CN103012620B - 一种高纯度肝素苄酯盐及其制法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种高纯度肝素苄酯盐及其制法和应用。具体地,本发明的肝素苄酯盐是将肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液反应后,加入对于肝素苄酯金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀分离制得,并具有以下特性:肝素苄酯盐纯度高,特别是季铵盐残留低,制备方法简单,易于工业化生产,可用于制备高纯度的低分子肝素,收率高。
Description
技术领域
本发明涉及由一种高纯度肝素苄酯盐,及其制备方法与在制备低分子肝素中的应用。
背景技术
肝素是动物(猪或牛)来源的硫酸多糖混合物,由于它们具有良好的抗血栓形成性质,因而得到了广泛应用,例如制备抗血栓形成药物、治疗心血管疾病的药物、和治疗脑血管疾病的药物等。
然而,天然肝素有许多缺陷,这些缺陷限制肝素的应用。一个主要缺陷是肝素用药过多可致自发性出血,故每次注射前应测定凝血时间。此外,长期使用,肝素还可引起过敏反应、血小板减少、骨质疏松和自发性骨折。
肝素钠自发性出血危险很大,临床使用中必须监测凝血时间,这给医生和患者均带来很大不便。同时,血小板减少和骨质疏松等不良反应也让医生在使用中有所顾忌。低分子肝素使用过程中无须监测凝血时间,并且大大降低了肝素长期使用产生的上述不良反应。
目前,制备低分子肝素的主要方法有亚硝酸盐降解法、过氧化氢降解法、肝素酶降解法以及肝素苄酯的碱降解法等。其中,肝素苄酯的碱降解法是将肝素与季铵盐成盐,然后将肝素季铵盐与氯化苄在二氯甲烷中发生酯化反应生成肝素苄酯季铵盐,往此溶液中加入醋酸钠甲醇溶液,过滤获得肝素苄酯钠盐,根据酯化率的高低,选择相应的降解条件,将此钠盐在碱性溶液中进行降解,获得低分子肝素。由此可见,如何准确测定酯化率在整个制备方法中非常关键。另外,由于低分子肝素是混合物,过程控制杂质变得非常重要。因此,高纯度的肝素苄酯碱金属或碱土金属盐是获得高质量低分子肝素的前提。
然而,上述制备方法具有如下缺点:(1)肝素苄酯钠盐纯度低:当醋酸钠甲醇溶液与肝素苄酯季铵盐反应生成肝素苄酯钠盐时,由于肝素为大分子长链,肝素苄酯钠盐在甲醇中溶解度很低,随着醋酸钠甲醇溶液的加入,来不及反应的含有季铵盐的肝素苄酯钠盐同时被沉淀出,这样导致反应不完全。实验证明,即使进行长时间的搅拌或多次与醋酸钠甲醇溶液重复反应,但毕竟是混悬状态,仍有相当部分的季铵盐不能全部反应,从而残留在肝素苄酯钠盐链上。(2)肝素苄酯钠盐的酯化率难以精确测定:由于反应为非溶液状态,反应物和产物均为沉淀,每次反应的程度均不易重现,季铵盐、氯化苄和醋酸钠残留每次都会有差异,这给酯化率的测定带来了不确定性,从而影响后续的降解条件的选择,进而影响产品的质量,甚至会影响生产的成功率。(3)最终产品的安全性隐患:反应过程中生成的季铵盐和过量的氯化苄及醋酸钠均不易被甲醇洗掉,会残留在产品中。在后续降解中也会产生新的杂质,给产品的安全性带来隐患。(4)难以产业化:肝素苄酯钠盐制备过程中获得的沉淀粘稠,难以过滤及纯化,同时需要大量甲醇洗涤沉淀,产业化难度大,成本高。
也有文献中提到,生成肝素苄酯季铵盐后,先将反应溶媒四氢呋喃直接蒸馏除去,然后加入甲醇混悬沉淀,过滤获得肝素苄酯季铵盐,然后将其加入醋酸钠的水溶液,生成肝素苄酯钠盐。这种制备方法需要先蒸馏除去反应溶媒,而实验证明,肝素苄酯季铵盐易溶于甲醇,因此蒸去反应溶媒后加入甲醇并不能得到沉淀,同时大大增加了产业化的难度和成本。
因此,本领域迫切需要开发高纯度的肝素苄酯盐,以及简单可行、适合产业化的制备方法及其在低分子肝素制备中的应用。
发明内容
本发明的目的就是提供一种高纯度的肝素苄酯盐,以及其简单可行、适合产业化的制备方法及其在低分子肝素制备中的应用。
在本发明的第一方面,提供了一种高纯度肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐的制备方法,包括步骤:
(a)将肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液进行混合,从而生成肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;和
(b)在步骤(a)所形成反应混合物中,加入对于肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀并分离出所述肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐。
在另一优选例中,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐(肝素苄酯季铵盐+肝素季铵盐等)的20-99.9wt%,较佳地30-99wt%,更佳地40-95wt%。
在另一优选例中,所述的肝素苄酯季铵盐是肝素季铵盐与苄基卤化物在有机溶剂中发生酯化反应生成的反应产物。
肝素是来源于牛、猪的肝素,即猪肝素或牛肝素及其衍生物。
在另一优选例中,所述苄基卤化物为卤化苄,较佳为氯化苄或溴化苄,更佳为氯化苄。
在另一优选例中,所述有机溶剂为二氯甲烷。
在另一优选例中,所述碱金属盐为氯化钠、醋酸钠、氯化钾、或硫酸钠;所述碱土金属盐为氯化钙、或氯化镁。
较佳为醋酸钠,更佳地为氯化钠。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为0.1w/v%~95w/v%。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为3w/v%~50w/v%。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为5w/v%~25w/v%。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.1~10∶1。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.2~5∶1。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.5~1∶1。
在另一优选例中,所述的水性溶液的溶剂,是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其组合的水溶液。
在另一优选例中,所述的不溶性溶剂选自下组:醇、酮、或其组合。
更佳地,所述的醇为甲醇、乙醇、或其组合;所述酮为丙酮。
本发明的第二方面,提供一种高纯度的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐,其中,杂质季铵盐的含量<5wt%。
在另一优选例中,所述杂质季铵盐的含量<1wt%,较佳的,所述杂质季铵盐的含量<0.5wt%,更佳地所述杂质季铵盐的含量<0.1wt%。
在另一优选例中,所述的肝素苄酯金属盐包括肝素苄酯钠盐、钾盐、钙盐或镁盐形式。
在另一优选例中,所述的肝素苄酯金属盐为肝素苄酯钠盐。
在另一优选例中,所述的肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐是用第一方面所述方法制备的。
本发明的第三方面,提供一种制备肝素衍生的多糖混合物的方法,包括以下步骤:
(a)将肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液进行混合,从而反应生成肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;和
(b)在步骤(a)所形成反应混合物中,加入对于肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀并分离出所述肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;
(c)将肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐进行碱降解获得所述肝素衍生的多糖混合物。
在另一优选例中,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐(肝素苄酯季铵盐+肝素季铵盐等)的20-99.9wt%,较佳地30-99wt%,更佳地40-95wt%。
在另一优选例中,所述的肝素苄酯季铵盐是肝素季铵盐与苄基卤化物在有机溶剂中发生酯化反应生成的反应产物。
肝素是来源于牛、猪的肝素,即猪肝素或牛肝素及其衍生物。
在另一优选例中,所述苄基卤化物为卤化苄,较佳为氯化苄或溴化苄,更佳为氯化苄。
在另一优选例中,所述有机溶剂为二氯甲烷。
在另一优选例中,所述碱金属盐为氯化钠、醋酸钠、氯化钾、或硫酸钠;所述碱土金属盐为氯化钙、或氯化镁。
较佳为醋酸钠,更佳地为氯化钠。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为0.1w/v%~95w/v%。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为3w/v%~50w/v%。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为5w/v%~25w/v%。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.1~10∶1。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.2~5∶1。
在另一优选例中,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.5~1∶1。
在另一优选例中,所述的水性溶液的溶剂,是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其组合的水溶液。
在另一优选例中,所述的不溶性溶剂选自下组:醇、酮、或其组合。
更佳地,所述的醇为甲醇、乙醇、或其组合;所述酮为丙酮。
本发明的第四方面,提供一种肝素衍生的多糖混合物,具有以下特征:
其是通过第三方面所述的方法制备;
重均分子量为不大于8000道尔顿;
抗凝血因子Xa与抗凝血因子IIa的活性比值为不低于1.5;
在其非还原末端,含有4-吡喃糖醛酸结构。
在另一优选例中,肝素衍生的多糖混合物,具有以下特征:
其是通过第三方面所述的方法制备;
重均分子量为3800-5000道尔顿;
分子量低于2000道尔顿的含量为总重量的12~20%;
分子量介于2000-8000道尔顿的含量为总重量的68%-82%;
抗凝血因子Xa与抗凝血因子IIa的活性比值为3.3-5.3;
在其非还原末端,含有4-吡喃糖醛酸结构,还原末端含有15~25%的1,6-脱水环结构。
在另一优选例中,通过第三方面所述的方法制备的肝素衍生的多糖混合物,具有以下特征:
重均分子量为1500-5000道尔顿;
抗凝血因子Xa与抗凝血因子IIa的活性比值为不低于10;
在其非还原末端,含有4-吡喃糖醛酸结构。
在另一优选例中,所述多糖混合物呈碱金属盐或碱土金属盐形式,其中,优选钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。
本发明的第五方面,提供一种药物组合物,所述组合物含有作为活性组分的第四方面所述的肝素衍生的多糖混合物。
本发明的第六方面,提供了高纯度的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐的用途,被用于制备高纯度的肝素衍生的多糖混合物。
在另一优选例中,制备过程包括以下步骤:
(a)将肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液进行混合,从而反应生成肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;和
(b)在步骤(a)所形成反应混合物中,加入对于肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀并分离出所述肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;
(c)将肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐进行碱降解获得所述肝素衍生的多糖混合物。
本发明提供的肝素苄酯盐纯度高,特别是季铵盐残留低,制备方法简单,易于工业化生产,可用于制备高纯度的低分子肝素,收率高。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究,通过改进肝素苄酯盐的制备方法,意外地发现,将肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液直接进行反应,可以高效、简便、快速地制备高纯度且季铵盐及醋酸钠残留低的肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐。在此基础上完成了本发明。
本发明的肝素苄酯盐具有以下主要优点:(1)纯度高:季铵盐残留量通常低于3wt%,氯化苄残留通常低于0.1wt%,醋酸钠残留量通常低于0.1wt%。(2)酯化率易于测定及控制,有利于在低分子肝素制备中的应用。(3)易溶于水,有利于其在低分子肝素制备中的应用,即在制备低分子肝素时更容易选择适宜的降解条件。(4)制备低分子肝素时,无季铵盐、氯化苄及醋酸钠等引入的杂质,色素含量低且易于除去,质量好,收率高。
如本文所用,术语“肝素”是指分子量范围2000~30000道尔顿的多糖。
在本发明中,可使用水溶剂或含水溶剂,所形成溶液通称为水性溶液。换言之,碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液,是指溶质为碱金属或碱土金属,溶解于溶剂为(a)水或(b)水与有机溶剂(如甲醇、乙醇等)形成的混合溶剂(例如,醇含量低于90%(V/V)的混合溶剂可视为水性溶液的溶剂)所形成的溶液。
一类优选的水性混合溶剂是水与有机溶剂(如甲醇、乙醇等)体积比为10-100∶0.01-90(较佳地20-100∶0.1-80,更佳地50-100∶1-50)的混合溶剂。
肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐
本发明的肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐可以采用如下方法制备:肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液反应,获得肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐,往此反应体系中加入对于肝素苄酯金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀分离出本发明所述的肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐。
在本发明的一个优选例中,所述的制备方法包括步骤:
(a)肝素苄酯季铵盐与碱金属或碱土金属盐的水性溶液反应,获得肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐混悬液;和
(b)往上述体系中加入对于肝素苄酯金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀分离出本发明所述的肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐。
在本发明的一个优选例中,所述的制备方法包括步骤:
(a)含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液反应,获得肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐混悬液;和
(b)往上述体系中加入对于肝素苄酯金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀分离出本发明所述的肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐。
在另一优选例中,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐(肝素苄酯季铵盐+肝素季铵盐等)的20-99.9wt%,较佳地30-99wt%,更佳地40-95wt%。
所述的不溶性溶剂选自下组:醇、酮、或其组合。
更佳地,所述的醇为甲醇、乙醇、或其组合;所述酮为丙酮。
在本发明中,作为碱金属盐或碱土金属盐,优选地是钠、钾、钙和镁盐。
本发明的肝素苄酯盐,它们与通过已有文献制备的肝素苄酯盐相比,具有更高的纯度和更易于质量控制。换言之,肝素苄酯盐纯度很高,而季铵盐、氯化苄及醋酸钠等杂质含量很低。例如,本发明肝素苄酯盐中季铵盐杂质含量≤5wt%,较佳地≤1wt%,更佳地≤0.1wt%。
这些肝素苄酯盐可以呈碱金属盐或碱土金属盐形式,其中,优选钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。
肝素衍生的多糖混合物
根据高纯度的肝素苄酯盐的酯化率,可采用相应条件对其进行降解,获得高纯度的肝素衍生的多糖混合物,如依诺肝素钠等低分子肝素。在这些肝素衍生的多糖混合物中,在其一端具有不饱和的4,5-葡萄糖醛酸2-O-硫酸酯结构单元。
药物组合物和施用方法
本发明的肝素衍生的多糖混合物可以用作抗血栓形成剂,预防静脉血栓栓塞性疾病(预防静脉内血栓形成),特别是与骨科或普外手术有关的血栓形成。治疗已形成的深静脉栓塞,伴或不伴有肺栓塞。治疗不稳定心绞痛及非Q波心梗,用于血液透析体外循环中,防止血栓形成。
此外,本发明的肝素衍生的多糖混合物还可用于治疗或辅助治疗心血管疾病和脑血管疾病。
因此,本发明还提供一种药物组合物,它含有作为活性组分的本发明的肝素衍生的多糖混合物和药学上可接受的载体。通常,在药物组合物中,本发明的肝素衍生的多糖混合物的含量为0.01-50wt%,更佳地为0.1-30wt%。一种优选的药物组合物剂型为注射剂(包括溶液和冻干剂)。
本发明的药物组合物可用常规方法制备和施用。一种优选的施用方法是皮下或静脉内给药。
本发明的主要优点在于:
(1)肝素苄酯盐纯度高,季铵盐、氯化苄及醋酸盐残留量低,通常重量含量低于5%。
(2)肝素苄酯盐质量控制简单,特别是关键指标酯化率可以准确测定及控制。
(3)肝素苄酯盐制备方法简单,不会产生粘稠的产物,简单过滤即可,无须通过长时间抽滤或离心方法,肝素苄酯盐收率高,易于产业化。
(4)应用高纯度肝素苄酯盐制备的肝素衍生的多糖混合物,产品纯度高,安全性好,不会引入由于中间体不纯而产生的杂质,如季铵盐含量<0.1wt%。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件(如《欧洲药典》中所述的条件),或按照制造厂商所建议的条件。
通用测定方法
(1)肝素酯或肝素酯盐的酯化程度可以用常规的HPLC来测定,即通过测定在0℃下由酯的皂化所产生的苯甲醇量来确定酯化程度。
(2)分子量和分子量分布以及抗Xa和抗IIa效价均采用欧洲药典中常规的低分子肝素质量标准的方法进行。
实施例1
肝素季铵盐的制备
向苄索氯铵(250g)的水溶液(1250ml)中,加入含市售的肝素钠(100g)的水(1000ml)溶液(注:猪来源的肝素)。搅拌下放置30分钟,形成肝素季铵盐沉淀。然后,将反应混合物在室温下过滤,获得滤饼,用水洗涤后真空干燥,获得肝素苄氧乙铵盐(305克)。
实施例2
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基氯(100ml)加入到含肝素苄氧乙铵盐(100g)的二氯甲烷(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持25小时。然后加入10w/v%的氯化钠水溶液(600ml),搅拌1小时后,加入甲醇1800ml,析出沉淀,过滤,滤饼用少量甲醇顶洗,干燥,得到白色的肝素苄酯钠盐(37克)。
经HPLC法测定,所述肝素苄酯钠盐中,季铵盐的残留量<0.5wt%,醋酸钠的残留量<0.05wt%,氯化苄的残留量<0.05wt%,酯化率为12.5%(w/w)。
实施例3
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基氯(100ml)加入到含肝素苄氧乙铵盐(100g)的二氯甲烷(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持24小时。然后加入15w/v%的醋酸钠水溶液(700ml),搅拌1小时,加入2100ml甲醇,析出沉淀,过滤,滤饼用少量甲醇顶洗,干燥,得到白色的肝素苄酯钠盐(38克)。
经HPLC法测定,在所述肝素苄酯钠盐中,季铵盐的残留量<0.6wt%,醋酸钠的残留量<0.1wt%,氯化苄的残留量<0.05wt%,酯化率为10.9%(w/w)。
实施例4
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基溴(120ml)加入到含肝素苄氧乙铵盐(100g)的二氯甲烷(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持25小时。然后加入15%的氯化钠水溶液(900ml),搅拌,加入2700ml乙醇,析出沉淀,过滤,滤饼用少量乙醇顶洗,干燥,由此得到白色的肝素苄酯钠盐(36克)。
经HPLC法测定,在所述肝素苄酯钠盐中,季铵盐的残留量<0.6wt%,氯化苄的残留量<0.05wt%。酯化率为13.3%(w/w)。
实施例5
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基氯(150ml)加入到含肝素苄氧乙铵盐(100g)的二氯甲烷(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持48小时。然后加入800ml 10w/v%的氯化钠水性溶液(5vol%的乙醇水溶液),搅拌,加入乙醇2400ml,析出沉淀,过滤,滤饼用少量乙醇顶洗,干燥,由此得到白色的肝素苄酯钠盐(42克)。
经HPLC法测定,在所述肝素苄酯钠盐中,季铵盐的残留量<0.5wt%,氯化苄的残留量<0.05wt%。酯化率为13.1%(w/w)。
实施例2-5结果表明,本发明制备方法简单,重现性好,肝素苄酯钠盐纯度高,均为白色,季铵盐及氯化苄残留低。
实施例6
肝素苄酯盐的应用
将实施例2得到的肝素苄酯钠盐(10g)溶于水(250ml)中,溶液无色澄清,加热至62℃。向此溶液中加入氢氧化钠(1g),反应1.5小时,从而使肝素苄酯钠盐降解,反应液变成淡黄色澄清溶液。将该溶液冷却至约20℃,加入稀盐酸进行中和。再加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为12%(w/v)。向反应混合物中加入甲醇(750ml),析出沉淀,过滤获得滤饼,甲醇洗涤后,将滤饼溶于100ml水中。用1M NaOH调节pH至8.4±0.1。将硼氢化钠(按10g/kg肝素苄酯钠盐计)加入到该溶液中,静置1个小时,然后用3M盐酸将pH调节至4.0-4.4以消除过多的硼氢化物。静置30分钟,并用2M NaOH调节pH至7.0。加入氯化钠,使盐浓度为10w/v%,然后加入溶液体积3倍体积的甲醇,析出沉淀,过滤获得滤饼,用甲醇洗涤后,真空干燥,从而得到高纯度的低分子肝素(白色,7.9g)。以肝素钠计,收率为89.1%。
经测定,所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
测量值 | 标准 | |
重均分子量(道尔顿) | 4538 | 3800~5000 |
分子量小于2000道尔顿的组分含量 | 17% | 12~20% |
分子量介于2000~8000道尔顿的组分含量 | 77% | 68-82% |
抗凝血因子Xa活性(IU/毫克) | 108.7 | 90-125IU/mg |
抗凝血因子IIa活性(IU/毫克) | 22.0 | 20-35IU/mg |
抗凝血因子Xa活性/抗凝血因子IIa活性比 | 4.9 | 3.3~5.3 |
1,6-脱水环含量 | 20.3% | 15~25% |
经HPLC检测,产品中季铵盐<0.01wt%,纯度高,安全性好。
所得产品完全符合上市依诺肝素钠的质量要求。
实施例7
肝素苄酯盐的应用
将实施例3得到的肝素苄酯钠盐(10g)溶于水(250ml)中,溶液无色澄清,加热至64℃。向此溶液中加入氢氧化钠(1g),反应1.5小时,从而使肝素苄酯钠盐降解,反应液变成淡黄色澄清溶液。将该溶液冷却至约20℃,加入盐酸进行中和。再加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为10%(w/v)。向反应混合物中加入甲醇(750ml),析出沉淀,过滤获得滤饼,甲醇洗涤后,将滤饼溶于100ml水中。用1M NaOH调节pH至8.4±0.1。将硼氢化钠(按10g/kg肝素苄酯钠盐计)加入到该溶液中,静置1个小时,然后用3M盐酸将pH调节至4.0-4.4以消除过多的硼氢化物。静置30分钟,并用2M NaOH调节pH至7.0。加入氯化钠,使盐浓度为10w/v%,然后加入溶液体积3倍体积的甲醇,析出沉淀,过滤获得滤饼,用甲醇洗涤后,真空干燥,从而得到高纯度的低分子肝素(白色,7.9g)。按肝素钠计算,收率为91.6%。
经测定,所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
测量值 | 标准 | |
重均分子量(道尔顿) | 4513 | 3800~5000 |
分子量小于2000道尔顿的组分含量 | 13% | 12~20% |
分子量介于2000~8000道尔顿的组分含量 | 78% | 68-82% |
抗凝血因子Xa活性(IU/毫克) | 109.7 | 90-125IU/mg |
抗凝血因子IIa活性(IU/毫克) | 25.1 | 20-35IU/mg |
抗凝血因子Xa活性/抗凝血因子IIa活性比 | 4.4 | 3.3~5.3 |
1,6-脱水环含量 | 19.3% | 15~25% |
经HPLC检测,产品中季铵盐<0.1wt%,纯度高,安全性好。
所得产品完全符合上市依诺肝素钠的质量要求。
实施例8肝素苄酯盐的应用
将实施例4得到的肝素苄酯钠盐(10g)溶于水(250ml)中,溶液无色澄清,加热至62℃。向此溶液中加入氢氧化钠(1g),反应1.5小时,从而使肝素苄酯钠盐降解,反应液变成淡黄色澄清溶液。将该溶液冷却至约20℃,加入盐酸进行中和。再加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为15%(w/v)。向反应混合物中加入甲醇(750ml),析出沉淀,过滤获得滤饼,甲醇洗涤后,将滤饼溶于100ml水中。往该溶液中加入5ml双氧水,反应1小时后,加入氯化钠,使盐浓度为10w/v%,加入溶液体积3倍体积的甲醇,析出沉淀,过滤获得滤饼,用甲醇洗涤后,真空干燥,从而得到高纯度的低分子肝素(白色,7.9g)。按肝素钠计算,收率为86.7%。
经测定,所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
测量值 | 标准 | |
重均分子量(道尔顿) | 4593 | 3800~5000 |
分子量小于2000道尔顿的组分含量 | 14% | 12~20% |
分子量介于2000~8000道尔顿的组分含量 | 79% | 68-82% |
抗凝血因子Xa活性(IU/毫克) | 119.7 | 90-125IU/mg |
抗凝血因子IIa活性(IU/毫克) | 27.1 | 20-35IU/mg |
抗凝血因子Xa活性/抗凝血因子IIa活性比 | 4.4 | 3.3~5.3 |
1,6-脱水环含量 | 20.7% | 15~25% |
经HPLC检测,产品中季铵盐<0.05wt%,纯度高,安全性好。
所得产品完全符合上市依诺肝素钠的质量要求。
实施例9肝素苄酯盐的应用
将实施例5得到的肝素苄酯钠盐(10g)溶于水(250ml)中,溶液无色澄清,加热至65℃。向此溶液中加入氢氧化钠(1.1g),反应1.5小时,从而使肝素苄酯钠盐降解,反应液变成淡黄色澄清溶液。将该溶液冷却至约20℃,加入盐酸进行中和。再加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为10%(w/v)。向反应混合物中加入甲醇(750ml),析出沉淀,过滤获得滤饼,甲醇洗涤后,将滤饼溶于100ml水中。往该溶液中加入5ml双氧水,反应1小时后,加入氯化钠,使盐浓度为10w/v%,加入溶液体积3倍体积的甲醇,析出沉淀,过滤获得滤饼,用甲醇洗涤后,真空干燥,从而得到高纯度的低分子肝素(白色,6.6g)。按肝素钠计算,收率为84.5%。
经测定,所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
测量值 | |
重均分子量(道尔顿) | 3593 |
分子量小于2000道尔顿的组分含量 | 14% |
分子量大于5000道尔顿的组分含量 | 3% |
抗凝血因子Xa活性(IU/毫克) | 102.7 |
抗凝血因子IIa活性(IU/毫克) | 3.1 |
抗凝血因子Xa活性/抗凝血因子IIa活性比 | 33.1 |
经HPLC检测,产品中季铵盐<0.1wt%,纯度高,安全性好。
从实施例5和9表明,根据酯化率的不同,采用不同的降解条件,可获得特定分子量分布和效价特点的低分子肝素。
实施例6-9表明,应用本发明获得的肝素苄酯盐为中间体,制备低分子肝素,收率高,杂质少,纯度高,产品安全性好。
采用本发明的肝素苄酯钠盐为中间体制备的低分子肝素,均完全符合上市依诺肝素钠的质量要求。同时,该制备方法得率高,无须繁琐且长时间的过滤处理步骤和大量甲醇冲洗滤饼,有利于降低成本和能耗,大大增强了产品的竞争力。
对比例1
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基氯(100ml)加入到肝素苄氧乙铵盐(100g)二氯甲烷(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持25小时。然后加入15w/v%的醋酸钠甲醇溶液(600ml)。析出沉淀,长时间抽滤,用5L甲醇冲洗滤饼,干燥,由此得到淡黄色的肝素苄酯钠盐(34克)。
经HPLC法测定,在所述肝素苄酯钠盐中,苄氧乙铵盐的含量为16wt%,醋酸钠的含量为13wt%。氯化苄的残留量为1.1wt%。由于有苄氧乙铵盐、氯化苄和醋酸钠的残留,较难测定酯化率。
对比例2
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基氯(100ml)加入到肝素苄氧乙铵盐(100g)二氯甲烷(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持25小时。然后加入10w/v%的醋酸钠甲醇溶液(600ml)。析出沉淀,离心。将沉淀混悬在10w/v%的醋酸钠甲醇溶液(600ml)中,搅拌2小时,离心。再将沉淀重复混悬、离心2次后,将沉淀混悬在600ml甲醇中,搅拌2小时后,过滤,滤饼用甲醇反复冲洗,干燥,由此得到淡黄色的肝素苄酯钠盐(31克)。
经HPLC法测定,在所述肝素苄酯钠盐中,苄氧乙铵盐的残留量为9wt%,醋酸钠的残留量为8wt%,氯化苄的残留量为0.5wt%。由于有苄氧乙铵盐、氯化苄和醋酸钠等的残留,较难测定酯化率。
对比例3
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基氯(100ml)加入到肝素苄氧乙铵盐(100g)二氯甲烷(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持25小时。然后加入10%的醋酸钠乙醇溶液(600ml)。析出沉淀,离心。将沉淀混悬在10%的醋酸钠乙醇溶液(600ml)中,搅拌2小时,离心。再将沉淀重复混悬、离心2次后,将沉淀混悬在600ml乙醇中,搅拌2小时后,过滤,滤饼用5L乙醇冲洗,干燥,由此得到肝素苄酯钠盐(30克)。
经HPLC法测定,在所述肝素苄酯钠盐中,季铵盐的残留量为7wt%,醋酸钠的残留量为7wt%,氯化苄的残留量为1.1wt%。由于有季铵盐、醋酸钠和氯化苄的残留,较难测定酯化率。
对比例4
肝素苄酯钠盐的制备
将苄基溴(100ml)加入到肝素苄氧乙铵盐(100g)四氢呋喃(500ml)溶液中。将溶液加热到35℃,维持25小时。然后将四氢呋喃溶媒蒸馏除去。加入甲醇,并能得到沉淀。说明肝素苄酯苄氧乙铵盐溶于甲醇,并不能通过已知专利的方法获得肝素卞酯钠盐。
对比例5
肝素苄酯盐的应用
将对比例1得到的肝素苄酯钠盐(10g)溶于水(250ml)中,得到淡黄色的混浊液,加热至62℃。向此溶液中加入氢氧化钠(1g),反应1.5小时,从而使肝素苄酯钠盐降解,反应液变成黄色混浊液。然后将该溶液冷却至约20℃,加入盐酸进行中和。再加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为10%(w/v)。向反应混合物中加入甲醇(750ml),析出沉淀,过滤获得滤饼,甲醇洗涤后,将滤饼溶于100ml水中。用1M NaOH调节pH至8.4±0.1。将硼氢化钠(按10g/kg肝素苄酯钠盐计)加入到该溶液中,静置1个小时,然后用3M盐酸将pH调节至4.0-4.4以消除过多的硼氢化物。静置30分钟,并用2M NaOH调节pH至7.0。加入氯化钠,使盐浓度为10w/v%,然后加入溶液体积3倍体积的甲醇,析出沉淀,过滤获得滤饼,用甲醇洗涤后,真空干燥,从而得到的低分子肝素(类白色,5.7g)。以肝素钠计算,收率为59.1%。
经测定,所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
测量值 | 标准 | |
重均分子量(道尔顿) | 4118 | 3800~5000 |
分子量小于2000道尔顿的组分含量 | 27% | 12~20% |
分子量介于2000~8000道尔顿的组分含量 | 65% | 68-82% |
抗凝血因子Xa活性(IU/毫克) | 91.2 | 90-125IU/mg |
抗凝血因子IIa活性(IU/毫克) | 18.5 | 20-35IU/mg |
抗凝血因子Xa活性/抗凝血因子IIa活性比 | 4.9 | 3.3~5.3 |
1,6-脱水环含量 | 27.4% | 15~25% |
经比较,颜色深于欧洲药典对于依诺肝素钠的颜色要求,并且分子量分布等指标不符合欧洲药典对依诺肝素钠的要求。
此外,最终产品中苄索氯铵的含量为0.5wt%,不符合注射级依诺肝素钠的要求,给产品安全性带来隐患。
对比例6
肝素苄酯盐的应用
将对比例2得到的肝素苄酯钠盐(10g)溶于水(250ml)中,得到淡黄色的混浊液,加热至60℃。向此溶液中加入氢氧化钠(1g),反应1.5小时,从而使肝素苄酯钠盐降解,反应液变成黄色混浊液。将该溶液冷却至约20℃,加入盐酸进行中和。再加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为10%(w/v)。向反应混合物中加入甲醇(750ml),析出沉淀,过滤获得滤饼,甲醇洗涤后,将滤饼溶于100ml水中。用1M NaOH调节pH至8.4±0.1。将硼氢化钠(按10g/kg肝素苄酯钠盐计)加入到该溶液中,静置1个小时,然后用3M盐酸将pH调节至4.0-4.4以消除过多的硼氢化物。静置30分钟,并用2M NaOH调节pH至7.0。加入氯化钠,使盐浓度为10w/v%,然后加入溶液体积3倍体积的甲醇,析出沉淀,过滤获得滤饼,用甲醇洗涤后,真空干燥,从而得到的低分子肝素(类白色,7.2g)。以肝素钠计算,收率为68.1%。
经测定,所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
测量值 | 标准 | |
重均分子量(道尔顿) | 4918 | 3800~5000 |
分子量小于2000道尔顿的组分含量 | 15% | 12~20% |
分子量介于2000~8000道尔顿的组分含量 | 79% | 68-82% |
抗凝血因子Xa活性(IU/毫克) | 115.1 | 90-125IU/mg |
抗凝血因子IIa活性(IU/毫克) | 35.8 | 20-35IU/mg |
抗凝血因子Xa活性/抗凝血因子IIa活性比 | 3.2 | 3.3~5.3 |
1,6-脱水环含量 | 13.7% | 15~25% |
经比较,颜色深于欧洲药典对于依诺肝素钠的颜色要求,并且分子量分布等指标不符合欧洲药典对依诺肝素钠的要求。
此外,最终产品中苄索氯铵的含量为0.7wt%,由氯化苄引入的杂质苄醇含量约为0.3wt%,不符合注射级依诺肝素钠的要求,给产品安全性带来隐患。
对比例7肝素苄酯盐的应用
将对比例3得到的肝素苄酯钠盐(10g)溶于水(250ml)中,得到淡黄色的混浊液,加热至65℃。向此溶液中加入氢氧化钠(1.2g),反应1.8小时,从而使肝素苄酯钠盐降解,反应液变成黄色混浊液。将该溶液冷却至约20℃,加入盐酸进行中和。再加入氯化钠使得反应混合物中的氯化钠浓度为10%(w/v)。向反应混合物中加入甲醇(750ml),析出沉淀,过滤获得滤饼,甲醇洗涤后,将滤饼溶于100ml水中。用1M NaOH调节pH至8.4±0.1。将硼氢化钠(按10g/kg肝素苄酯钠盐计)加入到该溶液中,静置1个小时,然后用3M盐酸将pH调节至4.0-4.4以消除过多的硼氢化物。静置30分钟,并用2M NaOH调节pH至7.0。然后加入溶液体积3倍体积的甲醇,析出沉淀,过滤获得滤饼,用甲醇洗涤后,真空干燥,从而得到的低分子肝素(类白色,7.3g)。以肝素钠计算,收率为66.8%。
经测定,所述的肝素衍生的多糖混合物的性质如下:
测量值 | 标准 | |
重均分子量(道尔顿) | 4652 | 3800~5000 |
分子量小于2000道尔顿的组分含量 | 19% | 12~20% |
分子量介于2000~8000道尔顿的组分含量 | 72% | 68-82% |
抗凝血因子Xa活性(IU/毫克) | 111.3 | 90-125IU/mg |
抗凝血因子IIa活性(IU/毫克) | 27.5 | 20-35IU/mg |
抗凝血因子Xa活性/抗凝血因子IIa活性比 | 4.0 | 3.3~5.3 |
1,6-脱水环含量 | 21.9% | 15~25% |
经比较,颜色深于欧洲药典对于依诺肝素钠的颜色要求,并且分子量分布等指标不符合欧洲药典对依诺肝素钠的要求。
此外,最终产品中苄索氯铵的含量为0.6wt%,由氯化苄引入的杂质苄醇含量约为0.3wt%,不符合注射级依诺肝素钠的要求,给产品安全性带来隐患。
对比例1~3与实施例2~5相比,说明在过滤时即使增大醇的量冲洗滤饼或者多次用醋酸钠甲醇溶液混悬沉淀,中间体肝素苄酯钠盐中会残留大量的季铵盐、氯化苄和醋酸钠,会对最终产品的引入杂质,同时较难精确控制肝素苄酯钠盐的酯化率。
对比例5~7与实施例6~9相比,说明如果肝素苄酯钠盐的质量不同,特别是纯度不同以及酯化率的准确度不同,则较难控制肝素苄酯钠盐的降解程度,制备的低分子肝素分子量分布、颜色及杂质残留等难以符合要求。
实施例10
药物组合物
注射液的制备(相当于50mg肝素衍生的多糖混合物/支)
将50g实施例6制备的肝素衍生的多糖混合物溶于400ml注射用水中,定容至500ml。无菌过滤,灌装成1000支,经质量检验合格后即可应用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (50)
1.一种高纯度肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐的制备方法,其特征在于,包括步骤:
(a)将肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液进行混合,从而生成肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;和
(b)在步骤(a)所形成反应混合物中,加入对于肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀并分离出所述肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;
其中,所述的水性溶液的溶剂,是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其组合的水溶液,并且所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为0.1w/v%~95w/v%,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.1~10:1。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐的20-99.9wt%。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐的30-99wt%。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐的40-95wt%。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的肝素苄酯季铵盐是肝素季铵盐与苄基卤化物在有机溶剂中发生酯化反应生成的反应产物。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述苄基卤化物为卤化苄。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述苄基卤化物为氯化苄或溴化苄。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述苄基卤化物为氯化苄。
9.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述有机溶剂为二氯甲烷。
10.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述碱金属盐为氯化钠、醋酸钠、氯化钾、或硫酸钠;所述碱土金属盐为氯化钙、或氯化镁。
11.根据权利要求10所述的制备方法,其特征在于所述碱金属盐为氯化钠。
12.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为3w/v%~50w/v%。
13.根据权利要求12所述的制备方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为5w/v%~25w/v%。
14.根据权利要求10所述的制备方法,其特征在于,所述所述碱金属盐为醋酸钠。
15.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.2~5:1。
16.根据权利要求15所述的制备方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.5~1:1。
17.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述水性溶液中,水与有机溶剂体积比为10-100:0.01-90。
18.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的不溶性溶剂选自下组:醇、酮、或其组合。
19.根据权利要求18所述的制备方法,其特征在于,所述的醇为甲醇、乙醇、或其组合;所述酮为丙酮。
20.一种高纯度的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐,其特征在于,杂质季铵盐的含量<5wt%,其中,所述的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐是用权利要求1-19任一所述方法制备的。
21.根据权利要求20所述的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐,其特征在于,所述杂质季铵盐的含量<1wt%。
22.根据权利要求20所述的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐,其特征在于,所述杂质季铵盐的含量<0.5wt%。
23.根据权利要求20所述的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐,其特征在于,所述杂质季铵盐的含量<0.1wt%。
24.根据权利要求20所述的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐,其特征在于,所述的肝素苄酯金属盐包括肝素苄酯钠盐、钾盐、钙盐或镁盐形式。
25.根据权利要求24所述的肝素苄基碱金属盐或碱土金属盐,其特征在于,所述的肝素苄酯金属盐为肝素苄酯钠盐。
26.一种制备肝素衍生的多糖混合物的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(a)将肝素苄酯季铵盐或含肝素苄酯季铵盐的原料,与碱金属或碱土金属盐的水性溶液进行混合,从而反应生成肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;和
(b)在步骤(a)所形成反应混合物中,加入对于肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐而言的不溶性溶剂,从而沉淀并分离出所述肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐;
(c)将肝素苄酯碱金属盐或碱土金属盐进行碱降解获得所述肝素衍生的多糖混合物;
其中,所述的水性溶液的溶剂,是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其组合的水溶液,并且所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为0.1w/v%~95w/v%,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.1~10:1。
27.根据权利要求26所述的方法,其特征在于,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐的20-99.9wt%。
28.根据权利要求27所述的方法,其特征在于,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐的30-99wt%。
29.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,所述的含肝素苄酯季铵盐的原料中肝素苄酯季铵盐占原料中肝素盐的40-95wt%。
30.根据权利要求26所述的方法,其特征在于,所述的肝素苄酯季铵盐是肝素季铵盐与苄基卤化物在有机溶剂中发生酯化反应生成的反应产物。
31.根据权利要求30所述的方法,其特征在于,所述苄基卤化物为卤化苄。
32.根据权利要求31所述的方法,其特征在于,所述苄基卤化物为氯化苄或溴化苄。
33.根据权利要求31所述的方法,其特征在于,所述苄基卤化物为氯化苄。
34.根据权利要求30所述的方法,其特征在于,所述有机溶剂为二氯甲烷。
35.根据权利要求26所述的方法,其特征在于,所述碱金属盐为氯化钠、醋酸钠、氯化钾、或硫酸钠;所述碱土金属盐为氯化钙、或氯化镁。
36.根据权利要求35所述的方法,其特征在于,所述碱金属盐为氯化钠。
37.根据权利要求26所述的方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为3w/v%~50w/v%。
38.根据权利要求37所述的方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐的水性溶液浓度为5w/v%~25w/v%。
39.根据权利要求35所述的方法,其特征在于,所述碱金属盐为醋酸钠。
40.根据权利要求26所述的方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.2~5:1。
41.根据权利要求40所述的方法,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐与所述肝素苄酯季铵盐的重量比为0.5~1:1。
42.根据权利要求26所述的方法,其特征在于,所述的水性溶液的溶剂,是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其组合的水溶液。
43.根据权利要求26所述的方法,其特征在于,所述的不溶性溶剂选自下组:醇、酮、或其组合。
44.根据权利要求43所述的方法,其特征在于,所述的醇为甲醇、乙醇、或其组合;所述酮为丙酮。
45.一种肝素衍生的多糖混合物,其特征在于,具有以下特征:
其是通过权利要求26所述的方法制备;
重均分子量为不大于8000道尔顿;
抗凝血因子Xa与抗凝血因子IIa的活性比值为不低于1.5;
在其非还原末端,含有4-吡喃糖醛酸结构。
46.根据权利要求45所述的肝素衍生的多糖混合物,其特征在于,
重均分子量为3800-5000道尔顿;
分子量低于2000道尔顿的含量为总重量的12~20%;
分子量介于2000-8000道尔顿的含量为总重量的68%-82%;
抗凝血因子Xa与抗凝血因子IIa的活性比值为3.3-5.3;
在其非还原末端,含有4-吡喃糖醛酸结构,还原末端含有15~25%的1,6-脱水环结构。
47.根据权利要求45所述的肝素衍生的多糖混合物,其特征在于,具有以下特征:
重均分子量为1500-5000道尔顿;
抗凝血因子Xa与抗凝血因子IIa的活性比值为不低于10;
在其非还原末端,含有4-吡喃糖醛酸结构。
48.根据权利要求45所述的肝素衍生的多糖混合物,其特征在于,所述多糖混合物呈碱金属盐或碱土金属盐形式。
49.根据权利要求48所述的肝素衍生的多糖混合物,其特征在于,所述碱金属盐或碱土金属盐形式为钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。
50.一种药物组合物,其特征在于,所述组合物含有作为活性组分的权利要求45所述的肝素衍生的多糖混合物和药学上可接受的载体。
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EP0293539A2 (fr) * | 1987-01-05 | 1988-12-07 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Procédé pour la dépolymérisation de l'héparine pour l'obtention d'une héparine de bas poids moléculaire dotée d'une activité antithrombotique |
CN101711771A (zh) * | 2008-10-07 | 2010-05-26 | 上海喜恩医药科技发展有限公司 | 一种肝素衍生的多糖混合物及其制法和药物组合物 |
CN102040671A (zh) * | 2009-10-13 | 2011-05-04 | 北京贯虹科技有限公司 | 一种超低分子量肝素的制备及纯化工艺 |
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2011
- 2011-09-26 CN CN201110288773.0A patent/CN103012620B/zh active Active
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EP0293539A2 (fr) * | 1987-01-05 | 1988-12-07 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Procédé pour la dépolymérisation de l'héparine pour l'obtention d'une héparine de bas poids moléculaire dotée d'une activité antithrombotique |
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