WO2012141391A1 - 포투랍두스 템페라타 ｍ１０２１（수탁번호:ｋｃｔｃ12006ｂｐ）동결건조 방법 및 동결 건조 분말. - Google Patents

포투랍두스 템페라타 ｍ１０２１（수탁번호:ｋｃｔｃ12006ｂｐ）동결건조 방법 및 동결 건조 분말. Download PDF

Info

Publication number
WO2012141391A1
WO2012141391A1 PCT/KR2011/006988 KR2011006988W WO2012141391A1 WO 2012141391 A1 WO2012141391 A1 WO 2012141391A1 KR 2011006988 W KR2011006988 W KR 2011006988W WO 2012141391 A1 WO2012141391 A1 WO 2012141391A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
freeze
moth
added
temperata
drying method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2011/006988
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
신재호
장은경
박건석
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
Original Assignee
Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Industry Academic Cooperation Foundation of KNU filed Critical Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
Publication of WO2012141391A1 publication Critical patent/WO2012141391A1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/10—Preservation of living parts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/10—Preservation of living parts
    • A01N1/12—Chemical aspects of preservation
    • A01N1/128—Chemically defined matrices for immobilising, holding or storing living parts, e.g. alginate gels; Chemically altering living parts, e.g. by cross-linking
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Definitions

  • the present invention relates to a method for freeze-drying a novel strain, Poturaddus temperata M1021 (Accession No .: KCTC 12006BP). More specifically, it relates to a freeze drying method characterized by adding a preservative.
  • the present invention relates to a freeze-dried powder of the strain of Porturadops temperata M1021 produced by the freeze-drying method as described above and to a biological pesticide comprising the same.
  • Organic chemical synthetic insecticides have been widely used to control pests, but due to decades of abuse and abuse, the emergence of abnormal or resistant pests of pest groups, toxic expression of non-target insects including humans, and environmental pollution It is causing many side effects.
  • an international agreement was reached to refrain from using highly toxic organic synthetic pesticides in order to protect human health.
  • the world reduced production by 50% of the chemical synthetic organophosphorus and chlorine pesticides used in the past 10 years in 2004, and again reduced production of organophosphorus and organochlorine insecticides by 50% by 2010. It is in the phase of implementation, agreeing to international agreements to be made.
  • microorganisms have been able to reduce or replace the use of chemical fertilizers or pesticides, microorganisms capable of biological control techniques that are less harmful to livestock, do not harm crops, and have less damage to the environment, such as soil ecosystems.
  • chemical fertilizers or pesticides microorganisms capable of biological control techniques that are less harmful to livestock, do not harm crops, and have less damage to the environment, such as soil ecosystems.
  • biological pesticides that can complement the chemical pesticides.
  • Lyophilization methods can be used for the use of such microorganisms in biopesticide formulations. Freeze drying is one of drying methods used for long-term preservation of microorganisms, preservation of active substances that are relatively unstable according to conditions such as temperature in an aqueous solution such as enzymes or functional proteins, or preserving the flavor and properties of foods as they are. .
  • Lepidoptera Lepidopter
  • Lepidoptera butterfly acids and moths acids and contain species belonging to the neck are the egg, larva, pupa, to complete transformation after the adult stage 4, of Lepidoptera larvae herbivorous then large with respect to the wide range of crops It is a representative pest causing economic damage.
  • the larva of the bee-flying moth (Galleria mellonella), which belongs to the butterfly neck, is a pest that affects the honeycomb. It is in a state of condition and eventually collapses, causing huge economic losses to honey farmers.
  • tobacco moths belonging to the butterfly neck are photogenic and omnivorous pests with more than 100 species of host, which are inherently high resistance to drugs and low sensitivity.
  • the present inventors have made a thorough effort to develop a biological pesticide that can effectively control butterfly neck pests, and as a result, to identify a novel strain, Poturaddus temperata M1021 (Accession No .: KCTC 12006BP), and to effectively use it as a biopesticide
  • the present invention has been completed to find the most suitable freeze drying method for strains and to provide it as a biological pesticide formulation.
  • an object of the present invention is to provide a freeze-dried powder of the strain of Porturadops temperata M1021 prepared by the above freeze-drying method and a biological pesticide comprising the same.
  • the present invention is characterized by adding at least one preservative selected from the group consisting of milk, sodium alginate, starch, glucose, and Porturabdus temperata M1021 (Accession No .: KCTC 12006BP Provide a freeze-drying method.
  • the present invention provides a freeze-dried powder of Porturadops temperata M1021 provided by the freeze-drying method as described above.
  • the present invention provides a biopesticide comprising such a lyophilized powder.
  • the present invention it is possible to control lepidopteran pests by using the Potorapis temperata M1021 strain as an environmentally friendly microbial pesticide preparation, and in particular, by inventing a freeze-drying method that is most suitable for the novel strains of the strains of Portrapaps temperata M1021. Increasing the survival rate and facilitating formulation can increase the availability of biopesticides.
  • FIG. 2 shows the effect of Schememilk on the viability of the frozen precursor powder Photorapdus temperata M1021 at 4 ° C. (Skimmilk was added to the 25-fold cell suspension. The added concentrations were: ⁇ : 0%, ⁇ : 1%, ⁇ : 5%, ⁇ : 7%, and ⁇ : 10%, respectively.)
  • the present invention provides a lyophilization method of photolabdus temperata M1021 (Accession No .: KCTC 12006BP).
  • Photorabdus temperata M1021 (Accession Number: KCTC 12006BP) used in the present invention was isolated and identified from an insect pathogenic nematode, and the result of comparing 16s rDNA nucleotide sequence (1493bp) of the strain with known strains (Photorhabdus temperata) and a homology of 99%.
  • This strain is a strain that is not exactly the same as the existing strain, and is a novel strain belonging to the species.
  • the strain of the present invention is named photolabdus temperata M1021, It was deposited with the accession number KACC 91627P at the National Institute of Agricultural Science. In addition, on August 23, 2011, it was deposited with the International Depositary Organization as KCTC 12006BP.
  • the morphological and biochemical characteristics of the strains of the present invention shows catalase, protease, and lipase enzyme activity as Gram-negative bacillus, and the growth temperature is active at 28 ° C to 30 ° C, and growth is inhibited as the culture temperature is increased. It may be characterized by.
  • the present invention adds at least one preservative selected from the group consisting of scheme milk, sodium alginate, starch, and glucose for efficient freeze drying of the photolabose temperata M1021.
  • the term "preservative" of the present invention refers to protecting cells from various physicochemical external impacts such as nutrient depletion, osmotic pressure, and in particular, protecting cells from ice crystals formed during freezing.
  • “Skim milk” used in the present invention is a portion remaining after centrifugation of fat in milk, and the scheme milk of the present invention is added at a concentration of 1% to 10% (w / v) to prevent death of the strain by freeze drying. It can be used as a preservative. Preferably, it may be added at a concentration of 7% (w / v), but is not limited thereto.
  • the "sodium alginate" of the present invention is a food additive for increasing the tackiness and viscosity of foods, enhancing the emulsion stability, and improving the physical properties and feel of foods, and the formula (C 6 H 7 O 6 Na) n. It is characterized by that.
  • the present invention relates to a method for freeze-drying Poturadops temperata M1021 by adding sodium alginate at a concentration of 0.5% to 1.5% (w / v).
  • This addition is most preferably but not limited to 1.5% (w / v) and the addition of starch as a preservative is also preferably at a concentration of 1% to 7% (w / v), more preferably 5% (w / v). It may be added as, but is not limited thereto.
  • glucose is a representative aldohexose (monosaccharide having 6 carbons and an aldehyde group) and is a central compound of carbohydrate metabolism, characterized by being able to synthesize 38 ATPs per molecule.
  • glucose may be added as a preservative, and may be preferably added at a concentration of 0.5% to 1.5% (w / v). At higher concentrations, glucose may have difficulty in powder formation.
  • the Poturadap temperata M1021 in performing the freeze-drying method, is preferably freeze at -60 ° C to -80 ° C, more preferably -70 ° C, and freezes for 48 to 72 hours. Can be performed.
  • the above freeze drying method is performed to provide a freeze-dried powder of the Poturadap temperata M1021 strain.
  • powdering methods known in the art can be used without limitation.
  • the powdering may be performed to pass 90% or more of the sieve of 300 mesh.
  • a pin miller, an airjet miller, or a hammer miller can be used.
  • pulverization can be prepared in a formulation selected from the group consisting of a hydrate (WP), a solid (GM), a granule (WG), a granule (GR), powder (DP) and seed treatment hydration (WS).
  • WP hydrate
  • GM a solid
  • WG granule
  • GR granule
  • DP powder
  • seed treatment hydration seed treatment hydration
  • the hydrating agent is a formulation of the pesticide that is hydrated when diluted in water as a powder phase
  • the solid agent is a formulation that is mixed or adsorbed microbial culture medium to the solid material means a formulation that does not correspond to powder, granules and hydrating agents.
  • the granular hydrating agent is a granular formulation of a pesticide used in dilution with water
  • the granules are granulated formulation of the pesticide used as a raw state
  • the powder is a powdered formulation of the pesticide used in its original state as the seed treatment
  • Hydrating means a formulation of pesticide that is hydrated and used as a suspension prior to treatment on the seed as a powder.
  • the present invention may also include a dry powder obtained by the drying method and a biopesticide containing the same.
  • the dry powder may be prepared as a biopesticide in a formulation selected from the group consisting of a hydrate (WP), a solid (GM), a granule (WG), a granule (GR), powder (DP) and seed treatment hydration (WS). have.
  • Scheme milk starch, sodium alginate, dextrose, sodium-glutamate and the like were purchased from Sigma. Tryptic Soy Broth (TSB), Bacto-trypton, and Bacto-yeast extract, which are microbial culture media, were purchased from Difco and other reagents were used as special reagents.
  • TTB Tryptic Soy Broth
  • Bacto-trypton Bacto-trypton
  • Bacto-yeast extract which are microbial culture media
  • Insect pathogenic microorganisms were used for Portrapads temperata M1021 isolated from entomopathogenic nematodes and identified by 16S rDNA sequencing (GenBank accession number HQ647119). Strains were incubated for 48 hours at 28 ° C. using TSB (Difco, France) agar medium, followed by shaking culture (28 ° C., 200 rpm) by inoculating single colonies in 100 ml TSB liquid medium prior to inoculation. This culture was incubated for 48 hours at 28 °C using 1L TSB liquid medium and then used to prepare a lyophilized sample.
  • TSB Disifco, France
  • the cells to be used for lyophilization were centrifuged (10,000 rpm, 4 ° C., 20 min) in a culture solution of Forturabdus temperata M1021 incubated for 48 hours in this culture, and then only the cells were recovered, followed by 1 sterile saline solution (0.85% NaCl). After washing twice, the same saline was suspended 25 times of the culture.
  • Scheme Milk, Starch, Sodium Glutamate were prepared to 15% (w / v), respectively, and Sodium Alginate was 4% (w) due to its high viscosity. / v) and used.
  • the final concentration of preservative added to 7 ml of suspension was 1, 3, 5, 7% (w / v) for starch and sodium glutamate, 1, 5, 7, 10% (w / v) for skim milk, and dextrose 0.5, 1% (w / v) and sodium alginate were added in 0.5, 1, 1.5% (w / v) portions.
  • the mixture was added uniformly by the addition of a preservative and then completely frozen at ⁇ 70 ° C., followed by freeze drying for 3 days using a lyophilizer (LABCONCO, USA).
  • the sample was weighed and then crushed uniformly to be refrigerated (4 ° C).
  • Test Example 1 Survival Rate of Bacteria by Freezing
  • the survival rate of Poturadap temperata M1021 after freezing was 3.03 ⁇ 10 6 colony forming unit (CFU) / ml before freezing and 2.63 ⁇ 10 3 CFU / ml after freezing.
  • the survival rate of the bacteria was only 0.09%.
  • polymers such as skim milk, starch, sodium alginate and sodium glutamate were used.
  • Sodium alginate is known to be a high molecular material that is widely used for the preservation and encapsulation of microorganisms. When the concentration of sodium alginate was 1.5% (w / v), the survival rate was 3.4% compared to the control (no addition). (C in FIG. 1A)
  • sodium glutamate widely used as a preservative for lyophilization, has been found to be an unsuitable preservative for lyophilization of the novel strain of Poturadaps temperata M1021.
  • the survival rate of the strain when 1 to 10% (w / v) of sodium glutamate was added was 0.01% when 10% was added, and the maximum survival rate was 0.13% in the non-treated group. There was no.
  • a freeze-dried powder sample of Porturadops temperata M1021 containing 7% (w / v) scheme milk was used to inject toxic to honeybee larvae larvae. The degree of death of the larvae was measured over time.
  • Porturadops temperata M1021 strain When the injected dose of Porturadops temperata M1021 strain was higher than 2.02X10 3 cells, all of them died within 24 hours after injection, and when injected at least 2.02X10 1 cells, most of the larvae were killed within 2 days (FIG. 3). . In addition, 50% of the larvae died at 4 days after injection even at a very low concentration of 2.02X10 0 cells. Found to be very low.
  • the honeybee moth larvae turn red and lose swelling after the death of the beeper moth larvae (Fig. 4). This is due to the anthraquinone pigment produced by the fungicide, P. luminescens It was confirmed that the high insecticidal power was exhibited by the treatment of the freeze-dried strain according to the present invention as a feature of only the Dus temperata strain.
  • Test Example 4 Evaluation of the stability of the strain according to the storage period.
  • the freeze-drying method most suitable for the strains of Porturorapus temperata M1021, which can be used as an environmentally friendly microbial pesticide preparation the survival rate of the strain is improved and the formulation is easy to be used, thereby increasing the availability as a biopesticide. Can be.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 스킴 밀크, 소듐 알지네이트, 전분(starch), 글루코스로 이루어진 군에서 1이상 선택된 보존제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 포투랍두스 템페라타 M1021(수탁번호: KCTC 12006BP) 동결건조 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기와 같은 동결 건조 방법에 의하여 만들어진 포투랍두스 템페라타 M1021 균주의 동결 건조 분말과 이를 포함하는 것을 특징으로 하는 생물 농약에 관한 것이다.

Description

포투랍두스 템페라타 Ｍ１０２１（수탁번호:ＫＣＴＣ12006ＢＰ）동결건조 방법 및 동결 건조 분말.
본 발명은 신규한 균주인 포투랍두스 템페라타 M1021(수탁번호: KCTC 12006BP)를 동결 건조하는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 보존제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 동결 건조 방법에 관한 것이다.
또한 본 발명은 상기와 같은 동결 건조 방법에 의하여 만들어진 포투랍두스 템페라타 M1021균주의 동결 건조 분말에 관한 것이며 이를 포함하는 것을 특징으로 하는 생물 농약에 관한 것이다.
그동안 해충을 방제하기 위하여 유기 화학적 합성 살충제가 널리 사용되고 있으나, 수십 년에 걸친 연용과 남용으로 인하여 해충 군의 이상격발 또는 저항성 해충의 출현, 인간을 비롯한 비목적 충에 대한 독성발현 및 환경 계의 오염 등의 많은 부작용을 야기하고 있다. 전 세계적으로 농약의 잔류 독성과 환경오염으로 인하여 여러 가지 문제점이 나타나자 인류의 건강을 지키기 위하여 우선 독성이 강한 유기합성 농약의 사용을 자제하기로 국제적인 합의가 도출되기도 하였다. 이러한 국제 협약에 의하여 전 세계는 2004년에 지난 10년 전에 사용하던 화학합성 유기인계, 유기염소계 살충제의 50%까지 생산이 감축되었고, 2010년까지 다시 유기인계, 유기염소계 살충제의 생산을 50% 감소시키기로 한 국제적 협의에 동의하여 현재 실행 단계에 있다.
그러나 독성농약 감축생산 협의 이후, 현재 전 세계적으로 많은 연구진이 환경 친화적 살충제를 개발하려고 많은 노력을 했음에도 불구하고, 이제까지 사용하였던 유기인계, 유기염소계 농약을 대체할 새롭고 안전한 살충제를 개발하지 못하였기 때문에 전 세계적인 농약감축회의 의결내용이 지켜지기 어려운 상황이며, 조만간 안전한 살충제가 개발되어 생산되지 않으면 해충방제용 살충제뿐만 아니라 식량을 비롯한 농산물 생산에 관련된 농업용 살충제의 부족으로 인해 국내외적으로 큰 문제가 대두될 것으로 예상된다.
최근에는 화학비료나 농약의 사용을 줄이거나 대체할 수 있으며, 인축에 위해가 적고 작물에 피해를 일으키지 않으며, 토양 생태계와 같은 환경에 대한 피해가 적은 생물학적 방제의 기술이 미생물에 의해 가능하다는 것이 국내외 여러 연구자들에 의해 입증됨에 따라, 화학농약의 폐단을 보완할 수 있는 생물 농약에 대한 관심과 연구가 증가하고 있는 추세이다.
생물 농약에 있어서 미생물을 이용한 생물 농약의 이용이 기대된다. 이러한 미생물의 생물 농약 제제로의 이용을 위하여 동결 건조 방법을 사용할 수 있다. 동결 건조는 미생물을 장기 보존하거나 효소 또는 기능성 단백질 등과 같이 수용액 상태에서 온도 등의 조건에 따라 상대적으로 불안정한 활성 물질을 보존하거나, 식품의 향과 성상을 원형을 그대로 보존하기 위하여 사용되는 건조 방법 중의 하나이다.
한편, 나비목(Lepidopter)에는 나비 류와 나방 류가 포함되며, 상기 목에 속하는 종들은 알, 유충, 번데기, 성충 4단계를 거쳐 완전변태를 하는데, 이 중 나비목 유충은 초식성이어서 광범위한 농작물에 대하여 큰 경제적 피해를 일으키는 대표적인 해충이다. 특히, 나비 목에 속하는 꿀벌부채명나방(Galleria mellonella)의 유충은 벌집에 가해하는 해충으로서 나방 성충이 벌통 안에 낳은 알에서 부화한 애벌레는 벌집과 꿀을 먹고 자라기 때문에 가해를 당한 꿀벌집은 너덜너덜한 상태가 되고 결국 무너지게 되어 꿀 농가에 막대한 경제적 손실을 주고 있다. 또한, 나비 목에 속하는 담배거세미나방은 가해하는 기주의 종류가 100 여종 이상인 광식성 및 잡식성 해충으로 이 유충은 선천적으로 약제에 대한 높은 내성과 낮은 감수성으로 어린 유충기를 제외한 중령 이상의 유충은 약제방제가 매우 어려운 대표적인 난방제 해충으로 알려져 있다 (Choi et al., Kor. J. Appl. Entomol., 1996, 35: 249-253; Bae et al., Kor. J. Appl. Entomol., 2003, 42: 225-231). 밤애기잎말이나방은 유충이 밤송이 속으로 뚫고 들어가 밤의 과육을 식해하며, 혹명나방은 벼의 주요 해충으로서 벼잎이 세로로 말리면서 그 속에서 잎살을 갉아 먹으므로 곡식의 낟알이 잘 여물지 않는 피해를 주는 등 경제작물에 큰 피해를 주고 있다. 따라서, 상기와 같이 농가에 경제적 손실을 안겨주는 나비목 해충에 대하여 생물학적으로 방제할 수 있는 우수한 살충력을 갖춘 저독성의 환경친화적 미생물 제제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
이에 본 발명자들은 나비 목 해충을 효과적으로 방제할 수 있는 생물 농약을 개발하기 위하여 예의 노력한 결과 신규한 균주인 포투랍두스 템페라타 M1021(수탁번호:KCTC 12006BP)를 밝히고 이를 효율적으로 생물 농약으로 사용하기 위하여 균주에 가장 적합한 동결 건조 방법을 찾아내어 이를 생물학적 농약 제제로 제공하기 위하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 신규한 균주인 포투랍두스 템페라타 M1021 균주에 가장 적합한 동결 건조 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 상기와 같은 동결 건조 방법으로 제조된 포투랍두스 템페라타 M1021균주의 동결 건조 분말과 이를 포함하는 것을 특징으로 하는 생물 농약을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 스킴 밀크, 소듐 알지네이트, 전분(starch), 글루코스로 이루어진 군에서 1이상 선택된 보존제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 포투랍두스 템페라타 M1021(수탁번호: KCTC 12006BP) 동결건조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기와 같은 동결 건조 방법에 의하여 제공되는 포투랍두스 템페라타M1021의 동결 건조 분말을 제공한다.
본 발명은 또 다른 양태로써, 상기와 같은 동결 건조 분말을 포함하는 생물 농약을 제공한다.
본 발명에 따르면 환경 친화적인 미생물 농약 제제로써 포투랍두스 템페라타 M1021 균주를 이용하여 나비목 해충을 방제할 수 있으며 특히 신규한 균주인 포투랍두스 템페라타 M1021 균주에 가장 적합한 동결 건조 방법을 발명함으로써 균주의 생존율을 높이고 제제화를 용이하게 함으로써 생물 농약으로의 이용가능성을 증대할 수 있다.
도 1a 및 도1b는 동결건조 후의 포토랍두스 템페라타 M1021의 생존에 미치는 보존제의 효과를 도시한다. (A: 스킴밀크, B:전분 C:소듐 알지네이트 D: 소듐 글루타메이드. E: 글루코스)
도 2는 4℃에서 동결 전조 분말 포토랍두스 템페라타 M1021의 생존력에서의 스킴밀크의 효과를 도시한다. (스킴밀크는 25배 세포 현탁액에 첨가되었다. 첨가한 농도는 각각 ■:0% ,○: 1%, △: 5%, ▲: 7% ,●:10% 을 나타낸다. )
도 3은 포토랍두스 템페라타 M1021 동결 건조의 살충 효과를 나타낸다. (투약 농도는 각각 ■:2.02×10⁴,◇: 2.02×103 ▲: 2.02×102 ◆: 2.02×101 ●: 2.02×100 , △:2.02×10-1 ,○: 대조군을 나타낸다.)
도 4는 동결 건조한 포토랍두스 템페라타 M1021을 처리시 살충 효과를 나타낸다.(왼쪽 대조군, 오른쪽 처리군)
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 포토랍두스 템페라타 M1021(수탁번호: KCTC 12006BP)의 동결건조방법을 제공한다.
본 발명에 사용된 포토랍두스 템페라타 M1021(수탁번호: KCTC 12006BP)은 곤충병원성 선충으로부터 분리 동정한 것으로서, 상기 균주의 16s rDNA 염기서열(1493bp)을 공지 균주와 비교한 결과 포토랍두스 템페라타(Photorhabdus temperata)와 99%의 상동성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 균주는 종래 존재하는 균주와 완전히 동일하지 않은 균주로 해당 종에 속하는 신규한 균주이며, 이러한 분석결과에 따라 본 발명의 균주를 포토랍두스 템페라타 M1021로 명명하고, 2011년 1월 4일자로 국립농업과학원 농업유전자원센터에 수탁번호 KACC 91627P로 기탁하였다. 또한 2011년 8월 23일자로 국제 기탁기관에 KCTC 12006BP으로 기탁하였다.
본 발명의 균주의 형태적, 생화학적 특성을 살펴보면, 그람 음성 간균으로서 카탈라아제, 프로테아제, 리파아제 효소 활성을 나타내며, 배양 온도는 28℃ 내지 30℃에서 성장이 활발하며 배양 온도가 높아짐에 따라 성장이 저해됨을 특징으로 할 수 있다.
이러한 포토랍두스 템페라타 M1021의 효율적인 동결 건조를 위하여 본 발명은 스킴 밀크, 소듐 알지네이트, 전분(starch), 글루코스로 이루어진 군에서 1이상 선택된 보존제를 첨가한다.
본 발명의 “보존제”란, 영양분의 고갈, 삼투압 등의 다양한 물리 화학적 외부 충격으로부터 세포를 보호하고, 특히 동결하는 동안 형성된 얼음 결정으로부터 세포를 보호하는 작용을 하는 것을 말한다.
본 발명에 사용된 “스킴 밀크”란 우유에서 지방분을 원심 분리하고 남은 부분으로써, 본 발명의 스킴 밀크는 1% 내지 10%(w/v) 농도로 첨가하여 동결 건조에 의한 균주의 사멸을 방지하는 보존제로 사용할 수 있다. 바람직하게는 7%(w/v) 농도로 첨가할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
또한 본 발명의 “소듐 알지네이트”란, 식품의 점착성 및 점도를 증가시키고 유화안정성을 증진하며 식품의 물성 및 촉감을 향상시키기 위한 식품 첨가물로써, 화학식은 (C6H7O6Na)n. 임을 특징으로 한다.
본 발명은 소듐 알지네이트를 0.5% 내지 1.5%(w/v)농도로 첨가하여 포투랍두스 템페라타 M1021을 동결 건조하는 방법에 관한 것이다. 이러한 첨가는 1.5%(w/v)가 가장 바람직하나 이에 제한되지 않으며 보존제로서 전분의 추가 역시 바람직하게는 1% 내지 7%(w/v)농도로 더욱 바람직하게는 5%(w/v)로 첨가할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 “글루코스”란, 대표적인 알도헥소스 (탄소 6개를 가지며 알데하이드기를 가지는 단당류)이며 탄수화물 대사의 중심적 화합물로서　한 분자당 38개의　ATP를 합성할 수 있는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서는 글루코스를 보존제로 첨가할 수 있으며 바람직하게는 0.5% 내지 1.5%(w/v)농도로 첨가할 수 있다. 이 이상의 농도의 경우 글루코스는 분말 형성의 어려움이 있을 수 있다.
본 발명에서는 동결 건조 방법을 수행하는 데 있어서 포투랍두스 템페라타 M1021을 바람직하게는 방법은 -60 ℃ 내지 -80℃, 더욱 바람직하게는 -70℃에서 동결할 수 있으며 48 내지 72시간 동안 동결과정을 수행할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태로써 상기와 같은 동결 건조 방법을 수행하여 포투랍두스 템페라타 M1021 균주의 동결 건조 분말을 제공한다.
본 발명에서의 분말화 하는 단계를 위해서 당업계에서 공지된 분말화의 방법을 제한 없이 사용할 수 있다. 예를 들어 분말화는 300 mesh의 체를 90% 이상 통과하도록 수행될 수 있다. 분말화를 할 때에는 핀(pin)밀러, 에어제트(airjet) 밀러, 해머(hammer)밀러 등을 사용할 수 있으며, 특히 핀(pin) 밀러를 사용하여 조분쇄한 후 일부 미분쇄된 입자의 경우 에어제트(airjet) 밀러를 사용하여 분쇄할 수 있다. 이렇게 분쇄하여 수화제(WP), 고상제(GM), 입상수화제(WG), 입제(GR), 분제(DP) 및 종자처리수화제(WS)로 이루어진 군에서 선택된 제형으로 제조할 수 있다. 상기 제형 외에도 생물농약으로 사용될 수 있는 제형이라면 모두 가능하다.
상기 수화제는 분상으로서 물에 희석하였을 때 수화되는 농약의 제형을, 상기 고상제는 미생물 배양액을 고상의 물질에 혼합하거나 흡착시킨 제제로 분제, 입제 및 수화제에 해당되지 않는 제형을 의미한다. 또한, 상기 입상 수화제는 과립상으로서 물에 희석하여 사용되는 농약의 제형을, 상기 입제는 입상으로서 원상태로 사용되는 농약의 제형을, 상기 분제는 분상으로서 원상태로 사용되는 농약의 제형을 상기 종자처리수화제는 분상으로서 종자에 처리하기 전에 수화시켜 현탁액으로 사용되는 농약의 제형을 의미한다.
본 발명은 상기 건조법으로 얻어진 건조 분말 및 이를 포함하는 생물농약도 포함할 수 있다. 상기 건조 분말은 수화제(WP), 고상제(GM), 입상수화제(WG), 입제(GR), 분제(DP) 및 종자처리수화제(WS)로 이루어진 군에서 선택된 제형으로 생물 농약을 제조할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 시험 예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 시험 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 시험 예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 재료 및 방법.
1.1 사용 배지 및 시약
스킴 밀크, 전분, 소듐 알지네이트, dextrose, 소듐-글루타메이트 등은 Sigma사로부터 구입하여 사용하였다. 미생물 배양용 배지인 Tryptic Soy Broth(TSB), Bacto-trypton, Bacto-yeast extract은 Difco에서 구입하여 사용하였고, 기타 시약은 특급시약을 사용하였다.
1.2 사용 균주 및 배양
사용된 곤충병원성 미생물은 곤충병원성 선충에서 분리한 포투랍두스 템페라타M1021을 사용하였으며, 16S rDNA sequencing을 통하여 동정하였다(GenBank accession number HQ647119). 균주는 TSB(Difco, France) agar 배지를 이용하여 28℃에서 48시간 배양한 다음, 본 배양에 접종하기 전에 단일 콜로니를 100 ㎖ TSB 액체 배지에 접종하여 진탕 배양하였다(28℃, 200rpm). 본 배양은 1L TSB 액체배지를 이용하여 28℃에서 48시간 배양한 다음 동결건조시료의 제조에 사용하였다.
실시예2. 동결건조 시료의 제조.
동결건조에 사용할 균체는 본 배양에서 48시간 배양한 포투랍두스 템페라타M1021의 배양액을 원심 분리(10,000rpm, 4℃, 20 min)하여 균체만을 회수한 뒤 멸균생리식염수(0.85% NaCl)에 1회 세척한 후 동일한 식염수에 본 배양액의 25배되게 현탁하였다. 동결건조 시 균체의 생존율에 영향을 미치는 보존제의 효과를 확인하기 위하여, 스킴 밀크, 전분, 소듐 글루타메이트는 각각 15% (w/v) 되게 제조하였으며, 소듐 알지네이트는 점성이 높은 관계로 4%(w/v)로 제조하여 사용하였다.
현탁액 7 ㎖에 첨가하는 보존제의 최종농도는 전분과 소듐 글루타메이트는 각각 1, 3, 5, 7%(w/v), 스킴 밀크는 1, 5, 7, 10%(w/v), dextrose는 0.5, 1%(w/v), 소듐 알지네이트는 0.5, 1, 1.5% (w/v) 씩 첨가하였다. 보존제를 첨가하여 균일하게 혼합한 다음 -70℃에서 완전히 동결한 후, 동결건조기 (LABCONCO, USA)를 사용하여 3일간 동결 건조하였다.
동결건조가 완료된 시료는 시료의 무게를 측정한 다음 균일하게 분쇄하여 냉장 보관(4℃)하였다.
시험예1. 동결에 따른 균의 생존율 변화
동결에 따른 포투랍두스 템페라타M1021의 생존율을 실험한 결과, 동결 전은 3.03×106 colony forming unit(CFU)/㎖을 나타내었으며, 동결 후에는 2.63×103 CFU/㎖을 나타내어 동결에 따른 균의 생존율은 0.09% 에 불과하였다.
따라서, 동결에 따른 균의 생존율을 향상시키고 최적화된 동결 건조 방법을 찾기 위하여 보존제 첨가에 의한 균을 생존율 변화를 살폈다.
시험예2. 보존제 종류 및 농도에 따른 균의 생존율
각각의 보존제가 농도 별로 함유된 포투랍두스 템페라타M1021 균주의 동결건조 시료를 각각 0.1 g씩 취하여 10 ㎖의 멸균생리식염수에 완전히 현탁 시킨 후, 멸균생리식염수를 이용하여 단계별(101 ∼ 106)로 희석하였다. 단계별로 희석한 시료를 TSB agar plate에 100 ㎕씩 도말 한 다음 28℃에서 48시간 배양하여 균 수를 측정하였다.
동결건조에 따른 세포의 손실을 최소화하기 위해 첨가한 보호제로 고분자 물질인 스킴 밀크, 전분, 소듐 알지네이트와 소듐 글루타메이트를 각각 사용하였다.
스킴 밀크의 경우 첨가 농도가 증가할수록 동결건조 시료에서의 포투랍두스 템페라타M1021 균주의 생존율도 점차 증가하여 7%(w/v) 일 때 가장 높은 63%의 생존율을 나타내었으며, 10% 이상에서는 급격하게 감소하였다 (도 1a의 A).
전분의 경우 5%에서, glucose는 1%(w/v)에서 각각 3.53과 2.11%의 생존율을 나타내어 비처리구에 비하여 각각 약 4배, 약 21배로 나타났다. 이는 포투랍두스 템페라타M1021균주의 동결 건조시 균의 생존율을 높일 수 있는 것을 보여주나 스킴 밀크 첨가시료에 비해서는 동결 건조 시 세포보호능력이 상대적으로 낮은 것으로 나타났다. (도1a의 B)
소듐 알지네이트는 미생물의 보존 및 캡슐화에 많이 사용되는 고분자 물질로 알려져 있다. 소듐 알지네이트의 첨가농도가 1.5%(w/v)일 때 대조군(무첨가)에 비하여 3.4%의 생존율을 나타내었다. (도1a의 C)
한편, 하기 비교예에서 사용된 소듐 글루타메이트의 경우 동결건조에 따른 세포 보호 효과가 전혀 나타나지 않았다. (도1b의 D)
Glucose는 1.5%(w/v)이상 첨가하였을 때 동결 건조 후 정상적인 분말을 형성하기 어려워 최종 첨가농도 1%(w/v) 에서 생존율 평가를 수행하였다. (도1b의 E)
비교예1. 소듐 글루타메이트 보존제 첨가시 균의 생존율
일반적으로 동결 건조 시 보존제로 널리 사용되는 소듐 글루타메이트는 본 발명의 신규한 균주인 포투랍두스 템퍼라타 M1021의 동결건조에 적합하지 않은 보존제로 나타났다.
도1b의 D에서 나타난 것과 같이 소듐 글루타메이트를 1 내지 10%(w/v)첨가 시 균주의 생존율은 10% 첨가시 0.01%로 나타났고, 최대 생존율 0.13%이 비처리구에서 나타나 보존제의 효과가 전혀 없었다.
이와 비교하여 스킴 밀크, 전분, 소듐 알지네이트, 글루코스는 각각 최대 63%, 3.53%, 3.4%, 2.11%로 나타남으로써 비처리 구와 비교하여 최대 630배의 보존 효과(스킴 밀크의 경우)를 보임으로써 포투랍두스 템페라타M1021균주의 동결 건조에 적합한 보존제로 나타났다.
시험예3. 동결건조에 따른 살충력 평가
7%(w/v) 스킴 밀크를 함유한 포투랍두스 템페라타M1021의 동결건조분말 시료를 이용하여 꿀벌부채명나방 유충에 대한 주사 독성을 실시하였으며, 포투랍두스 템페라타M1021 균주의 수에 따른 유충의 사멸 정도를 시간에 따라 측정하였다.
포투랍두스 템페라타M1021 균주의 주사량이 2.02Ｘ103cells 이상일 때는 주사 후 24시간 내에 모두 사멸하였으며, 적어도 2.02Ｘ101cells 이상을 주사할 경우 유충의 대부분이 2일 이내에 사멸하는 것으로 나타났다(도 3). 또한, 2.02Ｘ100cells의 아주 낮은 농도에서도 유충의 50%가 주사 후 4일만에 사멸하는 것으로 보아, 포투랍두스 템페라타M1021 균주의 꿀벌부채명나방 유충에 대한 LD (lethal dose, 치사량) 값은 매우 낮은 것으로 나타났다.
포투랍두스 템페라타M1021 균주에 의하여 꿀벌부채명나방 유충이 죽은 후 몸이 붉게 변하며 팽압을 상실하였다.(도 4) 이것은 포투랍두스 균주가 생산하는 anthraquinone 색소에 의한 것으로, P. luminescens와 포투랍두스 템페라타균주만의 특징으로 본 발명에 의한 동결 건조 균주의 처리에 의하여 높은 살충력이 나타남을 확인하였다.
시험예4. 저장 기간에 따른 균주의 안정성 평가.
동결건조 시료의 저장기간에 따른 포투랍두스 템페라타M1021균주의 안정성은 생존율이 가장 높게 나타난 스킴 밀크를 농도별로 첨가하여 실험하였다.
저온(4℃)에서 2주 간격으로 8주 동안 균의 생존 량을 측정하였으며, 동결건조 전·후의 균 수를 100으로 나타내었을 때, 스킴 밀크가 첨가되지 않은 경우 2주 만에 모두 사멸하는 것으로 나타났다.
스킴 밀크 농도가 5%와 10%(w/v) 의 경우, 동결건조 4주 후에 각각 24.38%와 36.74%의 생존율을 나타내었으며, 저장 6주 후에 모두 사멸하였다. 그러나 스킴 밀크 7%(w/v) 시료는 포투랍두스 템페라타M1021 균주의 75% 이상이 저장 4주까지도 유지되는 것으로 나타났으나 저장기간이 늘어남에 따라 생존 균 수의 지속적인 감소를 보였으며, 저장 8주시 생존율이18.53%을 나타내었다.
본 발명에 따르면 환경 친화적인 미생물 농약 제제로 사용 가능한 포투랍두스 템페라타 M1021 균주에 가장 적합한 동결 건조 방법을 이용함으로써 균주의 생존율이 향상되고 제제화가 용이해지게 되어 생물 농약으로써의 이용 가능성이 증대될 수 있다.
Figure PCTKR2011006988-appb-I000001
Figure PCTKR2011006988-appb-I000002

Claims (11)

  1. 스킴 밀크, 소듐 알지네이트, 전분(starch), 글루코스로 이루어진 군에서 1이상 선택된 보존제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 포투랍두스 템페라타 M1021(수탁번호: KCTC 12006BP) 동결 건조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 스킴 밀크는 1% 내지 10%(w/v) 농도로 첨가하는 것을 특징으로 하는 동결 건조 방법.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 스킴 밀크는 7%(w/v)농도로 첨가하는 것을 특징으로 하는 동결 건조 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 소듐 알지네이트는 0.5% 내지 2%(w/v)농도로 첨가하는 것을 특징으로 하는 동결 건조 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 전분은 1% 내지 7%(w/v)농도로 첨가하는 것을 특징으로 하는 동결 건조 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 글루코스는 0.5% 내지 1.5%(w/v)농도로 첨가하는 것을 특징으로 하는 동결 건조 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결 건조가 -60 ℃ 내지 -80℃에서 48 내지 72시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 동결 건조 방법.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 방법으로 제조된 포투랍두스 템페라타 M1021 균주의 동결 건조 분말.
  9. 제8항의 동결 건조 분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 생물 농약.
  10. 제9항에 있어서, 상기 생물 농약은 나비 목 해충 방제를 위한 농약임을 특징으로 하는 생물 농약.
  11. 제10항에 있어서, 상기 나비 목 해충은 꿀벌부채명나방(Galleria mellonella), 배추좀나방(Plutella xylostella), 담배거세미나방(Spodoptera litura), 털뿔가지나방(Alcis angulifera), 애모무늬잎말이나방(Adoxophyes orana), 감나무잎말이나방(Ptycholoma lecheana), 밤애기잎말이나방(Cydia Kurokoi), 복숭아순나방(Grapholita molesta), 은무늬굴나방(Lyonetia prunifoliella), 복숭아심식나방(Carposina sasakii), 파밤나방(Spodoptera exigua), 목화바둑나방(Diaphania indica), 혹명나방(Cnaphalocrocis medinalis), 이화명나방(Chilo suppressalis), 및 왕담배나방(Helicoverpa armigera)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 생물 농약.
PCT/KR2011/006988 2011-04-14 2011-09-22 포투랍두스 템페라타 ｍ１０２１（수탁번호:ｋｃｔｃ12006ｂｐ）동결건조 방법 및 동결 건조 분말. Ceased WO2012141391A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2011-0034743 2011-04-14
KR1020110034743A KR101254104B1 (ko) 2011-04-14 2011-04-14 포투랍두스 템페라타 ｍ１０２１（수탁번호:ｋａｃｃ９１６２７ｐ）동결건조 방법 및 동결 건조 분말.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012141391A1 true WO2012141391A1 (ko) 2012-10-18

Family

ID=47009529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2011/006988 Ceased WO2012141391A1 (ko) 2011-04-14 2011-09-22 포투랍두스 템페라타 ｍ１０２１（수탁번호:ｋｃｔｃ12006ｂｐ）동결건조 방법 및 동결 건조 분말.

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR101254104B1 (ko)
WO (1) WO2012141391A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101362211B1 (ko) * 2013-01-29 2014-02-17 구경본 포토랍두스 템페라타 템프라타 및 이의 추출물을 포함하는 항균·살충 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040067492A (ko) * 2003-01-23 2004-07-30 이진우 바실러스 스테아로서머필러스 ｄｌ-3 균주, 이를 포함하는미생물제제 및 이의 생산방법
KR20040104872A (ko) * 2003-06-04 2004-12-13 김용균 포토랍두스 템페라타 템페라타 ａｎｕ101
JP2005168424A (ja) * 2003-12-12 2005-06-30 National Institute For Agro-Environmental Science 微生物保存用分散媒及び微生物保存用容器

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0154496B1 (ko) * 1995-02-06 1998-10-15 김은영 액상 생체고분자 겔을 이용한 미생물 농약의 제조 방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040067492A (ko) * 2003-01-23 2004-07-30 이진우 바실러스 스테아로서머필러스 ｄｌ-3 균주, 이를 포함하는미생물제제 및 이의 생산방법
KR20040104872A (ko) * 2003-06-04 2004-12-13 김용균 포토랍두스 템페라타 템페라타 ａｎｕ101
JP2005168424A (ja) * 2003-12-12 2005-06-30 National Institute For Agro-Environmental Science 微生物保存用分散媒及び微生物保存用容器

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SEO, SAMYEOL ET AL.: "Comparative analysis of immunosuppressive metabolites synthesized by an entomopathogenic bacterium, Photorhabdus temperata ssp. temperata, to select economic bacterial culture media", KOR. J. APPL. ENTOMOL., vol. 49, no. 4, 2010, pages 409 - 416 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR101254104B1 (ko) 2013-04-12
KR20120117160A (ko) 2012-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12054704B2 (en) Bacteria and uses thereof
CN108018242B (zh) 一种粘质沙雷氏菌及其分离方法和应用
CN105861376B (zh) 一种粘质沙雷氏菌及其分离方法和应用
CN105802893B (zh) 一种昆虫病原线虫共生菌菌株及其应用
EP2079314B1 (en) Brevibacillus laterosporus strain compositions containing the same and method for the biological control of dipters
CN101481668A (zh) 杀棉叶螨苏云金芽孢杆菌悬浮剂、制备方法及应用
Suryadi et al. Evaluation of entomopathogenic Bacillus sphaericus isolated from Lombok beach area against mosquito larvae
Sharma et al. Diversity of entomopathogenic bacteria associated with the white grub, Brahmina coriacea
CN102907458B (zh) 生物灭蚊剂及其制备方法
CN101892170A (zh) 昆虫病原线虫共生菌及其应用
Santos et al. Entomopathogenic fungi: current status and prospects
WO2012141391A1 (ko) 포투랍두스 템페라타 ｍ１０２１（수탁번호:ｋｃｔｃ12006ｂｐ）동결건조 방법 및 동결 건조 분말.
Adesemoye et al. Bacteria-based artificial diets modulate larval development, survival and gut microbiota of two insect pests
KR101295026B1 (ko) 신규한 포토랍두스 템페라타 ｍ１０２１ 및 이를 이용한 해충의 방제방법
CA3130070A1 (en) Bee gut microbial formulation for use as a probiotic for improved bee health and pathogen resistance
CN118028150A (zh) 一株沙福芽孢杆菌及其在防治亚洲玉米螟幼虫中的应用
CN116555078B (zh) 一株有效降解氯氰菊酯的枯草芽孢杆菌及其应用
KR101288637B1 (ko) 곤충병원세균 유래 생물농약 조성물과 이를 이용한 방제 방법
KR101295023B1 (ko) 신규한 포토랍두스 템페라타 ｊ７ 및 이를 이용한 해충의 방제방법
KR101483479B1 (ko) 모기유충에 대한 살충효과를 갖는 포토랍두스 템페라타 템프라타 및 이를 이용한 모기유충 방제방법
CN110720470A (zh) 一种苏云金芽孢杆菌在防治根螨属昆虫中的应用
KR101295035B1 (ko) 신규한 포토랍두스 템페라타 ｊ５ 및 이를 이용한 해충의 방제방법
Gorashi et al. Characterization of Sudan strains of Bacillus thuringiensis pathogenic to the larvae of the house mosquito Culex quinquefasciatus
KR101295021B1 (ko) 신규한 포토랍두스 템페라타 ｊ３ 및 이를 이용한 해충의 방제방법
KR101295028B1 (ko) 신규한 포토랍두스 템페라타 ｊ６ 및 이를 이용한 해충의 방제방법

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11863622

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 11863622

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1