WO2011153817A1 - 用作黑皮素4受体激动剂的环肽 - Google Patents

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WO2011153817A1
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dcpa
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刘克良
冯思良
贾启燕
梁远军
孟庆斌
韩寒
许笑宇
魏晓莉
郑建全
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中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
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    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • a cyclic peptide for use as a melanocortin 4 receptor agonist for use as a melanocortin 4 receptor agonist
  • the present invention belongs to the field of pharmaceutical and chemical engineering, and relates to a cyclic peptide derivative represented by the formula (1), or a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic; these compounds have MC4-R agonistic activity.
  • the present invention also relates to pharmaceutical compositions containing these compounds and the use of these compounds in the manufacture of a medicament for the treatment of diseases such as obesity or sexual dysfunction.
  • obesity is one of the well-known factors of common diseases such as arteriosclerosis, hypertension, heart disease and type I diabetes, and sexual dysfunction also seriously affects patients' physical and mental health and family happiness.
  • Ct-MSH is an endogenous linear tripeptide derived from pre-opiomelanocortin (P0MC).
  • P0MC pre-opiomelanocortin
  • a -MSH is a linear thirteen peptide with an amide structure at the C-terminus and an acetylated N-terminus.
  • the primary structure of oc-MSH is as follows:
  • One aspect of the invention relates to a cyclic peptide derivative represented by the formula (1), or a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic,
  • R is selected from the group consisting of H -, 11 ⁇ (0)-, R!R 2 C(0)-, RjR C (0)-, Biotin -, tert-butoxycarbonyl (Boc), and hydrazine represented by formula (2) Methoxycarbonyl (Fmoc), wherein ⁇ and 11 2 are each independently selected from H, halogen, substituted or unsubstituted dC 6 straight or branched alkyl, substituted or unsubstituted C 2 -C 6 straight or branched alkenyl or alkynyl, substituted Or unsubstituted chain or branched alkoxy, substituted or unsubstituted dC ⁇ straight or branched alkylthio, substituted or unsubstituted C 2 -C 6 straight or branched fluorenyl or alkynyloxy , substituted or unsubstituted C 2 -linear or branched alkenylthio or alkynyl
  • Z is -0H or -NR 3 R 4 , wherein R 3 and R 4 are each independently H -, R -, ⁇ 2 ( ⁇ 0)-, R!R 2 NC (0)-, wherein 1 ⁇ and 11 2
  • R 3 and R 4 are each independently H -, R -, ⁇ 2 ( ⁇ 0)-, R!R 2 NC (0)-, wherein 1 ⁇ and 11 2
  • the definition is as described above;
  • Xaal is selected from the group consisting of L or D leucine residues (Leu), isoleucine residues (lie), norleucine residues (Nle), and structures - NH-(CH 2 ) nl - CO- , where nl is an integer from 1 to 5;
  • Xaa2 is selected from the structures of formula (3) - formula (6) of L or D type, wherein n2
  • - n5 are each independently selected from an integer of 1 - 5;
  • Xaa3 is an L or D type of His, or a structure represented by the formula (7), wherein R 5 is selected from - 2 , -NHC (0) NR ⁇ , and -NH-C(0)R"
  • R 5 is selected from - 2 , -NHC (0) NR ⁇ , and -NH-C(0)R"
  • 1 ⁇ and R 2 are the same as previously described;
  • Xaa is D type
  • Xaa5 is selected from the group consisting of the formula (8) of the formula L (L) or the formula (11), wherein n6 - n9 are each independently selected from an integer of from 1 to 5;
  • the cyclic peptide derivative represented by the formula (1), or a stereoisomer thereof, or a physiologically toxic salt thereof has good MC4-R agonistic activity and has good stability. Therefore, the cyclic peptide derivative represented by the formula (1), or a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic can be used as a medicament for the treatment of obesity and related diseases and sexual dysfunction.
  • ring means a ring formed by an amide bond (-C0-NH-) or a disulfide bond (-S-S-).
  • the R is Biotin-
  • Xaa2 is a structure represented by Formula (3) or Formula (4)
  • Xaa5 is a structure represented by Formula (8) or Formula (9)
  • Xaa2 Is the structure shown by formula (5) or (6)
  • Xaa5 is a formula (10) or the structure shown in equation (11).
  • the R is selected from the group consisting of H -, R CO)-, C (0)-, tert-butoxycarbonyl ( Boc ), and fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc ),
  • Xaa2 is a formula (3) ) the structure shown and Xaa5 is a structure represented by the formula (9), or Xaa2 is a structure represented by the formula (4) and Xaa5 is a structure represented by the formula (8) or the formula (9), or X aa2 is a formula (5)
  • the structure shown and Xaa5 is a structure represented by the formula (11), or Xaa2 is a structure represented by the formula (6) and Xaa5 is a structure represented by the formula (10) or the formula (11).
  • the 1 15 is 11.
  • the R is acetyl C-) or Biotin-
  • Z is -NH 2
  • Xaal is L-Nle or Aca
  • Xaa2 is L-Asp
  • L-Cys L-hCys > NAsp or NhCys
  • Xaa5 is L-Lys
  • L-Cys L-hCys
  • Xaa3 is L-His or L-Tal
  • Xaa4 is D-Phe or D-Cpa.
  • the cyclic peptide derivative is selected from the group consisting of:
  • Biotin- Nle-loop (NAsp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH 2 ( 21 ) Biotin-Nle-loop (NAsp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH 2 (22) Biotin-Nle-loop (Cys-His-DCpa- Arg-Trp-NhCys) -NH 2 ( 23 ) Biotin- Nle - loop (NhCys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH 2 ( 24 ) Biotin-Nle-loop (NhCys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH 2 ( 25 ) Biotin- Nle-loop (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH 2 ( 26 ) Biotin-Nle- ring (C
  • Biotin-Nle-loop (Cys-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH 2 Biotin-Nle-loop (hCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH 2 Biotin-Nle-loop (Cys -Tal-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH 2 Biotin-Nle - loop (hCys-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH 2 Ac- Aca - loop (Asp-H is-DPhe-Arg -Trp-NLys)-NH 2
  • Biotin-Aca-loop (Cys-Tab DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH 2 ( 125 ) Biotin-Aca-loop (NhCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH 2 ( 126 ) Biotin-Aca-loop (NhCy s-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -
  • Biotin-Aca-loop (Asp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys)-NH 2 ( 128 ) Biotin-Aca-loop (Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH 2 ( 129 ) Biotin-Aca-loop (hCys-Ta l-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH 2
  • the invention is selected from the group consisting of the above compounds 1, 2, 3, 4, 5, 10, 14, 16, 17, 20, 23, 25, 27, 30, 32, 36, 38, 39, 42, 45, 48, 54, 69, 70, 71, 72, 73, 78, 82, 84, 85, 88, 91, 93, 95, 98, 100, 104, 106, 107, 110, 112, 113, 116, and 122.
  • a pharmaceutical composition comprising any one of the above-described cyclic peptide derivatives, or a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic, and optionally, may further contain a pharmaceutically acceptable Acceptable carrier or excipient.
  • a further aspect of the invention relates to the use of the above cyclic peptide derivative, or a stereoisomer thereof, or a physiologically toxic salt thereof, as an MC4-R agonist.
  • a further aspect of the invention relates to a method for modulating MC4-R activity in vivo or in vitro, comprising using an effective amount of a cyclic peptide derivative according to any one of the invention, or a stereoisomer thereof, or The step of physiologically toxic salts.
  • Still another aspect of the present invention relates to the above cyclic peptide derivative, or a stereoisomer thereof, or a physiologically toxic salt thereof, for the preparation of a therapeutic and/or prophylactic agent for obesity, hypertension, atherosclerosis, heart disease, or II Use in drugs for type 2 diabetes.
  • a further aspect of the invention relates to the use of the above cyclic peptide derivative, or a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic, for the preparation of a medicament for the treatment and/or prevention of sexual dysfunction.
  • a further aspect of the invention relates to a method of treating or adjunctively treating and/or preventing sexual dysfunction in a mammal, including a human, comprising administering an effective amount of a cyclic peptide derivative of the invention, or a stereoisomer thereof a body, or a salt thereof that is not physiologically toxic, or a pharmaceutical composition of the invention.
  • a further aspect of the invention relates to a method of treating or adjunctively treating and/or preventing obesity, hypertension, atherosclerosis, heart disease, or type II diabetes in a mammal, including a human, comprising administering an effective amount Cyclopeptide derivative of the present invention Or a stereoisomer thereof, or a salt thereof which is not physiologically toxic, or a pharmaceutical composition of the invention.
  • the disease such as obesity, hypertension, atherosclerosis, heart disease, type II diabetes, or sexual dysfunction, specifically, refers to an MC4-R related disease such as MC4-R abnormality or MC4 -R activity abnormalities result in obesity, hypertension, atherosclerosis, heart disease, type 2 diabetes, or sexual dysfunction.
  • each active ingredient in the pharmaceutical compositions of the present invention can be varied so that the resulting amount of active compound is effective to provide the desired therapeutic response to the particular patient, composition, and mode of administration.
  • the dosage level will be selected based on the activity of the particular compound, the route of administration, the severity of the condition being treated, and the condition and past medical history of the patient to be treated. However, it is the practice in the art that the dosage of the compound be started from a level lower than that required to achieve the desired therapeutic effect, and the dosage is gradually increased until the desired effect is obtained.
  • a compound of the invention refers to a sufficient amount of a compound to treat the disorder in a reasonable effect/risk ratio suitable for any medical treatment and/or prevention. It will be appreciated, however, that the total daily usage of the compounds and compositions of the present invention will be decided by the attending physician within the scope of sound medical judgment.
  • the specific therapeutically effective dose level will depend on a number of factors, including the disorder being treated and the severity of the disorder; the activity of the particular compound employed; Composition; age, weight, general health, sex and diet of the patient; time of administration, route of administration and excretion rate of the particular compound employed; duration of treatment; use in combination or concurrent use with the particular compound employed Drugs; and similar factors well known in the medical field. For example, it is practiced in the art that the dose of the compound begins at a level lower than that required to achieve the desired therapeutic effect, gradually increasing the dosage until To the desired effect. The invention is further described below.
  • alkyl refers to an aliphatic hydrocarbon group which may be from about 1 to about 15 carbon atoms in a straight or branched chain, optionally substituted by one or more halogens. Atomic substitution. In particular it has from 1 to about 6 carbon atoms.
  • alkyl groups include mercapto, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, 3-pentyl, heptyl, octyl, decyl, decyl And dodecyl.
  • alkyl group substituted by one or more halogen atoms include a trifluoromethyl group.
  • the alkyl group may also be independently selected from one, two, three or four selected from the group consisting of
  • alkoxy refers to an alkyl-O- group wherein the alkyl group is as described herein.
  • alkoxy groups include difluorodecyloxy, methoxy, trifluoromethoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy and heptyloxy.
  • halogen includes fluorine, chlorine, bromine and hydrazine, preferably fluorine, chlorine and bromine.
  • cycloalkyl refers to a saturated monocyclic or bicyclic ring system of from about 3 to about 10 carbon atoms, optionally substituted with oxygen.
  • exemplary monocyclic cycloalkyl rings include C 3 -s cycloalkyl rings such as cyclopropyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
  • the cycloalkyl group may be independently selected from the group consisting of halogen, nitro, amino, hydroxy, carboxy, C" alkane by 1, 2, 3 or 4 Substituent substituted with a substituent of dC 4 alkoxy.
  • aryl is a 6-14 membered monocyclic or bicyclic aromatic group, such as phenyl or naphthyl, which is unsubstituted or independently selected from the group consisting of 3 ⁇ 4 , nitro, carboxy or d-C4 alkyl. a substituent mono- or di- or tri-substituted;
  • heteroaryl is a 4-10 membered monocyclic or bicyclic aromatic group containing from 1 to 5 heteroatoms independently selected from N, 0 and S, such as pyrrolyl, furyl, pyridyl, etc., which are not Monosubstituted or disubstituted substituted or substituted with a substituent independently selected from a steroid, a nitro group, a carboxy group, or a dC 4 alkyl group;
  • heterocyclyl is a non-aromatic cyclic group containing from 1 to 5, preferably from 1 to 3, heteroatoms independently selected from N, 0 and S in its ring structure, such as pyranyl, piperidinyl. And the like, which is unsubstituted or monosubstituted or disubstituted or trisubstituted by a substituent independently selected from a ⁇ , nitro, carboxy or dC 4 alkyl group.
  • the solid phase synthesis carrier MBH A resin and PAM resin used in the examples are products of Tianjin Nankai Synthetic Co., Ltd.; DCC, H0BT, BOP, DIEA and protected natural amino acids are products of Shanghai Jill Biochemical Co., Ltd. and Chengdu Chengnuo New Technology Co., Ltd. Protected non-natural amino acids are provided by our laboratory, except as indicated.
  • the above peptide resin was placed in a reactor of an HF cutter, and 0.5 mL of anisole and about 10 mL of liquid HF were added, and reacted at O'C for 40 minutes.
  • the HF was pumped off with an oil pump, the reactor was removed, cold solid diethyl ether was added to precipitate a solid, and the suspension was transferred to a sand core funnel.
  • the product was washed three times with a small amount of cold anhydrous diethyl ether, and then the product was eluted with a 10% aqueous acetic acid solution (150 mL), and lyophilized to give a white fluffy solid crude peptide (212 mg).
  • MBHA resin (0.54mmol/g) was used as the solid phase carrier, BOP/DIEA was used as the condensing agent, and Ac-Nle was synthesized according to the amino acid sequence of the compound according to the standard Fmoc solid phase peptide synthesis method (Reference 1 and Example 1). - Ring (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-Lys)-MBHA resin.
  • the above peptide resin was placed in a reactor of an HF cutter, and 0.5 mL of anisole and about 10 mL of liquid HF were added, and reacted at O'C for 40 minutes. Remove the HF with an oil pump and remove The reactor was precipitated by adding cold anhydrous ether and the suspension was transferred to a sand funnel. It was washed three times with a small amount of cold anhydrous diethyl ether, and then the product was eluted with a 10% aqueous solution of acetic acid (150 mL), and lyophilized to give a white fluffy solid crude peptide 196 mg.
  • MBHA resin 390mg MBHA resin (0.54mmol/g) was used as the solid phase carrier, BOP/DIEA was used as the condensing agent, and Ac-Nle was synthesized according to the amino acid sequence of the compound according to the standard Fmoc solid phase peptide synthesis method (Reference 1 and Example 1). - Ring (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-NLys)-MBHA resin.
  • the above peptide resin was placed in a reactor of an HF cutter, and 0.5 mL of phenyl ether ether and about 10 mL of liquid HF were added at 0. C reaction for 40 minutes.
  • the HF was pumped off with an oil pump, the reactor was removed, cold solid diethyl ether was added to precipitate a solid, and the suspension was transferred to a sand core funnel. It was washed three times with a small amount of cold anhydrous diethyl ether, and then the product was eluted with a 10% aqueous acetic acid solution (150 mL), and lyophilized to give a white fluffy solid crude peptide 196 mg.
  • the peptide resin was cleaved with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 176 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% aqueous ammonia, and the solution slightly changed to pink.
  • 100 mg of potassium ferricyanide was added under magnetic stirring at room temperature, and the solution turned yellow.
  • the progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min.
  • About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution disappeared yellow; filtered, washed with water 20 mL x 2 times.
  • the aqueous solution was combined, directly subjected to medium pressure separation and purification, and lyophilized.
  • 390mg MBHA resin (0.54mmol/g) was used as the solid phase carrier, and B0P/DIEA was used as the condensing agent.
  • B0P/DIEA was used as the condensing agent.
  • Ac-Nle was synthesized according to the standard Fmoc solid phase peptide synthesis method (Reference 1 and Example 1). -NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys-MBHA resin.
  • the peptide resin was cleaved with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 185 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% aqueous ammonia, and the solution slightly changed to pink. 100 mg of potassium ferricyanide was added under magnetic stirring at room temperature, and the solution turned yellow. The progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min. About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution disappeared yellow; filtered, washed with water 20 mL x 2 times.
  • Example 6 Synthesis of compound Ac- Nle-ring (Cys-His-Dc- Arg-Trp-NhCys) -NHj UP) 390mg MBHA resin (0.54mmol/g) was used as the solid phase carrier, BOP/DIEA was used as the condensing agent, and Ac-Nle was synthesized according to the amino acid sequence of the compound according to the standard Fmoc solid phase peptide synthesis method (Reference 1 and Example 1). -Cys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys-MBHA resin.
  • the peptide resin was dried and then cleaved with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 192 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% aqueous ammonia, and the solution slightly changed to pink.
  • the potassium ferricyanide 100 mg was added under magnetic stirring at room temperature, and the solution turned yellow. The progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min. About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution disappeared yellow; filtered, washed with water 20 mL x 2 times.
  • 390mg MBHA resin (0.54mmol/g) was used as the solid phase carrier, and BOP/DIEA was used as the condensing agent.
  • the standard Fmoc solid phase peptide synthesis method (Reference 1 and Example 1) was used to synthesize Biotin-Nle. - Ring (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-Lys) - MBHA resin.
  • the above peptide resin was placed in a reactor of an HF cutter, and 0.5 mL of phenylhydrazine ether and about 10 mL of liquid HF were added, and reacted at 0 ° C for 40 minutes.
  • the HF was pumped off with an oil pump, the reactor was removed, cold solid diethyl ether was added to precipitate a solid, and the suspension was transferred to a sand core funnel. It was washed three times with a small amount of cold anhydrous diethyl ether, and then the product was eluted with a 10% aqueous acetic acid solution (150 mL), and lyophilized to give a white fluffy solid crude peptide 210 mg.
  • the peptide resin was cleaved with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 201 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% aqueous ammonia, and the solution slightly changed to pink.
  • 100 mg of potassium ferricyanide was added under a magnetic stirrer at room temperature, and the solution turned yellow. The progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min. About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution disappeared yellow; filtered, washed with water 20 mL x 2 times.
  • the above peptide resin was placed in a reactor of an HF cutter, and 0.5 mL of anisole and about 10 mL of liquid HF were added and reacted at 0 ° C for 40 minutes.
  • the HF was pumped off with an oil pump, the reactor was removed, cold solid diethyl ether was added to precipitate a solid, and the suspension was transferred to a sand core funnel. It was washed three times with a small amount of cold anhydrous diethyl ether, and then the product was eluted with a 10% aqueous acetic acid solution (150 mL), and lyophilized to give a white fluffy solid crude peptide 210 mg.
  • the peptide resin was cleaved with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 201 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% aqueous ammonia, and the solution slightly changed to pink.
  • the potassium ferricyanide 100 mg was added under magnetic stirring at room temperature, and the solution turned yellow.
  • the progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min.
  • About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution yellow disappeared; filtered, and washed with water 20 mL > 2 times.
  • the peptide resin After drying the peptide resin, it is cleaved with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 192 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% ammonia water, and the solution is slightly pinkish. Color.
  • the potassium ferricyanide 100 mg was added under magnetic stirring at room temperature, and the solution turned yellow. The progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min. About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution disappeared yellow; filtered, washed with water 20 mL x 2 times. The aqueous solution was combined, directly subjected to medium pressure separation and purification, and lyophilized.
  • 390mg MBHA resin (0.54mmol/g) was used as the solid phase carrier, BOP/DIEA was used as the condensing agent, and Ac-Aca was synthesized according to the amino acid sequence of the compound according to the standard Fmoc solid phase peptide synthesis method (Reference 1 and Example 1). -Cys- His-DCpa- Arg-Trp- NhCys-MBHA resin.
  • the peptide resin was lysed with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 185 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% aqueous ammonia, and the solution slightly changed to pink.
  • the potassium ferricyanide 100 mg was added under magnetic stirring at room temperature, and the solution turned yellow.
  • the progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min.
  • About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution disappeared yellow; filtered, washed with water 20 mL x 2 times.
  • 390mg MBHA resin (0.54mmol/g) was used as the solid phase carrier, BOP/DIEA was used as the condensing agent, and Ac-Aca was synthesized according to the amino acid sequence of the compound according to the standard Fmoc solid phase peptide synthesis method (Reference 1 and Example 1). -Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-NhCys-MBHA resin. After drying the peptide resin, it is cleaved with anhydrous hydrogen fluoride and lyophilized to obtain a linear precursor crude peptide.
  • the peptide resin was cleaved with anhydrous hydrogen fluoride, and lyophilized to obtain 207 mg of the linear precursor crude peptide, dissolved in 100 mL of water, adjusted to pH 8.4 with 10% aqueous ammonia, and the solution was slightly pinkish.
  • the ferric cyanide clock lOOmg was added under magnetic stirring at room temperature, and the solution turned yellow. The progress of the reaction was monitored by HPLC and the reaction was completed in about 10 min. About 10 g of anion exchange resin was added, and after stirring at room temperature for about 20 minutes, the solution disappeared yellow; filtered, washed with water 20 mL x 2 times.
  • MATERIALS MC4-R-rich membrane proteins extracted from rat brain tissue; [ 125 1]- NDP- ⁇ -MSH, PerkinElmer.
  • Experimental principle Using the high affinity, specificity, saturation, reversibility of receptor-ligand binding and the high sensitivity of radionuclide measurement, the receptor and its labeled ligand can be combined under certain conditions. When the equilibrium is reached or at different time points, the reaction is terminated, and the free labeled ligands which have specifically bound to the receptor are separated, and the radioactivity of the two is measured, and the concentration is calculated.
  • ELISA kit manufactured by NewEas t Biosc iences, Wuhan, and MC4-R transfected HEK293 (human embryonic kidney 293) cells.
  • the method of transfection can be carried out by referring to techniques known to those skilled in the art, for example, referring to the section on cell transfection in the Guide to Molecular Cloning (L. Sambrook et al., translated by Huang Peitang et al., Third Edition, Science Press). .

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Description

用作黑皮素 4受体激动剂的环肽
技术领域
本发明属于医药化工领域， 涉及式 （1 ) 所示的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生理毒性的盐； 这些化合物具有 MC4-R 激动活性。 本发明还涉及含有这些化合物的药物组合物及这些化 合物在制备治疗肥胖或性功能障碍等疾病的药物中的用途。
R-Xaal -环 ( Xaa2-Xaa3-Xaa4-Arg-Trp-Xaa5 ) -Z 式（ 1 ) 背景技术
随着社会和生活方式的变化， 一些疾病例如肥胖或性功能障碍 都日益凸显。 其中， 肥胖是众所周知的导 动脉硬化、 高血压、 心 脏病以及 I I型糖尿病等常见疾病的因素之一， 而性功能障碍也严 重影响到患者的身心健康和家庭幸福。
仅仅是轻微肥胖就会增加患糖尿病、 高血压等疾病的几率， 然 而目前市场上用于治疗肥胖的有效药物只有少数几个， 例如西布曲 明 （S ibutramine )和奥利司他 ( Or l i s tat ) ， 而且都存在停药反 弹的缺点； 治疗性功能障碍的一线药物为西地那非等磷酸二酯酶抑 制剂， 但此类药物对女性患者无效， 而且部分患者报道响应逐渐消 失。 因此新的治疗肥胖和性功能障碍的药物的研发是必须和当务之 急的， 具有十分广阔的前景。
ct -MSH是一种源于前阿黑皮素 （P0MC ) 的内源性线型十三肽。 早在 20世纪 50年代， 人们就发现， 对狗、 猴、 猫以及兔子等中枢 给予 α -MSH 后能引起其性兴奋， 其作用机理是通过作用于 MC4-R 而产生调节性行为效应。 研究表明， MC4- R激动剂在治疗肥胖以及 性功能障碍等方面有潜在的应用价值（Van P L， Mart in W J, Howard A D， et al.. A role for the melanocortin 4 receptor in sexual function, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2002， 99(17): 11381-11386; Martin W J， Macintyre D E. Melanocortin receptors and erectile function. European Urology, 2004, 45 (6): 706-713. )。
a -MSH是一个线状十三肽， C端为酰胺结构， N端乙酰化。 oc -MSH的一级结构如下：
Ac-Ser^Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe'-Arg^Trp'-Gly^-Lys11 -Pro12-Val13-NH2
后来人们研究发现， a -MSH 的最小活性序列 为 His6-Phe7-Arg8-Trp9 e 围绕着此药效团， 人们设计合成了一系列此 类化合物， 包括线性肽和环肽， 在治疗肥胖以及性功能障碍方面有 一定的效果。 其中， 美国 Palatin公司开发的环七肽 MC4- R激动剂 PT - 141 ( Bremelanotide ) 正在进行 II 期临床研究 （Palatin Technologies Inc. , PRESS RELEASE on Febrary 16， 2010. ) 。 由于半衰期短或毒副作用较大（如导致血压升高）等原因， 目前此 类化合物还没有一种上市。 因此， 在保持活性的同时， 适当提高化 合物的半衰期、 降低毒副作用是十分重要的。 发明内容
本发明的一个方面涉及式（1)所示的环肽衍生物、 或其立体 异构体、 或其无生理毒性的盐，
R— Xaal-环 （ Xaa2- Xaa3-Xaa4-Arg-Trp-Xaa5 ) - Z 式 （ 1 ) 其中，
R选自 H -、 11^(0)-、 R!R2C(0)-, RjR C (0)-, 式（2)所示的 Biotin -、 叔丁氧羰基（Boc) 、 和芜甲氧羰基（ Fmoc ) ， 其中， ^和112分别独立地选自 H、 卤素、 取代或未取代的 d-C6直链或者 支链烷基、取代或未取代的 C2-C6直链或者支链烯基或者炔基、取 代或未取代的 链或者支链烷氧基、 取代或未取代的 d-C^ 直链或者支链烷硫基、取代或未取代的 C2-C6直链或者支链浠基或 者炔基氧基、取代或未取代的 C2- 直链或者支链烯硫基或者炔硫 基， C3-C8环烷基、 03-(8环烯基、 C6-C14芳基、 杂芳基、 和（：3-(8杂 环基；
Figure imgf000004_0001
式 （2)
Z为 -0H或- NR3R4，其中 R3、R4各自独立地为 H -、 R广、 Μ2(Η0)-、 R!R2NC (0)-, 其中 1^和112的定义同前面所述；
Xaal选自 L或 D型的亮氨酸残基（Leu)、异亮氨酸残基（ lie), 正亮氨酸残基（Nle) 、 和结构 - NH-(CH2)nl- CO-， 其中， nl 为 1 - 5的整数；
Xaa2选自 L或 D型的式（3) -式（6)所示的结构， 其中 n2
- n5分别独立地选自 1 - 5的整数；
― N -CO― 式 （4)
― N
Figure imgf000004_0002
-CO— 式 （ 6 )
Xaa3为 L或 D型的 His、 或式 （7) 所示的结构， 其中， R5 选自 - 2、 -NHC (0) NR^, 和 -NH-C(0)R" 其中 1^和 R2的定义同前面所述；
： ! 側
式 （7)
Xaa 为 D 型的
Figure imgf000005_0001
-NHC(0)NR!R2, -CCONRiRa, 和 -NH-d , 其中 和112的定义同 前面所述；
Xaa5选自 L或 D型的式 （8) -式 （11) 所示的结构， 其中 n6 - n9分别独立地选自 1 - 5的整数；
NH2 H2
(CH2)n6 (c )n7
― NH-CH-CO— 式 （8) ― N-CH2-CO― 式 （9)
— N
Figure imgf000005_0002
-CO― 式 （ 11 )
式（ 1 )所示的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生理毒 性的盐具有良好的 MC4-R激动活性， 同时具有较好的稳定性。 因 此式（ 1 )所示的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生理毒性 的盐可作为药物用于肥胖及相关疾病以及性功能障碍的治疗。 其 中， "环" 表示通过酰胺键（-C0-NH- )或二硫键（- S- S- )成环。
在本发明的一个实施方案中， 所述 R为 Biotin-, Xaa2为式 (3)或式（4)所示的结构并且 Xaa5为式（8)或式（9)所示的 结构， 或者 Xaa2为式 （ 5 ) 或式 （ 6 ) 所示的结构并且 Xaa5为式 (10) 或式 （11) 所示的结构。
在本发明的一个实施方案中， 所述 R 选自 H -、 R CO)-, C (0)-, 叔丁氧羰基 ( Boc ) 、 和芜甲氧羰基 ( Fmoc ) ， Xaa2 为式（ 3 )所示的结构并且 Xaa5为式（ 9 )所示的结构， 或者 Xaa2 为式（4)所示的结构并且 Xaa5为式（8)或式（9)所示的结构， 或者 X aa2为式 （5) 所示的结构并且 Xaa5为式 （11) 所示的结 构，或者 Xaa2为式（ 6 )所示的结构并且 Xaa5为式（ 10)或式（ 11 ) 所示的结构。
在本发明的一个实施方案中， 所述 115为 11。
在本发明的一个实施方案中， 所述 R 为乙酰基 C-) 或 Biotin-, Z为 -NH2， Xaal为 L-Nle或 Aca, Xaa2为 L-Asp, L-Cys, L-hCys> NAsp或 NhCys, Xaa5为 L-Lys, L-Cys, L-hCys, NLys 或 NhCys, Xaa3为 L- His或 L-Tal， Xaa4为 D- Phe或 D-Cpa。
在本发明的一个实施方案中， 所述环肽衍生物选自如下的化 合物：
( I ) Ac- Nle-环（Asp-His- DPhe-Arg-Trp- NLys) -NH2
(2 ) Ac- Nle -环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-Lys)-NH2
( 3) Ac-Nle-环（NAsp-His- DPhe- Arg- Trp-NLys)-NH2
( 4 ) Ac- Nle-环（Cys- His-DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2
( 5 ) Ac-Nle-环（NhCys-His-DPhe- Arg-Trp- Cys)-NH2
( 6 ) Ac-Nle-环（NhCys-His- DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2 ( 7 ) Ac- Nle -环 (Asp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-NLys)-NH2
( 8 ) Ac-Nle-环（NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-Lys)-NH2
( 9 ) Ac-Nle -环 (NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-NLys)-NH2
( 10) Ac-Nle-环（Cys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH2
( II ) Ac- Nle-环（NhCys-His-DCpa-Arg- Trp- Cys)-NH2 ( 12 ) Ac- Nle-环（NhCys- Hi s-DCpa-Arg-Trp- NhCys) -NH2 ( 13) Biotin-Nle-环（Asp-His- DPhe-Arg-Trp-NLys)-NH2 ( 14 ) Biotin-Nle -环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 15 ) Biotin- Nle-环（NAsp- His-DPhe-Arg- Trp-NLys)-NH2
( 16) Biotin-Nle-环（Cys-His- DPhe- Arg-Trp-NhCys) -NH2
( 17) Biotin-Nle-环（NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys)-NH2
( 18) Biotin-Nle-环 (NhCys- His-DPhe- Arg-Trp- NhCys) -NH2 ( 19 ) Biotin- Nle -环 (Asp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
( 20 ) Biotin- Nle -环 (NAsp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 21 ) Biotin-Nle -环 (NAsp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 22 ) Biotin- Nle-环（Cys-His-DCpa- Arg-Trp-NhCys) -NH2 ( 23 ) Biotin- Nle -环 (NhCys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 24) Biotin- Nle-环（NhCys-Hi s-DCpa-Arg- Trp-NhCys) -NH2 ( 25 ) Biotin- Nle -环 (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 26 ) Biotin-Nle-环（Cys-His- DPhe- Arg-Trp- Cys) -NH2 ( 27 ) Biotin- Nle -环 (hCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 28 ) Biotin- Nle -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 ( 29 ) Biotin-Nle -环 (hCys- His-DPhe- Arg-Trp- hCys) -NH2
( 30) B i o t i n-N 1 e-S (A s p-H i s -DCpa-Ar g-Tr p-Ly s) -NH2
( 31) Biotin- Nle -环（Cys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys)-NH2
( 32) Biotin-Nle-环（hCys- Hi s-DCpa-Arg-Trp-Cys)-NH2
( 33) Biotin- Nle-环（Cys-His-DCpa- Arg-Trp-hCys)-NH2
( 34) Biotin- Nle -环（hCys- His- DCpa-Arg- Trp-hCys)-NH2 ( 35 ) Ac- Nle-环（Asp- Ta卜 DPhe- Arg-Trp-NLys) -NH2
( 36 ) Ac-Nle-环 (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 37) Ac-Nle-环（NAsp-Ta卜 DPhe-Arg- Trp-NLys)-NH2 Ac-Nle-环（Cys- Tal- DPhe- Arg- Trp- NhCys) -NH2
Ac-Nle -环 (NhCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys)-NH2
Ac-Nle-环（NhCys- Tal-DPhe- Arg- Trp- NhCys)-NH2 Ac-Nle-环 (Asp-Tal-DCpa-Arg-Trp-NLys)-NH2
Ac-Nle -环 (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-Lys)-NH2
Ac-Nle -环 (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-NLys) - NH2
Ac-Nle-环 (Cys-Tal-DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH2
Ac-Nle-环（NhCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-Cys)-NH2
Ac-Nle-环（NhCys- Tal- DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH2 Biotin-Nl e -环 (A s p-Ta 1 -DPhe-Arg-Trp-NLys ) -NH2 Biotin-Nl e -环 (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 Biotin-Nl e -环 (NAsp-Ta 1 -DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 Biotin-Nle-环 (Cys-Ta卜 DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2 Biotin-Nle -环 (NhCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle-环（NhCys-Ta卜 DPhe- Arg-Trp-NhCys) -NH2 Biotin-Nl e -环 (A s p-Ta 1 -DCpa-Arg-Trp-NLys) - NH2 Biotin-Nle -环 (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 Biotin-Nl e -环 (NAsp-Ta 1 -DCpa-Arg-Trp-NLy s ) - NH2 Biotin-Nle -环 (Cys-Tal-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 Biotin-Nl e-环（NhCy s-Tal -DCpa-Arg-Trp-Cy s ) -NH2 Biotin-Nle -环 (NhCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 Biotin-Nl e -环 (A s p-Ta 1 -DPhe-Arg-Trp-Ly s ) - NH2 Biotin-Nle -环 (Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (hCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 Biotin—Nle -环 (hCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 Biotin-Nl e -环 (Asp-Ta 1 -DCpa-Arg-Trp-Lys) -跳
Biotin-Nle -环 (Cys-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (hCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (Cys-Tal-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 Biotin-Nle -环 (hCys-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 Ac- Aca -环 (Asp-H is-DPhe-Arg-Trp-NLys)-NH2
Ac- Aca -环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-Lys)-NH2
Ac- Aca -环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2
Ac-Aca-环（Cys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2
Ac- Aca -环 (NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys)-NH2
Ac-Aca-环（NhCys- His-DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2 Ac - Aca -环 (Asp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
Ac- Aca -环 (NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-Lys) - NH2
Ac- Aca -环 (NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
Ac-Aca-环 (Cys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH2
Ac- Aca -环 (NhCy s -H i s -DCpa- Ar g-T r p-Cy s ) -NH2
Ac- Aca-环（NhCys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH2 Biot in- Aca -环 (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 Biot in- Aca -环 (NAsp-H i s-DPhe-Arg-Trp-Lys) - NH2 Biot in- Aca -环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 Biot in- Aca -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2 Biot in- Aca -环 (NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biot in- Aca -环 (NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2 Bioti n- Aca -环 (Asp-H i s-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2 Biot in- Aca -环 (NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 Biot in - Aca -环 (NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 90) Biotin- Aca -环（Cys- His- DCpa-Arg- Trp-NhCys)-NH2
(91) Biotin- Aca -环（NhCys- His- DCpa-Arg- Trp- Cys)- NH2
( 92 ) Biot in-Aca-环（NhCys- Hi s- DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 ( 93 ) Biot in - Aca -环 (Asp-His-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 94 ) Biot in- Aca -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 95 ) Biotin- Aca -环 (hCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 96 ) Biot in- Aca -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 ( 97 ) Biot in- Aca -环 (hCys-His-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 ( 98 ) Biot in- Aca -环 (Asp-His-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 99 ) Biot in- Aca -环 (Cys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2
( 100) Biot in- Aca -环 (hCys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2
( 101 ) Biot in- Aca -环 (Cys-His-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2
( 102 ) Biotin-Aca-5 (hCys-His-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 ( 103 ) Ac- Aca -环 (Asp-Tal-DPhe-Arg-Trp-NLys) - NH2
( 104 ) Ac- Aca -环 (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 105 ) Ac- Aca -环 (NAs p-Ta 1 -DPhe-Ar g-Tr p-NLy s) -NH2
( 106 ) Ac- Aca-环（Cys-Tal-DPhe-Arg- Trp-NhCys) -NH2
(107) Ac-Aca -环 (NhCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2
( 108 ) Ac-Aca-环（NhCys-Ta DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2
( 109 ) Ac- Aca -环 (As p-Ta 1-DCpa-Arg-Tr p-NLy s) -NH2
( 110) Ac-Aca-^ (NAs -Ta l-DCpa-Arg-Trp-Lys)-NH2
( 111 ) Ac-Aca-环（NAs p-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 112 ) Ac-Aca-环（Cys- Ta卜 DCpa-Ar g-Trp-NhCys) -NH2
( 113) Ac- Aca-环（NhCys-Ta卜 DCpa- Arg-Trp-Cys)-NH2
( 114 ) Ac-Aca-环（NhCys-Tal-DCpa-Arg-Trp- NhCys) -NH2
( 115) Biotin-Aca-S (Asp-Tal-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 116 ) Biotin-Aca-5 (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 117 ) Biotin-Aca-i^ (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 118 ) Biotin-Aca-环（Cys-Ta DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2 ( 119 ) Biotin-Aca-S (NhCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 120 ) Biotin-Aca -环 (NhCys-Ta 1-DPhe-Arg-Trp-NhCy s)
-NH2
( 121 ) B i o t in-Aca-Sii (As p-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NLy s) -NH2 ( 122 ) Biotin-Aca -环 (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 123) Biotin-Aca-S (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
( 124) Biotin-Aca-环（Cys-Ta卜 DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH2 ( 125 ) Biotin-Aca -环 (NhCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 126 ) Biotin-Aca -环 (NhCy s-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -
NH2
( 127 ) Biotin-Aca -环 (Asp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 128 ) Biotin-Aca-环（Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 129 ) Biotin-Aca -环 (hCys-Ta l-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2
( 130) Biotin-Aca-环（Cys-Ta卜 DPhe-Arg-Trp-hCys)-NH2
( 131 ) Biotin-Aca -环 (hCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2
( 132 ) Biotin-Aca-S^ (Asp-Tal-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 133) Biotin-Aca-i^ (Cys-Tal-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2
( 134 ) Biotin-Aca-i^ (hCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 135) Biotin-Aca-i^ (Cys-Tal-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 ( 136 ) Biotin-Aca -环（hCys - Ta卜 DCpa - Arg-Trp-hCys) -NH2。 优选地， 本发明选自上面的化合物 1、 2、 3、 4、 5、 10、 14、 16、 17、 20、 23、 25、 27、 30、 32、 36、 38、 39、 42、 45、 48、 54、 69、 70、 71、 72、 73、 78、 82、 84、 85、 88、 91、 93、 95、 98、 100、 104、 106、 107、 110、 112、 113、 116、 以及 122。 本发明的另一个方面涉及一种药物组合物， 其含有上述的任 一种环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生理毒性的盐， 任选 地， 其还可以含有药学上可接受的载体或辅料。 本发明的还一个方面涉及上述的环肽衍生物、 或其立体异构 体、 或其无生理毒性的盐作为 MC4-R激动剂的用途。
本发明的还一个方面涉及一种在体内或体外调节 MC4-R活性 的方法， 包括使用有效量的本发明中任一项所述的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生理毒性的盐的步骤。
本发明的还一个方面涉及上述的环肽衍生物、 或其立体异构 体、 或其无生理毒性的盐在制备治疗和 /或预防肥胖、 高血压、 动 脉粥样硬化、 心脏病、 或 I I型糖尿病的药物中的用途。
本发明的还一个方面涉及上述的环肽衍生物、 或其立体异构 体、或其无生理毒性的盐在制备治疗和 /或预防性功能障碍的药物 中的用途。 本发明的还一个方面涉及一种治疗或辅助治疗和 /或预防哺 乳动物（包括人） 的性功能障碍的方法，该方法包括施用有效量的 本发明的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生理毒性的盐、 或者本发明的药物组合物。
本发明的还一个方面涉及一种治疗或辅助治疗和 /或预防哺 乳动物（包括人） 的肥胖、 高血压、 动脉粥样硬化、 心脏病、 或 I I型糖尿病的方法， 该方法包括施用有效量的本发明的环肽衍生 物、 或其立体异构体、 或其无生理毒性的盐、 或者本发明的药物 组合物。 在本发明中， 所述疾病例如肥胖、 高血压、 动脉粥样硬化、 心脏病、 I I型糖尿病、 或性功能障碍， 具体地， 是指 MC4-R相关 的疾病， 例如 MC4- R异常或者 MC4-R活性异常导致的肥胖、 高血 压、 动脉粥样硬化、 心脏病、 I I型糖尿病、 或性功能障碍。 可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平， 以 便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、 组合物和给药方式 得到所需的治疗反应。 剂量水平须根据具体化合物的活性、 给药 途径、 所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史 来选定。 但是， 本领域的做法是， 化合物的剂量从低于为得到所 需治疗效果而要求的水平开始， 逐渐增加剂量， 直到得到所需的 效果。
词语 "有效量"的本发明化合物指以适用于任何医学治疗和 / 或预防的合理效果 /风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识 到， 本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医 学判断范围内作出决定。 对于任何具体的患者， 具体的治疗有效 剂量水平须才艮据多种因素而定， 所述因素包括所治疗的障碍和该 障碍的严重程度； 所采用的具体化合物的活性； 所釆用的具体组 合物； 患者的年龄、 体重、 一般健康状况、 性别和饮食； 所采用 的具体化合物的给药时间、 给药途径和排泄率； 治疗持续时间； 与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物； 及医疗领域 公知的类似因素。 例如， 本领域的做法是， 化合物的剂量从低于 为得到所需治疗效果而要求的水平开始， 逐渐增加剂量， 直到得 到所需的效果。 下面对本发明作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献， 它们的全部内容通过引用并入本 文， 并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时， 以本发 明的表述为准。 此外， 本发明使用的各种术语和短语具有本领域 技术人员公知的一般含义， 即便如此， 本发明仍然希望在此对这 些术语和短语作更详尽的说明和解释， 提及的术语和短语如有与 公知含义不一致的， 以本发明所表述的含义为准。
在本发明中， 所有氨基酸构型除注明为 D-型外， 均为 L-型。 在本发明中， 除非另外说明，术语 "烷基"是指可以是直链或 支链的链中具有约 1到约 15个碳原子的脂族烃基，其任选地被一 个或多个卤素原子取代。 特别是具有 1-约 6个碳原子。 示例烷基 包括曱基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 仲丁基、 叔丁基、 正戊基、 3-戊基、 庚基、 辛基、 壬基、 癸基和十二烷基。 被一个 或多个卤素原子取代的烷基实例包括三氟曱基。 烷基还可以被 1 个、 2个、 3个或 4个独立地选自 |¾素， 硝基， 氨基， 羟基， 羧基， d-C4烷基或 d-C4烷氧基或者 d- 烷硫基的取代基取代。
术语 "烷氧基"是指烷基- 0-基团， 其中所述的烷基如本文所 述。 烷氧基实例包括二氟曱氧基、 甲氧基、 三氟曱氧基、 乙氧基、 正丙氧基、 异丙氧基、 正丁氧基和庚氧基。
术语 "卤素" 包括氟、 氯、 溴和捵， 优选氟、 氯、 溴。
术语 "环烷基" 是指约 3-约 10个碳原子的饱和单环或双环 环系， 任选地被氧取代。 示例单环环烷基环包括 C3-s环烷基环， 如环丙基、 环戊基、 环己基和环庚基。 环烷基可以被 1个、 2个、 3个或 4个独立地选自卤素， 硝基， 氨基， 羟基， 羧基， C「^烷 基或 d-C4烷氧基的取代基取代。
术语 "芳基"为 6-14元单环或双环芳香基团，如苯基或萘基， 其未被取代或被独立地选自 ¾素、硝基、羧基或 d- C4烷基的取代 基单取代或二取代或三取代；
术语 "杂芳基" 为含有 1 - 5个独立地选自 N、 0和 S的杂原 子的 4-10元单环或双环芳香基团，如吡咯基、呋喃基、吡啶基等， 其未被取代或被独立地选自 素、硝基、羧基或 d-C4烷基的取代 基单取代或二取代；
术语 "杂环基" 为其环结构中含 1 - 5个、 优选 1 - 3个独立 地选自 N、 0和 S的杂原子的非芳香环状基团， 如吡喃基、 哌啶基 等， 其未被取代或被独立地选自 δ素、 硝基、 羧基或 d-C4烷基的 取代基单取代或二取代或三取代。 具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述， 但是 本领域技术人员将会理解， 下列实施例仅用于说明本发明， 而不 应视为限定本发明的范围。 实施例中未注明具体条件者， 按照常 规条件或制造商建议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂 商者， 均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例所用固相合成载体 MBH A树脂以及 PAM树脂为天津南开 合成责任有限公司产品； DCC、 H0BT、 BOP, DIEA以及保护的天然 氨基酸由上海吉尔生化公司以及成都成诺新技术有限责任公司产 品， 保护的非天然氨基酸除说明外均由本实验室合成提供。
在本发明中使用的缩写具有下面的含义：
Ac 乙酰基
Aca 氨基己酸残基 Asp 天冬氨酸残基
Arg 精氨酸残基
Boc 叔丁氧羰基
BOP 苯并三唑 - 1 -氧-三 （二曱氨基）磷六氟磷酸
Cpa 四氯苯丙氨酸残基
Cys 半胱氨酸残基
DCC 二环己基碳二亚胺
DIEA 二异丙基乙胺
Fmoc 芴甲氧羰基
Fpa 对氟苯丙氨酸残基
hCys 高半胱氨酸残基
HOBt 1-羟基苯并三唑
His 组氨酸残基
Lys 赖氨酸残基
MBHA树脂 苯基氨曱基树脂
a -MSH α -黑素细胞刺激激素
Mtal 2-氨基 -3- ( 2-甲基噻唑基- 4-) 丙酸残基
NAsp N-羧基乙基甘氨酸残基
NCys N-巯基甲基甘氨酸残基
NhCys N-巯基乙基甘氨酸残基
NLys N-氨基丁基甘氨酸残基
Nle 正亮氨酸残基
PAM树脂 羟甲基苯乙酰胺曱基树脂
Phe 苯丙氨酸残基
RP-HPLC 反相高效液相色谱
Tal 2-氨基- 3- (噻唑基 -4-) 丙酸残基 Trp 色氨酸残基 实施例 1: 化合物 Ac-Nle-环（Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 1 ) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成方法（参考文献： 黄惟德， 陈常庆著， 多肽合成， 科学出版社， 1985 )操作合成 Ac-Nle-环（Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-NLys)-MBHA 树脂。
将上述肽树脂放入 HF切割仪的反应器中，加入 0.5mL苯甲醚 以及约 10mL液态 HF， 于 O'C反应 40分钟。 用油泵抽走 HF, 取下 反应器， 加入冷的无水乙醚沉淀出固体， 再将混悬液转移至砂芯 漏斗中。 用少量冷的无水乙醚洗涤三次， 再用 10%的乙酸水溶液 150mL将产物洗脱， 冷冻干燥后得白色蓬松固体粗肽 212mg。将其 用 10%醋酸 /水 50mL溶解， 经 C18反相中压色谱纯化， 洗脱剂为 20% - 30%乙腈 /1%醋酸 /水， 冻干得纯肽 14.7mg， HPLC 纯度为 91.7%, 收率 7%。 ESI-MS: 1024.0 (MW1024 ) 。 实施例 2: 化合物 Ac-Nle-环（NAsp-His- DPhe- Arg-Trp-Lys) -NH2 ( 2 ) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成方法 （ 参考文献同 实施例 1 ) 操作合成 Ac- Nle-环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-Lys)-MBHA树脂。
将上述肽树脂放入 HF切割仪的反应器中，加入 0.5mL苯甲醚 以及约 10mL液态 HF, 于 O'C反应 40分钟。 用油泵抽走 HF， 取下 反应器， 加入冷的无水乙醚沉淀出固体， 再将混悬液转移至砂芯 漏斗中。 用少量冷的无水乙醚洗涤三次， 再用 10%的乙酸水溶液 150mL将产物洗脱，冷冻干燥后得白色蓬松固体粗肽 196mg。将其 用 10%醋酸 /水 50mL溶解， 经 C18反相中压色谱纯化， 洗脱剂为 20% - 30%乙腈 /1%醋酸 /水， 冻干得纯肽 10.2mg, HPLC 纯度为 95.4%, 收率 5%。 ESI-MS: 1024.0 (MW1024 ) 。 实施例 3:化合物 Ac-Nle-环（NAsp-His-DPhe- Arg- Trp-NLys) -NH2 ( 3) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成方法 （ 参考文献同 实施例 1 ) 操作合成 Ac-Nle-环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-NLys)-MBHA树脂。
将上述肽树脂放入 HF切割仪的反应器中，加入 0.5mL苯曱醚 以及约 lOmL液态 HF, 于 0。C反应 40分钟。 用油泵抽走 HF， 取下 反应器， 加入冷的无水乙醚沉淀出固体， 再将混悬液转移至砂芯 漏斗中。 用少量冷的无水乙醚洗涤三次， 再用 10%的乙酸水溶液 150mL将产物洗脱， 冷冻干燥后得白色蓬松固体粗肽 196mg。将其 用 10%醋酸/水 50mL溶解， 经 C18反相中压色谱纯化， 洗脱剂为 20% - 30%乙腈 /1%醋酸 /水， 冻干得纯肽 10.5mg， HPLC 纯度为 91.6%, 收率 5%。 ESI-MS: 1024.0 ( MW1024 ) 。 实施例 4:化合物 Ac—Nle-环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2 ( 4 ) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， B0P/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成
Ac-N 1 e-Cy s-His -DPhe-Arg-T r p-NhCys -MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 176mg, 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钾 100mg， 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g， 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx 2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、冻干， 最后得纯肽 14.4mg， HPLC纯度 93.5%， 收率 7%。 ESI-MS: 1017.7 (MW1017) 。 实施例 5:化合物 Ac-Nle-环（NhCys-His-DPhe-Arg-Trp- Cys) -NH2 ( 5 ) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， B0P/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Nle-NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys-MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 185mg, 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钾 100mg， 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g， 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx 2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、冻干， 最后得纯肽 16. lmg， HPLC纯度 96.2%， 收率 8%。 ESI-MS: 1017.6 (M 1017) . 实施例 6:化合物 Ac- Nle-环（Cys- His- DCpa- Arg- Trp- NhCys) -NHj UP) 的合成 以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Nle-Cys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys-MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 192mg， 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钾 lOOmg, 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g， 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx 2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、冻干， 最后得纯肽 11. lmg, HPLC纯度 94.2%, 收率 5%。 ESI-MS: 1050.8 (MW1051 ) 0 实施例 7: 化合物 Biotin-Nle-^ (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp- Lys)-NH2 ( 25 ) 的合成
以 390mg MBHA树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成方法 （参考文献同实施例 1 ) 操作合成 Biotin-Nle -环 (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-Lys) -MBHA树脂。
将上述肽树脂放入 HF切割仪的反应器中，加入 0.5mL苯曱醚 以及约 10mL液态 HF， 于 0°C反应 40分钟。 用油泵抽走 HF， 取下 反应器， 加入冷的无水乙醚沉淀出固体， 再将混悬液转移至砂芯 漏斗中。 用少量冷的无水乙醚洗涤三次， 再用 10%的乙酸水溶液 150mL将产物洗脱，冷冻干燥后得白色蓬松固体粗肽 210mg。将其 用 10%醋酸 /水 50mL溶解， 经 C18反相中压色谱纯化， 洗脱剂为 20% - 30°/。乙腈 /1%醋酸 /水， 冻干得纯肽 12.7mg, HPLC 纯度为 94.8% 收率 5%。 ESI-MS: 1208.0 ( MW1208 ) 。 实施例 8:化合物 Ac-Nle-环（Cys-Ta卜 DPhe- Arg- Trp-NhCys) -NH2 ( 38 ) 的合成
以 390mg MBHA树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Nle-Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-NhCys-MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 201mg, 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4, 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅袢下加入铁氰化钾 100mg， 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g, 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx 2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、冻干， 最后得纯肽 12.4mg， HPLC纯度 95.6%， 收率 6°/。。 ESI-MS: 1033.8 (MW1034 ) β 实施例 9:化合物 Ac-Aca -环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 71 ) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， B0P/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成方法 （参考文献同实施例 1 ) 操作合成 Biotin- Nle -环 (Asp-His- DCpa-Arg-Trp-Lys) -MBHA树脂。
将上述肽树脂放入 HF切割仪的反应器中，加入 0.5mL苯甲醚 以及约 10mL液态 HF， 于 0°C反应 40分钟。 用油泵抽走 HF, 取下 反应器， 加入冷的无水乙醚沉淀出固体， 再将混悬液转移至砂芯 漏斗中。 用少量冷的无水乙醚洗涤三次， 再用 10%的乙酸水溶液 150mL将产物洗脱，冷冻干燥后得白色蓬松固体粗肽 210mg。将其 用 10%醋酸/水 50mL溶解， 经 C18反相中压色谱纯化， 洗脱剂为 20°/。- 30%乙腈 /1°/。醋酸 /水， 冻干得纯肽 15.7mg， HPLC 纯度为 92.1%, 收率 6%。 ESI-MS: 1023.9 (MW1024 ) 。 实施例 10:化合物 Ac-Aca -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2 ( 72) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， B0P/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Aca-Cys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys-MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 201mg, 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钾 lOOmg, 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g, 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mL> 2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、冻干，最后得纯肽 15. lmg, HPLC纯度 93.6%， 收率 7°/。。 ESI-MS: 1016.7 (MW1017) . 实施例 11:化合物 Ac-Aca-环（NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 73) 的合成
以 390mg MBHA树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， B0P/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Aca-NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys-MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 192mg， 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钾 lOOmg, 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g， 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx 2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、冻干， 最后得纯肽 15.6mg， HPLC纯度 94.8%, 收率 7%。 ESI-MS: 1016.9 (MW1017) 0 实施例 12:化合物 Ac-Aca-环（Cys- His- DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 (78) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Aca-Cys- His-DCpa- Arg-Trp- NhCys- MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 185mg， 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钾 lOOmg, 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g， 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx 2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、 冻干， 最后得纯肽 10.8mg, HPLC纯度 94· 8%, 收率 5%。 ESI-MS: 1051.7 (MW1051 ) 。 实施例 13:化合物 Ac-Aca-环（Cys-Ta卜 DPhe-Arg-Trp- NhCys) -NH2 ( 106) 的合成
以 390mg MBHA树脂 ( 0.54mmol/g) 为固相载体， BOP/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Aca-Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-NhCys-MBHA树脂。 肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽
185mg, 加水 lOOmL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钾 lOOmg, 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g， 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、 冻干， 最后得纯肽 10.5mg, HPLC纯度 97.1%, 收率 5%。 ESI- MS: 1034.9 (MW1035 ) 。 实施例 14:化合物 Ac-Aca -环 (Cys-Tal-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 (112) 的合成
以 390mg MBHA 树脂 （0.54mmol/g) 为固相载体， B0P/DIEA 为缩合剂，根据化合物的氨基酸序列，按标准的 Fmoc固相多肽合 成 方 法 （ 参 考 文 献 同 实 施 例 1 ) 操 作 合 成 Ac-Aca-Cys-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NhCys-MBHA树脂。
肽树脂干燥后用无水氟化氢裂解， 经冻干得线形前体粗肽 207mg, 加水 100mL溶解， 10%氨水调 pH值至 8.4， 溶液略变粉红 色。 室温磁力搅拌下加入铁氰化钟 lOOmg, 溶液变成黄色。 HPLC 监测反应进程，约 lOmin反应即完成。加入阴离子交换树脂约 10g， 室温搅拌约 20min后， 溶液黄色消失； 过滤， 水洗 20mLx2次。 合并水溶液， 直接进行中压分离纯化、 冻干，最后得纯肽 13.7mg, HPLC纯度 96.4%， 收率 6%。 ESI-MS: 1067.8 ( MW1068 ) „ 实施例 15: 受体结合活性评价试验
实验方法： 放射性配体受体结合实验
材料： 大鼠脑组织提取的富含 MC4- R的膜蛋白； [1251]- NDP- α-MSH , PerkinElmer公司。 实验原理： 利用受体与配体结合的高度亲和性、 特异性、 饱 和性、 可逆性以及放射性核素测量的高灵敏度的特点， 使受体与 其标记配体在一定条件下结合， 当反应达到平衡时或在不同的时 间点终止反应， 分离游离的和已与受体特异性结合的标记配体， 分别测定二者的放射活性， 计算其浓度。
计算指标： 结合抑制百分率，结合抑制百分率= (竟争性结合
-非特异结合） / (总结合 -非特异结合 ) X 100 % 。
结合抑制百分率越高表示化合物对受体的结合活性越高。 化合物筛选： 选择 Ι ΟηΜ和 Ι ΟΟηΜ两个浓度， 以 PT- 141为阳 性对照， 每个受试样品重复 3次。 表 1给出了抑制率较高的化合 物结果。 可以看到， 在 Ι ΟΟηΜ水平， 有 11 个化合物抑制率达到 50%; 在 Ι ΟηΜ水平， 有 5 个化合物抑制率达到 50%，与阳性对照 PT-141相当， 展示了较高的受体结合活性。
表 1: 受体结合活性评价结果
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实施例 16: 激动剂活性评价试验
材料： 武汉 NewEas t Biosc iences公司生产的 ELISA试剂盒 以及 MC4-R转染的 HEK293 (人胚肾 293 ) 细胞。 转染的方法可以 参考本领域技术人员知晓的技术进行， 例如参考 《分子克隆实验 指南》 （L萨姆布鲁克等著， 黄培堂等译， 第三版， 科学出版社） 中关于细胞转染的部分。
化合物样品： 编号为 1、 2、 4、 5、 25、 73的化合物。
操作步驟：
1. 分别配置上述 6个化合物样品不同浓度的工作溶液（M )。
0, 4x10— 9， 12xl 0—9， 4xl 0—8， 12x10— 8， 4xl 0"7, 4x10— 6。
2. 细胞消化、 计数、 配置工作溶液（5xl 07mL ) 。
3. 给药， 反应 30min。
4. 配置 cAMP (环磷酸腺苷） 标准品溶液。
5. 细胞裂解， 取上清， 加乙酰化试剂备用。
6. 使用 ELISA 试剂盒顺序加样， 反应， 读数（0D值） 。
7. 作 cAMP-OD标准曲线， 计算反应液 cAMP含量， 作样品浓 度- cAMP曲线， 计算 EC5。（半数有效浓度） 。
具体结果见表 2。
表 2: 激动活性评价结果
化合物编号 序列 EC nM)
PT-141 Ac-NIe-cfAsD-His-D-Phe-Ar2-Trp-Lvs -OH 16.1
1 Ac-Nle-c(AsD-His-D-Phe-Are-TrD-NLvs)-NH, 17.1
2 Ac-Nle-c(NAsD-His-D-Phe-Arg-TrD-Lvs -NH, 35.2
4 Ac-Nle-ciCvs-His-D-Phe-Ar2-TrD-NhCvs -NH, 42.0
5 Ac-NIe-ciNhCvs-His-D-Phe-Ar2-TrD-Cvs -NH, 54.2
25 Biotin-Nle-ciAsD-His-D-Phe-Arg-TrD-Lvs)-NH, 10.3 73 Ac-Aca-c(NhCvs-His-D-Phe-Arg-Trp-Cvs -NH 23.3 从表 2中可见， 上述 6个化合物与阳性对照的 EC5。在同一数 量级， 说明他们与阳性对照的激动活性相当。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述， 本领域技 术人员将会理解。 根据已经公开的所有教导， 可以对那些细节进 行各种修改和替换， 这些改变均在本发明的保护范围之内。 本发 明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims

权利要求
1. 式 （1 ) 所示的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生 理毒性的盐，
R-Xaal-环 ( Xaa2-Xaa3-Xaa4-Arg-Trp-Xaa5 ) -Z 式 （ 1 ) 其中，
R选自 H -、 R!C(O)-, R!R2C(0)-,
Figure imgf000028_0001
(0)-, 式（2)所示的 Biotin -、 叔丁氧羰基（Boc) 、 和芜甲氧羰基（ Fmoc ) ， 其中， 1^和112分别独立地选自 H、 ¾素、 取代或未取代的 链或者 支链烷基、取代或未取代的 C2-C6直链或者支链烯基或者炔基、取 代或未取代的 - 直链或者支链烷氧基、 取代或未取代的 d-C6 直链或者支链烷硫基、取代或未取代的 C2-C6直链或者支链烯基或 者炔基氧基、取代或未取代的（2-(^直链或者支链烯硫基或者炔硫 基， （：广 环烷基、 C3-C8环烯基、 C6- C14芳基、 杂芳基、 和 C3-C8杂 环基；
Figure imgf000028_0002
式 （2)
Z为 -0H或- NR3R4,其中 R3、R4各自独立地为 H-,R-,R1R2C (0)-, R.RiNC (0)-, 其中 1^和 R2的定义同前面所述;
Xaal选自 L或 D型的亮氨酸残基（Leu)、异亮氨酸残基（ Ile)、 正亮氨酸残基（Nle) 、 和结构 - NH-(CH2)nl-C0-， 其中， nl 为 1 - 5的整数；
Xaa2选自 L或 D型的式（ 3) -式（6)所示的结构， 其中 n2 - n5分别独立地选自 1 - 5的整数； COOH COOH
I I
(CH2)n2 (^2)η3 NH-CH-CO― 式 ( 3) ― N-CH2-C
SH SH
(CH2)n4 (C ^)n5 ― NH-CH-CO— 式 （ 5 ) ― N-CH2-CO— 式 （ 6 )
Xaa3为 L或 D型的 His、 或式 （7 ) 所示的结构， 其中， R5 选自 、 H -NHC (0) NRiR , -(（0) 2、 ^-NH-C (0) R1} 其中 1^和 R2的定义同前面
Xaa4 为 D 型的
Figure imgf000029_0001
R6选自 - NH -NHC (0)
Figure imgf000029_0002
- 0) 2、 和 -NH-C R 其中 和112的定义同 前面所述；
Xaa5选自 L或 D型的式 （8 ) -式 （ 11 )所示的结构， 其中 n6 - n9分别独立地选自 1 - 5的整数；
NH2 NH2
I I
(CH2)n6 (C)n7
― H-CH-CO— 式 （ 8 ) 一 N-CH2-CO一 式 （ 9 )
SH SH
I I
(CH2)n8 (C)n9 ― NH-CH-CO— 式 （10) ― N-CH2-CO― 式 （11 ) 。
2. 根据权利要求 1所述的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或 其无生理毒性的盐， 其中， R为 Biotin-, Xaa2为式（ 3)或式（4) 所示的结构并且 Xaa5为式（ 8 )或式（ 9 )所示的结构， 或者 Xaa2 为式 （5) 或式 （6) 所示的结构并且 Xaa5为式 （10) 或式 （11) 所示的结构。
3. 根据权利要求 1所述的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其 无生理毒性的盐， 其中， R 选自 H -、 R:C(0)-, R!R2C (0)-, 叔丁氧 叛基（Boc)、 和芜甲氧羰基（Fmoc) ， Xaa2为式（3)所示的结构 并且 Xaa5为式（9)所示的结构， 或者 Xaa2为式（4)所示的结构 并且 Xaa5为式 （8)或式 （9)所示的结构， 或者 X aa2为式 （5) 所示的结构并且 Xaa5为式（11)所示的结构， 或者 Xaa2为式（6) 所示的结构并且 Xaa5为式 （10)或式（11) 所示的结构。
4. 根据权利要求 1所述的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其 无生理毒性的盐， 其中， 115为 11。
5. 根据权利要求 1所述的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或 其无生理毒性的盐， 其中， R为乙酰基（AC- ) 或 Biotin -， Z为 - NH2， Xaal为 L-Nle或 Aca, Xaa2为 L-Asp L-Cys, L-hCys, NAs 或 NhCys, Xaa5为 L-Lys、 L-Cys> L-hCys, NLys或 NhCys, Xaa3 为 L-His或 L-Tal, Xaa4为 D-Phe或 D-Cpa。
6. 根据权利要求 1所述的环肽衍生物、 或其立体异构体、 或 其无生理毒性的盐， 其中， 所述环肽衍生物选自如下的化合物：
( 1 ) Ac- Nle-环（Asp-His- DPhe- Arg- Trp-NLys)-NH2
( 2 ) Ac-Nle-环（NAsp-His- DPhe- Arg-Trp-Lys)-NH2
( 3) Ac-Nle-环（NAsp-His- DPhe- Arg-Trp-NLys)-NH2
( 4 ) Ac- Nle-环（Cys-His-DPhe- Arg-Trp- NhCys)-NH2
( 5 ) Ac-Nle-环（NhCys-His- DPhe-Arg- Trp-Cys)-NH2
( 6 ) Ac-Nle -环 (NhCys- His-DPhe-Arg- Trp-NhCys)-NH2 ( 7 ) Ac- Nle-环 (Asp-His-DCpa-Arg-Trp-NLys)-NH2
( 8 ) Ac-Nle -环 (NAsp-His-DCpa - Arg-Trp-Lys)-NH2
( 9 ) Ac- Nle-环（NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-NLys)-NH2
( 10) Ac- Nle-环（Cys-His-DCpa-Arg- Trp- NhCys)-NH2
( 11 ) Ac- Nle-环（NhCys-His- DCpa-Arg- Trp- Cys)-NH2
( 12 ) Ac-Nle-环（NhCys-His-DCpa- Arg- Trp- NhCys) -NH2
13) Bioti Ln- -Nl e- -环（Asp- His-DPhe- Arg-Trp- NLys)-NH2
14) Bioti Ln- -Nl .e- -环（NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-Lys)-NH2
15 ) Bioti Ln- -N] .e- -环（NAsp-His-DPhe-Arg- Trp-NLys)-NH2
16) Biot: Ln- -Nl ie- -环 (Cys-His -DPhe-Arg-Trp-NhCy s ) - NH2
17) Bioti Ln- -N】 e- -环（NhCys-His- DPhe-Arg- Trp- Cys)-NH2
18) Bioti Ln- -N] e- -环（NhCy s - H i s -DPhe-Arg-T r p-NhCy s)-NH
19) Biot] ιη- -N] e- -环（Asp-His- DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
20) Bioti Ln- -Nl e- -环（NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-Lys)-NH2
21 ) Biot] LH- -Nl e- -环（NAsp-His-DCpa- Arg- Trp-NLys)-NH2
22) Biot] in- -Nl e- -环（Cys-His-DCpa-Arg-Tip-NhCys)-NH2
23) Bioti Ln- -N] e- -环（NhCys-His-DCpa- Arg-Trp-Cys)-NH2
24) Bioti Ln- -N】 e- -环（NhCy s-His - DCpa- Ar g-Tr p-NhCy s ) -NH
25 ) Bioti Ln- -Nl e- -环（Asp- His-DPhe- Arg-Trp-Lys)-NH2
26) Biot ίη- -Nl e- -环（Cys-His-DPhe-Arg-Trp- Cys)-NH2
27) Biot ίη- -N] e- -环（hCys- His-DPhe-Arg-Trp- Cys)-NH2
28) Biot in- -N] e- -环（Cys-His-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2
29) Biot Ln- -N] e- -环（hCys- His-DPhe- Arg-Trp-hCys)-NH2
30) Biot ίη- -N] e- -环 (A s p-H i s -DCpa-Ar g-Tr p-Ly s) -NH2
31 ) Biot Ln- -N] e- -环（Cys-His-DCpa-Arg-Trp- Cys)-NH2
32) Biot in- -N] e- -环（hCys-His-DCpa- Arg-Trp-Cys)-NH2 33) Bioti Ln- -Nle -环 (Cys-His-DCpa-Arg-Trp-hCys)- NH2
34) Bioti Ln- -Nle-环（hCys-His- DCpa-Arg-Trp- hCys) - NH2
35 ) Ac-N] e- -环（A sp-Tal -DPhe-Arg-T r p-NLys ) - NH2
36) Ac-Nl e- -环（NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2
37) Ac-N] e- -环（Msp-Tal-DPhe-Arg- Trp-NLys) -NH2
38) Ac-Nl e- -环（Cy s-Tal -DPhe-Arg-T r p-NhCy s ) -NH2
39) Ac-Nl e- -环（NhCy s-Tal -DPhe-Arg-T r p-Cy s) -NH2
40) Ac-Nl e- -环（NhCy s- Ta 1-DPhe- Arg- Trp-NhCy s) -NH2
41 ) Ac-Nl e- -环（Asp-Tal- DCpa- Arg-Trp-NLys)-NH2
42) Ac-N] e- -环（NAsp- Tal-DCpa-Arg-Trp- Lys)-NH2
43) Ac-N] e- -环（NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
44) Ac-Nl e- -环（Cy s- Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NhCys) - NH2
45) Ac-N] e- -环（NhCy s - Ta 1 -DCpa-Arg-Trp-Cy s ) -NH2
46) Ac-N] e- -环（NhCy s- Ta卜 DCpa- Ar g-Trp-NhCy s) -NH2
47) Bioti Ln- -Nle -环 (Asp-Tal-DPhe-Arg-Trp-NLys) - NH2
48) Bioti Lii- -Nle -环 (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) - NH2
49) Biot] ιη- -Nle-环（NAsp-Ta卜 DPhe-Arg- Trp-NLys) -NH2
50) Biot] ιη- -Nle-环（Cys- Ta卜 DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2
51 ) Bioti Ln- -Nle-环（NhCys-Tal-DPhe- Arg-Trp-Cys) -NH2
52) Bioti in- -Nle-环（NhCys- Tal- DPhe-Arg- Trp-NhCys)-NH2
53) Biot] Ln- -Nle -环 (Asp-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NLys) - NH2
54) Bioti Ln- -Nle -环 (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-Lys)- NH2
55) Bioti ιη- -Nle-环（NAsp- Ta卜 DCpa-Arg- Trp-NLys) -NH2
56) Biot ιη- -Nle-环（Cys-Ta卜 DCpa-Arg-Trp- NhCy s) -NH2
57) Biot ίη- -Nle-环（NhCys- Ta卜 DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2
58) Biot ίη- -N 1 e-环（NhCy s-Tal -DCpa-Arg-Trp-NhCy s)-NH2 Biotin-Nl e -环 (A s p-Ta 1 -DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 Biotin-Nle-环（Cys-Ta卜 DPhe- Arg- Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (hCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (Cys-Tal-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 Biotin-Nle -环 (hCys-Tal-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 Biotin-Nl e -环 (A s -Ta 1 -DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 Biotin-Nle -环 (Cy s-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (hCy s-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 Biotin-Nle -环 (Cys-Tal-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 Biotin-Nle -环 (hCys-Tal-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 Ac- Aca -环 (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 Ac- Aca -环 (NAsp-H is-DPhe-Arg-Trp-Lys)-NH2 Ac- Aca -环 (NAsp-His-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 Ac-Aca -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2 Ac- Aca -环 (NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys)-NH2 Ac-Aca-环（NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys)-NH2 Ac - Aca -环 (Asp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-NLys)-NH2 Ac - Aca -环 (NAsp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 Ac- Aca -环 (NAsp-H is-DCpa-Arg-Trp-NLys)-NH2 Ac-Aca -环 (Cys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys)-NH2 Ac- Aca -环 (NhCys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys)-NH2 Ac- Aca -环 (NhCys-His-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 Biotin-Aca -环 (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2 Bioti n- Aca -环 (NAsp-H i s-DPhe-Arg-Trp-Lys) - NH2 B i o t in- Aca -环 (NAsp-H i s-DPhe-Arg-Trp-NLys) - NH2 Biotin—Aca -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2 ( 85 ) Biotin-Aca -环 (NhCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 86 ) Biotin-Aca -环 (NhCy s -H i s -DPhe-Ar g-T r p-NhCy s ) -NH2 ( 87 ) Biot in-Aca -环 (Asp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2 ( 88 ) Biot in-Aca -环 (NAsp-His-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 89) Bioti n-Aca-S (NAs p-H i s-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
( 90) Bioti n-Aca-5 (Cys -H i s -DCpa-Ar g-Tr p-NhCy s ) -NH2
( 91 ) Biot in-Aca -环（NhCys- His- DCpa-Arg- Trp- Cys)- NH2
( 92 ) Biotin-Aca-环（NhCys-His- DCpa-Arg- Trp- NhCys) -NH2 ( 93 ) Biot in-Aca -环 (Asp-Hi s-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 94 ) Biot in-Aca -环 (Cy s -H i s -DPhe-Ar g-Tr p-Cy s) -NH2 ( 95 ) Biotin-Aca -环 (hCys-His-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2
( 96 ) Biot in-Aca -环 (Cys-His-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2
( 97 ) Biot in-Aca -环 (hCys-His-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2
( 98 ) Biot in-Aca -环 (Asp-Hi s-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 99 ) Biotin-Aca -环 (Cys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2
( 100 ) Biotin-Aca -环 (hCys-His-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 ( 101 ) Biotin-Aca -环 (Cys-His-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 ( 102 ) Biotin-Aca -环（hCys-His-DCpa-Arg-Trp-hCys)-NH2 ( 103) Ac-Aca-5^ (Asp-Tal-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2
( 104 ) Ac-Aca -环 (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2
( 105 ) Ac-Aca -环 (NAsp-Tal-DPhe-Arg-Trp-NLys) -NH2
( 106) Ac- Aca-环（Cys-Ta卜 DPhe-Ar g-Trp-NhCys) -NH2
( 107 ) Ac-Aca—环（NhCys- Ta卜 DPhe-Arg-Trp- Cys) -NH2
( 108) Ac- Aca-环（NhCys-Ta卜 DPhe-Arg- Trp- NhCys) -NH2
(109) Ac-Aca-S^ (Asp-Tal-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
( 110) Ac-Aca- ^ (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 111 Ac- ca -环 (NAsp-Ta l-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2
112 Ac- ca-环（Cys- Tal-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2
113 Ac- ca -环 (NhCys-Ta l-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2
114 Ac- ca -环（NhCy s-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 115 Bio in-Aca -环 (Asp-Ta l-DPhe-Arg-Trp-NLys) - NH2 116 Bio in-Aca -环 (NAsp-Ta l-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 117 Bio in-Aca -环 (NAsp-Ta l-DPhe-Arg-Trp-NLys) - NH2 118 Bio in-Aca -环 (Cys-Ta 1-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH2 119 Bio in-Aca -环 (NhCys-Ta 1-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 120 Bio in-Aca -环 (NhCy s-Ta 1-DPhe-Arg-Trp-NhCys) -NH 121 Bio in-Aca -环 (Asp-Ta l-DCpa-Arg-Trp-NLys) -NH2 122 Bio in-Aca -环 (NAsp-Tal-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 123 Bio in-Aca -环 (NAsp-Ta l-DCpa-Arg-Trp-NLys) - NH2 124 Bio in-Aca-环（Cys-Ta卜 DCpa-Arg-Trp-NhCys) -NH2 125 Bio in-Aca -环 (NhCys-Ta l-DCpa-Arg-Trp-Cys) -NH2 126 Bio in-Aca-环（NhCys-Ta l- DCpa- Arg-Trp- NhCys) -NH 127 Bio in-Aca -环 (Asp-Ta l-DPhe-Arg-Trp-Lys) -NH2 128 Bio in-Aca -环 (Cys-Ta 1-DPhe-Arg-Trp-Cys) -NH2 129 Bio in-Aca-环（hCys-Ta l-DPhe-Arg- Trp-Cys) -NH2 130 Bio in-Aca -环 (Cys-Ta 1-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 131 Bio in-Aca -环 (hCys-Ta l-DPhe-Arg-Trp-hCys) -NH2 132 Bio in-Aca -环 (Asp-Ta l-DCpa-Arg-Trp-Lys) -NH2 133 Bio in-Aca -环 (Cys-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-Cys) - NH2 134 Bio in-Aca-环（hCys-Ta卜 DCpa- Arg - Trp- Cys) -NH2 135 Bio in-Aca -环 (Cys-Ta 1-DCpa-Arg-Trp-hCys) -NH2 136 Bio in—Aca -环（hCys—Ta DCpa—Arg—Trp—hCys)—NH2。
7. 一种药物组合物， 其含有权利要求 1 - 6 中任一项所述的 环肽衍生物、 或其立体异构体、 或其无生理毒性的盐， 以及药学 上可接受的栽体或辅料。
8. 权利要求 1 - 6 中任一项所述的环肽衍生物、 或其立体异 构体、 或其无生理毒性的盐作为 MC4-R激动剂的用途。
9. 权利要求 1 - 6 中任一项所述的环肽衍生物、 或其立体异 构体、 或其无生理毒性的盐在制备治疗和 /或预防肥胖、 高血压、 动脉粥样硬化、心脏病、或 I I型糖尿病的药物中的用途；具体地， 所述肥胖、 高血压、 动脉粥样硬化、 心脏病、 或 I I 型糖尿病由 MC4-R异常或者 MC4-R活性异常所导致。
10. 权利要求 1 - 6中任一项所述的环肽衍生物、 或其立体异 构体、或其无生理毒性的盐在制备治疗和 /或预防性功能障碍的药 物中的用途； 具体地， 所述性功能障碍由 MC4-R异常或者 MC4-R 活性异常所导致。
11. 一种治疗或辅助治疗和 /或预防肥胖、 高血压、 动脉粥样 硬化、 心脏病、 I I型糖尿病、 或性功能障碍的方法， 包括给予有 效量的权利要求 1 - 6中任一项所述的环肽衍生物、或其立体异构 体、 或其无生理毒性的盐的步骤； 具体地， 所述肥胖、 高血压、 动脉粥样硬化、 心脏病、 I I型糖尿病、 或性功能障碍由 MC4-R异 常或者 MC4-R活性异常所导致。
12. 一种在体内或体外调节 MC4-R 活性的方法， 包括使用有 效量的权利要求 1 - 6中任一项所述的环肽衍生物、或其立体异构 体、 或其无生理毒性的盐的步骤。
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