체의 경쇄와 중쇄의 가변 영역을 PCR (polymerase chain reaction) 방법으로 증폭하였다. 증폭된 DNA 절편은 1% 아가로즈 젤 전기영동(agarose gel electrophoresis) 후 젤 추출 키트(gel extraction kit)(Qiagen)를 사용하여 분리하였다. 분리된 가변영역 절편을 주형으로 하여 overlap PCR 방법으로 항체 중쇄와 경쇄의 가변영역을 연결하여 scFv 형태의 유전자로 만들어 증폭한 후 1% 아가로즈 젤 전기영동(agarose gel electrophoresis)와 젤 추출 키트(gel extraction kit)(Qiagen) 방법을 사용하여 유전자를 분리하였다. 증폭된 scFv 유전자는 미리 도입된 SfiI 제한효소 부위를 SfiI (Roche) 제한 효소로 12시간 절단한 뒤 1% 아가로즈 젤 전기영동(agarose gel electrophoresis)와 젤 추출 키트(gel extraction kit)(Qiagen) 방법을 사용하여 분리하였다. pComb3XSS phagemid 벡터도 SfiI 제한 효소로 절단하고 분리한 뒤 상기 scFv 유전자와 섞고 T4 DNA ligase (Roche)를 넣은 후 16 ℃ 에서 12 시간 반응하였다. 반응액을 ER2738 (New England Biolab) competent cell과 섞고 electroporation 방법으로 형질 전환하였다. 형질 전환된 ER2738은 진탕 배양 후 VCSM13 helper phage (Agilent Technologies)를 넣고 12 시간 배양하여 phage library를 제작하였다.
실시예 3: 항체의 선별
H3N2의 HA에 결합하는 항체분절을 파지 라이브러리로 부터 선별하기 위하여 사용할 재조합 삼량체 HA를 자기 비드(magnetic bead)에 결합시켜 사용하였다. 재조합 삼량체 HA(FR-61)는 IRR(Influenza Reagent Resource, USA)에서 제공하였다. 상기 삼량체 HA는 C-말단 펩티드에 트롬빈(thrombin) 절단 자리, 삼량체 형성 유도 도메인(trimerizing domain; foldon) 및 6개의 히스티딘 잔기를 포함하는 구조이며, 바큘로 바이러스 시스템(baculovirus system)을 이용하여 생산되었다. 19 ㎍의 재조합 삼량체 HA를 6.3 x 107 의 M-270 자기 비드 (DYNAL)와 섞고 상온에서 24 시간 동안 반응 시겼다. 반응 후 여분의 반응액을 제거하고 3% BSA/PBS를 넣어 1시간 동안 반응시켜 여분의 반응성 에폭시기(epoxy group)를 제거한 뒤 PBS로 씻어 주었다.
실시예 2 에서 제작한 파지 라이브러리 배양액은 원심 분리하여 숙주세포를 제거한 뒤 4% PEG와 0.5M NaCl을 넣고 9000rpm 으로 15분간 원심 분리하여 파지를 침강 시키고 상층액을 제거하였다. 침강된 파지를 1% BSA/TBS 에 희석하여 항원이 결합된 자기 비드와 섞고 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응액을 제거한 뒤 남아있는 비드를 0.05% tween20가 포함된 PBS로 세척한 뒤 60 ㎕ 의 0.1 M glycine-HCl (pH 2.2)를 넣어 항원에 결합한 파지를 떼어내고 2 M Tris (pH 9.1)를 이용하여 중화 하였다. 떼어낸 파지는 ER2738에 감염시킨 뒤 VCSM13 헬퍼 파지(helper phage)를 넣고 배양하여 다음 번 패닝(panning)에 사용하였다. 4회의 패닝 후 후보 항체분절을 선별하였다.
실시예 4: phage enzyme immunoassay
4회의 패닝 후 감염시킨 ER2738의 일부를 헬퍼 파지를 넣기 전에 LB 플레이트에 도말하여 콜로니를 얻었다. 형성된 콜로니를 배양액에 넣어 진탕 배양하여 OD600이 0.7 이상의 값이 되었을 때 VCSM13 헬퍼 파지를 넣고 37 ℃에서 12 시간 이상 진탕 배양하였다. 배양액을 원심 분리하여 숙주세포를 제거하고 파지를 포함하는 상등액을 준비하였다.
Phage enzyme immunoassay를 위하여 96-웰 마이크로타이터 플레이트에 200 ng의 재조합 삼량체 HA를 흡착시킨 뒤 150 ㎕의 3% BSA/PBS를 넣고 37 ℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 준비한 파지 상층액을 6% BSA/PBS 와 1:1 희석한 뒤 각 웰에 넣고 37 ℃에서 2시간 동안 정치하였다. 각 웰을 0.05% Tween 20가 포함된 PBS로 3회 세척한 뒤 호스라디시 페록시다아제(horseradish peroxidase)가 표지 된 항 M13 항체를 넣고 37 ℃에서 1시간 동안 정치하였다. 각 웰을 0.05% Tween 20가 포함된 PBS로 3회 세척한 뒤 ABTS (2,2'-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-diammonium salt)를 넣고 405 nm 에서의 흡광도를 측정하였다. 그 결과 임의로 선정한 14개 클론이 모두 H3N2의 HA에 대하여 결합력을 나타냄을 확인하였다 (도 1).
실시예 5: 단일클론 항체의 발현
1차적으로 선별된 14개의 항체분절 중 일부를 유전자 재조합 방법으로 중쇄와 경쇄의 불변영역을 포함하는 완전한 항체 형태로 전환하였다. 이들 항체 유전자를 셀트리온 고유의 발현 벡터인 MarEx 발현 벡터에 다음과 같이 재클로닝 (recloning)을 진행하였다. 재클로닝 후, 이들 항체 유전자를 포함하는 MarEx 발현 벡터를 이용하여 효소결합 면역흡수 분석법 (ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay), 마이크로 중화시험법 (Microneutralization test; MN test) 및 혈구응집 억제시험 (Hemagglutination inhibition test: HI test)에 필요한 항체를 생산하였다.
중쇄와 경쇄 유전자를 제한효소 Nhe I과 Pme I을 처리하여 각각 동일한 제한효소로 처리된 pCT145 벡터와 pCT147 벡터에 삽입하였다. pCT145 및 pCT147 벡터는 각각 항체의 중쇄와 경쇄를 클로닝하기 위해 제작된 셀트리온 고유의 벡터이다(도 2). 이후, 중쇄 전사단위(프로모터-중쇄 유전자-폴리에이)와 경쇄 전사단위(프로모터-경쇄 유전자-폴리에이)를 함께 포함하는 발현 벡터를 제작하기 위하여, 중쇄 유전자를 포함하는 pCT145 벡터에 제한효소 Pac I과 Asc I을 처리하여 중쇄 전사단위를 확보한 다음, 경쇄 유전자를 포함하는 pCT147 벡터에 동일한 제한효소를 처리하여 중쇄 전사단위를 삽입하였다. 이후 제한효소를 이용하여, 중쇄 전사단위와 경쇄 전사단위를 동시에 포함하는 벡터를 선별하였다(도 3). 선별된 벡터는 Endofree plasmid maxi kit(QIAGEN, Germany, 12362)를 이용하여 추출되었으며, 추출된 DNA 중 일부를 이용하여 염기서열 분석을 통해 최종적으로 항체의 염기서열을 확인하였다.
이후, 추출된 항체의 DNA를 이용하여 부유배양 중인 셀트리온에서 제작한 F2N 세포주에 형질 감염하여 단일 클론 항체를 생산하는 일시적 세포주를 제조하였으며, 방법은 하기와 같다.　 세포 내 일시적 형질 감염을 위하여 양이온성 폴리머 (cationic polymer)인 FreeStyleTM Max(Invitrogen, USA, 16447-100)를 사용하였으며, 제조사의 사용설명서에 따라 형질 감염을 수행하였다. 형질 감염 전날, EX-CELL 293 Serum free media(SAFC, LIK, 14571C, 이하 "EX-CELL 293 배지"라 칭함)에서 배양된 F2N 세포를 원심분리를 수행하여 Modified EX-CELL 293 배지(SAFC, LIK, 65237, 맞춤 주문 생산)를 이용하여, ㎖ 당 1x106 개의 세포 농도로 250 ㎖ Erlenmeyer Flask에 80 ㎖ 또는 1 ℓ Erlenmeyer Flask에 200 ㎖ 접종하였다. 형질 감염 당일, 80 ㎖ 접종한 경우, 단일클론 항체를 코딩하는 DNA 100 ㎍와 FreeStyleTM Max 시약 100 ㎕을 각각 OptiPRO SFM II(Invitrogen, USA, 12309) 배지를 이용하여 1.6 ㎖ volume으로 희석한 후, 가볍게 혼합하여 주었다. 200 ㎖ 접종한 경우, DNA 250 ㎍와 FreeStyleTM Max 시약 250 ㎕를 각각 OptiPRO SFM II 배지를 이용하여 4 ㎖ volume으로 희석한 후, 가볍게 혼합하여 주었다. 각각 혼합한 후, 즉시 희석된 FreeStyleTM Max 시약 용액을 DNA가 희석되어 있는 용액과 혼합한 다음, 상온에서 19분 반응하였다. 상온에서 19분 반응하는 동안, 전날 접종된 F2N 세포를 신선한 Modified EX-CELL 293 배지를 이용하여 0.8x106 개의 세포 농도로 희석하였으며, 19분 반응 후, DNA와 FreeStyleTM Max 시약 혼합 용액을 F2N 세포에 처리함으로써 형질 감염을 진행하였다. 형질 감염 다음날, 동량의 EX-CELL 293 배지를 형질 감염된 세포에 첨가하여 7~8일 동안 배양함으로써 단일클론 항체를 생산하였다.
실시예 6: 단일클론 항체의 HA 결합능 검증
실시예 5의 방법으로 생산된 항체의 HA 결합능을 검증하고자 H3N2 인플루엔자 바이러스의 HA 중 단량체 HA와 그 서브유닛(HA1), 삼량체 HA를 확보하여 HA-ELISA를 진행하였다. 인플루엔자 A 바이러스의 재조합 단량체 HA(11056-V08H)와 HA1 서브유닛(11056-V08H1)은 Sino Biological Inc.(China)에서 구입하였다. 구입된 HA는 원래 HA의 1번 Met부터 531번 Ile까지의 아미노산 서열로 구성되어 있으며 HA1 서브유닛은 HA의 N-말단 분절(Met1-Arg345)로 구성되어 있다. 이들은 C-말단에 히스티딘(polyhistidine) 잔기를 포함하고 있으며 형질 감염된 인간 세포에서 생산되었다. 재조합 삼량체 HA(FR-61)는 IRR(Influenza Reagent Resource, USA)에서 제공하였다. 상기 삼량체 HA는 C-말단 펩티드에 트롬빈(thrombin) 절단 자리, 삼량체 형성 유도 도메인(trimerizing domain; foldon) 및 6개의 히스티딘 잔기를 포함하는 구조이며, 바큘로 바이러스 시스템(baculovirus system)을 이용하여 생산되었다.
항체의 항원(HA)과의 반응성은 항원(HA)과 항체를 이용한 효소결합 면역흡수 분석법(ELISA)에 의해 측정되었다. 자세한 방법은 하기와 같다. 먼저 50 ㎕의 삼량체 HA 항원(250 ng/㎖)을 각각 96-웰 마이크로타이터 플레이트(Nunc, Denmark, 449824)의 웰에 흡착시켰다. 상기 플레이트를 1% BSA가 함유된 인산 완충용액 (Teknova, USA, D5120)으로 처리하여 블로킹한 후, 3 배씩 연속적으로 희석한 항체 샘플(starting concentration: 1 ㎍/㎖)을 플레이트의 각 웰에 추가하였다. 이 후, 실온에서 1 시간 반응(incubation)시킨 다음, 과산화효소가 표지된 염소의 항-인간 감마 항체(Zymed, USA, 62.8420)로 감지하였다. 실온에서 1시간 반응 후 테트라메틸벤즈이딘(Tetramethylbenzydine: TMB, Sigma-Aldrich, USA, T0440)과 반응시키고, 본 반응을 1 N HCl로 중지시켰다. 플레이트 리더기(Spectramax plus 384, Molecular Device)를 사용해 450/570nm에서 흡광도를 측정하고, 그래프패드 프리즘 프로그램(GraphPad Software Inc. USA)을 이용하여 항원-항체간 반응성을 그래프로 나타내었다.
실험에 사용한 모든 후보항체는 삼량체 HA에는 높은 결합력을 나타내었으나 단량체 HA나 HA1 서브유닛에는 결합하지 않았다. (도4)
실시예 7: 바이러스에 대한 생체외(in vitro) 중화 활성 조사
HA-ELISA를 진행하였던 항체 중 5개 항체를 이용하여 다양한 독감 바이러스에 대한 생체 외 중화 활성를 확인하기 위하여 MN (microneutralization) 분석을 수행하였다.
실시예 7-1: MDCK 세포주 배양과 바이러스 농도 결정
MDCK(Madin-Darby canine kidney)는 London line(MDCK-L)을 사용하였다. MDCK 세포주는 10%의 FBS(Atlas Biologicals, USA, F0500A), 1X 페니실린/스트렙토마이신(pecinillin/streptomycin; Gibco, USA, 15140), 25 mM 헤페스(HEPES; Gibco, USA, 15630) 및 2 mM L-글루타민(glutamine; Gibco, USA, 25030)이 포함된 DMEM(Gibco, USA, 11965) 배지를 이용하여 37℃의 5% CO2 습윤(humidified) 세포배양기에서 배양되었다.
바이러스 농도는 세포 기반 ELISA 방법으로 정량하여, TCID50(Median tissue culture infective dose)를 구하였다. 상기 방법은 아래와 같이 진행되었다. 먼저 바이러스 저장액(Virus stock)을 바이러스 희석제(virus diluent)[DMEM(Gibco, USA), 3% BSA(Gibco, USA, 15260), 1X 페니실린/스트렙토아미신(pecinillin/streptomycin, Gibco, USA), 25 mM 헤페스(HEPES, Gibco, USA)]로 10배씩 연속 희석하여 96 웰 플레이트의 웰에 100 ㎕씩 첨가하였다. 음성 대조군(Negative control)으로는 바이러스가 포함되어 있지 않은 바이러스 희석제(virus diluent)를 첨가하였다. 이후 배양 중인 MDCK 세포주에 트립신(trypsin)을 처리하여 배양 용기에서 분리한 후, MDCK 배양 배지를 처리하여 트립신을 중화하였다. 인산 완충용액을 이용하여 2번 세척한 후, 바이러스 희석제로 세포 펠렛(pellet)을 희석하여 5×105 cells/㎖ 농도로 맞추었다. 바이러스가 들어있는 96 웰 플레이트에 3-4 ㎍/㎖ TPCK-트립신(Sigma, USA)을 넣은 이후 즉시 상기 MDCK 세포주 100 ㎕씩 첨가하여 37℃의 5% CO2 습윤(humidified) 세포배양기에서 20시간 반응시켰다. 반응시킨 플레이트를 인산 완충용액으로 1회 세척한 다음 냉각시킨 아세톤(acetone): 인산 완충용액(PBS)(80:20) 혼합액을 각 웰에 200 ㎕ 씩 첨가해서 8분간 고정(fix)한 후 상온에서 20분간 건조하였다. 각 플레이트에 인산 완충용액을 웰 당 200 ㎕ 첨가해서 2회 세척하고 비오틴화(biotinylated)된 anti-NP(nuclear protein) 단일클론 항체(Milipore, USA, MAB8257B)를 1% BSA가 포함된 인산 완충용액(인산 완충용액, 0.1% Tween-20)으로 2,000배 희석하여 웰 당 100 ㎕를 첨가하고 상온에서 1시간 반응시켰다. 웰 당 200 ㎕의 인산 완충용액으로 3회 세척한 후 1% BSA가 포함된 인산 완충용액에 20,000배 희석된 스트렙토아비딘(streptoavidin)-HRP 접합 항체를 웰 당 100 ㎕씩 첨가하고 상온에서 1시간 반응시켰다. 인산 완충용액으로 4회 세척한 후 OPD(Sigma, USA, P8287) 용액을 웰 당 100 ㎕ 첨가하고 상온에서 10분간 발색시키고, 3 M HCl을 웰 당 50 ㎕ 처리하여 반응을 종료시킨 후, OD490를 측정하였다. Reed & Muench(The American 1938)에 의한 방법을 이용하여 측정된 OD490에서 TCID50을 계산하였다.
실시예 7-2: MN 분석법
각 항체는 바이러스 희석제를 이용하여 1차적으로 10 ㎍/㎖ 농도로 맞추었다. 이 농도를 초기 농도로 하여, 다시 바이러스 희석제를 이용하여 연속적으로 2배씩 희석하여 96 웰 플레이트의 웰 당 50 ㎕씩 첨가하고 100 TCID50에 해당하는 농도의 바이러스를 웰 당 50 ㎕씩 첨가하여 37℃의 5% CO2 습윤(humidified) 세포 배양기에서 1시간 동안 반응시켰다. 그 후, 3-4 ㎍/㎖ 농도의 TPCK-trypsin(Sigma, USA, T1426)을 각 웰에 넣고 다시 100 ㎕씩의 처리된 MDCK 세포주를 넣은 후, 37℃의 5% CO2 습윤(humidified) 세포 배양기에서 20시간 반응시켰다. 20 시간 반응시킨 후부터의 과정은 실시예 4-1에 언급된 바이러스 정량화에 사용된 방법과 동일한 방법으로 MN 분석을 진행하여, OD490 수치를 측정하였다. 세포만 넣은 웰의 OD490 수치보다 높은 수치를 보이는 웰은 바이러스가 감염된 것으로 판단하였다. 각 항체별로 바이러스 항원이 검출되지 않는 여러 OD490 수치 중에서 항체의 제일 낮은 농도(㎍/㎖)를 표 1에 나타내었으며, 이 항체의 농도가 낮으면 낮을수록 바이러스의 중화 활성이 높음을 의미한다.
표 1 선별된 항체와 여러 가지 H3N2 바이러스를 이용한 마이크로중화시험법 (Micromeutralization assay; MN assay) 결과(단위: ㎍/㎖)
mab ID A/Hong Kong/68 A/Brisbane/10/07 A/Puerto Rico/8/34
CT 301 >80 0.039 >80
CT 302 >80 0.039 >80
CT 303 >80 0.156 >80
CT 305 >80 0.078 >80
CT 308 >80 0.039 >80
H3 서브타입 독감 바이러스에 대한 5개 후보 항체의 MN 분석 결과, 모두 A/Brisbane/10/07 (H3N2) 바이러스에 대해서는 높은 중화 활성을 나타내었으나 A/Hong Kong/68 (H3N2)와 A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) 에 대해서는 중화 활성을 나타내지 못했다 (표1).
상기 항체들이 같은 H3N2 바이러스임에도 다른 중화 활성을 나타내고 있어 임의로 CT302를 선정하여 다양한 연도에 분리된 H3N2 인플루엔자 바이러스에 대한 중화 활성을 MN 분석법을 이용하여 검증하였다. 그 결과 1997년 분리된 A/Sydney/5/97 바이러스까지는 중화 활성을 나타내었으나 그 이전에 분리된 인플루엔자 바이러스에 대해서는 전혀 중화 활성을 나타내지 못하였다 (표2).
표 2 선별된 항체와 여러 가지 타입의 바이러스를 이용한 마이크로중화시험법 (Micromeutralization assay; MN assay) 결과
Strains MN titer (μg/mL)
A/Beijing/353/89-X109 >20
A/Beijing/32/92-R-H3 >20
A/Johannesburg/33/94 R-H3 >20
A/Nanchang/933/95 >20
A/Sydney/5/97 0.019
A/Panama/2007/99 0.039
Wyomin/3/03.rg 0.0024
A/Brisbane/10/07 0.009
실시예 8: 바이러스에 의한 적혈구 응집반응에 대한 항체의 억제 능력 조사
v-bottom 96-웰 플레이트 상에서 항체를 2배씩 연속적으로 희석하고 4배의 HA 유니트의 바이러스를 첨가하여 혼합시켰다. 혼합한 플레이트를 상온에서 30분간 반응시킨 후, 각각의 웰에 1% avian red blood cell를 첨가하였다. 혈구응집 억제 엔드 포인트(end point)는 응집 반응이 관찰되지 않는 가장 낮은 항체 농도로 결정하였다.
그 결과, 실험하였던 모든 항체들이 시험에 사용한 H3N2 서브타입 바이러스 (A/Brisbane/10/07, A/Sydney/5/97, A/Philippines/2/82, A/Hong Kong/68 )에 대해 혈구응집을 고농도(>20 ㎍/㎖)에서도 억제하지 못하였다(표 3).
인플루엔자 바이러스는 HA를 매개로 숙주세포에 결합하여 내포작용으로 세포 내로 들어간 후 다시 HA의 구조변화에 따라 바이러스 막과 엔도좀 막 (endosomal membrane)이 융합되면서 유전체가 세포질내로 들어가 감염이 되는 것으로 알려져 있다. 상기 표2와 하기 표3의 결과는 본 발명에 따른 항체가 바이러스의 숙주세포 결합은 저해 할 수 없으나 다른 방법으로 바이러스의 감염을 저해한 다는 것을 시사하고 있다.
표 3 H3N2 서브타입 바이러스에 대한 선별된 항체의 혈구응집 억제시험 (Hemagglutination-inhibition test) 결과
Strains HI titer
A/Hong Kong/68 >20 μg/ml
A/Philippines/2/82 >20 μg/ml
A/Sydney/5/97 >20 μg/ml
A/Brisbane/10/07 >20 μg/ml
실시예 9: 바이러스에 대한 생체 내 (in vivo) 예방 및 치료 효과 조사
실시예 9-1: 마우스를 통한 항체의 인플루엔자 독감바이러스의 예방 및 치료 효과 조사
CT302 항체가 마우스에서 H3N2 바이러스에 대한 예방 및 치료 효과를 가지는지 조사하기 위하여 다음과 같이 실험을 진행하였다. 5마리로 구성된 마우스의 각 그룹에 비강을 통하여 10 LD50의 A/Brisbane/10/07 을 감염시켰다. CT302 항체는 kg 당 2 또는 10 ㎎의 양을 바이러스 감염 24시간 전, 또는 바이러스 감염 후 24 시간이나 48시간 후에 복강 내 주사를 통해 마우스에 투여되었다.
실험 결과, 도 5에서와 같이 음성 대조군의 경우 바이러스 감염 9일 후 20%의 생존율을 보이는 반면 CT302 항체를 바이러스 감염 24시간 전에 2 ㎎/kg 또는 10 ㎎/kg 를 주사할 경우 모든 마우스가 생존하여 CT302 항체가 바이러스 감염에 대해서 예방 효과가 있음을 확인하였다. CT302 항체의 치료 효과를 확인하기 위하여 바이러스 감염 후 항체를 주사할 경우 10 ㎎/kg의 항체를 24시간 후 투여하였을 때 80%, 48시간 후 투여하였을 때 60%, 2 ㎎/kg의 항체를 24시간 또는 48시간 후에 투여하였을 때에는 40%의 생존율을 나타내고 있어 CT302 항체가 바이러스 감염에 대한 치료효과가 있음을 확인하였다.
실시예 9-2: 페렛을 이용한 항체의 인플루엔자 독감바이러스의 치료 효과 조사
인플루엔자 연구에 많이 사용되고 있는 페렛을 이용하여 CT302 항체가 H3N2 바이러스에 대하여 치료 효과를 가지는지 조사하기 위하여 다음과 같이 실험을 진행하였다.
각 시험군은 9마리로 구성되었으며 H3N2 (A/Brisbane/10/07) 인플루엔자 바이러스를 1×106 TCID50/ml로 비강 및 기관에 접종하였다. 바이러스 접종 1일 뒤 인플루엔자와 무관한 CT-P6항체 또는 CT302를 30 mg/kg으로 단 회 정맥 주사하였다.
바이러스 접종 후 1, 3, 5, 9일째 각 시험군에서 항생제를 포함한 PBS용액 1 mL을 이용하여 페럿의 비강 세척액을 채취한 후 각 군당 2 ~ 3마리씩의 페럿을 희생시켜 폐 조직을 확보하여 비강 세척액과 폐 조직에서의 바이러스 농도를 세포주 (MDCK: Mardin-Darby Canine Kidney)를 이용하여 측정하였다. 세포주를 이용한 바이러스 적정시험을 위하여 비강세척액은 원심 분리하여, 폐조직은 항생제를 포함한 PBS용액 1 mL에 페럿 폐 조직 1 g을 넣고 분쇄기를 이용 파쇄, 원심 분리하여 상등액을 확보한 다음 항생제를 포함한 용액으로 단계별로 희석하였다. 희석된 상층액을 미리 준비된 세포주에 감염시킨 후, 37 ℃에서 72 시간 동안 배양하였다. 세포병변효과가 현미경으로 관찰되면 세포주의 배양액 50ul를 취하여 동량의 0.5% 계적혈구와 혼합 후, 30분간 반응시킨 다음 혈구 응집 반응 여부를 통해 바이러스 증식여부를 평가하였다.
H3N2 (A/Brisbane/10/07) 인플루엔자 바이러스 접종24시간 후 CT-P6와 CT302를 투여한 실험동물 페럿의 비강세척액에서 바이러스 역가를 측정한 결과, CT-P6의 경우 바이러스 접종 1일 후에 약 log 4 TCID50/㎖ 이상의 바이러스 역가가 관찰되었고, 접종 3일 후까지 비강세척액에서 바이러스 역가가 유지되었다. 5일 이후에는 바이러스가 감소되었고 (약 log 3.2 TCID50/㎖), 9일에는 바이러스가 검출되지 않았다. CT302를 투여한 군에서는 바이러스 접종1일 후에 CT-P6를 투여한 군과 비슷한 바이러스 역가를 보였지만, 3일 이후에는 바이러스가 현저히 감소되었다가 9일에는 바이러스가 전혀 검출되지 않아 페럿 비강세척액에서 바이러스의 제거가 빨리 일어남을 확인하였다.
실험동물 폐 조직에서의 바이러스 역가를 측정한 결과, CT-P6를 투여한 군의 경우 바이러스 접종 1일 후에 약 log 4.5 TCID50/㎖ 의 바이러스 역가가 관찰되었고, 3일 (약 log 4.2 TCID50/㎖), 5일 (약 log 2.0 TCID50/㎖)에는 바이러스 역가가 감소되었다가 9일에는 바이러스가 검출되지 않았다. CT302를 투여한 시험군에서는 바이러스 접종 1일 후에는 CT-P6를 투여한 군과 비슷한 역가를 보였으나, 3일 이후에는 바이러스가 감소되었다가 (3일: 약 log 3.7 TCID50/㎖, 5일: 약 log 0.3 TCID50/㎖) 9일에는 바이러스가 전혀 검출되지 않아 페럿의 폐 조직에서 바이러스 제거가 빨리 일어남을 확인하였다. (도 6)
본 발명의 결합 분자는 인플루엔자 A 바이러스에 대하여 결합 및 중화 활성을 가지므로 상기 인플루엔자 A 바이러스로 인한 질환에 대하여 예방 및 치료에 유용하며, 인플루엔자 A 바이러스의 감염 여부 진단 방법에도 유용하다.
서열번호 1 내지 112는 인플루엔자 H3 서브타입 바이러스에 특이적으로 결합하는 결합 분자에 관한 것이다.

Claims (47)

  1. 인플루엔자 A 바이러스에 특이적으로 결합하는 결합 분자.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 인플루엔자 A 바이러스는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스인 것을 특징으로 하는 결합 분자.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 결합 분자는
    서열번호 1 내지 서열번호 14 중 어느 하나,
    서열번호 15 내지 서열번호 28 중 어느 하나,
    서열번호 29 내지 서열번호 42 중 어느 하나,
    서열번호 43 내지 서열번호 56 중 어느 하나,
    서열번호 57 내지 서열번호 70 중 어느 하나 및
    서열번호 71 내지 서열번호 84 중 어느 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합 분자.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 결합 분자는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 결합 분자:
    제 1군은 서열번호 1, 서열번호 15, 서열번호 29, 서열번호 43, 서열번호 57, 및 서열번호 71;
    제 2군은 서열번호 2, 서열번호 16, 서열번호 30, 서열번호 44, 서열번호 58, 및 서열번호 72;
    제 3군은 서열번호 3, 서열번호 17, 서열번호 31, 서열번호 45, 서열번호 59, 및 서열번호 73;
    제 4군은 서열번호 4, 서열번호 18, 서열번호 32, 서열번호 46, 서열번호 60, 및 서열번호 74;
    제 5군은 서열번호 5, 서열번호 19, 서열번호 33, 서열번호 47, 서열번호 61, 및 서열번호 75;
    제 6군은 서열번호 6, 서열번호 20, 서열번호 34, 서열번호 48, 서열번호 62, 및 서열번호 76;
    제 7군은 서열번호 7, 서열번호 21, 서열번호 35, 서열번호 49, 서열번호 63, 및 서열번호 77;
    제 8군은 서열번호 8, 서열번호 22, 서열번호 36, 서열번호 50, 서열번호 64, 및 서열번호 78;
    제 9군은 서열번호 9, 서열번호 23, 서열번호 37, 서열번호 51, 서열번호 65, 및 서열번호 79;
    제 10군은 서열번호 10, 서열번호 24, 서열번호 38, 서열번호 52, 서열번호 66, 및 서열번호 80;
    제 11군은 서열번호 11, 서열번호 25, 서열번호 39, 서열번호 53, 서열번호 67, 및 서열번호 81;
    제 12군은 서열번호 12, 서열번호 26, 서열번호 40, 서열번호 54, 서열번호 68, 및 서열번호 82;
    제 13군은 서열번호 13, 서열번호 27, 서열번호 41, 서열번호 55, 서열번호 69, 및 서열번호 83; 및
    제 14군은 서열번호 14, 서열번호 28, 서열번호 42, 서열번호 56, 서열번호 70, 및 서열번호 84.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 결합 분자는 서열번호 85 내지 서열번호 98 중 어느 하나 및 서열번호 99 내지 서열번호 112 중 어느 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합분자.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 결합 분자는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 결합 분자:
    제 1군은 서열번호 85 및 서열번호 99;
    제 2군은 서열번호 86 및 서열번호 100;
    제 3군은 서열번호 87 및 서열번호 101;
    제 4군은 서열번호 88 및 서열번호 102;
    제 5군은 서열번호 89 및 서열번호 103;
    제 6군은 서열번호 90 및 서열번호 104;
    제 7군은 서열번호 91 및 서열번호 105;
    제 8군은 서열번호 92 및 서열번호 106;
    제 9군은 서열번호 93 및 서열번호 107;
    제 10군은 서열번호 94 및 서열번호 108;
    제 11군은 서열번호 95 및 서열번호 109;
    제 12군은 서열번호 96 및 서열번호 110;
    제 13군은 서열번호 97 및 서열번호 111; 및
    제 14군은 서열번호 98 및 서열번호 112.
  7. 인플루엔자 A 바이러스에 중화활성을 나타내는 항체.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 인플루엔자 A 바이러스는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스인 것을 특징으로 하는 항체.
  9. 제 7항에 있어서,
    상기 항체는,
    카밧 방법(Kabat numbering system)에 의하며,
    L(24)-L(25)-L(26)-L(27)-L(27A)-L(27B)-L(27C)-L(28)-L(29)-L(30)-L(31)-L(32)-L(33)-L(34)로 표시되는 경쇄 CDR1 영역;
    L(50)-L(51)-L(52)-L(53)-L(54)-L(55)-L(56)로 표시되는 경쇄 CDR2 영역;
    L(89)-L(90)-L(91)-L(92)-L(93)-L(94)-L(95)-L(95A)-L(95B)-L(95C)-L(96)-L(97)로 표시되는 경쇄 CDR3 영역;
    H(31)-H(32)-H(33)-H(34)-H(35)로 표시되는 중쇄 CDR1 영역;
    H(50)-H(51)-H(52)-H(52A)-H(53)-H(54)-H(55)-H(56)-H(57)-H(58)-H(59)-H(60)-H(61)-H(62)-H(63)-H(64)-H(65)로 표시되는 중쇄 CDR2 영역; 및
    H(95)-H(96)-H(97)-H(98)-H(99)-H(100)-H(100A)-H(100B)-H(100C)-H(100D)-H(100E)-H(100F)-H(100G)-H(100H)-H(100I)-H(100J)-H(100K)-H(101)-H(102)로 표시되는 중쇄 CDR3 영역을 포함하고,
    상기 L(24)는 T, S, G 또는 A;
    L(25)는 G 또는 A;
    L(26)는 S, Y 또는 T;
    L(27)는 S, K, T 또는 Q;
    L(27A)는 S;
    L(27B)는 N 또는 D;
    L(27C)는 I 또는 V;
    L(28)는 G, L 또는 D;
    L(29)는 A, G 또는 I;
    L(30)는 D, Y 또는 S;
    L(31)는 Y, Q, K 또는 N;
    L(32)는 A, Y 또는 D;
    L(33)는 V, T 또는 L;
    L(34)는 H, S 또는 N;
    L(50)는 A, Q, G, A 또는 D;
    L(51)는 N, D, V 또는 A;
    L(52)는 T, S 또는 N;
    L(53)는 N, Q 또는 H;
    L(54)는 R 또는 L;
    L(55)는 P 또는 E;
    L(56)는 S 또는 T;
    L(89)는 Q 또는 N;
    L(90)는 S, A 또는 Q;
    L(91)는 Y, G, F 또는 H;
    L(92)는 D, H 또는 T;
    L(93)는 N, T, R 또는 S;
    L(94)는 I, S, N, G 또는 F;
    L(95)는 L, N 또는 S;
    L(95A)는 S, N 또는 T;
    L(95B)는 G 또는 L;
    L(95C)는 S 또는 F;
    L(96)는 W, V, E 또는 P;
    L(97)는 V, I, L 또는 T;
    H(31)는 S, T, D, N, I 또는 L;
    H(32)는 H, Y 또는 F;
    H(33)는 A, P, E 또는 G;
    H(34)는 I, V 또는 M;
    H(35)는 S, T, H 또는 N;
    H(50)는 D, E, G, n, R, L 또는 V;
    H(51)는 I;
    H(52)는 L, I, S, M 또는 A;
    H(52A)는 P, W, Y 또는 F;
    H(53)는 G, T 또는 D;
    H(54)는 F, S 또는 G;
    H(55)는 G, E 또는 S;
    H(56)는 S, T, A 또는 N;
    H(57)는 P, A, K 또는 E;
    H(58)는 I, K, N, D, E, F, Y 또는 S;
    H(59)는 Y 또는 S;
    H(60)는 A;
    H(61)는 P, Q, D 또는 E;
    H(62)는 N, K, R, S, E, Q 또는 N;
    H(63)는 L, F 또는 V;
    H(64)는 K, Q, R 또는 L;
    H(65)는 G, A 또는 P;
    H(95)는 Q, E, D 또는 A;
    H(96)는 D, Y, K, P, F, A 또는 V;
    H(97)는 P, V 또는 G;
    H(98)는 I, L 또는 G;
    H(99)는 K, M, N, L, S 또는 A;
    H(100)는 I, Y, S 또는 A;
    H(100A)는 F, S, D, L, G 또는 H;
    H(100B)는 G 또는 S;
    H(100C)는 V, Y, G 또는 T ;
    H(100D)는 V, S, Y 또는 W;
    H(100E)는 I, Y, F, S, G 또는 V;
    H(100F)는 S, N, T, F 또는 P;
    H(100G)는 P, S 또는 F;
    H(100H)는 P 또는 R;
    H(100I)는 A, H 또는 S;
    H(100J)는 L, F 또는 G;
    H(100K)는 M;
    H(101)는 D;
    H(102)는 R, P, V 또는 Y인 것을 특징으로 하는 항체.
  10. 제 7항에 있어서,
    상기 항체는,
    서열번호 1 내지 서열번호 14 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR1 영역;
    서열번호 15 내지 서열번호 28 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR2 영역;
    서열번호 29 내지 서열번호 42 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR3 영역;
    서열번호 43 내지 서열번호 56 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR1 영역;
    서열번호 57 내지 서열번호 70 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR2 영역; 및
    서열번호 71 내지 서열번호 84 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  11. 제 7항에 있어서,
    상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체:
    제 1군은 서열번호 1을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 15를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 29를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 43을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 57을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 71을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 2군은 서열번호 2를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 16을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 30을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 44를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 58을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 72를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 3군은 서열번호 3을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 31을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 45를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 59를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 73을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 4군은 서열번호 4를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 32를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 46을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 60을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 74를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 5군은 서열번호 5를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 19를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 33을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 47을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 61을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 75를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 6군은 서열번호 6을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 20을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 34를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 48을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 62를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 76을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 7군은 서열번호 7을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 21을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 35를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 49를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 63을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 77을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 8군은 서열번호 8을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 22를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 36을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 64를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 78을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 9군은 서열번호 9를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 23을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 37을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 51을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 65를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 79를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 10군은 서열번호 10을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 24를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 38을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 52를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 66을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 80을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 11군은 서열번호 11을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 25를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 39를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 53을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 67을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 81을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 12군은 서열번호 12를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 26을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 40을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 54를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 82를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 13군은 서열번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 27을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 55를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 69를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 83을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 및
    제 14군은 서열번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 28을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 42를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 56을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 70을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 84를 포함하는 중쇄 CDR3 영역.
  12. 제 7항에 있어서,
    상기 항체는 서열번호 85 내지 98 중 하나를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99 내지 112 중 하나를 포함하는 중쇄 가변부를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  13. 제 7항에 있어서,
    상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체:
    제 1군은 서열번호 85를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 2군은 서열번호 86을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 100을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 3군은 서열번호 87을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 101을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 4군은 서열번호 88을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 102를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 5군은 서열번호 89를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 103을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 6군은 서열번호 90을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 104를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 7군은 서열번호 91을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 105를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 8군은 서열번호 92를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 106을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 9군은 서열번호 93을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 107을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 10군은 서열번호 94를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 108을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 11군은 서열번호 95를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 109를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 12군은 서열번호 96을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 110을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 13군은 서열번호 97을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 111을 포함하는 중쇄 가변부; 및
    제 14군은 서열번호 98을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 112를 포함하는 중쇄 가변부.
  14. 제 7항에 있어서,
    상기 항체에 약물이 추가로 부착되어 있는 것을 특징으로 하는 항체.
  15. 제 7항 내지 제 14항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 유전자를 포함하는 벡터.
  16. 제 15항의 벡터를 포함하는 세포주.
  17. 제 16항에 있어서,
    상기 세포주는 F2N, HEK293, CHOK1, DG44, DXB11, CHO-S, BHK, Sp2/0, 또는 NS인 것을 특징으로 하는 세포주.
  18. 제 15항의 벡터를 세포주에 형질 감염시켜 상기 결합 분자를 생산하는 방법.
  19. 제 18항에 있어서, 상기 세포주는 F2N, HEK293, CHOK1, DG44, DXB11, CHO-S, BHK, Sp2/0, 또는 NS인 것을 특징으로 하는 결합 분자를 생산하는 방법.
  20. 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스에 결합하는 결합분자를 발현하는 벡터의 제조 방법에 있어서,
    인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 예방접종을 한 포유동물로부터 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)를 분리하는 단계;
    상기 분리된 PBMC를 이용하여 항체 라이브러리(library)를 제작하는 단계;
    상기 항체 라이브러리 중 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스에 결합하는 항체를 선별하는 단계; 및
    상기 선별된 항체를 벡터에 클로닝하는 단계를 포함하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  21. 제 20항에 있어서,
    상기 항체는,
    카밧 방법(Kabat numbering system)에 의하며,
    L(24)-L(25)-L(26)-L(27)-L(27A)-L(27B)-L(27C)-L(28)-L(29)-L(30)-L(31)-L(32)-L(33)-L(34)로 표시되는 경쇄 CDR1 영역;
    L(50)-L(51)-L(52)-L(53)-L(54)-L(55)-L(56)로 표시되는 경쇄 CDR2 영역;
    L(89)-L(90)-L(91)-L(92)-L(93)-L(94)-L(95)-L(95A)-L(95B)-L(95C)-L(96)-L(97)로 표시되는 경쇄 CDR3 영역;
    H(31)-H(32)-H(33)-H(34)-H(35)로 표시되는 중쇄 CDR1 영역;
    H(50)-H(51)-H(52)-H(52A)-H(53)-H(54)-H(55)-H(56)-H(57)-H(58)-H(59)-H(60)-H(61)-H(62)-H(63)-H(64)-H(65)로 표시되는 중쇄 CDR2 영역; 및
    H(95)-H(96)-H(97)-H(98)-H(99)-H(100)-H(100A)-H(100B)-H(100C)-H(100D)-H(100E)-H(100F)-H(100G)-H(100H)-H(100I)-H(100J)-H(100K)-H(101)-H(102)로 표시되는 중쇄 CDR3 영역을 포함하고,
    상기 L(24)는 T, S, G 또는 A;
    L(25)는 G 또는 A;
    L(26)는 S, Y 또는 T;
    L(27)는 S, K, T 또는 Q;
    L(27A)는 S;
    L(27B)는 N 또는 D;
    L(27C)는 I 또는 V;
    L(28)는 G, L 또는 D;
    L(29)는 A, G 또는 I;
    L(30)는 D, Y 또는 S;
    L(31)는 Y, Q, K 또는 N;
    L(32)는 A, Y 또는 D;
    L(33)는 V, T 또는 L;
    L(34)는 H, S 또는 N;
    L(50)는 A, Q, G, A 또는 D;
    L(51)는 N, D, V 또는 A;
    L(52)는 T, S 또는 N;
    L(53)는 N, Q 또는 H;
    L(54)는 R 또는 L;
    L(55)는 P 또는 E;
    L(56)는 S 또는 T;
    L(89)는 Q 또는 N;
    L(90)는 S, A 또는 Q;
    L(91)는 Y, G, F 또는 H;
    L(92)는 D, H 또는 T;
    L(93)는 N, T, R 또는 S;
    L(94)는 I, S, N, G 또는 F;
    L(95)는 L, N 또는 S;
    L(95A)는 S, N 또는 T;
    L(95B)는 G 또는 L;
    L(95C)는 S 또는 F;
    L(96)는 W, V, E 또는 P;
    L(97)는 V, I, L 또는 T;
    H(31)는 S, T, D, N, I 또는 L;
    H(32)는 H, Y 또는 F;
    H(33)는 A, P, E 또는 G;
    H(34)는 I, V 또는 M;
    H(35)는 S, T, H 또는 N;
    H(50)는 D, E, G, n, R, L 또는 V;
    H(51)는 I;
    H(52)는 L, I, S, M 또는 A;
    H(52A)는 P, W, Y 또는 F;
    H(53)는 G, T 또는 D;
    H(54)는 F, S 또는 G;
    H(55)는 G, E 또는 S;
    H(56)는 S, T, A 또는 N;
    H(57)는 P, A, K 또는 E;
    H(58)는 I, K, N, D, E, F, Y 또는 S;
    H(59)는 Y 또는 S;
    H(60)는 A;
    H(61)는 P, Q, D 또는 E;
    H(62)는 N, K, R, S, E, Q 또는 N;
    H(63)는 L, F 또는 V;
    H(64)는 K, Q, R 또는 L;
    H(65)는 G, A 또는 P;
    H(95)는 Q, E, D 또는 A;
    H(96)는 D, Y, K, P, F, A 또는 V;
    H(97)는 P, V 또는 G;
    H(98)는 I, L 또는 G;
    H(99)는 K, M, N, L, S 또는 A;
    H(100)는 I, Y, S 또는 A;
    H(100A)는 F, S, D, L, G 또는 H;
    H(100B)는 G 또는 S;
    H(100C)는 V, Y, G 또는 T ;
    H(100D)는 V, S, Y 또는 W;
    H(100E)는 I, Y, F, S, G 또는 V;
    H(100F)는 S, N, T, F 또는 P;
    H(100G)는 P, S 또는 F;
    H(100H)는 P 또는 R;
    H(100I)는 A, H 또는 S;
    H(100J)는 L, F 또는 G;
    H(100K)는 M;
    H(101)는 D;
    H(102)는 R, P, V 또는 Y인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  22. 제 20항에 있어서,
    상기 항체는,
    서열번호 1 내지 서열번호 14 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR1 영역;
    서열번호 15 내지 서열번호 28 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR2 영역;
    서열번호 29 내지 서열번호 42 중 하나를 포함하는 경쇄 CDR3 영역;
    서열번호 43 내지 서열번호 56 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR1 영역;
    서열번호 57 내지 서열번호 70 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR2 영역; 및
    서열번호 71 내지 서열번호 84 중 하나를 포함하는 중쇄 CDR3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  23. 제 20항에 있어서,
    상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법:
    제 1군은 서열번호 1을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 15를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 29를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 43을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 57을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 71을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 2군은 서열번호 2를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 16을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 30을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 44를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 58을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 72를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 3군은 서열번호 3을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 31을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 45를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 59를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 73을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 4군은 서열번호 4를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 32를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 46을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 60을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 74를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 5군은 서열번호 5를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 19를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 33을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 47을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 61을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 75를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 6군은 서열번호 6을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 20을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 34를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 48을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 62를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 76을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 7군은 서열번호 7을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 21을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 35를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 49를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 63을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 77을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 8군은 서열번호 8을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 22를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 36을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 64를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 78을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 9군은 서열번호 9를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 23을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 37을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 51을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 65를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 79를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 10군은 서열번호 10을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 24를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 38을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 52를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 66을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 80을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 11군은 서열번호 11을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 25를 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 39를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 53을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 67을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 81을 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 12군은 서열번호 12를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 26을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 40을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 54를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 82를 포함하는 중쇄 CDR3 영역;
    제 13군은 서열번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 27을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 55를 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 69를 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 83을 포함하는 중쇄 CDR3 영역; 및
    제 14군은 서열번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1 영역, 서열번호 28을 포함하는 경쇄 CDR2 영역, 서열번호 42를 포함하는 경쇄 CDR3 영역, 서열번호 56을 포함하는 중쇄 CDR1 영역, 서열번호 70을 포함하는 중쇄 CDR2 영역, 및 서열번호 84를 포함하는 중쇄 CDR3 영역.
  24. 제 20항에 있어서,
    상기 항체는 서열번호 85 내지 98 중 하나를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99 내지 112 중 하나를 포함하는 중쇄 가변부를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  25. 제 20항에 있어서,
    상기 항체는 하기의 군 중 선택되는 어느 하나의 군의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법:
    제 1군은 서열번호 85를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 99를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 2군은 서열번호 86을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 100을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 3군은 서열번호 87을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 101을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 4군은 서열번호 88을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 102를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 5군은 서열번호 89를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 103을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 6군은 서열번호 90을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 104를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 7군은 서열번호 91을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 105를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 8군은 서열번호 92를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 106을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 9군은 서열번호 93을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 107을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 10군은 서열번호 94를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 108을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 11군은 서열번호 95를 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 109를 포함하는 중쇄 가변부;
    제 12군은 서열번호 96을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 110을 포함하는 중쇄 가변부;
    제 13군은 서열번호 97을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 111을 포함하는 중쇄 가변부; 및
    제 14군은 서열번호 98을 포함하는 경쇄 가변부 및 서열번호 112를 포함하는 중쇄 가변부.
  26. 제 20항에 있어서,
    상기 선별된 항체는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 HA 단백질에 결합하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  27. 제 20항에 있어서,
    상기 PBMC는 B 세포, T 세포, 대식세포, 수지상세포 및 NK 세포 중 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  28. 제 20항에 있어서,
    상기 포유동물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  29. 제 20항에 있어서,
    상기 항체에 약물이 추가로 부착되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터의 제조 방법.
  30. 제7항 내지 제14항 중 어느 하나의 항체를 포함하는 인플루엔자 H3 서브타입 바이러스 예방용 조성물.
  31. 제 30항에 있어서,
    상기 예방용 조성물은 0.001~100 mg/kg을 투여하는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 예방용 조성물.
  32. 제 30항에 있어서,
    상기 예방용 조성물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람용인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 예방용 조성물.
  33. 제 30항에 있어서,
    상기 예방용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 예방용 조성물.
  34. 제 30항의 예방용 조성물을 포유 동물에 투여하여 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 예방하는 방법.
  35. 제 34항에 있어서,
    상기 예방용 조성물을 0.001~100mg/kg을 투여하는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 예방하는 방법.
  36. 제 34항에 있어서,
    상기 포유동물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 예방하는 방법.
  37. 제 34항에 있어서,
    상기 예방용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 예방하는 방법.
  38. 제7항 내지 제14항 중 어느 하나의 항체를 포함하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 치료용 조성물.
  39. 제 38항에 있어서,
    상기 치료용 조성물은 0.001~100mg/kg을 투여하는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 치료용 조성물.
  40. 제 38항에 있어서,
    상기 치료용 조성물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람용인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 치료용 조성물.
  41. 제 38항에 있어서,
    상기 치료용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스 치료용 조성물.
  42. 제 38항의 치료용 조성물을 포유 동물에 투여하여 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 치료하는 방법.
  43. 제 42항에 있어서,
    상기 치료용 조성물을 0.001~100mg/kg을 투여하는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 치료하는 방법.
  44. 제 42항에 있어서,
    상기 포유동물은 쥐, 개, 돼지, 소, 말, 토끼, 라마, 페렛 또는 사람인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 치료하는 방법.
  45. 제 42항에 있어서,
    상기 치료용 조성물은 경구형 제형, 외용제, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe)용액제, 좌제, 멸균 주사용액 또는 동결건조(lyophilized)된 형태인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스를 치료하는 방법.
  46. 제 7항 내지 제 14항 중 어느 한 항의 항체를 목적하는 시료와 반응시키는 과정을 포함하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 존재 여부에 관한 정보제공 방법.
  47. 제 7항 내지 제 14항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 인플루엔자 A의 H3 서브타입 바이러스의 진단 키트.
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