WO2009019358A1 - Procédé de dépôt d'une suspension cellulaire sur une plaque d'analyse - Google Patents

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Novacyt
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    • G01N2035/1058—General features of the devices using the transfer device for another function for mixing

Definitions

  • the present invention relates to a method of depositing a cell suspension on an analysis plate by means of a sampling pipette comprising a step of taking a volume of cell suspension.
  • a sampling pipette comprising a step of taking a volume of cell suspension.
  • the cell suspension containing the harvested cells and a cell preservation liquid
  • a mixing liquid in order to "dilute" the cells in a cell suspension of greater volume.
  • the mixture allows resuspension of the cells to obtain a homogeneous distribution of cells in the suspension.
  • the use of a mixing well is known in which the cell suspension and the mixing liquid are poured in order to mix these two liquids.
  • the cells may adhere to or remain in the bottom of the well wall, resulting in potentially uncomfortable cell losses for subsequent analysis.
  • the use of such a disposable sink leads to the purchase of additional equipment, which poses problems of cost and disposal of waste.
  • deposition on the assay plate is by decantation of the cell suspension in a settling chamber disposed above the assay plate.
  • the cell storage fluid is gradually absorbed around the assay plate and the cells are deposited on the assay plate.
  • Such a system is for example described in EP-1 045 249. It is not possible to carry out mixing directly in the settling chamber because the mixing liquid is gradually absorbed, which prevents resuspension, lack of liquid.
  • certain cells begin to deposit on and adhere to the analysis plate even before the resuspension is done, which does not allow to obtain a homogeneous deposit.
  • One of the objectives of the invention is to overcome these drawbacks by proposing a method of depositing a cell suspension on an analysis plate for obtaining a cellular spread of excellent quality, homogeneous and without clumps.
  • the invention relates to a method of depositing a cell suspension on an analysis plate by means of a sampling pipette comprising a step of taking a volume of cell suspension, comprising at least the successive steps following:
  • - take a volume of rinsing liquid, - provide a second volume of air, said air volume being arranged to prevent the mixing of the volume of rinsing liquid and the first volume of mixing liquid during the movement back and forth printed in the pipette, the rinsing liquid entraining the cells adhering to the wall of the pipette during the deposition of the cell suspension on the analysis plate and being deposited with the cell suspension;
  • the ratio between the first volume of air and the first volume of mixing liquid is substantially between 1/10 and 1/3;
  • the ratio between the first volume of mixing liquid and the second volume of mixing liquid is substantially between 1/3 and 1;
  • the volume of cell suspension taken is substantially between 50 ⁇ l and 150 ⁇ l; the volume of rinsing liquid is substantially between 100 ⁇ l and
  • the second volume of air is substantially between 50 ⁇ l and 150 ⁇ l;
  • Samples of liquids and air and the movement back and forth printed in the pipette are provided by a pumping device; and the step of depositing on the analysis plate consists of emptying the pipette into a settling chamber disposed above the analysis plate.
  • FIG. 1 is a diagrammatic representation in section of a pipette in which the various samples provided by the process have been carried out
  • FIG. 2 is a diagrammatic sectional representation of the pipette of FIG. 1 during the mixing provided by the process
  • FIG. 3 is a schematic representation of the pipette of FIG. 1 placed above a settling chamber during the deposition of the cell suspension on an analysis plate.
  • the pipette 1 shown in the figures is for example a disposable pipette known per se and whose suction is controlled by a pumping device, also known and not shown.
  • the pumping device allows a precise liquid sampling whose volume can be perfectly selected.
  • a volume V1 of a rinsing liquid 2 is taken by means of the pipette 1.
  • the rinsing liquid is, for example, distilled water or physiological saline, and makes it possible to train cells adhering to the wall of the pipette 1, as will be described later.
  • the volume V1 is for example substantially between 100 .mu.l and 200 .mu.l. According to one embodiment, the volume V1 is substantially equal to 150 ⁇ l.
  • a volume V2 of air is provided in the pipette 1 under the rinsing liquid 2.
  • This volume V2 is for example substantially between 50 .mu.l and 150 .mu.l. The function of this volume of air will be described later.
  • a first volume V3 of a mixing liquid 3 is taken by means of the pipette 1.
  • the mixing liquid is, for example, distilled water or physiological saline.
  • the first volume V3 of liquid mixture 3 is for example substantially between 100 .mu.l and 200 .mu.l. According to one embodiment, the volume V3 is substantially equal to 150 ⁇ l.
  • a volume V4 of air is provided in the pipette 1 under the first volume V3 of mixing liquid 3.
  • the ratio between the first volume V4 of air and the first volume V3 of mixing liquid 3 is linked to the height of the displacement back and forth during pumping which must exceed the height of the air volume and be substantially between 1/10 and 1/3.
  • this volume V4 is for example substantially between 10 .mu.l and 30 .mu.l.
  • the volume V4 is substantially equal to 20 .mu.l.
  • a second volume V5 of the mixing liquid 3 is taken, separated from the first volume V3 by the volume V4 of air.
  • the ratio between the first volume V3 of mixing liquid 3 and the second volume V5 of mixing liquid 3 is substantially between 1/3 and 1.
  • the second volume V5 of mixing liquid 3 is, for example, substantially comprised between tre50 ⁇ l and 200 ⁇ l.
  • the second volume V5 is substantially equal to 130 ⁇ l.
  • a volume V6 of a cell suspension 4 is taken under the second volume V5 of mixing liquid 3.
  • the cell suspension 4 contains the cells 5 to be analyzed and a liquid for storing these cells.
  • the cells 5 are for example obtained in a known manner by smearing, scraping, collecting liquid or needle puncture.
  • the volume V6 is for example substantially between 50 .mu.l and 150 .mu.l. According to one embodiment, the volume V6 is substantially equal to 70 ⁇ l.
  • the difference in density between the mixing liquid 3 and the liquid of the cell suspension 4 causes the cell suspension 4 to rise in the second volume V5 of mixing liquid 3 and is placed under the volume V4 of air. The cell suspension 4 is thus "surrounded" by mixing liquid 3.
  • a reciprocating movement is imparted to the liquids present in the pipette 1, as represented by the arrows F of FIG. 2.
  • This reciprocating movement has the effect of "bursting" the air bubble of volume V4, because of the small value of it.
  • the first and second volumes V3 and V5 of mixing liquid 3 are mixed with the volume V6 of cell suspension 4, as shown in FIG. 2.
  • a "diluted" cell suspension 6 is thus obtained in the mixing liquid 3.
  • the cells 5 are distributed homogeneously in the suspension 6 by virtue of the position of the cell suspension 4 taken between the two volumes of mixing liquid 3 before the movement back and forth.
  • the next step of the process consists in emptying the pipette 1 in a settling chamber 7 disposed above an analysis plate 8, as shown in FIG. 3.
  • An absorbent material 9 is disposed around the analysis plate around the deposition zone so as to be in fluid communication with the cell suspension 6 poured into the settling chamber 7 and to absorb the liquid from this suspension 6 during the decantation.
  • the absorption of the liquid from the suspension 6 makes it possible to obtain the cellular deposit on the analysis plate 8, in a known manner. Thanks to the dilution of the cell suspension lifting 4 and resuspension in the mixing liquid 3, the cell deposit obtained on the analysis plate 8 is homogeneous and free of clumps.
  • the rinsing liquid 2 descends into the pipette 1, as represented by the arrow F 'of FIG. 3, and carries with it the cells 5 which have adhered to the inner wall of the pipette 1. These cells 5 are thus also poured into the settling chamber 7. This avoids any cell loss which could adversely affect the quality of the subsequent cell analysis.
  • the method according to the invention makes it possible to avoid the purchase of additional materials by using the sampling pipette 1 to carry out the mixing and resuspension of the cell suspension 4.
  • the process is therefore particularly economical and simple to implement. implemented, while allowing to obtain a thin layer cellular spread of excellent quality, homogeneous and without cluster on the analysis plate 8.

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Abstract

Ce procédé comprend au moins les étapes successives suivantes : prélever un premier volume (V3) de liquide de mélange (3), prévoir un premier volume (V4) d'air sous le premier volume (V3) de liquide de mélange (3), prélever un deuxième volume (V5) de liquide de mélange (3), prélever un volume (V6) de suspension cellulaire (4), la suspension cellulaire (4) montant à la surface du deuxième volume (V5) de liquide de mélange (3), imprimer un mouvement de va et vient aux liquides présents dans la pipette (1 ) de sorte que le premier volume (V4) d'air est comblé et que le premier et le deuxième volumes (V3, V5) de liquide de mélange (3) et le volume (V6) de suspension cellulaire (4) se mélangent, déposer la suspension cellulaire (6) obtenue sur la plaque d'analyse (8).

Description

Procédé de dépôt d'une suspension cellulaire sur une plaque d'analyse.
La présente invention concerne un procédé de dépôt d'une suspension cellulaire sur une plaque d'analyse au moyen d'une pipette de prélèvement comprenant une étape de prélèvement d'un volume de suspension cellulaire. Afin de permettre une analyse biologique efficace de cellules prélevées, par exemple par frottis, il est primordial que la suspension cellulaire disposée sur la plaque d'analyse présente un étalement cellulaire en couche mince d'excellente qualité, homogène et sans amas.
A cet effet, il est connu de mélanger la suspension cellulaire, contenant les cellules prélevées et un liquide de conservation cellulaire, à un liquide de mélange afin de « diluer » les cellules dans une suspension cellulaire de volume plus important. On obtient ainsi un meilleur étalement cellulaire. De plus, le mélange permet une remise en suspension des cellules afin d'obtenir une répartition homogène des cellules dans la suspension. On connaît l'utilisation d'un puits de mélange dans lequel on verse la suspension cellulaire et le liquide de mélange afin de mélanger ces deux liquides. Cependant, dans un tel puits, les cellules peuvent adhérer à la paroi du puits ou rester dans le fond de celui-ci, ce qui entraîne des pertes cellulaires potentiellement gênantes pour l'analyse ultérieure. De plus, l'utilisation d'un tel puits jetable entraîne des achats de matériels supplémentaires, ce qui pose des problèmes de coûts et d'élimination des déchets.
Dans certains systèmes, le dépôt sur la plaque d'analyse se fait par décantation de la suspension cellulaire dans une chambre de décantation disposée au- dessus de la plaque d'analyse. Le liquide de conservation cellulaire est progressi- vement absorbé autour de la plaque d'analyse et les cellules se déposent sur la plaque d'analyse. Un tel système est par exemple décrit dans le document EP- 1 045 249. Il n'est pas possible d'effectuer le mélange directement dans la chambre de décantation car le liquide de mélange est progressivement absorbé, ce qui empêche la remise en suspension, faute de liquide. De plus, certaines cellules commencent à se déposer sur et à adhérer à la plaque d'analyse avant même que la remise en suspension se fasse, ce qui ne permet pas d'obtenir un dépôt homogène. L'un des objectifs de l'invention est de pallier ces inconvénients en proposant un procédé de dépôt d'une suspension cellulaire sur une plaque d'analyse permettant d'obtenir un étalement cellulaire d'excellente qualité, homogène et sans amas. A cet effet, l'invention concerne un procédé de dépôt d'une suspension cellulaire sur une plaque d'analyse au moyen d'une pipette de prélèvement comprenant une étape de prélèvement d'un volume de suspension cellulaire, comprenant au moins les étapes successives suivantes :
- prélever au moyen de la pipette un premier volume de liquide de mélange, - prévoir un premier volume d'air sous le premier volume de liquide de mélange,
- prélever un deuxième volume de liquide de mélange, séparé du premier volume de liquide de mélange par le premier volume d'air, le procédé comprenant en outre les étapes suivantes après le prélèvement du volume de suspension cellulaire sous le deuxième volume de liquide de mélange :
- permettre le passage de la suspension cellulaire à la surface du deuxième volume de liquide de mélange du fait de la différence de densité entre la suspension cellulaire et le liquide de mélange, - imprimer un mouvement de va et vient aux liquides présents dans la pipette de sorte que le premier volume d'air est comblé et que le premier et le deuxième volumes de liquide de mélange et le volume de suspension cellulaire se mélangent assurant ainsi la formation d'une suspension cellulaire diluée homogène dans la pipette, - déposer la suspension cellulaire obtenue sur la plaque d'analyse.
Selon d'autres caractéristiques du procédé de l'invention :
- il comprend en outre les étapes suivantes, avant le prélèvement du premier volume de liquide de mélange :
- prélever un volume de liquide de rinçage, - prévoir un deuxième volume d'air, ledit volume d'air étant agencé pour empêcher le mélange du volume de liquide de rinçage et du premier volume de liquide de mélange lors du mouvement de va et vient imprimé dans la pipette, le liquide de rinçage entraînant les cellules adhérant à la paroi de la pipette pendant le dépôt de la suspension cellulaire sur la plaque d'analyse et étant déposé avec la suspension cellulaire ;
- le rapport entre le premier volume d'air et le premier volume de liquide de mélange est sensiblement compris entre 1/10 et 1/3 ;
- le rapport entre le premier volume de liquide de mélange et le deuxième volume de liquide de mélange est sensiblement compris entre 1/3 et 1 ;
- le volume de suspension cellulaire prélevée est sensiblement compris entre 50 μl et 150 μl ; - le volume de liquide de rinçage est sensiblement compris entre 100 μl et
200 μl ;
- le deuxième volume d'air est sensiblement compris entre 50 μl et 150 μl ;
- les prélèvements de liquides et d'air ainsi que le mouvement de va et vient imprimé dans la pipette sont assurés par un dispositif de pompage ; et - l'étape de dépôt sur la plaque d'analyse consiste à vider la pipette dans une chambre de décantation disposée au-dessus de la plaque d'analyse.
D'autres aspects et avantages de l'invention apparaîtront au cours de la description qui suit, donnée à titre d'exemple et faite en référence aux dessins annexés dans lesquels : - la Fig. 1 est une représentation schématique en coupe d'une pipette dans laquelle les différents prélèvements prévus par le procédé ont été effectués,
- la Fig. 2 est une représentation schématique en coupe de la pipette de la Fig. 1 lors du mélange prévu par le procédé,
- la Fig. 3 est une représentation schématique de la pipette de la Fig. 1 dis- posée au-dessus d'une chambre de décantation lors du dépôt de la suspension cellulaire sur une plaque d'analyse.
La pipette 1 représentée sur les figures est par exemple une pipette jetable connue en soi et dont l'aspiration est commandée par un dispositif de pompage, également connu et non représenté. Le dispositif de pompage permet un prélè- vement de liquide précis dont le volume peut être parfaitement sélectionné.
Au cours d'une première étape du procédé, un volume V1 d'un liquide de rinçage 2 est prélevé au moyen de la pipette 1. Le liquide de rinçage est par exemple de l'eau distillée ou du sérum physiologique, et permet d'entraîner les cellules adhérant à la paroi de la pipette 1 , comme cela sera décrit ultérieurement. Le volume V1 est par exemple sensiblement compris entre 100 μl et 200 μl. Selon un mode de réalisation, le volume V1 est sensiblement égal à 150 μl.
Un volume V2 d'air est prévu dans la pipette 1 sous le liquide de rinçage 2. Ce volume V2 est par exemple sensiblement compris entre 50 μl et 150 μl. La fonction de ce volume d'air sera décrite ultérieurement.
Sous le volume V2 d'air, un premier volume V3 d'un liquide de mélange 3 est prélevé au moyen de la pipette 1. Le liquide de mélange est par exemple de l'eau distillée ou du sérum physiologique. Le premier volume V3 de liquide de mé- lange 3 est par exemple sensiblement compris entre 100 μl et 200 μl. Selon un mode de réalisation, le volume V3 est sensiblement égal à 150 μl.
Un volume V4 d'air est prévu dans la pipette 1 sous le premier volume V3 de liquide de mélange 3. Le rapport entre le premier volume V4 d'air et le premier volume V3 de liquide de mélange 3 est lié à la hauteur du déplacement du va et vient lors du pompage qui doit dépasser la hauteur du volume d'air et être sensiblement compris entre 1/10 et 1/3. Ainsi ce volume V4 est par exemple sensiblement compris entre 10 μl et 30 μl. Selon un mode de réalisation, le volume V4 est sensiblement égal à 20 μl.
Sous le volume V4 d'air, un deuxième volume V5 du liquide de mélange 3 est prélevé, séparé du premier volume V3 par le volume V4 d'air. Le rapport entre le premier volume V3 de liquide de mélange 3 et le deuxième volume V5 de liquide de mélange 3 est sensiblement compris entre 1/3 et 1. Ainsi, le deuxième volume V5 de liquide de mélange 3 est par exemple sensiblement compris en- tre50 μl et 200 μl. Selon un mode de réalisation, le deuxième volume V5 est sen- siblement égal à 130 μl.
Ensuite, un volume V6 d'une suspension cellulaire 4 est prélevé sous le deuxième volume V5 de liquide de mélange 3. La suspension cellulaire 4 contient les cellules 5 à analyser et un liquide de conservation de ces cellules. Les cellules 5 sont par exemple obtenues de façon connue par frottis, grattage, recueil de Ii- quide ou ponction à l'aiguille. Le volume V6 est par exemple sensiblement compris entre 50 μl et 150 μl. Selon un mode de réalisation, le volume V6 est sensiblement égal à 70 μl. La différence de densité entre le liquide de mélange 3 et le liquide de la suspension cellulaire 4 fait que la suspension cellulaire 4 remonte dans le deuxième volume V5 de liquide de mélange 3 et vient se placer sous le volume V4 d'air. La suspension cellulaire 4 est ainsi « entourée » de liquide de mélange 3.
Au moyen du dispositif de pompage, un mouvement de va et vient est imprimé aux liquides présents dans la pipette 1 , comme représenté par les flèches F de la Fig. 2. On prévoit par exemple d'effectuer trois mouvements verticaux, alter- nativement dans un sens et dans l'autre, dans la pipette 1. Ce mouvement de va et vient a pour effet de faire « éclater » la bulle d'air de volume V4, du fait de petite valeur de celui-ci. Ainsi, le premier et le deuxième volumes V3 et V5 de liquide de mélange 3 sont mélangés avec le volume V6 de suspension cellulaire 4, comme représenté sur la Fig. 2. On obtient ainsi une suspension cellulaire 6 « diluée » dans le liquide de mélange 3. Les cellules 5 sont réparties de façon homogène dans la suspension 6 grâce à la position de la suspension cellulaire 4 prélevée entre les deux volumes de liquide de mélange 3 avant le mouvement de va et vient.
Du fait du volume V2 important d'air entre le premier volume V3 de liquide de mélange 3 et le volume V1 de liquide de rinçage 2, le mouvement de va et vient n'a pas pour effet de mettre en contact la suspension cellulaire 6 diluée avec le liquide de rinçage 2. Ainsi, comme représenté sur la Fig. 2, la suspension cellulaire diluée 6 ne se mélange pas au liquide de rinçage 2 lors du mouvement de va et vient. L'étape suivante du procédé consiste à vider la pipette 1 dans une chambre de décantation 7 disposée au-dessus d'une plaque d'analyse 8, comme représenté sur la Fig. 3. Un matériau absorbant 9 est disposé autour sur la plaque d'analyse autour de la zone de dépôt de sorte à être en communication fluidique avec la suspension cellulaire 6 versée dans la chambre de décantation 7 et à ab- sorber le liquide de cette suspension 6 au cours de la décantation. L'absorption du liquide de la suspension 6 permet d'obtenir le dépôt cellulaire sur la plaque d'analyse 8, de façon connue. Grâce à la dilution de la suspension cellulaire pré- levée 4 et à la remise en suspension dans le liquide de mélange 3, le dépôt cellulaire obtenu sur la plaque d'analyse 8 est homogène et dépourvu d'amas.
Lorsque la suspension cellulaire diluée 6 est vidée dans la chambre de décantation 6, le liquide de rinçage 2 descend dans la pipette 1 , comme représenté par la flèche F' de la Fig. 3, et entraîne avec lui les cellules 5 qui ont adhéré à la paroi interne de la pipette 1. Ces cellules 5 sont ainsi également versées dans la chambre de décantation 7. On évite ainsi toute perte cellulaire qui pourrait nuire à la qualité de l'analyse cellulaire ultérieure.
Le procédé selon l'invention permet d'éviter l'achat de matériels supplé- mentaires en utilisant la pipette 1 de prélèvement pour effectuer le mélange et la remise en suspension de la suspension cellulaire 4. Le procédé est donc particulièrement économique et simple à mettre en œuvre, tout en permettant d'obtenir un étalement cellulaire en couche mince d'excellente qualité, homogène et sans amas sur la plaque d'analyse 8.

Claims

REVENDICATIONS
1.- Procédé de dilution, de remise en suspension et de dépôt d'une suspension cellulaire sur une plaque d'analyse (8) au moyen d'une pipette de prélèvement (1 ) comprenant une étape de prélèvement d'un volume (V6) de suspen- sion cellulaire (4), caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes préalables successives suivantes :
- prélever au moyen de la pipette (1 ) un premier volume (V3) de liquide de mélange (3),
- prévoir un premier volume (V4) d'air sous le premier volume (V3) de Ii- quide de mélange (3),
- prélever un deuxième volume (V5) de liquide de mélange (3), séparé du premier volume (V3) de liquide de mélange (3) par le premier volume (V4) d'air, le procédé comprenant en outre les étapes suivantes après le prélèvement du volume (V6) de suspension cellulaire (4) sous le deuxième volume (V5) de Ii- quide de mélange (3) :
- permettre le passage de la suspension cellulaire (4) à la surface du deuxième volume (V5) de liquide de mélange (3) du fait de la différence de densité entre la suspension cellulaire (4) et le liquide de mélange (3),
- imprimer un mouvement de va et vient aux liquides présents dans la pi- pette (1 ) de sorte que le premier volume (V4) d'air est comblé et que le premier et le deuxième volumes (V3, V5) de liquide de mélange (3) et le volume (V6) de suspension cellulaire (4) se mélangent assurant ainsi la formation d'une suspension cellulaire diluée (6) homogène dans la pipette (1 ),
- déposer la suspension cellulaire (6) obtenue sur la plaque d'analyse (8).
2.- Procédé de dépôt selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il comprend en outre les étapes suivantes, avant le prélèvement du premier volume (V3) de liquide de mélange (3) :
- prélever un volume (V1 ) de liquide de rinçage (2),
- prévoir un deuxième volume (V2) d'air, ledit volume (V2) d'air étant agen- ce pour empêcher le mélange du volume (V1 ) de liquide de rinçage (2) et du premier volume (V3) de liquide de mélange (3) lors du mouvement de va et vient imprimé dans la pipette (1 ), le liquide de rinçage (2) entraînant les cellules (5) adhérant à la paroi de la pipette (1 ) pendant le dépôt de la suspension cellulaire (6) sur la plaque d'analyse (8) et étant déposé avec la suspension cellulaire (6).
3.- Procédé de dépôt selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le rapport entre le premier volume (V4) d'air et le premier volume (V3) de liquide de mélange (3) est sensiblement compris entre 1/10 et 1/3.
4.- Procédé de dépôt selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le rapport entre le premier volume (V3) de liquide de mélange (3) et le deuxième volume (V5) de liquide de mélange (3) est sensiblement com- pris entre 1/3 et 1.
5.- Procédé de dépôt selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le volume (V6) de suspension cellulaire (4) prélevée est sensiblement compris entre 50 μl et 150 μl.
6.- Procédé de dépôt selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, ca- ractérisé en ce que le volume (V1 ) de liquide de rinçage (2) est sensiblement compris entre 100 μl et 200 μl.
7.- Procédé de dépôt selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, caractérisé en ce que le deuxième volume (V2) d'air est sensiblement compris entre 50 μl et 150 μl.
8.- Procédé de dépôt selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que les prélèvements de liquides et d'air ainsi que le mouvement de va et vient imprimé dans la pipette (1 ) sont assurés par un dispositif de pompage.
9.- Procédé de dépôt selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, ca- ractérisé en ce que l'étape de dépôt sur la plaque d'analyse (8) consiste à vider la pipette (1 ) dans une chambre de décantation (7) disposée au-dessus de la plaque d'analyse (8).
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04329363A (ja) * 1991-05-02 1992-11-18 Olympus Optical Co Ltd 分注方法
US5174162A (en) * 1989-07-10 1992-12-29 Hitachi, Ltd. Pipetter, pipette tube, sample analyzing apparatus including them and method of mixing and pipetting liquids
US5555767A (en) * 1994-02-25 1996-09-17 Fuji Photo Film Co., Ltd. Liquid mixing method
US5773305A (en) * 1996-05-02 1998-06-30 Bayer Corp. Sample dilution module
EP1045249A1 (fr) * 1999-04-14 2000-10-18 Labonord Dispositif de dépôt de cellules sur une plaque d'analyse
US6426048B1 (en) * 1998-07-10 2002-07-30 Bayer Corporation Sample dilution module with offset mixing chamber

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5174162A (en) * 1989-07-10 1992-12-29 Hitachi, Ltd. Pipetter, pipette tube, sample analyzing apparatus including them and method of mixing and pipetting liquids
JPH04329363A (ja) * 1991-05-02 1992-11-18 Olympus Optical Co Ltd 分注方法
US5555767A (en) * 1994-02-25 1996-09-17 Fuji Photo Film Co., Ltd. Liquid mixing method
US5773305A (en) * 1996-05-02 1998-06-30 Bayer Corp. Sample dilution module
US6426048B1 (en) * 1998-07-10 2002-07-30 Bayer Corporation Sample dilution module with offset mixing chamber
EP1045249A1 (fr) * 1999-04-14 2000-10-18 Labonord Dispositif de dépôt de cellules sur une plaque d'analyse

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