WO2013004871A1 - Amidas de 2-amino-1,3-propanodioles y su uso como inhibidores de ceramidasas - Google Patents

Amidas de 2-amino-1,3-propanodioles y su uso como inhibidores de ceramidasas Download PDF

Info

Publication number
WO2013004871A1
WO2013004871A1 PCT/ES2012/070485 ES2012070485W WO2013004871A1 WO 2013004871 A1 WO2013004871 A1 WO 2013004871A1 ES 2012070485 W ES2012070485 W ES 2012070485W WO 2013004871 A1 WO2013004871 A1 WO 2013004871A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
formula
dihydroxyoctadecan
alkyl
acetamide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/ES2012/070485
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
José Luis ABAD SAIZ
Luz Del Carmen Camacho Castillo
Josefina Casas Brugulat
Gemma Fabrias Domingo
María GARRIDO MARTÍNEZ
Timothy Thomson Okatsu
Óscar MECA CORTÉS
Antonio Delgado Cirilo
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Universitat de Barcelona UB
Original Assignee
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Universitat de Barcelona UB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC, Universitat de Barcelona UB filed Critical Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Publication of WO2013004871A1 publication Critical patent/WO2013004871A1/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/164—Amides, e.g. hydroxamic acids of a carboxylic acid with an aminoalcohol, e.g. ceramides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/16—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C233/17—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/18—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/70—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/72—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C235/74—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of a saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/70—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/72—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C235/76—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C247/00—Compounds containing azido groups
    • C07C247/02—Compounds containing azido groups with azido groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C247/04—Compounds containing azido groups with azido groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/01—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C311/02—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C07C311/03—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton having the nitrogen atoms of the sulfonamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C311/04—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton having the nitrogen atoms of the sulfonamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to acyclic carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/01—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C311/02—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C07C311/03—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton having the nitrogen atoms of the sulfonamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C311/05—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton having the nitrogen atoms of the sulfonamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to acyclic carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups

Definitions

  • Ceramidases are hydrolases that catalyze the hydrolysis of ceramides in sphingosine and fatty acids in mammals, bacteria and fungi. According to their optimum pH, ceramidases are grouped into acidic, neutral and alkaline. To date, five different ceramidases have been cloned and expressed in a functional way: acid ceramidase, neutral and three alkaline.
  • Compound B13 ((1 R, 2R) -2 - (/ V-tetradecanoylamino) -1- (4-nitrophenyl) -1, 3- propanediol) is another acid ceramidase inhibitor. It is selective for this ceramidase, since it does not modify the activity of neutral and alkaline ceramidases. B13 induces the accumulation of ceramide and the death of SW403 cells (human adenocarcinoma), meianoma, and LNCaP prostate cells. In addition, B13 prevents the growth of tumors in vivo and sensitizes prostate tumors against radiation-induced apoptosis.
  • B13 is a neutral and lipophilic molecule, it is not very suitable to reach and accumulate in the lysosome, the acidic compartment in which the acidic ceramidase is found. Therefore, various structural analogues have been designed to improve the ability to reach the biological target. From these works, three families of analogues with different specificity regarding the intracellular organelle have emerged: a) lysosomotropic alkylamines (for example, LCL204); b) mitochondrotic cationic analogs (such as LCL85); c) neutral analogs without selectivity with respect to the compartment in which they accumulate (LCL15).
  • lysosomotropic alkylamines for example, LCL204
  • mitochondrotic cationic analogs such as LCL85
  • neutral analogs without selectivity with respect to the compartment in which they accumulate (LCL15).
  • LCL204 is able to selectively localize in lysosomes and induce apoptosis in prostate cancer cells and Fas-induced apoptosis in squamous cancer cells.
  • LCL204 (or AD2646) causes lysosomal destabilization and rapid degradation, dependent on cathepsin, of ceramidase acid, suggesting a lack of tumor specificity.
  • desipramine which is capable of decreasing the activity of acid ceramidase by stimulating its proteolytic degradation dependent on cathepsin, as well as for other amphiphilic compounds (chloropromazine, chioroquine), although not for other lysosomotropic agents ( ammonium chloride, bafilomycin A1).
  • LCL464 stands out, capable of inhibiting acid ceramidase both in vivo and in vitro, but without the ability to induce its proteolytic degradation.
  • compound LCL464 causes an increase in caspase-dependent apoptosis in various types of cancer.
  • Patent application WO200650264 describes ceramide conjugates with pyridinium salts and their use in the treatment of cancer.
  • This patent application also describes the compound I-B2 (2-bromo-N ⁇ ((2S, 3R) -1,3-dihydroxyheptadecan-2-yl) acetamide) as an intermediate for obtaining the compounds for the treatment of Cancer.
  • this prior art document does not disclose that compound I-B2 can be used as an anticancer.
  • Short-length N-acyl chain 3-ketoamides have been described as capable of inducing apoptosis in leukemia cells (Azuma et al. Bioorg Med Chem. 2007, 15, 2860-2867).
  • the present invention provides new ceramide derivatives acid. Likewise, the present invention also provides a family of compounds with antiproliferative and cytotoxic activity by inhibiting acid ceramidasa activity. In particular, the present invention provides a family of compounds for the treatment of cancer.
  • the present invention relates to a compound of formula (I):
  • Z is selected from H and OH
  • n is an integer selected from 0 to 1
  • Ri is selected from alkyl (CrC 3 o), alkenyl (C 2 -C 3 o), and alkynyon (C 2 - C 3 o),
  • B is selected from -H, -N 3 and -C CH,
  • R 2 is selected from -NHR 3 and maleimide, where
  • R 3 is selected from -CO-R4, -CO-CO-R4 and -SO2-R4, where
  • R 4 is selected from alkyl (Ci-Ci6) alkyl, (C2-Ci6), alkynyl (C2 ⁇ Ci 6), epoxide and aziridine, wherein the alkyl, alkenyl or alquiniio of R1 and R4 may independently be , optionally substituted by one or more substituents independently selected from halogen, OH, OR, OCF 3 , NH 2 , NO 2 , NRR ', NHCOR; CONRR, CHO, COOH, COOR, OCOR and CN, where R and R 'are alkyl or alkenyl; with the condition of
  • R 3 is different from -COR 4 with R 4 being alkyl (CrCi 6 ) unsubstituted or substituted by halogen or hydroxyl;
  • alkyl refers, in the present invention, to non-cyclic, linear or branched hydrocarbon chain radicals, which bind to the rest of the molecule through a single bond, for example, methyl, ethyl, n-propyl, / -propyl, n-butyl, ferc-butyl, sec-butyl, n-pentyl, n-hexy, decyl or dodecyl.
  • the alkyl groups may be optionally substituted by one or more substituents such as halogen, hydroxyl, azido, alkoxy, carboxyl, carbonite, cyano, carbaldehyde, alkoxycarbonyl, amino or nitro.
  • alkenyl refers to radicals of non-cyclic, linear or branched hydrocarbon chains, which contain one or more double carbon-carbon bonds, preferably contain a single carbon-carbon double bond, and which are attached to the rest of the molecule by a single bond, for example, vinyl, 1-propene, allyl, isoprenyl, 2-butenyl or 1,3-butadiene.
  • Alkenium radicals may be optionally substituted by one or more substituents such as halogen, hydroxyl, azido, alkoxy, carboxyl, carbonyl, cyano, carbaldehyde, alkoxycarbonyl, amino or nitro.
  • alkynyl refers to radicals of non-cyclic, linear or branched hydrocarbon chains, which have one or more triple carbon-carbon bonds, preferably contain a single carbon-carbon triple bond, and which are attached to the rest of the molecule by a simple link, for example, ethiny or 1-propyne.
  • the alkynyl group may be optionally substituted by one or more substituents such as halogen, hydroxyl, azido, alkoxy, carboxy, carbon, cyano, carbaldehyde, alkoxycarbonyl, amino or nitro.
  • substituents such as halogen, hydroxyl, azido, alkoxy, carboxy, carbon, cyano, carbaldehyde, alkoxycarbonyl, amino or nitro.
  • the present invention encompasses all possible stereoisomers not only their racemic mixtures but also their optically active isomers. Obtaining a single enantiomer can be achieved by any of the procedures commonly used, for example, by resolution of the racemic mixture through recrystallization techniques, chiraine synthesis, enzymatic resolution, biotransformation or chromatographic resoiu tangible.
  • pharmaceutically acceptable salt means a salt that retains an efficacy and biological properties similar to the free base or free acid and which is not bothersome in the biological sense or in any other.
  • Pharmaceutically acceptable salts may include acid addition salts, such as mesylates, smokers, hydrochlorides, citrates, maleates or tartrates.
  • Physiologically acceptable salts can also be formed with inorganic acids such as sulfuric or phosphoric acids.
  • basic type salts of an alkali metal, such as sodium, or an alkaline earth metal, for example calcium or magnesium can be formed.
  • solvate in the present patent application means an aggregate resulting from the ionic or molecular association between molecules of one or more solvents and molecules of one of the compounds object of this invention.
  • the solvate may comprise, for example, water molecules, alcohols, ketones, acetates or mixtures.
  • the solvate may comprise molecules of water, ethanol, isopropanol, acetone or mixtures.
  • the solvates object of the present invention can be obtained by methods known to a person skilled in the art, for example, by crystallization under controlled conditions.
  • the compound of formula (I) of the present invention is characterized in that Ri is selected from alkyl (CrC 30 ) and alkenyl (C 2 -C 3 0 ), preferably R is selected from alkyl (CC 3 or ) and alkenyl (C 2 -C 3 o) unsubstituted, more preferably Ri is selected from (C8-Cie) alkyl and alkenium (C8-Ci6) unsubstituted.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that n can be equal to zero.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that R 3 is -CO-R4, where R4 can be alkyl (CrCi6), and B can be selected from -N 3 and -CECH.
  • R 4 may be a (Ci-Ci 6 ) alkyl substituted with at least one halogen atom, more preferably the halogen may be a fluorine or bromine atom, even more preferably the halogen is bromine. Even more preferably, R 4 may be an alkyl (Ci-C5) substituted with at least one bromine atom.
  • R 4 may be an alkyl (CrC 6) substituted with at least one halogen atom, more preferably the halogen may be a fluorine or bromine atom, even more preferably the halogen is bromine.
  • R 4 may be an alkyl (Ci-C5) substituted with at least one bromine atom.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that R3 is -CO-R4, where R4 can be epoxide.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application where R3 is -CO-R4, where F can be epoxy, is also characterized in that n can be 1 and Z can be OH.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that R3 is -CO-R4, where R 4 can be alkenyl (C2-C e) or alkyne (C2-C) and).
  • R4 can be a aiquenilo (C2-Ci6) substituted with at least one halogen atom, more preferably, R4 can be a alqueniio (C 2 Ci 6) substituted with at least one fluorine atom or bromine, in an even more preferred R4 may be a (C2-Ci6) alkenyl substituted with at least one bromine atom.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that R 3 is -CO-R4, where R4 is alkenyl (C 2 -Ci 6 ) or alkynyl (C 2 -Ci6), and may be substituted by a! minus a group -CHO or - COOH.
  • the compound of formmuia (I) object of the present patent application is characterized in that f3 ⁇ 4 is -CO-CO-R4, where R4 can be alkyl (CrCi 6 ) and B can be selected from - N 3 and -CECH.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that R 3 can be -SO2-R4, where R 4 can be selected from alkyl (Ci-Ci6), alkenyl ( C2-Ci6), alkynyl (C2-C e), epoxide and aziridine.
  • R 4 may be alkyl (CrCi 6 ), more preferably (C C8) alkyl.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that R3 can be -SO2-R4, where R 4 can be selected from alkyl (CrCi 6 ), alkenyl (C 2 -Ci 6 ), aiquinyl (C 2 -Ci 6 ), epoxide and aziridine, n can be 1 and Z can be OH.
  • R 4 may be (Ci-Ci6) alkyl, more preferably (d-C8) alkyl.
  • the compound of formula (I) object of the present patent application is characterized in that R2 can be maieimide.
  • the compound of formula (I) as defined above is selected from the list consisting of:
  • the compound of formula (I) as defined above in this patent application is selected from the list consisting of:
  • the compound of formula (I) when n is 1 as defined above is selected from the list consisting of:
  • the compounds of formula (I) can be prepared following different methods known to any person skilled in the field of organic synthesis, in particular by the general procedures described below.
  • the starting materials are commercially available or can be prepared by methods of the literature.
  • a Cat. Grubbs (second generation); b: 1) H 2 , Pd / C; 2) NaN3 / DMF; c: NaN 3 / DMF; d: NaH / THF; e: 1) Li-C ⁇ C-TMS; 2) Bu 4 NF; f: HCI / MeOH; g: 1) cat. TsOH / MeOH; 2) NaOH / EtOH; h: 1) PCC / CH 2 CI 2 ; 2) cat. TsOH / MeOH.
  • compound 1 (Herold, Helv. Chim. Acta. 1988, 71, 354-62) is reacted with a terminal oiefin (such as 2a or 2b) in a cross-metathesis reaction in the presence of second generation Grubbs catalyst (Schmidt, Angew. Chem. Int. Ed. 2003, 42, 4996-9) obtaining compounds 3.
  • a terminal oiefin such as 2a or 2b
  • second generation Grubbs catalyst Schot, Angew. Chem. Int. Ed. 2003, 42, 4996-9
  • bromoderivative 3a is reacted with sodium azide in dimethylformamide, obtaining 3c, followed by acid hydrolysis of the oxazolidine ring and the Boc group.
  • mesylates 4 are obtained, which can be hydrogenated to 5.
  • reaction of 4 or 5 with lithium trimethylsilylacetyl followed by deprotection of acetylide with tetrabutylammonium fluoride, terminal alkynes 6 and 7, respectively. Its transformation into the corresponding IIG and IID amines is achieved by sequential hydrolysis of the isopropylidene and carbamate groups.
  • the above amino alcohols, as well as sphingosine or dihydrosphingosine, can be acylated by reaction with an acid chloride in the presence of a base.
  • an acid anhydride such as maleic anhydride, or a carboxylic acid can also be used in the presence of a suitable coupling agent such as, for example, 1- ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC), the ⁇ , ⁇ '- diisopropylcarbodiimide (DIC), O- (7-azabenzotriazol-1- il) hexafluoro phosphate - / V, A /, A / 'A /' - tetramethyluronium (HATU) or benzotriazol-1-yloxy -tris pyrroiidinophosphonium (PyBOP) and an activator such as 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), in the presence of a
  • the sulfonamides can be prepared by coupling the corresponding amines with ethanesuifonyl chloride in tetrahydrofuran solution.
  • compositions comprising a compound of general formula (I) or one of its pharmaceutically acceptable stereoisomers, salts or solvates as defined in this patent application and at least one pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition It can be presented in a form adapted to parenteral, oral, sublingual, nasai, intrathecai, bronchial, lymphatic, rectal, transdermal or inhaled administration.
  • both the compound of general formula (I) or a stereoisomer, a pharmaceutically acceptable salt or soivate thereof as defined in the present patent application as a compound chosen from 2,2-dibromo-N- ((2S, 3R) -1, 3-dihydroxyoctadecan-2-yl) acetamide and 2-bromo-N - ((2S, 3R) -1, 3- dihydroxyoctadecan-2-yl) Acetamide or a stereoisomer, a pharmaceutically acceptable salt or soivate of one of these compounds are useful for the treatment of a disease associated with the inhibition of acid ceramidase, and therefore are useful in the treatment and / or prevention of a disease. which studies with cellular hyperproliferation.
  • compositions of a compound of general formula (I) or a stereoisomer, a sai or a pharmaceutically acceptable soivate thereof as defined in the present patent application are useful for the treatment and prevention of a disease that occurs with cell hyperproliferation .
  • the compound or composition for use in the treatment or prevention of a disease that occurs with cellular hyperproliferation as defined above in the present application for patent can be used for the treatment of a disease chosen from cancer, metastasis, inflammation, asthma and arteriosclerosis.
  • the compound or composition for use in the treatment or prevention of a disease that occurs with cell hyperproliferation as defined in the present patent application can be used in the treatment of prostate cancer, pancreas, brain , colon, lung, breast, head and neck, ovary, larynx, urinary bladder, uterus, skin, sarcomas, lymphomas or leukemia.
  • prostate or lung cancer Preferably, prostate or lung cancer.
  • the present invention also relates to a method for the prevention or treatment of an individual who suffers from or is susceptible to suffering from disease that occurs with cellular hyperproliferation, in particular the treatment of cancer and more preferably the treatment of prostate or lung cancer, which comprises administering to said individual a therapeutically effective amount of a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof together with sufficient amounts of pharmaceutically acceptable excipients.
  • the present invention also relates to the use of both a compound of general formula (I) or a stereoisomer, a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof as defined in the present patent application, and the use of a compound chosen between 2,2-dibromo- N - ((2S, 3R) -1, 3-dihydroxyoctadecan-2-yl) acetamide and 2-bromo-N - ((2S, 3R) -1, 3- dihydroxioctadecan-2-yl ) acetamide or a stereoisomer, a pharmaceutically acceptable salt or solvate of one of these compounds, to make a pharmaceutical composition useful in the treatment of a disease associated with the inhibition of acid ceramidase, and therefore useful in the treatment and / or prevention of a disease that occurs with cellular hyperproliferation.
  • said composition can be used for the treatment of a disease caused by cancer, metastasis, inflammation, asthma and arteriosclerosis. More preferably, the tai composition as described above can be used in the treatment of prostate cancer, pancreas, brain, colon, lung, breast, head and colium, ovary, larynx, urinary bladder, uterus, skin, sarcomas , lymphomas or leukemia.
  • prostate or lung cancer Preferably, prostate or lung cancer.
  • the compounds used in the present invention can be used alone or with other drugs to provide a combination therapy.
  • the other drugs can be part of the same composition, or they can be supplied as a separate composition for administration at the same time or at a different time.
  • a compound of formula generates!
  • composition of a compound of formula (I) as defined above in the present patent application or the composition comprising a compound chosen from 2,2-dibromo-N- ((2S, 3R) -1, 3- dihydroxyoctadecan-2-yl) acetamide and 2-bromo-N - ((2S, 3R) -1, 3- dihydroxyoctadecan-2-yl) acetamide or a stereoisomer, a sai o a pharmaceutically acceptable soivate of one of these compounds and at least one excipient can be used in combination with another therapy for the treatment of a disease as defined above.
  • the therapeutic agents may be tamoxifen, daunorubicin, etoposide, pacitax, dacarbazide, temozoomomide, temsirolimus, fenretinide, resveratrol, borinostat, sorafenib, imatinib, bortezomib, gemcitabine or cispiatin.
  • Figure 1 Effect of the compounds on the acid ceramidasa activity.
  • the tests were performed on transduced Farber cells to overexpress acid ceramidase, either intact (white bars) or in lysates (gray bars). Incubation was carried out by adding together the inhibitor (16 ⁇ ) with the phylogenic substrate (16 ⁇ ) for 3 h. The procedure was followed as detailed in example 1 of the section on examples of biological tests (Bedia et al. Chembiochem 2007, 8, 642). The y axis indicates the percentage of enzymatic activity with respect to the control.
  • Figure 2 Effect of the compounds on the acid ceramidase activity.
  • the tests were carried out on human lung adenocarcinoma cells A549. The intact cells were incubated with the inhibitor (16 ⁇ ) for 24 h and then the phylogenic substrate (16 ⁇ ) was added, which was incubated for 3 h. Hydrolysis was determined by measuring the fluorescence generated after proceeding as indicated in example 1 of the section on examples of biological tests (Bedia et al. Chemb ⁇ ochem 2007, 8, 642). The axis and indicates the percentage of enzymatic activity with respect to the control.
  • Figure 3 Effect of the compounds I-B2, I-B17 and I-B9 on the acidic ceramidase activity of PC-3Mc prostate cancer cells.
  • the assays were carried out by incubation of the cells with the inhibitor. The cells were seeded in 96-well plates at a density of 10,000 cells / ml and the compounds were added 24 h after seeding. Three doses of each inhibitor, 1 ⁇ , 5 ⁇ and 10 ⁇ , were used in incubations for 48 h and the tests were performed in triplicate. After this incubation period, the medium was eimiminated and fresh medium containing the fluorogenic substrate (16 ⁇ ) was added and incubated for 3 h.
  • Hydrolysis is determined by measuring the fluorescence generated after proceeding as indicated in example 1 of the section on examples of biological tests (Bedia et al. Chemb ⁇ ochem 2007, 8, 642). The axis and indicates the percentage of enzymatic activity with respect to the control.
  • FIG. 5 Effect of compounds I-B2, I-B17 and I-B9 on the sphingolipidoma of the prostate cancer cells PC-3Mc.
  • the assays were carried out by incubation of the cells with the compounds. The cells were seeded in 6-well plates at a density of 250,000 cells / ml and the compounds were added 24 h after seeding. Three doses of each inhibitor, 1 ⁇ , 5 ⁇ and 10 ⁇ , were used in incubations for 48 h and the Trials were performed in triplicate. Three doses of each compound, 1 ⁇ , 5 ⁇ and 10 ⁇ , were used in incubations for 48 h. After this incubation period, the medium is removed, the cells are harvested and processed as detailed in example 2 of examples of biological tests.
  • A ceramides; B, dihydroceramides; C, sphingomyeliins; D dihydrosphingomyelins; E, glucosylceramides.
  • Figure 6 Effect of the compounds on the viability of A cells, lung adenocarcinoma A549 (black) and leukemia Jurkat A3 (gray) and B, prostate cancer PC3 / Mc.
  • the cells were seeded at a density of 200,000 cells per milliliter and, 24 hours after planting, they were incubated with the compounds for 24 h (A) or 72 h (B), after which the number of viable cells was determined through the MTT reduction test, as specified in example 3 of examples of biological tests.
  • Figure 7 Effect of the compounds on the growth of PC-3Mc cells on plastic substrate. 500 cells were seeded in each well of 96-well plates, leaving to adhere to the plastic for 24 h, followed by treatment with the compounds at a final concentration of 5 ⁇ . The effect of incubations with these compounds on cell growth was determined by quantifying the number of cells present at 24 h, 48 h, 72 h, 120 h, 144 h and 168 h after treatment with the compounds. The y-axis indicates the relative proportion of the number of cells with respect to day 1 and the x-axis refers to the time (t) in days.
  • Figure 8 Effect of inhibitors on the formation of cell colonies in semi-solid medium.
  • the PC-3Mc cells seeded in complete culture medium containing 3% agar, were treated with the test compounds at final concentrations of 1 ⁇ or 5 ⁇ , reacting them with a periodicity of 3 days, coinciding with the addition of new crop The number of colonies was counted 3 weeks after treatment.
  • the y axis indicates the number of colonies (No. Col.)
  • FIG. 9 Effect of ios inhibitors on cell invasion.
  • PC-3Mc cells were treated with the test compounds at a final concentration of 5 ⁇ during the 48 hours prior to the invasiveness test. After that treatment time, the cells were collected, resuspended in complete medium, and seeded on the upper chambers of the Transwell inserts coated with Matrigei (10 mg / mL). The test compounds were added to both the upper and lower chamber, at a concentration of 5 ⁇ , this treatment being maintained throughout the entire duration of the test. Each condition was performed in triplicate. The y-axis indicates the number of cells (No.) Figure 10. Formulas of the compounds synthesized in the examples.
  • 3C-NMR (101 MHz, CDCI 3 ): ⁇ 133.51, 128.29, 94.58, 81.20, 74.25, 65.08, 62.44, 51.61, 32.53, 29.55, 29.51, 29.45, 29.31, 29.28, 29.24, 28.97, 28.51, 26.84, 26.38, 24.74.
  • Step 1 On a solution of the 4 or 5 mesylates (2 mmol) in 8 mL of a 1: 1 THF / HMPA (hexamethiphosphotriamide) mixture cooled to -30 ° C, 4.5 mL of a solution was added dropwise 0.5 M of lithium trimethisysilylacetylide in THF (equivalent to 2.25 mmol). The reaction mixture was kept under stirring while slowly heating to room temperature. After consumption of the starting product (about 1 h, by TLC analysis), the reaction was stopped by adding 5 mL of saturated NH 4 Ci solution and the mixture was extracted with hexane (3 x 10 mL). The combined organic extracts were washed with water and brine, dried over anhydrous MgSO 4 and evaporated under reduced pressure to obtain the corresponding intermediate trimethylsilyl acetylides, which were used in the next step without purification.
  • THF / HMPA hexamethiphosphotriamide
  • Step 2 A solution of trimethylsilyl acetylide (1.5 mmol) in anhydrous THF (5 mL) was treated with 2 mL of a 1 M solution of Bu 4 NF in THF under Ar atmosphere. After stirring for 30 min at room temperature, the reaction mixture was treated with H 2 0 (0.5 mL), dried over anhydrous MgS0 4 and evaporated under reduced pressure, obtaining acetylenes 6 and 7.
  • Step 1 A solution of 460 mg (1 mmol) of compound 3a in ethanol (10 mL) was subjected to hydrogenation, at atmospheric pressure, in the presence of 10 mg of 10% Pd / C. After 12 h of stirring at room temperature, the reaction mixture was filtered over Celite and the filtrate obtained was evaporated to dryness to give a crude which was subjected to the following reaction.
  • Step 2 A solution of 100 mg (1.54 mmol) of sodium azide in anhydrous DMF (10 mL) was added, dropwise, over a solution of the crude from the previous reaction in 5 mL of DMF, under Ar atmosphere at room temperature. After the addition, the reaction mixture was heated to 65 ° C and kept under stirring for 12h. Then, the mixture was diluted with 40 mL of water and extracted with Et 2 0 (3 x 15 mL). The organic phases were washed with brine (2 x 10 mL), dried over anhydrous MgSO 4 , filtered and evaporated to give a residue that was purified by flash chromatography (Hexane / EtOAc 7: 3).
  • Step 1 A solution of 0.6 mmol of 6 or 7 and TsOH (12 mg, 0.06 mmol) in MeOH (10 mL) was stirred at 25 ° C for 6 h. After this time, the solvent was removed under reduced pressure and the resulting residue was dissolved in EtOAc The organic solution was washed, successively, with a saturated solution of NaHC03 and brine and dried. Evaporation of the solvent provides a residue that was used directly in the next stage of synthesis.
  • Step 2 A solution of the above crude in 2N NaOH (30 mL) and EtOH (30 mL) was heated at 80 ° C for 3 h. The reaction mixture was then cooled, concentrated, under reduced pressure, to a quarter of the volume and extracted with Et2Ü (3 x 15 mL). The combined organic phases were dried over MgSO 4 , filtered and evaporated to give the corresponding final product.
  • Step 1 A solution of 550 mg (1.30 mmol) of 8 in 30 mL of CH 2 CI 2 was treated with pyridinium chlorochromate (PCC) (420 mg, 1.90 mmol). The reaction mixture was kept under stirring at room temperature for 1 h, after which another 420 mg of PCC was added and kept under stirring for an additional 12 h. Then the reaction mixture was filtered. on Celite and the filtrate was evaporated under reduced pressure to give a crude that was used directly in the next step.
  • PCC pyridinium chlorochromate
  • Step 2 A solution of the above crude in 20 mL of MeOH was treated with 1.2 mL of acetiium chloride at 25 ° C for 6 h. After this time, the solvent was removed under reduced pressure to give the final product as the corresponding hydrochloride.
  • Example I-B A / -f (2S, 3R) -1, 3-dihydroxyoctadecan-2-ylletanosuifonamide
  • Example 1-B 2-Bromo-N - ((2S, 3R) -1, 3-dihydroxyoctadecan-2-yl) acetamide. According to the synthesis procedure described in patent application WO200650264. Example 1.
  • Example 1-B5 A / -f (2S, 3R) -1, 3-dihydroxyoctadecan-2-yl] propioiamide
  • Example 1-B6 A / -r (2S, 3f?) - 1, 3-dihydroxyoctadecan-2-yl1but-2-inamide
  • 3C-NMR (101 MHz, CD 3 OD): ⁇ 141.0, 126.3, 72.5, 62.3, 56.9, 35.0, 33.1, 30.9, 30.8, 30.5, 26.9, 23.8, 18.0, 14.6.
  • Example 1-B A / -f (2S, 3ff) -1, 3-dihydroxyoctadecan-2-yl1methacryamide
  • Example 1-B10 A -r (2S.3R) -N-1.3-dihydroxyoctadecan-2-yl-1-3-methyl-2-butenamide
  • the inhibitory activity of ceramidases by the compounds of the present invention was tested on fibroblasts of a Farber patient transduced for overexpression of ia ceramidase and on the lines of lung cancer A549 (American Type Culture Colection) and prostate cancer PC-3 / Mc.
  • the A549 line was maintained in the middle of HAM F12 supplemented with 2 mM glutamine, the Farber line was grown in DMEM medium and the PC-3 / Mc line was maintained in RPMI1640 medium.
  • the medium is supplemented with 10% serum of bovine fetus, 100 units / mL of penicillin and 10 ⁇ g / mL of streptomycin and the cultures were maintained at 37 O in an atmosphere of 5% CO 2 95% air and a humidity of 90%.
  • the cells were seeded in 96-well plates at a density of
  • the medium was removed and replaced with fresh medium (100 microliters per well) containing the fluorogenic substrate (Bedia et al. Chembiochem 2007, 8, 642) and the inhibitor at a concentration of 16 ⁇ .
  • the substrate can also be added directly without replacing the culture medium. In any case, it was incubated at 37 ° C for 3 hours, the cells were lysed and the enzymatic activity was determined following the procedure described (Bedia et ai. Chembiochem 2007, 8, 642). In some cases, the inhibitor and the substrate were added together and incubated for 3 h before proceeding with the cell's analysis.
  • the inhibitory effect of the compounds on the acidic ceramidase activity of the transduced Farber cells for the overexpression of the acidic ceramidase was determined.
  • the cells were incubated together with substrate and test compound for 3 h and after this time, the enzymatic activity was determined as described above.
  • the compounds I-B2, I-B8, I-B9 and I-B17 were the most active in intact cells, although only I-B2, I-B9 and I-B17 were also active in vitro.
  • the inhibitory effect of the compounds on the acidic ceramidase activity of A549 lung adenocarcinoma cells was determined.
  • the cells were incubated with the test compounds for 24 h and after this time the substrate was added, incubated for 3 h and continued as described above.
  • the compounds ID2, IE2 IF2 IG2 and IH2 they were the most active, presenting an inhibition of the acid ceramidasa superior to 95% with respect to the control.
  • the effect of compounds I-B2, I-9B and I-B17 on the acidic ceramidase activity of PC-3 c prostate cancer cells was determined.
  • the cells were seeded in 96-well plates at a density of 10,000 cells / ml and the test compounds were added 24 hours after seeding.
  • Figure 3 graphically represents the results obtained.
  • Compounds I-B17 and I-B2 cause a clear inhibition of acidic ceramidase activity at all doses used, with greater inhibitory effect at higher doses.
  • the cells were seeded in 6-well plates at a density of 250,000 cells / ml.
  • the compounds were added 24 h after seeding and incubated for different periods of time. After the treatments, the cells were washed with PBS and transferred to glass vials, where lipid extracts were prepared following the procedure described (Merrill et al Methods, 2005, 36, 207).
  • the analyzes were carried out by ultra-liquid liquid chromatography coupled to an accelerated flight time mass detector, which allows the identification of the compounds based on their exact mass, by electrospray ionization in positive mode.
  • the chromatographic and analytical conditions are those described in previous works (Munoz-Olaya et al ChemMedChem, 2008, 3, 946 and Canals et al Bioorg. Med. Chem., 2009, 17, 235).
  • the effects of the inhibitors I-B17, I-B9 and I-B2 on the sphingolipidoma of the prostate cancer cell line PC-3 c are detailed.
  • the sphingolipid content was determined after 48 h of incubation with the inhibitors at two different doses, 1 ⁇ or 5 ⁇ . Ceramides, dihydroceramides, sphingomyelins, dihydrosphingomyelins and glucosylceramides levels were determined.
  • Figure 5 graphically illustrates the changes in the levels of the different sphingolipids after incubating the PC-3Mc cells with the inhibitors.
  • I-B2 treatments caused a significant accumulation of ceramides and dihydroceramides at both 1 ⁇ and 5 ⁇ .
  • Treatment with I-B17 also caused an accumulation of ceramides and dihydroceramides, more pronounced in treatments with an inhibitor concentration of 5 ⁇ .
  • cytotoxicity was determined by measuring mitochondrial dehydrogenase activity with 3- (4,5-dimethithiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) after 24-72 h incubation of the cells with the problem compounds at different concentrations.
  • Figure 6A illustrates the effect of the test compounds on the viability of A549 lung cancer cells and dermal fibroblasts after 24 h of incubation.
  • Figure 6B graphically illustrates the effects of inhibitors I-B17, I-B9 and I-B2 on the viability of PC-3Mc cells after 72 h of incubation.
  • PC-3Mc cells grown in medium with 10% fetal bovine serum, were exposed to the test compounds, at a final concentration of 5 ⁇ .
  • 500 cells were seeded in each well of 96-well plates, allowed to adhere to the plastic for 24 h, followed by treatment with the compounds. Each treatment was performed in triplicate wells.
  • Figure 7 graphically illustrates the effect of incubations with these compounds on cell growth, quantified as the number of cells present at 24 h, 48 h, 72 h, 120 h, 144 h and 168 h of treatment with the compounds.
  • Compounds I-B17 and I-B2 caused an almost total inhibition of the growth of PC-3Mc cells during the first 6 days of treatment.
  • compound I-B9 did not cause significant differences over the number of cells present over 7 days of treatment, compared to control cells, exposed only to the solvent used for the compounds.
  • Example 5 Effect of inhibitors on the formation of cell colonies in semi-solid medium.
  • the ability of PC-3Mc cells to grow forming three-dimensional colonies in semi-suspension was determined.
  • the cells are resuspended at temperatures that preserve cell viability in a complete culture medium containing 0.6% agar, subsequently allowing to solidify at room temperature, on a bed of medium with 3% agar.
  • the cells seeded in this arrangement are incubated for 2 or 3 weeks at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO2 / 95% air and 90% humidity.
  • the problem compounds were added at final concentrations of 1 ⁇ or 5 ⁇ , reacting them with a periodicity of 3 days, coinciding with the addition of new culture medium.
  • the colonies are fixed with 0.5% glutardehyde, stained with violet crystal and visualized under a microscope.
  • the colonies of a diameter greater than or equal to 0.2 mm is provided with the ImageJ 1.43u program (NIH, USA).
  • Figure 8 illustrates how, at the concentration of 1 ⁇ , none of the compounds affected the ability of PC-3Mc cells to form colonies, while at 5 ⁇ , compounds I-B17 and I-B2 inhibit colony formation below 25% compared to the control.
  • Example 6 Effect of inhibitors on cell invasiveness.
  • the test known as invasiveness in Boyden chambers was used.
  • the commercial version that has been used of these chambers is called Transweli (from the Corning house), and consists of relatively inert polyester membranes, with pores of 8.0, Lim, placed in a plastic support that is inserted into 96-well plates. wells. These membranes are coated with components of the extraceiular matrix (Matrigel Growth Factor Reduced, from Becton-Dickinson).
  • the cells are deposited with medium lacking fetal bovine serum in the upper chamber, and the same medium is placed in the lower chamber (the 96-well plate well). Invasion of the cells from the upper chamber into the lower chamber is allowed for 48 hours under the usual culture conditions described in previous examples.
  • PC-3Mc cells were treated with the test compounds at a final concentration of 5 ⁇ during the 48 hours prior to the invasiveness test. After that treatment time, the cells were detached from the culture plates by incubation with tripisin (25 units / mL) and EDTA (0.1 mM) for 5 minutes, resuspended in complete medium, and seeded on the upper chambers of the Transweli inserts. previously covered with Matrigel to a concentration of 10 mg / mL. The test compounds were added to both the upper and lower chamber, at a concentration of 5 mM, this treatment being maintained throughout the entire duration of the test. Each condition was performed in triplicate. Figure 9 illustrates how, under these conditions, both I-B17 and I-B2 significantly inhibit the invasiveness of PC-3Mc cells.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) o un estereoisómero, una sal o un soívato, donde: A es -CH(OH)- o -C(=0)-, Z es H o OH, n es 0 o 1, R1es alquilo(C1-C3o), alquenilo(C2-C30) o alquinilo(C2-C30), B es -H, -N3 o -CΞCH, R2 es -NHR3 o maleimida, R3 es -COR4, -COCOR4 o -SO2R4, R4 es alquilo(C1-C16), alquenilo(C2-C16), alquinilo(C2-C16), epóxido o aziridina; con la condición de que: a) cuando A es -CH(OH) y B es H, R3 es diferente de -COR4 siendo R4 aiquilo(C1-C16); b) cuando A es -CH(OH), B es H,y R3 es -COCOR4 siendo R4 alquilo(C6), R1 es diferente de -CH=CH2-alquilo(C12), -CΞCH-alquilo(C12) o aiquilo(C13-C15); o c) cuando A es -C(=O), R1 es alquenilo(C2-C30), B es H y n es 0, R3 es diferente de -COR4 siendo R4 alquilo(C1C16). Uso del compuesto de fórmula (I), 2,2-dibromo-N-((2S,3R)-1,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamida o 2-bromo-N-((2S,3R)-1,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamida en el tratamiento o prevención de una enfermedad que cursa con hiperproliferación celular, solo o en combinación.

Description

Amidas de 2-amino-1,3-propanodioies y su uso como inhibidores de ceramidasas
ESTADO DE LA TÉCNICA
Las ceramidasas son hidrolasas que catalizan la hidrólisis de las ceramidas en esfingosina y ácidos grasos en mamíferos, bacterias y hongos. Según su pH óptimo, las ceramidasas se agrupan en ácidas, neutras y alcalinas. Hasta ia fecha, se han clonado y expresado de forma funcional cinco ceramidasas distintas: la ceramidasa ácida, ia neutra y tres alcalinas.
Existen evidencias que ponen de manifiesto ei papel importante que desempeñan las ceramidasas, especialmente la ceramidasa ácida, en el desarrollo y la progresión del cáncer, así como en la respuesta de los tumores a la terapia. La ceramidasa ácida está sobreexpresada en diversas líneas celulares y tejidos cancerosos, io que parece contribuir a la disminución de los niveles de ceramida y al aumento de los de esfíngosína-1 -fosfato, con el consiguiente aumento de la proliferación celular y resistencia a la muerte celular. En muchos casos, la inhibición de la ceramidasa ácida conduce a apoptosis. En numerosos trabajos se confirma la relación entre el aumento de la actividad ceramidasa ácida y la resistencia a la radío y quimioterapia, así como el interés del uso de inhibidores de la ceramidasa ácida como fármacos anticancerosos, tanto solos como en combinación con otras terapias. En células de glioblastoma resistentes a la radiación se observaron niveles elevados en la expresión de ceramidasa ácida. El tratamiento de dichas células con /V-oleoíletanolamina aumentó su sensibilidad frente a la radiación, con el consiguiente aumento de los niveles de ceramida, activación de caspasas y apoptosis.
Respecto a ía ceramidasa neutra, no se ha examinado con tanto detalle su papel en el cáncer. Sin embargo, Wu y col [Biochim Biophys Acta 2009, 1791, 730-739] comprobaron que la disminución de actividad ceramidasa neutra inducida por gemcitabína da fugar a una parada de cicio celular en la fase G(0)/G(1 ) en un tipo particular de células endoteliales murinas. Por último, el aumento de la muerte celular inducida por el inhibidor de la ceramidasa neutra DMAPP es otro de ios ejemplos que sustancia el papel de la ceramidasa neutra en el desarrollo y progresión del cáncer.
La búsqueda de inhibidores de la ceramidasa ácida ha recibido una mayor atención dado su interés como posibles fármacos antiproliferativos y citostáticos en la quimioterapia del cáncer. Uno de los primeros inhibidores descritos fue la /V-oleoíletanolamina, usado solamente como herramienta farmacológica, puesto que su escasa potencia hace inviable su uso terapéutico. Se ha descrito que la /V-oleoiletanoiamina inhibe las ceramidasas neutra y alcalina de queratinocitos, así como la glucosilación de ias ceramidas naturales en células CHP-100 de neuroepítelíoma a concentraciones no tóxicas, proceso que va acompañado de un aumento de ceramidas y la inducción de la apoptosis.
El compuesto B13 ((1 R,2R)-2-(/V-tetradecanoílamino)-1-(4-nitrofenil)-1 ,3- propanodíol) es otro inhibidor de la ceramidasa ácida. Es selectivo de esta ceramidasa, ya que no modifica la actividad de ias ceramidasas neutra y alcalinas. El B13 induce la acumulación de ceramida y la muerte de células SW403 (adenocarcinoma humano), meianoma, y células LNCaP de próstata. Además, el B13 previene el crecimiento de tumores in vivo y sensibiliza tumores de próstata frente a ia apoptosis inducida por radiación. Puesto que el B13 es una molécula neutra y lipófiía, no es muy adecuada para alcanzar y acumularse en el lisosoma, el compartimento ácido en el que se encuentra la ceramidasa ácida. Por ello, se han diseñado diversos análogos estructurales con objeto de mejorar la capacidad de alcanzar la diana biológica. De estos trabajos han surgido tres familias de análogos con diferente especificidad respecto al orgánulo íntracelular: a) alquilaminas lísosomotrópicas (por ejemplo, LCL204); b) análogos catiónicos mitocondriotrópicos (como el LCL85); c) análogos neutros sin selectividad respecto al compartimiento en el que se acumulan (LCL15). Entre los análogos lísosomotrópicos, el LCL204 es capaz de localizarse selectivamente en lisosomas y de inducir apoptosis en células de cáncer de próstata y apoptosis inducida por Fas en células escamosas de cáncer. Sin embargo, el LCL204 (o AD2646) provoca la desestabilización lisosomal y una rápida degradación, dependiente de catepsina, de la ceramidasa acida, lo que sugiere una falta de especificidad tumoral. Un efecto similar ha sido descrito para la desipramina, que es capaz de disminuir la actividad de la ceramidasa ácida por estimulación de su degradación proteolítica dependiente de catepsina, así como para otros compuestos anfifílicos (cloropromazina, cioroquina), aunque no para otros agentes lísosomotrópicos (cloruro amónico, bafilomicina A1 ).
Se ha descrito una nueva generación de inhibidores lisosomotrópicos de la ceramidasa ácida desprovistos de la capacidad desestabilizadora del íisosoma del LCL204. Este tipo de inhibidores muestran un grupo ω-aminoacilo junto con ia combinación de elementos estructurales del B13 y del LCL204 (AD2646). Dentro de este grupo destacan el LCL464, capaz de inhibir la ceramidasa ácida tanto in vivo como in vitro, pero sin capacidad para inducir su degradación proteolítica. Además, el compuesto LCL464 provoca un aumento de la apoptosis dependiente de caspasas en diversos tipos de cáncer.
De forma paralela al desarrollo de análogos del B13, se introdujeron modificaciones estructurales similares en la estructura del DMAPP. Este es un compuesto utilizado frecuentemente por sus propiedades inhibidoras de las ceramidasas neutra y alcalinas, tai y como se indica en el trabajo de [Bielawska y col Bioorganic and Medicinal Chemistry 2007, 16, 1032-1045]. Se han publicado estructuras de análogos de ceramidas diferentes a los compuestos de la presente invención como moduladores de la apoptosis (Chang et al., J Am Chem Soc. 2002 124, 1856-1857), inhibidores de la producción de interleuquina 4 (Park et al. Bioorg Med Chem. 2005, 13, 2589- 2595.) e inhibidores de la activación de la protein quinasa C para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el sistema nervioso (US5519007). La solicitud de patente WO200650264 describe conjugados de ceramidas con sales de piridinio y su uso en el tratamiento del cáncer. Esta solicitud de patente también describe el compuesto I-B2 (2-bromo-N~((2S,3R)- 1 ,3-dihidroxiheptadecan-2-yl)acetamida) como un intermedio para ia obtención de los compuestos para el tratamiento de cáncer. Sin embargo, este documento del estado de la técnica no divulga que el compuesto I-B2 pueda utilizarse como anticancerigeno. Otras patentes describen otros análogos de ceramidas diferentes a los de la presente invención como inhibidores de ceramidasas (WO2003005965 y WO2005051891 ), para el tratamiento del cáncer (EP1580187) y para uso en el tratamiento de la inflamación (WO2004064823).
Se han descrito 3-cetoamidas de cadena de N-acilo de corta longitud con capacidad de inducir apoptosís en células de leucemia (Azuma et al. Bioorg Med Chem. 2007, 15, 2860-2867).
También se han publicado diversas famiiias de inhibidores de la ceramidasa ácida con estructura de análogos de ceramidas o de aminoetanoles sustituidos en C2 [Bedia et al., Org. Biomol. Chem. 2005 3, 3707-12. Grijalvo et al., Chem. Phys. Lipids. 2006 144, 69-84. Bedia et al., Chem. Phys. Lipids. 2008 156, 33-40]. Una de estas familias posee estructura de tioéter, aunque presenta poca actividad citotóxica frente a células tumoraíes.
Descripción de la invención
La presente invención proporciona nuevos derivados de ceramida ácida. Así mismo, la presente invención también proporciona una familia de compuestos con actividad antiproliferativa y citotóxica mediante la inhibición de la actividad ceramídasa ácida. En particular, la presente invención proporciona una familia de compuestos para el tratamiento del cáncer.
En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000007_0001
) o un estereoisómero, una sai o un solvato farmacéuticamente aceptable de éste; donde:
A se selecciona entre -CH(OH)- y -C(=0)-,
Z se selecciona entre H y OH,
n es un número entero seleccionado entre 0 y 1 ,
R-i se selecciona entre aíquilo(CrC3o), alquenilo(C2-C3o), y alquiniío(C2- C3o),
B se selecciona entre -H, -N3 y -C CH,
R2 se selecciona entre -NHR3 y maleimida, donde
R3 se selecciona entre -CO-R4, -CO-CO-R4 y -SO2-R4, donde
R4 se selecciona entre alquilo(Ci-Ci6), alquenilo(C2-Ci6), alquinilo(C-2~ Ci6), epóxído y aziridina, donde los grupos alquilo, alquenilo o alquiniio de R1 y R4 pueden estar, independientemente, opcionalmente sustituidos por uno o varios sustituyentes elegidos independientemente entre halógeno, OH, OR, OCF3, NH2, NO2, NRR', NHCOR; CONRR , CHO, COOH, COOR, OCOR y CN, donde R y R' son alquilo o alquenilo; con la condición de que
a) cuando A es -CH(OH) y B es H, R3 es diferente de -COR4 siendo R4 alquilo(CrCi6) sin sustituir o sustituido por halógeno o hidroxilo;
b) cuando A es -CH(OH), B es H y R3 es -COCOR4 siendo R4 alquilo- Ce, R1 es diferente de -CH=CH2- alquilo(Ci2), -C≡CH-aiquilo(Ci2) o alquilo(Ci3-Ci5); o
c) cuando A es -C(=O), R1 es alquenilo(C2-C3o), B es H y n es 0, R3 es diferente de -COR4 siendo R4 alquílo(CrCi6).
El término "alquilo" se refiere, en la presente invención, a radicales de cadenas hidrocarbonadas no cíclicas, lineales o ramificadas, que se unen al resto de la molécula medíante un enlace sencillo, por ejemplo, metilo, etilo, n- propilo, /-propilo, n-butilo, ferc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexiio, decilo o dodeciio. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, azido, alcoxilo, carboxilo, carbonita, ciano, carbaldehido, alcoxicarbonilo, amino o nitro.
El término "alquenilo" se refiere a radicales de cadenas hidrocarbonadas no cíclicas, lineales o ramificadas, que contienen uno o más enlaces carbono-carbono dobles, preferentemente contiene un único doble enlace carbono-carbono, y que están unidos al resto de la molécula por un enlace simple, por ejemplo, vinilo, 1-propeniio, alilo, isoprenilo, 2-butenilo o 1 ,3-butadíenilo. Los radicales alqueniíos pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, azido, alcoxilo, carboxilo, carbonilo, ciano, carbaldehido, alcoxicarbonilo, amino o nitro. Eí término "alquínilo" se refiere a radicales de cadenas hidrocarbonadas no cíclicas, lineales o ramificadas, que tienen uno o más tripies enlaces carbono-carbono, preferentemente contiene un único triple enlace carbono- carbono, y que están unidos ai resto de la molécula por un enlace simple por ejemplo, etinüo o 1-propinílo. El grupo alquinilo puede estar opcionaimente sustituido por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, azido, alcoxilo, carboxiio, carbonüo, ciano, carbaldehido, alcoxicarbonílo, amino o nitro. Algunos de los compuestos de formula (I) de ia presente invención pueden tener uno o más centros estereogénicos. La presente invención abarca todos los posibles estereoisómeros no sólo sus mezclas racémicas sino también sus isómeros ópticamente activos. La obtención de un único enantiómero puede conseguirse mediante alguno de los procedimientos comúnmente empleados, por ejemplo, por resolución de ia mezcla racémica medíante técnicas de recristaiización, síntesis quíraí, resolución enzimática, biotransformación o resoiución cromatográfica.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal que conserva una eficacia y propiedades biológicas similares a la base libre o dei ácido libre y que no es molesta en sentido biológico ni en ningún otro.
Las sales farmacéuticamente aceptables pueden incluir ias sales de adición de ácidos, tales como mesilatos, fumaratos, clorhidratos, citratos, maleatos o tartratos. También pueden formarse sales fisiológicamente aceptables con ácidos inorgánicos como son los ácidos sulfúrico o fosfórico. Asimismo, pueden formarse sales de tipo básico de un metal alcalino, como por ejemplo el sodio, o de un metal alcalinotérreo, por ejemplo calcio o magnesio. Puede haber más de un catión o anión dependiendo del número de funciones con carga y de la valencia de los cationes y aniones. El término "solvato" en la presente solicitud de patente significa un agregado resultante de la asociación iónica o molecular entre moléculas de uno o más solventes y moléculas de uno de los compuestos objeto esta invención. El solvato puede comprender, por ejemplo, moléculas de agua, alcoholes, cetonas, acetatos o mezclas. En particular, el solvato puede comprender moléculas de agua, etanol, isopropanol, acetona o mezclas. Los solvatos objeto de la presente invención se pueden obtener por métodos conocidos por un experto en la materia, por ejemplo, por cristalización en condiciones controladas.
De acuerdo con una realización preferente, el compuesto de fórmula (I) de la presente invención se caracteriza porque Ri se selecciona entre alquilo(CrC30) y alquenilo(C2-C30), preferentemente R se selecciona entre alquilo(C C3o) y alquenílo(C2-C3o) sin sustituir, más preferentemente Ri se selecciona entre alquilo(C8-Cie) y alqueniio(C8-Ci6) sin sustituir.
De acuerdo con una realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente se caracteriza porque n puede ser igual a cero.
De acuerdo con otra realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente se caracteriza porque R3 es -CO-R4, donde R4 puede ser alquilo(CrCi6), y B se puede seleccionar entre -N3 y -CECH.
Preferentemente, R4 puede ser un alquilo(Ci-Ci6) sustituido con al menos un átomo de halógeno, más preferentemente el halógeno puede ser un átomo de flúor o bromo, aún más preferentemente el halógeno es bromo. De forma aún más preferente, R4 puede ser un alquílo(Ci-C5) sustituido con al menos un átomo bromo. De acuerdo con otra realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente caracterizado porque R3 es -CO-R4, donde R4 puede ser aiquilo(Ci-Ci6), y donde B se puede seleccionar entre -N3 y -CECH tal como se ha indicado anteriormente, también se caracteriza porque A es -C(=0).
Preferentemente, R4 puede ser un alquilo(CrC 6) sustituido con al menos un átomo de halógeno, más preferentemente el halógeno puede ser un átomo de flúor o bromo, aún más preferentemente el halógeno es bromo.
De forma aún más preferente, R4 puede ser un alquílo(Ci-C5) sustituido con al menos un átomo bromo. De acuerdo con otra realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) objeto de ía presente solicitud de patente se caracteriza porque R3 es -CO-R4, donde R4 puede ser epóxido.
Preferentemente, eí compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente donde R3 es -CO-R4, donde F puede ser epóxido, también se caracteriza porque n puede ser 1 y Z puede ser OH.
De acuerdo con otra realización preferente adicional, ei compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente se caracteriza porque R3 es -CO-R4, donde R4 puede ser aiquenilo(C2-C e) o alquiniio(C2-C e).
Preferentemente, R4 puede ser un aiquenilo(C2-Ci6) sustituido con al menos un átomo de halógeno, más preferentemente, R4 puede ser un alqueniio(C2-Ci6) sustituido con al menos un átomo de flúor o bromo, de forma aún más preferente R4 puede ser un alquenilo(C2-Ci6) sustituido con al menos un átomo de bromo. De acuerdo con otro modo de realización especialmente preferente, el compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente se caracteriza porque R3 es -CO-R4, donde R4 es alquenilo(C2-Ci6) o aíquínilo(C2-Ci6), y puede estar sustituido por a! menos un grupo -CHO o - COOH.
De acuerdo con otra realización preferente adicional, el compuesto de fórmuia (I) objeto de ia presente solicitud de patente se caracteriza porque f¾ es -CO-CO-R4, donde R4 puede ser alquilo(CrCi6) y B se puede seleccionar entre -N3 y -CECH.
De acuerdo con otra realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente se caracteriza porque R3 puede ser -SO2-R4, donde R4 se puede seleccionar entre alquilo(Ci-Ci6), alquenilo(C2-Ci6), alquinilo(C2-C e), epóxido y aziridína . Preferentemente R4 puede ser alquiio(CrCi6), más preferentemente alquilo(C C8).
De acuerdo con otra realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente se caracteriza porque R3 puede ser -SO2-R4, donde R4 se puede seleccionar entre alquilo(CrCi6), alquenilo(C2-Ci6), aiquinilo(C2-Ci6), epóxido y aziridina, n puede ser 1 y Z puede ser OH. Preferentemente R4 puede ser alquilo(Ci-Ci6), más preferentemente alquilo(d-C8).
De acuerdo con otra realización preferente adicional, ei compuesto de fórmula (I) objeto de la presente solicitud de patente se caracteriza porque R2 puede ser maieimida. De acuerdo con otro modo de realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido anteriormente se selecciona de la lista que consiste en:
1- [(2S,3R)-1 ,3-díhidroxioctadecan-2-il]-1 W-pirrol-2,5-díona,
A/-[(2S,3R,E)-1 ,3-díhídroxioctadec-4-en-2-íl]etanosulfonamida,
N-[(2S,3 :?)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il]etanosulfonamida,
A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxíoctadec-17-in-2-íl]etanosulfonamida,
A/-[(2S,3R)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradecan-2-ii)etanosulfonamida,
2- bromo-/V-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadec-17-in-2-il]acetamida,
A/-[(2S,3f?)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradecan-2-il]bromoacetamida,
N-[(2S,3R, E)- 14-azido- 1 , 3-d i h id roxitetradec-4-en-2-i l]bromoacetam ida , 2-bromo-A/-[(2S,3R,£)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-17-in-2-il]acetamida,
(S)-/V-(14-azido-1-hidroxi-3-oxotetradecan-2-ii)-2-bromoacetamida,
(RS)-A/-[(2S,3R,E)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-2-il]oxirano-2-carboxamida, (RS)-A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ii]oxirano-2-carboxamida,
(RS)-/V-[(2S,3R,E)-1 ,3-dihídroxioctadec-4-en-17-in-2-íl]oxírano-2- carboxamida,
(RS)-A/-[(2S,3R)-14-azido-1 ,3-díhídroxitetradecan-2-íl]oxírano-2-carboxamída, A/-[(2S,3f?)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il]propiolamida,
/V-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxíoctadecan-2-íl3but-2-inamida,
A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il3acrilamida,
(£)-/V-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ii]-2-butenamida,
A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihídroxioctadecan-2-il3metacrílamida,
N-[(2S,3 :?)-N-1 ,3-dihidroxyoctadecan-2-il]-3-metil-2-butenamida,
(2E,4E)-N-[(2S,3R)-1 ,3-díhidroxioctadecan-2-il]hexa-2,4-dienamida,
Ácido (E)-4-[(2S,3/:?)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-iiamino]-4-oxo-2-butenoico, (Z)-2,3-dibromo-N-[(2S,3/:?)-1 ,3-dihidroxíoctadecan-2-íl3-4-oxo-2-butenamida, (2S,3R)-2-(bromometii)-N-(1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acrilamida,
(E,2S,3R)-/V-(1 ,3-díhidroxi-2-octadecil)-2-metíl-2-butenamída,
(2S,3R)-N-(1 ,3-dihidroxi-17-octadecin-2-il)-2-oxooctanamida y
(2S,3R)-N-(14-azido-1 ,3-dihidroxi-2-tetradecií)-2-oxooctanamída,
o un estereoisómero, una sal o un soivato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos . Preferentemente, el compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido anteriormente en esta solicitud de patente se selecciona de la lista que consiste en:
2-bromo-A/-[(2S,3R)-1 ,3-díhidroxioctadec-17~in-2-il]acetamida,
A/-[(2S,3R)-14-azido-1 ,3-dihídroxitetradecan-2-íi]bromoacetamida,
A/-[(2S,3R,E)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradec-4-en-2-il]bromoacetamida,
2-bromo-/V-[(2S,3R,E)-1 ,3-dihidroxíoctadec-4-en-17-ín-2-il]acetamida y
(S)-A/-(14-azído-1-hidroxí-3-oxotetradecan-2-il)-2-bromoacetamída,
o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos.
De acuerdo con otro modo de realización preferente adicional, el compuesto de fórmula (I) cuando n es 1 tal como se ha definido anteriormente se selecciona de la lista que consiste en:
A/-[(2S,3S,4R)-1 ,3,4-tríhídroxioctadecan-2-il]etanosulfonamida y
(RS)-N-[(2S,3S,4R)-1 ,3,4-trihidroxioctadecan-2-il]oxirano-2-carboxamida, o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos.
Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse siguiendo distintos métodos conocidos para cualquier persona experta en el campo de la síntesis orgánica, en particular por los procedimientos generales que se describen a continuación. Los materiales de partida están disponibles comercialmente o bien se pueden preparar mediante métodos de la literatura.
Los compuestos de fórmula (I) pueden obtenerse a partir de los métodos y esquemas descritos a continuación: Esquema 1.
Figure imgf000015_0001
a: Cat. Grubbs (segunda generación); b: 1 ) H2, Pd/C; 2) NaN3/DMF; c: NaN3/DMF; d: NaH/THF; e: 1 ) Li-C≡C-TMS; 2) Bu4NF; f: HCI/MeOH; g: 1 ) cat. TsOH/MeOH; 2) NaOH/EtOH; h: 1 ) PCC/CH2CI2; 2) cat. TsOH/MeOH.
En primer lugar, se hace reaccionar el compuesto 1 (Herold, Helv. Chim. Acta. 1988, 71, 354-62) con una oiefina terminal (como, por ejemplo, 2a o 2b) en una reacción de metátesis cruzada en presencia del catalizador de Grubbs de segunda generación, (Schmidt, Angew. Chem. Int. Ed. 2003, 42, 4996-9) obteniéndose los compuestos 3. Por hídrogenación del intermedio 3a seguida de sustitución nucleófila del átomo de bromo por azida sódica se llega a los intermedios 8, que por hidrólisis de los grupos protectores conducen a los aminodíoles H-E. Por otra parte, por oxidación de 8 y posterior hidrólisis de los grupos protectores se obtienen las aminas ll-H. Para obtener las aminas ll-F, ei bromoderivado 3a se hace reaccionar con azida sódica en dimetilformamida, obteniéndose 3c, seguido de hidrólisis ácida del anillo de oxazolidina y del grupo Boc. Mediante reacción de los intermedios 3b con hídruro de sodio en dimetilformamida se obtienen los mesílatos 4, que pueden hidrogenarse a 5. Mediante reacción de 4 ó 5 con trimetilsililacetiluro de litio seguida de desproteccíón del acetíluro con fluoruro de tetrabutilamonio se obtienen los alquinos terminales 6 y 7, respectivamente. Su transformación en las correspondientes aminas IIG y IID se consigue mediante hidrólisis secuencial de los grupos isopropilideno y carbamato.
Los anteriores amino alcoholes, asi como la esfingosína o la dihidroesfingosina, pueden acilarse por reacción con un cloruro de ácido en presencia de una base. Alternativamente, también puede emplearse un anhídrido de ácido, como el anhídrido maleico, o un ácido carboxílico en presencia de un agente de acoplamiento adecuado como, por ejemplo, la 1- etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) , la Ν,Ν'- díisopropilcarbodiimida (DIC), el hexafluoro fosfato de O-(7-azabenzotriazol-1- il)-/V,A/,A/'A/'-tetrametiluronio (HATU) o el benzotriazol-1-iloxi-tris pirroiidinofosfonío (PyBOP) y un activador como el 1 -hidroxibenzotriazol (HOBt), en presencia de una base como trietilamína, en un disolvente como diciorometano y bajo atmosfera inerte (E. Vaieur, et al.,Chem Soc Rev 2009, 38, 606-31 ) Las sulfonamidas pueden prepararse por acoplamiento de las aminas correspondientes con cloruro de etanosuifonilo en disolución de tetrahídrofurano.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula general (I) o uno de sus estereisómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables tal como se define en esta solicitud de patente y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Preferentemente, ia composición farmacéutica se puede presentar en una forma adaptada a la administración parenteral, oral, sublingual, nasai, intratecai, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada. De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, tanto el compuesto de fórmula general (I) o un estereoisómero, una sal o un soivato farmacéuticamente aceptable de éste tal como se ha definido en la presente solicitud de patente, como un compuesto elegido entre 2,2-dibromo-N- ((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamida y 2-bromo-N-((2S,3R)-1 ,3- dihidroxioctadecan-2-il)acetamida o un estereoisómero, una sal o un soivato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos son útiles para el tratamiento de una enfermedad asociada con la inhibición de la ceramidasa ácida, y por lo tanto son útiles en el tratamiento y/o prevención de una enfermedad que cursa con híperproliferación celular.
De acuerdo con otro aspecto adicional de la presente invención, tanto las composiciones de un compuesto de fórmula general (I) o un estereoisómero, una sai o un soivato farmacéuticamente aceptable de éste tal como se ha definido en la presente solicitud de patente, como fas composiciones que comprenden un compuesto que se puede elegir entre 2,2- dibromo-N-((2S,3R)-1 ,3-díhídroxioctadecan-2-il)acetamida y 2-bromo-N- ((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamída o un estereoisómero, una sai o un soivato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, son útiles para el tratamiento y prevención de una enfermedad que cursa con híperproliferación celular.
Preferentemente, el compuesto o composición para utilizar en el tratamiento o prevención de una enfermedad que cursa con híperproliferación celular tal como se han definido anteriormente en la presente solicitud de patente, se puede utilizar para el tratamiento de una enfermedad elegida entre cáncer, metástasis, inflamación, asma y arteriesclerosis.
De forma más preferente, el compuesto o composición para utilizar en el tratamiento o prevención de una enfermedad que cursa con hiperproliferación celular tal como se han definido en la presente solicitud de patente, se puede utilizar en el tratamiento del cáncer de próstata, páncreas, cerebro, colon, pulmón, mama, cabeza y cuello, ovario, laringe, vejiga urinaria, útero, piel, sarcomas, línfomas o leucemia. Preferentemente, cáncer de próstata o pulmón.
La presente invención también se refiere a un método para la prevención o el tratamiento de un individuo que padece o es susceptible de padecer enfermedad que cursa con hiperproliferación celular, en particular el tratamiento del cáncer y más preferentemente el tratamiento del cáncer de próstata o pulmón, que comprende la administración a dicho individuo de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo junto con cantidades suficientes de excipientes farmacéuticamente aceptables.
La presente invención también se refiere al uso tanto de un compuesto de fórmula general (I) o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de éste tal como se ha definido en la presente solicitud de patente, como al uso de un compuesto elegido entre 2,2-dibromo- N-((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamída y 2-bromo-N-((2S,3R)-1 ,3- dihidroxioctadecan-2-il)acetamida o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos, para fabricar una composición farmacéutica útil en el tratamiento de una enfermedad asociada con la inhibición de la ceramidasa ácída, y por lo tanto útil en el tratamiento y/o prevención de una enfermedad que cursa con hiperproliferación celular. Preferentemente, dicha composición se puede utilizar para el tratamiento de una enfermedad eiegida entre cáncer, metástasis, infiamación, asma y arteriesclerosis. De forma más preferente, la composición tai como se ha descrito anteriormente se puede utilizar en el tratamiento del cáncer de próstata, páncreas, cerebro, colon, pulmón, mama, cabeza y cuelio, ovario, laringe, vejiga urinaria, útero, piel, sarcomas, linfomas o leucemia. Preferentemente, cáncer de próstata o pulmón.
Los compuestos usados en la presente invención pueden usarse solos o con otros fármacos para proporcionar una terapia de combinación. Los otros fármacos pueden formar parte de ia misma composición, o se pueden suministrar en forma de composición separada para la administración al mismo tiempo o en un momento diferente. Así, de acuerdo con otro aspecto adicional de la presente invención, un compuesto de fórmula genera! (I) tal como se ha definido en la presente solicitud de patente o un compuesto elegido entre 2,2-díbromo-N-((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamida y 2-bromo-N-((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ií)acetamída o un estereoisómero, una sal o un soivato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos, se puede utilizar en combinación con otra terapia para el tratamiento de una enfermedad tal como se ha definido anteriormente.
De acuerdo con otro aspecto adicional de la presente invención, la composición de un compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido anteriormente en la presente solicitud de patente o la composición que comprende un compuesto elegido entre 2,2-dibromo-N-((2S,3R)-1 ,3- dihidroxioctadecan-2-il)acetamida y 2-bromo-N-((2S,3R)-1 ,3- dihidroxioctadecan-2-il)acetamída o un estereoisómero, una sai o un soivato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos y al menos un excipiente, se puede utilizar en combinación con otra terapia para el tratamiento de una enfermedad tal como se ha definido anteriormente.
Otros tipos de terapia pueden ser quimioterapia o radioterapia. A título de ejemplo, los agentes terapéuticos pueden ser tamoxífen, daunorubicina, etoposido, pacíitaxel, dacarbacida, temozoíomída, temsirolimus, fenretínida, resveratrol, borinostat, sorafenib, imatinib, bortezomib, gemcitabina o cispiatin.
A io largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para ios expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de ía práctica de ía invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1. Efecto de los compuestos sobre la actividad ceramídasa ácida. Los ensayos se efectuaron sobre células de Farber transducidas para que sobreexpresen la ceramidasa ácida, ya sea intactas (barras blancas) o en lisados (barras grises). La incubación se llevó a cabo añadiendo conjuntamente el inhibidor (16 μΜ) con el sustrato fiuorogénico (16 μΜ) durante 3 h. A continuación se procedió tal como se detalla en el ejemplo 1 del apartado de ejemplos de ensayos biológicos (Bedia et al. Chembiochem 2007, 8, 642). El eje y indica el porcentaje de actividad enzimática respecto al control.
Figura 2. Efecto de los compuestos sobre la actividad ceramidasa ácida. Los ensayos se efectuaron sobre células de adenocarcinoma de pulmón humano A549. Las células intactas se incubaron con el inhibidor (16 μΜ) durante 24 h y luego se añadió el sustrato fiuorogénico (16 μΜ), que se incubó durante 3 h. La hidrólisis se determinó midiendo la fluorescencia generada después de proceder tal como se indica en ei ejemplo 1 dei apartado de ejemplos de ensayos biológicos (Bedia et al. Chembíochem 2007, 8, 642). El eje y índica el porcentaje de actividad enzimática respecto al control.
Figura 3. Efecto de ios compuestos I-B2, I-B17 e I-B9 sobre la actividad ceramidasa ácida de las células de cáncer de próstata PC-3Mc. Los ensayos se efectuaron por incubación de las células con el inhibidor. Las células se sembraron en placas de 96 pocilios a una densidad de 10.000 células/ml y los compuestos se añadieron 24 h después de la siembra. Se usaron tres dosis de cada inhibidor, 1 μΜ, 5 μΜ y 10 μΜ, en incubaciones durante 48 h y los ensayos se realizaron por triplicado. Tras este período de incubación, se eíimínó el medio y se añadió medio fresco conteniendo el eí sustrato fluorogénico (16 μΜ) y se incubó durante 3 h. La hidrólisis se determina midiendo la fluorescencia generada después de proceder tal como se índica en el ejemplo 1 del apartado de ejemplos de ensayos biológicos (Bedia et al. Chembíochem 2007, 8, 642). Eí eje y indica el porcentaje de actividad enzimática respecto al control. Figura 4. Efecto de los compuestos sobre el ceramidoma. Los ensayos se efectúan sobre células de adenocarcinoma de pulmón humano A549. Las céluías intactas se incubaron con el inhibidor (16 μΜ) durante 24 h y íuego se recolectaron las células y se procesaron tal como se detalla en ei ejemplo 2 de ejempíos de ensayos biológicos.
Figura 5. Efecto de los compuestos I-B2, I-B17 e I-B9 sobre el esfingolipidoma de ias células de cáncer de próstata PC-3Mc. Los ensayos se efectuaron por incubación de las células con los compuestos. Las células se sembraron en placas de 6 pocilios a una densidad de 250.000 células/ml y los compuestos se añadieron 24 h después de la siembra. Se usaron tres dosis de cada inhibidor, 1 μ , 5 μΜ y 10 μΜ, en incubaciones durante 48 h y los ensayos se realizaron por triplicado. Se usaron tres dosis de cada compuesto, 1 μΜ, 5 μΜ y 10 μΜ, en incubaciones durante 48 h. Tras este período de incubación, se elimina el medio se recolectan las células y se procesan tal como se detalla en el ejemplo 2 de ejemplos de ensayos biológicos. A, ceramidas; B, dihidroceramídas; C, esfingomieiinas; D dihidroesfingomielinas; E, glucosilceramidas.
Figura 6. Efecto de los compuestos sobre la viabilidad de las células de A, adenocarcinoma de pulmón A549 (negro) y de leucemia Jurkat A3 (gris) y B, cáncer de próstata PC3/Mc. Las células se sembraron a una densidad de 200.000 células por mililitro y, 24 h después de la siembra, se incubaron con los compuestos durante 24 h (A) o 72 h (B), tras las cuales se determinó el número de células viables medíante el ensayo de reducción del MTT, tal como se específica en el ejemplo 3 de ejemplos de ensayos biológicos. El eje y índica el porcentaje del numero de células respecto al control.
Figura 7. Efecto de los compuestos sobre el crecimiento de las células PC- 3Mc sobre sustrato plástico. Se sembraron 500 células en cada pocilio de placas de 96 pocilios, dejándose adherir al plástico durante 24 h, seguido de tratamiento con los compuestos a una concentración final de 5 μΜ. El efecto de las incubaciones con estos compuestos sobre el crecimiento celular de determinó cuantificado el número de células presentes a las 24 h, 48 h, 72 h, 120 h, 144 h y 168 h después del tratamiento con los compuestos. El eje y índica la proporción relativa del número de células respecto al día 1 y el eje x se refiere al tiempo (t) en días.
Figura 8. Efecto de los inhibidores sobre la formación de colonias celulares en medio semísóíido. Las células PC-3Mc, sembradas en medio de cultivo completo que contiene agar al 3%, se trataron con los compuestos problema a concentraciones finales de 1 μΜ o 5 μΜ, reañadiéndolos con una periodicidad de 3 días, coincidiendo con la adición de medio de cultivo nuevo. El número de colonias se contó 3 semanas después del tratamiento. El eje y indica el número de colonias (N° Col.)
Figura 9. Efecto de ios inhibidores sobre la invasividad celuiar. Las células PC-3Mc fueron tratadas con los compuestos problema a una concentración final de 5 μΜ durante las 48 h previas al ensayo de invasividad. Tras ese tiempo de tratamiento, las células fueron recolectadas, resuspendidas en medio completo, y sembradas sobre las cámaras superiores de los insertos Transwell recubiertos con Matrigei (10 mg/mL). Los compuestos problema se añadieron tanto a la cámara superior como a la inferior, a una concentración de 5 μΜ, manteniéndose este tratamiento a io largo de todo el período de duración del ensayo. Cada condición se realizó por triplicado. El eje y indica el número de células (N°) Figura 10. Fórmulas de ios compuestos sintetizados en los ejemplos.
EJEMPLOS
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la especificidad y efectividad de los inhibidores de ceramidasas de la presente invención.
Ejemplos de síntesis química Síntesis de ios precursores de las bases esfinqoides H(D-H)
Reacción de metátesis entre el alcohol 1 y las oiefinas terminales 2a y 2b: síntesis de 3a y de 3b
A una disolución desgasada del alcohol 1 (5 mmol) y de la olefina terminal 2a o 2b (20 mmol) en diclorometano (80 mL) se añadieron 400 mg (aproximadamente 0.5 mmol) de catalizador de Grubbs de segunda generación. La mezcla se agitó a la temperatura de reflujo bajo atmósfera de Ar durante 5 h. Tras la evaporación dei disolvente, el residuo se purificó por cromatografía flash (hexano / EtOAc 1 :3). (S)-4-i( E)-12-bromo-1 -hidroxidodec-2-enil1-2,2-dimetiioxazoiidina-3- carboxilato de terc-butiio (3a)
Rendimiento: 85%
1H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 5.58 (m, 1 H); 5.45 (m, 1 H); 4.20-3.70 (m, 4H); 3.35 (t, 2H); 1.95 (m, 2H); 1.78 (m, 2H); 1.65-1 .35 (m, 12H); 1.45 (s, 9H); 1 .18 (s, 6H),
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 154.32, 133.94, 133.40, 129.26, 128.25, 94.51 , 81 .13, 74.16, 65.03, 62.36, 34.17, 32.90, 32.48, 29.46, 29.36, 29.26, 29.19, 28.96, 28.84, 28.79, 28.47, 28.42, 28.24, 26.35, 24.71. (S)-4-r(RE)-1-hidroxi-14-(metiisuifoniloxi)tetradec-2-enil]-2,2- dimetiioxazoiidina-3-carboxiiato de tere-butilo (3b)
Rendimiento: 89%
H-RMN (400 MHz, CDCí3): δ 5.82-5.75 (m, 1 H); 5.45-5.30 (m, 1 H); 4.22 (t, 2H); 4.30-3.80 (m, 4H); 3.05 (s, 3H); 2.10-2.05 (m, 2H); 1.75-1.70 (m, 2H); 1.55-1.45 (s ancho, 15H); 1.70-1.15 (m, 12H)
(S)-4-f(RE)-12-azido-1-hidroxidodec-2-enil1-2,2-dimetiioxazoiidina-3- carboxilato de terc-butiio (3c)
Una disolución de 122 mg (1.87 mmol) de azida sódica en DMF anhidro (10 mL) se añadió, gota a gota, sobre una disolución del bromuro 3a en 5 mL de DMF, bajo atmósfera de Ar a temperatura ambiente. Finalizada la adición, la mezcla de reacción se calentó a 65° C y se mantuvo en agitación durante 12h. A continuación, ia mezcla se diluyó con 40 mL de agua y se extrajo con Et20 (3 x 15 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera (2 x 10 mL), se secaron sobre MgS04 anhidro, se filtraron y se evaporaron para dar un residuo que se purificó por cromatografía flash (Hexano / EtOAc 7:3). Rendimiento: 91 %
1H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 5.82 - 5.66 (m, 1 H), 5.48 - 5.36 (m, 1 H), 4.22 - 3.75 (m, 4H), 3.25 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.11 - 1.96 (m, 2H), 1.45 (s, 9H); 1.32 (s, 6H); 1.55-1.35 (m, 18H).
3C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 133.51 , 128.29, 94.58, 81.20, 74.25, 65.08, 62.44, 51.61 , 32.53, 29.55, 29.51 , 29.45, 29.31 , 29.28, 29.24, 28.97, 28.51 , 26.84, 26.38, 24.74.
Metanosu!fonato de (E)-13-r(1R7aS)-5.5-dimetil-3-oxo-tetrahidro-1 H- oxazolof3,4-c]oxazol-1 -il]tridec-12-enilo (4)
Sobre una disolución de 505 mg (1 mmol) de 3b en THF anhidro (10 ml_), enfriada en un baño de hielo, se añadieron 80 mg (2 mmol) de NaH. Tras agitación a temperatura ambiente durante 18h, ia mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo, se trató con una disolución acuosa saturada de NaHC03 y se extrajo con Et20 (3 x 5 ml_). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgS04 anhidro. Tras la evaporación del disolvente se obtuvo el compuesto 4, que se sometió a la etapa posterior sin purificación.
Rendimiento: 85%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 5.90-5.85 (m, 1 H); 5.80-5.75 (m, 1 H); 5.05-4.95 (m, 1 H); 4.55 (ancho, 1 H); 4.20 (t, 2H); 3.90-3.75 (m, 2H); 3.15 (s, 3H); 2.05 (m, 2H); 1.55 (s, 3H); 1.48 (s, 3H); 1.50-1.35 (ancho, 18H).
Metanosuífonato de 13-ΓΠ R7aS)-5,5-dimetil-3-oxo-tetrahidro-1 H-oxazolof3,4- cloxazol-1-illtrideciio (5)
Una disolución de 430 mg (1 mmoi) del compuesto 4 en etanol (10 ml_) se sometió a hidrogenación, a presión atmosférica, en presencia de 10 mg de Pd/C al 10 %. Tras 12 h de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró sobre Celíte y el filtrado obtenido se evaporó a sequedad proporcionando el compuesto 5.
Rendimiento: 98% H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 4.62 (m, 1 H); 4.30 (m, 1 H); 4.20 (t, 2H); 3.75- 3.55 (m, 2H); 2.85 (s, 3H); 1.75-1.65 (m, 2H); 1 .55-1.50 (m, 2H); 1.61 (s, 3H); 1.48 (s, 3H); 1.55-1 .25 (ancho, 20H). Síntesis de ios acetilenos 6 y 7 a partir de los mesilatos 4 y 5
Etapa 1 : Sobre una disolución de ios mesilatos 4 ó 5 (2 mmol) en 8 mL de una mezcla 1 :1 THF/HMPA (hexametiifosfotríamída) enfriada a -30 °C, se añadieron, gota a gota, 4.5 mL de una disolución 0.5 M de trimetiisililacetiluro de litio en THF (equivalentes a 2.25 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo en agitación mientras se calentó lentamente hasta alcanzar la temperatura ambiente. Tras el consumo del producto de partida (alrededor de 1 h, por análisis por TLC), la reacción se detuvo por adición de 5 mL de disolución saturada de NH4Ci y la mezcla se extrajo con hexano (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre MgS04 anhidro y se evaporaron a presión reducida para obtener los correspondientes acetiluros de trimetilsílílo intermedios, que se usaron en la etapa siguiente sin purificación.
Etapa 2: Una disolución del acetíluro de trímetilsililo (1 .5 mmol) en THF anhidro (5 mL) se trató con 2 mL de una disolución 1 M de Bu4NF en THF bajo atmósfera de Ar. Tras agitación durante 30 mín a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se trató con H20 (0.5 mL), se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó a presión reducida, obteniéndose los acetilenos 6 y 7. (1 7aS,E)-5,5-dimetil-1 -(pentadec-1 -en-14-inil)-dihidro-1 /-/-oxazoio[3,4- cloxazol-3(5H)-ona (6)
Rendimiento: 75%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 5.95-5.80 (m, 1 H); 5.75-5.70 (m, 1 H); 5.15-5.05 (m, 1 H); 4.65 (ancho, 1 H); 3.85-3.65 (m, 2H); 2.15-1.95 (m, 4H); 1.85 (t, 1 H); 1.50 (s, 3H); 1.45 (s, 3H); 1.50-1.25 (ancho, 18H). (1 RJa$)-5,5-dimetil-1 -(pentadec-14-inil)-dihidro-1 H-oxazoioí3,4-c]oxazoi- 3(5H)-ona (7)
Rendimiento: 79%
H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 5.15-5.05 (m, 1 H); 4.65 (ancho, 1 H); 3.85-3.65 (m, 2H); 2.05-1 .95 (ancho, 2H); 1 .85 (t, 1 H); 1 .50 (s, 3H); 1 .45 (s, 3H); 1 .50- 1 .45 (m, 4H); 1 .35-1 .25 (ancho, 20H)
(S)-4-f(f?)-12-azido-1 -hidroxidodecill-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de terc-butilo (8)
Etapa 1 : Una disolución de 460 mg (1 mmol) del compuesto 3a en etanol (10 mL) se sometió a hidrogenación, a presión atmosférica, en presencia de 10 mg de Pd/C al 10 %. Tras 12 h de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y el filtrado obtenido se evaporó a sequedad proporcionando un crudo que se sometió a la reacción siguiente.
Etapa 2: Una disolución de 100 mg (1 .54 mmol) de azida sódica en DMF anhidro (10 mL) se añadió, gota a gota, sobre una disolución del crudo de la reacción anterior en 5 mL de DMF, bajo atmósfera de Ar a temperatura ambiente. Finalizada la adición, la mezcla de reacción se calentó a 65° C y se mantuvo en agitación durante 12h. A continuación, la mezcla se diluyó con 40 mL de agua y se extrajo con Et20 (3 x 15 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera (2 x 10 mL), se secaron sobre MgS04 anhidro, se filtraron y se evaporaron para dar un residuo que se purificó por cromatografía flash (Hexano / EtOAc 7:3).
Rendimiento global : 72 %
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 4.15-3.95 (m, 2H); 3.90-3.70 (m, 2H); 3.25 (t, 2H); 1 .45 (s, 9H); 1 .65-1 .60 (m, 4H); 1 .40-1 .20 (m, 22H)
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 154.1 , 94.3, 73.0, 64.8, 62.6, 51 .5, 34.5, 33.9, (29.7-28.4), 26.8, 26.5, 26.1 , 24.3. Síntesis de bases esfinqoides il(D-H)
(2S,3R)-2-amino-14-azidotetradecano-1 ,3-diol (li-E) y (2S,3 E)-2-amino-14- azidotetradec-4-eno-1 ,3-dioi (H-F)
Una disolución de (0.5 mmol) de 8 o de 3c en MeOH (10 mL) se trató con cloruro de acetilo (0.6 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h, transcurridas las cuales se evaporó el disolvente a presión reducida. El residuo obtenido se disuelve en agua, se alcalinizó con una disolución de NaOH 1 N y se extrajo con EtOAc (3 x 5 mL). Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgSO4) y se evaporaron a sequedad y el residuo se purificó por cromatografía flash (hexano / EtOAc 7:3) para obtener el producto deseado.
(li-E): Rendimiento a partir de 8 : 82 %
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3.70 (m, 2H); 3.60 (m, 1 H); 3.25 (t, 2H); 2.85 (m, 1 H); 1.65-1.55 (m, 2H); 1.53-1.45 (m, 3H); 1.40-1.20 (m, 15H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 74.61 , 63.50, 55.80, 51.57, 33.95, 29.80, 29.71 , 29.69, 29.63, 29.60, 29.58, 29.26, 28.93, 26.81 , 26.23. (H-F): Rendimiento a partir de 3c : 85 %
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 5.80-5.65 (m, 1 H); 5.50-5.35 (m. 1 H); 4.05 (m, 1 H); 3.70-3.55 (m, 2H); 3.25 (t, 2H); 2.85-2.75 (m, 1 H); 2.05 (m, 2H); 1.55 (m, 2H); 1.40-1.20 (m, 13H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 134.63, 129.37, 75.20, 63.81 , 56.25, 51.57, 32.45, 29.52, 29.46, 29.40, 29.30, 29.24, 28.93, 26.80.
(2S,3R)-2-aminooctadec-17-in-1.3-diol (H-P) y (2S,3 E)-2-aminooctadec-4- en-17-in-1 ,3-diol (li-G) por hidrólisis de 6 y 7
Etapa 1. Una disolución de 0.6 mmol de 6 ó 7 y TsOH (12 mg, 0.06 mmol) en MeOH (10 mL) se agitó a 25 °C durante 6 h. Transcurrido este tiempo, se eliminó el disolvente a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en EtOAc. La disolución orgánica se lavó, sucesivamente, con una disolución saturada de NaHC03 y salmuera y se secó. La evaporación del disolvente proporciona un residuo que se usó directamente en la siguiente etapa de síntesis.
Etapa 2. Una disolución del crudo anterior en 2N NaOH (30 mL) y EtOH (30 mL) se calentó a 80 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a continuación, se concentra, a presión reducida, hasta una cuarta parte del volumen y se extrajo con Et2Ü (3 x 15 mL). Las fases orgánicas reunidas se secaron sobre MgS04, se filtraron y se evaporaron para dar el correspondiente producto final.
(li-D): Rendimiento global a partir de 7: 70%
H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3.990-3.65 (m, 2H); 3.45 (m, 1 H); 2.82 (m, 1 H); 2.01 (m, 2H); 1.82 (t, 1 H); 1.45 (m, 4H); 1.29-1.26 (m, 20H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 83.5, 75.1 , 62.5, 61.1 , 33.1 , (29.9-28.2), 23.5, 21.4.
(Il-G): Rendimiento global a partir de 6: 73%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 5.69-5.65 (m, 2H); 4.15 (m, 1 H); 3.90-3.65 (m, 2H); 2.85 (m, 1 H); 2.05-1.95 (m, 4H); 1.85 (t, 1 H); 1.45-1.30 (m, 18H).
3C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 131.1 , 129.7, 83.5, 75.5, 68.9, 62.3, 56.8, 35.1 , (29.9-28.4), 21.2. Hidrocioruro de (S)-2-amino-14-azido-1-hidroxitetradecan-3-ona (li-H)
Etapa 1. Una disolución de 550 mg (1.30 mmol) de 8 en 30 mL de CH2CI2 se trató con clorocromato de piridinio (PCC) (420 mg, 1.90 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo en agitación a temperatura ambiente durante 1 h, transcurrida la cual se añadieron otros 420 mg de PCC y se mantuvo en agitación durante 12 h más. A continuación, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y el filtrado se evaporó a presión reducida para dar un crudo que se utilizó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 2. Una disolución del crudo anterior en 20 mL de MeOH se trató con 1.2 mL de cloruro de acetiio a 25 °C durante 6 h. Transcurrido este tiempo, se eliminó el disolvente a presión reducida para dar el producto final en forma del correspondiente hídrocloruro.
Rendimiento global a partir de 8: 89 %
H-RMN (400 MHz, CD3OD): δ 4.15 (t ancho, 1 H); 4.10 (dd, 1 H); 3.95 (dd, 1 H), 3.3 (t, 2H); 2.65 (t, 2H); 1.60-1.55 (m, 2H); 1.45-1.25 (ancho, 16H).
13C-RMN (101 MHz, CD3OD): δ 205.19, 62.19, 60.26, 52.44, 39.62, 30.62, 30.60, 30.57, 30.52, 30.27, 30.09, 29.92, 27.82, 24.18.
Obtención de los compuestos de fórmula (I).
Ejemplo 1-B4. 1-K2S.3ffl-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ii1-1H-pirrol-2,5-diona
Una disolución de esfinganina (30 mg, 0,10 mmol) en CH2CI2 (1 mL) se adicionó, gota a gota, sobre 1 mL de una disolución de anhídrido maleíco 0.1 M en CH2CI2, enfriada exteriormente con un baño de hielo. A continuación, se retiró el baño y la mezcia se mantuvo en agitación a temperatura ambiente durante 16 h, transcurridas las cuales se adicionó cloruro de oxaliío (8.5 pL, 0,1 mmoi) y una gota de DMF, manteniendo ia agitación durante otras 8 h. Al final de este periodo, la mezcla de reacción se trató con 0,5 mL de una disolución 0,2 M de Et3N en de CH2CI2 y se agitó a temperatura ambiente. Al cabo de 1 h, ía mezcia de reacción se íavó con agua (3 x 2,5 mL) y ia fase orgánica se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó a presión reducida. El crudo resultante se purificó por cromatografía flash (hexano/EtOAc 4:1 ), obteniéndose 32 mg (81 % rendimiento) del compuesto I-B4.
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 6.94 (s, 2H), 3.75 - 3.68 (m, 1 H), 3.87 - 3.80 (m, 3H), 1.65 - 1.45 (m, 4H), 1.25 (ancho, 24H), 0.85 (t ancho, 3H). 3C-RMN (101 MHz, CDCI3): 170.25, 135.84, 69.06, 58.21 , 51.53, 33.71 , 32.13, (29.90 - 29.60), 26.04, 22.91 , 14.35.
Método genera! para ¡a preparación de sulfonamidas por acoplamiento con cloruro de etanosuifoniio
Sobre una disolución de la correspondiente base esfingoide II (0,10 mmol) y Na2C03 (21 mg, 0,20 mmol) en THF (1 ml_) y agua (2 ml_) se adicionaron, gota a gota, 14 μΙ_, (0,15 mmol) de cloruro de etanosuifonilo. La mezcla de reacción se mantuvo en agitación durante 18h a temperatura ambiente. A continuación, se diluyó con 5 mL de disolución saturada de NaCI, se extrajo con CH2CI2 (3 x 5 mL), se secó sobre MgS04 anhidro y se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía flash (hexano/EtOAc 4:1 ) para proporcionar el compuesto deseado. Ejemplo I-A1. A/-f(2S,3 E)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-2-¡netanosulfonamida Rendimiento: 75%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 5.69 (m, 1 H); 5.65 (m, 1 H); 4.15 (m, 1 H); 3.80-3.60 (m, 2H); 3.50 (q, 2H); 2.90 (m, 1 H); 2.01 (m, 2H); 1.29 (s, 3H); 1.35-1.26 (m, 22H); 0.86 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 131.5, 129.9, 72.1 , 59.5, 54.3, 48.8, 34.1 , 32.2, (30.0-29.5), 22.7, 14.1 , 2.3.
Ejemplo I-B1. A/-f(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-illetanosuifonamida
Rendimiento: 77%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3.45 (q ancho, 2H), 3.97 - 3.70 (m, 3H), 2.78 (m, 1 H), 1.68 - 1.41 (m, 4H), 1.28 (t ancho, 3H), 1.23 (ancho, 24H), 0.85 (t ancho, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 75.06, 60.61 , 54.83, 47.56, 33.91 , 31.93, (29.95 - 26.04), 22.81 , 14.25, 2.35. Ejemplo 1-C1. N-\(2S,3SAR)- ,3,4-trihidroxioctadecan-2-il]etanosulfonamida Rendimiento: 79%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3.90-3.60 (m, 2H); 3.50 (m, 1 H); 3.45 (q, 2H); 3.18 (m, 1 H); 2.75 (m, 1 H); 1.51 (m, 2H); 1.30 (s, 3H); 1.30-1.26 (s ancho, 24H); 0.86 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 76.5, 71.3, 59.6, 48.4, 47.2, 31.9, 31.2, (29.9- 29.3), 23.7, 22.6, 14.2, 2.3.
Ejemplo I-D1. A/-f(2S,3 ?)-1 ,3-dihidroxioctadec-17-in-2-illetanosulfonamida Rendimiento: 84%
1H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 3.90-3.70 (m, 3H); 3.45 (q, 2H); 2.80 (m, 1 H); 2.03 (m, 2H); 1 .85 (t, J = 2.5, 1 H); 1 .28 (s, 3H); 1.20-1.40 (s ancho, 24H).
3C-RMN (101 MHz, CDCi3): δ 83.5; 72.5; 47.6, 69.1 ; 60.2; 58.4; 32.9; (29.5-28.5); 23.4; 21.3, 2.3.
Ejemplo I-E1. /V-K2S.3ffl-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradecan-2- iDetanosulfonamida
Rendimiento: 71 %
H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3.80-3.60 (m, 2H); 3.45 (m, 1 H); 3.40 (q, 2H); 2.80 (m, 1 H); 1.45 (m, 2H); 1.30-1.25 (m, 20H).
13C-RMN (101 MHz, CDCi3): δ 71.5, 60.1 , 55.3, 50.2, 48.7, 33.1 , 30.2, (29.9- 29.2); 27.1 , 23.2, 2.3.
Método general para ia preparación de amidas por acopiamiento con ácidos carboxílicos
Sobre una disolución de la correspondiente base esfingoide li (0,10 mmol) y Et3N (30 μΙ_, aproximadamente 0,20 mmoí) en CH2CI2 (1 ml_) bajo atmósfera de argón, se añadió, gota a gota, una disolución del correspondiente ácido carboxílico (0,10 mmoí), HOBt (18 mg, 0,13 mmol) y EDC (20 mg, 0,13 mmoí) en CH2CI2 (1 ml_). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, se lavó con agua (3 x 0,5 ml_) y se concentró a presión reducida. El crudo resultante se purificó por cromatografía fíash, utilizando un gradiente CH2CÍ2/MeOH (de 0 a 5%), obteniéndose las correspondientes amidas con ios rendimientos que se indican en cada ejemplo Acoplamiento con ácido bromoacético
Ejemplo 1-D2. 2-bromo-A/-f(2S,3/:?)-1 ,3-dihidroxioctadec-17-in-2-iilacetamida Rendimiento: 72%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.05 (d ancho, 1 H); 4.21 (s, 2H); 3.90-3.70 (m, 4H); 2.03 (m, 2H); 1.85 (t, J = 2.5, 1 H); 1.20-1.40 (s ancho, 24H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 177.5; 83.5; 72.5; 69.1 ; 60.2; 58.4; 33.1 ; (29.5-28.5); 23.4; 21.3
Ejemplo A/-í(2S,3ffl-14-azido-1.3-dihidroxitetradecan-2- illbromoacetamida
Rendimiento: 77%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.7 (d ancho, 1 H); 4.10 (s, 2H); 3.90-3.75 (m, 4H); 3.25 (t, 2H); 1 .3-1.25 (ancho, 20H).
3C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 166.3, 74.2, 62.2, 53.9, 51.6, 42.8, 34.6, 29.6, 29.3, 28.9, 26.8, 26.0.
Ejemplo I-F2. A/-f(2S,3 £)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradec-4-en-2- illbromoacetamida
Rendimiento: 73%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.72 (d ancho, 1 H), 5.81 (m, 1 H); 5.53 (m, 1 H); 4.35 (m, 1 H); 4.10 (s, 2H); 4.01 (dd, 1 H); 3.90 (m, 1 H), 3.73 (dd, 1 H); 3.25 (t, 2H); 2.10 (m, 2H); 1.65 (m, 2H); 1.40-1.25 (s ancho, 14H).
3C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 166.6, 134.8, 128.6, 77.5, 77.2, 76.8, 74.2, 62.0, 54.8, 51 .6, 42.8, 32.4, 29.5, 29.5, 29.2, 29.2, 28.9, 26.8. Ejemplo I-G2. 2-bromo-A/-f(2S.3RE)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-17-in-2- illacetamida
Rendimiento: 84%
H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 8.10 (d ancho, 1 H); 5.71 -5.68 (m, 2H); 4.60 (m, 1 H); 3.90-3.70 (m, 3H); 2.10-1.95 (m, 4H); 1 .82 (t, J = 2.5, 1 H); 1 .45-1 .30 (m, 18H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 177.5; 131 .1 ; 129.7; 83.7; 72.8; 69.1 ; 60.0; 53.7; 34.1 ; (30.0-28.5); 21 .4 Ejemplo 1-H2. ( S)-N-( 14-azido-1 -hidroxi-3-oxotetradecan-2-i0-2- bromoacetamida
Rendimiento: 81 %
H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 4.20 (s, 2H), 4.16 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 4.10 (dd, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 3.97 (dd, J = 12.0, 3.4 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 1 .60 (dd, J = 16.4, 8.9 Hz, 9H), 1 .32 (s, 34H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 205.2, 178.5, 62.19, 60.26, 52.44, 39.62, 30.62, 30.60, 30.57, 30.52, 30.27, 30.09, 28.7, 29.4, 29.92, 27.82, 24.18.
Ejemplo 1-B2. 2-bromo-N-((2S,3R)-1 ,3-dihidroxíoctadecan-2-íl)acetamida. Según procedimiento de síntesis descrito en la solicitud de patente WO200650264. Ejemplo 1.
Acoplamiento con ácido dibromoacético
Ejemplo 1-B17. 2,2-dibromo-N-((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-i0acetamida. Rendimiento: 77%
1H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 6.23 (s, 1 H), 3.80-3.70 (m, 3H), 3.65 (t ancho, 1 H), 1 .55 (m. 2H), 1 .40-1 .20 (s ancho, 26H), 0.91 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 166.9, 71 .9, 61 .7, 57.6, 37.9, 34.9, 33.1 , 30.9-30.6, 30.5, 26.6, 23.7, 14.4. Acopiamiento con ácido qiicídico
Ejemplo 1-A3. (f?S)-/V-f(2S,3R£)-1.3-dihidroxioctadec-4-en-2-illoxirano-2- carboxamida
Rendimiento: 77%
H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.10 (d ancho, 1 H); 5.69-5.67 (m, 2H); 4.62 (m, 1 H); 3.80-3.60 (m, 3H); 3.50 (m, 1 H); 2.90-2.60 (m, 2H); 2.01 (m, 2H); 1.33- 1.26 (m, 22H); 0.85 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 173.5, 131.1 , 129.7, 73.1 , 60.2, 56.2, 55.4, 48.1 , 35.1 , 32.2, (29.9-29.3), 22.8, 14.2.
Ejemplo 1-B3. (RS)-/V-Í(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-illoxirano-2- carboxamida
Rendimiento: 79%
H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.10 (d ancho, 1 H); 3.80-3.60 (m, 4H); 3.52 (m, 1 H); 2.90-2.60 (m, 2H); 1.50 (m, 2H); 1.30-1.25 (m, 26H); 0.85 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCí3): δ 175.5, 72.4, (59.9-59.8), 56.2, 48.4, 32.8, 31.7, (29.6-29.3), 23.4, 22.8, 14.1.
Ejemplo 1-C3. (RS)-N-r(2S,3S,4 )-1 ,3,4-trihidroxioctadecan-2-il1oxirano-2- carboxamida
Rendimiento: 72%
H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 8.05 (d ancho, 1 H); 3.95-3.60 (m, 4H); 3.51 (m, 1 H); 3.20 (m, 1 H); 2.90-2.65 (m, 2H); 1.45 (m, 2H); 1.30-1.25 (m, 24H); 086 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCí3): δ 172.5, 77.5, 71.2, 60.3, 56.2, 53.2, 47.6, (31.8- 31.6), (29.9-29.3), 23.8, 22.6, 14.2.
Ejemplo 1-D3. (RS)-A/-f(2S,3RE)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-17-in-2-ii]oxirano-
2-carboxamida
Rendimiento: 73% H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.05 (d ancho, 1 H); 3.90-3.70 (m, 4H); 3.51 (m, 1 H); 2.90-2.65 (m, 2H); 2.05 (m, 2H); 1.85 (t, J = 2.5, 1 H); 1.46-1.42 (m, 4H); 1.29-1.26 (s ancho, 20H).
3C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 172.5, 83.5, 72.3, 69.1 , 59.9, 59.7, 56.2, 48.2, 32.6, 23.5, 21.4, (29.9-28.5).
Ejemplo l-E3. (RS)-/V-í(2S,3f?)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradecan-2-illoxirano-2- carboxamida
Rendimiento: 79%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.15 (d ancho, 1 H); 3.90-375 (m, 4H); 3.51 (m, 1 H); 2.90-2.65 (m, 2H); 1.45-1.30 (s ancho, 22H).
13C-RMN (101 MHz, CDC!3): δ 173.3, 72.4, (59.9-59.8), 55.4, 51.2, 47.6, 33.1 , (30.0-29.3), 26.7, 23.3. Otras reacciones de acopiamiento
Ejemplo 1-B5: A/-f(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il]propioiamida
Rendimiento: 90%
H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.77 (d ancho, 1 H), 4.23 - 4.03 (m, 1 H), 3.97 - 3.70 (m, 3H), 2.72 - 2.49 (m, 2H), 1 .68 - 1.41 (m, 4H), 1.23 (ancho, 24H), 0.85 (t ancho, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDC!3): δ 145.9, 84.5, 77.8, 73.06, 59.98, 57.53, 33.91 , 32.75, (29.90 - 29.58), 26.04, 22.98, 14.42.
Ejemplo 1-B6. A/-r(2S,3f?)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il1but-2-inamida
Rendimiento: 91 %
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.01 (d ancho, 1 H), 4.23 - 4.03 (m, 1 H), 3.97 - 3.70 (m, 3H), 2.72 - 2.49 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.68 - 1.41 (m, 4H), 1.23 (ancho, 24H), 0.85 (t ancho, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 145.2, 91.2, 78.8, 72.0, 59.6, 58.53, 35.1 , 32.9, (29.9-29.5), 26.0, 22.9, 14.3, 2.7. Ejemplo 1-B7. A/-r(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il1acrilamida
Rendimiento: 89%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 6.33 (d, J = 17.0, 1 H), 6.17 (dd, J = 10.2, 16.9, 1 H), 5.69 (d, J = 1 1.1 , 1 H), 4.16 - 3.99 (m, 1 H), 3.96 - 3.71 (m, 3H), 1.68 - 1 .46 (m, 4H), 1.25 (s ancho, 24H), 0.88 (t, J = 6.8, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 165.7, 131 .0, 127.3, 74.5, 62.4, 54.0, 34.7, 32.1 , 30.0, 29.7, 29.5, 26.3, 22.8, 14.2.
Ejemplo I-B8. (E)-/V-f(2S,3fí)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-illbut-2-enamida
Rendimiento: 86%
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 6.88 (dq, J = 6.7, 13.3, 1 H), 6.40 (d, J = 7.6, 1 H), 5.87 (d, J = 14.3, 1 H), 4.04 (d ancho, 1 H), 3.92 - 3.74 (m, 3H), 1.87 (d, J = 6.6, 3H), 1.70-1.46 (m, 4H), 1.25 (ancho, 24 H), 0.88 (t, J = 6.5, 3H).
3C-RMN (101 MHz, CD3OD): δ 141.0, 126.3, 72.5, 62.3, 56.9, 35.0, 33.1 , 30.9, 30.8, 30.5, 26.9, 23.8, 18.0, 14.6.
Ejemplo 1-B9. A/-f(2S,3ff)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il1metacriiamida
H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.22 (ancho, 1 H), 5.89 (s ancho, 1 H), 5.49 (s ancho, 1 H), 3.88-3.63 (m, 2H), 3.83 (m, 1 H), 3.75 (m, 1 H), 1.93 (s ancho, 1 H), 1.75-1.50 (m, 4H), 1.27 (ancho, 24 H), 0.85 (t, J = 6.5, 3H)
13C-RMN (101 MHz, CD3OD): δ 168.6, 141.3, 124.0, 72.3, 59.9, 59.8, 32.7, 31.8, 29.9-29.3, 23.4, 22.7, 14.1
Ejemplo 1-B10. A -r(2S.3R)-N-1.3-dihidroxioctadecan-2-il1-3- metil-2-butenamida
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 6.26 (ancho, 1 H), 6.64 (s, 1 H), 4.1 (m, 1 H), 3.85 (m, 3H); 2.16 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.54 (m, 2H), 1.25 (ancho, 26H), 0.88 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCi3): δ 167.4, 151.2, 1 18.5, 74.3, 62.7, 53.9, 34.7, 32.0, 29.8-29.5, 27.3, 26.1 , 22.8, 19.9, 14.2. Ejemplo 1-B11. (2E,4a-N-f(2S.3R)-1.3-dihidroxioctadecan-2-il]hexa-2,4- dienamida
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.1 1 (dd, J=14.8 Hz, J'=10 Hz, 1 H), 6.90 (d ancho, 1 H), 6.05 (m, 2H), 5.78 (d, J=15.2 Hz, 1 H), 3.95 (m, 2H), 3.62 (m, 1 H), 1.78 (d, J=6Hz, 3H), 1.45 (ancho, 2H), 1.19 (ancho, 26H), 0.82 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3,CD3OD): δ 167.3, 141 .7, 138.2, 129.7, 121.3, 73.3, 61.9, 54.5, 34.3, 31.9, 29.7-29.3, 26.0, 22.7, 18.5, 14.1.
Ejemplo 1-B12. Ácido
(E)-4-r(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ilaminol-4-oxo-2-butenoico
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.8 (ancho, 1 H), 6.38 (dd ancho, 2H), 4.12 (d ancho, 1 H), 3.88 (ancho, 3H), 1.45 (ancho, 2H), 1.25 (ancho, 26H), 0.87 (t, 3H).
3C-RMN (101 MHz, CDCI3): 5166.4, 166.2, 135.5, 132.5, 73.6, 61.2, 54.7, 34.5, 32.1 , 29.8-29.5, 26.1 , 22.8, 14.2
Ejemplo 1-B13. (Z)-2,3-dibromo-N-r(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il1-4- οχο-2-butenamida
H-RMN (400 MHz, CDC!3): δ 9.70 (s, 1 H), 8.22 (ancho, 1 H), 3.85 (m, 2H), 3.75 (m, 1 H), 3.63 (m, 1 H), 1.45 (m, 2H), 1.28 (ancho, 26H), 0.85 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDC!3): δ 192.3, 166.2, 143.2, 134.5, 72.5, 60.2, 58.9, 32.8, 31.8, 29.9-29.3, 23.5, 22.6, 14.1.
Ejemplo 1-B14. (2S,3f?)-2-(bromometil)-N-(1 ,3-dihidroxioctadecan-2- iPacrilamida
1H-RMN (400 MHz, CDCi3): δ 8.22 (ancho, 1 H), 6.02 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 5.81 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 4.12 (s, 2H), 3.85-3.53 (m, 4H), 1.45 (m, 2H), 1.29 (ancho, 26H), 0.85 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 169.1 , 142.5, 127.2, 71.2, 59.9, 59.7, 36.5, 33.1 , 31.5, 29.9-29.1 , 23.5, 22.6, 14.1. Ejemplo 1-B15. (E,2S.3R)-A/-(1 ,3-dihidroxi-2-octadecil)-2-methil-2-butenamida 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 6.62 (ancho, 1 H), 6.50 (ancho, 1 H), 4.01 (m, 1 H), 3.85-3.75 (m, 3H), 1.87 (s ancho, 3H), 1 .77 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.54 (m, 2H), 1.25 (ancho, 26H), 0.87 (t, 3H).
3C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 169.8, 131.7, 131.6, 74.2, 62.5, 54.1 , 34.6, 32.1 ,29.8-29.5, 26.1 , 22.8, 14.3, 14.1 , 12.5.
Ejemplo 1-D16. (2S,3R)-N-(1 ,3-dihidroxi-17-octadecin-2-in-2-oxooctanamida H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.25 (ancho, 1 H), 3.80-3.60 (m, 4H), 2.40 (t ancho, 2H), 2.03 (m, 2H), 1.85 (t, J=2.7 Hz, 1 H), 1.65 (m, 2H), 1.45 (m, 4H), 1.35-1.25 (m, 26H), 0.97 (t, 3H).
13C-RMN (101 MHz, CDCI3): δ 197.6, 159.9, 83.5, 72.4, 68.1 , 59.9, 59.7, 32.8-31.5, 30.1-28.5, 23.5-21.5, 14.2. Ejemplo 1-E16. (2S,3R)-N-(14-azido-1.3-dihidroxi-2-tetradecin-2- oxooctanamida
1H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.25 (ancho, 1 H), 3.85-3.62 (m, 4H), 2.45 (t ancho, 2H), 1.60-1.45 (m, 4H), 1.35-1.25 (ancho, 26H), 0.95 (t, 3H).
3C-RMN (101 MHz, CDC!3): δ 197.5, 160.2, 73.1 , 59.9, 59.7, 51.2, 32.6, 32.4, 31.8, 30.0-28.5, 26.8, 23.5, 23.1 , 22.9, 14.2.
Ejemplos de ensayos biológicos
Ejemplo 1. Actividad inhibidora de las ceramidasas
La actividad inhibidora de ias ceramidasas por ios compuestos de la presente invención se ensayó sobre fibroblastos de un enfermo de Farber transducidos para ia sobreexpresion de ia ceramidasa ácida y sobre las iíneas de cáncer de pulmón A549 (American Type Culture Coílection) y de cáncer de próstata PC-3/Mc. La línea A549 se mantuvo en medio de HAM F12 supiementado con glutamina 2 mM, la linea de Farber se cultivó en medio DMEM y la línea PC-3/Mc se mantuvo en medio RPMI1640. En todos los casos, ei medio se suplemento con un 10% de suero de feto bovino, 100 unidades/mL de penicilina y 10 μg/mL de estreptomicina y los cultivos se mantuvieron a 37 O en atmósfera de 5% CO 2 95% aire y una humedad del 90%. Las células se sembraron en placas de 96 pocilios a una densidad de
10.000 células por mililitro y después de 24-48 h, ei medio se eliminó y se sustituyó por medio nuevo (100 microlitros por pocilio) conteniendo el sustrato fluorogénico (Bedia et al. Chembiochem 2007, 8, 642) y el inhibidor a una concentración de 16 μΜ. También se puede añadir el sustrato directamente sin reemplazar el medio de cultivo. En cualquier caso, se incubó a 37 °C durante 3 horas, se procedió a la lísis de las células y se determinó la actividad enzimática siguiendo ei procedimiento descrito (Bedia et ai. Chembiochem 2007, 8, 642). En algunos casos, el inhibidor y el sustrato se añadieron conjuntamente y se incubaron durante 3 h antes de proceder a la iisis de las células.
En un ejemplo concreto se determinó el efecto inhibidor de los compuestos sobre la actividad ceramidasa ácída de las células de Farber transducidas para la sobreexpresion de la ceramidasa ácida. Es este caso, las células se incubaron conjuntamente con sustrato y compuesto problema durante 3 h y después de este tiempo, se determinó la actividad enzimática tal como se describe más arriba. Tal como se ilustra en la Figura 1 , ios compuestos I-B2, I-B8, I-B9 y I-B17, y fueron los más activos en células intactas, aunque sólo I-B2, I-B9 y I-B17 fueron también activos in vitro.
En otro ejemplo concreto se determinó el efecto inhibidor de los compuestos sobre la actividad ceramidasa ácída de las células de adenocarcinoma de pulmón A549. Las células se incubaron con los compuestos problema durante 24 h y después de este tiempo se añadió el sustrato, se incubó durante 3 h y se continuó tal como se describe más arriba. Tal como se muestra en ia Figura 2, ios compuestos ID2, IE2 IF2 IG2 y IH2 fueron los más activos, presentando una inhibición de la ceramídasa ácida superior al 95% respecto al control.
En otro ejemplo se determinó el efecto de los compuestos I-B2, I-9B y I- B17 sobre la actividad ceramidasa ácida de las células de cáncer de próstata PC-3 c. Las células se sembraron en placas de 96 pocilios a una densidad de 10.000 céíulas/ml y los compuestos problema se añadieron 24 horas después de la siembra. Se usaron tres dosis de cada inhibidor, 1 μΜ, 5 μΜ y 10 μΜ, en incubaciones durante 48 h. La Figura 3 representa gráficamente los resultados obtenidos. Los compuestos I-B17 y I-B2 causan una clara inhibición de la actividad ceramidasa ácida a todas las dosis empleadas, con mayor efecto inhibidor a mayor dosis.
Ejemplo 2. Efecto de los inhibidores sobre el ceramidoma
En estos experimentos, las células se sembraron en placas de 6 pocilios a una densidad de 250.000 células/mí. Los compuestos se añadieron 24 h después de la siembra y se incubaron durante distintos períodos de tiempo. Después de los tratamientos, las células se lavaron con PBS y se transfirieron a viales de vidrio, donde se prepararon ios extractos lipidíeos siguiendo el procedimiento descrito (Merrill et al Methods, 2005, 36, 207). Los análisis se llevaron a cabo por cromatografía líquida de ultrarresolución acoplada a un detector de masas de tiempo de vuelo acelerado, que permite la identificación de los compuestos en base a su masa exacta, mediante ionización en electrospray en modo positivo. Las condiciones cromatográficas y analíticas son las descritas en trabajos anteriores (Munoz-Olaya et al ChemMedChem, 2008, 3, 946 y Canals et al Bioorg. Med. Chem., 2009, 17, 235).
En un ejemplo concreto se detallan los efectos de los compuestos problema sobre la producción de ceramídas totales en la línea de cáncer de pulmón A549 después de 24 h de incubación. Los resultados se ilustran en la Figura 4. Los compuestos que producen un mayor aumento de los niveles de ceramidas son ID2, IF2, IG2 y IH2, con las cuales las ceramidas son 6 veces superiores a las de las células tratadas con vehículo.
En otro ejemplo concreto se detallan los efectos de ios inhibidores I-B17, I-B9 y I-B2 sobre el esfingolipidoma de ia línea celular de cáncer de próstata PC-3 c. El contenido en esfingolípidos se determinó tras 48 h de incubación con los inhibidores a dos dosis diferentes, 1 μΜ o 5 μ . Se determinaron niveles de ceramidas, dihidroceramídas, esfingomielinas, dihidroesfingomielinas y glucosilceramidas. La Figura 5 ilustra gráficamente los cambios en ios niveles de los diferentes esfingolípidos tras incubar las células PC-3Mc con los inhibidores. Los tratamientos con I-B2 causaron, tanto a 1 μΜ como a 5 μΜ, una acumulación significativa de ceramidas y dihidroceramídas. Ei tratamiento con I-B17 también causó una acumulación de ceramidas y dihidroceramídas, más acusada en tratamientos con una concentración del inhibidor de 5 μΜ.
Ejemplo 3. Efecto de los inhibidores sobre la viabilidad celular
La citotoxícidad se determinó por medida de la actividad deshídrogenasa mitocondríal con el bromuro de 3-(4,5-dimetiítíazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolío (MTT) después de 24-72 h de incubación de las células con los compuestos problema a distintas concentraciones. La Figura 6A iiustra el efecto de los compuestos problema sobre la viabilidad de las células de cáncer de pulmón A549 y de fibroblastos dérmicos después de 24 h de incubación. La Figura 6B ilustra gráficamente los efectos de los inhibidores I-B17, I-B9 y I-B2 sobre la viabilidad de las células PC-3Mc después de 72 h de incubación. El análisis de la curva generada con los datos representados proporciona unos valores de CC-50 sobre las células PC-3Mc de 13,7 μΜ para el compuesto I-B17, de 37,2 μΜ para el compuesto I-B9 y de más de 100 μΜ para el compuesto I-B2. Es decir, la citotoxícidad relativa de los tres compuestos es, de mayor a menor, la causada por I-B17, I-B9 y I-B2. Ejemplo 4. Efecto de los inhibidores sobre el crecimiento celuiar sobre sustrato plástico.
Las células PC-3Mc, cultivadas en medio con un 10% de suero fetal bovino, fueron expuestas a los compuestos problema, a una concentración final de 5 μΜ. Para realizar este ejemplo, se sembraron 500 células en cada pocilio de placas de 96 pocilios, dejándose adherir al plástico durante 24 h, seguido de tratamiento con los compuestos. Cada tratamiento se realizó en pocilios triplicados. La Figura 7 ilustra gráficamente el efecto de las incubaciones con estos compuestos sobre el crecimiento celular, cuantificado como número de células presentes a las 24 h, 48 h, 72 h, 120 h, 144 h y 168 h de tratamiento con los compuestos. Los compuestos I-B17 y I-B2 causaron una casi total inhibición del crecimiento de las células PC-3Mc durante los primeros 6 días de tratamiento. Por el contrario, el compuesto I-B9 no causó diferencias significativas sobre el número de células presentes a lo largo de los 7 días del tratamiento, en comparación con células control, expuestas únicamente al disolvente utilizado para los compuestos.
Ejemplo 5. Efecto de los inhibidores sobre la formación de colonias celulares en medio semisólido.
En este ejempio, se determinó la capacidad de las células PC-3Mc para crecer formando colonias tridimensionales en semisuspensíón. En el ensayo utilizado, las células se resuspenden a temperaturas que preservan la viabilidad celular en medio de cultivo completo que contiene agar al 0,6%, dejando posteriormente solidificar a temperatura ambiente, sobre un lecho de medio con 3% de agar. Las células sembradas en esta disposición se incuban durante 2 o 3 semanas a 37 °C en una atmósfera del 5% de CO2 / 95% aire y humedad del 90%. Una vez sembradas, se añadieron los compuestos problemas a concentraciones finales de 1 μΜ o 5 μΜ, reañadiéndolos con una periodicidad de 3 días, coincidiendo con la adición de medio de cultivo nuevo. Después de 3 semanas, las colonias se fijan con glutardehído al 0.5%, se tiñen con cristal de violeta y se visualizan al microscopio. Las colonias de un diámetro mayor o igual que 0.2 mm se cuentan con el programa ImageJ 1.43u (NIH, USA).
La Figura 8 ilustra cómo, a la concentración de 1 μΜ, ninguno de ios compuestos afectó la capacidad de las células PC-3Mc para formar colonias, mientras que a 5 μΜ, los compuestos I-B17 y I-B2 inhiben la formación de colonias por debajo de un 25% respecto al control.
Ejemplo 6. Efecto de los inhibidores sobre la invasividad celular.
En la realización de este ejemplo, se utilizó el ensayo conocido como de invasividad en cámaras de Boyden. La versión comercial que se ha usado de estas cámaras se llama Transweli (de la casa Corning), y consiste en membranas relativamente inertes de políéster, con poros de 8.0 ,Lim, colocadas en un soporte plástico que se inserta en pocilios de placas de 96 pocilios. Estas membranas se recubren con componentes de la matriz extraceiular (Matrigel Growth Factor Reduced, de la casa Becton-Dickinson). Las células se depositan con medio carente de suero fetal bovino en la cámara superior, y en la cámara inferior (el pocilio de la placa de 96 pocilios) se coloca el mismo medio. Se permite la invasión de las células desde la cámara superior hacia la cámara inferior durante 48 h en las condiciones habituales de cultivo descritas en anteriores ejemplos. Al cabo de esa incubación, se procede ai recuento de las células que han pasado a la cámara inferior. Para la realización de este ejemplo, las células PC-3Mc fueron tratadas con los compuestos problema a una concentración final de 5 μΜ durante las 48 h previas al ensayo de invasividad. Tras ese tiempo de tratamiento, las células fueron despegadas de las placas de cultivo medíante incubación con tripisína (25 unidades / mL) y EDTA (0.1 mM) durante 5 minutos, resuspendidas en medio completo, y sembradas sobre las cámaras superiores de los insertos Transweli previamente cubiertos con Matrigel a una concentración de 10 mg/mL. Los compuestos problema se añadieron tanto a la cámara superior como a la inferior, a una concentración de 5 mM, manteniéndose este tratamiento a lo largo de todo el periodo de duración del ensayo. Cada condición se realizó por triplicado. La Figura 9 ilustra cómo, en estas condiciones, tanto el I-B17 como el I-B2 inhiben significativamente la invasividad de las células PC-3Mc.

Claims

REIVINDICACIONES:
1.- Un compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000046_0001
Fórmula (I)
o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de éste,
A se selecciona entre -CH(OH)- y -C(=0)-,
Z se seíeccíona entre H y OH,
n es un número entero seleccionado entre 0 y 1 ,
R-i se selecciona entre aíquilo(C-i-C3o), alquenilo(C2-C30) y alquiniío(C C30),
B se selecciona entre -H, -N3 y -CECH,
R2 se selecciona entre -NHR3 y maleimida, donde
R3 se selecciona entre -COR4, -COCOR4 y -SO2R4, donde
R4 se selecciona entre alquilo(Ci-Ci6), alquenilo(C2-Ci6), alquinilo(C C e), epóxido y aziridina; donde los grupos alquilo, aiqueniio o alquinilo de R1 y R4 pueden estar, independientemente, opcionalmente sustituidos por uno o varios sustituyentes elegidos independientemente entre halógeno, OH, OR, OCF3, NH2, NO2, NRR', NHCOR; CONRR , CHO, COOH, COOR, OCOR y CN, donde R y R' son alquilo o aiqueniio con la condición de que
a) cuando A es -CH(OH) y B es H, R3 es diferente de -COR4 siendo R4 aiquilo(CrCi6) sin sustituir o sustituido por halógeno o hidroxilo;
b) cuando A es -CH(OH), B es H,y R3 es -COCOR4 siendo R4 alquilo(C6), R es diferente de
Figure imgf000047_0001
-C≡CH-aiquilo(C 2) o alquilo(Ci3-Ci5); o
c) cuando A es -C(=0), R-i es alquenilo(C2-C30), B es H y n es 0, R3 es diferente de -COR4 siendo R4 aiquilo(d-Ci6).
2. - Un compuesto de fórmula (I) según ia reivindicación 1 , caracterizado porque R1 se selecciona entre alquílo(CrC3o) y alquenilo(C2-C3o)
3. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque n es 0.
4. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R3 es -CO-R4 siendo R4 alquílo(CrCi6), y B se selecciona entre ~N3 y -CECH.
5. - Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 4, caracterizado porque R4 es un alquilo(CrCi6) sustituido con ai menos un átomo de halógeno.
6.- Un compuesto de fórmula (I) según ía reivindicación 5, caracterizado porque R4 es un alquilo(Ci-Ci6) sustituido con al menos un átomo de flúor o bromo.
7.- Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, caracterizado porque A es -C(=0).
8. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 , caracterizado porque R3 es -CO-R4 siendo R4 epóxído.
9. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque R3 es -CO-R4 siendo R4 epóxido, n es 1 y Z es
OH.
10. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R3 es -CO-R4 y R4 se selecciona entre alquenilo(C2-Ci6)y alquinilo(C2-Ci6).
11. - Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 10, caracterizado porque R4 es un alquenilo(C2-C 6) sustituido con al menos un átomo de halógeno.
12. - Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 11 , caracterizado porque R4 es un alquenilo{C2-Ci6) sustituido con al menos un átomo de flúor o bromo.
13.- Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, caracterizado porque R4 es un alquenílo(C2-Ci6) o alquinilo(C2-Ci6) sustituido con al menos un grupo -CHO o - COOH.
14. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R3 es -CO-CO-R4 siendo R4 aíquilo(Ci-C-i6) y B se selecciona entre -N3 y -C CH.
15. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R3 es -SO2-R4, donde R4 se selecciona entre alquilo(CrCi6), alquenilo(C2-Ci6), alquínílo(C2-C 6), epóxido y azíridina.
16. - Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 15, caracterizado porque f¾ es alquiio(Ci-Ci6).
17. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque R3 es -SO2-R4, donde R4 se selecciona entre alquilo(d-Ci6), alquenilo(C-2-Ci6), alquínilo(C-2-Ci6), epóxido y aziridina, n es 1 y Z es OH.
18. - Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 17, caracterizado porque R4 es alquiio(CrCi6).
19. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R2 es maleimida.
20.- Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de ias reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho compuesto se selecciona de la lista que consiste en:
1 -[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il]-1 H-pirroí-2,5-diona,
A/-[(2S,3 E)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-2-il]etanosulfonamida,
A/-[(2S,3R)-1 ,3~díhídroxioctadecan-2-il]etanosulfonamída,
A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihídroxioctadec-17-ín-2-il]etanosulfonamída,
A/-[(2S,3R)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradecan-2-il)etanosulfonamida,
2-bromo-A/-[(2S,3R)-1 ,3-díhidroxioctadec-17~in-2-il]acetamida,
A/-[(2S,3R)-14-azido-1 ,3-dihídroxitetradecan-2-íi]bromoacetamida,
A/-[(2S,3R,E)-14-azido-1 ,3-díhídroxitetradec-4-en-2-il]bromoacetamida, 2-bromo-A/-[(2S,3 £)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-17-in-2-il]acetamida,
(S)-A/-(14-azído-1-hidroxí-3-oxotetradecan-2-il)-2-bromoacetamída,
(RS)-/V-[(2S,3R,E)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-2-ii]oxirano-2-carboxamida, (f?S)-A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il]oxirano-2-carboxamida,
(RS)-A/-[(2S,3 E)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-17-in-2-il]oxirano-2- carboxamida, (RS)-/V-[(2S,3R)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradecan-2-il]oxirano-2-carboxamida, A/-[(2S,3R)-1 ,3-díhidroxioctadecan-2-il]propiolamida,
/V-[(2S,3R)-1 ,3-dihídroxioctadecan-2-il]but-2-inamida,
A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il]acniamida,
(E)~A/-[(2S,3R)~1 ,3-díhídroxioctadecan~2-il]-2-butenamida,
A/-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il3metacrilamida,
A/-[(2Sl3R)-N-1 ,3-dihidroxyoctadecan-2-il]-3-metil-2-butenamida,
(2E,4E)-N-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioGtadecan-2-il]hexa-2,4-dienamida,
Ácido (E)-4-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-iíamino]-4-oxo-2-butenoico, (Z)-2,3-dibromo-N-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ii]-4-oxo-2-butenamida, (2S,3 ?)-2-(bromometi!)-N-(1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acrilamida,
(E,2S,3R)-/V-(1 ,3-dihidroxi-2-octadeGil)-2-metil-2-butenamida,
(2S,3R)-N-(1 ,3-dihidroxi-17-octadecin-2-il)-2-oxooctanamida y
(2S,3R)-N-(14-azido-1 ,3-díhidroxi-2-tetradecíl)-2-oxooctanamida,
o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos.
21. - Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 20, caractenzado porque dicho compuesto se selecciona de ía lista que consiste en:
2-bromo-/V-[(2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadec-17-ín-2-il]acetamida,
A/-[(2S,3R)-14-azido-1 ,3-dihídroxitetradecan-2-íl]bromoacetamída,
A/-[(2S,3R;E)-14-azido-1 ,3-dihidroxitetradec-4-en-2-il]bromoacetamida, 2-bromo-A/-[(2S,3R,E)-1 ,3-dihidroxioctadec-4-en-17-in-2-il]acetamida y
(S)-A/-(14-azido-1-hidroxi-3-oxotetradecan-2-ii)-2-bromoacetamida,
o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos.
22. - Un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque dicho compuesto se selecciona de la lista que consiste en:
/V-[(2S,3S,4R)-1 ,3,4-trihidroxioctadecan-2-il]etanosulfonamida y (RS)-N-[(2S,3Sl4R)-1 ,3,4-trihidroxioctadecan-2-il]oxirano-2-carboxamida, o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos.
23.- Composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula general (I) o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de éste tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, y ai menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
24. - Un compuesto de fórmula general (I) tai como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 o un compuesto elegido entre 2,2- dibromo-N-((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ii)acetamida y 2-bromo-N- ((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamída o un estereoisómero, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos, para utilizar en el tratamiento o prevención de una enfermedad que cursa con hiperproliferación celular.
25. - Una composición tal como se define en la reivindicación 23 o una composición que comprende un compuesto elegido entre 2,2-dibromo-N-
((2S,3R)-1 ,3-díhidroxioctadecan-2-il)acetamida y 2-bromo-N-((2S,3R)-1 ,3- dihidroxioctadecan-2-il)acetamida o un estereoisómero, una sai o un solvato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos y al menos un excipiente, para utilizar en el tratamiento o prevención de una enfermedad que cursa con hiperproliferación celular.
26. - Un compuesto según la reivindicación 24 o una composición según la reivindicación 25, para utilizar en el tratamiento o prevención de una enfermedad cursada con hiperproliferación celular elegida entre cáncer, metástasis, inflamación, asma y arteríosclerosis.
27. - Un compuesto o una composición según la reivindicación 26, para utilizar en el tratamiento de un tipo de cáncer elegido entre cáncer de próstata, de páncreas, de cerebro, de colon, de pulmón, de mama, de cabeza y cuello, de ovario, de laringe, de vejiga urinaria, de útero, de piel, sarcomas, linfomas y leucemia.
28. - Un compuesto o una composición según la reivindicación 27, para utilizar en el tratamiento de un tipo de cáncer elegido entre cáncer de próstata y cáncer de pulmón.
29. - Un compuesto de fórmula general (I) tai como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 o un compuesto elegido entre 2,2- dibromo-N-((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-ii)acetamida y 2-bromo-N- ((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamída o un estereoisómero, una sal o un soivato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos, para utilizar en combinación con otra terapia para el tratamiento de una enfermedad tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 24, 26 a 28.
30.- Una composición tai como se define en la reivindicación 23 o una composición que comprende un compuesto elegido entre 2,2-dibromo-N- ((2S,3R)-1 ,3-dihidroxioctadecan-2-il)acetamida y 2-bromo-N-((2S,3R)-1 ,3- díhidroxioctadecan~2-íl)acetamida o un estereoisómero, una sal o un soivato farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos al menos un excipiente, para utilizar en combinación con otra terapia para el tratamiento de una enfermedad tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 25, 26 a 28.
PCT/ES2012/070485 2011-07-01 2012-06-29 Amidas de 2-amino-1,3-propanodioles y su uso como inhibidores de ceramidasas Ceased WO2013004871A1 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ESP201131119 2011-07-01
ES201131119A ES2396092B1 (es) 2011-07-01 2011-07-01 Amidas de 2-amino-1,3-propanodioles y su uso como inhibidores de ceramidasas.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013004871A1 true WO2013004871A1 (es) 2013-01-10

Family

ID=47436566

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES2012/070485 Ceased WO2013004871A1 (es) 2011-07-01 2012-06-29 Amidas de 2-amino-1,3-propanodioles y su uso como inhibidores de ceramidasas

Country Status (2)

Country Link
ES (1) ES2396092B1 (es)
WO (1) WO2013004871A1 (es)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018200931A1 (en) * 2017-04-28 2018-11-01 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for treating cancer

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001072701A1 (en) * 2000-03-28 2001-10-04 The Liposome Company, Inc. Ceramide derivatives and method of use
EP1580187A1 (en) * 2004-03-22 2005-09-28 Hans-Peter Deigner Apoptogenic and antiproliferative analogs of ceramide

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001072701A1 (en) * 2000-03-28 2001-10-04 The Liposome Company, Inc. Ceramide derivatives and method of use
EP1580187A1 (en) * 2004-03-22 2005-09-28 Hans-Peter Deigner Apoptogenic and antiproliferative analogs of ceramide

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PARK, J. ET AL.: "Divergent syntheses of all stereoisomers of phytosphingosine and their use in the construction of a ceramide library", BIOORGANIC CHEMISTRY, vol. 36, 2008, pages 220 - 228 *
SZULC, Z.M. ET AL.: "Tailoring structure-function and targeting properties of ceramides by site-specific cationization", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 14, 2006, pages 7083 - 7104 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018200931A1 (en) * 2017-04-28 2018-11-01 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for treating cancer
US11426371B2 (en) * 2017-04-28 2022-08-30 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for treating cancer

Also Published As

Publication number Publication date
ES2396092B1 (es) 2014-01-02
ES2396092A1 (es) 2013-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2703904T3 (es) Moduladores del receptor de NMDA y usos de los mismos
ES2539383T3 (es) Análogos arilesfingosina 1-fosfato bicíclicos
CA2990668C (en) IONIZABLE COMPOUNDS AND RELATED COMPOSITIONS AND USES
US10195179B2 (en) Spiro-lactam NMDA receptor modulators and uses thereof
JP7036792B2 (ja) スピロ－ラクタムｎｍｄａ受容体修飾因子およびその使用
ES2979128T3 (es) Moduladores del receptor NMDA espirolactama y bis-espirolactama y uso de los mismos
KR20120112351A (ko) 옵신 결합 리간드, 조성물 및 사용 방법
NZ512398A (en) Colchinol derivatives as vascular damaging agents
WO2003059866A1 (en) Geranyl compounds
JP6617702B2 (ja) Ｆｔｙ７２０のアザサイクリック拘束アナログ
ES2701531T3 (es) Derivados de pantotenato para el tratamiento de trastornos neurológicos
PT98227A (pt) Processo de preparacao de 1,4-diamino-2-3-di-hidroxi-butanos substituidos e de composicoes farmaceuticas que os contem
Chen et al. Structure-activity relationships in a series of 5-[(2, 5-dihydroxybenzyl) amino] salicylate inhibitors of EGF-receptor-associated tyrosine kinase: importance of additional hydrophobic aromatic interactions
EP2509939A2 (en) Novel n-benzylamide substitued derivatives of 2-(acylamido)acetic acid and 2-(acy-lamido) propionic acids: potent neurological agents
US20240101584A1 (en) Targeted delivery of 1,2,4,5 tetraoxane compounds and their uses
AU2005203122A1 (en) Inhibitors of the anandamide transported
ES2396092B1 (es) Amidas de 2-amino-1,3-propanodioles y su uso como inhibidores de ceramidasas.
JPWO2015030106A1 (ja) Ｇｇｔ阻害作用を有する化合物及びｇｇｔファミリー酵素阻害剤
ES3059582T3 (en) Sulfamate derivative compounds, processes for preparing them and their uses
ES2282315T3 (es) Profarmacos de aminoacidos excitadores.
JP7653184B2 (ja) ６‐（２‐（２ｈ‐テトラゾール‐５‐イル）エチル）‐６‐フルオロデカヒドロイソキノリン‐３‐カルボキシル酸及びそのエステル誘導体の医薬組成物
CN106674252A (zh) 海洋天然产物环酯肽的氟代烯烃类似物、其制备方法和用途
EP1806141B1 (en) Par-2 antagonists
CN109134511B (zh) C19位氟代的Largazole类似物、其制备方法和用途
CA2840031A1 (en) New ligands for targeting of s1p receptors for in vivo imaging and treatment of diseases

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12807234

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12807234

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1