WO2008145262A1 - Mittel zum eindecken von mikroskopischen präparaten - Google Patents

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WO2008145262A1
WO2008145262A1 PCT/EP2008/003905 EP2008003905W WO2008145262A1 WO 2008145262 A1 WO2008145262 A1 WO 2008145262A1 EP 2008003905 W EP2008003905 W EP 2008003905W WO 2008145262 A1 WO2008145262 A1 WO 2008145262A1
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WO
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mounting medium
covering
preparations
coating
coated
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Inventor
Daniela Grabis
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Merck Patent GmbH
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Merck Patent GmbH
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    • G—PHYSICS
    • G02—OPTICS
    • G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B21/00—Microscopes
    • G02B21/34—Microscope slides, e.g. mounting specimens on microscope slides

Definitions

  • the invention relates to covering glasses coated with mounting medium, to processes for their production and to their use in the manual and automatic covering of microscopic slides
  • the microscopic examination of specimens in transmitted light technology is based on the refraction of light on very thin objects.
  • the preparations are first mounted on a slide, treated with reagents, such as staining reagents or dehydrating agents, and then firmly surrounded with a glass-like resin. This is done by embedding or infiltrating resins into the samples. These resins, also called Eindeckmedien, penetrate the thin section of the test material and ideally connect without
  • the preferred material for slides and coverslips is generally glass. However, it is also possible, for example, instead of a cover glass for covering the preparations to use a plastic or plastic coverslips. The covered preparations, however, age faster and the cover sheet can detach.
  • the covering of preparations can be done in hydrophobic or hydrophilic Eindeckmedien.
  • the preparation For covering in hydrophobic media, the preparation must first be dehydrated after it has been applied to the slide and stained. It will eventually be in via an ascending alcohol series XyIoI or a xylene substitute introduced. Subsequently, the slide is provided with the hydrophobic Eindeckmedium and the cover glass placed so that no air bubbles in the preparation arise. After hardening of the mounting medium, the preparation is airtight enclosed in a glass-like environment and can be examined by transmitted light microscope.
  • Eindeckmediums the preparation is airtight enclosed as in a glass-like environment using a hydrophobic Eindeckmediums and can be examined by transmitted light microscope.
  • Covers the preparations is a very complex and time-consuming step. If the mounting medium is applied manually to the slide, care must be taken that a consistent amount is always applied, otherwise the medium escapes and glued to the side, or the covering is not complete. Even with the use of coverslipping often occur disturbances, as leaking mounting medium sticks to the machine. If the covered preparations are stacked too quickly after storage or stored tightly, they can also stick together or with their surroundings.
  • the mounting medium requires drying times of at least 30 minutes until cured, and even more than 45 minutes for hydrophilic media. In this way, long waiting times have to be accepted before the embedded specimen can be examined under the microscope. This applies in particular to investigations with immersion objectives. In addition, the great amount of time required is a major drawback, especially in the case of quick cuts, which are taken for example during an operation and must be examined immediately.
  • US 3,498,860 and EP 1242800 disclose the use of coverslips which have been previously coated with mounting medium or adhesive. The advantage of this method is that the cover glass can be previously coated with the mounting medium, dried and stored until use. The work with liquid Eindeckmedien during the Einis deleted. The drying times are also greatly reduced. Nevertheless, the method disclosed in US Pat. No. 3,498,860 and EP 1242800 was not used in practice, since the coated coverslips showed only moderate adhesive properties and frequently detached again after a short time.
  • the object of the present invention was therefore to provide coverslips coated with mounting medium which ensure good adhesive properties and a long service life of the coated preparations and, in addition, avoid blurred images during microscopy.
  • the invention therefore relates to a means for covering preparations which consists essentially of a cover glass and a layer of a mounting medium applied thereto, characterized in that the layer thickness of the mounting medium is less than or equal to 0.04 mm.
  • the layer thickness of the mounting medium is between 0.01 and 0.04 mm, more preferably between 0.02 and 0.04 mm.
  • the cover glass is made of glass.
  • the cover glass additionally has a marking.
  • the mounting medium contains one or more plasticizers.
  • the present invention also relates to a process for the production of coverslips coated with Eindeck medium, characterized in that the mounting medium by machine by means of one or more dispensing needles by means of printing (eg screen printing), coating by a liquid curtain, order through a slit nozzle, distributing with a doctor or applied by spin coating on the coverslip.
  • printing eg screen printing
  • coverslip means both a coverslip already cut to a suitable size for subsequent covering of preparations, as well as a glass plate (eg 40x40 cm), which is first coated according to the invention and then cut to size.
  • the coverslips are typically square, rectangular or round. Suitable sizes of coverslips for covering preparations are known in the art.
  • the application of the mounting medium by means of one or more dispensing needles.
  • the invention also provides the use of a coverslip according to the invention coated with mounting medium for manual or automatic covering of preparations.
  • a coverslip coated with an aromatics-free mounting medium is used to cover a preparation moistened with an aromatic-containing solvent.
  • flipping preparations means providing a slide on which there is a mounted, optionally colored, wetted with Inter medium preparation and a cover glass coated according to the invention and the subsequent covering of the
  • the last solvent of the dewatering series or of the dyeing i. typically xylene or xylene substitutes, typically referred to as water when overlayed with hydrophilic coverslip media.
  • the preparations can be stored for a longer period to the covering.
  • coverslip covers all coverslips known and suitable for the purpose, such as e.g. Cover glasses made of glass or plastic. Glass coverslips are preferred according to the invention.
  • standard glass coverslips having a thickness between 0.06 and 0.6 mm, preferably between 0.1 and 0.2 mm used.
  • An example of a cover glass which is particularly suitable according to the invention is a cover glass of standard thickness No. 1 (0.130-0.160 mm) from Menzel, Germany.
  • the coverslips are preferred depending on their size on a
  • one side of a cover glass is completely provided with a layer of a mounting medium.
  • the layer does not completely cover the cover glass, but leaves the edge areas free. It is particularly important that the coverslip is covered at the points with the layer of the mounting medium according to the invention, on which the specimen to be examined is located.
  • the layer of the mounting medium must be so much larger than the surface of the preparation that it goes beyond the specimen on all sides and thus a solid
  • Binding with the slide comes about, on which the preparation is located.
  • Eindeckmedium for coating the coverslips all Einre used in the prior art Eindeckmedien can be used.
  • the coating can be done with both hydrophobic and hydrophilic Eindeckmedien.
  • These are, for example, mounting media based on organic polymers, such as Canada balsam, acrylate resins, for example polymethacrylate, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol or glycerol gelatin.
  • Such containment media typically contain solvents such as water, xylene or xylene substitutes such as toluene, or other aromatic or aliphatic hydrocarbons such as terpenes or isoalkanes, as well as other additives known to those skilled in the art.
  • Mounting media for coating the coverslips which are particularly preferred according to the invention are mounting media which contain as solid component acrylate resins or mixed acrylate resins, in particular polymethyl methacrylate resins or polyisobutyl methacrylate resins.
  • Particularly preferred for the coating according to the invention as a solid component is a resin based on isobutyl methacrylate having a glass transition temperature (Tg according to DIN 53765) of 32 0 C, a viscosity number (DIN 51562) of about 30 cm 3 / g, a molecular wipe of 60,000 g / mol, a dynamic viscosity (40% in MEK) of 60 mPa s, a density (DIN 51757) of 1, 04 g / cm 3 as a ground bulk polymer having a bulk density (DIN 53466) of 600g / l.
  • This resin is hereinafter referred to as resin 1.
  • a Eindeckstoff which contains at least one resin based on n-butyl methacrylate and methyl methacrylate with a glass transition temperature (Tg to DIN 53765) of 49 0 C, a viscosity number (DIN 51562) of about 30 cm 3 / g as a solid component , a molecular wipe of 60,000 g / mol, a dynamic viscosity (40% in MEK) of 160 mPa s, a density (DIN 51757) of 1, 07 g / cm 3 as ground Bulk polymer with a bulk density (DIN 53466) of 600g / l.
  • This resin will be referred to as Resin 2 below.
  • the viscosity of the mounting media may be increased by adding additional solvent or by evaporating off a portion of the solvent prior to use
  • Solvent or addition of further solid can be reduced or increased so that the solids content decreases or increases. It has been found that for the application technique preferably used by application of the mounting medium by means of one or more dispensing needles, the viscosity 1 O in aromatics containing Eindeckmedien preferably between 150 mPa-s and max. 250 mPa-s and in the case of aromatic-free covering media preferably between 90 mPa s and 370 mPa s. The viscosity measurements were carried out according to the Ubbelohde measuring method.
  • the mounting medium for coating the cover glasses according to the invention should preferably have a viscosity of 90 to 350 mPa s, particularly preferably about 100 to 120 m Pa s and a solids content between 33 and 37 mass%, preferably between 34 and 36 mass%.
  • Solid component, the mounting medium for coating the cover glasses according to the invention preferably a viscosity of 150 to 250 m Pa s, more preferably about 200 m Pa s should have s and a solids content between 35 and 45 mass%, preferably between 38 and
  • the layer thickness of the mounting medium on the coverslip should not exceed 0.04 mm.
  • the layer thickness is preferably between 0.01 and 0.04 mm, particularly preferably between 0.02 and 0.04 mm, in particular between
  • the coefficient of variation should be less than 5%, preferably less than or equal to 3 to 4%.
  • the layer thickness according to the invention causes in the application a short dissolution of the coating by the solvent of the preparation to be covered and an immediately following usually a few seconds gluing of slide and coverslip.
  • coated according to the invention coverslips, this disorder can be avoided.
  • softening agents are added to the coverslipping media for coating the cover glasses according to the invention. It has been found that the addition of a plasticizer not only increases the flexibility of the coating, but also improves the adhesive property of the medium despite the small thickness of the glass according to the invention.
  • the coated coverslips can be stored at temperatures between - 22 ° C and + 4O 0 C, without affecting the functionality.
  • the amount of plasticizer depends on the type of organic polymers contained in the corresponding mounting medium. An addition of between 0.03% by volume and 10% by volume has proved to be advantageous. Plasticizers are known to those skilled in the art of organic polymers.
  • phthalates such as dibutyl phthalate, particularly preferably plasticizers based on esters - used base, for example 1, 2 - cyclohexanedicarboxylic acid diisononyl esters (available as Hexamoll ® DINCH by BASF, Germany) or a trimellitate based on a mixture of n-octanol and n-decanol (available as Diplast ® TM 8-10 / ST LONZA).
  • esters - used base for example 1, 2 - cyclohexanedicarboxylic acid diisononyl esters (available as Hexamoll ® DINCH by BASF, Germany) or a trimellitate based on a mixture of n-octanol and n-decanol (available as Diplast ® TM 8-10 / ST LONZA).
  • plasticizers based on functionalized alkoxysilanes are preferably used. These are, for example, amino-functionalized alkoxysilanes, in particular amino-functionalized trimethoxysilanes such as N (3- (trimethoxysilyl) propylethylenediamine (commercially available as ADDID 900 from Tego Chemie - Degussa Evonik, Germany) or ADDID 912 from Tego Chemie - Degussa Evonik , Germany.
  • amino-functionalized alkoxysilanes in particular amino-functionalized trimethoxysilanes such as N (3- (trimethoxysilyl) propylethylenediamine (commercially available as ADDID 900 from Tego Chemie - Degussa Evonik, Germany) or ADDID 912 from Tego Chemie - Degussa Evonik , Germany.
  • the glass transition temperature of the polymers contained in the mounting medium is suitable. Eindeckmedien, the brittle polymers with high
  • Glass transition temperatures are included before the use thereof for coating the cover glasses according to the invention preferably added plasticizer. Preferred amounts in this case are between 0.3 and 5%. Mounting media containing flexible, elastic polymers with low glass transition temperature (Tg ⁇ 45) require this Addition not or only in low concentration. Preferred amounts of plasticizers in this case are between 0.05 and 3%.
  • Tg 49 ° C and an average molecular weight of about 60 000 g / mol used. It has been observed that prolonged storage of a coverslip coated with this mounting medium at temperatures below the freezing point can cause cracks in the coating.
  • the formation of cracks in the coating can be prepared by adding one or more softener, preferably by addition of 3% -5% of a plasticizer ester based, particularly preferably Diplast ® TM 8-10 / ST LONZA be avoided. Also particularly suitable is the addition of a plasticizer based on functionalized alkoxysilanes, in particular N (3
  • the coverslips to be coated are marked in a preferred embodiment.
  • the marking is done before coating.
  • the marker can be applied to the side of the coverslip which is not coated with mounting medium or preferably to the side which is coated with mounting medium. If the mark is applied to the side of the coverslip which is not coated, it may also be applied after the coating.
  • the marking enables the user to recognize with which side the cover glass has to be placed on the preparation. Typically, one or more symbols, one or more numbers and / or one or more letters are used as marking.
  • the marking can be scratched or etched, for example, in the cover glass.
  • the marking is solvent-resistant in color or in the form of, for example, silica gel-containing Coating applied to the coverslip. The marking must be applied so thinly that it does not affect the covering.
  • the coating of the invention is also characterized by very good aging resistance, adhesion, odorlessness and physiological safety. It is resistant to light, heat, cold and UV radiation and versatile resistant to chemical influences. The different colored biological preparation coming into contact with this coating medium obtains an optimum, constant-lasting preservation for many years.
  • cover glass itself is more elastic and thus shatter-proof due to the coating according to the invention.
  • This advantage is especially good for automated roofing.
  • coverslipper work on a specific principle to take individual coverslips from the stack. This process often leads to glass breakage, since the coverslips, due to their natural nature, do not withstand this mechanical action.
  • a coating according to the invention can be applied only with difficulty and not reliably by hand.
  • various machine methods are well suited for even application of the mounting medium to the coverslips.
  • the order can be made on coverslips which have already been cut to size or on larger glass plates which are cut to the desired size after coating.
  • Suitable methods for producing coated coverslips are disclosed in WO 2005/085799.
  • the order is preferably by means of one or more dispensing needles. With this method, a full-surface as well as partial coating of the materials to be coated is possible.
  • the production of the coverslips coated according to the invention is particularly preferably carried out by first uniformly applying the mounting medium to one large glass plate by means of one or more dispensing needles. The glass plate is then cut into appropriate coverslips.
  • the mounting medium is placed in a container and e.g. applied to the coverslip using a dosing pump, compressed air, fluid pressure or a piston via one or more dosing needles.
  • the coating takes place by moving the dispensing needle and / or the cover glass or the template with the cover glass in the x and y direction.
  • the corresponding homogeneous surface and layer thickness can be controlled via the speed of movement of the needle or of the cover glass in the x / y direction and / or via the mass flow rate out of the needle.
  • the Eindeckmedium can be adjusted in advance with respect to the viscosity exactly and until discharged in a closed system remains (no viscosity change during the
  • the diameter of the dispensing needle is typically between 0.25 and 7.5 mm, preferably about 1, 6 mm. It should be noted that the distance between the needle and the coverslip must be kept to very tight tolerances.
  • the spacing of the dispensing needle from the coverslip, the speed of the dispensing needle, the distances between the individual coating lines, the volume flow of the mounting medium and the viscosity of the mounting medium can optimize the coating for each mounting medium.
  • the needle and / or mounting medium can be tempered.
  • a particularly uniform application is achieved by applying the amount of viscous mounting medium in proportion to the speed of the nozzle and increasing or decreasing in response to the acceleration or deceleration of the nozzle.
  • Corresponding methods and devices are disclosed in DE 100 20 295 and DE 196 47 015. These devices are mainly used for the metered extrusion of a strand of a viscous medium such. B. when applying seals on housing shells (DE 196 47 015).
  • the device used is equipped with a special feed pump and can thus apply a precise amount of mounting medium depending on the dynamic material properties of Eindeckmediums and consider the speed-dependent nonlinearities.
  • the mounting medium is applied according to a method according to DE 100 20 295 meandering. If, at a preferably constant temperature of the medium and the environment, parallel lines are applied meander-shaped, the mounting medium flows slowly into one another and a homogeneous, layer thickness-defined clear coating results.
  • the drying takes place.
  • a gentle drying process is carried out for several hours in a drying oven.
  • the drying can . eg atmospheric, under vacuum or by means of infrared.
  • the plates are cut after drying according to a predetermined grid in the appropriate coverslip sizes and carefully packaged.
  • the coated cover glass with the coated side which is optionally characterized by the applied mark, placed on a still moist with Intermedium slide with known technology. Coating with the mounting medium causes the coverslip and slide to bond within a few seconds and harden. Typically, the preparation is already fully cured after 3 minutes, most often even less than one minute, and may then, e.g. using immersion objectives, microscopy.
  • the coated cover glass according to the invention is suitable both for manual and for automatic covering of preparations. Since no liquid Eindeckmedium must be used for mounting, there is no risk of sticking.
  • the preparations fixed on the slides are removed directly after dyeing and optionally after dewatering from the last solution (intermediate medium), ie, for example, water or xylene or xylene substitutes, and covered while still wet. Are the preparations Already almost dry, they should be moistened again with a small amount of medium.
  • the coverslip according to the invention is suitable for covering preparations, for example from histology and cytology, as are typically also covered according to the prior art.
  • the cover glasses according to the invention are particularly suitable for covering preparations with a thickness of up to 15 microns.
  • the coated coverslips and the method according to the invention can also be used for automatic covering with coverslipping machines.
  • Coverslippers which according to the prior art moisten the slides with a defined amount of mounting medium and then place the coverslip on are commercially available.
  • Einsteckvon both coverslipping machines can be used according to the prior art, whose function is slightly modified, as well as coverslipping machines, which are designed for the inventive method.
  • Conventional coverslippers have a dosing pump to apply liquid mounting medium to the slides. This is not necessary in the method according to the invention. Accordingly, this step can be omitted in the use of coverslipping for the inventive method.
  • this metering device instead of the Eindeckmediums something Intermediate (XyIoI, xylene replacement, etc.) to give to the slides. Since the slides with the preparations for the process according to the invention should still be moist, preparations which have already dried slightly again after dyeing or dewatering could be moistened again with a small amount of medium. Subsequently, the preparation is covered with the coverslip according to the invention.
  • a coverslipper which is particularly suitable for the method according to the invention, the slides are stored with the preparations in a container filled with solvent (Intermedium). Only for covering the slides are transported out of the solvent container and covered directly with the coated coverslip. The task of mounting medium or further amounts of solvent is not necessary here.
  • the coverslip according to the invention are treated much gentler than with conventional methods, since no sticky mounting medium can get into the machine. Just as with manual draining, the specimens can be microscoped after a short time, typically even immediately.
  • the coverslips according to the invention and the method according to the invention for producing these coverslips now offer the possibility of covering preparations quickly and easily.
  • the coating according to the invention the cover glasses are more resistant to shattering and elastic and no longer shatter so easily.
  • the manual handling of sticky mounting media is eliminated.
  • the layer thickness of the mounting medium according to the invention produces a permanent covering.
  • the covered preparations can be stored for a long time without the cover glass peeling off.

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Abstract

Die Erfindung betrifft mit Eindeckmedium beschichtete Deckgläser zum Eindecken von Präparaten sowie maschinelle Verfahren zu deren Herstellung. Durch die erfindungsgemäßen Deckgläser wird das Eindecken von Präparaten stark vereinfacht, da zum einen die Handhabung des klebrigen Eindeckmediums entfällt und zum anderen die Präparate schon nach wenigen Minuten fest eingedeckt sind und selbst unter Verwendung von Immersionsobjektiven mikroskopiert werden können.

Description

Mittel zum Eindecken von mikroskopischen Präparaten
Die Erfindung betrifft mit Eindeckmedium beschichtete Deckgläser, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung bei der manuellen und automatischen Eindeckung von mikroskopischen
Präparaten.
Die mikroskopische Untersuchung von Präparaten in der Durchlichttechnik beruht auf der Lichtbrechung an sehr dünnen Objekten. Dazu werden die Präparate zunächst auf einen Objektträger aufgezogen, mit Reagenzien, wie Färbereagenzien oder Entwässerungsmitteln, behandelt und anschließend mit einem glasähnlichen Harz fest umgeben. Dies geschieht durch Einbettung oder Infiltration von Harzen in die Proben. Diese Harze, auch Eindeckmedien genannt, durchdringen den dünnen Schnitt des Untersuchungsmaterials und verbinden sich idealerweise ohne
Phasenbrechung mit dem Objektträger unter dem Material und dem Deckglas über dem Material. Man erhält so ein in eine Glasphase eingebettetes Präparat, das sich gut für die Untersuchung im Durchlicht- mikroskop eignet und zugleich konserviert ist.
Als bevorzugtes Material für Objektträger und Deckgläser wird im allgemeinen Glas verwendet. Es ist jedoch beispielsweise auch möglich, statt eines Deckglases zum Abdecken der Präparate eine Kunststoffolie oder Deckgläser aus Kunststoff zu verwenden. Die eingedeckten Präparate altern jedoch schneller und die Deckfolie kann sich ablösen.
Die Eindeckung von Präparaten kann in hydrophobe oder hydrophile Eindeckmedien erfolgen.
Zur Eindeckung in hydrophobe Medien muß das Präparat, nachdem es auf den Objektträger aufgezogen und gefärbt wurde, zunächst entwässert werden. Dazu wird es über eine aufsteigende Alkoholreihe schließlich in XyIoI oder einen Xylolersatzstoff eingebracht. Anschließend wird der Objektträger mit dem hydrophoben Eindeckmedium versehen und das Deckglas so aufgelegt, daß keine Luftblasen im Präparat entstehen. Nach Aushärtung des Eindeckmediums ist das Präparat in einer glasähnlichen Umgebung luftdicht eingeschlossen und kann im Durchlichtmikroskop untersucht werden.
Zur Eindeckung in hydrophile Eindeckmedien muß die Probe nicht entwässert werden, sondern kann sofort mit dem Eindeckmedium versehen werden. Nach Abdeckung mit dem Deckglas und Aushärtung des
Eindeckmediums ist das Präparat wie bei Verwendung eines hydrophoben Eindeckmediums in einer glasähnlichen Umgebung luftdicht eingeschlossen und kann im Durchlichtmikroskop untersucht werden.
Das Eindecken der Präparate ist ein sehr aufwendiger und zeitintensiver Schritt. Wird das Eindeckmedium manuell auf den Objektträger aufgebracht, muß darauf geachtet werden, daß stets eine gleichbleibende Menge aufgetragen wird, da sonst das Medium seitlich austritt und verklebt, oder aber die Eindeckung nicht vollständig ist. Auch bei der Verwendung von Eindeckautomaten treten häufig Störungen auf, da austretendes Eindeckmedium den Automaten verklebt. Werden die eingedeckten Präparate zu schnell nach dem Eindecken gestapelt oder eng gelagert, können sie auch untereinander oder mit ihrer Umgebung verkleben.
Weiterhin benötigt das Eindeckmedium bis zur Aushärtung Trocknungszeiten von mindestens 30 Minuten, bei hydrophilen Medien sogar mehr als 45 Minuten. Auf diese Weise müssen lange Wartezeiten in Kauf genommen werden, bevor das eingebettete Präparat unter dem Mikroskop untersucht werden kann. Dies gilt insbesondere für Untersuchungen mit Immersions- objektiven. Der große Zeitbedarf ist zudem besonders bei Schnellschnitten, die beispielsweise während einer Operation entnommen werden und sofort untersucht werden müssen, ein großer Nachteil. US 3,498,860 und EP 1242800 offenbaren den Einsatz von Deckgläsern, die bereits vorher mit Eindeckmedium oder Klebstoff beschichtet wurden. Vorteil dieses Verfahrens ist, dass das Deckglas vorher mit dem Eindeckmedium beschichtet, getrocknet und bis zum Einsatz gelagert werden kann. Die Arbeit mit flüssigen Eindeckmedien während des Eindeckens entfällt. Auch die Trockenzeiten werden stark verkürzt. Trotzdem fand das in US 3,498,860 und EP 1242800 offenbarte Verfahren keine Anwendung in der Praxis, da die beschichteten Deckgläser nur mäßige Hafteigenschaften zeigten und sich häufig nach kurzer Zeit wieder ablösten.
In WO 2005/085799 wurde versucht, beschichtete Deckgläser mit besseren Hafteigenschaften und längerer Lebensdauer zur Verfügung zu stellen. Dies sollte über eine Schichtdicke zwischen 0,05 und 0,8 mm mit einer bestimmten Schichtdickentoleranz erreicht werden. Tatsächlich ließen sich entsprechend der Vorgaben in WO 2005/085799 die Hafteigenschaften und die Lebensdauer verbessern. Es wurde jedoch festgestellt, dass die Verwendung von Deckgläsern entsprechend WO 2005/085799 beim Mikroskopieren teilweise zu unscharfen Bildern führt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es daher, mit Eindeckmedium beschichtete Deckgläser bereitzustellen, die gute Hafteigenschaften und lange Lebensdauer der eingedeckten Präparate gewährleisten sowie zusätzlich unscharfe Bilder beim Mikroskopieren vermeiden.
Es wurde gefunden, dass das Auftreten von unscharfen Bildern beim Mikroskopieren (sphärische Aberration) vermieden werden kann, wenn die Schichtdicke des Eindeckmediums auf dem Deckglas auf kleiner oder gleich 0,04 mm verringert wird. Wider Erwarten zeigen die erfindungsgemäßen Deckgläser trotz der sehr dünnen Beschichtung sehr - A -
gute Hafteigenschaften und eine lange Lebensdauer der eingedeckten Präparate von mindestens 5, typischerweise 10 bis 15 Jahren oder mehr.
Gegenstand der Erfindung ist deshalb ein Mittel zum Eindecken von Präparaten, das im wesentlichen aus einem Deckglas und einer darauf aufgebrachten Schicht eines Eindeckmediums besteht, dadurch gekennzeichnet, dass die Schichtdicke des Eindeckmediums kleiner oder gleich 0,04 mm ist.
In einer bevorzugten Ausführungsform beträgt die Schichtdicke des Eindeckmediums zwischen 0,01 und 0,04 mm, besonders bevorzugt zwischen 0,02 und 0,04 mm.
In einer bevorzugten Ausführungsform ist das Deckglas aus Glas.
In einer bevorzugten Ausführungsform weist das Deckglas zusätzlich eine Markierung auf.
In einer bevorzugten Ausführungsform enthält das Eindeckmedium einen oder mehrere Weichmacher.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist zudem ein Verfahren zur Herstellung von mit Eindeckmedium beschichteten Deckgläsern, dadurch gekennzeichnet, dass das Eindeckmedium maschinell mittels einer oder mehrerer Dosiernadeln, mittels Druckverfahren (z.B. Siebdruck), Beschichtung durch einen Flüssigkeitsvorhang, Auftrag durch eine Schlitzdüse, Verteilen mit einem Rakel oder mittels Spin Coating auf das Deckglas aufgetragen wird.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist für alle Größen von Deckgläsern geeignet. Daher bedeutet Deckglas sowohl ein bereits für das spätere Eindecken von Präparaten auf geeignete Größe geschnittenes Deckglas, wie auch eine Glasplatte (z.B. 40x40 cm), die zunächst erfindungsgemäß beschichtet wird und anschließend zugeschnitten wird. Die Deckgläser sind typischerweise quadratisch, rechteckig oder rund. Geeignete Größen der Deckgläser zum Eindecken von Präparaten sind dem Fachmann bekannt.
In einer bevorzugten Ausführungsform erfolgt der Auftrag des Eindeckmediums mittels einer oder mehrerer Dosiernadeln.
Gegenstand der Erfindung ist auch die Verwendung eines erfindungsgemäßen mit Eindeckmedium beschichteten Deckglases zur manuellen oder automatischen Eindeckung von Präparaten.
In einer bevorzugten Ausführungsform wird ein mit einem aromatenfreien Eindeckmedium beschichtetes Deckglas zur Eindeckung eines Präparates eingesetzt, das mit einem aromatenhaltigen Lösungsmittel angefeuchtet ist.
Erfindungsgemäß bedeutet Eindecken von Präparaten das Bereitstellen eines Objektträgers, auf dem sich ein aufgezogenes, optional gefärbtes, mit Intermedium benetztes Präparat befindet sowie eines erfindungsgemäß beschichteten Deckglases und das anschließende Abdecken des
Objektträgers mit dem Deckglas. Als Intermedium wird bei Eindeckung mit hydrophoben Eindeckmedien das letzte Lösungsmittel der Entwässerungsreihe bzw. der Färbung, d.h. typischerweise XyIoI oder Xylolersatzstoffe, bei Eindeckung mit hydrophilen Eindeckmedien typischerweise Wasser bezeichnet. In diesen Lösungsmitteln können die Präparate über einen längeren Zeitraum bis zur Eindeckung gelagert werden.
Unter den Begriff Deckglas fallen erfindungsgemäß alle für den Zweck bekannten und geeigneten Deckgläser, wie z.B. Deckgläser aus Glas oder Kunststoff. Bevorzugt werden erfindungsgemäß Deckgläser aus Glas.
Besonders bevorzugt werden standardisierte Deckgläser aus Glas mit einer Dicke zwischen 0,06 und 0,6 mm, bevorzugt zwischen 0,1 und 0,2 mm verwendet. Ein Beispiel für ein erfindungsgemäß besonders geeignetes Deckglas ist ein Deckglas der Standardstärke Nr. 1 (0,130-0,160 mm) der Firma Menzel, Deutschland.
Die Deckgläser werden in Abhängigkeit ihrer Größe bevorzugt auf einer
Seite mit einer definierten Menge des flüssigen Eindeckmediums versehen. In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird eine Seite eines Deckglases komplett mit einer Schicht eines Eindeckmediums versehen. Es ist jedoch auch möglich, dass die Schicht das Deckglas nicht komplett bedeckt, sondern die Randbereiche frei lässt. Wichtig ist insbesondere, dass das Deckglas an den Stellen mit der erfindungsgemäßen Schicht des Eindeckmediums bedeckt ist, an denen sich das zu mikroskopierende Präparat befindet. Dabei muss die Schicht des Eindeckmediums um soviel größer sein als die Fläche des Präparats, dass sie an allen Seiten über das Präparat hinausgeht und so eine feste
Bindung mit dem Objektträger zustande kommt, auf dem sich das Präparat befindet.
Als Eindeckmedium zur Beschichtung der Deckgläser können alle typischerweise zum Eindecken nach dem Stand der Technik verwendeten Eindeckmedien eingesetzt werden. Die Beschichtung kann sowohl mit hydrophoben als auch mit hydrophilen Eindeckmedien erfolgen. Dies sind beispielsweise Eindeckmedien auf Basis von organischen Polymeren, wie Kanadabalsam, Acrylatharzen, z.B. Polymethacrylat, Polystyrol, Polyvinyl- pyrrolidon, Polyvinylalkohol oder Glyceringelatine. Typischerweise enthalten derartige Eindeckmedien Lösungsmittel, wie Wasser, XyIoI oder Xylolersatzstoffe, wie Toluol, oder andere aromatische oder aliphatische Kohlenwasserstoffe, z.B. Terpene oder Isoalkane, sowie weitere Zusatzstoffe, die dem Fachmann bekannt sind. Weitere Beispiele für Eindeckmedien finden sich in „Romeis - Mikroskopische Technik", Urban & Schwarzenberg, 17. Auflage, 1989, Seite 296-297. Es wurde gefunden, dass der Feststoffanteil der Eindeckmedien zur Beschichtung der Deckgläser typischerweise zwischen ca. 30% und 50% (Massen%) betragen sollte. Dieser Wert ist jedoch nur als Richtwert, nicht aber als Absolutwert aufzufassen. In Abhängigkeit der jeweiligen Feststoff- komponente, der Oberflächenspannung und der Viskosität des Eindeckmediums kann sich dieser Wert ändern. Der Fachmann auf dem Gebiet des Eindeckens ist mit diesem Richtwert nach wenigen Beschichtungs- und Eindecktests in der Lage zu beurteilen, welcher Feststoffanteil bzw. welches Volumen Eindeckmedium pro mm2 Deckglas für das jeweilige Eindeckmedium sinnvoll ist.
Erfindungsgemäß besonders bevorzugte Eindeckmedien zur Beschichtung der Deckgläser sind Eindeckmedien, die als Feststoffkomponente Acrylatharze oder Mischacrylatharze, insbesondere Polymethylmethacrylatharze oder Polyisobutylmethacrylatharze, enthalten.
Besonders bevorzugt wird zur erfindungsgemäßen Beschichtung als Feststoffkomponente ein Harz verwendet auf Basis von Isobutylmethacrylat mit einer Glasübergangstemperatur (Tg nach DIN 53765) von 32 0C, einer Viskositätszahl (DIN 51562) von ca. 30 cm3/g, einem Molekulargewischt von 60.000 g/mol, einer dynamischen Viskosität (40% in MEK) von 60 mPa s, einer Dichte (DIN 51757) von 1 ,04 g/cm3 als gemahlenes Substanzpolymerisat mit einem Schüttgewicht (DIN 53466) von 600g/l. Dieses Harz wird im folgenden Harz 1 genannt.
Weiterhin wird bevorzugt ein Eindeckmittel verwendet, das als Feststoffkomponente zumindest ein Harz enthält auf Basis von n- Butylmethacrylat und Methylmethacrylat mit einer Glasübergangstemperatur (Tg nach DIN 53765) von 49 0C, einer Viskositätszahl (DIN 51562) von ca. 30 cm3/g, einem Molekulargewischt von 60.000 g/mol, einer dynamischen Viskosität (40% in MEK) von 160 mPa s, einer Dichte (DIN 51757) von 1 ,07 g/cm3 als gemahlenes Substanzpolymerisat mit einem Schüttgewicht (DIN 53466) von 600g/l. Dieses Harz wird im folgenden Harz 2 genannt.
Die Viskosität der Eindeckmedien kann vor deren Verwendung durch 5 Hinzufügen weiteren Lösungsmittels oder durch Abdampfen eines Teils des
Lösungsmittels oder Zugabe weiteren Feststoffs verringert oder erhöht werden, so daß der Feststoffanteil sinkt oder steigt. Es wurde gefunden, dass für die bevorzugt eingesetzte Auftragstechnik durch Auftrag des Eindeckmediums mittels einer oder mehrerer Dosiernadeln die Viskosität 1O bei aromatenhaltigem Eindeckmedien bevorzugt zwischen 150 mPa-s und max. 250 mPa-s und bei aromatenfreiem Eindeckmedien bevorzugt zwischen 90 mPa s und 370 mPa-s liegt. Die Viskostitätsmessungen wurden nach der Ubbelohde Meßmethode durchgeführt.
Es wurde gefunden, dass bei der Verwendung von aromatenfreien Eindeckmedien mit einem Harz entsprechend Harz 1 als Feststoffkomponente das Eindeckmedium zum erfindungsgemäßen Beschichten der Deckgläser bevorzugt eine Viskosität von 90 bis 350 m Pa s, besonders bevorzugt ca. 100 bis 120 m Pa s aufweisen sollte und einen Feststoffanteil zwischen 33 und 37 Massen%, bevorzugt zwischen 34 und 36 Massen %.
Es wurde weiterhin gefunden, dass bei der Verwendung von aromatenhaltigen Eindeckmedien mit einem Harz entsprechend Harz 2 als
Feststoffkomponente das Eindeckmedium zum erfindungsgemäßen Beschichten der Deckgläser bevorzugt eine Viskosität von 150 bis 250 m Pa s, besonders bevorzugt ca. 200 m Pa s aufweisen sollte und einen Feststoffanteil zwischen 35 und 45 Massen%, bevorzugt zwischen 38 und
40 Massen%. 30 Es wurde gefunden, dass für eine stabile und dauerhafte Eindeckung sowie eine optimale Qualität des Präparates für die Mikroskopie die Schichtdicke des Eindeckmediums auf dem Deckglas nicht über 0,04 mm betragen sollte. Bevorzugt beträgt die Schichtdicke zwischen 0,01 und 0,04 mm, besonders bevorzugt zwischen 0,02 und 0,04 mm, insbesondere zwischen
0,03 und 0,04 mm. Der Variationskoeffizient sollte weniger als 5%, bevorzugt kleiner oder gleich 3 bis 4% betragen. Die erfindungsgemäße Schichtdicke bewirkt bei der Anwendung ein kurzes Anlösen der Beschichtung durch das Lösungsmittel des einzudeckenden Präparats und ein unmittelbar darauf folgendes meist sekundenschnelles Verkleben von Objektträger und Deckglas.
Es wurde gefunden, dass es beim Einsatz von beschichteten Deckgläsern, bei denen die Schichtdicke des Eindeckmediums 0,04 mm überschreitet, insbesondere bei Objektiven mit hoher numerischer Apertur zu unscharfen Bildern beim Mikroskopieren kommt (sphärische Aberration). In solch einem Fall ist es kaum möglich, das zu untersuchende Objekt zu fokussieren. Diese Eigenschaft ist vergleichbar mit dem aus früheren Zeiten bekannten, sogenannten „Deckglasfehler" welcher durch nicht standardisierte Deckgläser verursacht wurde.
Durch die erfindungsgemäß beschichteten Deckgläser kann diese Störung vermieden werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform werden den Eindeckmedien zur erfindungsgemäßen Beschichtung der Deckgläser Weichmacher zugesetzt. Es wurde gefunden, dass durch die Zugabe eines Weichmachers nicht nur die Flexibilität der Beschichtung erhöht wird, sondern auch die Hafteigenschaft des Mediums trotz der erfindungsgemäßen geringen Schichtdicke auf dem Glas verbessert werden. Zusätzlich können die beschichteten Deckgläschen bei Temperaturen zwischen - 22°C und + 4O0C gelagert werden, ohne dass die Funktionalität beeinträchtigt wird. Die Menge der Weichmacher ist abhängig von der Art der organischen Polymere, die in dem entsprechenden Eindeckmedium enthalten sind. Als vorteilhaft hat sich ein Zusatz von zwischen 0,03 Vol% und 10 Vol% erwiesen. Weichmacher sind dem Fachmann auf dem Gebiet der organischen Polymere bekannt. Sie werden beispielsweise Lacken oder Kunststoffen zugesetzt und sind in der Lage das oder die in einer Probe (hier das Eindeckmedium) enthaltenen Polymere zu lösen oder zu quellen, so dass der Film eines ansonsten harten und spröden Polymers weicher und elastischer wird. Bevorzugt werden Phtalate, z.B. Dibutylphtalat, besonders bevorzugt Weichmacher auf Ester - Basis eingesetzt, z.B. 1 ,2 - Cyclohexandicarbonsäure-diisononylester (erhältlich als Hexamoll® DINCH von BASF, Deutschland) oder ein Trimellitat auf Basis eines Gemisches von n-Octanol und n-Decanol (erhältlich als DiPLAST®TM 8-10/ST der Firma LONZA). Zudem werden Weichmacher auf Basis funktionalisierter Alkoxysilane bevorzugt eingesetzt. Dies sind beispielsweise Amino- funktionalisierte Alkoxysilane, insbesondere Amino-funktionalisierte Trimethoxysilane wie z.B. N(3-(trimethoxysilyl)propylethylendiamin (käuflich zu erwerben als ADDID 900 der Firma Tego Chemie - Degussa Evonik, Deutschland) oder ADDID 912 der Firma Tego Chemie - Degussa Evonik, Deutschland.
Als Maß ob und wie viel Weichmacher eingesetzt werden sollte, ist die Glasübergangstemperatur der im Eindeckmedium enthaltenen Polymere geeignet. Eindeckmedien, die spröde Polymere mit hohen
Glasübergangstemperaturen (Tg > 45) enthalten, werden vor deren Verwendung zur Beschichtung der Deckgläser erfindungsgemäß bevorzugt Weichmacher zugesetzt. Bevorzugte Mengen liegen in diesem Fall zwischen 0,3 und 5%. Eindeckmedien, die flexible, elastische Polymere mit niedriger Glasübergangstemperatur (Tg < 45) enthalten, benötigen diesen Zusatz nicht oder nur in geringer Konzentration. Bevorzugte Mengen an Weichmachern liegen in diesem Fall zwischen 0,05 und 3%.
Beispielweise wird in einem bevorzugt eingesetzten Eindeckmedium ein Polymer aus Butylmethacrylat und Methylmethacrylat mit einer
Glastemperatur von Tg = 49°C und einem mittleren Molekulargewicht von ca. 60 000 g/mol verwendet. Es wurde beobachtet, dass bei längerer Lagerung eines mit diesem Eindeckmedium beschichteten Deckglases bei Temperaturen unterhalb des Gefrierpunktes Risse in der Beschichtung auftreten können. Die Bildung von Rissen in der Beschichtung kann durch Zusatz eines oder mehrerer Weichmacher, bevorzugt durch Zusatz von 3%-5% eines Weichmachers auf Ester-Basis, besonders bevorzugt DiPLAST®TM 8-10/ST der Firma LONZA vermieden werden. Weiterhin besonders geeignet ist auch der Zusatz eines Weichmachers auf Basis funktionalisierter Alkoxysilane, insbesondere N(3-
(trimethoxysilyl)propylethylendiamin in Mengen zwischen 0,3 und 5 Vol%, besonders bevorzugt zwischen 0,4 und 1 Vol%.
Demgegenüber wurden bei einem weiteren Beschichtungsmedium welches als organisches Polymer Iso-Butylmethacrylat mit einer
Glasübergangstemperatur von Tg 32°C aufweist, bei Temperaturen bis -6°C keine zusätzlichen positiven Effekte bei Zusatz eines Weichmachers beobachtet. Diese Beschichtung zeigt auch ohne Weichmacher-Zusatz hervorragende Elastizität und Temperaturbeständigkeit. Erst zum Erhalt der Elatizität und Temperaturbeständigkeit für Temperaturen unter -6°C ist auch hier die Zugabe geringer Mengen an Weichmacher (zwischen 0,03 und 3 Vol%, bevorzugt zwischen 0,05 und 1 Vol%) vorteilhaft. Die Zugabe geringer Mengen an Weichmacher beeinträchtig jedoch die Eigenschaften des Eindeckmediums bei Temperaturen über -60C nicht negativ, so dass auch für Eindeckmedien mit organischen Polymeren, deren
Glasübergangstemperatur unter 45°C liegt, die Zugabe von Weichmachern in Mengen zwischen 0,03 und 3Vol% bevorzugt ist. Weiterhin sollte das Eindeckmedium für die Beschichtung der Deckgläser einen Brechungsindex (n 20/D) in einem Bereich zwischen 1 ,4 und 1 ,5 haben und die Eigenfluoreszenz sollte < = 250 ppb betragen.
Es wurde gefunden, dass bei erfindungsgemäßer Beschichtung der Deckgläser mit einem aromatenfreien Eindeckmedium, insbesondere einem aromatenfreien Eindeckmedium zumindest enthaltend Harz 1 und einen optionalen Weichmacher, die Eindeckung von Präparaten, die mit aromatenfreien Lösungsmitteln oder aromatenhaltigen Lösungsmitteln angefeuchtet sind, erfolgen kann. Dies ist ein besonderer Vorteil gegenüber dem Stand der Technik, da bei herkömmlichen flüssigen Eindeckmedien immer zwischen Präparaten mit aromatenhaltigen und aromatenfreien
Lösungsmitteln unterschieden werden muss.
Da die erfindungsgemäße Beschichtung auf dem Deckglas mit bloßem Auge kaum zu erkennen ist und dadurch die Anwendung erschwert wird, werden die zu beschichtenden Deckgläser in einer bevorzugten Ausführungsform markiert. Typischerweise erfolgt die Markierung vor der Beschichtung. Die Markierung kann auf die Seite des Deckglases aufgebracht werden, die nicht mit Eindeckmedium beschichtet wird oder bevorzugt auf die Seite die mit Eindeckmedium beschichtet wird. Wenn die Markierung auf die Seite des Deckglases aufgebracht wird, die nicht beschichtet ist, kann sie auch nach der Beschichtung aufgebracht werden. Die Markierung ermöglicht es dem Anwender zu erkennen, mit welcher Seite das Deckglas auf das Präparat aufgelegt werden muss. Typischerweise werden als Markierung ein oder mehrere Symbole, ein oder mehrere Zahlen und/oder ein oder mehrere Buchstaben verwendet.
Die Markierung kann beispielsweise in das Deckglas geritzt oder geätzt werden. In einer bevorzugten Ausführungsform wird die Markierung mit lösungsmittelbeständiger Farbe oder in Form einer z.B. Kieselgel-haltigen Beschichtung auf das Deckglas aufgebracht. Die Markierung muss so dünn aufgebracht sein, dass sie das Eindecken nicht beeinträchtigt.
Dies kann beispielsweise direkt vor der Beschichtung in derselben Anlage über ein Inkjetverfahren erfolgen Dabei bewegt sich der Druckkopf zum
Auftrag der Farbe oder Beschichtung nach einem vorgegebenem Raster auf der gleichen Achse wie später die Dosiernadel, mit der das Eindeckmedium für die erfindungsgemäße Beschichtung aufgetragen wird. Nach der definiert aufgebrachten Markierung erfolgt die erfindungsgemäße Beschichtung.
Die erfindungsgemäße Beschichtung zeichnet sich zudem durch sehr gute Alterungsbeständigkeit, Haftfestigkeit, Geruchlosigkeit und physiologische Unbedenklichkeit aus. Sie ist beständig gegen Licht, Wärme, Kälte und UV- Strahlung und vielseitig widerstandsfähig gegen chemische Einflüsse. Das mit diesem Beschichtungsmedium in Berührung kommende unterschiedlichst gefärbte biologische Präparat erhält eine optimale konstantbleibende Konservierung für viele Jahre.
Es wurde gefunden, dass das Deckglas selbst durch die erfindungsgemäße Beschichtung elastischer und somit bruchsicherer ist. Dieser Vorteil kommt besonders der automatisierten Eindeckung zu gute. Die sogenannten Eindeckautomaten arbeiten nach einem bestimmten Prinzip, um einzelne Deckgläser vom Stapel zu nehmen. Bei diesem Vorgang kommt es häufig zu Glasbruch, da die Deckgläser aufgrund ihrer natürlichen Beschaffenheit diesem mechanischen Einwirken nicht standhalten.
Auch bei einer manuellen Eindeckung ist der Anwender durch leicht splitternde Deckgläser gefährdet, dieses Risiko wird durch die erfindungsgemäßen Deckgläser deutlich minimiert. Eine erfindungsgemäße Beschichtung kann nur schwer und nicht zuverlässig von Hand aufgetragen werden. Es wurde jedoch gefunden, dass sich verschiedene maschinelle Verfahren gut für den gleichmäßigen Auftrag des Eindeckmediums auf die Deckgläser eignen. Dabei kann der Auftrag auf bereits entsprechend zugeschnittene Deckgläser erfolgen oder auf größere Glasplatten, die nach der Beschichtung auf die gewünschte Größe zugeschnitten werden.
Geeignete Verfahren zur Herstellung beschichteter Deckgläser sind in WO 2005/085799 offenbart.
Bevorzugt ist der Auftrag mittels einer oder mehrerer Dosiernadeln. Mit diesem Verfahren ist eine vollflächige wie auch teilflächige Beschichtung der zu beschichtenden Werkstoffe möglich. Besonders bevorzugt erfolgt die Herstellung der erfindungemäß beschichteten Deckgläser, indem das Eindeckmedium zunächst mittels einer oder mehrerer Dosiernadeln gleichmäßig auf eine große Glasplatte aufgebracht wird. Die Glasplatte wird dann in entsprechende Deckgläser zerschnitten.
Das Eindeckmedium wird in einem Behältnis vorgelegt und z.B. mit Hilfe einer Dosierpumpe, Druckluft, Flüssigkeitsdruck oder durch einen Kolben über eine oder mehrere Dosiernadeln auf das Deckglas aufgebracht. Die Beschichtung erfolgt, indem sich die Dosiernadel und/oder das Deckglas bzw. die Vorlage mit dem Deckglas in x und y Richtung bewegt. Die entsprechende homogene Oberfläche und Schichtdicke kann über die Geschwindigkeit der Bewegung der Nadel bzw. des Deckglases in x/y- Richtung und/oder über den Mengendurchsatz aus der Nadel gesteuert werden.
Vorteil dieses Verfahrens ist, dass das Eindeckmedium vorher in bezug auf die Viskosität genau eingestellt werden kann und bis zum Austrag in einem geschlossenem System verbleibt (keine Viskositätsänderung während des
Beschichtungsprozesses).
Der Durchmesser der Dosiernadel beträgt typischerweise zwischen 0,25 und 7,5 mm, bevorzugt ca. 1 ,6 mm. Zu beachten ist, dass der Abstand zwischen Nadel und Deckglas unter sehr engen Toleranzen erfolgen muss.
Durch den Abstand der Dosiernadel vom Deckglas, die Geschwindigkeit der Dosiernadel, die Abstände der einzelnen Beschichtungslinien, den Volumenstrom des Eindeckmediums und die Viskosität des Eindeckmediums läßt sich für jedes Eindeckmedium die Beschichtung optimieren.
Bei Bedarf können die Nadel und/oder das Eindeckmedium temperiert werden.
Ein besonders gleichmäßiger Auftrag wird erreicht, indem man die Menge des viskosen Eindeckmediums proportional zur Geschwindigkeit der Düse ausbringt und in Abhängigkeit von der Beschleunigung oder Verzögerung der Düse erhöht oder verringert. Entsprechende Verfahren und Vorrichtungen sind in DE 100 20 295 und DE 196 47 015 offenbart. Diese Vorrichtungen dienen hauptsächlich dem dosierten Extrudieren eines Stranges eines viskosen Mediums wie z. B. beim Aufbringen von Dichtungen auf Gehäuseschalen (DE 196 47 015).
Es wurde gefunden, dass diese Vorichtungen und Verfahren hervorragend geeignet sind, auch großflächige Beschichtungen mit viskosen Medien zu applizieren. Dabei ist die eingesetzte Vorrichtung mit einer speziellen Förderpumpe ausgestattet und kann somit eine präzise Menge Eindeckmedium in Abhängigkeit der dynamischen Materialeigenschaften des Eindeckmediums auftragen und die geschwindigkeitsabhängigen Nichtlinearitäten berücksichtigen.
Besonders bevorzugt wird das Eindeckmedium nach einem Verfahren entsprechend DE 100 20 295 mäanderförmig aufgetragen. Werden bei bevorzugt konstanter Temperatur des Mediums und der Umgebung parallelverlaufende Linien mäanderförmig aufgetragen, so fließt das Eindeckmedium langsam ineinander und es entsteht eine homogene, schichtdickendefinierte glasklare Beschichtung.
Nach der Beschichtung erfolgt die Trocknung. Bevorzugt wird ein schonender Trocknungsprozess über mehrere Stunden in einem Trockenofen durchgeführt. Die Trocknung kann. z.B. atmosphärisch, unter Vakuum oder mittels Infrarot erfolgen.
Die Platten werden nach der Trocknung nach einem vorgegebenem Raster in die entsprechenden Deckglasgrößen geschnitten und sorgfältig verpackt.
Zur Eindeckung wird das beschichtete Deckglas mit der beschichteten Seite, die gegebenenfalls durch die aufgetragene Markierung gekennzeichnet ist, auf einen durch Intermedium noch feuchten Objektträger mit bekannter Technik aufgelegt. Durch die Beschichtung mit dem Eindeckmedium verbinden sich Deckglas und Objektträger innerhalb weniger Sekunden und härten aus. Typischerweise ist das Präparat bereits nach 3 Minuten, meistens sogar nach weniger als einer Minute, vollständig ausgehärtet und kann dann, z.B. unter Verwendung von Immersionsobjektiven, mikroskopiert werden.
Durch die einfache Handhabung eignet sich das erfindungsgemäße beschichtete Deckglas sowohl zur manuellen wie auch zur automatischen Eindeckung von Präparaten. Da zum Eindecken kein flüssiges Eindeckmedium verwendet werden muß, besteht keine Gefahr des Verklebens. Bevorzugterweise werden die auf den Objektträgern fixierten Präparate direkt nach dem Färben und optional nach dem Entwässern aus der letzten Lösung (Intermedium), d.h. z.B. Wasser oder XyIoI bzw. Xylolersatzstoffen, entnommen und in noch feuchtem Zustand eingedeckt. Sind die Präparate bereits nahezu trocken, sollten sie nochmals mit wenig lntermedium angefeuchtet werden.
Das erfindungsgemäße Deckglas eignet sich zum Eindecken von Präparaten beispielsweise aus Histologie und Zytologie, wie sie typischerweise auch nach dem Stand der Technik eingedeckt werden. Somit eignen sich die erfindungsgemäßen Deckgläser insbesondere zum Eindecken von Präparaten mit einer Dicke bis zu 15 μm.
Neben der manuellen Eindeckung können die beschichteten Deckgläser und das erfindungsgemäße Verfahren auch für die automatische Eindeckung mit Eindeckautomaten verwendet werden. Eindeckautomaten, die nach dem Stand der Technik die Objektträger mit einer definierten Menge Eindeckmedium benetzen und anschließend das Deckglas aufsetzen, sind kommerziell erhältlich. Für das erfindungsgemäße Eindeckverfahren können sowohl Eindeckautomaten nach dem Stand der Technik verwendet werden, deren Funktion leicht modifiziert wird, wie auch Eindeckautomaten, die für das erfindungsgemäße Verfahren konzipiert sind. Herkömmliche Eindeckautomaten besitzen eine Dosierpumpe, um flüssiges Eindeckmedium auf die Objektträger aufzubringen. Dies ist bei dem erfindungsgemäßen Verfahren nicht notwendig. Demnach kann dieser Schritt beim Einsatz von Eindeckautomaten für das erfindungsgemäße Verfahren ausgelassen werden. Eine weitere Möglichkeit besteht darin, über diese Dosiervorrichtung statt des Eindeckmediums etwas lntermedium (XyIoI, Xylolersatz, etc.) auf die Objektträger zu geben. Da die Objektträger mit den Präparaten für das erfindungsgemäße Verfahren noch feucht sein sollten, könnten Präparate, die nach dem Färben oder Entwässern bereits wieder leicht getrocknet sind, durch eine kleine Menge lntermedium erneut angefeuchtet werden. Anschließend wird das Präparat mit dem erfindungsgemäßen Deckglas eingedeckt. In einer anderen Ausführungsform eines Eindeckautomaten, die besonders für das erfindungsgemäße Verfahren geeignet ist, werden die Objektträger mit den Präparaten in einem mit Lösungsmittel (Intermedium) gefüllten Behälter gelagert. Erst zur Eindeckung werden die Objektträger aus dem Lösungsmittelbehälter heraus transportiert und direkt mit dem beschichteten Deckglas bedeckt. Die Aufgabe von Eindeckmedium oder weiterer Mengen an Lösungsmittel ist hier nicht notwendig.
Durch die Verwendung des erfindungsgemäßen Deckglases werden die Eindeckautomaten wesentlich schonender behandelt als mit herkömmlichen Verfahren, da kein klebriges Eindeckmedium in den Automaten gelangen kann. Genau wie bei der manuellen Eindeckung können die Präparate nach kurzer Zeit, typischerweise sogar sofort mikroskopiert werden.
Somit bieten die erfindungsgemäßen Deckgläser und das erfindungsgemäße Verfahren zum Herstellen dieser Deckgläser nun die Möglichkeit, Präparate schnell und einfach einzudecken. Durch die erfindungsgemäße Beschichtung werden die Deckgläser bruchsicherer und elastischer und zersplittern nicht mehr so leicht. Die manuelle Handhabung klebriger Eindeckmittel entfällt. Durch die erfindungsgemäße Schichtdicke des Eindeckmediums wird eine dauerhafte Eindeckung erzeugt. Die eingedeckten Präparate können über einen langen Zeitraum gelagert werden, ohne dass sich das Deckglas ablöst.
Auch ohne weitere Ausführungen wird davon ausgegangen, daß ein Fachmann die obige Beschreibung im weitesten Umfang nutzen kann. Die bevorzugten Ausführungsformen und Beispiele sind deswegen lediglich als beschreibende, keineswegs als in irgendeiner Weise limitierende Offen- barung aufzufassen. Die vollständige Offenbarung aller vor- und nachstehend aufgeführten Anmeldungen, Patente und Veröffentlichungen, insbesondere der korrespondierenden Anmeldung DE 10 2007 025 716.5, eingereicht am 01.06.2007, ist durch Bezugnahme in diese Anmeldung eingeführt.

Claims

Ansprüche
1. Mittel im wesentlichen bestehend aus einem Deckglas und einer darauf aufgebrachten Schicht eines Eindeckmediums, dadurch gekennzeichnet, dass die Schichtdicke des Eindeckmediums kleiner oder gleich 0,04 mm ist.
2. Mittel nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Schichtdicke des Eindeckmediums zwischen 0,02 und 0,04 mm beträgt.
3. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Deckglas aus Glas ist.
4. Mittel nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Deckglas zusätzlich eine Markierung aufweist.
5. Mittel nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Eindeckmedium zumindest einen Weichmacher enthält.
6. Verfahren zur Herstellung von mit Eindeckmedium beschichteten Deckgläsern, dadurch gekennzeichnet, dass das Eindeckmedium maschinell mittels einer oder mehrerer Dosiernadeln auf das Deckglas aufgetragen wird, wobei die Menge des Eindeckmediums proportional zur Geschwindigkeit der Dosiernadel aufgebracht wird und in Abhängigkeit von der Beschleunigung oder Verzögerung der Dosiernadel erhöht oder verringert wird.
7. Verwendung eines mit Eindeckmedium beschichteten Deckglases gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 5 zur manuellen oder automatischen Eindeckung von Präparaten.
8. Verwendung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass ein mit einem aromatenfreien Eindeckmedium beschichtetes Deckglas zur Eindeckung eines mit einem aromatenhaltigen Lösungsmittel angefeuchteten Präparates eingesetzt wird.
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