WO2008107557A1 - Procede d'enrichissement d'un extrait contenant de l'oleocanthal - Google Patents

Procede d'enrichissement d'un extrait contenant de l'oleocanthal Download PDF

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WO2008107557A1
WO2008107557A1 PCT/FR2008/000074 FR2008000074W WO2008107557A1 WO 2008107557 A1 WO2008107557 A1 WO 2008107557A1 FR 2008000074 W FR2008000074 W FR 2008000074W WO 2008107557 A1 WO2008107557 A1 WO 2008107557A1
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oleocanthal
bisulfite
extract
compound
process according
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PCT/FR2008/000074
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Cyril Estanove
François PRUVOST
Frédéric SALDMANN
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B.C. Development S.A.
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/60—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification
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    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
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    • A23V2250/21—Plant extracts
    • A23V2250/2131—Olive

Definitions

  • the present invention relates to a new process for enriching an extract containing oleocanthal capable of providing high oleocanthal content extracts, as well as a new process for extracting oleocanthal from olive oil. .
  • Olive oil contains, in particular, monounsaturated fatty acids (oleic acid) as well as phenolic compounds which have the effect of retarding the oxidation of LDL lipoproteins.
  • phenolic compounds there are phenolic alcohols such as tyrosol and hydroxy-tyrosol, benzoic acids, caffeic and They are esterified with tyrosol and hydroxytyrosol, as well as flavonoids such as flavones and flavonols.
  • Patent FR 2,825,022 describes a method of upgrading the aqueous phases in olive oil preparation processes by extracting the polyphenols contained therein for use in dietary and cosmetic compositions.
  • Oleocanthal or deacetoxy-ligstroside aglycone
  • olive oils of various origins more particularly in virgin olive oil obtained by first pressing. cold, at very low concentrations which generally vary from 20 to 200 ppm (mass), or from 0.002 to 0.02% by weight, depending on the origin of the olive oil. It can be represented by the following general formula (I):
  • oleocanthal is a very fragile product, easily destroyed by heat and oxidation, as are most of the other polyphenolic compounds naturally present in vegetable oils.
  • the extraction must be done with an 80/20 methanol / water mixture.
  • the purification of the extract is then carried out by washing with hexane the solubilized extract in acetonitrile.
  • the authors have optimized this method with respect to the total phenolic compounds present in olive oil, and their study is not directly transposable to obtain extracts rich in oleocanthal.
  • a significant portion of the triglyceride compounds is still present even after purification.
  • the studies carried out by the applicant have shown that it is possible to efficiently enrich an extract containing in particular Oleocanthal via the formation of bisulfitic intermediate compounds.
  • the subject of the present invention is a process for enriching an extract containing in particular Oleocanthal capable of providing extracts whose oleocanthal content is greater than or equal to about 30%.
  • the present invention also relates to a process for enriching an extract containing Oleocanthal, providing a 90% oleocanthal titrated extract free of triglyceride compounds and phenolic impurities, in particular tyrosol and hydroxytyrosol. .
  • the present invention also relates to a process for extracting and enriching oleocanthal from virgin olive oil, preferably virgin olive oil prepared by first cold pressing, providing an extract titrated to oleocanthal greater than 10% and may exceed 90%.
  • the process for enriching an Oleocanthal-containing extract according to the present invention comprises the following successive steps: a) forming a bisulfite compound by mixing said extract with an alkali or alkaline earth metal bisulfite or quaternary ammonium, for example sodium bisulfite, and removing the unreacted derivatives with said bisulfite; b) deprotection of the bisulfite compound.
  • Step a) consists of forming an intermediate bisulfite compound.
  • bisulfite compound is a compound obtained by addition of alkali metal or alkaline earth metal bisulfite or quaternary ammonium on aldehydes or ketones. The removal of the unreacted derivatives with the bisulfite is preferably carried out by liquid / liquid extraction.
  • Step b) of the process according to the invention consists of a deprotection of the bisulfite compound.
  • This deprotection can be carried out in an acid medium, in a basic medium, or in the presence of a silylating agent, in particular chloro-trimethylsilane.
  • the extract containing oleocanthal used initially is in the form of a yellowish oil
  • the mixture of said extract with bisulfite is made by solubilization of said extract in an aqueous solution of bisulfite, optionally added a solvent or mixture of solvents miscible with water.
  • solvents may be chosen from alkyl acetates, alcohols or acetonitrile. It may be a solution of sodium bisulfite composed of a mixture of water and ethanol.
  • the amount of bisulfite preferably sodium bisulfite, can be calculated so as to selectively form the bisulfitic salts of the oleocanthal (I), the ligstroside aglycone derivative. represented by formula (II) below, and oleuropein aglycone derivatives represented by formulas (III) and (IV) below.
  • Derivatives which do not have an aldehyde function for example 1-acetoxypinoresinol and pinoresinol
  • sodium bisulfite are subsequently removed by liquid / liquid extraction using a solvent which is immiscible with water, especially using dichloromethane or ethyl acetate.
  • the bisulfite compound is then obtained by evaporating the aqueous phase.
  • a step of selective precipitation of the bisulphite compound of the oleocanthal can be further provided between steps a) and b).
  • This selective precipitation step which takes place before the deprotection step, is intended to selectively obtain Oleocanthal and thus significantly increase its content in the final extract relative to the original extract.
  • the implementation of this step may indeed make it possible to obtain an oleocanthal extract of purity greater than 90%.
  • the selective precipitation step is carried out by solubilization of the bisulfite compound in water or in an alcohol, for example methanol, and then selective precipitation of the bisulfitic compound of the oleochalhal by a non-solvent chosen from preferably in the group consisting of alkyl acetates, ethers, ketones and acetonitrile, with ethyl ether being particularly preferred.
  • the deprotection step of the bisulfite compound is then carried out as described above.
  • the subject of the invention is a process for extracting Oléocanthal from virgin olive oil, which consists in preparing an extract containing
  • the preparation of said extract comprises the following successive steps: adding a hydrocarbon to the olive oil; extraction using a binary solvent mixture water / alcohol or acetone, or ternary water / alcohol or acetone / solvent immiscible with water; elimination of the organic phase and total or partial concentration of the aqueous phase.
  • the step of adding the hydrocarbon to the olive oil makes it possible to facilitate the separation between the organic phase and the aqueous phase.
  • the hydrocarbon used may comprise from 5 to 10 carbon atoms and is preferably selected from the group consisting of hexane, cyclohexane and heptane.
  • the alcohol is preferably selected from the group consisting of methanol, ethanol, n propanol, 1-isopropanol.
  • the latter may be, for example, a chlorinated solvent, a ketone or an alkyl acetate.
  • the chlorinated solvent generally comprises 1 to 8 carbon atoms and may be chosen preferably from the group consisting of dichloromethane, chloroform and chlorocyclohexane
  • the ketone preferably comprises from 4 to 8 carbon atoms and may be chosen from the group consisting of methyl ethyl ketone and pentanones
  • the alkyl acetate generally has from 3 to 8 carbon atoms and is preferably methyl or ethyl acetate.
  • the proportions of solvents used may vary according to the operating conditions, but they are generally between 80/20 and 40/60 in the case of a binary mixture water / alcohol or acetone, and for example a mixture is advantageously used water / methanol 60/40.
  • the following step makes it possible to partially purify the extract and to effectively remove the constituents entrained during the extraction, the physicochemical properties of which are close to those of the oleocanthal. This step is crucial to obtain an extract with a high concentration of oleocanthal.
  • the concentration of the extract can be complete by carrying out dry evaporation so as to obtain a dry extract which is then used in the enrichment stage.
  • the partial concentration rate must be at least 50%.
  • Oléocanthal is also isolated from other components of olive oil such as hydrocarbons (eg squalene), sterol, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothyroxine, levothoxyl, levocanthal, levoside, steastyrosol, and cinnamic series acids such as p-coumaric, caffeic, and sinapic acids; esterified derivatives of caffeic acid (verbascoside) or of elenolic acid (oleuropein glycosylated or not, largely responsible for the bitterness of olive oil), these two acids being esterified by tyrosol or hydroxytyrosol; and finally flavonoids such as flavones (luteolin) and flavonol
  • the extract obtained contains oleocanthal as a predominantly phenolic compound as well as small amounts of oleuropein aglycone derivatives and ligstroside aglycone, while tyrosol and hydroxytyrosol, and their derivatives, in particular the acetates, are totally eliminated, as are the triglyceride compounds.
  • the process of the invention makes it possible to obtain an extract containing not only oleocanthal with a content of at least 30% by weight, but also derivatives of Oleuropein aglycone and ligstroside aglycone in significant amount. The proportions of these four derivatives can be substantially equivalent. Such an extract containing these derivatives may be of economic interest.
  • the following examples illustrate the invention in more detail without limiting its scope. Unless otherwise indicated, ratios and percentages are by weight.
  • This example describes the extraction of oleocanthal with a binary solvent mixture.
  • the two aqueous phases are combined and concentrated by dry evaporation to not exceeding 40 ° C. in the bath (obtaining an oil).
  • a fresh solution of sodium bisulfite is prepared by dissolving 0.817 g in 100 ml of water (molecular weight: 104.06 g / mole, 7.85 ⁇ 10 -2 mole per liter).
  • a liquid / liquid water / dichloromethane extraction is then carried out on the aqueous phase thus obtained in order to remove the derivatives which have no aldehyde or unreacted functions with the bisulfite.
  • the aqueous phase is then evaporated on a rotary evaporator, and a residue R is obtained.
  • the R residue obtained is taken up by the minimum volume of a solution of dilute HCl (pH between 3 and 5) allowing a total solubility of the product.
  • the reaction medium is allowed to react with stirring for 30 minutes at room temperature.
  • the solution is extracted 3 times with an equivalent volume of dichloromethane.
  • the combined dichloromethane phases are then dried over Na 2 SO 4 , the solution is then filtered and the dichloromethane phase is concentrated on a rotary evaporator in order to recover the purified oleocanthal.
  • Example 2 describes a variant of Example 2, in which the Oleocanthal bisulfite compound is precipitated prior to deprotection.
  • the R residue is prepared as described in Example 2, and then it is taken up in a minimum of methanol.
  • Oleocanthal bisulfite compound is precipitated selectively by addition of ethyl ether.
  • the whitish precipitate is recovered by simple filtration.
  • Deprotection in an acid medium is then carried out on the precipitate as described in Example 2.
  • About 280 mg of oleocanthal with a purity of greater than 90% are obtained.
  • the bisulfite compound is prepared according to the conditions described in Example 2.
  • the residue R obtained in Example 2 is taken up by the minimum volume of a solution of NaOH (pH between 8 and 9) allowing a total solubility of the product.
  • the reaction medium is allowed to react with stirring for 30 minutes at room temperature.
  • the combined dichloromethane phases are then dried over Na 2 SO 4 , the solution is then filtered and the dichloromethane phase is concentrated on a rotary evaporator to recover the purified oleocanthal.
  • About 0.9 g of product containing a mixture of phenolic compounds (major oleocanthal, derivative of ligstroside aglycone (II) and oleuropein aglycone derivatives are obtained.
  • Example 4 describes a variant of Example 4, in which the bisulfite compound of the oleocanthal is precipitated prior to deprotection.
  • the R residue is prepared as described in Example 2, then it is taken up in a minimum of methanol and the bisulfitic compound of the oleocanthal is precipitated selectively by addition of ethyl ether. The whitish precipitate is recovered by simple filtration.
  • the bisulphite compound is prepared according to the conditions described in Example 2. To carry out its deprotection in the presence of chlorotrimethylsilane, the residue R obtained in Example 2 is taken up in 5 ml of acetonitrile.
  • the combined dichloromethane phases are then dried over Na 2 SO 4 , the solution is then filtered and the dichloromethane phase is concentrated on a rotary evaporator to recover the purified oleocanthal.
  • About 0.8 g is obtained containing a mixture of phenolic compounds (major oleocanthal (I), derived from ligstroside aglycone (II) and oleuropein aglycone derivatives).
  • Example 6 describes a variant of Example 6, in which the oleocanthal bisulphite compound is precipitated prior to deprotection.
  • the R residue is prepared as described in Example 2, and then it is taken up in a minimum of methanol.
  • the Oleocanthal bisulfite compound is precipitated selectively by addition of ethyl ether.
  • the whitish precipitate is recovered by simple filtration.

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Abstract

L'invention concerne un procédé d'enrichissement d'un extrait contenant de l'oléocanthal, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives suivantes: a) formation d'un composé bisulfitique par mélange dudit extrait avec un bisulfite de métal alcalin ou alcalino-terreux ou d'ammonium quaternaire et élimination des dérivés n'ayant pas réagi avec ledit bisulfite; b) déprotection du composé bisulfitique. L'invention concerne également un procédé d'extraction d'oléocanthal à partir d'huile d'olive vierge.

Description

PROCEDE D'ENRICHISSEMENT D'UN EXTRAIT CONTENANT DE L ' OLEOCANTHAL .
La présente invention concerne un nouveau procédé d'enrichissement d'un extrait contenant de 1 ' oléocanthal susceptible de fournir des extraits à teneur élevée en oléocanthal, ainsi qu'un nouveau procédé d'extraction d' oléocanthal à partir d'huile d'olive.
Le maintien de la santé et du confort de vie est devenu l'une des principales préoccupations des populations des pays développés. Il en résulte des besoins croissants en médicaments, en soins médicaux et en produits alimentaires de qualité contrôlée. En particulier, dans le domaine de l'alimentation, de nombreuses recherches ont été consacrées aux suppléments et compléments alimentaires, entraînant le développement des domaines de la "nutraceutique" et des "alicaments " , pour la mise au point d'aliments ou de compléments alimentaires destinés à favoriser les fonctions biologiques affectées par le vieillissement. De plus, les consommateurs recherchent aujourd'hui de plus en plus souvent des produits naturels ou d'origine naturelle ayant subi un traitement aussi peu dénaturant que possible. Des études épidémiologiques ont montré les effets bénéfiques pour la santé des régimes diététiques méditerranéens comprenant un apport élevé en fibres, fruits, légumes, et en huile d'olive qui constitue la source principale de matière grasse. L'huile d'olive contient notamment des acides gras mono- insaturés (acide oléique) ainsi que des composés phéno- liques qui ont pour effet de retarder l'oxydation des lipoprotéines LDL. Parmi ces composés phénoliques, on distingue des alcools phénoliques tels que le tyrosol et l'hydroxy- tyrosol, des acides benzoïques, des acides caféique et éléno- lique estérifiés par le tyrosol et 1 ' hydroxytyrosol , ainsi que des flavonoïdes tels que des flavones et flavonols. Le brevet FR 2.825.022 décrit une méthode de valorisation des phases aqueuses dans les procédés de préparation de l'huile d'olive, par extraction des polyphénols qui y sont contenus pour les utiliser dans des compositions diététiques et cosmétiques.
P. Andrewes et al., J". Agric. Food Chem. 51:5, 1415-1420
(2003), ont montré que l'huile d'olive contient un dérivé phénolique particulier, à savoir la deacetoxy ligstroside aglycone, qui est responsable de son goût typique. G. K. Beauchamp et al. Nature, vol. 437, 45-46 (Sept. 2005), ont montré que la deacetoxy ligstroside aglycone, ou oléocanthal, contenue dans l'huile d'olive vierge obtenue par première pression à froid, présente des propriétés inhibitrices des enzymes COXl et COX2 , c'est-à-dire des propriétés antiinflammatoires voisines de celles de l ' ibuprofène, molécule utilisée depuis de nombreuses années comme médicament anti- inflammatoire non-stéroidien. Ces propriétés de 1 ' oléocanthal sont aussi décrites dans WO 2006122128. L Oléocanthal, ou deacetoxy-ligstroside aglycone, a été détecté dans des huiles d'olive de diverses provenances, plus particulièrement dans l'huile d'olive vierge obtenue par première pression à froid, à des concentrations très faibles qui varient généralement de 20 à 200 ppm (masse) , soit de 0,002 à 0,02% en poids, en fonction de la provenance de l'huile d'olive. Il peut être représenté par la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000004_0001
Une utilisation pharmaceutique ou nutraceutique de ce composé requiert l'obtention de fractions beaucoup plus concentrées. De plus, 1 'oléocanthal est un produit très fragile, facilement détruit par la chaleur et par oxydation, comme le sont d'ailleurs la plupart des autres composés poly- phénoliques naturellement présents dans les huiles végétales.
Différentes méthodes d'extraction des composés phéno- liques présents dans l'huile d'olive ont été comparées par G. Montedoro et al., J". Agric. Food Chem. , 1992, 40, 9, 1571-
1576. Selon les auteurs, pour être optimale, l'extraction doit se faire avec un mélange méthanol/eau 80/20. La purification de l'extrait est ensuite réalisée par lavage à l ' hexane de l'extrait solubilisé dans l' acétonitrile . Cependant, les auteurs ont optimisé cette méthode par rapport aux composés phénoliques totaux présents dans l'huile d'olive, et leur étude n'est pas directement transposable à l'obtention d'extraits riches en oléocanthal. De plus, une partie importante des composés triglycéridiques est toujours présente même après purification.
D'autres purifications de l ' oléocanthal sont décrites dans la littérature. Elles font appel systématiquement à des purifications par chromatographie sur plaque de verre, sur colonne ouverte, ou par chromatographie préparâtive, et n'ont pour but que l'obtention de produit purifié pour caractéri- sation.
Ainsi, la quantité d'oléocanthal dans l'huile d'olive étant très faible (20 à 200 ppm soit 0.002 à 0.02% d'oléo- canthal) , il est difficile d'obtenir un extrait suffisamment enrichi en oléocanthal sans faire appel à des méthodes chromatographiques .
Il est donc souhaitable de pouvoir mettre au point un procédé permettant d'obtenir des extraits à teneur élevée en oléocanthal .
Les études effectuées par le demandeur ont montré qu'il est possible d'enrichir efficacement un extrait contenant notamment de 1 Oléocanthal en passant par la formation de composés intermédiaires bisulfitiques . La présente invention a pour objet un procédé d'enrichissement d'un extrait contenant notamment de 1 Oléocanthal susceptible de fournir des extraits dont la teneur en oléocanthal est supérieure ou égale à environ 30%.
La présente invention a encore pour objet un procédé d'enrichissement d'un extrait contenant de 1 Oléocanthal , procurant un extrait titré en oléocanthal supérieur à 90% exempt de composés triglycéridiques et d'impuretés phéno- liques, notamment de tyrosol et d ' hydroxytyrosol .
La présente invention a également pour objet un procédé d'extraction et d'enrichissement d'oléocanthal à partir d'huile d'olive vierge, de préférence d'huile d'olive vierge préparée par première pression à froid, procurant un extrait titré en oléocanthal supérieur à 10% et pouvant aller au-delà de 90%. Le procédé d'enrichissement d'un extrait contenant de 1 Oléocanthal conforme à la présente invention comprend les étapes successives suivantes : a) formation d'un composé bisulfitique par mélange dudit extrait avec un bisulfite de métal alcalin ou alcalino-terreux ou d'ammonium quaternaire, par exemple le bisulfite de sodium, et élimination des dérivés n'ayant pas réagi avec ledit bisulfite; b) déprotection du composé bisulfitique.
L'étape a) consiste en la formation d'un composé bisulfitique intermédiaire. De façon générale, on entend par composé bisulfitique un composé obtenu par addition de bisulfite de métal alcalin ou alcalino-terreux ou d'ammonium quaternaire sur des aldéhydes ou des cétones . L'élimination des dérivés qui n'ont pas réagi avec le bisulfite est réalisée de préférence par extraction liquide/liquide.
L'étape b) du procédé selon l'invention consiste en une déprotection du composé bisulfitique. Cette déprotection peut être réalisée en milieu acide, en milieu basique, ou en présence d'un agent de silylation, en particulier le chloro- triméthylsilane .
Selon une réalisation préférentielle, l'extrait contenant de l 'oléocanthal utilisé au départ se présente sous la forme d'une huile jaunâtre, et le mélange dudit extrait avec le bisulfite est réalisé par solubilisation dudit extrait dans une solution aqueuse de bisulfite, éventuellement additionnée d'un solvant ou d'un mélange de solvants miscibles à l'eau. Ces solvants peuvent être choisis parmi les acétates d'alkyle, les alcools ou 1 ' acétonitrile . Il peut s'agir d'une solution de bisulfite de sodium composée d'un mélange d'eau et d' éthanol .
Selon cette réalisation, la quantité de bisulfite, de préférence le bisulfite de sodium, peut être calculée de manière à former sélectivement les sels bisulfitiques de l'oléocanthal (I), du dérivé du ligstroside aglycone représenté par la formule (II) ci-dessous, et des dérivés de 1 'oleuropéine aglycone représentés par les formules (III) et (IV) ci-dessous.
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000007_0002
Les dérivés qui ne possèdent pas de fonction aldéhyde (par exemple le 1-acétoxypinorésinol et le pinorésinol) ou qui n'ont pas réagi avec le bisulfite de sodium sont ensuite éliminés par extraction liquide/liquide au moyen d'un solvant non miscible à l'eau, notamment en utilisant du dichloro- méthane ou de l'acétate d'éthyle. Le composé bisulfitique est alors obtenu en évaporant la phase aqueuse.
Après déprotection, on obtient un mélange dans lequel 1 'oléocanthal est majoritaire et les composés de formule (II), (III) et (IV) sont présents en quantités sensiblement équi- valentes. Le procédé qui vient d'être décrit peut permettre d'obtenir un extrait présentant une teneur élevée en oléocanthal, de l'ordre d'au moins 30%, et ce sans faire intervenir de réactifs chimiques organiques dont l'utilisation produit des effets néfastes sur l'environnement.
Selon une variante avantageuse du procédé selon l'invention, on peut prévoir en outre, entre les étapes a) et b) , une étape de précipitation sélective du composé bisulfitique de 1 ' oléocanthal . Cette étape de précipitation sélective, qui intervient avant l'étape de déprotection, a pour but d'obtenir de façon sélective 1 Oléocanthal et d'augmenter ainsi significativement sa teneur dans l'extrait final par rapport à l'extrait d'origine. La mise en œuvre de cette étape peut permettre en effet d'obtenir un extrait d' oléocanthal de pureté supérieure à 90%.
Selon une réalisation, l'étape de précipitation sélective est effectuée par solubilisation du composé bisulfitique dans de l'eau ou dans un alcool, par exemple le méthanol , puis précipitation sélective du composé bisulfitique de l'oléo- canthal par un non solvant choisi de préférence dans le groupe constitué par les acétates d'alkyle, les éthers, les cétones et 1 ' acétonitrile, 1 ' éther éthylique étant particulièrement préféré .
Selon cette variante, l'étape de déprotection du composé bisulfitique est ensuite effectuée comme décrit plus haut.
Selon un autre aspect, l'invention a pour objet un procédé d'extraction d Oléocanthal à partir d'huile d'olive vierge, qui consiste à préparer un extrait contenant de
1 'oléocanthal , et à enrichir ledit extrait en mettant en œuvre le procédé d'enrichissement tel que décrit ci-dessus.
Selon une réalisation préférentielle, la préparation dudit extrait comprend les étapes successives suivantes: addition d'un hydrocarbure à X 'huile d'olive; extraction au moyen d'un mélange de solvants binaire eau / alcool ou acétone, ou ternaire eau / alcool ou acétone / solvant non miscible à l'eau; - élimination de la phase organique et concentration totale ou partielle de la phase aqueuse.
L'étape d'addition de l'hydrocarbure à l'huile d'olive permet de faciliter la séparation entre la phase organique et la phase aqueuse. L'hydrocarbure utilisé peut comporter de 5 à 10 atomes de carbone et est choisi de préférence dans le groupe constitué par l'hexane, le cyclohexane et l'heptane.
Pour la mise en œuvre de l'étape suivante d'extraction, dans le cas d'un mélange binaire de solvants eau/alcool, l'alcool est choisi de préférence dans le groupe constitué par le méthanol , l'éthanol, le n-propanol, 1 ' isopropanol .
Lorsque l'on utilise un mélange ternaire de solvants eau/alcool ou acétone/solvant non miscible à l'eau, ce dernier peut être par exemple un solvant chloré, une cétone ou un acétate d'alkyle. Le solvant chloré comporte généralement 1 à 8 atomes de carbone et peut être choisi de préférence dans le groupe constitué par le dichlorométhane, le chloroforme et le chlorocyclohexane, la cétone comporte de préférence de 4 à 8 atomes de carbone et peut être choisie dans le groupe constitué par la méthyléthylcétone et les pentanones, et l'acétate d'alkyle comporte généralement de 3 à 8 atomes de carbone et est de préférence l'acétate de méthyle ou d'éthyle.
Les proportions de solvants utilisées peuvent varier selon les conditions opératoires, mais elles sont généralement comprises entre 80/20 et 40/60 dans le cas d'un mélange binaire eau/alcool ou acétone, et par exemple on utilise avantageusement un mélange eau/méthanol 60/40. L'étape suivante permet de purifier partiellement l'extrait et d'éliminer efficacement les constituants entraînés lors de l'extraction dont les propriétés physico-chimiques sont proches de celles de 1 'oléocanthal . Cette étape est cruciale pour obtenir un extrait à forte concentration en oléocanthal .
La concentration de l'extrait peut être totale en réalisant une évaporation à sec de manière à obtenir un extrait sec que l'on utilise ensuite dans l'étape d'enrichis- sèment. En cas de concentration partielle, il est avantageux de procéder ensuite à une étape de centrifugation avant de passer à l'étape d'enrichissement. Le taux de concentration partielle doit être d'au moins 50%.
Le procédé d'enrichissement décrit permet en particulier d'isoler 1 Oléocanthal de presque tous les autres composés phénoliques présents à l'origine dans l'huile d'olive. Il s'agit notamment des alcools phénoliques tels que le tyrosol et 1 ' hydroxytyrosol ; des acides libres de la série benzoïque tels que les acides protocatéchique, gallique, vanillique, syringique, ou de la série cinnamique tels que les acides p- coumarique, caféique, et sinapique ; des dérivés estérifiés de l'acide caféique (verbascoside) ou de l'acide élénolique (oleuropéine glycosylée ou non, en grande partie responsable de l'amertume de l'huile d'olive), ces deux acides étant estérifiés par le tyrosol ou l 'hydroxytyrosol ; et enfin des flavonoides tels que flavones (lutéoline) et flavonol (quercétine et kaemférol glycosylés ou non) . L ' oléocanthal est également isolé des autres composants de l'huile d'olive tels que hydrocarbures (par exemple squalène) , stérols (par exemple -sitostérol) , alcools triterpéniques , et tocophérol (sous formes , ou ) . ^
II est tout particulièrement intéressant de noter que l'extrait obtenu contient 1 'oléocanthal comme composé phéno- lique fortement prédominant ainsi que de faibles quantités de dérivés de 1 'oleuropéine aglycone et du ligstroside aglycone, tandis que le tyrosol et 1 'hydroxytyrosol , et leurs dérivés, en particulier les acétates, sont totalement éliminés, de même que les composés triglycéridiques . Comme indiqué plus haut, suivant la variante utilisée, le procédé de l'invention permet d'obtenir un extrait contenant non seulement de 1 'oléocanthal avec une teneur d'au moins 30% en poids, mais ausssi des dérivés de 1 Oleuropéine aglycone et du ligstroside aglycone en quantité significative. Les proportions de ces quatre dérivés peuvent être sensiblement équivalentes . Un tel extrait contenant ces dérivés peut présenter un intérêt économique. Les exemples suivants illustrent 1 ' invention plus en détail sans en limiter la portée. Sauf indication contraire, les rapports et pourcentages sont exprimés en poids .
Exemple 1
Préparation d'un extrait contenant de l 'oléocanthal à partir d'huile d'olive
Cet exemple décrit l'extraction d Oléocanthal par un mélange de solvants binaire.
A partir d'une huile d'olive contenant 56 mg d'oléo- canthal par kilogramme, on effectue tout d'abord une extraction comme indiqué ci-après.
Dans un réacteur de 50 litres, on charge 10 kilogrammes d'huile d'olive et 20 litres de cyclohexane.
Pour la lere extraction liquide/liquide, on ajoute
20 litres d'un mélange méthanol/eau 40/60 v/v et on agite le milieu à température ambiante pendant 5 minutes, puis on laisse décanter les 2 phases. L'extraction est répétée une deuxième fois dans les mêmes conditions.
On ajoute sur la première phase aqueuse 20 litres de cyclohexane . Le milieu est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 5 minutes puis on laisse décanter les 2 phases. On procède à un lavage de la deuxième phase aqueuse avec la même phase cyclohexane.
Les deux phases aqueuses sont regroupées et concentrées par évaporâtion à sec en ne dépassant pas 4O0C dans le bain (obtention d'une huile) .
On obtient ainsi environ 4,7 g d'extrait à 12% d' oléocanthal .
Exemple 2
Formation du composé bisulfitique et déprotection en milieu acide
On prépare une solution fraîche de sodium bisulfite en dissolvant 0,817 g dans 100 ml d'eau (masse moléculaire : 104,06 g/mole, 7,85.10"2 mole par litre).
On ajoute 20 ml de solution aqueuse diluée de sodium bisulfite (l,57.10"3 mole de bisulfite) à la quantité d'extrait adéquate contenant environ 400 mg d'oléocanthal (masse moléculaire: 304,13 g/mole, 1,31.10"3 mole), obtenu selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 1. Si le milieu est trop hétérogène, une petite quantité d'éthanol est ajoutée. La solution est agitée à température ambiante pendant 1 heure.
Si de 1 ' éthanol a été ajouté, celui-ci est évaporé à l'évaporateur rotatif.
On réalise ensuite une extraction liquide/liquide eau/dichlorométhane sur la phase aqueuse ainsi obtenue pour éliminer' les dérivés ne possédant pas de fonctions aldéhydiques ou n'ayant pas réagi avec le bisulfite. Puis la phase aqueuse est évaporée à l' évaporateur rotatif, et l'on obtient un résidu R.
Le résidu R obtenu est repris par le volume minimal d'une solution de HCl dilué (pH compris entre 3 et 5) permettant une solubilité totale du produit.
On laisse réagir le milieu réactionnel sous agitation pendant 30 minutes à température ambiante.
La solution est extraite 3 fois par un volume équivalent de dichlorométhane . On sèche ensuite sur Na2SO4 les phases dichlorométhane regroupées, puis la solution est filtrée et la phase dichlorométhane est concentrée à 1 ' évaporateur rotatif afin de récupérer 1 ' oléocanthal purifié.
On obtient environ 1,0 g de produit contenant un mélange de composés phénoliques (oléocanthal majoritaire, dérivé du ligstroside aglycone (II) et dérivés de l ' oleuropéine aglycone
(III) et (IV) en proportions équivalentes) , exempt de composés pinorésinols (1-acetoxypinoresinol et pinoresinol par exemple) . Le titre en oléocanthal dans le mélange est de l'ordre de 30%.
Exemple 3
Cet exemple décrit une variante de l'exemple 2, dans laquelle le composé bisulfitique de 1 Oléocanthal est précipité préalablement à la déprotection. Pour cela, le résidu R est préparé comme décrit dans l'exemple 2, puis il est repris dans un minimum de méthanol .
Le composé bisulfitique de 1 Oléocanthal est précipité sélectivement par ajout d'éther éthylique. Le précipité blanchâtre est récupéré par simple filtration. La déprotection en milieu acide est ensuite réalisée sur le précipité comme décrit dans l'exemple 2. On obtient environ 280 mg d'oléocanthal de pureté supérieure à 90%.
Exemple 4
Formation du composé bisulfitique et déprotection en milieu basique
Le composé bisulfitique est préparé selon les conditions décrites dans l'exemple 2.
Pour effectuer sa déprotection en milieu basique, le résidu R obtenu dans l'exemple 2 est repris par le volume minimal d'une solution de NaOH (pH compris entre 8 et 9) permettant une solubilité totale du produit .
On laisse réagir le milieu réactionnel sous agitation pendant 30 minutes à température ambiante.
La solution est extraite 3 fois par un volume équivalent de dichlorométhane .
On sèche ensuite sur Na2SO4 les phases dichlorométhane regroupées, puis la solution est filtrée et la phase dichlorométhane est concentrée à l ' évaporateur rotatif pour récupérer l'oléocanthal purifié. On obtient environ 0,9 g de produit contenant un mélange de composés phénoliques (oléocanthal majoritaire, dérivé du ligstroside aglycone (II) et dérivés de l ' oleuropéine aglycone
(III) et (IV) en proportions équivalentes) , exempt de composés pinoresinols (1-acetoxypinoresinol et pinoresinol par exemple) . Le titre en oléocanthal dans le mélange est de l'ordre de 30%.
Exemple 5
Cet exemple décrit une variante de l'exemple 4, dans laquelle le composé bisulfitique de l'oléocanthal est précipité préalablement à la déprotection. Pour cela, le résidu R est préparé comme décrit dans l'exemple 2, puis il est repris dans un minimum de méthanol et le composé bisulfitique de l'oléocanthal est précipité sélectivement par ajout éther éthylique. Le précipité blanchâtre est récupéré par simple filtration.
La déprotection en milieu basique est ensuite réalisée sur le précipité comme décrit dans l'exemple 4.
On obtient environ 250 mg d'oléocanthal de pureté supérieure à 90%.
Exemple 6
Formation du composé bisulfitique et déprotection en présence de chlorotriméthylsilane
Le composé bisulfitique est préparé selon les conditions décrites dans l'exemple 2. Pour effectuer sa déprotection en présence de chlorotriméthylsilane, on reprend le résidu R obtenu dans l'exemple 2 dans 5 ml d' acétonitrile .
On ajoute ensuite 0,4 g de chlorotriméthylsilane (Masse moléculaire : 108,64 g/mole, 3,68.10"3 mole), puis on laisse réagir le milieu rêactionnel sous agitation pendant 2 heures à 400C.
On laisse refroidir à température ambiante, et le milieu rêactionnel est évaporé à sec.
Le résidu ainsi obtenu est repris par 20 ml d'eau et on extrait la solution 3 fois par un volume équivalent de dichlo- rométhane .
On sèche ensuite sur Na2SO4 les phases dichlorométhane regroupées, puis la solution est filtrée, et la phase dichlorométhane est concentrée à l ' évaporateur rotatif pour récupérer l'oléocanthal purifié. On obtient environ 0,8 g contenant un mélange de composés phénoliques (oléocanthal (I) majoritaire, dérivé du ligstroside aglycone (II) et dérivés de l ' oleuropéine aglycone
(III) et (IV) en proportions équivalentes) , exempt de composés pinoresinols (1-acetoxypinoresinol et pinoresinol par exemple) . Le titre en oléocanthal dans le mélange est de l'ordre de 30%.
Exemple 7
Cet exemple décrit une variante de l'exemple 6, dans laquelle le composé bisulfitique de 1 ' oléocanthal est précipité préalablement à la déprotection.
Pour cela, le résidu R est préparé comme décrit dans l'exemple 2, puis il est repris dans un minimum de méthanol .
Le composé bisulfitique de 1 Oléocanthal est précipité sélectivement par ajout d'éther éthylique. Le précipité blanchâtre est récupéré par simple filtration.
La déprotection en présence de chlorotriméthylsilane est ensuite réalisée sur le précipité comme décrit dans l'exemple 6 ci-dessus. On obtient environ 230 mg d'oléocanthal de pureté supérieure à 90%.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé d'enrichissement d'un extrait contenant de 1 ' oléocanthal , caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives suivantes: a) formation d'un composé bisulfitique par mélange dudit extrait avec un bisulfite de métal alcalin ou alcalino-terreux ou d'ammonium quaternaire et élimination des dérivés n'ayant pas réagi avec ledit bisulfite; b) déprotection du composé bisulfitique.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend en outre, entre les étapes a) et b) , une étape de précipitation sélective du composé bisulfitique de 1 ' oléocanthal .
3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'étape de précipitation est effectuée par solubilisation du composé bisulfitique dans du méthanol , puis précipitation sélective du composé bisulfitique de 1 ' oléocanthal par un non- solvant .
4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le non-solvant est 1 ' éther éthylique.
5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'étape b) de déprotection est effectuée en milieu acide.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'étape b) de déprotection est effectuée en milieu basique.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'étape b) de déprotection est effectuée en présence d'un agent de silylation.
8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'agent de silylation est le chlorotriméthylsilane .
9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le bisulfite est le bisulfite de sodium.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 5 à 9, caractérisé en ce que l'extrait contenant de
1 '-oléocanthal est sous forme d'huile, et en ce que le mélange dudit extrait avec ledit bisulfite est réalisé par solubilisation dudit extrait dans une solution aqueuse de bisulfite . 0 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que la solution aqueuse de bisulfite comprend en outre un solvant ou un mélange de solvants miscibles à l'eau.
12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que l'élimination des dérivés n'ayant5 pas réagi avec le bisulfite est réalisée par extraction liquide/liquide .
13. Procédé d'extraction d ' oléocanthal à partir d'huile d'olive vierge, caractérisé en ce qu'il consiste à préparer un extrait contenant de 1 ' oléocanthal , et a enrichir ledit0 extrait par la mise en œuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12.
14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que la préparation dudit extrait comprend les étapes successives suivantes : 5 - addition d'un hydrocarbure à l'huile d'olive;
- extraction au moyen d'un mélange de solvants binaire ; eau / alcool ou acétone, ou ternaire eau / alcool ou acétone / solvant non miscible à l'eau; élimination de la phase organique et concentration0 totale ou partielle de la phase aqueuse.
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