WO2013075606A1 - 抑制hiv感染的小分子—多肽缀合物 - Google Patents

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WO2013075606A1
WO2013075606A1 PCT/CN2012/084859 CN2012084859W WO2013075606A1 WO 2013075606 A1 WO2013075606 A1 WO 2013075606A1 CN 2012084859 W CN2012084859 W CN 2012084859W WO 2013075606 A1 WO2013075606 A1 WO 2013075606A1
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PCT/CN2012/084859
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刘克良
王潮
史卫国
蔡利锋
王昆
郑保华
贾启燕
冯思良
白玉
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中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Definitions

  • the invention belongs to the field of biomedicine and relates to a small molecule and polypeptide conjugate for inhibiting HIV infection, in particular to a conjugate represented by formula I, a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or no physiological toxicity thereof Salt.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising the above-described conjugate of Formula I, a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic, and a conjugate of Formula I, a derivative thereof, and a stereoisomer thereof.
  • a body, or a physiologically toxic salt thereof for the treatment or prevention of a disease associated with HIV infection, particularly acquired immunodeficiency syndrome (AIDS).
  • AIDS acquired immunodeficiency syndrome
  • HIV-1 human immunodeficiency virus type 1
  • the currently used anti-HIV-1 drugs supplemented by highly active antiretroviral therapy, can prolong the survival time and improve the quality of life of HIV-infected patients to some extent.
  • HIV fusion inhibitors are novel anti-HIV drugs that interfere with the entry of viruses into target cells. They cut off the spread of the virus at the initial stage of infection, which has special significance for the prevention and control of HIV-1 infection, and thus becomes a new mechanism. Hot spots in HIV drug research.
  • Gp41 is a specific protein that mediates the fusion of HIV-1 to target cell membranes and is a target of fusion inhibitors.
  • HR1 interacts with HR1 to form a hexagonal core structure (6-HB).
  • T20 is a 36-amino acid fusion-inhibiting polypeptide derived from the gp41 HR2 region. It was approved by the US FDA in 2003 and is the only HIV-1 fusion inhibitor currently marketed. T20 can compete with the helical trimer composed of HR1 to occupy the action site of HR2, thereby inhibiting the formation of 6-HB, which makes the membrane fusion process impossible.
  • T20 Since T20 is completely derived from the natural HR2 sequence, it has low resistance to target mutations and is prone to drug resistance. Residues 36-45 of HR1 (GIVQQQNNLL) is the major site of T20 binding. Mutations in a single residue result in a 5-10 fold decrease in T20 sensitivity, and a two-residue mutation results in a 100-fold decrease in sensitivity. Secondly, T20 has poor stability in vivo, is easily degraded by proteases, and has low bioavailability. How to solve drug resistance and improve enzymatic stability is the main direction of research on novel HIV-1 fusion inhibitors.
  • the main solution strategy is to avoid the T20 target binding site and introduce a new functional sequence different from T20 to overcome drug resistance.
  • add spiral formation and stability factors to improve the helicity and stability of the sequence. improve enzymatic stability and inhibition activity.
  • the second-generation peptide fusion inhibitor T-1249 has an N-trimer hydrophobic pocket binding sequence (WQEWEQKI) at its N-terminus, which increases its activity by an order of magnitude compared with T20;
  • Agent T-1144 which is completely different from the target site of T20, is mainly the hydrophobic pocket area of HR1 (WEAWERAI).
  • the hydrophobic pocket of the Gp41 N-tr imer surface is also a target for small molecule fusion inhibitors.
  • NB-2 its EC 5Q value reached 1.04 ⁇ ⁇ ; ⁇ 12 also showed inhibition of HIV replication activity at the micromolar level, EC 5Q value was 0. 69 ⁇ ⁇ ; natural small molecule compound extracted from olive leaves Hydroxytyrosol (HT) inhibits HIV replication activity by 50 ⁇ .
  • HT Hydroxytyrosol
  • small molecule fusion inhibitors are far less active than peptide fusion inhibitors.
  • the present inventors combined a small molecule with a peptide fusion inhibitor to replace the functional regions PBD and LBD in a peptide fusion inhibitor with a small molecule, and a peptide pharmacophore and a non-peptide pharmacophore. Conjugation, so that the two play a synergistic role, design a new structure of HIV fusion inhibitors, explore new ideas to inhibit drug resistance. The present invention has thus been completed.
  • the object of the present invention is to design novel anti-HIV infection conjugates of completely non-native sequences, which are capable of inhibiting ⁇ 20 resistant HIV strains. Summary of the invention
  • a first aspect of the invention relates to a polypeptide-small molecule conjugate of formula I, a derivative thereof, a stereoisomer, or a salt thereof that is not physiologically toxic,
  • 3′ is a small molecule compound that specifically binds to the hydrophobic pocket of the HIV-1 gp41 N-trimer surface, or S m is deleted;
  • X al, X a2, X a3 , 4 HR non-natural peptide sequence at position a natural or unnatural amino acid residue, X al, X a2, X a3, X a4 may be the same or different;
  • EE-KK is a combination of residues that form a stable ⁇ -helical structure, located at the b, c, f, and g positions of the HR sequence, which are located on the outer side of the helix, in contact with the solvent, and do not participate in interaction with the target residue. It mainly forms and stabilizes the ore structure by forming a salt bridge between different electrical properties of the side chain, wherein E is L-form or D-type glutamic acid, and K is L-form or D-lysine.
  • X dl , X d2 , X d3 , ⁇ are natural or unnatural amino acid residues at the d position in the peptide of the non-native HR sequence, and X dl , X d2 , X d3 , X d4 may be the same or different;
  • Xei , Xe2 , Xes , X e4 are natural or unnatural amino acid residues of the e position in the non-natural HR sequence peptide, and X el , X e2 , X e3 , X e4 may be the same or different;
  • Z is L 2 - C-Chol , or Z is missing;
  • L 2 is a linking arm between the linking polypeptide and the cholesterol molecule
  • C is L-form or D-type cysteine
  • stereoisomer refers to the D- or L-stereo configuration of a polypeptide of formula I.
  • S m is selected from small molecule compounds as follows:
  • n n mNB- wherein NB 2 -L is a linker which is linked to the polypeptide at the 3-position of the pyrrole ring of the NB 2 molecule; mNB 2 introduces a carboxymethyl group as a Linker on the phenolic hydroxyl group of the NB-2 molecule, The polypeptide is linked; A 12 -L is a carboxymethyl group introduced as a Linker at the phenolic hydroxyl group of the A 12 molecule to be linked to the polypeptide;
  • ⁇ can be: a natural or unnatural amino acid; a diacid; a diamine; a diol; a polyethylene glycol having an amino group at one end and a carboxyl group at one end; specifically, one or several selected from the following compounds (for example, two , three), when L is a number (for example, two or three) selected from the following compounds, the compounds are linked by a guanamine bond:
  • L- or D-type glycine Gly
  • alanine Al
  • Leu leucine
  • isoleucine lie
  • glutamic acid Glu
  • glutamine Gin
  • aspartic acid Asparagine
  • Proline Glu
  • lysine L
  • serine serine
  • Thr Arginine
  • His histidine
  • tryptophan Trp
  • phenylalanine Phe
  • tyrosine Tr
  • cysteine methionine
  • Me methionine
  • GABA Y-aminobutyric acid
  • Ethylene glycol propylene glycol, butanediol, pentanediol, hexanediol;
  • X al, X a2, X a3 , 4 may be the same or different, selected from the D or L-amino acids: glycine (Gly), alanine (Ala), leucine (Leu), isoleucine ( Lie, Glu, Gln, Aspartate, Asp, As, Proline Threonine (Thr), arginine (Arg), histidine (His), tryptophan (Trp), phenylalanine (Phe), tyrosine (Tyr), cysteine (Cys) , methionine (Met);
  • X dl , X d2 , X d3 , ⁇ may be the same or different and are selected from the following D-type or L-type amino acids: glycine (Gly), alanine (Ala), leucine (Leu), isoleucine ( Lie, Glu, Gln, Aspartate, Asp, As, Proline Threonine (Thr), arginine (Arg), histidine (His), tryptophan (Trp), phenylalanine (Phe), tyrosine (Tyr), cysteine (Cys) , methionine (Met);
  • Xei, Xe2, Xes, X e4 may be the same or different and are selected from the following D-type or L-type amino acids: glycine (Gly), alanine (Ala), leucine (Leu), isoleucine (lie) , glutamic acid (Glu), glutamine (Gln), aspartic acid (Asp), asparagine (Asn), proline (Val), lysine (Lys), serine (Ser), threonine Acid (Thr), arginine (Arg), histidine (His), tryptophan (Trp), phenylalanine (Phe), tyrosine (Tyr), cysteine (Cys), ⁇ Thionine (Met);
  • L 2 may be one or several (for example, two or three) selected from the group consisting of amide bonds when L 2 is selected from several (for example, two or three) of the following compounds. : L- or D-type glycine (Gly), alanine (Ala), leucine (Leu), isoleucine Acid (lie), glutamic acid (Glu), glutamine (Gin), aspartic acid (Asp), asparagine (Asn), proline (Val), lysine (Lys), serine ( Ser ), Threonine (Th), Arginine (Arg), Histidine (His), Tryptophan (Trp), Phenylalanine (Phe), Tyrosine (Tyr), Cysteine ( Cys), methionine (Met);
  • GABA Y-aminobutyric acid
  • Ethylene glycol propylene glycol, butanediol, pentanediol, hexanediol;
  • polypeptide of Formula I a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or a salt thereof that is not physiologically toxic, wherein the polypeptide of Formula I is selected from the group consisting of:
  • IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- ⁇ Ala-C-Chol SEQ ID NO: 23
  • HT IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- ⁇ Ala-C-Chol SEQ ID NO: 23
  • the polypeptide of Formula I, a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or a physiologically inferior salt thereof is selected from the above compounds 10-15, 25 -30, 39-45, 54-59, 68-73, 81-87, 95-101, 110-115, 124-129, 138-143, 151-157, 165-171, and 190-224.
  • Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition comprising at least one polypeptide of the formula I according to the first aspect of the invention, a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic, and a pharmaceutically acceptable Accepted carrier or excipient.
  • a further aspect of the invention relates to an HIV fusion inhibitor comprising at least one polypeptide of the formula I according to the first aspect of the invention, a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic.
  • a further aspect of the invention relates to the use of a polypeptide of the formula I according to the first aspect of the invention, a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic, for the preparation of an HIV fusion inhibitor.
  • a further aspect of the invention relates to a polypeptide of the formula I according to the first aspect of the invention, a derivative thereof, a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic, for the preparation of a medicament for the treatment or prevention of a disease associated with HIV infection, in particular AIDS Use in.
  • a further aspect of the invention relates to a method of treating or preventing a disease associated with HIV infection, in particular AIDS, comprising administering to a subject receiving treatment or prevention an effective amount of a polypeptide of the formula I according to the first aspect of the invention, derived therefrom , its stereoisomers, or its non-physiological toxicity Salt.
  • the HIV includes HIV-1 and HIV-2.
  • Figure 1 is a schematic diagram of sample distribution of a test compound. detailed description
  • AIDS (Acquired Immure Deficiency Syndrome) AIDS, Acquired Immune Deficiency Syndrome
  • HIV Human Immunodeficiency Virus
  • Tyr (Tyrosine, Y)
  • the solid phase synthesis carrier Rink amide resin used in the tyrosine example is Tianjin Nankai Synthetic Co., Ltd.; HBTU, H0BT, DIEA and Fmoc protected natural amino acids or D-type unnatural amino acids are Shanghai Jill Biochemicals. The company and Chengdu Chengnuo New Technology Co., Ltd. products.
  • N-mercaptopyrrolidone is a product of ACR0S
  • trifluoroacetic acid is a product of Beijing Bomaijie Technology Co., Ltd.
  • 3, 4-dihydroxyphenylacetic acid, 4-J ⁇ salicylic acid, 5- ⁇ Salicylic acid, 2,5-hexanedione, tert-butanol and ethyl bromide are products of ALFA
  • DMF and DCM are products of South Korea's Samsung
  • chromatographically pure acetonitrile is Fisher's product.
  • Other reagents are domestically produced analytical products if they are not described.
  • Mass spectrometry (MALDI-T0F-MS) results (MW) of small molecule polypeptide conjugates are shown in the table.
  • Peptide synthesis uses the standard Fmoc solid phase method.
  • Rink Amide resin is used, and the peptide chain is extended from the C terminal to the N terminal.
  • the condensing agent is HBTU/HOBt/DIEA.
  • the deprotecting agent is a piperidine/DMF solution.
  • the cleavage agent is trifluoroacetic acid (TFA), and the crude peptide is dissolved in water and stored by lyophilization. Separation and purification by medium pressure liquid chromatography or high pressure liquid chromatography (HPLC), pure peptide content > 90%.
  • Base-assisted laser desorption time-of-flight mass spectrometry MALDI-T0F-MS was used to determine the molecular weight of the peptide sequence.
  • the peptide sequence was synthesized by CEM microwave peptide synthesizer.
  • the small molecule compound can be condensed with the N-terminal amino group of the polypeptide as the last residue, and then the hydroxy protecting group is removed under the cleavage condition of the polypeptide.
  • Blocking reagent 20% v/v DMF solution of acetic anhydride.
  • TFA needs to be cooled in the ice bath for 30 minutes in advance or stored in the refrigerator in advance; the prepared lysate is added to the peptide resin under ice bath conditions, electromagnetic stirring, the resin turns orange-red, and the reaction is carried out under ice bath for 30 minutes, then, withdraw The reaction was stirred for 90 min at room temperature and the reaction was completed.
  • 200 ml of cold diethyl ether was added to the reactor under vigorous stirring, and a white precipitate was precipitated, followed by stirring for 30 min; the precipitate was filtered off with a G4 sand core funnel, washed repeatedly with cold diethyl ether for 3 times, and dried.
  • 50 ml of double distilled water and 5 ml of acetonitrile were added to fully dissolve the solid, and the filtrate was freeze-dried to obtain a crude peptide of a small molecule at the N-terminus 1.03 g.
  • the resulting crude peptide linked to the small molecule was purified by medium pressure or high pressure chromatography.
  • the color column is a C18 column, and the eluent is acetonitrile, water and a small amount of acetic acid.
  • the color column was previously equilibrated with 15% acetonitrile/water/0.1% glacial acetic acid solution 200 ml.
  • Example 8 Preparation of Compound 8
  • the bromoacetic acid 6.95 g, cholesterol 7.73 g, EDC-HC1 13.43 g, DMAP 122 mg were weighed and added to a 500 ml eggplant-shaped flask, and 500 ml of DCM was added thereto, and the mixture was stirred under ice bath, and the solution was yellow. After 30 min, the ice bath was removed and reacted at room temperature for 24 h. The solution was reddish brown. It was washed successively with saturated NaHC0 3 , saturated NaCl, and dried over anhydrous MgSO 4 . After proper concentration, it was purified by a silica gel column wet packed column.
  • the polypeptide was synthesized according to the method of Example 1, and then the purified polypeptide (>90%) 20 mg was dissolved in 0.3 ml of DMS0, and 0.2 ml of Chol-Br 3. Omg in THF was added, and the mixture was uniformly mixed. The tube was added with 2 drops of DIEA, reacted at room temperature for 3 h, separated and purified by C4 semi-preparative reverse color column, and the molecular weight was confirmed by MALDI-TOF-MS.
  • Example 9-15 Preparation of Compound 9-15
  • Example 46 Preparation of Compound 46
  • the carboxyl-protected A 12 is synthesized according to the following synthetic route, and its phenolic hydroxyl group is etherified, thereby reducing the electrical influence caused by the modification and binding to the N-terminus of the polypeptide by the carboxyl group of the carboxymethyl group.
  • 5-aminosalicylic acid 0. 5g (3. 26 ol) was dissolved in 10 ml of saturated NaHC0 3 as a suspension. Benzyloxycarbonyl chloride 0. 61g, 0TC was added. After completion of the reaction, the precipitate was filtered off, and the filtrate was washed three times with anhydrous diethyl ether and then adjusted to pH 2 - 3 with 4N hydrochloric acid. After adjusting the acid was extracted three times with ethyl acetate layer were combined, dried over anhydrous Na 2 S0 4 and dried overnight, solvent was evaporated to give light purple solid was combined with the solid was filtered off, yielding intermediate 2. The yield was 95%.
  • the intermediate 2 0. 16 g was weighed into a 50 ml eggplant-shaped flask, DMAP 0. 006 g was added, and 3 ml of t-butanol was added thereto to dissolve, which was a suspension.
  • DCC 0. 24 g was weighed and dissolved in 3 ml of anhydrous THF.
  • the above solution was dropped into an eggplant flask using a pressure equalizing funnel and refluxed for 2 hours. After completion of the reaction the solvent was evaporated to dryness, redissolved with ethyl acetate, washed three times with saturated NaHC0 3, washed three times with saturated NaCl solution, dried over anhydrous Na 2 S0 4 overnight. After evaporation to dryness, the crude product was used directly in the next step.
  • the carboxyl-protected A 12 is synthesized according to the following synthetic route, and its phenolic hydroxyl group is etherified, thereby reducing the electrical influence caused by the modification and utilizing the carboxyl group to bind to the N-terminus of the polypeptide.
  • the synthetic route is synthesized according to the following synthetic route, and its phenolic hydroxyl group is etherified, thereby reducing the electrical influence caused by the modification and utilizing the carboxyl group to bind to the N-terminus of the polypeptide.
  • the carboxyl-protected NB 2 was synthesized according to the following synthetic route, and reacted with ethyl bromoacetate at its phenolic hydroxyl group, followed by saponification to remove the ethyl ester, and the carboxyl group was bonded to the peptide chain.
  • Example 172-224 The polypeptides shown in Example 172-224 and the small molecule conjugates were synthesized according to the methods of Example 1, Example 8, Example 9, and Example 130, respectively, and the molecular weight was confirmed by MALDI-TOF-MS.
  • Example 225 Compounds inhibit HIV-1 mediated cell-cell fusion activity evaluation (IC 5 ) 1. Resuscitation/freezing of TZM-bl cells and HL2/3 cells
  • the cell cryotube was taken out from the liquid nitrogen, and the 37 "C water bath was rapidly warmed up.
  • the cell cryopreservation solution (1 ml) was taken out, added to a 15 ml centrifuge tube, and 1 ml of the medium was added thereto, and centrifuged (800 rpm, lOmin) to remove the medium. 1 ml of fresh medium was added again, and the cells were uniformly suspended by light blowing, and the whole cell suspension was transferred to a 75 cm 2 culture flask containing 15 ml of the medium, and cultured at 37 ° C, 5% CO 2 .
  • subculture Remove the cell culture flask, pour off the medium, add 2ml of digestive juice, gently shake it to spread evenly on the cell surface, pour the digestive juice, add 2ml of digestive juice, spread well, digest at 37"C for 2min, add 4ml medium The digestion was terminated, all the liquid was taken out, centrifuged, the supernatant was discarded, 4 ml of the medium was added and lightly blown to uniformly suspend the cells, and 10 ⁇ l of the count was taken, and 40-500,000 cells were placed in a 75 cm 2 culture flask for subculture.
  • Sample preparation instructions Each sample plate (Costar 3799, Corning Incorporation, USA) can be prepared in 4 samples, each sample is repeated twice, as shown in Figure 1, the first concentration of the sample is placed in the first concentration of the sample A1
  • the wells were serially diluted 4 times and 10 concentration gradients were diluted accordingly.
  • the last two wells contained control medium only as the control, with the 11th well containing the target cells and the effector cells as a 100% fusion control (positive control) and the 12th well containing only the target cells as the unfused background control (negative control).
  • LA buffer (Luciferase Assay Buffer , Promega Cooperation, USA) Add the LA substrate (Lucif erase Assay Substrate, Promega Cooperation, USA) and add 40 ⁇ l/well to 96-well phosphorus; i ⁇ L, the specific operation is carried out according to the instructions.
  • the IC50 value was calculated using Origin software according to the cell fusion rate.
  • NB2 PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 21. 456 ⁇ 4. 0530 3645 NB2—PEG3— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 34. 056 ⁇ 9. 0079 3689

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Abstract

本申请公开了一种式I所示的抗HIV感染的小分子—多肽缀合物，或其立体异构体、无生理毒性的盐。本发明还公开了含有所述缀合物、或其立体异构体、无生理毒性的盐的药物组合物，以及所述缀合物、或其立体异构体、无生理毒性的盐在治疗或预防HIV感染所致相关疾病尤其是获得性免疫缺陷综合症（艾滋病）的用途。

Description

抑制 H I V感染的小分子 -多肽缀合物 技术领域
本发明属于生物医药领域， 涉及一种抑制 HIV感染的小分子与多肽缀 合物， 具体地， 涉及式 I所示的缀合物、 其衍生物、 其立体异构体、 或其 无生理毒性的盐。 本发明还涉及含有上述的式 I缀合物、 其衍生物、 其立 体异构体、 或其无生理毒性的盐的药物組合物， 以及式 I缀合物、 其衍生 物、 其立体异构体、 或其无生理毒性的盐在治疗或预防 HIV感染所致相关 疾病尤其是获得性免疫缺陷综合征 ( AIDS, 即艾滋病）的用途。
Sm - Li 一 XalEEXdlXelKK X^EE Xd2 e2 K Xa3EEXd3Xe3KK Xa4EE b4 e4 K ― Z 式 I 背景技术
艾滋病主要是由于人免疫缺陷病毒 I型（ HIV- 1 )感染导致的致死性传 染疾病， 在全球范围流行。 目前临床上应用的抗 HIV- 1药物， 辅以高效抗 逆转录病毒疗法， 可以在一定程度上延长 HIV感染者的生存时间和改善其 生活质量。 但是， 由于 HIV疫苗研究进展緩慢以及耐药性问题日益明显， 研发新型抗 HIV 药物仍是当务之急。 HIV 融合抑制剂 （HIV fusion inhibitors )是干扰病毒进入靶细胞的新型抗 HIV药物， 其在感染的初始 环节切断病毒的传播， 这对于预防及控制 HIV-1感染具有特殊意义， 因而 成为新机制抗 HIV药物研究的热点。
Gp41是介导 HIV-1与靶细胞膜融合的特异性蛋白，是融合抑制剂的作用 靶标。 Gp41的胞外区存在着两个与膜融合密切相关的螺旋结构功能区， 即 N 末端重复序列 （ HR1 )和 C末端重复序列 （ HR2 ) 。 在膜融合过程中， HR2与 HR1相互作用，形成一个六螺旋体核心结构（ 6- HB )。 T20是衍生于 gp41 HR2 区域的具有 36个氨基酸残基的融合抑制多肽， 于 2003年经美国 FDA批准 上市， 是目前唯一上市的 HIV- 1融合抑制剂。 T20能竟争性的和 HR1构成 的螺旋三聚体结合， 占据 HR2的作用位点， 进而抑制 6- HB的形成， 使得膜 融合过程不能完成。
T20的上市开辟了多肽类药物控制 HIV- 1的新领域。但是， T20本身存 在着一些缺陷和不足。 首先是耐药性问题： 由于 T20完全衍生于天然 HR2 序列， 对靶标突变的抵抗力低， 容易产生耐药性。 HR1 第 36-45 位残基 ( GIVQQQNNLL )是 T20结合的主要部位， 单个残基的突变导致 T20敏感度 下降 5-10倍， 两个残基突变则会导致敏感度下降 100倍。 其次， T20体内 稳定性差， 易被蛋白酶降解， 生物利用度低。 如何解决耐药性及提高酶解 稳定性是新型 HIV- 1融合抑制剂研究的主要方向。
基于上述问题， 目前主要的解决策略是避开 T20的靶标结合部位， 引 入不同于 T20的新的功能序列来克服耐药性； 同时， 加入螺旋形成及稳定 因子， 提高序列的螺旋性及稳定性， 提高酶解稳定性及抑制活性。 如第二 代多肽类融合抑制剂 T- 1249 , 在其 N端增加了与 N- tr imer疏水性口袋结 合序列 （WQEWEQKI ) , 使其活性比 T20提高了一个数量级； 又如第三代融 合抑制剂 T- 1144 , 和 T20的靶标作用位点完全不同， 主要为 HR1的疏水性 口袋区（WEAWERAI)。 I期临床研究结果表明， T- 1144能够显著抑制 T20耐 药性毒株， 同时比 T20显示了更高的活性及更好的药代动力学性盾。 此外， 5HR系列多肽开创了基于靶标 gp41 HR1螺旋三聚体的三维晶体结构应用计 算机辅助设计完全非天然 α螺旋肽的新思路。 以 5HR为先导结构， 在其 N 端引入口袋结合区 （WMEWDRE ) , C端引入脂膜结合区 ( SIMW )，使得 抑制融合活性得到了显著提高。
Gp41 N-tr imer表面的疏水性口袋同时是小分子融合抑制剂的作用靶 点。如 NB- 2,其 EC5Q值达到 1. 04 μ Μ; Α12同样在微摩尔水平显示了抑制 HIV 复制活性， EC5Q值为 0. 69 μ Μ; 从橄榄叶中提取的天然小分子化合物羟基酪 醇（hydroxytyrosol，HT )抑制 HIV复制活性达到 50 μ Μ。 但是， 小分子融 合抑制剂活性远不及肽类融合抑制剂。 其原因在于： （ 1 )单独的小分子只是 部分占据了疏水口袋， 与靶标结合力低，不足以竟争性抑制 6-ΗΒ形成； （2 ) 单独的小分子识别能力不强， 靶点附近的局部浓度不高。
综上所述， 本发明人将小分子与肽类融合抑制剂相结合， 以小分子取 代肽类融合抑制剂中的功能区 PBD和 LBD, 将肽类药效团与非肽类药效团 缀合， 使两者发挥协同作用， 设计全新结构 HIV融合抑制剂， 探索抑制耐 药性的新思路。 由此而完成了本发明内容。
本发明目的是设计完全非天然序列的新型抗 HIV感染缀合物， 能够抑 制 Τ20耐药性 HIV毒株。 发明内容
本发明的第一方面涉及式 I所示的多肽-小分子缀合物、其衍生物、其 立体异构体、 或其无生理毒性的盐,
Sm - Li一 XalEEXdlXelKK X^EE Xd2 e2 K Xa3EEXd3Xe3KK Xa4EE b4 e4 K ― Z 式 I 其中，
3„为能够与 HIV- 1 gp41 N-trimer表面疏水性口袋区特异性结合的小 分子化合物， 或者 Sm缺失；
为使得小分子能够保持空间灵活性而与靶标结合的， 连接肽与小分 子间的连接臂， 或者 L缺失；
Xal、 Xa2、 Xa3、 4为非天然 HR序列肽中 a位的天然或非天然氨基酸残基， Xal、 Xa2、 Xa3、 Xa4可以相同或不同；
EE-KK为形成稳定 α-螺旋结构的残基組合， 分别位于 HR序列的 b， c， f， g位， 它们位于螺旋的外侧面， 与溶剂接触， 不参与与靶标残基的相互 作用， 主要是利用其侧链不同电性间形成盐桥作用而形成并稳定 or螺旋结 构， 其中， E为 L型或 D型谷氨酸， K为 L型或 D型赖氨酸。
Xdl、 Xd2、 Xd3、 ^为非天然 HR序列肽中 d位的天然或非天然氨基酸残基， Xdl、 Xd2、 Xd3、 Xd4可以相同或不同；
Xei , Xe2 , Xes , Xe4为非天然 HR序列肽中 e位的天然或非天然氨基酸残基， Xel、 Xe2、 Xe3、 Xe4可以相同或不同；
Z为 L2- C-Chol , 或者 Z缺失； 其中
L2为连接多肽与胆固醇分子间的连接臂；
C为 L型或 D型半胱氨酸；
Choi为胆固醇。
本发明所用术语"立体异构体"是指式 I多肽的 D-或 L-立体构型。
在本发明的一个实施方案中， Sm选自如下小分子化合物：
Figure imgf000004_0001
ΗΤ ΗΤ, ΗΤ2
Figure imgf000005_0001
Figure imgf000005_0002
Figure imgf000005_0003
Figure imgf000005_0004
mNB- 其中， NB2-L是在 NB2分子的吡咯环 3位引入一个羧基作为与多肽连接 的 Linker; mNB2是在 NB-2分子的酚羟基上引入羧甲基作为 Linker, 使其 与多肽相连； A12-L是在 A12分子酚羟基处引入羧甲基作为 Linker, 以便与多 肽连接；
！^可以为： 天然或非天然氨基酸； 二酸； 二胺； 二醇； 一端为氨基， 一端为羧基的聚乙二醇； 具体的， 可为选自以下化合物的一个或数个（例 如两个、 三个） ， 当 L,为选自以下化合物的数个 （例如两个、 三个） 时， 化合物之间以酖胺键相连：
L型或 D型的甘氨酸（Gly) ， 丙氨酸（Ala), 亮氨酸（Leu) ，异亮氨 酸（lie), 谷氨酸（Glu) ， 谷酰胺 （Gin) ， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺 ( Asn) , 缬氨酸（Val)， 赖氨酸（Lys)， 丝氨酸（ Ser ) , 苏氨酸（Thr)， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His) , 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪 氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱硫氨酸（Met)；
&-丙氨酸（& 1&)；
Y -氨基丁酸（GABA)；
6 -氨基己酸（Aca);
乙二酸， 两二酸， 丁二酸， 戊二酸， 己二酸；
乙二胺， 两二胺， 丁二胺， 戊二胺， 己二胺；
乙二醇， 丙二醇， 丁二醇， 戊二醇， 己二醇；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEd)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG2)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG3)；
Xal、 Xa2、 Xa3、 4可以相同或不同，选自如下 D型或 L型的氨基酸： 甘 氨酸（Gly),丙氨酸 (Ala),亮氨酸（ Leu )，异亮氨酸（lie)， 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gln)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺（Asn)， 纈氨酸（Val)， 赖 氨酸 (Lys)， 丝氨酸（Ser)， 苏氨酸（Thr)， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His), 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱 硫氨酸（Met)；
Xdl、 Xd2、 Xd3、 ^可以相同或不同，选自如下 D型或 L型的氨基酸： 甘 氨酸（Gly),丙氨酸 (Ala),亮氨酸（ Leu )，异亮氨酸（lie)， 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gln)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺（Asn)， 纈氨酸（Val)， 赖 氨酸 (Lys)， 丝氨酸（Ser)， 苏氨酸（Thr)， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His), 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱 硫氨酸（Met)；
Xei, Xe2, Xes, Xe4可以相同或不同，选自如下 D型或 L型的氨基酸： 甘 氨酸（Gly),丙氨酸 (Ala),亮氨酸（ Leu )，异亮氨酸（lie)， 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gln)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺（Asn)， 纈氨酸（Val)， 赖 氨酸 (Lys)， 丝氨酸（Ser)， 苏氨酸（Thr)， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His), 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱 硫氨酸（Met)；
L2可为选自以下化合物的一个或数个（例如两个、 三个） ， 当 L2为选 自以下化合物的数个（例如两个、 三个） 时， 化合物之间以酰胺键相连： L型或 D型的甘氨酸（Gly) , 丙氨酸 (Ala), 亮氨酸（Leu)，异亮氨 酸（lie), 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gin)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺 (Asn) , 纈氨酸（Val)， 赖氨酸 (Lys)， 丝氨酸（ Ser )， 苏氨酸（ Thr )， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His) , 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪 氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱硫氨酸（Met)；
氯乙酸；
溴乙酸；
&-丙氨酸（& 1&)；
Y -氨基丁酸（GABA)；
6 -氨基己酸（Aca);
乙二酸， 两二酸， 丁二酸， 戊二酸， 己二酸；
乙二胺， 两二胺， 丁二胺， 戊二胺， 己二胺；
乙二醇， 丙二醇， 丁二醇， 戊二醇， 己二醇；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEd)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG2)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG3)；
Choi为胆固醇。
在本发明的一个实施方案中， 所述的式 I多肽、 其衍生物、 其立体异 构体、 或其无生理毒性的盐， 其中， 所述式 I多肽选自如下的化合物：
1 HT- -AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 1 )；
2 HT- β Ala - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 2)；
3 HT- -Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 3)；
4 HT- 2Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 4)；
5 HT- -PEGr -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 5)；
6 HT- -PEG2 - -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 6)；
7 HT- -PEG3- -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 7)；
8 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 8)；
HT AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
9)；
ΗΤ-β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
10)；
HT— Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
11)； HT-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
12 ) ；
HT--PEG -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
13 ) ；
HT~PEG2~ AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
14 ) ；
HT— PEG厂- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
15 ) ；
HT IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 16 ) ；
ΗΤ- β Ala- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 17 )
HT~Aca~ IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 18 )
HT-2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 19 )
HT--PEG -- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 20 )
HT~PEG2~ IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 21 )
HT— PEG厂- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 22 )
IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 23 ) ； HT IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
24 ) ；
ΗΤ- β Ala- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
25 ) ；
HT~Aca~ IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
26 ) ；
HT-2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
27 ) ；
HT--PEG -- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
28 ) ；
HT~PEG2~ IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
29 ) ；
HT— PEG厂- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
30 ) ；
HT IEELIKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK ( SEQ ID NO: 31 ) ；
ΗΤ- β Ala- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 32 ) ； HT-— Aca- -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 33) ；
HT- ■2Aca- -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 34) ；
HT- -PEd -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 35) ；
HT- -PEG2 -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 36) ；
HT- -PEG3 -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 37) ；
IEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 38 ) ；
HT- -― lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
39)
HT- β Ala- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
40)
HT- -Aca― lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
41)
HT-: Ikcsi― lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
42)
HT- -PEG-- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
43)
HT- -PEG2~ lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
44)
HT- -PEG3~ lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
45)
NB2 - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 46)；
NB2 - β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 47)；
NB2 - -Aca一- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 48 ) ；
NB2 - 2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 49) ；
NB2 - -PEG-- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 50) ；
NB2 - -PEG2- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 51 ) ；
NB2 - -PEG3- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 52) ；
NB2 - — - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 53) ；
NB2 - β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
54)
NB2- -Aca一- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 55 )
NB2 - 2Aca— - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
56 )
NB2 - -PEG - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
57 )
NB2 - -PEG2- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
58 )
NB2 - -? EG - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
59 )
NB2 - ■IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 60 )；
NB2 - β Ala- - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 61 )；
NB2 - -Aca— - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 62 ) ；
NB2 - 2Aca— - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 63 ) ；
NB2 - -PEG - - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 64 ) ；
NB2 - -PEG2 - - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 65 ) ；
NB2 - -PEG3- - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 66 ) ；
NB2 - —— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID
N0: 67 ) ；
NB2 - β Ala- - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
68 )
NB2 - -Aca— - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
69 )
NB2 - 2Aca— - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
70 )
NB2 - -PEG - - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
71 )
NB2 - -PEG2- - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
72 )
NB2 - -? EG - - IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
73 )
NB2 - ■IEELIKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK ( SEQ ID NO: 74 )；
NB2- β Ala- - IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 75 )； 76 NB2 - -Aca— - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 76 ) ；
77 NB2 - 2Aca- - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 77 ) ；
78 NB2 - -PEd- - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 78 ) ；
79 NB2 - -PEG2 - - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 79 ) ；
80 NB2 - -PEG3- - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 80 ) ；
81 NB2 - —— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID
N0: 81 ) ；
82 NB2 - β Ala- - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
82 )
83 NB2 - -Aca— - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
83 )
84 NB2 - 2Aca- - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
84 )
85 NB2 - -? G - - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
85 )
86 NB2 - -PEG2- - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
86 )
87 NB2 - -PEG3- - lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
87 )
88 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 88 )；
89 Ai2 - P Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 89 ) ；
90 Al2― -Aca -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 90 )；
91 Al2 - 2Aca -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 91 )；
92 Al2― -PEG - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 92 ) ；
93 Al2― -PEG2 - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 93 ) ；
94 Al2― -PEG3- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 94 ) ；
95 — - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
95 )
96 Al2 - β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
96 )
97 -Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
97 ) 98 A12-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
98 ) ；
99 A12— PEG -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
99 ) ；
100 A12— PEG2~ AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
100 ) ；
101 A12— PEG厂- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
101 ) ；
102 A12 lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 102 ) ；
103 Α12- β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 103 )
104 A12— Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 104 )
105 A12-2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 105 )
106 A12— PEG -- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 106 )
107 A12— PEG2~ lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 107 )
108 A12— PEG -- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 108 )
109 A12 lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
109 ) ；
110 Α12- β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
110 ) ；
111 A12— Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
111 ) ；
112 A12-2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
112 ) ；
113 A12— PEG -- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
113 ) ；
114 A12— PEG2~ lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
114 ) ；
115 A12— PEG厂- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
115 ) ；
116 A12 IEELIKK I EEL IKK I EEL IKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 116 ) ；
117 Α12- β Ala- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 117 ) ；
118 A12— Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 118 ) ； 1
1
Figure imgf000013_0001
126 ) ；
127 A12— PEG -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
127 ) ；
128 A12— PEG2~ lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
128 ) ；
129 A12--PEG厂- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
129 ) ；
130 mNB2 -AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 130 ) ；
131 mNB厂 β Ala - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 131 ) ；
132 mNB2― Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 132 ) ；
133 mNB2-2Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 133 ) ；
134 - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 134 ) ；
135 mNB厂- PEG2- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 135 ) ；
136 mNB厂- PEG3- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 136 ) ；
137 mNB2 —— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 137 ) ；
138 mNB厂 β Ala - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
138 ) ；
139 mNB2― Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
139 ) ；
140 mNB2-2Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 141 mNB2- -PEG - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
141 )
142 mNB2- -PEG - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
142 )
143 mNB2- -? EG - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
143 )
144 mNB2- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 144 ) ；
145 mNB2- β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 145 ) ；
146 mNB2- -Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 146 ) ；
147 mNB2- 2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 147 ) ；
148 mNB2- -PEG - - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 148 ) ；
149 mNB2- -PEG - - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 149 ) ；
150 mNB2- -PEG3- - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 150 ) ；
151 mNB2- — - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID
N0: ] L51 ) ；
152 mNB2- β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
152 )
153 mNB2- -Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
153 )
154 mNB2- 2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
154 )
155 mNB2- -PEG - - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
155 )
156 mNB2- -PEG - - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
156 )
157 mNB2- -PEG3- - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
157 )
158 mNB2- I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK ( SEQ ID NO: 158 ) ；
159 mNB2- β Ala- I EEL IKK I EEL IKK IEELIKK I EEL IKK ( SEQ ID NO: 159 ) ；
160 mNB2- -Aca— I EEL IKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 160 ) ；
161 mNB2- 2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 161 ) ； mNB --PEG1— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 162 ) ； mNB厂 -PEG厂- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 163 ) ； mNB厂 -PEG3— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 164 ) ； mNB2 lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 165 ) ；
mNB厂 β Ala- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
166 ) ；
mNB厂 -Aca— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
167 ) ；
mNB厂 2Aca— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
168 ) ；
mNB厂 -PEd— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
169 ) ；
mNB厂 -PEG2— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
170 ) ；
mNB厂 -PEG3— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
171 ) ；
HT- IEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 172 ) ；
HT- - P Ala- lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 173 ) ；
HT- — Aca― lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 174 ) ；
HT- -2Aca- lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 175 ) ；
HT- -PEG2- -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 176 ) ；
HT- -PEG3- -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 177 ) ；
NB2 -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 178 )
NB2 - P Ala- -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 179 ) ；
NB2 ― Aca— -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 180 ) ；
NB2 -2Aca- -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 181 ) ；
NB2 — PEG2 - -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 182 )
NB2 — PEG3- -lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 183 )
Ai2" - P Ala —lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 184 )
Ai2" -— Aca- —lEELIKK SEEL IKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 185 )
A12—- PEG2—- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 186 ) ； 187 mNB--p Ala— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK (SEQ ID NO: 187 )；
188 mNB2 -— Aca -— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 188 )； 189 mNB2 -— PEG2 -— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 189)； 190 A12 lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 190) ；
191 Α12-β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
191 )；
192 Ai2 Aca lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
192)；
193 A12-2Aca― lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
193)；
194 A12— PEG-- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
194)；
195 A12— PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
195)；
196 A12— PEG,— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
196)；
197 HT lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 197) ；
198 HT -β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
198)；
199 HT— Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
199)；
200 HT -2Aca— I EEL IKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
200 )；
201 HT— PEG-- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
201 )；
202 HT— PEG2- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
202 )；
203 HT—PEG厂- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK β Ala-C-Chol (SEQ ID NO:
203 )；
204 NB2 lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 204 ) ；
205 NB2 - β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
205 ) ；
206 NB2—Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
206 ) ；
207 NB2 -2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
207 ) ；
208 NB2 —PEG -- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 208 ) ；
209 NB2 ~PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 209 ) ；
210 NB2 —PEG厂- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 210 ) ；
211 HT8 lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 211 ) ；
212 HT8 - β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
212 ) ；
213 HT8—Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
213 ) ；
214 HT8 -2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
214 ) ；
215 HT8 —PEG -- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 215 ) ；
216 HT8 ~PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 216 ) ；
217 HT8 —PEG厂- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 217 ) ；
218 mNB2 lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 218 ) ；
219 mNB2 - β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 219 ) ；
220 mNB --Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 220 )；
221 mNB -2Aca— I EEL IKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
221 )；
222 mNB2—PEG -- I EEL IKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 222 ) ；
223 mNB2— PEG2— I EEL IKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 223 ) ；
224 mNB厂 -PEG3— I EEL IKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID
NO: 224 ) ； 在本发明的一个实施方案中， 所述的式 I多肽、 其衍生物、 其立体异 构体、 或其无生理毒性的盐， 其选自上面的化合物 10-15, 25-30， 39-45, 54-59, 68—73， 81—87， 95-101, 110-115, 124-129, 138—143、 151—157、 165-171以及 190-224。 本发明的另一个方面涉及一种药物組合物， 其含有至少一种本发明第 一方面的式 I多肽、 其衍生物、 其立体异构体、 或其无生理毒性的盐， 以 及药学上可接受的载体或辅料。 本发明的还一个方面涉及一种 HIV融合抑制剂， 其含有至少一种本发 明第一方面的式 I多肽、 其衍生物、 其立体异构体、 或其无生理毒性的盐。 本发明的还一个方面涉及本发明第一方面的式 I多肽、 其衍生物、 其 立体异构体、 或其无生理毒性的盐在制备 HIV融合抑制剂中的用途。 本发明的还一个方面涉及本发明第一方面的式 I多肽、 其衍生物、 其 立体异构体、 或其无生理毒性的盐在制备用于治疗或预防 HIV感染相关疾 病尤其是艾滋病的药物中的用途。 本发明的还一个方面涉及一种治疗或预防 HIV感染相关疾病尤其是艾 滋病的方法， 所述的方法包括对给予接受治疗或者预防的对象有效量的本 发明第一方面的式 I多肽、 其衍生物、 其立体异构体、 或其无生理毒性的 盐。
在本发明中， 所述 HIV包括 HIV-1和 HIV-2。 附图说明
图 1为待测化合物样品分配示意图。 具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述， 但是本领域技 术人员将会理解， 下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限定本发明 的范围。 实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造商建议的条件 进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通过市购获得的常规 在本发明中使用的缩写具有下面的含义：
AIDS (Acquired Immure Deficiency Syndrome) 艾滋病， 获得性免疫缺陷综合征
Ala (Alanine, A) 丙氛酸
Asn (Asparagine, N) 天冬醜氛
Cys (Cysteine, C) 半胱氨酸
DCM (Dichloromethane) 二氯甲烷
DMF (N, N-Di methyl malonate) 二甲基甲 Bib胺
Env (Envelope glycoprotein) 包腹糖蛋白
ESI-MS (Electronic spray ion mass spectroscopy)电喷雾貭讲
Fmoc (Fluorenylmethoxycarbonyl) 甲氧
Gin (Glutamine, Q) 谷跣氛
Glu(Glutamic acid, E) 谷氛酸
6-HB (six-helix bundle) 六螺旋体
HBTU 2- (1H-1-羟基苯并三唑） -1， 1， 3， 3-四甲基脲六氟磷酸
His(Histidine, H) 組氛酸
HoBt (1-Hydroxylbenzotriazole anhydrous) 1 -幾基苯并三氣峻
HR1 (N-terminal heptad repeat, NHR) N末端重复序列
HR2 (C- terminal heptad repeat, CHR) C末端重复序列
HIV ( Human Immunodeficiency Virus) ) 人免疫缺陷病毒
HIV-1 人免疫缺陷病毒 I型 HIV-2 人免疫缺陷病毒 Π型
HPLC (High performance liquid chromatography)高效液相色谱
Ile(Isoleucine, I) 异亮氛酸
Leu (Leucine, L) 亮氛酸
Lys (Lysine, K) 赖氛酸
Ser (Serine, S) 丝氛酸
TFA(trif luoroacetic acid) 三氟乙酸
Thr (Threonie, T) 苏氛酸
Tyr (Tyrosine, Y) 酪氨酸 实施例所用固相合成载体 Rink 酰胺树脂为天津南开合成责任有限公 司产品； HBTU、 H0BT、 DIEA以及 Fmoc保护的天然氨基酸或 D型的非天然 氨基酸为上海吉尔生化公司以及成都诚诺新技术有限责任公司产品。 N -曱 基吡咯坑酮（NMP)为 ACR0S公司产品； 三氟乙酸（TFA)为北京博迈杰科 技有限公司产品； 3， 4 -二羟基苯乙酸、 4- J ^水杨酸、 5- ^水杨酸、 2, 5- 己二酮、 叔丁醇以及溴代乙酸乙酯为 ALFA公司产品； DMF、 DCM为韩国三 星公司产品； 色谱纯乙腈为 Fisher公司产品。 其它试剂如无说明均为国产 分析纯产品。 小分子多肽缀合物的质谱（ MALDI- T0F- MS )结果（MW)见表
实施例 1: 化合物 1的制备
1.1 HT的制备及其与连接臂的连接
Figure imgf000020_0001
4
中间体 2的合成：
氮气保护下用 18.5ml 曱醇溶解 0.2g ( 1.19mmol )化合物 1, 滴入浓 H2S043滴， 避光回流 2小时。 反应结束后蒸干反应液， 用乙酸乙酯重新溶 解， 并用饱和 NaHC03洗三遍。 水相合并， 用乙酸乙酯萃取三遍后合并酯相， 用饱和 NaCl溶液洗至中性。 酯相用无水 Na2S04干燥过夜， 蒸干溶剂得中间 体 2。 收率 96%。
中间体 3的合成：
氮气保护下将 0. 21g (1. 19mmol)中间体 2溶于 15ml无水氯仿中， 加入 2，2-二曱氧基丙垸（DMP ) 1. 6ml , 樟脑磺酸 0. 06g (0. 24mmol)。 避光回流 4 小时， TLC监测反应（石油醚： 乙醚 =7: 1 )反应结束后用饱和 NaHC03洗三 遍， 氯仿相用无水 Na2S04干燥过夜， 蒸干溶剂得粗产物。 柱层析分离纯化 (石油醚： 乙醚 =80: 1 )得中间体 3, 收率 71%。
中间体 4的合成：
氮气保护下将 2. 54g ( 11. 43mmol ) 中间体 3溶于 100ml无水四氢呋喃 中， 加入 LiAlH4 0. 22g (5. 72mmol)，避光反应 6小时。 反应结束后加入用水 湿润的乙醚 5ml , 后加入水 0. 5ml , 有沉淀生成。 滤出沉淀后溶液用无水 Na2S04干燥过夜，蒸干溶剂得粗产物。柱层析分离纯化（石油醚：乙醚 =15: 1 ) 的中间体 4, 收率 70%。
化合物 5的合成：
将 0. 2g( 1. 03mmol )中间体 4溶于 5ml二氯曱垸中，加入三乙胺 0. 3ml , DMAP 0. Olg, 冰浴搅拌。 称取丁二酸酐 0. 24g (2. 4mmol)用 3ml二氯曱垸溶 解， 呈悬浊液， 油浴回流。 10分钟后将中间体 4的二氯曱垸溶液用恒压漏 斗滴入， 滴完后 10分钟反应完全。 用 10%柠檬酸水溶液洗有机相 1遍， 后 用饱和 NaCl溶液洗至中性， 用无水 Na2S04干燥过夜。 蒸干溶剂得粗产物。 柱层析分离纯化（石油醚： 乙酸乙酯 =8: 1 )得化合物 5, 收率 80%。 XH NMR (CDC13): δ 6.68-6.58 (m, 3H), 4.25 (t, J=8.0Hz, 2H), 2.83 (t, J=8.0Hz, 2H), 2.65 (q, 4H)， 1.66 (s, 6H).
1. 2 HT与肽缀合物（化合物 1)的制备
多肽合成采用标准的 Fmoc固相方法。 选用 Rink Amide树脂， 肽链由 C端向 N端延长。 缩合剂为 HBTU/HOBt/DIEA。 脱保护剂为哌啶 /DMF溶液。 裂解剂为三氟乙酸（TFA ) , 粗肽水溶解后冻干保存。 用中压液相色谱法或 高压液相色谱法（HPLC )进行分离纯化， 纯肽含量>90%。 基盾辅助激光解 析飞行时间质谱（MALDI- T0F- MS )确定肽序列分子量。
利用 CEM微波多肽合成仪合成肽序列，小分子化合物可以作为最后的 残基与多肽 N端氨基缩合，然后在多肽裂解条件下脱去羟基保护基，最后得 到小分子-多肽缀合物。
合成条件如下：
保护氨基酸或小分子化合物： 0. 2M 的 DMF溶液，
活化剂： 0. 45M HBTU/HOBt 的 DMF溶液，
活化碱： 2M DIEA 的 NMP溶液，
脱保护剂： 20% v/v哌啶的 DMF溶液，
封闭试剂： 20% v/v 乙酸酐的 DMF溶液。
称取 Rink Amide树脂 0. 5g (0. 25mmol)置入 CEM微波多肽合成仪反应 器中， 然后将氨基酸， 小分子， 活化剂， 活化碱， 脱保护试剂， 封闭试剂 按上述浓度配置好后， 用 CEM微波全自动多肽合成仪进行合成。 完成后肽 树脂用 DMF洗涤 3遍后用无水曱醇收缩， 室温真空干燥， 得肽树脂 2. 05g。
裂解液 (体积百分比）：三氟乙酸： 乙二硫醇： 间曱酚： 水 = 82. 5 ： 10 ： 肽树脂 （连接小分子 HT ) 的裂解： 称取微波合成仪合成好的肽树脂 2. 05g, 放入 250ml茄形瓶中， 冰浴， 电磁搅拌。 按 1克肽树脂加入 10ml 的量配制裂解液。 TFA需预先冰浴降温 30min或者预先存放于冰箱中使用； 将配制好的裂解液加入到冰浴条件下的肽树脂中， 电磁搅拌， 树脂变橙红 色， 冰浴条件下反应 30min, 然后， 撤冰浴， 室温再继续搅拌反应 90min, 反应完成。 剧烈搅拌下向反应器中加入冷乙醚 200ml , 析出白色沉淀， 继 续搅拌 30min;用 G4的砂芯抽虑漏斗滤出析出物，用冷乙醚反复洗涤 3遍， 晾干。 加入双蒸水 50ml , 乙腈 5ml使固体充分溶解， 抽虑， 滤液冻干得 N 端连接小分子的粗肽 1. 03g。
所得连接小分子的粗肽用中压或高压色谱进行纯化。色讲柱为 C18柱， 洗脱剂为乙腈，水及少量乙酸。具体操作步骤：称取粗肽 1. 00g,加水 20ml , 乙腈 5ml使固体溶解， 离心 10min (3000转 /分钟）， 取上清液上样。 色讲柱 预先用 15%乙腈 /水 /0. 1%冰乙酸溶液 200ml平衡。 上样后继续用 15%乙腈 / 水 /0. 1%冰乙酸溶液 200ml冲洗， 高效^目检测洗脱液成分。根据液相检测 结果逐渐升高乙腈含量， 直至所纯化的多肽缀合物主峰被洗脱出来。 合并 洗脱液， 旋转蒸发去除大部分溶剂， 冻干得纯的小分子-多肽缀合物（化合 物 1 ) , HPLC检测含量大于 90%。 实施例 2-7 化合物 2-7的制备
方法同实施例 1 , 只是连接小分子与多肽的连接臂（ l inker )分别替 换为 P -丙氨酸（ P Ala ) , 6-氨基己酸（Aca ) , PEd, PEG2， PEG3,将上述 作为连接臂的化合物先分别与多肽连接， 再与小分子连接， 得到化合物 2- 化合物 7。 实施例 8 化合物 8的制备
胆固醇溴代乙酸酯（Choi- Br )的合成
依次称取溴乙酸 6. 95g, 胆固醇 7. 73g, EDC-HC1 13. 43g, DMAP 122mg 加入 500ml茄形瓶中， 加入 DCM 500ml , 冰浴下搅拌， 溶液呈黄色。 30min 后撤除冰浴， 室温下反应 24h, 溶液呈红褐色。 依次用饱和 NaHC03、 饱和 NaCl洗涤， 无水 MgS04干燥。 适当浓缩后用硅胶柱湿法装柱上样纯化。 先 用石油醚： 乙酸乙酯 =10: 1作为洗脱剂洗脱 500ml之后将洗脱剂更换为石 油醚： 乙酸乙酯 =9: 1 , 洗脱下产物， 蒸除溶剂， 真空干燥后得到白色固体 6. 3g, 产率 62%。
首先按实施例 1的方法合成多肽， 然后取纯化后的多肽（>90% ) 20mg 溶于 0. 3ml DMS0中， 分别加入 0. 2ml Chol-Br 3. Omg的 THF溶液， 混合均 匀后用滴管加入 DIEA 2滴， 室温反应 3h, 用 C4半制备反相色讲柱分离纯 化， MALDI- T0F- MS确证分子量。 实施例 9-15 化合物 9-15的制备
首先按实施例 1的方法合成小分子 HT与多肽缀合物，然后再按实施例 8的方法与胆固醇连接， 得到目标化合物， MALDI- T0F- MS确证分子量。 实施例 16-45 化合物 16-45的制备
分别按实施例 1 , 实施例 8和实施例 9的方法合成多肽与小分子 HT缀 合物， 只是将多肽序列进行变化。 实施例 46 化合物 46的制备
46. 1 NB2 ^的保护与连接臂的引入： 将 NB2苯环 用苄酯保护， 然后在其吡咯环的 3位引入一个羧基，以便与连接臂或多肽 N端进行反应。 合成路线如下：
Figure imgf000024_0001
9 8
中间体的 2合成：
化合物 1 (10. 0g， 0. 04mol)用 30ml CH2C12及 5ml DMF溶解， 溶解后加 入苄醇（ 12. 85g， 0. 12mol ) , DCC( 9. 0g， 0. 04mol )及 4-吡咯坑基吡啶 1. 0g, 室温搅拌 12小时， TLC监测反应进程。 反应完成后蒸除溶剂， 加入乙酸乙 酯 200ml反应物， 滤除 DCU。 有机相依次用饱和 NaHC03， 5%杵檬酸， H20洗 涤， 无水 MgS04干燥。化合物 2的粗品经硅胶柱层析纯化 [V (石油醚）： V (乙 酸乙酯）=7: 2]得 6. 2g无色油状物， 收率 45. 76%。
中间体 3的合成：
在化合物 2 ( 6. 2g， 0. 02mol ) 中加入 4N HCl/EtOAc溶液， 室温搅拌 1 小时， 蒸干反应液得化合物 2 (白色固体） ， 直接用于下步反应。
中间体 6的合成：
在三口瓶中加入丙酮 ( 508ml, 6. 90mol ) , H20 1000ml , KC103 ( 120g， 1. lOmol ) 。 机械搅拌下滴入 Br2 ( 206ml, 4. OOmol ) ， 约 1. 5小时滴完。 继续搅拌至反应液无色， KC103完全溶解， 反应完成。 萃取分离， 有机相中 加入 MgO振摇，水洗 3次后用无水 CaCl2干燥。减压蒸條，收集沸点为 50-51 "C 镏分， 得无色刺激性液体 140. 9g。 收率 14. 93%。 中间体 7的合成：
在茄瓶中加入乙酰乙酸叔丁酯（5. Oml , 0. 03mol ) , 无水乙醇 25ml , 冰浴冷却到 0"C。 滴入乙醇钠（12. 3ml , 0. 03mol )保持冰浴条件反应 15 分钟。 将上述混合液加入到搅拌的化合物 6 ( 2. 2ml , 0. 03mol ) 的无水乙 醇 /曱苯 [30ml , V (无水乙醇）： V (曱苯 ) =2: 1]溶液中， 室温搅拌 4小时。 加 入 2N HC 1酸化至中性，蒸除乙醇后加入 EtOAc, 有机相水洗三次，无水 MgS04 干燥。 化合物 7的粗品经硅胶柱层析纯化 [V (石油醚）： V (乙酸乙酯） =7: 2] 得 3. 79g浅黄色液体。 收率 57. 80%。
中间体 8的合成：
在茄瓶中加入化合物 3 ( 1. 80g, 6. 44mmol ) , 用 30ml 曱苯溶解。 加 入 N -曱基吗啉 ( 0. 71ml , 6. 44讓 ol ) , 化合物 7 ( 1. 52g, 6. 44讓 ol )及对 曱苯磺酸 0. 08g。 加热回流反应 3小时后冷却至室温。 减压蒸除溶剂后加 入乙酸乙酯溶解，有机相水洗 3次， 无水 MgS04干燥。化合物 8的粗品经硅 胶柱层析纯化 [V (石油醚）： V (乙酸乙酯） =9: 1]得 1. 91g浅黄色液体。 收率 70. 48%。
目标化合物 (化合物 9 )的合成：
将中间体 8中加入 6N HCl/EtOAc溶液， 室温搅拌至原料点消失， 蒸除 溶剂后加入石油醚， 置于冰箱中， 得浅褐色粉末 1. 3g。 收率 83%。 XH NMR (DMSO-d6): δ 11.73 (s， 1Η)， 10.72 (s， 1Η)， 7.93 (d, J=8.4Hz, 1H)， 7.37-7.52 (m， 5H)， 6.96 (d， J=2.0Hz, 1H)， 6.88 (dd， J=8.4, 2.0Hz, 1H)， 6.24 (s， 1H)， 5.41 (s, 2H)， 2.23 (s, 3H)， 1.96 (s, 3H).
46. 2 小分子 NB2与多肽的连接
按照实施例 1. 2的方法合成 NB2与多肽的缀合物。 实施例 47-87 化合物 47-87的制备
分别按照实施例 46 ,实施例 8以及实施例 9的方法合成化合物 47-87 , MALDI-TOF-MS确证分子量。 实施例 88 化合物 88的制备
88. 1 小分子 的保护与连接臂的引入（方法 1 ) ：
按如下合成路线合成羧基保护的 A12, 并使其酚羟基成醚， 降低修饰所 引起的对电性的影响并利用羧曱基的羧基与多肽 N 端结合。
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000026_0002
中间体 2的合成：
在茄形瓶中加入 5 -氨基水杨酸 0. 5g (3. 26讓 ol)用 10ml饱和 NaHC03溶 解，呈悬浊液。 加入苄氧羰酰氯 0. 61g, 0TC搅拌。 反应结束后滤除沉淀， 滤液用无水乙醚洗三遍后用 4N盐酸调 PH=2- 3。 调酸性后用乙酸乙酯萃取 三遍， 酯层合并， 用无水 Na2S04干燥过夜， 蒸干溶剂得淡紫色固体， 与滤 除的固体合并， 得中间体 2。 产率 95%。
中间体 3的合成：
称取中间体 2 0. 16g于 50ml茄形瓶中， 加入 DMAP 0. 006g, 加入叔丁 醇 3ml溶解， 呈悬浊液。 称取 DCC 0. 24g, 用 3ml无水 THF溶解。 用衡压 漏斗将上述溶液滴入到茄形瓶中， 回流 2小时。 反应完全后蒸干溶剂， 用 乙酸乙酯重新溶解，后用饱和 NaHC03洗三遍、饱和 NaCl溶液洗三遍， 无水 Na2S04干燥过夜。 蒸干后粗品直接用于下步反应。
中间体 4的合成：
在上步所得粗品中加入固体 K2C03 0. 15g, 用 3ml 2-丁酮溶解， 加热回 流 30分钟。 在上述溶液中加入溴乙酸叔丁酯 0. 22g, 继续回流 3小时。 反 应完全后加入水 15ml , 用氯仿萃取一遍， 氯仿层用 5%NaOH洗两遍后用饱 和 NaCl溶液洗三遍， 无水 Na2S04干燥过夜。 蒸干后得棕色油状物。 柱层析 分离纯化（石油醚： 乙酸乙酯 =8: 1 ) , 得无色油状物 0. 18g。 收率 75%。 中间体 5的合成：
称取 0. 2g中间体 4并溶解于 5ml无水曱醇中。 加入 5% Pd/C 0. 5g, 50ps i下催化氢化。 反应 24小时后滤去 5% Pd/C, 蒸干溶液得无色油状物， 直接用于下步反应。 收率 50%。
中间体 6的合成：
称取中间体 5 0. 3g, 用 5ml曱苯溶解。 加入 NMM 0. 1ml , 2，5-己二酮 0. 23g, 对曱基苯磺酸 0. Olg, 回流 5小时。 反应完成后放置室温， 减压蒸 除溶剂得棕红色油状物。 加入乙酸乙酯 15ml溶解产物， 并用饱和 NaCl溶 液洗三遍,无水 Na2S04干燥过夜。柱层析分离纯化 (石油醚：乙酸乙酯 =30: 1 ), 得无色油状物。 产率 70%。
化合物 7的合成：
上述所得油状物用 3ml曱醇溶解， 冰浴下滴加 IN NaOH lml。 反应 15 分钟后用 1N盐酸中和。 减压蒸除部分溶剂后再用 1N盐酸调 PH=2- 3。 有白 色固体析出， 得化合物 7。 产率 95%。 NMR (CD3OD): δ 7.44 (d， J=2.8Hz, 1H)， 7.30 (dd, J=8.7, 2.8Hz, 1H), 7.13 (d, J=8,7Hz, 1H), 5.78 (s, 2H), 4.79 (s, 2H)， 1.96 (s, 6H), 1.58 (s, 9H); 13C NMR (DMSO-d6): δ 169.80, 164.23, 155.47, 131.99, 130.88, 129.34， 127.70, 122.93, 114.26, 105.88, 81.21, 65.40, 27.75, 12.87.
88. 2小分子 A12 ^的保护与连接臂的引入（方法 2 ) ：
按如下合成路线合成羧基保护的 A12, 并使其酚羟基成醚， 降低修饰所 引起的对电性的影响并利用羧曱基的 与多肽 N端结合。 该合成路线较
88. 1中的合成路线使得产物收率得到明显提高。
Figure imgf000028_0001
中间体 2的合成：
称取 5 -硝基水杨酸 0. 2g于 50ml茄形瓶中， 加入 DMAP 0. 006g, 加入 叔丁醇 3ml溶解， 呈悬浊液。 称取 DCC 0. 24g, 用 3ml无水 THF溶解。 用 衡压漏斗将上述溶液滴入到茄形瓶中， 回流 2小时。反应完全后蒸干溶剂， 用乙酸乙酯重新溶解， 后用饱和 NaHC03洗三遍、饱和 NaCl溶液洗三遍， 无 水 Na2S04干燥过夜。 石油醚： 乙酸乙酯 =20: 1过柱纯化。
中间体 3的合成：
中间体 2用 3ml 2 -丁酮溶解， 加入固体 K2C03 0. 15g, 加热回流 30分 钟。 在上述溶液中加入溴乙酸叔丁酯 0. 22g, 继续回流 3小时。 反应完全 后加入水 15ml , 用氯仿萃取一遍， 氯仿层用 5%NaOH洗两遍后用饱和 NaCl 溶液洗三遍， 无水 Na2S04干燥过夜。 蒸干后得棕色油状物。 柱层析分离纯 化（石油醚： 乙酸乙酯 =8: 1 ) , 得无色油状物 0. 18g。 收率 80%。
中间体 4的合成：
称取 0. 2g中间体 3并溶解于 5ml无水曱醇中。 加入 10% Pd/C 0. 02g, 50ps i下催化氢化。 反应 1小时后滤去 5% Pd/C, 蒸干溶液得无色油状物， 直接用于下步反应。 收率 98%。
中间体 5的合成：
称取中间体 4 0. 3g, 用 5ml曱苯溶解。 加入 NMM 0. 1ml , 2，5-己二酮 0. 23g, 对曱基苯磺酸 0. Olg, 回流 5小时。 反应完成后放置室温， 减压蒸 除溶剂得棕红色油状物。 加入乙酸乙酯 15ml溶解产物， 并用饱和 NaCl溶 液洗三遍,无水 Na2S04干燥过夜。柱层析分离纯化 (石油醚：乙酸乙酯 =30: 1 ), 得无色油状物。 产率 70%。
化合物 6的合成：
上述所得油状物用 3ml曱醇溶解， 冰浴下滴加 IN NaOH lml。 反应 15 分钟后用 1N盐酸中和。 减压蒸除部分溶剂后再用 1N盐酸调 PH=2- 3。 有白 色固体析出， 得化合物 6。 产率 95%。 NMR (CD3OD): δ 7.44 (d， J=2.8Hz, 1H)， 7.30 (dd, J=8.7, 2.8Hz, IH), 7.13 (d, J=8,7Hz, IH), 5.78 (s, 2H), 4.79 (s, 2H)， 1.96 (s, 6H), 1.58 (s, 9H); 13C NMR (DMSO-d6): δ 169.80, 164.23, 155.47, 131.99, 130.88, 129.34， 127.70, 122.93, 114.26, 105.88, 81.21, 65.40, 27.75, 12.87.
88. 3 小分子 A12与多肽缀合物的制备
按照实施例 1. 2的方法合成 A12与多肽的缀合物。 实施例 89-129 化合物 89-129的制备
分别按照实施例 88 ,实施例 8以及实施例 9的方法合成化合物 89-129 , MALDI-T0F-MS确证分子量。 实施例 130 化合物 130的制备
130. 1 小分子 mNB2的合成：
按如下合成路线合成羧基保护的 NB2,并在其酚羟基部位与溴乙酸乙酯 反应， 后经皂化脱掉乙酯， 羧基与肽链相连。
DCGDMAP/t-BuOH
Figure imgf000030_0001
中间体 2的合成：
称取 4 -硝基水杨酸 0. 2g于 50ml茄形瓶中， 加入 DMAP 0. 006g, 加入 叔丁醇 3ml溶解， 呈悬浊液。 称取 DCC 0. 24g, 用 3ml无水 THF溶解。 用 衡压漏斗将上述溶液滴入到茄形瓶中， 回流 4小时。反应完全后蒸干溶剂， 用乙酸乙酯重新溶解， 后用饱和 NaHC03洗三遍、饱和 NaCl溶液洗三遍， 无 水 Na2S04干燥过夜。 石油醚： 乙酸乙酯 =20: 1过柱纯化。
中间体 3的合成：
中间体 2用 3ml 2 -丁酮溶解， 加入固体 K2C03 0. 15g, 加热回流 30分 钟。 在上述溶液中加入溴乙酸叔丁酯 0. 22g, 继续回流 3小时。 反应完全 后加入水 15ml , 用氯仿萃取一遍， 氯仿层用 5%NaOH洗两遍后用饱和 NaCl 溶液洗三遍， 无水 Na2S04干燥过夜。 蒸干后得棕色油状物。 柱层析分离纯 化（石油醚： 乙酸乙酯 =8: 1 ) , 得无色油状物 0. 18g。 收率 80%。
中间体 4的合成：
称取 0. 2g中间体 3并溶解于 5ml无水曱醇中。 加入 10% Pd/C 0. 02g, 50ps i下催化氢化。 反应 1小时后滤去 5% Pd/C, 蒸干溶液得无色油状物， 直接用于下步反应。 收率 98%。
中间体 5的合成：
称取中间体 4 0. 3g, 用 5ml曱苯溶解。 加入 NMM 0. 1ml , 2，5-己二酮 0. 23g, 对曱基苯磺酸 0. 01g, 回流 5小时。 反应完成后放置室温， 减压蒸 除溶剂得棕红色油状物。 加入乙酸乙酯 15ml溶解产物， 并用饱和 NaCl溶 液洗三遍,无水 Na2S04干燥过夜。柱层析分离纯化 (石油醚：乙酸乙酯 =30: 1 ), 得无色油状物。 产率 70%。
目标化合物 6的合成：
上述所得油状物用 3ml曱醇溶解， 冰浴下滴加 IN NaOH lml。 反应 15 分钟后用 1N盐酸中和。 减压蒸除部分溶剂后再用 1N盐酸调 PH=2- 3。 有白 色固体析出， 得化合物 6。 产率 95%。 NMR (CD3OD): δ 7.78 (d， J=8.1Hz, 1H), 6.88 (dd, J=8.1, 1.9Hz, 1H), 6.82 (d, 1.9Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 1.98 (s, 6H), 1.57 (s, 9H); 13C NMR (DMSO-d6): δ 169.83, 164.66, 157.79, 141.73, 130.85, 127.58, 120.90, 119.17, 113.60, 106.32, 80.74, 67.08, 27.84, 12.88.
130. 2 小分子 mNB2与多肽缀合物的制备
按照实施例 1. 2的方法合成 mNB2与多肽的缀合物。 实施例 131-171化合物 131-171的制备
分别按照实施例 130 , 实施例 8 以及实施例 9 的方法合成化合物 131-171 , MALDI- T0F- MS确证分子量。 实施例 172-224 化合物 172-224的制备
分别按照实施例 1 , 实施例 8 , 实施例 9和实施例 130的方法合成化合 物 172-224所示多肽与小分子缀合物， MALDI- T0F- MS确证分子量。 实施例 225 化合物抑制 HIV- 1介导的细胞-细胞融合活性评价（ IC5。 ) 一、 TZM-bl细胞和 HL2/3细胞的复苏 /冻存
将细胞冻存管从液氮中取出，37"C水浴迅速升温，取出细胞冻存液（ 1ml ), 加至 15ml离心管， 并加入 lml培养基， 离心（800rpm, lOmin ) , 除去培 养基， 重新加入 lml新鲜培养基， 并轻吹使细胞均匀悬浮， 将细胞悬浮液全 部转移至含有 15ml培养基的 75cm2培养瓶中， 在 37Ό、 5%C02下培养。
消化细胞并计 离心， 弃上清， 加冻存液轻吹使细胞均匀悬浮（100 万 /ml ) , 分装至冻存管（lml/管）， 分别置于 4"C ( 30min )、 -20 "C ( 2h )、 -80 "C ( I2h )、 -196"C ^。
二、 传代培养 取出细胞培养瓶， 倒去培养基， 加入 2ml消化液， 轻晃使其在细胞表面 平铺均匀， 倒去消化液， 重新加入 2ml消化液， 铺匀， 37"C消化 2min, 加入 4ml培养基终止消化， 取出所有液体， 离心， 弃上清， 加 4ml培养基并轻吹 使细胞均匀悬浮，取 10 μ 1计数，取 40-50万细胞置于 75cm2培养瓶中传代培 养。
三、 融合实验
A. 取 TZM-bl细胞（由美国 NIH AIDS Research and Reference Reagent Program提供 )悬浮液稀释至 50万 /ml, 铺入 96孔细胞培养板， 50 μ 1/孔， 培养 24h。
B. 样品： 取待测化合物， 先估计化合物的 IC50值， 以这个估计的 值为基础， 乘以两个 4, 再乘以 6得到待测化合物的配制浓度， 例如： 估计 样品的 IC50为 ΙΟηΜ, 则样品的配制浓度为 10*4*4*6=960nM, 以此浓度为 基础， 在 96孔板上第 (1-10)列依次将待测化合物稀释四倍； ， 11列和 12列 为空白溶剂 (空白溶剂即只^^养基，不含待测样品，其中 11列为阳性对照， 为无样品抑制剂^^下以 1:3浓度混合的 TZM-bl细胞和 HL2/3细胞； 12列 为阴性对照， 为单一 TZM-bl细胞的化学发光信号）； DMSO含量 < 6%。
样品配制说明：每个样品板（Costar 3799, Corning Incorporation, USA ) 可配制 4个样品， 每个样品重复两次， 如图 1所示， 以第一行为例将选定浓 度的样品放置第 A1孔， 序列稀释 4倍， 按此稀释 10个浓度梯度。 最后两个 孔作为对照只含有培养基， 其中第 11孔含有靶细胞和效应细胞为 100%融合 对照（阳性对照） ， 第 12孔只含靶细胞为无融合背景对照（阴性对照）。
C.取 HL2/3细胞（由美国 NIH AIDS Research and Reference Reagent Program提供）悬浮液稀释至 100万 /ml, 加入细胞板的（1-11) x (A-H), 50 μ 1/孔， 第 12 x (Α-Η)补加 50 μ 1/孔培养基。
D. 立即取步骤 Β中的 20 μ 1/孔样品加入细 Ji&^L, 培养 6h。
E. 去除细胞板中每孔中的培养基 ( 120 μ ΐ/孔） ， 以 PBS洗 2次， 150 μ 1/次。
F. 加入稀释后的裂解液（I X ) , 50 μ 1/孔， 裂解 5min; 其中稀释 后的裂解液（I X )即将 Luciferase试剂盒（Promega, USA ) 中 （5 x ) 的裂解液用水稀释， 根据用量新鲜配制， 具体操作按照说明书进行。
G. 取 20 μ 1/孔细胞裂解液铺在 96孔磷; i ^L上。
H. 将融化后的 LA緩冲液 ( Luciferase Assay Buffer , Promega Cooperation, USA )加入 LA底物 ( Lucif erase Assay Substrate, Promega Cooperation, USA ) 中混匀， 加 40 μ 1/孔于 96孔磷; i ^L中， 具体操作按照 说明书进行。
Η. 立即在酶标仪上检测发光， 具体操作按照说明书进行。 实验的阴性 对照为单一 TZM-bl细胞的化学发光信号， 用 Min表示； 阳性对照为无样品 抑制剂条件下以 1:3浓度混合的 TZM-bl细胞和 HL2/3细胞， 用 Max表示； 测定值为某一样品在某一浓度下的信号值，用 X表示；细胞融合率 =( X-Min ) I ( Max-Min ) *100%。 根据细胞融合率采用 Origin软件计算 IC50值。
按照上述方法， 抑制 HIV- 1介导的细胞融合活性测定结果见下面的表
表 1 : 抑制 HIV- 1介导的细胞融合活性（ IC5Q )和缀合物的质谱结果（MW )
Figure imgf000033_0001
HT-2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK 45. 065 ± 33. 778 3726
HT— PEG -- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK 79. 068 ± 37. 077 3601
HT—PEG2— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK 67. 486 ± 23. 098 3645
HT— PEG 3— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK 65. 756 ± 22. 046 3689 lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0134 ± 0. 0653 3907
HT lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0128 ± 0. 0063 4101
HT- p Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0095 ± 0. 0005 4172
HT—Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0056 ± 0. 0084 4214
HT-2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0066 ± 0. 0007 4327
HT—PEGi— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0049 ± 0. 0008 4202
HT—PEG2— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0065 ± 0. 0004 4246
HT—PEG3— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0056 ± 0. 0006 4290
HT 1 EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK 56. 063 ± 5. 0593 3669
ΗΤ- β Al a-IEELIKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK 67. 047 ± 8. 8605 3740
HT—Aca— I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK 86. 055 ± 17. 075 3782
HT-2Aca— IEELIKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK 47. 065 ± 6. 0787 3895
HT— PEG -- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 99. 068 ± 67. 064 3770
HT—PEG2— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 26. 476 ± 4. 0560 3814
HT— PEG 3— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 47. 056 ± 23. 079 3858
IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0348 ± 0. 0069 4075
HT— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0098 ± 0. 0563 4269
ΗΤ- β Ala-IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0025 ± 0. 0003 4340
HT—Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0089 ± 0. 0564 4382
HT-2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0038 ± 0. 0002 4495
HT—PEGi— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0076 ± 0. 0007 4370
HT—PEG2— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0067 ± 0. 0008 4414
HT—PEG3— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0046 ± 0. 0009 4458
NB2 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 34. 023 ± 5. 0693 3500
NB2- β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 45. 097 ± 8. 0005 3571
NB2—Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 67. 015 ± 10. 005 3613
NB2-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 38. 005 ± 6. 0707 3726
NB2—PEG1— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 69. 098 ± 36. 084 3601
NB2—PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 21. 456 ± 4. 0530 3645 NB2—PEG3— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 34. 056 ± 9. 0079 3689
NB2 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0236 ± 0. 0693 3954
NB2- β Ala-AEELA AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0097 ± 0. 0005 4024
NB2—Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0154 ± 0. 0054 4067
NB2-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0075 ± 0. 0007 4179
NB2—PEG1— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0098 ± 0. 0034 4054
NB2—PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0065 ± 0. 0030 4098
NB2—PEG3— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0078 ± 0. 0069 4142
NB2 IEELA IEELA IEELA IEELA 0. 0236 ± 0. 0693 3521
NB2- β Ala-IEELA IEELAKK IEELAKK IEELAKK 0. 0097 ± 0. 0005 3592
NB2—Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 0. 0154 ± 0. 0054 3634
NB2-2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 0. 0075 ± 0. 0007 3747
NB2—PEG1— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 0. 0098 ± 0. 0034 3622
NB2—PEG2— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 0. 0065 ± 0. 0030 3666
NB2—PEG3— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 0. 0078 ± 0. 0069 3700
NB2 IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0236 ± 0. 0693 4122
NB2- β Ala-IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0097 ± 0. 0005 4193
NB2—Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0154 ± 0. 0054 4235
NB2-2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0075 ± 0. 0007 4348
NB2—PEG1— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0098 ± 0. 0034 4223
NB2—PEG2— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0065 ± 0. 0030 4267
NB2—PEG3— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0078 ± 0. 0069 4311
NB2 1 EEL IKK IEELI IEELI IEELI 54. 095 ± 4. 754 3690
NB2- β Ala-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK 42. 655 ± 7. 3568 3761
NB2—Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 8. 9876 ± 2. 852 3803
NB2-2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 17. 643 ± 0. 5566 3916
NB2—PEG1— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 2. 678 ± 0. 5014 3791
NB2—PEG2— IEELI K IEELIKK IEELIKK IEELIKK 49. 366 ± 8. 7893 3835
NB2—PEG3— IEELI K IEELIKK IEELIKK IEELIKK 67. 624 ± 24. 036 3879
NB2 IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0078 ± 0. 0069 4290
NB2- β Ala-IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK— p Ala— C— Choi 0. 0236 ± 0. 0693 4361
NB2—Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0097 ± 0. 0005 4403
NB2-2Aca-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0154 ± 0. 0054 4516 85 NB2-PEG1-IEELI IEELI I EEL IKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0075 ± 0. 0007 4391
86 NB2-PEG2-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0098 ± 0. 0034 4435
87 NB2-PEG3-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0065 ± 0. 0030 4479
88 An AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 19. 096 ± 2. 752 3514
89 Αΐ2- β Ala-AEELA AEELAKK AEELAKK AEELAKK 22. 655 ± 1. 378 3585
90 Ai2—Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 8. 054 ± 2. 892 3627
91 Ai2-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 17. 855 ± 0. 5476 3740
92 A12—PEG1— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 2. 662 ± 0. 6314 3615
93 A12—PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 19. 346 ± 0. 0563 3659
94 A12—PEG3— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 5. 6677 ± 0. 0906 3703
95 An AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0058 ± 0. 0065 3968
96 Αΐ2- β Ala-AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0096 ± 0. 0393 4038
97 Ai2—Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0081 ± 0. 0805 4081
98 Ai2-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0094 ± 0. 0002 4193
99 A12—PEG1— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0045 ± 0. 0006 4068
100 A12—PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0057 ± 0. 0007 4112
101 A12—PEG3— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0087 ± 0. 0005 4156
102 An IEELA IEELA IEELA IEELA 15. 066 ± 2. 552 3535
103 Αΐ2- β Ala-IEELA IEELAKK IEELAKK IEELAKK 5. 655 ± 1. 362 3606
104 Ai2—Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 8. 057 ± 2. 342 3648
105 Ai2-2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 12. 945 ± 0. 5466 3761
106 A12—PEG1— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 2. 665 ± 0. 6334 3636
107 A12—PEG2— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 4. 3456 ± 0. 0673 3680
108 A12—PEG3— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 1. 6427 ± 0. 0506 3714
109 An IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0548 ± 0. 0035 4136
110 Αΐ2- β Ala-IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0046 ± 0. 0323 4207
111 Ai2—Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0051 ± 0. 0005 4249
112 Ai2-2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0066 ± 0. 0003 4362
113 A12—PEG1— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0086 ± 0. 0005 4237
114 A12—PEG2— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0032 ± 0. 0003 4281
115 A12—PEG3— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- p Ala- C- Cho i 0. 0052 ± 0. 0004 4325
116 An IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 13. 046 ± 2. 562 3704
117 Αΐ2- β Ala-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK 7. 675 ± 1. 332 3775 118 An— Aca— IEELI IEELI IEELI IEELI 6. 056 ± 2. 212 3817
119 Ai2-2Aca— IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK 5. 985 ± 0. 5432 3930
120 An—PEGi— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 2. 651 ± 0. 3564 3805
121 A12—PEG2— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 4. 3560 ± 0. 0643 3849
122 A12—PEG3— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 1. 5527 ± 0. 2906 3891
123 An IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0248 ± 0. 0075 4304
124 Αΐ2- β Ala-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK— p Ala— C— Choi 0. 0096 ± 0. 0023 4375
125 An— Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0061 ± 0. 0002 4417
126 Ai2-2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0056 ± 0. 0005 4530
127 An— PEGi-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0075 ± 0. 0008 4405
128 An— PEG2-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0034 ± 0. 0002 4449
129 An— PEGs-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0048 ± 0. 0005 4493
130 mNB2 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 43. 056 ± 3. 6572 3514
131 mNB2- p Ala-AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 25. 467 ± 1. 8992 3585
132 mNB2— Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 4. 6788 ± 2. 4692 3627
133 mNB2-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 19. 656 ± 0. 5876 3740
134 mNB2—PEGi— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 2. 7478 ± 0. 8614 3615
135 mNB2—PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 19. 345 ± 0. 0763 3659
136 mNB2—PEG3— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK 7. 6987 ± 0. 0986 3703
137 mNB2 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0128 ± 0. 0465 3968
138 mNB2- β Ala-AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0156 ± 0. 0678 4038
139 mNB2— Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0089 ± 0. 0609 4081
140 mNB2-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0087 ± 0. 0009 4193
141 mNB2—PEGi— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0235 ± 0. 0076 4068
142 mNB2—PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0097 ± 0. 0077 4112
143 mNB2—PEG3— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0127 ± 0. 0055 4156
144 mNB2 IEELA IEELA IEELA IEELA 35. 786 ± 6. 652 3535
145 Αΐ2- β Ala-IEELA IEELAKK IEELAKK IEELAKK 5. 6785 ± 1. 662 3606
146 mNB2— Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 5. 0587 ± 2. 964 3648
147 mNB2-2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 18. 995 ± 0. 5066 3761
148 mNB2—PEGi— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 2. 8568 ± 0. 4734 3636
149 mNB2—PEG2— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 4. 7656 ± 0. 0690 3680
150 mNB2—PEG3— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK 1. 8942 ± 0. 0806 3714 151 mNB2 lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0127 ± 0. 0075 4136
152 mNB2- p A a- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0062 ± 0. 0353 4207
153 mNB2—Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0091 ± 0. 0075 4249
154 mNB2-2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- p Ala- C- Choi 0. 0078 ± 0. 0023 4362
155 mNB2—PEGi— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0066 ± 0. 0007 4237
156 mNB2—PEG2— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0146 ± 0. 0013 4281
157 mNB2—PEG3— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala- C- Choi 0. 0069 ± 0. 0009 4325
158 mNB2 IEELI I EEL IKK I EEL IKK IEELI 15. 0476 ± 7. 562 3704
159 mNB2- p Ala-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK 7. 8766 ± 1. 372 3775
160 mNB2—Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 7. 0366 ± 2. 781 3817
161 mNB2-2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 5. 978 ± 0. 5832 3930
162 mNB2—PEGi— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 5. 6771 ± 0. 8564 3805
163 mNB2—PEG2— IEELI K IEELIKK IEELIKK IEELIKK 5. 3670 ± 0. 0643 3849
164 mNB2—PEG3— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK 1. 5427 ± 0. 2706 3891
165 mNB2 IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0078 ± 0. 0085 4304
166 mNB2- p Ala-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0093 ± 0. 0021 4375
167 mNB2—Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0089 ± 0. 0006 4417
168 mNB2-2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0086 ± 0. 0012 4530
169 mNB2— PEGi-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0054 ± 0. 0009 4405
170 mNB2— PEG2-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0044 ± 0. 0004 4449
171 mNB2— PEGs-IEELI IEELIKK IEELIKK IEELIKK- p Ala- C- Choi 0. 0053 ± 0. 0004 4493
172 HT IEELIKK SEELI IEEQI QEESI K 5. 035 ± 1. 432 3647
173 ΗΤ- β Ala-IEELI SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 11. 24 ± 1. 490 3718
174 HT—Aca— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 9. 056 ± 2. 762 3760
175 HT— 2Aca-IEELI SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 7. 065 ± 1. 892 3873
176 HT—PEG2— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 6. 095 ± 2. 682 3792
177 HT—PEG3— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 5. 035 ± 1. 432 3836
178 NB2 IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 12. 765 ± 1. 788 3668
179 NB2- β Ala-IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 2. 211 ± 0. 3646 3739
180 NB2—Aca— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 4. 3570 ± 0. 0651 3781
181 NB2-2Aca— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 1. 5457 ± 0. 8776 3894
182 NB2—PEG2— IEELI K SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 2. 934 ± 0. 5473 3813
183 NB2—PEG3— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK 0. 6942 ± 0. 0673 3857 184 Αΐ2—β Ala— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK 0. 3960 ± 0. 0611 3753
185 An— - Aca— - lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK 0. 5367 ± 0. 0676 3866
186 An— - PEG2— - lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK 0. 5368 ± 0. 0386 3898
187 mNB2—p Ala— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK 0. 5660 ± 0. 0781 3753
188 mNB2— - Aca— - lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK 0. 8967 ± 0. 5653 3866
189 mNB2— - PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK 0. 3658 ± 0. 0753 3898
190 An lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A a-C-Chol 0. 0027 ± 0. 0003 4282
191 Αΐ2- β Ala-IEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0036± 0. 0075 4353
192 An— Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0037 ± 0. 0002 4395
193 Ai2-2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0059± 0. 0043 4518
194 An—PEGi— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0049 ± 0. 0008 4383
195 A12—PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0086 ± 0. 0008 4427
196 A12—PEG3— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0065 ± 0. 0042 4471
197 HT lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A a-C-Chol 0. 0126± 0. 0564 4247
198 ΗΤ- β Ala-IEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- p Ala- C- Choi 0. 0087 ± 0. 0032 4318
199 HT—Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β A la-C-Chol 0. 0089 ± 0. 0056 4360
200 HT-2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β A a-C-Chol 0. 0036± 0. 0008 4483
201 HT—PEGi— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- p Ala- C- Choi 0. 0457 ± 0. 0045 4348
202 HT—PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- p Ala- C- Choi 0. 0069± 0. 0098 4392
203 HT—PEG3— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- p Ala- C- Choi 0. 0049 ± 0. 0004 4436
204 NB2 lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - p Ala- C- Choi 0. 0258± 0. 0443 4268
205 NB2- β Ala-IEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0170 ± 0. 0138 4339
206 NB2— Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0158 ± 0. 0008 4381
207 NB2-2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0180 ± 0. 0143 4504
208 NB2—PEG1— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0198 ± 0. 0065 4369
209 NB2—PEG2— lEELI K SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0098 ± 0. 0156 4413
210 NB2—PEG3— lEELI K SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0064 ± 0. 0346 4457
211 HT8 lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol 0. 0134 ± 0. 0458 4247
212 ΗΤ8- β Ala-IEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0058 ± 0. 0008 4262
213 HT8— Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0568 ± 0. 0763 4304
214 HT8-2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0568 ± 0. 0535 4427
215 HTg—PEGi— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0068 ± 0. 0296 4292
216 HT8—PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK- β Ala-C-Chol 0. 0078 ± 0. 0256 4336 217 HT8— PEG3— IEELI SEELI IEEQI QEESI - β Ala-C-Chol 0. 0159 ± 0. 0326 4380
218 mNB2 1 EEL IKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK - p Ala- C- Choi 0. 0084 ± 0. 0008 4282
219 mNB2- β Ala-IEELI SEELIKK IEEQIKK QEESIKK- β Ala- C- Choi 0. 0058 ± 0. 0007 4353
220 mNB2— Aca— IEELI SEELIKK IEEQIKK QEESIKK- β A a-C-Chol 0. 0078 ± 0. 0045 4395
221 mNB2-2Aca— IEELI SEELIKK IEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0018 ± 0. 0087 4518
222 mNB2—PEGi— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0061 ± 0. 0076 4383
223 mNB2—PEG2— IEELI K SEELIKK IEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0078 ± 0. 0006 4427
224 mNB2—PEG3— IEELIKK SEELIKK IEEQIKK QEESIKK- β A la-C-Chol 0. 0123 ± 0. 0026 4471
225 WMEWDRE INNYTSL IHSLIEE SQNQQEK NEQELL 0. 0063 ± 0. 0012 4289
226 YTSLIHS LIEESQN QQE NEQ ELLELD WASLWNWF 0. 0021 ± 0. 0004 4491 由表 1活性结果可知， 所有小分子-多肽缀合物均显示了抑制 HIV- 1细 胞融合活性， 其中化合物 10-15, 25-30， 39-45, 54-59, 68-73, 81-87, 95-101, 110-115， 124-129, 138-143、 151-157、 165-171、 190-224抑制 HIV融合活性达到低的 nM水平， 与阳性对照药 T20 (化合物 226 )和 C34 (化合物 225 )相当。 尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述， 本领域技术人员将 会理解。根据已经公开的所有教导， 可以对那些细节进行各种修改和替换， 这些改变均在本发明的保护范围之内。 本发明的全部范围由所附权利要求 及其任何等同物给出。

Claims

1. 式 I所示的多肽、其衍生物、其立体异构体、或其无生理毒性的盐，
Sm - Li一 XalEEXdlXelKK X^EE Xd2 e2 K Xa3EEXd3Xe3KK Xa4EE b4 e4 K一 Z 式 I
其中，
3„为能够与 HIV- 1 gp41 N-trimer表面疏水性口袋区特异性结合的小 分子化合物， 或者 Sm缺失；
为使得小分子能够保持空间灵活性而与靶标结合的， 连接肽与小分 子间的连接臂， 或者 L缺失；
Xal、 Xa2、 Xa3、 4为非天然 HR序列肽中 a位的天然或非天然氨基酸残 基， Xal、 Xa2、 Xa3、 Xa4可以相同或不同；
EE-KK为形成稳定 α-螺旋结构的残基組合， 分别位于 HR序列的 b， c， f， g位， 它们位于螺旋的外侧面， 与溶剂接触， 不参与与靶标残基的相互 作用，主要是利用其侧链不同电性间形成盐桥作用而形成并稳定 or螺旋结 构， 其中， E为 L型或 D型谷氨酸， K为 L型或 D型赖氨酸；
Xdl、 Xd2、 Xd3、 ^为非天然 HR序列肽中 d位的天然或非天然氨基酸残 基， Xdl、 Xd2、 Xd3、 Xd4可以相同或不同；
Xei , Xe2 , Xes , Xe4为非天然 HR序列肽中 e位的天然或非天然氨基酸残 基， Xel、 Xe2、 Xe3、 Xe4可以相同或不同；
Z为 L2- C-Chol , 或者 Z缺失； 其中
L2为连接多肽与胆固醇分子间的连接臂；
C为 L型或 D型半胱氨酸；
Choi为胆固醇。
2. 根据权利要求 1所述的式 I多肽、其衍生物、其立体异构体、或其 无生理毒性的盐，
其中，
Sm选自如下小分子化合物：
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000042_0002
mNB- 其中， NB2-L是在 NB2分子的吡咯环 3位引入一个 作为与多肽连接 的 Linker; mNB2是在 NB2分子的酚羟基上引入羧甲基作为 Linker,使其与 多肽相连； A12-L是在 A12分子酚羟基处引入乙酸作为 Linker, 以便与多肽 连接；
1^可以为： 天然或非天然氨基酸； 二酸； 二胺； 二醇； 一端为氨基， 一端为羧基的聚乙二醇； 具体的， 可为选自以下化合物的一个或数个（例 如两个、 三个） ， 当 L,为选自以下化合物的数个 （例如两个、 三个） 时， 化合物之间以酰胺键相连：
L型或 D型的甘氨酸（Gly) ， 丙氨酸（Ala), 亮氨酸（Leu) ，异亮氨 酸（lie), 谷氨酸（Glu) ， 谷酰胺 （Gin) ， 天冬氨酸（Asp) ， 天冬酰胺 sn)， 缬氨酸（Val)， 赖氨酸（Lys)， 丝氨酸（ Ser )， 苏氨酸（ Thr )， 精氨酸（Arg) ， 组氨酸（His) , 色氨酸（Trp) ， 苯丙氨酸（Phe) ， 酪 氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱硫氨酸（Met)；
&-丙氨酸（& 1&)；
Y -氨基丁酸（GABA)；
6 -氨基己酸（Aca);
乙二酸， 两二酸， 丁二酸， 戊二酸， 己二酸；
乙二胺， 两二胺， 丁二胺， 戊二胺， 己二胺；
乙二醇， 丙二醇， 丁二醇， 戊二醇， 己二醇；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEd)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG2)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG3)；
Xal、 Xa2、 Xa3、 4可以相同或不同，选自如下 D型或 L型的氨基酸： 甘 氨酸（Gly),丙氨酸 (Ala),亮氨酸（Leu)，异亮氨酸（lie), 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gin)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺（Asn)， 纈氨酸（Val)， 赖 氨酸 (Lys)， 丝氨酸（Ser)， 苏氨酸（Thr)， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His), 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱 硫氨酸（Met)；
Xdl、 Xd2、 Xd3、 ^可以相同或不同，选自如下 D型或 L型的氨基酸： 甘 氨酸（Gly),丙氨酸 (Ala),亮氨酸（Leu)，异亮氨酸（lie), 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gin)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺（Asn)， 纈氨酸（Val)， 赖 氨酸 (Lys)， 丝氨酸（Ser)， 苏氨酸（Thr)， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His), 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱 硫氨酸（Met)；
Xei, Xe2, Xes, Xe4可以相同或不同，选自如下 D型或 L型的氨基酸： 甘 氨酸（Gly),丙氨酸 (Ala),亮氨酸（Leu)，异亮氨酸（lie), 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gin)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺（Asn)， 纈氨酸（Val)， 赖 氨酸 (Lys)， 丝氨酸（Ser)， 苏氨酸（Thr)， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His), 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱 硫氨酸（Met)；
L2可为选自以下化合物的一个或数个（例如两个、 三个） ， 当 L2为选 自以下化合物的数个（例如两个、 三个） 时， 化合物之间以酰胺键相连：
L型或 D型的甘氨酸（Gly) , 丙氨酸 (Ala), 亮氨酸（Leu)，异亮氨 酸（lie), 谷氨酸（Glu)， 谷酰胺（Gin)， 天冬氨酸（Asp) , 天冬酰胺 (Asn) , 纈氨酸（Val)， 赖氨酸 (Lys)， 丝氨酸（ Ser )， 苏氨酸（ Thr )， 精氨酸（Arg)， 組氨酸（His) , 色氨酸（Trp)， 苯丙氨酸（Phe)， 酪 氨酸（Tyr)， 半胱氨酸（Cys)， 曱硫氨酸（Met)；
氯乙酸；
溴乙酸；
&-丙氨酸（& 1&)；
Y -氨基丁酸（GABA)；
6 -氨基己酸（Aca);
乙二酸， 两二酸， 丁二酸， 戊二酸， 己二酸；
乙二胺， 两二胺， 丁二胺， 戊二胺， 己二胺；
乙二醇， 丙二醇， 丁二醇， 戊二醇， 己二醇；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEd)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG2)；
NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-COOH (PEG3)；
Choi 为胆固醇。
3. 根据权利要求 1所述的式 I多肽、其衍生物、 其立体异构体、 或其 无生理毒性的盐， 其中， 所述式 I多肽选自 SEQ ID NO: 1 - 224所示序列的 多肽中的至少一种：
1 HT- -AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 1)；
2 HT- β Ala - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 2)
3 HT- — Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 3)
4 HT- ■2Aca- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 4)
5 HT- -PEGr -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 5)
6 HT- -PEG2 - -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 6)
7 HT- -PEG3- -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 7)
8 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO:
9 HT AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 9)
10 ΗΤ-β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 10)
11 HT— Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 11)
12 HT-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 12)
13 HT— PEG-- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 13) HT— PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 14) ； HT— PEG厂- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 15) ； HT lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 16) ；
1
ΗΤ-β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 17) ；
HT— Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 18) ；
HT-2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 19) ；
HT— PEG-- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 20) ；
HT— PEG2— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 21 ) ；
HT— PEG厂- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 22 ) ；
lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 23) ；
HT- — - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 24)
HT- β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 25)
HT- — Aca― lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 26)
HT- ■2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 27)
HT- -PEG-- - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 28)
HT- -PEG2- - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 29)
HT- - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 30)
HT- I EEL IKK IEELIKK I EEL IKK I EEL IKK ( SEQ ID NO: 31 ) ；
HT- β Ala- I EEL IKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 32) ；
HT- — Aca― IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 33) ；
HT- ■2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 34) ；
HT- -PEG-- - IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 35) ；
HT- -PEG2- - IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 36) ；
HT- - IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 37) ；
IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 38 ) ；
HT- —IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK -P Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 39)
HT- β Ala- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 40)
HT- -Aca—― IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 41)
HT- 2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 42)
HT- -PEG-- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 43)
HT- -PEG2— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 44)
HT- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 45) NB2 ■AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 46 ) ；
NB2 -P Ala- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 47) ；
NB2 —― Aca— - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 48) ；
NB2 -2Aca— - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 49) ；
NB2 - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 50)
NB2 — PEG2 - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 51)
NB2 — PEG厂 - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 52)
NB2 — - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 53)
NB2 -β Ala- - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 54)
NB2 —― Aca— - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 55)
NB2 -2Aca— - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 56)
NB2 - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 57)
NB2 — PEG2 - - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 58)
NB2 — PEG厂 - AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 59)
NB2 ■lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 60 ) ；
NB2 -β Ala- - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 61) ；
NB2 —― Aca— - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 62) ；
NB2 -2Aca— - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 63) ；
NB2 - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 64)
NB2 — PEG2 - - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 65)
NB2 — PEG厂 - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 66)
NB2 — - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 67)
NB2 -β Ala- - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 68)
NB2 —― Aca— - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 69)
NB2 -2Aca— - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 70)
NB2 - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 71)
NB2 — PEG2 - - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 72)
NB2 — PEG厂 - lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 73)
NB2 IEELIKK I EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK ( SEQ ID NO: 74 ) ；
NB2 -β Ala- - IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 75) ；
NB2 —― Aca— - IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 76) ；
NB2 -2Aca— - IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 77) ； 78 NB2— PEG -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 78 )
79 NB2— PEG2— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 79 )
80 NB2— PEG3— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 80 )
Ί
81 NB2 lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 81 )
82 NB3 - P Ala- I EEL IKK lEELIKK lEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 82 )
83 NB3 ― Aca― lEELIKK lEELIKK lEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 83 )
84 NB3 -2Aca― lEELIKK lEELIKK lEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 84 )
85 NB3 lEELIKK lEELIKK lEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 85 )
86 NB3 — PEG2— lEELIKK lEELIKK lEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 86 )
87 NB3 —PEG厂- lEELIKK lEELIKK lEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 87 )
88 A12 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 88 ) ；
89 Α12- β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 89 )
90 A12~Aca~ AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 90 )
91 A12-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 91 )
92 A12~PEG -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 92 )
93 A12~PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 93 )
94 A12— PEG厂- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 94 )
95 A12 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 95 )
96 Α12- β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 96 )
97 A12~Aca~ AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 97 )
98 A12-2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 98 )
99 A12~PEG -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 99 ) 100
PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 100 ) ；
101
PEG厂- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 101 ) ；
102
lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 102 ) ；
Figure imgf000047_0001
β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 103 ) ；
Figure imgf000047_0002
Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 104 ) ； 105 A12-2 Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 105 ) ；
106 A12― PEG -- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 106 ) ；
107 A12― PEG2— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 107 ) ；
108 A12― PEG厂- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK ( SEQ ID NO: 108 ) ；
109 A12~ lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 109 ) ；
110 A12 - β Ala- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 110 ) ；
111 A12― Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 111 ) ；
112 A12-2 Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 112 ) ；
113 A12― PEG -- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 113 ) ；
114 A12― PEG2— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 114 ) ；
115 A12― PEG厂- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 115 ) ；
116 A12~
1 EEL IKK I EEL IKK I EEL IKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 116 ) ；
117 A12 - β Ala- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 117 ) ；
118 A12― Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 118 ) ；
119 A12-2 Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 119 ) ；
120 A12― PEG -- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 120 ) ； 121 A12― PEG2— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 121 ) ；
122 A12 -- PEG厂- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK ( SEQ ID NO: 122 ) ；
123 A12~ lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 123 ) ；
124 A12 - β Ala- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 124 ) ；
125 A12― Aca— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 125 ) ；
126 A12-2 Aca— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 126 ) ；
127 A12― PEG -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 127 ) ；
128 A12― PEG2— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 128 ) ；
129 A12― PEG厂- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 129 ) ；
130 mNB2
AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 130 ) ；
131 mNB2 - β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 131 ) ；
132 mNB2 —Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 132 ) ；
133 mNB2 -2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 133 ) ；
134 mNB2 —PEG -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 134 ) ；
135 mNB2 — PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 135 ) ；
136 mNB2 —PEG厂- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK ( SEQ ID NO: 136 ) ； 137 mNB2 AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 137 ) ；
138 mNB2 - β Ala- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 138 ) ；
139 mNB2 — Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 139 ) ；
140 mNB2 -2Aca— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 140 ) ；
141 mNB2 —PEG -- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 141 ) ；
142 mNB2 — PEG2— AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 142 ) ；
143 mNB2 —PEG厂- AEELAKK AEELAKK AEELAKK AEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 143 ) ；
144 mNB2
IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 144 ) ；
145 mNB2 - β Ala- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 145 ) ；
146 mNB2 —Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 146 ) ；
147 mNB2 -2Aca— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 147 ) ；
148 mNB2 —PEG -- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 148 ) ；
149 mNB2 — PEG2— IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 149 ) ；
150 mNB2 —PEG厂- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK ( SEQ ID NO: 150 ) ；
151 mNB2
IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 151 ) ；
152 mNB2 - β Ala- IEELAKK IEELAKK IEELAKK IEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 152 ) ； 153 mNB2 — Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 153 ) ；
154 mNB2 -2Aca— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 154 ) ；
155 mNB2 —PEG -- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 155 ) ；
156 mNB2 — PEG2— lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 156 ) ；
157 mNB2 —PEG厂- lEELAKK lEELAKK lEELAKK lEELAKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 157 ) ；
158 mNB2
1 EEL IKK I EEL IKK IEELIKK I EEL IKK ( SEQ ID NO: 158 ) ；
159 mNB2 - β Ala- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 159 ) ；
160 mNB2 —Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 160 ) ；
161 mNB2 -2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 161 ) ；
162 mNB2 —PEG -- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 162 ) ；
163 mNB2 — PEG2— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 163 ) ；
164 mNB2 —PEG厂- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK ( SEQ ID NO: 164 ) ；
165 mNB2
IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 165 ) ；
166 mNB2 - β Ala- IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 166 ) ；
167 mNB2 —Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 167 ) ；
168 mNB2 -2Aca— IEELIKK IEELIKK IEELIKK IEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 168 ) ； 169 mNB2
—PEG -- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 169 ) ；
170 mNB2
— PEG2— lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 170 ) ；
171 mNB2
—PEG厂- lEELIKK lEELIKK lEELIKK lEELIKK- β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 171 ) ；
172 HT— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 172 ) ；
173 HT- β Ala-IEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 173 ) ；
174 HT—
Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 174 ) ；
175 HT—
2Aca-IEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 175 ) ；
176 HT—
PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 176 ) ；
177 HT—
PEG厂 -lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 177 ) ；
178 NB2 - lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 178 )
179 NB2 - β Ala-IEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 179 ) ；
180 NB2 -
-Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 180 ) ；
181 NB2 -
2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 181 ) ；
182 NB2 -
-PEG厂 -lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 182 ) ；
183 NB2-
-PEG3— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 183 ) ；
Figure imgf000052_0001
β Ala— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 184 ) ； 185 A12― -Aca— - lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK (SEQ ID NO: 185)；
186 A12― -PEG2 -— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK (SEQ ID NO: 186)；
187 mNB2 —β Ala— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 187)；
188 mNB2 — - Aca -— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 188 )；
189 mNB2 —- PEG2 -— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK ( SEQ ID NO: 189)；
190 A12~ lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 190) ；
191 A12 - β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 191 ) ；
192 A12― Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 192)；
193 A12-2 Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 193)；
194 A12― PEG-- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 194 )；
195 A12― PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 195 )；
196 A12― PEG3— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 196 )；
197 HT— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 197) ；
198 HT - β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol (SEQ ID NO: 198 ) ；
199 HT —Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 199)；
200 HT -2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK -β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 200 )； 201 HT
—PEG -- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 201 )
202 HT — PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 202 )
203 HT — PEG3— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 203 )
204 NB2- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 204 )
205 NB2 β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 205 )
206 NB2 —Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 206 )
207 NB2 -2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 207 )
208 NB2 —PEG -- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 208 )
209 NB2 — PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 209 )
210 NB2 — PEG3— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 210 )
211 HT8- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 211 )
212 HT8 β Ala- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 212 )
213 HT8 —Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 213 )
214 HT8 -2Aca— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 214 )
215 HT8 —PEG -- lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 215 )
216 HT8 — PEG2— lEELIKK SEELIKK lEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 216 ) 217 HT8 — PEG3— I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 217 )；
218 mNB2
I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 218 )；
219 mNB2 - β Ala- I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 219 )；
220 mNB2 — Aca— I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 220 )；
221 mNB2 -2Aca— I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 221 )；
222 mNB2 —PEG -- I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 222 )；
223 mNB2 — PEG2— I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 223 )；
224 mNB2 — PEG3— I EEL IKK SEEL IKK IEEQIKK QEESIKK - β Ala-C-Chol ( SEQ ID NO: 224 ) 。
4. 一种药物組合物，其含有至少一种权利要求 1-3中任一项所述的式 I 多肽、 其衍生物、 其立体异构体、 或其无生理毒性的盐， 以及药学上可 接受的载体或辅料。
5. 一种 HIV融合抑制剂，其含有权利要求至少一种权利要求 1-3中任 一项所述的式 I多肽、 其衍生物、 其立体异构体、 或其无生理毒性的盐。
6. 权利要求 1-3中任一项所述的式 I多肽、其衍生物、其立体异构体、 或其无生理毒性的盐在制备 HIV融合抑制剂中的用途。
7.权利要求 1-3中任一项所述的式 I多肽、其衍生物、其立体异构体、 或其无生理毒性的盐在制备用于治疗或预防 HIV感染相关疾病尤其是艾滋 病的药物中的用途。
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