WO2009121208A1 - 基于磁性纤维素材料用于分离核酸的试剂、分离促进剂、试剂盒及方法 - Google Patents

基于磁性纤维素材料用于分离核酸的试剂、分离促进剂、试剂盒及方法 Download PDF

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Description

基干磁性纤维素材料用干分离核酸的试剂、 分离促进剂、 试
剂盒及方法
[技术领域]
本发明是关于一种分离促进剂、 试剂、 试剂盒， 及分离方法， 尤其是一种用于分 离核酸时所使用的分离促进剂、 试剂、 试剂盒， 及分离方法。
[背景技术]
传统核酸分离及纯化的方法是利用有机溶剂，例如酚（phenol)及氯仿（chloroform) 将含有核酸样品中的蛋白质及其它物质进行变性 （denature), 并利用离心方式始其可 以与核酸分离， 但是此种方式所使用的酚及氯仿均具有高腐蚀性、 高挥发性， 以及强 烈毒性， 在操作上必须十分小心， 操作人员稍有不慎即会受到伤害； 且此种方式的纯 化方法操作费时， 在商业使用上有一定的困难度存在。
目前在商业应用上的核酸分离技术， 自 Willem R. Boom等人在 Akzo Nobel N.V. 公司开发出称为 「Boom Patent」 的微粒分离技术专利 （US5，234，809)后， 多是应用此 种方式来分离核酸。 「Boom Patent」 主要系利用分离促进剂（chaotropic agent)将样品 中的核酸与非核酸物质分离， 并且利用硅微粒（silica particle)来吸附核酸， 之后再使 用冲提缓冲液将吸附于硅微粒上的核酸冲洗下来， 以达到回收核酸之目的。 后来的开 发方向则是使用磁性微粒使得核酸与非核酸物质能够更有效的分离（如 US6,855，499)， 或更进一步针对分离促进剂组成做出改进。
如美国专利 US5, 990,302中所揭露， 利用一种含有胍盐（guanidine salt)的分离促 进剂及核酸吸附载体， 将核酸与其它非核酸物质分离， 但在制作过程中， 仍须适当调 配胍盐与其它溶剂之比例， 否则无法达成有效分离的效果； 且胍盐制作过程繁复， 需 要另辟一条生产线， 故此种含有胍盐的分离促进剂在应用上有不易配制之虞。
因此， 如何制作出一种能够有效分离核酸物质、 操作安全、 使用简单， 且易于制 造的分离促进剂及包含此种分离促进剂的试剂组， 实为一亟待解决的问题。
[发明内容]
为解决上述问题， 本发明提供一种分离促进剂（Chaotropic agent), 其配合一种固 态载体共同使用以从非核酸物质中分离出核酸， 当加入所述分离促进剂的固态载体与 含有核酸的样品混合后， 所述分离促进剂会提供样品中的核酸与非核酸物质分离， 促 使所述固态载体与核酸结合并吸附， 其特征在于配合分离促进剂使用的固态载体至少 具有磁性纤维素 （magnetic cellulose), 且所述分离促进剂包含有一个醇物质及一种基 质溶液， 藉由所述基质溶液调整所述醇物质至适当浓度， 促使样品内的核酸与磁性纤 维素进行接合， 其中， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合 组成的组。
本发明还提供一种试剂， 其配合一种固态载体共同使用以从非核酸物质中分离出 核酸， 当加入试剂的固态载体与含有核酸的样品混合后， 所述试剂会提供样品中的核 酸与非核酸物质分离， 促使所述固态载体与核酸结合并吸附， 其特征在于配合试剂使 用的所述固态载体至少具有磁性纤维素， 且所述试剂是由一个金属盐类及分离促进剂 所组成， 所述分离促进剂进一步包含有一个醇物质及一种基质溶液， 以藉由所述基质 溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促使样品内的核酸与磁性纤维素进 行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离子组成的盐类， 较佳的情况下可以是锂盐、 钠盐或钾盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的 组。
本发明还提供一种试剂盒， 其用以从非核酸物质中分离出核酸， 所述试剂盒包括 有一种试剂、 一种与所述试剂配合使用的固态载体、 一种清洗缓冲液及一种冲提缓冲 液， 其特征在于： 所述固态载体至少具有磁性纤维素， 且所述试剂是由一个金属盐类 及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂进一步包含有一个醇物质及一种基质溶液， 以 藉由所述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促使核酸与磁性纤维 素进行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离子组成的盐类， 较佳的情况下可以是 锂盐、 钠盐或钾盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合 组成的组。
本发明还提供一种以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 当加入所述分离促进 剂的磁性纤维素材与含有核酸的样品混合后， 所述分离促进剂会提供样品中的核酸与 非核酸物质分离， 其特征在于所述分离促进剂包含有一个醇物质及一种基质溶液， 藉 由所述基质溶液调整所述醇物质至适当浓度， 促使样品内的核酸与磁性纤维素材进行 接合， 其中， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。
本发明还提供一种以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 当加入试剂的磁性纤维素材 与含有核酸的样品混合后， 所述试剂会提供样品中的核酸与非核酸物质分离， 其特征 在于所述试剂是由一个金属盐类及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂包含有一个醇 物质及一种基质溶液，藉由所述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促使样品内的核酸与磁性纤维素材进行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离子组 成的盐类， 较佳的情况下可以是锂盐、 钠盐或钾盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙 醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。
本发明还提供一种以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒， 其特征在于所述试剂盒包 括有一种试剂、 一种磁性纤维素材、 一种清洗缓冲液及一种冲提缓冲液， 且所述试剂 是由一个金属盐类及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂进一步包含有一个醇物质及 一种基质溶液， 以藉由所述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促 使核酸与磁性纤维素材进行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离子组成的盐类， 较佳的情况下可以是锂盐、 钠盐或钾盐， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与 异丙醇的任意组合组成的组。
本发明还提供一种用磁性纤维素材分离核酸的方法， 该方法包括提供一种含有核 酸的样品， 以及预备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材， 其特征 在于添加所述试剂至含有核酸的样品中予以混合， 所述试剂是由一个金属盐类及分离 促进剂所组成， 且所述分离促进剂进一步包含有一个醇物质及一种基质溶液， 藉由所 述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促使核酸与磁性纤维素材进 行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离子组成的盐类， 较佳的情况下可以是锂盐、 钠盐或钾盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的 组。
本发明还提供一种用磁性纤维素材分离核酸的方法， 该方法包括提供一种含有核 酸的样品， 以及预备一种试剂、 可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材、 清洗缓 冲液和冲提缓冲液等步骤， 其特征在于添加所述试剂至含有核酸的样品中予以混合， 所述试剂是由一个金属盐类、 一个醇物质及一种基质溶液所组成， 藉由所述基质溶液 调整所述金属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促使核酸与磁性纤维素材进行接合， 其 中， 所述金属盐类是由单价阳离子组成的盐类， 较佳的情况下可以是锂盐、 钠盐或钾 盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组； 而后 用清洗缓冲液冲洗所述磁性纤维素材， 去除掉样品中的非核酸物质， 并以冲提缓冲液 分离出所述磁性纤维素材上所接合的核酸。
本发明还提供一种将核酸结合至磁性纤维素材的方法， 该方法包括提供一种含有 核酸的样品，以及预备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材等步骤， 其特征在于添加所述试剂至含有核酸的样品中予以混合，所述试剂是由一个金属盐类、 一个醇物质及一种基质溶液所组成， 以所述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质 至适当浓度， 促使核酸与磁性纤维素材进行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离 子组成的盐类， 较佳的情况下可以是锂盐、 钠盐或钾盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。
本发明还提供一种核酸分离方法， 包括提供一种含有核酸的样品， 以及预备清洗 缓冲液和冲提缓冲液等步骤， 其特征在于：
(a) .提供一种固态载体， 所述固态载体至少含有磁性纤维素；
(b) .提供一种试剂， 所述试剂是由一个金属盐类、一个醇物质及一种基质溶液所组 成， 以藉由所述基质溶液调整锂盐和所述醇物质至一个适当浓度， 促使样品中的核酸 与所述固态载体进行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离子组成的盐类， 较佳的 情况下可以是锂盐、 钠盐或钾盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙 醇的任意组合组成的组； 及
(c) .混合所述试剂、所述固态载体与含有核酸的样品， 并以清洗缓冲液冲洗所述固 态载体， 去除掉样品中的非核酸物质， 并以该冲提缓冲液分离出所述固态载体上所接 合的核酸。
本发明还提供一种染色体 DNA纯化方法， 包括提供一含有染色体 DNA的样品， 以及预备清洗缓冲液和冲提缓冲液等步骤， 其特征在于：
(a) .提供一种固态载体， 所述固态载体至少含有磁性纤维素；
(b) .提供一种试剂，所述试剂是由一个金属盐类、一个醇物质及一种基质溶液所组 成， 以藉由所述基质溶液调整金属盐类和所述醇物质至一个适当浓度， 促使样品中的 染色体 DNA 与所述固态载体进行接合， 其中， 所述金属盐类是由单价阳离子组成的 盐类， 较佳的情况下可以是锂盐、 钠盐或钾盐， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组；
(c) .混合所述试剂、 所述固态载体及含有染色体 DNA的样品， 并以清洗缓冲液冲 洗所述固态载体， 去除掉样品中的非核酸物质， 再以该冲提缓冲液分离出所述固态载 体上所接合的染色体 DNA。
因此， 本发明的主要目的在于提供一种能够有效分离核酸物质的、 配合一种固态 载体共同使用以从非核酸物质中分离出核酸的分离促进剂 （chaotropic agent 本发明的另一个目的在于提供一种操作安全且使用简单的、 配合一种固态载体共 同使用以从非核酸物质中分离出核酸的分离促进剂 （chaotropic agent
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造的、 配合一种固态载体共同使用以从 非核酸物质中分离出核酸的分离促进剂 （chaotropic agent) 0
因此， 本发明的主要目的在于提供一种能够有效分离核酸物质的、 配合一种固态 载体共同使用以从非核酸物质中分离出核酸的一种试剂。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全且使用简单的配合一种固态载体共同 使用以从非核酸物质中分离出核酸的一种试剂。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造的配合一种固态载体共同使用以从非 核酸物质中分离出核酸的一种试剂。
本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质的试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全且使用简单的试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造的试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质且以磁性纤维素材分离 核酸的分离促进剂。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全、 使用简单， 且以磁性纤维素材分离 核酸的分离促进剂。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造且以磁性纤维素材分离核酸的分离促 进剂。
本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质且以磁性纤维素材分离 核酸的试剂。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全、 使用简单， 且以磁性纤维素材分离 核酸的试剂。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造且以磁性纤维素材分离核酸的试剂。 本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质且以磁性纤维素材分离 核酸的试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全、 使用简单， 且以磁性纤维素材分离 核酸的试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造且以磁性纤维素材分离核酸的试剂 本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质且用磁性纤维素材分离 核酸的方法。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全、 使用简单， 用磁性纤维素材分离核 酸的方法。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造且用磁性纤维素材分离核酸的方法。 本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质的将核酸结合至磁性纤 维素材的方法。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全、 使用简单的将核酸结合至磁性纤维 素材的方法。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造的将核酸结合至磁性纤维素材的方 法。
本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质的核酸分离方法。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全、 使用简单的核酸分离方法。
本发明的另一个目的在于提供一种易于制造的核酸分离方法。
本发明的另一个目的在于提供一种能够有效分离核酸物质的染色体 DNA纯化方 法。
本发明的另一个目的在于提供一种操作安全、 使用简单的染色体 DNA纯化方法。 本发明的另一个目的在于提供一种易于制造的染色体 DNA纯化方法。
[具体实施方式]
以下配合各实施例说明本发明的分离促进剂 （Chaotropic agent)、 试剂、 试剂盒、 以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂、 以磁性纤维素材分离核酸的试剂、 一种以磁 性纤维素材分离核酸的试剂盒、 一种用磁性纤维素材分离核酸的方法、 一种将核酸结 合至磁性纤维素材的方法， 以及一种染色体 DNA纯化方法。 其中， 载体与核酸结合、 核酸分离、 清洗， 及冲提程序步骤所利用的基本原理与基本架构， 已为相关技术领域 具有通常知识者所能明了， 故以下文中之说明， 不再作完整描述， 合先叙明。 实施例 1
本发明的实施例 1是一种分离促进剂（Chaotropic agent), 此种分离促进剂需配合 一种固态载体共同使用以从非核酸物质中分离出核酸， 如将细胞破碎物 （cdl lysate) 中， 分离出质粒 DNA、基因组 DNA， 或是 cDNA等 DNA物质， 其中细胞破碎物的来 源可为含有细胞或细菌的培养液、组织样品（tissue sample) , 或全血样品（whole blood sample ) 等样品。
其中， 配合分离促进剂使用的固态载体可为由磁性纤维素（magnetic cellul0se)所 制成的磁性纤维素纸 （magnetic cellulose paper ) , 或是磁性纤维素磁珠 （magnetic cellulose bead) ,而磁性纤维素纸或磁性纤维磁珠的制作方式是参考 M. Pourfarzaneh等 人所提出之方法 ( The Use of Magnetizable Particles in Solid Phase Immunoassay, M. Pourfarzaneh, R. S. Kamel, J. Landon, and C. C. Dawes, Methods of Biochemical Analysis. Volume 28, Page 267-295 。
前述的分离促进剂包含有醇物质及一种基质溶液， 其中醇物质可选自由乙醇、 异 丙醇、及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组，而基质溶液在使用上是包含 0.05M至 2.0M 浓度的锂盐、 钠盐或钾盐， 且 pH值范围是在约 5.0到 7.5之间， 可以搭配醇物质的体 积百分比浓度范围为约 10%到 80%， 分离效果较佳。
在从前述的非核酸物质中分离 DNA时， 是将上述样品中加入所述分离促进剂及 由磁性纤维素所制成的磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠的固态载体后， 样品与固态 载体混合， 藉由前述的基质溶液将醇物质调整至一个适当浓度， 使得分离促进剂能够 破坏核酸与核酸所处环境间的氢键（hydrogen bonding )、范德瓦尔斯相互作用（Van der Waals interactions ) , 或是疏水性 （hydrophobic effect) 等作用， 促使样品中的 DNA与 非核酸物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠进行接合并 吸附于其上。 详细实验证据将在以下的对照例 1及对照例 2中加以说明。 实施例 2
本发明的实施例 2是一种试剂， 此种试剂是用在分离核酸时， 使核酸能够有效的 与非核酸物质分离， 并吸附在一种固态载体上， 其组成包含有预定浓度的锂盐、 钠盐 或钾盐及分离促进剂， 其中锂盐、 钠盐或钾盐在使用上的浓度范围为 0.05M至 2.0M。
此种试剂需配合一种固态载体共同使用以从非核酸物质中分离出核酸， 如将细胞 破碎物 （cell lysate ) 中， 分离出质粒 DNA、 基因组 DNA， 或是 cDNA等 DNA物质， 其中细胞破碎物的来源可为含有细胞或细菌的培养液、 组织样品 （tissue sample ) , 或 全血样品 （whole blood sample ) 等样品。
其中， 配合所述试剂使用的固态载体可为由磁性纤维素（magnetic cellulose )所制 成的磁性纤维素纸 (magnetic cellulose paper),或是磁性纤维素磁珠 (magnetic cellulose bead), 制作方式如同实施例 1中所述。
而前述的分离促进剂包含有一个醇物质及一种基质溶液， 其中醇物质可选自由乙 醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组， 而基质溶液在使用上 pH值是在 5.0到 7.5之间。 其中， 搭配前述 0.05M至 2.0M的锂盐、 钠盐或钾盐所使用的醇物质 的预定体积百分比浓度范围约在 10%到 80%有较佳的分离结果。
在从前述的非核酸物质中分离 DNA时， 是将上述样品中加入所述试剂及由磁性 纤维素纸或是磁性纤维素磁珠制成的固态载体后， 样品与固态载体混合， 藉由前述的 基质溶液将醇物质调整至一个适当浓度， 使得试剂中的分离促进剂能够破坏核酸与核 酸所处环境间的氢键 （hydrogen bonding 范德瓦尔斯相互作用 （Van der Waals interactions), 或是疏水性（hydrophobic effect)等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸 物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠进行接合并吸附于 其上， 详细实验证据将在以下的对照例 1及对照例 2中加以说明。 实施例 3
本发明的实施例 3是一种试剂盒， 这种试剂盒是用于从非核酸物质中分离出核酸 并进行回收， 如将细胞破碎物 （cell lysate) 中， 分离出质粒 DNA、 基因组 DNA， 或 是 cDNA等 DNA物质， 并进行回收。 其中细胞破碎物的来源可为含有细胞或细菌的 培养液、 组织样品 （tissue sample), 或全血样品 （ whole blood sample ) 等样品。
试剂盒包括有一种试剂、 一种与所述试剂配合使用的固态载体、 一种清洗缓冲液 及一种冲提缓冲液， 特征在于， 配合试剂使用的固态载体为由磁性纤维素 （magnetic cellulose) 所制成的磁性纤维素纸 （magnetic cellulose paper), 或是磁性纤维素磁珠 (magnetic cellulose bead)。 而且试剂盒中的试剂是由一个具有单价阳离子的金属盐类 (如锂盐、 钠盐或钾盐） 及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂进一步包含有一个醇 物质及一种基质溶液， 其中， 醇物质可选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意 组合组成的组。 而前述锂盐、 钠盐或钾盐、 醇物质及基质溶液在使用上的适当浓度及 酸碱值范围如实施例 2， 在此不再重复赘述， 以下仅就本实施例不同处加以描述。
此种试剂盒在使用上， 是将含有具有单价阳离子的金属盐类及分离促进剂的试剂 以及磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠等固态载体加入样品中， 使样品与固态载体混 合， 藉由前述的基质溶液将醇物质调整至一个适当浓度， 使得试剂中的分离促进剂能 够破坏核酸与核酸所处环境间的氢键（hydrogen bonding )、 范德瓦尔斯相互作用 （Van der Waals interactions), 或是疏水性（hydrophobic effect)等作用， 促使样品中的 DNA 与非核酸物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠进行接合 并吸附于其上， 使 DNA与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠形成一结合物。
之后使用清洗缓冲液将吸附于 DNA与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠所形成 的结合物上的杂质洗去； 待清洗完毕后， 再使用冲提缓冲液将 DNA 自磁性纤维素纸 或是磁性纤维素磁珠冲洗下来到冲提缓冲液里， 以达成自样本中回收 DNA之目的。 详细实验证据将在以下的对照例 1及对照例 2中加以说明。 实施例 4
本发明的实施例 4是一种以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 如将细胞破碎 物（cell lysate) 中， 分离出质粒 DNA、 基因组 DNA， 或是 cDNA等 DNA物质， 其中 细胞破碎物的来源可为含有细胞或细菌的培养液、 组织样品 （tissue sample), 或全血 样品 （whole blood sample) 等样品。 而前述的分离促进剂包含有一个醇物质及一种基 质溶液， 其中醇物质可选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组， 而基质溶液在使用上是包含 0.05M至 2.0M浓度的锂盐、钠盐或钾盐， 且 pH值的范围 是在约 5.0到 7.5之间。配合使用的醇物质的预定体积百分比浓度范围为约 10%到 80%。
在从前述的非核酸物质中分离 DNA时， 是将上述样品中加入所述分离促进剂及 由磁性纤维素所制成的磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠的固态载体后， 样品与固态 载体混合， 藉由前述的基质溶液将醇物质调整至适当浓度， 使得分离促进剂能够破坏 核酸与核酸所处环境间的氢键（hydrogen bonding)、范德瓦尔斯相互作用（Van der Waals interactions), 或是疏水性（hydrophobic effect)等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸 物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠进行接合并吸附于 其上， 详细实验证据将在以下的对照例 1及对照例 2中加以说明。 实施例 5
本发明的实施例 5是一种以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 此种试剂是用在分离 核酸时， 使核酸能够有效的与非核酸物质分离， 并吸附在磁性纤维素材上， 其组成包 含有一个具有单价阳离子的金属盐类 （如锂盐、 钠盐或钾盐） 及分离促进剂， 其中锂 盐、 钠盐或钾盐在使用上的浓度范围为 0.05M至 2.0M。 此种试剂可用于如自细胞破碎物（cell lysate)中，分离出质粒 DNA、基因组 DNA， 或是 cDNA等 DNA物质， 其中细胞破碎物的来源可为含有细胞或细菌的培养液、 组 织样品 （tissue sample), 或全血样品 （whole blood sample) 等样品。
其中，前述的分离促进剂包含有一个醇物质及一种基质溶液，而在配合前述锂盐、 钠盐或钾盐的醇物质的体积百分比浓度是 10%到 80%效果较佳。 此外， 醇物质的组成 群组以及基质溶液在使用上的酸碱值均同于实施例 2， 在此不再重复赘述。
在从前述的非核酸物质中分离 DNA时， 是将上述样品中加入所述试剂后， 样品 与磁性纤维素材混合， 藉由前述的基质溶液将醇物质调整至一个适当浓度， 使得试剂 中的分离促进剂能够破坏核酸与核酸所处环境间的氢键 （hydrogen bonding), 范德瓦 尔斯相互作用 （ Van der Waals interactions), 或是疏水性 （hydrophobic effect) 等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸物质分离， 让样品内的 DNA与磁性纤维素纸或是磁性纤 维素磁珠进行接合并吸附于其上， 详细实验证据将在以下的对照例 1及对照例 2中加 以说明。 实施例 6
本发明的实施例 6是一种以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒， 这种试剂盒是用于 从非核酸物质中分离出核酸并进行回收， 如将细胞破碎物 （cell lysate) 中， 分离出质 粒 DNA、 基因组 DNA, 或是 cDNA等 DNA物质， 并进行回收。 其中细胞破碎物的来 源可为含有细胞或细菌的培养液、组织样品（tissue sample), 或全血样品（whole blood sample) 等样品。
试剂盒的特征在于试剂盒包括有一种试剂、 一种磁性纤维素材、 一种清洗缓冲液 及一种冲提缓冲液， 试剂盒中的试剂是由一个具有单价阳离子的金属盐类 （如锂盐、 钠盐或钾盐） 及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂进一步包含有一个醇物质及一种 基质溶液， 其中， 醇物质可选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的 组。 而前述金属盐类、 醇物质及基质溶液在使用上的浓度及酸碱值范围如实施例 2， 在此不再重复赘述， 以下仅就本实施例不同处加以描述。
此种试剂盒在使用上， 是将含有一个具有单价阳离子的金属盐类及分离促进剂的 试剂以及磁性纤维素材加入样品中， 使样品与磁性纤维素材混合， 藉由前述的基质溶 液将醇物质调整至适当浓度， 使得试剂中的分离促进剂能够破坏核酸与核酸所处环境 间的氢键 （hydrogen bonding )、 范德瓦尔斯相互作用 (Van der Waals interactions), 或 是疏水性 （hydrophobic effect) 等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸物质分离， 让样 品内的 DNA与磁性纤维素材进行接合并吸附于其上， 并形成一结合物。
之后使用清洗缓冲液将吸附于 DNA与磁性纤维素材所形成的结合物上的杂质洗 去； 待清洗完毕后， 再使用冲提缓冲液将 DNA 自磁性纤维素材冲洗下来到冲提缓冲 液里， 以达成自样本中回收 DNA之目的。 详细实验证据将在以下的对照例 1及对照 例 2中加以说明。 对照例 1
为测定本发明的分离促进剂、 包含前述的分离促进剂的试剂、 试剂盒， 以及配合 磁性纤维素材的分离促进剂的核酸与非核酸物质的分离效果及促使核酸与磁性纤维素 材的结合效果， 是以固定量的核酸样品为起始样本， 加入固定体积含有不同浓度的金 属盐类、 醇物质、 以及磁性纤维素材， 并在各个步骤测定样本中的核酸含量， 以推算 结合效果以及最终回收效果， 详细步骤如下：
1. 准备 200微升（200 μΐ), 50mg/ml的人类胎盘 DNA (Human Placenta DNA, Sigma D7011 );
2. 加入 500微升 （50 μΐ) 含有 72%的乙醇 （Ethanol, EtOH) 及 0.05M的不 同金属盐类的分离促进剂或试剂， 以及 20微升 （20 μΐ) 的 Cortex纤维素 珠粒 (Cellulose bead) (Megacell™)磁珠加入步骤 1的人类胎盘 DNA之中， 充分混合后在室温中静置 10分钟；
3. 待吸附 DNA的磁珠沉淀后， 移除上清液 （supernatant), 并测量上清液样 本在 260 nm的吸收度 （O.D.260), 换算回 DNA浓度及 DNA含量， 并与 起始 DNA量比较， 以推算分离效果；
4. 使用 500 微升 （ml) 含有 70%异丙醇 （Isoprpanol) 作为清洗缓冲液清洗 之后， 以 20微升（ml)的水将吸附在磁珠上的 DNA冲洗下来， 测量最后 回收的 DNA含量， 并与起始 DNA量比较以推算回收效果。
如表 1所示， 使用 0.05M的氯化锂 （Lithium Chloride, LiCl)、 醋酸钠 （Sodium acetate, NaOAc), 或氯化钠 （ Sodium Chloride ) 作为前述实施例中所述的金属盐类溶 液， 而搭配 72%的乙醇， 其中对照组 （空白实验组， 组别 1-4) 的醇物质及金属盐浓 度分别为 0%及 0 M。 表 1
Figure imgf000013_0001
*:实验结果无法测得 （not available)
由表 1的结果可以得知， 在 72%的乙醇以及 0.05M的不同金属盐类的条件下， 结 合效果都大于 90%， 其中又以 72%， 0.05M NaOAc的配方最佳。 对照例 2
如表 2所示，当以固定体积的全血（whole blood)样品为例，使用 0.05M, 0.1M, 0.5M, 1.0M, 2M的醋酸钠 （sodium acetate, NaoAC) 或醋酸钾 （potassium acetate, KoAC) 作 为前述实施例中所述的金属盐类溶液， 而搭配的醇物质的体积百分比浓度范围则为 10%到 72% (组别 2-1到 2-8)， 其中对照组（空白实验组， 组别 2-9) 的醇物质及醋酸 钾浓度分别为 0%及 0 M。
首先相同体积的全血样品经过裂解缓冲液 （lysis buffer) 处理后得到细胞破碎物， 再加入上述含有不同浓度的金属盐类溶液及含有不同体积百分比浓度的分离促进剂， 并同时加入磁性纤维素材， 与细胞破碎物充分混合， 经过以 70%异丙醇 （Isoprpanol) 作为清洗缓冲液清洗之后， 再以 pH 8.0的 10 mM的 Tris-HCl当作冲提缓冲液回收样 品中的 DNA， 最后测得各组样品中 DNA的浓度 （以奈克 /微升， ng/μΐ为单位）， 并测 量各组回收的 DNA产物在波长 260nm及 280nm的吸光度比值 （O.D.260/280比值）， 以及在波长 260nm及 230nm的吸光度比值（O.D.260/230比值）， 以分别检测各组回收 的 DNA纯度。 表 2
Figure imgf000013_0002
2-6 10% 异丙醇 0.1M NaOAc, pH 34.06 1.52 0.17
5.0
2-7 50% 异丙醇 0.05M KoAC 19.49 1.91 0.07
2-8 25% 异丙醇 0.05M KoAC 24.63 1.9 0.24
2-9 0% 异丙醇 0M KoAC 0 N/A* N/A*
*:实验结果无法测得 （not available) 由表 2的结果可以得知， 在 10%到 72%的醇物质， 以及 0.05M到 2M的金属盐浓 度的条件下， 最终所得到的 DNA产物纯度良好， 产物中蛋白质含量 （O.D.260/280比 值 > 1.5) 及 RNA含量 （O.D.260/230比值 < 0.5 ) 都很低。 此外， 本对照例虽只显示 10%到 72%的醇物质浓度范围下配合不同金属盐类的实验结果， 但是在其它实验中， 醇物质浓度提高到 80%时， 亦有良好的分离效果及 DNA产物纯度； 且分离促进剂或 试剂的 pH值从 5.0到 7.5都具有可促使核酸与非核酸物质分离及促使核酸与磁性纤维 素材结合的效果。
所以根据本发明所揭露的分离促进剂（Chaotropic agent 由分离促进剂及金属盐 类所组成的试剂、包含分离促进剂的试剂盒、 以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂、 以磁性纤维素材分离核酸的试剂、 以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒， 可有效配合包 含有磁性纤维素材的固态载体而得到良好的分离及纯化效果。 实施例 7
本发明的实施例 7是一种用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中包含有提供一种 含有核酸的样品， 以及预备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材， 所述试剂是由一个金属盐类及分离促进剂所组成， 且所述分离促进剂进一步包含有一 个醇物质及一种基质溶液， 其中， 醇物质可选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的 任意组合组成的组。 而前述金属盐类、 醇物质及基质溶液在使用上的浓度及酸碱值范 围如实施例 2， 在此不再重复赘述， 以下仅就本实施例不同处加以描述。
首先， 提供一含有核酸的样品， 例如细胞破碎物（cell lysate), 而细胞破碎物的来 源可为含有细胞或细菌的培养液、组织样品（tissue sample), 或全血样品（whole blood sample) 等样品， 以及准备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材。 上述试剂是由一个预定浓度的锂盐、 钠盐或钾盐及分离促进剂所组成， 而分离促进剂 进一步包含有一个醇物质及基质溶液。将试剂添加至上述含有核酸的样品中进行混合， 使样品与磁性纤维素材混合， 藉由前述的基质溶液将醇物质调整至适当浓度， 使得试 剂中的分离促进剂能够破坏核酸与核酸所处环境间的氢键 （hydrogen bonding)^ 范德 瓦尔斯相互作用 （Van der Waals interactions), 或是疏水性 （hydrophobic effect) 等作 用， 促使样品中的 DNA与非核酸物质分离， 让样品内的 DNA与磁性纤维素材进行接 合并吸附于其上， 并形成一结合物。
本方法可进一步包括提供一清洗缓冲液， 将吸附于 DNA与磁性纤维素材所形成 的结合物上的非核酸物质洗去； 亦可进一步包括提供一冲提缓冲液， 待清洗完毕后， 再使用冲提缓冲液将 DNA自磁性纤维素材冲洗下来到冲提缓冲液， 回收 DNA。 详细 实验证据将在以下的对照例 3中加以说明。 实施例 8
本发明的实施例 8是一种用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中包含有提供一种 含有核酸的样品， 以及预备一种试剂、 可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材、 清洗缓冲液和冲提缓冲液等步骤， 所述试剂是由锂盐、 钠盐或钾盐及分离促进剂所组 成， 且分离促进剂进一步包含有醇物质及基质溶液， 其中， 醇物质可选自由乙醇、 异 丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。 而上述锂盐、 钠盐或钾盐、 醇物质及基 质溶液在使用上的浓度及酸碱值范围如实施例 2， 在此不再重复赘述， 以下仅就本实 施例不同处加以描述。
首先， 提供一含有核酸的样品， 例如细胞破碎物（cdl lysate), 而细胞破碎物的来 源可以含有细胞或细菌的培养液、组织样品（tissue sample), 或全血样品（whole blood sample) 等样品， 以及准备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材。 上述试剂是由锂盐及分离促进剂所组成， 而分离促进剂进一步包含有醇物质及基质溶 液。 将试剂添加至上述含有核酸的样品中进行混合， 使样品与磁性纤维素材混合， 藉 由前述的基质溶液将醇物质调整至适当浓度， 使得试剂中的分离促进剂能够破坏核酸 与核酸所处环境间的氢键 （hydrogen bonding )> 范德瓦尔斯相互作用 （Van der Waals interactions), 或是疏水性（hydrophobic effect)等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸 物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素材进行接合并吸附于其上， 并形成 DNA- 磁性纤维素材结合物。
接着提供一清洗缓冲液， 将吸附于 DNA-磁性纤维素材结合物上的非核酸物质洗 去， 待冲洗完毕后， 提供一冲提缓冲液， 使用冲提缓冲液将 DNA 自磁性纤维素材冲 洗下来到冲提缓冲液， 回收 DNA。 详细实验证据将在以下的对照例 3中加以说明。 实施例 9
本发明的实施例 9是一种将核酸结合至磁性纤维素材的方法， 其中包含有提供一 种含有核酸的样品， 以及预备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材 等步骤， 所述试剂是由锂盐、 钠盐或钾盐、 及分离促进剂及一种基质溶液所组成， 而 分离促进剂亦包含有醇物质， 而醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意 组合组成的组。 上述锂盐、 钠盐或钾盐、 醇物质及基质溶液在使用上的浓度及酸碱值 范围如实施例 2， 在此不再重复赘述， 以下仅就本实施例不同处加以描述。
首先， 准备一含有核酸的样品， 例如细胞破碎物（cell lysate), 而细胞破碎物的来 源可以含有细胞或细菌的培养液、组织样品（tissue sample), 或全血样品（whole blood sample) 等样品， 以及准备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维素材。
将试剂添加至上述含有核酸的样品中进行混合， 使样品与磁性纤维素材混合， 藉 由前述的基质溶液将醇物质调整至适当浓度， 使得混合液中分离促进剂能够破坏核酸 与核酸所处环境间的氢键 （hydrogen bonding 范德瓦尔斯相互作用 （Van der Waals interactions), 或是疏水性（hydrophobic effect)等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸 物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素材进行接合并吸附于其上， 并形成 DNA- 磁性纤维素材结合物。 详细实验证据将在以下的对照例 3中加以说明。 实施例 10
本发明的实施例 10是一种核酸分离方法， 如从细胞破碎物（cell lysate)中， 分离 出质粒 DNA、基因组 DNA， 或是 cDNA等 DNA物质， 其中细胞破碎物的来源可为含 有细胞或细菌的培养液、 组织样品 （tissue sample), 或全血样品 （whole blood sample) 等样品。
此种方法包括提供上述含有核酸的样品， 以及预备清洗缓冲液和冲提缓冲液等步 骤， 其特征在于：
(a) .提供一种固态载体， 所述固态载体至少含有磁性纤维素， 其型态可以由磁性纤 维素 （magnetic cellulose) 所制成的磁性纤维素纸 (magnetic cellulose paper), 或是磁 性纤维素磁珠 （magnetic cellulose bead), 制作方式如同实施例 1中所述；
(b) .提供一种试剂， 所述试剂是由一个预定浓度的锂盐、钠盐或钾盐、一个醇物质 及一种基质溶液所组成， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组 合组成的组， 藉由基质溶液调整锂盐和醇物质至适当浓度。 在使用上， 醇物质的预定 体积百分比浓度范围是约 10%到 80%, 而锂盐、 钠盐或钾盐的较佳预定浓度范围是 0.05M至 2.0M, 而在使用上， 基质溶液的酸碱值范围需在约 pH5.0到约 pH7.5之间， 如此才能促使样品中的核酸与所述固态载体进行接合，
(c).混合所述试剂、所述固态载体与含有核酸的样品， 使得试剂能够破坏核酸与核 酸所处环境间的氢键 （hydrogen bonding ) 范德瓦尔斯相互作用 （Van der Waals interactions), 或是疏水性（hydrophobic effect)等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸 物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠进行接合并吸附于 其上， 并以清洗缓冲液冲洗所述固态载体， 去除掉样品中的非核酸物质， 并以该冲提 缓冲液分离出所述固态载体上所接合的核酸。
详细实验证据将在以下的对照例 3中加以说明。 实施例 11
本发明的实施例 11是一种染色体 DNA纯化方法， 如从细胞破碎物 （cell lysate) 中萃取出染色体 DNA (基因组 DNA) 的方法， 其中细胞破碎物的来源可为含有细胞 或细菌的培养液、 组织样品 （tissue sample), 或全血样品 （whole blood sample) 等样
P
PR o
此种方法包括提供上述含有染色体 DNA的样品， 以及预备清洗缓冲液和冲提缓 冲液等步骤， 其特征在于：
(a) .提供一种固态载体， 所述固态载体至少含有磁性纤维素， 其型态可以由磁性纤 维素 （magnetic cellulose) 所制成的磁性纤维素纸 （magnetic cellulose paper), 或是磁 性纤维素磁珠 （magnetic cellulose bead), 制作方式如同实施例 1中所述；
(b) .提供一种试剂，所述试剂是由一个金属盐类、一个醇物质及一种基质溶液所组 成， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组， 而金属 盐类则可是锂盐、 钠盐或钾盐， 如氯化锂、 醋酸钠或醋酸钾， 藉由基质溶液调整金属 盐类和所述醇物质至适当浓度，醇物质较佳的预定体积百分比浓度范围是 10%到 80%， 而金属盐类较佳浓度范围是 0.05M至 2.0M, 而在使用上，基质溶液的酸碱值范围需在 约 pH5.0到约 pH7.5之间，如此才能促使样品中的染色体 DNA与所述固态载体进行接 合.
(c) .混合所述试剂、 所述固态载体及含有染色体 DNA的样品， 使得试剂能够破坏 核酸与核酸所处环境间的氢键（hydrogen bonding),范德瓦尔斯相互作用（Van der Waals interactions), 或是疏水性（hydrophobic effect)等作用， 促使样品中的 DNA与非核酸 物质分离， 让样品内的 DNA 与磁性纤维素纸或是磁性纤维素磁珠进行接合并吸附于 其上， 并以清洗缓冲液冲洗所述固态载体， 去除掉样品中的非核酸物质， 并以该冲提 缓冲液分离出所述固态载体上所接合的核酸。
详细实验证据将在以下的对照例 3中加以说明。 对照例 3
如表 3所示，当以固定体积的全血 (whole blood)样品为例，使用 0.05M, 0.1M, 0.5M, 1.0M, 2M的醋酸钠 （sodium acetate, NaoAC) 或醋酸钾 （potassium acetate, Ko AC) 作 为前述实施例中所述的金属盐类溶液， 而搭配的醇物质的体积百分比浓度范围则为 10%到 72% (组别 3-1到 3-9)， 其中对照组 （空白实验组， 组别 3-10) 的醇物质及醋 酸钾浓度分别为 0%及 0M。
操作步骤如下：
(a) . 200微升 （μΐ) 的全血样品， 加入 20p 1的裂解缓冲液 （lysis buffer) 及 20 微升 （μ1)， 10 mg/ml的蛋白酶 K (Proteinase Κ)， 混合处理后得到细胞破碎物；
(b) .将 500微升（μΐ)的试剂加入前述的细胞破碎物中。试剂中含有 10%到 72%的 异丙醇，以及 0.05Μ至 2.0Μ的醋酸钠（Sodium acetate)或醋酸钾（Potassium actetate), 和含有磁性纤维素材的固态载体， 试剂酸碱值小于或等于 pH 6.0， 此时样品中的染色 体 DNA与固态载体进行接合；
(c) . 使用 1毫升（ml)的清洗缓冲液（内含有 70%的异丙醇，或是 20%的 PEG6000 配上 2M的醋酸钾）， 将不与固态载体结合的非核酸杂质清洗去除；
(d) . 使用 100微升 （μΐ) 的 pH 8.0, lOmM的 Tris-HCl当作冲提缓冲液， 将附着在 固态载体上的染色体 DNA分离出来。
最后测得各组样品中 DNA的浓度（以奈克 /微升, ng/μΐ为单位）， 并测量各组回收 的 DNA产物在波长 260nm及 280nm的吸光度比值 （O.D.260/280比值）， 以及在波长 260nm及 230nm的吸光度比值 （O.D.260/230比值）， 以分别检测各组回收的 DNA纯 度。 表 3
Figure imgf000019_0001
*:实验结果无法测得 （not available) 由表 3的结果可以得知， 在 10%到 72%的醇物质， 以及 0.05M到 2M的金属盐浓 度的条件下， 均可得到至少 5奈克 /微升的染色体 DNA， 且 DNA产物纯度良好， 大致 上最终取得的染色体 DNA 中蛋白质含量 （O.D.260/280 比值 > 1.5 ) 及 RNA 含量 (O.D.260/230比值 < 0.5 ) 都很低。 此外， 本对照例虽只显示 10%到 72%的醇物质浓 度范围下配合不同金属盐类的实验结果， 但是在其它实验中， 醇物质浓度提高到 80% 时，亦有良好的分离效果及 DNA产物纯度；且分离促进剂或试剂的 pH值从 5.0到 7.5 都具有可促使核酸与非核酸物质分离及促使核酸与磁性纤维素材结合的效果。
所以根据本发明所揭露的用磁性纤维素材分离核酸的方法、 将核酸结合至磁性纤 维素材的方法、 核酸分离方法， 以及染色体 DNA纯化方法， 可有效配合包含有磁性 纤维素材的固态载体而得到良好的分离及纯化效果。 以上所述仅为本发明的优选实施例， 并非用以限定本发明的权利范围； 同时以上 的描述， 对于熟知本技术领域的专门人士应可明了及实施， 因此其它未脱离本发明所 揭示的精神下所完成的等效改变或修饰， 均应包含在下述的权利要求范围中。

Claims

权 利 要 求
1. 一种分离促进剂， 其配合固态载体共同使用以从非核酸物质中分离 出核酸， 当加入所述分离促进剂的固态载体与含有核酸的样品混合后， 所 述分离促进剂会提供样品中的核酸与非核酸物质分离， 促使所述固态载体 与核酸结合并吸附 其特征在于- 配合分离促进剂使用的固态载体至少具有磁性纤维素 （ magnetic cellulose ) ， 且所述分离促进剂包含有一个醇物质及一种基质溶液， 促使 样品内的核酸与所述磁性纤维素进行接合，其中，所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。
2. 依据权利要求 1所述的分离促进剂， 其中， 所述醇物质的浓度范围为 约 10%到 80%。
3. 依据权利要求 1所述的分离促进剂， 其中， 所述基质溶液进一步包 含有金属盐类。
4. 依据权利要求 3所述的分离促进剂， 其中， 所述金属盐类包含有单 价阳离子。
5. 依据权利要求 3所述的分离促进剂， 其中， 所述金属盐类选自由锂 盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
6. 依据权利要求 3所述的分离促进剂， 其中， 所述金属盐类的浓度约 在 0.05M和 2.0M之间。
7 依据权利要求 1 所述的分离促进剂， 其中， 所述基质溶液的 pH值 范围在约 5.0到约 7.5之间。
8. 依据权利要求 1所述的分离促进剂， 其中， 所述核酸为 DNA。
9. 依据权利要求 1所述的分离促进剂， 其中， 所述固态载体为磁性纤 维素纸 ( magnetic cellulose paper ) 。
10. 依据权利要求 1 所述的分离促进剂， 其中， 所述固态载体为磁性 纤维素磁珠 ( magnetic cellulose bead ) 。
1 1 . 一种试剂， 其配合固态载体共同使用以从非核酸物质中分离出核 酸， 当加入所述试剂的固态载体与含有核酸的样品混合后， 所述试剂会提 供样品中的核酸与非核酸物质分离， 促使所述固态载体与核酸结合并吸 附， 其特征在于：
配合试剂使用的所述固态载体至少具有磁性纤维素， 且所述试剂是由 一个金属盐类及一种分离促进剂所组成， 所述分离促进剂包含有一个醇物 质及一种基质溶液， 促使样品内的核酸与磁性纤维素进行接合， 其中， 所 述金属盐类包含有单价阳离子， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇 与异丙醇的任意组合组成的组。
12. 依据权利要求 1 1所述的试剂， 其中， 所述醇物质的浓度范围为约 10%到 80 %。
13. 依据权利要求 1 1所述的试剂， 其中， 所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐， 与钾盐组成的组其中之一；
14. 依据权利要求 1 1 所述的试剂， 其中， 所述金属盐类的浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
15. 依据权利要求 9 所述的试剂， 其中， 所述基质溶液的 pH 值范围 在约 5.0到约 7.5之间。
16. 依据权利要求 9所述的试剂， 其中， 所述核酸为 DNA。
17. 依据权利要求 9所述的试剂， 其中， 所述固态载体为磁性纤维素 纸 ( magnetic cellulose paper ) 。
18. 依据权利要求 9所述的试剂， 其中， 所述固态载体为磁性纤维素 磁珠 ( magnetic cellulose bead ) 。
19. 一种试剂盒， 其用于从非核酸物质中分离出核酸， 所述试剂盒包 括有一种试剂、 一种与所述试剂配合使用的固态载体、 一种清洗缓冲液及 一种冲提缓冲液， 其特征在于： 所述固态载体至少具有磁性纤维素， 且所 述试剂是由一个金属盐类及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂包含有一 个醇物质及一种基质溶液， 促使核酸与磁性纤维素进行接合， 其中， 所述 金属盐类包含有单价阳离子； 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与 异丙醇的任意组合组成的组。
20. 依据权利要求 16所述的试剂盒， 其中， 所述醇物质的适当浓度范 围约为 10%到 80%。
21 . 依据权利要求 16所述的试剂盒，其中，所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一
22. 依据权利要求 16所述的试剂盒， 其中， 所述金属盐类的浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
23. 依据权利要求 16所述的试剂盒， 其中， 所述基质溶液的 pH值范 围在约 5.0到约 7.5之间。
24. 依据权利要求 16所述的试剂盒， 其中， 所述核酸为 DNA。
25. 依据权利要求 16所述的试剂盒， 其中， 所述固态载体为磁性纤维 素纸 ( magnetic cellulose paper ) 。
26. 依据权利要求 16所述的试剂盒， 其中， 所述固态载体为磁性纤维 素磁珠 ( magnetic cellulose bead ) 。
27. 一种以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 当加入所述分离促 进剂的磁性纤维素材与含有核酸的样品混合后， 所述分离促进剂会提供样 品中的核酸与非核酸物质分离， 其特征在于- 所述分离促进剂包含有一个醇物质及一种基质溶液， 促使样品内的核 酸与磁性纤维素材进行接合， 其中， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及 乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。
28. 依据权利要求 23所述的以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 其中， 所述醇物质的浓度范围为约 10%到 80%。
29. 依据权利要求 23所述的以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 其中， 所述基质溶液进一步包含有一个金属盐类。
30. 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 其中， 所述金属盐类包含有单价阳离子。
31 . 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 其中， 所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
32. 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 其中， 所述金属盐类的浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
33. 依据权利要求 23所述的以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 其中， 所述基质溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
34. 依据权利要求 23所述的以磁性纤维素材分离核酸的分离促进剂， 其中， 所述核酸为 DNA。
35. 一种以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 当加入所述试剂的磁性纤 维素材与含有核酸的样品混合后， 所述试剂会提供样品中的核酸与非核酸 物质分离， 其特征在于：
所述试剂是由一个金属盐类及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂包 含有一个醇物质及一种基质溶液， 促使样品内的核酸与磁性纤维素材进行 接合， 其中， 所述金属盐类包含有单价阳离子， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。
36. 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 其中， 所述醇物质的浓度范围为约 10%到 80%。
37. 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 其中， 所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
38. 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 其中， 所述金属盐类的浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
39. 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 其中， 所述基质溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
40. 依据权利要求 29所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂， 其中， 所述核酸为 DNA。
41 . 一种以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂 盒包括有一种试剂、 一种磁性纤维素材、 一种清洗缓冲液及一种冲提缓冲 液， 且所述试剂是由一个金属盐类及分离促进剂所组成， 所述分离促进剂 包含有一个醇物质及基质溶液，促使核酸与磁性纤维素材进行接合，其中， 所述金属盐类包含有单价阳离子， 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙 醇与异丙醇的任意组合组成的组。
42. 依据权利要求 34所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒，其中， 所述醇物质的浓度范围为约 10%到 80%。
43. 依据权利要求 34所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒，其中， 所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
44. 依据权利要求 34所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒，其中， 所述金属盐类浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
45. 依据权利要求 34所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒，其中， 所述基质溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
46. 依据权利要求 34所述的以磁性纤维素材分离核酸的试剂盒，其中， 所述核酸为 DNA。
47. 一种用磁性纤维素材分离核酸的方法， 该方法包括提供一种含有 核酸的样品， 以及预备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维 素材， 其特征在于：
添加所述试剂至含有核酸的样品中予以混合， 所述试剂是由一个的金 属盐类及分离促进剂所组成， 且所述分离促进剂包含有一个醇物质及基质 溶液， 藉由所述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促 使核酸与磁性纤维素材进行接合， 其中， 所述金属盐包含有单价阳离子； 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组。
48. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述醇物质的适当浓度范围为约 10%到 80%。
49. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
50. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述金属盐类的适当浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
5 1. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述基质溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
52. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述核酸为 DNA。
53. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述非核酸物质是源自细胞破碎物 （cell lysate ) 。
54. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 该方法 进一步包括提供一种清洗缓冲液， 以去除掉样品中的非核酸物质。
55. 依据权利要求 39所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 该方法 进一步包括提供一种冲提缓冲液， 以分离核酸与所述磁性纤维素材。
56. 一种用磁性纤维素材分离核酸的方法， 该方法包括提供一种含有 核酸的样品， 以及预备一种试剂、 可与所述试剂共同配合使用的磁性纤维 素材、 清洗缓冲液和冲堤缓冲液的步骤， 其特征在于- 添加所述试剂至含有核酸的样品中予以混合， 所述试剂是由一个金属 盐类、 一个醇物质及一种基质溶液所组成， 藉由所述基质溶液调整所述金 属盐类和所述醇物质至适当浓度， 促使核酸与磁性纤维素材进行接合， 其 中， 所述金属盐类包含有单价阳离子， 且所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异丙醇的任意组合组成的组； 而后用清洗缓冲液冲洗所述磁性纤 维素材， 去除掉样品中的非核酸物质， 并用冲堤缓冲液分离出所述磁性纤 维素材上所接合的核酸。
57. 依据权利要求 47所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述醇物质的适当浓度范围为约 10%到 80%。 '
58. 依据权利要求 47所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐与钾盐所组成的组其中之一。
59. 依据权利要求 47所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述金属盐类的适当浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
60. 依据权利要求 47所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述基质溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
61 . 依据权利要求 47所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 所述核酸为 DNA。
62. 依据权利要求 47所述的用磁性纤维素材分离核酸的方法， 其中， 该非核酸物质是源自细胞破碎物 （cdl lysate ) 。
63. 一种将核酸结合至磁性纤维素材的方法， 该方法包括提供一种含 有核酸的样品， 以及预备一种试剂和可与所述试剂共同配合使用的磁性纤 维素材的步骤， 其特征在于：
添加所述试剂至含有核酸的样品中予以混合， 所述试剂是由一个金属 盐类、 一个醇物质及基质溶液所组成， 以所述基质溶液调整所述金属盐类 和所述醇物质至适当浓度， 促使核酸与磁性纤维素材进行接合， 其中， 所 述金属盐类包含有单价阳离子； 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇 与异丙醇的任意组合组成的组。
64. 依据权利要求 53所述的将核酸结合至磁性纤维素材的方法，其中， 所述醇物质的适当浓度范围为约 10%到 80%。
65. 依据权利要求 53所述的将核酸结合至磁性纤维素材的方法，其中， 所述金属盐类选自由锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
66. 依据权利要求 53所述的将核酸结合至磁性纤维素材的方法，其中， 所述金属盐类的适当浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
67. 依据权利要求 53所述的将核酸结合至磁性纤维素材的方法，其中， 所述基质溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
68. 依据权利要求 53所述的将核酸结合至磁性纤维素材的方法，其中， 所述核酸为 DNA。
69. 一种核酸分离方法， 包括提供一种含有核酸的样品， 以及预备清 洗缓冲液和冲提缓冲液的步骤， 其特征在于：
(a) . 提供一种固态载体， 所述固态载体至少含有磁性纤维素；
(b) . 提供一种试剂， 所述试剂是由一个金属盐类、 一个醇物质及一种 基质溶液所组成， 藉由所述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至一 个适当浓度， 促使样品中的核酸与所述固态载体进行接合， 其中， 所述金 属盐类包含有单价阳离子； 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙醇与异 丙醇的任意组合组成的组； 及
(c) . 混合所述试剂、 所述固态载体与含有核酸的样品， 并以清洗缓冲 液冲洗所述固态载体， 去除掉样品中的非核酸物质， 并以该冲提缓冲液分 离出所述固态载体上所接合的核酸。
70. 依据权利要求 58所述的核酸分离方法， 其中， 所述醇物质的调整 后的适当浓度范围为约 10%到 80%。
71 . 依据权利要求 58所述的核酸分离方法， 其中， 所述金属盐类选自 由锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
72. 依据权利要求 58所述的核酸分离方法， 其中， 所述金属盐类的调 整后的适当浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
73. 依据权利要求 58 所述的核酸分离方法， 其中， 所述基质溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
74. 依据权利要求 58所述的核酸分离方法， 其中， 所述核酸为 D A。
75. 依据权利要求 58所述的核酸分离方法， 其中， 所述固态载体为磁 性纤维素纸 ( magnetic cellulose paper ) 。
76. 依据权利要求 58所述的核酸分离方法， 其中， 所述固态载体为磁 性纤维素磁珠 ( magnetic cellulose bead ) 。
77. 一种染色体 DNA纯化方法， 包括提供含有染色体 DNA的样品， 以及预备清洗缓冲液和冲提缓冲液的步骤， 其特征在于：
(a) . 提供一种固态载体， 所述固态载体至少含有磁性纤维素；
(b) . 提供一种试剂， 所述试剂是由一个金属盐类、 一个醇物质及一种 基质溶液所组成， 藉由所述基质溶液调整所述金属盐类和所述醇物质至一 个适当浓度， 促使样品中的染色体 DNA与所述固态载体进行接合， 其中， 所述金属盐类包含有单价阳离子； 所述醇物质选自由乙醇、 异丙醇、 及乙 醇与异丙醇的任意组合组成的组；
(c) . 混合所述试剂、 所述固态载体及含有染色体 DNA 的样品， 并以 清洗缓冲液冲洗所述固态载体， 去除掉样品中的非核酸物质， 再以该冲提 缓冲液分离出所述固态载体上所接合的染色体 DNA。
78. 依据权利要求 65所述的染色体 DNA纯化方法， 其中， 所述醇物 质的调整后的适当浓度范围为约 10%到 80 %。
79. 依据权利要求 65所述的染色体 DNA纯化方法， 其中， 该金属盐 类为锂盐、 钠盐与钾盐组成的组其中之一。
80. 依据权利要求 65所述的染色体 DNA纯化方法， 其中， 所述金属 盐类的调整后的适当浓度约在 0.05M和 2.0M之间。
81. 依据权利要求 65所述的染色体 DNA纯化方法， 其中， 所述基质 溶液的 pH值范围在约 5.0到约 7.5之间。
82. 依据权利要求 65所述的染色体 DNA纯化方法， 其中， 所述固态 载体为磁性纤维素纸 ( magnetic cellulose paper ) 。
83. 依据权利要求 65所述的染色体 DNA纯化方法， 其中， 所述固态 载体为磁性纤维素磁珠 ( magnetic cellulose bead ) 。
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