WO2012085381A1 - Nouvelles compositions d'inocula fongiques, leur procede de preparation et leur application a l'amelioration de la croissance des cultures - Google Patents

Nouvelles compositions d'inocula fongiques, leur procede de preparation et leur application a l'amelioration de la croissance des cultures Download PDF

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WO2012085381A1
WO2012085381A1 PCT/FR2011/052838 FR2011052838W WO2012085381A1 WO 2012085381 A1 WO2012085381 A1 WO 2012085381A1 FR 2011052838 W FR2011052838 W FR 2011052838W WO 2012085381 A1 WO2012085381 A1 WO 2012085381A1
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WO
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granules
mycorrhizal
phosphate
peat
fungus
Prior art date
Application number
PCT/FR2011/052838
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English (en)
Inventor
Robin Duponnois
Mohamed Hafidi
Yves PRIN
Yadir OUHDOUCH
Original Assignee
Institut De Recherche Pour Le Developpement (I.R.D.)
Universite Cadi Ayyad-Factulte Des Sciences Semlalia, Marrakech-Maroc
Centre De Cooperation Internationale En Recherche Agronomique Pour Le Developpement (Cirad)
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Publication date
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05B—PHOSPHATIC FERTILISERS
    • C05B17/00—Other phosphatic fertilisers, e.g. soft rock phosphates, bone meal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
    • A01G18/10—Mycorrhiza; Mycorrhizal associations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05C—NITROGENOUS FERTILISERS
    • C05C9/00—Fertilisers containing urea or urea compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G5/00—Fertilisers characterised by their form
    • C05G5/30—Layered or coated, e.g. dust-preventing coatings

Definitions

  • the present invention relates to novel fungal inocula compositions, process for their preparation and their application to the improvement of crop growth.
  • Mycorrhiza is a mutually beneficial association between a plant and a mycorrhizal fungus
  • this soil contained mycorrhizae, which are mixed organs located on the roots of plants, formed by the juxtaposition of two types of organisms: the superior plant and the underground mycelial filaments of the fungus.
  • the fungi will draw from the soil the mineral elements, especially the less mobile such as zinc, copper and phosphorus, essential for the development of the latter and they will provide the plant. In exchange, the plant gives the mushroom sugars and growth substances thus ensuring its survival.
  • Mycorrhizae play an important role in the assimilation of certain forms of nitrogen as well as in the absorption of soil water.
  • mycorrhizal techniques have been developed and that using mycorrhizal fungi alone is now based on the following steps: (i) isolation and purification of fungal strains, (ii) selection under controlled conditions of fungal strains that perform for a given parameter (for example: effect of the strain on the growth of the host plant) and (iii) multiplication of the strain in axenic conditions and production of fungal inocula.
  • mycorrhizal fungi There are two types of mycorrhizal fungi, the ectomycorrhizal fungi, which mainly concern forest species and mycorrhizal fungi with arbuscules, which concern herbaceous plant species.
  • this inoculum does not include phosphate.
  • compositions comprising a mycorrhizal inoculum embedded in a matrix and containing neither phosphate nor peat.
  • this composition involves the use of external phosphate to provide the plant with phosphorus (P) which is an essential nutrient for it, but which has two major drawbacks which are, on the one hand the very low solubility aqueous phosphate in nonacidic soil, and secondly a loss of phosphate efficiency due to the dispersion of the powder in the culture substrate.
  • P phosphorus
  • compositions comprising a mycorrhizal inoculum, inorganic phosphate and respectively peat or compost.
  • the documents EP 0 092 990, EP 0 485 229, WO 2009/009805 and US 2008/0064598 describe compositions comprising a mycorrhizal inoculum formulated in the form of granules or particles but devoid of coating in a matrix.
  • Another formulation includes an inoculum associated with inorganic phosphate.
  • This type of inoculum is for example described in Ouahmane et al. (Responses of Pinus halepensis growth, soil microbial catabolic functions and soil phosphate-solubilizing bacteria after rock phosphate amendment and ectomycorrhizal inoculation Plant Soil, DOI 10.1007 / sl 1 104-008-9882-z) which describe the effect of an ectomycorrhizal fungus (Pisolithus sp.) On the growth of pine (Pinus halepensis) plants with or without phosphate rock.
  • the mushroom ectomycorrhizal fungi association has a major disadvantage, which is the weak impact of the ectomycorrhizal fungus on its ability to alter inorganic phosphate.
  • One of the objects of the invention is therefore to provide a mycorrhizal fungus formulation in the form of granules embedded in a matrix allowing mycorrhizal fungi to alter the complex inorganic phosphates to release bioavailable P ions for the plant via cultural processes. respectful of the environment while avoiding the dispersion of phosphate in the soil.
  • Another object of the invention is to provide a process for preparing said granules.
  • the present invention relates to granules comprising inorganic phosphate, peat, at least one mycorrhizal inoculum, with the exception of nutrients or malt germ, said granules being coated in a matrix based on at least one polymerized hydrocolloid.
  • inorganic phosphate is meant any inorganic phosphate, such as rock phosphate (or natural phosphate), which can be found in different countries such as, for example, New Zealand, Peru, Egypt or Morocco without being limited to them, or lapouzolane, which will allow the release of phosphorus to the plant
  • the expression “embedded in a matrix” it is to be understood that the granules and their constituents are covered by the polymerized hydrocolloid and therefore remain in the matrix, thus making it possible to promote the capacity of the inoculum or fungus to solubilize the phosphate. inorganic when the granules are brought into contact with the plant, and thus make the phosphor ions accessible to the plant, by releasing them outside the granules so that the plant can use them.
  • fertilizers plant nutrients, including chemical, organic or biological fertilizers such as nitrogen nutrients, especially nutrients containing ammonium compounds, amines or animal proteins.
  • the phosphate or peat present in the granules are excluded from the definition of the nutrient term above.
  • the expression "with the exception of nutrients” means "with the exception of added nutrients”.
  • Said inorganic phosphate granules embedded in a matrix based on at least one polymerized hydrocolloid have the advantage of being stable in the matrix, which means that the granules and its constituents (phosphate, peat, mycorrhizal fungus, etc.) when kept cold, that is to say between 2 and 6 ° C, and are not in contact with the plant or an aqueous medium, do not degrade and can be kept for a few days to several months, up to 6 months.
  • the matrix represents the medium in which the constituents are immobilized and consists of hydrocolloids, especially a fixing agent of natural origin, plant or animal.
  • the role of the mycorrhizal symbiosis on the development of the host plant will be optimized by intimately combining the impact of the fungus on the plant directly (hormonal effect, mineral, etc.) but also indirectly by altering the inorganic phosphate thus making it possible to release phosphorus ions to the plant.
  • the inventors have, surprisingly, found that the coating of phosphate with peat, a mycorrhizal fungus and a hydrocolloid in the form of polymerized granules not only allowed the solubilization of the phosphate and the hormonal and mineral effect of the fungus but also exerted a synergistic action on the aerial and root biomass of plants compared to the above-ground and root biomass obtained with granules without alginate or without phosphate when the granules are put in contact with a plant.
  • the present invention relates to granules as defined above, consisting of inorganic phosphate, peat, at least one mycorrhizal inoculum, said granules being coated in a matrix based on at least one polymerized hydrocolloid.
  • the granules contain only peat, inorganic phosphate, inoculum and matrix with the exception of any other constituent.
  • the present invention relates to granules as defined above, in which the mycorrhizal inoculum comprises at least one ectomycorrhizal fungus, of the genus Hebeloma, and / or of the genus Scleroderma, and / or of the genus Laccaria ,
  • ectomycorrhizal fungus a fungus whose mycelium develops between the cells of the root cortex, but does not enter living cells, thus forming "the Hartig intercellular network”. It forms a fungal mantle around the root. (Smith, SE & Read, DJ (1997), Mycorrhizal symbiosis, 2 nd edition, UK, Academy Press.)
  • the fungus of the genus Hebeloma is chosen from the group consisting of: Hebeloma anthracophilum, Hebeloma cistophilum, Hebeloma crustuliniforme, Hebeloma fastibile, Hebeloma mesophaeum, Hebeloma pallidum, Hebeloma radicosum, Hebeloma sarcophyllum and Hebeloma sinapizans, in particular Hebeloma crustuliniforme.
  • the fungus of the genus Scleroderma is chosen from the group consisting of: Scleroderma dyctiosporum and Scleroderma verrucosum and preferentially Scleroderma verrucosum
  • the fungus of the genus Laccaria is selected from the group consisting of: Laccaria amethystea, Laccaria bicolor, Laccaria laccata,
  • Laccaria proxima Laccaria purpureo-badia and Laccaria tortilis, especially Laccaria bicolor.
  • the ectomycorrhizal fungus is used in spaces intended for forest crops.
  • Forest crops include Myrtaceae, Pinaceae, Abietaceae, Fagaceae, Tiliaceae, Ulmaceae and Salicaceae; this list is not limiting.
  • spaces intended for cultivation means here as well as throughout the present description, any type of container comprising elements suitable for culture such as pots, trays, jars, blister packs without being limited thereto as well. that any type of ground, piece of ground, field, greenhouse ....
  • the present invention relates to granules as defined above, wherein the mycorrhizal inoculum comprises at least one mycorrhizal fungus with arbuscules of the genus Glomus.
  • the arbuscular mycorrhizal fungus is a fungus whose mycelium penetrates the root cells and develops arbuscules or vesicles when associated with plant roots. It does not form a fungal mantle around the root (Smith, SE & Read, DJ (1997), Mycorrhizal symbiosis, 2 nd edition, UK, Academy Press.)
  • the arbuscular mycorrhizal fungus of the genus Glomus is selected from the group consisting of: Glomus mosseae, Glomus fasciculatus, Glomus aggregatum and Glomus intraradices, in particular Glomus intraradices.
  • the arbuscular mycorrhizal fungus is used in spaces intended for cultivation, in particular cereals, fodder, vegetable, fruit or horticultural crops and preferentially market garden, fruit or horticultural crops.
  • Cereal crops include, but are not limited to, barley, oats and wheat.
  • Forage crops include legumes such as clover, alfalfa and bird's-foot trefoil, and grasses, such as the meadow filly, orchardgrass, this list is not exhaustive.
  • Vegetable crops include tomatoes, aubergines, potatoes, carrots, lettuce, cucumber, melon, cabbage, cauliflower ...
  • the fruit crops include apples, pears, peaches, grapes, cherries, plums, citrus fruits, this list not being exhaustive.
  • the horticultural crops include flowers, ornamental plants, this list is not exhaustive.
  • the present invention relates to granules as defined above, in which the mycorrhizal inoculum comprises at least one ectomycorrhizal fungus of the genus Hebeloma, and / or of the genus Scleroderma, and / or of the genus Laccaria, and at least one mycorrhizal arbuscular fungus of the genus Glomus.
  • the fungi of the genus Hebeloma, the genus Scleroderma, the genus Laccaria and the genus Glomus are as defined above.
  • This association of ectomycorrhizal and mycorrhizal fungi with arbuscules is more particularly advantageous for fast-growing woody species of the Casuarina, Allocasuarina, Eucalyptus and Acacia genera of Australian origin.
  • the present invention relates to granules as defined above, wherein the weight of mycorrhizal inoculum is from about 0.05% (w / w) to 0.2% (w / w). p) in particular 0.11% (w / w) relative to the total weight of the granules.
  • the present invention relates to granules as defined above, wherein the weight of peat is from about 2.2% (w / w) to about 3.3% (w / w). ) in particular 2.8% (w / w) relative to the total weight of the granules.
  • the present invention relates to granules as defined above, wherein the weight of inorganic phosphate ranges from about 36.7% (w / w) to about 37.8% (w / w). p) in particular 37% (w / w) relative to the total weight of the granules.
  • the present invention relates to granules as defined above, wherein the inorganic phosphate is rock phosphate or pozzolan.
  • Pozzolan is a volcanic rock very rich in phosphorus, completely insoluble in water and can only be solubilized by a mycorrhizal fungus.
  • the present invention relates to granules as defined above, in which the inorganic phosphate is calibrated to a diameter of about 2 mm to about 7 mm, in particular 5 mm.
  • Too small granules would not offer a minimum capacity for fungal mycelium delivery but also adequate protection of the fungus against environmental environmental variations (abiotic stress).
  • the present invention relates to granules as defined above, wherein the weight of polymerized hydrocolloid is from about 1.7% (w / w) to about 2.8% (w / w). / p), in particular 2.2% (w / w) relative to the total weight of the granules.
  • the present invention relates to granules as defined above, in which said matrix is based on chitosan, carrageenans, carboxymethylcellulose, alginates and in particular sodium or calcium alginate. .
  • Calcium alginate can be obtained from sodium alginate by ion exchange, in particular by reaction of sodium alginate with a divalent cation such as calcium chloride, calcium acetate, calcium carbonate, calcium phosphate, preferably calcium chloride.
  • a divalent cation such as calcium chloride, calcium acetate, calcium carbonate, calcium phosphate, preferably calcium chloride.
  • Chitosan is produced by deacetylation of chitin present in the exoskeleton of insects and other arthropods (crustaceans, arachnids, etc.). It is an amino polysaccharide consisting of N-acetyl-D-glucose-2-amine groups linked together by a ⁇ - (1, 4) type bond.
  • Carrageenans are linear polysaccharides made up of more or less substituted galactose molecules.
  • the chain consists of subunits called carrabioses comprising two galactoses linked by a ⁇ - (1,4) bond. These carrabioses are linked together in the chain by ⁇ - (1,3) bonds.
  • Carboxymethylcellulose is a polymer derived from natural cellulose formed by reaction of cellulose with a base and chloroacetic acid. It is based on a ⁇ - (1, 4) -D-glucopyranose structure.
  • Alginates are polymers of alginic acid (consisting of mannuronic acid and guluronic acid) obtained from brown algae (Laminariales, Fucales). Sodium alginate is extracted from the algae with soda and then dried to obtain a white powder, with a molecular weight ranging from 32,000 to 200,000 Da.
  • the present invention relates to granules as defined above, in which the polymerized hydrocolloid is calcium alginate.
  • the invention relates to the use of granules comprising in particular at least one ectomycorrhizal fungus, as defined above, in spaces intended for forest crops.
  • the invention relates to the use of granules comprising in particular at least one arbuscular mycorrhizal fungus, as defined above, in spaces intended for crops, in particular cereals, fodder crops, vegetable gardens, fruit or horticultural crops and preferentially market garden, fruit or horticultural
  • the invention relates to the use of granules comprising in particular at least one ectomycorrhizal fungus, or an arbuscular mycorrhizal fungus, in which the proportion of granules per 100 ml of substrate containing a unitary unit of culture is from about 0.05% (w / v) to about 0.5% (w / v), especially 0.1% (w / v).
  • Another advantage of the invention consists in the optimization of the conditions of mycorhization and phosphate solubilization allowing the use of very small amount of granules.
  • the containers used for the production of forest seedlings have a volume of 0.5 1 to 1 liter.
  • the weight of granules will be about 1 g per pot or 0.2 g per 100 ml of substrate
  • unitary unit of culture here designates a seed, seed, grain, fruit, seed, kernel or plant without being limited thereto making it possible to obtain a forest, grain, fodder, vegetable, fruit or horticultural crop. .
  • the invention relates to the use of granules comprising in particular at least one ectomycorrhizal fungus, and at least one arbuscular mycorrhizal fungus, wherein the proportion of granules per 100 ml of substrate containing a unitary unit of culture is from about 0.05% (w / w) to about 0.5% (w / w), particularly 0.1% (w / w).
  • the containers used are m me as above defined.
  • the invention relates to a process for the preparation of granules as defined above, comprising a step of polymerization of inorganic phosphate granules impregnated with peat, at least one mycorrhizal inoculum and at least one hydrocolloid. with an aqueous solution of a divalent cation selected from calcium chloride, zinc acetate, calcium acetate, calcium carbonate, calcium phosphate, aluminum chloride or dialdehydes.
  • hydrocolloid The contact of the hydrocolloid with the divalent cation causes the polymerization of said hydrocolloid which then immobilizes the various constituents present (mycorrhizal inoculum, peat) coated on the phosphorus granules.
  • the invention relates to a process for preparing granules, as defined above, comprising the following steps:
  • step c) immersing the washed granules obtained in step c) in the immersion solution to obtain granules impregnated with hydrocolloid, peat and mycelium,
  • the multiplication and the harvest of the mycelium are carried out according to Duponnois & Garbaye (1991); DUPONNOIS, R. & GARBAYE, J. (1991). Douglas fir-Laccaria laccata ectomycorrhizal symbiosis. Annals of Forestry Science, 48: 239-251.
  • the immersion solution is an aqueous solution.
  • the mixture of the various constituents is carried out at ambient temperature, ie from 20 to
  • the hydrocolloid is chosen from chitosan, carrageenans, carboxymethylcellulose, alginates and in particular sodium or calcium alginate.
  • the hydrocolloid is a sodium alginate.
  • the hydrocolloid is present from 15 g to 25 g per liter of immersion solution, in particular 20 g. Below 15 g, the amount of hydrocolloid is insufficient to obtain a correct polymerization.
  • the peat must first be crushed and sterilized. Grinding allows homogenization of the immersion solution of the granules. Sterilization eliminates microbial agents that may compete with the fungus.
  • the grinding can be carried out by any apparatus well known to those skilled in the art.
  • the proportion of peat is from 20 to 30 g / l of immersion solution, in particular 25 g / l.
  • the immersion of the granules in the immersion solution is carried out at ambient temperature for 60 minutes to 120 minutes, in particular 90 minutes.
  • the immersion step has the effect of impregnating, that is to say, adsorbing the hydrocolloid, the inoculum and peat on the phosphate granules.
  • granules impregnated with hydrocolloid, inoculum and peat are introduced into an aqueous divalent cation solution at ambient temperature for 120 minutes to 180 minutes, in particular 150 minutes.
  • the divalent cation is chosen from calcium chloride, zinc acetate, calcium acetate, calcium carbonate, calcium phosphate, aluminum chloride or dialdehydes and preferentially calcium chloride.
  • This step has the effect of polymerizing the hydro colloid on the phosphate granules thus immobilizing the peat and inoculum coated on the phosphate granules.
  • the granules are recovered and can be preserved for a few days to several months, up to six months, when these are kept cold, that is to say between 2 and 6 ° C, and preferably 4 ° C.
  • the invention relates to a process for preparing granules, as defined above, in which the phosphate granules are calibrated to a diameter of about 2 to about 7 mm, in particular about 5 mm. .
  • the invention relates to a process for preparing granules, as defined above, in which the hydrocolloid is sodium alginate at a concentration in the immersion solution of about 10 to 30 g / l, in particular 20 g / l, the peat in the immersion solution is at a concentration of about 20 to 30 g / l, in particular 25 g / l, and the aqueous solution of divalent cation in the immersion solution is calcium chloride at a concentration of from about 50 to about 150 g / l, especially 100 g / l.
  • the present invention relates to a method of fertilizing forest species such as Pinus spp., Quercus spp., Isoberlinia glaucia, comprising contacting forest plants with polymerized granules comprising at least one ectomycorrhizal inoculum, such as as defined above, per unit unit of culture.
  • unitary crop element here designates a seed, seed, grain, fruit, seed, kernel or plant without being limited thereto making it possible to obtain a forest crop.
  • the unitary element of culture corresponds to a seed or a plant.
  • the present invention relates to a method for fertilizing forest species as defined above, comprising the following steps:
  • granules comprising an ectomycorrhizal inoculum, as defined above, b. contacting forest seedlings with granules at a dose of about 1 g of granules to about 5 g of granules, in particular about 1 g of granules, per unit culture element, in particular seed or plant.
  • the ectomycorrhizal inoculum consists of at least one ectomycorrhizal fungus of the genus Hebeloma, and / or of the genus Scleroderma, and / or of the genus Laccaria, in particular the fungus of the genus Hebeloma is chosen from Hebeloma anthracophilum, Hebeloma cistophilum, Hebeloma crustuliniforme, Hebeloma fastibile, Hebeloma mesophaeum, Hebeloma pallidum, Hebeloma radicosum, Hebeloma sarcophyllum and Hebeloma sinapizans, in particular Hebeloma crustuliniforme, the fungus of the genus Scleroderma is selected from the group consisting of: Scleroderma dyctiosporum and Scleroderma verrucosum and preferentially Scleroderma verrucosum
  • the present invention relates to a method for fertilizing cereal, forage, vegetable, fruit or horticultural species, comprising contacting cereal, forage, vegetable, fruit or horticultural plants with the polymerized granules comprising at least one Mycorrhizal inoculum with arbuscules, as defined above, per unit culture element.
  • unitary element of culture here designates a seed, seed, grain, fruit, seed, kernel or a plant without being limited thereto making it possible to obtain a cereal, forage, market garden, fruit or horticultural crop.
  • the unitary element of culture corresponds to a seed or a plant.
  • the present invention relates to a method for fertilizing cereal, forage, vegetable, fruit or horticultural species, as defined above, comprising the following steps:
  • the arbuscular mycorrhizal inoculum consists of at least one mycorrhizal arbuscular fungus of the genus Glomus, in particular the arbuscular mycorrhizal fungus of the genus Glomus is selected from the group consisting of: Glomus mosseae, Glomus fasciculatus, Glomus aggregatum and Glomus intraradices, especially Glomus intraradices.
  • the present invention relates to a method for fertilizing forest species such as Pinus spp., Quercus spp., Isoberlinia glaucia, or cereal, forage, market garden, fruit or horticultural species, comprising contacting forest seedlings or grain, fodder, vegetable, fruit or horticultural plants with the polymerized granules comprising at least one ectomycorrhizal inoculum and at least one arbuscular mycorrhizal inoculum, as defined above, per unit culture element.
  • the contacting is as defined above for forest plants and grain plants, fodder, market gardeners, fruit or horticultural plants.
  • unitary crop element here designates a seed, seed, grain, fruit, seed, kernel or plant without being limited thereto making it possible to obtain a forest crop or a cereal, fodder, market garden or fruit crop. or horticultural.
  • the unitary element of culture corresponds to a seed or a plant.
  • the present invention relates to a method for fertilizing forest, cereal, forage, vegetable, fruit or horticultural species, as defined above, comprising the following steps: at. preparation of granules comprising at least one ectomycorrhizal inoculum and at least one arbuscular mycorrhizal inoculum, as defined above b. contacting forest seedlings with granules at a dose of about 1 g of granules to about 5 g of granules, in particular about 1 g of granules, per unit culture element, in particular seed or plant
  • the ectomycorrhizal inoculum consists of at least one ectomycorrhizal fungus of the genus Hebeloma, and / or of the genus Scleroderma, and / or of the genus Laccaria, and at least one mycorrhizal fungus with arbuscules of the genus Glomus,
  • the fungus of the genus Hebeloma is chosen from Hebeloma anthracophilum, Hebeloma cistophilum, Hebeloma crustuliniforme, Hebeloma fastibile, Hebeloma mesophaeum, Hebeloma pallidum, Hebeloma radicosum, Hebeloma sarcophyllum and Hebeloma sinapizans, in particular Hebeloma crustuliniforme
  • the fungus of the genus Scleroderma is chosen from group consisting of: Scleroderma dyctiosporum and Scleroderma verrucosum and preferentially Scleroderma verrucosum and the fungus of the genus Laccaria is selected from the group consisting of: Laccaria amethystea, Laccaria bicolor, Laccaria laccata, Laccaria proxima, Laccaria purpureo- badia and Laccaria tortilis
  • Example 1 General procedure for preparing a mycorrhizal inoculum (ectomycorrhizal or mycorrhizal arbuscules or ectomycorrhizal and mycorrhizal arbuscules)
  • EXAMPLE 2 Preparation of granules comprising a mycorrhizal inoculum (ectomycorrhizal or mycorrhizal with arbuscules or ectomycorrhizal and mycorrhizal with arbuscules)
  • Step 1 Preparation of the mycorrhizal inoculum according to Example 1
  • Step 2 Harvest mycelium by filtration, wash the mycelium with running water and then grind.
  • Step 3 Calibration of the natural phosphate granules (diameter 5 mm) and washing the granules under running water
  • Step 4 Preparation of the immersion solution for the granules composed of: sodium alginate (20 ⁇ l -1 ), ground peat previously sterilized (50 ⁇ l 1 ) and fungal mycelium (1 g dry weight per liter of solution)
  • Step 5 Immerse the calibrated granules (900 g) in the immersion solution at room temperature (20-25 ° C) for 90 min.
  • Step 6 Immersion of the granules of step 5 in a solution of calcium chloride (CaCl 2 , 100 gl -1 ) for 150 min at room temperature (20-25 ° C.)
  • Step 7 Elimination of traces of CaCl 2 by washing with running water
  • Step 8 Preservation of the granules at 4 ° C.
  • Calcium alginate balls made with a physical support consisting of natural phosphate granules according to Example 2 (10 beads per pot)
  • Table I shows that after 4 months of cultivation: pine cultured with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and peat (2nd column treatment) or with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and calcium alginate (3rd column treatment) developed aerial and root biomass significantly higher than that observed with the witness; there is no significant difference between the culture with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and peat (2 nd column treatments) compared to an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and calcium alginate (3rd column treatments); pine cultured with the granules of the invention (treatments 4 th column) developed aerial and root biomass significantly higher than that observed with culture pins with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and peat (2nd column treatment) compared with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and calcium alginate (3rd column treatment), showing
  • pines grown with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and peat (3 rd column treatments) or with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and calcium alginate (5 th column treatments) developed a significantly higher aerial and root biomass than that observed with the control or the natural phosphate; there is no significant difference between culture with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and peat (3 rd column treatments) compared to an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and calcium alginate (5 th column treatments);
  • pine cultured with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum, peat and natural phosphate (4 th treatment column) developed aerial and root biomass significantly higher than that observed pines cultured with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and peat ( 3rd column treatment) or with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum and calcium alginate (5 th column treatment);
  • the pines grown with the granules of the invention (6 th column treatments) developed an above-ground biomass and root biomass significantly higher than that observed with the cultivation of pines grown with an ectomycorrhizal fungus Scleroderma verrucosum, peat and phosphate rock ( 4 th column treatments), showing the synergy showing the synergy between the various constituents of the invention thus demonstrating not only the intrinsic action of the fungus on the development of the plant but also its action on the dissolution of phosphate which is otherwise stimulated by coating on the pellets compared to the uncoated granules (treatments 4 th column) which avoids the dispersion of phosphate.

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Abstract

1 NOUVELLES COMPOSITIONSDINOCULA FONGIQUES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEUR APPLICATION A LAMELIORATION DE LA CROISSANCE DES CULTURES 5 ABREGE La prsente invention concerne de nouvelles compositions dinocula fongiques, leur procd de prparation et leur application lamlioration de la croissance des cultures.10 (pas de dessins)

Description

NOUVELLES COMPOSITIONS D'INOCULA FONGIQUES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEUR APPLICATION A L'AMELIORATION DE LA
CROISSANCE DES CULTURES
La présente invention concerne de nouvelles compositions d' inocula fongiques, leur procédé de préparation et leur application à l'amélioration de la croissance des cultures.
La mycorhization est une association à bénéfice mutuel entre un végétal et un champignon mycorhizien
L'importance des champignons mycorhiziens dans les plantations forestières a été mise en évidence pour la première fois en 1910 dans des essais d'introduction de pins exotiques au Kenya. Alors que ces plantations se soldaient généralement par des échecs spectaculaires (plants chlorotiques, mortalité très élevée), sur les conseils du " Royal Botanic Gardens ", du sol de vieilles plantations de pins fut importé d'Afrique du Sud afin d'être utilisé comme substrat de culture en pépinière.
En effet, ce sol contenait des mycorhizes qui sont des organes mixtes situés sur les racines des végétaux, formés par la juxtaposition de deux types d'organismes : la plante supérieure et les filaments mycéliens souterrains du champignon. Les champignons vont puiser dans le sol les éléments minéraux, et plus particulièrement les moins mobiles tels que le zinc, le cuivre et le phosphore, indispensables au développement de celle-ci et qu'ils vont procurer à la plante. En échange, la plante donne au champignon des sucres et des substances de croissance assurant ainsi sa survie. Les mycorhizes jouent un rôle important dans l'assimilation de certaines formes d'azote ainsi que dans l'absorption de l'eau du sol.
Cette technique employant un sol riche en propagules fongiques mycorhiziennes fut rapidement divulguée avec succès dans d'autres pays d'Afrique comme la Tanzanie, Ouganda, Malawi, etc.
Depuis, plusieurs techniques de mycorhization ont été développées et celle utilisant des champignons mycorhiziens seuls repose dorénavant sur les étapes suivantes : (i) isolement et purification de souches fongiques, (ii) sélection, en conditions contrôlées de souches fongiques performantes pour un paramètre donné (par exemple : effet de la souche sur la croissance de la plante hôte) et (iii) multiplication de la souche en conditions axéniques et production d'inocula fongiques. On distingue deux types de champignons mycorhiziens, les champignons ectomycorhiziens qui concerne essentiellement les essences forestières et les champignons mycorhiziens à arbuscules qui concernent les espèces végétales herbacées.
En ce qui concerne les champignons ectomycorhiziens, plusieurs formulations d'inoculum ont été testées et ont montré des effets spectaculaires en pépinière.
Ainsi un inoculum de type billes d'alginate de calcium est décrit dans le brevet JP 3 091 855 B2 qui concerne un procédé de préparation de mycorhizes de champignon mycorhizien par développement puis prélèvement de racines de pin rouge japonais, additionné à un mélange de mycélium, tel que Trichola matsutake Sing. avec de l'alginate de sodium, puis addition d'une solution de chlorure de calcium pour polymériser le mélange. Les racines recouvertes sont ensuite mises en culture pour former les mycorhizes du champignon mycorhizien.
Cependant, cet inoculum ne comprend pas de phosphate.
Les documents US 5,021 ,350, US 5,096,481 et CN 2010 1212881 décrivent des compositions comprenant un inoculum mycorhizien enrobé dans une matrice et ne contiennent ni phosphate, ni tourbe.
Par conséquent, cette composition implique l'emploi de phosphate extérieur pour apporter à la plante le phosphore (P) qui est un élément nutritif essentiel pour celle-ci, mais qui présente deux inconvénients majeurs qui sont, d'une part la très faible solubilité aqueuse du phosphate en sol non acide, et d'autre part une perte d'efficacité du phosphate du fait de la dispersion de la poudre dans le substrat de culture.
Pour réduire les déficiences en phosphore et assurer une bonne productivité des plantes, de grandes quantités de fertilisants à base de phosphore sous forme soluble sont employées. Cependant, jusqu'à 80% de l'amendement fertilisant en phosphore est perdu car il est facilement précipité en formes insolubles (CaHP04, Ca3(P04)2, FePÛ4 et AIPO4) et devient non disponible pour la plante.
La demande internationale WO 2007/066136 et la demande JP1993-163583 décrivent des compostions comprenant un inoculum mycorhizien, du phosphate inorganique et respectivement de la tourbe ou du compost. Les documents EP 0 092 990, EP 0 485 229, WO 2009/009805 et US 2008/0064598 décrivent des compositions comprenant un inoculum mycorhizien formulé sous forme de granules ou particules mais dépourvus d'enrobage dans une matrice.
Une autre formulation comprend un inoculum associé à du phosphate inorganique. Ce type d' inoculum est par exemple décrit dans Ouahmane et al. (Responses of Pinus halepensis growth, soil microbial catabolic fonctions and phosphate-solubilizing bacteria after rock phosphate amendment and ectomycorrhizal inoculation ; Plant soil, DOI 10.1007/sl 1 104-008-9882-z) qui décrivent l'effet d'un champignon ectomycorhizien (Pisolithus sp.) sur la croissance de plants de pin (Pinus halepensis) en présence ou non de phosphate naturel. Les résultats montrent que lorsque que ledit champignon ectomycorhizien est utilisé en présence de phosphate, une synergie est alors observée sur la croissance de la biomasse aérienne et/ou racinaire comparée à la croissance aérienne et/ou racinaire observée avec le phosphate seul ou le champignon seul.
Cependant, l'association champignon ectomycorhizien phosphate présente un inconvénient principal qui est la faiblesse de l'impact du champignon ectomycorhizien concernant sa capacité d'altération du phosphate inorganique.
Par conséquent, il existe un besoin de mettre à disposition des formulations non polluantes permettant de fournir aux plantes le phosphore nécessaire à leur croissance.
L'un des objets de l'invention est donc de fournir une formulation de champignon mycorhizien sous forme de granules enrobés dans une matrice permettant aux champignons mycorhiziens d'altérer les phosphates inorganiques complexes pour libérer des ions P biodisponibles pour la plante via des processus culturaux respectueux de l'environnement tout en évitant la dispersion du phosphate dans le sol.
Un autre objet de l'invention est de fournir un procédé de préparation desdits granules.
La présente invention concerne des granules comprenant du phosphate inorganique, de la tourbe, au moins un inoculum mycorhizien, à l'exception de nutriments ou de germe de malt, lesdits granules étant enrobés dans une matrice à base d'au moins un hydrocolloïde polymérisé.
Par le terme « granules », il faut comprendre une petite particule ou un grain dont la taille peut être comprise d'environ 2 à environ 10 mm. Par l'expression « phosphate inorganique », il faut comprendre tout phosphate inorganique, tel qu'un phosphate de roche (ou phosphate naturel) qui peut être trouvé dans différents pays tels que par exemple la nouvelle Zélande, le Pérou, l'Egypte ou le Maroc sans être limité à ceux-ci, ou de lapouzzolane, et qui permettra la libération de phosphore à la plante
Par l'expression « enrobé dans une matrice », il faut comprendre que les granules et ses constituants sont recouverts par l 'hydrocolloïde polymérisé et restent donc dans la matrice, permettant ainsi de favoriser la capacité de l'inoculum ou champignon à solubiliser le phosphate inorganique lorsque les granules sont mis en contact avec la plante, et à rendre ainsi les ions phosphores accessibles de manière accrue à la plante, en les libérant à l'extérieur des granules pour que la plante puisse les utiliser.
Par le terme « nutriments », il faut comprendre les fertilisants pour plantes, notamment des fertilisants chimiques, organiques ou biologiques tels que par exemple des nutriments azotés, en particulier des nutriments contenant des composés ammonium, des aminés ou des protéines animales.
Le phosphate ou la tourbe présents dans les granules sont exclus de la définition du terme nutriment ci-dessus. L'expression « à l'exception de nutriment » signifie donc « à l'exception de nutriments ajoutés ».
Lesdits granules de phosphate inorganique enrobés dans une matrice à base d'au moins un hydrocolloïde polymérisé possèdent l'avantage d'être stables dans la matrice, ce qui signifie que les granules et ses constituants (phosphate, tourbe, champignon mycorhizien...) lorsqu'ils sont conservés à froid, c'est-à-dire entre 2 et 6°C, et ne sont pas en contact avec la plante ou un milieu aqueux, ne se dégradent pas et peuvent être conservés ainsi de quelques jours à plusieurs mois, jusqu'à 6 mois.
La matrice représente le milieu dans lequel les constituants sont immobilisés et est constituée d'hydrocolloïdes, notamment un agent de fixation d'origine naturelle, végétale ou animale.
Lorsque les granules sont mis en contact avec une plante, le rôle de la symbiose mycorhizienne sur le développement de la plante hôte sera optimisé en combinant intimement l'impact du champignon sur la plante directement (effet hormonal, minéral, etc) mais également indirectement par altération du phosphate inorganique permettant ainsi de libérer des ion phosphores à la plante.
Les inventeurs ont, de façon surprenante, trouvé que l'enrobage de phosphate avec de la tourbe, un champignon mycorhizien et un hydrocolloïde sous forme de granules polymérisés permettait non seulement la solubilisation du phosphate et l'effet hormonal et minéral du champignon mais encore exerçait une action synergique sur la biomasse aérienne et racinaire des plantes comparée à la biomasse aérienne et racinaire obtenue avec des granules sans alginate ou sans phosphate lorsque les granules sont mises en contact avec une plante.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, constitués de phosphate inorganique, de tourbe, d'au moins un inoculum mycorhizien, lesdits granules étant enrobés dans une matrice à base d'au moins un hydrocolloïde polymérisé.
Dans ce mode de réalisation, les granules ne contiennent que la tourbe, le phosphate inorganique, l'inoculum et la matrice à l'exception de tout autre constituant.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels l'inoculum mycorhizien comprend au moins un champignon ectomycorhizien, du genre Hebeloma, et/ou du genre Scleroderma, et/ou du genre Laccaria,
On entend par champignon ectomycorhizien, un champignon dont le mycélium se développe entre les cellules du cortex racinaires, mais ne pénètre pas dans les cellules vivantes, formant ainsi « le réseau intercellulaire de Hartig ». Il forme un manteau fongique autour de la racine. (Smith, S.E. & Read, D.J. (1997). Mycorrhizal symbiosis. 2nd édition, UK, Académie Press.)
Dans un mode de réalisation avantageux, le champignon du genre Hebeloma est choisi parmi le groupe constitué de: Hebeloma anthracophilum, Hebeloma cistophilum, Hebeloma crustuliniforme, Hebeloma fastibile, Hebeloma mesophaeum, Hebeloma pallidum, Hebeloma radicosum, Hebeloma sarcophyllum et Hebeloma sinapizans, en particulier Hebeloma crustuliniforme. Dans un mode de réalisation avantageux, le champignon du genre Scleroderma est choisi parmi le groupe constitué de: Scleroderma dyctiosporum et Scleroderma verrucosum et préférentiellement Scleroderma verrucosum
Dans un mode de réalisation avantageux, le champignon du genre Laccaria est choisi parmi le groupe constitué de: Laccaria amethystea, Laccaria bicolor, Laccaria laccata,
Laccaria proxima, Laccaria purpureo-badia et Laccaria tortilis, en particulier Laccaria bicolor.
Dans un mode de réalisation préféré du procédé décrit ci-dessus, le champignon ectomycorhizien est utilisé dans des espaces destinés aux cultures forestières.
Les cultures forestières comprennent notamment les myrtacées, les pinacées, les abiétacées, les fagacées, les tiliacées, les ulmacées les salicacées; cette liste n'étant pas limitative.
Le terme « espaces destinés aux cultures » désigne ici ainsi que tout au long de la présente description, tout type de contenant comprenant des éléments appropriés à la culture tels que des pots, bacs, bocaux, plaques alvéolées sans être limité à ceux-ci ainsi que tout type de terrain, pièce de terre, champ, serre....
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans laquelle l'inoculum mycorhizien comprend au moins un champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus.
On entend par champignon mycorhizien à arbuscules, un champignon, dont le mycélium pénètre les cellules racinaires et développe des arbuscules ou des vésicules, lorsqu'il est associé à des racines de plantes. Il ne forme pas de manteau fongique autour de la racine.(Smith, S.E. & Read, DJ. (1997). Mycorrhizal symbiosis. 2nd édition, UK, Académie Press.)
Selon un mode de réalisation avantageux de la présente invention, le champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus, est choisi parmi le groupe constitué de: Glomus mosseae, Glomus fasciculatus, Glomus aggregatum et Glomus intraradices, en particulier Glomus intraradices.
Selon encore un autre mode de réalisation du procédé ci-dessus, le champignon mycorhizien à arbuscules est utilisé dans des espaces destinés aux cultures, notamment céréalières, fourragères, maraîchères, fruitières ou horticoles et préférentiellement maraîchères, fruitières ou horticoles.
Les cultures céréalières comprennent notamment l'orge, l'avoine et le blé, cette liste n'étant pas limitative.
Par culture fourragère il faut comprendre les légumineuses telles que le trèfle, la luzerne et le lotier corniculé, et des graminées, comme la fiéole des prés, le dactyle pelotonné, cette liste n'étant pas limitative.
Les cultures maraîchères comprennent notamment les tomates, les aubergines, les pommes de terre, les carottes, la laitue, le concombre, le melon, le chou, le chou-fleur...
Les cultures fruitières comprennent notamment des pommes, poires, pêches, raisin, cerises, prunes, agrumes, cette liste n'étant pas limitative.
Les cultures horticoles comprennent notamment les fleurs, les plantes ornementales, cette liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans laquelle l'inoculum mycorhizien comprend au moins un champignon ectomycorhizien du genre Hebeloma, et/ou du genre Scleroderma, et/ou du genre Laccaria, et au moins un champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus.
Dans un mode de réalisation avantageux, les champignons du genre Hebeloma, du genre Scleroderma, du genre Laccaria et du genre Glomus sont tels que définis ci-dessus.
Cette association de champignon ectomycorhizien et mycorhizien à arbuscules est plus particulièrement avantageuse pour les essences ligneuses à croissance rapide des genres Casuarina, Allocasuarina, Eucalyptus et Acacia d'origine australienne.
Ces espèces forestières sont fréquemment utilisées dans les programmes de reboisement en milieu tropical humide et sec et l'association des deux types de champignons mycorhiziens permet d'obtenir des gains de croissance par rapport à ceux enregistrés quand un type seulement de champignon est inoculé.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels le poids d'inoculum mycorhizien est compris d'environ 0,05% (p/p) à 0,2% (p/p) en particulier 0,11% (p/p) par rapport au poids total des granules.
Les pourcentages sont exprimés en poids sec d'inoculum par rapport au poids des granules. Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels le poids de tourbe est compris d'environ 2,2% (p/p) à environ 3,3% (p/p) en particulier 2,8% (p/p) par rapport au poids total des granules.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels le poids de phosphate inorganique est compris d'environ 36,7% (p/p) à environ 37,8% (p/p) en particulier 37% (p/p) par rapport au poids total des granules.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels le phosphate inorganique est du phosphate de roche ou de la pouzzolane.
La pouzzolane est une roche volcanique très riche en phosphore, complètement insoluble dans l'eau et qui ne peut être solubilisée que par un champignon mycorhizien.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels le phosphate inorganique est calibré à un diamètre d'environ 2 mm à environ 7 mm, en particulier 5 mm.
Le calibrage du phosphate permet d'homogénéiser l'apport de granules dans le sol. Des granules trop gros (plus de 7 mm) ne permettraient pas d'obtenir un contact rapide entre le symbiote et la plante (mort du mycélium).
Des granules trop petits (moins de 2 mm) n'offriraient pas une capacité minimale d'apport de mycélium fongique mais également une protection adéquate du champignon contre les variations environnementales du milieu (stress abiotiques).
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels le poids d'hydrocolloïde polymérisé est compris d'environ l ,7%(p/p) à environ 2,8%(p/p) , en particulier 2,2%(p/p) par rapport au poids total des granules.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels ladite matrice est à base de chitosane, de carraghénanes, de carboxyméthylcellulose, d'alginates et en particulier d'alginate de sodium ou de calcium.
L'alginate de calcium peut être obtenu à partir d'alginate de sodium par échange d'ion, notamment par réaction de l'alginate de sodium avec un cation divalent tel que le chlorure de calcium, l'acétate de calcium, le carbonate de calcium, le phosphate de calcium, de préférence le chlorure de calcium.
Le chitosane est produit par désacétylation de la chitine présent dans l'exosquelette des insectes et autres arthropodes (crustacés, arachnides, etc.). C'est un polysaccharide aminé constitué de groupes N-acétyl-D-glucose-2-amine reliés entre eux par une liaison du type β-(1 ,4).
Les carraghénanes sont des polysaccharides linéaires constitués de molécules de galactose plus ou moins substituée. La chaîne est constituée de sous unités appelées carrabioses comprenant deux galactoses liés par une liaison β-(1,4). Ces carrabioses sont liés entre eux dans la chaîne par des liaisons a-(l ,3).
La carboxyméthylcellulose est un polymère dérivé de la cellulose naturelle formé par réaction de la cellulose avec une base et de l'acide chloroacétique. Il est basé sur une structure β-(1 ,4)-D-glucopyranose.
Les alginates sont des polymères d'acide alginique (constitué d'acide mannuronique et d'acide guluronique) obtenus à partir d'algues brunes (Laminariales, Fucales). L'alginate de sodium est extrait des algues avec de la soude puis séché pour obtenir une poudre blanche, d'un poids moléculaire allant de 32 000 à 200 000 Da.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne des granules tels que définis ci-dessus, dans lesquels l'hydrocolloïde polymérisé est de l'alginate de calcium.
Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation de granules comprenant notamment au moins un champignon ectomycorhizien, tels que définis ci-dessus, dans des espaces destinés aux cultures forestières.
Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation de granules comprenant notamment au moins un champignon mycorhizien à arbuscules, tels que définis ci-dessus, dans des espaces destinés aux cultures, notamment céréalières, fourragères, maraîchères, fruitières ou horticoles et préférentiellement maraîchères, fruitières ou horticoles
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne l'utilisation de granules comprenant notamment au moins un champignon ectomycorhizien, ou un champignon mycorhizien à arbuscules, dans laquelle la proportion de granule pour 100 ml de substrat contenant un élément unitaire de culture est comprise d'environ 0,05 % (p/v) à environ 0,5 % (p/v) en particulier 0,1 % (p/v).
Un autre avantage de l'invention consiste en l'optimisation des conditions de mycorhization et de solubilisation du phosphate permettant l'emploi de très faible quantité de granules.
Les containers utilisés pour la production de plants forestiers présentent un volume de 0,5 1 à 1 litre. Pour un container de 0,5 1, le poids de granules sera d'environ 1 g par pot soit 0,2 g pour 100 ml de substrat
En dessous de 0,05%, la proportion de granules est trop faible pour observer une amélioration significative de la biomasse racinaire.
Au dessus de 0,5%, l'augmentation de la quantité de granules ne produit aucune amélioration substantielle par rapport à 0,5%.
L'expression « élément unitaire de culture » désigne ici une graine, semence, grain, fruit, pépin, noyau ou une plante sans être limité à ceux-ci permettant d'obtenir une culture forestière, céréalière, fourragère, maraîchère, fruitière ou horticole.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne l'utilisation de granules comprenant notamment au moins un champignon ectomycorhizien, et au moins un champignon mycorhizien à arbuscules, dans laquelle la proportion de granule pour 100 ml de substrat contenant un élément unitaire de culture est comprise d'environ 0,05 % (p/p) à environ 0,5 % (p/p) en particulier 0,1 % (p/p).
Les containers utilisés sont les mAme que ci-dessus définis.
En dessous de 0,05%, la proportion de granules est trop faible pour observer une amélioration significative de la biomasse racinaire.
Au dessus de 0,5%, l'augmentation de la quantité de granules ne produit aucune amélioration substantielle par rapport à 0,5%.
Selon un autre aspect, l'invention concerne un procédé de préparation de granules tels que définis ci-dessus, comprenant une étape de polymérisation de granules de phosphate inorganique imprégnés de tourbe, d'au moins un inoculum mycorhizien et d'au moins un hydrocolloïde avec une solution aqueuse d'un cation divalent choisi parmi le chlorure de calcium, l'acétate de zinc, l'acétate de calcium, le carbonate de calcium, le phosphate de calcium, le chlorure d'aluminium ou des dialdéhydes.
Le contact de l'hydrocolloïde avec le cation divalent provoque la polymérisation dudit hydrocolloïde qui immobilise alors les différents constituants présents (inoculum mycorhizien, tourbe) enrobés sur les granules de phosphore.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne un procédé de préparation de granules, tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes:
a) multiplication d'au moins un mycélium mycorhizien en fermenteur sur un milieu nutritif adapté selon la souche fongique cultivée pour obtenir un mycélium mycorhizien multiplié,
b) récolte dudit mycélium par fîltration, lavage du mycélium à l'eau puis broyage pour obtenir un mycélium mycorhizien multiplié récolté,
c) calibrage de granules de phosphate inorganique, en particulier du phosphate de roche ou de la pouzzolane et lavage des granules à l'eau pour obtenir des granules calibrés lavés,
d) préparation de la solution d'immersion pour les granules composée de :
i. au moins un hydrocolloïde,
ii. de tourbe broyée préalablement stérilisée, et
iii. de mycélium mycorhizien,
e) immersion des granules calibrés lavés obtenus à l'étape c) dans la solution d'immersion pour obtenir des granules imprégnés d'hydrocolloïde, de tourbe et de mycélium,
f) introduction des granules imprégnés dans une solution aqueuse d'un cation divalent pour obtenir des granules polymérisés,
g) élimination des traces de cation divalent par un lavage à l'eau pour obtenir granules polymérisés lavés,
La multiplication et la récolte du mycélium sont effectuées selon Duponnois & Garbaye (1991) ; DUPONNOIS, R. & GARBAYE, J. (1991). Techniques for controlled synthesis of the Douglas fir-Laccaria laccata ectomycorrhizal symbiosis. Annales des Sciences Forestières, 48: 239-251. La solution d'immersion est une solution aqueuse.
Le mélange des différents constituants est effectué à température ambiante, soit de 20 à
25°C.
L'hydrocolloïde est choisi parmi chitosane, de carraghénanes, de carboxyméthylcellulose, d'alginates et en particulier d'alginate de sodium ou de calcium.
De préférence, l'hydrocolloïde est un alginate de sodium.
L'hydrocolloïde est présent de 15g à 25g par litre de solution d'immersion, en particulier 20g. En dessous de 15g, la quantité d'hydrocolloïde est insuffisante pour obtenir une polymérisation correcte.
Au dessus de 25g, la proportion d'hydrocolloïde est trop importante par rapport aux autres constituants conduisant ainsi à des granules qui ne peuvent plus libérer les différents constituants.
La tourbe doit au préalable être broyée et stérilisée. Le broyage permet une homogénéisation de la solution d'immersion des granules. La stérilisation élimine les agents microbiens susceptibles d'entrer en compétition avec le champignon. Le broyage peut être effectué par tout appareil bien connu de l'homme du métier.
La proportion de tourbe est comprise de 20 à 30 g/1 de solution d'immersion, en particulier 25 g/1.
La tourbe sert au support du mycélium, à acidifier le milieu pour un développement optimal du champignon (pH = 5,5)
L'immersion des granules dans la solution d'immersion est effectuée à température ambiante durant 60 min à 120 min, en particulier 90 min.
L'étape d'immersion a pour effet d'imprégner, c'est-à-dire d'adsorber l'hydrocolloïde, l'inoculum et la tourbe sur les granules de phosphate.
L'introduction ensuite des granules imprégnés d'hydrocolloïde, d'inoculum et de tourbe dans une solution aqueuse de cation divalent est effectuée à température ambiante durant 120 min à 180 min, en particulier 150 min.
Le cation divalent est choisi parmi le chlorure de calcium, l'acétate de zinc, l'acétate de calcium, le carbonate de calcium, le phosphate de calcium, le chlorure d'aluminium ou des dialdéhydes et préférentiellement est le chlorure de calcium. Cette étape à pour effet de faire polymériser l'hydro colloïde sur les granules de phosphate immobilisant ainsi la tourbe et l'inoculum enrobés sur les granules de phosphate.
Après lavage, les granules sont récupérés et peuvent être conservés ainsi de quelques jours à plusieurs mois, jusqu'à six mois, lorsque ceux-ci sont conservés à froid, c'est-à-dire entre 2 et 6°C, et préférentiellement 4°C.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne un procédé de préparation de granules, tel que défini ci-dessus, dans lequel les granules de phosphate sont calibrées à un diamètre d'environ 2 à environ 7 mm, en particulier environ 5 mm.
Le calibrage du phosphate permet est effectué pour les même raisons que ci-dessus. Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne un procédé de préparation de granules, tel que défini ci-dessus, dans lequel l'hydrocolloïde est de l'alginate de sodium à une concentration dans la solution d'immersion comprise d'environ 10 à 30 g/1, en particulier 20 g/1, la tourbe dans la solution d'immersion est à une concentration d'environ 20 à 30 g/1, en particulier 25 g/1, et la solution aqueuse de cation divalent dans la solution d'immersion est du chlorure de calcium à une concentration comprise d'environ 50 à environ 150 g/1, en particulier 100 g/1.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de fertilisation d'espèces forestières telles que Pinus spp., Quercus spp., Isoberlinia glaucia, comprenant la mise en contact de plants forestiers avec les granules polymérisés comprenant au moins un inoculum ectomycorhizien, tels que définis ci-dessus, par élément unitaire de culture.
L'expression « élément unitaire de culture » désigne ici une graine, semence, grain, fruit, pépin, noyau ou une plante sans être limité à ceux-ci permettant d'obtenir une culture forestière.
En particulier, l'élément unitaire de culture correspond à une graine ou un plant.
Par mise en contact de plants forestiers avec les granules, il faut comprendre l'introduction des granules dans, par exemple, un bocal, récipient, pot... contenant un substrat de plantation et un jeune plant forestier ou une graine de plant forestier ou une semence....
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne un procédé de fertilisation d'espèces forestières tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes :
a. préparation de granules comprenant un inoculum ectomycorhizien, tels que définis ci-dessus, b. mise en contact de plants forestiers avec des granules à une dose d'environ 1 g de granules à environ 5 g de granules, en particulier d'environ 1 g de granules, par élément unitaire de culture, notamment graine ou plant. Dans un mode de réalisation avantageux, inoculum ectomycorhizien est constitué d'au moins un champignon ectomycorhizien du genre Hebeloma, et/ou du genre Scleroderma, et/ou du genre Laccaria, en particulier le champignon du genre Hebeloma est choisi parmi Hebeloma anthracophilum, Hebeloma cistophilum, Hebeloma crustuliniforme, Hebeloma fastibile, Hebeloma mesophaeum, Hebeloma pallidum, Hebeloma radicosum, Hebeloma sarcophyllum et Hebeloma sinapizans, notamment Hebeloma crustuliniforme, le champignon du genre Scleroderma est choisi parmi le groupe constitué de: Scleroderma dyctiosporum et Scleroderma verrucosum et préférentiellement Scleroderma verrucosum et le champignon du genre Laccaria est choisi parmi le groupe constitué de: Laccaria amethystea, Laccaria bicolor, Laccaria laccata, Laccaria proxima, Laccaria purpureo- badia et Laccaria tortilis, en particulier Laccaria bicolor.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de fertilisation d'espèces céréalières, fourragères, maraîchères, fruitières ou horticoles, comprenant la mise en contact de plants céréaliers, fourragers, maraîchers, fruitiers ou horticoles avec les granules polymérisés comprenant au moins un inoculum mycorhizien à arbuscules, tels que définis ci-dessus, par élément unitaire de culture.
Par mise en contact de plants céréaliers, fourragers, maraîchers, fruitiers ou horticoles avec les granules, il faut comprendre l'introduction des granules dans, par exemple, un bocal, récipient, pot... contenant un substrat de plantation et un jeune plant céréalier, fourrager, maraîcher, fruitier ou horticole ou une graine de plants céréalier, fourrager, maraîcher, fruitier ou horticole ou une semence....
L'expression « élément unitaire de culture » désigne ici une graine, semence, grain, fruit, pépin, noyau ou une plante sans être limité à ceux-ci permettant d'obtenir une culture céréalière, fourragère, maraîchère, fruitière ou horticole.
En particulier, l'élément unitaire de culture correspond à une graine ou un plant. Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne un procédé de fertilisation d'espèces céréalières, fourragères, maraîchères, fruitières ou horticoles, tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes :
a. préparation de granules comprenant au moins un inoculum endomycorhizien, tels que définis ci-dessus,
b. mise en contact de plants forestiers avec des granules à une dose d'environ 1 g de granules à environ 5 g de granules, en particulier d'environ 1 g de granules, par élément unitaire de culture, notamment graine ou plant Dans un mode de réalisation avantageux, l'inoculum mycorhizien à arbuscules est constitué d'au moins un champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus, en particulier le champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus est choisi parmi le groupe constitué de: Glomus mosseae, Glomus fasciculatus, Glomus aggregatum et Glomus intraradices, en particulier Glomus intraradices.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de fertilisation d'espèces forestières telles que Pinus spp., Quercus spp., Isoberlinia glaucia, ou d'espèces céréalières, fourragères, maraîchères, fruitières ou horticoles, comprenant la mise en contact de plants forestiers ou de plants céréaliers, fourragers, maraîchers, fruitiers ou horticoles avec les granules polymérisés comprenant au moins un inoculum ectomycorhizien et au moins un inoculum mycorhizien à arbuscules, tels que définis ci-dessus, par élément unitaire de culture.
La mise en contact est telle que défini ci-dessus pour les plants forestiers et les plants céréaliers, fourragers, maraîchers, fruitiers ou horticoles.
L'expression « élément unitaire de culture » désigne ici une graine, semence, grain, fruit, pépin, noyau ou une plante sans être limité à ceux-ci permettant d'obtenir une culture forestière ou une culture céréalière, fourragère, maraîchère, fruitière ou horticole.
En particulier, l'élément unitaire de culture correspond à une graine ou un plant.
Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne un procédé de fertilisation d'espèces forestières, céréalières, fourragères, maraîchères, fruitières ou horticoles, tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes : a. préparation de granules comprenant au moins un inoculum ectomycorhizien et au moins un inoculum mycorhizien à arbuscules, tels que définis, ci-dessus b. mise en contact de plants forestiers avec des granules à une dose d'environ 1 g de granules à environ 5 g de granules, en particulier d'environ 1 g de granules, par élément unitaire de culture, notamment graine ou plant
Dans un mode de réalisation avantageux, inoculum ectomycorhizien est constitué d'au moins un champignon ectomycorhizien du genre Hebeloma, et/ou du genre Scleroderma, et/ou du genre Laccaria, et d'au moins un champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus,
en particulier le champignon du genre Hebeloma est choisi parmi Hebeloma anthracophilum, Hebeloma cistophilum, Hebeloma crustuliniforme, Hebeloma fastibile, Hebeloma mesophaeum, Hebeloma pallidum, Hebeloma radicosum, Hebeloma sarcophyllum et Hebeloma sinapizans, notamment Hebeloma crustuliniforme, le champignon du genre Scleroderma est choisi parmi le groupe constitué de: Scleroderma dyctiosporum et Scleroderma verrucosum et préférentiellement Scleroderma verrucosum et le champignon du genre Laccaria est choisi parmi le groupe constitué de: Laccaria amethystea, Laccaria bicolor, Laccaria laccata, Laccaria proxima, Laccaria purpureo- badia et Laccaria tortilis, en particulier Laccaria bicolor et en particulier le champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus est choisi parmi le groupe constitué de: Glomus mosseae, Glomus fasciculatus, Glomus aggregatum et Glomus intraradices, en particulier Glomus intraradices.
EXEMPLES :
Exemple 1 : Mode opératoire général pour préparer un inoculum mycorhizien (ectomycorhizien ou mycorhizien à arbuscules ou ectomycorhizien et mycorhizien à arbuscules)
Les modes opératoires qui peuvent être utilisés sont décirt dans les références suivantes : DUPONNOIS, R. & GARBAYE, J. (1991). Techniques for controlled synthesis of the Douglas fir-Laccaria laccata ectomycorrhizal symbiosis. Annales des Sciences Forestières, 48: 239-251. DUPO OIS, R. & GARBAYE, J. (1991). Mycorrhization helper bacteria associated with the Douglas fir-Laccaria laccata symbiosis: effects in vitro and in glasshouse conditions. Annales des Sciences Forestières, 48: 239-251.
DUPONNOIS, R., PLENCHETTE, C. & BA, A.M. (2001). Growth stimulation of seventeen fallow leguminous plants inoculated with Glomus aggregatum in Sénégal. European Journal of Soil Biology, 37: 181 -186.
Exemple 2 : Préparation des granules comprenant un inoculum mycorhizien (ectomycorhizien ou mycorhizien à arbuscules ou ectomycorhizien et mycorhizien à arbuscules)
Etape 1 : Préparation de l'inoculum mycorhizien selon l'exemple 1
Etape 2 : Récolte du mycélium par filtration, lavage du mycélium à l'eau courante puis broyage.
Etape 3 : Calibrage des granules de phosphate naturel (diamètre 5 mm) et lavage des granules à l'eau courante
Etape 4 : Préparation de la solution d'immersion pour les granules composée de : alginate de sodium (20 g.l-1), tourbe broyée préalablement stérilisée (50 g.l 1) et de mycélium fongique (1 g poids sec par litre de solution)
Etape 5 : Immersion des granules calibrés (900 g) dans la solution d'immersion à température ambiante (20-25°C) pendant 90 min.
Etape 6 : Immersion des granules de l'étape 5 dans une solution de chlorure de calcium (CaCl2, 100 g.l"1) pendant 150 min à température ambiante (20-25°C)
Etape 7 : Elimination des traces de CaCl2 par un lavage à l'eau courante
Etape 8 : Conservation des granules à 4°C.
Exemple 3 : Comparaison de la mycorhization contrôlée de Pinus halepensis par la souche de champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum dans différentes consitions
3.1 : Après 4 mois de culture dans un sol sableux (Tableau I) La culture est effectuée telle que décrite dans l'article Ouahmane et al. ((2009) ; Responses of Pinus halepensis growth, soil microbial catabolic fonctions and phosphate-solubilizing bacteria after rock phosphate amendment and ectomycorrhizal inoculation, Plant Soil DOI 10.1007/sl l l04-008-9882-z)
Tableau I
Figure imgf000019_0001
: Inoculum Tourbe vermiculite appliqué à T = 0 à raison de 10% (v/v) dans chaque pot.
: Inoculum Billes alginate de Ca appliqué à raison de 10 billes par pot.
Billes d' alginate de Calcium fabriquées avec un support physique constitué de granules de phosphate naturel selon l'exemple 2 (10 billes par pot)
^ Les valeurs d'une même ligne suivies par une même lettre ne sont pas signifîcativement différentes d'après l'analyse de variance à un facteur contrôlé (P < 0,05).
Le tableau I montre qu'après 4 mois de culture : les pins cultivés avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de la tourbe (2eme colonne traitements) ou avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de l'alginate de calcium (3eme colonne traitements) ont développé une biomasse aérienne et racinaire signifîcativement plus élevée que celle observée avec le témoin ; il n'y a pas de différence significative entre la culture avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de la tourbe (2eme colonne traitements) comparée à un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de l'alginate de calcium (3eme colonne traitements) ; les pins cultivés avec les granules de l'invention (4eme colonne traitements) ont développé une biomasse aérienne et racinaire signifîcativement plus élevée que celle observée avec la culture des pins avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de la tourbe (2eme colonne traitements) comparée à un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de l'alginate de calcium (3eme colonne traitements), montrant la synergie entre les différents constituants de l'invention;
3.2 :Après 12 mois de culture dans un sol sableux (Tableau II) (après transfert des plants mycorhizes dans des pots de 10 litres)
TABLEAU II
Traitements
S. S. S.
S.
KRP (1) verrucosum verrucosum verrucosum
Témoin verrucosum
(inoc T/V) + KRP + KRP
(inoc BA) (3)
(2) (inoc T/V) (2) (inoc BA) (4)
Biomasse
aérienne (mg 321 ,2 a (5) 318,6 a 426,7 b 534,6 c 446,7 b 648,9 d poids sec) Biomasse
racinaire (mg 158,9 a 149,7 a 248,9 b 298,2 c 252,4 b 320,6 d poids sec)
Teneur en azote des 1 ,2 a 1 ,1 a 1 ,6 b 1 ,7 b 1 ,7 b 1 ,8 b aiguilles (%)
Teneur en phosphore
4,1 a 4,3 a 7,2 b 9,7 c 7,4 b 9,9 c des aiguilles (g-kg 1)
( ' : Phosphate naturel appliqué à 0,1% (m/v) dans la couche superficielle des pots (0 - 10 cm) (2) : Inoculum Tourbe vermiculite appliqué à T = 0 à raison de 10% (v/v) dans chaque pot ^ : Inoculum Billes alginate de Ca appliqué à raison de 10 billes par pot à T = 0
(4) Billes d' alginate de Calcium fabriquées avec un support physique constitué de granules de phosphate naturel selon l'exemple 2 (10 billes par pot)
^ Les valeurs d'une même ligne suivies par une même lettre ne sont pas significativement différentes d'après l'analyse de variance à un facteur contrôlé (P < 0.05)
Le tableau II montre qu'après 12 mois de culture :
les pins cultivés avec du phosphate naturel uniquement (2eme colonne traitements) ne montrent pas de différence significative de la biomasse aérienne obtenue par rapport à celle du témoin (lere colonne traitements);
les pins cultivés avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de la tourbe (3eme colonne traitements) ou avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de l'alginate de calcium (5eme colonne traitements) ont développé une biomasse aérienne et racinaire significativement plus élevée que celle observée avec le témoin ou le phosphate naturel; il n'y a pas de différence significative entre la culture avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de la tourbe (3eme colonne traitements) comparée à un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de l'alginate de calcium (5eme colonne traitements) ;
les pins cultivés avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum, de la tourbe et du phosphate naturel (4eme colonne traitements) ont développé une biomasse aérienne et racinaire signifîcativement plus élevée que celle observée les pins cultivés avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de la tourbe (3eme colonne traitements) ou avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum et de l'alginate de calcium (5eme colonne traitements) ;
les pins cultivés avec les granules de l'invention (6eme colonne traitements) ont développé une biomasse aérienne et racinaire signifîcativement plus élevée que celle observée avec la culture des pins cultivés avec un champignon ectomycorhizien Scleroderma verrucosum, de la tourbe et du phosphate naturel (4eme colonne traitements), montrant la synergie montrant la synergie entre les différents constituants de l'invention démontrant ainsi non seulement l'action intrinsèque du champignon sur le développement de la plante mais également son action sur la dissolution du phosphate qui par ailleurs est stimulée par enrobage sur les granules comparée à des granules non enrobés (4eme colonne traitements) qui évite la dispersion du phosphate.

Claims

1 REVENDICATIONS
1. Granules comprenant du phosphate inorganique, de la tourbe, au moins un inoculum mycorhizien, à l'exception de nutriments ou de germe de malt, lesdits granules étant enrobés dans une matrice à base d'au moins un hydrocolloïde polymérisé.
2. Granules selon la revendication 1 , constitués de phosphate inorganique, de tourbe, d'au moins un inoculum mycorhizien, lesdits granules étant enrobés dans une matrice à base d'au moins un hydrocolloïde polymérisé.
3. Granules selon la revendication 1 ou 2, dans lesquels l'inoculum mycorhizien comprend au moins un champignon ectomycorhizien, du genre Hebeloma, et/ou du genre Scleroderma, et/ou du genre Laccaria,
4. Granules selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'inoculum mycorhizien comprend au moins un champignon mycorhizien à arbuscules du genre Glomus.
5. Granules selon l'une des revendications 1 à 4, dans lesquels le poids d' inoculum mycorhizien est compris d'environ 0,05% (p/p) à 0,2% (p/p) en particulier 0,11% (p/p) par rapport au poids total des granules.
6. Granules selon l'une des revendications 1 à 5, dans lesquels le poids de tourbe est compris d'environ 2,2% (p/p) à environ 3,3% (p/p) en particulier 2,8% (p/p) par rapport au poids total des granules.
7. Granules selon l'une des revendications 1 à 6, dans lesquels le poids de phosphate inorganique est compris d'environ 36,7% (p/p) à environ 37,8% (p/p) en particulier 37% (p/p) par rapport au poids total des granules.
8. Granules selon l'une des revendications 1 à 7, dans lesquels le phosphate inorganique est du phosphate de roche ou de la pouzzolane. 2
9. Granules selon la revendication 8 ou 9, dans lesquels le phosphate inorganique est calibré à un diamètre d'environ 2 mm à environ 7 mm, en particulier 5 mm.
10. Granules selon l'une des revendications 1 à 9, dans lesquels le poids d 'hydrocolloïde polymérisé est compris d'environ l,7%(p/p) à environ 2,8%(p/p), en particulier 2,2%(p/p) par rapport au poids total des granules.
11. Granules selon la revendication 10, dans lequel l'hydrocolloïde polymérisé est de l'alginate de calcium.
12. Utilisation de granules comprenant notamment au moins un champignon ectomycorhizien, tels que définis dans l'une des revendications 1 à 3 et 5 à 11 , dans des espaces destinés aux cultures forestières.
13. Utilisation de granules comprenant notamment au moins un champignon mycorhizien à arbuscules, tels que définis dans l'une des revendications 1 , 2 et 4 à 1 1 , dans des espaces destinés aux cultures, notamment céréalières, fourragères, maraîchères, fruitières ou horticoles et préférentiellement maraîchères, fruitières ou horticoles
14. Utilisation selon la revendication 12 ou 13, dans laquelle la proportion de granule pour 100 ml de substrat contenant un élément unitaire de culture est comprise d'environ 0,05 % (p/v) à environ 0,5 % (p/v) en particulier 0,1 % (p/v).
15. Procédé de préparation de granules tels que définis dans l'une des revendications 1 à 11 , comprenant une étape de polymérisation de granules de phosphate inorganique imprégnés de tourbe, d'au moins un inoculum mycorhizien et d'au moins un hydrocolloïde avec une solution aqueuse d'un cation divalent choisi parmi le chlorure de calcium, l'acétate de zinc, l'acétate de calcium, le carbonate de calcium, le phosphate de calcium, le chlorure d'aluminium ou des dialdéhydes. 3
16. Procédé de préparation de granules selon la revendication 15, comprenant les étapes suivantes: a) multiplication d'au moins un mycélium mycorhizien en fermenteur sur un milieu nutritif adapté selon la souche fongique cultivée pour obtenir un mycélium mycorhizien multiplié,
b) récolte dudit mycélium par fîltration, lavage du mycélium à l'eau puis broyage pour obtenir un mycélium mycorhizien multiplié récolté,
c) calibrage de granules de phosphate inorganique, en particulier du phosphate de roche ou de la pouzzolane et lavage des granules à l'eau pour obtenir des granules calibrés lavés,
d) préparation de la solution d'immersion pour les granules composée de :
i . au mo ins un hy dro co lloïde ,
ii. de tourbe broyée préalablement stérilisée, et
iii. de mycélium mycorhizien,
e) immersion des granules calibrés lavés obtenus à l'étape c) dans la solution d'immersion pour obtenir des granules imprégnés d'hydrocolloïde, de tourbe et de mycélium,
f) introduction des granules imprégnés dans une solution aqueuse d'un cation divalent pour obtenir des granules polymérisés,
g) élimination des traces de cation divalent par un lavage à l'eau pour obtenir granules polymérisés lavés,
17. Procédé de préparation de granules selon la revendication 16, dans lequel les granules de phosphate sont calibrées à un diamètre d'environ 2 à environ 7 mm, en particulier environ 5 mm.
18. Procédé de préparation de granules selon la revendication 16 ou 17, dans lequel l'hydrocolloïde est de l'alginate de sodium à une concentration dans la solution d'immersion comprise d'environ 10 à 30 g/1, en particulier 20 g/1, la tourbe dans la 4 solution d'immersion est à une concentration d'environ 20 à 100 g/1, en particulier 50 g/1, et la solution aqueuse de cation divalent dans la solution d'immersion est du chlorure de calcium à une concentration comprise d'environ 50 à environ 150 g/1, en particulier 100 g/1-
19. Procédé de fertilisation d'espèces forestières telles que Pinus spp., Quercus spp., Isoberlinia glaucia, comprenant la mise en contact de plants forestiers avec les granules polymérisés tel que définis dans les revendications I à 3 et 5 à l l, par élément unitaire de culture.
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