WO2010123221A9 - 글리세올린을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물 - Google Patents

글리세올린을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing and improving menopausal symptoms containing glycerol as an active ingredient. More specifically, the present invention relates to a composition for the prevention and improvement of menopausal symptoms containing glycerol extracted from edible fungal inoculated beans as an active ingredient.
  • menopausal is a type of endocrine syndrome refers to a transition period in which the physiological function and sexual function is reduced or lost due to a decrease in female hormone, ie, estrogen, due to the gradual aging of ovarian function.
  • Symptoms of menopausal symptoms include vascular changes such as hot flashes, tachycardia, sweating or headaches, symptoms of musculoskeletal changes such as myalgia, arthralgia and back pain, and symptoms of urogenital changes such as urinary or urinary incontinence.
  • there are symptoms caused by changes in the brain's nervous system such as memory loss, depression, concentration decline, and dizziness.
  • symptoms such as decreased vision and changes in skin and hair occur, and women such as osteoporosis or cardiovascular diseases caused by hormonal changes. It can also cause fatal diseases.
  • phytoestrogens collectively refer to various kinds of compounds present in plants having estrogen activity, and have two phenol rings as common skeletons of chemical structures.
  • Phytoestrogens can be broadly divided into three types: isoflavones, coumestans, and lignans.
  • isoflavones are biochanin A and formononetin in plants. It exists as an inactive glycoside of human body, and when absorbed into human body, it is converted into genistein and daidzein, which have a structure similar to estrogen by glucosidase, respectively, to show estrogen-like activity. do.
  • Plants containing phytoestrogens include soybean processed foods including soybeans (soy milk, tofu, miso, etc.), various cereals, fruits, and clover, and isoflavones are mainly used in legumes and lignans. It is known that is mainly contained in cereals.
  • Glycerollins are one of the phytoalexins, such as isoflavones, which are low-molecular-weight substances produced when plants are stressed by substances such as microbial infections or inorganic salts. It has antibacterial effects but is known to be harmless to the human body (Boue et. Al., J Agric Food Chem.
  • phytoalexin is a protein deacetylase, sir, a protein deacetylase that is produced in some tissues of the body such as the brain, liver, and kidney of the human body in addition to its antioxidant and anti-cancer effects. It has been known to activate the path of sirtuin to lower calorie intake and prolong life. However, there is little research on other functions of phytoalexin.
  • glyceryl De glyceollins
  • Aspergillus scavenger Asp. Sogae
  • Aspergillus duck claim Asp. Oryzae
  • phytoalexins such as glycerol and oxooctadecadienoic acids.
  • the present inventors are developing a new menopausal symptom improving composition which is excellent in improving the symptoms of menopausal symptoms without any side effects, and the glycerol compound isolated from the inoculated soybean has excellent antioxidant activity and estrogen-like activity.
  • the present invention was completed by confirming that there is an effect that can improve symptoms of menopause.
  • an object of the present invention is to provide a composition for the prevention and improvement of menopausal symptoms containing a glycerin compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention to provide a composition for the prevention and improvement of menopausal symptoms containing an extract extracted with water or an organic solvent of soybean inoculated with fungi as an active ingredient.
  • Another object of the present invention to provide a food for preventing and improving menopausal symptoms comprising the composition.
  • Another object of the present invention is to provide a medicament for the prevention and treatment of menopausal symptoms comprising the composition.
  • the present invention provides a composition for the prevention and improvement of menopausal symptoms containing a glycerin compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention also provides a composition for the prevention and improvement of menopausal symptoms containing the extract extracted with soybean fungus inoculated with fungi as an active ingredient.
  • the present invention also provides a food for the prevention and improvement of menopausal symptoms comprising the composition.
  • the present invention provides a medicament for the prevention and treatment of menopausal symptoms comprising the composition.
  • the glycerin compound according to the present invention has excellent antioxidant activity and has estrogen-like activity, it has an effect of preventing and improving menopausal symptoms caused by aging and estrogen deficiency, and since there are no side effects, hormone replacement therapy for treating menopausal symptoms and It can be used as a material for health functional food.
  • FIG. 1 is a schematic view showing a process for separating and purifying a glycerol compound according to the present invention.
  • Figure 2 shows a graph confirming the glycerol compound separated and purified by the method of the present invention using a mass spectrometer.
  • Figure 3a is a graph comparing the content of the total phenolic antioxidant component contained in the soybean extract (containing glycerol) and the non-inoculated soybean extract inoculated with Aspergillus dust.
  • Figure 3b is a graph comparing the antioxidant activity degree using a ferric reducing ability of plasma (FRAP) method for soybean extract (containing glycerol) and inoculated with Aspergillus agent.
  • FRAP ferric reducing ability of plasma
  • glycerol compound according to the present invention is a soybean extract (containing glycerol) inoculated with an Aspergillus agent, a non-inoculated soybean extract, estradiol, and a recombinant yeast strain having a gene of a human estrogen receptor. It is a graph comparing estrogen activity after treatment with idzein, genistein and DMSO, respectively.
  • Figure 5 shows the estrogen-like activity after treating the MCF-7 breast cancer cell line with the glycerol compound, soybean extract (containing glycerol), vaccinated soybean extract, estradiol and DMSO, respectively, inoculated with a glycerol compound according to the present invention. It shows the result of comparing the expression level of pS2, which is an index of through RT-PCR.
  • the present invention is characterized by providing a composition for the prevention and improvement of menopausal symptoms containing a glycerin compound as an active ingredient.
  • the glycerol compound according to the present invention may be a glycerol compound I, II or III represented by the following formula (I) to (III).
  • the glycerol compound according to the present invention may be used in the form of a salt, preferably a pharmaceutically acceptable salt.
  • the salt is preferably an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid, and an organic acid and an inorganic acid may be used as the free acid.
  • the organic acid is not limited thereto, citric acid, acetic acid, lactic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, formic acid, propionic acid, oxalic acid, trifluoroacetic acid, benzoic acid, gluconic acid, metasulfonic acid, glycolic acid, succinic acid, 4-toluenesulfonic acid, Glutamic acid and aspartic acid.
  • the inorganic acid includes, but is not limited to, hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid and phosphoric acid.
  • glycerol compounds according to the invention can be isolated from nature or prepared by chemical synthesis methods known in the art.
  • the glycerol compounds of the present invention can be obtained from fungal inoculated soybeans using methods of extracting and separating conventional materials.
  • the soybean can be used to dehydrate properly, macerated or only dehydrated to obtain the desired extract, preferably dehydrated and then pulverized and then ground.
  • the mold as is available the edible fungus, as a kind of such fungi include, but are not limited to, Aspergillus scavenger (Asp. Sogae), Aspergillus duck claim (Asp. Oryzae), Aspergillus Asp. Flavus or R. oligosporus can be used, and preferably Aspergillus sojae can be used.
  • the soybean seed inoculated with the fungus is fermented for a predetermined time and then extracted with a suitable solvent, and the desired extract can be purified using purification methods known to those skilled in the art.
  • Suitable solvents for the extraction may be water or an organic solvent, preferably purified water, methanol (methanol), ethanol (ethanol), propanol (isopropanol), butanol (butanol), acetone (acetone) ), Or a mixture of various solvents such as ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, hexane, and cyclohexane Can be used. More preferably ethanol can be used.
  • the separation and purification of the glycerol compound of the present invention from the soybean extract inoculated with the fungus is characterized by column chromatography and high-performance liquid chromatography filled with various synthetic resins such as silica gel or activated alumina. (HPLC) and the like can be used alone or in combination.
  • the extraction and separation and purification method of the active ingredient is not necessarily limited to the above method.
  • the glycerol compound of the present invention may be used in the form of a purely isolated and purified compound, and may also be used in the form of an extract containing the same.
  • the extract can be obtained by extracting the soybean inoculated with the fungus as water or an organic solvent as described above.
  • the glycerol compound is one of the phytoalexin, such as isoflavone (phytoalexin), has been found to have anti-cancer activity (Payton Stewart F, et. Al., Mol Carcinog . Mar., 4, 2009, Salvo VA, et.al., Clin Cancer Res. , 12, 7159-64, 2006), reported that the glycerol compound can improve menopausal symptoms by having antioxidant and estrogen-like activity. It has not been done.
  • isoflavone phytoalexin
  • the present invention was first identified that the soybean extract containing the glycerol compound and glycerol compound of the present invention has excellent antioxidant activity and estrogen-like activity.
  • a soybean extract containing a glycerol compound prepared according to the method of the present invention that is, a soybean extract inoculated with Aspergillus powder, which is known in the art, the method of ferric reducing ability
  • the antioxidant activity is superior to the soybean extract which does not contain the glycerin compound, that is, the soybean extract not inoculated with Aspergillus.
  • Phenolic content was also higher in soybean extracts containing glycerol compounds (see FIGS. 3A and 3B).
  • the present inventors found that the glycerol compound and the soybean extract containing the glycerol compound have excellent antioxidant activity, and when inoculated with soybean with Aspergillus bacteria, the production of glycerol compound is promoted. The antioxidant activity was also increased further by.
  • active oxygen refers to oxygen that is harmful to the body
  • oxygen is an indispensable substance for humans, it is absorbed into the body when we breathe to generate energy in the cells.
  • some of the absorbed oxygen causes chemical reactions in the body to denature to toxic components, which is oxygen that is toxic.
  • the denaturation is caused by freon gas, exhaust gas, food additives, food peroxides, chemicals, ultraviolet rays, electromagnetic waves, stress, and chemicals made of synthetic synthetic chemicals in the air pollutants. It has a strong oxidizing power that makes your body sick and promotes aging.
  • the glycerol compound of the present invention and the soybean extract containing the glycerol compound has an antioxidant activity to remove the active oxygen which is one of the causes to promote the aging of the human body, thus preventing diseases caused by oxidative stress, It can be used to improve and treat.
  • the present inventors also found that the glycerol compound and glycerol of the present invention in the MCF-7 breast cancer cell line having an estrogen receptor in order to confirm whether the glycerol compound and the glycerol compound containing the glycerol compound of the present invention has estrogen-like activity As a result of treating the soybean extract containing the compound, it was confirmed that the cell proliferation of the MCF-7 cell line was promoted (see Example ⁇ 3-1>).
  • the result of measuring the estrogen activity of the soybean extract containing the glycerol compound and glycerol compound of the present invention in a recombinant yeast strain having a human estrogen receptor the glycerol compound of the present invention was found to be superior in estrogen activity than dydzein and genistein, known as estradiol and estrogen analogues, estrogen hormones used as a positive control group (see FIG. 4).
  • estradiol and estrogen analogues estrogen hormones used as a positive control group
  • FIG. 4 As a result of measuring the expression level of pS2 used as an indicator, it was shown that the soybean extract containing the glycerol compound and glycerol compound of the present invention increased the expression of pS2 more strongly than the estradiol hormone (see FIG. 5).
  • estrogen is a type of endocrine hormone that is synthesized from cholesterol in the body
  • the secretory sources are mainly follicles and corpus luteum of the ovary, and during pregnancy are also secreted in the fetal placenta, adrenal glands and testes.
  • Estrogen secretion in the ovary secretes follicle stimulating hormones and luteinizing hormones, which are hormones that regulate menstrual cycle and enable pregnancy, when gonadotropins secreted from the anterior pituitary gland transmit signals to the reproductive organs, which in turn act on the ovaries Releases estrogen and progesterone Estrogen stimulates the endometrium in the first half of the menstrual cycle to thicken the endometrium and to increase blood supply so that the fertilized egg can be implanted.
  • estrogen is a representative female hormone involved in endometrial proliferation, uterine muscle development, secondary sexual manifestations, mediation of menstrual cycle, maternal change during pregnancy, and stimulation of proliferation of the mammary gland. It functions as described above via. However, in postmenopausal women, estrogen secretion is reduced, causing a variety of symptoms.
  • the soybean extract containing the glycerol compound and the glycerol compound according to the present invention is very excellent in estrogen-like activity can be used to prevent, improve and treat the symptoms of menopausal symptoms caused by estrogen deficiency.
  • the present invention provides a composition for the prevention and improvement of menopausal symptoms containing a glycerol (Clyceollin) compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a glycerol (Clyceollin) compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • composition of the present invention can be used as a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of menopausal symptoms.
  • menopausal symptoms refers to the symptoms appearing in women before and after menopause as the secretion of estrogen decreases due to aging of the ovary, such as fatigue, excitement, insomnia, decreased concentration, depression, memory loss, headache, anxiety , Cardiovascular disorders such as nervousness, timidity, hot flashes, dizziness, paresthesia, palpitations, tachycardia, nausea, constipation, diarrhea, arthralgia, myalgia, cold hands and feet, weight gain, osteoporosis and heart disease, hypertension, stroke (Kalin MF & Zumoff B., Steroids, 55, 330-352, 1990).
  • composition for preventing and improving menopausal symptoms may include a pharmaceutically effective amount of a glycerol compound alone or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents.
  • the pharmaceutically effective amount herein refers to an amount sufficient to prevent, ameliorate and treat menopausal symptoms.
  • the pharmaceutically effective amount of glycerol according to the present invention is 0.5 to 100 mg / day / kg body weight, preferably 0.5 to 5 mg / day / kg body weight.
  • the pharmaceutically effective amount may be appropriately changed according to the degree of menopausal symptoms, the age, weight, health condition, sex, route of administration and duration of treatment of the patient.
  • the pharmaceutically acceptable refers to a composition that is physiologically acceptable and does not cause an allergic reaction such as gastrointestinal disorders, dizziness or the like when administered to humans.
  • carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers and preservatives may be further included.
  • compositions of the present invention may be formulated using methods known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal.
  • the formulations may be in the form of powders, granules, tablets, emulsions, syrups, aerosols, soft or hard gelatin capsules, sterile injectable solutions, sterile powders.
  • composition for preventing and improving menopausal symptoms according to the present invention may be administered through various routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or muscle, and the dosage of the active ingredient is determined by the route of administration, the age, sex, weight and It may be appropriately selected depending on various factors such as the severity of the patient.
  • the composition for preventing and improving menopausal symptoms of the present invention can be administered in parallel with a known compound having the effect of preventing, improving or treating menopausal symptoms.
  • the present invention can provide a medicament for preventing and treating menopausal symptoms, including a composition containing a glycerin compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the composition for preventing and improving menopausal symptoms according to the present invention not only provides an effect of relieving menopausal symptoms through excellent antioxidant effect and estrogen-like effect, but also has no toxicity and side effects for drugs, so it can be used with confidence even for long-term use.
  • the fungus used to obtain the soybean extract containing glycerol in the present invention that is, the Aspergillus dust can also be used as a food grade, so the composition of the present invention has a very stable characteristic to the body.
  • the composition for preventing and improving menopausal symptoms of the present invention can be added to food for the purpose of preventing and improving menopausal symptoms, the composition of the present invention can be used as a composition for food for preventing and improving menopausal symptoms. have.
  • composition for food for the prevention and improvement of menopausal symptoms of the present invention can be easily utilized as foods, such as the main ingredients, secondary ingredients, food additives, functional foods or beverages that are effective in preventing and improving menopausal symptoms.
  • the term “food” refers to a natural product or processed product containing one or more nutrients, and preferably means a state in which it can be directly eaten through a certain processing step, It includes all foods, food additives, functional foods and drinks.
  • Foods to which the composition for preventing and improving menopausal symptoms according to the present invention can be added include, for example, various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, functional foods, and the like.
  • food includes special nutritional products (e.g., formulated milk, young, infant food, etc.), processed meat products, fish products, tofu, jelly, noodles (e.g. ramen, noodles, etc.), bread, health supplements, seasonings.
  • Foods e.g. soy sauce, miso, red pepper paste, mixed soy sauce
  • sauces confectionery (e.g. snacks), candy, chocolates, gums, ice creams, dairy products (e.g.
  • fermented milk, cheese, etc. other processed foods
  • kimchi, Pickled foods various kimchi, pickles, etc.
  • beverages e.g., fruit drinks, vegetable drinks, soy milk, fermented beverages, etc.
  • natural seasonings e.g. ramen soup, etc.
  • the food, beverage or food additives may be prepared by a conventional manufacturing method.
  • the term "functional food” refers to the control of biological defense rhythms and disease prevention of food groups or food compositions that have added value to the food by using physical, biochemical, or biotechnological techniques to act and express the function of the food for a specific purpose. It means a food that is designed and processed to fully express the body's regulatory function regarding recovery and the like, and specifically, it may be a health functional food.
  • the functional food may include food acceptable food additives, and may further include appropriate carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of functional foods.
  • the "beverage” refers to a generic term for drinking to quench thirst or to enjoy a taste and includes a functional drink.
  • the beverage contains, as essential ingredients, a composition for the prevention and amelioration of the menopausal symptoms as an essential ingredient, and there are no special limitations on the other ingredients, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients, such as ordinary drinks. Can be.
  • foods containing compositions for preventing and improving menopausal symptoms of the present invention include various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavoring agents such as flavoring agents, colorants and fillers (cheese). , Chocolate and the like), pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like.
  • the components can be used independently or in combination.
  • the amount of the composition according to the present invention may include 0.001% to 90% by weight of the total food weight, preferably 0.1% by weight to 40% by weight, and in the case of a beverage, may be included in a ratio of 0.001g to 2g, preferably 0.01g to 0.1g based on 100ml, but for health and hygiene purposes or for health control purposes.
  • the active ingredient is not limited to the above range because it can be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.
  • the present inventors conducted the following experiment to separate glycerol, a type of phytoalexin. That is, after sterilizing the surface of the beans for 3 minutes with 70% ethanol, and then washed twice with deionized water for 2 minutes and immersed in water for 4 hours. The sterilized gauze moistened with water was then placed in a culture vessel, placed into 1 / 2-1 / 8 soybeans, and 10 ⁇ l of spore suspension of Aspergillus fungus mold was inoculated on one side of the split soybeans. At this time, the control group was used that was not inoculated with the fungus divided.
  • the culture vessel was packed with black vinyl and left in a dark chamber at 25 for 3 days.
  • the soybean inoculated with fungus 2 was then refluxed with 8L of 80% ethanol for 3 hours at 78.
  • the reflux extract was concentrated under reduced pressure, and then the concentrated extract was dispersed with water, followed by partition extraction with normal-hexane to remove fatty acids.
  • the aqueous layer was partitioned and extracted under ethyl acetate, and then concentrated under reduced pressure to obtain about 25 g of ethyl acetate fraction extract. Got it.
  • the extract was then purified using MPLC chromatography.
  • the filler was then eluted with silica gel 9385 (30x300mm, Merck), changing hexane: (ethylacetate / methanol (1: 1)) from 50: 1 to 5: 1 at 254 nm at a flow rate of 4 mL / min.
  • the collected fractions were collected, and after confirming the presence of glycerol in the second fraction (Fr. 2) of the five fractions by TLC and HPLC, the second fraction was concentrated under reduced pressure. 340 mg of fraction 2 was obtained, This was confirmed to be a glycerol compound through analysis using a mass spectrometer (see FIG.
  • Example 1 to examine whether the fraction of the glycerol compound, that is, the fraction of the soybean extract containing all of the glycerin I, II and III has an antioxidant activity inoculated with the Aspergillus fungus in Example 1 Folin-Ciocalteu assay was performed on the fractions extracted from soybean (containing glycerol). At this time, a fraction of the soybean extract that was not inoculated with Aspergillus granules was used as a control.
  • the Folin-Ciocalteu Assay method is a method for measuring the amount of phenolic compounds having antioxidant activity well known in the art, using a mixture of tungstate and molybdate in an alkaline solution (5-10% water soluble sodium carbonate) If the phenolic compound to be oxidized, O 2 - to form a molybdate and reaction are oxidized molybdenum (MoO 4 -) there is the formation of so measuring the formed material at 750nm and it gallic acid dangryangga (gallic acid equivalent: GAE ).
  • the antioxidant activity of glycerol according to the present invention was measured using a method of ferric reducing ability of plasma (FRAP) (Parker, L. 1999. Method in Enzymology , 293. Oxidants and antioxidants part A. pp. 15- 27)
  • FRAP ferric reducing ability of plasma
  • TPTZ ferric 2,4,6-trippyridyl-s-triazine
  • the mixture was mixed with 170 ⁇ L of sterile water per well, 7 ⁇ L of the fraction of the standard solution and the soybean extract, and 30 ⁇ L of the FRAP solution in a 96-well plate, and then measured for absorbance at 593 nm after 4 minutes.
  • the degree of FRAP was calculated by linear regression analysis of the standard solution of absorbance values.
  • the fraction of soybean inoculated with Aspergillus fungus that is, the fraction containing glycerol
  • Aspergillus fungus was found to have more phenolic content than the fraction of soybean without inoculation.
  • the antioxidant activity was measured through analysis, it was confirmed that the fraction of soybean containing glycerol by fungal inoculation was superior to the fraction of soybean not inoculated with mold.
  • the results indicate that the glycerol compound of the present invention has excellent antioxidant activity.
  • Example 1 In order to confirm whether the glycerol compound of the present invention isolated in Example 1 has estrogen-like activity, the following experiment was performed.
  • the MCF-7 breast cancer cell line which is an estrogen-like substance assay cell line, was used.
  • MCF-7 cells with estrogen receptors were cultured at 37 ° C. with EMEM medium containing 10% charcoal script-FBS at 2 ⁇ 10 4 cell counts / well in 24-well plates. After 24 hours, the medium was removed and replaced with a medium containing a glycerol compound of the present invention in the concentration range of 0.01-500 ⁇ g / mL. Then, after the culture period of 2 days, the degree of cell proliferation was measured by MTT assay method. At this time, the control cell line was an MDA-MB-231 cell line without estrogen receptor.
  • the MCF-7 breast cancer cell line containing the estrogen receptor treated with the glycerol compound according to the present invention promoted cell proliferation compared with the glycerol compound treated with the MDA-MB-231 cell line used as a control group. (Not shown).
  • the present inventors have found that the glycerol compound of the present invention induces estrogen activity in response to the estrogen receptor as an estrogen-like compound.
  • the present inventors measured the estrogen activity of the glycerol compound using a recombinant yeast strain having a gene of the human estrogen receptor.
  • the measurement is based on recombinant yeast strains having human estrogen receptors ( Saccharomyces cerevisiae ER + LYS 8127) was incubated with agitation at 300 rpm in an incubator maintained at 30 ° C.
  • the medium was yeast nitrogen base (6.74 g / L), dextrose (20 g / L), and L-lysine (36 mg). / L) and L-histidine (24 mg / L) were used.
  • the yeast strains OD 600 nm After two days of incubation, the yeast strains OD 600 nm The absorbance at reached 1.0-2.0. Then, 50 ⁇ M of CuSO to produce estrogen receptor from the yeast 4 end OD added medium 600 nm Dilute to 0.03 at. Then, in a 50 mL conical tube, 5 mL of the diluted yeast and each sample (i.e., the fraction of soybean extract inoculated with mold, the fraction of soybean extract inoculated with mold, the glycerol compound isolated in the present invention, Dyezein, Genistein, estradiol as a positive control group, DMSO as a negative control group was added in each concentration (0.1, 1.0, 10.0 ⁇ g / ml), and then incubated with stirring at 300 rpm in an incubator maintained at 30 °C temperature .
  • each sample i.e., the fraction of soybean extract inoculated with mold, the fraction of soybean extract inoculated with mold, the glyce
  • OD yeast in which each of the above materials is treated 600 nm Dilute to a value of 0.25 at and add 100 to 96-well plates. Then, OD to measure each badge color 590 nm Absorbance was measured at, and ⁇ -Galactosidase activity was 2 mg / ml.
  • estradiol hormone a positive control group
  • estradiol hormone a positive control group
  • Estrogen activity was higher than that of the treatment, and estrogen-like substances such as genistein and diazein also showed estrogen activity, but the activity was lower than that of the glycerol compound of the present invention. appear.
  • the fraction of the soybean extract not inoculated with the fungus was found to have a very low estrogen activity (see FIG. 4).
  • pS2 protein is the first protein expressed when a human breast cancer cell line is stimulated by estrogen.
  • the expression level of the protein is used as an index indicating the activity of estrogen.
  • the present inventors conducted an experiment to confirm whether the expression of the pS2 protein is promoted in the estrogen activity of the glycerol compound of the present invention.
  • the cells of the MCF-7 breast cancer cell line used in Example ⁇ 3-1> were dispensed on a plate of 56 cm 2 , and then, as a fungus, a fraction of the soybean extract inoculated with the fungus in the culture medium.
  • the PCR reaction was carried out in a PCR thermocycler (MJ Research), the first strand synthesis conditions of cDNA was subjected to initial denaturation for 2 minutes at 95 o C, then 1 minute at 94 o C, 60 o C for amplification reaction The reaction was repeated 30 times for 1 minute at 72 o C at 30 minutes, and the PCR reaction was completed by 10 minutes at 72 o C. Then, the PCR reaction product was confirmed by electrophoresis using 1% agarose gel.
  • the MCF-7 cell line was treated with the glycerin compound of the present invention, the expression of pS2 was higher than the treatment with estradiol hormone, and the fraction of the soybean seed inoculated with the fungus (glycerol PS2 expression was higher than that treated with estradiol hormone.
  • the fraction of the soybean extract that was not inoculated with the fungus was found to have a lower expression level of pS2 than that of the negative control DMSO (see FIG. 5).
  • the glycerol compound according to the present invention acts to increase the expression of pS2, and the glycerol compound has a very good estrogen-like activity.
  • the estrogen activity of glycerol was confirmed to be superior to the estrogen hormone estradiol, it was found that the glycerol compound of the present invention can be used for the prevention, improvement and treatment of menopausal symptoms.
  • composition for preventing and relieving of menopausal symptoms Composition for preventing and relieving of menopausal symptoms

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Abstract

본 발명은 글리세올린을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 식용 곰팡이를 접종한 콩으로부터 추출한 글리세올린을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 글리세올린 화합물은 항산화 활성이 우수하고 에스트로겐 유사활성이 있어 노화 및 에스트로겐 결핍으로 인한 갱년기 증상을 예방 및 개선할 수 있는 효과가 있으며 부작용이 없기 때문에 갱년기 증상의 치료를 위한 호르몬 대체요법 및 건강 기능성 식품의 소재로 사용할 수 있는 효과가 있다.

Description

글리세올린을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물
본 발명은 글리세올린을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 식용 곰팡이를 접종한 콩으로부터 추출한 글리세올린을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다.
과학과 문명의 발달로 산업화된 현대를 살아가는데 있어서 인간은 그 수명이 점차 연장됨과 동시에 각종 스트레스, 공해 및 자연발생적인 노화 현상 등으로 인하여 면역력이 저하되고 노화가 진행되게 된다. 특히 여성의 경우 40대 이후 서서히 시작되는 갱년기 증상으로 인해 신체적 및 정신적 어려움을 겪고 있다.
한편, 갱년기란 내분비 증후군의 일종으로 난소기능의 전반적이고 점진적인 노화로 인한 여성호르몬, 즉 에스트로겐의 감소로 인해 생리적 기능 및 성기능이 감소 내지 소실되는 과도기를 말한다. 이러한 갱년기의 증상으로는 안면홍조, 빈맥, 발한 또는 두통과 같은 혈관성 변화에 의한 증상이 있고, 근육통, 관절통 및 요통과 같은 근골격계 변화에 의한 증상이 있으며, 빈뇨 또는 요실금과 같은 비뇨생식기 변화에 의한 증상이 있고, 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴 및 현기증과 같은 뇌신경계 변화에 의한 증상이 있으며, 이 외에도 시력감퇴 및 피부와 모발이 변화되는 증상들이 발생되며, 호르몬 변화로 인한 골다공증이나 심혈관계 질환 등 여성의 건강에 치명적인 질환이 발생되기도 한다.
따라서 중년 여성들의 신체적, 정신적 건강 및 삶의 질을 개선하기 위하여 갱년기 증상을 개선할 수 있는 치료제의 개발이 요구되었으며, 이러한 갱년기 증상의 개선을 위해 호르몬 대체요법 및 비스테로이드계 제제 등의 약물들이 개발된 바 있다. 그러나 이들 약물의 경우 대부분이 두통 및 체중증가 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있으며, 특히, 에스트로겐 대체요법의 경우에도 인위적으로 체내에 호르몬을 투여하는 것이기 때문에 이에 대한 거부반응과 함께 자궁출혈, 뇌졸중, 심장발작, 유방암 및 자궁암의 발생 위험이 증가될 수 있는 것으로 알려져 있다(Swaran L., et. al., Obstetrics & Gynecology, 91, 678-684, 1998).
따라서 이와 같은 문제점들 때문에 식품이나 첨가물의 형태로 섭취하는 자연적인 방법으로 에스트로겐 요법을 대체하고자 하는 관심이 높아지고 있으며, 부작용이 없으면서도 갱년기의 증상을 완화시키는 효과가 우수한 새로운 갱년기 치료제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
한편, 식물성 에스트로겐은 에스트로겐 활성을 갖는 식물 내에 존재하는 여러 종류의 화합물을 통칭하는 것으로서, 화학적 구조의 공통적인 골격으로 두 개의 페놀고리를 갖는다. 식물성 에스트로겐은 크게 이소플라본(isoflavone), 쿠메스탄 (coumestan) 및 리그난(lignan)의 3종류로 나눌 수 있는데, 이중에서 이소플라본은 식물체 내에서는 바이오카닌 A(biochanin A) 및 포르모노네틴(formononetin)의 비활성형 배당체로서 존재하고 있으며, 사람의 체내로 흡수되면 글루코시다제(glucosidase)에 의해 각각 에스트로겐과 유사한 구조를 갖는 제니스테인(genistein) 및 다이드제인(daidzein)으로 변환되어 에스트로겐과 같은 활성을 나타내게 된다. 또한, 식물성 에스트로겐을 함유하고 있는 식물로는 주로 콩을 포함한 콩 가공식품(두유, 두부, 된장 등)과 각종 곡류, 과일류 및 클로버 등이 있으며, 이소플라본의 경우는 주로 콩과 식물에, 리그난의 경우는 주로 곡류에 많이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.
글리세올린(glyceollins)은 이소플라본(isoflavone)과 같이 피토알렉신(phytoalexin) 중의 하나로 식물체들이 미생물에 의한 감염이나 무기염류와 같은 물질에 의해 스트레스를 받을 경우 생산되는 저분자량의 물질이며, 피토알렉신은 항균 작용을 갖고 있지만 인체에는 무해한 것으로 알려져 있고(Boue et. al., J Agric Food Chem. Jun., 48, 6, 2167-72, 2000), 최근에는 항암 및 항염증 효과 등이 알려지면서 새로운 기능성 물질로 주목 받고 있는데, 일예로 포도의 레스베라트롤(resveratrol)의 경우, 가장 대표적인 피토알렉신으로서 항산화 및 항암 효과 이외에도 인체의 뇌, 간, 신장 등 신체의 일부 조직에서 만들어지는 단백질 탈아세틸화효소인 시르투인(sirtuin)의 경로를 활성화하여 칼로리 섭취를 낮추고 수명을 연장시키는 효과가 있는 것으로 알려진 바 있다. 그러나 이 외에 피토알렉신이 가지고 있는 다른 기능에 대한 연구는 거의 되어 있지 않은 실정이다.
또한, 글리세올린(glyceollins)은 곰팡이 감염에 의해 콩에서 유도되는 물질로서 일반 콩에는 존재하지 않으며, 콩을 식용에 안전한 아스퍼질러스 소제(Asp. sogae), 아스퍼질러스 오리제(Asp. oryzae), 아스퍼질러스 플레이버스(Asp. flavus) 또는 리조푸스 올리고스포러스(R. oligosporus)로 처리할 경우, 글리세올린 및 옥소옥타데카노익산 (oxooctadecadienoic acids) 등 피토알렉신들의 생산을 유도할 수 있는 것으로 알려져 있고 (Boue et al., J Agric Food Chem. Jun. 48(6), 2167-72, 2000, Feng et. al., J Agric Food Chem. Oct., 17, 55(21), 8589-95, 2007), 최근에는 이러한 글리세올린이 유방암 및 난소암과 같은 암의 발병을 예방하고 진행을 억제하는 효과가 있는 것으로 보고되고 있다. 그러나 상기 기능 이외에 글리세올린이 가지고 있는 다른 기능들에 대해서는 전혀 밝혀진 바가 없다.
이에 본 발명자들은 부작용이 없으면서도 갱년기의 증상을 개선시킬 수 있는 효과가 우수한 새로운 갱년기 증상 개선용 조성물을 개발하던 중, 곰팡이를 접종한 콩에서 분리된 글리세올린 화합물이 우수한 항산화활성 및 에스트로겐 유사활성이 있어 갱년기의 증상을 개선할 수 있는 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 글리세올린(glyceollin) 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 곰팡이균으로 접종한 콩을 물 또는 유기용매로 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 식품을 제공하는 것이다.
나아가 본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 갱년기 증상의 예방 및 치료용 약제를 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 글리세올린(glyceollin) 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 곰팡이균으로 접종한 콩을 물 또는 유기용매로 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 식품을 제공한다.
나아가 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 갱년기 증상의 예방 및 치료용 약제를 제공한다.
본 발명에 따른 글리세올린 화합물은 항산화 활성이 우수하고 에스트로겐 유사활성이 있으므로 노화 및 에스트로겐 결핍으로 인한 갱년기 증상을 예방 및 개선할 수 있는 효과가 있으며 부작용이 없기 때문에 갱년기 증상의 치료를 위한 호르몬 대체요법 및 건강 기능성 식품의 소재로 사용할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명에 따른 글리세올린 화합물을 분리 및 정제하는 공정을 모식도로 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 방법으로 분리 및 정제한 글리세올린 화합물을 질량분석기를 이용하여 확인한 그래프를 나타낸 것이다.
도 3a는 아스퍼질러스 소제로 접종한 콩 추출물(글리세올린 함유) 및 접종하지 않은 콩 추출물에 포함된 항산화 성분인 총 페놀의 함량을 비교한 그래프이다.
도 3b는 아스퍼질러스 소제로 접종한 콩 추출물(글리세올린 함유) 및 접종하지 않은 콩 추출물에 대하여 FRAP(ferric reducing ability of plasma) 방법을 이용하여 항산화 활성 정도를 비교한 그래프이다.
도 4는 인간의 에스트로겐 수용체의 유전자를 가지고 있는 재조합 이스트 균주에 대하여 본 발명에 따른 글리세올린 화합물, 아스퍼질러스 소제로 접종한 콩 추출물(글리세올린 함유), 접종하지 않은 콩 추출물, 에스트라디올, 다이드제인, 제니스테인 및 DMSO를 각각 처리한 후 에스트로겐 활성도를 비교한 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 글리세올린 화합물, 아스퍼질러스 소제로 접종한 콩 추출물(글리세올린 함유), 접종하지 않은 콩 추출물, 에스트라디올 및 DMSO를 MCF-7 유방암 세포주에 각각 처리한 후 에스트로겐 유사 활성의 지표인 pS2의 발현 정도를 RT-PCR을 통해 비교한 결과를 나타낸 것이다.
본 발명은 글리세올린(glyceollin) 화합물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.
본 발명에 따른 상기 글리세올린 화합물은 하기 화학식 I 내지 III으로 표시되는 글리세올린 화합물 I, II 또는 III일 수 있다.
<화학식 I>
Figure PCTKR2010002331-appb-I000001
<화학식 II>
Figure PCTKR2010002331-appb-I000002
<화학식 III>
Figure PCTKR2010002331-appb-I000003
또한, 본 발명에 따른 상기 글리세올린 화합물은 염, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하며, 상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.
본 발명에 따른 글리세올린 화합물은 천연으로부터 분리되거나 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조할 수 있다.
바람직하게, 본 발명의 글리세올린 화합물은 종래의 물질을 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 곰팡이가 접종된 콩으로부터 수득될 수 있다. 이때, 상기 콩은 목적하는 추출물을 획득하기 위해 적절히 탈수하여 침연(macerated)하거나 또는 단지 탈수하여 사용할 수 있고, 바람직하게는 탈수하여 침연한 후 분쇄한 것을 사용할 수 있다. 또한, 상기 곰팡이로는 식용 가능한 곰팡이를 사용할 수 있으며, 이러한 곰팡이의 종류로는 이에 제한되지는 않으나, 아스퍼질러스 소제(Asp. sogae), 아스퍼질러스 오리제(Asp. oryzae), 아스퍼질러스 플레이버스(Asp. flavus) 또는 리조푸스 올리고스포러스(R. oligosporus)를 할 수 있으며, 바람직하게는 아스퍼질러스 소제(Aspergillus sojae)를 사용할 수 있다. 상기 기술한 바와 같이, 곰팡이로 접종한 콩은 일정시간 동안 발효시킨 다음, 적절한 용매로 추출하고, 목적하는 추출물은 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에게 알려진 정제 방법을 이용하여 정제될 수 있다.
상기 추출을 위한 적절한 용매로는 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 보다 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다.
또한, 곰팡이가 접종된 콩 추출물로부터 본 발명의 글리세올린 화합물의 분리 및 정제는 실리카겔(silica gel)이나 활성 알루미나(alumina)등의 각종 합성수지를 충진한 컬럼 크로마토그라피(column chromatography) 및 고속액체크로마토그라피(HPLC) 등을 단독으로 혹은 병행하여 사용할 수 있다. 그러나 유효성분의 추출 및 분리정제 방법은 반드시 상기한 방법에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 글리세올린 화합물은 순수하게 분리·정제된 화합물의 형태로 사용될 수 있으며, 또한 이를 함유하는 추출물의 형태로도 사용될 수 있다. 상기 추출물은 상기한 바와 같이 곰팡이에 접종된 콩을 물 또는 유기용매로 추출하여 얻을 수 있다.
한편, 글리세올린 화합물은 이소플라본(isoflavone)과 같이 피토알렉신(phytoalexin) 중의 하나로서, 항암활성을 가지고 있는 것으로 밝혀진 바 있으나(Payton Stewart F, et. al., Mol Carcinog. Mar., 4, 2009, Salvo VA, et. al., Clin Cancer Res., 12, 7159-64, 2006), 상기 글리세올린 화합물이 항산화 활성 및 에스트로겐 유사 활성을 가짐으로써 갱년기 증상을 개선할 수 있다는 내용에 대해서는 전혀 보고된 바가 없다.
반면, 본 발명에서는 본 발명의 글리세올린 화합물 및 글리세올린 화합물을 포함하는 콩 추출물이 우수한 항산화 활성 및 에스트로겐 유사활성을 가지고 있다는 사실을 최초로 규명하였다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 방법에 따라 제조된 글리세올린 화합물을 함유하는 콩 추출물, 즉, 아스퍼질러스 소제로 접종한 콩 추출물을 당업계에 공지된 방법인 FRAP(ferric reducing ability of plasma) 방법을 통해 항산화 활성도를 측정한 결과, 글리세올린 화합물을 함유하지 않은 콩 추출물, 즉, 아스퍼질러스 소제로 접종하지 않은 콩 추출물에 비해 항산화 활성이 월등히 우수한 것을 확인할 수 있었으며, 항산화 성분인 페놀 함량 또한 글리세올린 화합물을 함유하는 콩 추출물에서 더 높게 나타났다(도 3a 및 3b 참조).
따라서 상기 결과를 통해 본 발명자들은 글리세올린 화합물 및 글리세올린 화합물을 함유하는 콩 추출물이 우수한 항산화 활성이 있다는 것을 알 수 있었으며, 아스퍼질러스속 균으로 콩을 접종할 경우, 글리세올린 화합물의 생산 유도를 촉진함으로써 항산화 활성 또한 더욱 증가함을 알 수 있었다.
한편, 활성산소는 몸에서 해로운 작용을 하는 산소를 말하는 것으로, 산소는 인간에게 없어서는 안될 중요한 물질로서 우리가 호흡을 할 때 체내에 흡수되어 세포 안에서 에너지를 생성하는 역할을 한다. 이때 흡수된 산소의 일부가 체내에서 화학반응을 일으켜 독성을 갖는 성분으로 변성되는데, 이러한 독성이 있는 산소가 바로 활성산소이다. 이렇게 변성되는 이유는 대기 오염물질속의 프레온가스, 배기가스, 식품첨가물, 식품과산화물, 화학약품, 자외선, 전자파, 스트레스, 인공합성 화학물질로 만든 약품 등에 기인하는 것으로, 활성산소는 세포와 염색체까지도 변질시키는 강력한 산화력을 가지고 있어 몸을 병들게 하고 노화를 촉진시키게 된다.
따라서 본 발명의 글리세올린 화합물 및 상기 글리세올린 화합물을 포함하고 있는 콩 추출물은 인체의 노화를 촉진시키는 원인 중 하나인 활성산소를 제거하는 항산화 활성을 가지고 있으므로 산화적 스트레스로 인해 발생하는 질환들을 예방, 개선 및 치료하는데 사용될 수 있다.
또한, 본 발명자들은 본 발명의 글리세올린 화합물 및 글리세올린 화합물을 포함하는 콩 추출물이 에스트로겐 유사활성이 있는지를 확인하기 위해 에스트로겐 수용체를 가지고 있는 MCF-7 유방암 세포주에 본 발명의 글리세올린 화합물 및 글리세올린 화합물을 포함하는 콩 추출물을 처리한 결과, MCF-7 세포주의 세포 증식이 촉진된 것을 확인할 수 있었다(실시예 <3-1> 참조).
또한, 본 발명의 일실시예에 있어서, 인간의 에스트로겐 수용체를 가지고 있는 재조합 이스트(yeast) 균주를 대상으로 본 발명의 글리세올린 화합물 및 글리세올린 화합물을 포함하는 콩 추출물에 대해 에스트로겐 활성도를 측정한 결과, 본 발명의 글리세올린 화합물이 양성대조군으로 사용한 에스트로겐 호르몬인 에스트라디올 및 에스트로겐 유사물질로 알려진 바 있는 다이드제인과 제니스테인 보다도 에스트로겐 활성이 더 우수한 것으로 나타났고(도 4 참조), 나아가 에스트로겐 유사활성의 지표로 사용되고 있는 pS2의 발현정도를 측정한 결과, 본 발명의 글리세올린 화합물 및 글리세올린 화합물을 포함하는 콩 추출물이 에스트라디올 호르몬 보다 pS2의 발현을 더 강하게 증가시키는 것으로 나타났다(도 5 참조).
한편, 에스트로겐(estrogen)이란 내분비계 호르몬의 일종으로 체내에서 콜레스테롤로부터 합성되며, 분비원은 주로 난소의 난포 및 황체이며, 임신 중에는 태아 태반계, 부신 및 정소 등에서도 분비된다. 난소에서의 에스트로겐 분비는 뇌하수체 전엽에서 분비되는 성선자극 호르몬이 생식기관에 신호를 전달하면 월경주기를 조절하고 임신을 가능케 하는 호르몬인 난포자극호르몬과 황체형성호르몬이 분비되고, 이는 다시 난소에 작용하여 에스트로겐과 프로게스테론을 분비하게 한다. 에스트로겐은 월경주기 전반부에 자궁내막을 자극해 수정란이 착상할 수 있도록 자궁내막이 두꺼워지도록 하고 혈액공급량을 증가시키는 작용을 한다. 즉, 에스트로겐은 자궁내막의 증식, 자궁근의 발육, 제2차 성징의 발현, 월경주기 성립의 매개, 임신시의 모체변화 야기, 유선관의 증식분비 촉진 등에 관여하는 대표적인 여성호르몬이며, 에스트로겐 수용체를 매개로 하여 상기와 같은 기능을 한다. 그러나 폐경기 여성 경우, 에스트로겐 분비가 감소되기 때문에 여러 가지 제반 증상이 발생하게 된다.
따라서 에스트로겐의 결핍 개선, 에스트로겐의 분비 촉진 또는 에스트로겐의 유사활성을 가진 물질은 갱년기 증상을 예방 또는 치료하는데 사용할 수 있다. 이에 본 발명에 따른 글리세올린 화합물 및 글리세올린 화합물을 포함하는 콩 추출물은 에스트로겐 유사 활성이 매우 우수하므로 에스트로겐 결핍으로 발생되는 갱년기의 증상들을 예방, 개선 및 치료하는데 사용할 수 있다.
그러므로 본 발명은 글리세올린(glyceollin) 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 상기 본 발명의 조성물은 갱년기 증상의 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물로 사용될 수 있다.
상기 “갱년기 증상”이란 난소의 노화로 인하여 에스트로겐의 분비가 감소됨에 따라 폐경을 전후로 걸쳐 여성에게 나타나는 증상을 말하며, 이러한 증상으로는 피로, 흥분, 불면, 집중력 저하, 우울증, 기억 상실, 두통, 근심, 신경과민, 소심증, 안면홍조, 현기증, 감각이상, 심계항진, 빈맥, 메스꺼움, 변비, 설사, 관절통, 근육통, 수족 냉증, 체중 증가, 골다공증 및 심장병, 고혈압, 뇌졸중 등과 같은 심혈관계의 이상 현상 등이 있다(Kalin MF ＆ Zumoff B., Steroids, 55, 330-352, 1990).
본 발명에 따른 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 글리세올린 화합물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 갱년기 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.
본 발명에 따른 글리세올린의 약학적으로 유효한 양은 0.5 ~ 100 mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.5 ~ 5 mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 갱년기 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.
또한, 상기에서 약학적으로 허용되는이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물은 갱년기 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.
따라서 본 발명은 글리세올린(glyceollin) 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 갱년기 증상의 예방 및 치료용 약제를 제공할 수 있다.
나아가 본 발명에 따른 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물은 우수한 항산화 효과 및 에스트로겐 유사 효과를 통해 갱년기 증상을 완화시키는 효과를 제공할 뿐만 아니라, 약물에 대한 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 본 발명에서 글리세올린을 포함하는 콩 추출물을 수득하기 위해 사용한 곰팡이, 즉, 아스퍼질러스 소제 또한 식품 등급으로 사용할 수 있는 것이므로 상기 본 발명의 조성물은 체내에 대해 매우 안정한 특징이 있다.
따라서 본 발명의 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물은 갱년기 증상의 예방 및 개선을 목적으로 하는 식품에 첨가할 수 있으므로, 상기 본 발명의 조성물을 갱년기 증상의 예방 및 개선을 위한 식품용 조성물로 사용할 수 있다.
그러므로 본 발명의 갱년기 증상의 예방 및 개선을 위한 식품용 조성물은 갱년기 증상의 예방 및 개선에 효과가 있는 식품, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.
본원에서 상기 “식품”이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.
본원발명에 따른 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본원발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
또한, 상기 “기능성 식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
또한, 본원발명에서 상기“음료”란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
나아가 상기 기술한 것 이외에 본원발명의 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본원발명의 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물을 함유하는 식품에 있어서, 상기 본 발명에 따른 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.001중량% 내지 90중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1중량% 내지 40중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100ml를 기준으로 0.001g 내지 2g, 바람직하게는 0.01g 내지 0.1g의 비율로 포함할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
글리세올린의 분리 및 정제
본 발명자들은 피토알렉신의 한 종류인 글리세올린을 분리하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다. 즉, 70%의 에탄올로 3분간 콩의 표면을 살균한 후, 탈이온수로 2분간 2번 세척하고 4시간 동안 물에 침지시켰다. 이후, 물로 적셔진 살균된 거즈를 배양용 용기에 깔고, 1/2-1/8로 분할된 콩을 놓고, 10 ㎕의 아스퍼질러스 소제 곰팡이의 포자 부유물을 분할된 콩의 일면에 접종하였다. 이때, 대조군으로는 분할된 콩에 곰팡이를 접종하지 않은 것을 사용하였다. 상기 방법으로 곰팡이를 콩에 접종 후, 배양용기를 검은 비닐로 포장한 후 3일 동안 25의 어두운 챔버에 방치하였다. 이후 곰팡이로 접종된 콩 2을 78에서 3시간 동안 80% 에탄올 8L로 환류 추출하였다. 이후 환류추출물은 감압농축 후, 농축엑기스를 물로 분산시킨 다음 노르말-헥산으로 분배추출하여 지방산을 제거하였으며, 물층을 다시 에틸아세테이트로 분배추출 한 다음, 감압 농축하여 약 25 g의 에틸아세테이트 분획 추출물을 얻었다. 이후 상기 추출물은 MPLC 크로마토그래피를 이용하여 분리정제 하였다. 이때 충진제는 실리카겔 9385(30x300mm, Merck)을 사용하여 4mL/min의 유속으로 UV 254nm에서 헥산:(에틸아세테이트/메탄올(1:1))을 50:1에서 5:1로 변화시키면서 각각 5개의 용출된 분획을 수집하였으며, 5개의 분획 중 2번 분획(Fr. 2)에 글리세올린이 존재하는 것을 TLC 및 HPLC를 이용하여 확인한 후, 2번 분획을 감압 농축하였다. 2번 분획을 340 mg 확보하였고, 이를 질량 분석기를 이용한 분석을 통해 글리세올린 화합물임을 확인하였으며(도 2 참조), 상기 본 발명의 방법으로 분리된 글리세올린 화합물은 하기 화학식 I 내지 III의 구조를 갖는 글리세올린 I, II 및 III이었다. 또한, 본 발명의 방법에 따라 곰팡이가 접종된 콩으로부터 글리세올린 화합물을 분리하는 분리공정은 도 1에 나타내었다.
<화학식 I> <화학식 II> <화학식 III>
Figure PCTKR2010002331-appb-I000004
<실시예 2>
본 발명에 따른 글리세올린 화합물의 항산화 활성 측정
상기 실시예 1에서 글리세올린 화합물, 즉, 글리세올린 I, II 및 III을 모두 함유하고 있는 콩 추출물의 분획이 항산화 활성을 가지고 있는지를 조사하기 위하여 상기 실시예 1에서 아스퍼질러스 소제 곰팡이로 접종된 콩으로부터 추출된 분획(글리세올린 함유)을 대상으로 Folin-Ciocalteu 어세이 방법을 수행하였다. 이때 대조군으로는 아스퍼질러스 소제 곰팡이를 접종하지 않은 콩 추출물의 분획을 사용하였다. 상기 Folin-Ciocalteu 어세이 방법은 당업계에 잘 알려진 항산화 활성을 갖는 페놀 화합물의 양을 측정하는 방법으로서, 알칼리 용액(5~10%의 수용성 소듐 카보네이트)에서 텅스텐산염 및 몰리브덴산염의 혼합물을 이용하여 페놀계 화합물이 산화될 경우, O2 -를 형성하여 몰리브덴산염과 반응하고 산화 몰리브데늄(MoO4 -)을 형성하게 되는데 이렇게 형성된 물질을 750nm에서 측정하며 이를 갈릭산 당량가(gallic acid equivalent: GAE)로 나타내는 방법이다.
또한, 본 발명에 따른 글리세올린의 항산화 활성 측정은 FRAP(ferric reducing ability of plasma) 방법을 이용하여 수행하였는데(Parker, L. 1999. Method in Enzymology, 293. Oxidants and antioxidants part A. pp. 15-27), 상기 FRAP 방법은 페릭 2,4,6-트리피리딜-에스,-트이라진(ferric-2,4,6-tripyridyl-s-triazine)(TPTZ) 시약의 산화반응에 의해 2가의 철이 3가로 산화되면서 발색 산물로 전환되는 원리를 이용한 것으로서, 황산제일철을 사용하여 1mM 용액(0.278g FeSO47H2O/L)을 제조 후 이를 표준용액으로 사용하였으며, FRAP 용액은 300mM 아세테이트 버퍼(pH 3.6) 200 mL, 10mM TPTZ 용액 20mL, 20mM의 FeCl3 용액 20mL 및 24mL의 멸균수를 섞어 제조한 다음 37℃를 유지시켜 사용하였다. 상기와 같이 어세이 용액이 준비된 후, 96-웰 플레이트에 각 웰 당 170μL의 멸균수, 상기 표준용액과 콩 추출물의 분획물 7μL 및 30μL의 FRAP 용액을 섞어준 다음, 4분 후 593nm에서 흡광도를 측정하였으며, FRAP 정도는 흡광도 값의 표준용액에 대한 선형회귀분석을 통해 산출하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 아스퍼질러스 소제 곰팡이로 접종한 콩의 분획, 즉, 글리세올린을 함유한 분획이 곰팡이를 접종하지 않은 콩의 분획보다 페놀 함량이 더 많은 것으로 나타났고, FRAP 분석을 통한 항산화 활성 측정 결과, 곰팡이 접종에 의해 글리세올린을 함유한 콩의 분획이 곰팡이를 접종하지 않은 콩의 분획보다 항산화 활성이 월등이 우수한 것을 확인할 수 있었다.
따라서 상기 결과를 통해 본 발명의 글리세올린 화합물이 우수한 항산화 활성을 가지고 있음을 알 수 있었다.
<실시예 3>
본 발명에 따른 글리세올린 화합물의 에스트로겐 유사활성 측정
상기 실시예 1에서 분리된 본 발명의 글리세올린 화합물이 에스트로겐 유사활성을 가지고 있는지를 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.
<3-1> MCF-7 세포의 증식 측정
본 발명에 따른 글리세올린 화합물의 에스트로겐 유사활성을 측정하기 위하여 에스트로겐 유사물질 검정용 세포주인 MCF-7 유방암 세포주를 사용하였다. 즉,
에스트로겐 수용체를 가지고 있는 MCF-7 세포를 24-웰 플레이트에 2x104 세포수/웰로 10% 차콜 스트립트-FBS가 포함된 EMEM 배지와 함께 분주하여 37℃에서 배양하였다. 24시간 후, 상기 배지를 제거하고 0.01-500μg/mL 농도 범위의 본 발명의 글리세올린 화합물이 포함된 배지로 교체하였다. 그런 뒤 2일간의 배양기간 후, 세포증식 정도를 MTT 어세이 방법으로 측정하였다. 이때 대조군 세포주로는 에스트로겐 수용체가 없는 MDA-MB-231 세포주를 사용하였다.
그 결과, 에스트로겐 수용체를 가지고 있는 MCF-7 유방암 세포주에 본 발명에 따른 글리세올린 화합물을 처리한 경우가 대조군으로 사용한 MDA-MB-231 세포주에 글리세올린 화합물을 처리한 경우에 비해 세포 증식이 촉진된 것을 알 수 있었다(결과 미도시).
따라서 본 발명자들은 상기 결과를 통해 본 발명의 글리세올린 화합물이 에스트로겐 유사 화합물로서 에스트로겐 수용체에 반응하여 에스트로겐 활성을 유도함을 알 수 있었다.
<3-2> 이스트를 이용한 에스트로겐 활성 측정
본 발명자는 상기 <3-1> 방법 이외에도 인간의 에스트로겐 수용체의 유전자를 가지고 있는 재조합 이스트 균주를 이용하여 글리세올린 화합물에 대한 에스트로겐 활성을 측정하였다. 상기 측정은 인간의 에스트로겐 수용체를 가지고 있는 재조합 이스트(yeast) 균주(Saccharomyces cerevisiae ER+LYS 8127)를 30℃ 온도가 유지되는 배양기에서 300 rpm으로 교반하면서 배양하였는데, 이때 배지로는 yeast nitrogen base(6.74 g/L), dextrose(20 g/L), L-lysine(36 mg/L) 및 L-histidine(24 mg/L)로 구성된 배지를 사용하였다. 이틀간의 배양 후, 이스트 균주들이 OD600nm에서 흡광도가 1.0~2.0에 도달되도록 하였다. 이후, 상기 이스트로부터 에스트로겐 수용체를 생산하기 위하여 50 μM의 CuSO4가 첨가된 배지를 OD600nm에서 0.03이 되도록 희석하였다. 그런 뒤, 50 mL 코니칼 튜브에 상기 희석된 이스트 5 mL 및 각각의 시료(즉, 곰팡이로 접종된 콩 추출물의 분획, 곰팡이로 접종되지 않은 콩 추출물의 분획, 본 발명에서 분리한 글리세올린 화합물, 다이드제인, 제니스테인, 양성대조군으로 에스트라디올, 음성대조군으로 DMSO)를 농도별(0.1, 1.0, 10.0 ㎍/ml)로 첨가한 후, 30℃ 온도가 유지되는 배양기에서 300 rpm으로 교반하면서 배양하였다. 상기와 같은 각각의 물질의 처리가 이루어진 이스트를 OD600nm에서 0.25의 수치로 희석하여 96-웰 플레이트에 100 씩 첨가하였다. 이후, 각각의 배지 색깔을 측정하기 위해 OD590nm에서 흡광도를 측정하였으며, β-Galactosidase의 활성은 2 mg/ml의 O-니트로페닐-β-D-갈락토피라노시드(ONPG), 0.1% SDS(sodium dodecyl sulfate), 50 mM β-머캅토에탄올 및 25 U/ml의 자이몰라제(zymolase)가 첨가된 100 버퍼(60 mM Na2HPO4, 40 mM NaH2PO4, 10 mM KCl, 1 mM MgSO4, pH 7.0)를 첨가함으로써 유도하였다. 이후, 20 분간 상온에서 배양한 다음, OD420nm에서 흡광도를 측정하였고, OD420nm-OD590nm 값을 산출하여 음성대조군으로 나머지 값을 나누었으며, 결과를 도 4에 나타내었다.
그 결과, 인간의 에스트로겐 수용체의 유전자를 가지고 있는 재조합 이스트 균주에 곰팡이의 접종으로 인해 글리세올린이 생성된 콩 추출물의 분획 및 본 발명에서 분리한 글리세올린 화합물을 처리한 경우가 양성대조군인 에스트라디올 호르몬을 처리한 경우보다 에스트로겐 활성이 더 우수한 것으로 나타났으며, 에스트로겐 유사물질인 제니스테인 및 다이아제인을 처리하였을 경우 또한 에스트로겐 활성을 나타내었지만 본 발명의 글리세올린 화합물을 처리하였을 경우에 비해서는 그 활성도가 낮은 것으로 나타났다. 반면, 곰팡이를 접종하지 않은 콩 추출물의 분획의 경우에는 에스트로겐 활성이 매우 낮은 것으로 나타났다(도 4 참조).
<3-3> pS2의 mRNA 발현에 따른 에스트로겐 활성 측정
pS2 단백질은 사람의 유방암 세포주가 에스트로겐에 의한 자극을 받을 경우 가장 먼저 발현되는 단백질로서 당업계에서는 상기 단백질의 발현 정도를 에스트로겐의 활성도를 나타내는 지표로 사용되고 있다. 이에 본 발명자들은 본 발명의 글리세올린 화합물에 대한 에스트로겐 활성에 있어서 상기 pS2 단백질의 발현을 촉진시키는지를 확인하는 실험을 수행하였다. 먼저 이를 위해, 상기 실시예 <3-1>에서 사용한 MCF-7 유방암 세포주에 대하여 상기 세포들을 56cm2의 플레이트에 분주한 뒤, 세포를 배양하는 배지에 곰팡이로 접종된 콩 추출물의 분획, 곰팡이로 접종되지 않은 콩 추출물의 분획, 본 발명에서 분리한 글리세올린 화합물, 에스트라디올 및 DMSO를 각각 처리한 후 6 시간 동안 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 MCF-7세포로부터 RNeasy 미니 키트(퀴아젠)을 사용하여 총 RNA를 분리하였으며, 하기 표 1에 기재된 프라이머들을 가지고 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR)을 수행함으로써 pS2 유전자의 발현 정도를 측정하였다, 이때 대조군으로는 베타-튜불린 프라이머를 사용하였다. 상기 PCR 반응은 PCR thermocycler(MJ Research)에서 수행되었으며, cDNA의 첫 번째 가닥 합성 조건은 초기 변성을 95oC에서 2분 동안 실시하였고, 이후 증폭반응을 위해 94oC에서 1분, 60oC에서 1분, 72oC에서 1분간의 반응을 30회 반복하였고, 72oC에서 10분간 반응으로 PCR 반응을 완료하였다. 이후, PCR 반응 생성물은 1% 아가로스 젤을 이용한 전기영동을 통해 확인하였다.
표 1 프라이머 서열
종류 서열 서열목록
β-tubulin 정방향 5'-CATACCTTGAGGCGAGCAAA-3' 1
β-tubulin 역방향 5'-TGAGAAGCCTGAGGTGATGG-3' 2
pS2 정방향 5'-TTTGGAGCAGAGAGGAGGCAATGG-3' 3
pS2 역방향 5'-TGGTATTAGGATAGAAGCACCAGGG-3' 4
그 결과, MCF-7 세포주에 본 발명의 글리세올린 화합물을 처리한 경우, 에스트라디올 호르몬을 처리한 경우보다 pS2의 발현양이 더 많은 것으로 나타났으며, 곰팡이를 접종한 콩 추출물의 분획(글리세올린 함유) 또한 pS2의 발현양이 에스트라디올 호르몬을 처리한 경우보다 더 많은 것으로 나타났다. 반면, 곰팡이를 접종하지 않은 콩 추출물의 분획의 경우에는 pS2의 발현양이 음성대조군인 DMSO를 처리한 경우보다 더 감소한 것으로 나타났다(도 5 참조).
따라서 상기 결과를 통해, 본 발명에 따른 글리세올린 화합물은 pS2의 발현을 증가시키는 작용을 한다는 것을 알 수 있었으며 글리세올린 화합물이 매우 우수한 에스트로겐 유사활성을 갖는다는 것을 알 수 있었다. 또한 글리세올린의 에스트로겐 활성은 에스트로겐 호르몬인 에스트라디올 보다 더 우수함을 확인함으로써 본 발명의 글리세올린 화합물을 갱년기 증상의 예방, 개선 및 치료제의 용도로 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
<110> Industry academy cooperation foundation kyungpook national university
<120> Composition for preventing and relieving of menopausal symptoms
comprising glyceollin
<130> OP10-1005
<150> KR10-2009-34438
<151> 2009-04-21
<160> 4
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> beta-tubulin F
<400> 1
cataccttga ggcgagcaaa 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> beta tubulin R
<400> 2
tgagaagcct gaggtgatgg 20
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pS2 F
<400> 3
tttggagcag agaggaggca atgg 24
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pS2 R
<400> 4
tggtattagg atagaagcac caggg 25

Claims (8)

  1. 글리세올린(glyceollin) 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 글리세올린 화합물은 하기 화학식 I 내지 III으로 표시되는 글리세올린 I, II 및 III으로 이루어진 군중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물.
    Figure PCTKR2010002331-appb-I000005
  3. 곰팡이균으로 접종한 콩을 물 또는 유기용매로 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 곰팡이균은 아스퍼질러스 오리제(Asp. oryzae), 아스퍼질러스 소제(Aspergillus sojae), 아스퍼질러스 플레이버스(Asp. flavus) 및 리조푸스 올리고스포러스(Rhizopus oligosporus)로 이루어진 군중에서 선택된 것을 특징으로 하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 상기 유기용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산 및 시클로헥산으로 이루어진 군중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물.
  6. 제3항에 있어서, 상기 추출물은 글리세올린(glyceollin) 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 갱년기 증상의 예방 및 개선용 식품.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 갱년기 증상의 예방 및 치료용 약제.
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