WO2013051743A1 - 음수용 또는 사료 첨가용 조성물 - Google Patents

음수용 또는 사료 첨가용 조성물 Download PDF

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WO2013051743A1
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feed
radix
group
swine
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PCT/KR2011/007449
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마진열
정태호
김동선
이재훈
엄영란
음현애
박동익
임가영
양민철
이지혜
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한국한의학연구원
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms

Definitions

  • the present invention relates to a composition for drinking water or feed addition, more specifically Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (hereinafter referred to as 'PRRSV') and / or Porcine Circovirus type 2 (Porcine Circovirus Type 2, hereinafter referred to as 'PCV-2', the present invention relates to a composition for drinking water or for adding food which can improve various clinical symptoms caused by infection.
  • 'PRRSV' Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus
  • 'PCV-2' Porcine Circovirus Type 2
  • Feed is a substance that sustains livestock and supplies organic or inorganic nutrients necessary to produce milk, meat, eggs, fur, etc.
  • a good feed is rich in nutrients, no harmful ingredients to livestock, and high in yield. It should always be readily available and always fresh and digestible. Grain is currently used in many parts of the feed for raising livestock, and the recent rapid increase in the population has increased the demand for grain for food, making it difficult to use grain as a feed source. It is limiting the development of livestock raising. Therefore, the feed industry has made a lot of efforts to maximize the efficiency of the feed and the development of feed that can replace the grain, various feeds that can perform additional functions such as improving the digestion and absorption rate of animals The development of additive solvents has become an important part of the feed industry.
  • Feed additives are a kind of supplementary feed, which is a feed that increases productivity by completely supplying essential nutrients or adding a specific effect to the feed, and is specifically an edible additive used for supplementation of deficiency, enhancement of feed efficiency, and growth growth.
  • Feed additives include salts, bone meal, vitamins, antibiotics, antibacterial agents, antioxidants, antifungal agents, enzymes, probiotics, amino acids and trace minerals.
  • a substance used to increase the effectiveness of the feed by adding or supplementing a small amount to a general feed mainly for energy and protein supply is called a feed additive, and is distinguished from an animal medicine for the purpose of preventing and treating diseases.
  • the development of feed additive composition promotes the fattening and digestion of livestock, thereby maximizing feed efficiency and reducing feed consumption, and enabling high quality livestock production due to rapid growth and fattening. It is very important in that it can contribute.
  • the weak piglets in weaning pigs are generally 50% caused by porcine Circovirus Associated Disease (hereinafter referred to as 'PCVAD') caused by the combined infection of PRRSV and PCV-2. It is known.
  • 'PCVAD' porcine Circovirus Associated Disease
  • the PRRSV is a causative virus of swine genital respiratory syndrome, which is a combination of reproductive disorders and respiratory infections. When the virus is infected, the disease causes a wide variety of diseases. From no economic loss to severe, up to 20% loss on farm production.
  • Reproductive disorders due to PRRSV infection are mainly characterized by late gestational or premature births, development of stillbirths and mummy piglets, concentrations of preterm weaning mortality, increased post-weaning mortality, and increased estrus These symptoms are concentrated in infected sows and piglets born from the sows. Most of the reproductive disorders caused by PRRSV infection return to the pre-infection state after 6 months from the beginning of infection.
  • Respiratory illnesses caused by PRRS infection can appear at all ages, especially in piglets and weaners. In this case, rapid double breathing, bleeding, conjunctivitis, sneezing, diarrhea, etc. are observed, and there may be a short period of temperature increase, and rarely neurological symptoms may be present. Respiratory diseases are characterized by more bacterial and viral pathogen secondary infections and multiple infections than PRRSV infection alone, in which case the pathogenicity is much more amplified.
  • PCV-2 is a causative virus of post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), which is one of the most economically damaging diseases in Korea. Since weaning systemic wasting syndrome continues to reduce productivity by 20-40% in farms for at least six months to up to three years, farms with weaning systemic wasting syndrome fail to improve further productivity and worsen profitability.
  • Diseases caused by PCV-2 infection include porcine dermatitis and nephropathy syndrome (PDNS) in addition to the systemic wasting syndrome described above.
  • PDNS nephropathy syndrome
  • PCV-2 is a porcine respiratory disease complex. ), Abortions, stillbirths such as stillbirth, exudative epidermal inflammation, etc. are known to be involved.
  • the present inventors studied negative or feed additives that can ameliorate various clinical symptoms caused by the PCVAD.
  • raw materials including yin and yang, gold and silver, raw paper, and nectar are included as a raw material of Bangpungtongsan.
  • the present invention was completed by confirming that the herbal extract prepared by mixing and improving the weight gain and vital signs of the weaning pig (weak piglet) group affected by the PCVAD.
  • It is an object of the present invention to provide a composition for drinking water or feed comprising a herbal extract prepared by extracting a herbal mixture comprising yin and yang gwak, gold and silver, raw paper and Mok Hyang to the raw material of wind-breakable acid.
  • the present invention is a raw material of windproof Tongseong, cheongung, windproof, donkey, peony, pontoon, peppermint, ephedra, forget-me-not, rhubarb, gypsum, Gilgyeong, golden, baekchul, gardenia, mold, ginger, talc, licorice It provides a composition for drinking water or feed addition containing the herbal extract extracted by mixing the herbal medicine including yin and yang, gold and silver, paper and neck.
  • the herbal medicine is 1 weight part in the yinyanggok cheongung, windproof, Angelica, Peony, Yeongyo, peppermint, ephedra, forget-me-not, rhubarb, gypsum, Gilgyeong, golden, baekchul, gardenia, mold, ginger, talc, licorice It can be used after mixing the gold, silver, paper and wood in a mixing ratio of 0.5 to 5 parts by weight, respectively, but the mixing ratio may be outside these ranges as long as a desired anti-viral effect is obtained.
  • any medicines that can be used for the purpose of preventing or treating a cold or the flu may be included without limitation.
  • the organic solvent may be used without the aldehyde and the aqueous solution of the alcohol, aldehyde and ketone of a ketone of the C 1 -C 4 alcohols, C 1 -C 4, C 1 -C 4 limits, but limited to, It doesn't happen.
  • the herbal extract is diluted in water and used as a drinking water, or formulated directly, or diluents such as wheat flour, starch, and textrin and cereals, rice hulls and skim rice bran. It can be formulated with feedstocks such as bran, oil and fat rich seed cakes.
  • the drinking water or feed addition composition of the present invention may be in the form of a dry or liquid preparation, and may further include one or more enzyme preparations.
  • Enzyme preparations can be added in either dry or liquid form, lipolytic enzymes such as lipases, phytases that break down phytic acid to form phosphates and inositol phosphates, starches and glycogen Amylase, an enzyme that hydrolyzes an ⁇ -1,4-glycoside bond, and phosphatase, cellulose, an enzyme that hydrolyzes an organophosphate ester carboxymethylcellulase to break down cellulose, xylanase to break down xylose, maltase to hydrolyze maltose into two molecules of glucose, and It may be selected and used from the group consisting of sugar producing enzymes such as invertase which hydrolyzes saccharose to form a glucose-fructose mixture.
  • compositions of the present invention may further comprise other non-pathogenic microorganisms.
  • Microorganisms that can be added include Slyter, LLJ Animal Sci. 910-926) and yeasts such as Saccharomyces cerevisiae (Jhonson, DE et al. J. Anim. Sci., 1983, 56, 735-739; Williams, PEV et al, 1990, 211. ), Microorganisms of the genus Lactobacillus sp. That have physiological activity and organic matter degradability under anaerobic conditions such as cattle, but are not limited thereto.
  • feedstocks such as peanuts, peas, sugar beets, pulp, grain by-products, animal viscera flour and fishmeal flour, including various grains and soy protein may be appropriately used.
  • the processing process is a process in which the feed material is compressed to a constant outlet under pressure in a state in which the feed material is filled, and in the case of protein, it is preferable to use an extrusion process in which the availability is increased. Extrusion has the advantages of denaturing proteins through heat treatment, destroying antienzyme factors, and increasing the activity of protease by enzymatic exposure to new sites by molecular structural changes.
  • soy protein in the case of soy protein, the extrusion process improves the digestibility of the protein and inactivates antinutrients such as trypsin inhibitor, one of the inhibitors of protease present in soybean. Increasing digestion can increase the nutritional value of soy protein.
  • animals in which the compositions of the present invention can be used include livestock such as pigs, piglets, edible cattle, dairy cows, calves, sheep, goats, horses, rabbits, dogs, cats, and the like; Poultry such as chicks, chickens, domestic chickens, roosters, ducks, geese, turkeys, quails, birds, etc., but are not limited thereto.
  • the dosage is changed depending on the type of animal to be administered, the age, and the type of other feed components, it is difficult to define a constant, but in the case of the feed additive composition of the present invention, it is generally from 0.01 to 100 parts by weight of the blended feed. It is preferable to mix in an amount of 10 parts by weight and use it as a supplementary feed.
  • compositions of the present invention can be usefully used to ameliorate the clinical symptoms caused by infection of swine genital respiratory syndrome virus and / or swine circovirus type 2 in particular.
  • the clinical symptoms include weight loss, swine genital respiratory syndrome, weaning piglet systemic wasting syndrome, swine dermatitis renal failure syndrome, complex swine respiratory disease, miscarriage, stillbirth and exudative epidermal infection, but are not necessarily limited thereto.
  • the herbal extract of the present invention is a natural substance, there is no toxicity and can be continuously used in a large amount.
  • a safe substance having a 50% lethal dose (LD 50 ) by at least 2 g / kg oral toxicity test Turned out to be.
  • the composition of the present invention when the composition of the present invention is administered, the absolute value of weight gain and weight gain is remarkable compared to the negative control group, which is the weak control pig group not fed the medicine, and the positive control group, which is the healthy pig group not fed the medicine. (See FIGS. 1 and 2).
  • the weight gain is markedly different from that of the negative control group, which is a weak pig group not fed the medicine (see FIG. 3).
  • composition for drinking water or feed of the present invention can significantly improve the absolute value of the weight gain and weight gain of the livestock, and can also significantly increase the vital signs, so that the feed efficiency and weight gain of the livestock, especially the weak weaning piglets It can be usefully used.
  • FIG. 1 is a graph showing the relative weight increase rate according to the RATIO parking, A (Week 0-1), B (Week 1-2), C (Week 2-3) and D (Week 3-4) Shows the rate of increase during
  • FIG. 2 is a graph showing the absolute value of the weight gain according to the DIFF parking, A (week 0-1), B (week 1-2), C (week 2-3) and D (week 3-4) Weight gain).
  • Figure 3 is a graph showing the increase in the average body weight for 4 weeks, black is the positive control group, blue is the negative control group, red is the experimental group.
  • FIG. 4 is an electrophoretic photograph showing that PRRSV (A) and CPV-2 (B) were detected in dead piglets, respectively.
  • FIG. 5 is a micrograph showing the symptoms of interstitial pneumomia (A) and pleuritis (B) in dead piglets, respectively ( ⁇ 100).
  • Figure 6 is a graph showing the weekly vital signs scores of the negative control, positive control and experimental group.
  • 7 to 9 are photographs showing the breeding state and the vitality state immediately after group separation (A) and 4 weeks (B) of the experimental group, the negative control group and the positive control group, respectively.
  • 10 to 12 are graphs showing the number of cells having chromosomal abnormalities after 24 hours of treatment without S9 mix, 6 hours of treatment without S9 mix, and 6 hours of treatment with S9 mix.
  • Figures 13 to 16 respectively show the response curve of the base-substituted strain in the direct method, the administration response curve of the base-substituted strain in the metabolic activity method, the response curve of the frameshift-type strain in the direct method and the frameshift strain in the metabolic activity method. Is a graph showing the dose response curve.
  • All herbal medicines were purchased domestically and used as samples. 15 L of water was added to about 2,456.5 g of the selected herbal medicines having the composition shown in Table 1, and then left at room temperature for 1 hour. Thereafter, hot water extract was performed at 115 ° C. for 3 hours to obtain an herbal extract having a volume of about 11 L, and the herbal extract was lyophilized to obtain about 9.6 g of lyophilized product.
  • the herbal extract was used in the present invention, and the test substance was mixed with water by 1% and used in experiments in the form of negative water.
  • the experiment was conducted after adapting to the changed environment for one day.
  • the experimental animals were housed in three cages provided with sufficient space at a temperature of 23 ⁇ 3 ° C. and a humidity of 50 ⁇ 5%.
  • the test substance prepared in Example 1 was used for the experiment, and was carried out according to 'Formulation and preparation of test substance (NITR / SOP / TSB / 002_02)' in the standard work procedure of the Korea Food and Drug Administration.
  • RATIO parking (weight of the parking before weight of parking) / weight of parking before
  • DIFF parking the weight of the parking before the weight of the parking
  • the RATIO parking is a relative weight gain rate for all the parking, and represents the weight gain rate in a precise sense, and the DIFF parking is the absolute amount of the weight increased as the difference between the weight of the previous parking and the parking.
  • the scoring of vital signs is described in Halina M. Zaleski, Roger R.hacker, Variables related to the progress of parturition and probability of stillbirth in swine, The Canadian Veterinary Journal, 1993 February; 34 (2): 109-113.
  • the method was changed and scored from 0 to 12 by combining muscle tone, skin condition, the ratio of duration of movement to lying for 30 minutes, the presence of clinical symptoms, feed intake, and negative intake.
  • the vital signs scoring was performed at 3, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28 days of age.
  • Acute toxicity test was performed using 7-week-old specific pathogen-free (SPF) SD (Sprague-Dawley) rats supplied by Dooyeol Biotech as follows. After 7 days of acquiring the experimental animals, 5 animals per group were administered to the control group and the herbal extracts prepared in Example 1 at doses of 500, 1,000 and 2,000 mg / kg, respectively. The experiment was performed by setting the experimental group. Animal mortality, clinical symptoms and body weight change (prior to administration, 1, 3, 7 and 14 days) were observed after one oral administration, and autopsy was performed to visually check for abnormalities of the thoracic cavity and abdominal organs.
  • SPF pathogen-free
  • Example 1 In order to evaluate the genotoxicity of the herbal extract prepared in Example 1 metabolic activation method (+ S9 mix) and applying metabolic enzyme system (S9) using ovarian embryonic cells (CHO-K1 cells) derived from Chinese hamster Chromosomal aberration experiments were performed in a direct method (-S9 mix).
  • the composition of the S9 mix is as follows: 0.3 ml of S9 in 1 ml of S9 mix, 5 ⁇ mol of MgCl 2 , 33 ⁇ mol of KCl, 5 ⁇ mol of G-6-P, 4 ⁇ mol of NADP, 4 ⁇ l of HEPES buffer. Mol included.
  • Test substance was prepared by dissolving in sterile distilled water and diluting.
  • test substance In order to determine the treatment concentration of the test substance, cell proliferation inhibition experiments were performed, and the test substance was performed by applying eight concentration steps (39.06, 78.13 156.25, 312.5, 625, 1,250, 2,500, 5,000 ⁇ g / ml). The concentration for the experiment was determined. Based on the results of the cell proliferation inhibition experiment, the highest treatment concentration of the test substance of this experiment was determined, and was determined as the following three concentration groups of azeotrope 2.
  • Metabolic activity method (+ S9 mix, 18 hours recovery group for 6 hours treatment): 625, 1,250, 2,500 ⁇ g / ml
  • MMC Mitomycin C (0.04 ⁇ g / ml)
  • PP ploidy
  • ER intranuclear excretion
  • Gap The undyed part is above the longitudinal axis of the chromosome, indicating that the width is as clear as the thickness of the chromosome.
  • composition of the S9 mix used as a metabolite was as follows: 1 ml of S9 in 10 ml of S9 mix, 0.2 ml of 0.4 M MgCl 2 /1.65 M KCl, 0.05 ml of 1.0 M Glucose-6-Phosphate, 0.1 M NADPH 0.4 ml, 0.1 M NADH 0.4 ml, 0.2 M Na-PBS 5 ml, distilled water 2.95 ml.
  • the concentration determination experiment was carried out in the 5 concentration group of azeotrope 2 with 5,000 ⁇ g / plate as the highest concentration, and growth inhibition was suppressed in all strains regardless of the application of metabolic activity system. It was not observed (Table 4).
  • NaN 3 is sodium azide
  • 9-AA is 9-aminoacridine hydrochloride hydrate
  • AF-2 is 2- (2-furyl) -3- (5-nitro-2-furyl) acrylamide)
  • 2-AA represents 2-aminoanthracene.
  • Micronucleus experiments using bone marrow cells of male mice were performed to evaluate the genotoxicity of the herbal extract prepared in Example 1.
  • 7-week-old male mice were purified for 7 days in the preliminary experiment and the present experiment, and the test materials were administered orally by concentration.
  • the test material was prepared by suspending in sterile saline solution, and in the preliminary experiments and the present experiment were treated in step concentration of 1,250, 2,500, 5,000 mg / kg.
  • the main experiment was performed at 5,000 mg / kg as the highest dose, and autopsy and specimen preparation were performed 24 hours after administration.
  • the number of polyinflammatory red blood cells in the total erythrocytes in the 5,000 mg / kg administration group showed a statistically significant difference compared to the solvent control (p ⁇ 0.05).
  • the frequency of micronucleus induction observed in about 2,000 polyinflammatory erythrocytes per subject did not show statistically significant results in all test substance administration groups (1,250, 2,500, 5,000 mg / kg) compared to the solvent control group.
  • mitomycin C used as a positive control was statistically significant and significantly increased in the frequency of micronucleus induction compared to the solvent control (p ⁇ 0.01). No statistically significant body weight change was observed in all dose groups after administration of the test substance compared to the solvent control group (Table 6).
  • MNPCE PCE with one or more micronuclei
  • PCE polyinflammatory red blood cells
  • NCE normal red blood cells
  • MMC mitomycin C
  • the present inventors prepared the composition for feed addition comprising the herbal extract prepared in Example 1 to the composition of Table 7 below.
  • the enzyme preparation used a combination of phytase, cellulase, xylanase, maltase, and converting enzyme, and Aspergillus orissae was used as a non-pathogenic microorganism.

Abstract

본 발명은 음수용 또는 사료 첨가용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 천궁, 방풍, 당귀, 작약, 연교, 박하엽, 마황, 망초, 대황, 석고, 길경, 황금, 백출, 산치자, 형개, 생강, 활석, 감초, 음양곽, 금은화, 원지 및 목향을 포함하는 생약을 물 또는 유기용매로 추출한 생약 추출물을 함유하는 음수용 또는 사료 첨가용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 가축의 증체율과 체중 증가량의 절대값을 현저하게 향상시키고, 활력징후 점수도 확연히 증가시킬 수 있으므로, 축산동물, 특히 허약한 이유자돈의 사료 효율 및 체중 증대용으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

음수용 또는 사료 첨가용 조성물
본 발명은 음수용 또는 사료 첨가용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, 이하 'PRRSV'라 하기도 함) 및/또는 돼지 써코바이러스 2형(Porcine Circovirus Type 2, 이하 'PCV-2'라 하기도 함)의 감염에 의해 초래되는 다양한 임상 증상을 개선할 수 있는 음수용 또는 사료 첨가용 조성물에 관한 것이다.
사료란 가축의 생명을 유지하고, 젖, 고기, 알, 털가죽 등을 생산하는데 필요한 유기 또는 무기 영양소를 공급하는 물질로서, 좋은 사료는 영양소의 함량이 많고 가축에게 유해한 성분이 없으며 생산량이 많을 뿐 아니라 항상 쉽게 구할 수 있고 언제나 신선하고 소화율이 높은 것이어야 한다. 가축을 사육하기 위한 사료는 현재 많은 부분에서 곡물이 사용되고 있는데, 최근 인구가 급격하게 증가함으로써 식량으로의 곡물의 수요가 증대되어 곡물을 사료의 원료로서 이용하기는 점점 어렵게 되었고 이러한 곡물 사료의 부족이 가축 사육의 발전에 제약이 되고 있다. 이에 사료 산업계에서는 곡물을 대체할 수 있는 사료의 개발 및 이용되는 사료의 효율을 극대화시키기 위한 많은 노력을 기울여 왔으며, 동물의 소화기능 및 흡수율을 증진시키는 등의 부가적인 기능을 수행할 수 있는 다양한 사료 첨가용제의 개발이 사료 산업에서 중요한 위치를 차지하게 되었다.
사료 첨가제는 일종의 보충 사료로서, 사료에 첨가하여 필수 영양소를 완전 공급하거나 특정한 효과를 냄으로써 생산성을 높이는 사료이며, 구체적으로 결핍물의 보충, 사료 효율의 증진 및 성장 촉진 등을 목적으로 사용하는 식용 첨가제이다. 사료 첨가제로는 소금, 골분, 비타민제, 항생 물질, 항균제, 항산화제, 항곰팡이제, 효소제, 생균제, 아미노산제 및 미량의 광물질이 있다. 일반적 의미로는 에너지와 단백질 공급을 주로 하는 일반 사료에 소량을 첨가 또는 보충함으로써 사료의 효과를 높이기 위해 사용하는 물질을 사료 첨가제라고 하여, 질병의 예방과 치료를 목적으로 하는 동물 약품과 구분한다. 이러한 사료 첨가용 조성물의 개발은 가축의 비육과 소화를 촉진시킴으로써 사료의 효율을 극대화시켜 사료 사용량을 줄일 수 있을 뿐만 아니라 빠른 증식과 비육으로 인해 고품질의 가축 생산을 가능하게 하여 농가의 소득 수준 향상에 기여할 수 있다는 점에서 그 중요성이 매우 크다고 할 수 있다.
한편, 이유자돈에서 발생하는 허약자돈은 일반적으로 PRRSV와 PCV-2의 복합감염에 의해 야기되는 돼지 써코바이러스 관련 질병(Porcine Circovirus Associated Disease, 이하 'PCVAD'라 하기도 함)에 의해 50% 정도가 발생하는 것으로 알려져 있다.
상기 PRRSV는 번식장애와 호흡기 감염이 복합적으로 나타나는 돼지 생식기 호흡기 증후군의 원인 바이러스로서, 이 바이러스에 감염되었을 경우 병을 일으키는 정도는 매우 다양하여, 단지 혈청 검사에 의해서만 감염을 알 수 있을 정도로 임상증상 및 경제적 손실이 전혀 없는 경우부터 농장의 생산에 20% 정도 손실을 입힐 정도로 심한 경우까지 있다.
PRRSV 감염에 의한 번식장애의 특징은 주로 임신 107일에서 113일 사이에 집중된 임신말기 유산 또는 조산 태아 분만, 사산 및 미이라 자돈의 발생, 자돈의 이유전 폐사율의 급증, 이유후 폐사율의 증가, 발정회귀의 지연 등이며, 이 증상들은 감염된 모돈과 그 모돈에서 태어난 자돈들에 집중적으로 나타난다. PRRSV 감염에 의한 번식장애는 대부분 감염 초기부터 6개월 정도가 경과하면 감염 이전 상태로 회복되는 것으로 알려져 있다.
PRRS 감염에 의한 호흡기 질환은 전 일령에 나타날 수 있으며, 특히 포유자돈과 이유자돈에서 집중적으로 나타난다. 이 경우 빠른 복식호흡, 안검부종, 결막염, 재채기, 설사 등이 관찰되고, 짧은 기간의 체온 상승이 있는 경우도 있으며, 드물게 신경증상을 보일 수도 있다. 호흡기 질환의 특징은 PRRSV 단독 감염의 경우보다는 세균성, 바이러스성 병원체의 2차 감염 및 복합감염이 많으며, 그 경우 병원성이 훨씬 증폭된다.
이상의 임상 증상들은 급성으로 심하게 진행되는 경우에 뚜렷하게 관찰할 수 있는 것들이며, 준임상형 감염이나 만성적으로 진행될 경우는 뚜렷하고 특징적인 임상증상을 거의 관찰할 수 없다. 만성적 감염은 이유자돈과 육성비육 단계에서 주로 이루어지며, PRRSV의 공격을 받은 호흡기계에 세균 및 바이러스가 감염되어 비염과 폐렴을 일으킨다. 결과적으로 일일 평균 증체량이 저하되고, 사료 요구율은 더 증가하게 되며, 이유 후 폐사율이 PRRSV 감염전의 평균 폐사율보다 2배가량 높아진다.
또한, PCV-2는 국내에서 가장 경제적인 피해를 많이 유발하는 질병 중 하나인 이유자돈 전신성 소모성 증후군(Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)의 원인 바이러스이다. 이유자돈 전신성 소모성 증후군은 농장에서 최소 6개월에서 최대 3년까지 지속적으로 생산성을 20∼40% 감소시키기 때문에, 이유자돈 전신성 소모성 증후군이 발생한 농장에서는 더 이상의 생산성을 향상시키지 못해 수익성을 악화시키는 무서운 질병이다. PCV-2 감염에 의해 유발되는 질병에는 전술한 이유자돈 전신성 소모성 증후군 이외에도 돼지 피부염 신부전 증후군(PDNS; porcine dermatitis and nephropathy syndrome)이 있으며, 최근에는 PCV-2가 복합 돼지 호흡기 질병(PRDC; porcine respiratory disease complex), 유산, 사산 등의 생식기 질환, 삼출성 표피염 등에도 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명자들은 상기 PCVAD에 의해 초래되는 다양한 임상 증상을 개선할 수 있는 음수 또는 사료 첨가제에 대해 연구한 결과, 방풍통성산(防風通聖散)의 원료에 음양곽, 금은화, 원지 및 목향을 포함하는 생약을 혼합한 후 추출하여 제조된 생약 추출물이 상기 PCVAD에 이환된 이유자돈(허약자돈)군의 증체율 및 활력 징후를 향상시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 방풍통성산의 원료에 음양곽, 금은화, 원지 및 목향을 포함하는 생약 혼합물을 추출하여 제조되는 생약 추출물을 포함하는 음수용 또는 사료 첨가용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 방풍통성산의 원료인 천궁, 방풍, 당귀, 작약, 연교, 박하엽, 마황, 망초, 대황, 석고, 길경, 황금, 백출, 산치자, 형개, 생강, 활석, 감초에 음양곽, 금은화, 원지 및 목향을 포함하는 생약을 혼합하여 추출한 생약 추출물을 함유하는 음수용 또는 사료 첨가용 조성물을 제공한다.
상기 생약 추출물을 제조하기 위해서는, 먼저 방풍통성산의 원료인 천궁, 방풍, 당귀, 작약, 연교, 박하엽, 마황, 망초, 대황, 석고, 길경, 황금, 백출, 산치자, 형개, 생강, 활석, 감초에 음양곽, 금은화, 원지 및 목향을 포함하는 생약에 2∼10배량의 물 또는 유기용매, 바람직하게는 물을 가한 후 70 내지 125℃에서 1 내지 10시간, 바람직하게는 3 내지 4시간 동안 추출하는 것이 바람직하다. 그러나, 상기와 같은 열수추출 이외에도 냉침추출, 환류냉각추출 또는 초음파추출 등의 추출방법을 사용해도 무방하다. 상기 생약 추출물을 제조함에 있어서, 생약은 음양곽 1 중량부에 천궁, 방풍, 당귀, 작약, 연교, 박하엽, 마황, 망초, 대황, 석고, 길경, 황금, 백출, 산치자, 형개, 생강, 활석, 감초, 금은화, 원지 및 목향을 각각 0.5 내지 5 중량부의 혼합비로 혼합한 후 사용할 수 있으나, 원하는 항-바이러스 효과가 얻어지는 한 상기 혼합비는 이들 범위 밖이어도 무방하다. 또한, 상기 생약 원료들 이외에도 일반적으로 한방에서 감기나 독감의 예방 또는 치료 목적으로 사용될 수 있는 임의의 약재들이 제한없이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, 상기 유기용매로는 C1-C4의 알코올, C1-C4의 케톤, C1-C4의 알데히드 및 상기 알코올, 케톤 및 알데히드의 수용액이 제한없이 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 음수용 또는 사료 첨가용 조성물을 제조함에 있어서, 상기 생약 추출물을 물에 희석해 음수로 사용하거나, 직접 제제화하거나 밀분, 녹말, 텍스트린 등의 희석제 및 곡류, 왕겨 및 탈지 쌀겨와 같은 겨, 오일 및 지방분이 풍부한 종자 케이크와 같은 사료용 원료와 함께 제제화될 수 있다.
또한, 본 발명의 음수용 또는 사료 첨가용 조성물은 건조 또는 액체 상태의 제제 형태일 수 있으며, 하나 이상의 효소 제제를 추가로 포함할 수 있다. 첨가되는 효소 제제는 건조 또는 액체 상태가 모두 가능하며, 리파제(lipase)와 같은 지방 분해효소, 피틴산(phytic acid)을 분해하여 인산염과 이노시톨인산염을 만드는 파이타제(phytase), 녹말과 글리코겐(glycogen) 등에 포함되어 있는 알파-1,4-글리코시드 결합(α-1,4-glycoside bond)을 가수분해하는 효소인 아밀라제(amylase), 유기인산에스테르를 가수분해하는 효소인 포스파타제(phosphatase), 셀룰로스(cellulose)를 분해하는 카르복시메틸셀룰라제(carboxymethylcellulase), 자일로스(xylose)를 분해하는 자일라나제(xylanase), 말토오스(maltose)를 두 분자의 글루코스(glucose)로 가수분해하는 말타제(maltase) 및 사카로스(saccharose)를 가수분해하여 글루코스-프룩토스(glucose-fructose) 혼합물을 만드는 전환효소(invertase) 등과 같은 당 생성 효소로 구성된 군으로부터 선택되어 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 비병원성의 다른 미생물을 추가로 포함할 수 있다. 첨가할 수 있는 미생물로는 가축의 체중을 증가시키며 우유의 산유량을 늘리고 사료의 소화 흡수율을 높이는 효과를 보여주는 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae)와 같은 사상균(Slyter, L.L. J. Animal Sci. 1976, 43. 910-926) 및 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)와 같은 효모(Jhonson, D.E et al. J. Anim. Sci., 1983, 56, 735-739; Williams, P.E.V. et al, 1990, 211), 소의 위와 같은 혐기적 조건에서 생리적 활성 및 유기물 분해능이 있는 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.)의 미생물 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
아울러, 각종 곡물 및 대두 단백을 비롯한 땅콩, 완두콩, 사탕무, 펄프, 곡물 부산물, 동물 내장 가루 및 어분 가루 등과 같은 사료원료는 가공되지 않거나 또는 가공된 것을 적절히 사용할 수 있다. 가공 과정은 사료원료가 충진된 상태에서 가압 하에 일정한 배출구로 압축되는 공정으로 단백질의 경우에는 변성이 되어 이용성이 증가되는 압출 성형(extrusion)을 사용하는 것이 바람직하다. 압출 성형은 열처리 과정을 통해 단백질을 변성시키고, 항효소 인자를 파괴시키며, 단백질 분해효소의 활성을 분자적 구조변화에 의한 새로운 부위로의 효소적 노출에 의해 증가시키는 등의 장점을 갖는다. 또한, 대두 단백질과 같은 경우에는 압출 성형을 통해서 단백질의 소화율을 향상시키고 대두에 존재하는 단백질 분해효소의 저해제 중 하나인 트립신 저해제(trypsin inhibitor)와 같은 항 영양인자들을 불활성화시키며, 단백질 분해효소에 의한 소화율 향상을 증가시켜 대두 단백의 영양적 가치를 증가시킬 수 있다.
본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 동물의 대표적인 예로는 돼지, 돼지새끼, 식용우, 젖소, 송아지, 양, 염소, 말, 토끼, 개, 고양이 등과 같은 가축; 병아리, 알닭, 가정용 닭, 수탉, 오리, 거위, 칠면조, 메추라기, 작은새 등과 같은 가금류가 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 투여량은 투여될 동물의 종류, 연령 및 기타 사료 성분의 종류에 따라 변화되므로 일정하게 정의하기는 어렵지만, 일반적으로 본 발명의 사료 첨가용 조성물의 경우에는 배합사료 100 중량부에 대하여 0.01∼10 중량부의 양으로 혼합하여 보조 사료로 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 특히 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 및/또는 돼지 써코바이러스 2형의 감염에 의해 유발되는 임상 증상을 개선하는데 유용하게 사용될 수 있다. 상기 임상 증상으로는 체중저하, 돼지 생식기 호흡기 증후군, 이유자돈 전신성 소모성 증후군, 돼지 피부염 신부전 증후군, 복합 돼지 호흡기 질병, 유산, 사산 및 삼출성 표피염 등이 있으나 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 생약 추출물은 천연 물질이므로 독성이 전혀 없어 지속적으로 다량 사용될 수 있으며, 마우스에 대한 독성 실험을 수행한 결과 경구 독성실험에 의한 50% 치사량(LD50)이 적어도 2 g/㎏ 이상인 안전한 물질로 판명되었다. 또한, 본 발명의 한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물을 투여한 경우에는 약을 먹이지 않은 허약자돈군인 음성대조군 및 약을 먹이지 않은 건강한 자돈군인 양성대조군에 비해 증체율과 체중 증가량의 절대값이 현저하게 향상된다(도 1 및 도 2 참조).
또한, 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 평균 체중에 있어서도 본 발명의 조성물을 투여한 경우에는 약을 먹이지 않은 허약자돈군인 음성대조군에 비해 체중 증가가 두드러지게 차이난다(도 3 참조).
또한, 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물을 투여할 경우, 실험 0주차, 1주차 까지는 실험군의 활력이 눈에 띄게 증가하지는 않았지만, 2주차 이후에는 음성대조군에 비해 활력징후 점수가 확연히 증가하는 양상을 보인다(도 6 내지 도 9 참조).
본 발명의 음수용 또는 사료 첨가용 조성물은 가축의 증체율과 체중 증가량의 절대값을 현저하게 향상시키고, 활력징후 점수도 확연히 증가시킬 수 있으므로, 축산동물, 특히 허약한 이유자돈의 사료 효율 및 체중 증대용으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 RATIO 주차에 따른 상대적 체중 증가율을 보여주는 그래프로서, A(0주차-1주차), B(1주차-2주차), C(2주차-3주차) 및 D(3주차-4주차) 동안의 증체율을 나타낸다.
도 2는 DIFF 주차에 따른 체중 증가량의 절대값을 보여주는 그래프로서, A(0주차-1주차), B(1주차-2주차), C(2주차-3주차) 및 D(3주차-4주차) 동안의 체중 증가량을 나타낸다.
도 3은 4주 동안의 평균 체중의 증가 양상을 보여주는 그래프로서, 검은색은 양성대조군, 푸른색은 음성대조군, 붉은색은 실험군을 나타낸다.
도 4는 폐사한 자돈에서 각각 PRRSV(A) 및 CPV-2(B)가 검출된 것을 보여주는 전기영동 사진이다.
도 5는 폐사한 자돈에서 각각 폐 간질(interstitial pneumomia)(A) 및 흉막염(pleuritis)(B) 증상이 있음을 보여주는 현미경 사진이다(×100).
도 6은 음성대조군, 양성대조군 및 실험군의 주별 활력 징후 점수를 보여주는 그래프이다.
도 7 내지 도 9는 각각 실험군, 음성대조군 및 양성대조군의 군분리 직후(A) 및 4주후(B)의 사육 상태 및 활력 상태를 보여주는 사진이다.
도 10 내지 도 12는 각각 S9 믹스 부재시 24시간 처리한 후, S9 믹스 부재시 6시간 처리한 후 및 S9 믹스 존재시 6시간 처리한 후 염색체 이상을 갖는 세포의 수를 나타내는 그래프이다.
도 13 내지 도 16는 각각 직접법에서 염기치환형 균주의 투여 응답 곡선, 대사활성법에서 염기치환형 균주의 투여 응답 곡선, 직접법에서 프레임시프트형 균주의 투여 응답 곡선 및 대사활성법에서 프레임시프트형 균주의 투여 응답 곡선을 보여주는 그래프이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 음수용 또는 사료 첨가용 조성물의 제조
모든 생약은 국내산으로 구입하여 시료로 사용하였다. 하기 표 1의 조성을 갖는 정선한 생약 약 2,456.5 g에 물 15 ℓ를 가한 후 상온에서 1시간 동안 방치하였다. 그 후, 115℃에서 3시간 동안 열탕추출하여 약 11 ℓ 부피의 생약 추출물을 얻었고, 상기 생약 추출물을 동결건조하여 약 9.6 g의 동결건조물을 얻었다. 상기 생약 추출물을 본 발명에 사용하였으며, 시험물질을 물에 1% 섞어 음수의 형태로 실험에 사용하였다.
표 1
원료명 중량(g)
천궁 84.5
방풍 84.5
당귀 84.5
작약 84.5
연교 84.5
박하엽 84.5
마황 84.5
망초 84.5
대황 84.5
석고 131
길경 131
황금 131
백출 65.5
산치자 65.5
형개 65.5
생강 225
활석 318.5
감초 225
금은화 84.5
음양곽 84.5
원지 84.5
목향 84.5
실시예 2. 증체율 평가
<2-1> RATIO 주차 및 DIFF 주차
호흡기 증상이 존재하며, 혈청 검사에서 바이러스를 진단하여 PRRSV와 PCV-2 바이러스의 복합 감염이 확인되고, 임상증상이 전혀 없이 활력이 정상인 정상 자돈의 60∼70% 정도 비율인 20일령 이유 자돈을 허약자돈으로 분리하여 하루 동안 바뀐 환경에 적응시킨 후 실험을 실시하였다. 실험동물은 충분한 공간이 제공된 3개의 우리에 23±3℃의 온도와 50±5%의 습도에서 사육하였다. 상기 실시예 1에서 제조한 시험물질을 실험에 사용하였으며, 식품의약품안전평가원의 표준작업수순서 중 '시험물질의 배합 및 조제(NITR/SOP/TSB/002_02)'에 따라 실시하였다. 매주 체중 측정을 통해 주간 증체율을 계산하였으며, 이유자돈이 49일령이 되기까지 4주 동안 증체율을 측정하였다. 실험 결과의 통계학적 유의성을 평가할 수 있도록 각 실험군당 개체 수는 10마리로 하였으며, 동일한 실험을 3회 반복하여 데이터를 분석하였다. 시험약물과 대조군의 변화 수치 및 오차를 t-테스트를 통해 유의성을 검증하였으며, 통계 프로그램은 SAS를 이용하였다. 증체율에 대해 하기 두 가지 방법을 적용하였다.
(1) RATIO 주차 = (해당 주차의 체중 전 주차의 체중)/전 주차의 체중
(2) DIFF 주차 = 해당 주차의 체중 전 주차의 체중
상기 RATIO 주차는 전 주차에 대한 상대적 체중 증가율로서 정확한 의미의 체중 증가율을 나타내며, DIFF 주차는 전 주차와 해당 주차의 체중의 차이로서 증가한 체중의 절대량을 나타낸다.
그 결과, RATIO 주차의 경우 0주차∼1주차 기간 동안의 증체율은 본 발명의 조성물을 먹이지 않은 허약자돈군인 음성대조군, 본 발명의 조성물을 먹이지 않은 건강한 자돈군인 양성대조군 및 약물투여군 모두에서 별다른 차이가 없었으나(p<0.01), 3주차∼4주차를 지나며 약물 투여군의 증체율이 음성대조군과 양성대조군 모두에 비해 현저하게 증체율이 향상된 것을 확인할 수 있었다(p<0.01)(도 1).
또한, DIFF 주차에 있어서도 3주차∼4주차가 되면서 실험군의 체중 증가량의 절대값이 본 발명의 조성물을 먹이지 않은 허약자돈군인 음성대조군에 비해 유의하게 차이가 나는 것을 확인하였다(p<0.01)(도 2).
<2-2> 평균 체중의 증가 양상
본 발명의 조성물을 먹이지 않은 허약자돈군인 음성대조군에 비해 본 발명의 조성물을 먹인 허약자돈군인 실험군의 체중 증가가 두드러지게 차이남을 확인하였다(도 3).
<2-3> 폐사한 허약자돈에서 원인 바이러스의 분리
실험 과정에서 음성대조군에서 2두의 폐사(2주차 1두, 3주차1두)가 관찰되었으며, 상기 폐사한 2두의 혈청 분석을 수행하였다. 구체적으로, 폐사한 2두의 혈청으로부터 바이러스 RNA와 바이러스 DNA를 추출한 후(PRRSV는 RNA 바이러스이고, PCV-2는 DNA 바이러스임), PRRSV와 PCV-2에 특이적인 프라이머를 사용하여(PRRSV의 ORF7, PCV-2의 ORF2) PCR 기법으로 해당 유전자 부위를 증폭하였다. 이때, PRRSV에 대한 프라이머로는 서열번호 1 및 서열번호 2로 기재되는 염기서열을 갖는 프라이머를 사용하였고(Res Vet Sci. 2008 Aug;85(1):184-93. Epub 2007 Dec 3. Simultaneous detection and genotyping of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) by real-time RT-PCR and amplicon melting curve analysis using SYBR Green. MartE, Riera P, SitjM, Fang Y, Oliveira S, Maldonado J.), PCV-2에 대한 프라이머로는 서열번호 3 및 서열번호 4로 기재되는 염기서열을 갖는 프라이머를 사용하였다(J Vet Diagn Invest. 2003 Jul;15(4):369-73. Detection of porcine circovirus type 2 in feces of pigs with or without enteric disease by polymerase chain reaction. Yang JS, Song DS, Kim SY, Lyoo KS, Park BK.). 이 후, 전기영동을 수행한 결과, PRRSV 및 CPV-2 양성임을 확인하였다(PRRSV: 300 bp, PCV-2: 300 bp)(도 4).
또한, 폐사 후 즉시 부검하여 육안적 병변을 관찰하였으며, 조직을 10% 완충 포르말린으로 고정 후, 파라핀 블록을 제작하여 H&E 염색으로 분석한 결과, 조직 소견상 폐 간질 및 흉막 내 염증 소견이 확인되었으며(도 5), 이는 PRRSV와 PCV-2 감염에 의한 호흡기 증상에서의 전형적인 소견이라 할 수 있다.
실시예 3. 활력징후 평가
활력 징후의 점수화는 참고논문(Halina M. Zaleski, Roger R. Hacker, Variables related to the progress of parturition and probability of stillbirth in swine, The Canadian Veterinary Journal, 1993 February; 34(2): 109∼113)의 방법을 변경하여 근긴장(muscle tone), 피부 상태, 30분 동안 움직이는 기간 대 누워있는 기간의 비율, 임상증상의 유무, 사료 섭취량, 음수 섭취량의 점수를 종합하여 0∼12점의 점수를 매겼다. 상기 활력 징후 점수화는 3, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28일령에 실시하였다.
그 결과, 실험 0주차, 1주차 까지는 실험군의 활력이 눈에 띄게 증가하지는 않았지만, 2주차 이후에는 음성대조군에 비해 활력징후 점수가 확연히 증가하는 양상을 보였다(도 6 내지 도 9).
실시예 4. 급성독성 실험
두열바이오텍에서 공급받은 7주령의 특정병원체부재(specific pathogen- free, SPF) SD(Sprague-Dawley) 계통의 랫드를 사용하여 다음과 같이 급성독성실험을 실시하였다. 실험동물 입수 후 7일 동안 순화기간을 두둔 후, 암·수컷 각각 그룹 당 5마리씩의 동물에 대조군 및 상기 실시예 1에서 제조한 생약 추출물을 각각 500, 1,000 및 2,000 ㎎/㎏의 용량으로 투여한 실험군으로 설정하여 실험을 수행하였다. 1회 경구 투여 후 동물의 폐사 여부, 임상 증상 및 체중 변화(투여전, 투여 1, 3, 7 및 14일)를 관찰하였으며, 부검하여 육안으로 흉강 및 복부 장기의 이상 여부를 관찰하였다.
실험 결과, 모든 실험군의 실험동물에서 사망동물 및 특이한 일반증상은 관찰되지 않았으며, 체중 측정 결과 모든 실험동물에서 정상적인 체중 증가를 나타내었다. 아울러, 실험종료시 모든 생존동물의 부검 결과 특이한 육안 소견은 관찰되지 않았다. 이상의 결과, 상기 생약 추출물은 암·수컷 랫드에서 각각 2 g/㎏까지도 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD50)은 2 g/㎏ 이상인 안전한 물질임을 확인하였다.
실시예 5. 염색체 이상 실험
실시예 1에서 제조한 생약 추출물의 유전독성을 평가하기 위하여 차이니즈 햄스터 유래의 난소유아세포(CHO-K1 cell)를 이용하여 대사활성효소계(S9)를 적용한 대사활성화법(+S9 mix) 및 적용하지 않은 직접법(-S9 mix)에서 염색체이상 실험을 수행하였다. 이때, 상기 S9 믹스의 조성은 다음과 같다: S9 믹스 1 ㎖ 중 S9 0.3 ㎖, MgCl2 5 μ㏖, KCl 33 μ㏖, G-6-P 5 μ㏖, NADP 4 μ㏖, HEPES 버퍼 4 μ㏖ 포함. 시험물질은 멸균증류수에 용해한 후 희석하여 조제하였다. 시험물질의 처리 농도를 결정하기 위해 세포증식 억제 실험을 수행하였으며, 시험물질은 8개의 농도단계(39.06, 78.13 156.25, 312.5, 625, 1,250, 2,500, 5,000 ㎍/㎖)를 적용하여 수행한 후 본실험을 위한 농도를 결정하였다. 세포증식 억제 실험의 결과를 토대로 본실험의 시험물질 최고 처리 농도를 결정하여 공비2의 3단계 농도군으로 다음과 같이 정하였다.
직접법(-S9 mix, 24시간 연속처리군) : 312.5, 625, 1,250 ㎍/㎖
직접법(-S9 mix, 6시간 처리 18시간 회복군) : 312.5, 625, 1,250 ㎍/㎖
대사활성법(+S9 mix, 6시간 처리 18시간 회복군) : 625, 1,250, 2,500 ㎍/㎖
본실험 결과 대사활성화를 적용시키지 않은 직접법의 24시간 연속처리군의 경우 이상중기상(aberrant metaphases)의 빈도가 음성대조군과 비교하여 모든 처리농도에서 유의한 증가를 관찰할 수 없었으며(도 10), 직접법의 6시간 처리 18시간 회복군에서도 이상중기상의 빈도가 음성대조군과 비교하여 모든 처리농도에서 유의한 증가를 관찰할 수 없었다(도 11). 24시간 연속처리군 및 6시간 처리 18시간 회복군 모두에서 배수성(polyploidy, PP) 및 핵내 배화(endoreduplication, ER)의 빈도는 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 보이지 않았다(표 2).
표 2
Figure PCTKR2011007449-appb-T000001
* 음성대조군과 유의한 차이(p<0.05)
a) 처리시간-회복시간
MMC: Mitomycin C (0.04 ㎍/㎖), PP: 배수성, ER: 핵내 배화
Gap: 염색되지 않은 부분이 염색분체의 종축 위에 있어 그 폭이 염색 분체의 두께 정도로 그 구분이 명확한 것을 나타냄.
또한, 대사활성법을 이용하여 6시간 시험물질을 처리한 경우, 모든 처리군에 있어서 이상중기상의 빈도는 음성대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 증가를 관찰할 수 없었으며(도 12), 배수성(PP) 및 핵내 배화(ER)의 빈도 또한 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 보이지 않았다(표 3).
표 3
Figure PCTKR2011007449-appb-T000002
* 음성대조군과 유의한 차이(p<0.05)
a) 처리시간-회복시간
CPA: Cyclophosphamide·H2O (10 ㎍/㎖)
이상의 결과로부터, 상기 생약 추출물은 본실험 조건 하에서 CHO-K1 세포에 대해 염색체 이상을 유발하지 않는다는 것을 확인하였다.
실시예 6. 미생물복귀 돌연변이 실험
실시예 1에서 제조한 생약 추출물에 대한 발암성 유발 유무 판단을 위한 기초 자료를 얻기 위하여 유전독성 실험 중 미생물복귀 돌연변이 실험을 수행하였다. 실험에는 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium)의 히스티딘 요구성 균주인 TA98, TA100, TA1535, TA1537 및 대장균의 트립토판 요구성 균주인 WP2uvrA를 이용하였다. 실험 물질은 멸균증류수에 현탁하여 사용하였으며, 대사활성에 의한 경우와 대사활성에 의하지 않은 경우를 적용하였다. 이때, 대사활성물질로 사용된 S9 믹스의 조성은 다음과 같다: S9 믹스 10 ㎖ 중 S9 1 ㎖, 0.4 M MgCl2/1.65 M KCl 0.2 ㎖, 1.0 M Glucose-6-Phosphate 0.05 ㎖, 0.1 M NADPH 0.4 ㎖, 0.1 M NADH 0.4 ㎖, 0.2 M Na-PBS 5 ㎖, 증류수 2.95 ㎖ 포함.
본 실험에서의 적용 농도의 결정을 위하여 5,000 ㎍/플레이트를 최고 농도로 하여 공비2의 5단계 농도군으로 농도결정 실험을 수행한 결과, 대사활성계를 적용하는 것과 무관하게 모든 균주에서 생육 저해는 관찰되지 않았다(표 4).
[규칙 제91조에 의한 정정 03.02.2012]　
표 4
Figure WO-DOC-TABLE-4
상기에서, NaN3은 나트륨 아자이드, 9-AA는 9-아미노아크리딘 히드로클로라이드 수화물, AF-2는 2-(2-푸릴)-3-(5-니트로-2-푸릴)아크릴아미드), 2-AA는 2-아미노안트라센을 나타낸다.
농도 결정 실험 결과를 바탕으로 본 실험에서 대사활성화에 의하지 않은 경우와 대사활성화에 의한 경우 5,000 ㎍/플레이트 농도 처리군에서 음성대조군에 비해 복귀 집락수의 증가가 관찰되었으나, 양성으로 판단할만한 복귀 집락수의 증가는 관찰되지 않았다(표 5 및 도 13 내지 도 16).
[규칙 제91조에 의한 정정 03.02.2012]　
표 5
Figure WO-DOC-TABLE-5
이상의 결과로부터, 상기 생약 추출물은 본 실험 조건 하에서 복귀 돌연변이를 유발하지 않는다는 것을 확인하였다.
실시예 7. 마우스 골수세포를 이용한 소핵 실험
실시예 1에서 제조한 생약 추출물의 유전 독성을 평가하기 위하여 수컷 마우스의 골수세포를 이용한 소핵 실험을 수행하였다. 본 소핵 실험은 예비실험과 본실험에서 각각 7주령의 수컷 마우스를 7일간 순화시킨 후 농도별로 실험 물질을 경구 투여하였다. 시험물질은 멸균 생리식염수에 현탁하여 조제하였으며, 예비실험과 본실험에서는 모두 1,250, 2,500, 5,000 ㎎/㎏의 단계별 농도로 처리하였다.
예비실험 결과, 모든 시험물질 투여군에서 용매 대조군과 비교하여 특이한 일반 증상은 관찰되지 않았다. 투여 농도(1,250, 2,500, 5,000 ㎎/㎏) 및 투여 후 도살 시기(24시간, 48시간)에 따라 관찰시, 전체 적혈구 중 다염성(polychromatic) 적혈구의 수는 용매 대조군과 비교해 뚜렷한 골수세포 증식 억제는 나타나지 않았다.
예비실험의 결과를 기초로 5,000 ㎎/㎏을 최고 투여 농도로 하고 부검 및 검체 제작 시기를 투여 후 24시간으로 본실험을 수행하였다. 그 결과, 5,000 ㎎/㎏ 투여군에서 전체 적혈구 중 다염성 적혈구의 수는 용매 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 차이를 보였다(p<0.05). 개체 당 약 2,000개의 다염성 적혈구에서 관찰한 소핵 유발 빈도는 모든 시험물질 투여군(1,250, 2,500, 5,000 ㎎/㎏)에서 용매 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 결과를 보이지 않았다. 한편, 양성 대조군으로 사용된 마이토마이신 C는 소핵유발 빈도에서 용매 대조군에 비해 통계적으로 유의하며 현저한 증가를 보였다(p<0.01). 시험물질 투여 후 모든 투여군에서 용매 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 체중 변화는 관찰되지 않았다(표 6).
표 6
Figure PCTKR2011007449-appb-T000005
* 음성대조군과 유의한 차이(p<0.05)(one-way ANOVA)
** 음성대조군과 유의한 차이(p<0.01)(one-way ANOVA)
MNPCE: 하나 이상의 소핵을 갖는 PCE, PCE: 다염성 적혈구, NCE: 정상 적혈구, MMC: 마이토마이신 C
이상의 결과로부터, 상기 생약 추출물은 본 실험 조건 하에서 마우스 골수세포의 소핵 형성에 영향을 주지 않는다는 것을 확인하였다.
제조예. 생약 추출물을 포함하는 사료 첨가용 조성물의 제조
본 발명자들은 실시예 1에서 제조한 생약 추출물을 포함하는 사료 첨가용 조성물을 하기 표 7의 조성으로 제조하였다.
표 7 사료 첨가용 조성물의 구성 비율(단위; 중량%)
생약 추출물 효소 제제 미생물 아미노산 기타
제조예 1 100
제조예 2 90 10
제조예 3 80 10 10
제조예 4 70 10 10 10
제조예 5 60 15 15 8 2
제조예 6 55 20 15 8 2
상기 표 7에서, 효소 제제는 파이타제, 셀룰라제, 자일라나제, 말타제 및 전환효소의 혼합제제를 사용하였고, 비병원성의 미생물로는 아스퍼질러스 오리자에를 사용하였다.

Claims (11)

  1. 천궁, 방풍, 당귀, 작약, 연교, 박하엽, 마황, 망초, 대황, 석고, 길경, 황금, 백출, 산치자, 형개, 생강, 활석, 감초, 음양곽, 금은화, 원지 및 목향을 포함하는 생약을 물 또는 유기용매로 추출한 생약 추출물을 함유하는 음수용 또는 사료 첨가용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 음양곽 1 중량부에 천궁, 방풍, 당귀, 작약, 연교, 박하엽, 마황, 망초, 대황, 석고, 길경, 황금, 백출, 산치자, 형개, 생강, 활석, 감초, 금은화, 원지 및 목향을 각각 0.5 내지 5 중량부의 혼합비로 혼합하여 추출한 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 유기용매는 C1-C4의 알코올, C1-C4의 케톤, C1-C4의 알데히드 및 상기 알코올, 케톤 및 알데히드의 수용액으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    하나 이상의 효소 제제를 추가로 포함하는 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 효소 제제는 리파제, 파이타제, 아밀라제, 포스파타제, 카르복시메틸셀룰라제, 자일라나제, 말타제 및 전환효소로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서,
    비병원성의 다른 미생물을 추가로 포함하는 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 미생물은 락토바실러스 속의 미생물, 아스퍼질러스 오리자에, 사카로미세스 세레비지에로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  8. 청구항 1에 있어서,
    추가로 1종 이상의 아미노산을 함유하는 조성물.
  9. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서,
    돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 또는 돼지 써코바이러스 2형의 감염에 의해 유발되는 임상 증상을 개선하는 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 임상 증상은 체중저하, 돼지 생식기 호흡기 증후군, 이유자돈 전신성 소모성 증후군, 돼지 피부염 신부전 증후군, 복합 돼지 호흡기 질병, 유산, 사산 및 삼출성 표피염으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  11. 청구항 1의 음수용 또는 사료 첨가용 조성물을 함유하는 사료.
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103445029A (zh) * 2013-09-21 2013-12-18 广南(湛江)家丰饲料有限公司 一种有效防治呼吸道疾病及增强免疫力的猪用饲料添加剂
CN104222608A (zh) * 2014-08-27 2014-12-24 淮北正兴生物饲料有限责任公司 一种预防流产的妊娠母猪饲料及其制作方法
WO2022000571A1 (zh) * 2020-07-02 2022-01-06 南京农业大学 糖酵解抑制剂在制备防治猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的药物中的应用
CN114532454A (zh) * 2022-03-04 2022-05-27 福建省农业科学院农业生态研究所 一种适用于液态饲喂的仔猪中草药饲料添加剂

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103719632A (zh) * 2014-01-06 2014-04-16 王众 含果仁组份的禽畜饲料及禽畜饲养方法
CN104587427A (zh) * 2014-12-25 2015-05-06 北京资源亚太饲料科技有限公司 一种治疗小反刍兽疫的中药散剂
CN105194253A (zh) * 2015-10-21 2015-12-30 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 一种用于治疗仔猪渗出性皮炎的兽用中药组合物及其应用
CN105535452A (zh) * 2015-12-28 2016-05-04 青岛华仁技术孵化器有限公司 防治猪繁殖与呼吸综合征的药物
CN106071560A (zh) * 2016-06-27 2016-11-09 固镇县牧兴生态养猪场 猪群运动后饮用的防暑降温饮品的制备方法
CN106036024A (zh) * 2016-06-27 2016-10-26 固镇县牧兴生态养猪场 用于猪运动后饮用的清凉消暑饮用水的制备方法
CN106173379A (zh) * 2016-06-27 2016-12-07 固镇县牧兴生态养猪场 用于猪运动后饮用的清凉消暑饮用水
CN106071079A (zh) * 2016-06-27 2016-11-09 固镇县牧兴生态养猪场 猪群运动后饮用的防暑降温饮品
CN106360004A (zh) * 2016-09-19 2017-02-01 赵国启 一种提高仔猪prrs抗体水平的饲料
CN110613054A (zh) * 2019-09-17 2019-12-27 中国农业大学 一种哺乳母猪用的中草药添加剂及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0581926B1 (de) * 1992-02-21 1996-09-11 NEUFELD, Klaus Tierfutter zur leistungssteigerung
KR19980082030A (ko) * 1998-08-17 1998-11-25 김상춘 유황을 포함한 한약제, 광물질을 함유한 사료의 제조방법
KR20050087916A (ko) * 2004-02-27 2005-09-01 대한민국(관리부서:농촌진흥청) 생리활성을 촉진하여 체세포를 저감하는 젖소용사료첨가제
KR20060119081A (ko) * 2005-05-18 2006-11-24 원광대학교산학협력단 항균활성을 갖는 오미자 추출물을 함유하는 조성물

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101167977B (zh) * 2007-10-18 2010-06-09 付琦 一种预防鸡高热病的中草药添加剂
CN101480484B (zh) * 2008-01-11 2012-05-30 曾雄辉 一种防风通圣散制剂的制备方法
CN101658551A (zh) * 2008-08-27 2010-03-03 新乡博凯生物技术有限公司 一种抗猪病毒病的金银花组合物
KR101164515B1 (ko) * 2009-11-05 2012-07-11 한국 한의학 연구원 인플루엔자 바이러스 유래 질병의 예방 또는 치료용 조성물
CN102187956B (zh) * 2011-06-22 2012-12-19 毕景阳 无抗生物生物复合预混料

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0581926B1 (de) * 1992-02-21 1996-09-11 NEUFELD, Klaus Tierfutter zur leistungssteigerung
KR19980082030A (ko) * 1998-08-17 1998-11-25 김상춘 유황을 포함한 한약제, 광물질을 함유한 사료의 제조방법
KR20050087916A (ko) * 2004-02-27 2005-09-01 대한민국(관리부서:농촌진흥청) 생리활성을 촉진하여 체세포를 저감하는 젖소용사료첨가제
KR20060119081A (ko) * 2005-05-18 2006-11-24 원광대학교산학협력단 항균활성을 갖는 오미자 추출물을 함유하는 조성물

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103445029A (zh) * 2013-09-21 2013-12-18 广南(湛江)家丰饲料有限公司 一种有效防治呼吸道疾病及增强免疫力的猪用饲料添加剂
CN104222608A (zh) * 2014-08-27 2014-12-24 淮北正兴生物饲料有限责任公司 一种预防流产的妊娠母猪饲料及其制作方法
WO2022000571A1 (zh) * 2020-07-02 2022-01-06 南京农业大学 糖酵解抑制剂在制备防治猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的药物中的应用
CN114532454A (zh) * 2022-03-04 2022-05-27 福建省农业科学院农业生态研究所 一种适用于液态饲喂的仔猪中草药饲料添加剂

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