WO2012177081A2 - 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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preventing
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안경섭
권옥경
오세량
김정희
리쑨콴
박지원
이상우
이중구
이형규
최상호
바이트 트란더
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한국생명공학연구원
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    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • composition for preventing and treating inflammatory diseases containing Aldicia tincture extract or fractions thereof as an active ingredient
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases using an Aldicia tincture C4 // s / a tine tori a Pit.) Extract or a fraction thereof.
  • Inflammation refers to the pathological condition of an abscess formed by the invasion of external infectious agents (bacteria, bears, viruses, various types of allergens).
  • bacteria bacteria
  • viruses viruses
  • various types of allergens bacteria, bears, viruses, various types of allergens.
  • the dead cells of the white blood cells generated during this process accumulate in the tissues invaded by the bacteria, and at the same time, cell destruction of the invading bacteria killed by the white blood cells is carried out. It melts into the invading tissue and forms an abscess. Inflammation of the abscess can be promoted through anti-inflammatory action.
  • Anti-inflammatory action is used to inhibit the growth of invading bacteria by using an antimicrobial agent or to activate macrophage (macrophage) that phagocytosed foreign substances accumulated in the abscess to digest the foreign substances. And promotes inflammation, such as promoting the function of the macrophages to excrete.
  • macrophage macrophage
  • an inflammatory reaction is a defensive reaction process of a living body that attempts to repair and repair the damaged area when an invasion that causes any organic change in the cells or tissues of the living body. It is said to include tissue cells and immune-related cells.
  • tissue cells and immune-related cells.
  • inflammatory diseases have been attempted at the molecular level of cytokines, and factors affecting these diseases have been identified one by one.
  • NF-KB nuclear factor-kappa B
  • I KBGnhibitory kappa B chemokines and lipo like reactive oxygen
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor-alpha I ⁇ kinase is activated by various stimuli such as polysaccharides (LPS) and then phosphorylated to release ⁇ .
  • NF ⁇ ⁇ composed of ⁇ 50 and ⁇ 65 heterodimers, is known to promote the expression of genes (tumor necrosis factor or cyclooxide synthase) that, after being activated, migrate to the nucleus and induce inflammatory reactions.
  • genes tumor necrosis factor or cyclooxide synthase
  • Nitric oxide (NO) is produced by oxidizing L-arginine by nitric oxide synthase (N0S), which is a mediator of the inflammatory process.
  • inducible nitric oxide synthase iNOS
  • PGE2 Prostaglandin E2
  • Leukotriene are also inflammatory mediators produced from arachidonic acid, in particular PGE2 is produced by the cyclooxide synthase (C0X— 2; cyclooxygenase-2 enzyme) and mainly macrophages. It is found that macrophages are rapidly induced by inflammatory agents such as ribopolysaccharides. Adjuvant, collagen II, and carrageenan are used in animal models for inflammation.
  • Carrageenan extracted from Chondrus cripus a kind of algae, has acute inflammation and chronic inflammation, DIC induction, and tumors. It is known to have various biological effects such as growth promotion, activation of Hagenian factor and kinin, and inactivation of complement (Chan WY et al., J. Pharmacol. Expt 1. Therap., 147: 48, 1965).
  • steroids The most potent anti-inflammatory drug of all time has been developed by steroids.
  • long-term use will always have side effects. Therefore, in the treatment of inflammation, steroids exert a surprising effect on the first use and completely disappear the symptoms, but this is only for a while, the symptoms reappear with the use of steroids, and the symptoms become more severe with repeated use.
  • Side effects of steroids include many back side effects, such as back-blooded face, fluid retention, adrenal suppression, increased susceptibility to infection and other psychosis, cataracts, glaucoma, peptic ulcer, delayed wound healing, and reactivation of early infection. Have.
  • NF- ⁇ atopic dermatitis
  • an atopic therapeutic agent was developed that administered artificial DNA similar to the gene to which ⁇ binds to bind NF-i B to inhibit the action of NF- ⁇ .
  • Nortavis, Switzerland is an inducer of ascomycin, and has developed and marketed "Elidel” of Pimecrolimus, a therapeutic agent for atopic dermatitis with a mechanism to selectively inhibit the release of inflammation-causing cytokines.
  • Elidel of Pimecrolimus
  • Prof. Jang Hyun-wook of Yeungnam University College of Medicine has extracted the extract of Sambaekcho and leather tree for the treatment of asthma and allergies, and signed a technology transfer contract with Korea's pharmacies for 150 million won and 4% of ordinary fee. (January 22, 2006 article article).
  • Aldicia tinktoria G / y / s / a tine tori a Pit. Is a plant belonging to the family Myrsinaceae, and it is known to be used as a black dye in the folklore, but the antioxidant activity of the same plants A. crenata and A.
  • pus ilia 2008-001634, Japan Patent
  • a study on the antimicrobial activity (salmonella) of components such as syringic acid, isorhamnetin, and quercetin isolated from A.elliptica plants Results There is no bar. Accordingly, the present inventors conducted screenings related to inflammatory activity of plant extracts abroad, Al0sia tincture extracts, N0, PGE2 and IL-6 (interleukin ⁇ 6) and IL-lbeta cytokine which increased rapidly due to inflammation It was found that there is an effect of significantly lowering the amount of caine.
  • the tincture thoria extract inhibit iNOS and C0X-2 phosphorylation of the gene and inhibit the expression of the protein also with nuclear transfer of the p65 proteins and signaling molecules, with carrageenan, In the induced mouse foot edema model, it was confirmed that the aldicia tincture extract has an anti-inflammatory effect. Accordingly, the Aldicia tincture extract was completed as a safe substance without plant-derived cytotoxicity, and can be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for preventing or treating various inflammatory diseases including allergies. [Detailed Description of the Invention]
  • the present invention is Aldicia tincture
  • composition for preventing and treating inflammatory diseases containing tinctoria Pit.) extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention also provides a skin external preparation for preventing and improving inflammatory diseases containing Aldicia tincture extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases containing Aldicia tincture extract or fractions thereof as an active ingredient.
  • the present invention also provides a composition for preventing and improving inflammatory diseases containing aldicia tincture extract or fractions thereof as an active ingredient.
  • the present invention also provides a method of treating inflammatory disease, comprising administering a pharmaceutically effective amount of an Aldicia tincture extract or a fraction thereof to an individual suffering from an inflammatory disease.
  • the present invention also provides a method for preventing inflammatory disease comprising administering to a subject a pharmaceutically effective amount of an Aldicia tincture extract or a fraction thereof.
  • the present invention also provides an aldicia tincture extract or a fraction thereof for use as a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases.
  • the present invention also provides an aldicia tincture extract or fractions thereof for use as an external preparation for skin for preventing and improving inflammatory diseases.
  • the present invention also provides an aldicia tincture extract or a fraction thereof for use as a cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases.
  • the present invention provides an aldicia tincture extract or fractions thereof for use as a composition for preventing and improving inflammatory diseases.
  • inflammation refers to an abscess formed by the invasion of an external infectious agent (bacteria, gourd. Tooth, virus, various types of allergens). Means a pathological condition.
  • allergy refers to a phenomenon in which a living body in contact with a foreign substance exhibits a different reaction from the normal to the substance.
  • prevention refers to any action that inhibits or delays the progression of an inflammatory disease by administration of a composition of the present invention.
  • treatment and “improvement” refer to any action in which the symptoms of an inflammatory disease are ameliorated or beneficially altered by administration of a composition of the invention.
  • administration means providing a subject of the present composition in any suitable manner.
  • the term "individual 1" used in the present invention refers to all animals, such as humans, monkeys, dogs, goats, pigs or mice having a disease that can improve the symptoms of inflammatory diseases by administering the composition of the present invention.
  • the term "pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable, benefit or risk ratio applicable to medical treatment, which means the type of disease, the severity and the activity of the drug in the individual. It may be determined according to the sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of release, the duration of treatment, factors including the drug used at the same time and other factors well known in the medical field.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases, which comprises an extract of Aldicia tinctoria (U / s / a tinctoria Pit.) Or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the inflammatory diseases are allergic, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis, pharyngitis, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia, Psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendonitis, hay, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis: Nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases It is preferable to be one It is not limited.
  • the aldicia tincture extract is preferably prepared by a manufacturing method comprising the following steps, but not always limited thereto:
  • step 3 drying the filtered extract of step 2) under reduced pressure.
  • the aldicia tincture of step 1) can be used without limitation, such as being grown or marketed.
  • the aldicia tincture is available in both leaves, stems or roots.
  • the extraction solvent is preferably water, alcohol or a combination thereof. It is preferable to use C1 , C2 lower alcohols as the alcohol, and ethane or methane as the lower alcohols. As the extraction method, it is preferable to use shaking extraction, Soxhlet extraction or reflux extraction, but is not limited thereto.
  • the extraction solvent is preferably extracted by adding 1 to 10 times the amount of dried aldicia tincture.
  • the extraction temperature is preferably 30 to ioo ° C, but is not limited thereto.
  • the extraction time is preferably 10 to 48 hours, more preferably 15 to 30 hours, but is not limited thereto.
  • the number of times the extraction is preferably 3 to 5 times, more preferably three times repeated extraction is not limited thereto.
  • the reduced pressure concentration in step 3) is preferably a vacuum reduced concentration concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • the fraction of the aldicia tincture extract of the present invention is preferably prepared by a method of extracting the aldicia tincture extract additionally with an organic solvent, but is not limited thereto.
  • the organic solvent is preferably n-nucleic acid, chloroform, ethyl acetate or butane, but is not limited thereto.
  • the fractions were added with n-nucleic acid, chloroform, ethyl acetate and butanol in stages, and then soluble in each solvent addition stage. 0
  • the fraction obtained n—nucleic acid fraction, chloroform fraction, ethyl acetate fraction and butane fraction, and the water fraction obtained by removing the butanol fraction and concentrating the remaining water layer may be used, most preferably ethyl acetate fraction.
  • aldicia tincture extract or fractions thereof in order to confirm the cytotoxicity of the aldicia tincture extract or fractions thereof, after inoculating the macrophage of the mouse RAW264.7 cells in 96-well plate and attached, aldicia tincture After treatment with various concentrations of Toria extract or its fractions and incubated, the absorbance was measured, the cell viability was calculated as 100% of the negative control group treated with DMS0, Aldicia tintoria extract or ethyl acetate fraction, butanol fraction And water fractions were found to be non-toxic up to a concentration of 20 / g / ⁇ (see Table 1).
  • the production of lipopolysaccharide-induced nitric oxide (NOtric oxide) in raw 264.7 cells was measured, LPS It was confirmed that the aldicynic tincture extract was strongly inhibited by the increased nitric oxide production amount, and in particular, the ethyl acetate fraction showed the strongest inhibitory effect of nitric oxide formation (69.87 ⁇ 2.74%) (see Table 2). ). In addition, it was confirmed that the nitric oxide production was significantly reduced in a concentration-dependent manner in the group in which Aldicia tincture extract was pretreated and LPS induced inflammation compared to the group treated with LPS alone (see FIG. 1).
  • RT PCR Reverse transcription—Polymerase chain reaction
  • Western blot Western blot and immunofluorescence staining to confirm the effect of inhibiting the expression of iNOS gene and protein of the Aldicia tintusia extract, lipopoly It was confirmed that iNOS gene expression was increased in the cells treated with saccharides, and in the cells treated with the Aldicia tincture extract, the amount of nucleic acid expression of iNOS and protein expression of iNOS were significantly decreased according to the treatment concentration (FIG. 2 ). Reference).
  • prostaglandin E2 Prostaglandin E2
  • prostaglandin E2 production inhibitory effect of the aldicia tincture extract prostaglandin E2 production is rapidly produced in cells treated only with lipopolysaccharide
  • prostaglandin E2 production was inhibited in a concentration-dependent manner in cells pre-treated with aldicia tincture extract (see FIG. 3).
  • nucleic acid expression amount and protein of C0X-2 according to the treatment concentration It was confirmed that the expression was significantly reduced (see FIG. 4).
  • the amount of IL-6 and IL-beta cytokines increased by the treatment of LPS concentration by pre-treating the aldicia tincture extract It was confirmed that the decrease is medically (see Fig. 5a and 5b).
  • the amount of cytoplasmic p65 is reduced by 30 minutes when only LPS treatment, while the p65 in the nucleus The amount was found to increase.
  • the indicia tincture was induced by LPS after pretreatment, it was confirmed that the increase in the amount of p65 in the nucleus was weak (see FIG. 6).
  • JNK and p38 is the overall form protein • the changes were not, there was no change for the Xiah hayeoteu mye Aldi tincture extract Astoria process confirmed that the increase in the phosphorylated form of the protein expression by LPS.
  • ERK protein Aldicia tintoria extract treatment did not change the protein of the whole form, it was confirmed that the phosphorylated protein also suppressed the increase in expression (see Figure 7).
  • the Aldicia tincture extract was found to have an excellent anti-inflammatory effect on animal cells, and thus confirmed the anti-inflammatory effect through animal experiments, even in the carrageenan-induced mouse foot edema model. It was confirmed that the ethyl acetate fractions showed a significant inhibitory effect (see Figure 8).
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention inhibits the production of nitric oxide which is rapidly increased by inflammation, and is concentration-dependent. Significantly lowers the levels of PGE2 and IL-6 (interleukin-6) and IL-lbeta cytokines, inhibits the expression of iNOS and C0X-2 genes and -proteins, and inhibits nuclear translocation and phosphorylation of p65 proteins Inhibition, carrageenan-induced mouse foot edema model also shows a significant inhibitory effect, it can be seen that it can be useful as an active ingredient in the pharmaceutical composition for the prevention and treatment of inflammation-related diseases.
  • the composition containing the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention may further contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to the above components.
  • composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable additive, wherein the pharmaceutically acceptable additive may include starch, gelatinized starch, microcrystalline cellulose, lactose, povidone, colloidal silicon dioxide, hydrogen phosphate , Lactose ,. Manni, syrup, gum arabic, pregelatinized starch, corn starch, powdered cellulose, hydroxypropyl cellulose, opadry, sodium starch glycolate, carnauba lead, synthetic aluminum silicate, stearic acid, magnesium stearate, stearic acid Aluminum, calcium stearate, sucrose, dextrose, sorbide and talc can be used.
  • the pharmaceutically acceptable additive according to the present invention is preferably included 0.1 to 90 parts by weight based on the composition, but is not limited thereto.
  • composition of the present invention can be administered in various oral and parenteral dosage forms in actual clinical administration, and when formulated, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, etc., which are usually acid-soluble It can be prepared using.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, which may include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, water Can be prepared by mixing sucrose, lactose or gelatin.
  • lubricants such as magnesium styrate talc may also be used.
  • Oral liquid preparations include suspending agents, liquid solutions, emulsions and syrups, and may include various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin.
  • Formulations for parenteral administration include Sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories can be included.
  • the non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used.
  • As a suppository base witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, and glycerogelatin can be used.
  • composition of the present invention can be administered orally or parenterally according to the desired method, the external or intraperitoneal injection, intrarectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intramuscular injection in parenteral administration It is preferable to select. Dosage ranges according to the patient's weight age, sex, health status, diet, administration time, administration method, excretion rate and the severity of the disease.
  • the dosage of the composition of the present invention varies depending on the patient's weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, administration method, excretion rate and severity of the disease, the daily dosage is the Aldicia tinctureria extract 0.0001 to 100 mg / kg based on the amount of preferably 0.001 to 10 mg / kg, may be administered 1 to 6 times a day.
  • composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological reaction modulators for the prevention and treatment of inflammatory diseases.
  • the present invention also provides a method for treating an inflammatory disease, comprising administering to a subject suffering from an inflammatory disease a composition containing a pharmaceutically effective amount of an Aldicia tincture extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a method for preventing inflammatory disease comprising administering to a subject a composition containing a pharmaceutically effective amount of an Aldicia tincture extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the pharmaceutically effective amount is 0.0001 to 100 mg / kg, preferably
  • Dosage may vary depending on the age, sex, health, diet, duration of administration, rate of removal, severity of the disease, and the like of a particular patient. '
  • the subject is a vertebrate and preferably a mammal; Preferably, they are experimental animals such as rats, rabbits, guinea pigs, hamsters, dogs, and cats, and most preferably are apes, such as chimpanzees and gorillas.
  • experimental animals such as rats, rabbits, guinea pigs, hamsters, dogs, and cats, and most preferably are apes, such as chimpanzees and gorillas.
  • the method of administration may be administered orally or parenterally, intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intrauterine dural injection, intracerebroventricular injection or intrathoracic injection during parenteral administration. It can be administered by injection.
  • the inflammatory diseases include allergies, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus ⁇ fibromyalgia, psoriatic arthritis , Osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendonitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases Preferred but not limited to.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention inhibits the rapid increase in nitric oxide production due to inflammation and significantly increases the amount of PGE2 and IL ⁇ 6 (interleukin-6) and IL-lbeta cytokines in a concentration-dependent manner. Lowering the level of iNOS and C0X-2 genes and proteins, inhibiting nuclear transfer of p65 protein and phosphorylation of signaling molecules, and carrageenan-induced mouse foot edema model. It can be seen that it can be usefully used as an active ingredient of the pharmaceutical composition for the prevention and treatment of inflammation-related diseases.
  • the present invention also provides a skin external preparation for preventing and treating inflammatory diseases, which contains an Aldicia tincture extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the inflammatory diseases include allergy, edema, dermatitis, atopy, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, ulcerative colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia (fibromyalgia) ), Psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, shoulder periarthritis, tendonitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and various acute and chronic inflammatory diseases Characterized in that any one is not limited to this.
  • Aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention inhibits the rapid increase in nitric oxide production due to inflammation, and significantly increases the amount of PGE2 and IL-6 (interleukin-6) and IL-lbeta cytokines in a concentration-dependent manner. Lowers the expression of iNOS and C0X-2 genes and proteins, inhibits nuclear transfer of p65 protein and phosphorylation of signaling molecules, and has a significant inhibitory effect in carrageenan-induced mouse edema model. It can be usefully used as an active ingredient of a skin external preparation for preventing and treating various inflammatory diseases.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention is used as an external preparation for skin, in addition to fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents (foaming) agents), fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, layering agents, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic activities G), auxiliaries commonly used in dermatological analysis, such as lipid vesicles or any other ingredients conventionally used for external preparations for skin use.
  • the ingredients may be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.
  • the dosage of the aldicia tincture extract in the external preparation for skin is 0.0001 to 100 mg / kg, preferably 0.001 to 10 mg / kg, but is not limited thereto. Dosage may vary depending on the weight, age, sex, health, duration of administration, clearance, and severity of the particular patient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases containing Aldicia tincture extract or fractions thereof as an active ingredient.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention inhibit the production of nitric oxide, which is rapidly increased by inflammation, and significantly increase the amount of PGE2 and IL ⁇ 6 (interleukin-6) and IL-lbeta cytokines in a concentration-dependent manner. Inflammatory, it inhibits the expression of iNOS and C0X-2 genes and proteins, inhibits nuclear transfer and signaling phosphorylation of p65 protein, and has a significant inhibitory effect in carrageenan-induced mouse edema model.
  • cosmetic compositions for preventing and improving diseases It can be usefully used as an active ingredient.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention are used as a cosmetic composition, for example, emulsions, suspensions, microemulsions, and microemulsions obtained by 'dispersing an oil phase in a solution, gel, solid or pasty anhydrous product, or water phase. It may be provided in the form of capsules, microgranules or ionic (liposomes), nonionic vesicle dispersants, creams, skins, lotions, powders, ointments, sprays or concealed sticks. It may also be prepared in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
  • the cosmetic composition is in addition to the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention, fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances , Surfactants water, ionic or nonionic emulsifiers, layering agents, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or cosmetics It may contain adjuvants conventionally used in the cosmetic field, such as any other ingredients conventionally used in the art.
  • the present invention provides a health food for preventing and improving inflammatory diseases containing aldicia tincture extract or fractions thereof as an active ingredient.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention inhibits the production of nitric oxide, which is rapidly increased by inflammation, and depends on the concentration of PGE2 . And significantly lower the levels of IL-6 (interleukin-6) and IL-lbeta cytokines, inhibit the expression of iNOS and C0X-2 genes and proteins, inhibit nuclear transfer and signaling phosphorylation of p65 protein.
  • Carrageenan-induced mouse foot edema model also shows a significant inhibitory effect, it can be usefully used as a component of the composition for health food for preventing and improving various inflammatory diseases.
  • the inflammatory diseases include allergy, edema, dermatitis, atopy, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, ulcerative colitis, gout, Ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia, psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendonitis, hay, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and a variety of Characterized in that it is any one selected from the group consisting of acute and chronic inflammatory diseases, but is not limited thereto.
  • the health food of the present invention may be added to the Aldicia tincture extract or fractions thereof as it is, or used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the kind of the health food There is no particular limitation on the kind of the health food.
  • foods to which the Aldisia tincture extract can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, 3 ⁇ 4, ice creams including various kinds of soups, drinks , Teas, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes, and includes all of the health food in the usual sense.
  • the health beverage composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional components, as in the general beverage.
  • the above-mentioned natural carbohydrates are glucose, monosaccharides such as fructose, maltose, disaccharides such as sucrose, polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, sugars such as xyl, sorbitol, and eritlet.
  • sweetener natural sweeteners such as tautin, stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin, aspartame, and the like can be used.
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ⁇ of the composition of the present invention.
  • the health food of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, And carbonating agents used in carbonated drinks.
  • it may contain flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks.
  • the proportion of such additives is not critical, but is usually selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • the present invention also provides an aldicia tincture extract or a fraction thereof for use as a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases.
  • the present invention also provides an aldicia tincture extract or fractions thereof for use as an external preparation for skin for preventing and improving inflammatory diseases.
  • the present invention also provides an aldicia tincture extract or a fraction thereof for use as a cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases.
  • the present invention provides an aldicia tincture extract or fractions thereof for use as a composition for preventing and improving inflammatory diseases.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention inhibits the rapid increase in nitric oxide production due to inflammation and significantly increases the amount of PGE2 and IL1 (interleukin-6) and IL—lbeta cytokines in a concentration-dependent manner. It lowers the expression of iNOS and C0X-2 genes and proteins, inhibits nuclear transfer of p65 protein and phosphorylation of signaling molecules, and shows significant inhibitory effects in carrageenan-induced mouse foot edema model. It can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases, external skin preparations, cosmetic compositions and compositions for health food.
  • Extract or fractions thereof of the present invention has excellent anti-inflammatory activity and almost no cytotoxicity, and thus pharmaceuticals, processed foods, functional foods, etc. for the prevention and treatment of inflammatory and allergic diseases. It may be usefully used as an active ingredient of a composition such as a food additive, a functional beverage, or a beverage additive.
  • 1 is a diagram showing the inhibitory effect of aldicia tincture extract on nitric oxide production induced by lipopolysaccharide in Raw264.7 cells (# is less than PO.001 and * is positive compared to negative control) PO.05 or less): ⁇ ; Negative control group treated with DMSO only;
  • FIG. 2 is a diagram showing the inhibitory effect of Aldicia tincture extract on LPS-induced nitric oxide synthase expression:
  • FIG. 3 is a diagram showing the inhibitory effect of the aldicia tincture extract on the production of LPS-induced prostaglandins (# is less than PO.001 compared to the negative control and * is less than PO.005 compared to the positive control). .
  • FIG. 4 is a diagram showing the inhibitory effect of aldicia tincture extract on the expression of prostaglandins induced by LPS:
  • Figure 5 is a diagram showing the inhibitory effect of the aldicia tincture extract on LPS-induced cytokine production (# is less than PO.001 compared to the negative control, * is less than PO.005 compared to the positive control and ** is positive control) Contrast PO.05 or less).
  • IL-lbeta inter leukin-lbeta
  • FIG. 6 is a diagram showing the inhibitory effect of the aldicia tincture extract on nuclear transfer of p65 induced by LPS:.
  • FIG. 7 is a diagram showing the inhibitory effect of the aldicia tincture extract on the phosphorylation of LPS-induced signaling material.
  • 8 is a diagram showing the inhibitory effect of aldicia tincture extract against carrageenan induced mouse foot edema:
  • Control group Group administered only PBS;
  • Carrageenan Induction of inflammation with carrageenan after administration of PBS;
  • Indomethacin Induction with carrageenan after 5 mg / kg of indomethacin.
  • FIG. 9 shows the TLCCThin Layer Chromatography of Aldicia tinctoria Pit.
  • T aldicia tincture extract
  • W Aldisia tinktoria water fraction.
  • FIG. 10 is a diagram showing the CAD (Charge Aerosol Detector) of the Aldicia tintustoria 4 / ⁇ // 5 / ⁇ 3 tinctoria Pit.) Extract and fractions. [Best form for implementation of the invention]
  • Aldicia tincture of 100% methane extract of the present invention was purchased from the Overseas Plant Extract Bank of the Korea Center for Biomaterials, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, and the specimen (KRIB 0027026) was the herbarium of the plant of Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology. Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology). Specifically, the extraction process, after drying the aldicia tincture (leaves, young branches, flowers), adding 1 methane to the ground powder sample 113 g of ultrasonic extractor (SDN-900H, SD-ULTRASONIC CO., LTD. ) was repeated 30 times (40 KHz, 15 minutes extraction—120 minutes stop) at room temperature.
  • SDN-900H, SD-ULTRASONIC CO., LTD. ultrasonic extractor
  • Aldicia tintoria methanol extract (hereinafter referred to as Aldicia tintoria extract) was obtained.
  • Aldicia tintoria extract the aldicia tincture extract was dissolved in DMS0 (dimethyl sulfoxide) to a concentration of 20 mg / ml, and then diluted by concentration.
  • DMS0 dimethyl sulfoxide
  • Example 4 UPLC Analysis of Extracts and Fractions of Aldisia Tincture
  • the aldicia tincture extract and fractions obtained in ⁇ Example 1> and ⁇ Example 2> were dissolved in 100 mg / ml of methane and filtered through a membrane filter of 0.2.
  • Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) was run on a Waters Acquity UPLC system, and the column was ACQUITY UPLCTMBEHC18 (l (mX 2.1 mm, id, 1.7 ⁇ , waters, USA) at 35 ° C.
  • Mobile phase A is water and formic acid (100: 0.1, v / v) and mobile phase B is acetonitril and formic acid (100: 0.1, v / v).
  • mobile phase B is acetonitril and formic acid (100: 0.1, v / v).
  • the flow rate of the mobile phase was 0.4 ml / min and the sample injection amount was 3 ⁇ .
  • GAD Charge Aerosol Detector
  • the present inventors added DMEM (Dulbecco's Modified) with 5% Fetal Bovine Serum added to mouse macrophage Raw264.7 cells. Eagle Medium, Gibco Inc.) was suspended in a concentration of 1 x 10 5 / i ⁇ and inoculated in 96 well plate by 100 ⁇ . After 4 hours the aldicia tincture extract or fractions thereof was treated at a concentration of 20 g / m, or the aldicia tincture extract was treated at concentrations of 0, 5, 10, 20 and 30 / zg /.
  • DMEM Dulbecco's Modified
  • Fetal Bovine Serum added to mouse macrophage Raw264.7 cells.
  • Eagle Medium Gibco Inc.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof was treated at a concentration of 20 g / m, or the aldicia tincture extract was treated at concentrations of 0, 5, 10, 20 and 30 / zg /.
  • the cell survival rate was calculated according to the following equation with DMS0 as a negative control group treated with 0. 100%.
  • mouse macrophage Raw264.7 purchased from ATCC was added 2.5 x 10 5 pcs / m £ in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco) medium containing 5% Fetal Bovine Serum.
  • the suspension was inoculated with 200 ⁇ in 96 well plate (96 well plate).
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention was treated with 20 ⁇ / ⁇ or aldicia tincture extract, respectively, at concentrations of 0, 5, 10, 20, and 30 / zg / me.
  • 0.5 / g / m £ LPS was incubated for 24 hours.
  • the supernatant 100 was collected and placed in a new 96-well plate, and the same amount of grease reagent (Griess reagent, Sigma) was added to react at room temperature for 10 minutes, followed by a microplate measuring instrument (microplate). reader, Bio-Rad) absorbance at 540 nm wavelength was measured.
  • a calibration curve was prepared by using sodium nitrite, and the nitric oxide production in the culture medium was determined based on this, and the inhibition rate of each sample was calculated using the nitric oxide production in the LPS-treated group as 100%. .
  • RT-PCR reverse transcript ion polymerase chain react ion
  • iNOS primer forward primer 5'-GGA GCG ACT
  • TGT GGA TTG TC— 3 ' SEQ ID NO: 1
  • SEQ ID NO: 2 reverse primer 5'— GTG AGG GCT TGG CTG AGT GAG-3'
  • iNOS gene expression was increased in cells treated with lipopolysaccharide as compared to the negative control group, and nucleic acid expression of iNOS according to treatment concentration in cells treated with aldicia tincture extract. It was confirmed that the amount is significantly reduced (Fig. 2a).
  • the cells were detached from the culture vessel and contained a protease inhibitor cocktail (Roche, USA). Homogenized using protein eluate (CelLyticTM-MT Tissue Lysis Reagent, Sigma, USA). The extract was centrifuged at 14000 rpm for 20 minutes to separate supernatant and insoluble aggregates. Protein concentration in the isolated supernatant was analyzed by bio-rad protein. 4 kits (Bio-Rad protein assay kit, Bio-Rad, USA) was measured.
  • the supernatant was mixed 1: 5 with 5X SDS 0.156M Tris-HCl, pH 6.8, 2.5% SDS, 37.5% glycerol, 37.5 mM DTT) and boiled at 100 ° C for 10 minutes.
  • 20 proteins were loaded on an SDS 4-12% SDS-PAGE gel and electrophoresed at 125 V for 2 hours to separate them according to molecular weight, and the proteins were electrophoresed for 1 hour under conditions of 100 mA per gel. Transferred to PVDF membrane.
  • Anti-iNOS antibody (1: 100, Santa Cruz Biotechnology, USA) was bound to the membrane as a primary antibody, and then photosensitized.
  • the lipopolysaccharide-treated cells significantly increased the expression of iNOS protein, whereas the cells pretreated with the aldicia tincture extract were significantly reduced in the expression of the protein. (FIG. 2C).
  • the prostaglandin E2 production was rapidly increased in cells treated with lipoful saccharide, whereas the prostaglandin E2 production was inhibited in a concentration-dependent manner in the cells pretreated with the aldicia tincture extract ( 3).
  • CDNA synthesized in ⁇ Experimental Example 3-1> was used as a template, and C0X-2 primer (forward primer 5'-GM GTC TTT GGT CTG GTG CCT G-3 '; SEQ ID NO: 3, 15 reverse primer 5 After mixing the '-GTC TGC TGG TTT GGA ATA GTT GC-3'; SEQ ID NO: 4), the expression level of the gene was confirmed using PCR Premix (Ferment as, USA).
  • the present inventors have analyzed the production of LPS-induced IL-6 (interleukin-6) and IL-lbeta (mouse IL-6 EL ISA).
  • LPS-induced IL-6 interleukin-6
  • IL-lbeta IL-lbeta
  • BD OptEIATM US Black was measured using a mouse IL-1beta Enzyme Immunometr Assay Kit; Assay designs, USA).
  • the supernatant 100 ⁇ was recovered and dispensed into a 96 well plate coated with mouse immunoglobulin and reacted with stirring for 2 hours. Then, the cells were washed four times with the washing solution, and then reacted for 2 hours after dispensing the primary antibody, anti—IL-6 antibody or anti—IL-1beta antibody, at 100 ⁇ . After the reaction, washing was performed and the secondary antibody was dispensed and reacted for 30 minutes. After washing again, the substrate was added and reacted for 30 minutes, and then the degree of color development was measured at 450 nm with a microplate meter.
  • the protein was attached to the PVDF membrane in the same manner as in Experimental Example ⁇ 3-2>, and the protein expression level was confirmed by attaching the p65 antibody.
  • Aldicia tincture extract was found to have excellent anti-inflammatory effects on animal cells.
  • BALB / c female mice weighing 20-25 g were randomly selected and divided into groups.
  • Aldicia tintusia extract Black silver ethyl acetate fraction was dissolved in phosphate buffer (PBS) ultrasonically and administered at a concentration of 40 mg / kg, and PBS was administered as a negative control.
  • PBS phosphate buffer
  • indomethacin (Sigma, USA) was administered at a concentration of 5 mg / kg.
  • carrageenan (1% v / v) solution dissolved in PBS was injected 25 ul into the left foot of the mouse to induce inflammation. Foot thickness was measured with a caliper (Digital caliper, Niigata Seiki, Japan) before carrageenan injection, and measured 4 hours after carrageenan injection to calculate the degree of inflammation induction.
  • the negative control group increased the thickness of the foot by carrageenan by 0.85 ⁇ 0.12 mm, but in the group treated with the Aldicia tincture extract, 0.32 ⁇ 0.05 mm increased, and the Aldicia tinctureria ethyl acetate fraction was added.
  • 0.38 ⁇ 0.07 mm was increased, indicating that both aldicia tincture extract and fractions inhibited carrageenan-induced mouse foot edema (FIG. 8).
  • the above ingredients were mixed and layered in an airtight cloth to prepare a powder.
  • Aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention 100 rag
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • Aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention 100 mg
  • the capsules were prepared by layering the gelatine capsules according to a conventional method for preparing capsules.
  • Aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention 1 g.
  • Aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention 150 mg
  • Brown rice, barley, rice, and jujube were alphanized by a known method and then dried to be roasted, and then pulverized to prepare a powder having a particle size of 60 mesh.
  • Black beans, black sesame seeds, and sesame seeds were also steamed and dried by a known method, and then ground to a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, dried by spraying and drying with a hot air dryer, and ground to a particle size of 60 mesh by a grinder to obtain a dry powder.
  • the grains, seeds and the Aldicia tincture extract of the present invention prepared above were prepared by blending in the following ratios.
  • Grains (30 parts by weight brown rice, 15 parts by weight radish, 20 parts by weight barley) ,
  • Seeds (7 parts by weight perilla, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame seeds),
  • Aldicia tincture extract or fractions thereof (3 parts by weight), ganoderma lucidum (0.5 parts by weight) of the present invention,
  • Homogeneous subsidiary ingredients such as liquid fructose (0.53 ⁇ 4>), oligosaccharides (2%), sugar (2%), salt (0.5%), water (75%) and 5 g of the Aldisia tincture extract or fractions thereof After sterilization and instant sterilization, it was prepared by packing it in a small packaging container such as a glass bottle or a plastic bottle.
  • Vegetable juice was prepared by adding 5 g of the aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention to 1,000 ⁇ of tomato or carrot juice.
  • Fruit juice was prepared by adding 1 g of Aldicia tincture extract or fractions thereof of the present invention to apple or grape juice ⁇ , ⁇ ni.e.

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Abstract

【요약서】 본 발명은 알디시아 팅크토리아(Ardisia tinctoria Pit.) 추출물 및 이의 분획물을 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물이 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 저해함을 확인하였으며, 알디시아 팅크토리아 추출물은 농도의존적으로 PGE2 및 IL-6(interleukin-6)와 IL-1beta 사이토카인의 양을 현저하게 낮추는 효과가 있었으며, iNOS 및 COX-2 유전자 및 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제함을 확인하였다. 또한, 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 알디시아 팅크토리아 추출물과 에틸아세테이트 분획물이 염증억제 효과가 있다는 것을 확인하였다. 따라서, 상기 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물이 염증관련 질환의 예방 및 치료용 또는 개선용 조성물, 피부외용제, 화장료 조성물 및 건강식품용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물
【기술분야】
본 발명은 알디시아 팅크토리아 C4/ /s/a tine tori a Pit.) 추출물 또는 이의 분획물을 이용한 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
염증 (inflammation)이란 외부 감염원 (박테리아， 곰광이， 바이러스， 다양한 종류의 알레르기 유발물질)의 침입에 의하여 형성되는 농양의 병리적 상태를 뜻한다ᅳ 구체적으로， 외부 세균이 특정 조직에 침입하여 증식을 하게 되면 생체의 백혈구가 이를 인지하여 증식된 외부 세균을 활발히 공격하게 되는데, 이 과정 중 발생되는 백혈구의 사해가 균에 의하여 침입받은 조직에 축적됨과 동시에 백혈구에 의하여 사멸된 침입균의 세포 파괴물이 침입받은 조직 내로 융해되어 농양이 형성된다. 염증에 의한 농양의 치료는 소염작용을 통하여 촉진될 수 있는데， 소염작용이란 항균제를 이용하여 침입균의 증식을 억제하거나 농양 중에 축적된 이물질들을 탐식하는 대식세포 (macrophage)를 활성화하여 상기 이물질들을 소화 및 배설하는 대식세포의 기능을 항진시키는 등의 염증치료 촉진작용이다.
일반적으로 염증 반웅은 생체의 세포나 조직에 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습이 가해질 때 그 손상부위를 수복 재생하려고 하는 생체의 방어 반웅과정이다ᅳ 따라서 이러한 일련의 반웅에는 국소의 혈관， 체액의 각종 조직세포, 면역관여 세포 등이 포함된다고 한다. 최근 분자생물학의 발달과 더불어 염증성 질환이 사이토카인 (cytokine)이라는 분자 수준에서의 이해가 시도되고 있으며, 이러한 질환에 영향을 주는 인자들도 하나씩 규명되고 있다.
염증을 유도하는 사이토카인과 매개체들은 핵의 요소에 의해 조절된다. 그 예로 NF-KB(nuclear factor-kappa B)는 Rel 유전자계 (Rel gene family)의 핵단백질로서 7가지가 있고， 세포질에서는 I KBGnhibitory kappa B)와 결합되어 불활성인 형태로 존재하나， 유해산소 (reactive oxygen) , TNF-α (tumor necrosis factor-alpha)과 같은 케모카인 (chemokines) 및 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide;LPS)와 같은 다양한 자극에 의해 I κΒ 키나제가 활성화된 후 인산화 과정을 통해 ΙκΒ가 떨어져 나가게 된다. ρ50과 ρ65의 헤테로다이머 (heterodimer)로 구성된 NFᅳ κΒ는 활성화된 후， 핵으로 이동하여 염증반웅을 유도하는 유전자 (종양괴사인자나 사이클로옥사이드 합성효소) 발현을 촉진시키는 것으로 알려져 . 있다 (Oh GT et al . , Artherosclerosis , 159(1) :17-26, 2001； Epstein FH et al . , The New England Journal of Medicine, 336(15) :1066-1071, 1997； Zhang WJ et al . , FASEB J, 15(130) :2423— 2431， 2001； Denk A et al. , J. Biol. Chem. , 276(30) :28451— 28458, 2001； Sahnoun Z et al . , Phsiology, 53(4) :315—339, 1998； Lindner V Pathobiology , 66(6) :311— 320， 1998； Landry DB et al. , Am. J. Pathol. , 151(4) : 1085-1095， 1997； ； Gerritsen ME et al. , Am. J. Pathol. ,147(2) :P278-292, 1995) . 나이트릭 옥사이드 (Nitric oxide; NO)는 나이트릭 옥사이드 합성효소 (N0S)에 의해 L-아르기닌 (L-arginine)이 산화되어 생성되는데， 염증과정의 매개체로서 병원성 DNA를 손상시키는 방어작용을 함으로써 항상성을 유지하는 역할을 한다 (Kou and Schroder , Annuals of Surgery 221, 220-235, 1995). N0S 중에서 유도성 나이트릭옥사이드 합성효소 (iNOS; inducible nitric oxide synthase)는 세포내에서 NO의 과생산에 아주 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있다. 프로스타글란딘 E2(PGE2)와 류코트리엔 (Leukotriene) 또한， 아라키도닉산 (arachidonic acid)으로부터 생성되는 염증 매개체로서 특히， PGE2는 사이클로옥사이드 합성효소 (C0X— 2; cyclooxygenase-2 enzyme)에 의해 생성되며 주로 대식세포와 단핵구세포에서 많이 생성되는데， 대식세포는 리보폴리사카라이드와 같은 염증성 제제에 의해 빠르게 유도된다는 것이 밝혀졌다. 염증유발을 위해 동물모델에서 사용되는 물질들은 adjuvant, collagen II， carrageenan 등이 있는데, 해조류의 일종인 Chondrus cripus에서 추출한 carrageenan은 면역반응 억제 외에도 급성 염증 및 만성염증유발， DIC유발， 종양의 성장 촉진, Hagenian factor와 kinin의 활성화， 보체의 불활성화 등 다양한 생물학적 작용이 있는 것으로 알려져 있다 (Chan WY et al. , J. Pharmacol. Expt 1. Therap. , 147： 48， 1965) .
지금껏 일류가 개발한 약제 중 가장 강력한 항염작용을 지니고 있는 약제는 스테로이드 제제이다. 그러나 장기적으로 사용할 때 반드시 부작용을 수반하게 된다. 따라서 염증 치료에 있어 스테로이드제는 처음 사용할 때 놀라을 정도의 효과를 발휘하여 증상을 완전 소실시켜버리지만 이는 잠시일 뿐이고， 증상은 스테로이드 사용을 증지함과 함께 다시 나타나며 반복사용과 함께 증상은 더욱 심해져 간다. 스테로이드제의 부작용으로는 등근 다혈성의 얼굴， 체액의 저류， 부신억제， 감염에 대한 감수성의 증가와 기타 정신병, 백내장， 녹내장， 소화성 궤양， 창상치유지연, 초기 감염의 재활성화 등의 많은 부작용을 가지고 있다.
따라서 천연식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 의약품이나， 별도의 정제 과정 없이 안전하게 섭취할 수 있으며 염증을 억제할 수 있는 효과가 있고， 용이하게 식품에 이용할 수 있는 물질에 대한 연구가 필요한 실정이다. 그 예로 일본 히로사키대 및 오사카대 연구진은 아토피성 피부염이 염증반웅을 일으키는 유전자군올 조절하는 단백질의 하나인 NF-κΒ가 면역세포의 특정 유전자와 결합하여 염증성 물질을 만들아 발현된다는 것에 착안하여 NF-κΒ가 결합하는 유전자와 유사한 인공 DNA를 투여하여 인공 DNA와 NF-i B를 결합시켜 NF-κΒ의 작용을 억제하게 한 아토피성 치료제를 개발하여 임상에서 유효성을 확인한 바 있다. 그리고 스위스 노타비스사는 아스코마이신의 유도제 일종으로, 염증을 유발하는 사이토카인의 방출을 선택적으로 억제하는 기전을 가진 아토피성 피부염 치료제인 Pimecrolimus 성분의 "엘리델"을 개발하여 시판하고 있다. 또한， 영남대 약대 장현욱 교수 연구팀은 삼백초와 가죽나무의 추출물이 천식과 알레르기 치료에 효과가 있고， 19일 한국파마에 기술 선급료 1억 5000만원， 경상실시료 매출액의 4%로 기술이전 계약을 체결하였다 (약사공론 2006년 1월 22일 기사자료).
지금까지 알레르기 질환에서 특징적으로 나타나는 다양한 종류의 사이토카인 및 케모카인에 대한 항체를 이용한 알레르기 질환 치료제로써 다래 추출물을 이용한 알레르기 치료제, 천연초 선인장 발효추출물을 이용한 알레르기성 피부염 치료제 및 특정 유산균을 이용한 항염증 질환 치료제 개발 등이 이루어져 왔으나， 현재까지 알디시아 팅크토리아를 이용한 항염증 치료제에 대한 개발은 이루어지지 않고 있는 실정이다. 알디시아 팅크토리아 G/ y/s/a tine tori a Pit.)는 Myrsinaceae과에 속하는 식물이며， 민간에서 검정색 염료로 사용되었다고 알려져 있으나， 동속식물인 A. crenata, A. pus ilia의 경우 항산화활성이 있으며 (2008-001634， Japan Patent), A.elliptica 식물에서 분리된 시링산 (syringic acid), 이소람테틴 (isorhamnetin)，퀘서틴 (quercetin)등의 성분들이 항균활성 (살모넬라)을 갖는다는 연구결과 (Methin Phadungkit & Omboon Luanratana, 20(7), 693-696， 2006 Natural Product Research)등 동속식물에 대한 연구결과는 다양한 반면， 알디시아 팅크토리아에 대한 연구나， 성분에 대한 연구는 전혀 보고된 바가 없다. 이에， 본 발명자들은 해외식물추출물을 대상으로 염증활성에 관련한 스크리닝을 수행한 결과， 알디시아 팅크토리아 추출물이 염증 유발에 의해 급격히 증가한 N0와 PGE2 및 IL-6(interleukinᅳ 6)와 IL-lbeta사이토카인의 양을 현저하게 낮추는 효과가 있다는 것을 알 수 있었다. 이러한 염증 억제 작용 기작에 관한 연구로서 알디시아 팅크토리아 추출물이 iNOS 및 C0X-2 유전자 및 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제함을 확인하였으며， 카라기난으로' 유도된 마우스 족부종 모델에서도 알디시아 팅크토리아 추출물이 염증억제 효과가 있다는 것을 확인하였다. 따라서， 알디시아 팅크토리아 추출물은 식물 유래의 세포독성이 없는 안전한 물질로서， 알레르기를 포함하는 다양한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다. 【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
본 발명의 목적은 알디시아 팅크토리아 tine tori a Pit.) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물， 피부외용제， 화장료 조성물 및 건강식품용 조성물을 제공하는 것이다. [기술적 해결방법】
상기 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 알디시아 팅크토리아
tinctoria Pit.) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 피부 외용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품용 조성물을 제공한다. 또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 염증성 질환에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환 치료방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환 예방방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
또한， 본 발명은 염증성 질환 예방 및 개선용 피부 외용제로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
또한， 본 발명은 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
아울러， 본 발명은 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품용 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다. 이하， 본 발명에서 사용한 용어를 설명한다. 본 발명에서 사용되는 용어 "염증 "이란 외부 감염원 (박테리아， 곰광.이, 바이러스， 다양한 종류의 알레르기 유발물질)의 침입에 의하여 형성되는 농양의 병리적 상태를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "알레르기"는 어떤 외래성 물질과 접한 생체가 그 물질에 대하여 정상과는 다른 반응을 나타내는 현상을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방 "은 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
' 본 발명에서 사용되는 용어 "치료" 및 "개선 "은 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여' '는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개체1 '는 본 발명의 조성물을 투여하여 염증성 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간， 원숭이， 개, 염소， 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다 . ,
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양' '은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인.수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며， 이는 개체의 질환의 종류, 중증도， 약물의 활성， 약물에 대한 민감도， 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간， 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 、 이하， 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명은 알디시아 팅크토리아 (U/s/a tinctoria Pit.) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 염증성 질환은 알레르기， 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염， 증이염， 인후염， 편도염， 폐렴， 위궤양， 위염, 크론병， 대장염, 통풍， 강직성 척추염， 류마티스 열, 루푸스， .섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염， 류마티스 관절염, 견관절주위염， 건염， 건초염， 건주위염， 근육염， 간염， 방광염， ： 신장염， 쇼그렌 증후군 (Sjogren's syndrome) , 다발성 경화증， 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 알디시아 팅크토리아 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 알디시아 팅크토리아에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계 ; 및
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축한 후 건조하는 단계.
상기 방법에 있어서， 단계 1)의 알디시아 팅크토리아는 재배한 것 또는 시관되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.
상기 알디시아 팅크토리아는 잎， 줄기 또는 뿌리가 모두 이용가능하다.
상기 추출용매는 물， 알코올 또는 이들의 흔합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코을로는 C1 ,내지 C2 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며， 저급 알코올로는 에탄을 또는 메탄을을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 알디시아 팅크토리아 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 30내지 ioo°c인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한， 추출시간은 10 내지 48시간인 것이 바람직하며 , 15 내지 30시간인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러 , 추출 회수는 3 내지 5회인 것이 바람직하며， 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서， 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것아 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한， 건조는 감압건조， 진공건조, 비등건조， 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물의 분획물은 상기 알디시아 팅크토리아 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 유기용매로는 n-핵산， 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄을인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물로는 n-핵산， 클로로포름， 에틸아세테이트 및 부탄올을 단계적으로 첨가한 후, 각 용매 첨가 단계에서 가용성 0
o 분획을 획득한 n—핵산 분획물, 클로로포름 분획물， 에틸아세테이트 분획물 및 부탄을 분획물, 및 상기 부탄올 분획물을 제거하고 남은 물층을 농축한 물 분획물이 모두 사용가능하나， 에틸아세테이트 분획물인 것이 가장 바람직하다. 본 발명의 한가지 측면에서， 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물의 세포독성을 확인하기 위하여， 생쥐의 대식세포인 RAW264.7 세포를 96웰 플레이트 (well plate)에 접종하여 부착한 후， 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 다양한 농도로 처리하여 배양한 후， 흡광도를 측정하였으며， 세포생존률은 DMS0를 처리한 음성대조군를 100%로 하여 계산한 결과， 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 에틸아세테이트 분획물， 부탄올 분획물 및 물 분획물은 20 /g/^의 농도까지 독성이 없음을 확인하였다 (표 1 참조).
본 발명의 한가지 측면에서， 알디시아 팅크토리아 추출물의 염증 억제 효과를 알아보기 위하여， Raw264.7 세포에서 리포폴리사카라이드로 유도된 나이트릭 옥사이드 (nitric oxide; NO)의 생성량를 측정한 결과， LPS에 의해 증가된 나이트릭옥사이드 생성량을 알디시아 팅크토리아 추출물이 강하게 억제함을 확인하였으며， 특히， 에틸아세테이트 분획물이 가장 강한 나이트릭옥사이드 생성저해효과 (69.87±2.74%)를 나타내는 것을 확인하였다 (표 2 참조). 또한， LPS 단독 처리한 군에 비해 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리하고 LPS로 염증을 유도한 군에서 농도의존적으로 나이트릭 옥사이드 생성량이 현저히 감소하는 것을 확인하였다 (도 1 참조).
또한， 본 발명의 한가지 측면에서， 알디시아 팅크토리아 추출물의 iNOS 유전자 및 단백질 발현 억제 효과를 확인하기 위하여 RT PCR(Reverse transcription— Polymerase chain reaction) , 웨스턴 블랏 및 면역형광염색법을 수행한 결과， 리포폴리사카라이드를 처리한 세포에서 iNOS 유전자 발현이 증가하는 것을 확인하였고, 알디시아 팅크토리아 추출물을 처리한 세포에서는 처리농도에 따라 iNOS의 핵산 발현량 및 iNOS의 단백질 발현이 현저히 줄어드는 것을 확인하였다 (도 2 참조).
또한, 본 발명의 한가지 측면에서, 알디시아 팅크토리아 추출물의 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2) 생성 저해 효과를 확인한 결과， 리포폴리사카라이드만 처리한 세포에서는 프로스타글란딘 E2 생성이 급격히 증가하는 반면， 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 세포에서는 농도의존적으로 프로스타글란딘 E2 생성이 저해되는 것을 확인하였다 (도 3 참조). 또한, 본 발명의 한가지 측면에서, C0X-2 발현에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 억제 효과를 확인한 결과， 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 세포에서는 처리농도에 따라 C0X-2의 핵산 발현량 및 단백질 발현이 현저히 감소하는 것을 확인하였다 (도 4 참조).
또한, 본 발명의 한가지 측면에서， 알디시아 팅크토리아 추출물의 사이토카인 생성 저해 효과를 확인한 결과， LPS의 처리로 증가된 IL-6 및 IL-beta 사이토카인의 양은 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리함으로써 농도의전적으로 감소하는 것을 확인하였다 (도 5a 및 도 5b 참조).
또한, 본 발명의 한가지 측면에서， 알디시아 팅크토리아 추출물의 NF-KB 단백질인 p65의 이동저해효과를 확인한 결과， LPS만 처리했을 때 세포질의 p65의 양이 30분까지 감소하는 반면， 핵내의 p65 양은 증가하는 것을 확인하였다. 그러나, 알디시아 팅크토리아를 전처리후 LPS로 유도했을 경우， 핵내의 p65 양의 증가가 미약함을 확인하였다 (도 6 참조).
또한， 본 발명의 한가지 측면에서， 알디시아 팅크토리아 추출물의 신호전달 단백질의 인산화 억제 효과를 확인한 결과 대식세포에 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리하고 LPS를 처리한 경우, JNK와 p38은 전체형태는 단백질의 변화가 • 없었으며， LPS에 의해 인산화형태의 단백질 발현이 증가함을 확인하였으몌 알디시아 팅크토리아 추출물 처리에 대해서는 변화가 없었다. 반면, ERK 단백질은 ; 알디시아 팅크토리아 추출물 처리시 전체형태의 단백질은 변화가 없었으며, 인산화형태의 단백질 또한 발현 증가가 억제됨을 확인하였다 (도 7 참조).
또한， 본 발명의 한가지 측면에서， 알디시아 팅크토리아 추출물이 동물세포에 대해 염증저해효과가 우수하였기에 동물실험을 통해 염증저해 효과를 확인한 결과， 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 알디시아 팅크토리아 추출물과 에틸아세테이트 분획물이 유의적인 염증억제 효과를 나타내는 것을 확인하였다 (도 8 참조).
따라서, 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 저해하고, 농도의존적으로 PGE2 및 IL-6(interleukin-6)와 IL-lbeta 사이토카인의 양을 현저하게 낮추며， iNOS 및 C0X-2 유전자 및 - 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제하고， 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 유의적인 염증억제 효과를 나타내므로， 염증관련 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다. 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 조성물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며， 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분， 젤라틴화 전분， 미결정셀를로오스, 유당， 포비돈， 콜로이달실리콘디옥사이드， 인산수소칼슴， 락토스,. 만니를, 엿， 아라비아고무， 전호화전분， 옥수수전분， 분말셀롤로오스, 히드록시프로필셀를로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납， 합성규산알루미늄， 스테아린산， 스테아린산마그네슘， 스테아린산알루미늄， 스테아린산칼슘， 백당， 덱스트로스 , 소르비를 및 탈크 등이 사용될 수 있다 . 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
즉， 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제쩨화할 경우에는 보통 산용하는 충진제， 증량제， 결합제, 습윤제， 붕해제， 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제， 환제， 산제， 과립제, 캡슐제 등이 포함되며， 이러한 고형제제는 알디시아 팅크토리아 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (Calcium carbonate), 수크로스 (Sucrose)， 락토오스 (Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한， 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제， 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물， 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제， 감미제， 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액， 비수성용제， 현탁제， 유제， 동결건조제제， 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜 (Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜， 올리브 오일과 같은 식물성 기름， 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골， 트윈 (tween) 61， 카카오지， 라우린지, 글리세로제라틴 둥이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사， 직장내주사， 피하주사， 정맥주사， 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 투여량은 환자의 체중 연령， 성별， 건강상태, 식이， 투여시간， 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령， 성별, 건강상태, 식이, 투여시간， 투여방법， 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며， 일일 투여량은 알디시아 팅크토리아 추출물의 양을 기준으로 0.0001 내지 100 mg/kg이고 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg이며， 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 염증성 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로， 또는 수술， 방사선 치료， 호르몬 치료， 화학 치료 및 생물학적 반웅 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 염증성 질환에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 치료 방법을 제공한다.
또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 예방 방법을 제공한다.
상기 약학적으로 유효한 양이란 0.0001 내지 100 mg/kg이고， 바람직하게는
0.001 내지 10 mg/kg이며， 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체중 연령， 성별, 건강상태, 식이, 투여기간, 투여방법， 제거율， 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. '
상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며， 그보다 바람직하게는 쥐 , 토끼， 기니아피크， 햄스터， 개， 고양이와 같은 실험동물이고 가장 바람직하게는 침팬지， 고릴라와 같은 유인원류 동물이다.
상기 투여 방법은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며， 비경구 투여시 복강내주사， 직장내주사， 피하주사， 정맥주사， 근육내 주사， 자궁내 경막 주사, 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사 또는 흉부내 주사에 의해 투여될 수 있다. 상기 염증성 질환은 알레르기， 피부염, 아토피， 결막염， 치주염， 비염， 중이염， 인후염， 편도염， 폐렴, 위궤양， 위염, 크론병， 대장염, 통풍, 강직성 척추염， 류마티스 열， 루푸스ᅵ 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염， 골관절염, 류마티스 관절염 , 견관절주위염， 건염， 건초염， 건주위염， 근육염， 간염 , 방광염， 신장염， 쇼그렌 증후군 (Sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 저해하고， 농도의존적으로 PGE2 및 ILᅳ 6(interleukin-6)와 IL-lbeta 사이토카인의 양을 현저하게 낮추며， iNOS 및 C0X-2 유전자 및 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제하고， 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 유의적인 염증억제 효과를 나타내므로, 염증관련 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다. 또한, 본 발명은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 피부외용제를 제공한다.
상기 염증성 질환에는 알레르기， 부종, 피부염， 아토피, 결막염， 치주염， 비염， 중이염， 인후염， 편도염, 폐렴， 위궤양， 위염, 크론병， 궤양성 대장염， 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열， 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염， 골관절염， 류마티스관절염， 견관절주위염， 건염， 건초염， 건주위염， 근육염, 간염， 방광염， 신장염, 쇼그렌 증후군 (Sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 다양한 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하나 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 저해하고， 농도의존적으로 PGE2 및 IL-6(interleukin-6)와 IL-lbeta 사이토카인의 양을 현저하게 낮추며， iNOS 및 C0X-2 유전자 및 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제하고， 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 유의적인 염증억제 효과를 나타내므로， 다양한 염증성 질환 예방 및 치료용 피부외용제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 피부 외용제로 사용하는 경우， 추가로 지방 물질.， 유기 용매， 용해제， 농축제 및 겔화제, 연화제， 항산화제， 현탁화제， 안정화제， 발포제 (foaming agent), 방향제, 계면활성제， 물， 이온형 또는 비이온형 유화제， 층전제， 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제， 보존제， 비타민， 차단제， 습윤화제， 필수 오일， 염료， 안료， 친수성 또는 친유성 활성거), 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분먀에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
상기 피부 외용제에 알디시아 팅크토리아 추출물의 투여량은 0.0001 내지 100 mg/kg이고， 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg이며， 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체중， 연령， 성별， 건강상태, 투여기간， 제거율， 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. 또한， 본 발명은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 저해하고， 농도의존적으로 PGE2 및 ILᅳ 6(interleukin— 6)와 IL-lbeta 사이토카인의 양을 현저하게 낮추며, iNOS 및 C0X-2 유전자 및 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제하고 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 유의적인 염증억제 효과를 나타내므로， 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 화장료 조성물로 사용하는 경우， 예를 들면 용액， 겔， 고체 또는 반죽 무수 생성물， 수상에 유상을 '분산시켜 얻은 에멀견, 현탁액， 마이크로에멀견， 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형 (리포좀)， 비이온형의 소낭 분산제의 형태， 크림, 스킨， 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물에 추가로 지방 물질， 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제， 연화제， 항산화제, 현탁화제， 안정화제, 발포제 (foaming agent), 방향제, 계면활성제 물， 이온형 또는 비이온형 유화제, 층전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제， 보존제， 비타민， 차단제， 습윤화제， 필수 오일， 염료， 안료， 친수성 또는 친유성 활성제， 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 본 발명은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 저해하고， 농도의존적으로 PGE2.및 IL-6(interleukin— 6)와 IL-lbeta 사이토카인의 양을 현저하게 낮추며, iNOS 및 C0X-2 유전자 및 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제하고, 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 유의적인 염증억제 효과를 나타내므로， 다양한 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품용 조성물의 성분으로 유용하게 사용될 수 있다. 상기 염증성 질환에는 알레르기， 부종， 피부염， 아토피， 결막염， 치주염, 비염， 중이염， 인후염， 편도염， 폐렴， 위궤양， 위염， 크론병， 궤양성 대장염， 통풍， 강직성 척추염， 류마티스 열， 루푸스， 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염， 골관절염， 류마티스관절염， 견관절주위염， 건염, 건초염， 건주위염， 근육염， 간염， 방광염， 신장염 쇼그렌 증후군 (Sjogren's syndrome), 다발성 경화증， 및 다양한 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 건강식품은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고， 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다 .
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 알디시아 팅크토리아 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류， 소시지， 빵， 초콜릿， 캔디류， 스넥류, 과자류， 피자， 라면， 기타 면류， ¾류， 아이스크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스프, 음료수， 차， 드링크제， 알코을음료 및 비타민 복합제 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당， 과당과 같은 모노사카라이드， 말토스， 슈크로스와 같은 디사카라이드， 및 덱스트린， 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드， 자일리를， 소르비를， 에리트리틀 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴， 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나， 사카린， 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ^당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제， 비타민， 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염 알긴산 및 그의 염 , 유기산， 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린， 알코올， 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스， 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 흔합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 증량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다ᅳ 또한, 본 발명은 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
또한， 본 발명은 염증성 질환 예방 및 개선용 피부 외용제로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
또한， 본 발명은 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
아울러， 본 발명은 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품용 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 저해하고 농도의존적으로 PGE2 및 IL一 6(interleukin-6)와 IL— lbeta 사이토카인의 양을 현저하게 낮추며, iNOS 및 C0X-2 유전자 및 단백질의 발현을 억제함과 p65단백질의 핵전이와 신호전달물질의 인산화를 억제하고, 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 모델에서도 유의적인 염증억제 효과를 나타내므로， 다양한 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물， 피부 외용제， 화장료 조성물 및 건강식품용 조성물의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.
【유리한 효과】
본 발명의 알디시아 팅크토리아 tinctoria Pit.) 추출물 또는 이의 분획물은 우수한 항염증활성을 가지고， 세포독성이 거의 없으므로， 염증관련 질환, 알레르기 질환 등의 예방 및 치료를 위한 의약품， 가공식품， 기능성 식품， 식품첨가제， 기능성 음료， 또는 음료첨가제 등의 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
【도면의 간단한 설명】
도 1은 Raw264.7 세포에서 리포폴리사카라이드에 의해 유도되는 나이트릭 옥사이드 생성에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 억제효과를 나타낸 도이다 (#는 음성대조군 대비 PO.001 이하 및 *는 양성대조군 대비 PO.05 이하): 一; DMSO만 처리한 음성대조군;
+ ; LPS 0.5 /g/ii 로 유도된 양성대조군;
5； 알디시아 팅크토리아추출물을 5
Figure imgf000019_0001
처리한 후 LPS로 유도;
10； 알디시아 팅크토리아 추출물을 10 nzlxwl 처리한 후 LPS로 유도;
20； 알디시아 팅크토리아 추출물을 20 iiglxwi 처리한 후 LPS로 유도; 및
30； 알디시아 팅크토리아추출물을 30 g/ini 처리한 후 LPS로 유도 도 2는 LPS로 유도된 나이트릭옥사이드 합성효소의 발현에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 억제효과를 나타낸 도이다:
a; 핵산 증폭법 ;
b; 웨스턴블라팅 ; 및
c; 면역형광염색법.
도 3은 LPS로 유도된 프로스타글란딘의 생성에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 억제효과를 나타낸 도이다 (#는 음성대조군 대비 PO.001 이하 및 *는 양성대조군 대비 PO.005 이하)..
도 4는 LPS로 유도된 프로스타글란딘의 발현에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 억제효과를 나타낸 도이다:
a; 핵산 증폭법 ; 및
b; 웨스턴블라팅.
도 5는 LPS로 유도된 사이토카인 생성에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 저해효과를 나타낸 도이다 (#는 음성대조군 대비 PO.001 이하， *는 양성대조군 대비 PO.005 이하 및 **는 양성대조군 대비 PO.05 이하).
a; IL-6( inter leukin-6)； 및
b; IL-lbeta( inter leukin-lbeta) .
도 6은 LPS로 유도된 p65의 핵전이에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 저해효과를 나타낸 도이다: .
LPS; LPS로 유도한 군; 및
LPS+AT; AT를 30 /g/m. 처리한 후 LPS로 유도.
도 7은 LPS로 유도된 신호전달물질의 인산화에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 저해효과를 나타낸 도이다. 도 8은 카라기난으로 유도된 마우스 족부종에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 저해효과를 나타낸 도이다:
대조군; PBS만 투여한 군;
카라기난; PBS투여후 카라기난으로 염증 유도;
AT; 알디시아 팅크토리아추출물을 40 mg/kg 투여후 카라기난으≤ 유도;
ATE; 알디시아 팅크토리아 에틸아세테이트 분획물을 40 mg/kg 투여후 카라기난으로 유도; 및
인도메타신; 인도메타신 5 mg/kg을 투여후 카라기난으로 유도.
도 9는 알디시아 팅크토리아 tinctoria Pit.) 추출물과 분획물의 TLCCThin Layer Chromatography)를 나타낸 그림이다:
T: 알디시아 팅크토리아 추출물;
H: 알디시아 팅크토리아 n—핵산 분획물;
C: 알디시아 팅크토리아 클로로포름 분획물; '
E: 알디시아 팅크토리아 에틸아세테이트 분획물;
B: 알디시아 팅크토리아 부탄을 분획물; 및
W: 알디시아 팅크토리아 물 분획물.
도 10은 알디시아 팅크토리아 4/Ύ//5/<3 tinctoria Pit.) 추출물과 분획물의 CAD(Charge Aerosol Detector)를 나타낸 그림이다. 【발명의 실시를 위한 최선의 형태】
이하， 본 발명을 실시예， 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명의 내용이 하기 실시예， 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 알디시아 팅크토리아 r /s/a tinctoria Pit.) 추출물의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 100% 메탄을 추출물은 한국생명공학연구원 해외생물소재허브센터의 해외식물추출물은행에서 구입하였으며， 증거표본 (KRIB 0027026)은 한국생명공학연구원 식물표본관 (KRIB, Herbarium of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology)에 보관되어 있다. 구체적으로 추출과정을 살펴보면， 알디시아 팅크토리아 (잎， 어린 가지， 꽃)를 건조한 후, 분쇄된 분말시료 113 g에 메탄을 1 를 가한 후 초음파추출기 (SDN-900H, SD-ULTRASONIC CO., LTD)를 이용하여 상온에서 30회 (40 KHz, 15분 추출— 120분 정지) 반복추출하였다. 그런 다음 여과하여 감압농축한 후, 알디시아 팅크토리아 메탄올 추출물 (이하 알디시아 팅크토리아 추출물이라 명함) 10.33 g을 수득하였다. 본 발명에서는 알디시아 팅크토리아 추출물을 DMS0(dimethyl sulfoxide)에 20 mg/ml의 농도가 되도록 용해시킨 후， 농도별로 희석하여 사용하였다. <실시예 2> 알디시아 팅크토리아의 용매 분획물 제조
상기 <실시예 1>에서 얻어진 알디시아 팅크토리아 추출물 증 450 mg 에 증류수를 첨가하여 현탁시키고， 동량의 n-핵산을 가하여 흔합 후 n-핵산가용성 분획부와 물가용성 분획부를 분리하였으며， 이를 3회 실시하여 여과, 감압농축하여 11-핵산 분획물 90.4 呢을 수득하였다. 그런 다음， 상기 n-핵산 분획물을 제거하고 남은 물층에 클로로포름을 동량 가하여 같은 방법으로 클로로포름 분획물 22.0 mg 수득하였고， 다시 남은 물층에 에틸아세테이트를 동량 가하여 같은 방법으로 에틸아세테이트 분획물 44.8 mg을 수득하였으며, 또다시 남은 물층에 부탄올을 동량 가하여 동일한 방법으로 부탄을 분획물 57.6 nig을 수득하였으며， 남은 물층을 농축하여 물 분획물 205.2 mg을 수득하였다.
<실시예 3> 알디시아팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물의 TLC조사
상기 <실시예 1>과 <실시예 2〉에서 얻어진 알디시아 팅크토리아 추출물과 분획물을 10mg/n 의 농도로 메탄올에 녹인 후 실리카겔 박층 크로마토그래피 (TLC Silica gel 60 F254, Merck)를 시행하여 비극성 물질들을 확인하였다. 전개용매로는 n-핵산 ： 아세톤의 비율이 2 ： 1인 흔합용매로 하였다. 또한， 극성물질들을 확인해 보기 위해 실리카겔 역상 크로마토그래피 (TLC Silica gel 60 RP-18 F254S, Merck)를 실시하였고， 전개용매는 메탄올 50%로 하였다 (도 10).
<실시예 4> 알디시아 팅크토리아의 추출물 및 분획물의 UPLC분석 상기 <실시예 1>과 <실시예 2>에서 얻어진 알디시아 팅크토리아 추출물과 분획물을 lOmg/ml로 메탄을에 녹인 후 0.2 의 membrane filter로 여과하였다. 초고성능 액체 크로마토그래피 (UPLC, Ultra Performance Liquid Chromatography)는 Waters Acquity UPLC 시스템을 이용하였으며， 컬럼은 ACQUITY UPLCTMBEHC18(l( mX 2.1 mm, i.d. , 1.7μιιι, waters, 미국)을 35°C에서 사용하였으며， 이동상 A는 물과 formic acid (100:0.1， v/v)로 이동상 B는 acetonitril과 formic acid (100:0.1,v/v)로 하여 초기에 B를 1OT로 1분동안 유지시킨 후， 5분까지 45%로 증가， 7.5분까지 100%로 이동상 B를 증가시켜 분석 한 후， 이동상 B를 10OT로 9분까지 유지시키고， 9.5분까지 이동상 B를 1 로 낮추고 11분까지 10%로 안정화시켜 분석에 사용하였다. 이동상의 유속량은 0.4 ml/min 그리고 시료 주입량은 3 μΐ로 하였다.
GAD(Charge Aerosol Detector)는 UPLC로부터 분리되어진 물질들에 전하 (Charge)를 붙여주어 그 전하를 측정하는 detector로써 크로마토그래피 형식으로 물질의 상대적 함량과 분리도를 확인해 볼 수 있다 (도 11).
<실험예 1> 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물에 대한 세포독성실험
본 발명자들은 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물의 세포 생존율에 대한 영향을 확인하기 위하여， 생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 소태아혈청 (Fetal Bovine Serum) 5% 첨가한 DMEM(Dulbecco ' s Modified Eagle Medium, Gibco사) 배지에 1 x 105개 /i ^의 농도로 현탁하여 100 ^씩 96웰 플레이트에 접종하여 부착하였다. 4시간 후에 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 20 g/m의 농도로 처리하거나, 알디시아 팅크토리아 추출물을 0， 5， 10, 20 및 30 /zg/ 의 농도로 처리하였다. 24시간 동안 배양한 후， 5 mg/ml의 ΜΊΤ용액을 웰 당 10 ,씩 첨가하여 4시간 더 배양한 후， 상등액을 제거하고， DMS0를 100 ^씩 첨가한 후, 570 皿에서 흡광도를 측정하였으며， 세포생존률은 DMS0를 0. 처리한 음성대조군를 100%로 하여 하기 수학식에 따라 계산하였다.
【수학식 1】 추출물처리한 Q jQ ! ¾
세포생존을 (%): xlOO
음성대조군 QD57(½|:
【표 1】
Figure imgf000023_0001
그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 알디시아 팅크토리아 추출물과 에틸아세테이트， 부탄을， 물 분획물은 세포생존율에 미치는 영향이 거의 없으나， 핵산 분획물과 클로로포름 분획물은 아주 강한 세포생존율 저해효과를 나타내는 것을 확인하였다 (표 1). <실험예 2> 알디시아팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물의 NO생성 저해 효과 본 발명자들은 알디시아 팅크토리아 추출물의 염증 억제 효과를 알아보기 위하여， Raw264.7 세포에서 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide; LPS, Sigma사)로 유도된 나이트릭 옥사이드 (nitric oxide; NO)의 생성량을 측정하였다. 구체적으로， ATCC에서 구입한 마우스 대식세포 Raw264.7를 소태아혈청 (Fetal Bovine Serum) 5%를 첨가한 DMEM(Dulbecco' s Modified Eagle Medium, Gibco사) 배지에 2.5 x 105 개 /m£농도로 현탁하여 96웰 플레이트 (96 well plate)에 200 ^씩 접종하였다. 4시간 동안 부착시킨 후, 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 각각 20 μ /αιί 혹은 알디시아 팅크토리아 추출물을 0， 5， 10, 20, 및 30 /zg/m.e의 농도로 처리하여 1시간 동안 배양한 후에 0.5 /g/m£의 LPS를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후， 상층액 100 를 회수하여 새로운 96웰 플레이트에 넣고， 그리스 시약 (Griess reagent , Sigma사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 반옹시킨 후， 마이크로플레이트 측정기 (microplate reader, Bio-Rad사)로 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 소디움 나이트라이트 (sodium nitrite)를 이용하여 검량선을 작성하고, 이를 기준으로 배양액 내의 나이트릭 옥사이드 생성량을 구하였으며， LPS를 처리한 군의 나이트릭 옥사이드 생성량을 100%로 하여 각 시료의 저해율을 계산하였다.
그 결과, 표 2 에 나타낸 바와 같이, LPS에 의해 증가된 나이트릭옥사이드 생성량을 알다시아 팅크토리아 추출물이 강하게 억제함을 확인하였으며， 특히, 에틸아세테이트 분획물이 가장 강한 나이트릭옥사이드 생성저해효과 (69.87±2.74¾ 를 나타내었다. 반면에 n-핵산 (NO저해율 ;68.87±2.45¾ 세포생존율; 4.61±0.26%)과 클로로포름 (NO저해율 ;72.67± 1.81%, 세포생존율; 5.59土0.67¾) 분획물의 나이트릭옥사이드 생성저해효과는 세포생존율이 감소했기 때문에 나타난 결과로 확인되었다 (표 1 및 2).
【표 2】
Figure imgf000024_0001
또한， 도 1에 나타낸 바와 같이, LPS를 단독 처리한 군에 비해 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리하고 LPS로 염증을 유도한 군에서 농도의존적으로 나이트릭 옥사이드 생성량이 현저히 감소하는 것을 확인하였다 (도 1).
<실험예 3> iNOS 발현에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 저해 효과
<3-1> 핵산증폭법 (RT-PCR)
알디시아 팅크토리아 추출물의 iNOS 유전자 발현 억제 효과를 확인하기 위하여 RT-PCR( Reverse transcript ion一 Polymerase chain react ion)을 수행하였다. 구체적으로， <실험예 1>의 방법으로 100 mm 페트리디쉬에 1.X 106 개의 세포를 분주하고, 알디시아 팅크토리아 추출물을 농도별로 처리하고， LPS로 염증을 유도시켜 24시간 배양 후, 배지를 제거한 다음에 세포를 배양용기로부터 떼어내어 리보핵산 추출 용액 (Invitrogen, CA, 미국)을 사용하여 세포를 균질화하였다. 5분 후에 세포를 모아서 원심분리관에 옮기고， 200 ^의 클로로포름을 넣고 15초간 완전히 섞어주고， 3분간 방치한 후, 14000 rpm에서 15분간 원심분리하였다. 리보핵산을 포함하는 상둥액을 새로운 관에 옮겨 담고 아이소프로필알코을 500 ^와 흔합하였다. 10분 후 다시 원심분리를 하여 상등액은 버리고, 침천물에 75% 에탄올 1 을 넣고 10,000 rpra에서 5분간 원심분리한 후， 상등액은 버리고 침전된 리보핵산은 20분간 상온에서 건조시켰다. 건조된 리보핵산은 DEPC(Diethylpyrocarbonate, Sigma)가 처리된 증류수로 현탁하였다. 리보핵산은 정량 후， Omniscript RT kit (Pharmingen, 미국)를 이용하여 상보적 핵산 (complementary DNA)를 합성하였다ᅳ 합성된 cDNA를 템플릿 (template)로 하고， iNOS 프라이머 (정방향 프라이머 5'-GGA GCG ACT TGT GGA TTG TC— 3'：서열번호 1， 역방향 프라이머 5'— GTG AGG GCT TGG CTG AGT GAG-3'；서열번호 2)를 흔합하고， PCR Premix(Fermentas, 미국)를 사용하여 유전자의 발현 정도를 확인하였다.
그 결과， 도 2a에서 보는 바와 같이 음성대조군에 비해 리포폴리사카라이드를 처리한 세포에서 iNOS 유전자 발현이 증가하는 것을 확인하였고， 알디시아 팅크토리아 추출물을 처리한 세포에서는 처리농도에 따라 iNOS의 핵산 발현량이 현저히 줄어드는 것을 확인하였다 (도 2a).
<3-2> 웨스턴블라팅 (Western blotting)
알디시아 팅크토리아 추출물의 iNOS 단백질의 발현 억제 효과를 확인하기 위하여 웨스턴 블랏을 수행하였다.
구체적으로， 상기 <실험예 .3ᅳ1>과 동일한 방법으로 시료를 처리한 세포에서 배지를 제거한 다음에 세포를 배양용기로부터 떼어내어 단백질 분해효소 저해제 (Protease inhibitor cocktail, Roche , 미국)를 함유한 단백질 용출용액 (CelLyticTM-MT Tissue Lysis Reagent , Sigma, 미국)을 사용하여 균질화하였다. 추출액은 20분 동안 14000 rpm에서 원심분리한 뒤 상등액과 불용성 응집체를 분리하였다. 분리된 상등액의 단백질 농도는 바이오 -라드 단백질 분석 4 키트 (Bio-Rad protein assay kit, Bio-Rad, 미국)를 이용하여 측정하였다. 또한， 상등액을 5X SDS 0.156M Tris-HCl, pH 6.8, 2.5% SDS, 37.5% 글리세를， 37.5 mM DTT)와 1:4로 섞어 100°C에서 10분간 끓였다. 끓인 시료에서 20 단백질을 SDS 4-12% SDS-PAGE 겔에 로딩하고 125 V에서 2시간 동안 전기영동 하여 분자량에 따라 분리하였고， 상기 단백질을 겔 한 장당 100 mA의 조건으로 1시간 동안 전기영동 하여 PVDF 막으로 옮겼다. 이 막에 1차 항체로 항 -iNOS 항체 (1:100， Santa Cruz Biotechnology, 미국)를 결합시킨 후， 감광하여 분석하였다.
그 결과， 도 2b에서 나타내는 바와 같이 대식세포에 리포폴리사카라이드와 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 경우 농도의존적으로 iNOS의 단백질 발현이 감소하였다 (도 2b).
<3-3> 면역형광염색법 (I腿 unofluoresence)
약 2X 105 개 /m세포를 퍼머녹스 챔버 플라스틱 슬라이드 (Permanox chambered plastic slides; Nunc , 미국)에 부착시키고， 상기 <실험예 2>에서와 같이 대식세포에 염증을 유도한 후, 상등액을 제거하고， 인산완충액 (PBS)로 세척하였다. 이후 4°C에서 30분간 에탄을로 고정하였고， 세척한 후， 3% 소혈청알부민 (bovine serum albumin)으로 실온에서 30분간 차단하였다. 차단 후 1차 항체 [항— iNOS 항체 (1:100)]를 4°C에서 하루 동안 반응시켰다. 인산완층액으로 3번 세척한 이후에 텍사스레드 (Texas red; Santa Cruz Biotechnology, 미국)가 연결된 2차 항체 (Santa Cruz Biotechnology, 미국)를 실온의 암조건에서 2시간 동안 반옹하였다. 인산완충액으로 프로통 골드 안티페드 용액 (ProLong Gold Ant i fade reagent , Invitrogen, 미국)으로 3번 마운팅한 후 공초점 현미경 (LSM510m Carl Zeiss, Germany)으로 촬영하였다.
그 결과， 도 2c에서 보는 바와 같이， 리포폴리사카라이드만 처리한 세포에서는 iNOS의 단백질 발현이 급격히 증가하는 반면， 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 세포에서는 단백질의 발현이 유의적으로 감소되는 것을 확인하였다 (도 2c).
<실험예 4>프로스타글란딘 생성에 관한 알디시아 팅크토리아추출물의 억제 효과 알디시아 팅크토리아 추출물의 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2) 생성 저해 효과를 확인하기 위한 실험으로서， 상기 <실험예 2>와 동일한 방법으로 처리한 Raw264.7 세포의 배양 상층액을 취하여 프로스타글란딘 측정 키트 (PGE2 assay kit; R&D systems, Minneapolis, 미국)를 사용하여 프로스타글란딘 5 E2(Prostaglandin E2)의 생성 저해 효과를 측정하였다.
그 결과， 도 3에서 보는 바와 같이 리포풀리사카라이드만 처리한 세포에서는 프로스타글란딘 E2 생성이 급격히 증가하는 반면， 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 세포에서는 농도의존적으로 프로스타글란딘 E2 생성이 저해되는 것을 확인하였다 (도 3).
L0
<실험예 5> C0X-2 발현에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 억제 효과
<5-1>핵산증폭법 (RT-PCR)
상기 <실험예 3-1>에서 합성된 cDNA를 템플릿 (template)로 하고， C0X-2 프라이머 (정방향 프라이머 5'-GM GTC TTT GGT CTG GTG CCT G-3'； 서열번호 3， 15 역방향 프라이머 5'-GTC TGC TGG TTT GGA ATA GTT GC-3'； 서열번호 4)를 흔합한 후 PCR Premix (Ferment as, 미국)를 사용하여 유전자의 발현 정도를 확인하였다.
그 결과， 도 4a에서 보는 바와 같이 음성대조군에 비해 리포폴리사카라이드를 처리한 세포에서 C0X-2 유전자 발현이 증가하는 것을 확인한 반면， 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 세포에서는 처리농도에 따라 C0X- 20 2의 핵산 발현량이 현저히 줄어드는 것을 확인하였다 (도 4a).
<5-2>웨스턴블라팅 (Western blotting)
상기 <실험예 3-2>와 동일한 방법으로 단백질을 부착시킨 막에 1차 항체로 항 -C0X— 2 항체 (1:100, Santa Cruz Biotechnology, 미국)를 결합시킨 후， 감광하여 25 분석하였다.
그 결과， 도 4b에서 보는 바와 같이 대식세포에 리포폴리사카라이드와 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 경우 농도의존적으로 C0X-2의 단백질 발현이 감소하였다 (도 4b). <실험예 6> 알디시아팅크토리아 추출물의 사이토카인 생성 저해 효과
본 발명자들은 알디시아 팅크토리아 추출물의 사이토카인 생성 저해 효과를 확인하기 위하여， LPS로 유도된 IL-6(interleukin-6)와 IL-lbeta의 생성량을 효소면역학적 분석키트 (mouse IL— 6 EL ISA set; BD OptEIATM, 미국 흑은 mouse IL- lbeta Enzyme Immunometr ic Assay Kit； Assay designs , 미국)를 이용하여 측정하였다.
구체적으로， 상기 <실험예 2>과 동일한 방법으로 Raw264.7 세포를 배양한 후, 상층액 100 ^를 회수하여 마우스 면역글로불린을 코팅한 96 웰플레이트에 분주하여 2시간 동안 교반하며 반응시켰다. 그런 다음, 세척용액으로 4회 세척한 다음， 제 1차 항체인 항— IL— 6 항체 혹은 항— IL-lbeta 항체를 100 ^씩 분주한 후 2시간 반웅시켰다. 반응 후에 세척을 하고 제 2차 항체를 분주하고 30분간 반웅시켰다. 다시 세척한 후 기질을 넣어 30분간 반응시킨 다음， 발색 정도를 마이크로플레이트 측정기로 450 nm에서 측정하였다.
그 결과， 도 5에서 보는 바와 같이， LPS의 처리로 증가된 각각의 ILᅳ 6와 IL-lbeta 사이토카인의 양이 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리함으로 인하여 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였다 (도 5a 및 5b).
<실험예 7> 알디시아 팅크토리아 추출물의 NF-KB단백질의 이동저해효과
알디시아 팅크토리아 추출물의 NF-KB 단백질인 p65의 이동저해효과를 확인하기 위하여 Raw264.7 세포에 알디시아 팅크토리아를 30 / 의 농도로 처리하고 30분 후에 LPS를 0.5/ / ^의 농도로 처리한 후， 시간별로 세포를 수집하여 핵과 세포질 단백질 추출용액 (NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extract ion Reagent s , Thermo Fisher Scientific Inc. , 미국)을 이용하여 각각 용출하였다.
단백질은 실험예 <3-2>와 동일한 방법으로 PVDF막에 부착시키고， 이를 p65 항체를 부착시켜서 단백질 발현량을 확인하였다.
그 결과， 도 6에서 보는 바와 같이 LPS만 처리했을 때 세포질의 p65의 양이 30분까지 감소하는 반면， 핵내의 p65 양은 증가하는 것을 확인하였다. 그러나， 알디시아 팅크토리아를 전처리후 LPS로 유도했을 경우， 핵내의 p65 양의 증가가 미약함을 확인하였다 (도 6).
<실험예 8> 알디시아 팅크토리아추출물의 신호전달 단백질의 인산화 억제 효과 상기 <실험예 7〉의 방법으로 처리된 세포를 배양용기로부터 떼어내어 단백질 분해효소 저해제 및 인산화분해저해효소 (phosphatase inhibitor, Roche, 독일)를 함유한 단백질 용출용액을 사용하여 균질화하였다. 추출액은 20분 동안 14000 rpm에서 원심분리한 뒤 상등액과 불용성 응집체를 분리하였다. 분리된 상등액의 단백질을 정량하여 시료당 20 ； «g의 단백질을 SDS 10% SDS-PAGE 겔에 전기영동한 후, PVDF 막으로 옮겼다. 단백질이 옮겨진 막에서 단백질이 없는 부분을 탈지분유로 차단 (blocking)시킨 다음， 1차 항체로 항 -ERK, 항 -p38 MAPK, 항一 JNI 1:1000, Santa Cruz Biotechnology, 미국)의 전체형태의 항체를 부착하거나 항— p38 MAPK과 항 -JNK(1:1000, Enzo, Rarmingdale, NY) 또는 항 -ERK( 1:1000， Cell Signaling Technology, 미국)의 인산화형태의 항체를 부착한 후， 2차 항체를 순차적으로 결합시켰다.
그 결과， 도 7에서 보는 바와 같이 대식세포에 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리하고 LPS를 처리한 경우, JNK와 p38은 전체형태는 단백질의 변화가 없었으며, LPS에 의해 인산화형태의 단백질 발현이 증가함을 확인하였으며, 알디시아 팅크토리아 추출물 처리에 대해서는 변화가 없었다. 반면， ERK 단백질은 알디시아 팅크토리아 추출물 처리시 전체형태의 단백질은 변화가 없었으며， 인산화형태의 단백질 또한 발현 증가가 억제됨을 확인하였다 (도 7).
<실험예 9> 카라기난 (carrageenan) 유도 마우스 족부종에 대한 알디시아 팅크토리아 추출물의 억제효과
알디시아 팅크토리아 추출물이 동물세포에 대해 염증저해효과가 우수하였기에 동물실험을 통해 염증저해 효과를 확인하였다.
구체적으로， 무게가 20-25g인 BALB/c 암컷 마우스 (코아텍， 대한민국)를 4- 5마리씩 무작위적으로 선정하여 각 그룹으로 나누었다. 알디시아 팅크토리아 추출물 흑은 에틸아세테이트 분획물은 인산완충액 (PBS)에 초음파로 녹여서 40 mg/kg의 농도로 투여하였으며， 음성대조군으로는 PBS를 투여하였으며, 양성대조군으로는 인도메타신 (Indomethacin, Sigma, 미국)을 5 mg/kg의 농도로 투여하였다. 30분 후에, 염증을 유도하기 위하여 PBS에 녹인 카라기난 (1% v/v) 용액을 마우스의 왼발에 25 ul씩 주사하였다. 발의 두께는 카라기난을 주사하기 전에 캘리퍼 (Digital caliper, Niigata Seiki , 일본)로 측정하였으며， 카라기난 주사하고 4시간후에 다시 측정하여 염증 유도정도를 계산하였다.
그 결과, 도 8에서 보는 바와 같이 음성대조군은 카라기난에 의해 발의 두께가 0.85 土 0.12 mm 증가하였으나, 알디시아 팅크토리아 추출물을 전처리한 군에서는 0.32 士 0.05 mm증가하였으며， 알디시아 팅크토리아 에틸아세테이트 분획물을 전처리한 군에서는 0.38 士 0.07 mm 증가하였기에 알디시아 팅크토리아 추출물 및 분획물 모두 카라기난으로 유도된 마우스 족부종을 억제효과가 있음을 확인하였다 (도 8).
<제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1>산제의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 2 g
유당 1 g ―
상기의 성분을 흔합하고 기밀포에 층진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 100 rag
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg
스테아린산 마그네 2 rag
상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 100 mg
옥수수전분 100 rag 유 당 100 nig
스테아된산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡술에 층전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4>환의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 1 g .
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리를 0.5 g
상기의 성분을 흔합한 후 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5>과립의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 150 mg
대두추출물 50 mg
포도당 200 rag
전분 600 mg
상기의 성분을 흔합한 후, 30% 에탄을 100 rag을 첨가하여 섭씨 60 °C에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 2>식품의 제조
<2-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 0.5 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고， 이 흔합물을 이용하여 빵， 케이크， 쿠키， 크래커 및 면류를 제조하였다.
<2-2>스프 및 육즙 (gravies)의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 0.1-5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품， 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<2-3> 그라운드 비프 (ground beef)의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<2-4>유제품 (dairy products)의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-5>선식의 제조
현미, 보리， 참쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨， 들깨도 공지의 방법으로 찌서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고， 분무， 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류， 종실류 및 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다..
곡물류 (현미 30 중량부， 을무 15 중량부， 보리 20 중량부)，
종실류 (들깨 7 중량부， 검정콩 8 중량부， 검정깨 7 중량부)，
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 (3 증량부)， 영지 (0.5 중량부)，
지황 (0.5 증량부).
<제조예 3〉 음료의 제조 1
<3-l> 건강음료의 제조
액상과당 (0.5¾>)， 올리고당 (2%), 설탕 (2%)， 식염 (0.5%), 물 (75%)과 같은 부재료와 본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병， 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
<3-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ^에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<3-3>과일 주스의 제조
본 발명의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물 1 g을 사과 또는 포도 주스 ι,οοο ni.e에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims

【청구의 범위]
【청구항 1]
알디시아 팅크토리아 G \s/a / o /a Pit.) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 2】
제 1항에 있어서， 상기 알디시아 팅크토리아는 물， CI ~ C2의 저급 알코을 또는 이들의 흔합물을 용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 3】
제 2항에 있어서, 상기 저급 알코을은 에탄을 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물. 【청구항 4】
제 1항에 있어서, 상기 분획물은 상기 알디시아 팅크토리아 추출물에 11-
' 핵산， 클로로포름， 에틸아세테이트 또는 부탄올을 가하여 추출한 분획물인 것을 . 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물. 【,청구항 5】
제 4항에 있어서， 상기 분획물은 에틸아세테이트 분획물인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 6】
. 제 1항에 있어서, 상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피， 결막염， 치주염, 비염， 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양， 위염， 크론병, 대장염, 통풍， 강직성 척추염, 류마티스 열， 루푸스， 섬유근통 (fibromyalgia)， 건선관절염， 골관절염， 류마티스 관절염， 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염， 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군 (Sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 7】
알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 피부 외용제.
【청구항 8】
제 7항에 있어서， 상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염， 아토피， 결막염, 치주염， 비염， 중이염， 인후염， 편도염, 폐렴， 위궤양, 위염， 크론병， 대장염， 통풍， 강직성 척추염， 류마티스 열, 루푸스， 섬유근통， 건선관절염， 골관절염, 류마티스 관절염， 견관절주위염， 건염， 건초염， 건주위염ᅳ 근육염， 간염 , 방광염， . 신장염， 쇼그렌 증후군， 다발성 경화증， 및 급성 및 만성 염증 질환으로 ' 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 피부 외용제. 【청구항 9】
알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물.
【청구항 10]
제 9항에 있어서， 상기 염증성 질환은 알레르기， 피부염， 아토피, 결막염， 치주염, 비염， 중이염， 인후염, 편도염， 폐렴， 위궤양， 위염, 크론병， 대장염， 통풍, 강직성 척추염， 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통， 건선관절염， 골관절염， 류마티스 관절염， '견관절주위염， 건염, 건초염， 건주위염， 근육염， 간염， 방광염， 신장염， 쇼그렌 증후군， 다발성 경화증， 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물. 【청구항 11】
알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품용 조성물. 【청구항 12】
제 11항에 있어서, 상기 염증성 질환은 알레르기， 피부염， 아토피， 결막염， 치주염， 비염 중이염, 인후염， 편도염, 폐렴 위궤양， 위염， 크론병, 대장염, 통풍， 강직성 척추염， 류마티스 열， 루푸스， 섬유근통, 건선관절염， 골관절염, 류마티스 관절염， 견관절주위염， 건염， 건초염， 건주위염， 근육염, 간염, 방광염, 신장염， 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품용 조성물.
【청구항 15】
약학적으로 유효한 양의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 염증성 질환에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환 치료방법.
【청구항 16】
유효한 양의 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환 예방방법.
【청구항 17】
염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물.
'
【청구항 18】
염증성 질환 예방 및 게선용 피부 외용제로 사용하기 위한 알디시아 ： 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물. 【청구항 19】
염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물. 【청구항 20】
염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품용 조성물로 사용하기 위한 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물.
PCT/KR2012/004957 2011-06-24 2012-06-22 알디시아 팅크토리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 WO2012177081A2 (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JPS6075442A (ja) * 1983-09-30 1985-04-27 Otsuka Pharmaceut Co Ltd １，４−ベンゾキノン誘導体
CN1242212A (zh) * 1998-07-21 2000-01-26 王辉 一种治疗慢性支气管炎的中药——消炎止咳胶囊
KR100748851B1 (ko) * 2006-04-25 2007-08-13 주식회사 바이오랜드 항염 및 항자극 활성을 갖는 백량금 추출물을 함유하는피부외용 조성물

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