WO2013037818A9 - Beverages containing glycolipid preservatives - Google Patents

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WO2013037818A9
WO2013037818A9 PCT/EP2012/067823 EP2012067823W WO2013037818A9 WO 2013037818 A9 WO2013037818 A9 WO 2013037818A9 EP 2012067823 W EP2012067823 W EP 2012067823W WO 2013037818 A9 WO2013037818 A9 WO 2013037818A9
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glycolipids
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Thomas Schloesser
Sven JAKUPOVIC
Werner KATZER
Grit KLUGE
Karsten Siems
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Wacker Chemie Ag
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    • C07H13/04—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals attached to acyclic carbon atoms
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
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    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats

Definitions

  • the invention relates to drinks containing glycolipids as natural preservatives and to processes for producing these drinks.
  • Preservatives are substances that protect a solid or liquid from spoiling due to microorganism attack.
  • microorganisms can be, for example, yeasts, molds, Gram-positive or Gram-negative bacteria.
  • yeasts, molds, Gram-positive or Gram-negative bacteria Particularly in the food industry, food infestation by yeasts, molds or bacteria must be prevented in order to ensure the safety of the products over a limited period of time.
  • Consumers' desire to consume a safe and limited-life food is offset by the desire for the greatest possible naturalness of the food. The consumer would like to forego the addition of chemically synthesized food additives.
  • natural alternatives to synthetic additives are increasingly being offered on the market.
  • a good example is the replacement of synthetic dyes in foods with dyes of natural origin.
  • Glycolipids are molecules in which one or more mono- or oligosaccharides are glycosidically bound to a lipid molecule.
  • the saccharide residue in the glycolipid is responsible for naming the various glycolipid classes. If, for example, the disaccharide sophorose is part of a glyco-lipid, it is called sophoroselipids.
  • sophoroselipids Also known in the literature are rhamnoselipids, trehaloselipids, cellobioselipids and mannosylerythritollipids.
  • Ustilago maydis ⁇ U. maydis) is a fungus of the genus U-stilaginomycete that can infest corn plants. Especially in Mexico U. maydis is considered food and is eaten there as a delicacy.
  • the genus Pseudozyma is also a member of the Usitilaginomyceten and is closely related to Ustilago.
  • R s is H or OH
  • R 7 is H or OH or -0
  • the beverage preferably contains as preservative a glycolipid of the formula (II)
  • Ri is H or COCH 3 represents
  • R 2 is the same or different and H or
  • R 3 is the same or different and is H or OH and
  • R 4 is OH or OCH 3
  • glycolipid or a salt of the glycolipid.
  • the beverage contains on its own a glycolipid of the formulas (III) to (XXV) ⁇
  • the salt is preferably an alkali or alkaline earth salt.
  • glycolipid of the formulas (XI), (XV), (IX) or (XIII) or one of their mixtures Preference is given to a glycolipid of the formulas (XI), (XV), (IX) or (XIII) or one of their mixtures, more preferably a glycolipid of the formulas (XI) or ⁇ XIII) or one of their mixtures, where again a Mixture of the glycolipids of the formulas (XI) and (XIII) is particularly preferred.
  • drinks contain at least one of said glycolipids in an amount of 10 to 4000 ppm.
  • drinks contain at least one of the glycolipids mentioned in each case in an amount of 10 to 1000 ppm.
  • drinks contain at least one of the glycolipids mentioned in each case in an amount of 10 to 100 ppm.
  • the beverages are juices, nectars, soft drinks, milk-based products, whey-containing drinks or yoghurt drinks.
  • the invention further relates to a process for the preparation of the beverages according to the invention.
  • the glycolipids or mixtures of the glycolipids according to formula (I) or formula (II) to (XXV) are either added directly to the beverage or added via Vo solutions in water or ethanol to the drink.
  • a preliminary solution of the glycolipids or mixtures of the glycolipids in beverage bases or emulsion bases for drinks is possible.
  • the glycolipids or mixtures of the glycolipids are either added directly to the beverage base or beverage emulsion base, or to the beverage base or beverage base via pre-solutions in water or ethanol.
  • the glycolipids according to formulas ⁇ I) to (XVII) and ⁇ XXV) can be prepared by cultivating the microorganism U. maydis in a nutrient medium, the glycolipids being formed by the microorganism and subsequently isolating the glycolipids from the medium getting cleaned.
  • the glycolipids according to formulas (XVIII) to (XXIV) can be prepared by culturing the microorganism Pseudozyma sp. In a nutrient medium, wherein the glycolipids are formed by the microorganism and the glycolipids are subsequently isolated from the medium and purified.
  • the preparation of the glycolipids of the formulas (I) to (XVII) and (XXV) with the aid of a 17th maydis strain is preferably carried out in a shake flask or a fermenter by methods known to the person skilled in the art.
  • the preparation of the glycolipids of the formulas (XVIII) to (XXIV) with the aid of a Pseudozyma sp, strain is preferably carried out in a shake flask or a fermenter by methods known to the person skilled in the art.
  • the carbon source is preferably sugar, sugar alcohols or organic acids. Glucose, lactose, sucrose, maltose, D-mannitol or glycerol are particularly preferably used as carbon sources.
  • the nitrogen source used is preferably ammonia, ammonium salts, amino acids, urea or protein hydrolysates.
  • salts of the elements phosphorus, chlorine, sodium, magnesium, nitrogen, potassium, calcium, iron, and in trace ⁇ i. in ⁇ concentrations ⁇ salts of the elements molybdenum, boron, cobalt, manganese, zinc, copper and nickel can be added.
  • organic acids e.g., acetate, citrate
  • amino acids e.g., L-isoleucine, D / L-methionine
  • vitamins e.g., vitamin B1, vitamin B6, vitamin B12
  • the pH of the medium during the cultivation is preferably in the pH range of 2.0 to 10.0, particularly preferably in the pH range of 2.0 to 8.5.
  • the incubation of the U. maydis strain and the Pseudozyma sp. Strain is preferably carried out under aerobic conditions over a period of 20 hours to 300 hours and in the region of the optimal growth temperature for the respective strain.
  • the incubation temperature is preferably 20-35 ° C, particularly preferred is an incubation temperature of 24-30 ° C. Particularly preferred is a cultivation time between 24 and 150 h.
  • the glycolipids can be purified by a process in which the glycolipids formed during the fermentation are omasse and culture supernatant isolated, and the compounds according to formula (I) to (XXV) are purified by chromatography, by selective extraction or by crystallization.
  • glycolipids from biomass and culture supernatant takes place in a known manner, for example by separation, centrifugation, adsorption or membrane administration.
  • solvents for example methanol, acetone, ethanol, isopropanol, methyl acetate, ethyl acetate, CO 2 , propane, butane, hexane, dichloromethane or ethyl methyl ketone, which can be used for extraction.
  • methanol is used for extraction.
  • the biomass may also be mechanically such as e.g. be pretreated by high-pressure homogenization or ultrasound.
  • the purification of the compounds can be carried out by chromatographic methods known to those skilled in the art, selective extraction, ion exchange or crystallization. Preference is given first to a coarse separation by means of medium pressure chromatography (MPLC) and subsequent fine separation by reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC).
  • MPLC medium pressure chromatography
  • RP-HPLC reversed phase high performance liquid chromatography
  • the invention also relates to the use of a glycolipid according to formula (I) to (XXV) or one of its salts as preservative in beverages, the above-mentioned preference of the different glycolipids and amounts also apply here.
  • glycolipids of the formulas (II) to (XXV) or one of their salts as preservatives in beverages is particularly preferred.
  • glycolipids of the formulas (III) to (XXV) or one of their salts are particularly preferred as preservatives in beverages, very particularly preferably in juices, nectars, soft drinks, milk-containing products, whey-containing drinks and yoghurt drinks.
  • the U. maydis strain ACD 04507fxxx000001 was isolated from spores of an affected corncob in September 2010. The sample comes from the federal state of Brandenburg in Germany. The
  • the strain was maintained by freezing a suspension in a glycerol-containing freezing solution at -80 ° C.
  • special 500 mL Erlenmeyer flasks 500 mL Erlenmeyer flasks with two opposing punctures are approximately 2.5 cm long, between 2 and 3 cm above the bottom of the flask and at an angle of 30 ° C to the horizontal
  • the preculture flasks were incubated on an orbital shaker with a 50 mm shaking radius at a shaking speed of 200 rpm and 24-25 ° C. for two days.
  • the main culture was carried out in just such Erlenmeyer flasks with 100 mL GLO1 medium (50 g / L glucose, 1.7 g / L Yeast Nitrogen base, pH 6.5, the glucose and Yeast Nitrogen Base solutions were separated autoclaved). The flasks were inoculated with 10 mL each of the preculture.
  • GLO1 medium 50 g / L glucose, 1.7 g / L Yeast Nitrogen base, pH 6.5, the glucose and Yeast Nitrogen Base solutions were separated autoclaved.
  • the flasks were inoculated with 10 mL each of the preculture.
  • the inoculated flasks were incubated on an orbital shaker with a 50 mm shaking radius at a shaking speed of 200 rpm and 24-25 ° C for five days.
  • Example 2 126 pistons of the main culture acc.
  • Example 2 were harvested in 1 L centrifuge beakers and centrifuged in a Heraeus Sepatech centrifuge at 5300 g for 20 min. The sediment thus obtained was frozen and lyophilized. The extraction was carried out with methanol and was supported by 15 min treatment in an ultrasonic bath and shaking for 15 min. After a filter ration, the sediment was again extracted in the same way with methanol.
  • the isolation of the compounds contained was carried out by a two-step process.
  • the extract grown on Celite was fractionated by medium pressure chromatography (MPLC) on RP-18 (200 x 50 mm) with a gradient (methanol-water) of 57-90% methanol at a flow rate of 30 mL / min (see Table 1).
  • MPLC medium pressure chromatography
  • DSM 2498 and DSM 62841 were frozen at ⁇ 80 ° C and used directly; the titer of the frozen suspensions was determined by plating on agar plates.
  • the inoculum was prepared from single colonies of freshly grown agar plates, typically overnight cultures.
  • the titer of the inoculum suspension is determined approximately by measuring the absorbance at 625 nm. If this corresponds to the absorption of McFarland Standard 0.5, a titer of 10 8 is assumed.
  • the test is carried out in U-bottom polystyrene 96well plates. Test substances are typically dissolved in DMSO, DMSO water or water. Table 7:
  • the calculated titre of the strains after inoculation is reproduced in Table 7. Anaerobically growing strains are grown using the BD GasPak EZ anaerobic system ⁇ BD, Tullastr. 8-12, 69126 Heidelberg, Germany). The BreathEasy Pole (Diversified Biotech, 65 Commerce Way, Dedham, MA 02026, USA) prevents contamination of adjacent wells with fungal spores.
  • the growth is evaluated by means of a binocular and other optical aids.
  • Aa Alicyclobacillus acidoterrestris DSM
  • Gl Gluconacetobacter liquefaciens DSM 5603
  • Aa Alicyclobacillus acidoterrestris DSM 2498
  • Gl Giuconacetobacter liquefaciens DSM 5603
  • Example 5 Various strains of microorganisms were incubated as set forth in Example 5 in the presence of various concentrations of the glycolipids (XIII), (V), (VIII), (IX), (XI), (XXII), and the glycolipid mixture AW-048 , In contrast to Example 5, the microorganisms were incubated in Getrankematrices. Table 10 lists the drinks used. By plating the inoculated drinks after 1 day, 1 week, 2 weeks and 4 weeks on suitable agar media, the preservative effect was checked. A substance was considered conservative if there was no increase in cell titer for 4 weeks. The mycel-forming fungi were additionally examined by binocular for hyphae growth.
  • Table 11 gives an overview of the preservative effects of the glycolipids and glycolipid mixtures.
  • Vitaperle energy 111 g / L sugar taurine, caffeine, B vitamins, carbon dioxide
  • Aa ⁇ licyclobacillus acidoterrestris DSM 2498
  • Gl Gluconacetobacter liguefaciens DSM 5603
  • 25, 100, 300 ... preserving effect at a concentration of 25, 100, 300 ... g / mL; > 600,> 1800 no preservative effect at the maximum used concentration of 600 g / mL or 1800 g / mL
  • the pseudozyma sp. Strain ACD 01658fxxxOOOOll was isolated from a soil sample in December 2002. The sample comes from the Rift Valley in Kenya. The strain was maintained by freezing a suspension in a glycerol-containing freezing solution at -80 ° C.
  • the strain ACD 01658fxxxOOOOll was on June 20, 2012 at the DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH, Inhoffenstr 7 B, D-38124 Braunschweig) under the number DSM 26076 according to Budapest Treaty by the company Analyticon Discovery GmbH (Hermannswerder house 17, 14473 Potsdam, Germany).
  • the main culture was carried out in special 500 mL Erlenmeyer flasks (500 mL Erlenmeyer flasks with two opposite punctures, the punctures being about 2.5 cm long, between 2 and 3 cm above the bottom of the flask and at an angle of 30 ° C Arranged horizontally; the flasks are sterile-capped with polyurethane foam stoppers of 50 mm in length and 40 mm in diameter) with 200 ml of SGCH1 medium (10 g / l L-glutamic acid monosodium salt monohydrate, 30 g / l sucrose, 0.15 g / l dihydrochloride).
  • the trace element solution contains 0.01 M sulfuric acid per liter of 1.5 g FeSO 4 .7H 2 O, 0.9 g ZnSO 4 .7H 2 O, 0.4 g MnS0 4 x H 2 0, 0.55 g CuS0 4 x 5 H 2 0, 0.6 g of Co (N0 3) 2 x 6 H 2 0, 0.25 g of boric acid and 0.2 g of Na 2 Mo0 4 x 2 H 2 0).
  • the main culture flasks were inoculated with 2.5 ml of homogenized preculture per Erlenemeyer flask and incubated on an orbital shaker with a 50 mm shaking radius at a shaking speed of 200 rpm and 24-25 ° C. for seven days.
  • Example 9 was shaken after addition of about 5% by volume of Diaion HP20 adsorbent resin after 45 minutes and then harvested in 1 L centrifuge beaker and centrifuged in a Heraeus Sepatech centrifuge at 5300 g for 20 min. The sediment thus obtained was extracted twice with acetone. The extraction was carried out with 15 min treatment in an ultrasonic bath and shaking for 15 min. After filtration, the sediment was again extracted in the same way with acetone.
  • Example 11 Isolation The isolation of the compounds contained was carried out by a two-step process.
  • the extract grown on celite was fractionated by medium pressure chromatography (MPLC) on RP-18 (200 x 50 mm) with a gradient (methanol-water) of 57-90% methanol at a flow rate of 30 mL / min (see Table 12).
  • MPLC medium pressure chromatography
  • the biomass sediment centrifuged from the fermentation of Ustilago maydis contains Ustilagin yarnren and Ustilipide.
  • the extraction with solvent, the precipitation from aqueous solution and a subsequent enrichment of the urstilaginic acids by degreasing were carried out to remove the ustilipids.
  • the extract is mixed with 50 ° C warm methanol, filtered and the resulting extract reduced in volume. After addition of 9 times the volume of water (preheated to 50 ° C.) precipitation takes place by cooling to room temperature and position. for two days at 4 ° C.
  • the urstilagic acid-containing precipitate is separated by means of a centrifuge, washed with cold water and dried after repeated degreasing with methyl tert-butyl ether (MTBE).
  • MTBE methyl tert-butyl ether
  • Example 13 Analytical data for AW-048 product
  • the content determination by HPLC-ELSD method gives> 99% U-stilaginic acids in total.
  • 1 shows the HPLC ELSD chromatogram of an enriched urstilagic acid fraction (glycolipid mixture AW-048 product).
  • Example 15 Olfactory assessment of the glycolipid-containing product AW-048
  • Example 16 Taste assessment of a solution of the substance NP-018256 (XI) Substance NP-018256 (purity 98.4% according to HPLC method 3, tabular details see above) was dissolved in a concentration of 50 ppm in still mineral water with heating to 60 ° C. The prepared solution, after cooling to room temperature, was evaluated by nine subjects according to the taste-and-spit method, and as a result, two subjects found no difference in comparison to water, and two other subjects described the solution as neutral were able to differentiate between the solution and water, the taste was not described as unpleasant and the substance did not adversely affect the taste of beverages at the concentration tested.
  • Example 17 Taste Assessment of AW-048 in Drinks AW-048 solutions of 50 ppm were prepared in various beverages as described in Example 15 for water. In addition to an apple spritzer, an orange platter and an ice tea, an energizer drink and a drink whey were also used. Three subjects were unable to discriminate between the original drinks and drinks with AW-048. In summary it could be stated that no taste impairment of the drinks by AW-048 takes place.
  • Example 18 Preparation of an apple spritzer with AW-048
  • Example 22 Preparation of a drinking whey with AW-048

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Abstract

The invention relates to a beverage comprising as a natural preservative a glycolipid of the formula (I) where n is 2, R1 is identical or different and denotes H or COCH3, R2 is identical or different and denotes H or (a), wherein m is 1, 2 or 3, R3 is identical or different and denotes H or OH, and R4 denotes OH or OCH3, R5 denotes H or (b) or (a), where m is 1, 2 or 3, R6 denotes H or OH and R7 denotes H or OH or =O, or a salt of the glycolipid.

Description

Getränke enthaltend Glykolipide als Konservierungsmittel Beverages containing glycolipids as preservatives
Die Erfindung betrifft Getränke, enthaltend Glykolipide als natürliche Konservierungsmittel sowie Verfahren zur Herstellung dieser Getränke. The invention relates to drinks containing glycolipids as natural preservatives and to processes for producing these drinks.
Konservierungsmittel sind Stoffe, die einen Feststoff oder eine Flüssigkeit vor dem Verderb infolge eines Befalls durch Mikroorganismen schützen. Diese Mikroorganismen können beispielswei- se Hefen, Schimmelpilze, grampositive oder gramnegative Bakterien sein. Besonders in der Lebensmittelindustrie muss ein Befall von Lebensmitteln durch Hefen, Schimmelpilze oder Bakterien verhindert werden um eine Sicherheit der Produkte über einen begrenzten Zeitraum zu gewährleisten. Dem Wunsch der Verbraucher, ein sicheres und begrenzt haltbares Lebensmittel zu konsumieren, steht der Wunsch nach größtmöglicher Natürlichkeit des Lebensmittels entgegen. Der Verbraucher würde gerne auf den Zusatz von chemisch synthetisierten Zusatzstoffen in Lebensmitteln verzichten. So werden auf dem Markt immer häufiger natür- liehe Alternativen zu synthetischen Zusatzstoffen angeboten. Ein gutes Beispiel ist der Austausch von synthetischen Farbstoffen in Lebensmitteln durch Farbstoffe natürlichen Ursprungs . Im Bereich der Konservierung von Lebensmitteln werden bisher natürliche Konservierungsmittel nur in sehr eingeschränkten Spe ialanwendungen eingesetzt. Dies liegt an den schlechten sensorischen Eigenschaften der entsprechenden Substanzen oder Extrakte. Besonders in der Getränkeindustrie spielt die Senso- rik eines Produkts eine entscheidende Rolle. Aus diesem Grund ist es bisher nicht gelungen natürliche Alternativen zu den chemisch synthetisierten Konservierungsstoffen Sorbinsäure und Benzoesäure in Getränken zu etablieren. Glykolipide sind Moleküle, bei denen ein oder mehrere Mono- o- der Oligosaccharide glykosidisch an ein Lipid-Molekül gebunden sind. Der Saccharid-Rest im Glykolipid ist für die Namensgebung der verschiedenen Glykolipid-Klassen verantwortlich. Ist beispielsweise das Disaccharid Sophorose Bestandteil eines Glyko- lipids, spricht man von Sophoroselipiden. Literaturbekannt sind weiterhin Rhamnoselipide , Trehaloselipide, Cellobioselipide und Mannosylerythritollipide . Preservatives are substances that protect a solid or liquid from spoiling due to microorganism attack. These microorganisms can be, for example, yeasts, molds, Gram-positive or Gram-negative bacteria. Particularly in the food industry, food infestation by yeasts, molds or bacteria must be prevented in order to ensure the safety of the products over a limited period of time. Consumers' desire to consume a safe and limited-life food is offset by the desire for the greatest possible naturalness of the food. The consumer would like to forego the addition of chemically synthesized food additives. For example, natural alternatives to synthetic additives are increasingly being offered on the market. A good example is the replacement of synthetic dyes in foods with dyes of natural origin. In the field of food preservation, natural preservatives have hitherto been used only in very limited special applications. This is due to the poor sensory properties of the corresponding substances or extracts. Especially in the beverage industry, the sensor technology of a product plays a decisive role. For this reason, it has not yet been possible to establish natural alternatives to the chemically synthesized preservatives sorbic acid and benzoic acid in beverages. Glycolipids are molecules in which one or more mono- or oligosaccharides are glycosidically bound to a lipid molecule. The saccharide residue in the glycolipid is responsible for naming the various glycolipid classes. If, for example, the disaccharide sophorose is part of a glyco-lipid, it is called sophoroselipids. Also known in the literature are rhamnoselipids, trehaloselipids, cellobioselipids and mannosylerythritollipids.
Ustilago maydis {U. maydis) ist ein Pilz aus der Klasse der U- stilaginomyceten, der Maispflanzen befallen kann. Vor allem in Mexico gilt U. maydis als Nahrungsmittel und wird dort als Delikatesse verzehrt. Die Gattung Pseudozyma gehört ebenfalls zu den Usitilaginomyceten und ist mit Ustilago nahe verwandt. Ustilago maydis {U. maydis) is a fungus of the genus U-stilaginomycete that can infest corn plants. Especially in Mexico U. maydis is considered food and is eaten there as a delicacy. The genus Pseudozyma is also a member of the Usitilaginomyceten and is closely related to Ustilago.
Aus EP1 15538 ist bekannt dass sich Backwaren durch Rhamnolipi - de konservieren lassen. Aus US2698843 ist bekannt, dass das Cellobioselipid üstilagin- säure antibiotische Wirksamkeit besitzt. It is known from EP 1 15538 that baked goods can be preserved by rhamnolipids. From US2698843 it is known that the cellobioselipid has urtilagic acid antibiotic activity.
Die Biosynthese der Ustilaginsäure sowie die Verwendung als A- gens zur biologischen Kontrolle des pflanzenpathogenen Pilzes Botrytis cinerea sind in der Dissertation von Beate Teichmann (http: //archiv. ub. uni- marburg . de/opus / rontdoor . php?source opus=2342&la=de) beschrieben. In der Publikation von Ross (Appl. Microbiol . 1958, 6(4):268- 73) ist ein Screening von potentiell antimikrobiellen Substanzen beschrieben bei dem auch Ustilaginsäure verwendet wurde, die allerdings keine konservierende Wirkung im Test zeigte. Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Getränken, die durch ein natürliches Konservierungsmittel konserviert werden, und die bekannten sensorischen Nachteile be~ kannter natürlicher Konservierungsmittel nicht aufweisen. The biosynthesis of usstilagic acid and its use as an agent for the biological control of the phytopathogenic fungus Botrytis cinerea are described in the PhD thesis of Beate Teichmann (http://archiv.ub.uniburgurg.de / opus / rontdoor.php? Source opus = 2342 & la = de). In the publication by Ross (Appl.Microbiol 1958, 6 (4): 268-73) a screening of potentially antimicrobial substances is described in which also stilthartinic acid was used, which, however, showed no preservative effect in the test. It is an object of the present invention to provide beverages which are preserved by a natural preservative and which do not have the known sensory disadvantages of known natural preservatives.
Diese Aufgabe wird gelöst durch ein Getränk enthaltend als natürliches Konservierungsmittel ein Glykolipid der Formel (I) This object is achieved by a beverage containing as natural preservative a glycolipid of the formula (I)
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oder n = 2 ist gleich oder verschieden ist und H oder COCH3 bedeutet gleich oder verschieden ist und H oder
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or n = 2 is the same or different and H or COCH 3 means the same or different and H or
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bedeutet, wobei m l, 2 oder 3 ist,  where m is 1, 2 or 3,
gleich oder verschieden ist und H oder OH bedeutet und is the same or different and is H or OH and
OH oder OCH3 bedeutet OH or OCH 3 means
H oder
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H or
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oder
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or
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bedeutet, wobei m l, 2 oder 3 ist, where m is 1, 2 or 3,
Rs H oder OH bedeutet R s is H or OH
R7 H oder OH oder -0 bedeutet R 7 is H or OH or -0
oder ein Salz des Glykolipids . Bevorzugt enthält das Getränk als Konservierungsmittel ein Gly- kolipid der Formel (II) or a salt of the glycolipid. The beverage preferably contains as preservative a glycolipid of the formula (II)
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(II)  (II)
wobei in which
Ri H oder COCH3 bedeutet Ri is H or COCH 3 represents
R2 gleich oder verschieden ist und H oder
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R 2 is the same or different and H or
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bedeutet, wobei m l, 2 oder 3 ist,  where m is 1, 2 or 3,
R3 gleich oder verschieden ist und H oder OH bedeutet undR 3 is the same or different and is H or OH and
R4 OH oder OCH3 bedeutet R 4 is OH or OCH 3
oder ein Salz des Glykolipids .  or a salt of the glycolipid.
Besonders bevorzugt enthält das Getränk als on ervierungsmit- tel ein Glykolipid der Formeln (III) bis (XXV)  Particularly preferably, the beverage contains on its own a glycolipid of the formulas (III) to (XXV) 
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9 9
£Z8/.90/ZlOZd3/I3d 8ΐ8/.£0/£ΪΟΖ OAV  £ Z8 / .90 / ZlOZd3 / I3d 8ΐ8 /. £ 0 / £ ΪΟΖ OAV 
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10 10
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oder ein Salz der genannten Verbindungen.
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or a salt of said compounds.
Bei dem Salz handelt es sich vorzugsweise um ein Alkali- oder ein Erdalkalisalz. The salt is preferably an alkali or alkaline earth salt.
Bevorzugt handelt es sich um ein Glykolipid der Formeln (XI) , (XV) , (IX) oder (XIII) oder eines ihrer Gemische, besonders bevorzugt ein Glykolipid der Formeln (XI) oder {XIII) oder eines ihrer Gemische, wobei wiederum ein Gemisch der Glykolipide der Formeln (XI) und (XIII) insbesondere bevorzugt ist. Preference is given to a glycolipid of the formulas (XI), (XV), (IX) or (XIII) or one of their mixtures, more preferably a glycolipid of the formulas (XI) or {XIII) or one of their mixtures, where again a Mixture of the glycolipids of the formulas (XI) and (XIII) is particularly preferred.
Vorzugsweise enthalten Getränke mindestens eines der genannten Glykolipide jeweils in einer Menge von 10 bis 4000 ppm. Besonders bevorzugt enthalten Getränke mindestens eines der genannten Glykolipide jeweils in einer Menge von 10 bis 1000 ppm. Preferably, drinks contain at least one of said glycolipids in an amount of 10 to 4000 ppm. Particularly preferably, drinks contain at least one of the glycolipids mentioned in each case in an amount of 10 to 1000 ppm.
Insbesondere bevorzugt enthalten Getränke mindestens eines der genannten Glykolipide jeweils in einer Menge von 10 bis 100 ppm . Particularly preferably, drinks contain at least one of the glycolipids mentioned in each case in an amount of 10 to 100 ppm.
Bevorzugt handelt es sich bei den Getränken um Säfte, Nektare, Erfrischungsgetränke, milchhaltige Produkte, molkehaltige Getränke oder Joghurtgetränke. Preferably, the beverages are juices, nectars, soft drinks, milk-based products, whey-containing drinks or yoghurt drinks.
Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Getränke. Bei diesem Verfahren werden die Glykolipide oder Gemische der Glykolipide gemäß Formel (I) bzw. Formel (II) bis (XXV) entweder direkt in das Getränk gegeben oder über Vo lösungen in Wasser oder Ethanol dem Getränk zugegeben. Weiterhin ist eine Vorlösung der Glykolipide oder Gemische der Glykolipide in Getränkegrundstoffen oder Emulsions- grundstoffen für Getränke möglich. Auch bei den Getränkegrund- Stoffen oder Emulsionsgrundstoffen für Getränke werden die Gly- kolipide oder Gemische der Glykolipide entweder direkt in den Getränkegrundstoff oder Emulsionsgrundstoff für Getränke gegeben oder über Vorlösungen in Wasser oder Ethanol dem den Ge- tränkegrundstoff oder Emulsionsgrundstoff für Getränke zugegeben . The invention further relates to a process for the preparation of the beverages according to the invention. In this method, the glycolipids or mixtures of the glycolipids according to formula (I) or formula (II) to (XXV) are either added directly to the beverage or added via Vo solutions in water or ethanol to the drink. Furthermore, a preliminary solution of the glycolipids or mixtures of the glycolipids in beverage bases or emulsion bases for drinks is possible. Even with the drinks Substances or emulsion bases for beverages, the glycolipids or mixtures of the glycolipids are either added directly to the beverage base or beverage emulsion base, or to the beverage base or beverage base via pre-solutions in water or ethanol.
Die Glykolipide gemäß Formeln {I) bis (XVII) und {XXV) lassen sich dadurch herstellen, dass der Mikroorganismus U. maydis in einem Nährmedium kultiviert wird, wobei die Glykolipide durch den Mikroorgani mus gebildet werden und die Glykolipide anschließend aus dem Medium isoliert und gereinigt werden. The glycolipids according to formulas {I) to (XVII) and {XXV) can be prepared by cultivating the microorganism U. maydis in a nutrient medium, the glycolipids being formed by the microorganism and subsequently isolating the glycolipids from the medium getting cleaned.
Die Glykolipide gemäß Formeln (XVIII) bis (XXIV) lassen sich dadurch herstellen, dass der Mikroorganismus Pseudozyma sp.-in einem Nährmedium kultiviert wird, wobei die Glykolipide durch den Mikroorganismus gebildet werden und die Glykolipide anschließend aus dem Medium isoliert und gereinigt werden. Die Herstellung der Glykolipide der Formeln (I) bis (XVII) und (XXV) mit Hilfe eines 17. maydis- Stammes erfolgt vorzugsweise in einem Schüttelkolben oder einem Fermenter nach dem Fachmann bekannten Verfahren. Die Herstellung der Glykolipide der Formeln (XVIII) bis (XXIV) mit Hilfe eines Pseudozyma sp, -Stammes erfolgt vorzugsweise in einem Schüttelkolben oder einem Fermenter nach dem Fachmann bekannten Verfahren. Als Kohlenstoff -Quelle dienen vorzugsweise Zucker, Zuckeralkohole oder organische Säuren. Besonders bevorzugt werden als Kohlenstoff -Quellen Glucose, Lactose, Saccharose, Maltose, D- Mannit oder Glycerin eingesetzt. Als Stickstoff -Quelle werden vorzugsweise Ammoniak, Ammoniumsalze, Aminosäuren, Harnstoff oder Proteinhydrolysate verwendet . The glycolipids according to formulas (XVIII) to (XXIV) can be prepared by culturing the microorganism Pseudozyma sp. In a nutrient medium, wherein the glycolipids are formed by the microorganism and the glycolipids are subsequently isolated from the medium and purified. The preparation of the glycolipids of the formulas (I) to (XVII) and (XXV) with the aid of a 17th maydis strain is preferably carried out in a shake flask or a fermenter by methods known to the person skilled in the art. The preparation of the glycolipids of the formulas (XVIII) to (XXIV) with the aid of a Pseudozyma sp, strain is preferably carried out in a shake flask or a fermenter by methods known to the person skilled in the art. The carbon source is preferably sugar, sugar alcohols or organic acids. Glucose, lactose, sucrose, maltose, D-mannitol or glycerol are particularly preferably used as carbon sources. The nitrogen source used is preferably ammonia, ammonium salts, amino acids, urea or protein hydrolysates.
Als weitere Medienzusätze können Salze der Elemente Phosphor, Chlor, Natrium, Magnesium, Stickstoff, Kalium, Calcium, Eisen und in Spuren {d.h. in μΜ Konzentrationen} Salze der Elemente Molybdän, Bor, Kobalt, Mangan, Zink, Kupfer und Nickel zuge- setzt werden. As further media additives, salts of the elements phosphorus, chlorine, sodium, magnesium, nitrogen, potassium, calcium, iron, and in trace {i. in μΜ concentrations} salts of the elements molybdenum, boron, cobalt, manganese, zinc, copper and nickel can be added.
Des Weiteren können organische Säuren (z.B. Acetat, Citrat) , Aminosäuren (z.B. L-Isoleucin, D/L-Methionin) und Vitamine (z.B. Vitamin Bl, Vitamin B6, Vitamin B12) dem Medium zugesetzt werden. Further, organic acids (e.g., acetate, citrate), amino acids (e.g., L-isoleucine, D / L-methionine) and vitamins (e.g., vitamin B1, vitamin B6, vitamin B12) may be added to the medium.
Als komplexe Nährstoffquellen können z.B. Malzextrakt, Maisquellwasser, Sojamehl oder Hefeextrakt zum Einsatz kommen. Der pH-Wert des Mediums liegt während der Kultivierung bevorzugt im pH-Bereich von 2,0 bis 10,0 besonders bevorzugt ist ein pH~Bereich von 2,0 bis 8,5. As complex nutrient sources, e.g. Malt extract, corn steep liquor, soybean meal or yeast extract are used. The pH of the medium during the cultivation is preferably in the pH range of 2.0 to 10.0, particularly preferably in the pH range of 2.0 to 8.5.
Die Inkubation des U. maydis-Stammes und des Pseudozyma sp.- Stammes erfolgt vorzugsweise unter aeroben Bedingungen, über einen Zeitraum von 20 h bis 300 h und im Bereich der für den jeweiligen Stamm optimalen Wachstumstemperatur. Die Inkubationstemperatur beträgt vorzugsweise 20 - 35 °C, besonders bevorzugt ist eine Inkubationstemperatur von 24 - 30 °C. Besonders bevorzugt ist eine Kultivierungs2eit zwischen 24 und 150 h. The incubation of the U. maydis strain and the Pseudozyma sp. Strain is preferably carried out under aerobic conditions over a period of 20 hours to 300 hours and in the region of the optimal growth temperature for the respective strain. The incubation temperature is preferably 20-35 ° C, particularly preferred is an incubation temperature of 24-30 ° C. Particularly preferred is a cultivation time between 24 and 150 h.
Die Glykolipide lassen sich reinigen durch ein Verfahren, bei dem die während der Fermentation gebildeten Glykolipide aus Bi- omasse und Kulturüberstand isoliert, extrahiert und die Verbindungen gemäß Formel (I) bis (XXV) chromatographisch, durch selektive Extraktion oder durch Kristallisation aufgereinigt werden. The glycolipids can be purified by a process in which the glycolipids formed during the fermentation are omasse and culture supernatant isolated, and the compounds according to formula (I) to (XXV) are purified by chromatography, by selective extraction or by crystallization.
Die Isolation der Glykolipide aus Biomasse und Kulturüberstand erfolgt in bekannter Art, beispielsweise durch Separation, Zentrifugation, Adsorption oder Membranverf hren. Dem Fachmann sind verschiedene Lösungsmittel wie beispielsweise Methanol, Aceton, Ethanol, Isopropanol, Methylacetat , Ethyl- acetat, C02, Propan, Butan, Hexan, Dichlormethan oder Ethylme- thylketon bekannt, die zur Extraktion eingesetzt werden können. Bevorzugt wird Methanol 2ur Extraktion eingesetzt. The isolation of the glycolipids from biomass and culture supernatant takes place in a known manner, for example by separation, centrifugation, adsorption or membrane administration. The person skilled in the art is aware of various solvents, for example methanol, acetone, ethanol, isopropanol, methyl acetate, ethyl acetate, CO 2 , propane, butane, hexane, dichloromethane or ethyl methyl ketone, which can be used for extraction. Preferably, methanol is used for extraction.
Neben den genannten chemischen Aufschlussmethoden kann die Biomasse auch mechanisch wie z.B. durch Hochdruckhomogenisation oder Ultraschall vorbehandelt werden. Die Reinigung der Verbindungen kann durch dem Fachmann bekannte chromatographische Methoden, selektive Extraktion, lonenaus- tauschverfahren oder Kristallisation durchgeführt werden. Bevorzugt ist zunächst eine grobe Trennung durch eine Mittel - druckchromatographie (MPLC) sowie eine anschließende Feintren- nung durch eine Reversed-Phase-Hochleistungs- £lüssigkeitschromatographie (RP-HPLC) . In addition to the mentioned chemical digestion methods, the biomass may also be mechanically such as e.g. be pretreated by high-pressure homogenization or ultrasound. The purification of the compounds can be carried out by chromatographic methods known to those skilled in the art, selective extraction, ion exchange or crystallization. Preference is given first to a coarse separation by means of medium pressure chromatography (MPLC) and subsequent fine separation by reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC).
Überraschenderweise wurde gefunden, dass die Verbindungen sehr gute konservierende Eigenschaften insbesondere auch gegenüber klassischen Getränkeverderbern wie Alicyclobacillus acidoter- restris , Gluconacetobacter liquefaciens , Lactobacillus planta¬ ren, Weissella confusa, Brettano yces naardenensis, Aspergillus brasiliensis , Penicillium expansum und Zygosaccharo yces rouxii besitzen und nicht die sensorischen Nachteile anderer natürlicher Konservierungsmittel aufzuweisen. Surprisingly, it was found that the compounds very good preservative properties in particular over classic Getränkeverderbern as Alicyclobacillus acidoter- restris, Gluconacetobacter liquefaciens, Lactobacillus planta ¬ ren, white Ella confusa, Brettano yces naardenensis, Aspergillus brasiliensis, Penicillium expansum and Zygosaccharo yces rouxii and do not have the sensory disadvantages of other natural preservatives.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung eines Glykolipids gemäß Formel (I) bis (XXV) oder eines ihrer Salze als Konservierungsmittel in Getränken, wobei die bereits genannte Bevorzugung der verschiedenen Glykolipide und Mengen auch hier gilt. The invention also relates to the use of a glycolipid according to formula (I) to (XXV) or one of its salts as preservative in beverages, the above-mentioned preference of the different glycolipids and amounts also apply here.
Besonders bevorzugt ist daher die Verwendung der Glykolipide der Formeln (II) bis (XXV) oder eines ihrer Salze als Konservierungsmittel in Getränken. Therefore, the use of the glycolipids of the formulas (II) to (XXV) or one of their salts as preservatives in beverages is particularly preferred.
Ganz besonders bevorzugt ist die Verwendung der Glykolipide der Formeln (III) bis (XXV) oder eines ihrer Salze als Konservie- rungsmittel in Getränken, ganz besonders bevorzugt in Säften, Nektaren, Erfrischungsgetränken, milchhaltigen Produkten, molkehaltigen Getränken und Joghurtgetränken. Very particular preference is given to the use of the glycolipids of the formulas (III) to (XXV) or one of their salts as preservatives in beverages, very particularly preferably in juices, nectars, soft drinks, milk-containing products, whey-containing drinks and yoghurt drinks.
Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Er- findung. The following examples serve to further explain the invention.
Beispiel 1 : Stamm!solierung Example 1: strain!
Der U. maydis-Stamm ACD 04507fxxx000001 wurde im September 2010 aus Brandsporen eines befallenen Maiskolbens isoliert. Die Pro- be stammt aus dem Bundesland Brandenburg in Deutschland. Die The U. maydis strain ACD 04507fxxx000001 was isolated from spores of an affected corncob in September 2010. The sample comes from the federal state of Brandenburg in Germany. The
Haltung des Stammes erfolgte durch Einfrieren einer Suspension in einer Glycerol-haltigen Einfrierlösung bei -80°C. The strain was maintained by freezing a suspension in a glycerol-containing freezing solution at -80 ° C.
Der Stamm ACD 04507fxxx000001 wurde am 02.09.2011 bei der DSMZ (Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstr. 7 B, D-38124 Braunschweig) unter der Nummer DSM 25129 gemäß Budapester Vertrag von der Firma Analyticon Discovery GmbH (Hermannswerder Haus 17, 14473 Potsdam, Deutschland) hinterlegt. Beispiel 2: Kultivierung The strain ACD 04507fxxx000001 was on September 2, 2011 at the DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH, Inhoffenstr 7 B, D-38124 Braunschweig) under the number DSM 25129 according to the Budapest Treaty by the company Analyticon Discovery GmbH (Hermannswerder house 17, 14473 Potsdam, Germany). Example 2: Cultivation
ACD 04507fxxx000001 wurde auf einem MA-Agarmedium (30 g/L Malzextrakt, 15 g/L Agar agar, pH = 7,0) bei 24 - 25°C revitali- siert. Zur Vorkultur wurden spezielle 500 mL Erlenmeyer-Kolben (500 mL Erlenmeyer-Kolben mit zwei gegenüberliegenden Einstichen; die Einstiche sind etwa 2,5 cm lang, zwischen 2 und 3 cm über dem Boden des Kolbens und in einem Winkel von 30 °C zur Horizontalen angeordnet; Die Kolben werden mit Polyurethan- Schaumstopfen von 50 mm Länge und 40 mm Durchmesser steril ver- schlössen) mit jeweils 100 mL MAT-Medium (30 g/L Malzextrakt, 1 g/L Agar agar, 0,2 Volumenprozent Tween 85, pH = 7,0) durch drei bis vier bewachsene Agarstücke von 11 Tage alten Agarplat- ten beimpft.  ACD 04507fxxx000001 was revitalized on an MA agar medium (30 g / L malt extract, 15 g / L agar agar, pH = 7.0) at 24-25 ° C. For preculture, special 500 mL Erlenmeyer flasks (500 mL Erlenmeyer flasks with two opposing punctures are approximately 2.5 cm long, between 2 and 3 cm above the bottom of the flask and at an angle of 30 ° C to the horizontal The flasks are sterile-closed with polyurethane foam stoppers of 50 mm length and 40 mm diameter) with 100 ml MAT medium each (30 g / l malt extract, 1 g / l agar agar, 0.2% by volume Tween 85, pH = 7.0) were inoculated through three to four covered agar pieces of 11 day old agar plates.
Die Vorkulturkolben wurden auf einem Orbitalschüttler mit 50 mm Schüttelradius bei einer Schüttelgeschwindigkeit von 200 rpm und 24 - 25 °C zwei Tage inkubiert.  The preculture flasks were incubated on an orbital shaker with a 50 mm shaking radius at a shaking speed of 200 rpm and 24-25 ° C. for two days.
Die Hauptkultur erfolgte in ebensolchen Erlenmeyer-Kolben mit jeweils 100 mL GLOl-Medium (50 g/L Glucose, 1,7 g/L Yeast Nit- rogen Base, pH 6,5; die Glucose- und Yeast Nitrogen Base- Lösungen wurden getrennt autoklaviert) . Beimpft wurden die Kolben mit jeweils 10 mL der Vorkultur.  The main culture was carried out in just such Erlenmeyer flasks with 100 mL GLO1 medium (50 g / L glucose, 1.7 g / L Yeast Nitrogen base, pH 6.5, the glucose and Yeast Nitrogen Base solutions were separated autoclaved). The flasks were inoculated with 10 mL each of the preculture.
Die beimpften Kolben wurden auf einem Orbitalschüttler mit 50 mm Schüttelradius bei einer Schüttelgeschwindigkeit von 200 rpm und 24 - 25 °C fünf Tage inkubiert.  The inoculated flasks were incubated on an orbital shaker with a 50 mm shaking radius at a shaking speed of 200 rpm and 24-25 ° C for five days.
Beispiel 3: Ernte und Extraktberei ung Example 3: Harvest and Extraction Preparation
126 Kolben der Hauptkultur gem. Beispiel 2 wurden in 1 L- Zentrifugenbecher geerntet und in einer Heraeus Sepatech Zentrifuge bei 5300 g für 20 min zentrifugiert . Das so gewonnene Sediment wurde eingefroren und lyophilisiert. Die Extraktion erfolgte mit Methanol und wurde durch 15 min Behandlung im Ultraschallbad und 15 min schütteln unterstützt. Nach einer Filt- ration wurde das Sediment nochmals auf gleiche Weise mit Methanol extrahiert . 126 pistons of the main culture acc. Example 2 were harvested in 1 L centrifuge beakers and centrifuged in a Heraeus Sepatech centrifuge at 5300 g for 20 min. The sediment thus obtained was frozen and lyophilized. The extraction was carried out with methanol and was supported by 15 min treatment in an ultrasonic bath and shaking for 15 min. After a filter ration, the sediment was again extracted in the same way with methanol.
Durch die zweimalige Extraktion wurden 3300 mL einer Lösung erhalten, die 83,7 g Feststoffe enthielt. Der Extrakt wurde nach Zugabe von 168 g Celite getrocknet.  The extraction twice gave 3300 mL of a solution containing 83.7 g of solids. The extract was dried after addition of 168 g of Celite.
Beispiel 4: Isolierung Example 4: Isolation
Die Isolierung der enthaltenen Verbindungen erfolgte durch ein zweistufiges Verfahren.  The isolation of the compounds contained was carried out by a two-step process.
1. Stufe : Vortrennung mittels PLC 1st stage: pre-separation via PLC
Der auf Celite aufgezogene Extrakt wurde durch Mitteldruckchromatographie (MPLC) an RP-18 (200 x 50 mm) mit einem Gradient (Methanol-Wasser) von 57 - 90 % Methanol bei einer Flussrate von 30 mL/min aufgetrennt (siehe Tabelle 1} .  The extract grown on Celite was fractionated by medium pressure chromatography (MPLC) on RP-18 (200 x 50 mm) with a gradient (methanol-water) of 57-90% methanol at a flow rate of 30 mL / min (see Table 1).
Tabelle 1: Relevante Fraktionen der MPLC-Trennung Table 1: Relevant fractions of MPLC separation
FrakVolumen Ausbeute Bewertung  Frak volume yield rating
tion [mL] [g]  tion [mL] [g]
A 1000 < 24,23  A 1000 <24.23
B 750 1,21  B 750 1.21
C 750 präparative HPLC, als C~  C 750 preparative HPLC, as C ~
1,28 1237-C  1.28 1237-C
D 750 präparative HPLC, als C- D 750 preparative HPLC, as C
8 , 47 1237-D 8, 47 1237-D
EI 750 präparative HPLC, als C- EI 750 preparative HPLC, as C
17, 08 1237-E und C-1237-R 17, 08 1237-E and C-1237-R
F 750 15, 98  F 750 15, 98
G 750 9, 73  G 750 9, 73
I 750 5, 04  I 750 5, 04
K 600 0 , 67 2. Stufe: Feintrennung mittels präparativer RP-HPLCK 600 0, 67 2nd stage: Fine separation by preparative RP-HPLC
Zur Isolierung der enthaltenen Verbindungen wurden jeweils max 3,50 g der PLC-Fraktionen, die bei der Bestimmung der minimalen inhibitorischen Konzentration (MIC) wachstumshemmende Wirkung gegen die Testkeime zeigten, über präparative HPLC mittel der in den Tabellen 2 bis 4 beschriebenen Methoden getrennt. To isolate the compounds contained, in each case a maximum of 3.50 g of the PLC fractions which showed growth-inhibiting activity against the test microbes in determining the minimum inhibitory concentration (MIC) was separated by preparative HPLC by means of the methods described in Tables 2 to 4.
Tabelle 2: Trennungsbedingungen der Fraktion C-1237-C Table 2: Separation conditions of fraction C-1237-C
Stationäre Phase LiChrospher Select B, 10 pm, 250 x  Stationary phase LiChrospher Select B, 10 pm, 250 x
50 mm  50 mm
Flußrate 80 mL/min  Flow rate 80 mL / min
Detektion Evaporative Light Scattering Detector  Detection Evaporative Light Scattering Detector
{ ELSD) , UV-Detektor  {ELSD), UV detector
Laufmittel A Bidest. Wasser + 5 ni Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisensäure (pH 3)  Eluent A bidest. Water + 5 ni ammonium formate and 0.1% formic acid (pH 3)
Laufmittel B Acetonitril/ ethanol - 1:1 + 5 mM Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisensäure (pH 3)  Mobile phase B acetonitrile / ethanol - 1: 1 + 5 mM ammonium formate and 0.1% formic acid (pH 3)
Gradient von 32 % auf 66 % B in 57,7 min  Gradient from 32% to 66% B in 57.7 min
Tabelle 3: Trennungsbedingungen der Fraktion C-1237-D Table 3: Separation conditions of fraction C-1237-D
Stationäre Phase LiChrospher Select B, 10 pm, 250 x  Stationary phase LiChrospher Select B, 10 pm, 250 x
50 mm  50 mm
Flußrate SO mL/min  Flow rate SO mL / min
Detektion ELSD , UV  Detection ELSD, UV
Laufmittel A Bidest. Wasser + 5 mM Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisensäure (pH 3)  Eluent A bidest. Water + 5 mM ammonium formate and 0.1% formic acid (pH 3)
Laufmittel B Acetonitril/Methanol = 1:1 + 5 mM Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisensäure {pH 3)  Eluent B acetonitrile / methanol = 1: 1 + 5 mM ammonium formate and 0.1% formic acid {pH 3)
Gradient von 52 % auf 74 % B in 57,7 min Tabelle 4: Trennungsbedingungen der Fraktion C-1237-E und - Gradient from 52% to 74% B in 57.7 min Table 4: Separation conditions of fraction C-1237-E and
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Die isolierten Feinfraktionen wurden per HPLC (Einzelheiten siehe im Folgenden als „Methode ltt tabellarisch dargestellt) , LC/MS (Einzelheiten siehe im Folgenden als „Methode 2" tabellarisch dargestellt) und NMR-Spektroskopie charakterisiert und die analytischen Daten zur Klärung der Strukturen genutzt. The isolated fine fractions were determined by HPLC (see details below as "(shown method l tt tabulated), LC / MS Refer to as" Method 2 "in table) and NMR spectroscopy and used the analytical data to clarify the structures ,
Methode 1: Analytisches HPLC-ELSD-VerfahrenMethod 1: Analytical HPLC ELSD Method
HPLC System Merck Hitachi HPLC system Merck Hitachi
Daten System HPLC-Manager D-7000 HSM  Data System HPLC-Manager D-7000 HSM
Stationäre Merck Superspher 60 RP-select B 125 x 4 Phase mm , 4 um  Stationary Merck Superspher 60 RP-select B 125 x 4 mm, 4 μm
Flußrate 1 mL/min  Flow rate 1 mL / min
Detektion ELSD (Sedex 75)  Detection ELSD (Sedex 75)
Injektions- 10 μΐ.  Injection 10 μΐ.
volumen volume
Mobile PhaA: 5 mM Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisen- se : säure  Mobile PhaA: 5 mM ammonium formate and 0.1% formic acid
B: Acetonitril/Methanol = 1:1, Zusatz von 5 mM Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisensäure (pH 3)  B: acetonitrile / methanol = 1: 1, addition of 5 mM ammonium formate and 0.1% formic acid (pH 3)
Gradient Zeit [min] % A % B  Gradient Time [min]% A% B
0 85 15  0 85 15
15 0 100  15 0 100
18 0 100 18 0 100
Methode 2: Analytisches LC/MS-Verfahren Method 2: Analytical LC / MS Method
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In der folgenden Tabelle 5 sind die Ergebnisse zu Feintrennungen zusammengestellt. The following table 5 summarizes the results on fine separations.
Tabelle 5: Mengen und Reinheit der Chargen zu den relevanten Strukturen aus C-1237 Table 5: Quantities and purity of the batches to the relevant structures from C-1237
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Beispiel 5 : Bestimmung der antimikrobiellen Aktivität
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Example 5: Determination of antimicrobial activity
Die Bestimmung der antimikrobiellen Aktivität erfolgte im  The determination of the antimicrobial activity took place in the
Broth-Dilution-Test und wurde in Mikrotiterplatten aus Polystyrol mit U-Boden durchgeführt. Dieses Verfahren wurde auch zur Bestimmung der minimalen inhibitorischen Konzentration (MIC) eingesetzt. Die verwendeten Mikroorganismen sind in Tabelle 6 aufgelistet . Tabelle 6: Verwendete Mikroorganismen Broth-dilution test and was performed in microtiter plates of polystyrene with U-bottom. This method was also used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC). The microorganisms used are listed in Table 6. Table 6: Microorganisms used
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Zur Inokulumproduktion wurden Sporen von DSM 1988, DSM 2498 und DSM 62841 bei ~80°C eingefroren und direkt verwendet; der Titer der gefrorenen Suspensionen wurde durch ausplattieren auf Agar- platten bestimmt. For inoculum production spores from DSM 1988, DSM 2498 and DSM 62841 were frozen at ~ 80 ° C and used directly; the titer of the frozen suspensions was determined by plating on agar plates.
Bei den anderen Stämmen wurde das Inokulum aus Einzelkolonien frisch bewachsener Agarplatten, typischerweise Übernachtkultu- ren, hergestellt. Der Titer der Inokulumsuspension wird näherungsweise durch Messung der Absorption bei 625 nm bestimmt. Entspricht diese der Absorption von McFarland-Standard 0.5, wird ein Titer von 108 angenommen. Der Test wird in Polystyrol- 96 -well-Platten mit U-Boden durchgeführt. Testsubstanzen werden typischerweise in DMSO, DMSO- Wasser oder Wasser gelöst . Tabelle 7: In the other strains, the inoculum was prepared from single colonies of freshly grown agar plates, typically overnight cultures. The titer of the inoculum suspension is determined approximately by measuring the absorbance at 625 nm. If this corresponds to the absorption of McFarland Standard 0.5, a titer of 10 8 is assumed. The test is carried out in U-bottom polystyrene 96well plates. Test substances are typically dissolved in DMSO, DMSO water or water. Table 7:
Zusammenfassung und Übersicht hinsichtlich der Testbedingungen  Summary and overview regarding the test conditions
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Der rechnerische Titer der Stämme nach Inokulation ist in Ta~ belle 7 wiedergegeben. Anaerob wachsende Stämme werden unter Einsatz des BD GasPak EZ Anaerobe System {BD, Tullastr. 8-12, 69126 Heidelberg, Deutschland) inkubiert. Durch die BreathEasy- Polie (Diversified Biotech, 65 Commerce Way, Dedham, MA 02026, USA) wird die Kontamination von benachbarten Wells mit Pilz- Spören verhindert. The calculated titre of the strains after inoculation is reproduced in Table 7. Anaerobically growing strains are grown using the BD GasPak EZ anaerobic system {BD, Tullastr. 8-12, 69126 Heidelberg, Germany). The BreathEasy Pole (Diversified Biotech, 65 Commerce Way, Dedham, MA 02026, USA) prevents contamination of adjacent wells with fungal spores.
Die Auswertung des Wachstums erfolgt mittels Binokular und anderer optischer Hilfsmittel. The growth is evaluated by means of a binocular and other optical aids.
Nähr- und Testmedien: Nutrition and test media:
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SL6: SL6:
Bestandteile [g/L] Ingredients [g / L]
1 ZnS04 x 7 H20 0,11 ZnS0 4 x 7 H 2 0 0.1
2 MnCl2 x 4 H20 0, 032 MnCl 2 x 4 H 2 0 0, 03
3 H3BO3 0,33 H 3 BO 3 0.3
4 CoCl2 x 6 H20 0,2 4 CoCl 2 x 6 H 2 O 0.2
CuCl2 x 2 H20 0, 01CuCl 2 × 2 H 2 0 0, 01
6 NiCl2 x 6 H20 0, 026 NiCl 2 × 6 H 2 0 0, 02
7 Na2 o04 x 2 H20 0, 037 Na 2 o0 4 x 2 H 2 0 0, 03
8 Demineralisiertes 1000 mL Wasser Anleitung zur Herstellung von AAMA :
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8 Demineralized 1000 mL water Instructions for the production of AAMA:
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PDA: PDA:
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SA:
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SA:
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TM186: TM186:
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WAC08:
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WAC08:
Bestandteil Lieferant [g L] Component Supplier [g L]
1 Sabouraud Dextrose Di fco 12, 0 Broth 238230 1 Sabouraud Dextrose Di fco 12, 0 Broth 238230
2 Glucose Roth HNO6 7,0 2 Glucose Roth HNO6 7.0
3 Fructose Diasan 15, 03 Fructose Diasan 15, 0
4 Saccharose Handels15, 0 ware 4 sucrose commercial 15, 0 commodity
Demineralisiertes 1000 mL Wasser  Demineralized 1000 mL of water
6 pH-Wert pH 4,5 WAC1 : 6 pH-value pH 4.5 WAC1:
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Anleitung zur Herstellung von WAC14 : Instructions for making WAC14:
Lösung A und Lösung B getrennt autoklavieren.  Autoclave Solution A and Solution B separately.
1)  1)
2) Nach dem Autoklavieren Lösung B in die Gefäße mit Lösung A zugeben und homogenisieren.  2) After autoclaving, add solution B to the tubes containing solution A and homogenize.
3} Medium in sterile Gefäße dispensieren. Beispiel 6: Antimikrobielle Aktivität der Fraktionen C-1237-C, C-1237-D und C-1237-E 3} Dispense medium into sterile containers. Example 6: Antimicrobial activity of fractions C-1237-C, C-1237-D and C-1237-E
Verschiedene Mikroorganismen-Stämme wurden, wie in Beispiel 5 ausgeführt, unter Anwesenheit verschiedener Konzentrationen der Fraktionen C-1237-C, 01237-D und C-1237-E inkubiert. In Tabel- le 8 sind die MIC-Werte der Fraktionen C-1237-C, C-1237-D und C-1237-E und in Tabelle 9 die MIC-Werte der isolierten Glykoli- pide (II) bis (XI) für die einzelnen Mikroorganismen aufgelis- tet.  Various microorganism strains were incubated as set forth in Example 5 in the presence of various concentrations of fractions C-1237-C, 01237-D and C-1237-E. In Table 8, the MIC values of fractions C-1237-C, C-1237-D and C-1237-E and in Table 9 the MIC values of the isolated glycolipids (II) to (XI) for the individual microorganisms are listed.
Tabelle 8: MIC-Werte der Fraktionen C-1237-C, C-1237-D und C- 1237-E Table 8: MIC values of fractions C-1237-C, C-1237-D and C-1237-E
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Aa = Alicyclobacillus acidoterrestris DSM  Aa = Alicyclobacillus acidoterrestris DSM
Gl = Gluconacetobacter liquefaciens DSM 5603  Gl = Gluconacetobacter liquefaciens DSM 5603
Lp = Lactobacillus plantarum DSM 20174  Lp = Lactobacillus plantarum DSM 20174
Pe = Penicillium expansum DSM 62841  Pe = Penicillium expansum DSM 62841
Zr = Zygosaccharomyces rouxii DSM 7525 Zr = Zygosaccharomyces rouxii DSM 7525
Tabelle 9: MIC-Werte der Glykolipide (III) bis (XXV) in pg/raL Table 9: MIC values of glycolipids (III) to (XXV) in pg / raL
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Aa = Alicyclobacillus acidoterrestris DSM 2498  Aa = Alicyclobacillus acidoterrestris DSM 2498
Gl = Giuconacetobacter liquefaciens DSM 5603 Gl = Giuconacetobacter liquefaciens DSM 5603
Lactobacillus plantarum DSM 20174  Lactobacillus plantarum DSM 20174
Penicillium expansum DSM 62841  Penicillium expansum DSM 62841
Zygosaccharomyces rouxii DSM 7525 Beispiel 7: Konservierende Wirkung im Konservierungsbelastungs- test Zygosaccharomyces rouxii DSM 7525 Example 7: Preservative action in the preservation stress test
Verschiedene Mikroorganismen-Stämme wurden, wie in Beispiel 5 ausgeführt, unter Anwesenheit verschiedener Konzentrationen der Glykolipide (XIII), (V), (VIII), (IX), (XI), (XXII) sowie dem Glykolipid-Gemisc AW-048 inkubiert. Im Unterschied zu Beispiel 5 wurden die Mikroorganismen in Getrankematrices inkubiert. In Tabelle 10 sind die verwendeten Getränke aufgelistet. Durch ausplattieren der inokulierten Getränke nach 1 Tag, 1 Woche, 2 Wochen und 4 Wochen auf geeigneten Agarmedien wurde die konservierende Wirkung überprüft. Als konservierend wurde eine Substanz angesehen, wenn es über 4 Wochen zu keiner Zunahme des Zelltiters kam. Die mycelbildenden Pilze wurden zusätzlich mittels Binokular auf Hyphenwachstum untersucht.  Various strains of microorganisms were incubated as set forth in Example 5 in the presence of various concentrations of the glycolipids (XIII), (V), (VIII), (IX), (XI), (XXII), and the glycolipid mixture AW-048 , In contrast to Example 5, the microorganisms were incubated in Getrankematrices. Table 10 lists the drinks used. By plating the inoculated drinks after 1 day, 1 week, 2 weeks and 4 weeks on suitable agar media, the preservative effect was checked. A substance was considered conservative if there was no increase in cell titer for 4 weeks. The mycel-forming fungi were additionally examined by binocular for hyphae growth.
Tabelle 11 gibt einen Überblick über die konservierende Wirkung der Glykolipide und Glykolipid-Gemische . Table 11 gives an overview of the preservative effects of the glycolipids and glycolipid mixtures.
Tabelle 10: Im Konservierungsbelastungstest eingesesetzte Ge~ tränkematrices Table 10: Soil matrices used in the preservation stress test
Getränk Zuckergehalt Besondere Zusätze  Drink sugar content Special additives
Apfelschorle 60 g/L Zucker Kohlensäure  Apple spritzer 60 g / L sugar carbonic acid
(Adelholzener)  (Adelholzener)
Nestea® 69 g/L Zucker Citronensäure, Na-Nestea ® 69 g / L sugar citric acid, sodium
Pfirsich Geschmack Citrat, Teeextrakt Peach flavor citrate, tea extract
Orangen-Nektar 83 g/L Zucker Ascorbinsäure  Orange nectar 83 g / L sugar ascorbic acid
(Frucht Oase)  (Fruit oasis)
Bio Trinkmolke 117 g/L KohMit Süßmolke, Zitronen- Orange - aracuj a lenhydrate saftkonz., Pektin, Jo(Andechser) hannisbrotkernmehl  Organic drinking whey 117 g / L KohMit sweet whey, lemon orange - aracuj a lenhydrate juice concentrate, pectin, Jo (Andechser) hannisbrotkernmehl
Vitaperle energy 111 g/L Zucker Taurin, Koffein, B- Vitamine, Kohlensäure Vitaperle energy 111 g / L sugar taurine, caffeine, B vitamins, carbon dioxide
Orangensaft (Sonniger) , unverdünnter Orange juice (Sunny), undiluted
zentrifugiert , überSaft: centrifuged, over juice:
stand 1:1 mit Wasser 93 g/L Zucker stood 1: 1 with water 93 g / L of sugar
verdünnt Tabelle 11: Ergebnisse im Konservierungsbelastungstest dilute Table 11: Results in the preservation stress test
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Legende : Legend :
Stämme : Tribes:
Aa = Älicyclobacillus acidoterrestris DSM 2498  Aa = Älicyclobacillus acidoterrestris DSM 2498
Gl = Gluconacetobacter liguefaciens DSM 5603 Gl = Gluconacetobacter liguefaciens DSM 5603
Lp = Lactobacillus plantarum DSM 20174 Lp = Lactobacillus plantarum DSM 20174
Pe = Penicillium expansum DSM 62841 Pe = Penicillium expansum DSM 62841
Zr = Zygosaccharomyces rouxii DSM 7525 Zr = Zygosaccharomyces rouxii DSM 7525
Bn - Brettanomyces naardenensis CBS 6115  Bn - Brettanomyces naardenensis CBS 6115
Ab = Aspergillus brasiliensis DSM 1988 From = Aspergillus brasiliensis DSM 1988
Wc = Weissella confusa DSM 20194 Wc = Weissella confusa DSM 20194
Matrices : Matrices:
AP = Apfelschorle AP = apple spritzer
02 = Orangensaft 1 : 1 verdünnt  02 = orange juice diluted 1: 1
ON = Orangennektar  ON = orange nectar
TM = Trinkmolke  TM = drinking whey
ET = Nestea* Eistee VE = Vitaperle Energy (Details siehe Tabelle 10) ET = Nestea * Ice tea VE = Vitaperle Energy (see Table 10 for details)
Zahlenwerte : Numerical values:
25, 100, 300 ... = konservierende Wirkung bei einer Konzentration von 25, 100, 300 ... g/mL; >600, >1800 keine konservierende Wir- kung bei der maximalen eingesetzten Konzentration von 600 g/mL bzw. 1800 g/mL  25, 100, 300 ... = preserving effect at a concentration of 25, 100, 300 ... g / mL; > 600,> 1800 no preservative effect at the maximum used concentration of 600 g / mL or 1800 g / mL
Beispiel 8 : Stammisolierung Example 8: Stock Isolation
Der Pseudozyma sp. -Stamm ACD 01658fxxxOOOOll wurde im Dezember 2002 aus einer Bodenprobe isoliert. Die Probe stammt aus dem Rift Valley in Kenia. Die Haltung des Stammes erfolgte durch Einfrieren einer Suspension in einer Glycerol -haltigen Einfrierlösung bei -80°C.  The pseudozyma sp. Strain ACD 01658fxxxOOOOll was isolated from a soil sample in December 2002. The sample comes from the Rift Valley in Kenya. The strain was maintained by freezing a suspension in a glycerol-containing freezing solution at -80 ° C.
Der Stamm ACD 01658fxxxOOOOll wurde am 20.06.2012 bei der DSMZ (Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstr. 7 B, D-38124 Braunschweig) unter der Nummer DSM 26076 gemäß Budapester Vertrag von der Firma Analyticon Discovery GmbH (Hermannswerder Haus 17, 14473 Potsdam, Deutschland) hinterlegt.  The strain ACD 01658fxxxOOOOll was on June 20, 2012 at the DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH, Inhoffenstr 7 B, D-38124 Braunschweig) under the number DSM 26076 according to Budapest Treaty by the company Analyticon Discovery GmbH (Hermannswerder house 17, 14473 Potsdam, Germany).
Beispiel 9: Kultivierung Example 9: Cultivation
ACD 01658fxxx000011 wurde auf einem MA-Agarmedium (30 g/L Malzextrakt, 15 g/L Agar agar, pH = 7,0) bei 30°C revitalisiert . Von der revitalisierten Kultur wurde die Vorkultur mit drei bis vier bewachsenen Agarstücken beimpft. Die Vorkultur wurde in einer 500 mL-Laborflasche mit 125 mL Malzextrakt-Weichagar (30 g/L Malzextrakt, 2,75 g/L Agar agar, pH = 7,0) und Raschigrin- gen von etwa 50 mL Schüttvolumen statisch bei 30°C inkubiert und alle 2 bis 3 Tage durch Schütteln homogenisiert.  ACD 01658fxxx000011 was revitalized on an MA agar medium (30 g / L malt extract, 15 g / L agar agar, pH = 7.0) at 30 ° C. From the revitalized culture, the preculture was inoculated with three to four overgrown agar pieces. The preculture was static in a 500 mL laboratory flask with 125 mL malt extract soft agar (30 g / L malt extract, 2.75 g / L agar agar, pH = 7.0) and Raschigringen of about 50 mL bulk volume at 30 ° C incubated and homogenized by shaking every 2 to 3 days.
Die Hauptkultur erfolgte in speziellen 500 mL Erlenmeyer-Kolben (500 mL Erlenmeyer-Kolben mit zwei gegenüberliegenden Einstichen; die Einstiche sind etwa 2,5 cm lang, zwischen 2 und 3 cm über dem Boden des Kolbens und in einem Winkel von 30 °C zur Horizontalen angeordnet; die Kolben werden mit Polyurethan- Schaumstopfen von 50 mm Länge und 40 mm Durchmesser steril verschlossen) mit jeweils 200 mL SGCH1-Medium (10 g/L L- Glutaminsäure Mononatriumsalz Monohydrat, 30 g/L Saccharose, 0,15 g/L di-Kaliumhydrogenphosphat , 0,4 g/L Kaliumchlorid, 0,05 g/L Magnesiumsulfat Heptahydrat, 0,5 g/L Hefeextrakt, 25 mL einer Spurenelementelösung und 2,0 g/L Calciumcarbonat. Vor Zugabe des Calciumcarbonats wurde der pH-Wert mit 1 M Salzsäure auf pH = 6,5 eingestellt. Die Spurenelementelösung enthält pro Li- ter 0,01 M Schwefelsäure 1,5 g FeS04 x 7 H20, 0,9 g ZnS04 x 7 H20, 0,4 g MnS04 x H20, 0,55 g CuS04 x 5 H20, 0,6 g Co(N03)2x 6 H20, 0,25 g Borsäure und 0,2 g Na2Mo04 x 2 H20) Die Hauptkulturkolben wurden mit 2,5 mL homogenisierter Vorkultur pro Erlene- meyer-Kolben beimpft und auf einem Orbitalschüttler mit 50 mm Schüttelradius bei einer Schüttelgeschwindigkeit von 200 rpm und 24 - 25 °C sieben Tage inkubiert. The main culture was carried out in special 500 mL Erlenmeyer flasks (500 mL Erlenmeyer flasks with two opposite punctures, the punctures being about 2.5 cm long, between 2 and 3 cm above the bottom of the flask and at an angle of 30 ° C Arranged horizontally; the flasks are sterile-capped with polyurethane foam stoppers of 50 mm in length and 40 mm in diameter) with 200 ml of SGCH1 medium (10 g / l L-glutamic acid monosodium salt monohydrate, 30 g / l sucrose, 0.15 g / l dihydrochloride). Potassium hydrogen phosphate, 0.4 g / L potassium chloride, 0.05 g / L magnesium sulfate heptahydrate, 0.5 g / L yeast extract, 25 mL of a trace element solution and 2.0 g / L of calcium carbonate 1 M hydrochloric acid adjusted to pH = 6.5 The trace element solution contains 0.01 M sulfuric acid per liter of 1.5 g FeSO 4 .7H 2 O, 0.9 g ZnSO 4 .7H 2 O, 0.4 g MnS0 4 x H 2 0, 0.55 g CuS0 4 x 5 H 2 0, 0.6 g of Co (N0 3) 2 x 6 H 2 0, 0.25 g of boric acid and 0.2 g of Na 2 Mo0 4 x 2 H 2 0). The main culture flasks were inoculated with 2.5 ml of homogenized preculture per Erlenemeyer flask and incubated on an orbital shaker with a 50 mm shaking radius at a shaking speed of 200 rpm and 24-25 ° C. for seven days.
Beispiel 10: Ernte und Extraktbereitung Example 10: Harvest and extract preparation
50 Kolben der Hauptkultur gem. Beispiel 9 wurden nach Zugabe von etwa 5 Volumenprozent Diaion HP20-Adsorberharz nach 45 Minuten geschüttelt und danach in 1 L-Zentrifugenbecher geerntet und in einer Heraeus Sepatech Zentrifuge bei 5300 g für 20 min zentrifugiert . Das so gewonnene Sediment wurde zweimal mit Aceton extrahiert. Die Extraktion erfolgte mit 15 min Behandlung im Ultraschallbad und 15 min schütteln. Nach einer Filtration wurde das Sediment nochmals auf gleiche Weise mit Aceton extrahiert .  50 pistons of the main culture acc. Example 9 was shaken after addition of about 5% by volume of Diaion HP20 adsorbent resin after 45 minutes and then harvested in 1 L centrifuge beaker and centrifuged in a Heraeus Sepatech centrifuge at 5300 g for 20 min. The sediment thus obtained was extracted twice with acetone. The extraction was carried out with 15 min treatment in an ultrasonic bath and shaking for 15 min. After filtration, the sediment was again extracted in the same way with acetone.
Durch die zweimalige Extraktion wurden 2650 mL einer Lösung er- . halten, die 25,4 g Feststoffe enthielt. Der Extrakt wurde nach Zugabe von 51 g Celite getrocknet.  By extracting twice, 2650 ml of a solution were obtained. containing 25.4 g of solids. The extract was dried after addition of 51 g of Celite.
Beispiel 11 : Isolierung Die Isolierung der enthaltenen Verbindungen erfolgte durch ein zweistufiges Verfahren. Example 11: Isolation The isolation of the compounds contained was carried out by a two-step process.
1. Stufe: Vortrennung mittels MPLC 1st stage: Pre-separation by means of MPLC
Der auf Celite aufgezogene Extrakt wurde durch Mitteldruckchromatographie (MPLC) an RP-18 (200 x 50 mm) mit einem Gradient (Methanol-Wasser) von 57 - 90 % Methanol bei einer Flussrate von 30 mL/min aufgetrennt (siehe Tabelle 12) . The extract grown on celite was fractionated by medium pressure chromatography (MPLC) on RP-18 (200 x 50 mm) with a gradient (methanol-water) of 57-90% methanol at a flow rate of 30 mL / min (see Table 12).
Tabelle 12: Relevante Fraktionen der MPLC-Trennung Table 12: Relevant fractions of MPLC separation
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2. Stufe: Feintrennung mittels präparativer RP-HPLC 2nd stage: Fine separation by preparative RP-HPLC
Zur Isolierung der enthaltenen Verbindungen wurden die MPLC- Fraktionen sinnvoll vereinigt und über praparative HPLC mittels der in den Tabellen 13 bis 14 beschriebenen Methoden getrennt. Tabelle 13: Trennungsbedingungen der Fraktion H-0695-C To isolate the compounds contained, the MPLC fractions were usefully combined and separated by preparative HPLC by means of the methods described in Tables 13 to 14. Table 13: Separation conditions of fraction H-0695-C
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Die isolierten Feinfraktionen wurden per HPLC (Einzelheiten siehe im Folgenden als „Methode 3" tabellarisch dargestellt) , LC/MS (Einzelheiten siehe im Folgenden als „Methode 4" tabell risch dargestellt) und NMR- Spektroskopie charakterisiert und die analytischen Daten zur Klärung der Strukturen genutzt. Methode 3: Analytisches HPLC-ELSD-Verfahren The isolated fine fractions were characterized by HPLC (for details, see Table 3 below), LC / MS (for details, see Table 4 below) and NMR spectroscopy, and the analytical data to clarify the structures used. Method 3: Analytical HPLC ELSD Method
HPLC System Merck Hitachi  HPLC system Merck Hitachi
Daten System HPLC-Manager D-7000 HSM  Data System HPLC-Manager D-7000 HSM
Stationäre Merck Superspher 60 RP-select B 125 x 4 Phase mm, 4 pm  Stationary Merck Superspher 60 RP-select B 125 x 4 mm, 4 pm
Flußrate 1 mL/min  Flow rate 1 mL / min
Detektion ELSD (Sedex 75}  Detection ELSD (Sedex 75}
Injektions10 L  Injection10 L
volumen volume
Mobile PhaA: 5 mM Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisense : säure  Mobile PhaA: 5 mM ammonium formate and 0.1% formic acid
B: Acetonitril/Methanol = 1:1, Zusatz von 5 mM Ammoniumformiat und 0,1 % Ameisensäure (pH 3)  B: acetonitrile / methanol = 1: 1, addition of 5 mM ammonium formate and 0.1% formic acid (pH 3)
Gradient Zeit [min] % A % B  Gradient Time [min]% A% B
0 85 15  0 85 15
15 0 100  15 0 100
18 0 100 18 0 100
Methode 4: Analytisches LC/MS -Verfahren Method 4: Analytical LC / MS Method
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In der folgenden Tabelle 15 sind die Ergebnisse zu Feintrennungen zusammengestellt. Tabelle 15: Mengen und Reinheit der Chargen zu den für das Patent relevanten Strukturen aus H-0695 The following table 15 summarizes the results on fine separations. Table 15: Quantities and purity of the batches to the patent relevant structures of H-0695
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Beispiel 12: Downstream processing (Produktion des AW-048 Produktes)
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Example 12: Downstream Processing (Production of the AW-048 Product)
Das aus der Fermentation von Ustilago maydis abzentrifugierte Biomassesediment enthält Ustilaginsäuren und Ustilipide. Zur Aufreinigung der Ustilaginsäuren wurde die Extraktion mit Lö- sungsmittel, die Fällung aus wässriger Lösung und eine nachfolgende Anreicherung der Ustilaginsäuren durch Entfettung zur Abtrennung der Ustilipide durchgeführt.  The biomass sediment centrifuged from the fermentation of Ustilago maydis contains Ustilaginsäuren and Ustilipide. To purify the urstilaginic acids, the extraction with solvent, the precipitation from aqueous solution and a subsequent enrichment of the urstilaginic acids by degreasing were carried out to remove the ustilipids.
Der Extrakt wird mit 50 °C warmem Methanol versetzt, filtriert und der erhaltene Extrakt auf des Volumens reduziert. Nach Zugabe des 9- fachen Wasservolumens (auf 50 °C vorgewärmt) erfolgt die Fällung durch Abkühlung auf Raumtemperatur und Lage- rung für zwei Tage bei 4°C. Der Ustilaginsäure-haltige Niederschlag wird mittels Zentrifuge abgetrennt, mit kaltem Wasser gewaschen und nach mehrfacher Entfettung mit Methyl -tert- butylether (MTBE) getrocknet. The extract is mixed with 50 ° C warm methanol, filtered and the resulting extract reduced in volume. After addition of 9 times the volume of water (preheated to 50 ° C.) precipitation takes place by cooling to room temperature and position. for two days at 4 ° C. The urstilagic acid-containing precipitate is separated by means of a centrifuge, washed with cold water and dried after repeated degreasing with methyl tert-butyl ether (MTBE).
Beispiel 13: Analytische Daten zum AW-048 Produkt Example 13: Analytical data for AW-048 product
Die Gehaltsbestimmung nach HPLC-ELSD-Verfahren ergibt > 99% U- stilaginsäuren in Summe. Fig. 1 zeigt das HPLC-ELSD-Chromatogramm einer angereicherten Ustilaginsäurefraktion (Glykolipid-Gemisch AW-048 -Produkt) . The content determination by HPLC-ELSD method gives> 99% U-stilaginic acids in total. 1 shows the HPLC ELSD chromatogram of an enriched urstilagic acid fraction (glycolipid mixture AW-048 product).
Auswertung über Peakflächen Evaluation over peak areas
Rt Rel.Are Substanz- Nr . [min] Area a MW Fragmente Kommentar klasse Rt Rel.Are substance no. [min] Area a MW Fragments Comment class
277, 489, üstilagin- 277, 489, üstilagin-
1 20, 22 5,42 0,47 % 782 507 säuren 1 20, 22 5.42 0.47% 782 507 acids
27 , 305, Ustilagin¬ 27, 305, Ustilagin¬
2 21,75 77 , 88 67,86 % 784 509 NP-018217 sauren 2 21.75 77, 88 67.86% 784 509 NP-018217 acidic
Ustilagin¬ Ustilagin¬
3 22, 31 1,08 0,10 % 810 305, 507 sauren 3 22, 31 1.08 0.10% 810 305, 507 acidic
Ustilagin¬ Ustilagin¬
4 23, 11 12,47 1,09 % 754 277 , 479 sauren 4 23, 11 12.47 1.09% 754 277, 479 acidic
Ustilagin- Ustilagin-
5 23, 77 334, 11 29,26 % 812 305, 509 NP-018256 säuren 5 23, 77 334, 11 29.26% 812 305, 509 NP-018256 acids
Ustilagin- Ustilagin-
6 24,20 4 , 94 0,43 % 768 277, 493 NP-01825S säuren 6 24.20 4, 94 0.43% 768 277, 493 NP-01825S acids
Ustilagin¬ Ustilagin¬
7 25, 01 3,30 0,29 % 782 305, 479 sauren 7 25, 01 3,30 0,29% 782 305, 479 acidic
z.B. 606145- Ustilipic! e.g. 606145 Ustilipic!
8 31,13 0, 97 0,08 % 662 541 53-3 El? 8 31.13 0, 97 0.08% 662 541 53-3 El?
9 40, 70 4, 76 0,42 %  9 40, 70 4, 76 0.42%
UstilaginSumme 99,50 % sauren  Ustilagin Sum 99.50% acid
Zur Identifizierung der Nebenkomponenten der Ustilaginsäure- fraktion wurde ein LCMS vermessen. Alle Peaks, die im LCMS-ELSD der angereicherten Ustilaginsäurefraktion mit einer relativen Fläche von > 0.1 % detektiert werden können, lassen sich anhand der Molmassen bzw. charakteristischer Fragmente im Massenspekt- rum identifizieren und der Substanzklasse der Ustilaginsauren zuordne . To identify the minor components of the stilthynic acid fraction, an LCMS was measured. All peaks that can be detected in the LCMS-ELSD of the enriched urstilaginic acid fraction with a relative area of> 0.1% can be identified by molecular masses or characteristic fragments in the mass spectra and assigned to the substance class of the Ustilaginsauren.
Zur Quantifizierung wurde das ELSD- Chromatogramm herangezogen. Bei den detektierten Peaks handelt es sich bis auf 2 Peaks (Re- tentionszeit bei 31,13 min und 40,70 min} um Ustilaginsauren mit einem Gesamtanteil > 99 %. Beispiel 14: Isolierung aus dem Fällungsprodukt For quantification, the ELSD chromatogram was used. The peaks detected are up to 2 peaks (retention time at 31.13 min and 40.70 min) of Ustilaginsauren with a total> 99%. Example 14: Isolation from the precipitated product
Die Isolierung der in jeweils 2,0 g Pällungsprodukt enthaltenen Verbindungen erfolgte durch Feintrennung mittels präparativer P-HPLC wie in der Tabelle 16 beschrieben.  The isolation of the compounds contained in each 2.0 g of precipitation product was carried out by fine separation by preparative P-HPLC as described in Table 16.
Tabelle 16: Trennungsbedingungen der Fraktion C-1391-N und C- 1392-N Table 16: Separation conditions of fraction C-1391-N and C-1392-N
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000044_0001
Die isolierten Feinf aktionen wurden per HPLC (Einzelheiten siehe oben unter „Methode 3" tabellarisch dargestellt), LC/MS (Einzelheiten siehe oben unter „Methode 4" tabellarisch dargestellt) und NMR-Spektroskopie charakterisiert und die analytischen Daten 2ur Klärung der Strukturen genutzt. In der folgenden Tabelle 17 sind die Ergebnisse zu den Feintrennungen zusammengestellt. Tabelle 17: Mengen und Reinheit der Chargen zu den Strukturen aus C-1391-N und C-1392-N The isolated fines were characterized by HPLC (for details see above in "Method 3" tabulated), LC / MS (details tabulated above under "Method 4") and NMR spectroscopy and the analytical data used to clarify the structures. The following table 17 summarizes the results for the fine separations. Table 17: Quantities and purity of the batches to the structures of C-1391-N and C-1392-N
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000045_0001
Beispiel 15: Olfaktorische Beurteilung des Glykolipid-haltigen Produktes AW-048 Example 15: Olfactory assessment of the glycolipid-containing product AW-048
Die direkte olfaktorische Beurteilung des pulverförmigen AW- 048 -Produktes von vier Testpersonen ergab, dass das AW-048- Produkt zwar leicht charakteristisch, jedoch nicht unangenehm riecht .  The direct olfactory evaluation of the powdered AW-048 product from four subjects revealed that the AW-048 product smells slightly distinctive but does not smell unpleasant.
Weiterhin wurde das Gylkolipid-haltige Produkt AW-048 in Konzentrationen von 50 ppm und 100 ppm in Leitungswasser (pH = 6) gelöst. Dazu wurden zunächst 5 mg AW-048 bzw. 10 mg AW-048 ein- gewogen und jeweils in 125 L Ethanol (absolut) in 1,5 mL Eppendorf Reaktionsgefäßen vorgelöst. Diese Lösungen wurden anschließend in jeweils 100 mL Leitungswasser (pH = 6) pipettiert. Die anschließende olfaktorische Beurteilung der zwei Lösungen von vier Testpersonen ergab, dass die Lösungen nicht von reinem Leitungswasser (pH = 6) unterschieden werden konnten.  Furthermore, the glycolipid-containing product AW-048 was dissolved in concentrations of 50 ppm and 100 ppm in tap water (pH = 6). For this purpose, first 5 mg AW-048 or 10 mg AW-048 were weighed and pre-dissolved in each case in 125 l ethanol (absolute) in 1.5 ml Eppendorf reaction vessels. These solutions were then pipetted into 100 ml tap water (pH = 6). The subsequent olfactory evaluation of the two solutions of four subjects showed that the solutions could not be distinguished from pure tap water (pH = 6).
Beispiel 16: Geschmackliche Beurteilung einer Lösung der Substanz NP-018256 (XI) Substanz NP-018256 (Reinheit 98,4% nach HPLC Methode 3, Einzelheiten tabellarisch siehe oben) wurde in einer Konzentration von 50 ppm in stillem Mineralwasser unter Erwärmen auf 60°C gelöst. Die hergestellte Lösung wurde nach Abkühlen auf Raumtem- peratur von neun Testpersonen nach der „taste-and-spit" -Methode beurteilt. Als Ergebnis stellten zwei Testpersonen keinen Unterschied im Vergleich zu Wasser fest. Zwei weitere Testpersonen beschrieben die Lösung als neutral. Fünf Testpersonen konnten die Lösung im Vergleich zu Wasser unterscheiden, der Ge- schmack wurde als nicht unangenehm beschrieben. Die Substanz beeinträchtigt in der getesteten Konzentration den Geschmack von Getränken nicht negativ. Example 16: Taste assessment of a solution of the substance NP-018256 (XI) Substance NP-018256 (purity 98.4% according to HPLC method 3, tabular details see above) was dissolved in a concentration of 50 ppm in still mineral water with heating to 60 ° C. The prepared solution, after cooling to room temperature, was evaluated by nine subjects according to the taste-and-spit method, and as a result, two subjects found no difference in comparison to water, and two other subjects described the solution as neutral were able to differentiate between the solution and water, the taste was not described as unpleasant and the substance did not adversely affect the taste of beverages at the concentration tested.
Beispiel 17 : Geschmackliche Beurteilung von AW-048 in Getränken AW-048-Lösungen von 50 ppm wurden in verschiedenen Getränken, wie in Beispiel 15 für Wasser beschrieben, hergestellt. Neben einer Apfelschorle, einem Orangenenktar und einem Eisteee wurde auch ein Engergydrink und eine Trinkmolke verwendet. Drei Testpersonen waren nicht in der Lage zwischen den Original- Getränken und den Getränken mit AW-048 zu diskriminieren. Zusammenfassend konnte festgehalten werden, dass keine geschmackliche Beeinträchtigung der Getränke durch AW-048 erfolgt. Example 17: Taste Assessment of AW-048 in Drinks AW-048 solutions of 50 ppm were prepared in various beverages as described in Example 15 for water. In addition to an apple spritzer, an orange platter and an ice tea, an energizer drink and a drink whey were also used. Three subjects were unable to discriminate between the original drinks and drinks with AW-048. In summary it could be stated that no taste impairment of the drinks by AW-048 takes place.
Beispiel 18 : Herstellung einer Apfelschorle mit AW-048 Example 18: Preparation of an apple spritzer with AW-048
5 mg AW-048 wurden in 75 pL reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 100 mL einer Apfelschorle {Adelholzener Alpenquellen GmbH) gegeben. 5 mg of AW-048 were dissolved in 75 pL of pure ethanol. Subsequently, this solution was added to 100 ml of apple spritzer {Adelholzener Alpenquellen GmbH).
Beispiel 19: Herstellung eines Eistees mit AW-048 Example 19: Preparation of an ice tea with AW-048
5 mg AW-048 wurden in 75 pL reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 100 mL eines Eistees (Nestea Pfirsich; Coca-Cola GmbH) gegeben. Beispiel 20: Herstellung eines Orangennektars mit AW-048 5 mg of AW-048 were dissolved in 75 pL of pure ethanol. Subsequently, this solution was added to 100 ml of an ice tea (Nestea peach, Coca-Cola GmbH). Example 20: Preparation of Orange Nectar with AW-048
5 mg AW-048 wurden in 75 μΐ.. reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 100 mL eines Orangennektars (Hardthof Orangen Nektar; efresco Deutschland GmbH) gegeben.  5 mg AW-048 were dissolved in 75 μΐ .. pure ethanol. Subsequently, this solution was added to 100 ml of an orange nectar (Hardthof orange nectar, efresco Deutschland GmbH).
Beispiel 21: Herstellung eines Energydrinks mit AW-048 Example 21: Preparation of Energy Drink with AW-048
5 mg AW-048 wurden in 75 L reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 100 mL eines Energydrings {Energy Rocket; Radlberger Getränke GmbH & Co.} gegeben.  5 mg of AW-048 were dissolved in 75 L of pure ethanol. Subsequently, this solution was added to 100 mL of an energydring {Energy Rocket; Radlberger Getränke GmbH & Co.}.
Beispiel 22: Herstellung einer Trinkmolke mit AW-048 Example 22: Preparation of a drinking whey with AW-048
5 mg AW-048 wurden in 75 L reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 100 mL einer Trinkmolke (Müller* Fitness Molke Apfel; Molkerei Alois Müller GmbH & Co. KG) gegeben.  5 mg of AW-048 were dissolved in 75 L of pure ethanol. Subsequently, this solution was added to 100 ml of a drinking whey (Müller * Fitness whey apple; Alois Müller GmbH & Co. KG).
Beispiel 23: Herstellung eines Apfelschorlen-Grundstoffes mit AW-048 Example 23: Preparation of apple spritzer base with AW-048
5 mg AW-048 wurden in 75 L reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 7,641 mL eines Apfelschorlen-Grundstoffes (Döhler GmbH) gegeben. Diese Menge des Grundstoffes eignet sich zur Herstellung von 100 mL Apf lschorle.  5 mg of AW-048 were dissolved in 75 L of pure ethanol. Subsequently, this solution was added to 7.641 mL of an apple spruce base (Döhler GmbH). This amount of the raw material is suitable for the production of 100 ml of apple juice.
Beispiel 24: Herstellung eines Mehrfruchtnektar-Grundstoffes mit AW-048 Example 24: Preparation of a multi-fruit nectar base with AW-048
5 mg AW-048 wurden in 75 ]L reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 9,748 mL eines Mehrfruchtnektar- Grundstoffes (Döhler GmbH) gegeben. Diese Menge des Grundstoffes eignet sich zur Herstellung von 100 mL Mehrfruchtnektar. Beispiel 25: Herstellung eines Energydrink-Grundsto fes mit AW-5 mg of AW-048 were dissolved in 75 μl of pure ethanol. Subsequently, this solution was added to 9.748 mL of a multi-fruit nectar base (Döhler GmbH). This amount of the raw material is suitable for the production of 100 mL multi-fruit nectar. Example 25: Preparation of an Energy Drink Base with AW-
048 048
5 mg AW-048 wurden in 75 L reinem Ethanol gelöst. Anschließend wurde diese Lösung zu 8,419 mL eines Energydrink-Grundstoffes (Döhler GmbH) gegeben. Diese Menge des Grundstoffes eignet sich zur Herstellung von 100 mL Energydrink. 5 mg of AW-048 were dissolved in 75 L of pure ethanol. Subsequently, this solution became 8.419 mL of an energydrink base (Döhler GmbH). This amount of the raw material is suitable for the production of 100 mL of energy drink.
Ausdruck (Original in electronischem Format) Expression (original in electronic format)
(Dieses Blatt zählt nicht als Blatt der internationalen Anmeldung und ist nicht Teil derselben)  (This sheet does not count as part of the international application and is not part of it)
Figure imgf000049_0001
Figure imgf000049_0001
Anwalts Wa 11137-F  Lawyer Wa 11137-F
Die nachstehenden Angaben The following information
betreffen den Mikroorganismus und/  concern the microorganism and /
oder anderes biologisches Material,  or other biological material,
der/das in der Beschreibung genannt  the one called in the description
ist is
-1 Seite 15 -1 page 15
-2 Zeile 28 -2 line 28
-3 Angaben betr. Hinterlegung -3 Information on deposit
-3-1 Name der Hinterlegungsstelle DSMZ DSMZ-Deutsche Sammlung von  -3-1 Name of depository DSMZ DSMZ-German collection of
Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH -3-2 Anschrift der Hinterlegungsstelle Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig,  Microorganisms and Cell Cultures GmbH -3-2 Address of the depository Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig,
Germany germany
-3-3 Datum der Hinterlegung 02. September 2011 (02.09.2011) -3-3 Date of filing 02. September 2011 (02.09.2011)
-3-4 Eingangsnummer DSMZ 25129 -3-4 Input number DSMZ 25129
-5 Bestimmungsstaaten, für die  -5 States of destination for which
besondere Angaben gemacht werden Alle Bestimmungsstaaten  Particulars are given All States of destination
Die nachstehenden Angaben  The following information
betreffen den Mikroorganismus und/  concern the microorganism and /
oder anderes biologisches Material,  or other biological material,
der/das in der Beschreibung genannt  the one called in the description
ist is
-1 Seite 33 -1 page 33
-2 Zeile 14 -2 line 14
-3 Angaben betr. Hinterlegung -3 Information on deposit
-3-1 Name der Hinterlegungsstelle DSMZ DSMZ-Deutsche Sammlung von  -3-1 Name of depository DSMZ DSMZ-German collection of
Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH -3-2 Anschrift der Hinterlegungsstelle Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig,  Microorganisms and Cell Cultures GmbH -3-2 Address of the depository Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig,
Germany germany
-3-3 Datum der Hinterlegung 20. Juni 2012 (20.06.2012) -3-3 Date of filing 20. June 2012 (20.06.2012)
-3-4 Eingangsnummer DSMZ 26076 -3-4 entry number DSMZ 26076
-5 Bestimmungsstaaten, für die  -5 States of destination for which
besondere Angaben gemacht werden Alle Bestimmungsstaaten  Particulars are given All States of destination
VOM ANMELDEAMT AUSZUFÜLLEN -4 Dieses Formular ist mit der TO BE COMPLETED BY THE REGISTRATION OFFICE -4 This form is available with the
internationalen Anmeldung  international registration
eingegangen ja  yes
(ja oder nein) (Yes or no)
-4-1 Bevollmächtigter Bediensteter  -4-1 authorized agent
Kuiper-Cristina, Nathalie Ausdruck (Original in electronischem Format) Kuiper-Cristina, Nathalie Expression (original in electronic format)
(Dieses Blatt zählt nicht als Blatt der internationalen Anmeldung und ist nicht Teil derselben)  (This sheet does not count as part of the international application and is not part of it)
VOM INTERNATIONALEN BÜRO AUSZUFÜLLEN -5 Dieses Formular ist an folgendem TO BE COMPLETED BY THE INTERNATIONAL OFFICE -5 This form is attached to the following
Datum beim internationalen Büro  Date at the international office
eingegangen received
-5-1 Bevollmächtigter Bediensteter -5-1 authorized agent

Claims

Patentansprüche : Claims:
1. Getränk enthaltend als natürliches Konservierungsmittel ein Glykolipid der Formel (I) : 1. A beverage containing as natural preservative a glycolipid of the formula (I):
Figure imgf000051_0001
Figure imgf000051_0001
Ri gleich oder verschieden ist und H oder COCH3 bedeutetRi is the same or different and is H or COCH 3
R2 gleich oder verschieden ist und H oder
Figure imgf000051_0002
R 2 is the same or different and H or
Figure imgf000051_0002
bedeutet, wobei m l, 2 oder 3 ist,  where m is 1, 2 or 3,
R3 gleich oder verschieden ist und H oder OH bedeutet und R 3 is the same or different and is H or OH and
OH oder OCH3 bedeutet
Figure imgf000051_0003
OH or OCH 3 means
Figure imgf000051_0003
oder
Figure imgf000051_0004
or
Figure imgf000051_0004
bedeutet, wobei m l, 2 oder 3 ist, Re H oder OH bedeutet where ml is 2, or 3, Re H or OH means
R? H oder OH oder =0 bedeutet  R? H or OH or = 0 means
oder ein Salz des Glykolipids gemäß Formel I. or a salt of the glycolipid according to formula I.
2. Getränk gemäß Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass es als Konservierungsmittel ein Glykolipid der Formel (II) 2. Drink according to claim 1, characterized in that it contains as preservative a glycolipid of the formula (II)
Figure imgf000052_0001
Figure imgf000052_0001
(II)  (II)
wobei in which
Ri H oder COCH3 bedeutet Ri is H or COCH 3 represents
R2 gleich oder verschieden ist und H oder
Figure imgf000052_0002
R 2 is the same or different and H or
Figure imgf000052_0002
bedeutet, wobei m l, 2 oder 3 ist,  where m is 1, 2 or 3,
R3 gleich oder verschieden ist und H oder OH bedeutet und R 3 is the same or different and is H or OH and
R4 OH oder OCH3 bedeutet R 4 is OH or OCH 3
oder ein Salz des Glykolipids gemäß Formel II enthält. or a salt of the glycolipid according to formula II.
3. Getränk gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, 3. Drink according to claim 1 or 2, characterized
dass es als Konservierungsmittel ein Glykolipid der Formeln that it contains as preservative a glycolipid of the formulas
(III) bis (XXV)  (III) to (XXV)
( I II )
Figure imgf000052_0003
51 (I II)
Figure imgf000052_0003
51
Figure imgf000053_0001
Figure imgf000053_0001
Figure imgf000054_0001
Figure imgf000054_0001
£Z8/.90/ZT0Zd3/I3d 8ΐ8/.εο/εΐοζ OAV £ Z8 / .90 / ZT0Zd3 / I3d 8ΐ8 / .εο / εΐοζ OAV
Figure imgf000055_0001
Figure imgf000055_0001
CS CS
£Z8Z,90/nOZd3/13d 8T8/.C0/n0Z OAV £ Z8Z, 90 / nOZd3 / 13d 8T8 / .C0 / n0Z OAV
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000056_0002
Figure imgf000056_0003
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000056_0002
Figure imgf000056_0003
10 55
Figure imgf000057_0001
10 55
Figure imgf000057_0001
Figure imgf000057_0002
56
Figure imgf000058_0001
Figure imgf000057_0002
56
Figure imgf000058_0001
Figure imgf000058_0002
Figure imgf000059_0001
Figure imgf000058_0002
Figure imgf000059_0001
oder ein Salz der genannten Verbindungen enthält. or a salt of said compounds.
4. Getränk gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Salz ein Alkali- oder ein Erdalkalisalz der genannten Verbindungen ist. 4. Drink according to one of claims 1 to 3, characterized in that the salt is an alkali or an alkaline earth metal salt of said compounds.
5. Getränk gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4 , dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Konservierungsmittel um ein Gly kolipid der Formeln (XI) , (XV) , (IX) oder (XIII) oder eines ih rer Gemische handelt. 5. A beverage according to any one of claims 1 to 4, characterized in that it is the preservative is a glycolipid of the formulas (XI), (XV), (IX) or (XIII) or one of their mixtures.
6. Getränk gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Konservierungsmittel um ein Gly- kolipid der Formeln (XI) oder (XIII) oder eines ihrer Gemische hande1t . 6. A beverage according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the preservative is a glycolipid of the formulas (XI) or (XIII) or one of their mixtures.
7. Getränk gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Konservierungsmittel um ein Gemisch der Glykolipide der Formeln (XI) und (XIII) handelt. 7. A beverage according to any one of claims 1 to 6, characterized in that it is the preservative is a mixture of the glycolipids of the formulas (XI) and (XIII).
8. Getränk gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass mindestens eines der Glykolipide jeweils in einer Menge von 10 bis 4000 ppm vorhanden ist. 8. A beverage according to any one of claims 1 to 6, characterized in that at least one of the glycolipids is present in each case in an amount of 10 to 4000 ppm.
9. Verwendung eines Glykolipids gemäß Formel (I) bis (XIV) oder eines ihrer Salze als Konservierungsmittel in Getränken. 9. Use of a glycolipid according to formula (I) to (XIV) or one of its salts as preservative in beverages.
10. Verfahren zur Herstellung der Getränke gemäß Anspruch 1 bis S, dadurch gekennzeichnet, dass die Glykolipide oder Gemische der Glykolipide gemäß Formel (I) bzw. Formel (II) bis (XXV) entweder direkt in das Getränk gegeben oder über Vorlösungen in Wasser oder Ethanol dem Getränk zugegeben werden. 10. A process for the preparation of beverages according to claim 1 to S, characterized in that the glycolipids or mixtures of the glycolipids according to formula (I) or formula (II) to (XXV) either directly into the drink or via preliminary solutions in water or Ethanol be added to the drink.
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