WO2011016567A1 - 抗アミロイドβオリゴマーヒト化抗体 - Google Patents

抗アミロイドβオリゴマーヒト化抗体 Download PDF

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麗夫 久保田
鈴木　伸之
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協和発酵キリン株式会社
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    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material

Definitions

  • the present invention relates to an antibody that specifically binds to an amyloid ⁇ (hereinafter also referred to as A ⁇ ) protein oligomer and use thereof.
  • a ⁇ amyloid ⁇
  • AD Alzheimer's disease
  • a ⁇ soluble amyloid ⁇ protein oligomer
  • a ⁇ amyloid ⁇ protein oligomer
  • a ⁇ oligomers excessive accumulation or deposition of A ⁇ oligomers in the brain may trigger a series of pathological cascades that cause Alzheimer's disease.
  • the above shows the possibility that treatment targeting A ⁇ oligomers is effective for the onset of AD, the delay of stage progression, or prevention.
  • Non-patent Document 3 the knowledge about neurodegeneration caused by responsible molecules, particularly A ⁇ oligomers, which is the core of this amyloid cascade hypothesis has been proved mainly in in vitro experiments (Non-patent Document 3) and directly proved in vivo. Not.
  • Non-patent Document 4 since the structure-specific examination of A ⁇ oligomers has not been made, synaptic toxicity due to endogenous A ⁇ oligomers has not been clarified.
  • Alzheimer's disease model mice Although various Alzheimer's disease model mice have been studied, the neurotoxicity of A ⁇ oligomers in the brains of Alzheimer's disease patients has not yet been clarified.
  • NFT neurofibrillary tangle
  • Non-patent Document 4 anti-A ⁇ oligomeric mouse monoclonal antibodies NAB61 (Non-patent Document 4), 1A9, 2C3, E12, 1C10, and 4D3 (Patent Document 1) are known.
  • HAMA Human Anti Mouse Antibody
  • Non-patent Document 13 Human chimeric antibodies and humanized antibodies have various advantages in clinical application to humans compared to antibodies from non-human animals such as mouse antibodies. For example, in experiments using monkeys, it has been reported that immunogenicity is reduced compared to mouse antibodies, and blood half-life is extended (Non-patent Document 13).
  • human chimeric antibodies and humanized antibodies are expected to have fewer side effects in humans and maintain their therapeutic effects for a long period of time compared to non-human animal antibodies.
  • recombinant antibodies such as human chimeric antibodies, humanized antibodies, and human antibodies are prepared using gene recombination techniques, they can be prepared as molecules of various forms.
  • H chain C region human antibody heavy chain
  • ADCC cytotoxic activity
  • a ⁇ 2 or ⁇ 4 subclass a recombinant antibody with reduced effector activity can be produced, and the blood half-life is expected to be longer than that of a mouse antibody (Non-patent Document 14).
  • cytotoxic activity such as complement-dependent cytotoxicity (hereinafter referred to as CDC activity) and ADCC activity via the Fc region of antibody (region after hinge region of antibody H chain) and ADCC activity are the treatment. Since they are important for the effect, human-type chimeric antibodies, humanized antibodies, and human antibodies are desirable as compared with antibodies from non-human animals such as mouse antibodies (Non-Patent Documents 15 and 16).
  • Non-patent Document 17 Single chain antibodies
  • Non-patent Document 18 Dimerized V region fragment (hereinafter referred to as Diabody)
  • dsFv disulfide-stabilized V region fragment
  • Non-patent document 19 peptide containing CDR
  • the antibody fragments can be prepared as antibody fragments having a small molecular weight, such as those described in Reference 20), and these antibody fragments are superior in migration to a target tissue as compared to complete antibody molecules (Non-patent Document 21).
  • Non-patent document 4 and Patent document 1 described above disclose antibodies against A ⁇ oligomers.
  • these antibodies are antibodies that bind not only to A ⁇ oligomers but also to A ⁇ monomers. Therefore, there is a concern about the ability of antibodies to migrate into the brain in antibody therapy in Alzheimer's disease, which targets the pathological condition in the brain.
  • an object of the present invention is to provide a humanized antibody that specifically binds only to A ⁇ oligomers and does not bind to A ⁇ monomers, and uses thereof. More specifically, an antibody that specifically binds to an A ⁇ oligomer, a method for measuring A ⁇ oligomer using the antibody, a method for diagnosing Alzheimer's disease using the antibody, and a drug containing the antibody are provided. Objective.
  • a humanized antibody that specifically binds only to an A ⁇ oligomer without binding to an A ⁇ monomer is as follows. 1.
  • (A) The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 or the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, and the 39th Gln To Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 70th Ile to Leu, 72nd Ala to Val
  • An antibody heavy chain variable region comprising an amino acid sequence having at least one amino acid modification in which Thr at 74th is replaced with Lys and Ala at 97th is replaced with Thr
  • the second Ile of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 is Val
  • the 15th Pro is Leu
  • the 50th Gln is L.
  • Antibody light chain variable region 2 comprising an amino acid sequence of performing at least one modified amino acid modification s in and the 92 th Tyr substituting Phe. 18.
  • An anticognitive dysfunction agent comprising the humanized antibody according to item 1 or 2 as an active ingredient. 4).
  • a therapeutic agent for Alzheimer's disease comprising the humanized antibody according to item 1 or 2 as an active ingredient. 5.
  • a senile plaque formation inhibitor comprising the humanized antibody according to item 1 or 2 as an active ingredient. 6).
  • An amyloid ⁇ amyloid fibril formation inhibitor comprising the humanized antibody according to item 1 or 2 as an active ingredient. 7).
  • a method for at least one of prevention and treatment of cognitive impairment comprising the step of administering the humanized antibody according to item 1 or 2.
  • a method for at least one of prevention and treatment of Alzheimer's disease comprising a step of administering the humanized antibody according to item 1 or 2.
  • a method for suppressing progression of Alzheimer's disease comprising a step of administering the humanized antibody according to item 1 or 2.
  • prevention of Alzheimer's disease, establishment of a therapeutic method and establishment of an early diagnosis marker are expected by targeting amyloid ⁇ protein which is a causative molecule of Alzheimer's disease.
  • Antibody therapy in Alzheimer's disease targets the pathology in the brain, and there is concern about the ability of the antibody to enter the brain, but there is a possibility that the antibody of the present invention can be treated by peripheral vein administration, It is thought that antibody therapy for Alzheimer's disease will accelerate at a stretch.
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence of the heavy chain variable region HV0 and amino acid residues modified from the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 in HV2, HV3, HV4, HV5, HV7a, HV7b, HV9 and HV12.
  • the first and second lines represent the amino acid numbers of the heavy chain variable regions, and the alphabet in each line represents the modified amino acid (indicated by one letter).
  • FIG. 2 shows the amino acid sequence of the L chain variable region LV0 and amino acid residues modified from the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 in LV2a, LV2b, LV2c, LV2d, LV3, and LV4.
  • FIG. 3 shows a sensorgram in which the binding activity of each anti-A ⁇ oligomer humanized antibody to A ⁇ monomer was measured by Biacore.
  • the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention (hereinafter referred to as the antibody of the present invention or the humanized antibody of the present invention) is a humanized antibody characterized in that it binds to the A ⁇ oligomer and does not bind to the A ⁇ monomer.
  • the antibody of the present invention is preferably an isolated antibody, a purified antibody or an antibody composition.
  • the isolated antibody and the purified antibody and antibody composition include substantially 100% of the target antibody, such as antibody-producing cells, tissues, or concomitant proteins derived from antibody-producing animals in antibody production.
  • An antibody is a heterotetrameric protein composed of two heavy chains (H chains) and two light chains (L chains).
  • Antibodies include polyclonal and monoclonal antibodies that recognize a single antigen.
  • Polyclonal antibodies are a mixture of antibodies that recognize a single antigen.
  • Examples of the polyclonal antibody include antisera of a host animal immunized with an antigen.
  • Monoclonal antibody is an antibody secreted by antibody-producing cells of a single clone.
  • a monoclonal antibody recognizes only one epitope (also called an antigenic determinant) and has a uniform amino acid sequence (primary structure).
  • the antibody of the present invention is preferably a monoclonal antibody.
  • CDR complementarity Determining region
  • H chain antibody heavy chain
  • SEQ ID NOs: 1 to 3 A monoclonal antibody comprising an amino acid sequence, and the L chain CDRs 1 to 3 each comprise the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 4 to 6, and the amino acid whose antibody heavy chain variable region (hereinafter referred to as VH) is represented by SEQ ID NO: 8.
  • VH antibody heavy chain variable region
  • VL monoclonal antibody containing the sequence and the light chain variable region (hereinafter referred to as VL) comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 10, and anti-A ⁇ oligomeric mouse monoclonal antibody 6E4.
  • Epitopes include, for example, a single amino acid sequence that is recognized and bound by a monoclonal antibody, a three-dimensional structure composed of amino acid sequences, a three-dimensional structure composed of amino acid sequences to which sugar chains are bound, and amino acid sequences to which sugar chains are bound. .
  • the epitope recognized by the antibody of the present invention may be any epitope that contains at least one of the A ⁇ protein and the protein fragment and exists on the complexed A ⁇ oligomer.
  • Examples of the epitope to which the antibody of the present invention binds include an epitope composed of the primary sequence of A ⁇ amino acid exposed on the A ⁇ oligomer, an epitope composed of the three-dimensional structure of A ⁇ oligomer, and the like.
  • a ⁇ protein which is a main component of amyloid, is a peptide consisting of 40 to 42 amino acids, and is produced by the action of protease from a precursor protein called amyloid precursor protein (APP, hereinafter referred to as APP). It is known.
  • amyloid molecules produced from APP include soluble monomers and soluble oligomeric non-fibrous polymers.
  • a ⁇ oligomer refers to a non-fibrous polymer, and refers to an A ⁇ oligomer that contains at least one of A ⁇ protein or the protein fragment and forms a complex.
  • a ⁇ oligomer examples include an A ⁇ 40 (A ⁇ 1-40) oligomer, an A ⁇ 42 (A ⁇ 1-42) oligomer, and an A ⁇ oligomer containing at least one of A ⁇ 40 and A ⁇ 42.
  • examples of the A ⁇ oligomer also include an A ⁇ oligomer containing an A ⁇ fragment lacking the N-terminus of A ⁇ in at least one of A ⁇ 40 and A ⁇ 42.
  • the A ⁇ 42 oligomer in the present invention specifically refers to a molecule having a molecular weight measured by SDS-PAGE of 45 to 160 kDa and a molecular weight measured by Blue Native-PAGE of 22.5 to 1035 kDa. .
  • the A ⁇ 42 oligomer is mainly recovered in a> 100 kDa retentate in the molecular sieve.
  • a form in which granular molecules having a height of 1.5 to 3.1 nm, bead-like molecules, and ring-like molecules are mixed is exhibited.
  • the A ⁇ 42 oligomer is eluted in the void volume fraction 8 having a molecular weight of> 680 kDa or more and the fraction 15 at the boundary of the molecular weight of 17 to 44 kDa.
  • the antibody of the present invention may be any humanized antibody that binds to the A ⁇ oligomer and does not bind to the A ⁇ monomer, and its origin and shape are not limited.
  • the antibody of the present invention preferably does not recognize soluble amyloid ⁇ (A ⁇ ) monomer, which is a physiological molecule, but reacts only with soluble A ⁇ oligomers.
  • not binding to a soluble A ⁇ monomer but only binding to a soluble A ⁇ oligomer means that a monomer (about 4.5 kDa) is recognized among A ⁇ monomers and A ⁇ oligomers discriminated by the ultrafiltration / molecular sieve method.
  • a monomer about 4.5 kDa
  • a ⁇ oligomers discriminated by the ultrafiltration / molecular sieve method means specifically recognizing soluble A ⁇ oligomers higher than A ⁇ dimer. Therefore, it is more preferable that the antibody of the present invention specifically binds to a soluble A ⁇ oligomer higher than A ⁇ dimer.
  • the antibody of the present invention preferably has at least one activity of the following (1) to (5).
  • Anti-neurotoxic activity (2) A ⁇ amyloid fibril formation inhibitory activity (3) Specificity to recognize only A ⁇ oligomer (4) Ability to capture A ⁇ oligomer in AD brain (5) APPswe-transgenic mouse (Tg2576) Of preventing Alzheimer's disease-like phenotype (memory impairment, brain A ⁇ accumulation level) in children
  • the antibody of the present invention can also be prepared as a recombinant antibody.
  • the recombinant antibody includes antibodies produced by genetic recombination, such as human chimeric antibodies, humanized antibodies (or human CDR grafted antibodies), human antibodies and antibody fragments.
  • Recombinant antibodies having characteristics of monoclonal antibodies, low antigenicity, and extended blood half-life are preferred as therapeutic agents.
  • examples of the recombinant antibody include those obtained by modifying the monoclonal antibody of the present invention using a gene recombination technique.
  • the human chimeric antibody includes a heavy chain variable region (hereinafter referred to as VH) and a light chain variable region (hereinafter referred to as VL) of an antibody of a non-human animal and a heavy chain constant region (hereinafter referred to as CH) of a human antibody. And a light chain constant region (hereinafter referred to as CL).
  • VH heavy chain variable region
  • VL light chain variable region
  • CH heavy chain constant region
  • CL light chain constant region
  • the human chimeric antibody according to the present invention is used for animal cells having cDNAs encoding the CH and CL obtained from cDNAs encoding the VH and VL from a hybridoma producing a monoclonal antibody that specifically binds an A ⁇ oligomer.
  • a human chimeric antibody expression vector can be constructed by inserting each into an expression vector and introduced into an animal cell for expression and production.
  • the CH may be any CH as long as it belongs to human immunoglobulin (hereinafter referred to as hIg), but CH belonging to the hIgG class is preferable, and hIgG1, hIgG2, hIgG3, and hIgG4, which are subclasses of the hIgG class. CH belonging to can also be used.
  • hIg human immunoglobulin
  • the CL may be any CL as long as it belongs to hIg, and CL belonging to the ⁇ class or ⁇ class can be used.
  • the humanized antibody refers to an antibody obtained by grafting the VH and VL CDR amino acid sequences of non-human animal antibodies into appropriate positions of the human antibody VH and VL.
  • a humanized antibody comprises the VH and VL CDR amino acid sequences of a monoclonal antibody that specifically binds to an A ⁇ oligomer produced from a hybridoma derived from a non-human animal, the VH and VL framework regions of any human antibody (A amino acid sequence of the V region transplanted into the framework region (hereinafter referred to as FR) is prepared, a cDNA encoding the amino acid sequence of the V region is constructed, and expression for animal cells having genes encoding CH and CL of human antibodies Each vector can be inserted into a vector to construct a humanized antibody expression vector and introduced into animal cells to be expressed and produced.
  • amino acid sequences of FRs of VH and VL of humanized antibodies any amino acid sequences of FRs of VH and VL derived from human antibodies can be used.
  • VH and VL FR amino acid sequences registered in databases such as Protein Data Bank, and Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept.
  • the common amino acid sequences of the VH and VL FR subgroups of human antibodies described in Health and Human Services (1991) and the like can be used.
  • humanized antibody of the present invention examples include, for example, CDRs 1 to 3 of the antibody VH each containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 1 to 3, and CDRs 1 to 3 of the antibody VL represented by SEQ ID NOs: 4 to 6, respectively. And a humanized antibody containing the amino acid sequence.
  • the humanized antibody of the present invention is preferably a humanized antibody containing at least one of the following (a) VH and (b) VL.
  • the number of modifications to be introduced is not limited.
  • At least one amino acid residue selected from Met, 67th Arg, 68th Val, 70th Ile, 72th Ala, 74th Thr and 97th Ala was substituted with another amino acid residue VH containing amino acid sequence
  • B at least one amino acid residue selected from the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 or the second Ile, 15th Pro, 50th Gln, and 92nd Tyr of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 VL comprising an amino acid sequence in which the group is replaced with another amino acid residue
  • VH contained in the humanized antibody of the present invention include 12th Lys, 20th Val, 38th Arg, 39th Gln, 45th Leu in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12, 48th Met, 67th Arg, 68th Val, 70th Ile, 72nd Ala, 74th Thr, and 97th Ala contain amino acid sequences substituted with other amino acid residues VH is preferred.
  • VH contained in the humanized antibody of the present invention one VH selected from the following (1) to (9) is also preferable.
  • VH containing an amino acid sequence substituted with amino acid residues (5) 45th Leu, 48th Met, 67th Arg, 68th Val, 72nd Ala, 74th Thr, and 97th Ala of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, etc.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val
  • the 20th Val is Leu
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu. 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 70th Ile to Leu, 72nd Ala to Val, 74
  • An amino acid sequence into which at least one modification selected from a modification in which the th Thr is replaced with Lys and the 97th Ala is replaced with Thr is introduced.
  • amino acid sequence of VH includes, for example, the amino acid sequence of VH into which the following 12 to 1 modifications are introduced.
  • amino acid sequence of VH into which 12 modifications have been introduced include, for example, the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 as Val, the 20th Val as Leu, and the 38th Arg to Lys, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 70th Ile Leu includes an amino acid sequence in which the 72nd Ala is replaced with Val, the 74th Thr is replaced with Lys, and the 97th Ala is replaced with Thr.
  • amino acid sequence of VH into which 11 modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (12).
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, 39 The Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, the 67th Arg is Lys, the 68th Val is Ala, the 70th Ile is Leu, the 72nd Ala is Val, and the 74th Amino acid sequence in which Thr is replaced with Lys and 97th Ala is replaced with Thr (7)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, and the 38th Arg is Lys, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 68th Val to Ala, 70th Ile to Leu, 72nd Ala to Val
  • 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val, 20th Val is Leu, 38th Arg is Lys, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val Ala, amino acid sequence in which 70th Ile is replaced with Leu, 72nd Ala is replaced with Val, and 97th Ala is replaced with Thr (12) 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val , 20th Val to Leu, 38th Arg to Lys, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68 The amino acid sequence in which the first Val is replaced with Ala, the 70th Ile is replaced with Leu, the 72nd Ala is replaced with Val, and the 74th Thr is replaced with Lys.
  • amino acid sequence of VH into which 10 modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (66).
  • the 38th Arg of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 67th Arg is Lys.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 67th Arg is Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 48th Met is Ile. Amino acid sequence in which 67th Arg is replaced with Lys, 68th Val is replaced with Ala, 70th Ile is replaced with Leu, 72nd Ala is replaced with Val, and 97th Ala is replaced with Thr. (45) The 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 48th Met is Ile.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the amino acid sequence in which the 48th Met is replaced with Ile, the 67th Arg with Lys, the 72nd Ala with Val, the 74th Thr with Lys, and the 97th Ala with Thr (58)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the amino acid sequence in which the 48th Met is replaced with Ile, the 67th Arg with Lys, the 70th Ile with Leu, the 72nd Ala with Val, and the 97th Ala with Thr (60)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the amino acid sequence in which the 48th Met is replaced with Ile, the 67th Arg with Lys, the 70th Ile with Leu, the 72nd Ala with Val, and the 74th Thr with Lys (61)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val
  • the 20th Val is Leu
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe.
  • the 68th Val is replaced with Ala
  • the 74th Thr is replaced with Lys
  • the 97th Ala is replaced with Thr.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the amino acid sequence in which the 48th Met is replaced with Ile, the 67th Arg with Lys, the 68th Val with Ala, the 72nd Ala with Val, and the 97th Ala with Thr (63)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 20th Val is Leu, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Phe.
  • amino acid sequence of VH into which nine modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (10).
  • the 38th Arg of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Lys, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is substituted with the 68th Val as Ala, the 72nd Ala as Val, the 74th Thr as Lys, and the 97th Ala as Thr.
  • the amino acid sequence in which the 72nd Ala is replaced with Val, the 74th Thr is replaced with Lys, and the 97th Ala is replaced with Thr (4) the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val, 38th Arg to Lys, 39th Gln to Leu, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 72nd Ala to Val, 74th The amino acid sequence in which Thr of the amino acid is replaced with Lys and the 97th Ala is replaced with Thr (5) The 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 a, 38th Arg to Lys, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 72nd Ala to Val
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is substituted with 12th Lys as Val, 38th Arg as Lys, 39th amino acid sequence in which
  • amino acid sequence of VH into which 8 modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (47).
  • the 39th Gln of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, the 67th Arg is Lys, and the 68th Val is Ala.
  • the amino acid sequence in which the 72nd Ala is replaced with Val, the 74th Thr is replaced with Lys, and the 97th Ala is replaced with Thr (2) the 38th Arg of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is expressed as Lys, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 72nd Ala to Val, 74th Thr to Lys, and 97 Amino acid sequence in which th Ala is replaced with Thr (3)
  • the 38th Arg of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Lys, and the 39th Gln Leu, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 72nd Ala to Val, 74th Thr to Lys, and 97th Ala to Thr
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is 38th Arg in Lys, 39th Gln in Leu, 45th Leu in P
  • Val is replaced with Ala
  • the 72nd Ala is replaced with Val
  • the 74th Thr is replaced with Lys
  • the 97th Ala is replaced with Thr.
  • the 38th Arg of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is replaced with Lys.
  • Amino acid sequence in which 67th Arg is replaced with Lys, 68th Val is replaced with Ala, 72nd Ala is replaced with Val, 74th Thr is replaced with Lys, and 97th Ala is replaced with Thr (12)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown by 12 is Val
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • 72nd Ala is replaced by Val
  • 74th Thr is replaced by Lys
  • 97th Ala is replaced by Thr.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence is Val
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 48th Met is Ile
  • the 68th Val is Ala
  • the 72nd Ala is Val.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is replaced with Val
  • the 39th Gln is replaced with Leu
  • the 74th Thr is replaced with Lys
  • the 97th Ala is replaced with Thr.
  • the Leu is the Phe, the 48th Met is the Ile, the 67th Arg is the Lys, the 72nd Ala is the Val, the 74th An amino acid sequence in which Thr is replaced with Lys and 97th Ala is replaced with Thr
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 39th Gln is Leu, and the 45th Leu is Amino acid sequence in which Phe is substituted with 48th Met for Ile, 67th Arg for Lys, 68th Val for Ala, 74th Thr for Lys, and 97th Ala for Thr
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 39th Gln is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, the 67th Arg is Lys, 68 Amino acid sequence (17) in which the first Val is replaced with Ala, the 72nd Ala is replaced with Val, and the 97
  • the 12th Lys of the column is Val, the 38th Arg is Lys, the 48th Met is Ile, the 67th Arg is Lys, the 68th Val is Ala, the 72nd Ala is Val,
  • the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val
  • the 38th Arg is Lys
  • the 45th Leu is Ph.
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is substituted with Thr at 74th with Lys and 97th Ala with Thr. , 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 72nd Ala to Val, and 97th Ala to Thr
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th An amino group in which Arg is replaced with Lys, 68th Val is replaced with Ala, 72nd Ala is replaced with Val, and 74th Thr is replaced with Lys.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, the 39th Gln is Leu, the 67th Arg is Lys, and the 68th Val is Ala, amino acid sequence in which 72nd Ala is replaced with Val, 74th Thr is replaced with Lys, and 97th Ala is replaced with Thr
  • 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val 38th Arg to Lys, 39th Gln to Leu, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 72nd Ala to Val, 74th Thr to Lys, and Amino acid sequence in which 97th Ala is substituted with Thr
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, 38th Arg of the eye to Lys, 39th Gln to Leu, 48th Met to Ile, 68th Val to Ala, 72nd Ala to Val,
  • the 12th Lys of the amino acid sequence is Val
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 67th Arg is Lys
  • the 72nd Ala is Val.
  • the 12th Lys of the non-acid sequence is Val
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 67th Arg is Lys
  • the 68th Val is Ala.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in which the 74th Thr is replaced with Lys and the 97th Ala replaced with Thr is the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12, the 38th Arg is the Lys, The 39th Gln was replaced with Leu, the 45th Leu with Phe, the 67th Arg with Lys, the 68th Val with Ala, the 72nd Ala with Val, and the 97th Ala with Thr.
  • Amino acid sequence (37) The 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, and the 39th Gln Amino acid sequence in which Leu, 45th Leu is replaced with Phe, 67th Arg is replaced with Lys, 68th Val is replaced with Ala, 72nd Ala is replaced with Val, and 74th Thr is replaced with Lys (38)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 48th Met is Ile
  • 72 The amino acid sequence of (39) SEQ ID NO: 12 in which the 12th Lys is replaced by Val, the 74th Thr is replaced by Val, the 74th Thr is replaced by Lys, and the 97th Ala is replaced by Thr.
  • the 12th Lys is Val
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • 97th Ala is replaced with Thr (43) 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 Val, 38th Arg to Lys, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 72nd Ala to Val
  • the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val, 8th Arg to Lys, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg
  • the 12th Lys of the sequence is Val
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe.
  • amino acid sequence of VH into which seven modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (22).
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val
  • the 20th Val is Leu
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 48th Met is Ile.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in which the 67th Arg is replaced with Lys and the 97th Ala is replaced with Thr the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val, the 38th Arg is Lys, Amino acid sequence in which 39th Gln is replaced with Leu, 45th Leu with Phe, 48th Met with Ile, 67th Arg with Lys, and 97th Ala with Thr (3) SEQ ID NO: 12
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown by is Val
  • 39th Gln is Leu
  • 45th Leu is Phe
  • 48th Met Ile 67th Arg to Lys
  • 68th Val to Ala
  • 97th Ala to Thr (4) 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 to Val
  • the 39th Gln is replaced by Leu
  • the 45th Leu is replaced by Phe
  • the 48th Met is replaced by Ile
  • Amino acid sequence (5) 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, 39th Gln is Leu, 45th Leu is Phe, 48th Met is Ile, 67th An amino acid sequence in which Arg is replaced with Lys, 72nd Ala is replaced with Val, and 97th Ala is replaced with Thr (6)
  • the 12th Lys is Val
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 48th Met is Ile
  • the 67th Arg is Lys
  • the 74th Thr is Lys.
  • amino acid sequence (7) in which 97th Ala is replaced with Thr, 20th Val of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Leu, 38th Arg is Lys, 39th Gln is Leu, The amino acid sequence in which the 45th Leu is replaced with Phe, the 48th Met with Ile, the 67th Arg with Lys, and the 97th Ala with Thr (8) 20th of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 Val to Leu, 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th A Amino acid sequence in which rg is replaced by Lys, 68th Val is replaced by Ala, and 97th Ala is replaced by Thr (9) The 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, and the 39th Gln is Amino acid sequence in which Leu, 45th Leu is replaced by Phe, 48th Met is replaced by Ile, 67th Arg is replaced
  • the 38th Arg of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is replaced with Lys.
  • the 39th Gln to Leu, the 45th Leu to Phe, the 48th Met to Ile, and the 67th Arg to Lys The amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 with the 70th Ile replaced with Leu and the 97th Ala replaced with Thr
  • the 38th Arg of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th The amino acid sequence in which Leu is replaced with Phe, the 48th Met is replaced with Ile, the 67th Arg is replaced with Lys, the 72nd Ala is replaced with Val, and the 97th Ala is replaced with Thr.
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 48th Met is Ile
  • the 67th Arg is Lys
  • the 74th Thr is Lys.
  • the amino acid sequence in which 97th Ala is substituted with Thr (16) n to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 70th Ile to Leu, and 97th Ala The amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with Thr.
  • the 39th Gln of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • An amino acid sequence in which the 68th Val is replaced with Ala, the 72nd Ala is replaced with Val, and the 97th Ala is replaced with Thr (18)
  • the 39th Gln of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is represented by Leu, The th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, the 67th Arg is Lys, the 68th Val is Ala, and the 74th T Amino acid sequence in which r is replaced with Lys and 97th Ala is replaced with Thr (19)
  • the 39th Gln of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 45th Leu is Phe, and the 48th Met is Ile, 67th Arg to Lys, 70th Ile to Leu, 72nd Ala
  • Amino acid sequence (22) 39th Gln of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, 45th Leu is Phe, 48th Met is Ile, 67th Arg is Lys, 72nd Ala Amino acid sequence in which is replaced with Val, 74th Thr with Lys, and 97th Ala with Thr
  • amino acid sequence of VH into which six modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (7).
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the 48th Met is Ile
  • the 67th Arg is Lys.
  • the amino acid sequence in which the 97th Ala is replaced with Thr (2)
  • the 20th Val of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Leu
  • the 39th Gln is Leu
  • the 45th Leu is Phe
  • the amino acid sequence in which the 48th Met is replaced by Ile, the 67th Arg is replaced by Lys
  • the 97th Ala is replaced by Thr.
  • the 38th Arg of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is replaced by Lys and the 39th. Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, and 97th The amino acid sequence in which la is replaced with Thr (4)
  • the 39th Gln of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, and the 67th Arg is Lys.
  • amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in which the 68th Val is replaced with Ala and the 97th Ala is replaced with Thr the 39th Gln of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is represented by Leu, the 45th Leu is represented by Phe, The amino acid sequence in which the 48th Met is replaced with Ile, the 67th Arg is replaced with Lys, the 70th Ile is replaced with Leu, and the 97th Ala is replaced with Thr.
  • amino acid sequence of VH into which five modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (8).
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Val, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, the 67th Arg is Lys, and the 97th Ala is The amino acid sequence substituted with Thr
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Leu, the 45th Leu is Phe, the 48th Met is Ile, the 67th Arg is Lys, And amino acid sequence in which 97th Ala is replaced with Thr (3) 38th Arg of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Lys, 45th Leu is Phe, 48th Met is Ile, 67th Amino acid sequence (4) in which Arg is substituted with Lys and 97th Ala is replaced with Thr No.
  • Substituted amino acid sequence (7) The 45th Leu of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Phe, and the 48th Met is Ile. Amino acid sequence in which 67th Arg is substituted with Lys, 72nd Ala with Val, and 97th Ala with Thr (8) 45th Leu of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is represented with Phe, 48th Amino acid sequence in which Met is replaced with Ile, 67th Arg is replaced with Lys, 74th Thr is replaced with Lys, and 97th Ala is replaced with Thr
  • amino acid sequence of VH into which four modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (9).
  • An amino acid sequence in which the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with Val, the 45th Leu is replaced with Phe, the 48th Met is replaced with Ile, and the 97th Ala is replaced with Thr (2 ) Amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, wherein the 20th Val is replaced with Leu, the 45th Leu is replaced with Phe, the 48th Met is replaced with Ile, and the 97th Ala is replaced with Thr (3) Amino acid sequence represented by No.
  • the 45th Leu of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Phe, the 48th Met is Ile, the 70th Ile is Leu, and the 97th Ala is Thr.
  • the amino acid sequence substituted with (8)
  • the 45th Leu of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is changed to Phe, the 48th Met
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with Phe, and the 48th Met is changed to Ile.
  • Amino acid sequence in which 74 th Thr is replaced with Lys and 97 th Ala is replaced with Thr
  • amino acid sequence of VH into which three modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (19).
  • the amino acid represented by SEQ ID NO: 12 The amino acid sequence in which the 20th Val of the sequence is replaced with Leu, the 45th Leu is replaced with Phe, and the 97th Ala is replaced with Thr.
  • the 38th Arg of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is expressed as Lys.
  • the 45 th Leu of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 Amino acid sequence in which 48th Met is replaced with Ile and 97th Ala is replaced with Thr (6)
  • 45th Leu of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Phe, 67th Arg is Lys, and Amino acid sequence in which 97th Ala is replaced with Thr (7) Amino acid sequence in which the 45th Leu of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with Phe, the 68th Val with Ala, and the 97th Ala with Thr Sequence (8)
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is represented by the amino acid
  • the 45th Leu in the amino acid sequence is placed in Phe, the 72nd Ala in Val, and the 97th Ala in Thr.
  • the amino acid sequence (10) of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is the amino acid sequence (11) in which the 45th Leu is replaced with Phe, the 74th Thr is replaced with Lys, and the 97th Ala is replaced with Thr.
  • amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in which the 48th Met is replaced with Ile (14)
  • amino acid sequence (39) in which the 39th Gln is replaced with Leu, the 45th Leu with Phe, and the 48th Met with Ile (15), the 45th Leu of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 with Phe,
  • the 45th Leu of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is Phe
  • the 48th Met is Ile
  • the 68th The amino acid sequence (17) of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 was replaced with 45th Leu as Phe, 48th Met as Ile, and 70th Ile as Leu.
  • amino acid sequence of VH into which two modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (66).
  • An amino acid sequence in which the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is replaced with Val and the 20th Val is replaced with Leu (2)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val And amino acid sequence (3) in which Arg at position 38 is replaced with Lys (3)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID No. 12 is Val, and 48 The amino acid sequence in which the Met is replaced with Ile (6)
  • the 12th Ly of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 Of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with Val and the 68th Val is replaced with Ala (8)
  • the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is represented by Val, The amino acid sequence in which the 72nd Ala is replaced with Val (10) The amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 wherein the 12th Lys is replaced with Val, and the 74th Thr is replaced with Lys (11) SEQ ID NO: 12 The 12th Lys of the amino acid sequence shown by is substituted with Val, and the 97th Ala is replaced with Thr.
  • the amino acid sequence in which the 20th Val of the no acid sequence is replaced with Leu and the 68th Val is replaced with Ala (18)
  • the 20th Val of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is represented by Leu
  • the 70th Ile is represented by The amino acid sequence substituted with Leu (19)
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 The amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 was replaced with Leu, and the 72nd Ala was substituted with Val (20).
  • Amino acid sequence in which 20th Val is replaced with Leu and 74th Thr is replaced with Lys (21)
  • the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with Leu
  • the 97th Ala is replaced with Thr.
  • Amino acid sequence (22) Arg at position 38 of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 to Lys, and 3
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is substituted with 38th Arg in Lys and the 67th Arg in Lys.
  • the amino acid sequence substituted with Lys (26) The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 The 38th Arg of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 was replaced with Lys, and the 68th Val was replaced with Ala (27) The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 An amino acid sequence in which 38th Arg is replaced with Lys and 70th Ile is replaced with Leu ( 8) An amino acid sequence in which the 38th Arg of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with Lys, and the 72nd Ala is replaced with Val (29) The 38th Arg of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is set in Lys And amino acid sequence (31) in which 74 th Thr is replaced with Lys (30) amino acid sequence (31) in which amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is substituted with 38th Arg in Lys and 97th Ala with Thr The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is replaced with Leu, and the 39th Gln of the amino acid sequence
  • Amino acid sequence obtained by substituting Ile for Met (33) No. 39 of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 The amino acid sequence in which the Gln of the first amino acid is replaced with Leu and the 67th Arg is replaced with Lys (34)
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is replaced with 39th Gln with Leu, and the 68th Val with amino acid.
  • Amino acid sequence (42) Amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 wherein 45th Leu is replaced with Phe, and 70th Ile is replaced with Leu (43) 45th Leu of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 Amino acid sequence in which Phe is substituted with Phe and 72nd Ala is substituted with Val (44) SEQ ID NO: 1
  • the 45th Leu of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is replaced with Phe, and the 97th Amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 wherein Ala is replaced by Thr
  • Amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 Substituted by 48th Met by Ile and 67th Arg by Lys Amino acid sequence (48) in which the 48th Met of the sequence is replaced with Ile
  • amino acid sequence (62) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 was replaced with Leu, and the amino acid sequence (63) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 was replaced with Lys at the 74th Thr.
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is substituted with 72nd Ala with Val and 74th Thr with Lys.
  • amino acid sequence of VH into which one modification has been introduced include the following amino acid sequences (1) to (12).
  • An amino acid sequence in which the 12th Lys of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is substituted with Val (2) An amino acid sequence in which the 20th Val of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is substituted with Leu
  • Lys An amino acid sequence in which the 39th Gln of the amino acid sequence shown in SEQ ID No. 12 is substituted with Leu (5) shown in SEQ ID No.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 and the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 are Val, the 20th Val is Leu, and the 38th Arg is Lys. 39th Gln to Leu, 45th Leu to Phe, 48th Met to Ile, 67th Arg to Lys, 68th Val to Ala, 70th Ile to Leu, An amino acid sequence in which the 72nd Ala is replaced with Val, the 74th Thr is replaced with Lys, and the 97th Ala is replaced with Thr is preferred.
  • the humanized antibody of the present invention includes an amino acid sequence in which the second Ile, 15th Pro, 50th Gln, and 92nd Tyr of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 are substituted with other amino acid residues.
  • a humanized antibody containing VL containing is preferable, and an amino acid sequence in which the 15th Pro, 50th Gln, and 92nd Tyr in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 are substituted with other amino acid residues Preferred examples include VL.
  • a humanized antibody containing 1 VL selected from the following (1) to (4) is also preferable.
  • VL including an amino acid sequence in which the 50th Gln and 92nd Tyr of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 are substituted with other amino acid residues (2) VL including an amino acid sequence in which the second Ile and the 92nd Tyr of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 are substituted with other amino acid residues (3) VL including an amino acid sequence in which the 15th Pro in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 and the 92nd Tyr are substituted with other amino acid residues (4) VL including an amino acid sequence in which the second Ile and 50th Gln of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 are substituted with other amino acid residues
  • the amino acid sequence of the VL for example, the second Ile of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 is Val, the 15th Pro is Leu, the 50th Gln is Lys, and the 92nd Tyr is Phe.
  • An amino acid sequence into which at least one modification selected from modifications to be substituted is introduced.
  • amino acid sequence of the VL of the antibody of the present invention into which the above-described modification has been introduced includes, for example, the amino acid sequence of VH into which the following four to one modification has been introduced.
  • the amino acid sequence of VL into which four modifications are introduced for example, the second Ile of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 is Val, the 15th Pro is Leu, and the 50th Examples include amino acid sequences in which Gln is replaced with Lys and the 92nd Tyr is replaced with Phe.
  • amino acid sequence of VL into which three modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (4).
  • Amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in which the second Ile is replaced with Val, 15th Pro is replaced with Leu, and 50th Gln is replaced with Lys (2) Amino acid represented by SEQ ID NO: 14 Amino acid sequence in which the second Ile of the sequence is substituted with Val, the 15th Pro with Leu, and the 92nd Tyr with Phe (3)
  • the 15th Pro of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 is Leu
  • the 50th Gln is Lys
  • amino acid sequence of VL into which two modifications have been introduced include the following amino acid sequences (1) to (6).
  • the second Ile of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 is Val.
  • the amino acid sequence (3) in which the 50th Gln is substituted with Lys (3) the amino acid sequence (4) in which the second Ile of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 is substituted with Val and the 92nd Tyr with Phe
  • amino acid sequence of VL into which one modification has been introduced include the following amino acid sequences (1) to (4).
  • Amino acid sequence in which the second Ile of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 is substituted with Val (2) Amino acid sequence in which the 15th Pro of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 is substituted with Leu (3)
  • Sequence An amino acid sequence in which the 50th Gln of the amino acid sequence shown in No. 14 is substituted with Lys (4)
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 is Val
  • the 15th Pro is Leu
  • the 50th Gln is Lys.
  • the amino acid sequence in which the 92nd Tyr is substituted with Phe and the amino acid sequence in which the 50th Gln in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 is substituted with Lys and the 92nd Tyr with Phe are preferred.
  • any one antibody in which the above VH and VL are respectively combined can be mentioned.
  • Preferred examples of the antibody of the present invention include the following antibodies (1) to (4).
  • a humanized antibody comprising at least one of VH comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 and VL comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 (2) VH comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 and the figure (3)
  • a humanized antibody comprising at least one VL comprising any one of the amino acid sequences represented by 2 (3)
  • a VH comprising any one of the amino acid sequences represented by FIG. 1 and a VL comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 (4)
  • 6E4HV0 or HV12 is preferable.
  • 6E4LV0, LV2a and LV4 of the amino acid sequence of VL shown in FIG. 2 are preferable.
  • a humanized antibody containing VH containing any one of the amino acid sequences shown in FIG. 1 and VL containing any one of the amino acid sequences shown in FIG. 2 the amino acid sequence of 6E4HV0 or HV12 shown in FIG. More preferred is a humanized antibody comprising a VH comprising VL and a VL comprising any one amino acid sequence of 6E4LV0, LV2a and LV4 shown in FIG.
  • a humanized antibody containing VH containing the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 12 or 15 and VL containing the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14, 16 or 17 can be mentioned.
  • combinations of HV0 and LV0, HV0 and LV2a, HV0 and LV4, and HV12 and LV4 are preferable.
  • a humanized antibody comprising VH containing the amino acid sequence shown by HV0 in FIG. 1 and VL containing the amino acid sequence shown by LV0 in FIG. (2) VH containing the amino acid sequence shown by HV0 in FIG. 1 and VL containing the amino acid sequence shown by LV2a in FIG. 2 (HV0LV2a) (3) VH containing the amino acid sequence shown by HV0 in FIG. 1 and VL containing the amino acid sequence shown by LV4 in FIG. 2 (HV0LV4) (4) VH containing the amino acid sequence shown by HV12 in FIG. 1 and VL containing the amino acid sequence shown by LV4 in FIG. 2 (HV12LV4)
  • the combination of amino acid sequences contained in VH and VL is a combination of SEQ ID NOs: 12 and 14, SEQ ID NOs: 12 and 16, SEQ ID NOs: 12 and 17, and SEQ ID NOs: 15 and 17. Mention may be made of humanized antibodies.
  • the humanized antibody of the present invention also includes a humanized antibody that reacts with the A ⁇ oligomer by competing with the above-mentioned humanized antibody, and a humanized antibody that binds to the same epitope as the above-mentioned epitope that the humanized antibody reacts with. Is done.
  • the human antibody refers to an antibody that naturally exists in the human body, and a human antibody phage library prepared by recent advances in genetic engineering, cell engineering, and developmental engineering techniques, and An antibody obtained from a human antibody-producing transgenic animal is also included.
  • the antibody naturally present in the human body can be cultured by, for example, isolating human peripheral blood lymphocytes, infecting and immortalizing EB virus, etc., and cloning the lymphocytes that produce the antibody.
  • the antibody can be further purified.
  • the human antibody phage library is a library in which antibody fragments such as Fab and scFv are expressed on the phage surface by inserting antibody genes prepared from human B cells into the phage genes.
  • a phage expressing on its surface an antibody fragment having a desired antigen-binding activity can be recovered using the binding activity to a substrate on which an antigen is immobilized as an index.
  • the antibody fragment can be further converted into a human antibody molecule comprising two complete heavy chains and two complete light chains by genetic engineering techniques.
  • a human antibody-producing transgenic animal means an animal in which a human antibody gene is incorporated into cells.
  • a human antibody-producing transgenic mouse can be produced by introducing a human antibody gene into a mouse ES cell, transplanting the ES cell into an early mouse embryo, and generating it.
  • Human antibodies from human antibody-producing transgenic animals can be produced in the culture supernatant by obtaining and culturing human antibody-producing hybridomas using conventional hybridoma production methods for non-human animals. It can be produced by accumulating.
  • the number of amino acids to be deleted, substituted, inserted and / or added is one or more, and the number is not particularly limited, but site-specific mutagenesis [Molecular Cloning, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), Current protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987-1997), Nucleic Acids Research, 10, 6487 (1982), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 6409 (1982), Gene, 34, 315 (1985), Nucleic Acids Research, 13, 4431 (1985), Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 82, 488 (1985)].
  • 1 to several tens 1 to 20 are preferable, 1 to 10 are more preferable, and 1 to 5 are more preferable.
  • deletion, substitution, insertion or addition of one or more amino acid residues in the amino acid sequence of the above antibody indicates the following. That is, it means that there is a deletion, substitution, insertion or addition of one or a plurality of amino acid residues in any one and a plurality of amino acid sequences in the same sequence.
  • deletion, substitution, insertion or addition may occur simultaneously, and the amino acid residue to be substituted, inserted or added may be either a natural type or a non-natural type.
  • natural amino acid residues include L-alanine, L-asparagine, L-aspartic acid, L-glutamine, L-glutamic acid, glycine, L-histidine, L-isoleucine, L-leucine, L-lysine, L -Arginine, L-methionine, L-phenylalanine, L-proline, L-serine, L-threonine, L-tryptophan, L-tyrosine, L-valine and L-cysteine.
  • amino acid residues contained in the same group can be substituted for each other.
  • Group A leucine, isoleucine, norleucine, valine, norvaline, alanine, 2-aminobutanoic acid, methionine, O-methylserine, t-butylglycine, t-butylalanine and cyclohexylalanine
  • Group B aspartic acid, glutamic acid, isoaspartic acid, Isoglutamic acid, 2-aminoadipic acid and 2-aminosuberic acid
  • Group C asparagine and glutamine
  • Group D lysine, arginine, ornithine, 2,4-diaminobutanoic acid and 2,3-diaminopropionic acid
  • Group E proline, 3 -Hydroxyproline and 4-hydroxyproline
  • Group F serine, threonine and homoserine
  • examples of the antibody fragment include Fab, F (ab ′) 2 , Fab ′, scFv, diabody, dsFv, and a peptide containing CDR.
  • Fab is a fragment obtained by treating IgG with papain, a proteolytic enzyme (cleaved at the 224th amino acid residue of the H chain), about half of the N chain side of the H chain and the entire L chain are disulfides. It is an antibody fragment having an antigen binding activity with a molecular weight of about 50,000 bound by binding.
  • the Fab of the present invention can be obtained by treating a monoclonal antibody specifically recognizing A ⁇ oligomer and binding to the extracellular region with papain.
  • a Fab may be produced by inserting a DNA encoding the Fab of the antibody into a prokaryotic expression vector or a eukaryotic expression vector, and expressing the vector by introducing the vector into a prokaryotic or eukaryotic organism. it can.
  • F (ab ′) 2 was obtained by decomposing the lower part of two disulfide bonds in the hinge region of IgG with pepsin, a proteolytic enzyme, and was constructed by combining two Fab regions at the hinge portion. It is a fragment having an antigen binding activity with a molecular weight of about 100,000.
  • the F (ab ′) 2 of the present invention can be obtained by treating a monoclonal antibody that specifically recognizes the A ⁇ oligomer and binds to the extracellular region with pepsin.
  • Fab ′ described below can be prepared by thioether bond or disulfide bond.
  • Fab ′ is an antibody fragment having an antigen binding activity of about 50,000 molecular weight obtained by cleaving the disulfide bond in the hinge region of F (ab ′) 2 .
  • the Fab ′ of the present invention can be obtained by treating F (ab ′) 2 that specifically recognizes the A ⁇ oligomer of the present invention and binds to the extracellular region with a reducing agent such as dithiothreitol.
  • DNA encoding the Fab ′ fragment of the antibody is inserted into a prokaryotic expression vector or eukaryotic expression vector, and the vector is introduced into prokaryotic or eukaryotic cells to express Fab ′.
  • scFv is a VH-P-VL or VL-P-VH polypeptide in which one VH and one VL are linked using an appropriate peptide linker (hereinafter referred to as P), and has antigen-binding activity. It is an antibody fragment having
  • the scFv of the present invention specifically recognizes the A ⁇ oligomer of the present invention and obtains cDNA encoding the VH and VL of the monoclonal antibody that binds to the extracellular region, constructs the DNA encoding scFv, It can be produced by inserting DNA into a prokaryotic expression vector or a eukaryotic expression vector and introducing the expression vector into a prokaryotic or eukaryotic organism.
  • Diabody is an antibody fragment obtained by dimerizing scFv and is an antibody fragment having a bivalent antigen-binding activity.
  • the bivalent antigen binding activity can be the same, or one can be a different antigen binding activity.
  • the diabody of the present invention specifically obtains the cDNA encoding the VH and VL of the monoclonal antibody that specifically recognizes the A ⁇ oligomer of the present invention and binds to the extracellular region, and converts the scFv-encoding DNA into the amino acid of the peptide linker.
  • sequence length By constructing the sequence length to be 8 residues or less, inserting the DNA into a prokaryotic expression vector or eukaryotic expression vector, and introducing the expression vector into a prokaryotic or eukaryotic organism. It can be expressed and manufactured.
  • DsFv refers to a polypeptide in which one amino acid residue in each of VH and VL is substituted with a cysteine residue, which are bonded via a disulfide bond between the cysteine residues.
  • the amino acid residue to be substituted for the cysteine residue can be selected based on the three-dimensional structure prediction of the antibody according to a known method [Protein Engineering, 7, 697 (1994)].
  • the dsFv of the present invention specifically recognizes the A ⁇ oligomer of the present invention and obtains cDNA encoding the VH and VL of the monoclonal antibody that binds to the extracellular region, constructs a DNA encoding dsFv, It can be produced by inserting DNA into a prokaryotic expression vector or a eukaryotic expression vector and introducing the expression vector into a prokaryotic or eukaryotic organism.
  • the peptide containing CDR is configured to contain at least one region of CDR of VH or VL.
  • Peptides containing multiple CDRs can be linked directly or via a suitable peptide linker.
  • the peptide comprising the CDR of the present invention constructs DNA encoding the CDRs of the VH and VL of the humanized antibody that specifically binds to the A ⁇ oligomer of the present invention, and the DNA is used for prokaryotic expression vectors or eukaryotics. It can be produced by inserting into an expression vector and expressing the expression vector by introducing it into a prokaryotic or eukaryotic organism. Moreover, the peptide containing CDR can also be manufactured by chemical synthesis methods, such as Fmoc method and tBoc method.
  • a radioisotope, a low molecular weight drug, a high molecular weight drug, a protein or an antibody drug is chemically or genetically coupled to the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention or the antibody fragment. Also included are derivatives of the antibodies produced.
  • the derivative of the antibody of the present invention is an N-terminal or C-terminal side of the H-chain or L-chain of the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention or an antibody fragment thereof, an appropriate one in the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody or the antibody fragment thereof.
  • Chemical methods such as radioisotopes, low molecular weight drugs, high molecular weight drugs, immunostimulants, proteins and antibody drugs on substituents or side chains and sugar chains [Introduction to Antibody Engineering, Jinshokan (1994)] It can manufacture by combining by.
  • DNA encoding the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention or the antibody fragment thereof and the DNA encoding the protein or antibody drug to be bound are linked and inserted into an expression vector, and the expression vector is inserted into an appropriate host cell.
  • the derivative of the antibody of the present invention can be produced by a genetic engineering technique that is introduced into and expressed.
  • Examples of the label include enzymes such as alkaline phosphatase, peroxidase and luciferase, luminescent materials such as acridinium ester and lophine, or fluorescent materials such as fluorescein isothiocyanate (FITC) and tetramethylrhodamine isothiocyanate (RITC). Can be mentioned.
  • enzymes such as alkaline phosphatase, peroxidase and luciferase
  • luminescent materials such as acridinium ester and lophine
  • fluorescent materials such as fluorescein isothiocyanate (FITC) and tetramethylrhodamine isothiocyanate (RITC).
  • the anti-A ⁇ oligomeric monoclonal antibody can be produced as follows.
  • a ⁇ 1-42 (Peptide Laboratories, Osaka) is dissolved in distilled deionized water or 10 mmol / L phosphate buffer, After incubating for 18 hours, the peptides were separated by 4-12% SDS-PAGE, visualized by CBB staining, and then A ⁇ 1-42 tetramer free from contamination of A ⁇ 1-42 monomer was excised to obtain A ⁇ 1-42 oligomers. Can be produced.
  • a ⁇ 1-40 in which 6-carboxytetramethylrhodamine (6-TAMRA) (SIGMA) was chemically bonded to the N-terminus of the synthesized A ⁇ 1-40 peptide using a conventional method was synthesized A ⁇ 1-40 (Peptide Laboratories, Osaka).
  • 6-TAMRA 6-carboxytetramethylrhodamine
  • a ⁇ 1-40 oligomers containing a large amount of oligomers can also be prepared by polymerization reaction together.
  • Immunization is performed by administering an antigen subcutaneously or intravenously or intraperitoneally to an animal, for example, with Freund's complete adjuvant or an appropriate adjuvant such as aluminum hydroxide gel and pertussis vaccine.
  • the antigen is a partial peptide
  • a conjugate with a carrier protein such as BSA (bovine serum albumin) and KLH (Keyhole limpet hemocyanin) is prepared and used as an immunogen.
  • BSA bovine serum albumin
  • KLH Keyhole limpet hemocyanin
  • Any animal can be used as the animal to immunize with the antigen as long as it can produce a hybridoma.
  • a mouse, a rat, a hamster, a chicken or a rabbit is used.
  • antibodies produced by hybridomas prepared by obtaining cells having antibody-producing ability from such animals, immunizing the cells in vitro, and then fusing with myeloma cells.
  • a cell line obtained from a mouse is used.
  • the myeloma cells are subcultured in normal medium [RPMI 1640 medium supplemented with glutamine, 2-mercaptoethanol, gentamicin, FBS, and 8-azaguanine], and subcultured to normal medium 3 to 4 days before cell fusion. Secure the number of cells of 2 ⁇ 10 7 or more on the day of fusion.
  • a hybridoma is prepared by fusing the antibody-producing cells obtained in (2) and the myeloma cells obtained in (3) using polyethylene glycol 1500. be able to.
  • a cell group that reacts with the A ⁇ oligomer and does not react with the A ⁇ monomer is selected by a hybridoma selection method such as a dot blot method or a binding assay described later.
  • cloning was repeated twice by the limiting dilution method (first time was HT medium (medium obtained by removing aminopterin from HAT medium), second time normal medium was used), and a stable and strong antibody titer was observed.
  • HT medium medium obtained by removing aminopterin from HAT medium
  • second time normal medium was used
  • the hybridoma becomes ascites tumor in 10-21 days. Ascites was collected from this mouse, centrifuged to remove solids, salted out with 40-50% ammonium sulfate, and purified by caprylic acid precipitation, DEAE-Sepharose column, protein A column or gel filtration column. IgG or IgM fractions are collected and used as purified monoclonal antibodies.
  • Examples of a method for screening an antibody include a method of selecting an antibody based on the binding activity between the antibody and A ⁇ oligomer.
  • the binding activity of the antibody of the present invention to the antigen (A ⁇ oligomer) can be determined by, for example, absorbance measurement, enzyme-linked immunosorbent assay (dot blot method, ELISA), enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA). ), Biacore (manufactured by Biacore) using an immunofluorescence method or the like and a surface plasmon resonance method (SPR method).
  • the binding of anti-A ⁇ oligomer monoclonal antibody to A ⁇ oligomer is a dot blot in which 2.5 ⁇ l of A ⁇ 1-42 (2.5 ⁇ g / dot) preincubated for 18 hours is immobilized on a nitrocellulose membrane. Can be confirmed by law.
  • Non-specific binding sites on the membrane were blocked with a phosphate buffer containing 5% low-fat milk, 1% BSA and 0.05% Tween-20, then incubated with the culture supernatant, and A ⁇ in the culture supernatant was Oligomer-bound antibodies were detected with horseradish peroxidase-labeled goat anti-mouse F (ab ′) 2 (1: 3000; Amersham) and using a highly sensitive chemiluminescence (ECL) kit using LAS3000 mini (Fujitsu, Tokyo, Japan). It can be detected (International Publication No. 2009/051220).
  • an antibody is immobilized on a plate, an antigen against it is added to the plate, and then a sample containing a desired antibody such as a culture supernatant of a cell producing the antibody or a purified antibody is added.
  • a secondary antibody that recognizes the primary antibody and is tagged with an enzyme such as alkaline phosphatase is added and the plate is incubated.
  • an enzyme substrate such as p-nitrophenyl phosphate can be added to the plate, and the absorbance can be measured to evaluate the antigen binding ability of the target sample.
  • the reactivity of the antibody is confirmed using a sandwich solid-phase enzyme immunoassay (chemiluminescence-ELISA) using chemiluminescence. (International Publication No. 2009/051220).
  • a ⁇ oligomer analysis in plasma and organ obtained from the administered mouse was performed using 6E10-HRP-labeled 6E10 (Senetek PLC). , Napa, CA, USA) It is also possible to carry out human specific oligomer ELISA (WO 2009/051220).
  • the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention can bind to A ⁇ oligomers in AD brain is determined by amyloid fraction containing a large amount of A ⁇ oligomers (Matsubara E, et al; Neurobiol Aging, 2004). This can be confirmed by conducting an immunoprecipitation experiment (Ghiso J, et al: Biochem J, 1993) (International Publication No. 2009/051220).
  • anti-A ⁇ oligomer antibody specifically binds to A ⁇ oligomer and has cytoprotective activity.
  • Yamamoto N, et al: J. MoI. Biol. Chem. , 282: 2646-2655, 2007, or WO 2009/051220 each separated using A ⁇ incubation and ThT assay, A ⁇ -induced neurotoxicity assay, ultrafiltration and gel filtration. This can be confirmed by the reactivity to molecular size A ⁇ oligomers.
  • a ⁇ amyloid fibril formation inhibitory activity can be confirmed using thioflavin T assay and electron microscopy.
  • the ability of both antibodies to capture A ⁇ oligomers in AD brain is determined by the presence of SDS stability 4-, 5-, 8-, 12-mer during immunoprecipitation using an anti-A ⁇ oligomer humanized antibody. It can be measured by checking.
  • the humanized antibody of the present invention is administered to the mice, and memory impairment, senile plaques It is possible to verify whether Alzheimer-like phenotypes such as lesions, synaptic dysfunction and A ⁇ accumulation can be prevented (WO 2009/051220).
  • a recombinant antibody expression vector is an animal cell expression vector in which DNAs encoding human antibodies CH and CL are incorporated, and the animal cell expression vector is human. It can be constructed by cloning DNAs encoding antibody CH and CL, respectively.
  • Any human antibody CH and CL can be used for the C region of a human antibody.
  • ⁇ 1 subclass CH and ⁇ class CL of human antibodies are used.
  • cDNA is used for DNA encoding CH and CL of human antibodies, chromosomal DNA consisting of exons and introns can also be used.
  • Any expression vector for animal cells can be used as long as it can incorporate and express a gene encoding the C region of a human antibody.
  • pAGE107 [Cytotechnol. , 3, 133 (1990)]
  • pAGE103 [J. Biochem. , 101, 1307 (1987)]
  • pHSG274 [Gene, 27, 223 (1984)]
  • pKCR Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78, 1527 (1981)]
  • pSG1bd2-4 [Cytotechnol. , 4, 173 (1990)]
  • pSE1UK1Sed1-3 [Cytotechnol. , 13, 79 (1993)].
  • the expression vectors for animal cells for example, the SV40 early promoter [J. Biochem. , 101, 1307 (1987)], Moloney murine leukemia virus LTR [Biochem. Biophys. Res. Commun. , 149, 960 (1987)] and an immunoglobulin heavy chain promoter [Cell, 41, 479 (1985)].
  • an enhancer for example, an enhancer [Cell, 33, 717 (1983)] is used as the enhancer.
  • Recombinant antibody expression vectors balance the ease of construction of recombinant antibody expression vectors, the ease of introduction into animal cells, and the balance of expression levels of antibody H and L chains in animal cells.
  • a vector for expressing a recombinant antibody of a type (tandem type) in which the antibody H chain and L chain are present on the same vector [J. Immunol. Methods, 167, 271 (1994)]
  • tandem recombinant antibody expression vector pKANTEX93 (International Publication No. 97/10354), pEE18 [Hybridoma, 17, 559 (1998)] or the like is used.
  • the base sequence of the linking portion encodes an appropriate amino acid, and VH and VL cDNAs designed to be appropriate restriction enzyme recognition sequences are prepared.
  • a cDNA encoding the non-human antibody VH or VL is amplified by a PCR method using a synthetic DNA having a recognition sequence of an appropriate restriction enzyme at both ends, and the recombinant antibody expression vector obtained in (1) Can also be cloned.
  • the amino acid sequence of the VH or VL framework region (hereinafter referred to as FR) of the human antibody to be grafted with the VH or VL CDR amino acid sequence of the non-human antibody is selected. Any amino acid sequence can be used as long as it is derived from a human antibody.
  • FR amino acid sequences of human antibodies registered in databases such as Protein Data Bank, or common amino acid sequences of each subgroup of FRs of human antibodies [Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services (1991)] are used.
  • an FR amino acid sequence having as high a homology as possible (at least 60% or more) with the FR amino acid sequence of VH or VL of the original antibody is selected.
  • the amino acid sequence of CDR of the original antibody is transplanted to the amino acid sequence of FR of VH or VL of the selected human antibody, respectively, and the amino acid sequence of VH or VL of the humanized antibody is designed respectively.
  • a humanized antibody can only have its antigen-binding activity by transplanting only the VH and VL CDRs of a non-human antibody into the VH and VL FRs of a human antibody. [BIO / TECHNOLOGY, 9, 266 (1991)].
  • the amino acid residues of FR of human antibody VH and VL can be modified by performing the PCR reaction described in (4) using the synthetic DNA for modification.
  • the base sequence is determined by the method described in (2) and it is confirmed that the target modification has been performed.
  • the vector for humanized antibody expression obtained in (1) is cloned upstream of each gene encoding the human antibody CH or CL so that they are expressed in an appropriate form.
  • Any host cell capable of expressing a recombinant antibody can be used as the host cell into which the expression vector is introduced.
  • COS-7 cells American Type Culture Collection (ATCC) number: CRL1651] are used. Use [Methods in Nucleic Acids Res. , CRC press, 283 (1991)].
  • Any host cell capable of expressing a recombinant antibody can be used as a host cell into which the recombinant antibody expression vector is introduced.
  • CHO-K1 ATCC CCL-61
  • DUkXB11 ATCC CCL-9096
  • Pro-5 ATCC CCL-1781
  • CHO-S Life Technologies, Cat # 11619
  • mice 20 also referred to as YB2 / 0
  • mouse myeloma cell NSO mouse myeloma cell SP2 / 0-Ag14
  • mouse P3X63-Ag8.653 cell ATCC number: CRL1580
  • dihydrofolate reductase gene (Hereinafter referred to as dhfr) deficient CHO cells [Proc. Natl. Acad. Sci. , USA, 77, 4216 (1980)], Lec13 that has acquired lectin resistance (Somatic Cell and Molecular genetics, 12, 55 (1986)), and CHO cells deficient in the ⁇ 1,6-fucose transferase gene (International Publication No. 2005). / 035586, WO 02/31140) and rat YB2 / 3HL. P2. G11.16 Ag. 20 cells (ATCC number: CRL1662) are used.
  • a protein such as an enzyme involved in the synthesis of intracellular sugar nucleotide GDP-fucose, a sugar chain modification in which the 1-position of fucose is ⁇ -bonded to the 6-position of N-acetylglucosamine at the reducing end of the N-glycoside-linked complex sugar chain
  • a host cell in which the activity of a protein such as an enzyme involved in the protein and a protein involved in the transport of intracellular sugar nucleotide GDP-fucose to the Golgi apparatus is reduced or deleted, such as a CHO deficient in the ⁇ 1,6-fucose transferase gene Cells (International Publication No. 2005/035586, International Publication No. 02/31140) and the like can also be used.
  • a transformant that stably expresses the recombinant antibody is selected by culturing in an animal cell culture medium containing a drug such as G418 sulfate (hereinafter referred to as G418) (Japan).
  • G418 sulfate hereinafter referred to as G418, (Japan).
  • Examples of the medium for animal cell culture include RPMI1640 medium (manufactured by Invitrogen), GIT medium (manufactured by Nippon Pharmaceutical), EX-CELL301 medium (manufactured by JRH), IMDM medium (manufactured by Invitrogen), Hybridoma-SFM medium ( Invitrogen) or a medium obtained by adding various additives such as FBS to these mediums.
  • the obtained transformant is cultured in a medium to express and accumulate the recombinant antibody in the culture supernatant.
  • the expression level and antigen binding activity of the recombinant antibody in the culture supernatant can be measured by ELISA method or the like.
  • the transformed strain can increase the expression level of the recombinant antibody using a DHFR amplification system (Japanese Patent Laid-Open No. 2-257891) or the like.
  • the recombinant antibody is purified from the culture supernatant of the transformed strain using a protein A-column [Monoclonal Antibodies-Principles and Practice, Third edition, Academic Press (1996), Antibodies-A LaboratoryLaboratoryLaboratoryLaboratoryLaboratory. (1988)].
  • the molecular weight of the purified recombinant antibody H chain, L chain, or whole antibody molecule is determined by polyacrylamide gel electrophoresis [Nature, 227, 680 (1970)] and Western blotting [Monoclonal Antibodies-Principles and Principals, Third edition]. , Academic Press (1996), Antibodies-A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)].
  • Method for controlling effector activity of antibody As a method for controlling the effector activity of the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention, reduction of the N-linked complex sugar chain that binds to the 297th asparagine (Asn) of the Fc region of the antibody
  • Methods for controlling the amount of fucose (also referred to as core fucose) that binds ⁇ -1,6 to N-acetylglucosamine (GlcNAc) present at the terminal International Publication No. 2005/035586, International Publication No. 2002/31140, International Publication) No. 00/61739
  • methods for controlling by modifying amino acid residues in the Fc region of antibodies, and changing antibody subclasses are known.
  • the effector activity can be controlled using any method for the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention.
  • Effector activity refers to antibody-dependent activity caused through the Fc region of an antibody.
  • Antibody-dependent cytotoxic activity ADCC activity
  • complement-dependent cytotoxic activity CDC activity
  • macrophages macrophages
  • dendritic cells Antibody-dependent phagocytosis (antibody-dependent phagocytosis, ADP activity) such as phagocytic cells is known.
  • the effector activity of the antibody can be increased or decreased.
  • a method for reducing the content of fucose bound to the N-linked complex type sugar chain bound to the Fc of the antibody expressing the antibody using CHO cells deficient in the ⁇ 1,6-fucose transferase gene, A method for obtaining an antibody to which fucose is not bound can be used.
  • Antibodies without fucose binding have high ADCC activity.
  • the antibody is expressed using a host cell into which an ⁇ 1,6-fucose transferase gene has been introduced.
  • a method for obtaining an antibody to which fucose is bound can be used.
  • An antibody to which fucose is bound has a lower ADCC activity than an antibody to which fucose is not bound.
  • ADCC activity and CDC activity can be increased or decreased by modifying amino acid residues in the Fc region of the antibody.
  • the CDC activity of an antibody can be increased by using the amino acid sequence of the Fc region described in US Patent Application Publication No. 2007/0148165.
  • ADCC activity or CDC activity is obtained. It can be increased or decreased.
  • IgG2 and IgG4 subclasses are known to have lower effector activity than IgG1 and IgG3 subclasses, and the effector activity is reduced by recombination with the Fc region of the antibody subclass with lower effector activity.
  • Antibodies can be produced.
  • IgG2 antibodies and IgG4 that are stable and have controlled effector activity by using the methods described in International Publication Nos. 2006/0775668 and 2006/035586, etc. Antibodies can be made.
  • an antibody with controlled effector activity of an antibody can be obtained by using the above method in combination with one antibody.
  • the treatment does not necessarily have a complete therapeutic effect or a preventive effect on an organ or tissue exhibiting a symptom due to a disease or illness, and may include a partial effect.
  • the treatment of Alzheimer's disease in the present invention is to improve at least one symptom that may be caused by Alzheimer's disease, such as improvement and suppression of cognitive dysfunction, improvement and suppression of senile plaque formation, improvement of synaptic dysfunction and Examples thereof include suppression and reduction and suppression of A ⁇ accumulation in brain tissue and blood.
  • the cognitive dysfunction includes, for example, long-term / short-term memory impairment, object recognition memory impairment, spatial memory impairment, and associative emotional memory impairment, which are regarded as memory impairment.
  • the therapeutic method using the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody of the present invention includes a method for suppressing cognitive dysfunction, a method for suppressing Alzheimer's disease, a method for suppressing the progression of Alzheimer's disease, and a method for suppressing senile plaque formation. And a method of suppressing A ⁇ accumulation, a method of neutralizing (suppressing) neurotoxic activity, a method of inhibiting A ⁇ amyloid fibril formation, and a method of neutralizing (suppressing) synaptic toxic activity.
  • a method for at least one of prevention and treatment of cognitive dysfunction and a method for at least one of prevention and treatment of Alzheimer's disease can also be mentioned.
  • the therapeutic agent containing the antibody of the present invention or the antibody fragment or derivative thereof may contain only the antibody or the antibody fragment or derivative thereof as an active ingredient. It is provided as a pharmaceutical preparation prepared by a method known in the technical field of pharmaceutics, mixed with one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • administration route examples include oral administration and parenteral administration such as intraoral, intratracheal, rectal, subcutaneous, intramuscular and intravenous.
  • administration forms include sprays, capsules, tablets, powders, granules, syrups, emulsions, suppositories, injections, ointments, and tapes.
  • Preparations suitable for oral administration include emulsions, syrups, capsules, tablets, powders and granules.
  • Liquid preparations such as emulsions or syrups include sugars such as water, sucrose, sorbitol and fructose, glycols such as polyethylene glycol and propylene glycol, oils such as sesame oil, olive oil and soybean oil, p-hydroxybenzoic acid It is manufactured using preservatives such as esters, and flavors such as strawberry flavor and peppermint as additives.
  • Capsules, tablets, powders and granules, etc. include excipients such as lactose, glucose, sucrose and mannitol, disintegrants such as starch and sodium alginate, lubricants such as magnesium stearate and talc, polyvinyl alcohol, hydroxy A binder such as propylcellulose and gelatin, a surfactant such as fatty acid ester, and a plasticizer such as glycerin are used as additives.
  • preparations suitable for parenteral administration include injections, suppositories, and sprays.
  • the injection is produced using, for example, a carrier made of a salt solution, a glucose solution, or a mixture thereof.
  • the suppository is produced using a carrier such as cacao butter, hydrogenated fat and carboxylic acid, for example.
  • the propellant is manufactured using a carrier that does not irritate the recipient's oral cavity and airway mucosa, disperses the monoclonal antibody of the present invention or an antibody fragment thereof as fine particles, and facilitates absorption.
  • the carrier examples include lactose and glycerin. It can also be produced as an aerosol or dry powder.
  • VH amino acid sequence of the VH anti-A ⁇ oligomer 6E4 humanized antibody was designed as follows.
  • the amino acid sequence of VH of human antibody VH for grafting the amino acid sequence of CDR1 to 3 of 6E4VH was selected.
  • the 6E4VH CDR amino acid sequence (SEQ ID NOs: 1 to 3) was transplanted to an appropriate position in the FR amino acid sequence of the common sequence of VH subgroup I of human antibodies.
  • the amino acid sequence 6E4HV0 of VH of the anti-A ⁇ oligomer 6E4 humanized antibody represented by SEQ ID NO: 12 was designed.
  • sequences of CDRs 1 to 3 of the amino acid sequence of VL are determined as SEQ ID NOs: 4 to 6, and the amino acid sequence of VL of the anti-A ⁇ oligomer 6E4 humanized antibody is Designed.
  • the amino acid sequence of FR of human antibody VL for grafting the amino acid sequence of CDRs 1 to 3 of 6E4VL was selected.
  • the 6E4VL CDR amino acid sequence (SEQ ID NOs: 4 to 6) was transplanted to the appropriate position of the FR amino acid sequence of the consensus sequence of subgroup II of the human antibody VL.
  • the 110th Leu in the amino acid sequence of 6E4VL (SEQ ID NO: 10) is not the most frequently used amino acid residue in the corresponding site of the amino acid sequence of human antibody FR mentioned by Kabat et al. It is an amino acid residue frequently used.
  • amino acid sequence 6E4LV0 SEQ ID NO: 14
  • VH amino acid sequence 6E4HV0 and VL amino acid sequence 6E4LV0 of the anti-A ⁇ oligomer 6E4 humanized antibody designed above are only the amino acid sequence of the CDR of 6E4, which is an anti-A ⁇ oligomeric mouse monoclonal antibody, in the FR amino acid sequence of the selected human antibody. This is a transplanted sequence.
  • the binding activity is often lowered only by transplanting the amino acid sequence of the CDR of the mouse antibody to the FR of the human antibody.
  • amino acid residues of FR that are thought to affect the binding activity were identified as follows.
  • HV0LV0 the three-dimensional structure of the antibody V region consisting of the VH amino acid sequence 6E4HV0 and the VL amino acid sequence 6E4LV0 of the anti-A ⁇ oligomer 6E4 humanized antibody designed above is constructed using a computer modeling technique. did.
  • Discovery Studio manufactured by Accelrys
  • a computer model of the three-dimensional structure of the V region of the anti-A ⁇ oligomeric mouse monoclonal antibody 6E4 was also constructed in the same manner.
  • amino acid sequences of VH of HV0LV0 and FR of VL an amino acid residue different from 6E4 is selected, an amino acid sequence modified to 6E4 amino acid residue is prepared, and a three-dimensional structural model is constructed in the same manner. did.
  • At least one amino acid sequence is modified to an amino acid residue existing at the same site of 6E4, and VH and VL of a humanized antibody including amino acid sequences having various modifications are designed. did.
  • the 12th Lys of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 is Val
  • the 20th Val is Leu
  • the 38th Arg is Lys
  • the 39th Gln is Leu
  • 45th Leu to Phe 48th Met to Ile
  • 67th Arg to Lys 68th Val to Ala
  • 70th Ile to Leu 72nd Ala to Val
  • 74th At least one amino acid modification was introduced that replaced Thr in Lys and 97th Ala with Thr.
  • the amino acid sequences of the heavy chain variable regions HV2, HV3, HV4, HV5, HV7a, HV7b, HV9, HV12 and the light chain variable regions LV2a, LV2b, LV2c, LV2d, LV3, and LV4 are shown in FIGS. 1 and 2, respectively.
  • the DNA encoding the amino acid sequence of the variable region of the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody is the DNA encoding the amino acid sequence of 6E4VH and 6E4VL (SEQ ID NOs: 7 and 9). In the case where amino acid modification is performed using a codon that is present, it was prepared using a codon frequently used in mammalian cells.
  • DNA sequences encoding the amino acid sequences of 6E4HV0 and 6E4LV0 of anti-A ⁇ oligomer 6E4 humanized antibody are shown in SEQ ID NOs: 11 and 13, respectively.
  • the variable region subjected to amino acid modification was prepared using codons used in DNA encoding 6E4VH and 6E4VL amino acid sequences.
  • a humanized antibody expression vector was constructed and a humanized antibody was expressed.
  • FUT8 knockout CHO cell As an animal cell line to be expressed, a CHO / DG44 cell line (hereinafter referred to as FUT8 knockout CHO cell) in which the ⁇ 1,6-fucosyltransferase (FUT8) gene was double knocked out was used. It is known that fucose is not added to the core part of the N-linked complex sugar chain of the antibody expressed in this host cell line (WO 2002/31140).
  • the culture supernatant was passed through a column and washed with 5.0 mL of PBS buffer (pH 7.4). After washing, 0.1 mol / L citrate buffer (pH 5.0), 0.1 mol / L citrate buffer (pH 3.5), 0.1 mol / L citrate buffer (pH 3.0)
  • the antibody adsorbed on the carrier was eluted using 2.0 mL of each in the order.
  • Elution was obtained by dividing 500 ⁇ L into 4 fractions. Next, SDS-PAGE analysis was performed on the obtained purified fractions, and the fractions in which elution of the target protein was confirmed were collected and used with 150 mmol / L NaCl, 10 mmol / L Na citrate solution (pH 6.0). Dialysis was performed overnight at 4 ° C.
  • the anti-A ⁇ oligomer humanized antibody solution was collected and sterilized using a 0.22 ⁇ m pore size Millex GV (MILLIPORE), and then the absorbance at 280 nm (OD280 nm) was measured with an absorptiometer (SHIMADZU UV-1700). The concentration of each purified anti-A ⁇ oligomer humanized antibody was calculated.
  • anti-A ⁇ oligomer humanized antibody HV0LV0 consisting of antibody VH 6E4HV0 and VL 6E4LV0, antibody VH 6E4HV0, VL LV2a HV0LV2a, antibody VH 6E4HV0, VL LV4 HV0LV4, and antibody HV0LV4
  • HV12LV4 Four types of HV12LV4, in which VH is HV12 and VL is LV4, were prepared.
  • Preparation of antigen (1) Preparation of A ⁇ oligomer Amyloid ⁇ -Protein, Human 1-42 peptide (manufactured by Peptide Institute, Inc.) was prepared to 1 mmol / L using hexafluoroisopropanol. The prepared solution was sonicated for 10 minutes and then air-dried overnight at room temperature.
  • An A ⁇ oligomer was prepared by adding 200 ⁇ L of an acetic acid solution (pH 4.5) to the prepared solution and storing it at 4 ° C. overnight.
  • Example 2 (1) The following operations were all performed using Biacore T100 (manufactured by GE Healthcare Bioscience).
  • the A ⁇ oligomer obtained in Example 2 (1) was immobilized on a CM5 sensor chip (manufactured by GE Healthcare Bioscience) by the amine coupling method.
  • Measurement samples (HV0LV0, HV0LV2a, HV0LV4, and HV12LV4) prepared at 8 concentrations by stepwise dilution from 30 ⁇ g / mL to a chip immobilized with A ⁇ oligomers from low concentration according to an automatic program of multikinetics Measurements were made with sequential additions.
  • Biacore T100 Evaluation software manufactured by Biacore
  • analysis was performed with the Bivalent Analyte model, and the binding rate constant ka and the dissociation rate constant kd of each antibody with respect to the A ⁇ oligomer were calculated.
  • the binding rate constant ka1, dissociation rate constant kd1 and dissociation constant KD (kd1 / ka1) of each antibody obtained as a result are shown in Table 1.
  • each of the anti-A ⁇ oligomer humanized antibodies has an affinity of 3 ⁇ 10 ⁇ 7 to 4 ⁇ 10 ⁇ 8 mol / L for the A ⁇ oligomer. The binding ability of was shown.
  • the A ⁇ monomer obtained in Example 2 (2) was immobilized on an SA sensor chip (manufactured by GE Healthcare Bioscience) by the biotin capture method.
  • a measurement sample (6E10, HV0LV0, HV0LV2a, HV0LV4, and HV12LV4) prepared in 5 concentrations by stepwise dilution from 30 ⁇ g / mL to 30 ⁇ g / mL on a chip immobilized with A ⁇ monomer was reduced according to an automatic program of multi-kinetics. Measurement was carried out by successively adding from the concentration. The sensorgram is shown in FIG.
  • HV0LV0, HV0LV2a, HV0LV4, and HV12LV4 showed the ability to bind to A ⁇ monomer.
  • the A ⁇ oligomer-binding antibody in the culture supernatant was detected with horseradish peroxidase-labeled goat anti-mouse F (ab ′) 2 (1: 3000; Amersham) and sensitive chemiluminescence (ECL) using LAS3000mini (Fujitsu, Tokyo, Japan). ) Pictured with kit. Thereby, anti-A ⁇ oligomer mouse monoclonal antibody 6E4 was established.

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Abstract

　Ａβモノマーに結合せず、Ａβオリゴマーのみに特異的に結合するヒト化抗体、該抗体を有効成分として含有する、抗認知機能障害剤、アルツハイマー病治療剤、老人斑形成抑制剤またはＡβアミロイド線維形成阻害剤、該抗体を投与する工程を含む、認知機能障害またはアルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法、並びに該抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の進行を抑制する方法。

Description

抗アミロイドβオリゴマーヒト化抗体
　本発明は、アミロイドβ（以下、Ａβとも記す）タンパク質オリゴマーに特異的に結合する抗体およびその用途に関する。
　アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ;ＡＤ、以下ＡＤと記載する）における記憶力低下は、さまざまな証拠により、可溶性アミロイドβタンパク質オリゴマー（以下、アミロイドβタンパク質をＡβ、アミロイドβタンパク質オリゴマーをＡβオリゴマーと記す場合もある）が、シナプス機能不全の結果、引き起こされているものと考えられている（非特許文献１および２）。
　したがって、Ａβオリゴマーが、脳内に過度に蓄積または沈着することが、アルツハイマー病を引き起こす一連の病的カスケードの引き金となっている可能性がある。以上のことは、Ａβオリゴマーを標的とした治療が、ＡＤの発症、病期進行の遅延または予防に有効な可能性を示している。
　しかし、このアミロイドカスケード仮説の中核となる責任分子、特にＡβオリゴマーによって引き起こされる神経変性に関する知見は、主としてインビトロ実験において証明されたものであり（非特許文献３）、インビボでは直接的には証明されていない。
　これまでに報告されたインビボ実験（非特許文献４）では、Ａβオリゴマーの構造特異的な検討がなされていないために、内因性Ａβオリゴマーによるシナプス毒性は明らかにされていない。
　また、種々のアルツハイマー病モデルマウスにおいて検討がなされているものの、未だにアルツハイマー病患者の脳内におけるＡβオリゴマーの神経毒性については明らかにされていない。
　更に、なぜヒト内嗅領皮質において神経原線維変化（Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ　Ｔａｎｇｌｅ；ＮＦＴ、以下ＮＦＴと略記する）形成および神経細胞喪失が、老人斑形成に先行して発症するのか、Ａβオリゴマーが、これらの組織変化および機能不全に、どのように関与するのかは未だに明らかにされていない。
　Ａβオリゴマーに対する抗体としては、抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体　ＮＡＢ６１（非特許文献４）、１Ａ９、２Ｃ３、Ｅ１２、１Ｃ１０、および４Ｄ３（特許文献１）などが知られている。
　一般にヒト以外の動物の抗体、例えばマウス抗体などをヒトに投与すると、異物として認識されることにより、ヒト体内にマウス抗体に対するヒト抗体（Ｈｕｍａｎ　Ａｎｔｉ　Ｍｏｕｓｅ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ：ＨＡＭＡ）が誘導されることが知られている。ＨＡＭＡは投与されたマウス抗体と反応し、副作用を引き起こすこと（非特許文献５～８）、およびマウス抗体の体内からの消失を速め（非特許文献６、９、１０）、マウス抗体の治療効果を減じてしまうことが知られている（非特許文献１１、１２）。
　これらの問題点を解決するため、遺伝子組換え技術を利用してヒト以外の動物の抗体からヒト型キメラ抗体やヒト化抗体などの遺伝子組換え抗体の作製が試みられている。
　ヒト型キメラ抗体やヒト化抗体は、マウス抗体などのヒト以外の動物の抗体と比較してヒトへの臨床応用上、様々な利点を有している。例えば、サルを用いた実験でマウス抗体に比べ免疫原性が低下し、血中半減期が延長したことが報告されている（非特許文献１３）。
　すなわち、ヒト型キメラ抗体やヒト化抗体は、ヒト以外の動物の抗体に比べ、ヒトにおいて副作用が少なく、その治療効果が長期間持続することが期待される。
　また、ヒト型キメラ抗体やヒト化抗体、ヒト抗体などの遺伝子組換え抗体は、遺伝子組換え技術を利用して作製するため、様々な形態の分子として作製することができる。
　例えば、ヒト抗体の重鎖（以下、Ｈ鎖と表記する）定常領域（以下、Ｃ領域と表記する）（Ｈ鎖Ｃ領域を、ＣＨと表記する）としてγ１サブクラスを使用すれば、抗体依存性細胞傷害（以下、ＡＤＣＣと表記する）活性などのエフェクター機能の高い遺伝子組換え抗体を作製することができる。また、γ２やγ４サブクラスを使用すればエフェクター活性を低下させた遺伝子組換え抗体を作製することができ、かつマウス抗体に比べ血中半減期の延長が期待される（非特許文献１４）。
　特に、抗体のＦｃ領域（抗体Ｈ鎖のヒンジ領域以降の領域）を介した補体依存性細胞傷害活性（以下、ＣＤＣ活性と表記する）やＡＤＣＣ活性等の細胞傷害活性の高さがその治療効果に重要であるために、ヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体やヒト抗体はマウス抗体などのヒト以外の動物の抗体と比較して望ましい（非特許文献１５、１６）。
　さらに、遺伝子組換え抗体は、最近の蛋白質工学、遺伝子工学の進歩により、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体（以下、ｓｃＦｖと表記する）（非特許文献１７）、２量体化Ｖ領域断片（以下、Ｄｉａｂｏｄｙと表記する）（非特許文献１８）、ジスルフィド安定化Ｖ領域断片（以下、ｄｓＦｖと表記する）（非特許文献１９）、ＣＤＲを含むペプチド（非特許文献２０）などの、分子量の小さい抗体断片としても作製でき、これらの抗体断片は、完全な抗体分子に比べ、標的組織への移行性に優れている（非特許文献２１）。
　以上の事実は、ヒトへの臨床応用に用いる抗体としては、マウス抗体などのヒト以外の動物の抗体よりもヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体または該抗体断片の方が望ましいことを示している。
国際公開第２００９／０５１２２０号
Ｋｌｅｉｎ　ＷＬ，Ｔｒｅｎｄｓ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　２４：２１９－２２４，２００１． Ｓｅｌｋｏｅ　ＤＪ，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２９８：７８９－７９１，２００２． Ｈａｓｓ　Ｃ　ｅｔ　ａｌ：Ｎａｔｕｒｅ　Ｒｅｖｉｗ　８：１０１－１２，２００７． Ｌｅｅ　ＥＢ，ｅｔ　ａｌ：Ｊ　Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：４２９２－４２９９，２００６． Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２，８８１（１９８４） Ｂｌｏｏｄ，６５，１３４９（１９８５） Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８０，９３２（１９８８） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．,ＵＳＡ，８２，１２４２（１９８５） Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２６，１０１１（１９８５） Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８０，９３７（１９８８） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３５，１５３０（１９８５） Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，４６，６４８９（１９８６） Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，５６，１１１８（１９９６） Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８５，６６８（１９９５） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４，１３８２（１９９０） Ｎａｔｕｒｅ，３２２，３２３（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３（１９８８） Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５，６２９（１９９７） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２，２４９（１９９５） Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，２９６６（１９９６） Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，５２，３４０２（１９９２）
　上記の非特許文献４および特許文献１にはＡβオリゴマーに対する抗体が開示されている。しかしながら、これらの抗体はＡβオリゴマーに結合するだけでなく、Ａβモノマーにも結合する抗体である。そのため、脳内病態を標的としているアルツハイマー病における抗体療法における、抗体の脳内移行性が懸念される。
　したがって、本発明は、Ａβモノマーに結合せず、Ａβオリゴマーのみに特異的に結合するヒト化抗体およびその用途を提供することを課題とする。より詳細には、Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体、該抗体を用いたＡβオリゴマーを測定する方法、該抗体を用いたアルツハイマー病を診断する方法、ならびに該抗体を含む薬剤を提供することを目的とする。
　上記課題を鑑み鋭意検討した結果、本発明者らは、Ａβモノマーに結合せず、Ａβオリゴマーのみに特異的に結合するヒト化抗体を見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は以下である。
１．アミロイドβタンパク質モノマーには結合せず、アミロイドβタンパク質オリゴマーに結合するヒト化抗体であって、以下の（ａ）抗体重鎖可変領域および（ｂ）抗体軽鎖可変領域を含むヒト化抗体。
　　（ａ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列、または配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓにおよび９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域
　　（ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列、または配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓにおよび９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域
２．抗体重鎖可変領域が配列番号１２または１５で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１４、１６または１７で示されるアミノ酸配列を含む、前項１記載のヒト化抗体。
３．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、抗認知機能障害剤。
４．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アルツハイマー病治療剤。
５．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、老人斑形成抑制剤。
６．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβアミロイド線維形成阻害剤。
７．前項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、認知機能障害の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
８．前項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
９．前項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の進行を抑制する方法。
　本発明の抗体によれば、アルツハイマー病の原因分子であるアミロイドβタンパク質を標的とした、アルツハイマー病の予防、治療法確立および早期診断マーカー確立が期待される。
　アルツハイマー病における抗体療法は、脳内病態を標的としており、抗体の脳内移行性が懸念されているが、本発明の抗体は末梢静脈投与により病態の治療を行うことができる可能性があり、アルツハイマー病の抗体医療が一気に加速すると考えられる。
図１はＨ鎖可変領域ＨＶ０のアミノ酸配列、およびＨＶ２、ＨＶ３，ＨＶ４、ＨＶ５、ＨＶ７ａ、ＨＶ７ｂ、ＨＶ９およびＨＶ１２において配列番号１２で示されるアミノ酸配列から改変されたアミノ酸残基を示している。図中第１行および第２行はＨ鎖可変領域のアミノ酸番号を表し、各行におけるアルファベットは改変されたアミノ酸（１文字表記）を表している。 図２はＬ鎖可変領域ＬＶ０のアミノ酸配列、およびＬＶ２ａ、ＬＶ２ｂ、ＬＶ２ｃ、ＬＶ２ｄ、ＬＶ３、ＬＶ４において配列番号１４で示されるアミノ酸配列から改変されたアミノ酸残基を示している。図中第１行および第２行はＬ鎖可変領域のアミノ酸番号を表し、各行におけるアルファベットは改変されたアミノ酸（１文字表記）を表している。 図３はビアコアにより各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＡβモノマーへの結合活性を測定したセンサーグラムを示している。
　本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（以下、本発明の抗体、本発明のヒト化抗体ともいう）は、Ａβオリゴマーに結合し、Ａβモノマーに結合しないことを特徴とするヒト化抗体である。本発明の抗体は、単離された抗体、精製された抗体または抗体組成物であることが好ましい。
　前記単離された抗体、並びに精製された抗体および抗体組成物とは、目的の抗体を実質的に１００％含み、抗体作製における抗体生産細胞、組織、または抗体産生動物由来の共雑タンパク質等の不純物を含まない抗体をいう。
　抗体とは、２本の重鎖（Ｈ鎖）と２本の軽鎖（Ｌ鎖）からなるヘテロ４量体のタンパク質である。抗体には、単一の抗原を認識するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体がある。
　ポリクローナル抗体とは、単一の抗原を認識する抗体の混合物である。ポリクローナル抗体としては、例えば、抗原を免疫した宿主動物の抗血清などが挙げられる。
　モノクローナル抗体とは、単一クローンの抗体産生細胞が分泌する抗体である。モノクローナル抗体は、ただ一つのエピトープ（抗原決定基ともいう）を認識し、構成するアミノ酸配列（１次構造）が均一である。
　本発明の抗体はモノクローナル抗体であることが好ましい。本発明においてモノクローナル抗体としては、抗体重鎖（以下、Ｈ鎖と記す）の相補性決定領域（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ；ＣＤＲ、以下ＣＤＲと記す）１～３が、それぞれ配列番号１～３で示されるアミノ酸配列を含み、かつＬ鎖ＣＤＲ１～３が、それぞれ配列番号４～６で示されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体、抗体のＨ鎖可変領域（以下、ＶＨと記す）が配列番号８で示されるアミノ酸配列を含み、かつＬ鎖可変領域（以下、ＶＬと記す）が配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体、および抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４を挙げることができる。
　エピトープとしては、例えば、モノクローナル抗体が認識して結合する単一のアミノ酸配列、アミノ酸配列からなる立体構造、糖鎖が結合したアミノ酸配列および糖鎖が結合したアミノ酸配列からなる立体構造などが挙げられる。
　本発明の抗体が認識するエピトープとしては、Ａβタンパク質および該タンパク質断片の少なくとも一方を含み、かつ複合体を形成したＡβオリゴマー上に存在するエピトープであればいかなるものもでもよい。
　本発明の抗体が結合するエピトープとしては、例えば、Ａβオリゴマー上に露出しているＡβのアミノ酸の一次配列からなるエピトープ、Ａβオリゴマーの立体構造からなるエピトープなどが挙げられる。
　アミロイドの主要構成成分であるＡβタンパク質とは、４０～４２アミノ酸からなるペプチドで、アミロイド前駆体タンパク質（ａｍｙｌｏｉｄ　ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ；　ＡＰＰ、以下ＡＰＰと記す）という前駆体タンパク質から、プロテアーゼの作用によって産生されることが知られている。
　ＡＰＰから生成されるアミロイド分子には、超遠心沈査画分に回収されるアミロイド線維とは別に、可溶性のモノマーおよび可溶性のオリゴマーの非線維性重合体がある。
　本発明において、Ａβオリゴマーとは、非線維性重合体を指し、Ａβタンパク質または該タンパク質断片の少なくとも一方を含み、かつ複合体を形成したＡβオリゴマーをいう。
　Ａβオリゴマーとして、具体的には、例えば、Ａβ４０（Ａβ１－４０）オリゴマー、Ａβ４２（Ａβ１－４２）オリゴマー、並びにＡβ４０およびＡβ４２の少なくとも一方が含まれるＡβオリゴマーが挙げられる。
　また、本発明において、Ａβオリゴマーとしては、Ａβ４０およびＡβ４２の少なくとも一方に、ＡβのＮ末端が欠損したＡβ断片を含むＡβオリゴマーも挙げられる。
　本発明におけるＡβ４２オリゴマーとは、具体的には、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより測定される分子量が４５～１６０ｋＤａであり、Ｂｌｕｅ　Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥにより測定される分子量が２２．５～１，０３５ｋＤａである分子をいう。
　前記Ａβ４２オリゴマーは、分子篩では、主に、＞１００ｋＤａ保持液に回収される。また、原子間力顕微鏡による観察では、高さ１．５～３．１ｎｍの粒状分子、数珠状分子および輪状分子が混在した形態を呈す。
　また、前記Ａβ４２オリゴマーは、ゲル濾過法では、分子量＞６８０ｋＤａ以上のｖｏｉｄ　ｖｏｌｕｍｅ画分８と分子量１７～４４ｋＤａ境界の画分１５に溶出される。
　本発明の抗体は、Ａβオリゴマーに結合し、Ａβモノマーに結合しないヒト化抗体であればよく、その由来および形状については制限されない。
　本発明の抗体は、生理的分子である可溶性アミロイドβ（Ａβ）モノマーを認識せず、可溶性Ａβオリゴマーのみに反応することが好ましい。
　本発明において、可溶性Ａβモノマーには結合せず、可溶性Ａβオリゴマーのみに結合するとは、限外濾過・分子篩法により判別されるＡβモノマーおよびＡβオリゴマーのうち、モノマー(約４．５ｋＤａ)を認識せず、Ａβダイマー以上の可溶性のＡβオリゴマーを特異的に認識することをいう。従って、本発明の抗体は、Ａβダイマー以上の可溶性Ａβオリゴマーに特異的に結合することがより好ましい。
　本発明の抗体は、以下の（１）～（５）の少なくとも１つの活性を有することが好ましい。
（１）抗神経毒性活性
（２）Ａβアミロイド線維形成抑制活性
（３）Ａβオリゴマーのみを認識する特異性
（４）ＡＤ脳においてＡβオリゴマーを捕捉する能力
（５）ＡＰＰｓｗｅ－トランスジェニックマウス（Ｔｇ２５７６）におけるアルツハイマー病様表現型発症（記憶障害、脳Ａβ蓄積レベル）を予防する能力
　本発明の抗体の前記（１）～（５）に関する活性は、国際公開第２００９／０５１２２０号に記載の方法を用いて、確認することができる。
　本発明の抗体は、遺伝子組換え抗体として作製することもできる。本発明において、遺伝子組換え抗体は、ヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体（または、ヒト型ＣＤＲ移植抗体ともいう）、ヒト抗体および抗体断片など、遺伝子組換えにより製造される抗体を包含する。
　遺伝子組換え抗体において、モノクローナル抗体の特徴を有し、抗原性が低く、血中半減期が延長されたものは、治療薬として好ましい。遺伝子組換え抗体としては、例えば、上記本発明のモノクローナル抗体を遺伝子組換え技術を用いて改変したものが挙げられる。
　前記ヒト型キメラ抗体とは、ヒト以外の動物の抗体の重鎖可変領域（以下、ＶＨと記す）および軽鎖可変領域（以下、ＶＬと記す）とヒト抗体の重鎖定常領域（以下、ＣＨと記す）および軽鎖定常領域（以下、ＣＬと記す）とからなる抗体をいう。
　本発明におけるヒト型キメラ抗体は、Ａβオリゴマーを特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマより、前記ＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、前記ＣＨおよびＣＬをコードする遺伝子を有する動物細胞用発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築し、動物細胞へ導入することにより発現させ、製造することができる。
　前記ＣＨとしては、ヒトイムノグロブリン（以下、ｈＩｇと表記する）に属するＣＨであればいかなるものでもよいが、ｈＩｇＧクラスに属するＣＨが好ましく、さらにｈＩｇＧクラスのサブクラスであるｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｈＩｇＧ３、ｈＩｇＧ４に属するＣＨを用いることもできる。
　また、前記ＣＬとしては、ｈＩｇに属するＣＬであればいずれのものでもよく、κクラスあるいはλクラスに属するＣＬを用いることができる。
　本発明におけるヒト化抗体とは、ヒト以外の動物の抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列をヒト抗体のＶＨおよびＶＬの適切な位置に移植した抗体をいう。
　ヒト化抗体は、ヒト以外の動物由来のハイブリドーマから生産されるＡβオリゴマーに特異的に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列を、任意のヒト抗体のＶＨおよびＶＬのフレームワーク領域（Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　Ｒｅｇｉｏｎ；以下ＦＲと表記する）に移植したＶ領域のアミノ酸配列を作製し、Ｖ領域のアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡを構築し、ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードする遺伝子を有する動物細胞用発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト化抗体発現ベクターを構築し、動物細胞へ導入することにより発現させ、製造することができる。
　ヒト化抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列としては、ヒト抗体由来のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列であれば、いかなるものでも用いることができる。
　例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄａｔａ　Ｂａｎｋなどのデータベースに登録されているヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列、並びにＳｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）などに記載の、ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲの各サブグループの共通アミノ酸配列などを用いることができる。
　本発明のヒト化抗体としては、例えば、抗体のＶＨのＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１～３で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体のＶＬのＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４～６で示されるアミノ酸配列を含むヒト化抗体が挙げられる。
　本発明のヒト化抗体としては、以下の（ａ）ＶＨおよび（ｂ）ＶＬの少なくとも一方を含むヒト化抗体が好ましい。なお、以下の（ａ）および（ｂ）において、導入される改変の数に制限はない。 
（ａ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列、または配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７０番目のＩｌｅ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒおよび９７番目のＡｌａから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列、または配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ 
　本発明のヒト化抗体に含まれるＶＨとしては、例えば、配列番号１２で示されるアミノ酸配列中の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７０番目のＩｌｅ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨが好適に挙げられる。 
　また、本発明のヒト化抗体に含まれるＶＨとしては、以下の（１）～（９）から選ばれる１のＶＨもまた好ましい。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ 
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ 
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（９）配列番号１２のアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
　前記ＶＨのアミノ酸配列としては、例えば、配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換する改変から選ばれる少なくとも１つの改変が導入されたアミノ酸配列が挙げられる。
　前記ＶＨのアミノ酸配列としては、さらに具体的には、例えば、以下の１２個～１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列が挙げられる。
　１２個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓにおよび９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列が挙げられる。
　１１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（１２）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
　１０個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（６６）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
　９個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（１０）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
　８個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（４７）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
　７個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（２２）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｓｙに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
　６個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（７）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
　５個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（８）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
　４個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（９）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
　３個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（１９）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
　２個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（６６）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および２０番目のＶａｌをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および３８番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および３８番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（２４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（２５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（２７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（３２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（３３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（３５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（３６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（３７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（４０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（４２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（４３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（４４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（４８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（４９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（５０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（５３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（５４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（５５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（５８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（５９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（６２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
　１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（１２）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
　上記のＶＨのアミノ酸配列の中でも、配列番号１２で示されるアミノ酸配列、並びに配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列が好ましい。
　本発明のヒト化抗体としては、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬを含むヒト化抗体が好ましく、配列番号１４で示されるアミノ酸配列中の１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬが好適に挙げられる。
　また、本発明のヒト化抗体として、以下の（１）～（４）から選ばれる１のＶＬを含むヒト化抗体もまた好ましい。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、および５０番目のＧｌｎが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
　前記ＶＬのアミノ酸配列としては、例えば、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換する改変から選ばれる少なくとも１つの改変が導入されたアミノ酸配列が挙げられる。
　上記の改変が導入された本発明の抗体のＶＬのアミノ酸配列としては、さらに具体的には、例えば、以下の４個～１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列が挙げられる。
　４個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列が挙げられる。
　３個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（４）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
　２個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（６）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、および１５番目のＰｒｏをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、および５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
　１個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）～（４）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
　上記のＶＬのアミノ酸配列の中でも、配列番号１４で示されるアミノ酸配列、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列、並びに配列番号１４で示されるアミノ酸配列中の５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列が好ましい。
　本発明の抗体の具体例としては、上記のＶＨとＶＬをそれぞれ組み合わせたいずれか１の抗体を挙げることができる。
　本発明の抗体としては、例えば、以下の（１）～（４）の抗体が好適に挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬの少なくとも一方を含むヒト化抗体
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび図２で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＬの少なくとも一方を含むヒト化抗体
（３）図１で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＨおよび配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬの少なくとも一方ヒト化抗体
（４）図１で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＨおよび図２で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＬを含むヒト化抗体
　図１で示されるＶＨのアミノ酸配列のうち、６Ｅ４ＨＶ０またはＨＶ１２が好ましい。また、図２で示されるＶＬのアミノ酸配列の６Ｅ４ＬＶ０、ＬＶ２ａおよびＬＶ４が好ましい。
　したがって、図１で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＨおよび図２で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＬを含むヒト化抗体としては、図１で示される６Ｅ４ＨＶ０またはＨＶ１２のアミノ酸配列を含むＶＨと、図２で示される６Ｅ４ＬＶ０、ＬＶ２ａおよびＬＶ４のいずれか１のアミノ酸配列を含むＶＬとを含むヒト化抗体がより好ましい。
　具体的には、例えば、配列番号１２または１５で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１４、１６または１７で示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含むヒト化抗体を挙げることができる。
　図１で示されるＶＨのアミノ酸配列と図２で示されるＶＬのアミノ酸配列の組み合わせとしては、ＨＶ０とＬＶ０、ＨＶ０とＬＶ２ａ、ＨＶ０とＬＶ４およびＨＶ１２とＬＶ４の組み合わせが好ましい。
　したがって、本発明の抗体としては、以下の（１）～（４）のヒト化抗体がさらに好ましい。
（１）図１のＨＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含むヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０）
（２）図１のＨＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ２ａで示されるアミノ酸配列を含むＶＬ（ＨＶ０ＬＶ２ａ）
（３）図１のＨＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬ（ＨＶ０ＬＶ４）
（４）図１のＨＶ１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬ（ＨＶ１２ＬＶ４）
　前記抗体としては、具体的には、例えば、ＶＨおよびＶＬが含むアミノ酸配列の組み合わせが、配列番号１２および１４、配列番号１２および１６、配列番号１２および１７並びに配列番号１５および１７の組み合わせであるヒト化抗体を挙げることができる。
　更に、本発明のヒト化抗体には、上記のヒト化抗体と競合してＡβオリゴマーに反応するヒト化抗体、および上記のヒト化抗体が反応するエピトープと同じエピトープに結合するヒト化抗体も包含される。
　本発明において、ヒト抗体とは、元来ヒト体内に天然に存在する抗体をいうが、最近の遺伝子工学的、細胞工学的、発生工学的な技術の進歩により作製されたヒト抗体ファージライブラリーおよびヒト抗体産生トランスジェニック動物から得られる抗体なども含まれる。
　ヒト体内に天然に存在する抗体は、例えば、ヒト末梢血リンパ球を単離し、ＥＢウイルスなどを感染させ不死化し、クローニングすることにより、該抗体を産生するリンパ球を培養でき、培養上清中より該抗体を精製することができる。
　ヒト抗体ファージライブラリーは、ヒトＢ細胞から調製した抗体遺伝子をファージ遺伝子に挿入することによりＦａｂ、ｓｃＦｖなどの抗体断片をファージ表面に発現させたライブラリーである。
　ヒト抗体ファージライブラリーより、抗原を固定化した基質に対する結合活性を指標として所望の抗原結合活性を有する抗体断片を表面に発現しているファージを回収することができる。該抗体断片は、さらに、遺伝子工学的手法により２本の完全なＨ鎖および２本の完全なＬ鎖からなるヒト抗体分子へも変換することができる。
　ヒト抗体産生トランスジェニック動物は、ヒト抗体遺伝子が細胞内に組込まれた動物を意味する。具体的には、例えば、マウスＥＳ細胞へヒト抗体遺伝子を導入し、該ＥＳ細胞をマウスの初期胚へ移植後、発生させることによりヒト抗体産生トランスジェニックマウスを作製することができる。
　ヒト抗体産生トランスジェニック動物からのヒト抗体は、通常のヒト以外の動物で行われているハイブリドーマ作製方法を用い、ヒト抗体産生ハイブリドーマを取得し、培養することで培養上清中にヒト抗体を産生蓄積させることにより作製することができる。
　上記抗体または抗体断片を構成するアミノ酸配列において、１つ以上のアミノ酸が欠失、付加、置換または挿入され、かつ上述の抗体またはその抗体断片と同様な活性を有するモノクローナル抗体またはその抗体断片も、本発明のモノクローナル抗体またはその抗体断片に包含される。
　欠失、置換、挿入および／または付加されるアミノ酸の数は１個以上でありその数は特に限定されないが、部位特異的変異導入法［Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　２ｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７－１９９７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０，６４８７（１９８２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，７９，６４０９（１９８２）、Ｇｅｎｅ，３４，３１５（１９８５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１３，４４３１（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ.,ＵＳＡ，８２，４８８（１９８５）］などの周知の技術により、欠失、置換もしくは付加できる程度の数である。例えば、１～数十個、１～２０個が好ましく、１～１０個がより好ましく、１～５個がさらに好ましい。
　上記の抗体のアミノ酸配列において１つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入または付加されたとは、次のことを示す。即ち、同一配列中の任意、かつ１もしくは複数のアミノ酸配列中において、１または複数のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入または付加があることを意味する。また、欠失、置換、挿入または付加が同時に生じる場合もあり、置換、挿入または付加されるアミノ酸残基は天然型と非天然型いずれの場合もある。
　天然型アミノ酸残基としては、例えば、Ｌ－アラニン、Ｌ－アスパラギン、Ｌ－アスパラギン酸、Ｌ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、グリシン、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－ロイシン、Ｌ－リジン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－プロリン、Ｌ－セリン、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリンおよびＬ－システインなどが挙げられる。
　以下に、相互に置換可能なアミノ酸残基の好ましい例を示す。同一群に含まれるアミノ酸残基は相互に置換可能である。
　Ａ群：ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、ノルバリン、アラニン、２－アミノブタン酸、メチオニン、Ｏ－メチルセリン、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニンおよびシクロヘキシルアラニン
　Ｂ群：アスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、２－アミノアジピン酸および２－アミノスベリン酸
　Ｃ群：アスパラギンおよびグルタミン
　Ｄ群：リジン、アルギニン、オルニチン、２，４－ジアミノブタン酸および２，３－ジアミノプロピオン酸
　Ｅ群：プロリン、３－ヒドロキシプロリンおよび４－ヒドロキシプロリン
　Ｆ群：セリン、スレオニンおよびホモセリン
　Ｇ群：フェニルアラニンおよびチロシン
　本発明において、抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｄｉａｂｏｄｙ、ｄｓＦｖおよびＣＤＲを含むペプチドなどが挙げられる。
　Ｆａｂは、ＩｇＧを蛋白質分解酵素であるパパインで処理して得られる断片のうち（Ｈ鎖の２２４番目のアミノ酸残基で切断される）、Ｈ鎖のＮ末端側約半分とＬ鎖全体がジスルフィド結合で結合した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。
　本発明のＦａｂは、Ａβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体をパパインで処理して得ることができる。また、該抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、Ｆａｂを製造することもできる。
　Ｆ（ａｂ’）２は、ＩｇＧのヒンジ領域の２個のジスルフィド結合の下部を蛋白質分解酵素であるペプシンで分解して得られた、２つのＦａｂ領域がヒンジ部分で結合して構成された、分子量約１０万の抗原結合活性を有する断片である。
　本発明のＦ（ａｂ’）２は、Ａβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体をペプシンで処理して得ることができる。また、下記のＦａｂ’をチオエーテル結合またはジスルフィド結合させ、作製することもできる。
　Ｆａｂ’は、上記Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。
　本発明のＦａｂ’は、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するＦ（ａｂ’）２をジチオスレイトールなどの還元剤で処理して得ることができる。
　また、該抗体のＦａｂ’断片をコードするＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、Ｆａｂ’を製造することもできる。
　ｓｃＦｖは、１本のＶＨと１本のＶＬとを適当なペプチドリンカー（以下、Ｐと表記する）を用いて連結した、ＶＨ－Ｐ－ＶＬまたはＶＬ－Ｐ－ＶＨポリペプチドで、抗原結合活性を有する抗体断片である。
　本発明のｓｃＦｖは、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターあるいは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物あるいは真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。
　ｄｉａｂｏｄｙは、ｓｃＦｖが二量体化した抗体断片で、二価の抗原結合活性を有する抗体断片である。二価の抗原結合活性は、同一であることもできるし、一方を異なる抗原結合活性とすることもできる。
　本発明のｄｉａｂｏｄｙは、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡをペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが８残基以下となるように構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。
　ｄｓＦｖとは、ＶＨおよびＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドを該システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させたものをいう。システイン残基に置換するアミノ酸残基は既知の方法［Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７，６９７（１９９４）］に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。
　本発明のｄｓＦｖは、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｄｓＦｖをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターあるいは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。
　ＣＤＲを含むペプチドは、ＶＨまたはＶＬのＣＤＲの少なくとも１領域以上を含んで構成される。複数のＣＤＲを含むペプチドは、直接または適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。
　本発明のＣＤＲを含むペプチドは、本発明のＡβオリゴマーに特異的に結合するヒト化抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物あるいは真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。また、ＣＤＲを含むペプチドは、Ｆｍｏｃ法およびｔＢｏｃ法などの化学合成法によって製造することもできる。
　本発明のモノクローナル抗体には、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片に放射性同位元素、低分子の薬剤、高分子の薬剤、蛋白質または抗体医薬などを化学的若しくは遺伝子工学的に結合させた抗体の誘導体も含まれる。
　本発明の抗体の誘導体は、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片のＨ鎖またはＬ鎖のＮ末端側またはＣ末端側、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片中の適当な置換基または側鎖および糖鎖などに、放射性同位元素、低分子の薬剤、高分子の薬剤、免疫賦活剤、蛋白質および抗体医薬などを化学的手法［抗体工学入門，　地人書館　（１９９４）］により結合させることにより製造することができる。
　また、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片をコードするＤＮＡと、結合させたい蛋白質または抗体医薬をコードするＤＮＡを連結させて発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを適当な宿主細胞へ導入し、発現させる遺伝子工学的手法により、本発明の抗体の誘導体を製造することができる。
　上記抗体の誘導体を検出方法、定量方法または診断方法において、検出用試薬、定量用試薬または診断薬として使用する場合に、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体またはその抗体断片に結合する薬剤としては、通常の免疫学的検出または測定法で用いられる標識体が挙げられる。
　標識体としては、例えば、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼおよびルシフェラーゼなどの酵素、アクリジニウムエステルおよびロフィンなどの発光物質、またはフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）およびテトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＲＩＴＣ）などの蛍光物質などが挙げられる。
　以下に、具体的な抗体作製方法について記載する。
１．抗Ａβオリゴマーモノクローナル抗体の作製
　本発明において、抗Ａβオリゴマーモノクローナル抗体は、以下のようにして作製することができる。
（１）抗原の調製
　抗原とするＡβオリゴマーを作製する方法としては、合成Ａβ１－４２（ペプチド研、大阪）を蒸留脱イオン水または１０ｍｍｏｌ／Ｌ　リン酸緩衝液中に溶解させ、それを３７℃で１８時間インキュベート後、４－１２％　ＳＤＳ－ＰＡＧＥにてペプチドを分離し、ＣＢＢ染色にて可視化後、Ａβ１－４２モノマーの混入のないＡβ１－４２テトラマーのみを切り出すことにより、Ａβ１－４２オリゴマーを作製することができる。
　また、合成したＡβ１－４０ペプチドのＮ末端に６－Ｃａｒｂｏｘｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ（６－ＴＡＭＲＡ）（ＳＩＧＭＡ）を従来の方法を用いて化学結合させた修飾Ａβ１－４０を、合成Ａβ１－４０（ペプチド研、大阪）とともに重合反応させることにより、オリゴマーを多く含むＡβ１－４０オリゴマーを調製することもできる。
（２）動物の免疫
　抗原をＢａｌｂ－ｃマウスの肉趾に対して、完全フロイントアジュバントにより乳化させた２．５μｇのＡβ１－４２テトラマーまたはＡβ１－４０オリゴマーによる免疫処置を行い、続いてさらに６回の追加免疫を行う。抗体産生細胞とミエローマ細胞との融合は、公知の方法、例えば、ケーラーとミルステインらの方法（Ｋｏｈｌｅｒ．Ｇ．ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．（１９８１）７３，３－４６）等により行うことができる。具体的には、抗原を免疫したマウスの鼠径リンパ節から抗体を産生する免疫細胞を取得する。
　免疫は、動物の皮下あるいは静脈内または腹腔内に、例えば、フロインドの完全アジュバント、または水酸化アルミニウムゲルと百日咳菌ワクチンなどの適当なアジュバントとともに抗原を投与することにより行う。
　抗原が部分ペプチドである場合には、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）およびＫＬＨ（Ｋｅｙｈｏｌｅ　Ｌｉｍｐｅｔ　ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）などのキャリア蛋白質とコンジュゲートを作製し、これを免疫原として用いる。
　抗原を免疫する動物としてはハイブリドーマを作製することが可能であれば、いかなるものも用いることができるが、好ましくはマウス、ラット、ハムスター、ニワトリまたはラビットなどが用いられる。また、このような動物から抗体産生能を有する細胞を取得し、該細胞にｉｎ　ｖｉｔｒｏで免疫を施した後に、骨髄腫細胞と融合して作製したハイブリドーマが生産する抗体なども包含される。
（３）骨髄腫細胞の調製
　骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化細胞を用い、例えば、８－アザグアニン耐性マウス（ＢＡＬＢ／ｃ由来）骨髄腫細胞株Ｐ３－Ｘ６３Ａｇ８－Ｕ１（Ｐ３－Ｕ１）［Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｏｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８，１（１９７８）］、Ｐ３－ＮＳ１／１－Ａｇ４１（ＮＳ－１）［Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６，５１１（１９７６）］、ＳＰ２／０－Ａｇ１４（ＳＰ－２）［Ｎａｔｕｒｅ，２７６，２６９（１９７８）］、Ｐ３－Ｘ６３－Ａｇ８６５３（６５３）［Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２３，１５４８（１９７９）］およびＰ３－Ｘ６３－Ａｇ８（Ｘ６３）［Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５（１９７５）］などを用いる。
　前記骨髄腫細胞は、正常培地［グルタミン、２－メルカプトエタノール、ジェンタマイシン、ＦＢＳ、および８－アザグアニンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地］で継代し、細胞融合の３～４日前に正常培地に継代し、融合当日２×１０７個以上の細胞数を確保する。
（４）細胞融合とモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの調製
　（２）で得られる融合用抗体産生細胞と（３）で得られる骨髄腫細胞を、ポリエチレングリコール１５００を用いて融合することで、ハイブリドーマを作製することができる。
　培養後、培養上清の一部を抜き取り、後述のドットブロット法、バインディングアッセイなどのハイブリドーマの選択方法により、Ａβオリゴマーに反応し、Ａβモノマーに反応しない細胞群を選択する。次に、限界希釈法によりクローニングを２回繰り返し［１回目はＨＴ培地（ＨＡＴ培地からアミノプテリンを除いた培地）、２回目は正常培地を使用する］、安定して強い抗体価の認められたものをモノクローナル抗体産生ハイブリドーマとして選択する。
（５）精製モノクローナル抗体の調製
　プリスタン処理［２，６，１０，１４－テトラメチルペンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ）０．５ｍｌを腹腔内投与し、２週間飼育する］した８～１０週令のマウスまたはヌードマウスに、（４）で得られるモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを腹腔内に注射する。
　１０～２１日でハイブリドーマは腹水癌化する。このマウスから腹水を採取し、遠心分離して固形分を除去後、４０～５０％硫酸アンモニウムで塩析し、カプリル酸沈殿法、ＤＥＡＥ－セファロースカラム、プロテインＡ－カラムあるいはゲル濾過カラムによる精製を行ない、ＩｇＧあるいはＩｇＭ画分を集め、精製モノクローナル抗体とする。
（６）モノクローナル抗体の選択
　抗体をスクリーニングする方法としては、抗体とＡβオリゴマーの結合活性を指標に抗体を選択する方法が挙げられる。
　本発明の抗体の抗原（Ａβオリゴマー）への結合活性は、例えば、吸光度測定法、酵素結合免疫吸着アッセイ法（ドットブロット法、ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫アッセイ法（ＥＩＡ）、放射免疫アッセイ法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法等および表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）を利用したＢｉａｃｏｒｅ（ビアコア社製）の少なくとも１を用いて解析することができる。
　具体的には、例えば、抗Ａβオリゴマーモノクローナル抗体のＡβオリゴマーに対する結合は、１８時間プレインキュベートした２．５μｌのＡβ１－４２（２．５μｇ／ドット）をニトロセルロース膜上に固相化するドットブロット法で確認することができる。膜上の非特異結合部位を５％低脂肪乳、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するリン酸緩衝液でブロッキング後、培養液上清とともにインキュベートし、培養上清中のＡβオリゴマー結合抗体は西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＦ（ａｂ’)２（１：３０００；Ａｍｅｒｓｈａｍ）で検出し、ＬＡＳ３０００　ｍｉｎｉ（Ｆｕｊｉｔｓｕ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いる高感度化学発光（ＥＣＬ）キットを用いて検出できる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
　ＥＬＩＳＡでは、抗体をプレート上に固定し、それに対する抗原をプレートに添加し、次いで、抗体を産生する細胞の培養上清または精製抗体などの所望の抗体を含む試料を添加する。次に、一次抗体を認識しかつアルカリホスファターゼなどの酵素でタグ付加された二次抗体を添加し、プレートをインキュベーションする。洗浄後に、ｐ－ニトロフェニルリン酸などの酵素基質をプレートに添加し、吸光度を測定して、目的試料の抗原結合能力を評価することができる。
　また、本発明において、ＡβモノマーではなくＡβオリゴマーを特異的に検出するために、化学発光を利用するサンドイッチ固相酵素免疫アッセイ（化学発光－ＥＬＩＳＡ）を用いて、抗体の反応性を確認することもできる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
　また、本発明において、マウスｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、末梢から投与されたモノクローナル抗体の有効性を評価するためには、投与マウスから入手した血漿および臓器におけるＡβオリゴマー分析を、６Ｅ１０－ＨＲＰ標識６Ｅ１０（Ｓｅｎｅｔｅｋ　ＰＬＣ，Ｎａｐａ，ＣＡ，ＵＳＡ）ヒト特異的オリゴマーＥＬＩＳＡを行うことも可能である（国際公開第２００９／０５１２２０号）
　更に、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体が、ＡＤ脳内のＡβオリゴマーに結合しうるか否かは、Ａβオリゴマーを大量に含有するアミロイド分画（Ｍａｔｓｕｂａｒａ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ；Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ　Ａｇｉｎｇ，２００４）にて免疫沈降実験（Ｇｈｉｓｏ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ，１９９３）を行うことで、確認することができる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
（７）抗Ａβオリゴマー抗体の活性評価
　本発明において、抗Ａβオリゴマー抗体がＡβオリゴマー特異的に結合し、細胞保護活性を有することは、Ｙａｍａｍｏｔｏ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８２：２６４６－２６５５，２００７、または国際公開第２００９／０５１２２０号に記載の、ＡβインキュベーションおよびＴｈＴアッセイ法、Ａβ誘発性神経毒性アッセイ法や、限外濾過およびゲルろ過を用いて分離された各分子サイズのＡβオリゴマーに対する反応性により確認することができる。
　更に、Ａβアミロイド線維形成抑制活性は、チオフラビンＴアッセイおよび電子顕微鏡検査を用いて確認することができる。
　本発明において、ＡＤ脳における両抗体のＡβオリゴマー捕捉能は、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体を用いた免疫沈降を行う際に、ＳＤＳ安定性４－、５－、８－、１２－ｍｅrの存在を確認することで測定することができる。
　また、本発明において、ＡＰＰｓｗｅ－トランスジェニックマウス（Ｔｇ２５７６）におけるアルツハイマー病様表現型発症を予防する能力を確認する方法としては、本発明のヒト化抗体を該マウスに投与し、記憶障害、老人斑病変、シナプス機能不全およびＡβ蓄積等のアルツハイマー様表現型を予防できるか否かを検証することが挙げられる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
２．遺伝子組換え抗体の作製
　遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株の取得と遺伝子組換え抗体の調製は以下のようにして行うことができる。
（１）遺伝子組換え抗体発現用ベクターの構築
　遺伝子組換え抗体発現用ベクターは、ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードするＤＮＡが組み込まれた動物細胞用発現ベクターであり、動物細胞用発現ベクターにヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードするＤＮＡをそれぞれクローニングすることにより構築することができる。
　ヒト抗体のＣ領域は任意のヒト抗体のＣＨおよびＣＬを用いることができる。例えば、ヒト抗体のγ１サブクラスのＣＨおよびκクラスのＣＬなどを用いる。ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードするＤＮＡには、ｃＤＮＡを用いるが、エキソンとイントロンからなる染色体ＤＮＡを用いることもできる。
　動物細胞用発現ベクターには、ヒト抗体のＣ領域をコードする遺伝子を組込み発現できるものであればいかなるものでも用いることができる。例えば、ｐＡＧＥ１０７［Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３，１３３（１９９０）］、ｐＡＧＥ１０３［Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１，１３０７（１９８７）〕、ｐＨＳＧ２７４［Ｇｅｎｅ，２７，２２３（１９８４）］、ｐＫＣＲ［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．,ＵＳＡ，７８，１５２７（１９８１）］、ｐＳＧ１ｂｄ２－４［Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌ．，４，１７３（１９９０）］およびｐＳＥ１ＵＫ１Ｓｅｄ１－３［Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１３，７９（１９９３）］などを用いる。
　動物細胞用発現ベクターのうちプロモーターには、例えば、ＳＶ４０の初期プロモーター［Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１，１３０７（１９８７）］、モロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４９，９６０（１９８７）〕および免疫グロブリンＨ鎖のプロモーター［Ｃｅｌｌ，４１，４７９（１９８５）］などを用いる。また、エンハンサーには、例えば、エンハンサー［Ｃｅｌｌ，３３，７１７（１９８３）］などを用いる。
　遺伝子組換え抗体発現用ベクターには、遺伝子組換え抗体発現ベクターの構築の容易さ、動物細胞への導入の容易さ、動物細胞内での抗体Ｈ鎖およびＬ鎖の発現量のバランスが均衡するなどの点から、抗体Ｈ鎖およびＬ鎖が同一のベクター上に存在するタイプ（タンデム型）の遺伝子組換え抗体発現用ベクター［Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６７，２７１（１９９４）］を用いるが、抗体Ｈ鎖およびＬ鎖が別々のベクター上に存在するタイプを用いることもできる。
　タンデム型の遺伝子組換え抗体発現用ベクターには、ｐＫＡＮＴＥＸ９３（国際公開第９７／１０３５４号）、ｐＥＥ１８［Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１７，５５９（１９９８）］などを用いる。
（２）ヒト以外の動物由来の抗体のＶ領域をコードするｃＤＮＡの取得およびアミノ酸配列の解析
　非ヒト抗体を産生するハイブリドーマからＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成後、適当なクローニングベクターに遺伝子をクローングし、ＤＮＡシークエンサーを用いた配列解析を行うことで、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡ配列を決定することができる。
　決定したＤＮＡ配列からＶＨおよびＶＬの全アミノ酸配列をそれぞれ推定し、既知の抗体のＶＨおよびＶＬの全アミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，　ＵＳ　Ｄｅｐｔ．　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］と比較することにより、取得したｃＤＮＡが分泌シグナル配列を含む抗体のＶＨおよびＶＬの完全なアミノ酸配列をコードしているかをそれぞれ確認する。
　分泌シグナル配列を含む抗体のＶＨおよびＶＬの完全なアミノ酸配列に関しては、既知の抗体のＶＨおよびＶＬの全アミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］と比較することにより、分泌シグナル配列の長さおよびＮ末端アミノ酸配列を推定でき、更にはそれらが属するサブグループを知ることができる。
　また、ＶＨおよびＶＬの各ＣＤＲのアミノ酸配列についても、既知の抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］と比較することによって見出すことができる。
（３）ヒト型キメラ抗体発現ベクターの構築
　（１）で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流に、それぞれ非ヒト抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡをそれぞれクローニングすることで、ヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築することができる。
　非ヒト抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡの３’末端側と、ヒト抗体のＣＨまたはＣＬの５’末端側とを連結するために、連結部分の塩基配列が適切なアミノ酸をコードし、かつ適当な制限酵素認識配列になるように設計したＶＨおよびＶＬのｃＤＮＡを作製する。
　作製されたＶＨおよびＶＬのｃＤＮＡを、（１）で得られるヒト化抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流にそれらが適切な形で発現するようにそれぞれクローニングし、ヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築する。
　また、非ヒト抗体ＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡを、適当な制限酵素の認識配列を両端に有する合成ＤＮＡを用いてＰＣＲ法によりそれぞれ増幅し、（１）で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターにクローニングすることもできる。
（４）ヒト化抗体のＶ領域をコードするｃＤＮＡの構築
　ヒト化抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡは、以下のようにして構築することができる。
　非ヒト抗体のＶＨまたはＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列を移植するヒト抗体のＶＨまたはＶＬのフレームワーク領域（以下、ＦＲと表記する）のアミノ酸配列をそれぞれ選択する。選択するＦＲのアミノ酸配列には、ヒト抗体由来のものであれば、いずれのものでも用いることができる。
　例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄａｔａ　Ｂａｎｋなどのデータベースに登録されているヒト抗体のＦＲのアミノ酸配列、またはヒト抗体のＦＲの各サブグループの共通アミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］などを用いる。
　抗体の結合活性の低下を抑えるため、元の抗体のＶＨまたはＶＬのＦＲのアミノ酸配列とできるだけ高い相同性（少なくとも６０％以上）のＦＲのアミノ酸配列を選択する。
　次に、選択したヒト抗体のＶＨまたはＶＬのＦＲのアミノ酸配列に、もとの抗体のＣＤＲのアミノ酸配列をそれぞれ移植し、ヒト化抗体のＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列をそれぞれ設計する。
　設計したアミノ酸配列を抗体の遺伝子の塩基配列に見られるコドンの使用頻度［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］を考慮してＤＮＡ配列に変換し、ヒト化抗体のＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列をそれぞれ設計する。
（５）ヒト化抗体のＶ領域のアミノ酸配列の改変
　ヒト化抗体は、非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲのみをヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲに移植しただけでは、その抗原結合活性は元の非ヒト抗体に比べて低下する［ＢＩＯ／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，９，２６６（１９９１）］。
　ヒト化抗体では、ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列の中で、直接抗原との結合に関与しているアミノ酸残基、ＣＤＲのアミノ酸残基と相互作用するアミノ酸残基、および抗体の立体構造を維持し、間接的に抗原との結合に関与しているアミノ酸残基を同定し、それらのアミノ酸残基を元の非ヒト抗体のアミノ酸残基に置換することにより、低下した抗原結合活性を上昇させることができる。
　抗原結合活性に関わるＦＲのアミノ酸残基を同定するために、Ｘ線結晶解析［Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１１２，５３５（１９７７）］およびコンピューターモデリング［Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７，１５０１（１９９４）］などを用いることにより、抗体の立体構造の構築および解析を行うことができる。
　また、それぞれの抗体について数種の改変体を作製し、それぞれの抗原結合活性との相関を検討することを繰り返し、試行錯誤することで必要な抗原結合活性を有する改変ヒト化抗体を取得できる。
　ヒト抗体のＶＨ及びＶＬのＦＲのアミノ酸残基は、改変用合成ＤＮＡを用いて（４）に記載のＰＣＲ反応を行うことにより、改変させることができる。ＰＣＲ反応後の増幅産物について（２）に記載の方法により、塩基配列を決定し、目的の改変が施されたことを確認する。
（６）ヒト化抗体発現ベクターの構築
　（１）で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流に、構築した遺伝子組換え抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡをそれぞれクローニングし、ヒト化抗体発現ベクターを構築することができる。
　例えば、（４）および（５）で得られるヒト化抗体のＶＨまたはＶＬを構築する際に用いる合成ＤＮＡのうち、両端に位置する合成ＤＮＡの５’末端に適当な制限酵素の認識配列を導入することで、（１）で得られるヒト化抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流にそれらが適切な形で発現するようにそれぞれクローニングする。
（７）遺伝子組換え抗体の一過性発現
　（３）および（６）で得られる遺伝子組換え抗体発現ベクター、またはそれらを改変した発現ベクターを用いて遺伝子組換え抗体の一過性発現を行い、作製した多種類のヒト化抗体の抗原結合活性を効率的に評価することができる。
　発現ベクターを導入する宿主細胞には、遺伝子組換え抗体を発現できる宿主細胞であれば、いかなる細胞でも用いることができるが、例えばＣＯＳ－７細胞［Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号：ＣＲＬ１６５１］を用いる［Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．，ＣＲＣ　ｐｒｅｓｓ，２８３（１９９１）］。
（８）遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株の取得と遺伝子組換え抗体の調製
　（３）および（６）で得られた遺伝子組換え抗体発現ベクターを適当な宿主細胞に導入することにより遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株を得ることができる。
　宿主細胞への発現ベクターの導入には、エレクトロポレーション法［日本国特開平２－２５７８９１号公報、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３，１３３（１９９０）］などを用いる。
　遺伝子組換え抗体発現ベクターを導入する宿主細胞には、遺伝子組換え抗体を発現させることができる宿主細胞であれば、いかなる細胞でも用いることができる。例えば、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ　ＣＣＬ－６１）、ＤＵｋＸＢ１１　（ＡＴＣＣ　ＣＣＬ－９０９６）、Ｐｒｏ－５（ＡＴＣＣ　ＣＣＬ－１７８１）、ＣＨＯ－Ｓ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｔ　＃　１１６１９）、ラットミエローマ細胞ＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０（またはＹＢ２／０ともいう）、マウスミエローマ細胞ＮＳＯ、マウスミエローマ細胞ＳＰ２／０－Ａｇ１４（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１５８１）、マウスＰ３Ｘ６３－Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１５８０）、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子（以下、ｄｈｆｒと表記する）が欠損したＣＨＯ細胞［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．,ＵＳＡ，７７，４２１６（１９８０）］、レクチン耐性を獲得したＬｅｃ１３［Ｓｏｍａｔｉｃ　Ｃｅｌｌ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１２，５５（１９８６）］、α１，６－フコース転移酵素遺伝子が欠損したＣＨＯ細胞（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第０２／３１１４０号）およびラットＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１６６２）などを用いる。
　また、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ－フコースの合成に関与する酵素などの蛋白質、Ｎ－グリコシド結合複合型糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素などの蛋白質および細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ－フコースのゴルジ体への輸送に関与する蛋白質などの活性が低下または欠失した宿主細胞、例えばα１，６－フコース転移酵素遺伝子が欠損したＣＨＯ細胞（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第０２／３１１４０号）などを用いることもできる。
　発現ベクターの導入後、遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株は、Ｇ４１８硫酸塩（以下、Ｇ４１８と表記する）などの薬剤を含む動物細胞培養用培地で培養することにより選択する（日本国特開平２－２５７８９１号公報）。
　動物細胞培養用培地には、ＲＰＭＩ１６４０培地（インビトロジェン社製）、ＧＩＴ培地（日本製薬社製）、ＥＸ－ＣＥＬＬ３０１培地（ジェイアールエイチ社製）、ＩＭＤＭ培地（インビトロジェン社製）、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ－ＳＦＭ培地（インビトロジェン社製）、またはこれら培地にＦＢＳなどの各種添加物を添加した培地などを用いる。
　得られた形質転換株を培地中で培養することで培養上清中に遺伝子組換え抗体を発現蓄積させる。培養上清中の遺伝子組換え抗体の発現量および抗原結合活性はＥＬＩＳＡ法などにより測定できる。
　また、形質転換株は、ＤＨＦＲ増幅系（日本国特開平２－２５７８９１号公報）などを利用して遺伝子組換え抗体の発現量を上昇させることができる。
　遺伝子組換え抗体は、形質転換株の培養上清よりプロテインＡ－カラムを用いて精製する［Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ（１９９６）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）］。
　また、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィーおよび限外濾過などの蛋白質の精製で用いられる方法を組み合わすこともできる。
　精製した遺伝子組換え抗体のＨ鎖、Ｌ鎖或いは抗体分子全体の分子量は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法［Ｎａｔｕｒｅ，２２７，６８０（１９７０）］およびウェスタンブロッティング法［Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ（１９９６）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）］などを用いて測定することができる。
３．抗体のエフェクター活性を制御する方法
　本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のエフェクター活性を制御する方法としては、抗体のＦｃ領域の２９７番目のアスパラギン（Ａｓｎ）に結合するＮ結合複合型糖鎖の還元末端に存在するＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）にα-１,６結合するフコース（コアフコースともいう）の量を制御する方法（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００２／３１１４０号、国際公開第００／６１７３９号）や、抗体のＦｃ領域のアミノ酸残基を改変することで制御する方法、および抗体サブクラスを変更することなどが知られている。本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体にはいずれの方法を用いても、エフェクター活性を制御することができる。
　エフェクター活性とは、抗体のＦｃ領域を介して引き起こされる抗体依存性の活性をいい、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ活性）、補体依存性傷害活性（ＣＤＣ活性）や、マクロファージや樹状細胞などの食細胞による抗体依存性ファゴサイトーシス（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，ＡＤＰ活性）などが知られている。
　抗体のＦｃのN結合複合型糖鎖のコアフコースの含量を制御することで、抗体のエフェクター活性を増加または低下させることができる。抗体のＦｃに結合しているＮ結合複合型糖鎖に結合するフコースの含量を低下させる方法としては、α１，６－フコース転移酵素遺伝子が欠損したＣＨＯ細胞を用いて抗体を発現することで、フコースが結合していない抗体を取得する方法を用いることができる。フコースが結合していない抗体は高いＡＤＣＣ活性を有する。
　一方、抗体のＦｃに結合しているN結合複合型糖鎖に結合するフコースの含量を増加させる方法としては、α１，６－フコース転移酵素遺伝子を導入した宿主細胞を用いて抗体を発現させることで、フコースが結合している抗体を取得する方法を用いることができる。フコースが結合している抗体は、フコースが結合していない抗体よりも低いＡＤＣＣ活性を有する。
　また、抗体のＦｃ領域のアミノ酸残基を改変することでＡＤＣＣ活性やＣＤＣ活性を増加または低下させることができる。例えば、米国特許出願公開第２００７／０１４８１６５号明細書に記載のＦｃ領域のアミノ酸配列を用いることで、抗体のＣＤＣ活性を増加させることができる。また、米国特許第６，７３７，０５６、米国特許第７，２９７，７７５号明細書または米国特許第７，３１７，０９１号明細書に記載のアミノ酸改変を行うことで、ＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性を、増加させることも低下させることもできる。
　更に、ヒトＩｇＧサブクラスにおいて、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４サブクラスは、ＩｇＧ１やＩｇＧ３サブクラスに比べてエフェクター活性が低いことが知られており、エフェクター活性の低い抗体サブクラスのＦｃ領域に組換えることで、エフェクター活性を低下した抗体を作製することができる。
　ＩｇＧ２やＩｇＧ４サブクラスに関する抗体の安定化については、国際公開第２００６／０７５６６８号、国際公開第２００６／０３５５８６号などに記載の方法を用いることにより、安定でありかつエフェクター活性を制御したＩｇＧ２抗体やＩｇＧ４抗体を作製することができる。
　更に、上述の方法を組み合わせて、一つの抗体に使用することにより、抗体のエフェクター活性が制御された抗体を取得することができる。
４．本発明の抗Ａβオリゴマー抗体を用いた治療方法
　アルツハイマー病に伴う記憶力低下は、可溶性Ａβオリゴマーによって引き起こされるシナプス機能不全に関連することが示唆されている［Ｋｌｅｉｎ　ＷＬ，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ；Ｓｅｌｋｏｅ　ＤＪ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ］。従って、Ａβオリゴマーの過度の蓄積および沈着は、アルツハイマー病を結果として引き起こす複雑な下流カスケードの引き金を引く可能性がある。
　本発明において治療とは、疾患または疾病による症状を呈する臓器、組織に対して、必ずしも完全な治療効果または予防効果を有する必要はなく、部分的な効果を有する場合であってよい。
　本発明におけるアルツハイマー病の治療とは、アルツハイマー病によって生じ得る少なくとも１つの症状を改善することであり、例えば、認知機能障害の改善および抑制、老人斑形成の改善および抑制、シナプス機能不全の改善および抑制、並びに脳組織中および血液中等におけるＡβ蓄積の減少および抑制等が挙げられる。
　ここで認知機能障害には、例えば、記憶障害とされる、長期／短期記憶障害、物体認識記憶障害、空間記憶障害、および連合情緒記憶障害が含まれる。
　また、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体を用いた治療方法としては、認知機能障害を抑制する方法、アルツハイマー病を抑制する方法、アルツハイマー病の進行を抑制する方法、老人斑形成を抑制する方法、Ａβの蓄積を抑制する方法、神経毒性活性を中和する（抑制する）方法、Ａβアミロイド線維形成を阻害する方法およびシナプス毒性活性を中和する（抑制する）方法を挙げることができる。
　さらに他の態様として、認知機能障害の予防および治療の少なくとも一方ための方法、アルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法も挙げることができる。
　また、本発明の抗体または該抗体断片、またはこれらの誘導体を含有する治療剤は、有効成分としての該抗体もしくは該抗体断片、またはこれらの誘導体のみを含むものであってもよいが、通常は薬理学的に許容される１以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野において公知の方法により製造した医薬製剤として提供される。
　投与経路としては、例えば、経口投与、並びに口腔内、気道内、直腸内、皮下、筋肉内および静脈内などの非経口投与が挙げられる。
　投与形態としては、例えば、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、座剤、注射剤、軟膏およびテープ剤などが挙げられる。
　経口投与に適当な製剤は、乳剤、シロップ剤、カプセル剤、錠剤、散剤および顆粒剤などである。
　乳剤またはシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビトールおよび果糖などの糖類、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールなどのグリコール類、ごま油、オリーブ油および大豆油などの油類、ｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、並びにストロベリーフレーバーおよびペパーミントなどのフレーバー類などを添加剤として用いて製造する。
　カプセル剤、錠剤、散剤および顆粒剤などは、乳糖、ブドウ糖、ショ糖およびマンニトールなどの賦形剤、デンプンおよびアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクなどの滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロースおよびゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤並びにグリセリンなどの可塑剤などを添加剤として用いて製造する。
　非経口投与に適当な製剤としては、例えば、注射剤、座剤および噴霧剤などが挙げられる。
　注射剤は、例えば、塩溶液若しくはブドウ糖溶液またはこれらの混合物からなる担体などを用いて製造する。
　座剤は、例えば、カカオ脂、水素化脂肪およびカルボン酸などの担体を用いて製造する。
　噴霧剤は受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ本発明のモノクローナル抗体またはその抗体断片を微細な粒子として分散させ、吸収を容易にさせる担体などを用いて製造する。
　担体としては、例えば、乳糖およびグリセリンなどが挙げられる。また、エアロゾルまたはドライパウダーとして製造することもできる。
　さらに、上記非経口剤においても、経口投与に適当な製剤で添加剤として例示した成分を添加することもできる。
　抗Ａβオリゴマー抗体ヒト化抗体の作製
（１）抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列の設計
　初めに、Ｋａｂａｔら[Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）]の報告に基づいて、参考例で作製した抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４のＶＨのアミノ酸配列（配列番号８）のＣＤＲ配列を決定した。その結果、ＶＨのＣＤＲ１～３を配列番号１～３とした。
　次に、ＶＨの抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列を以下のようにして設計した。６Ｅ４ＶＨのＣＤＲ１～３のアミノ酸配列（配列番号１～３）を移植するためのヒト抗体のＶＨのＦＲのアミノ酸配列を選択した。
　カバットらは、既知の様々なヒト抗体のＶＨをそのアミノ酸配列の相同性からサブグループ（ＨＳＧ　Ｉ～ＩＩＩ）に分類し、それらのサブグループ毎に共通配列を報告している［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］。
　そこで、ヒト抗体のＶＨのサブグループＩ～ＩＩＩの共通配列のＦＲのアミノ酸配列と６Ｅ４ＶＨのＦＲのアミノ酸配列との相同性検索を実施した。相同性を検索した結果、ＨＳＧＩ、ＨＳＧＩＩ、およびＨＳＧＩＩＩの相同性はそれぞれ７５．９％、５４．０％、５７．５％であった。従って、６Ｅ４ＶＨのＦＲのアミノ酸配列はサブグループＩと最も高い相同性を有していた。
　以上の結果から、ヒト抗体のＶＨのサブグループＩの共通配列のＦＲのアミノ酸配列の適切な位置に、６Ｅ４ＶＨのＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号１～３）を移植した。このようにして、配列番号１２で表される抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０を設計した。
　次に、Ｈ鎖と同様にして、ＶＬのアミノ酸配列（配列番号１０）のＣＤＲ１～３の配列を配列番号４～６と決定し、抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＬのアミノ酸配列を以下のようにして設計した。
　６Ｅ４ＶＬのＣＤＲ１～３のアミノ酸配列（配列番号４～６）を移植するためのヒト抗体のＶＬのＦＲのアミノ酸配列を選択した。
　カバットらは、既知の様々なヒト抗体のＶＬをそのアミノ酸配列の相同性からサブグループ（ＨＳＧ　Ｉ～ＩＶ）に分類し、それらのサブグループ毎に共通配列を報告している［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ　Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］。
　そこで、ヒト抗体のＶＬのサブグループＩ～ＩＶの共通配列のＦＲのアミノ酸配列と６Ｅ４ＶＬのＦＲのアミノ酸配列との相同性検索を実施した。相同性を検索した結果、ＨＳＧＩ、ＨＳＧＩＩ、ＨＳＧＩＩＩ、およびＨＳＧＩＶの相同性はそれぞれ６７．５％、８６．３％、６８．８％、７６．３％であった。従って、６Ｅ４ＶＬのＦＲのアミノ酸配列はサブグループＩＩと最も高い相同性を有していた。
　以上の結果から、ヒト抗体のＶＬのサブグループＩＩの共通配列のＦＲのアミノ酸配列の適切な位置に、６Ｅ４ＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号４～６）を移植した。
　しかし、６Ｅ４ＶＬのアミノ酸配列（配列番号１０）中の１１０番目のＬｅｕは、カバットらが挙げるヒト抗体ＦＲのアミノ酸配列の相当する部位において、最も使用される頻度が高いアミノ酸残基ではないが、比較的高い頻度で使用されるアミノ酸残基である。
　したがって、上記の６Ｅ４のアミノ酸配列で認められるアミノ酸残基を用いることとした。このようにして、抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０（配列番号１４）を設計した。
　上記で設計した抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０およびＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０は、選択したヒト抗体のＦＲのアミノ酸配列に抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体である６Ｅ４のＣＤＲのアミノ酸配列のみを移植した配列である。
　しかし、一般に、ヒト化抗体を作製する場合には、単なるヒト抗体のＦＲへのマウス抗体のＣＤＲのアミノ酸配列の移植のみでは結合活性が低下してしまうことが多い。
　このため、結合活性の低下を回避するため、ＣＤＲのアミノ酸配列の移植とともに、ヒト抗体とマウス抗体で異なっているＦＲのアミノ酸残基のうち、結合活性に影響を与えると考えられるアミノ酸残基を改変することが行われている。
　そこで、本実施例でも、結合活性に影響を与えると考えられるＦＲのアミノ酸残基を以下のようにして同定した。
　まず、上記で設計した抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０およびＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０よりなる抗体Ｖ領域（以下、ＨＶ０ＬＶ０と表す）の三次元構造をコンピューターモデリングの手法を用いて構築した。
　三次元構造座標作製および三次元構造の表示には、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　Ｓｔｕｄｉｏ（アクセルリス社製）を添付の使用説明書に従い、用いた。また、抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４のＶ領域の三次元構造のコンピューターモデルも同様にして構築した。
　更に、ＨＶ０ＬＶ０のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列の中で、６Ｅ４と異なっているアミノ酸残基を選択し、６Ｅ４のアミノ酸残基へ改変したアミノ酸配列を作製し、同様に三次元構造モデルを構築した。
　これら作製した６Ｅ４、ＨＶ０ＬＶ０および改変体のＶ領域の三次元構造を比較し、抗体の結合活性に影響を与えると予測されるアミノ酸残基を同定した。
　その結果、ＨＶ０ＬＶ０のＦＲのアミノ酸残基の中で抗原結合部位の三次元構造を変化させ、抗体の結合活性に影響を与えると考えられるアミノ酸残基として、６Ｅ４ＨＶ０では配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７０番目のＩｌｅ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａを、６Ｅ４ＬＶ０では２番目のＩｌｅ、１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒをそれぞれ選択した。
　これらの選択したアミノ酸残基のうち、少なくとも１つ以上のアミノ酸配列を６Ｅ４の同じ部位に存在するアミノ酸残基へ改変し、様々な改変を有するアミノ酸配列を含むヒト化抗体のＶＨおよびＶＬを設計した。
　具体的には、ＶＨについては、配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を導入した。
　また、ＶＬについては、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を導入した。
　ＨＶ０ＬＶ０のＦＲに存在する、少なくとも１つのアミノ酸残基を改変した抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体の抗体Ｖ領域として、ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ２ｂ、ＨＶ０ＬＶ２ｃ、ＨＶ０ＬＶ２ｄ、ＨＶ０ＬＶ３、ＨＶ０ＬＶ４、ＨＶ２ＬＶ０、ＨＶ２ＬＶ２ａ、ＨＶ２ＬＶ２ｂ、ＨＶ２ＬＶ２ｃ、ＨＶ２ＬＶ２ｄ、ＨＶ２ＬＶ３、ＨＶ２ＬＶ４、ＨＶ３ＬＶ０、ＨＶ３ＬＶ２ａ、ＨＶ３ＬＶ２ｂ、ＨＶ３ＬＶ２ｃ、ＨＶ３ＬＶ２ｄ、ＨＶ３ＬＶ３、ＨＶ３ＬＶ４、ＨＶ４ＬＶ０、ＨＶ４ＬＶ２ａ、ＨＶ４ＬＶ２ｂ、ＨＶ４ＬＶ２ｃ、ＨＶ４ＬＶ２ｄ、ＨＶ４ＬＶ３、ＨＶ４ＬＶ４、ＨＶ５ＬＶ０、ＨＶ５ＬＶ２ａ、ＨＶ５ＬＶ２ｂ、ＨＶ５ＬＶ２ｃ、ＨＶ５ＬＶ２ｄ、ＨＶ５ＬＶ３、ＨＶ５ＬＶ４、ＨＶ７ａＬＶ０、ＨＶ７ａＬＶ２ａ、ＨＶ７ａＬＶ２ｂ、ＨＶ７ａＬＶ２ｃ、ＨＶ７ａＬＶ２ｄ、ＨＶ７ａＬＶ３、ＨＶ７ａＬＶ４、ＨＶ７ｂＬＶ０、ＨＶ７ｂＬＶ２ａ、ＨＶ７ｂＬＶ２ｂ、ＨＶ７ｂＬＶ２ｃ、ＨＶ７ｂＬＶ２ｄ、ＨＶ７ｂＬＶ３、ＨＶ７ｂＬＶ４、ＨＶ９ＬＶ０、ＨＶ９ＬＶ２ａ、ＨＶ９ＬＶ２ｂ、ＨＶ９ＬＶ２ｃ、ＨＶ９ＬＶ２ｄ、ＨＶ９ＬＶ３、ＨＶ９ＬＶ４、ＨＶ１２ＬＶ０、ＨＶ１２ＬＶ２ａ、ＨＶ１２ＬＶ２ｂ、ＨＶ１２ＬＶ２ｃ、ＨＶ１２ＬＶ２ｄ、ＨＶ１２ＬＶ３、およびＨＶ１２ＬＶ４をそれぞれ設計した。
　Ｈ鎖可変領域ＨＶ２、ＨＶ３，ＨＶ４、ＨＶ５、ＨＶ７ａ、ＨＶ７ｂ、ＨＶ９、ＨＶ１２およびＬ鎖可変領域ＬＶ２ａ、ＬＶ２ｂ、ＬＶ２ｃ、ＬＶ２ｄ、ＬＶ３、ＬＶ４のアミノ酸配列をそれぞれ図１および図２に示した。
（２）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の作製
　抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の可変領域のアミノ酸配列をコードするＤＮＡは、６Ｅ４ＶＨおよび６Ｅ４ＶＬのアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（配列番号７、９）で用いられているコドンを利用し、アミノ酸改変を行う場合は、哺乳動物細胞において高頻度で使用されるコドンを用いて、作製した。
　抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体の６Ｅ４ＨＶ０および６Ｅ４ＬＶ０のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を配列番号１１、１３にそれぞれ示す。また、アミノ酸改変を行った可変領域の作製には、６Ｅ４ＶＨおよび６Ｅ４ＶＬのアミノ酸配列をコードするＤＮＡで用いられているコドンを利用し、作製した。
　これらＤＮＡ配列を用いて、ヒト化抗体の発現ベクターの構築およびヒト化抗体の発現をそれぞれ行った。
（３）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＶＨをコードするｃＤＮＡの構築
　上記（１）で設計した配列番号１２に表される抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０、および上記（２）の方法により設計した図１に示されるＨＶ１２をコードするｃＤＮＡを全合成にて作成した。
（４）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のVＬをコードするｃＤＮＡの構築
　上記（１）で設計した配列番号１４に表される抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０、および上記（２）の方法により設計した図２に示されるＬＶ２a、ＬＶ４をコードするｃＤＮＡを全合成にて作成した。
（５）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体発現ベクターの構築
　国際公開第９７／１０３５４号に記載のヒト化抗体発現用ベクターｐＫＡＮＴＥＸ９３の適当な位置に上記（３）および（４）で得られた６Ｅ４ＨＶ０またはＨＶ１２をコードするｃＤＮＡ、並びに６Ｅ４ＬＶ０、ＬＶ２ａおよびＬＶ４のいずれか１をコードするｃＤＮＡを挿入し、各種抗Ａβオリゴマーヒト化抗体発現ベクターを構築した。
（６）動物細胞を用いた抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の発現
　上記（５）で得られた抗Ａβオリゴマーヒト化抗体発現ベクターを用いて抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の動物細胞での発現を、常法［Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｇｕｉｄｅ，Ｗ．Ｈ．　Ｆｒｅｅｍａｎ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９２）］により行い、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４およびＨＶ１２ＬＶ４）を産生する形質転換株を取得した。
　発現させる動物細胞株としては、α１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）の遺伝子をダブルノックアウトしたＣＨＯ／ＤＧ４４細胞株（以下、ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞）を用いた。この宿主細胞株で発現させた抗体のＮ－結合型複合型糖鎖のコア部分には、フコースが付加されないことが知られている（国際公開第２００２／３１１４０号）。
（７）精製抗Ａβオリゴマーヒト化抗体取得
　本実施例（６）で得られた形質転換株を、通常の培養法で培養した後、細胞懸濁液を回収し、３０００ｒｐｍ、４℃の条件で２０分間の遠心分離を行い、培養上清を回収した後、０．２２μｍ孔径Ｍｉｌｌｅｘ　ＧＶフィルターを通して濾過滅菌した。
　０．８ｃｍ径のカラムにＰｒｏｓｅｐ　ｖＡ　Ｈｉｇｈ　Ｃａｐａｃｉｔｙ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）０．５ｍＬを充填し、精製水５．０ｍＬおよびＰＢＳバッファー（ｐＨ７．４）５．０ｍＬを順次通塔し、担体の平衡化を行った。
　次に、上記培養上清をカラムに通塔した後、ＰＢＳバッファー（ｐＨ７．４）５．０ｍＬで洗浄した。洗浄後、０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ　５．０）、０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ　３．５）、０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ　３．０）の順に各２．０　ｍＬを用いて担体に吸着した抗体の溶出を行った。
　溶出は５００μＬずつ、４画分に分けて取得した。次に、得られた精製画分のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を行い、目的蛋白質の溶出が確認された画分をまとめ、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸Ｎａ溶液（ｐＨ６．０）を用いて、４℃で一昼夜透析を行った。
　透析後、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体溶液を回収し、０．２２μｍ孔径Ｍｉｌｌｅｘ　ＧＶ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社）を用いて滅菌濾過した後に、２８０ｎｍの吸光度（ＯＤ２８０ｎｍ）を、吸光光度計（ＳＨＩＭＡＤＺＵ　ＵＶ－１７００）を用いて測定し、各精製抗Ａβオリゴマーヒト化抗体濃度を算出した。
　その結果、抗体のＶＨが６Ｅ４ＨＶ０、ＶＬが６Ｅ４ＬＶ０からなる抗Ａβオリゴマーヒト化抗体ＨＶ０ＬＶ０、抗体のＶＨが６Ｅ４ＨＶ０、ＶＬがＬＶ２aからなるＨＶ０ＬＶ２a、抗体のＶＨが６Ｅ４ＨＶ０、ＶＬがＬＶ４からなるＨＶ０ＬＶ４、および抗体のＶＨがＨＶ１２、ＶＬがＬＶ４からなるＨＶ１２ＬＶ４の４種類を作製した。
抗原の作製
（１）Ａβオリゴマーの調製
　Ａｍｙｌｏｉｄ　β－Ｐｒｏｔｅｉｎ，　Ｈｕｍａｎ　１－４２ペプチド（ペプチド研究所社製）を、ヘキサフロロイソプロパノールを用いて１ｍｍｏｌ／Ｌとなるよう調製した。調製した溶液を１０分間ソニケーションした後、室温で一晩風乾させた。
　次に、ジメチルスルホキシドを４μＬ添加し、３分間ソニケーションを実施した。調製した溶液に酢酸溶液（ｐＨ４．５）２００μＬ添加し、４℃の条件で一晩静置保存することで、Ａβオリゴマーを調製した。
（２）Ａβモノマーの調製
　Ｂｉｏｔｉｎ－ｂｅｔａ－Ａｍｙｌｏｉｄ，Ｈｕｍａｎ　１－４０（ＡｎａＳｐｅｃ社製)を、０．１％アンモニア水を用いて２５０μｍｏｌ／Ｌとなるよう調製した。調製した溶液を５分間ソニケーションした後、１６０００ｒｐｍ、４℃の条件で６０分間の遠心分離を行い、上清を回収することでＡβモノマーを調製した。
（１）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の活性評価
ビアコアによる抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＡβオリゴマーへの結合活性評価
　各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）のＡβオリゴマーに対する結合活性を反応速度論的に解析するため、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）を用いて結合活性測定を行った。
　以下の操作は全てＢｉａｃｏｒｅ　Ｔ１００（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いて行った。実施例２（１）で得られたＡβオリゴマーを、アミンカップリング法によりＣＭ５センサーチップ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）に固定化した。
　Ａβオリゴマーを固定化したチップに３０μｇ／ｍＬから２倍希釈で段階的に希釈して８濃度に調製した測定サンプル（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）をマルチカイネティクスの自動プログラムに従い低濃度から順に連続添加して測定した。
　装置添付の解析ソフトＢｉａｃｏｒｅ　Ｔ１００　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ社製）を用い、Ｂｉｖａｌｅｎｔ　Ａｎａｌｙｔｅモデルで解析し、各抗体のＡβオリゴマーに対する結合速度定数ｋａ及び解離速度定数ｋｄを算出した。
　その結果得られた各抗体の結合速度定数ｋａ１、解離速度定数ｋｄ１および解離定数ＫＤ（ｋｄ１／ｋａ１）を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　表１に示すように、各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）はいずれも、Ａβオリゴマーに対し、３×１０－７から４×１０－８ｍｏｌ／Ｌのアフィニティーでの結合能を示した。
（２）ビアコアによる抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＡβモノマーへの結合活性評価
各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）のＡβモノマーに対する結合活性を解析するため、本実施例（１）と同様の手法により結合活性測定を行った。また対照抗体として抗Ａβ抗体６Ｅ１０（ＣＯＶＡＮＣＥ社製）の測定を行った。
　実施例２（２）で得られたＡβモノマーを、ビオチンキャプチャー法によりＳＡセンサーチップ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）に固定化した。Ａβモノマーを固定化したチップに３０μｇ／ｍＬから２倍希釈で段階的に希釈して５濃度に調製した測定サンプル（６Ｅ１０、ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）をマルチカイネティクスの自動プログラムに従い低濃度から順に連続添加して測定した。センサーグラムを図３に示す。
　図３に示すように、４種類の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）はいずれもＡβモノマーへの結合能を示さないことが明らかとなった。
［参考例］
１．抗原の作製
　Ａβ　１－４０ペプチドを合成し、そのＮ末端に蛍光色素６－Ｃａｒｂｏｘｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ（６－ＴＡＭＲＡ）（ＳＩＧＭＡ）を化学結合した化合物を作製した。この化合物を、Ａβ１－４０ペプチド（ペプチド研）とともに重合反応させることにより、オリゴマーを多く含む標品（Ａβ１－４０オリゴマー）を調製した。
２．抗体産生ハイブリドーマの作製
　上述の方法で作製した抗原をＢａｌｂ－ｃマウスの肉趾に対して、免疫処置を行い、続いてさらに６回の追加免疫を行った。鼠径リンパ節を用いて、ポリエチレングリコール１５００を用いたＳｐ２／Ｏ－Ａｇ１４細胞との融合によってハイブリドーマを作製した。
３．ドットブロット解析
　初期スクリーニングは、１８時間プレインキュベートした２．５μlのＡβ１－４２（２．５μｇ／ドット）をニトロセルロース膜上に固相化するドットブロット解析で行った。膜上の非特異結合部位を５％低脂肪乳、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するリン酸緩衝液でブロッキング後、培養液上清とともにインキュベートした。
　培養上清中のＡβオリゴマー結合抗体は西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＦ（ａｂ’）２（１：３０００；Ａｍｅｒｓｈａｍ）で検出し、ＬＡＳ３０００ｍｉｎｉ（Ｆｕｊｉｔｓｕ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いる高感度化学発光（ＥＣＬ）キットによって描出した。これにより、抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４を確立した。
　上記の参考例は、ＰＣＴ／ＪＰ２００９／５２０３９（国際公開第２００９／０９９１７６号）に記載されている。
　本発明を特定の態様を用いて詳細に説明したが、本発明の意図と範囲を離れることなく様々な変更および変形が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお、本出願は、２００９年８月７日付けで出願された米国仮出願（６１／２３２，０３８号）に基づいており、その全体が引用により援用される。
配列番号１－人工配列の説明；ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２－人工配列の説明；ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号３－人工配列の説明；ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号４－人工配列の説明；ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号５－人工配列の説明；ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号６－人工配列の説明；ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１－人工配列の説明；６Ｅ４ＨＶ０可変領域をコードするＤＮＡ配列
配列番号１２－人工配列の説明；６Ｅ４ＨＶ０可変領域のアミノ酸配列
配列番号１３－人工配列の説明；６Ｅ４ＬＶ０可変領域をコードするＤＮＡ配列
配列番号１４－人工配列の説明；６Ｅ４ＬＶ０可変領域のアミノ酸配列
配列番号１５－人工配列の説明；ＨＶ１２可変領域のアミノ酸配列
配列番号１６－人工配列の説明；ＬＶ２ａ可変領域のアミノ酸配列
配列番号１７－人工配列の説明；ＬＶ４可変領域のアミノ酸配列

Claims (9)

  1. 　アミロイドβタンパク質モノマーには結合せず、アミロイドβタンパク質オリゴマーに結合するヒト化抗体であって、以下の（ａ）抗体重鎖可変領域および（ｂ）抗体軽鎖可変領域を含むヒト化抗体。
    　　（ａ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列、または配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓにおよび９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域
    　　（ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列、または配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓにおよび９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域
  2. 　抗体重鎖可変領域が配列番号１２または１５で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１４、１６または１７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１記載のヒト化抗体。
  3. 　請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、抗認知機能障害剤。
  4. 　請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アルツハイマー病治療剤。
  5. 　請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、老人斑形成抑制剤。
  6. 　請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβアミロイド線維形成阻害剤。
  7. 　請求項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、認知機能障害の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
  8. 　請求項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
  9. 　請求項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の進行を抑制する方法。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015159963A1 (ja) * 2014-04-16 2015-10-22 協和発酵キリン株式会社 ヒトｃｓｆの毒性を測定する方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3165092A1 (en) 2015-11-09 2017-05-10 Incotec Holding B.V. Seed coating composition
RU2741802C2 (ru) * 2016-01-12 2021-01-28 Нэшнл Юниверсити Корпорейшн Тиба Юниверсити АНТИТЕЛО К Myl9
CN107118260B (zh) * 2017-05-12 2020-10-16 中国科学院过程工程研究所 一种多肽及其组成的疫苗和应用
WO2020097155A1 (en) * 2018-11-06 2020-05-14 Alsatech, Inc. Cell-based gene therapy for neurodegenerative diseases
TW202300517A (zh) 2021-03-12 2023-01-01 美商美國禮來大藥廠 抗類澱粉β抗體及其用途
WO2022251048A1 (en) 2021-05-24 2022-12-01 Eli Lilly And Company Anti-amyloid beta antibodies and uses thereof
CN117586388A (zh) * 2022-08-09 2024-02-23 深圳智源生物医药有限公司 改进的β淀粉样蛋白寡聚体特异性结合抗体

Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02257891A (ja) 1989-03-31 1990-10-18 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 組換え動物細胞による蛋白質の製造
WO1997010354A1 (en) 1995-09-11 1997-03-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. ANTIBODY AGAINTS α-CHAIN OF HUMAN INTERLEUKIN 5 RECEPTOR
WO2000061739A1 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
WO2002031140A1 (fr) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules produisant des compositions d'anticorps
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 融合蛋白質組成物
JP2006509721A (ja) * 2002-06-11 2006-03-23 ノースウエスタン ユニバーシティ 抗ａｄｄｌ抗体及びその使用
WO2006035586A1 (ja) 2004-09-28 2006-04-06 Daikin Industries, Ltd. 空気調和装置
WO2006075668A1 (ja) 2005-01-12 2006-07-20 Kirin Beer Kabushiki Kaisha 安定化されたヒトIgG2およびIgG3抗体
US20070148165A1 (en) 2005-07-22 2007-06-28 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Recombinant antibody composition
US7297775B2 (en) 1998-04-02 2007-11-20 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
JP2008520553A (ja) * 2004-10-25 2008-06-19 メルク・アンド・カンパニー・インコーポレーテッド 抗ａｄｄｌ抗体およびこの使用
WO2009051220A1 (ja) 2007-10-19 2009-04-23 Immunas Pharma, Inc. Aβオリゴマーに特異的に結合する抗体およびその利用
WO2009099176A1 (ja) 2008-02-08 2009-08-13 Immunas Pharma, Inc. Aβオリゴマーに特異的に結合する抗体およびその利用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6218506B1 (en) 1997-02-05 2001-04-17 Northwestern University Amyloid β protein (globular assembly and uses thereof)
US20050059591A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
NZ579543A (en) * 2004-07-09 2011-07-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-glypican 3 antibody
CN101137394A (zh) * 2004-10-25 2008-03-05 默克制药公司 抗addl抗体及其应用
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
WO2011155607A1 (ja) * 2010-06-11 2011-12-15 協和発酵キリン株式会社 抗ｔｉｍ－３抗体

Patent Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02257891A (ja) 1989-03-31 1990-10-18 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 組換え動物細胞による蛋白質の製造
WO1997010354A1 (en) 1995-09-11 1997-03-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. ANTIBODY AGAINTS α-CHAIN OF HUMAN INTERLEUKIN 5 RECEPTOR
US7297775B2 (en) 1998-04-02 2007-11-20 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2000061739A1 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
WO2002031140A1 (fr) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules produisant des compositions d'anticorps
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
JP2006509721A (ja) * 2002-06-11 2006-03-23 ノースウエスタン ユニバーシティ 抗ａｄｄｌ抗体及びその使用
WO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 融合蛋白質組成物
WO2006035586A1 (ja) 2004-09-28 2006-04-06 Daikin Industries, Ltd. 空気調和装置
JP2008520553A (ja) * 2004-10-25 2008-06-19 メルク・アンド・カンパニー・インコーポレーテッド 抗ａｄｄｌ抗体およびこの使用
WO2006075668A1 (ja) 2005-01-12 2006-07-20 Kirin Beer Kabushiki Kaisha 安定化されたヒトIgG2およびIgG3抗体
US20070148165A1 (en) 2005-07-22 2007-06-28 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Recombinant antibody composition
WO2009051220A1 (ja) 2007-10-19 2009-04-23 Immunas Pharma, Inc. Aβオリゴマーに特異的に結合する抗体およびその利用
WO2009099176A1 (ja) 2008-02-08 2009-08-13 Immunas Pharma, Inc. Aβオリゴマーに特異的に結合する抗体およびその利用

Non-Patent Citations (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Antibodies-A Laboratory Manual", 1988, COLD SPRING HARBOR LABORATORY
"Antibody Engineering Handbook", 1994, CHIJIN SHOKAN
"Antibody Engineering, A Practical Guide", 1992, W. H. FREEMAN AND COMPANY
"Current Protocols in Molecular Biology", 1987, JOHN WILLY & SONS
"Methods in Nucleic Acids Res.", 1991, CRC PRESS, pages: 283
"Molecular Cloning, Second Edition,", 1989, COLD SPRING HARBOR LABORATORY PRESS
"Monoclonal Antibodies-Principles and practice,Third edition,", 1996, ACADEMIC PRESS
"Sequence of Proteins of Immunological Interest", 1991, US DEPT. HEALTH AND HUMAN SERVICES
"Sequences of Proteins of Immunological Interest", 1991, US DEPT. HEALTH AND HUMAN SERVICES
"Sequences ofProteins of Immunological Interest", 1991, US DEPT. HEALTH AND HUMAN SERVICES
BIO/TECHNOLOGY, vol. 9, 1991, pages 266
BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 149, 1987, pages 960
BLOOD, vol. 65, 1985, pages 1349
CANCER RES., vol. 46, 1986, pages 6489
CANCER RES., vol. 52, 1992, pages 3402
CANCER RES., vol. 56, 1996, pages 1118
CELL, vol. 33, 1983, pages 717
CELL, vol. 41, 1985, pages 479
CURRENT TOPICS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, vol. 18, 1978, pages 1
CYTOTECHNOL., vol. 13, 1993, pages 79
CYTOTECHNOL., vol. 3, 1990, pages 133
CYTOTECHNOL., vol. 4, 1990, pages 173
CYTOTECHNOLOGY, vol. 3, 1990, pages 133
ETSURO MATSUBARA: "Alzheimer's Disease no Kotai Chiryo", CLINICAL TESTING, vol. 52, no. 3, 15 March 2008 (2008-03-15), pages 297 - 301, XP008151851 *
EUROPEAN J. IMMUNOLOGY, vol. 6, 1976, pages 511
GENE, vol. 27, 1984, pages 223
GENE, vol. 34, 1985, pages 315
GHISO J ET AL., BIOCHEM J, 1993
HASS C ET AL., NATURE REVIEW, vol. 8, 2007, pages 101 - 12
HYBRIDOMA, vol. 17, 1998, pages 559
IMMUNOL., vol. 85, 1995, pages 668
J IMMUNOLOGY, vol. 123, 1979, pages 1548
J. BIOCHEM., vol. 101, 1987, pages 1307
J. IMMUNOL. METHODS, vol. 167, 1994, pages 271
J. MOL. BIOL., vol. 112, 1977, pages 535
J.BIOL.CHEM., vol. 271, 1996, pages 2966
J.CLIN.ONCOL., vol. 2, 1984, pages 881
J.IMMUNOL., vol. 135, 1985, pages 1530
J.IMMUNOL., vol. 144, 1990, pages 1382
J.NATL.CANCER INST., vol. 80, 1988, pages 937
J.NUCL.MED., vol. 26, 1985, pages 1011
JNATL. CANCER INST., vol. 80, 1988, pages 932
KABAT ET AL.: "Sequences ofProteins oflmmunological Interest", 1991, US DEPT. HEALTH AND HUMAN SERVICES
KLEIN WL, TRENDS NEUROSCI, vol. 24, 2001, pages 219 - 224
KLEIN WL., TRENDS NEUROSCI, 2001
KOHLER. G; MILSTEIN, C., METHODS ENZYMOL., vol. 73, 1981, pages 3 - 46
LAMBERT, M.P. ET AL.: "Monoclonal antibodies that target pathological assemblies of Abeta.", J. NEUROCHEM., vol. 100, no. 1, 2007, pages 23 - 35, XP002484504 *
LEE EB ET AL., J.BIOL.CHEM., vol. 281, 2006, pages 4292 - 4299
MATSUBARA E ET AL., NEUROBIOL AGING, 2004
MIKIO SHOJI ET AL.: "Alzheimer's Disease no Kotai Chiryo", AMYLOIDOSIS NI KANSURU CHOSA KENKYU HEISEI 19 NENDO SOKATSU BUNTAN KENKYU HOKOKUSHO, 2008, pages 76 - 78, XP008134941 *
MOLECULAR IMMUNOL., vol. 32, 1995, pages 249
MORETTO, N. ET AL.: "Conformation-sensitive Antibodies against Alzheimer Amyloid-beta by Immunization with a Thioredoxin-constrained B-cell Epitope Peptide.", J. BIOL. CHEM., vol. 282, no. 15, 13 April 2007 (2007-04-13), pages 11436 - 11445, XP002451806 *
NATURE BIOTECHNOL., vol. 15, 1997, pages 629
NATURE, 1988, pages 322,323
NATURE, vol. 227, 1970, pages 680
NATURE, vol. 256, 1975, pages 495
NATURE, vol. 276, 1978, pages 269
NUCLEIC ACIDS RESEARCH, vol. 10, 1982, pages 6487
NUCLEIC ACIDS RESEARCH, vol. 13, 1985, pages 4431
PROC. NATL. ACAD SCI. U.S.A., vol. 77, 1980, pages 4216
PROC. NATL. ACAD SCI. USA, vol. 78, 1981, pages 1527
PROC. NATL. ACAD SCI. USA, vol. 79, 1982, pages 6409
PROC. NATL. ACAD SCI. USA, vol. 82, 1985, pages 488
PROC. NATL. ACAD SCI. USA, vol. 84, 1987, pages 7413
PROC.NATL.ACADSCI., USA, vol. 82, 1985, pages 1242
PROTEIN ENGINEERING, vol. 7, 1994, pages 1501
REITER ET AL., PROTEIN ENGINEERING, vol. 7, 1994, pages 697
SCIENCE, 1988, pages 242,423
SELKOE DJ, SCIENCE, vol. 298, 2002, pages 789 - 791
SELKOE DJ., SCIENCE, 2002
SOMATIC CELL AND MOLECULAR GENETICS, vol. 12, 1986, pages 55
YAMAMOTO N ET AL., J. BIOL. CHEM., vol. 282, 2007, pages 2646 - 2655

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015159963A1 (ja) * 2014-04-16 2015-10-22 協和発酵キリン株式会社 ヒトｃｓｆの毒性を測定する方法
US10232056B2 (en) 2014-04-16 2019-03-19 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for measuring toxicity of human CSF

Also Published As

Publication number Publication date
BR112012002819B1 (pt) 2022-11-22
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