WO2010040317A1 - 一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物 - Google Patents

一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
WO2010040317A1
WO2010040317A1 PCT/CN2009/074330 CN2009074330W WO2010040317A1 WO 2010040317 A1 WO2010040317 A1 WO 2010040317A1 CN 2009074330 W CN2009074330 W CN 2009074330W WO 2010040317 A1 WO2010040317 A1 WO 2010040317A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
heparin
mixture
activity
salt
polysaccharide
Prior art date
Application number
PCT/CN2009/074330
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
徐学明
Original Assignee
上海喜恩医药科技发展有限公司
上海医药工业研究院
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 上海喜恩医药科技发展有限公司, 上海医药工业研究院 filed Critical 上海喜恩医药科技发展有限公司
Publication of WO2010040317A1 publication Critical patent/WO2010040317A1/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/727—Heparin; Heparan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
    • C08B37/0078—Degradation products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/10—Heparin; Derivatives thereof

Definitions

  • a pharmaceutical composition comprising as an active ingredient the above-described heparin-derived polysaccharide mixture of the invention and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the heparin ester alkali metal salt is degraded with an alkali metal hydroxide in an aqueous solvent at pH 10-14 (more preferably pH 1 1-13) to form a degraded heparin-derived polysaccharide.
  • aqueous solvent includes water and a mixed solvent of water and an alcohol such as methanol or ethanol.
  • an aqueous solution having an alcohol content of less than 5% (v/v) can be regarded as an aqueous solvent.
  • the temperature in the degradation reaction is usually 50 ° C to 90 ° C, preferably 60 ° C to 85 ° C, and the reaction time is in the range of 30 minutes to 3 hours, preferably 1 to 3 hours.
  • the water/ester weight ratio is usually in the range of 5 to 50: 1, preferably 10 to 30:1. 4.
  • the prepared heparin-derived polysaccharide it can be isolated and purified by a conventional method.
  • polysaccharide mixture of the present invention has the following characteristics:
  • These polysaccharide mixtures are in the form of alkali metal or alkaline earth metal salts.
  • alkali metal salt or alkaline earth metal salt preferred are sodium, potassium, calcium and magnesium salts.
  • Pharmaceutical composition and method of administration are sodium, potassium, calcium and magnesium salts.
  • heparin-derived polysaccharide mixture of the present invention can also be used for the treatment or adjuvant treatment of cardiovascular diseases and cerebrovascular diseases.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared and administered by a conventional method.
  • a preferred method of administration is Subcutaneous or intravenous administration.
  • the main advantages of the invention are:
  • heparin benzyl ester (7. lg) in the form of a sodium salt (abbreviated as "heparin benzyl ester sodium salt") was obtained. The degree of esterification was determined to be 91%.
  • the heparin benzyl ester (5 g) obtained as above in the form of a sodium salt was dissolved in water (125 ml) and heated to 75 °C. To this solution was added sodium hydroxide (0.45 g) and the temperature was maintained at 75 ° C for 1.5 hours to degrade heparin. The reaction mixture was then cooled to about 20 ° C and neutralized by the addition of hydrochloric acid. Additional sodium chloride was added to bring the sodium chloride concentration in the reaction mixture to 10% (w/v).
  • the heparin-derived polysaccharide mixture prepared in the previous step was dissolved in water to form an aqueous solution having a concentration of about 10%.
  • the pH was adjusted to 8. 4 ⁇ 0.2 with IM NaOH.
  • the borohydride is eliminated by the use of 3M hydrochloric acid to adjust the pH to 4. 0-4. 4 to eliminate excessive hydroboration. Things. Allow to stand for 30 minutes and adjust the pH to 7.0 with 2M Na0H. Then, a volume of 3 volumes of methanol was added to precipitate a precipitate, which was filtered to obtain a filter cake, which was washed with methanol and dried in vacuo to give a purified heparin-derived polysaccharide mixture (white, 3. 7 g).
  • the properties of the heparin-derived polysaccharide mixture were determined as follows:
  • the constituent polysaccharide in the mixture has an unsaturated 4,5-glucuronic acid 2-0-sulfate structural unit at one end thereof as determined by a conventional method.
  • Example 3
  • Benzyl chloride (15 ml) was added to a solution of heparin benzyl ethoxy ammonium salt (15 g) in dichloromethane (75 ml). The solution was heated to 35 ° C for 48 hours. Then, a 10% sodium acetate methanol solution (90 ml) was added to precipitate a heparin benzyl ester sodium salt precipitate. The reaction mixture was filtered to give a cake, which was washed with methanol and dried. Thus, a heparin benzyl ester (7.4 g) in the form of a sodium salt was obtained. The degree of esterification was determined to be 97%. 2. Heparin-derived polysaccharide mixture
  • the heparin benzyl ester (5 g) obtained as above in the form of a sodium salt was dissolved in water (125 ml) and heated to 75 °C.
  • Sodium hydroxide (0.5 g) was added to the solution, and the temperature was maintained at 75 ° C for 1.5 hours to degrade heparin.
  • the reaction mixture was then cooled to about 20 ° C and neutralized by the addition of hydrochloric acid. Additional sodium chloride was added to bring the sodium chloride concentration in the reaction mixture to 10% (w/v).
  • the heparin-derived polysaccharide mixture prepared in the previous step was dissolved in water to form an aqueous solution having a concentration of about 10%.
  • the pH was adjusted to 8.4 ⁇ 0.2 by using IM NaOH.
  • the borohydride is eliminated by the use of 3M hydrochloric acid to adjust the pH to 4. 0-4. 4 to eliminate excessive hydroboration. Things. Allow to stand for 30 minutes and adjust the pH to 2M Na0H to 7. 0.
  • a solution volume of 3 volumes of methanol was added to precipitate a precipitate, which was filtered to obtain a filter cake, which was washed with methanol and dried in vacuo to give a purified heparin-derived polysaccharide mixture (white, 3. 8 g).
  • the properties of the heparin-derived polysaccharide mixture were determined as follows:
  • the constituent polysaccharide in the mixture has an unsaturated 4,5-glucuronic acid 2-0-sulfate structural unit at one end thereof as determined by a conventional method.
  • Example 4
  • Benzyl chloride (15 ml) was added to a solution of heparin benzyl ethoxy ammonium salt (15 g) in dichloromethane (75 ml). The solution was heated to 37 ° C for 36 hours. Then, a 10% sodium acetate methanol solution (90 ml) was added to precipitate a heparin benzyl ester sodium salt precipitate. The reaction mixture was filtered to give a cake, which was washed with methanol and dried. Thus, heparin benzyl ester (7.2 g) in the form of a sodium salt was obtained. The degree of esterification was determined to be 93%.
  • the heparin benzyl ester (5 g) obtained as above in the form of a sodium salt was dissolved in water (125 ml) and heated to 75 °C. To the solution was added sodium hydroxide (0.45 g) and the temperature was maintained at 75 ° C for 1.5 hours to degrade heparin. The reaction mixture was then cooled to about 20 ° C and neutralized with the addition of hydrochloric acid. Additional sodium chloride was added to bring the sodium chloride concentration in the reaction mixture to 10% (w/v).
  • heparin-derived polysaccharide mixture (light yellow, 3. 9 g). 3, purification
  • the heparin-derived polysaccharide mixture prepared in the previous step was dissolved in water to form an aqueous solution having a concentration of about 10%.
  • the pH was adjusted to 8.4 ⁇ 0.2 by using IM NaOH.
  • the borohydride is eliminated by the use of 3M hydrochloric acid to adjust the pH to 4. 0-4. 4 to eliminate excessive hydroboration. Things. 0 ⁇ The pH was adjusted to 7.0 with a 2M Na0H adjustment.
  • heparin-derived polysaccharide mixture (white, 3. 6 g).
  • the properties of the heparin-derived polysaccharide mixture were determined as follows:
  • the constituent polysaccharide in the mixture has an unsaturated at one end thereof
  • Benzyl chloride (15 ml) was added to a solution of heparin benzyl ethoxy ammonium salt (15 g) in dichloromethane (75 ml). The solution was heated to 40 ° C for 24 hours. Then, a 10% sodium acetate methanol solution (90 ml) was added to precipitate a heparin benzyl ester sodium salt precipitate. The reaction mixture was filtered to give a cake, which was washed with methanol and dried. Thus, heparin benzyl ester (7.3 g) in the form of a sodium salt was obtained. The degree of esterification was determined to be 93%.
  • the heparin benzyl ester (5 g) obtained as above in the form of a sodium salt was dissolved in water (125 ml) and heated to 80 °C. To the solution was added sodium hydroxide (0.45 g) and the temperature was maintained at 75 ° C for 1.5 hours to degrade heparin. The reaction mixture was then cooled to about 20 ° C and neutralized with the addition of hydrochloric acid. Additional sodium chloride was added to bring the sodium chloride concentration in the reaction mixture to 10% (w/v).
  • the heparin-derived polysaccharide mixture prepared in the previous step was dissolved in water to form an aqueous solution having a concentration of about 10%.
  • the pH was adjusted to 8. 4 ⁇ 0.1 with IM NaOH.
  • the borohydride is eliminated by the use of 3M hydrochloric acid to adjust the pH to 4. 0-4. 4 to eliminate excessive hydroboration. Things. Allow to stand for 30 minutes and adjust the pH to 7.0 with 2M Na0H. Then, a volume of 3 volumes of methanol was added to precipitate a precipitate, which was filtered to obtain a filter cake, which was washed with methanol and dried in vacuo to give a purified heparin-derived polysaccharide mixture (white, 3. 7 g).
  • Example 6 The results of Examples 2 to 5 show that the heparin-derived polysaccharide mixture of the present invention has excellent antithrombotic properties, has low side effects, and is substantially free of residual components such as an organic base and dermatan sulfate.
  • Example 6 The results of Examples 2 to 5 show that the heparin-derived polysaccharide mixture of the present invention has excellent antithrombotic properties, has low side effects, and is substantially free of residual components such as an organic base and dermatan sulfate.
  • a prescribed amount of the degradation product is dissolved in a certain amount (about 400 ml) of water for injection;
  • the prescribed amount of the degradation product is dissolved in a certain amount (about 400 ml) of water for injection;

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物 技术领域
本发明涉及由肝素衍生的多糖混合物， 及其制备方法与含有所述多糖混 合物的药物组合物。 背景技术
肝素是动物（猪或牛）来源的硫酸多糖混合物，由于它们具有良好的抗血栓 形成性质， 因而得到了广泛应用， 例如制备抗血栓形成药物、 治疗心血管疾病 的药物、 和治疗脑血管疾病的药物等。
然而， 天然肝素有许多缺陷， 这些缺陷限制肝素的应用。一个主要缺陷是 肝素用药过多可致自发性出血， 故每次注射前应测定凝血时间。 此外， 肝素还 可引起过敏反应、 血小板减少、 骨质疏松和自发性骨折。
肝素钠自发性出血危险很大， 临床使用中必须监测凝血时间， 这给医生和 患者均带来很大不便。 同时， 血小板减少和骨质疏松等不良反应也让医生在使 用中有所顾忌。 因此， 广大医药工作者希望找到一种优化方法， 既保留肝素钠 的高效抗血栓， 又能减少其出血等不良反应。
科学研究表明， 肝素的高抗凝血活性（抗凝血因子 I la 活性）可能引起出 血， 降低抗 I la活性可降低出血风险。
肝素的高抗凝血因子 I la活性与其分子链的长短即分子大小有关。 因此， 通过对肝素的化学降解， 可获得低分子肝素， 如对肝素酯的进行碱性降解（或 解聚）， 获得了依诺肝素钠。 临床试验表明， 这些降低了抗凝血因子 I la活性 的低分子肝素大大降低了肝素的出血等缺陷。但是， 这些产物还具有较高抗凝 血因子 I la活性， 因此， 仍然具有一定的出血等风险。
中国专利 CN01814187中公布了一种低分子量肝素混合物， 其平均分子量 为 1500〜3000道尔顿。 然而， 该文献的混合物含有大量（至少约 35%)分子量过 低（如小于 1700道尔顿）因而无抗凝血因子 Xa活性的组分。此外， 该文献公开了 一种制备方法，其中包括了与苄索氯铵二次成盐以及用胍类有机碱进行降解的 步骤。然而， 二次成盐会增加成本， 且胍类有机碱易残留于成品中，造成危害。
因此， 本领域迫切需要开发既具有优异抗血栓形成性质， 且副作用小（如 出血风险低）的肝素产品。 发明内容
本发明的目的就是提供一种具有优异抗血栓形成性质， 且副作用小（如出 血风险低）的肝素产品。 在本发明的第一方面， 提供了一种肝素衍生的多糖混合物，所述混合物是 肝素或肝素酯或肝素酯盐的降解产物， 并且所述混合物具有下述特性：
- 重均分子量为 3100〜4500道尔顿；
- 抗凝血因子 Xa的活性为 100-150 IU/毫克， 抗凝血因子 Ila的活性为
0.001-10 IU/毫克， 且抗凝血因子 Xa活性与抗凝血因子 Ila活性的 比值 10;
- 在所述混合物中的构成多糖中， 在其一端具有不饱和的 4， 5-葡糖醛酸 2-0-硫酸酯结构单元； 和
- 所述的多糖混合物为碱金属盐或碱土金属盐形式。
在另一优选例中， 所述多糖混合物的抗凝血因子 Xa活性是 125-150 IU/ 毫克。
在另一优选例中， 重均分子量是 3200〜4000道尔顿。
在另一优选例中， 所述混合物为钠盐、 钾盐、 钙盐或镁盐形式。
在另一优选例中， 所述混合物的抗凝血因子 Ila活性为 0.01-5 IU/毫克。 在另一优选例中， 所述混合物的抗凝血因子 Xa活性与抗凝血因子 Ila活 性的比值 20， 较佳地 25，更佳地 30。
在另一优选例中， 按下式计， 所述混合物中分子量 1700 道尔顿的肝素 衍生的多糖的含量 Y 20%:
分子量 1700道尔顿的肝素衍生的多糖的重量
Υ= Χ100% 。
肝素衍生的多糖混合物的重量
较佳地， 所述的含量 Υ 15%; 更佳地， 所述的含量 Υ 10%。
在另一优选例中， 所述的肝素是来源于牛、 猪的肝素， 即猪肝素或牛肝 素。
在本发明的第二方面， 提供了本发明上述的肝素衍生的多糖混合物的制 备方法， 包括步骤：
(a)在水性溶剂中，在 pH 10-14 (更佳地 11-13)和碱金属氢氧化物存在下， 降解肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐， 从而形成降解的肝素衍生的多糖； 和
(b)从反应体系中分离或纯化出本发明所述的肝素衍生的多糖混合物。 在另一优选例中， 所述的肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐的酯化度是
60-99%, 更佳地为 70〜95%。
在另一优选例中， 所述的碱金属氢氧化物为氢氧化钾或氢氧化钠。
在另一优选例中， 在降解步骤（a)中， 所述碱金属氢氧化物和肝素苄酯碱 金属盐或碱土金属盐的重量比为 0. 06〜0. 2 , 更佳地为 0. 08〜0. 15。
在步骤（a)中， 反应温度范围在 60°C〜90°C， 更佳地为 70°C〜85 °C ; 反 应时间范围在 30分钟〜 3小时， 更佳地为 1〜3小时。
在另一优选例中， 在步骤 (b)中还包括对制得的所述的肝素衍生的多糖混 合物用硼氢化钠进行脱色处理。
在本发明的第三方面， 提供了本发明所述的肝素衍生的多糖混合物的用 途， 它们被用于（a)制备抗血栓形成药物； （b)制备治疗心血管疾病的药物； 或 (c) 制备治疗脑血管疾病的药物。
在本发明的第四方面， 提供了一种药物组合物， 它含有作为活性组分的 本发明上述的肝素衍生的多糖混合物和药学上可接受的载体。 具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，通过改进肝素衍生多糖混合物的制备方 法，采用在特定条件下用无机碱进行降解， 并用甲醇使得处于特定重均分子量 范围内的衍生多糖析出， 从而首次制备了一种具有优异抗血栓形成性质， 且副 作用小（如出血风险低）的肝素产品。本发明的肝素衍生的多糖混合物具有以下 主要优点： （1) 无活性成分的含量低； （2)抗凝血因子 Xa 的活性高（通常为 100-150 IU/毫克）且抗凝血因子 I la的活性很低（通常为 0. 001-10 IU/毫克）， 故抗凝血因子 Xa活性与抗凝血因子 I la活性的比值远大于 10 (如 20-200或更
如本文所用， 术语 "本发明的混合物"和 "本发明的肝素衍生的多糖混合 物" 可互换使用。
本发明的肝素衍生的多糖混合物可以采用如下方法制备： 在水性溶剂（如 水或水与醇（如甲醇、 乙醇）形成的混合溶剂）中， 借助氢氧化钠， 对高酯化度 的肝素苄酯钠盐进行降解， 从而形成降解的肝素衍生多糖， 然后进行分离和 / 或纯化。
在本发明的一个优选例中， 所述的制备方法包括步骤：
1、将肝素与季铵盐（以苯乙铵盐为佳，例如氯化苄乙氧铵）在惰性溶剂（如 水）中反应形成盐， 从而得到肝素苄乙氧铵盐。
肝素与季铵盐（如氯化苄乙氧铵）的重量比约为 1 : 4， 以 1 : 2. 5〜2. 8为佳。 其中， 反应温度和时间没有特别限制， 通常反应温度可以为 4°C -60°C， 较佳地为 10-5CTC ; 反应时间通常为 5分钟 -24小时。
2、 在惰性溶剂（如二氯甲烷）中， 将肝素铵盐（如肝素苄乙氧铵盐）与苄基 氯反应形成肝素酯。通常所形成的肝素酯的酯化度为 60%〜99%， 优选地 75%〜 95%。在形成肝素酯后， 可进一步与醋酸碱金属盐（如醋酸钠）的甲醇溶液反应， 形成肝素酯碱金属盐。
其中， 酯化反应的温度和时间没有特别限制， 通常反应温度可以为 15-60 °C ; 反应时间通常为 30分钟 -72小时。 一种特别优选的肝素酯是肝素苄酯。
形成肝素酯碱金属盐的反应温度和时间没有特别限制， 通常反应温度可 以为 15-6CTC ; 反应时间通常为 15分钟 -24小时。一种特别优选的肝素酯碱金 属盐是肝素苄酯钠。
在一具体实施例中，为得到范围为 60%〜99%的酯化度，在 3-5份体积的氯 溶剂中， 用每 1份重量肝素苄乙氧铵盐约与 1〜1. 5份体积的苄基氯是特别有 利的， 在温度为 25 °C〜45 °C下， 以 30°C〜40°C为佳， 持续 24〜48小时的反应 时间来进行。 在反应结束后， 加入反应体积 1〜1. 5倍体积的 10%醋酸钠甲醇 溶液， 得到肝素苄酯钠盐。
3、 在水性溶剂中， 在 pH 10-14 (更佳地 pH 1 1-13)下， 用碱金属氢氧化 物对肝素酯碱金属盐进行降解， 形成降解的肝素衍生多糖。
如本文所用， 术语 "水性溶剂" 包括水以及水与醇（如甲醇、 乙醇）形成 的混合溶剂。 例如， 醇含量低于 5% (v/v)的水溶液可视为水性溶剂。
一种优选的无机碱是氢氧化钠。 通常， 碱和酯的重量比范围为 0. 06〜0. 2， 更佳地为 0. 08〜0. 15。
降解反应中的温度通常为 50 °C〜90 °C， 以 60 °C〜85 °C更佳， 反应时间范 围在 30分钟〜 3小时， 以 1〜3小时为佳。
降解反应中， 水 /酯重量比范围通常为 5〜50 : 1， 较佳地为 10〜30 : 1。 4、 对于制得的肝素衍生多糖， 可以用常规方法进行分离和纯化。
本发明的由肝素衍生的多糖混合物， 它们与天然肝素相比， 具有更高的抗 血栓活性和更低的副作用。 换言之， 抗凝血因子 X (因子 Xa)的活性很高， 而抗 凝血因子 I la (因子 I la)的活性很低。 例如， 本发明混合物的抗凝血因子 Xa 活性 /抗凝血因子 I la活性比 10，较佳地 20， 更佳地 25。
更具体地， 本发明的多糖混合物具有下述特性：
它们的重均分子量为 3100-4500 道尔顿， 抗凝血因子 Xa 活性为 100- 150IU/毫克， 抗凝血因子 I la活性为 0. 001 -10IU/毫克， 抗凝血因子 Xa 活性 /抗凝血因子 I la活性比高于 10 ;
这些混合物的构成多糖中， 在其一端具有不饱和的 4， 5-葡萄糖醛酸 2-0- 硫酸酯结构单元；
这些多糖混合物呈碱金属盐或碱土金属盐形式。
在本发明中， 作为碱金属盐或碱土金属盐， 优选地是钠、 钾、 钙和镁盐。 药物组合物和施用方法
本发明的肝素衍生的多糖混合物可以用作抗血栓形成剂， 预防静脉血栓 栓塞性疾病（预防静脉内血栓形成）， 特别是与骨科或普外手术有关的血栓形 成。 治疗已形成的深静脉栓塞， 伴或不伴有肺栓塞。 治疗不稳定心绞痛及非 Q 波心梗， 用于血液透析体外循环中， 防止血栓形成。
此外， 本发明的肝素衍生的多糖混合物还可用于治疗或辅助治疗心血管 疾病和脑血管疾病。
因此， 本发明还提供一种药物组合物， 它含有作为活性组分的本发明的 肝素衍生的多糖混合物和药学上可接受的载体。 通常， 在药物组合物中， 本发 明的肝素衍生的多糖混合物的含量为 0. 01-50wt%,更佳地为 0. l-30wt% o 一种 优选的药物组合物剂型为注射剂（包括溶液和冻干剂）。
本发明的药物组合物可用常规方法制备和施用。 一种优选的施用方法是 皮下或静脉内给药。 本发明的主要优点在于：
(1) 无抗血栓活性的成分含量低（通常可小于 10%)。
(2) 抗凝血因子 Xa的活性高（通常为 100-150 IU/毫克）且抗凝血因子 I la 的活性很低（通常为 0. 001-10 IU/毫克），抗凝血因子 Xa活性与抗凝血因子 I la 活性的比值远大于 10 (如 20-200或更高），因此抗血栓性能优异，且副作用低。
(3)本发明的制备方法无二次成盐步骤， 并且采用无机碱， 故成本低， 不 会产生有机碱残留。
(4) 在本发明的制备低分子肝素混合物的过程中， 硫酸皮肤素（分子量约
20000 道尔顿以上）不会发生降解， 故很容易在后续的分离或纯化步骤中与重 均分子量仅 3100-4500道尔顿的肝素衍生多糖分开，故本发明的混合物中不含 或基本上不含硫酸皮肤素等非肝素成分。 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于 说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验 方法， 通常按照常规条件（如《欧洲药典》 中所述的条件）， 或按照制造厂商所 建议的条件。 除非另外说明， 否则百分比和份数按重量计。 通用测定方法
(1)肝素酯或肝素酯盐的酯化程度可以用常规的 HPLC 来测定， 即通过测 定在 0°C下由酯的皂化所产生的苯甲醇量来确定酯化程度。
(2)分子量和分子量分布以及抗 Xa和抗 I la效价均采用欧洲药典中常规 的低分子肝素质量标准的方法进行。 实施例 1
肝素苄乙氧铵盐的制备
向氯化苄乙氧铵（270g)的水溶液（1250ml)中， 加入含市售的肝素钠（100g) 的水（1000ml)溶液（注： 猪来源的肝素）。 搅拌下放置 30分钟， 形成肝素苄乙 氧铵盐沉淀。 然后， 将反应混合物在室温下过滤， 获得滤饼， 用水洗涤后真空 干燥， 获得肝素苄乙氧铵盐（约 310克）。 实施例 2
肝素衍生的多糖混合物的制备
1、 肝素苄基酯钠盐的制备
将苄基氯（15ml)加入到肝素苄乙氧铵盐（15g)二氯甲烷（75ml)溶液中。 将 溶液加热到 35 °C， 维持 36小时。 然后加入 10%的醋酸钠甲醇溶液（90ml)， 析 出肝素苄基酯钠盐沉淀。 将反应混合物过滤， 获得滤饼， 用甲醇冲洗滤饼并干 燥。 由此得到以钠盐形式存在的肝素苄基酯（7. lg) (简称为 "肝素苄基酯钠 盐" ）。 经测定， 酯化程度为 91%。
2、 肝素衍生的多糖混合物
将上面得到的以钠盐形式存在的肝素苄基酯（5g)溶于水（125ml)中， 加热 至 75 °C。 向此溶液中加入氢氧化钠（0. 45g)， 并维持温度在 75 °C， 1. 5小时， 从而使肝素降解。 然后将反应混合物冷却至约 20°C， 加入盐酸进行中和。 再 加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为 10% (w/v)。 向反应混合物中加 入甲醇（375ml)， 析出沉淀， 过滤获得滤饼， 甲醇洗涤后， 真空干燥， 获得肝 素衍生的多糖混合物（浅黄色， 3. 9g)。 3、 纯化
将上一步骤制备的肝素衍生的多糖混合物溶于水中，形成浓度约 10%的水 溶液。 用 IM NaOH调节 pH至 8. 4 ± 0. 2。 将硼氢化钠（按 15g/kg肝素衍生的多 糖混合物计）加入到该溶液中， 静置 1 个小时， 然后用 3M盐酸将 pH调节至 4. 0-4. 4以消除过多的硼氢化物。 静置 30分钟， 并用 2M Na0H调节调节 pH至 7. 0。 然后加入溶液体积 3倍体积的甲醇，析出沉淀， 过滤获得滤饼， 用甲醇洗 涤后， 真空干燥， 从而得到纯化的肝素衍生的多糖混合物（白色， 3. 7g)。 经测定， 所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
重均分子量 3, 800道尔顿
分子量小于 1700道尔顿的组分含量（Y) 9% 抗凝血因子 Xa活性 146IU/毫克 抗凝血因子 I la活性 9. 6IU/毫克
抗凝血因子 Xa活性 /抗凝血因子 I la活性比 15. 2 此外， 在所述多糖混合物中甲醇和二氯甲烷的残留量测不出， 表明该多 糖混合物的安全性好。
经常规方法测定， 在所述混合物中的构成多糖中， 在其一端具有不饱和 的 4， 5-葡糖醛酸 2-0-硫酸酯结构单元。 实施例 3
肝素衍生的多糖混合物的制备
1、 肝素苄基酯钠盐的制备
将苄基氯（15ml)加入到肝素苄乙氧铵盐（15g)二氯甲烷（75ml)溶液中。 将 溶液加热到 35 °C， 维持 48小时。 然后加入 10%的醋酸钠甲醇溶液（90ml)， 析 出肝素苄基酯钠盐沉淀。 将反应混合物过滤， 获得滤饼， 用甲醇冲洗滤饼并干 燥。 由此得到以钠盐形式存在的肝素苄基酯（7. 4g)。经测定， 酯化程度为 97%。 2、 肝素衍生的多糖混合物
将上面得到的以钠盐形式存在的肝素苄基酯（5g)溶于水（125ml)中， 加热 至 75 °C。 向此溶液中加入氢氧化钠（0. 5g)， 并维持温度在 75 °C， 1. 5小时， 从而使肝素降解。 然后将反应混合物冷却至约 20°C， 加入盐酸进行中和。 再 加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为 10% (w/v)。 向反应混合物中加 入甲醇（375ml)， 析出沉淀， 过滤获得滤饼， 甲醇洗涤后， 真空干燥， 获得肝 素衍生的多糖混合物（浅黄色， 4. 0g)。
3、 纯化
将上一步骤制备的肝素衍生的多糖混合物溶于水中，形成浓度约 10%的水 溶液。 用 IM NaOH调节 pH至 8. 4 ± 0. 2。 将硼氢化钠（按 10g/kg肝素衍生的多 糖混合物计）加入到该溶液中， 静置 1 个小时， 然后用 3M盐酸将 pH调节至 4. 0-4. 4以消除过多的硼氢化物。 静置 30分钟， 并用 2M Na0H调节调节 pH至 7. 0。 然后加入溶液体积 3倍体积的甲醇，析出沉淀， 过滤获得滤饼， 用甲醇洗 涤后， 真空干燥， 从而得到纯化的肝素衍生的多糖混合物（白色， 3. 8g)。 经测定， 所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
Figure imgf000010_0001
经常规方法测定， 在所述混合物中的构成多糖中， 在其一端具有不饱和 的 4， 5-葡糖醛酸 2-0-硫酸酯结构单元。 实施例 4
肝素衍生的多糖混合物的制备
1、 肝素苄基酯钠盐的制备
将苄基氯（15ml)加入到肝素苄乙氧铵盐（15g)二氯甲烷（75ml)溶液中。 将 溶液加热到 37 °C， 维持 36小时。 然后加入 10%的醋酸钠甲醇溶液（90ml)， 析 出肝素苄基酯钠盐沉淀。 将反应混合物过滤， 获得滤饼， 用甲醇冲洗滤饼并干 燥。 由此得到以钠盐形式存在的肝素苄基酯（7. 2g)。经测定， 酯化程度为 93%。
2、 肝素衍生的多糖混合物
将上面得到的以钠盐形式存在的肝素苄基酯（5g)溶于水（125ml)中， 加热 至 75 °C。 向此溶液中加入氢氧化钠（0. 45g)， 并维持温度在 75 °C， 1. 5小时， 从而使肝素降解。 然后将反应混合物冷却至约 20°C， 加入盐酸进行中和。 再 加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为 10% (w/v)。 向反应混合物中加 入甲醇（750ml)， 析出沉淀， 过滤获得滤饼， 甲醇洗涤后， 真空干燥， 获得肝 素衍生的多糖混合物（浅黄色， 3. 9g)。 3、 纯化 将上一步骤制备的肝素衍生的多糖混合物溶于水中，形成浓度约 10%的水 溶液。 用 IM NaOH调节 pH至 8. 4 ± 0. 2。 将硼氢化钠（按 10g/kg肝素衍生的多 糖混合物计）加入到该溶液中， 静置 1 个小时， 然后用 3M盐酸将 pH调节至 4. 0-4. 4以消除过多的硼氢化物。 静置 30分钟， 并用 2M Na0H调节调节 pH至 7. 0。 然后加入溶液体积 3倍体积的甲醇，析出沉淀， 过滤获得滤饼， 用甲醇洗 涤后， 真空干燥， 从而得到纯化的肝素衍生的多糖混合物（白色， 3. 6g)。 经测定， 所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
Figure imgf000011_0001
经氢谱法测定， 在所述混合物中的构成多糖中， 在其一端具有不饱和的
4, 5-葡糖醛酸 2-0-硫酸酯结构单元。 实施例 5
肝素衍生的多糖混合物的制备
1、 肝素苄基酯钠盐的制备
将苄基氯（15ml)加入到肝素苄乙氧铵盐（15g)二氯甲烷（75ml)溶液中。 将 溶液加热到 40°C， 维持 24小时。 然后加入 10%的醋酸钠甲醇溶液（90ml)， 析 出肝素苄基酯钠盐沉淀。 将反应混合物过滤， 获得滤饼， 用甲醇冲洗滤饼并干 燥。 由此得到以钠盐形式存在的肝素苄基酯（7. 3g)。经测定， 酯化程度为 93%。
2、 肝素衍生的多糖混合物
将上面得到的以钠盐形式存在的肝素苄基酯（5g)溶于水（125ml)中， 加热 至 80°C。 向此溶液中加入氢氧化钠（0. 45g)， 并维持温度在 75 °C， 1. 5小时， 从而使肝素降解。 然后将反应混合物冷却至约 20°C， 加入盐酸进行中和。 再 加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为 10% (w/v)。 向反应混合物中加 入甲醇（750ml)， 析出沉淀， 过滤获得滤饼， 甲醇洗涤后， 真空干燥， 获得肝 素衍生的多糖混合物（浅黄色， 3. 9g)。
3、 纯化
将上一步骤制备的肝素衍生的多糖混合物溶于水中，形成浓度约 10%的水 溶液。 用 IM NaOH调节 pH至 8. 4 ± 0. 1。 将硼氢化钠（按 12g/kg肝素衍生的多 糖混合物计）加入到该溶液中， 静置 1 个小时， 然后用 3M盐酸将 pH调节至 4. 0-4. 4以消除过多的硼氢化物。 静置 30分钟， 并用 2M Na0H调节调节 pH至 7. 0。 然后加入溶液体积 3倍体积的甲醇，析出沉淀， 过滤获得滤饼， 用甲醇洗 涤后， 真空干燥， 从而得到纯化的肝素衍生的多糖混合物（白色， 3. 7g)。
Figure imgf000012_0001
实施例 2-5结果表明，本发明肝素衍生的多糖混合物具有优异的抗血栓性 能， 且副作用低， 而且基本上没有有机碱和硫酸皮肤素等不利成分的残留。 实施例 6
药物组合物
注射液的制备（相当于 50mg肝素衍生的多糖混合物 /支）
1 . 处方
实施例 2中制备的肝素衍生的多糖混合物 50克
注射用水 加至 500ml
制成 1000支
2. 工艺 2. 1处方量的降解物溶于一定量（约 400毫升）的注射用水中；
2. 2用注射用水定容至 500ml ;
2. 3无菌过滤， 灌装，
2. 4质量检验。 实施例 7
药物组合物
注射液的制备（相当于 30mg肝素衍生的多糖混合物 /支）
1 . 处方
实施例 5中制备的肝素衍生的多糖混合物 30克
注射用水 加至 500ml
制成 1000支
2. 工艺
2. 1处方量的降解物溶于一定量（约 400毫升）的注射用水中；
2. 2用注射用水定容至 500ml ;
2. 3无菌过滤， 灌装，
2. 4质量检验。 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考， 就如同每一篇文 献被单独引用作为参考那样。此外应理解， 在阅读了本发明的上述讲授内容之 后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改， 这些等价形式同样落于 本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

权 利 要 求
1. 一种肝素衍生的多糖混合物， 所述混合物是肝素或肝素酯或肝素酯盐 的降解产物， 其特征在于， 所述混合物具有下述特性：
- 重均分子量为 3100〜4500道尔顿；
- 抗凝血因子 Xa的活性为 100-150 IU/毫克， 抗凝血因子 I la的活性为 0. 001-10 IU/毫克， 且抗凝血因子 Xa活性与抗凝血因子 I la活性的 比值 10 ;
- 在所述混合物中的构成多糖中， 在其一端具有不饱和的 4， 5-葡糖醛酸 2-0-硫酸酯结构单元； 和
- 所述的多糖混合物为碱金属盐或碱土金属盐形式。
2. 如权利要求 1所述的多糖混合物， 其特征在于， 所述多糖混合物的抗 凝血因子 Xa活性是 125-150 IU/毫克， 和 /或重均分子量是 3200〜4000道尔 顿。
3. 如权利要求 1所述的多糖混合物， 其特征在于， 所述混合物为钠盐、 钾盐、 钙盐或镁盐形式。
4. 如权利要求 1所述的多糖混合物， 其特征在于， 所述混合物的抗凝血 因子 I la活性为 0. 01-5 IU/毫克。
5. 如权利要求 1所述的多糖混合物， 其特征在于， 所述混合物的抗凝血 因子 Xa活性与抗凝血因子 I la活性的比值 20， 较佳地 25，更佳地 30。
6. 如权利要求 1所述的多糖混合物， 其特征在于， 按下式计， 所述混合 物中分子量 1700道尔顿的肝素衍生的多糖的含量 Y 20% :
分子量 1700道尔顿的肝素衍生的多糖的重量
Υ= Χ 100% 。
肝素衍生的多糖混合物的重量
7. 一种权利要求 1所述的肝素衍生的多糖混合物的制备方法， 其特征在 于， 包括步骤：
(a)在水性溶剂中， 在 pH 10-14 和碱金属氢氧化物存在下， 降解肝素苄 酯碱金属盐或碱土金属盐， 从而形成降解的肝素衍生的多糖； 和
(b)从反应体系中分离或纯化出权利要求 1 所述的肝素衍生的多糖混合 物。
8. 如权利要求 7所述的方法， 其特征在于， 所述的肝素苄酯碱金属盐或 碱土金属盐的酯化度是 60-99%， 更佳地为 70〜95%。
9. 如权利要求 1所述的肝素衍生的多糖混合物的用途， 其特征在于， 用 于（a)制备抗血栓形成药物； （b)制备治疗心血管疾病的药物； 或（c)制备治疗 脑血管疾病的药物。
10. 一种药物组合物， 其特征在于， 它含有作为活性组分的权利要求 1 所述的肝素衍生的多糖混合物和药学上可接受的载体。
PCT/CN2009/074330 2008-10-07 2009-09-30 一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物 WO2010040317A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200810200817.8A CN101711771B (zh) 2008-10-07 2008-10-07 一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物
CN200810200817.8 2008-10-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010040317A1 true WO2010040317A1 (zh) 2010-04-15

Family

ID=42100221

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2009/074330 WO2010040317A1 (zh) 2008-10-07 2009-09-30 一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN101711771B (zh)
WO (1) WO2010040317A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102399379B (zh) * 2010-09-09 2016-08-31 上海喜恩医药科技发展有限公司 一种肝素衍生的多糖混合物及其制备方法和药物组合物
CN103012620B (zh) * 2011-09-26 2017-09-19 徐美英 一种高纯度肝素苄酯盐及其制法和应用
CN103012621B (zh) * 2011-09-26 2017-09-19 徐美英 一种高纯度肝素苄酯盐及其制法和应用
CN103175925B (zh) * 2013-03-20 2014-12-03 山东辰中生物制药有限公司 依诺肝素钠生产过程中肝素苄基酯的酯化率的检测方法
CN108503721A (zh) * 2018-03-28 2018-09-07 美瑞多生物科技（天津）有限公司 具有抗凝血功能活性多糖及其制备和应用
CN109762079B (zh) * 2019-01-15 2021-04-27 湖北亿诺瑞生物制药有限公司 一种从肝素副产物中分离提纯舒洛地特原料药的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0133078A1 (fr) * 1983-07-04 1985-02-13 Rhone-Poulenc Sante Oligosaccharides sulfatés, leur procédé de préparation et leur utilisation comme médicaments
US6384021B1 (en) * 1999-07-23 2002-05-07 Laboratorios Farmaceuticos Rovi Heparin compositions of very low molecular weight
CN1852926A (zh) * 2003-07-24 2006-10-25 安万特医药股份有限公司 由肝素衍生的寡糖混合物、其制备方法与含有所述混合物的药物组合物
WO2007140231A2 (en) * 2006-05-25 2007-12-06 Momenta Pharmaceutical, Inc. Low molecular weight heparin composition and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0133078A1 (fr) * 1983-07-04 1985-02-13 Rhone-Poulenc Sante Oligosaccharides sulfatés, leur procédé de préparation et leur utilisation comme médicaments
US6384021B1 (en) * 1999-07-23 2002-05-07 Laboratorios Farmaceuticos Rovi Heparin compositions of very low molecular weight
CN1852926A (zh) * 2003-07-24 2006-10-25 安万特医药股份有限公司 由肝素衍生的寡糖混合物、其制备方法与含有所述混合物的药物组合物
WO2007140231A2 (en) * 2006-05-25 2007-12-06 Momenta Pharmaceutical, Inc. Low molecular weight heparin composition and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CN101711771A (zh) 2010-05-26
CN101711771B (zh) 2015-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6703806B2 (ja) 低抗凝固剤ヘパリン
WO2010040317A1 (zh) 一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物
EP1070503B1 (en) Compositions comprising low molecular weight Heparin
AU2012354229B2 (en) Non anti-coagulative glycosaminoglycans comprising repeating disaccharide unit and their medical use
US10023659B2 (en) Processes for the production of chemically-modified heparins
WO2013044793A1 (zh) 一种高纯度肝素苄酯盐及其制法和应用
CN102399379A (zh) 一种肝素衍生的多糖混合物及其制备方法和药物组合物
NZ625096B2 (en) Low anticoagulant heparins

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09818781

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 09818781

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1