WO2013054046A1 - Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation - Google Patents

Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation Download PDF

Info

Publication number
WO2013054046A1
WO2013054046A1 PCT/FR2012/052307 FR2012052307W WO2013054046A1 WO 2013054046 A1 WO2013054046 A1 WO 2013054046A1 FR 2012052307 W FR2012052307 W FR 2012052307W WO 2013054046 A1 WO2013054046 A1 WO 2013054046A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
compound
formula
groups
complex
Prior art date
Application number
PCT/FR2012/052307
Other languages
English (en)
Inventor
Raymond Ziessel
Mathieu STARCK
Alexandra SUTTER
Original Assignee
Centre National De La Recherche Scientifique
Universite De Strasbourg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National De La Recherche Scientifique, Universite De Strasbourg filed Critical Centre National De La Recherche Scientifique
Priority to CA2850619A priority Critical patent/CA2850619A1/fr
Priority to US14/348,259 priority patent/US9388202B2/en
Priority to EP12780235.3A priority patent/EP2766377A1/fr
Publication of WO2013054046A1 publication Critical patent/WO2013054046A1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/576—Six-membered rings
    • C07F9/58—Pyridine rings

Definitions

  • the present invention relates to organic compounds useful as ligands for the preparation of lanthanide complexes or certain water-soluble transition metals, a process for their preparation and their use as a fluorescent probe.
  • the lanthanide ion complexes have very particular spectroscopic properties that allow applications in the field of luminescence detection. These complexes have a very large Stokes shift, very thin emission lines, of the order of a few nm, which are characteristic of the lanthanide ion used. They can emit in the visible or near-infrared range, and they have an extremely long excited state of life, up to a millisecond. This last characteristic is an essential asset: it allows a time-resolved detection (which makes it possible to eliminate the parasitic fluorescence signals) and it causes a very strong increase in the detection sensitivity of the complexes by luminescence microscopy or in the analyzes fluoroimmun unanimouss.
  • the luminescent complexes of lanthanide ions therefore have applications in most fields of conventional fluorescence.
  • lanthanide ion complexes are generally difficult to obtain.
  • Many properties of the complex depend on the structure of the ligand and the lanthanide ion, including the excitation efficiency of the complex, the degree of stability of the lanthanide complexation in a competitive chemical medium and in a serum medium (which must be high). to avoid the release of the cations), the luminescence quantum yield and the possibility of forming covalent bonds with the material to be marked for the biological applications of the complexes.
  • Adequate excitation of the complexes can be achieved when the ligand of the complex comprises heteroaromatic groups which are intended to capture light and transfer it to the lanthanide ion which will be reemitted. This phenomenon is called antenna effect.
  • Heteroaromatics defines many spectroscopic properties of the final complex, including the spectral range of excitation and luminescence quantum yield.
  • CN-181 1429-A discloses a complex of Tb 3+ and a ligand which has a 2,6-dipyrazolylpyridine backbone wherein each of the pyrazolyl groups has a -CH 2 -N (CH 2 CO 2 H) 2 moiety.
  • Said complex is useful for the detection of singlet oxygen. It is obtained by a process of attaching the anthracene group to a dibromoaminopyridine and then modifying the pyridyl group by reaction of the bromine atoms with the appropriate reagents to replace each Br with a pyrazolyl group carrying a -CH 2 -N group (CH 2 CO 2 H) 2 .
  • EP-0 770 610 discloses lanthanide ion complexes wherein the ligand is a 2,6-dipyrazolylpyridine skeleton wherein each of the pyrazolyl groups has a -CH 2 -N (CH 2 CO 2 H) 2 moiety.
  • the preparation process consists in first preparing a 2,6-dipyrazolylpyridine di-brominated compound and then modifying it to obtain the two end groups -CH 2 -N (CHG 2 CO 2 H) 2 . This method does not make it possible to obtain compounds in which the pyridyl group carries substituents chosen to adjust the properties of the lanthanide complex in which said compounds constitute the ligand.
  • No. 2,935,973 discloses ligands derived from 2,6-dipyrazolylpyridine in which each of the pyrazolyl groups bears a group -CH 2 -N (CHG 2 CO 2 R) 2 in which each of R represents H or an alkali metal or a quaternary ammonium group, the pyrazolyl groups may also carry one or two substituents selected from an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or these two substituents together form a biradical forming an aromatic ring with the two carbon atoms which the carry.
  • These ligands are capable of complexing lanthanide ions and find applications for marking and two-photon microscopy.
  • the object of the present invention is to provide compounds useful as ligands for lanthanide or transition metal complexes which have improved solubility in water and in biological media, as well as excellent chemical stability, very good luminescence properties and very long life time.
  • a compound according to the present invention has the following formula (I):
  • n is an integer ranging from 0 to 4.
  • A represents a -COO function in which R is a hydrogen atom or an alkaline cation; or a group A 2 ;
  • a 2 represents a group -P (O) (OCH 2 CH 3 ) (OR 2 ) or -P (O) (OR 2 ) 2 in which R 2 represents a hydrogen atom or an alkaline cation;
  • Wi represents a hydrogen atom, a heteroatom, a halogen atom, a non-coordinating solubilizing function, a polyethylene glycol chain, or a function capable of changing the electronic delocalization of the photon collecting antenna;
  • each of Y 1 and Y 2 represents an H atom, an amino group, thiol, or Y 1 and Y 2 together form a biradical forming one or more aromatic or heteroaromatic rings with the two carbon atoms which carry them;
  • B represents a linker consisting of at least one group selected from -CO-NH-, peptide groups containing from 1 to 4 amino acids, alkylene groups which have from 2 to 10 carbon atoms and which optionally comprise at least one heteroatom in the carbon chain, and alkynyl groups which have 2 to 10 carbon atoms and which optionally include at least one heteroatom in the carbon chain;
  • D represents an oxygen or sulfur atom, a linear alkyl chain preferably having 1 to 4 carbon atoms, a cycloalkane preferably having 2 to 3 vertices or an aryl;
  • biotin function (-CO- (CH 2 ) 4 -C 5 H 7 N 2 OS), a polyheteroaromatic group or a crown ether,
  • a macroscopic support such as, for example, a silica ball, a nanolatex ball or any other support capable of being functionalized, such as, for example, mesoporous TiO 2 , ZnO or NiO (A. Mishra et al., Angew Chem Int. Ed. 2009, 14, 2474).
  • non-coordinating solubilizing function means a function capable of solvating a molecule and rendering it soluble in an aqueous medium. or serum so that the solubility of this molecule is of the order of one millimole per liter and does not interact with lanthanide ions or transition metals.
  • non-coordinating solubilizing functions mention may be made in particular of polyethylene glycol chains of different sizes, polysaccharides or complex carbohydrates, quaternary ammonium groups, and the like.
  • the term function capable of changing the electronic delocalization of the photon collecting antenna any unsaturated function capable of causing significant electronic delocalization.
  • functions there may be mentioned in particular aromatic rings, rings containing hetero atoms, unsaturated bonds bearing an aryl or polyaryl group, or any unsaturated function.
  • silylated organic cluster a cluster comprising silicon, and oxygen without metal atoms.
  • W 1 represents a hydrogen atom.
  • a compound of formula (I) according to the present invention may be prepared from a compound corresponding to the following formula (II):
  • R 6 is chosen from the following groups of formula R 6 -a or R 6 -b:
  • R ' 1 represents a linear or branched C 1 -C 4 alkyl radical such as, for example, an ethyl or tert-butyl radical;
  • R - R ' 2 represents a radical QQ such as for example an ethyl radical
  • Y 1 and Y 2 are as defined for the compounds of formula (I) above.
  • Compounds of formula (II) in which substituents Y 1 and Y 2 together form an aromatic ring such as, for example, a fused phenyl ring may be prepared by a process comprising following steps: i) in a first step, 1,4-dibromonaphthalene (compound 1) is reacted with a source of acetylene such as, for example, propargyl alcohol to obtain a compound 2, ii) in a second step, the compound 2 resulting from step i) is deprotected in a basic hot medium in the presence of a mineral base such as KOH or NaOH, to obtain a compound 3; iii) in a third step; performs the coupling of the compound 3 resulting from stage ii) with a compound 4 of formula (III) below:
  • the compounds of formula (II) in which the radicals Y 1 and Y 2 together form an aromatic ring other than a phenyl group may be prepared by a process analogous to that used above for the compounds of formula ( ⁇ ), comprising steps i) to v) above, but using instead of 1,4-dibromonaphthalene in step i), a corresponding brominated compound, for example 2,3-dimethoxy-1,4-dibromobenzene.
  • a compound of formula (II) in which the substituents Y 1 and Y 2 are separate groups may be prepared by a process similar to that described above for the compounds of formula ( ⁇ ), comprising steps i) to v) above, but in which the compound 1 in step i) is replaced by a 1,4-dibromophenyl compound bearing on the phenyl ring the desired substituents Y 1 and Y 2 , i.e., a hydrogen atom, or an amino or thiol group.
  • the process for preparing a compound of formula (I) according to the invention comprises:
  • the replacement of the linear alkyl groups R ' 1 and R' 2 by a K + , Na + or Li + cation may be carried out with KOH, NaOH or LiOH respectively in a polar solvent (for example a CH 3 OH / H mixture). 2 O), at a temperature between 20 and 100 ° C, for example at 60 ° C, or using trimethylsilyl bromide in a solvent such as dichloromethane at room temperature followed by basic hydrolysis.
  • the COOK, COONa or COOLi group can then, if necessary, be modified to an acid group by reaction with an acid such as HCl in water.
  • the replacement by H of branched alkyl groups R ' 1 or R' 2 may be effected by reaction with trifluoroacetic acid (TFA) in an aprotic organic solvent.
  • TFA trifluoroacetic acid
  • the organic solvent may be THF, Et 2 O 3 N, DMF, DMSO, toluene, CH 2 C1 2 , or a mixture thereof (for example a THF / Et 3 N mixture).
  • the bromine atom of the compound of formula (II) may be subjected to various chemical reactions such as Stille couplings , Heck, Sonogashira or Suzuki, carboalkoxylation or carboamidation reactions.
  • the organometallic catalyst used in the l st step is preferably a complex of Pd and triphenylphosphine, such as [Pd (PPh 3) 2 Cl 2] or [Pd (PPh 3) 4].
  • the temperature is preferably between 20 and 120 ° C.
  • the reagent used to react with the compound of formula (II) depends on the nature of group B of the compound of formula (I).
  • B represents -CO-NH- (respectively -CO-O-)
  • the reagent used is an amine of formula Z-CH 2 - (CH 2 -D) m -CH 2 -NH 2 (respectively an alcohol of formula Z-CH 2 - (CH 2 -D) m -CH 2 -OH), formulas in which Z, D and m have the meanings indicated above for the compounds of formula (I ), in the presence of carbon monoxide.
  • B represents -C ⁇ C-
  • the reagent used comprises a true acetylenic group, HC ⁇ C-.
  • the first step is preferably carried out under a stream of carbon monoxide in the presence of an aminoalkylate ester (such as an aminobutyrate ester such as ethyl aminobutyrate) at a temperature of preferential 70 ° C.
  • an aminoalkylate ester such as an aminobutyrate ester such as ethyl aminobutyrate
  • the l st step of the process comprises reacting the compound of formula (II) with a corresponding reagent which has a terminal group HC ⁇ C-, such as, for example, ethyl heptynoate.
  • the reaction is preferably carried out at a temperature of about 50 ° C.
  • the organometallic catalyst is preferably a complex of palladium and triphenylphosphine, in particular Pd (PPh 3 ) 2 Cl 2 in the presence of Cul or [Pd (PPh 3 ) 4 ].
  • a lanthanide or transition metal complex according to the invention comprises a lanthanide ion or a transition metal complexed with a ligand of formula (I) as defined above.
  • the lanthanide ion is selected from Gd 3+ , Lu 3+ , Eu 3+ , Tb 3+ , Dy 3+ , Sm 3+ , Er 3+ , Yb 3+ , Pr 3+ and Nd 3+ ions.
  • the ion of a metal of transition may be selected from the following metals Cu (II), Co (II), Mn (II or IV), Ni (II), Fe (III), Pd (II) and Pt (II).
  • a lanthanide or transition metal complex may be obtained by mixing equimolar amounts of a compound of formula (I) (preferably in the form of sodium salt) with a lanthanide salt or a transition metal salt, heating the mixture, cooling and neutralization to pH 6 to 8, then recovering the complex at room temperature.
  • a compound of formula (I) preferably in the form of sodium salt
  • the lanthanide salt may be a nitrate, chloride, perchlorate or triflate Ln (CF 3 SO 3 ) 3 .
  • the transition metal salt may for example be a chloride, acetate, nitrate or any other compound soluble in water or alcohols.
  • the compound of formula (I) and the lanthanide salt or the transition metal salt are mixed in equimolar quantities in solution in water or in a MeOH / water mixture, the solution is heated during 2 to 3 hours at 60 ° C, cooled to room temperature and then neutralized if necessary to pH 7 by addition of NaOH, a quaternary ammonium hydroxide or HCl diluted in water.
  • the complexes formed are then isolated by concentration of the mother liquors and precipitation in an H 2 O / MeOH / THF / Et 2 O mixture.
  • the complexes according to the invention have various applications, depending on the nature of the substituents of the pyridyl group of the ligand.
  • the stability of the terbium complexes synthesized from the ligands (1-1) to (1-4) according to the invention is given in Table 2 below.
  • Various buffers in the presence of ligands capable of decomplexing the lanthanide ions were tested.
  • Table 2 gives also the stability of a terbium complex TbL4 of the prior art and having the following formula:
  • Tb (I-3) and Tb (I-4) exhibit excellent stability with life times greater than 3 milliseconds in various aqueous media.
  • the complexes according to the invention have an exceptional solubility in water. Their solubility is of the order of one millimole per liter.
  • the production costs and the purification of these compounds make them very interesting potential candidates for biomedical and biological analysis in time resolved to quantify traces of analytes by specifically exciting the ligand which is considered as the collecting antenna. of photons.
  • Compounds according to the invention allow to accommodate all of the lanthanides and the ligand absorption properties are adjustable according to the decoration provided by said ligand.
  • the complexes of the invention are useful for labeling compounds that carry an amino, alcohol, thiol, carboxylic acid or activated ester group.
  • These compounds can be monomeric molecules or polymers optionally in the form of beads.
  • the Z group of the ligand of the complex is preferably a -COOH group, a COONa group, an N-hydroxysuccinimide ester-type activated ester or pentafluorophenol ester, a Br, an I, or an amine.
  • the luminescence properties of the complex may be disrupted by the presence of an analyte that binds to the recognition site.
  • analyte that binds to the recognition site.
  • Spectroscopy and two-photon absorption microscopy are relatively recent techniques that have the advantage, particularly in microscopy, of significantly improving the spatial resolution by using low energy photons.
  • Almost all of the luminescent markers studied in two-photon absorption are fluorescent organic compounds of hodamine® type. These organic compounds have very low Stokes displacements and broad emission bands (corresponding to a half-height width greater than 50 nm).
  • the luminescent complexes of lanthanide ions according to the present invention exhibit very high Stokes displacements and narrow emission bands. They are therefore particularly interesting compounds for marking and biphotonic microscopy and very recent work has demonstrated this possibility on Eu and Tb complexes. [Cf. in particular a) Law, GL; et al. J. Am. Chem.
  • the complexes of the invention in which the group B of the ligand of the complex is an amide function or a C ⁇ C group, and the terminal Z group comprises a terminal acid function capable of being converted into activated ester can be used as a luminescent marker for two-photon absorption.
  • the product was purified by chromatography using a variable mixture of dichloromethane / methanol (0/10 to 3/7 v / v MeOH / CH 2 Cl 2 ) and provided the expected compound 12 as a color solid. white with a chemical yield of 78%.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

La présente invention concerne des composés organiques, utilisables comme ligands pour la préparation de complexes de lanthanides ou de certains métaux de transition solubles dans l'eau, un procédé pour leur préparation, ainsi que leur utilisation à titre de sonde fluorescente.

Description

SONDES LUMINESCENTES POUR LE MARQUAGE BIOLOGIQUE ET L'IMAGERIE, LEUR PROCEDE DE PREPARATION.
La présente invention concerne des composés organiques, utilisables comme ligands pour la préparation de complexes de lanthanides ou de certains métaux de transition solubles dans l'eau, un procédé pour leur préparation, ainsi que leur utilisation à titre de sonde fluorescente.
Les complexes d'ions lanthanides possèdent des propriétés spectroscopiques très particulières qui permettent des applications dans le domaine de la détection par luminescence. Ces complexes possèdent un très large déplacement de Stokes, des raies d'émission très fines, de l'ordre de quelques nm, qui sont caractéristiques de l'ion lanthanide utilisé. Ils peuvent émettre dans le domaine visible ou proche infrarouge, et ils ont un temps de vie de l'état excité extrêmement long, pouvant atteindre la milliseconde. Cette dernière caractéristique est un atout essentiel : elle permet une détection en temps résolu (ce qui permet d'éliminer les signaux de fluorescence parasite) et elle provoque une très forte augmentation de la sensibilité de détection des complexes en microscopie de luminescence ou dans les analyses fluoroimmunologiques. Les complexes luminescents d'ions lanthanides ont par conséquent des applications dans la plupart des domaines de la fluorescence conventionnelle. Cependant, les complexes d'ions lanthanides sont généralement difficiles à obtenir. De nombreuses propriétés du complexe dépendent de la structure du ligand et de l'ion lanthanide, notamment l'efficacité d'excitation du complexe, le degré de stabilité de la complexation des lanthanides en milieu chimique compétitif et en milieu sérique (qui doit être élevé pour éviter le relargage des cations), le rendement quantique de luminescence et la possibilité de former des liaisons covalentes avec le matériel à marquer pour les applications biologiques des complexes. Une excitation adéquate des complexes peut être obtenue lorsque le ligand du complexe comprend des groupements hétéroaromatiques qui ont pour but de capter la lumière et de la transférer à l'ion lanthanide qui va réémettre. Ce phénomène est appelé effet d'antenne. Le choix de ces groupements hétéroaromatiques définit de nombreuses propriétés spectroscopiques du complexe final, notamment la gamme spectrale d'excitation et le rendement quantique de luminescence.
CN-181 1429- A décrit un complexe de Tb3+ et d'un ligand qui a un squelette 2,6-dipyrazolylpyridine dans lequel chacun des groupes pyrazolyle porte un groupement -CH2-N(CH2CO2H)2. Ledit complexe est utile pour la détection de l'oxygène singulet. Il est obtenu par un procédé consistant à fixer le groupe anthracène sur une dibromo-aminopyridine, puis à modifier le groupe pyridyle par réaction des atomes de brome avec les réactifs appropriés pour remplacer chaque Br par un groupe pyrazolyle portant un groupe -CH2-N(CH2CO2H)2 .
EP-0 770 610 décrit des complexes d'ion lanthanide dans lesquels le ligand est un squelette 2,6-dipyrazolylpyridine dans lequel chacun des groupes pyrazolyle porte un groupement -CH2-N(CH2CO2H)2. Le procédé de préparation consiste à préparer d'abord un composé 2,6-dipyrazolylpyridine di bromé, puis on le modifie pour obtenir les deux groupes terminaux -CH2-N(CHG2CO2H)2. Ce procédé ne permet pas d'obtenir des composés dans lesquels le groupe pyridyle porte des substituants choisis pour ajuster les propriétés du complexe de lanthanide dans lesquels lesdits composés constituent le ligand.
F -2 935 973 décrit des ligands dérivés de 2,6-dipyrazolylpyridine dans lesquels chacun des groupes pyrazolyle porte un groupement -CH2-N(CHG2CO2R)2 dans lequel chacun des R représente H ou un métal alcalin ou un groupe ammonium quaternaire, les groupes pyrazolyle pouvant en outre porter un ou deux substituants choisis parmi un groupe alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou bien ces deux substituants forment ensemble un biradical formant un cycle aromatique avec les deux atomes de carbone qui les portent. Ces ligands sont aptes à complexer les ions lanthanide et trouvent des applications pour le marquage et la microscopie biphotonique. Ils présentent cependant une faible solubilité dans l'eau et une grande instabilité en milieu purement aqueux, en milieu salin ou en milieu purement biologique. Le but de la présente invention est de fournir des composés utiles comme ligands pour des complexes de lanthanide ou de métal de transition qui aient une solubilité améliorée dans l'eau et dans les milieux biologiques, ainsi qu'une excellente stabilité chimique, de très bonnes propriétés de luminescence et des temps de vie très longs.
Ce but est atteint par les composés qui font l'objet de la présente invention et qui vont être décrits ci-après.
Un composé selon la présente invention répond à la formule (I) suivante :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle :
m est un nombre entier variant de 0 à 4 ;
A représente une fonction -COO dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un cation alcalin ; ou un groupement A2 ;
A2 représente un groupement -P(O)(OCH2CH3)(OR2) ou -P(O)(OR2)2 dans lesquels R2 représente un atome d'hydrogène ou cation alcalin ;
Wi représente un atome d'hydrogène, un hétéroatome, un atome d'halogène, une fonction solubilisante non coordinante, une chaîne polyéthylèneglycol, ou une fonction apte à changer la délocalisation électronique de l'antenne collectrice de photons ;
chacun des Y1 et Y2 représente un atome H, un groupement amino, thiol, ou bien Y 1 et Y 2 forment ensemble un biradical formant un ou plusieurs cycles aromatiques ou hétéroaromatiques avec les deux atomes de carbone qui les portent ;
B représente un segment de liaison constitué par au moins un groupe choisi parmi -CO-NH-, les groupes peptide contenant de 1 à 4 acides aminés, les groupes alkylène qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée, et les groupes alkynyle qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée ;
D représente un atome d'oxygène ou de soufre, une chaîne alkyle linéaire ayant de préférence de 1 à 4 atomes de carbone, un cycloalkane ayant de préférence de 2 à 3 sommets ou un aryle ;
Z est :
NH2, un halogène, un phosphate,
un groupe COO 3 dans lequel R3 est H, un cation alcalin, un groupe ammonium quaternaire N(R4)4 + dans lequel R4 est H ou une chaîne alkyle linéaire ayant de préférence de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe succinimide -N-(CO-CH2-CH2-CO)- ou un groupe pentafluorophényle -C6F5 ;
une fonction biotine (-CO-(CH2)4-C5H7N2OS), un groupement polyhétéroaromatique ou un éther couronne,
un cluster organique silylé ou un cluster inorganique ;
un support macroscopique tel que par exemple une bille de silice, une bille de nanolatex ou tout autre support susceptible d'être fonctionnalisé tel que par exemple du TiO2 mésoporeux, ZnO ou NiO (A. Mishra et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 14, 2474).
Selon l'invention, on entend par fonction solubilisante non coordinante, une fonction capable de solvater une molécule et de la rendre soluble en milieu aqueux ou sérique de telle sorte que la solubilité de cette molécule soit de l'ordre de la millimole par litre et qui n'interagit pas avec les ions lanthanides ou les métaux de transition. Parmi de telles fonctions solubilisantes non coordinantes, on peut en particulier citer les chaînes polyéthylèneglycol de différente tailles, les polysaccharides ou glucides complexes, les groupements ammonium quaternaire, etc ..
Selon l'invention, on entend par fonction apte à changer la délocalisation électronique de l'antenne collectrice de photons, toute fonction insaturée susceptible d'engendrer une délocalisation électronique importante. Parmi de telles fonctions, on peut en particulier citer les cycles aromatiques, les cycles comportant des hétéroatomes, les liaisons insaturées portant un groupement aryle ou polyaryle, ou toute fonction insaturée.
Selon l'invention, on entend par cluster organique silylé, un amas comprenant du silicium, et de l'oxygène sans atomes métalliques. Selon une forme de réalisation préférée de l'invention W1 représente un atome d'hydrogène.
Parmi les cations alcalins mentionnés pour 1 et R 2 , on peut en particulier citer K+, Na+ et Li+.
Les composés de formule (I) dans lesquels les groupes Y1 et Y2 représentent ensemble un cycle phényle fusionné, sont particulièrement préférés.
Un composé de formule (I) selon la présente invention peut être préparé à partir d'un composé répondant à la formule (II) suivante :
Figure imgf000007_0001
dans laquelle R6 est choisi parmi les groupements de formule R6-a ou R6-b suivants :
Figure imgf000007_0002
dans lesquels :
- R'1 représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en Ci-C4 tel que par exemple un radical éthyle ou ter-butyle ;
- R'2 représente un radical Q-Q tel que par exemple un radical éthyle ;
- Y1 et Y2 sont tels que définis pour les composés de formule (I) ci-dessus. Les composés de formule (II) dans lesquels les substituants Y1 et Y2 forment ensemble un cycle aromatique tel que par exemple un cycle phényle fusionné (désignés ci-après par composés de formule (ΙΓ)) peuvent être préparés par un procédé comprenant les étapes suivantes : i) dans une première étape on fait réagir du 1 ,4-dibromonaphtalène (composé 1) avec une source d'acétylène telle que par exemple de l'alcool propargylique pour obtenir un composé 2, ii) dans une deuxième étape, on déprotège le composé 2 issu de l'étape i) en milieu basique à chaud en présence d'une base minérale telle que KOH ou NaOH, pour obtenir un composé 3, iii) dans une troisième étape on effectue le couplage du composé 3 issu de l'étape ii) avec un composé 4 de formule (III) suivante :
Figure imgf000008_0001
en présence d'un catalyseur au palladium, dans un solvant organique sous argon, et d'une base organique soluble, pour obtenir un composé 5 de formule (IV) suivante :
Figure imgf000008_0002
iv) dans une quatrième étape, on réalise la conversion du composé 5 en composé 6 dibromo en présence de PBr3 en milieu chloroforme en utilisant du bromosuccinimide en présence de triphényle phosphine :
Figure imgf000009_0001
v) dans une cinquième étape, on réalise la substitution des deux atomes de brome du cycle pyridine du composé 7 dans un solvant anhydre tel que par exemple l'acétonitrile anhydre, en présence d'une base minérale choisie par exemple parmi K2CO3, Na2CO et Cs2CO et d'un composé choisi parmi les composés de formule (V) suivante [NH(CH2COOR'1)(CH2P(O)(OR'2)2] et les composés de formule (VI) suivante [NH{CH2P(O)(OR'2)2}2] dans lesquelles R'1 et R'2, indépendamment l'un de l'autre, représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié en Ci-C4. Le procédé de préparation d'un composé de formule (ΙΓ) peut être représenté par le schéma réactionnel 1 suivant, dans lequel les radicaux R'1, R'2, R5 et R6 ont les significations indiquées ci-dessus :
Figure imgf000010_0001
Les composés de formule (II) dans lesquels les radicaux Y1 et Y2 forment ensemble un cycle aromatique autre qu'un groupement phényle peuvent être préparés par un procédé analogue à celui utilisé ci-dessus pour les composés de formule (ΙΓ), comprenant les étapes i) à v) ci-dessus, mais en utilisant à la place du 1 ,4-dibromonaphtalène à l'étape i), un composé bromé correspondant, par exemple du 2,3-diméthoxy- 1 ,4-dibromobenzène.
Un composé de formule (II) dans lequel les substituants Y1 et Y2 sont des groupes séparés (désigné ci-après par composé de formule (Π")) peut être préparé par un procédé similaire à celui décrit ci-dessus pour les composés de formule (ΙΓ), comprenant les étapes i) à v) ci-dessus, mais dans lequel on remplace le composé 1 à l'étape i) par un composé 1 ,4-dibromophényl portant sur le cycle phényle les substituants Y1 et Y2 souhaités, c'est-à-dire un atome d'hydrogène, ou un groupement amino ou thiol. Le procédé de préparation des composés de formule (ΙΓ) peut être représenté par le schéma réactionnel 2 suivant dans lequel les radicaux R'1, R'2, R5 et R6 ont les significations indiquées ci-dessus et Y1 et Y2 représentent un atome H, ou un groupement amino ou thiol :
Figure imgf000011_0001
Plus particulièrement, le procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'invention comprend :
une première étape au cours de laquelle le brome d'un composé de formule (II) est remplacé par un groupe B-CH2(D-CH2)mCH2-Z dans lequel D a la même signification que celle indiquée ci-dessus relativement aux composés de formule (I), par réaction avec un réactif approprié, en présence d'un catalyseur organométallique, dans un solvant organique ;
une deuxième étape au cours de laquelle les groupes '1 et R'2 des groupements R6-a ou R6-b sont respectivement remplacés par des groupes R1 et R2, lesdits groupes étant H ou un cation alcalin pour R1 ou un cation alcalin pour R tel que mentionné précédemment.
Le remplacement des groupes R'1 et R'2 du type alkyle linéaire par un cation K+, Na+ ou Li+ peut être effectué avec KOH, NaOH ou LiOH respectivement dans un solvant polaire (par exemple un mélange CH3OH/H2O), à une température entre 20 et 100°C, par exemple à 60°C, ou bien en utilisant du bromure de triméthylsilyle dans un solvant tel que le dichlorométhane à température ambiante suivi d'une hydrolyse basique. Le groupe COOK, COONa ou COOLi peut ensuite, si nécessaire, être modifié en groupe acide par réaction avec un acide tel que HC1 dans l'eau. Le remplacement par H de groupes R'1 ou R'2 du type alkyle ramifié peut être effectué par réaction avec l'acide trifluoroacétique (TFA) dans un solvant organique apro tique.
Dans les différentes étapes du procédé de préparation d'un composé de formule (II), le solvant organique peut être THF, Et2O, Et3N, DMF, DMSO, le toluène, CH2C12, ou un de leurs mélanges (par exemple un mélange THF/Et3N).
Pour la mise en œuvre de la lere étape du procédé de préparation d'un composé de formule (I), l'atome de brome du composé de formule (II) peut être soumis à des réactions chimiques variées telles que des couplages de Stille, de Heck, de Sonogashira ou de Suzuki, des réactions de carboalkoxylation ou de carboamidation. Le catalyseur organométallique utilisé dans la lere étape est de préférence un complexe de Pd et de triphénylphosphine, par exemple [Pd(PPh3)2Cl2] ou [Pd(PPh3)4]. La température est comprise de préférence entre 20 et 120°C. Le réactif utilisé pour réagir avec le composé de formule (II) dépend de la nature du groupe B du composé de formule (I). Dans les réactions de carboamidation (respectivement de carboalkoxylation), B représente -CO-NH- (respectivement -CO-O-), le réactif utilisé est une aminé de formule Z-CH2-(CH2-D)m-CH2-NH2 (respectivement un alcool de formule Z-CH2-(CH2-D)m-CH2-OH), formules dans lesquelles Z, D et m ont les significations indiquées ci-dessus pour les composés de formule (I), en présence de monoxyde de carbone. Dans les couplages de type Sonogashira, B représente -C≡C-, le réactif utilisé comprend un groupe acétylénique vrai, H-C≡C-. Selon une forme de réalisation particulière du procédé de préparation des composés de formule (I), et lorsque le groupe B du substituant B-CH2(D-CH2)mCH2-Z du composé de formule (I) est un groupe -CO-NH-, alors la première étape est de préférence réalisée sous un flux de monoxyde de carbone en présence d'un ester d'aminoalkylate (tel qu'un ester d'aminobutyrate comme l'aminobutyrate d'éthyle) à une température préférentielle de 70°C.
Lorsque le groupe B du substituant B-CH2(D-CH2)mCH2-Z du composé de formule (I) est un groupe -C≡C-, la lere étape du procédé consiste à faire réagir le composé de formule (II) avec un réactif correspondant qui a un groupe terminal HC≡C-, tel que par exemple l'heptynoate d'éthyle. Dans ce cas, la réaction est de préférence réalisée à une température d'environ 50°C. Le catalyseur organométallique est de préférence un complexe de palladium et de triphénylphosphine, en particulier Pd(PPh3)2Cl2 en présence de Cul ou [Pd(PPh3)4]. Quelques exemples de ligands, auxquels l'invention n'est cependant pas limitée, sont donnés ci-après à titre purement illustratif. Des ligands similaires peuvent être obtenus en remplaçant Na par l'un des autres groupes R1 ou R2 tels que définis précédemment.
Figure imgf000014_0001
Un complexe de lanthanide ou d'un métal de transition selon l'invention comprend un ion lanthanide ou d'un métal de transition complexé par un ligand de formule (I) tel que défini précédemment. L'ion lanthanide est choisi parmi les ions Gd3+, Lu3+, Eu3+, Tb3+, Dy3+, Sm3+, Er3+, Yb3+, Pr3+ et Nd3+. L'ion d'un métal de transition peut être choisi parmi les métaux suivants Cu(II), Co(II), Mn(II ou IV), Ni(II), Fe(III), Pd(II) et Pt(II).
Un complexe de lanthanide ou de métal de transition peut être obtenu par mélange de quantités équimoléculaires d'un composé de formule (I) (de préférence sous forme de sel de sodium) avec un sel de lanthanide, respectivement un sel de métal de transition, chauffage du mélange, refroidissement et neutralisation à pH de 6 à 8, puis récupération du complexe à la température ambiante.
Le sel de lanthanide peut être un nitrate, un chlorure, un perchlorate ou un triflate Ln(CF3SO3)3.
Le sel de métal de transition peut par exemple être un chlorure, acétate, nitrate ou tout autre composé soluble dans l'eau ou les alcools.
Dans un mode de réalisation particulier, le composé de formule (I) et le sel de lanthanide ou le sel de métal de transition sont mélangés en quantités équimolaires en solution dans l'eau ou dans un mélange MeOH/eau, la solution est chauffée pendant 2 à 3 heures à 60°C, refroidie à température ambiante puis neutralisée si nécessaire à pH 7 par addition de NaOH, d'un hydroxyde d'ammonium quaternaire ou de HCl dilué dans l'eau. Les complexes formés sont ensuite isolés par concentration des eaux mères et précipitation dans un mélange H2O/MeOH/THF/Et2O. Les complexes selon l'invention ont des applications variées, selon la nature des substituants du groupement pyridyle du ligand.
Leurs propriétés optiques de luminescence, les temps de vie de luminescence et les propriétés de brillance sont exceptionnelles avec des rendements quantiques autour de 38% pour le Tb, 18% pour l'Eu et des temps de vie des états excités supérieurs à 3 millisecondes pour les complexes Tb(I-3) et Tb(I-4).
A titre d'exemple, l'ensemble des propriétés d'absorption et d'émission des complexes de terbium et d'europium synthétisés à partir des ligands (1-1) à (1-4) conformes à l'invention est résumé dans le Tableau 1 suivant : TABLEAU 1
Figure imgf000016_0001
a) Dans un tampon 0,01 M TRIS/HC1 à pH = 7,0.
b) Erreur estimée à ± 15 % sur le rendement quantique et ± 5 % sur le temps de vie τ. Les paramètres φ et τ représentent respectivement les rendements quantiques de luminescence et les temps de vie de luminescence. Ils peuvent être mesurés dans l'eau et dans D2O.
Dans une configuration préférée de l'invention plusieurs tests de stabilité montrent l'absence de dégradation de la sonde fluorescente. Il a été démontré en particulier qu'aucune perte de luminescence des complexes de terbium et d'europium n'a été observée sur plusieurs jours lorsque ces complexes sont dissous en milieu aqueux à pH neutre ou en milieu salin à des concentrations de 10"5 à 10"6 M.
A titre d'exemple, la stabilité des complexes de terbium synthétisés à partir des ligands (1-1) à (1-4) conformes à l'invention est donnée dans le Tableau 2 ci-dessous. Différents tampons en présence de ligands susceptibles de décomplexer les ions lanthanides ont été testés. A titre de comparaison, le Tableau 2 donne également la stabilité d'un complexe de terbium TbL4 de l'art antérieur et répondant à la formule suivante :
Figure imgf000017_0001
TbL4
TABLEAU 2
Figure imgf000017_0002
Complexe non conforme à l'invention Cette étude de stabilité montre que les complexes conformes à l'invention
Tb(I-3) et Tb(I-4) présentent une excellente stabilité avec des temps de vie supérieurs à 3 millisecondes dans divers milieux aqueux.
Par ailleurs, les complexes conformes à l'invention ont une solubilité dans l'eau exceptionnelle. Leur solubilité est de l'ordre de la millimole par litre. De plus, les coûts de production et la purification de ces composés en font des candidats potentiels très intéressants pour l'analyse biomédicale et biologique en temps résolu pour quantifier des traces d'analytes en excitant spécifiquement le ligand qui est considéré comme l'antenne collectrice de photons. Les composés conformes à l'invention permettent d'accommoder l'ensemble des lanthanides et les propriétés d'absorption des ligands sont modulables en fonction de la décoration apportée par ledit ligand.
En particulier, les complexes de l'invention sont utiles pour le marquage de composés qui portent un groupe aminé, alcool, thiol, acide carboxylique ou ester activé. Ces composés peuvent être des molécules monomères ou des polymères éventuellement sous forme de billes. Pour cette utilisation, le groupe Z du ligand du complexe est de préférence un groupe -COOH, un groupe COONa, un ester activé de type ester de N-hydroxysuccinimide ou ester de pentafluorophénol, un Br, un I, ou une aminé.
Lorsque le ligand d'un complexe luminescent possède un site de reconnaissance électroniquement relié à la structure de complexation du ligand, les propriétés de luminescence du complexe peuvent être perturbées par la présence d'un analyte qui se fixe sur le site de reconnaissance. En couplant électroniquement le site de reconnaissance à la pyridine centrale par des liaisons acétyléniques, l'interaction du site de reconnaissance avec ses substrats induit des perturbations électroniques qui se traduisent par des changements de luminescence des complexes d'ion lanthanide.
La spectroscopie et la microscopie d'absorption à deux photons sont des techniques relativement récentes et qui ont pour intérêt, notamment en microscopie, de permettre une amélioration significative de la résolution spatiale en utilisant des photons de basses énergies. La quasi-totalité des marqueurs luminescents étudiés en absorption à deux photons sont des composés organiques fluorescents de type hodamine®. Ces composés organiques présentent de très faibles déplacements de Stokes et des bandes d'émission larges (correspondant à une largeur à mi-hauteur supérieure à 50 nm). Les complexes luminescents d'ions lanthanides selon la présente invention présentent des déplacements de Stokes très élevés et des bandes d'émission étroites. Ils constituent par conséquent des composés particulièrement intéressants pour le marquage et la microscopie biphotonique et des travaux très récents ont démontrés cette possibilité sur des complexes d'Eu et de Tb. [Cf. notamment a) Law, G.L.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 3714 ; b) Picot, A.; et al, J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 1532.]. Les complexes de l'invention dans lesquels le groupe B du ligand du complexe est une fonction amide ou un groupe C≡C, et le groupe Z terminal comporte une fonction acide terminale susceptible d'être transformée en ester activé peuvent être utilisés comme marqueur luminescent pour l'absorption à deux photons.
Les complexes de l'invention dans lesquels le groupe terminal Z du ligand est un groupe biotine sont utiles pour la reconnaissance de l'avidine, de la streptavidine et de la neuravidine.
La présente invention est illustrée par les exemples suivants, auxquels elle n'est cependant pas limitée.
Exemple 1
Synthèse des composés de formule (1-1) et (1-2)
1) Première étape : Synthèse du composé 2
A une solution dégazée de 2,000 g de 1 ,4-dibromonaphtalène (composé 1 obtenu de source commerciale) (6,99 mmol) dans 60 mL de tetrahydrofuran (THF) contenant 10 mL de diisopropylamine, on a ajouté 0,588 g d'alcool propargylique (6,99 mmol), 0,490 g de [Pd(PPh3)2Cl2] (0,699 mmol), puis 0,133 g de Cul (0,699 mmol). La solution résultante a été chauffée sous agitation à 50°C durant 2 jours. Après traitement aqueux et extraction, le produit a été purifié par colonne de chromatographie sur silice flash en utilisant un gradient d'éther de pétrole dans du dichlorométhane de 50% à 0%. Le composé 2 attendu a été obtenu sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 27%.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,25 (m, 2H) ; 7,72 (d, 3J = 7,7 Hz, 1H) ; 7,64 (m, 2H) ; 7,47 (d, 3J = 7,7 Hz, 1H) ;1,73 (s, 6H).
SM-ESI : 290,0 (98), 288,0 (100) Analyse élémentaire pour Ci5H13BrO :
C H
Calculé 62,30 4,53
Trouvé 62,11 4,25
2) Deuxième étape : Synthèse du composé 3
A une solution de 0,500 g du composé 2 (1,73 mmol) dans 20 mL d'un mélange THF/H2O (15 mL/5mL), on a ajouté une solution aqueuse de KOH (0,484 g, 8,64 mmol) dans 5 mL d'eau. Après une agitation pendant une heure, le composé a été extrait avec du dichlorométhane et la phase organique lavée avec une solution aqueuse de NH4C1 saturée. Le composé a été purifié par chromatographie sur silice flash en utilisant un gradient d'éther de pétrole dans du dichlorométhane de 50% à 0%. Le composé 3 attendu a été obtenu sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 95%.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,27 (m, 2H) ; 7,77 (d, 3J = 7,7 Hz, 1H) ; 7,71 (m, 2H) ; 7,50 (d, 3J = 7,7 Hz, 1H) ; 3,24 (s, 1H).
SM-ESI : 232,0 (98), 230,0 (100)
Analyse élémentaire pour Ci2H7Br :
C H
Calculé 62,37 3,05
Trouvé 62,21 2,89
3) Troisième étape : Synthèse du composé 5
A une solution dégazée de 0,329 g du composé 4 (1,51 mmol) préparé selon le procédé décrit par A. M. Raitsimring et al (J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 14138) dans un mélange THF/triéthylamine (20 mL/7 mL), on a ajouté 0,349 g du composé 3 obtenu ci-dessus à l'étape 2) (1,51 mmol), ainsi que 0,174 g de [Pd(PPh3)4] (0,151 mmol). Cette solution a été chauffée à 60°C pendant 20 heures. Le solvant a été évaporé avec un évaporateur et extrait avec du dichlorométhane. La purification a été réalisée par chromatographie flash sur silice en utilisant un gradient de méthanol dans du dichlorométhane de 2 à 20%. Le composé 5 attendu a été obtenu avec un rendement de 67%.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,36 (m, 2H) ; 7,71 (s, 2H) ; 7,66 (m, 2H) ; 7,43 (s, 2H) ; 4,84 (s, 4H) ; 1,68 (m, 2H). SM-ESI : 369,0 (98), 367,0 ( 100)
Analyse élémentaire pour Ci9H14NO2Br :
C H N
Calculé 61,97 3,83 3,80
Trouvé 61,69 3,64 3,51
4) Quatrième étape : Synthèse du composé 6
A une solution de 0,300 g du composé 5 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,815 mmol) dans 20 mL de chloroforme, on a ajouté 0,661 g de PBr3 (2,44 mmol) et on a agité la solution à température ambiante durant 1 heure. On a ensuite ajouté 0,330 g de PBr3 (1,22 mmol) et on a chauffé au reflux durant 1 heure. La conversion totale du composé 5 en composé 6 a été contrôlée par chromatographie en couche mince (CCM). Après refroidissement, le milieu réactionnel a été versé précautionneusement dans une solution aqueuse de NaCl à 0°C. Le solvant a été évaporé avec un évaporateur et le résidu a été extrait avec du dichlorométhane. La purification a été réalisée par chromatographie flash sur silice en utilisant un gradient d'éther de pétrole dans du dichlorométhane de 70 à 50%. Le composé attendu 6 a été obtenu avec un rendement de 78%.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,35 (m, 2H) ; 7,72 (s, 2H) ; 7,67 (m, 2H) ; 7,57 (s, 2H) ; 4,57 (s, 4H).
SM-ESI : 495,0 (98), 493,0 (100)
Analyse élémentaire pour Ci9H12NBr3 :
C H N
Calculé 46,19 2,45 2,84
Trouvé 45,83 2,24 2,63 5) Cinquième étape : Synthèse des composés 7 et 8
Figure imgf000022_0001
Synthèse du composé 7
A une solution de 150,0 mg du composé 6 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,304 mmol) dans 20 mL d'acétonitrile anhydre, on a ajouté 192,5 mg (0,760 mmol) de dérivé de glyphosate de formule NH[{CH2PO(OEt)2}(CH2COOEt)] (préparé selon la référence S. Aime et al, Chem. Eur. J. 2006, 6, 2609-2617) et 209,8 mg de K2CO3 (1,520 mmol). La solution résultante a été chauffée sous agitation à 60°C pendant 36 heures sous argon. Le produit a été purifié par colonne de chromatographie sur silice en utilisant un mélange de solvants (de 0/10 à 2/8 (v/v) MeOH/CH2Cl2). On a obtenu le composé 7 attendu sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 70%.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,38 (m, 2H) ; 7,74 (s, 2H) ; 7,69 (m, 2H) ; 7,60 (s, 2H) ; 4,20-4,09 (m, 12H), 4,00 (s, 4H) ; 3,60 (s, 4H) ; 3,16 (s, 4H) ; 1,34-1,16 (m, 18H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) : δ 24,77.
SM-ESI : 839,2 (98), 837,2 (100)
Analyse élémentaire pour C 7H50N Oi0P2Br :
C H N
Calculé 52,99 6,01 5,01
Trouvé 52,65 5,71 4,83 Synthèse du composé 8.
A une solution de 150,0 mg du composé 6 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,304 mmol) dans 20 ml d'acétonitrile anhydre, on a ajouté 241,2 mg (0,760 mmol) de dérivé amino-di(méthylènediéthylphosphite) et 210 mg de K2CO3 anhydre (1,520 mmol). La suspension résultante a été chauffée à 60°C pendant 12 heures sous argon. Le composé a été purifié par chromatographie sur gel de silice en utilisant un mélange de solvants (de 0/10 à 4/6 (v/v) MeOH/CH2Cl2) et a donné le composé 8 attendu sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 72%.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,32 (m, 2H) ; 7,69 (s, 2H) ; 7,65 (m, 2H) ; 7,59 (s, 2H) ; 4,1 1 - 4,07 (m, 16H) ; 4,02 (s, 4H), 3,16 (s, 4H) ; 3,12 (s, 4H) ; 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 24H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) : δ 24,62.
SM-ESI 967,1 (98), 965,2 (100).
Analyse élémentaire pour C 9H60N Oi2P4Br :
C H N
Calculé 48,46 6,26 4,35
Trouvé 48,24 5,87 4,11
6) Sixième étape : Synthèse des précurseurs des composés 1-1 et 1-2 dont deux exemples sont les composés 9 et 10.
Figure imgf000023_0001
Synthèse du composé 9.
A une solution de 100,0 mg (0,1 19 mmol) du composé 7 obtenu ci-dessus à l'étape précédente, dans un mélange toluène (10 ml) / triéthylamine (5 ml), on a ajouté 30,0 mg de chlorhydrate de 4-éthylaminobutyrate (0,179 mmol) et 8,3 mg de Pd(PPh3Cl2) (0,012 mmol). La solution résultante a été chauffée à 70°C durant 12 heures sous un flux continu de CO à pression atmosphérique. Le composé 9 attendu a été obtenu sous forme d'un solide blanc après purification par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvants comme éluant (de 0/10 à 3/7 MeOH/CH2Cl2), avec un rendement de 64 %. RMN 1H (200 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,34 (m, 2H) ; 7,77 (s, 2H) ; 7,66 (m,
2H) ; 7,58 (s, 2H) ; 4,22 - 4,00 (m, 14H) ; 4,06 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4H) ; 3,27 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,16 (s, 4H) ; 2,31 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 1,96 (m, 2H) ; 1,37 - 1,15 (m, 21H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) δ 24,74. SM-ESI : 916,3 (100).
Analyse élémentaire pour C44H62N4Oi P2 :
C H N
Calculé 57,63 6,82 6,11
Trouvé 57,45 6,49 5,88
Synthèse du composé 10.
A une solution dégazée de 100,0 mg (0,1 19 mmol) du composé 7 tel que préparé ci-dessus à l'étape précédente dans un mélange de 6 ml de THF et de 2 ml de triéthylamine, on a successivement ajouté 7,7 mg de Pd(PPh3Cl2) (0,01 1 mmol), 2,1 mg de Cul (0,01 1 mmol) ainsi que 27,6 mg d'éthyle-hept-6-ynoate (0,179 mmol). La solution obtenue a été chauffée à 50°C durant une nuit. Le produit a été purifié par chromatographie en utilisant un mélange variable de dichlorométhane/méthanol (de 0/10 à 3/7 v/v MeOH/CH2Cl2) et a fourni le composé 10 attendu sous forme d'un solide de couleur blanche avec un rendement chimique de 72 %. RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,37 (m, 2H) ; 7,75 (s, 2H) ; 7,71 (m, 2H) ; 7,59 (s, 2H) ; 4,18-4,1 1 (m, 14H) ; 4,05 (s, 4H) ; 3,55 (s, 4H) ; 3,17 (s, 4H) ; 2,15 (m, 4H) ; 1,56 (m, 4H), 1,32-1,1 1 (m, 21 H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) : δ 24,89. SM-ESI 91 1,3 (100).
Analyse élémentaire pour C46H63N Oi2P2
C H N
Calculé 60,58 6,96 4,61
Trouvé 60,41 6,61 4,43
7) Septième étape : Synthèse des composés 1-1 et 1-2. Synthèse du composé 1-1.
A une solution de 0,050 g du composé 9 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,055 mmol) dans un mélange de THF (5 ml) et de méthanol (10 ml) on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (1 1,3 mg, 0,284 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit. L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé 1-1 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une solution concentrée de méthanol. On a obtenu le composé de formule 1-1 attendu avec un rendement de 60%.
RMN 1H (200 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,33 (m, 2H) ; 7,75 (s, 2H) ; 7,66 (m, 2H) ; 7,56 (s, 2H) ; 4,17 (q J = 7,0 Hz, 4H) ; 4,06 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4H) ; 3,27 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,16 (s, 4H) ; 2,31 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 1 ,96 (m, 2H) ; 1.18 (t, J = 7,0 Hz, 6H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) : δ 28,56
SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 777,2 (100), 389,1 (35, doublement chargé) Analyse élémentaire pour C34H37N4Oi3P2Na5 + H2O
C H N
Calculé 45,14 4,35 6,19
Trouvé 44,93 4,08 5,76
Synthèse du composé 1-2.
A une solution de 0,050 g du composé 10 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,055 mmol) dans un mélange de tétrahydrofurane (4 ml) et de méthanol (8 ml) on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (1 1,3 mg , 0,283 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit. L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé 1-2 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une solution concentrée de méthanol. On a obtenu le compose 1-2 attendu avec un rendement de 64%.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,34 (m, 2H) ; 7,73 (s, 2H) ; 7,68 (m, 2H) ; 7,57 (s, 2H) ; 4,14 (q, J = 7,0 Hz, 4H) ; 4,07 (s, 4H) ; 3,57 (s, 4H) ; 3,19 (s, 4H) ; 2,19 (m, 4H) ; 1,58 (m, 4H), 1,17 (m, 6H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) : δ 28,73
SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 772,2 (100), 386,6 (20, doublement chargé)
Analyse élémentaire pour C 6H38N Oi2P2Na5 + H2O
C H N
Calculé 48,06 4,48 4,67
Trouvé 47,81 4,23 4,43 Exemple 2
Synthèse de composés de formule 1-3 et 1-4
1) Première étape : Synthèse des précurseurs des composés 1-3 et 1-4 dont deux exemples sont les composés 11 et 12.
Figure imgf000027_0001
Synthèse du composé 11.
A une solution de 100,0 mg (0,103 mmol) de composé 8 obtenu ci-dessus à l'étape 5 de l'exemple 1, dans un mélange toluène (10 ml) / triéthylamine (5 ml), on a ajouté 26,0 mg de chlorhydrate de 4-éthylaminobutyrate (0,155 mmol) et 7,2 mg de Pd(PPh3Cl2) (0,010 mmol). La solution résultante a été chauffée à 70°C durant 12 heures sous un flux continu de CO à pression atmosphérique. Le composé 11 attendu a été obtenu avec un rendement de 74 % sous forme d'un solide blanc après purification par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvants comme éluant (de 0/10 à 3/7 MeOH/CH2Cl2).
RMN 1H (200 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,30 (m, 2H) ; 7,74 (s, 2H) ; 7,60 (m,
2H) ; 7,54 (s, 2H) ; 4,22 - 4,00 (m, 18H) ; 4,05 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4H) ; 3,27 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,16 (s, 4H) ; 2,31 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 1 ,96 (m, 2H) ; 1 ,37 - 1,15 (m, 27H). RMN 31P (CDCI3, 161 MHz) δ 24,56. SM-ESI : 1045,0 (100).
Analyse élémentaire pour C46H72N4Oi5P4 :
C H N
Calculé 52,87 6,94 5,36
Trouvé 52,72 6,71 5,09
Synthèse du composé 12.
A une solution dégazée de 100,0 mg (0,1 19 mmol) du composé 8 tel que préparé ci-dessus à l'étape 5) de l'exemple 1, dans un mélange de 6 ml de tetrahydrofurane et de 2 ml de triéthylamine, on a successivement ajouté 7,7 mg de Pd(PPh3Cl2) (0,01 1 mmol), 2,1 mg de Cul (0,01 1 mmol) ainsi que 27,6 mg d'éthyle-hept-6-ynoate (0,179 mmol). La solution obtenue a été chauffée à 50°C durant une nuit. Le produit a été purifié par chromatographie en utilisant un mélange variable de dichlorométhane/méthanol (de 0/10 à 3/7 v/v MeOH/CH2Cl2) et a fourni le composé 12 attendu sous forme d'un solide de couleur blanche avec un rendement chimique de 78 %.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,33 (m, 2H) ; 7,73 (s, 2H) ; 7,64 (m, 2H) ; 7,60 (s, 2H) ; 4,1 1 - 4,07 (m, 18H) ; 4,02 (s, 4H), 3,16 (s, 4H) ; 3,12 (s, 4H) ; 2,15 (m, 4H) ; 1,55 (m, 4H), 1 ,25 (m, 27H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) : δ 24,75.
SM-ESI 1039,3 (100).
Analyse élémentaire pour C48H73N Oi4P4:
C H N
Calculé 55,43 7,07 4,04
Trouvé 55,29 6,72 3,82
2) Deuxième étape : Synthèse des composés 1-3 et 1-4. Synthèse du composé 1-3.
A une solution de 0,060 g du composé 11 (0,057 mmol) tel que préparé ci- dessus à l'étape précédente, dans un mélange de tetrahydrofurane (5 ml) et de méthanol (10 ml), on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (1 1,9 mg, 0,298 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit. L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé 1-3 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une solution concentrée de méthanol. On a obtenu le composé 1-3 attendu avec un rendement de 66 %.
RMN 1H (200 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,30 (m, 2H) ; 7,72 (s, 2H) ; 7,64 (m, 2H) ; 7,54 (s, 2H) ; 4,14 (q, J = 7,0 Hz, 8H) ; 4,06 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4H) ; 3,27 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,16 (s, 4H) ; 2,31 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 1 ,96 (m, 2H) ; 1,18 (t, J = 7,0 Hz, 12H).
RMN 31P (CDC13, 161 MHz) : δ 28,54
SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 905,2 (100), 453,1 (25, doublement chargé)
Analyse élémentaire pour C 6H47N4Oi5P4Na5 + 2H2O
C H N
Calculé 41,15 4,89 5,33
Trouvé 40,81 4,62 5,03
Synthèse du composé 1-4.
A une solution de 0,060 g du composé 12 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,058 mmol), dans un mélange de tetrahydrofurane (4 ml) et de méthanol (8 ml), on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (12,0 mg, 0,300 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit. L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé 1-4 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une solution concentrée de méthanol. On a obtenu le composé 1-4 attendu avec un rendement de 64 %. RMN 1H (300 MHz, CDC13) δ (ppm) : 8,38 (m, 2H) ; 7,77 (s, 2H) ; 7,72 (m,
2H) ; 7,62 (s, 2H) ; 4,10 (q J = 7,0 Hz, 8H) ; 4,04 (s, 4H) ; 3,64 (s, 4H) ; 3,21 (s, 4H) ; 2,21 (m, 4H) ; 1 ,62 (m, 4H), 1,21 (m, 12H). RMN 31P (CDCI3, 161 MHz) : δ 28,48
SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 900,2 (100), 450,5 (30, doublement chargé).
Analyse élémentaire pour C38H48N3Oi4P4Na5 + 2H2O
C H N
Calculé 43,65 5,01 4,02
Trouvé 43,43 4,76 3,87

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé de formule (I) suivante :
Figure imgf000031_0001
dans laquelle :
m est un nombre entier variant de 0 à 4 ;
A1 représente une fonction -COO 1 dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un cation alcalin ; ou un groupement A2 ;
A2 représente un groupement -P(O)(OCH2CH3)(OR2) ou -P(O)(OR2)2 dans lesquels R2 représente un atome d'hydrogène ou cation alcalin ;
Wi représente un atome d'hydrogène, un hétéroatome, un atome d'halogène, une fonction solubilisante non coordinante, une chaîne polyéthylèneglycol, ou une fonction apte à changer la délocalisation électronique de l'antenne collectrice de photons ;
chacun des Y1 et Y2 représente un atome H, un groupement amino, thiol, ou bien Y 1 et Y 2 forment ensemble un biradical formant un ou plusieurs cycles aromatiques ou hétéroaromatiques avec les deux atomes de carbone qui les portent ; B représente un segment de liaison constitué par au moins un groupe choisi parmi -CO-NH-, les groupes peptide contenant de 1 à 4 acides aminés, les groupes alkylène qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée, et les groupes alkynyle qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée ;
D représente un atome d'oxygène ou de soufre, une chaîne alkyle linéaire, un cycloalkane ou un aryle ;
Z est :
* NH2, un halogène, un phosphate,
un groupe COO 3 dans lequel R3 est H, un cation alcalin, un groupe ammonium quaternaire N(R4)4 + dans lequel R4 est H ou une chaîne alkyle linéaire, un groupe succinimide -N-(CO-CH2-CH2-CO)- ou un groupe pentafluorophényle -C6F5 ;
* une fonction biotine (-CO-(CH2)4-C5H7N2OS), un groupement polyhétéroaromatique ou un éther couronne,
* un cluster organique silylé ou un cluster inorganique ;
* un support macroscopique.
2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que W1 représente un atome d'hydrogène.
3. Composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que R1 et R2 sont choisis parmi K+, Na+ et Li+.
4. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les groupes Y1 et Y2 représentent ensemble un cycle phényle fusionné.
5. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il répond à l'une des formules (1-1) à (1-4) suivantes :
Figure imgf000033_0001
6. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) tel que défini à l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
- une première étape au cours de laquelle le brome d'un composé de formule (II) suivante :
Figure imgf000034_0001
dans laquelle R6 est choisi parmi les groupements de formule R6-a ou R6-b suivants :
Figure imgf000034_0002
dans lesquels :
- R'1 représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en Ci-C4 ;
- R'2 représente un radical Q-Q ;
- Y1 et Y2 sont tels que définis à la revendication 1 pour les composés de formule (I) ;
est remplacé par un groupe B-CH2(D-CH2)mCH2-Z dans lequel D a la même signification que celle indiquée ci-dessus relativement aux composés de formule (I), par réaction avec un réactif approprié, en présence d'un catalyseur organométallique, dans un solvant organique ;
une deuxième étape au cours de laquelle les groupes R'1 et R'2 sont respectivement remplacés par des groupes R1 et R2, lesdits groupes étant H ou un cation alcalin pour R1 ou un cation alcalin pour R2.
7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le remplacement des groupes R'1 et R'2 du type alkyle linéaire par un cation K+, Na+ ou Li est effectué avec KOH, NaOH ou LiOH respectivement dans un solvant polaire, à une température entre 20 et 100°C, ou bien en utilisant du bromure de triméthylsilyle dans un solvant à température ambiante suivi d'une hydrolyse basique.
8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le remplacement par H de groupes '1 ou R'2 du type alkyle ramifié est effectué par réaction avec l'acide trifluoroacétique dans un solvant organique apro tique.
9. Procédé selon la revendication 6, pour la préparation d'un composé de formule (I) dans lequel B représente -CO-NH- ou -CO-O-, caractérisé en ce que le réactif utilisé lors de la première étape est une aminé de formule Z-CH2-(CH2-D)m-CH2-NH2 ou un alcool de formule Z-CH2-(CH2-D)m-CH2-OH, formules dans lesquelles Z, D et m ont les significations indiquées à la revendication 1 pour les composés de formule (I), en présence de monoxyde de carbone.
10. Procédé selon la revendication 6, pour la préparation d'un composé de formule (I) dans lequel B représente -C≡C-, caractérisé en ce que le réactif utilisé pour la réaction avec le composé de formule (II) porte un groupe terminal HC≡C-, et la réaction est réalisée à une température de 50°C en présence d'un complexe de palladium et de triphénylphosphine.
1 1. Complexe de lanthanide ou d'un métal de transition, caractérisé en ce qu'il comprend un ion lanthanide ou d'un métal de transition complexé par un ligand de formule (I) tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 5.
12. Complexe selon la revendication 1 1, caractérisé en ce que l'ion lanthanide est choisi parmi les ions Gd3+, Lu3+, Eu3+, Tb3+, Dy3+, Sm3+, Er3+, Yb3+, Pr3+ et Nd3+.
13. Complexe selon la revendication 1 1, caractérisé en ce que l'ion d'un métal de transition est choisi parmi Cu(II), Co(II), Mn(II ou IV), Ni(II), Fe(III), Pd(II) et Pt(II).
14. Utilisation d'un complexe tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 1 à 13 dans lequel le groupe Z du ligand du complexe est un groupe -COOH, un groupe COONa, un ester activé de type ester de N-hydroxysuccinimide ou ester de pentafluorophénol, un Br, un I, ou une aminé, pour le marquage de composés qui portent un groupe aminé, alcool, thiol, acide carboxylique ou ester activé.
15. Utilisation d'un complexe tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 1 à 13 dans lequel le groupe B du ligand du complexe est une fonction amide ou un groupe C≡C, et le groupe terminal Z comporte une fonction acide terminale susceptible d'être transformée en ester activé, comme marqueur luminescent pour l'absorption à deux photons.
16. Utilisation d'un complexe tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 1 à 13 dans lequel le groupe terminal Z du ligand est un groupe biotine, pour la reconnaissance de l'avidine, de la streptavidine et de la neuravidine.
PCT/FR2012/052307 2011-10-12 2012-10-11 Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation WO2013054046A1 (fr)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA2850619A CA2850619A1 (fr) 2011-10-12 2012-10-11 Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation
US14/348,259 US9388202B2 (en) 2011-10-12 2012-10-11 Luminescent probes for biological labeling and imaging, method for preparing same
EP12780235.3A EP2766377A1 (fr) 2011-10-12 2012-10-11 Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1159222 2011-10-12
FR1159222A FR2981349B1 (fr) 2011-10-12 2011-10-12 Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013054046A1 true WO2013054046A1 (fr) 2013-04-18

Family

ID=47116065

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2012/052307 WO2013054046A1 (fr) 2011-10-12 2012-10-11 Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation

Country Status (5)

Country Link
US (1) US9388202B2 (fr)
EP (1) EP2766377A1 (fr)
CA (1) CA2850619A1 (fr)
FR (1) FR2981349B1 (fr)
WO (1) WO2013054046A1 (fr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112791858B (zh) * 2020-12-18 2021-12-14 中南大学 一种黄铜矿复合捕收剂及其制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0770610A1 (fr) 1995-10-25 1997-05-02 Wallac Oy Réactifs pour liaison biospécifique marqués par des chélates luminescents de lanthanides et leur utilisation
CN1811429A (zh) 2005-01-26 2006-08-02 中国科学院大连化学物理研究所 一种铽配合物单线态氧荧光探针及其应用
WO2007128873A1 (fr) * 2006-05-05 2007-11-15 Wallac Oy Procédé de préparation de dérivés maléimido de réactifs de marquage de biomolécules et leurs conjugués dérivés
FR2935973A1 (fr) 2008-09-18 2010-03-19 Centre Nat Rech Scient Complexes de lanthanide et d'un ligand 2,6-bis(n-pyrazolyl) pyridine

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0770610A1 (fr) 1995-10-25 1997-05-02 Wallac Oy Réactifs pour liaison biospécifique marqués par des chélates luminescents de lanthanides et leur utilisation
CN1811429A (zh) 2005-01-26 2006-08-02 中国科学院大连化学物理研究所 一种铽配合物单线态氧荧光探针及其应用
WO2007128873A1 (fr) * 2006-05-05 2007-11-15 Wallac Oy Procédé de préparation de dérivés maléimido de réactifs de marquage de biomolécules et leurs conjugués dérivés
FR2935973A1 (fr) 2008-09-18 2010-03-19 Centre Nat Rech Scient Complexes de lanthanide et d'un ligand 2,6-bis(n-pyrazolyl) pyridine

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. M. RAITSIMRING ET AL., J AM. CHEM. SOC., vol. 129, 2007, pages 14138
A. MISHRA ET AL., ANGEW. CHEM. INT. ED., vol. 14, 2009, pages 2474
HARRI TAKALO ET AL: "Luminescence of Europium(III) Chelates with 4-(Arylethynyl)pyridines as Ligands", HELVETICA CHIMICA ACTA, 1 January 1993 (1993-01-01), pages 877 - 883, XP055020790, Retrieved from the Internet <URL:http://onlinelibrary.wiley.com/store/10.1002/hlca.19930760211/asset/19930760211_ftp.pdf?v=1&t=gzb2ah7b&s=e00d1f40186f4b6eee1afaba36fd7c9d973794b3> [retrieved on 20120302] *
LAW, G.L. ET AL., J AM. CHEM. SOC., vol. 130, 2008, pages 3714
PICOT, A. ET AL., J AM. CHEM. SOC., vol. 130, 2008, pages 1532
S. AIME ET AL., CHEM. EUR. J., vol. 6, 2006, pages 2609 - 2617
SABAH ABADA ET AL: "Formation of very stable and selective Cu(ii) complexes with a non-macrocyclic ligand: can basicity rival pre-organization?", DALTON TRANSACTIONS, vol. 39, no. 38, 1 January 2010 (2010-01-01), pages 9055 - 9062, XP055014573, ISSN: 1477-9226, DOI: 10.1039/c0dt00453g *

Also Published As

Publication number Publication date
FR2981349B1 (fr) 2014-01-10
EP2766377A1 (fr) 2014-08-20
US20140228553A1 (en) 2014-08-14
US9388202B2 (en) 2016-07-12
FR2981349A1 (fr) 2013-04-19
CA2850619A1 (fr) 2013-04-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0180492B1 (fr) Complexes macropolycycliques de terres rares-et application à titre de marqueurs fluorescents
JP5807025B2 (ja) 蛍光プローブ
FR2882056A1 (fr) Dipyrromethenes-bore borocarbones insatures
CA2622283A1 (fr) Procede d&#39;obtention de complexes de lanthanides hautement luminescents
EP2758391B1 (fr) Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l&#39;imagerie, et leur procédé de préparation.
EP3638659B1 (fr) Nouveaux agents mono et di-antennes complexants hydrosolubles et complexes de lanthanide correspondants
US10203333B2 (en) Electronically neutral metal complexes as biological labels
FR2935973A1 (fr) Complexes de lanthanide et d&#39;un ligand 2,6-bis(n-pyrazolyl) pyridine
EP2766377A1 (fr) Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l&#39;imagerie, leur procede de preparation
EP0396435B1 (fr) Dérivés polyazotés et leurs complexes métalliques utilisables pour la fixation de l&#39;oxygène
JP2005022985A (ja) 亜鉛蛍光プローブ
CN111718276A (zh) 一种衍生物的合成方法
EP1648883B1 (fr) Complexes de lanthanides, leur preparation et leurs utilisations
JP4511125B2 (ja) フェニルアゾメチンデンドリマーとデンドロン誘導体の合成方法
JP6202431B2 (ja) かご型シルセスキオキサン誘導体
JP3572354B2 (ja) １，３−プロパンジオールピレニルアセチルアセトンエステル化合物
CN110590784B (zh) 一种基于吡咯并吡咯二酮的衍生物及制备方法与应用
FR3045053A1 (fr) Agents complexants hydrosolubles a base de triazapyridinophane et complexes de lanthanide fluorescents correspondants
JP3903169B2 (ja) １，３−プロパンジオールピレニルグリシンアミドアセチルアセトンエステル化合物
JP2022110398A (ja) 化合物、及びその製造方法
JPH0834769A (ja) ２位に置換基を有するビタミンｄ誘導体
CN113637027A (zh) 一种苯基三氮唑二羧酸-罗丹明b衍生物荧光探针及其制备方法与应用
FR2727415A1 (fr) Complexes du ruthenium utilisables en particulier pour determiner la topologie des proteines, et leur procede de preparation
JP2005097071A (ja) 高次フラーレンの分離方法および環状ポルフィリン多量体
JP2001328986A (ja) 環状アニリン硫化物とその製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12780235

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14348259

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2850619

Country of ref document: CA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012780235

Country of ref document: EP