WO2012008776A2

WO2012008776A2 - 닥나무 추출물을 제조하는 방법, 그에 의해 제조된 닥나무 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: WO2012008776A2
Application number: PCT/KR2011/005191
Authority: WO
Inventors: 권순상; 이진영; 정한순; 김소연; 안성준
Original assignee: Amorepacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 2010-07-14
Filing date: 2011-07-14
Publication date: 2012-01-19
Anticipated expiration: 2013-01-14
Also published as: CN102985066B; CN102985066A; WO2012008776A3

Abstract

본 발명은 닥나무 추출물의 제조방법, 그에 의해 제조된 닥나무 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 닥나무 또는 그 추출물을 초고압, 초임계 또는 오일추출법으로 추출함으로써 유효성분을 증대시켜 미백, 항노화, 항주름, 보습 및 탄력 개선 효과를 높이는 닥나무 추출물의 제조방법, 그에 의해 제조된 닥나무 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이 를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 닥나무 또는 그 추출 물을 자연발효시키거나, 발효 균주 또는 일정량의 소금을 첨가하여 발효시킨 후 이 를 용매로 추출함으로써 인체에 유해한 부패균, 대장균 및 혐기성 세균 등의 잡균 의 번식을 막고 악취 등을 없애고 기존의 추출물 보다 미백, 항노화, 항주름, 보습 또는 탄력 개선 효과를 높이는 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

【명세서】

【발명의 명 칭】

닥나무 추출물올 제조하는 방법， 그에 의해 제조된 닥나무 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물

【기술분야】

본 발명은 닥나무 추출물의 제조방법， 그에 의해 제조된 닥나무 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것 이다. 보다 상세하게는 닥나무 또는 그 추 출물을 초고압， 초임계 또는 오일추출법으로 추출함으로써 유효성분을 증대시켜 추 출물올 제조하는 방법에 관한 것이다.

또한， 본 발명은 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효 또는 발효 균주나 일정 량의 소금올 첨가하여 발효시킨 후 이를 용매로 추출함으로써 인체에 유해한 부패 균 , 대장균 및 혐기성 세균 등의 잡균의 번식을 막고 악취 등올 제거하는 발효방법 에 관한 것 이다.

그리고 이로써 기존의 추출물보다 미 백， 항노화， 항주름， 보습 및 탄력 개선 효과를 높이는 닥나무 추출물의 제조방법， 그에 의해 제조된 닥나무 추출물 및 이 를 포함하는 화장료 조성물， 또는 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법， 그 발효 추 출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

【배경기술】

본 발명은 닥나무 추출물의 제조방법， 그에 의해 제조된 닥나무 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것 이다. 보다 상세하게는 닥나무 또는 그 추 출물올 초고압， 초임계 또는 오일추출법으로 추출함으로써 유효성분을 증대시켜 추 출물올 제조하는 방법에 관한 것이다.

또한， 본 발명은 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효 또는 발효 균주나 일정 량의 소금을 첨가하여 발효시킨 후 이를 용매로 추출함으로써 인체에 유해한 부패 균， 대장균 및 혐기성 세균 등의 잡균의 번식을 막고 악취 등을 제거하는 발효방법 에 관한 것 이다.

【발명의 상세한 설명】

【기술적 과제】 본 발명자들은 닥나무 추출물 내 유효성분의 함량올 높이기 위한 방안을 연 구한 결과， 초고압， 초임계 또는 오일 추출법으로 닥나무를 추출할 경우 및 미 백， 항노화， 항주름， 보습 및 탄력 개선 효과가 우수함올 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다. 또한 , 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효시 키거나， 발효 균주 또는 일정량 의 소금을 첨가하여 발효시킨 후 이를 용매로 추출한 닥나무 발효 추출물도 미 백， 항노화， 항주름， 보습 및 탄력 개선 효과가 우수함올 발견하고 본 발명올 완성하게 되었다.

따라서， 본 발명의 목적은 닥나무 추출물 내 유효성분의 함량을 높이기 위 한 닥나무 추출물의 제조방법을 제공하는 것 및 상기 방법으로 제조한 닥나무 추출물 을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한， 본 발명의 목적은 닥나무 추출물 내 유효성분의 함량을 높이기 위 한 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법 및 그 발효 추출물을 제공하는 것이다.

【기술적 해결방법】

상기의 목적을 달성하기 위하여， 본 발명에서는 닥나무의 뿌리， 줄기， 잎， 꽃 및 열매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상올 초고압， 초임계 또는 오일 추출 법으로 추출하는 단계를 포함하는 닥나무 추출물의 제조방법 및 상기 방법으로 제조 한 닥나무 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 , 본 발명에서는 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효， 균발효 또는 염장 발효시 키는 발효방법 및 상기 방법으로 얻은 닥나무 발효 추출물을 제공한다.

【유리 한 효과】

본 발명에 의 한 방법으로 추출된 닥나무 추출물은 유효성분의 증대로 인해 미 백， 항노화， 항주름， 보습 및 탄력 개선 효과가 우수하였다.

또한， 본 발명에 의한 방법으로 발효된 닥나무 발효 추출물도 유효성분의 증 대로 인해 미 백， 항노화， 항주름， 보습 및 탄력 개선 효과가 우수하였으며， 염장 발효 추출물의 경우 인체에 유해한 대장균 또는 혐기성 세균 등에 의한 부패 및 오 염을 방지할 수 있었다.

【도면의 간단한 설명】

도 1은 본 발명에서 사용한 초고압기의 단면도이다.

도 2는 본 발명에서 사용한 초고압기의 사진이다.

도 3은 소금이 유해 미생물의 성 장에 미 치는 영 향을 알아보기 위하여， 대장 균 Escherichia coli ATCC 8739) , 녹농균 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027) 및 황색포도상 ^^ Staphylococcus aureus ATCC 6538) 배양 시 천일염을 용액을 도말 한 후 저해환 생성 여부를 확인한 결과를 보여준다.

【발명의 실시를 위한 최선의 형태】

본 발명은 초고압， 초임계 또는 오일 추출법으로 닥나무 추출물을 제조하는 방법에 관한 것 이다. 이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 초고압， 초임계 또는 오일 추출법으로 닥나무 추출물을 제조하는 방법에 관한 것으로서， 보다 상세하게는 본 발명에 의 한 추출방법은 닥나무의 뿌 리， 줄기， 잎， 꽃 및 열매 증 적어도 하나를 물 또는 C1 내지 C5의 저급 알코올올 첨가하여 10~90t 에서 4~24시간 동안 유효성분을 추출하는 단계 ; 및 상기 추출물 올 초고압， 초임 계 또는 오일 추출법으로 가공하는 단계를 포함할 수 있으며， 상기 초고압， 초임계 또는 오일 추출법은 상기 추출 단계와 동시 또는 순차적으로 진행 될 수 있고， 저급 알코올올 이용한 추출 과정은 생략할 수도 있다.

본 발명의 일 실시 예에서 초고압 기술을 이용하여 닥나무 추출물올 제조할 수 있다. 예를 들면 닥나무의 뿌리， 줄기， 잎， 꽃 또는 열매를 20~50^°C에서 50~ 300 Mpa의 압력으로 10~20분간 초고압 처 리하여 추출할 수 있으며， 바람직하게는 25~35^°C에서 70 내지 200 Mpa의 압력으로 10분 내지 15분간 초고압 처리 한다. 본 발명의 일 실시 예에서는 도 1 및 도 2에 도시된 구성을 갖는 초고압기를 사용하여 초고압 처리할 수 있으나， 이에 만 한정되는 것은 아니다. 도 1에서 상기 초고압기는 실린더 (cyl inder) 부위， 실런더부의 피가압물을 담는 프로세싱 챔버 (Processing Chamber) , 가압 피스톤 (Pressur ing Pi ston) , 실린더 외부의 온도를 조 절하는 물 순화 재킷 (Water ci rculat ion jacket ) 및 오일 펌프 등으로 구성되며， 랩 스케일 (Lab scale)에서는 HHP의 최 대압력 (max . pressure)이 600 Mpa이고 작용 부피 (Working volume)가 0.6 ί 정도이며， 산업 적으로 상용 가능한 정도는 파일럿- 스케일 (Pi lot-scale) UHP 설비 (35 L)로서 최 대압력 이 2 , 000 Mpa이고 작용 부피가 35 까지 가능하다. 또한 본 발명의 일 실시예에서는 초임 계 기술을 이용하여 닥나무 추출물을 제조할 수 있다. 이때， 초임계 유체로는 이산화탄소， 질소， 아산화질소， 메탄， 에 틸렌， 프로판 및 프로필렌 등올 사용할 수 있으며， 바람직하게는 초임계 이산화탄 소를 사용하는 것이 좋다. 초임계 유체 증 이산화탄소는 그 임 계 압력 이 73.8 bar 이고 임계 온도가 31. 11 로 낮아 일반적으로 초임계 조건올 만들기가 쉽고， 이산화 탄소 자체에 독성이 없으며 비용이 저렴하기 때문이다.

상기 초임계 추출 조건은 20~40^°C, 70~200 bar의 압력 하에서 초임계 유체 를 가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도가 20°C 이상일 때 추출효율이 증대 되며， 40 C를 초과하면 추출효율은 높지만 그 이하와 비교하여 추출효율의 증대가 없다. 또한， 기압이 70 bar 이상일 때 추출효율이 증대되며， 200 bar를 초과하면 그 이하의 기압일 때와 비교하여 추출효율의 증대가 없다. 본 발명의 일 실시예에서는 오일추출법올 통해 닥나무 추출물올 제조할 수 있다. 예를 들면， 닥나무의 뿌리， 줄기， 잎， 꽃 또는 열매에 콩기름， 참기름 등의 식물유를 첨가하여 40~70^°C, 2~10 bar 압력에서 2〜： L2시간 동안추출할 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 방법에 의한 제조된 닥나무 추출물을 조성물 총 중량 에 대하여 0.0001 ~ 90 중량 %, 바람직하게는 0.001~50 중량 %로 포함하는 화장료 조 성물에 관한 것이다. 또한 본 발명에 의한 화장료 조성물은 미백, 항노화， 항주름， 보습 또는 탄력 개선용임을 특징으로 한다. 한편， 나아가본 발명은 닥나무 추출물 내 유효성분의 함량올 높이기 위하여 닥나무 또는 그추출물을 발효시키는 방법에 관한 것이다.ᅳ

본 발명에서는 닥나무 또는 그 추출물을 당업계에 잘 알려진 통상적인 방법 으로 발효시킬 수 있다. 이때， 닥나무 추출물은 당업계에 잘 알려진 방법으로 물 또는 에탄올로 추출하여 제조할 수 있다. 예를 들면， 닥나무의 뿌리， 줄기， 잎， 꽃 또는 열매에 물 또는 에탄올올 첨가하여 10~90^°C에서 4~24시간 동안 추출하여 제 조할 수 있고， 바람직하게는 물올 사용할 수 있으나， 이에만 한정되는 것은 아니 다. 이하， 본 발명을 보다상세히 설명한다.

본 발명은 닥나무 또는 그추출물을 자연발효시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에서 상기 닥나무 또는 그 추출물은 당 성분과 혼합하여 옹기 등 의 용기에 담아 인위적인 조작 없이 자연 발효시켜 제조할 수 있다. 이때， 사용 가 능한 당 성분은 특별히 한정되지 않으며， 예를 들면， 자당， 자일리를， 올리고당， 식이섬유， 에리스리를, 포도당 또는 과당 등이 사용될 수 있다. 상기 당 성분은 전 체 발효물 총 중량에 대하여 1 내지 10 중량 %로 혼합되는 것이 바람직하고， 햇볕이 잘 드는 사계절의 자연환경에서 30일 내지 6년， 바람직하게는 6개월 이상 발효시킨 다. 또한 본 발명은 닥나무 또는 그 추출물을 균발효시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에서 상기 닥나무 또는 그 추출물은 효모균， 버섯균， 유산균， 누룩균 또는 바실러스속균 (고초균) 등 당업계에 잘 알려져 있는 유용한 발효 균주 를 접종하여 10~60^°C에서 18시간 내지 100일 정도 발효시킬 수 있다. 이때， 닥나 무에 직접 발효 균주를 접종하여 발효시킨 후 이를 다시 물 또는 에탄올 등으로 추 출할 수도 있고， 기존 닥나무 추출물에 발효 균주를 접종하여 발효물을 얻을 수도 있다.

본 발명에서 사용하는 효모균은 사카로마이세스

sp.), 스키조 ！"가로 τ³!"이 -^)― ( Schi zosaccharomyces sp. )， 토를로프시스 ( Tor u lops is sp. ) , 로도토 ^^ Rhodotorula sp.) 또는 칸디다 /?(/^ sp.) 등을 들 수 있으며， 버섯균은 식 용으로 가능한 버섯균이라면 어느 것이나 가능하나， 바람직하게는 차가버섯 ( Inonnotus-obl iquus) , 동중하 ΐ균류 (6 厂 sinensis, Paeci lomyces japonica) ,

, 상황버섯 G¾?////7/s linteus) 또는 영 지버^ (Gano/enna lucidum) 등올 사용할 수 있다. 또한 유산균은 락토바실러스 (Lactobaci 1 lus sp. ) , 스트 토코쿠스 (5 rep ocOcci/s sp. ) , 류코노스톡 {Leuconostoc sp.) 또는

sp.) 등을 들 수 있으며， 누룩균은 라이조푸스 우사미 (½ 7^') 및 오리재 (florae), 아스퍼질러스 오리재

oryzae) 또는 아스퍼질러스 소재 ( ?e/ 7/i/s sojae) 등을 들 수 있고， 바실러스속균 (고초균)은 바실러스 리체니포르미스

1 i chen i form is) F1017, 바실러스 리체니포르미스 lichen/ form Is) F1232, 바실러스 리체니포르미스 0¾c///i/s 1 i chen i form is) F1267, 바실러스 리체니포르미 ^{Bacillus 1 i chen i form is) F1268, 바실러스 리체니포르미스 ¾^7/^ 1 i chen i form is) F1200, 바실러스 푸미루스 pumilus) F1337, 바실러스 소 노렌시스 sonorensis) F1005, 바실러스 서브틸리스 CSscJ/i/s subtil is)

F1236 또는 바실러스 서브틸리스 subtilis) F1279 등을 들 수 있으나， 이 에만 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에서 효모를 사용하여 발효시킬 경우， 닥나무 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도 (약 10⁵내지 10⁷ cell/mL)로 효모를 접종 하여 pH 5.5~6.5， 온도 25~50^°C, 통기량 0.05 0.5 VVM의 조건을 유지하면서 배 양한 후， 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 효모균제를 제거함으로써 닥 나무 발효 추출물올 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 120 시간이 바람직하다. 또한， 본 발명의 일 실시 예에서 버섯균을 사용하여 발효시킬 경우， 닥나무 또는 그 추출물에 버섯균올 접종하여 온도 18~25^°C , 습도 60~80¾의 조건올 유지 하면서 배양한 후， 물이나 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들어， 메탄올， 에탄올 , 프로판올 및 부탄올 등)， 상기 저급 알코올과 물의 혼합 용매， 아 세톤， 에틸아세테이트， 클로로포름， 1，3-부틸렌글리콜， 핵산 또는 디에틸에 테르 증 1종 이상올 이용하고， 50〜： lOO , 1~5시간 동안 가열하여 감압 농축하여 닥나무 발효 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 1일 내지 100일이 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시 예에서 유산균을 사용하여 발효시 킬 경우， 닥나무 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도 (약 10⁵ 내지 10⁷ cel l /mL)로 유산 균올 접종하여 pH 6.5-7.5 , 온도 25~50^°C , 통기량 1WM의 조건올 유지하면서 배 양한 후， 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균제가 제거된 닥나무 발 효 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 120 시간이 바람직하다.

또한， 본 발명의 일 실시 예에서 누룩균을 사용하여 발효시 킬 경우， 닥나무 또는 그 추출물에 누룩균을 접종하여 온도 15~45ΐ 의 조건올 유지하면서 배양한 후， 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 누룩균제가 제거된 닥나무 발효 추 출물올 수득할 수 있다. 배양 시간은 18 내지 120 시간이 바람직하다.

또한， 본 발명의 일 실시 예에서 바실러스속균올 사용하여 발효시 킬 경우， 닥 나무 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도 (약 10⁵ 내지 10⁷ cel l/mL)로 바실러스속균올 접종하여 온도 10~60°C의 조건을 유지하면서 배양한 후， 이 발효 액을 원심분리하여 pH 5.5~8.5， 고분자 침전물과 바실러스균제가 제거된 닥나무 발효 추출물올 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 96 시간이 바람직하다. 또한 본 발명은 닥나무 또는 그 추출물올 염장 발효시 키는 방법에 관한 것 이 다. 본 발명의 일 실시 예에서 상기 닥나무 또는 그 추출물은 1) 닥나무 또는 그 추 출물에 일정량의 소금을 첨가하여 장기 숙성 발효시 키는 단계 ; 및 2) 상기 염장 발 효물올 물 또는 유기용매로 추출하여 발효 추출물올 수득하는 단계 ;를 포함하는 염 장 발효 방법에 관한 것 이다.

상기 1) 단계에서， 염장에 사용되는 소금으로는 정제한 고순도 염화나트륨， 천일염， 암염 및 죽염 등이 바람직하며， 소금의 농도는 전체 발효물에 대하여 10~ 30 증량 ¾가 바람직하다. 소금의 함량이 10 증량 % 미만에서는 기 대하는 효과를 발휘 하기가 어렵고， 30 증량 %를 초과하면 효과의 변화가 미미하다.

본 발명의 발효공정은 4 내지 40^°C 사이에서 충분한 발효가 일어날 수 있도 록 30일에서 1년 정도， 바람직하게는 6개월 내지 1년 정도가 발효시키는 것이 좋 다. 4^°C 미만에서는 유용 미생물의 성장이 잘 되지 않고 40°C를 초과할 경우 미생 물의 성장이 너무 과하게 일어나 닥나무 또는 그 추출물의 성능에 영향올 미칠 수 있다.

상기 2) 단계에서 사용하는 추출 용매로는 정제수， 메탄올， 에탄올， 글리세 린， 에틸아세테이트， 부틸렌글리콜， 프로필렌글리콜， 디클로로메탄 및 핵산으로 이 루어진 그룹에서 선택된 1종올 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 이때， 추출온도는 10 내지 80^°C가 바람직하며， 6시간 내지 24시간 동안 추출할 수 있다. 상기 추출온도 및 추출시간올 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화 가 생길 수 있다.

본 발명에서는 상기 2) 단계 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상은 에서 냉침, 가열 및 여과하여 얻어진 액상물 또는 추가로 용매를 증발， 분무건조 또는 동결건조하여 닥나무의 염장 발효추출물의 제조할 수 있다.

또한 본 발명은 상기 방법에 의한 제조된 닥나무 발효 추출물올 조성물 총 증량에 대하여 0.0001~90 중량 %, 바람직하게는 0.001~50 증량 %로 포함하는 화장 료 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명에 의한 화장료 조성물은 미백， 항노화， 항 주름， 보습 또는 탄력 개선용임을 특징으로 한다.

【발명의 실시를 위한 형태】

이하， 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다구체적으로 설명한 다. 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형， 치환 및 삽입 등올 수행할 수 있으며， 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포 함된다.

[실시예 1] 초고압추출물 제조

닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음초고압 기계를 세팅하여 초고압 처리를 준비한 후 프로세싱 챔버 부위에 물올 채운 다음 상기에서 준비한 닥나무를 진공팩에 포장한 후 초고압기를 이용하여 50 Mpa 이상의 압력 및 501C 이하의 온도에서 1분 이상 처리한 후 실온에서 냉각시킨 후 건조기에서 건조 하여 닥나무 추출물올 얻었다. [실시 예 2] 초임 계 추출물 제조

닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 후 초임 계 추출조에 투입 한 다음 고압용 기 체펌프를 이용하여 추출조에 이산화탄소를 공급하여 압력 이 75 bar에 달하면 이산화탄소의 공급을 중단하였다. 온도 제어기를 이용하여 추출조 외부를 감싸고 있는 열선을 통해 추출조 내부의 온도를 2 /min 속도로 40^°C까지 승온하였다. 추출조의 출구에 부착된 압력조절기를 이용하여 이산화탄소를 일부 배 출하면서 추출조의 온도와 압력올 34^°C , 74 bar로 30분간 유지하였다. 그런 다음 고압용 기 체펌프를 재가동하여 2 L/min의 유량으로 이산화탄소를 추출조에 연속적 으로 공급하였다. 동시에 출구 쪽에 부착된 압력조절기를 이용하여 추출물을 방출 시 키며 추출조의 온도와 압력올 34 ^°C 74 bar로 일정하게 유지하였다. 압력조절기의 온도를 40^°C로 유지하면서 압력조절기를 통하여 방출된 방출물은 압력 및 온도강하 로 인하여 이산화탄소가 고체 드라이아이스로 전이 되었다. 방출된 추출물은 상압으 로 감압하여 이산화탄소를 대기로 방출시 키고， 닥나무 추출물은 포집기 내로 회수 하였다. 위 의 과정을 4시간 동안 수행하여 닥나무 추출물을 얻었다.

[실시 예 3] 오일 추출물 제조

닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg을 깨꿋한 물로 씻어 건조시킨 다음 콩기름 10 « 에 넣고 냉각콘덴서가 달린 추출기에서 50^°C , 2 ~4 bar 압력에서 4시간 추출한 후 여과지로 여과하였다. 이 추출물을 넁각콘덴서가 달린 증류장치에서 70°C로 감압농 축하여 닥나무 오일 추출물을 얻었다.

[비교예 1]

닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음 물 10 에 넣 고 냉각콘덴서가 달린 추출기에서 5시간 끓여서 추출한 후 300 메쉬 여과포로 여과 하고， 5〜： 15 °C에서 5일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과하였다. 이 추출물을 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 8( C로 감압농축하여 71.3 g (건조중 량)을 얻었다.

[실시 예 4]

비교예 1에서 제조한 닥나무 추출물을 실시 예 1과 동일한 방법으로 초고압처 리하였다. [실시예 5]

비교예 1에서 제조한 닥나무 추출물을 실시예 2와 동일한 방법으로 초임계 추출하였다.

[실시예 6]

비교예 1에서 제조한 닥나무 추출물을 실시예 3과 동일한 방법으로 오일 추 출하였다.

[시험예 1] 티로시나제 저해 효과

티로시나제 효소는 버섯류 (Mushroom)로부터 추출된 것으로 시그마 (SIGMA)사 의 것올 사용하였다. 먼저 기질인 티로신을 증류수에 용해시켜 0.3 mg/ml의 용액으 로 만들고 그 용액올 1.0 ml씩 시험관에 넣은 다음， 여기에 포타슴 -포스페이트 완 충용액 (0.1 mol 농도， pH 6.8) 1.0 ml 및 증류수 0.7 ml를 첨가하였다.

실시예 1~6 및 비교예 1의 추출물을 에탄올 용액에 적당농도로 혼합하여 준 비한 각 추출물 시료액 0.2 ml를 반웅액에 넣은 다음 37^°C 항온조에서 10분 동안 반웅시켰다. 이때 대조군은 각 추출물 대신 용매만을 0.2 ml 넣은 것으로 준비하였 고， 양성대조군으로는 아스코르브산을 사용하였다. 이 반응액에 2500 유닛 /ml의 티 로시나제 용액 0.1 ml씩올 넣고 다시 37C 항온조에서 10분 동안 반웅시켰다. 이 반응액이 든 시험관올 얼음물속에 넣어서 급냉시켜 반응을 증지시키고 광전분광분 석계로 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정하였으며， 그 결과를 하기 표 1에 나타내 었다. 각추출물의 티로시나제 저해 효과는 하기 수학식 1로 산출하였다.

【수학식 1】

EJ로시나제제 IHS(%I = 10(H각추 SS의반응 S광도 /[H조군의반응 S광도 x 1001

【표 1】

상기 표 상 1의 결과에서， 초고압， 초임계 및 오일 추출법올 거 쳐 제조한 실 시 예 1 ~6의 닥나무 추출물의 티로시나제 억제율이 높아 미 백 효과가 우수함올 알 수 있었다.

[시험 예 2] B16/F10 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제능 평가

실시 예 1 ~6 , 비교예 1 및 코지산을 각각 0.001 중량 %로 함유한 시료를 시험 물질로 하여 일정 농도로 B16/F10 멜라노마 세포 (한국세포주은행 )의 배양액에 첨가 하여 3일간 배양한 후 배양액을 제거하고 PBS로 세척하고 IN NaOH로 세포를 녹여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시험물질올 첨가하지 않은 세포를 대조군으로 하 여 대조군에서의 멜라닌 함량과 비교하여 각 시험물질의 멜라닌 생성 저해 정도를 측정하였다. 수학식 2에 따라 멜라닌 생성 억제율올 계산하여 그 결과를 표 2에 나 타내었다.

【수학식 2]

【표 2】

상기 표 2의 결과에서， 초고압， 초임계 및 오일 추출법을 거쳐 제조한 실入^' 예 1 6의 닥나무 추출물의 멜라닌 생성 억제율이 높아 미 백 효과가 우수함을 알 丁 ·

[실시 예 7] 닥나무 자연 발효 추출물 제조

세척한 닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg올 올리고당 50 g과 혼합하여 옹기에 넣고， 옹기가 가득차면 위에서 압을 가하여 누르지 않고 자연 상태로 옹기의 뚜껑을 덮고 6개월간 자연 발효시 켰다. 발효가 끝난 후， 발효된 원료를 여과 형 S으로 걸러내어 ^ 찌꺼기를 제거함으로써 닥나무 자연 발효추출물을 얻었다.

[실시예 8] 효모를 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말을 1.5 의 정제수에 5 중량 %가 되도록 첨가하여 탄소원, 질소원, 인삼염， 무기염류 및 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고， 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5〜 6.5로 맞추었다. 상기 닥나무 추출 분말이 함유된 배양 배지에 사카로마이세스 (5^c?arozzyces sp.)를 If)⁶ cell/mL로 접 종하고 pH 5.5~6.5， 온도 25~35^°C, 통기량 0.5 WM의 조건올 유지하면서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액올 l.OOOXg에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 효모 균 체가 제거된 최종 닥나무 발효 추출물올 얻었다.

[실시예 9] 버섯균을 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말에 동층하초균류 (/¾ec/7c«?yces japonica) 를 5 중량 ¾로 첨가하고， 18~25^, 습도 60~70¾에서 60일간 발효시킨 후 건조시킨 다음， 이를 분쇄하여 얻어진 분쇄물 100 g씩올 80% 메탄올 3 에 각각 넣고 냉각 콘덴서가 달린 환류추출기에서 3시간 끓여 추출하였다. 그 다음 100 메쉬 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온 에서 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후， 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 60^°C로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 닥나무 발효 추출물을 얻었 다.

[실시예 10] 유산균을 이용한 닥나무 발효추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말을 1.5 의 정제수에 5 중량 %가 되도록 첨가하여 탄소원， 질소원， 인삼염， 무기염류， 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하 고， 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5 6.5로 맞추었다. 상기 닥나무 추출 분말이 함유된 배양 배지에 락토바실러

s/ 를 10⁶ cell/mL로 접종 하고， pH 6.5~7.5， 온도 35~38t, 통기량 1 WM의 조건을 유지하면서 72시간 동 안 배양하였다.

상기 발효액올 l.OOOXg에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균 균체가 제거된 최종 닥나무 발효 추출물올 얻었다. [실시예 11] 누룩균을 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말에 아스퍼질러스 오리재 isperᅳ oryz e)를 5 증량 %로 첨가하고， 25^°C에서 48시간 동안 발효시킨 후 건조시킨 다음， 이를 분쇄하여 얻어진 분쇄물 100 g씩올 80% 메탄올 3 에 각각 넣고 냉각콘덴서 가 달린 환류추출기에서 3시간 끓여 추출하였다. 그 다음 100 메쉬 여과포로 여과 한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액올 합하여 상온에서 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후， 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치에서 로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 닥나무 발효 추출물을 얻었다.

[실시예 12] 바실러스균올 이용한 닥나무 발효추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말을 1.5 의 정제수에 5 중량 %가 되도록 첨가하여 탄소원， 질소원， 인삼염， 무기염류 및 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고， 수산화나트륨올 이용하여 적절한 pH 5.5~6.5로 맞추었다. 상기 닥나무 추출 분말이 함유된 배양 배지에 바실러스 서브틸리스 0 c// /s subtil is) F1279를 접종 하고， 45 C에서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액을 LOOOXg에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 바실러스 균체가 제거된 최종 닥나무 발효추출물을 얻었다.

[실시예 13] 닥나무 염장 발효추출물 제조

닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg올 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 후 10 중량 «>농도의 소금 용액에 혼합한 다음 옹기에 담아 준비하고 4°C에서 약 30일간 발효시킨 후 여 기에 80% 에탄올 수용액 5 £를 넣고， 3회 환류 추출한 다음， 15^°C에서 1일간 침적 시켰다. 그 후， 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고， 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물올 물에 현탁한 다음， 에테르 1 로 5회 추출하여 색소를 제거하고， 수층을 1-부탄올 500 m«로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1- 부탄올충을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고， 이를 소량의 메탄올에 녹인 후， 대량의 에틸아세테이트에 추가하여 생성된 침전물올 건조함으로써， 닥나무의 염장 발효 추출물 50.3 g을 수득하였다.

[시험예 3] 티로시나제 저해 효과

티로시나제 효소는 버섯류 (Mushroom)로부터 추출된 것으로 시그마 (SIGMA)사 의 것을 사용하였다. 먼저 기질인 티로신을 증류수에 용해시켜 0.3 mg/ml의 용액으 로 만들고 그 용액올 1.0 ml씩 시험관에 넣은 다음， 여기에 포타습 -포스페 이트 완 충용액 (0. 1 mol 농도， pH 6.8) 1.0 ml 및 증류수 0.7 ml를 첨 가하였다.

실시 예 7~13 및 비교예 1의 추출물올 에탄올 용액에 적당농도로 혼합하여 준 비 한 각 추출물 시료액 0.2 ml를 반응액에 넣은 다음 37^°C 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이 때 대조군은 각 추출물 대신 용매만올 0.2 ml 넣은 것으로 준비하였 고， 양성 대조군으로는 아스코르브산올 사용하였다. 이 반응액에 2500 유닛 /ml의 티 로시나제 용액 0. 1 ml씩을 넣고 다시 37^°C 항온조에서 10분 동안 반웅시 켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음물속에 넣어서 급넁시켜 반웅을 중지시 키고 광전분광분 석 계로 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정하였으며， 그 결과를 하기 표 3에 나타내 었다. 각 추출물의 티로시나제 저해 효과는 상기 수학식 1로 산출하였다.

【표 3]

상기 표 3의 결과에서， 본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물인 실시 예 7~13의 티로시나제 억제율이 높아 미 백 효과가 우수함을 알 수 있었다.

[시험예 4] B16/F10 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제능 평가

실시 예 7~13, 비교예 1 및 코지산을 각각 0.001 증량 %로 함유한 시료를 시험 물질로 하여 일정 농도로 B16/F10 멜라노마 세포 (한국세포주은행 )의 배양액에 첨가 하여 3일간 배양한 후 배양액올 제거하고 PBS로 세척하고 IN NaOH로 세포를 녹여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시험물질올 첨가하지 않은 세포를 대조군으로 하 여 대조군에서의 멜라닌 함량과 비교하여 각 시험물질의 멜라닌 생성 저해 정도를 측정하였다 . 상기 수학식 2에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하여 그 결과를 표 4 에 나타내었다.

【표 4】

상기 표 4의 결과에서， 본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물인 실시예 7~13의 멜라닌 생성 억제율이 높아 미백 효과가우수함올 알수 있었다.

[시험예 5] 유해 세균 생성 저해 실험

배지 (Letheen Agar)를 샤알레에 1차 부어 굳힌 후 전배양시킨 대장균 {Escherichia coli ATCC 8739)， 녹^균 {Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027) 및 황 색포도상 ᄏ―균 {Staphylococcus aureus ATCC 6538)올 전배양시키고 이 시험균을 40

^°C 정도가 되도록 조절한 배지 (Letheen Agar)에 최종적으로 균의 양이 1()⁵마리 /g이 되도록 회석하여 1차 배지 위에 부어 굳혔다. 멸균된 종이 디스크 (paper disk)에 10%, 20% 및 30%의 천일염 용액올 0.02 ml 정도 주입하여 균이 도말된 배지에 얹고 상온에서 24시간 동안 용액이 충분히 확산되게 한 다음 각 32^°C에서 최적시간 동안 배양한 후 샤알레에 나타나는 저해환 생성 여부를 확인하였으며， 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3의 결과로부터， 소금이 유해 미생물의 성장을 저해하는 것올 확인하였 다.

[제형예 1 13 및 비교제형예 1~2]

하기 표 5 내지 7의 조성에 따라 통상적인 방법으로 제형예 1〜：3 및 비교제 형예 1~2의 영양크림을 제조하였다 (단위: 중량 %).

【표 5】

【표 6]

【표 7]

배한성분 비교체 에 Ί 비교체 ¾예 2 비교예 1 0.5 ¬납 10 10

폴리솜베이트 60 1.5 1.5 피이지 60 경화피마자유 2 2

솜비타세스뒤음레이트 0.5 0.5 휴듀파라뷔 10 10

스쿠암라 5 5

카프릴릭 /카프릭트리글리세라이드 (Estasan: Uniqema( 5 5

제조사))

글리세퓌 5 5

부 레금리콜 3 3

프로 ¾해금리콜 3 3

트리에타올아 ?1 0.2 0.2 방부제. ^소 및 향료 적량 적량 정제수 [시험예 6] 본 발명에 의한 초고압， 초임계 및 오일 추출법을 거쳐 제조한 닥나무 추출물의 피부 보습 효과

본 발명에 의한 닥나무 추출물이 피부 보습력 증가에 미치는 효과를 측정하 기 위하여， 피부 건조증을 나타내는 40~50대의 성인 남녀 160명을 8개조로 나누어 각 조에 제형예 1~6 및 비교제형예 1~2를 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주， 2주， 4주 경과한 시점 및 도포를 증지한 2주 경과 ( 총 6주 경과) 후에 항온， 항습 조건 (24^°C, 상대습도 40%)에서 코니오미터로 피부 수분량을 측정하였으며， 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 코니오미터는 표피의 전기전도도 값을 측정하여 피부에 존재하는 수분량을 측정하는 피부 수분 측정기이 다. 시험결과는 시험개시 직전에 측정한 코니오미터 값을 기준으로 하여 일정기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 표시한 것이다.

【표 8]

상기 표 8의 결과에서， 본 발명에 의한 초고압， 초임계 및 오일 추출법올 거 쳐 제조한 실시예 1~6의 닥나무 추출물올 포함하는 제형예 1~6의 피부 수분 증가 율이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한， 제형예 1~6의 영양크림의 도포를 중지한 후에도 피부 수분을 측정한 수치가 도포 후 1주와 유사하게 나타나， 실시예를 도포 하지 않아도 일정 기간동안피부 수분이 지속적으로 유지됨올 알수 있었다.

[시험예 7] 본 발명에 의한 초고압， 초임계 및 오일 추출법을 거쳐 제조한 닥나무 추출물의 피부 주름 개선 효과

본 발명에 의한 닥나무 추출물이 피부 주름 개선에 미치는 효과를 측정하기 위하여， 30~50세의 안면주름이 있는 시험대상자 160명올 대상으로 피부 주름 개선 효과를 비교 평가하였다. 크림 사용 이전의 안면 양쪽부의 피부 상태를 측정해 놓은 다음 각 시험대상 자들에게 제형예 1~6 및 비교제형예 1~2의 크림을 3개월간 사용하도록 한 후 동 일 부위를 재측정하여 피부 주름의 변화량올 측정하였으며， 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다. 24^°C, 상대습도 40%의 항온항습실에서 눈꼬리 부위의 주름올 레플리카 (replica)로 떠서 비시오메타 시스템 (Visiometer system; C+K사)으로 피부 주름을 측정하였다. 피부 주름의 변화량은 하기 수학식 3에 따라 계산하였다.

【수학식 3】

상기 수학식 3에서， "Tdi"는 D90에서의 측정부위 값이며， "Tdo' '는 DO에서의 측정부위 값이다.

【표 9】

상기 표 9의 결과에서， 본 발명에 의한 초고압, 초임계 및 오일 추출법을 거 쳐 제조한 실시예 1~6의 닥나무 추출물을 포함하는 제형예 1~6의 피부 주름 개선 효과가우수함을 확인할수 있었다.

[시험예 8] 본 발명에 의한 초고압， 초임계 및 오일 추출법을 거쳐 제조한 닥나무 추출물의 피부 탄력 향상 효능 확인

피부 탄력 향상 효능 확인을 위하여 제형예 1~6 및 비교제형예 1~2의 크림 을 30~40대 여성 160명올 대상으로 20명을 1조로 하여 8개 조로 나누어 측정하였 다. 실험 방법은 다음과 같다.

각 조에 제형예 1~6및 비교제형예 1~2의 크림올 각각 나누어 주고 매일 1 회씩 12주간 안면에 도포하게 한 후， 피부탄력측정기 (Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co. , Germany)를 이용하여 피부탄력올 측정하였다. 그 결과는 하기 표 10에 나타내었다. 표 10의 결과값은 Cutometer SEM 575의 AR8(R8(왼쪽) -R8(오른 쪽)) 값으로 기재하였는데, R8 값은 피부 점탄성 (viscoelasticity)의 성질을 나타 낸다.

【표 10】

상기 표 10의 결과를 보면， 본 발명에 의한추출 과정을 거쳐 제조한 실시예 1~6의 닥나무 추출물올 포함하는 제형예 1~6의 피부 탄력 개선 효과가우수함을 확인할 수 있었다.

따라서， 본 발명의 닥나무 추출물올 함유하는 화장료 조성물은 피부 탄력 향 상에 매우 효과적임올 확인할수 있다.

[시험예 9] 본 발명에 의한 닥나무 발효추출물의 피부 보습 효과

본 발명에 의한 닥나무 발효추출물이 피부 보습력 증가에 미치는 효과를 측 정하기 위하여， 피부 건조증을 나타내는 40~50대의 성인 남녀 180명올 9개 조로 나누어 각 조에 제형예 7〜： L3 및 비교제형예 1~2를 매일 2회씩 4주간 안면에 도포 하였다. 도포 개시 전과， 도포 후 1주， 2주， 4주 경과한 시점 및 도포를 중지한 2 주 경과 (총 6주 경과) 후에 항온， 항습 조건 (24^°C, 상대습도 40%)에서 코니오미터 로 피부 수분량올 측정하였으며， 그 결과를 하기 표 11에 나타내었다. 코니오미터 는 표피의 전기전도도 값올 측정하여 피부에 존재하는 수분량올 측정하는 피부 수 분 측정기이다. 시험결과는 시험개시 직전에 측정한 코니오미터 값을 기준으로 하 여 일정기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 표시한 것이다.

【표 11】

시험물질 수분 증가율 (%)

1주 경과 2주 경과 4주 경과 6주 경과 제형예 7 33 41 42 31

제형예 8 32 40 42 30

제형예 9 33 39 40 29

제형예 10 30 36 38 30

제형예 11 31 37 37 32

체 예 12 31 37 40 31

제형예 13 32 38 38 29

비교제형예 1 30 32 32 15

비교제형예 2 32 35 38 26

상기 표 11의 결과에서， 본 발명에 의한 발효과정올 거쳐 제조한 실시예

7~13의 닥나무 발효추출물을 포함하는 제형예 7~13의 피부 수분 증가율이 우수함 을 확인할 수 있었다. 또한， 제형예 7~13의 영양크림의 도포를 증지한 후에도 피부 수분올 측정한수치가도포 후 1주와유사하게 나타나， 실시예를 도포하지 않아도 일정 기간 동안 피부 수분이 지속적으로 유지됨을 알수 있었다.

[시험예 10] 본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물의 피부 주름 개선 효과

본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물이 피부 주름 개선에 미치는 효과를 측정 하기 위하여， 30~50세의 안면주름이 있는 시험대상자 90명을 대상으로 피부 주름 개선 효과를 비교 평가하였다.

크림 사용 이전의 안면 양쪽부의 피부 상태를 측정해 놓은 다음 각 시험대상 자들에게 제형예 7~13 및 비교제형예 1~2의 크림올 3개월간 사용하도록 한 후 동 일 부위를 재측정하여 피부 주름의 변화량을 측정하였으며， 그 결과를 하기 표 12 에 나타내었다. 24^°C, 상대습도 40%의 항온항습실에서 눈꼬리 부위의 주름을 레플 리카 (replica)로 떠서 비시오메타 시스템 (Visiometer system; C+K사)으로 피부 주 름을 측정하였다. 피부 주름의 변화량은 상기 수학식 3에 따라 계산하였다.

【표 12】

丄

상기 표 12의 결과에서， 본 발명에 의한 발효 과정을 거쳐 제조한 실시예 7~13의 닥나무 발효 추출물을 포함하는 제형예 7~13의 피부 주름 개선 효과가 우수 함올 확인할 수 있었다.

[시험예 11] 피부 탄력 향상 효능 확인

피부 탄력 향상 효능 확인을 위하여 제형예 7~13 및 비교제형예 1~2의 크림 을 30~40대 여성 180명을 대상으로 20명을 1조로 하여 9개 조로 나누어 측정하였 다. 실험 방법은 다음과 같다.

각 조에 제형예 7~13 및 비교제형예 1~2의 크림을 각각 나누어 주고 매일 1 회씩 12주간 안면에 도포하게 한 후， 피부탄력측정기 (Cutometer SEM 575, C+ Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 그 결과는 하기 표 13에 나타내었다. 표 13의 결과값은 Cutometer SEM 575의 AR8(R8(왼쪽) -R8(오른 쪽)) 값으로 기재하였는데， R8 값은 피부 점탄성 (viscoelasticity)의 성질을 나타 낸다.

【표 13】

상기 표 13의 결과를 보면， 본 발명에 의한 발효 과정올 거쳐 제조한 실시예 7~13의 닥나무 발효추출물올 포함하는 제형예 7~13의 피부 탄력 개선 효과가우수 함올 확인할 수 있었다.

따라서， 본 발명의 닥나무 발효 추출물올 함유하는 화장료 조성물은 피부 탄 력 향상에 매우 효과적임을 확인할 수 있다.

Claims

【청구의 범위】

【청구항 1】

닥나무의 뿌리， 줄기， 잎， 꽃 및 열매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 초고압， 초임계 또는 오일 추출법으로 추출하는 단계를 포함하는 닥나무 추출물의 제조방법.

【청구항 2]

제 1항에 있어서，

상기 닥나무의 뿌리， 줄기, 잎， 꽃 및 열매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상올 물 또는 C1 내지 C5의 저급 알코올올 이용하여 유효성분을 추출하는 단계를 더 포함하는 닥나무 추출물의 제조방법■

【청구항 3]

제 2 항에 있어서，

상기 저급 알코올을 이용한 추출 과정은 초고압， 초임계 또는 오일 추출과 동시에 또는 순차적으로 진행되는 것인 닥나무 추출물의 제조방법.

【청구항 4]

제 1항에 있어서，

상기 초고압 추출법은 70 내지 200 Mpa의 압력으로 1분 내지 15분간 처리하 는 것인 닥나무 추출물의 제조방법.

【청구항 5]

제 1항에 있어서，

상기 초임계 추출법은 20~40^°C, 70~200 bar의 압력 하에서 처리하는 것인 닥나무 추출물의 제조방법 .

【청구항 6]

제 5항에 있어서，

상기 초임계 유체는 이산화탄소， 질소， 아산화질소, 메탄， 에틸렌， 프로판 또는 프로필렌인 닥나무 추출물의 제조방법.

【청구항 7]

저 1 1항에 있어서，

상기 오일 추출법은 식물유를 첨가하여 40~70^°C, 2~10 압력에서 2~12시간 동안 처리하는 것인 닥나무 추출물의 제조방법.

【청구항 8]

제 7항에 있어서， 상기 식물유는 콩기름 또는 참기름인 닥나무 추출물의 제조방법.

【청구항 9】

제 1항 내지 제 8항 증 어느 하나의 항에 따라 제조된 닥나무추출물올 포함 하는 화장료 조성물.

【청구항 10]

제 9항에 있어서，

상기 조성물은 미백， 항노화， 항주름， 보습 또는 탄력 개선용인 화장료 조성 물

【청구항 11】

닥나무 또는 그추출물을 자연발효， 균발효 또는 염장발효시키는 발효방법.

【청구항 12】

저 1 11항에 있어서,

상기 자연발효는 닥나무 또는 그 추출물을 당 성분과 흔합하여 발효시키는 것인 발효방법 .

【청구항 13】

제 11항에 있어서，

상기 당 성분은 자당， 자일리를, 올리고당， 식이섬유， 에리스리틀， 포도당 및 과당으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 발효방법.

【청구항 14]

제 11항에 있어서，

상기 균발효는 닥나무 또는 그 추출물에 발효 균주를 접종하여 10~60^°C에서 18시간 내지 100일간 발효시키는 것인 발효방법 .

【청구항 15]

제 14항에 있어서，

상기 발효 균주는 효모균， 버섯균， 유산균， 누룩균 및 바실러스속균 (고초균) 으로 이루어진 군에서 선택된 것인 발효방법 .

【청구항 16]

제 11항에 있어서， 상기 염장발효는

1) 닥나무 또는 그 추출물에 소금올 첨가하여 장기 숙성 발효시키는 단계;

2) 상기 염장 발효물을 물 또는 유기용매로 추출하여 발효 추출물을 수득하 는 단계; 를 포함하는 것 인 발효방법ᅳ

【청구항 17】

제 16항에 있어서，

상기 1) 단계에서 사용하는 소금은 고순도 염화나트륨， 천일염， 암염 및 죽 염으로 이루어진 군에서 선택된 것인 발효방법 .

【청구항 18]

제 16항에 있어서，

상기 1) 단계에서 소금의 사용량은 발효물 총 증량에 대하여 10~30 증량 % 인 발효방법 .

【청구항 19]

제 16항에 있어서，

상기 2) 단계에서 사용하는 유기용매는 메탄올， 에탄올， 글리세린， 에틸아세 테이트， 부틸렌글리콜， 프로필렌글리콜， 디클로로메탄 및 핵산으로 이루어진 군에 서 선택된 1종 이상인 발효방법 .

【청구항 20]

제 16항에 있어서，

상기 1) 단계의 발효 공정은 4~40 :에서 30일 내지 1년간 발효시 키는 것인 발효방법 .

【청구항 21]

제 11항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 의 한 발효방법으로 제조된 닥나무 발 효 추출물 .

【청구항 22]

제 21항에 따른 닥나무 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물 .

【청구항 23]

제 22항에 있어서，

상기 조성물은 미 백， 항노화， 항주름， 보습 또는 탄력 개선용인 화장료 조성