WO2011076969A1 - Compuestos multifuncionales modificadores de la enfermedad de alzheimer para el tratamiento de esta enfermedad - Google Patents

Compuestos multifuncionales modificadores de la enfermedad de alzheimer para el tratamiento de esta enfermedad Download PDF

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WO2011076969A1
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dimethoxyindan
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PCT/ES2010/070862
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Diego MUÑOZ-TORRERO LÓPEZ-IBARRA
Pelayo Camps Garcia
Tània GÓMEZ NADAL
Elisabet Viayna Gaza
Carles Galdeano Cantador
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Universidad De Barcelona
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    • C07D215/42—Nitrogen atoms attached in position 4
    • C07D215/46—Nitrogen atoms attached in position 4 with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms, attached to said nitrogen atoms

Definitions

  • Multifunctional Alzheimer's disease modifying compounds for the treatment of this disease
  • the invention relates to compounds that act on different biological targets involved in the neuropathogenesis of the disease of
  • AD Alzheimer's
  • It is also related to pharmaceutical compositions comprising said compounds, and their use for the treatment of AD.
  • AD the most common form of dementia in the elderly, is one of the biggest health problems in countries
  • EA neuropsychiatric symptoms
  • apathy apathy, verbal and physical agitation, irritability, anxiety, depression, delusions and hallucinations.
  • EA currently affects approximately 20 million people worldwide and this amount will increase
  • AD Alzheimer's disease
  • AD Alzheimer's disease
  • ⁇ -amyloid peptide ⁇ -amyloid peptide
  • ⁇ ⁇ -amyloid peptide
  • Different strategies are being developed to reduce, prevent or even reverse the generation and deposition of ⁇ , in order to slow the disease progress and prevent further neuronal cell losses.
  • the most advanced developing disease-modifying anti-Alzheimer's drug candidate is (R) -flurbiprofen, a modulator of ⁇ -secretase activity, which, together with ⁇ -secretase, is involved in the formation of ⁇ from the amyloid precursor protein ("APP").
  • the (R) -flurbiprofen is in Phase III clinical trials. In earlier stages of clinical trials there are some active or passive immunization protocols involving second-generation ⁇ vaccines with improved safety profile compared to the first-generation AN-1792 vaccine or anti- ⁇ monoclonal antibodies.
  • AD central nervous system
  • AChE acetylcholinesterase
  • AChE inhibitors have proven to be an effective class of drugs improving cognitive function and activities of daily living, and generally have favorable tolerability and safety profiles. Recent evidence suggests that the AChE enzyme also has secondary non-cholinergic functions. Thus, while AChE has an activity Non-cholinergic neurotrophic, can also play a key role in the development of senile plaques, accelerating the deposition of ⁇ . Thus, AChE can bind to ⁇ , thus promoting the aggregation of ⁇ as an early occurrence in the neurodegenerative cascade of AD. The proaggregating effect of ⁇ of AChE results in cognitive impairment in doubly transgenic mice expressing human amyloid precursor protein and human AChE (hAChE). It is then hoped that blocking the peripheral site of AChE, the recognition zone of ⁇ within the enzyme, affects the aggregation of ⁇ induced by AChE and may constitute a potential strategy to modulate the progression of AD.
  • AChEIs AChE inhibitors
  • the so-called dual binding site AChEIs are usually endowed with a potent AChE inhibitory activity due to the increased number of target-drug interactions, thus exceeding the low activity of the selective AChEIs of peripheral site.
  • WO2007 / 122274 These hybrids are more potent inhibitors of hAChE and AChE-induced ⁇ aggregation than donepezil and tacrine models (cf. P. Camps et al., "Novel Donepezil-Based Inhibitors of Acetyl and Butyrylcholinesterase and Acetylcholinesterase-lnduced ⁇ - Amyloid
  • the inventors have found new compounds with a multifunctional profile since they are capable of acting on different molecular targets in the neurodegenerative cascade, being a good pharmacological option to face the multifactorial nature of AD and to stop the progression of the disease.
  • the compounds of the present invention are especially advantageous since they simultaneously interact with the peripheral, mid-throat and active sites of hAChE, reaching not only high hAChE inhibitory activity, but also interfering with the aggregation of ⁇ induced by AChE.
  • these compounds also have a significant butyrylcholinesterase (BChE) inhibitory activity.
  • BACE-1 ⁇ -secretase
  • neurodegenerative that is, they should be able to interfere in the upper part of the neurotoxic cascade of AD and, therefore, modify
  • the compounds of the present invention are capable of crossing the blood brain barrier (BHE) and entering the central nervous system (CNS) and, therefore, should be metabolically more robust than most BACE-1 inhibitors developed so far, of a peptide nature and with poor pharmacokinetics in most cases.
  • BHE blood brain barrier
  • CNS central nervous system
  • these compounds have complementary actions resulting from the action on other biological targets involved in the neurotoxic cascade of AD.
  • This combined pharmacological and pharmacokinetic profile makes these compounds very promising candidates for disease-modifying anti-Alzheimer's drugs.
  • one aspect of the present invention relates to a compound of formula (I), or its pharmaceutically acceptable salts, including any stereoisomer or mixture of stereoisomers, where: Ri is a radical (dC 4 ) -alkyl; R 2 and R 3 are radicals independently selected from the group consisting of F, Cl and methyl; R 4 and R 5 are identical radicals selected from the group consisting of (dC 4 ) -alkyl and (dC 4 ) -alkoxy; R 6 and R 7 are identical radicals selected from the group consisting of
  • the compounds of the present invention have a 5,6-dimethoxy-2 - [(4-piperidinyl) methyl)] indane fragment as a unit of interaction with the peripheral site, providing an antiplatelet effect of ⁇ .
  • the lack of stereogenic centers in the 5,6-dimethoxy-2 - [(4-piperidinyl) methyl)] indane fragment avoids problems related to the formation and separation of diastereomeric mixtures when combined with chiral huprins.
  • the unit of interaction with the active site of the new compounds is huprins Y and X.
  • model huprins so-called huprins Y and X, have a multi-target pharmacological profile including agonist activity of the muscarinic receptor Mi , antagonist properties of the / V-methyl-D-aspartic acid (NMDA) receptor, and neuroprotective effects in In vitro and in vivo against toxicity induced by NMDA, glutamate and 3-nitropropionic acid, apart from a potent hAChE inhibitory activity.
  • the length of the connector is considered adequate to provide the necessary distance between huprine and the donepezil-related fragment, for the desired dual site binding in the compounds of the present invention.
  • the new compounds of formula (I) or their salts may exist in solvated and non-solvated forms, including hydrated forms. Thus, they may contain stoichiometric amounts of solvent in the case of solvates, or of water in the case of hydrates. It is understood that the invention includes all these solvated and non-solvated forms.
  • the production of solvates and hydrates depends on the solvent used and the crystallization conditions that can be determined by the person skilled in the art.
  • the new compounds described herein have the ability to retain water molecules, which in some cases cannot be removed after drying the analytical samples at 65 ° C / 30 Torr for 4 days.
  • the compounds of formula (I) are in the form of dihydrochloride.
  • the compounds of formula (I) are those where m, r, and s are 0.
  • the compounds of formula (I) are those where t and u are 1.
  • the compounds of formula (I) are those where R 4 and R 5 are methoxy.
  • the compounds of formula (I) are those where Ri is methyl or ethyl.
  • the compounds of formula (I) are those where R 2 is Cl.
  • the compounds of formula (I) are those where n is 2.
  • the compounds of formula (I) are those where n is 3.
  • the compounds of formula (I) are those that are substantially pure enantiomeric compounds.
  • substantially pure enantiomeric compound is understood as one that has sufficient enantiomeric excess to be used on an industrial scale, which depends on each specific case, as one skilled in the art will find when the invention is exploited.
  • an enantiomeric excess e.e.
  • an enantiomeric excess greater than or equal to 90% and preferably greater than or equal to 98% e.e. is sufficient.
  • the most preferred compounds are those selected from the following list:
  • the compounds of formula (I) can be prepared by a process comprising reacting the intermediate compound of formula (II),
  • X is a halogen such as Cl, Br or I, or a sulphonate of formula OSO 2 R 8 where R 8 is a radical selected from (dC 4 ) -alkyl, CF 3 , phenyl, and phenyl mono- or disubstituted by a radical (dC 4 ) -alkyl.
  • the leaving group is bromide, mesylate (OSO 2 Me), besylate (OSO 2 Ph) or tosylate (OSO 2 PhMe).
  • pharmaceutically acceptable salts of the compound of formula (I) include acid addition salts such as dihydrochloride, but also any other pharmaceutically acceptable salts of other acids such as hydrobromic, hydrofluoric, sulfuric, phosphoric, acetic, citric. , fumaric, gluconic, lactic, maleic or tartaric.
  • These salts can be prepared conventionally, that is, by mixing a solution of the free base and the acid in a suitable solvent, for example ethanol, and recovering the acid addition salt as a precipitate, or by evaporating the solution.
  • a suitable solvent for example ethanol
  • the intermediate compounds of formula (II) are new and form part of the invention.
  • the halogenation reaction can be carried out using thionyl chloride, without end of alkaline aqueous reaction to avoid the subsequent formation of cycled by-products resulting from intramolecular alkylation of the piperidine nitrogen atom.
  • the intermediate compounds of formula (IV) can be prepared by alkylating a compound of formula (V) with a compound of formula (VI).
  • R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , r, s, t, uyn have the same meaning as in compound (IV) and Y is a leaving group.
  • the compound of formula (VI) is 2-bromoethanol or 3-chloro-1-propanol.
  • the reaction is carried out at reflux temperature and in the presence of an appropriate solvent.
  • An example of an appropriate solvent is 1-pentanol.
  • the compounds of formula (V) are known and can be prepared as described by P. Camps et al., In “Novel Donepezil-Based Inhibitors of Acetyl- and Butyrylcholinesterase and Acetylcholinesterase-lnduced ⁇ -Amyloid Aggregation", J. Med. Chem. 2008, vol. 51, pp. 3588-3598.
  • racemic compounds of formula (III) can be easily prepared through a four-step sequence from bicyclo [3.3.1] nonano-3,7-dione (cf. P. Camps et al., "New Tacrine-Huperzine A Hybrids (Huprines): Highly Potent Tight-Binding Acetylcholinesterase Inhibitors of Interest for the Treatment of Alzheimer's disease ", J. Med.Chem. 2000, vol. 43, pp. 4657-4666).
  • the substantially pure enantiomeric compounds of formula (III) can be easily obtained on a gram scale by chiral chromatographic resolution of the racemic compounds, in particular by medium pressure liquid chromatography using microcrystalline cellulose triacetate as the chiral stationary phase.
  • Another aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of the compound of formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, including any stereoisomer or mixture thereof, together with appropriate amounts of one or more. more pharmaceutically acceptable excipients or vehicles.
  • terapéuticaally effective amount refers to the amount of a compound that, when administered, is sufficient to prevent the development, or to alleviate to some degree, one or more of the symptoms of AD.
  • dose of compound administered according to this invention will of course be determined by the particular circumstances surrounding the case, including the compound administered, the route of
  • pharmaceutical composition refers to a mixture of a compound disclosed herein with other chemical components, such as diluents or carriers.
  • the pharmaceutical composition facilitates the administration of the compound to an organism.
  • pharmaceutically acceptable excipients or carriers refer to a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle, such as liquid or solid filler, diluent, excipient, solvent, or encapsulation material.
  • Each component must be pharmaceutically acceptable in the sense of being compatible with the other ingredients of the pharmaceutical composition. It must also be suitable for use in contact with human or animal tissue or organ without excessive toxicity, irritation, allergic response, immunogeneicity or other problems or complications provided with a reasonable benefit / risk ratio.
  • treatment is intended to include the relief or eradication of a disorder, disease, or condition, or the relief or eradication of the cause (s) of the disorder, disease, or condition itself.
  • the Compounds of the present invention have the ability to inhibit AChE, BChE, aggregation of h ⁇ induced by AChE and self-induced and BACE-1, and also have the ability to cross BHE as determined using an artificial membrane assay.
  • a further aspect of the present invention relates to a compound of formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, including any stereoisomer or mixture thereof, for the prophylactic and / or therapeutic treatment of AD.
  • This aspect can also be formulated as the use of the compounds of formula (I), or of a salt
  • the invention also relates to a method of treatment and / or prophylaxis of a mammal, including a human, suffering or being susceptible to AD, said method comprising administering to said patient a therapeutically effective amount of the compound of formula ( I), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, including any stereoisomer or mixtures thereof, together with pharmaceutically acceptable excipients or vehicles.
  • IR spectra were performed on a Perkin-Elmer Spectrum RX I spectrophotometer. Absorption values are expressed as wave numbers (enrf 1 ); Only significant absorption bands are given.
  • Tacrine-derived dimeric compounds the new compounds described herein have the ability to retain water molecules, which cannot be removed after drying of the analytical samples at 65 ° C / 30 Torr for 4 days. Thus, elemental analyzes of these compounds showed the presence of varying amounts of water.
  • Donepezil-huprine hybrids of formula (I) were transformed into the corresponding dihydrochlorides as follows: A solution of the free base (1 mmol) in CH 2 CI 2 (10-50 mL) was filtered through a PTFE of 0.45 ⁇ and treated with excess of a methanolic HCI solution (9 mmol). The solution was concentrated in vacuo to dryness and the solid residue was
  • Example 7 Preparation of (-) - (7S, 1 1 S) -3-chloro-12-r (2- ⁇ 4-r5,6-dimethoxyindan-2-yl) methylpiperidin-1-yl) ethyl) amino] -6,7,10,1 1 -tetrahydro-9-methyl-7.1 1 - methanocyclooctafiblquinoline ((-) - (la))
  • Example 8 Preparation of ( ⁇ ) -3-chloro-12- ⁇ (3- ⁇ 4-5,6-dimethoxyindan-2- yl) methyl] piperidin-1-yl) propyl) amino] -6,7,10 , 1 1 -tetrahydro-9-methyl-7.1 1 - methanocyclooctafiblquinoline (( ⁇ ) - (lb), compound of formula ( ⁇ ) - (!) With
  • Example 9 Preparation of (-) - (7S, 1 1 S) -3-chloro-12-r (3- ⁇ 4- [5,6-dimethoxyindan-2-yl) methylpiperidin-1-yl) propyl) amino1 -6,7,10,1 1 -tetrahydro-9-methyl-7.1 1 - methanocyclooctafi lquinoline ((-) - (lb))
  • Example 1 Preparation of ( ⁇ ) -3-chloro-12 - [(2- ⁇ 4- [5,6-dimethoxyindan-2- yl) methyl] piperidin-1-yl) ethyl) amino] -9-ethyl -6,7,10,1 1 -tetra h id ro-7.1 1 -
  • Example 12 Preparation of (-H7S.1 1 S) -3-chloro-12-r (2- ⁇ 4- [5,6-dimethoxyindan-2-yl) methylpiperidin-1-yl) ethyl) amino1-9- ethyl-6,7,10,1 1 -tetrahydro- 7,1 1 -methanocyclooctafi lquinoline ((-) - (lc))
  • Example 13 Preparation of ( ⁇ ) -3-chloro-12-r (3- ⁇ 4- [5,6-dimethoxyindan-2- yl) methyl] piperidin-1-yl) propyl) amino] -9-ethyl- 6,7,10,1 1 -tetra h id ro-7.1 1 -
  • Example 14 Preparation of (-H7S.1 1 S) -3-chloro-12-r (3- ⁇ 4-5,6-dimethoxyindan-2-yl) methylpiperidin-1-yl) propyl) amino1-9-ethyl -6,7,10,1 1 -tetrahydro- 7.1 1 -methanocyclooctafiblquinoline ((-) - (ld))
  • the AChE inhibitory activity of compounds (la) - (ld) was evaluated spectrophotometrically at 25 ° C by the method of Ellman et al., Using recombinant human AChE and acetylthiocholine iodide (0.13 mM) as substrate (cf. GL Ellman et al., "New and Rapid Colorimetric Determination of Acetylcholinesterase Activity" Biochem. Pharmacol. 1961, vol. 7, pp. 88-95).
  • the reaction took place in a final volume of 3 mL of 0.1 M phosphate buffer solution pH 8.0, containing 0.04 units of hAChE, and 333 ⁇ solution of 5,5'-dithiobis (2-nitrobenzoic acid) (DTNB) used to produce the yellow anion of 5-thio-2-nitrobenzoic acid.
  • Inhibition curves were performed in triplicate by incubating at least 12 inhibitor concentrations for 15 min. A triplicate sample without inhibitor was always present to yield 100% AChE activity.
  • the reaction was stopped with 100 ⁇ of 1 mM serine, and the color production was measured at 414 nm.
  • BChE inhibitory activity determinations were similarly carried out by the method of Ellman et al., Using 0.035 units of 0.56 mM human serum and butyrylthiocholine BChE, instead of AChE and
  • acetylthiocholine in a final volume of 1 mL.
  • Inhibitors were calculated by nonlinear regression analysis, using the GraphPad Prism program (GraphPad Software; San Diego, USA), which gave estimates of IC 5 or (drug concentration that produces 50% inhibition of enzyme activity) . The results are expressed as mean ⁇ standard error of the average of at least 4 experiments performed in triplicate.
  • DTNB, acetylthiocholine, butyrylthiocholine, and enzymes were purchased from Sigma and the Fluka serum.
  • Table 1 The results obtained are summarized in Table 1. It includes the inhibitory activities of AChE and BChE of donepezil hydrochlorides, racemic Y and X huprins and enantiopures as reference compounds, and of dihydrochlorides of racemic compounds (la) - (ld) and enantiopides. Values are expressed as mean ⁇ standard error of the average of at least four experiments.
  • the selectivity of AChE means IC 50 hBChE / IC 50 hAChE.
  • Substantially pure racemic and enantiomeric (la) - (ld) compounds are potent inhibitors of hAChE, presenting IC 50 values in the low to medium nanomolar range.
  • the most potent compound, (-) - (lb) is 8 times more potent than donepezil and 8 times less potent than the (-) - huprine Y model.
  • compounds (la) - (ld) are selective for AChE inhibition against BChE, they are moderately potent hBChE inhibitors.
  • Example 16 Test of inhibition of ⁇ - ⁇ aggregation induced by
  • Thioflavin T (Basic Yellow 1), the lyophilized human recombinant AChE powder, 1, 1, 1, 3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP), was purchased from Sigma Chemicals. The absolute DMSO on molecular sieves was from Fluka. The water was deionized and doubly distilled. ⁇ ⁇ ⁇ , supplied as trifluoroacetate salt, was purchased from Bachem AG (Bubendorf, Switzerland). ⁇ - ⁇ (2 mg mL "1 ) was dissolved in HFIP and lyophilized. The 1 mM solutions of the evaluated inhibitors were prepared by dissolving in MeOH.
  • the compounds of formula (la) - (ld) significantly inhibit, at a concentration of 100 ⁇ , the aggregation of ⁇ induced by hAChE, with inhibition percentages between 27% and 50% (Table 2), in all cases greater than of the single AChEl of the commercialized dual-junction site donepezil (22%), probably as a result of a better dual-site binding to the AChE, and in most cases also larger than those of the model huprins, which presented a remarkable inhibitory activity (12-37%).
  • the most potent compounds were the hybrids with trimethylene connector ( ⁇ ) - (lb), (-) - (lb), ( ⁇ ) - (ld), and (-) - (ld), as well as the hybrid with ethylenic connector ( ⁇ ) - (la), all with inhibition percentages between 40% and 50%.
  • Example 17 Assay for inhibition of autoaggregation of ⁇ - ⁇ -zi?
  • ⁇ / inhibitor 5/1).
  • Targets containing the evaluated inhibitors were prepared and evaluated.
  • the thioflavin T fluorescence method was used (cf. M. Bartolini et al., " ⁇ - Amyloid Aggregation Induced by Human Acetylcholinesterase: Inhibition Studies", Biochem. Pharmacol. 2003, vol .65, pp. 407-416). After incubation, the samples were diluted to a final volume of 2.0 ml_ with 50 mM glycine-NaOH buffer (pH 8.5) containing thioflavin T 1.5 ⁇ .
  • Example 18 Test of inhibition of ⁇ -secretase (BACE-1)
  • The% inhibition due to the presence of an increasing concentration of compound to be evaluated was calculated by the following expression: 100 - (IF ⁇ / IF 0 x 100) where IF ⁇ and IF 0 are the fluorescence intensities obtained for BACE- 1 in the presence and absence of inhibitor, respectively.
  • the inhibition curve for the most potent compound was obtained by representing the% inhibition against the logarithm of the inhibitor concentration in the test sample. Linear regression parameters were determined and IC 5 or extrapolated, when possible (GraphPad Prism 4.0, GraphPad Software Inc.).
  • All compounds of formula (la) - (ld) have a significant BACE-1 inhibition (12-31%) at 5 ⁇ .
  • the most potent BACE-1 inhibitors, the compounds ( ⁇ ) - (lb), (-) - (lb), and (-) - (la) are more potent than model huprins, but less potent than donepezil.
  • the value of IC 5 or for inhibition of BACE-1 of the compound (-) - (lb) is in the low micromolar range (1 1 .0 ⁇ ), thus constituting a moderately potent inhibitor of BACE-1, while for the Donepezil has described a value of IC 5 or 1 1, 3 ⁇ .
  • Example 19 In vitro permeation test of the blood brain barrier
  • PAMPA-BBB artificial membrane permeation
  • PAMPA-BBB test permeability results for compounds of formula (la) - (ld), huprins Y and X, and donepezil (Pe, 10 "6 cm s " 1 ) with their predictive penetration into the CNS are Summary in Table 3. Values are expressed as the mean ⁇ standard deviation of the average of three independent experiments. Compounds ( ⁇ ) - (la) -2HCI to ( ⁇ ) - (lc) -2HCI have been dissolved in PBS: 70:30 EtOH and compound ( ⁇ ) - (ld) -2HCI, huprins and donepezil are have dissolved in PBS: EtOH 80:20.
  • Table 4 shows the percentages of inhibition of AChE activity in mouse brains after administration of ( ⁇ ) - (lb) -2HCI and donepezil-HCI, over time.
  • the values are expressed as mean ⁇ standard error of the average of at least three independent experiments, each performed in triplicate.

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Abstract

Los compuestos de fórmula (I), o sus sales farmacéuticamente aceptables, incluyendo cualquier estereóismero o mezcla de ellos, donde R1 es un radical (C1-C4)-alquilo; R2 y R3 son radicales seleccionados independientemente del grupo que consiste en F, Cl y metilo; R4 y R5 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en (C1-C4)-alquilo y (C1-C4)-alcoxilo; R6 y R7 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en (C1-C4)-alquilo, y (C1-C4)-alcoxilo; n es un número entero de 2 a 4; m es un número entero de 0 a 1; r y s son números enteros idénticos de 0 a 1; y t y u son números enteros idénticos de 0 a 1, son útiles para el 15 tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Alzheimer. (I)

Description

Compuestos multifuncionales modificadores de la enfermedad de Alzheimer para el tratamiento de esta enfermedad
La invención se refiere a compuestos que actúan sobre diferentes dianas biológicas involucradas en la neuropatogénesis de la enfermedad de
Alzheimer (EA), y a un procediemiento para su preparación. También se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, y con su uso para el tratamiento de la EA.
ESTADO DE LA TÉCNICA
La EA, la forma más común de demencia en las personas ancianas, constituye uno de los mayores problemas sanitarios en los países
desarrollados, junto con los trastornos cardiovasculares y el cáncer. Este lento, progresivo, y finalmente fatal desorden neurodegenerativo está clínicamente caracterizado por un notable deterioro cognitivo definido por una pérdida de memoria y capacidad de aprendizaje, junto con una
capacidad reducida para llevar a cabo las actividades básicas de la vida diaria, y una diversa gama de síntomas neuropsiquiátricos tales como apatía, agitación verbal y física, irritabilidad, ansiedad, depresión, delirios y alucinaciones. La EA afecta actualmente aproximadamente a unos 20 millones de personas a nivel mundial y esta cantidad aumentará
sustancialmente en el futuro junto con el aumento del número de ancianos en la población, teniendo en cuenta el hecho de que la prevalencia de la EA se duplica cada 5 años a partir de los 65, con un 47% de afectados entre los mayores de 85 años. Como consecuencia de la creciente incidencia y de los efectos devastadores de la enfermedad, hay una necesidad urgente y creciente de una farmacoterapia efectiva. El carácter multifactorial de la EA ha propiciado el desarrollo de una variedad de aproximaciones para su corrección farmacológica. Aunque se ha hecho un tremendo progreso en la identificación de los orígenes moleculares de la EA, actualmente no hay cura para esta enfermedad.
La EA está caracterizada por dos principales signos patológicos: las placas de amiloide y los ovillos neurofibrilares, además de la pérdida de células neuronales en regiones cerebrales específicas. Un aumento en la producción del péptido β-amiloide (Αβ) y su posterior deposición en forma de placas de amiloide insolubles, formando las placas seniles extraneuronales, parece representar el suceso patológico clave que desencadena el proceso neurodegenerativo en la EA. Se están desarrollando diferentes estrategias dirigidas a disminuir, prevenir o incluso revertir la generación y deposición del Αβ, con objeto de enlentecer el progreso de la enfermedad y prevenir más pérdidas de células neuronales.
Más de un 40% de candidatos a fármacos anti-Alzheimer en ensayos clínicos tienen como diana la agregación del Αβ / formación de placa amiloide y la formación del Αβ. El candidato a fármaco anti-Alzheimer modificador de la enfermedad en desarrollo más avanzado es el (R)-flurbiprofeno, un modulador de la actividad de la β-secretasa, que, junto con la β-secretasa, está involucrado en la formación del Αβ a partir de la proteína precursora del amiloide ("amyloid precursor protein", APP). El (R)-flurbiprofeno está en Fase III de ensayos clínicos. En fases más tempranas de ensayos clínicos se encuentran algunos protocolos de inmunización activa o pasiva involucrando vacunas de Αβ de segunda generación con perfil de seguridad mejorado respecto a la vacuna de primera generación AN-1792 o anticuerpos monoclonales anti-Αβ.
En contraste con estas aproximaciones, el tratamiento sintomático de la EA, particularmente el tratamiento de los déficits cognitivos, ha sido atajado con éxito mediante el restablecimiento de neurotransmisores deficientes, particularmente acetilcolina, en el sistema nervioso central (SNC) de los pacientes con EA. Así, los esfuerzos de investigación se han enfocado, entre otros, en el potencial terapéutico de inhibidores de acetilcolinesterasa (AChE) para aliviar la sintomatología de la enfermedad. La aproximación terapéutica más establecida para la EA es el uso de agentes colinomiméticos indirectos con el perfil farmacológico de inhibidores de AChE (tacrina, donepezilo, rivastigmina y galantamina) que mejoran la neurotransmisión colinérgica central inhibiendo la degradación de la acetilcolina.
Los inhibidores de AChE han demostrado ser una clase efectiva de fármacos mejorando la función cognitiva y las actividades de la vida diaria, y tener generalmente unos perfiles de tolerabilidad y seguridad favorables. Pruebas recientes sugieren que el enzima AChE tiene también funciones no colinérgicas secundarias. Así, mientras que la AChE tiene una actividad neurotrófica no colinérgica, también puede jugar un papel clave en el desarrollo de las placas seniles, acelerando la deposición del Αβ. Así, la AChE puede unirse al Αβ, promoviendo así la agregación del Αβ como un suceso temprano en la cascada neurodegenerativa de la EA. El efecto proagregante del Αβ de la AChE resulta en deterioro cognitivo en ratones doblemente transgénicos que expresan proteína precursora del amiloide humana y AChE humana (hAChE). Se espera entonces que el bloqueo del sitio periférico de la AChE, la zona de reconocimiento del Αβ dentro del enzima, afecte la agregación del Αβ inducida por AChE y puede constituir una estrategia potencial para modular la progresión de la EA.
Sobre la base de estas premisas, nuevas clases de inhibidores de AChE (AChEIs) han emergido como prometedores candidatos a fármacos anti- Alzheimer modificadores de la enfermedad. De particular interés son aquellos AChEIs capaces de unirse simultáneamente a los sitios periférico y catalítico, que están separados por unos 14 Á al estar localizados en la boca y en el fondo de la garganta que lleva al sitio activo. Aparte de los efectos
antiagregantes del Αβ que resultan del bloqueo del sitio periférico, los llamados AChEIs de sitio de unión dual están usualmente dotados de una potente actividad inhibitoria de la AChE debido al número aumentado de interacciones diana-fármaco, superando así la baja actividad de los AChEIs selectivos de sitio periférico.
Se han descrito actividades inhibitorias in vitro de AChE y de la agregación del Αβ inducida por AChE para diferentes familias de AChEIs de sitio de unión dual. Entre ellos, están la memoquina (cf. e.g. A. Cavalli et al., "A Small Molecule targeting the Multifunctional Nature of Alzheimer's disease", Anqew. Chem. Int. Ed 2007, vol. 46, pp. 3689-3692) o algunos compuestos híbridos que tienen un fragmento de indanona del donepezilo y un resto de tacrina, que se han descrito en WO2004/032929.
En los últimos años se han desarrollado diferentes familias de AChEIs de sitio de unión dual basados en donepezilo que llevan la 5,6-dimetoxi-1 - indanona o un fragmento estrechamente relacionado como la unidad de interacción con el sitio periférico, pero sólo en un caso se han determinado los efectos antiagregante del Αβ , en concreto en una familia de híbridos que llevan el fragmento de 5, 6-dimetoxi-2-[(4-piperidinil)metil)]-1 -indanona del donepezilo (o el derivado de indano del mismo) y una unidad de tacrina como las unidades de interacción del sitio periférico a media garganta y del sitio activo, respectivamente. Estos compuestos se han descrito en
WO2007/122274. Estos híbridos son más potentes inhibidores de la hAChE y de la agregación del Αβ inducida por AChE que los modelos donepezilo y tacrina (cf. P. Camps et al., "Novel Donepezil-Based Inhibitors of Acetyl and Butyrylcholinesterase and Acetylcholinesterase-lnduced β-Amyloid
Aqqreqation", J.Med. Chem. 2008, vol. 51 , pp. 3588-3598).
Hasta el momento, no se ha comercializado ningún fármaco anti-Alzheimer modificador de la enfermedad. En particular, en relación con AChEIs de sitio de unión dual, sólo hay un ejemplo en ensayos clínicos, conocido como el NP-61 de Noscira, que entró en Fase I de ensayos clínicos en 2007. Así, a pesar de todos los esfuerzos de investigación invertidos en el pasado, hay aún una importante necesidad para encontrar compuestos para el tratamiento de la EA que pudieran modificar el curso de la EA, deteniendo o
enlenteciendo el progreso de la enfermedad.
EXPLICACIÓN DE LA INVENCIÓN
Los inventores han encontrado nuevos compuestos dotados de un perfil multifuncional ya que son capaces de actuar sobre distintas dianas moleculares en la cascada neurodegenerativa, siendo una buena opción farmacológica para afrontar la naturaleza multifactorial de la EA y para detener la progresión de la enfermedad.
Los compuestos de la presente invención son especialmente ventajosos ya que simultáneamente interaccionan con los sitios periféricos, de media garganta y activo de la hAChE, alcanzando no sólo una alta actividad inhibitoria de hAChE, sino también interfieren con la agregación del Αβ inducida por AChE. El primer efecto, de interés, para el tratamiento de la sintomatología de la EA, y el último para la modificación de la progresión de la EA. Además, estos compuestos también presentan una significativa actividad inhibitoria de la butirilcolinesterasa (BChE).
Sorprendentemente, los inventores han encontrado que estos compuestos muestran un significativo efecto inhibitorio sobre la autoagregación del Αβ. Asimismo, los inventores han encontrado que los compuestos de la presente invención también son capaces de bloquear la formación del Αβ mediante inhibición de la β-secretasa (BACE-1 ). La BACE-1 se ha investigado ampliamente como diana terapéutica para agentes modificadores de la enfermedad en la EA, ya que la BACE-1 está involucrada en la rotura proteolítica del APP al Αβ y los ratones sin BACE-1 no mostraron ningún fenotipo adverso.
Estos hechos son especialmente relevantes ya que, si se administraran en una fase temprana, estos compuestos podrían detener el proceso
neurodegenerativo, es decir deberían ser capaces de interferir en la parte alta de la cascada neurotóxica de la EA y, por lo tanto, modificar
positivamente la progresión de la EA.
Además, tal y como se ilustra en los Ejemplos, se ha predicho que los compuestos de la presente invención son capaces de atravesar la barrera hematoencefálica (BHE) y entrar en el sistema nervioso central (SNC) y, por tanto, deberían ser metabólicamente más robustos que la mayoría de inhibidores de BACE-1 desarrollados hasta el momento, de naturaleza peptídica y con mala farmacocinética en la mayoría de casos.
Por lo tanto, estos compuestos tienen acciones complementarias resultantes de la actuación sobre otras dianas biológicas involucradas en la cascada neurotóxica de la EA. Este perfil farmacológico combinado y farmacocinético hace que estos compuestos sean candidatos muy prometedores a fármacos anti-Alzheimer modificadores de la enfermedad.
La terapia con un único fármaco multimodal es ventajosa sobre la
pol ¡farmacia clásica, ya que reduce el riesgo de interacciones fármaco- fármaco y simplifica los estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos, la fabricación, formulación, diseños de ensayo clínico, y también los regímenes terapéuticos resultando en un mayor cumplimiento del paciente, que es un tema crítico en el cuidado de la EA.
Así, un aspecto de la presente invención se relaciona con un compuesto de fórmula (I), o sus sales farmacéuticamente aceptables, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de estereoisómeros, donde: Ri es un radical (d-C4)-alquilo; R2 y R3 son radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste en F, Cl y metilo; R4 y R5 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en (d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo; R6 y R7 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en
(d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo; n es un número entero de 2 a 4; m es un número entero de 0 a 1 ; r y s son números enteros idénticos de 0 a 1 ; y t y u son números enteros idénticos de 0 a 1 .
Figure imgf000008_0001
(I)
Los compuestos de la presente invención tienen un fragmento de 5,6- dimetoxi-2-[(4-piperidinil)metil)]indano como unidad de interacción con el sitio periférico, proporcionando un efecto antiagregante del Αβ. La falta de centros estereogénicos en el fragmento de 5,6-dimetoxi-2-[(4-piperidinil)metil)]indano evita problemas relacionados con la formación y separación de mezclas diastereoméricas al combinarse con las huprinas quirales. La unidad de interacción con el sitio activo de los nuevos compuestos son las huprinas Y y X. Es conocido en la técnica que las huprinas modelo, las denominadas huprinas Y y X, presentan un perfil farmacológico multi-diana incluyendo actividad agonista del receptor muscarínico M-i , propiedades antagonistas del receptor del ácido /V-metil-D-aspártico (NMDA), y efectos neuroprotectores in vitro e in vivo frente a toxicidad inducida por NMDA, glutamato y ácido 3- nitropropiónico, aparte de una potente actividad inhibitoria de la hAChE. La longitud del conector se considera la adecuada para proporcionar la distancia necesaria entre la huprina y el fragmento relacionado con el donepezilo, para la unión de sitio dual deseada en los compuestos de la presente invención.
Los nuevos compuestos de fórmula (I) o sus sales pueden existir en formas solvatadas y no solvatadas, incluyendo formas hidratadas. Así, pueden contener en su estructura cantidades estequiométricas de disolvente en el caso de los solvatos, o de agua en el caso de los hidratos. Se entiende que la invención incluye todas estas formas solvatadas y no solvatadas. La obtención de solvatos e hidratos depende del disolvente usado y de las condiciones de cristalización que pueden ser determinadas por el experto en la materia. Los nuevos compuestos aquí descritos tienen la capacidad de retener moléculas de agua, que en algunos casos no pueden ser eliminadas después de secar las muestras analíticas a 65 °C/30 Torr durante 4 días.
En una realización preferida, los compuestos de formula (I) están en forma de dihidrocloruro.
En una realización preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquéllos donde m, r, and s son 0.
En una realización más preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquéllos donde t y u son 1 .
En una realización incluso más preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquéllos donde R4 y R5 son metoxilo.
En otra realización más preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquellos donde Ri es metilo o etilo.
En otra realización más preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquéllos donde R2 es Cl.
En aún otra realización preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquéllos donde n es 2.
En aún otra realización preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquéllos donde n es 3.
En otra realización preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquéllos que son compuestos enantioméricos sustancialmente puros. Por compuesto enantiomérico sustancialmente puro se entiende como aquél que tiene suficiente exceso enantiomérico para usarse a escala industrial, lo cual depende de cada caso específico, como el experto en la materia encontrará cuando la invención sea explotada. Generalmente, es suficiente con un exceso enantiomérico (e.e.) mayor o igual al 90% y preferiblemente mayor o igual al 98% e.e.
Los compuestos más preferidos son aquellos seleccionados de la siguiente lista:
(±)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}etil)amino]- 6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina ((±)-(la)), (±)- compuesto de fórmula (I) con R^Me, R2=CI, n=2, m=r=s=0, R4=R5=OMe, t=u=1 ).
(-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}etil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina (H-(la)).
(±)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}propil)amino]- 6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina ((±)-(lb), compuesto de fórmula (I) con R^Me, R2=CI, n=3, m=r=s=0, R4=R5=OMe, t=u=1 ).
(-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}propil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina (H-(lb)). (+)-(7R,1 1 R)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}propil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[i ]quinolina ((+)-(lb)).
(±)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}etil)am etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro-7,1 1 -metanocicloocta[i ]quinolina ((±)-(lc), compuesto de fórmula (I) con
Figure imgf000011_0001
R2=CI, n=2, m=r=s=0, R4=R5=OMe, t=u=1 ).
(-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}etil)amino]-9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina ((-)- (le)).
(±)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}propil)amino]- 9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina ((±)-(ld)), compuesto de fórmula (I) con
Figure imgf000011_0002
R2=CI, n=3, m=r=s=0, R4=R5=OMe, t=u=1 ).
(-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}propil)amino]-9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina (H-(ld)).
Los compuestos de fórmula (I) se pueden preparar por un procedimiento que comprende hacer reaccionar el compuesto intermedio de fórmula (II),
Figure imgf000011_0003
(CH2)n
\
X
(II) con el compuesto de fórmula (III), incluyendo los correspondientes estereoisómeros o mezclas de ellos,
Figure imgf000012_0001
y opcionalmente tratar con un ácido farmacéuticamente aceptable
para formar la sal correspondiente; donde R-i , R2, R3, R4, R5, Re, R7, m, n, r, s, t y u son como se definen en la correspondiente reivindicación de compuesto, y X es un grupo saliente.
Preferiblemente, X es un halógeno tal como Cl, Br o I, o un sulfonato de fórmula OSO2R8 donde R8 es un radical seleccionado de (d-C4)-alquilo, CF3, fenilo, y fenilo mono- o disustituido por un radical (d-C4)-alquilo. En una realización preferida el grupo saliente es bromuro, mesilato (OSO2Me), besilato (OSO2Ph) o tosilato (OSO2PhMe).
Como se menciona anteriormente, las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (I) incluyen sales de adición de ácido tales como dihidrocloruro, pero también cualesquiera otras sales farmacéuticamente aceptables de otros ácidos tales como el bromhídrico, fluorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, fumárico, glucónico, láctico, maleico o tartárico.
Estas sales pueden prepararse convencionalmente, es decir, mezclando una disolución de la base libre y el ácido en un disolvente adecuado, por ejemplo etanol, y recuperando la sal de adición ácida como precipitado, o por evaporación de la disolución.
Los compuestos intermedios de fórmula (II) son nuevos y forman parte de la invención. Los compuestos intermedios de fórmula (II) con X=halógeno pueden prepararse halogenando un compuesto de fórmula (IV) donde R4, R5, Re, R7, r, s, t y u tienen el mismo significado mencionado para el compuesto (II).
Figure imgf000013_0001
(CH2)n
\
OH
(IV)
La reacción de halogenacion puede llevarse a cabo usando cloruro de tionilo, sin final de reacción acuoso alcalino para evitar la formación posterior de subproductos ciclados resultantes de alquilación intramolecular del átomo de nitrógeno de piperidina.
El compuesto de fórmula (II) con X=OSO2R8 se puede preparar haciendo reaccionar el compuesto de fórmula (IV) con un haluro de sulfonilo de fórmula ZSO2R8, donde Z es un halógeno en presencia de una base adecuada tal como una amina orgánica terciaria, por ejemplo trietilamina.
Los compuestos intermedios de fórmula (IV) tal como se han definido anteriormente son nuevos y forman parte de la invención.
Los compuestos intermedios de fórmula (IV) pueden prepararse alquilando un compuesto de fórmula (V) con un compuesto de fórmula (VI).
Figure imgf000014_0001
En los compuestos de fórmula (V) y (VI), R4, R5, R6, R7, r , s, t, u y n tienen el mismo significado que en el compuesto (IV) e Y es un grupo saliente.
Preferiblemente, el compuesto de fórmula (VI) es 2-bromoetanol o 3-cloro-1 - propanol. Generalmente, la reacción se lleva a cabo a temperatura de reflujo y en presencia de un disolvente apropiado. Un ejemplo de disolvente apropiado es el 1 -pentanol.
Los compuestos de fórmula (V) son conocidos y pueden prepararse tal como se describe por P. Camps et al., in "Novel Donepezil-Based Inhibitors of Acetyl- and Butyrylcholinesterase and Acetylcholinesterase-lnduced β- Amyloid Aggregation", J. Med. Chem. 2008, vol. 51 , pp. 3588-3598.
Los compuestos racémicos de fórmula (III) puede prepararse fácilmente a través de una secuencia de cuatro pasos a partir de biciclo[3.3.1 ]nonano-3,7- diona (cf. P. Camps et al., "New Tacrine-Huperzine A Hybrids (Huprines): Highly Potent Tight-Binding Acetylcholinesterase Inhibitors of Interest for the Treatment of Alzheimer's disease", J. Med.Chem. 2000, vol. 43, pp. 4657- 4666). Por otro lado, los compuestos enantioméricos sustancialmente puros de fórmula (III) pueden obtenerse fácilmente a una escala de gramo por resolución cromatográfica quiral de los compuestos racémicos, en concreto por cromatografía líquida de media presión usando triacetato de celulosa microcristalina como fase estacionaria quiral. Otro aspecto de la presente invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de los mismos, junto con cantidades apropiadas de uno o más excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.
El término "cantidad terapéuticamente efectiva" como se usa aquí, se refiere a la cantidad de un compuesto que, cuando se administra, es suficiente para prevenir el desarrollo, o aliviar en algún grado, uno o más de los síntomas de la EA. La dosis particular de compuesto administrado según esta invención será por supuesto determinado por las circunstancias particulares que rodeen el caso, incluyendo el compuesto administrado, la ruta de
administración, la condición particular a ser tratada, y consideraciones similares.
El término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de un compuesto revelado aquí con otros componentes químicos, tales como diluyentes o vehículos. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo.
Los términos "excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables" se refieren a un material farmacéuticamente aceptable, composición o vehículo, tales como relleno líquido o sólido, diluyente, excipiente, disolvente, o material de encapsulación. Cada componente debe ser farmacéuticamente aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composición farmacéutica. Debe ser también adecuado para el uso en contacto con el tejido u órgano de humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, inmunogeneicidad u otros problemas o complicaciones proporcionados con una relación beneficio/riesgo razonable.
El término "tratamiento" pretende incluir el alivio o la erradicación de un desorden, enfermedad, o condición, o el alivio o la erradicación de la(s) causa(s) del desorden, enfermedad, o condición propiamente.
Tal como se ha mencionado anteriormente y se ilustra en los Ejemplos, los compuestos de la presente invención tienen la capacidad de inhibir AChE, BChE, la agregación del Αβ inducida por AChE y autoinducida y la BACE-1 , y también tienen la capacidad de atravesar la BHE según se ha determinado usando un ensayo con una membrana artificial.
Así, un aspecto adicional de la presente invención se relaciona con un compuesto de fórmula (I), o una sal farmaceúticamente aceptable del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de ellos, para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la EA. Este aspecto puede también formularse como el uso de los compuestos de fórmula (I), o de una sal
farmacéuticamente aceptable de ellos, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de ellos, para la preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la EA en un mamífero incluyendo un humano. La invención también se relaciona con un método de tratamiento y/o profilaxis de un mamífero, incluyendo un humano, sufriendo o siendo susceptible de padecer de la EA, dicho método comprende la administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezclas de ellos, junto con excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. Además, la presente invención cubre todas las posibles combinaciones de realizaciones particulares y preferidas aquí indicadas.
EJEMPLOS
Métodos Generales.
Los puntos de fusión se determinaron en tubos capilares abiertos con un aparato de puntos de fusión MFB 595010M Gallenkamp. Los análisis elementales y espectros de masas de alta resolución se llevaron a cabo en el Servicio de Microanálisis del IIQAB (CSIC, Barcelona, España) con un analizador Cario Erba modelo 1 106, y en los Servicios Científico- Técnicos de la Universidad de Barcelona con un espectrómetro LC/MSD TOF D'Agilent Technologies.
Los espectros de IR se realizaron en un espectrofotómetro Perkin-Elmer Spectrum RX I. Los valores de absorción se expresan como números de onda (enrf1); sólo se dan las bandas de absorción significativas.
La cromatografía en columna se llevó a cabo con gel de sílice 60 AC.C (35-70 mesh, SDS, ref 2000027) o con un equipo Biotage FLASH 40M Silica (KP-Sil™ 40-63 μιτι, cartuchos de 40x150 mm). La cromatografía en capa fina se realizó con láminas soportadas en aluminio con gel de sílice 60 F254 (Merck, ref 1 .05554), y las manchas se visualizaron con luz UV light y con disolución acuosa al 1 % de KMnO4.
Para la cristalización se usaron disolventes de grado analítico, mientras que en las reacciones, extracciones y cromatografía en columna se usaron disolventes puros para síntesis.
Con propósitos de caracterización, los nuevos compuestos se transformaron en los correspondientes dihidrocloruros, y se recristal izaron. Las muestras analíticas de todos los nuevos híbridos que fueron sometidos a evaluación farmacológica poseen una pureza > 95% tal como se evidenció por sus análisis elementales y, en los híbridos enantiopuros, también por HPLC. Cabe destacar que, tal como se describió previamente para unos
compuestos diméricos derivados de tacrina, los nuevos compuestos descritos aquí tienen la capacidad de retener moléculas de agua, que no pueden ser eliminadas después de secado de las muestras analíticas a 65 °C/30 Torr durante 4 días. Así, los análisis elementales de estos compuestos mostraron la presencia de cantidades variables de agua.
Ejemplo 1 : Preparación de 2-{[1 -(2-hidroxietil)piperidin-4-il1metil)-5,6- dimetoxiindano ((IVa), compuesto (IV) con n=2, r=s=0, R4=Rñ=OMe, t=u=1 )) Una mezcla de 5,6-dimetoxi-2-[(4-piperidinil)metil]indano (compuesto (V) con r=s=0, R4=R5=OMe, t=u=1 ) (970 mg, 3.53 mmol, 1 equiv) y 2-bromoetanol (compuesto (VI) con n=2, Y=Br) (0.5 mL, 0.88 g, 7.05 mmol, 2 equiv) en 1 - pentanol se calentó bajo reflujo durante 48 h. La suspensión resultante se dejó enfriar a temperatura ambiente, se diluyó con AcOEt (60 mL) y se extrajo con HCI acuoso 1 N (3x20 mL). Las fases acuosas combinadas se lavaron con AcOEt (4x20 mL), se alcalinizaron con lentejas de NaOH (pH = 12), y se extrajeron con CH2CI2 (3x30 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron con Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío para dar un residuo sólido gris (861 mg), que fue sometido a cromatografía en columna (gel de sílice de 35-70 μηη, mezclas CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% como eluyente). Eluyendo con CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 92:8:0.5, el compuesto del título (616 mg, 55% de rendimiento) se aisló como un sólido blanco. Eluyendo con CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 90:10:0.5 a 80:20:0.5, se aisló la piperidina (V) de partida (193 mg) (68% de basado en piperidina de partida reaccionada). Caracterización: Rf 0.27
(CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 8.5:1 .5:0.05); pf 78-79 °C
(CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 92:8:0.5); IR (KBr) v 3514 (O-H st) cnrf1. Análisis elemental, calculado para Ci9H29NO3 C 71 .44, H 9.15, N 4.38; encontrado C 71 .41 , H 9.09, N 4.36.
Ejemplo 2: Preparación de 2-{[1 -(3-hidroxipropil)piperidin-4-il1metil)-5,6- dimetoxiindano ((IVb), compuesto (IV) con n=3, r=s=0, R4=Rñ=OMe, t=u=1 ))
Se preparó tal como se ha descrito para el compuesto del Ejemplo 1 , a partir de 5,6-dimetoxi-2-[(4-piperidinil)metil]indano (compuesto (V) con r=s=0, R4=R5=OMe, t=u=1 ) (1 .09 g, 3.96 mmol, 1 equiv) y 3-cloro-1 -propanol (compuesto (VI) con n=3, Y=CI) (0.7 mL, 0.79 g, 8.37 mmol, 2 equiv). Se obtuvo un residuo sólido gris (1 .02 g) que fue sometido a cromatografía en columna (gel de sílice de 35-70 μιτι, mezclas CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% como eluyente). Eluyendo con CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 92:8:0.5, se aisló el compuesto del título (577 mg, 44% de rendimiento) como un sólido blanco. Eluyendo con CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50%
90:10:0.5 a 85:15:0.5, se aisló piperidina de partida (78 mg) (47% de rendimiento del compuesto del título basado en piperidina reaccionada). Caracterización: Rf 0.29 (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05); pf 85-86 °C (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 92:8:0.5); IR (KBr) v 3172 (O-H st) cm Análisis elemental, calculado para C20H31 NO3 C 72.04, H 9.37, N 4.20; encontrado C 72.06, H 9.25, N 4.16.
Eiemplo 3: Preparación del hidrocloruro de 2-{[1 -(2-cloroetil)piperidin-4- il1metil)-5,6-dimetoxiindano ((lia), compuesto (II) con n=2, r=s=0, R4=Rñ=OMe, t=u=1 , X=CI en forma de hidrocloruro))
Sobre una disolución enfriada a 5 °C del compuesto (IVa) del Ejemplo 1 (566 mg, 1 .77 mmol, 1 equiv) en CH2CI2 (25 mL), se añadió gota a gota SOCI2 (6.43 mL, 10.5 g, 88.2 mmol, 50 equiv). La mezcla de reacción se calentó bajo reflujo durante 4 h, se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó al vacío. El residuo sólido marrón claro resultante se redisolvió en CH2CI2 (5x10 mL) y se evaporó al vacío para dar compuesto del título crudo (671 mg), que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Eiemplo 4: Preparación del hidrocloruro de 2-{[1 -(3-cloropropil)piperidin-4- il1metil)-5,6-dimetoxiindano ((llb), compuesto (II) con n=3, r=s=0, R4=Rñ=OMe, t=u=1 , X=CI en forma hidrocloruro))
Se preparó tal como se describe para el compuesto (lia) del Ejemplo 3, a partir del compuesto (IVb) del Ejemplo 2 (694 mg, 2.08 mmol, 1 equiv) y SOCI2 (7.6 mL, 12.4 g, 104 mmol, 50 equiv). Se obtuvo el compuesto del título crudo (825 mg) y se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.
Eiemplo 5: Procedimiento general para la reacción de ω-cloroalquilpiperidinas de fórmula (II) con huprinas de fórmula (III)
Se preparó una disolución de huprina de fórmula (III) (1 mmol) en DMSO anhidro (4.5 mL) calentando a 70 °C en un baño de agua, se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se añadió a una mezcla de KOH pulverizado (343 mg de reactivo de 85% de pureza, 5.2 mmol) y tamiz molecular de 4 Á
(aproximadamente 600 mg). La mezcla resultante se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 2 h y entonces se trató, gota a gota, con una disolución de co-cloroalquilpiperidina de fórmula (II) en forma de hidrocloruro (1 .2 mmol) en DMSO (1 .5-5 mL), previamente preparada por calentamiento a 70 °C en un baño de agua. La mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 3-5 días, se diluyó con agua (30-100 mL), y se extrajo con CH2CI2 (4x20 ml_). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3x30 ml_), se secaron con Na2SO4 anhidro, y se evaporaron a presión reducida para dar un residuo sólido o líquido marrón, que fue sometido a cromatografía en columna (gel de sílice de 35-70 μιτι o equipo Biotage FLASH 40M Silica (KP-Sil™ 40-63 μηη, cartuchos de 40x150 mm), mezclas CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% o hexano/AcOEt/Et3N como eluyente).
Los híbridos donepezilo-huprina de fórmula (I) se transformaron en los correspondientes dihidrocloruros como sigue: Una disolución de la base libre (1 mmol) en CH2CI2 (10-50 mL) se filtró a través de un PTFE de 0.45 μιτι y se trató con exceso de una disolución metanólica de HCI (9 mmol). La disolución se concentró al vacío a sequedad y el residuo sólido se
recristal izó de mezclas MeOH/AcOEt y/o se secó a 65 °C/30 Torr durante 4 días.
Ejemplo 6: Preparación de (±)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2- il)metillpiperidin-1 -il)etil)amino1-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 - metanociclooctafi lquinolina ((±)-(la)), compuesto de fórmula (±)-(!) con
Figure imgf000020_0001
A partir de compuesto de fórmula (±)-(llla) (compuesto (±)-(lll) con R^Me, R2=CI y m=0) (235 mg, 0.83 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (lia) crudo (compuesto (II) con n=2, r=s=0, R4=R5=OMe, t=u=1 ,_X=CI en forma de hidrocloruro) del Ejemplo 3 (alícuota de 371 mg de una cantidad total de 671 mg del producto crudo obtenido a partir de 566 mg (1 .77 mmol) de compuesto (IVa) de Ejemplo 1 ), se obtuvo un residuo sólido marrón (384 mg) que se sometió a cromatografía en columna [gel de sílice de 35-70 μιτι (50 g), CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.4], para proporcionar sucesivamente compuesto de fórmula (±)-(la) (103 mg, 21 % de rendimiento) como un sólido amarillo claro, una mezcla (±)-(la)/(±)-(llla) en proporción aproximada 64:36 (1H RMN) (1 14 mg, 36% de rendimiento total de (±)-(la)), y huprina de partida (±)-(llla) (47 mg) (58% de rendimiento total de (±)-(la) basado en (±)-(llla) reaccionado). Caracterización: (±)-(la): Rf = 0.64
(CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (±)-(la)-2HCI: pf 200-202 °C (CH2CI2/MeOH 6:7); IR (KBr) v 3500-2500 (máx a 3417, 3256, 3055, 3001 , 2928, 2835, N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1630, 1581 , y 1504 (ar-C-C y ar-C-N st) cnrf1; HRMS calculado para (C36H44 35CIN3O2 + H+) 586.3194, encontrado 586.3207. Análisis elemental, calculado para
(C36H44CIN3O2-2HCI-3H2O) C 60.63, H 7.35, N 5.89, Cl 14.91 ; encontrado C 60.90, H 7.05, N 5.93, Cl 15.06.
Ejemplo 7: Preparación de (-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-r(2-{4-r5,6-dimetoxiindan- 2-il)metillpiperidin-1 -il)etil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 - metanociclooctafiblquinolina ((-)-(la))
A partir de (-)-(llla) (>99% ee, 295 mg, 1 .04 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (lia) crudo (alícuota de 473 mg de una cantidad total de 2.50 g del producto crudo obtenido a partir de 2.20 g (6.90 mmol) de compuesto (IVa)) con un tiempo de reacción de 5 días, se obtuvo un residuo sólido marrón (686 mg) y se sometió a cromatografía en columna [gel de sílice de 35-70 μηη (68 g), mezclas CH2Cl2/MeOH/NH4OH acuoso al 50%]. Eluyendo con CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.2 a 98:2:0.2, se aislaron sucesivamente compuesto de fórmula (-)-(la) (106 mg, 17% de rendimiento) y una mezcla (-)-(la)/(-)-(llla) en proporción aproximada 55:45 (1H RMN) [210 mg, 36% de rendimiento total de (-)-(la), 54% de rendimiento total de (-)-(la) basado en huprina (-)-(llla) reaccionada] como un aceite incoloro y un aceite amarillento, respectivamente. Caracterización: (-)-(la): Rf = 0.64 (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (-)-(la)-2HCI: [cc]20 D = -139 (c 0.96, MeOH); pf 228-230 °C (CH2CI2/MeOH 4:1 ); IR (KBr) v 3600- 2500 (máx a 3551 , 3388, 3342, 3229, 3056, 2928, 2842, 2701 , N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1629, 1582, y 1505 (ar-C-C y ar-C-N st) crTf1.HRMS calculado para (C36H44 35CIN3O2 + H+) 586.3194, encontrado 586.3193.
Análisis elemental, calculado para (C36H44CIN3O2-2HCI-2H2O) C 62.20, H 7.25, N 6.04, Cl 15.30; encontrado C 62.45, H 7.20, N 6.19, Cl 15.13.
Ejemplo 8: Preparación de (±)-3-cloro-12-í(3-{4-í5,6-dimetoxiindan-2- il)metil]piperidin-1 -il)propil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 - metanociclooctafiblquinolina ((±)-(lb), compuesto de fórmula (±)-(!) con
Figure imgf000021_0001
A partir de (±)-(llla) (31 1 mg, 1 .09 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (llb) crudo (alícuota de 508 mg de una cantidad total de 825 mg del producto crudo obtenido a partir de 694 mg (2.08 mmol) de compuesto (IVb)), se obtuvo un residuo sólido marrón (641 mg). Tras tres purificaciones sucesivas por cromatografía en columna (gel de sílice de 35-70 μιτι (65 g), CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.2 a 92:8:0.2 + equipo Biotage FLASH 40M Silica, CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 98:2:0.2 + equipo Biotage FLASH 40M Silica, CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 100:0:0.2 a 95:5:0.2), se aislaron una mezcla (±)-(llla)/(±)-(lb) en proporción aproximada 38:62 (1H RMN) (152 mg) y compuesto de fórmula (±)-(lb) [136 mg, 21 % de rendimiento aislado, 35% de rendimiento total, 43% de rendimiento total basado en huprina (±)-(llla) reaccionada] como un sólido y aceite
amarillentos, respectivamente. Caracterización: (±)-(lb): Rf = 0.59
(CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (±)-(lb)-2HCI: pf 184-186 °C (MeOH/AcOEt 1 :8); IR (KBr) v 3600-2500 (máx a 3417, 3252, 3060, 2995, 2928, 2835, N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1630, 1581 , y 1504 (ar-C-C y ar-C-N st) crrf1. HRMS calculado para (C37H4635CIN3O2 + H+) 600.3351 , encontrado 600.3358. Análisis elemental, calculado para
(C37H46CIN3O2-2HCI-2H2O) C 62.66, H 7.39, N 5.93, Cl 15.00; encontrado C 62.29, H 7.19, N 5.71 , Cl 15.05.
Ejemplo 9: Preparación de (-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-r(3-{4-[5,6-dimetoxiindan- 2-il)metillpiperidin-1 -il)propil)amino1-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 - metanociclooctafi lquinolina ((-)-(lb))
A partir de (-)-(llla) (>99% ee, 200 mg, 0.70 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (llb) crudo (alícuota de 276 mg de una cantidad total de 1 .29 g del producto crudo obtenido a partir de 1 .30 g (3.90 mmol) de compuesto (IVb)), se obtuvo un residuo oleoso marrón (415 mg) que se sometió a cromatografía en columna [gel de sílice de 35-70 μιτι (42 g), CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.2], para proporcionar
sucesivamente una mezcla (-)-(llla)/(-)-(lb) en proporción aproximada 22:78 (1H RMN) (65 mg) y compuesto de fórmula (-)-(lb) [64 mg, 15% de
rendimiento aislado, 27% de rendimiento total, 29% de rendimiento total basado en (-)-(llla) reaccionada] como aceites amarillentos. Caracterización: (-)-(lb): Rf = 0.62 (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (-)- (lb)-2HCI: [cc]20 D = -139 (c 0.1 1 , MeOH); pf 206-208 °C (CH2CI2/MeOH 5:1 ); IR (KBr) v 3600-2500 (máx a 3371 , 3232, 31 19, 3055, 2924, 2856, 2646, N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1630, 1582, y 1502 (ar-C-C y ar-C-N st) crrf1. HRMS calculado para (C37H46 35CIN3O2 + H+) 600.3351 , encontrado 600.3344. Análisis elemental, calculado para (C37H46CIN3O2-2HCI-3.5H2O) C 60.36, H 7.53, N 5.71 , Cl 14.45; encontrado C 60.07, H 7.29, N 5.34, Cl 14.79.
Ejemplo 10: Preparación de (+H7R1 1 f?)-3-cloro-12-r(3-{4-[5,6- dimetoxiindan-2-il)metillpiperidin-1 -il)propil)amino]-6,7,10,1 1 -tetra h id ro-9- metil-7,1 1 -metanocicloocta[ib]quinolina ((+)-(lb))
A partir de (+)-(llla) (>99% ee, 283 mg, 0.99 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (llb) crudo (alícuota de 461 mg de una cantidad total de 1 .29 g del producto crudo obtenido a partir de 1 .30 g (3.90 mmol) de compuesto (IVb)), se obtuvo un residuo oleoso marrón (590 mg) y se sometió a cromatografía en columna [gel de sílice de 35-70 μιτι (59 g),
hexano/AcOEt/Et3N 50:50:0.2], para proporcionar sucesivamente (+)-(llla) de partida (41 mg) como un sólido amarillento, y una mezcla (+)-(llla)/(+)-(lb) en proporción aproximada 35:65 (1H RMN) (20 mg) y compuesto de fórmula (+)- (Ib) [279 mg, 47% de rendimiento aislado, 49% de rendimiento total, 59% de rendimiento total basado en (+)-(llla) reaccionado] como aceites amarillentos. Caracterización: (+)-(lb): Rf = 0.58 (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (+)-(lb)-2HCI: [cc]20 D = +140 (c 0.82, MeOH); pf 198-199 °C
(MeOH/AcOEt 2:13); IR (KBr) v 3600-2500 (máx a 3400, 3220, 31 19, 3061 , 3014, 2920, 2897, 2833, 2628, 2552, N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1630, 1605, 1583, y 1504 (ar-C-C y ar-C-N st) cm"1. HRMS calculado para
(C37H46 35CIN3O2 + H+) 600.3351 , encontrado 600.3352. Análisis elemental, calculado para (C37H46CIN3O2-2HCI-2.5H2O) C 61 .88, H 7.44, N 5.85, Cl 14.81 ; encontrado C 62.14, H 7.22, N 5.81 , Cl 14.38.
Ejemplo 1 1 : Preparación de (±)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2- il)metil]piperidin-1 -il)etil)amino]-9-etil-6,7,10,1 1 -tetra h id ro-7,1 1 -
Figure imgf000023_0001
A partir de compuesto de fórmula (±)-(lllb) (compuesto (±)-(lll) con
Figure imgf000023_0002
R2=CI y m=0) (322 mg, 1 .08 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (lia) crudo [alícuota de 464 mg de una cantidad total de 503 mg del producto crudo obtenido a partir de 396 mg (1 .24 mmol) de compuesto (IVa)], se obtuvo un residuo sólido marrón (549 mg) y se sometió a cromatografía en columna (gel de sílice de 35-70 μηη (55 g), mezclas CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50%). Eluyendo con CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.2 a 95:5:0.2, se aisló compuesto de fórmula (±)-(lc) (181 mg, 28% de
rendimiento) como un sólido amarillento. Caracterización: (±)-(lc): Rf = 0.58 (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (±)-(lc)-2HCI: pf 222-225 °C (MeOH/AcOEt 2:9); IR (KBr) v 3600-2500 (máx a 3402, 3256, 3226, 3056, 2925, 2851 , 2707, 2651 , N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1629, 1582, 1557, y 1505 (ar-C-C y ar-C-N st) cm"1. HRMS calculado para (C37H4635CIN3O2 + H+) 600.3351 , encontrado 600.3358. Análisis elemental, calculado para
(C37H46CIN3O2-2HCM .5H2O) C 63.47, H 7.34, N 6.00, Cl 15.19; encontrado C 63.51 , H 7.18, N 5.94, Cl 15.21 .
Ejemplo 12: Preparación de (-H7S.1 1 S)-3-cloro-12-r(2-{4-[5,6- dimetoxiindan-2-il)metillpiperidin-1 -il)etil)amino1-9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro- 7,1 1 -metanociclooctafi lquinolina ((-)-(lc))
A partir de (-)-(lllb) (>99% ee, 303 mg, 1 .02 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (lia) crudo [alícuota de 413 mg de una cantidad total de 2.50 g del producto crudo obtenido a partir de 2.20 g (6.90 mmol) de compuesto (IVa), se obtuvo un residuo sólido marrón (555 mg) que se sometió a cromatografía en columna (gel de sílice de 35-70 μιτι (55 g), mezclas CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50%). Eluyendo con
CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.2 a 98:2:0.2, se aislaron sucesivamente compuesto de fórmula (-)-(lc) (1 10 mg, 18% de rendimiento) y una mezcla (-)-(lc)/(-)-(lllb) en proporción aproximada 68:32 (1H RMN) [156 mg, 35% de rendimiento total de (-)-(lc), 43% de rendimiento total de (-)-(lc) basado en huprina (-)-(lllb) reaccionada] como aceites incoloro y amarillento, respectivamente. Caracterización: (-)-(lc): Rf = 0.58 (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (-)-(lc)-2HCI: [cc]20 D = -140 (c 1 .39, MeOH); pf 251- 252 °C (CH2CI2/MeOH 4:1 ); IR (KBr) v 3500-2500 (máx a 3402, 3220, 31 17, 3047, 2927, 2904, 2837, 2718, 2677, 2642, 2505, N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1631 , 1601 , 1582, y 1502 (ar-C-C y ar-C-N st) cm"1. HRMS calculado para (C37H46 35CIN3O2 + H+) 600.3351 , encontrado 600.3353. Análisis elemental, calculado para (C37H46CIN3O2-2HCM .75H2O) C 63.06, H 7.37, N 5.96, Cl 15.09; encontrado C 63.03, H 7.27, N 5.94, Cl 14.50.
Ejemplo 13: Preparación de (±)-3-cloro-12-r(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2- il)metil]piperidin-1 -il)propil)amino]-9-etil-6,7,10,1 1 -tetra h id ro-7,1 1 -
Figure imgf000025_0001
A partir de compuesto de fórmula (±)-(lllb) (230 mg, 0.77 mmol) e
hidrocloruro del compuesto de fórmula (llb) crudo (alícuota de 358 mg de una cantidad total de 1 .69 g del producto crudo obtenido a partir de 1 .33 g (3.99 mmol) de compuesto (IVb)), se obtuvo un residuo sólido marrón (412 mg) y se sometió a cromatografía en columna (equipo Biotage FLASH 40M Silica, mezclas CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50%). Eluyendo con
CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.2 a 97:3:0.2, se aislaron sucesivamente una mezcla (±)-(lllb)/(±)-(ld) en proporción aproximada 10:90 (1H RMN) (138 mg) y compuesto de fórmula (±)-(ld) (97 mg, 21 % de rendimiento aislado, 47% de rendimiento total, 50% de rendimiento total basado en huprina (±)-(lllb) reaccionada) como un aceite y un sólido amarillentos, respectivamente. Caracterización: (±)-(ld): Rf = 0.59
(CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (±)-(ld)-2HCI: pf 210-21 1 °C (MeOH/AcOEt 1 :8); IR (KBr) v 3600-2500 (máx a 3372, 3254, 3120, 3055, 2926, 2837, 2723, N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1630, 1583, y 1503 (ar-C-C y ar-C-N st) cm"1. HRMS calculado para (C38H4835CIN3O2 + H+) 614.3507, encontrado 614.3515. Análisis elemental, calculado para
(C38H48CIN3O2-2HCI-2.5H2O) C 62.33, H 7.57, N 5.74, Cl 14.53; encontrado C 62.1 1 , H 7.19, N 5.59, Cl 14.79.
Ejemplo 14: Preparación de (-H7S.1 1 S)-3-cloro-12-r(3-{4-í5,6- dimetoxiindan-2-il)metillpiperidin-1 -il)propil)amino1-9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro- 7,1 1 -metanociclooctafiblquinolina ((-)-(ld))
A partir de (-)-(lllb) (>99% ee, 31 1 mg, 1 .04 mmol) e hidrocloruro del compuesto de fórmula (llb) crudo (alícuota de 408 mg de una cantidad total de 1 .29 g del producto crudo obtenido a partir de 1 .30 g (3.90 mmol) de compuesto (IVb), se obtuvo un residuo oleoso marrón (610 mg). Tras dos purificaciones sucesivas por cromatografía en columna (gel de sílice de 35-70 μηη (76 g), CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 99:1 :0.2 + gel de sílice de 35-70 μιτι (45 g), hexano/AcOEt/Et3N 50:50:0.2), se aislaron huprina (-)-(lllb) de partida (143 mg) y el compuesto de fórmula (-)-(ld) [151 mg, 24% de rendimiento, 44% de rendimiento basado en huprina (-)-(lllb)
reaccionada] como un sólido y un aceite amarillentos, respectivamente. Caracterización: (-)-(ld): Rf = 0.61 (CH2CI2/MeOH/NH4OH acuoso al 50% 9:1 :0.05). (-)-(ld)-2HCI: [cc]20 D = -136 (c = 0.10, MeOH); pf 234-236 °C
(CH2CI2/MeOH 5:2); IR (KBr) 3600-2500 (máx a 3419, 3129, 3064, 2925, 2852, N-H, +N-H, O-H, y C-H st), 1629, 1583, y 1505 (ar-C-C y ar-C-N st) cm"1. HRMS calculado para (C38H4835CIN3O2 + H+) 614.3507, encontrado 614.3501 . Análisis elemental, calculado para (C38H48CIN3O2-2HCI-3H2O) C 61 .58, H 7.61 , N 5.67, Cl 14.35; encontrado C 61 .56, H 7.43, N 5.41 , Cl 14.10.
Ejemplo 15: Ensayo de inhibición de la AChE y la BChE
La actividad inhibitoria de la AChE de los compuestos (la)-(ld) se evaluó espectrofotométricamente a 25 °C por el método de Ellman et al., usando AChE recombinante humana y yoduro de acetiltiocolina (0.13 mM) como sustrato (cf. G.L. Ellman et al., "New and Rapid Colorimetric Determination of Acetylcholinesterase Activity" Biochem. Pharmacol. 1961 , vol. 7, pp. 88-95). La reacción tuvo lugar en un volumen final de 3 mL de 0.1 M disolución de tampón fosfato pH 8.0, conteniendo 0.04 unidades de hAChE, y disolución 333 μΜ de ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico) (DTNB) usada para producir el anión amarillo del ácido 5-tio-2-nitrobenzoico. Las curvas de inhibición se realizaron por triplicado incubando al menos 12 concentraciones de inhibidor durante 15 min. Una muestra triplicada sin inhibidor estuvo siempre presente para rendir el 100% de actividad AChE. La reacción se paró con 100 μΐ de eserina 1 mM, y la producción de color se midió a 414 nm.
Las determinaciones de la actividad inhibitoria de BChE se llevaron a cabo similarmente por el método de Ellman et al., usando 0.035 unidades de BChE de suero humano y butiriltiocolina 0.56 mM, en lugar de AChE y
acetiltiocolina, en un volumen final de 1 mL.
Los datos a partir de experimentos concentración-inhibición de los
inhibidores se calcularon por análisis de regresión no lineal, usando el programa GraphPad Prism (GraphPad Software; San Diego, USA), que dio estimaciones de las IC5o (concentración de fármaco que produce el 50% de inhibición de la actividad el enzima). Los resultados están expresados como media ± error estándar de la media de al menos 4 experimentos realizados por triplicado. DTNB, acetiltiocolina, butiriltiocolina, y los enzimas se adquirieron de Sigma y la eserina de Fluka.
Los resultados obtenidos se resumen en la Tabla 1 . Incluye las actividades inhibitorias de AChE y BChE de los hidrocloruros del donepezilo, de las huprinas Y y X racémicas y enantiopuras como compuestos de referencia, y de los dihidrocloruros de los compuestos (la)-(ld) racémicos y enantiopuros. Los valores están expresados como media ± error estándar de la media de al menos cuatro experimentos. Concentración inhibitoria IC50 (nM) de la actividad de la AChE recombinante humana o de la BChE de suero humano. La selectividad de AChE significa IC50 hBChE / IC50 hAChE.
Los compuestos (la)-(ld) racémicos y enantioméricos sustancialmente puros son potentes inhibidores de la hAChE, presentando valores de IC50 en el rango nanomolar bajo a medio. El compuesto más potente, (-)-(lb) es 8 veces más potente que el donepezilo y 8 veces menos potente que la (-)-huprina Y modelo. Aunque los compuestos (la)-(ld) son selectivos para la inhibición de AChE frente a BChE, son moderadamente potentes inhibidores de hBChE.
Tabla 1 : Actividad inhibitoria de AChE y BChE
IC50 (nM) selectividad AChE compuesto hAChE hBChE
(±) -(la)-2HCI 18.1 ± 1 .2 336 ± 21 10
(-) -(la)-2HCI 13.0 ± 0.1 303 ± 12 18
(±) -(lb)-2HCI 5.37 ± 0.3 88.4 ± 2.3 12
(-) -(lb)-2HCI 2.61 ± 0.2 349 ± 20 106
(+) -(lb)-2HCI 49.9 ± 5.1 95 ± 5.3 1 .5
(±) -(lc)-2HCI 48.6 ± 5.2 174 ± 9.4 2
(-) -(lc)-2HCI 28.6 ± 2.3 419 ± 17 14
(±) -(ld)-2HCI 6.32 ± 0.1 61 ± 3.2 1 .2
(-) -(ld)-2HCI 3.85 ± 0.2 194 ± 9.3 16 Donepezilo HCI 21 .4 ± 2.3 7273 ± 621 627
(±)-Huprina Y-HCI 0.78 ± 0.1 236 ± 44 303
(-)-Huprina Y HCI 0.32 ± 0.10 247 ± 18 772
(+)-Huprina Y-HCI 123 ± 18 153 ± 31 1 .2
(±)-Huprina X HCI 0.96 ± 0.1 15.8 ± 2.4 21
(-)-Huprina X HCI 0.27 ± 0.0 159 ± 10 497
(+)-Huprina X HCI 6.83 ± 0.7 58.3 ± 5.9 2.5
Ejemplo 16: Ensayo de inhibición de la agregación del Αβ-ι inducida por
AChE
La capacidad de los compuestos (la)-(ld) para inhibir la agregación del Αβ inducida por AChE se determinó usando un método de fluorescencia de tioflavina T (cf. M. Bartolini et al., "β-Amyloid Aggregation Induced by Human Acetylcholinesterase: Inhibition Studies", Biochem. Pharmacol. 2003, vol. 65, pp. 407-416).
La tioflavina T (Basic Yellow 1 ), el polvo liofilizado de AChE recombinante humana, 1 ,1 ,1 ,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP), se adquirieron de Sigma Chemicals. El DMSO absoluto sobre tamices moleculares era de Fluka. El agua era desionizada y doblemente destilada. El Αβ^ο, suministrado como sal trifluoroacetato, se adquirió de Bachem AG (Bubendorf, Switzerland). El Αβ-ι (2 mg mL"1) se disolvió en HFIP y se liofilizó. Las disoluciones 1 mM de los inhibidores evaluados se prepararon por disolución en MeOH.
Alícuotas de 2 μΐ de péptido Αβ-,^ο, liofilizado a partir de una disolución de 2 mg mL"1 de HFIP y disuelto en DMSO, se incubaron durante 24 h a temperatura ambiente en tampón fosfato sódico 0.215 M (pH 8.0) a una concentración final de 230 μΜ. Para experimentos de co-incubación se añadieron alícuotas de (16 μί) de hAChE (concentración final 2.30 μΜ, Αβ/AChE relación molar 100:1 ) y AChE en presencia de 2 μί del inhibidor evaluado (concentración final del inhibidor 100 μΜ) en disolución de tampón fosfato sódico 0.215 M pH 8.0. Se prepararon blancos conteniendo Αβ-,^ο solo, AChE recombinante humana sola, y Αβ^ο más inhibidores evaluados en tampón fosfato sódico 0.215 M (pH 8.0). El volumen final de cada vial fue de 20 μΙ_. Cada ensayo fue realizado por duplicado. Para cuantificar la formación de fibrillas de amiloide, se aplicó entonces el método de
fluorescencia de la tioflavina T. Las intensidades de fluorescencia debida a la conformación en láminas β se monitorizaron durante 300 s a em = 490 nm (Xexc = 446 nm). El porcentaje de inhibición de la agregación inducida por AChE debida a la presencia del compuesto evaluado se calculó siguiendo la siguiente expresión: 100 - (IF¡/IF0 x 100) donde IF¡ e IF0 son las intensidades de fluorescencia obtenidas para Αβ más AChE en presencia y en ausencia de inhibidor, respectivamente, menos las intensidades de fluorescencia debidas a los respectivos blancos.
También se determinó el efecto antiagregante del Αβ de las huprinas Y y X racémicas y (-)- y (+)-enantiopuras, mientras que el del donepezilo ya estaba descrito en la referencia mencionada anteriormente en este Ejemplo.
Los compuestos de fórmula (la)-(ld) inhiben significativamente, a una concentración 100 μΜ, la agregación del Αβ inducida por hAChE, con porcentajes de inhibición entre 27% y 50% (Tabla 2), en todos los casos mayores que los del único AChEl de sitio de unión dual comercializado donepezilo (22%), probablemente como resultado de una mejor unión de sitio dual a la AChE, y en la mayoría de casos también mayores que los de las huprinas modelo, que presentaron una remarcable actividad inhibitoria (12-37%).
Los compuestos más potentes fueron los híbridos con conector trimetilénico (±)-(lb), (-)-(lb), (±)-(ld), y (-)-(ld), así como el híbrido con conector etilénico (±)-(la), todos ellos con porcentajes de inhibición entre 40% y 50%.
Los resultados de la inhibición de la agregación del Αβ^ο inducida por AChE por los hidrocloruros del donepezilo, huprinas Y y X racémicas y
enantiopuras, y los dihidrocloruros de los compuestos de fórmula (I) racémicos y enantiopuros se resumen en la Tabla 2 de más abajo.
Cabe destacar que estos ensayos se realizan usando altas concentraciones de AChE, Αβ e inhibidor. Tal como se explica por D. Muñoz-Torrero et al., en la página 2451 de Curr. Med. Chem. 2008, vol. 15, pp. 2433-2455, si se considera la relación de concentración inhibidor/AChE en el ensayo de Ellman para la determinación de la actividad inhibitoria de la AChE y en el ensayo fluorimétrico basado en tioflavina T para la determinación de la actividad inhibitoria de la agregación del Αβ inducida por AChE, los valores resultantes son verdaderamente de la misma magnitud. Así, parece razonable que cantidades similares de un inhibidor dado puedan conducir a ambas actividades inhibitorias.
Ejemplo 17: Ensayo de inhibición de la autoagregación del Αβ-ι-zi?
Como se describe en un protocolo publicado previamente (cf. M. Bartolini et al., "Insight into the Kinetic of Amyloid Beta (1 -42) Peptide Self-Aggregation: Elucidation of Inhibitors' Mechanism of Action", ChemBioChem 2007, vol. 8, pp. 2152-2161 ), muestras de
Figure imgf000030_0001
pretratadas con HFIP (Bachem AG, Switzerland) se solubilizaron con una mezcla CH3CN/Na2CO3/NaOH
(48.4:48.4:3.2). Los experimentos se realizaron incubando el péptido en tampón fosfato 10 mM (pH = 8.0) conteniendo NaCI 10 mM, a 30 °C durante 24 h (concentración final de Αβ 50 μΜ) con y sin inhibidor (10 μΜ,
Αβ/inhibidor = 5/1 ). Se prepararon y evaluaron blancos conteniendo los inhibidores evaluados. Para cuantificar la formación de fibrillas de amiloide, se usó el método de fluorescencia de la tioflavina T (cf. M. Bartolini et al., "β- Amyloid Aggregation Induced by Human Acetylcholinesterase: Inhibition Studies", Biochem. Pharmacol. 2003, vol. 65, pp. 407-416). Después de incubación, las muestras se diluyeron hasta un volumen final de 2.0 ml_ con tampón glicina-NaOH 50 mM (pH 8.5) conteniendo tioflavina T 1 .5 μΜ. Se llevó a cabo un registro de 300 segundos de la intensidad de fluorescencia ( exc = 446 nm; em = 490 nm, FP-6200 fluorómetro, Jasco Europe), y los valores meseta se promediaron tras sustraer la fluorescencia basal de la disolución de tioflavina T 1 .5 μΜ. Las intensidades de fluorescencia se compararon y el porcentaje de inhibición debido a la presencia del inhibidor se calculó por la siguiente fórmula: 100 - (IF¡/IF0 x 100) donde IF¡ e IF0 son las intensidades de fluorescencia obtenidas para Αβ-,.^ en presencia y en ausencia del inhibidor, respectivamente.
Los compuestos de fórmula (la)-(ld) inhiben significativamente la
autoagregación del Αβ al ser evaluados a una concentración 5 veces menor que la del Αβ, con porcentajes de inhibición entre 16% y 30%, en todos los casos mayores que el del donepezilo (<5%) y la (-)- y (+)-huprina Y
(compuesto de fórmula (III) donde
Figure imgf000031_0001
R2=CI y m=0 (10% y 13%, respectivamente), mientras que son aproximadamente equipotentes con la huprina X racémica y enantiopura (compuesto de fórmula (III) donde
Figure imgf000031_0002
R2=CI y m=0 (23-25%).
Los resultados de la inhibición de la autoagregación del Αβ por los
hidrocloruros del donepezilo, las huprinas Y y X racémicas y enantiopuras, y los dihidrocloruros de los compuestos de fórmula (I) racémicos y
enantiopuros se resumen en la Tabla 2 de más abajo.
Ejemplo 18: Ensayo de inhibición de la β-secretasa (BACE-1 )
Los estudios de inhibición de la β-secretasa (BACE-1 , Sigma) se realizaron empleando un péptido mimetizando la secuencia del APP como sustrato (M- 2420, Bachem). Se empleó el siguiente procedimiento: 5 μΐ de compuesto a evaluar (o DMSO) se preincubaron con 175 μί del enzima (c = 10.6 nM) durante 1 h a temperatura ambiente. Se añadió entonces el sustrato (3 μΜ) y se dejó reaccionar durante 15 min. La señal de fluorescencia se leyó a em = 405 nm (Xexc = 320 nm). Se compararon las intensidades de fluorescencia con y sin inhibidor y se calculó el porcentaje de inhibición debida a la presencia del compuesto a evaluar. El % de inhibición debido a la presencia de una creciente concentración de compuesto a evaluar se calculó por la siguiente expresión: 100 - (IF¡/IF0 x 100) donde IF¡ e IF0 son las intensidades de fluorescencia obtenidas para la BACE-1 en presencia y en ausencia de inhibidor, respectivamente. Se obtuvo la curva de inhibición para el compuesto más potente representando el % de inhibición frente al logaritmo de la concentración de inhibidor en la muestra de ensayo. Los parámetros de regresión lineal se determinaron y la IC5o se extrapoló, cuando fue posible (GraphPad Prism 4.0, GraphPad Software Inc.).
Para demostrar inhibición de la actividad BACE-1 se diluyó en serie un inhibidor peptidomimético (inhibidor de β-secretasa IV, Calbiochem) en los vasos de reacción (IC5o = 0.013 μΜ).
Todos los compuestos de fórmula (la)-(ld) presentan una inhibición de BACE- 1 significativa (12-31 %) a 5 μΜ. Los inhibidores de BACE-1 más potentes, los compuestos (±)-(lb), (-)-(lb), y (-)-(la) son más potentes que las huprinas modelo, pero menos potentes que el donepezilo. El valor de IC5o para inhibición de BACE-1 del compuesto (-)-(lb) está en el rango micromolar bajo (1 1 .0 μΜ), constituyendo así un moderadamente potente inhibidor de BACE- 1 , mientras que para el donepezilo se ha descrito un valor de IC5o de 1 1 ,3 μΜ.
Los resultados de las actividades inhibitorias de BACE-1 de los hidrocloruros del donepezilo, las huprinas Y y X racémicas y enantiopuras, y los
dihidrocloruros de los compuestos de fórmula (I) racémicos y enantiopuros se resumen en la Tabla 2.
En la Tabla 2, los valores están expresados como la media ± error estándar de la media de dos medidas independientes, cada una realizada por duplicado. Para determinar la actividad inhibitoria de la agregación del Αβ^ο inducida por AChE se usó una concentración 100 μΜ del inhibidor. Para determinar la actividad inhibitoria de la agregación autoinducida del Αβ-ι-^ se usó una concentración 10 μΜ de inhibidor ([Αβ]/[Ι]=5/1 ). Para determinar la actividad inhibitoria de BACE-1 se usó una concentración 5 μΜ de inhibidor. Para los compuestos de la invención se usaron BACE-1 recombinante humana (Novartis) y sustrato M-2420 (Bachem). Para las huprinas se usaron BACE-1 recombinante humana (Invitrogen) y sustrato Panvera Peptide (Invitrogen). Nd significa no determinado. Los valores dados para el hidrocloruro del donepezilo se han obtenido de la literatura. Para el donepezilo se ha descrito un valor de IC50 de 1 1 ,3 ¡i M para inhibición de BACE-1 .
Tabla 2: Actividad inhibitoria de la agregación del Αβ-ι-,ιο inducida por AChE, de la autoagregación del Αβι-^? y de BACE-1
Compuesto Agregación del Agregación del Actividad
Αβ^ο inducida Αβ1-42 BACE-1 (%) por AChE (%) autoinducida (%)
(±)-(la)-2HCI 44.2 ± 1 .0 26.0 ± 2.0 14.3 ± 7.6 (-)-(la)-2HCI 31.1 ±0.4 16.3 ±0.5 24.6 ±3.0
(±)-(lb)-2HCI 44.5 ± 1.8 28.5 ±0.4 29.1 ±2.9
(-)-(lb)-2HCI 41.5 ±2.4 29.0 ±2.0 30.8 ±4.1
(+)-(lb)-2HCI 24.9 ±2.4 29.9 ± 1.3 13.1 ±4.7
(±)-(lc)-2HCI 35.7 ±3.2 16.3 ±0.5 19.2 ±2.2
(-)-(lc)-2HCI 27.3 ±2.6 20.9 ±0.3 12.5 ±0.7
(±)-(ld)-2HCI 49.8 ±0.4 20.9 ±0.3 18.0 ±9.0
(-)-(ld)-2HCI 43.8 ±0.8 23.6 ±4.0 14.9 ±3.9
DonepeziloHCI 22 <5
(±)-Huprina Y HCI 37.5 ±0.5 nd nd
(-)-Huprina Y HCI 25.1 ±4.9 10.2 ±6.5 14.0 ±0.1
(+)-Huprina Y-HCI 11.6 ± 1.7 13.2 ±1.9 13.6 ±2.3
(±)-Huprina X HCI 34.1 ±0.2 25.5 ±2.1 15.7 ±3.8
(-)-Huprina X-HCI 28.9 ±0.2 25.4 ±1.2 21.8 ±7.2
(+)-Huprina X HCI 21.5 ± 1.4 22.9 ±0.4 16.7 ±0.6
Ejemplo 19: Ensayo de permeación in vitro de la barrera hematoencefálica
La penetración en el cerebro es un aspecto principal para los fármacos de SNC exitosos. En los últimos años, varios métodos in silico / in vitro se han usado para predecir el potencial de permeación de la BHE de compuestos prueba. Entre ellos, el ensayo en paralelo de permeación de membrana artificial (PAMPA-BBB) descrito por Di et al. (cf. L. Di et al., "High Throughput Artificial Membrane Permeability Assay for Blood-Brain Barrier", Eur. J. Med. Chem.2003, vol.38, pp.223-232) predice la permeación pasiva a través de la BHE con alto éxito, alto rendimiento, y reproducibilidad. Para evaluar la penetración en cerebro de los compuestos (la)-(ld) aquí descritos usamos el ensayo PAMPA-BBB. Se determinó la permeabilidad in vitro (Pe) de (la)— (Id) racémicos, y la de las huprinas modelo Y y X y el donepezilo a través de un extracto lipídico de cerebro porcino usando tampón fosfato salino
(PBS):EtOH (80:20 o 70:30, dependiendo de la solubilidad de los
compuestos). Para cada mezcla de disolventes, se hizo una validación del ensayo comparando la permeabilidad experimental con los valores descritos de 15 fármacos comerciales que dio una buena correlación lineal: Pe (exp.) = 1 .48 Pe (bibl.) + 1 .91 (R2 = 0.95) para PBS:EtOH (80:20) y Pe (exp.) = 2.15 Pe (bibl.) + 1 .13 (R2 = 0.93) para PBS:EtOH (70:30). A partir de estas ecuaciones y teniendo en cuenta los límites establecidos por Di et al. para la permeación a través de BHE, establecimos que los compuestos con valores de permeabilidad por encima de 7.8 10"6 cm s"1 (PBS:EtOH, 80:20) o 9.7 10"6 cm s"1 (PBS:EtOH, 70:30) deberían atravesar la BHE. Todos los compuestos evaluados, así como las huprinas modelo y el donepezilo, mostraron valores de permeabilidad por encima de los límites anteriormente mencionados, apuntando a que podrían atravesar la BHE y alcanzar sus dianas
farmacológicas localizadas en el SNC.
Los resultados de permeabilidad del ensayo PAMPA-BBB para los compuestos de fórmula (la)-(ld), las huprinas Y y X, y el donepezilo (Pe, 10"6 cm s"1) con su penetración predictiva en el SNC se resumen en la Tabla 3. Los valores están expresados como la media ± desviación estándar de la media de tres experimentos independientes. Los compuestos (±)-(la)-2HCI a (±)-(lc)-2HCI se han disuelto en PBS:EtOH 70:30 y el compuesto (±)- (ld)-2HCI, las huprinas y el donepezilo se han disuelto en PBS:EtOH 80:20.
Tabla 3: Permeabilidad del ensayo PAMPA-BBB compuesto Pe (10"6 cm s"1) Predicción
(±)-(la)-2HCI 15.2 ± 0.1 CNS+
(±)-(lb)-2HCI 1 1 .4 ± 0.2 CNS+
(±)-(lc)-2HCI 21 .3 ± 0.4 CNS+
(±)-(ld)-2HCI 17.1 ± 0.4 CNS+
(±)-Huprina Y-HCI 18.2 ± 0.1 CNS+
(±)-Huprina X-HCI 17.8 ± 0.1 CNS+
Donepezilo HCI 25.2 ± 0.2 CNS+ Ejemplo 20: Ensayo ex vivo de inhibición de la acetilcolinesterasa
Grupos de 9 ratones Oncins France cepa 1 (OF1 ) se trataron
intraperitonealmente (i.p.) con (±)-(lb)-2HCI (10 μηηοΙ/Kg), donepezilo (10 μηηοΙ/Kg) y solución salina (0,1 ml_/10 g). Los animales se sacrificaron en diferentes estadios (0 min, 5 min, 10 min, 20 min, 30 min, 40 min, 1 h, 2 h, 6 h, y 24 h) tras la administración de fármaco y los cerebros se separaron rápidamente y se congelaron sobre hielo seco. La actividad de la AChE se determinó tal como como se describe por G. L. Ellman et al.; "A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity", Biochem. Pharmacol. 1961 , vol. 7, pp. 88-95; M. M. Alcalá et al., "Characterisation of the anticholinesterase activity of two new tacrine-huperzine A hybrids", Neuropharmacology 2003, vol. 44, pp. 749-755, utilizando preparaciones de homogeneizado de cerebro, excluyendo el cerebelo, como fuente del enzima. Debido a la necesaria dilución de la muestra de tejido, la técnica ex vivo puede causar la disociación de un complejo reversible enzima-inhibidor. Para limitar ésto, la dilución final del tejido fue de 20 veces. Los porcentajes de inhibición se calcularon comparando la actividad de la AChE en los homogeneizados tratados con fármaco con la actividad en los controles no tratados.
El protocolo descrito arriba fue aprobado por el Comité Ético de Animales de la Universitat Autónoma de Barcelona y cumple con las leyes vigentes de España, que están de acuerdo con la European Communities Council Directive de 24 de Noviembre de 1986 (86/609/EEC).
Se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento animal y reducir el número de animales usados.
La Tabla 4 muestra los porcentajes de inhibición de la actividad de AChE en cerebro de ratón tras la administración de (±)-(lb)-2HCI y donepezilo-HCI, a lo largo del tiempo. En la Tabla 4, los valores se expresan como media ± error estándar de la media de al menos tres experimentos independientes, cada uno de ellos realizado por triplicado.
Tanto (±)-(lb) como el donepezilo pueden atravesar la barrera
hematoencefálica muy rápidamente. Así, 5 minutos después de la administración, se observó una marcada inhibición de la actividad de la AChE para (±)-(lb) (59%) y el donepezilo (73%). La inhibición de la AChE disminuye progresivamente para ambos compuestos y desaparece por completo 6 h después de la administración. Cabe destacar que en ambos casos existe un ligero aumento de la actividad de la AChE 24 h después de la administración (Tabla 4, valores negativos). Esta activación del enzima parece ser más marcada para el donepezilo, probablemente como resultado de su ligeramente superior inhibición de la AChE en relación a (±)-(lb). Además, tras la adminitración del donepezilo se observó una notable reducción de la actividad motora como efecto secundario, mientras que los animales tratados con (±)-(lb) no mostraron ninguna alteración del comportamiento.
El efecto inhibitorio mostrado por (±)-(lb) sobre la actividad de la AChE de cerebro de ratón claramente demuestra su habilidad para atravesar la barrera hematoencefálica y entrar en el sistema nervioso central.
Tabla 4: Porcentajes de inhibición de la actividad de AChE en cerebro de ratón
Tiempo (±)-(lb) Donepezilo
% sobre control % sobre control
5 min 59,4 ± 5,52 73,1 ± 1 ,81
10 min 54,1 ± 5,61 69,7 ± 0,90
20 min 46,2 ± 2,78 68,1 ± 6,92
30 min 50,3 ± 3,45 75,8 ± 4,25
40 min 31 ,0 ± 1 1 ,5 53,1 ± 1 1 ,6
1 h 20,5 ± 6,34 45,9 ± 9,97
2 h 16,2 ± 5,10 45,8 ± 5,67
6 h 8,22 ± 2,02 7,91 ± 4,01
24 h -14,6 ± 8,61 -21 ,4 ± 9,80

Claims

REIVINDICACIONES
1 . Compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de ellos,
Figure imgf000037_0001
(I) donde:
Ri es un radical (d-C4)-alquilo;
R2 y R3 Son radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste en F, Cl y metilo;
R4 y R5 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en (d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo;
R6 y R7 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en
(d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo;
n es un número entero de 2 a 4;
m es un número entero de 0 a 1 ;
r y s son números enteros idénticos de 0 a 1 ; y
t y u son números enteros idénticos de 0 a 1 .
2. Compuesto según la reivindicación 1 , donde m, r, y s son 0, y t y u son 1 .
3. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, donde Ri es metilo o etilo.
4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, donde R2 es Cl.
5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 -4, donde R4 y R5 son metoxilo.
6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, donde n es 2.
7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, donde n es 3.
8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 -7, que es un compuesto enantiomérico sustancialmente puro.
9. Compuesto según la reivindicación 5, que se selecciona de la siguiente lista:
(±)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}etil)amino]- 6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina;
(-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}etil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina;
(±)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}propil)amino]- 6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina;
(-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}propil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina;
(+)-(7R,1 1 R)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}propil)amino]-6,7,10,1 1 -tetrahidro-9-metil-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina;
(±)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}etil)amino]-9- etil-6,7,10,1 1 -tetra h id ro-7,1 1 -metanocicloocta[¿)]quinolina; (-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(2-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}etil)amino]-9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro-7,1 1 -metanocicloocta[i ]quinolina;
(±)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 -il}propil)amino]- 9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro-7,1 1 -nnetanocicloocta[i ]quinolina; y
(-)-(7S,1 1 S)-3-cloro-12-[(3-{4-[5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1 - il}propil)amino]-9-etil-6,7,10,1 1 -tetrahidro-7,1 1 -metanocicloocta[i ]quinolina.
10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 -9, donde la sal farmacéuticamente aceptable es un dihidrocloruro.
1 1 . Procedimiento para la preparación del compuesto tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, que comprende hacer reaccionar un intermedio de fórmula (II),
Figure imgf000039_0001
(CH2)n
\
X
(II) con un intermedio de fórmula (III), incluyendo los correspondientes estereoisómeros o mezcla de ellos,
Figure imgf000040_0001
y, opcionalmente, tratar con el ácido farmacéuticamente aceptable para formar la correspondiente sal; donde X es un grupo saliente.
12. Procedimiento según la reivindicación 10, donde el compuesto de fórmul (IV) se somete a una reacción de halogenación o a una reacción de sulfonilación para rendir el compuesto de fórmula (II).
Figure imgf000040_0002
(CH2)n
\
OH
(ÍV)
13. Compuesto de fórmula (I) tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, para uso en el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Alzheimer.
14. Uso del compuesto definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Alzheimer en un mamífero, incluyendo un humano.
15. Composición farmacéutica que comprende una cantidad
terapéuticamente efectiva del compuesto definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, junto con cantidades apropiadas de uno o más excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.
16. Compuesto de fórmula (II),
Figure imgf000041_0001
(CH2)n
\
X
(II) donde:
R4 y R5 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en (d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo;
R6 y R7 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en
(d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo;
n es un número entero de 2 a 4;
r y s son números enteros idénticos de 0 a 1 ;
t y u son números enteros idénticos de 0 a 1 ; y
X es un grupo saliente.
17. Compuesto de fórmula (IV),
Figure imgf000042_0001
(CH2)n
\
OH
(IV) donde:
R4 y R5 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en (d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo;
R6 y R7 son radicales idénticos seleccionados del grupo que consiste en
(d-C4)-alquilo y (d-C4)-alcoxilo;
n es un número entero de 2 a 4;
r y s son números enteros idénticos de 0 a 1 ; y
t y u son números enteros idénticos de 0 a 1 .
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013167711A1 (en) 2012-05-10 2013-11-14 Universitat De Barcelona Beta-amyloid-directed multitarget compounds for the treatment of alzheimer's disease
EP2818467A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Universitat de Barcelona Multi-target drug compounds for the treatment of neurodegenerative disorders
CN104892489A (zh) * 2015-06-08 2015-09-09 扬子江药业集团江苏海慈生物药业有限公司 一种盐酸多奈哌齐杂质的制备方法
WO2020193448A1 (en) * 2019-03-28 2020-10-01 Universitat De Barcelona Multitarget compounds for the treatment of alzheimer's disease

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007122274A1 (es) * 2006-04-20 2007-11-01 Universidad De Barcelona Compuestos inhibidores de acetilcolinesterasa para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007122274A1 (es) * 2006-04-20 2007-11-01 Universidad De Barcelona Compuestos inhibidores de acetilcolinesterasa para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
P. CAMPS ET AL: "Novel donepezil-based inhibitors of acetyl- and butyrylcholinesterase and acetylcholinesterase-induced B-amyloid aggregation", JOURNAL MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 51, 2008, pages 3588 - 3598 *
P. CAMPS ET AL: "Synthesis and pharmacological evaluation of huprine-tacrine heterodimers", JOURNAL MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 48, 2005, pages 1701 - 1704, XP055077719, DOI: doi:10.1021/jm0496741 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013167711A1 (en) 2012-05-10 2013-11-14 Universitat De Barcelona Beta-amyloid-directed multitarget compounds for the treatment of alzheimer's disease
US9238626B2 (en) 2012-05-10 2016-01-19 Universitat De Barcelona Beta-amyloid-directed multitarget compounds for the treatment of alzheimer's disease
EP2818467A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Universitat de Barcelona Multi-target drug compounds for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2014206877A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Universitat De Barcelona Multi-target drug compounds for the treatment of neurodegenerative disorders
CN104892489A (zh) * 2015-06-08 2015-09-09 扬子江药业集团江苏海慈生物药业有限公司 一种盐酸多奈哌齐杂质的制备方法
WO2020193448A1 (en) * 2019-03-28 2020-10-01 Universitat De Barcelona Multitarget compounds for the treatment of alzheimer's disease

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