WO2009129797A4 - Stabile lysepuffermixtur zur extraktion von nukleinsäuren - Google Patents

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Abstract

Die Erfindung betrifft eine lagerstabile Lysepuffermixtur zur Isolierung von Nukleinsäuren aus biologischen, vorzugsweise diagnostischen Proben. Sie ist bevorzugt mit einer Extraktionskontrolle verbunden. Die der Erfindung zugrunde liegende Aufgabe ist es, ein verbessertes Nukleinsäureextraktionssystem bereitzustellen, welches kostengünstig, stabil und einfach anzuwenden ist und dabei den Ansprüchen an ein modernes Nukleinsäureextraktionssystem genügt, indem es u.a. Extraktionskontrollen enthält. Gegenstand der Erfindung ist eine Lysepuffermixtur zur Isolierung von Nukleinsäuren, welche nicht chaotrope Salze, eine besondere Auswahl an Detergenzien, eine definierte Menge mindestens einer Nukleinsäure als Extraktionskontrolle, gegebenenfalls lytische Enzyme, gegebenenfalls Carrier Nukleinsäuren sowie gegebenenfalls weitere Zusätze umfasst.

Claims

GEÄNDERTE ANSPRÜCHE beim Internationalen Büro eingegangen am 11 Januar 2010 (11.01.10)
1. Lagerstabile gefriergetrockenete Lysepuffermixtur, dadurch hergestellt, dass alle Komponenten der Lysepuffermixtur gemeinsam in wässriger Lösung vorliegen und gefriergetrocknet werden, zur Isolierung von Nukleinsäuren aus beliebigen komplexen Ausgangsmaterialien, umfassend die Komponenten
- nicht chaotrope Salze
- Detergenzien
- eine definierte Menge mindestens einer Nukleinsäure als Extraktionskontrolle
- gegebenenfalls lytische Enzyme
- gegebenenfalls Carrier Nukleinsäuren
- gegebenenfalls weitere Zusätze.
2. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die nicht chaotropen Salze monovalente, bivalente, multivalente Kationen oder Mischungen aus diesen Kationen enthalten.
3. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Kationen Ammoniumionen, Natriumionen, Kaliumionen, Magnesiumionen, Calciumionen, Zinkionen oder Manganionen sind.
4. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1-3, dadurch gekennzeichnet, dass der pH Wert zwischen 5 und 9, vorzugsweise bei 8 liegt.
5. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass die Detergenzien Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB), Tween 20, Triton X-100 und/ oder Natriumdodecylsulfat (SDS) sind.
6. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Detergenz Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB) ist.
7. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 5-6, dadurch gekennzeichnet, dass die Detergenzien in 0,1 - 5 %er Menge enthalten sind.
8. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 5-7, dadurch gekennzeichnet, dass Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB) in 2%er Menge enthalten ist.
9. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die mindestens eine Nukleinsäure als Extraktionskontrolle synthetisch oder über molekularbiologische Verfahren hergestellt oder eine native Nukleinsäure ist.
10. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäure zur Extraktionskontrolle eine oder mehrere DNA's oder eine oder mehrere RNA's oder Mischungen aus einer oder mehreren DNA's und RNA's sind.
11. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 9-10, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäure zur Extraktionskontrolle in definierten Mengen eingesetzt wird.
12. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die lytischen Enzyme Proteinasen sind.
13. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 12, dadurch gekennzeichnet, dass ein lytisches Enzym Proteinase K ist.
14. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 12-13 dadurch gekennzeichnet, dass ein lytisches Enzym Proteinase K und ein weiteres lytisches Enzym Lysozym ist.
15. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass als Carrier- Nukleinsäuren synthetische Nukleinsäuren oder Isolate aus biologischen Materialien eingesetzt werden.
16. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 15, dadurch gekennzeichnet, dass als Carrier-Nukleinsäuren poly A RNA, tRNA, Lachs Spermien DNA oder Herings- spermien DNA verwendet werden.
17. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sie als feste lagerstabile Formulierung in einsatzfertigen Reaktionsgefäßen vorliegt.
18. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 17, dadurch gekennzeichnet, dass die Reaktionsgefäße 96 well Mikrotiter - Platten, 384 well Mikrotiter - Platten oder 0,5- 5 ml Reaktionsgefäße sind.
19. Lysepuffermixtur nach Ansprüchen 1 und 17-18, dadurch gekennzeichnet, dass die Reaktionsgefäße 2 ml Reaktionsgefäße sind.
20. Lysepuffermixtur nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sie in Tablettenform vorliegt.
21. Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäuren aus beliebigen komplexen Ausgangsmaterialien unter Verwendung der Lysepuffermixtur nach einem der Ansprüche 1 bis 20.
22. Verfahren nach Anspruch 21 , dadurch gekennzeichnet, dass die zu isolierenden Nukleinsäuren DNA oder RNA oder DNA in Kombination mit RNA und das Ausgangsmaterial Mikroorganismen sind.
23. Reaktionskit für die Extraktion von Nukleinsäuren umfassend die Formulierungen aus Anspruch 1-20.
24. Reaktionskit für die Extraktion von Nukleinsäuren umfassend Lysegefäße mit der Lysepuffermixtur nach einem der Ansprüche 1-20, einen Bindepuffer auf alkoholischer Basis, einen Elutionspuffer, und eine Festphase zur Bindung der Nukleinsäuren, vorzugsweise Silica Spin Filter, 96 Well Filterplatten oder magnetische Beads mit Silica Oberfläche.
25. Reaktionskit nach Ansprüchen 24, dadurch gekennzeichnet, dass er einen oder mehrere Waschpuffer enthält.
26. Reaktionskit nach Ansprüchen 25-26, für die Extraktion von Virusnukleinsäuren aus diagnostischen Proben.
27. Reaktionskit nach Anspruch 26, umfassend mindestens ein 2 ml Lysegefäß mit der Lysepuffermixtur, einen Bindepuffer auf Isopropanol-Basis, zwei verschiedene Waschpuffer, einen Elutionspuffer, sowie Spin Filter als Adsorbtionsphase.
28. Reaktionskit nach Ansprüchen 23-25 für die Extraktion von bakteriellen Nukleinsäuren aus diagnostischen Proben.
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