CN105535452A

CN105535452A - 防治猪繁殖与呼吸综合征的药物

Info

Publication number: CN105535452A
Application number: CN201511003851.2A
Authority: CN
Inventors: 孙霞
Original assignee: Qingdao Huaren Technology Incubator Co Ltd
Current assignee: Qingdao Huaren Technology Incubator Co Ltd
Priority date: 2015-12-28
Filing date: 2015-12-28
Publication date: 2016-05-04

Abstract

本发明提供了一种用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物，其原料药包括淫羊藿、黄精、芡实、麻黄、鹅不食草、沙苑子、连翘、土党参、水栀、山药、牡丹皮、白附片、天文草、炙甘草、芒萁骨、小芸木、山苦草和草木犀。其对动物毒害小，药物残留少等特点，在防制繁殖与呼吸综合征方面具有更明显的优势。

Description

防治猪繁殖与呼吸综合征的药物

技术领域

本发明涉及中医药技术领域，尤其涉及一种防治猪繁殖与呼吸综合征的药物。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveandRespira-tionSyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种急性接触性传染病，主要引起妊娠母猪的繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状，导致妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍和仔猪的大量死亡。该病是一种急性、高致死性传染病，病毒致病力强，传播速度快，猪群发病率和死亡率高，仔猪发病率可达100％死亡率可达30％以上，母猪流产率可达30％以上。育肥猪、母猪也可发病死亡。

该病至今尚无有效的治疗方法，疫苗预防是主要的措施。疫苗的研究已取得显著进展，世界上商品化的PRRS疫苗有灭活疫苗和弱毒活疫苗两类。临床上PRRS疫苗主要存在的问题是：第一，疫苗产生免疫反应需要较长时间；其次，PRRSV疫苗并不具备完全的保护力，尤其是灭活疫苗不能激发细胞免疫；第三，PRRSV弱毒疫苗可以在免疫猪体组织中存在几周时间，并且从注苗猪向易感猪传播。因此，应用灭活疫苗增强疫苗免疫效力和安全性，研制免疫增强剂来提高PRRS灭活疫苗的免疫效果具有显著优势。

近年来发现中药对病毒性疾病的防止有较好的作用，因此开发和研制出中药制剂来预防该病有广阔的前景。中兽医认为，PRRS属于温(疫)病范畴，是因猪受虚邪贼风、暑热燥寒等外邪侵袭而引起的疾病，具有传染性、流行性、高热等特点。中药防治PRRS的机理有直接作用和间接作用，直接作用是中药制剂阻断病毒对正常细胞的吸附、穿入、复制等环节而达到抗病毒的目的。间接作用是中药通过机体调节作用，增强机体的细胞免疫、体液免疫，激活免疫细胞，诱导干扰素的产生，促使病毒不能在猪体细胞中生存繁殖，而发挥抗PRRSV的作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物，其对动物毒害小，药物残留少等特点，在防制繁殖与呼吸综合征方面具有更明显的优势。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物，其原料药包括淫羊藿、黄精、芡实、麻黄、鹅不食草、沙苑子、连翘、土党参、水栀、山药、牡丹皮、白附片、天文草、炙甘草、芒萁骨、小芸木、山苦草和草木犀。

其中，所述药物中各原料药的重量分别为淫羊藿20g～30g、黄精25g～35g、芡实15g～25g、麻黄10g～20g、鹅不食草20g～30g、沙苑子25g～35g、连翘15g～25g、土党参35g～45g、水栀10g～20g、山药25g～35g、牡丹皮20g～30g、白附片10g～20g、天文草15g～25g、炙甘草20g～30g、芒萁骨10g～20g、小芸木15g～25g、山苦草10g～20g和草木犀15g～25g。

其中，所述药物中各原料药的重量分别为淫羊藿23g～27g、黄精28g～32g、芡实18g～22g、麻黄13g～17g、鹅不食草23g～27g、沙苑子28g～32g、连翘18g～22g、土党参38g～42g、水栀13g～17g、山药28g～32g、牡丹皮23g～27g、白附片13g～17g、天文草18g～22g、炙甘草23g～27g、芒萁骨13g～17g、小芸木18g～22g、山苦草13g～17g和草木犀18g～22g。

其中，所述药物中各原料药的重量分别为淫羊藿25g、黄精30g、芡实20g、麻黄15g、鹅不食草25g、沙苑子30g、连翘20g、土党参40g、水栀15g、山药30g、牡丹皮25g、白附片15g、天文草20g、炙甘草25g、芒萁骨15g、小芸木20g、山苦草15g和草木犀20g。

本发明还提供了上述药物的制备方法，具体为将各原料药组分分别粉碎，按重量送入搅拌机中混合均匀，每100g混合物，加入500g～600g的水，煮沸3～4小时，过滤，获得第一滤液，100g混合物获得的滤渣再次加入200g～300g的水，再次煮沸1～2小时，过滤，获得第二滤液，将第一滤液和第二滤液混合，浓缩除去水溶剂，粉碎，干燥，获得干燥的粉末。

本发明的有益效果：

本发明提供的用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物对动物毒害小，药物残留少等特点，在防制繁殖与呼吸综合征方面具有更明显的优势。

具体实施方式

中医理论认为，猪繁殖与呼吸综合征的发生和变化虽错综复杂，但归于两点，即机体内在因素和外在因素相互作用的结果。中兽医学认为这是(正气)与(邪气)斗争的结果。(正气)是畜禽机体各脏腑组织器官的机能活动，以及其对外界环境的适应能力，对致病因素的抵抗能力，康复能力，是以脏腑功能和气血津液等物质为基础的识别异物，排除异物，维持自身内环境平衡和稳定的功能。(邪气)是指外界的六淫、疫病之气，又包括机体阴阳失调所产生的病理变化和病理产物等。机体的健康与否取决于(正气)和(邪气)的强弱，从中兽医学角度分析，属于中医温病，其在猪体的发病转变可用三焦，上焦、中焦、下焦，卫气营血来辨证论治。(虚邪共济)是发病诱因，也就是中医所讲的五脏处于(虚)时病毒乘虚而入，导致邪盛正衰，抗病无力，该病夏季多发。多因外感湿热化火，导致肺气不宣，升降失常，阴阳失调所致。现代医学的免疫系统有防御，自隐和监视3大功能。防御是指抵御各种病原微生物的感染，中兽医学正气防御外邪的作用与之相似；自隐就是指清除自身抗原、排除外源性因素十扰、稳定内环境、维持免疫平衡；免疫监视以防止机体细胞突变为“异己分子”，并通过免疫排斥反应，排斥这些“异己分子”，中兽医学正气协调脏腑经络气血相互依存、相互制约、清除内邪、重新建立阴阳平衡的作用也与之相似。由此可知，中兽医学所说的畜体正气，具有现代兽医学免疫系统的相似功能，免疫系统的器官、组织、细胞可能就是正气的中药物质基础，正邪相争的过程就是免疫反应的过程。因此，整个疾病的发生、发展和变化，都是“正气”和“邪气”相互斗争的反应，正邪斗争贯穿疾病发展的始终，因此，在治疗上本着扶正祛邪，标本兼顾的原则。

基于此，本发明提供一种用于治疗猪繁殖与呼吸综合征的药物，其原料药包括淫羊藿、黄精、芡实、麻黄、鹅不食草、沙苑子、连翘、土党参、水栀、山药、牡丹皮、白附片、天文草、炙甘草、芒萁骨、小芸木、山苦草和草木犀。

进一步优选，所述药物仅由上述原料药制备而成。

所述药物中各原料药的重量分别为淫羊藿20g～30g、黄精25g～35g、芡实15g～25g、麻黄10g～20g、鹅不食草20g～30g、沙苑子25g～35g、连翘15g～25g、土党参35g～45g、水栀10g～20g、山药25g～35g、牡丹皮20g～30g、白附片10g～20g、天文草15g～25g、炙甘草20g～30g、芒萁骨10g～20g、小芸木15g～25g、山苦草10g～20g和草木犀15g～25g。

进一步优选，所述药物中各原料药的重量分别为淫羊藿23g～27g、黄精28g～32g、芡实18g～22g、麻黄13g～17g、鹅不食草23g～27g、沙苑子28g～32g、连翘18g～22g、土党参38g～42g、水栀13g～17g、山药28g～32g、牡丹皮23g～27g、白附片13g～17g、天文草18g～22g、炙甘草23g～27g、芒萁骨13g～17g、小芸木18g～22g、山苦草13g～17g和草木犀18g～22g。

最优选，所述药物中各原料药的重量分别为淫羊藿25g、黄精30g、芡实20g、麻黄15g、鹅不食草25g、沙苑子30g、连翘20g、土党参40g、水栀15g、山药30g、牡丹皮25g、白附片15g、天文草20g、炙甘草25g、芒萁骨15g、小芸木20g、山苦草15g和草木犀20g。

各原料药药理如下：

淫羊藿：拉丁名EpimediiFolium，味辛、甘，性温，入肝、肾经，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效，主治肾虚阳痿、遗精早泄、腰膝痿软、肢冷畏寒；寒湿痹痛或四肢拘挛麻木等证。

黄精：拉丁名PolygonatiRhizoma，味甘，性平，入肺、脾、肾经，具有养气养阴，健脾润肺，益肾填精的功效，用于脾胃气阴亏虚，食少无力，阴虚肺燥，干咳少痰，阴虚内热之消渴，肾虚精亏、阳痿遗精、头晕耳鸣、目昏眼花等证。

芡实：味甘，涩，性平。归脾、肾经。具有益肾固精，补脾止泻，祛湿止带的功能，主治梦遗滑精，脾虚泄泻，脾虚白浊，带下等证。

麻黄：味辛、微苦，性温，入肺、膀胱经，具有发寒解表，宣肺平喘，利水消肿的作用，主要用于外感风寒之发热无汗等表实证；风湿性痹痛；寒邪犯肺或热邪壅肺至咳喘气逆，水肿，小便不利等证。

鹅不食草：味辛，性温，入肺、肝经，具有祛风寒，通鼻窍，止咳祛痰，散瘀消肿的作用，用于风寒表证，鼻塞流涕及鼻渊，咳嗽痰多，百日咳，疮痈肿痛等证。

沙苑子：性温，味甘，具有温补肝肾，固精，缩尿，明目的作用，用于肾虚阳痿，遗精早泄，尿频，或白带过多，腰膝酸软，腰痛；肝肾不足，目昏目暗，视力减退等证。

连翘：味苦，性微寒，入心、肝、胆、小肠经，有清热解毒，消肿散结的功效，用于痈疽，瘰疬，乳痈，丹毒，风热感冒，温病初起，温热入营，高热烦渴，神昏发斑，热淋尿闭等证。

土党参：拉丁名radixcampanumoeajavanicae，为桔梗科金钱豹属植物大花金钱豹与金钱豹的根，味甘，性平，归肺、脾经，具有健脾益气、补肺止咳，下乳的功效，主治劳虚内伤，气虚乏力，心悸，多汗，脾虚泄泻，白带，乳汁稀少，脾虚咳嗽等证。

水栀：为茜草科栀子属植物大花栀子的果实，味苦，性寒，具有清热解毒，消肿止痛的功效，主治热毒、黄疸、肾炎水肿，挫伤扭伤等证。

山药：拉丁名dioscoreaerhizoma，味甘、性平，入肺、脾、胃经，有补脾养胃，益肺固肾，养阴生津的作用，主治脾胃虚弱，脾失健运之食少纳差，脘闷腹泻等证。

牡丹皮：拉丁名MoutanCortex，味苦、辛，性微寒，入心、肝、肾经，有清热凉血、活血化瘀的作用，用于热毒炽盛之阴虚发热、湿热结毒之肠痈、气结血瘀、口干、舌红绛等证；以及肝火目赤肿痛，胃火牙龈疼痛。

白附片：味辛、甘，性大热，归心、肾、脾经。具有回阳救逆，补火助阳，散寒止痛的功效，主治亡阳虚脱，肢冷脉微，心阳不足，胸痹心痛，虚寒吐泻，脘腹冷痛，肾阳虚衰，阳痿宫冷，阴寒水肿，阳虚外感，寒湿痹痛等证。

天文草：性温，味辛，无毒，解毒利湿，止咳定喘，消肿止痛。用于疟疾，牙痛，肠炎，痢疾，咳嗽，哮喘，百日咳，肺结核，外用治毒蛇咬伤，狗咬伤，痈疖肿等证。

炙甘草：味甘，性平，入十二经，调和药性，祛痰止咳的作用，并能健脾和中，缓急止痛，主要用于补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。

芒萁骨：为里白科芒萁属植物芒萁的幼叶、叶柄，味微苦，涩，性凉，具有化瘀止血，利尿消肿的功效，主治妇女血崩，跌打损伤，外伤出血，热淋涩痛，白带，小儿腹泻，目赤肿痛，烫火伤，毒虫咬伤等证。

小芸木：为芸香科小芸木属植物小芸木的根、树皮及叶，味苦，辛，性温，具有祛风除湿，行气散瘀的功效，主治流感，感冒咳嗽，胃痛，风湿痹痛，跌打肿痛，骨折等证。

山苦草：为唇形科筋骨草属植物散瘀草的全草，味苦，性寒，具有清热平肝，消炎解毒的功效，主治慢性肝炎，尿路感染，口腔炎，疮疡肿毒等证。

草木犀：味辛，性平，具有和中健胃，清热化湿，利尿的功效，主治暑湿胸闷，口腻，口臭，赤白痢，淋病等证。

本发明还提供了一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的饲料，其原料包括用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物粉末、玉米、豆粕、食盐、鱼粉、蛋氨酸锌、赖氨酸、维生素A、维生素C和乙氧基喹啉。

进一步优选，所述饲料仅由上述原料构成。

其中，所述饲料中各原料的重量份分别为用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物粉末3重量份～5重量份、玉米250重量份～300重量份、豆粕120重量份～160重量份、食盐3重量份～5重量份、鱼粉25重量份～35重量份、蛋氨酸锌0.5重量份～1.5重量份、赖氨酸0.5重量份～1.5重量份、维生素A1重量份～2重量份、维生素E1重量份～2重量份、乙氧基喹啉2重量份～4重量份。

进一步优选，所述饲料中各原料的重量份分别为用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物粉末4重量份、玉米280重量份、豆粕150重量份、食盐4重量份、鱼粉30重量份、蛋氨酸锌1重量份、赖氨酸1重量份、维生素A2重量份、维生素E2重量份、乙氧基喹啉3重量份。

本发明还提供了上述饲料的制备方法，具体为：

第一步，制备上述药物粉末；

第二步，将第一步得到的药物粉末和食盐、蛋氨酸锌、赖氨酸、维生素A2、维生素E2和乙氧基喹啉按上述重量份配比均匀混合，混合时间为2～3分钟，混合后通过制粒机制成直径1～3mm颗粒，制粒在45～55℃下真空干燥；

第三步，将玉米、豆粕、鱼粉按照上述重量份配比取出混合均匀后粉碎，将粉碎好的原料进行混合，混合时间为4～5分钟，通过制粒机制成直径1～3mm颗粒，然后在45～55℃下真空干燥；

第四步，将第二步制成的颗粒和第三步制成的颗粒进行混合，混合时间为4～5分钟，得到颗粒料成品。

以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1药物粉末1

将淫羊藿25g、黄精30g、芡实20g、麻黄15g、鹅不食草25g、沙苑子30g、连翘20g、土党参40g、水栀15g、山药30g、牡丹皮25g、白附片15g、天文草20g、炙甘草25g、芒萁骨15g、小芸木20g、山苦草15g和草木犀20g分别粉碎，送入搅拌机中混合均匀，每100g混合物，加入600g的水，煮沸4小时，过滤，获得第一滤液，100g混合物获得的滤渣再次加入300g的水，再次煮沸2小时，过滤，获得第二滤液，将第一滤液和第二滤液混合，浓缩除去水溶剂，粉碎，干燥，获得干燥的粉末。

药理学急毒性试验

实验动物：SPF级，昆明小鼠，40只，20±2g，雌雄各半，由青岛农业大学动物实验中心提供。

受试药物：实验组：本发明实施例1制备的药物粉末1，水溶解配成生药含量1.75g/ml的溶液，4℃保存备用。对照组：灌胃生理盐水，其余条件同本发明药物组。

实验方法

分组：取SPF级，昆明小鼠40只，雌雄各半，饲养于青岛农业大学动物实验中心，适应性饲养一周。按随机数表法，将小鼠分为2组，分别是对照组20只，实验组20只，雌雄各半，分笼饲养。

给药方法

实验前，各组小鼠禁食不禁水12h，对照组灌胃蒸馏水0.2ml/20g体重，3次/日，实验组，灌胃本发明实施例1制备的药物粉末1，0.2ml/20g体重，3次/日，给药间隔4h。连续给药7天，停药观察3天。

观察指标

一般情况：观察给药期间及停药观察期间，各组小鼠的一般情况，如发育情况(体温、体重、心率)，皮毛情况，精神状态，各天然孔情况，自主活动情况。

脏器检查及理化检测：根据实验要求，给药期间出现动物死亡，立即解剖，观察各脏器情况，剥离各脏器，称重，并计算脏器指数，心脏取血理化检测；如无死亡，则根据实验要求，在观察期后，予10％水合氯醛麻醉，打开腹腔，观察各脏器情况，腹主动脉取血处死，做理化检测，剥离各脏器，称重，并计算脏器指数。

结果

实验期间无小鼠死亡，根据实验安排进行相关检测。

一般情况

给药期间及停药观察期间，各组小鼠在体重、体温等基础体征，无明显异常，两组比较，无统计学差异，外观正常，无畸形，皮毛色泽正常，精神状态良好，各天然孔干净，无异常分泌物，自主活动正常，无异常行为。

脏器检查及理化检测

根据实验要求，在观察期后，予10％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血处死，打开腹腔，观察各脏器情况，各组小鼠脏器排列正常，无粘连，无出血，所取血液做理化检测，各组小鼠血常规无异常，肝功、肾功检查无异常，剥离各脏器，称重，计算脏器指数，经统计学分析，无统计学差异，两组同期进行比较，统计学无差异。

结论

通过小鼠急性毒性试验，小鼠给药量为52.5g/kg/d，而无明显毒副作用，可以认为药物是安全的。通过本实验可以证实，本发明中药在急性毒性试验中，无急性毒性反应，无迟发毒性，基本可以认为是安全的。

长期毒性试验

受试药物

实验组：本发明实施例1制备的药物粉末1，水溶解配成生药含量1.15g/ml、0.85g/ml、0.55g/ml的溶液，4℃保存备用。对照组：灌胃生理盐水，其余条件同本发明药物组。

实验方法

分组

取SPF级，昆明小鼠40只，雌雄各半，饲养于青岛农业大学动物实验中心，适应性饲养一周。按随机数表法，将小鼠分为2组，分别是对照组10只、高剂量组10只、中剂量组10只、低剂量组10只，雌雄各半，分笼饲养。

给药方法

实验前，各组小鼠禁食不禁水12h，对照组灌胃蒸馏水0.2ml/20g体重，2次/日，高、中、低剂量组，分别灌胃本发明实施例1制备的药物粉末1.0g/ml、0.75g/ml、0.5g/ml，0.2ml/20g体重，2次/日，给药间隔6h。连续给药14天，停药观察7天。

观察指标

一般情况

观察给药期间及停药观察期间，各组小鼠的一般情况，如发育情况(体温、体重、心率)，皮毛情况，精神状态，各天然孔情况，自主活动情况。

脏器检查及理化检测

根据实验要求，给药期间出现动物死亡，立即解剖，观察各脏器情况，剥离各脏器，称重，并计算脏器指数，心脏取血理化检测；如无死亡，则根据实验要求，在观察期后，予10％水合氯醛麻醉，打开腹腔，观察各脏器情况，腹主动脉取血处死，做理化检测，剥离各脏器，称重，并计算脏器指数。

结果

实验期间无小鼠死亡，根据实验安排进行相关检测。

一般情况

脏器检查及理化检测

结论

通过本实验可以证实，本发明中药在长期毒性试验中，无蓄积毒性，无迟发毒性，基本可以认为是安全的，故临床使用是安全的。

实施例2药物粉末2

将淫羊藿23g、黄精28g、芡实18g、麻黄13g、鹅不食草23g、沙苑子28g、连翘18g、土党参38g、水栀13g、山药28g、牡丹皮23g、白附片13g、天文草18g、炙甘草23g、芒萁骨13g、小芸木18g、山苦草13g和草木犀18g分别粉碎，送入搅拌机中混合均匀，每100g混合物，加入600g的水，煮沸4小时，过滤，获得第一滤液，100g混合物获得的滤渣再次加入300g的水，再次煮沸2小时，过滤，获得第二滤液，将第一滤液和第二滤液混合，浓缩除去水溶剂，粉碎，干燥，获得干燥的粉末。

实施例3药物粉末3

将淫羊藿27g、黄精32g、芡实22g、麻黄17g、鹅不食草27g、沙苑子32g、连翘22g、土党参42g、水栀17g、山药32g、牡丹皮27g、白附片17g、天文草22g、炙甘草27g、芒萁骨17g、小芸木22g、山苦草17g和草木犀22g分别粉碎，送入搅拌机中混合均匀，每100g混合物，加入600g的水，煮沸4小时，过滤，获得第一滤液，100g混合物获得的滤渣再次加入300g的水，再次煮沸2小时，过滤，获得第二滤液，将第一滤液和第二滤液混合，浓缩除去水溶剂，粉碎，干燥，获得干燥的粉末。

实施例4饲料1

将实施例1制备的药物粉末400g、食盐400g、蛋氨酸锌100g、赖氨酸100g、维生素A200g、维生素E200g、乙氧基喹啉300g均匀混合，混合时间为3分钟，混合后通过制粒机制成直径3mm颗粒，制粒在55℃下真空干燥，将玉米28kg、豆粕15kg、鱼粉3kg混合均匀后粉碎，将粉碎好的原料进行混合，混合时间为5分钟，通过制粒机制成直径2mm颗粒，然后在50℃下真空干燥，将前面制成的颗粒进行混合，混合时间为5分钟，得到颗粒料成品。

比较例1饲料2

将淫羊藿25g、黄精40g、芡实30g、麻黄15g、鹅不食草20g、沙苑子25g、连翘35g、土党参30g、水栀20g、山药25g、牡丹皮20g、刺五加35g、白仙茅15g、扭肚藤15g、四叶草20g、马尾连15g、桑寄生30g、山大黄20g、南沙参25g和益智15g分别粉碎至40目，混合在一起，然后将其放入体积为药材量的10倍并且体积浓度为90％的乙醇溶液中，采用回流提取法，提取3次，每次提取时间为2h，提取温度为75℃，将提取溶液混合、过滤后收集滤液，置于旋转蒸发仪上浓缩，除去乙醇溶剂，干燥，粉碎，获得免疫制剂，将该制备的免疫制剂30g和磷酸氢钙20g、食盐10g、复合微量元素添加剂优利保2g、复合维生素添加剂优维素5g、赖氨酸1g和蛋氨酸1g均匀混合，混合时间为3分钟，混合后通过制粒机制成直径2mm颗粒，制粒在50℃下真空干燥，将玉米550g、豆粕100g、鱼粉80g、小麦130g混合均匀后粉碎，将粉碎好的原料进行混合，混合时间为5分钟，通过制粒机制成直径2mm颗粒，然后在50℃下真空干燥，将前面制成的颗粒进行混合，混合时间为5分钟，得到颗粒料成品。

抗病毒试验

主要试剂及仪器

细胞生长液，低糖DMEM，CIBCO产品，加10％新生小牛血清(青岛泛海生物有限公司)，每100ml营养液加10000IU的的青霉素和链霉素。

细胞维持液，除新生小牛血清为2％外，其余同细胞生长液。

MTT，3-(4，6-二甲基噻唑-2-xl)-2，5-乙苯基-四唑溴盐，Amresco公司产品。

二甲基亚砜(DMSO)，分析纯，上海凌缝化学试剂有限公司产品。

DC3022型酶联免疫检测仪，国营华东电子管厂产品。

药物准备

实施例1制备的药物粉末1，加水溶解至生药含量60mg/ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。经预试验测定对Marc-145细胞的最大安全浓度为6.0mg/ml，用细胞维持液4倍比稀释成6000、1500、375、93.75μg/ml4个浓度，4℃保存备用。

病毒准备

猪繁殖与呼吸综合征病毒，本实验室-20℃保存，临用前37℃解冻后，用细胞维持液稀释成100TCID₅₀备用。

试验方法

在96孔板上接种Marc-145细胞，培养24h形成单层后，分别采用先加药物后加病毒、先加病毒后加药物、药物与病毒孵育后加3种方式。即先加药物，孵育2h后加入病毒液；先加病毒，孵育2h后除去病毒液再加入药物；药物和病毒孵育2h后加入到细胞。继续培养72h，按MTT吸收法用酶联免疫检测仪测定各孔OD₅₇₀值，作为药物对抗病毒感染细胞的指标。OD值越大，抗病毒效果越好。

数据处理

计量资料采用表示，组间比较采用χ²检验，所有资料均采用SPSS12.0统计软件处理。

结果

表1中药药物抵抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞的作用(OD₅₇₀值)

通过表1可以看出，本发明中药药物对猪繁殖与呼吸综合征病毒具有很好的预防和治疗作用，且随着药物浓度越高，效果越好。

防治效果试验

试验材料：实施例4制备的饲料1和比较例1制备的饲料2。

试验动物

2014年5月，青岛某地多个猪场的保育猪，整群发生不同程度的呼吸困难(腹式呼吸)，精神沉郁，嗜睡，食欲不振等情况，严重者咳嗽，气喘，呼吸频率高达80次/min以上，耳部！腹部和腿部发绀等症状。剖检病猪可见肺充血、出现水肿，局灶性肺炎；有的有胸腔积液、肺门淋巴结肿大等症状。临床上曾用过多种药物治疗如磺胺嘧啶，青、链霉素等均未见效果，猪群进行过猪瘟、猪蓝耳病和链球菌病免疫。

实验室检查

病料总RNA的提取

取血清0.25ml加入1mlTrizol试剂，室温孵育5min，加入0.2ml氯仿，充分晃动离心管15s，室温孵育2-3min，4℃、12000r/min离心15min，转移上清液于另一新的1.5ml离心管，加入0.5ml异丙醇，充分晃动，放置4℃、12000r/min离心10min，沉淀核酸，弃上清液，加入75％乙醇1ml震摇，洗涤核酸，4℃、8000r/min离心5min，弃上清液，室温干燥沉淀5min，加入40μlDEPC水溶解沉淀物。

反转录

取下游引物GP5.20.5μl，10mmol/ldNTPs0.25μl，5×反转录buffer2.0μl和总RNA7.0μl，65℃水浴10min，然后加入M-MLV反转录酶0.25μl，用无菌双蒸水补至总体积10.0μl，37℃水浴1h。

PCR

反应总体积25μl。上游引物GP5.10.5μl，下游引物GP5.20.5μl，2.5mmol/ldNTPs2.0μl，10×Mg²⁺freebuffer2.5μl，2.5mmol/1Mg²⁺1.5μl，rTap酶2.5U，CDNA1μl，用灭菌双蒸水补至总体积25μl。反应循环参数，94℃预变性5min；94℃变性45s，59℃退火45s，72℃延伸60s，共进行35循环；然后72℃延伸10min。取PCR产物进行2％琼脂糖凝胶电泳。

RT-PCR检测结果

10份血清样品结果全部为阳性，根据临床症状、剖检变化和血清学检测结果，诊断为主要病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒。

分组治疗

取600头病猪分成3组，分别放入3个打扫干净并消毒的隔离猪舍内。饲料组200头，采用本发明实施例4提供的饲料进行喂食；空白对照组200头不给任何药物，喂食普通玉米饲料；阳性对照组200头喂食比较例1制备的饲料2。三组均喂食7天。

疗效判定

观察猪只的精神、采食、体温、呼吸、皮肤和耳朵颜色及死亡等情况，按如下标准判断疗效。

治愈：用药后呼吸平稳，精神、饮食、体温、皮肤和耳朵颜色恢复正常。

好转：用药后症状明显减轻，呼吸、精神、体温、饮食好转。

无效：用药后症状不减轻，甚至加重或死亡。

总有效率＝治愈率+好转率。

结果

三组疗效比较，结果见表2。

表2三组疗效比较

组别

治愈数

治愈率

好转数

好转率

无效数

总有效率

饲料组

192

96.0％

6

3.0％

2

99.0％

阳性对照

178

89.0％

12

6.0％

10

95.0％

空白对照

0

0.0％

25

12.5％

175

12.5％

从表2可以看出，采用本发明提供的含有中药药物的饲料可以很好的治疗猪繁殖与呼吸综合征，且与本发明发明人之前的研究成果相比，效果更好，差异显著。

所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1.一种用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物，其特征在于：原料药包括淫羊藿、黄精、芡实、麻黄、鹅不食草、沙苑子、连翘、土党参、水栀、山药、牡丹皮、白附片、天文草、炙甘草、芒萁骨、小芸木、山苦草和草木犀。

2.如权利要求1所述的用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物，其特征在于：各原料药的重量分别为淫羊藿20g～30g、黄精25g～35g、芡实15g～25g、麻黄10g～20g、鹅不食草20g～30g、沙苑子25g～35g、连翘15g～25g、土党参35g～45g、水栀10g～20g、山药25g～35g、牡丹皮20g～30g、白附片10g～20g、天文草15g～25g、炙甘草20g～30g、芒萁骨10g～20g、小芸木15g～25g、山苦草10g～20g和草木犀15g～25g。

3.如权利要求1或2所述的用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物，其特征在于：各原料药的重量分别为淫羊藿23g～27g、黄精28g～32g、芡实18g～22g、麻黄13g～17g、鹅不食草23g～27g、沙苑子28g～32g、连翘18g～22g、土党参38g～42g、水栀13g～17g、山药28g～32g、牡丹皮23g～27g、白附片13g～17g、天文草18g～22g、炙甘草23g～27g、芒萁骨13g～17g、小芸木18g～22g、山苦草13g～17g和草木犀18g～22g。

4.如权利要求1至3所述的用于防治猪繁殖与呼吸综合征的药物，其特征在于：各原料药的重量分别为淫羊藿25g、黄精30g、芡实20g、麻黄15g、鹅不食草25g、沙苑子30g、连翘20g、土党参40g、水栀15g、山药30g、牡丹皮25g、白附片15g、天文草20g、炙甘草25g、芒萁骨15g、小芸木20g、山苦草15g和草木犀20g。

5.权利要求1至4所述药物的制备方法，其特征在于：将各原料药组分分别粉碎，按重量送入搅拌机中混合均匀，每100g混合物，加入500g～600g的水，煮沸3～4小时，过滤，获得第一滤液，100g混合物获得的滤渣再次加入200g～300g的水，再次煮沸1～2小时，过滤，获得第二滤液，将第一滤液和第二滤液混合，浓缩除去水溶剂，粉碎，干燥，获得干燥的粉末。