WO2007142347A1

WO2007142347A1 - 腫瘍マーカー及び癌疾病の罹患の識別方法

Info

Publication number: WO2007142347A1
Application number: PCT/JP2007/061690
Authority: WO
Inventors: Makoto Watanabe; Osamu Nishimura; Toshiya Matsubara; Ichiro Takemasa; Morito Monden; Katsuya Nagai; Nariaki Matsuura
Original assignee: Shimadzu Corporation; Osaka University
Priority date: 2006-06-05
Filing date: 2007-06-05
Publication date: 2007-12-13
Also published as: EP2180320A1; EP2028492A1; EP2028492A4; US20090191575A1

Abstract

本発明は、大腸癌の腫瘍マーカー及び大腸癌についての罹患を識別することができる方法を提供する。大腸癌組織から同定されたタンパク質を含む腫瘍マーカー。当該腫瘍マーカーを用いて大腸癌の罹患を識別する方法。当該方法においては、前記タンパク質の、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人に由来する試料中におけるレベルを測定し、得られた測定値レベルと、前記タンパク質の正常レベルとを比較し、得られた測定値レベルが、前記正常レベルよりも増加又は減少していることを、前記対象となる個人が大腸癌に罹患している可能性が高いことの指標の1つとする。

Description

明細書腫瘍マーカー及び癌疾病の罹患の識別方法

技術分野本発明は、臨床での診断'検診'経過観察、及び分類の技術に関し、具体的には、腫瘍マ一力一及び癌疾病の罹患の識別方法（Tumor Marker and Method to Identify Morbidity of Cancer Disease) に関する。とりわけ、本発明は、大腸癌の腫瘍マーカー及び大腸癌の罹患の識別方法に闋する。

背景技術大腸癌の診断 '検診■経過観察の手法の一つとして、血液検査が行われている。血液検査においては、患者の血液中のある種のタンパク質（腫瘍マーカー： tumor marker) の濃度を計測することで、進行癌の存在を推定することができる。大腸癌の腫瘍マーカーについては、例えば、 Anticancer Research, 2004,24(4), 2519-2530 (非特許文献 1 ) などに記載されている。現在、代表的な腫瘍マーカーとしては、癌胎児性抗原 (CEA) や CA19-9が挙げられる。肝臓などへの転移があると、これらの腫瘍マ一カーの濃度が度に上昇する。また、 US2006/0019256 (COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING AND DIAGNOSING CANCER) (特許文献 1 ) には、肺癌由来の培養細胞 (xenogralttumors)の解析結果として、 HIA-C, MBC2、 RAB22A, MGC15429, MHC class I antigenが癌関連蛋白質として記載されている。さらに、 US2003/0211498 (TUMOR MARKERS IN OVARIAN CANCER) (特許文献 2) には、子宮癌マ一力一遺伝子として Tumor rejection antigen-1が記載されている。非特許文献 1 「ァンチキヤンサ一■リサーチ（Anticancer Research)」、 2004年、第 24巻、第 4号、 p. 2519-2530

特許文献 1 米国特許出願公開第 2006/0019256号明細書

特許文献 2 米国特許出願公開第 2003/0211498号明細書

発明の開示

発明の目的

上述のように、癌胎児性抗原 (CEA) や CA19-9などの腫瘍マーカーが、大腸癌の診断. 検診'経過観察における血液検査で用いられている。しかしながら、早期癌の段階においてはこれらの腫瘍マ一カーの濃度は正常レベルであることが多く、進行癌の段階においても正常レベルの範囲であることカ《少なくない。このような観点から、罹患部位についての特異性が高く且つ ffl診断に適した新規腫瘍マーカーの発見が求められている。なお、上記特許文献 1には、開示された癌関連タンパク質が、大腸癌に関連していることは記載されていなしゝ。また、上記特許文献 2には、開示された子宮癌マ一カー遺伝子が、大腸癌に関連していることは記載されていない。本発明は、大腸癌に対してよリ特異性の高し、腫瘍マーカーを提供することを目的とする。また本発明は、大腸癌につしゝての罹患を識別することができる方法を提供することを目的とする。発明の概要

本発明者らは、大腸癌患者から採取した大腸粘膜上皮における病織と正常組織とを試料とし、プロ亍オーム解析法として N B S法を用い、両紙織間で：? ¾量に一定量以上の差が認められるタンパク質群を同定した。 N B S法は、 2—ニトロベンゼンスルフエニルクロリドを用いる、タンパク質■ぺプチドの相対定量に優れた手法である。 N B S法を用いるプロテオーム角？ ^法は、二次元電気泳動法を用いる最も汎用的なプロテオー厶角 ¾ff法と、分離様式及び検出原理が根本的に異なる。このため、 N B S法を用しゝたプロ亍オーム解析法によると、現在までに腎癌マーカー igffiとして報告されているタンパク質群とは異なるマーカ一候補タンパク質を見出すことができると考えられる。

本発明は、以下の発明を含む。下記（1 ) 及び（2) は、大腸癌の腫瘍マ一カーに関する。下記（1 ) は、癌患者体内で、正常レベルに比べて発現量が多いタンパク質を含む大腸癌の腫瘍マーカーに関する。

( 1 )

6-phosphogluconolactonase Alphal acid glyco protein, Alpha-actinin 1、 Apurinic en donuclease、 Calumenin, Chaperonin_N Clathrin heavy chain 1、 Clathrin light polypeptid e A、 c-myc binding prateir Complement factor H、 Cysteine rich intestinal protein 1、 F-box protein 40、 Fibrinogen gamma、 Fk506 Binding Protein Fkbp Mutant R42kH87V COMPし EX WITH Immunosuppressant Fk506、 Guanine nucleotide binding protein (G protein), beta polypeptide 2-like 1、 Heat shock 70kD protein 9B、 Heparan sulfate prat p pyyv., ht,i chdu ein lai Enolasmiretcululmenalrotn 1cimein 28 Enoloee hse- cnNmdra-- yypyy p,,,dase Co, Anhr Fo roabnl reca 1 Cates srmrdutsehinstenec 1 ci rihroteinn D

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( 5 )

ADP-ribosylation factor-like 10C、 aldehyde dehydrogenase2、 Alpha-actinin 4、 Annexi n A2 isoform 2、 ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial FO complex, subunit d i soform a、 ATP-binding cassette transporter family A member 12、 Calnexin、 Carbonic Anhydrase Form B、 Carbonyl reductase , 1、 Cathepsin S、 cysteine rich protein 1、 Dyn ein light chain 1、 Endoplasmic-reticulum-lumenal protein 28、 Enoyl coenzyme hydrase, short chain1、 Eukaryotic translation elongation factor 2、 Filamin B、 gelsolin isoform a 、 Glucosamine-fructose-6-phosphate aminotransferase^ GTP-binding protein Rab3B、 H aptoglobiru Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2、 Hydroxymethylglutaryl-CoA sy nthase, mitochondrial Isocitrate dehydrogenase 1、 Lymphocyte cytosolic protein 1、 Ma jor vault protein^ MGC15429 prateiru MHC class I antigen^ Myosin, heavy polypeptid e 14、 Myozenin 3、 NADH Ubiquinone oxidoreductase subunit B13、 Normal mucosa o f esophagus specific 1、 Olfactomedin 4、 phosphoenolpyruvate calboxykinase 2、 Phos phoglycerate mutase 1、 Proline arginine-rich end leucine-rich repeat protein precursor 、 Protein kinase C and casein kinase substrate in neurons 2、 Protein P97、 Pyridoxin e 5-phosphate oxidase^ Raf kinase inhibitor protein _% Ras associated protein Rab5B、 Retinoblastoma binding protein 4、 succinate dehydrogenase complex,subunit A„flavopr otein、 Thioredoxin domain containing 5、 TNRC15 protein； Collagen, type XIV, alpha 1、及び Desmoglein 2からなる群から選ばれるタンパク質を大腸癌の腫瘍マーカ一として使用することによって、大腸癌の罹患を識別する方法。 ( 6)

前記タンパク質の、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人に由来する試料中におけるレベルを測定し、

得られた測定値レベルと、前記タン' ク質の正常レベルとを比較し、

得られた測定値レベルが、前記正常レベルよりも減少していることを、前記対象となる個人が大腸癌に罹患している可能性が高いことの指標の 1つとする、（ 6 )に記載の大腸癌の罹患を識別する方法。前記タンパク質の正常レベルとは、癌性試料の対照となる非癌性試料における前記タンパク質レベルであればよい。例えば、健康な個人に由来する正常試料におけるレベルや、癌疾病の罹患患者に由来する癌性でなしゝ正常試料におけるレベルなどが挙げられる。前記試料が血清又は尿であリ、前記タン/ ク質のレベルは、生体特異的親和性に基づく検査によって測定される、（6) に記載の大腸癌の罹患を識別する方法。本発明はまた、下記 ( 7 ) 及び（8 ) に記載の大腸癌の処理のための薬剤組成物に向けられる。大腸癌の処理とは、大腸癌細胞を死滅させること、及び大腸癌細胞の成長を抑制することを含む。 ( 7 )

大腸癌細胞に対して供給することによって、大腸癌細胞の死滅及び/又は大腸癌細胞成長の抑制を促進する反応を誘発するための薬剤組成物であって、（1 )に記載の腫瘍マーカーに免疫特異的に結合する少なくとも 1種の抗体を含む、薬剤組成物。 (8 )

免疫刺激量で、大腸癌細胞に対して供給することによって、免疫応答を促進するための薬剤組成物であって、（ 1 ) に記載の腫瘍マーカーを含む、薬剤組成物。上記 (7 ) 及び（8 ) の薬剤組成物は、大腸癌の処理に用いられる潜在的な治療剤として特定されうる。或いは、上記（7 ) 及び（8 ) の薬剤組成物は、大腸癌の処理に用いられる治療剤として用いられうる。

本発明によると、大腸癌に対してよリ特異性の高し、腫瘍マーカ一を提供することができる。また本発明によると、大腸癌についての罹患を識別することができる方法を提供することができる。

図面の簡単な説明

図 1は、本発明における大腸癌組織で発現が亢進するタンパク質 (6種蜀について、臨床検体（大腸癌患者の大腸粘上皮組織の癌部及び非癌部）でのウェスタンブロッテイング解析結果を示す。

図 2は、本発明における大腸癌繊で発現が宂進するタンパク質 (6種 ¾1)について、臨床検体（大腸癌患者の大腸粘 fl莫上皮組織の癌部及び非癌部）での免疫組織化学染色によるバリデ一ション解析結果を示す。

発明を実施するための形態 <腫瘍マーカー >

本発明は、大腸癌の腫瘍マーカ一を提供する。

本発明におレゝて腫瘍マーカーとして提供するタンパク質は、大腸癌患者から採取された大腸粘膜上皮組織の癌部、非癌部よリ抽出し、 2—二トロベンゼンスルフエニルク口リド (NBSC I) を用いた同位 ί材票識法（NBS法）と H PLCを用いた分離法とによるプロ亍オーム解析技術によって同定された。 NBS法は、 2種類の状態のタンパク質試料のうち一方を重しゝ試薬（2—二トロ [¹³C₆] ベンゼンスルフエニルクロリド）で修飾し、他方を軽い試薬（2—二トロ [¹²C₆] ベンゼンスルフエニルクロリド）で修飾し、得られた N B S修飾タンパク質試料双方を互いに混合し、トリプシン消化など当業者による適切な処理を行い、質量分析装置でぺプチド量の違いを測定することにより、 2種類の状態のタンパク質試料におけるタンパク質含有量の相対的な差を調べることができる方法である。

NBS法は、 Rapid Commun. Mass Spectrom., 2003, 17, 1642-1650及び国際公報第 2 O 04/002950号パンフレツ卜などに記載されている。従来から汎用されてきた二次元電気泳動法では、塩基性の等電点を示すタンパク質及び 100 KD a前後の大きな分子量を持つタンパク質の分離と検出とに難があった。本発明 0

11 で用いた N B S法では、組織に含まれるタンパク質をトリプシン消化することによって得られるぺプチド断片を直接的な解析対象とし、分離には H P L Cを用いるため、分子量と等電点とに関する制約はない。このこと力ヽら、従来得られてきた知見と異なるものが得られる可能性がある。これらのタンパク質は、当業者によって選択されるあらゆるタンパク質精製技術によつて単離及び精製することができる。例えば、イオン交換、ァフィ二ティ、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー、遠心分離、溶解度差、及び電気泳動などを含む技術を用いることができる。本発明が腫瘍マーカ一として提供するタンパク質のうち、癌患者体内で、正常レベルに比べて発現量力《多いタンパク質として、 6-phosphogluconolactonase、 Alphal acid glyco protein^ Alpha-actinin 1、 Apurinic endonuclease、 Calumeniru Chaperonin、 Clathrin he avy chain 1、 Clathrin light polypeptide A、 c-myc binding protein^ Complement factor H、 Cysteine rich intestinal protein 1、 F-box protein 40、 Fibrinogen gamma、 Fk506 Bi nding Protein Fkbp Mutant R42kH87V COMPLEX WITH Immunosuppressant Fk506、 Guanine nucleotide binding protein (G protein), beta polypeptide 2-like 1、 Heat shock 70kD protein 9B、 Heparan sulfate proteoglycan 2、 HLA-C、 hypothetical protein FLJ38 663、 L-plastin polypeptide^ MBC2、 Migration inhibitory factor-related protein 14 variant E、 Mitogen inducible gene、 Proteasome subunit p58、 RAB18, member RAS oncogen e family、 RAB22A、 Radixiru RAN, member RAS oncogene family、 Rhodanese;thiosul fate sulfurtransferase、 Ribosomal protein し 13、 Ribosomal protein L27a、 Ribosomal pr otein L4、 Ribosomal protein S18、 Ribosomal protein S29、 Ribosome binding protein 1、 S adenosylhomocysteine hydrolase* Solute carrier family 25 (mitochondrial carrier; adenine nucleotide translocator), member 5、 Solute carrier family 3(activator of dibasic and neutral amino acid transport), member 2、 Splicing factor 3B， subunit 3、 Splicing f actor, arginine/serine-rich 3 (SRp20) U5 snRNP-specific protein, 116 kD、 Ubiquitin iso peptidase T、 Vitronectin^ XTP3 transactivatied protein A、 Galectin 1、 Reticulocalbin 1 、 Vimentin、 ESP-2 (z xin)； Protein tyrosine phosphatase receptor type C、 Protein t yrosine phosphatase, receptor type, alpha _% orosomucoid 2、 Tumor rejection antigen 1 、 glycyl-tRNA synthetase: TLS proteir Ribonuclease RNase A family 3、及び heterag eneous nuclear ribonucleoprotein H2を提供する。上記タンパク質は、例えば、大腸癌患者数の約 5 0 <½以上で、癌部において、非癌部におけるよリも約 5 00/0以上、好ましくは 1 0 0 %以上大きし、発現量を示す傾向にある。さらに、上記タンノ《ク質のうち、 Protein tyrosine phosphatase receptor type C、 Prate in tyrosine phosphatase, receptor type, alpha、 orosomucoid 2、 Tumor rejection antigen 1、 glycyl-tRNA synthetase^ TLS proteiru Ribonuclease RNase A family 3、及び heter ogeneous nuclear ribonucleoprotein H2については、癌部において特異的に発現する（或いは、非癌部において検出限界以下である）。本発明が腫瘍マーカーとして提供するタンパク質のうち、大腸癌患者体内で、正常レべルに比べて発現量が少ないタンパク質として、 ADP-ribosylation factor-like 10C、 aldehyd e dehydragenase2、 Alpha-actinin 4、 Annexin A2 isoform 2、 ATP synthase, H+ transp orting, mitochondrial F0 complex, subunit d isoform a、 ATP-binding cassette transporte r family A member 12、 Calnexiru Carbonic Anhydrase Form B、 Carbonyl reductase 1 、 Cathepsin S、 cysteine rich protein 1、 Dynein light chain 1、 Endoplasmic-reticu!um-lu menal protein 28、 Enoyl coenzyme hydrase.short chainl、 Eukar otic translation elonga tion factor 2、 Filamin B、 gelsolin isoform a、 Glucosamine-fructose-6-phosphate aminot ransf erase GTP-binding protein Rab3B、 Haptoglobin、 Heterogeneous nuclear ribonucl eoprotein A2、 Hydroxymethylglutaryl-CoA synthase, mitochondrial, Isocitrate dehydroge nase 1、 Lymphocyte cytosolic protein 1、 ajor vault protein _N MGC15429 protein MH C class I antigen _s Myosin, heavy polypeptide 14、 Myozenin 3、 NADH Ubiquinone oxi doreductase subunit B13、 Normal mucosa of esophagus specific 1、 Olfadomedin 4、 p hosphoenolpyruvate calboxykinase 2、 Phosphoglycerate mutase 1、 Proline arginine-ric h end leucine-rich repeat protein precursor. Protein kinase C and casein kinase subst rate in neurons 2、 Protein P97、 Pyridoxine 5'-phosphate oxidase^ Raf kinase inhibitor protein^ Ras associated protein Rab5B、 Retinoblastoma binding protein 4、 succinate dehydrogenase complex, subunit A„flavoprotein、 Thioredoxin domain containing 5、 TNR C15 protein； Collagen, type XIV, alpha 1、及び Desmoglein 2を提供する。上記タンパク質は、例えば、大腸癌患者数の約 5 0%以上で、非癌部において、癌部におけるよりも約 5 0%以上、好ましくは 1 0 0%以上大きい発現量を示す傾向にある。さらに、上記タンパク質のうち、 Collagen, type XIV, alpha 1、及び Desmoglein 2については、非癌部において特異的に発現する（或いは、癌部において検出限界以下である）

<大腸癌の罹患を識別する方法 >

本発明はまた、上記タン/ ク質群から選ばれる少なくとも 1種のタン/《ク質を腫瘍マ一力一として使用することにより、大腸癌の罹患を識別する方法を提供する。本発明の方法においては、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人に由来する試料を用意し、当該試料中において、上記タンパク質群から選ばれる少なくとも 1種のタンパク質のレベルを測定する。得られた測定値レベルは、正常レベルと比較される。正常レベルとは、上記タンノ《ク質群から選ばれる少なくとも 1種のタンパク質の、癌性試料の対照となる試料におけるタンパク質レベルである。ここで、癌性試料の対照となる試料は、癌性でなしゝ試料であれば特に限定されない。例えば、健康な個人に由来する試料や、癌疾病の罹患患者に由来する正常試料などが挙げられる。本発明において、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人に由来する試料としては、特に限定されない。例えば、細胞や組織、体液、及び組織抽出物などが挙げられる。細胞や組織には、組織生検材料及び検死解剖材料などが含まれ、それらの組織切片および組織抽出物も含まれる。特に、試料としては、大腸由来試料の細胞、組織、及び組織抽出物が挙げられる。大腸由来試料としては、粘膜上皮、粘膜固有層、粘膜筋板、粘膜下層、固有筋層、及び漿膜などが挙げられる。体液としては、血液、尿、及び体分泌物などが含まれる。血液としては、全血、血漿、 ifii5青などが含まれる。組織抽出物とは、当業者に公知の方法によってホモジネート又は可溶化された組織をいう。これら例示された試料の中でも、血清及び/又は尿を試料とすることが好ましい。対象となる個人の細胞や組織、体液、及び組織抽出物を含む試料におしゝて測定された腫瘍マ一カーの測定値は、好ましくは同種の細胞や組織、体液、及び組織抽出物を含む、癌性でなし、試料におけるレベルと比較される。大腸癌の罹患の識別において、腫瘍マーカーは、以下の用途で用いられる。組織中の腫瘍マーカーは、例えば、組織切片を用いた癌診断や予後診断（例えば、免疫組織化学染色法、マスイメージングなどにより行う）、及び PET診断（例えば、腫瘍マーカーに対する放射性プローブの使用により行う）におけるターゲットとして、或いは、治療における薬物ターゲット（後述のく薬剤組成物〉の項目参照）となる。また、血中の腫瘍マーカーは、例えば、癌診断、予後診断において定量的に測定されるべき対象となる。上言己タンノ《ク質群力《、 6-phosphogluconolactonase、 Alphal acid glyco proteiru Alpha- actinin 1、 Apurinic endonuclease、 Calumeniru Chaperoning Clathrin heavy chain 1、 C lathrin light polypeptide A、 c-myc binding protein. Complement factor H、 Cysteine rich intestinal protein 1、 F-box protein 40、 Fibrinogen gamma、 Fk506 Binding Protein Fkb p Mutant R42kH87V COMPLEX WITH Immunosuppressant Fk506、 Guanine nucleotid e binding protein (G protein), beta polypeptide 2-like 1、 Heat shock 70kD protein 9B、 Heparan sulfate proteoglycan 2、 HLA-C、 hypothetical protein FLJ38663、 L-plastin poly peptides MBC2、 Migration inhibitory factor-related protein 14 variant E、 Mitogen induci ble gene、 Proteasome submit p58、 RAB18, member RAS oncogene family、 RAB22A 、 Radixir RAN, member RAS oncogene family^ Rhodanese;thiosulfate sulfurtransfera se、 Ribosomal protein し 13、 Ribosomal protein L27a、 Ribosomal protein L4、 Ribosom al protein S18、 Ribosomal protein S29、 Ribosome binding protein 1、 S adenosylhomo cysteine hydrolase_N Solute carrier family 25 (mitochondrial carrier; adenine nucleotide t ranslocator), member 5、 Solute carrier family 3(activator of dibasic and neutral amino acid transport), member 2、 Splicing factor 3B， subunit 3、 Splicing factor, arginine/serin e-rich 3 (SRp20)、 U5 snRNP-specific protein, 116 kD、 Ubiquitin isopeptidase T、 Vrtron ectir XTP3 transactivatied protein A、 Galectin 1、 Reticulocalbin 1、 imentiru ESP-2 (zyxin)； Protein tyrosine phosphatase receptor type C、 Protein tyrosine phosphatase, receptor type, alpha、 orosomucoid 2、 Tumor rejection antigen 1、 glycyl-tRNA synthet ase、 TLS proteiru Ribonuclease RNase A family 3、及び heterogeneous nuclear ribonu cleoprotein H2からなる群である場合、得られた測定値レベルが、正常レベルよりも上昇していることを、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人が、大腸癌に罹患している可能性がいことの指標の 1つとすることができる。測定値レベルにおける上昇の度合いとしては、測定値レベルが、正常レベルの 5 0 %以上、好ましくは 1 0 0 %以上となる程度を目安にすると良い。さらに、上言己タンパク質のうち、 Protein tyrosine phosphatase receptor type C、 Prate in tyrosine phosphatase, receptor type, alpha、 orosomucoid 2、 Tumor rejection antigen 1、 glycyl-tRNA synthetase^ TLS protein Ribonuclease RNase A family 3、及び heter ogeneous nuclear ribonucleoprotein H2Iこっし、て ίま、大腸癌組織 ίこおし、て特異 0勺なタンノ"？ク質であるため、その存在が確認されれば、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人が、大腸癌に罹患している可能性が高いことの指標の 1つとすることができる。上記タンパク質群が、 ADP-ribosylation factor-like 10C、 aldehyde dehydrogenase2、 Al pha-actinin 4、 Annexin A2 isoform 2、 ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial FO complex, subunit d isoform a、 ATP-binding cassette transporter family A member 12 、 Calnexiris Carbonic Anhydrase Form B、 Carbonyl reductase 1、 Cathepsin S、 cystei ne rich protein 1、 Dynein light chain 1、 Endoplasmic-reticulum-lumenal protein 28、 En oyl coenzyme hydrase.short chain1、 Eukaryotic translation elongation factor 2、 Filamin B、 gelsolin isoform a、 Glucosamine-fructose-6-phosphate aminotransferase^ GTP-bindi ng protein Rab3B、 Haptoglobin^ Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2、 Hydrox ymethylglutaryl-CoA synthase, mitochondrials Isocitrate dehydrogenase 1、 Lymphocyte cytosolic protein 1、 Major vault proteiru MGC15429 protein^ MHC class I antigen、 My osin, heavy polypeptide 14、 Myozenin 3、 NADH Ubiquinone oxidoreductase subunit B 13、 Normal mucosa of esophagus specific 1、 Olfactomedin 4、 phosphoenolpyruvate c alboxykinase 2、 Phosphoglycerate mutase 1、 Proline arginine-rich end leucine-rich rep eat protein precursor^ Protein kinase C and casein kinase substrate in neurons 2、 Pr otein P97、 Pyridoxine 5-phosphate oxidase^ Raf kinase inhibitor proteiru Ras associat ed protein Rab5B、 Retinoblastoma binding protein 4、 succinate dehydrogenase compl ex.subunit A,,flavoprotein、 Thioredoxin domain containing 5、 TNRC15 protein； Colla gen, type XIV， alpha 1、及ぴ Desmoglein 2からなる群である場合、得られた測定値レべルが、正常レベルよりも減少している場合、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人が、大腸癌に罹患している可能性が^いことの指標の 1つとすることができる。測定値レべルにおける減少の度合いとしては、正常レベルが測定値レベルの 5 00/₀以上、好ましくは 1 0 0 %以上となる程度を目安にすると良い。さらに、上記タンパク質のうち、 Collagen, type XIV, alpha 1、及び Desmoglein 2については、正常組織（非癌組織）において特異的なタンパク質であるため、その不在が確認、されれば、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人が、大腸癌に罹患している可能性が高いことの指標の 1つとすることができる。上記タンパク質のレベルは、好ましくは、生体特異的親和性に基づく検査によって測定される。生体特異的親和性に基づく検査は当業者に良く知られた方法であり、特に限定されないが、ィムノアツセィが好ましい。具体的には、ウェスタンプロット、ラジオィ厶ノアツセィ、 E L I S A、サンドイッチィムノアツセィ、免疫沈降法、沈降反応、ゲル内拡散沈降反応、免疫拡散法、凝集測定、補体結合分析検定、免疫放射定量法、蛍光ィムノアッセィ、プロテイン Aィ厶ノアッセィなどの、競合及び非競合アツセィ系を含むィ厶ノアッセィが含まれる。ィムノアッセィにおいては、個体の試料中の腫瘍マーカーに結合する抗体の存在を検出する。具体的には、アツセィ培地中において、測定すべき腫瘍マーカータンパク質及び当該タンパク質の抗体からなる免疫複合体を形成しうる条件のもと、試料を当該抗体に接触させることによって行われる。より具体的なィムノアッセィプロトコルは、当業者であれば容易に選択することができる。上記タンパク質のレベルは、上記のように、生体特異的親和性に基づく検査によって測定されること力《好ましいが、その他のタンパク質定量法によって測定することもできる。例えば、既に述べた N B S法は、定量性に優れた方法である。この場合、上記タンパク質を既知レベルで調製した試料や、正常試料などの適当な試料を対照試料として、対象となる個人の試料との間における前記タンパク質の存在量の差を調べることによって、測定を行うことができる。本発明の方法は、本発明の腫瘍マーカーを単独で測定してもよいし、他のいかなる腫瘍マーカーと組み合わせて測定してもよい。従って、本発明の方法は、本発明の腫瘍マーカ —のレベルと同様に他の腫瘍マーカ一のレベルを測定することを含んでいてよい。本発明の腫瘍マ一カーは、大腸癌の検出、診断、モニタリング、ステージング及び予後判定を目的として用いられるとよい。好ましくは、腫瘍の動態の把握に用いられるとよい o例えば、腫瘍に対して化学療法や放射線療法が行われている場合、その治療がどれくらいの効果を奏しているかを判断することに用いられるとよい。また、腫瘍マーカー値がい腫瘍に対して切除手術が行われた場合、術後の経過観察のために用いられるとよい。

<薬剤組成物 >

本発明はまた、本発明の B重瘍マーカーのうち、大腸癌患者体内で、正常レベルに比べて発現量が多いタンパク質を含む腫瘍マーカ一を用いることによって大腸癌を処理するための薬剤組成物に向けられる。薬剤組成物の一形態は、癌細胞に対して供給することによって、癌細胞の死滅及び/又は癌細胞成長の抑制を促進する反応を誘発するための薬剤組成物であって、本発明の腫瘍マ一力一に免疫特異的に結合する少なくとも 1種の抗体を含む、薬剤組成物である。抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及び、分子生物学的技術により調製した抗 7 061690

19 体を含む。ここで抗体とは、広く免疫特異的に結合する物質であればよく、抗体フラグメントゃ抗体融合タンパク質も用いられてよい。しゝずれの場合も、抗体の調製は、当業者に良く知られた方法によつて行われる。薬剤組成物の他の一形態は、免疫刺激量で、癌細胞に対して供給することによって、免疫応答を促進するための薬剤組成物であって、本発明の腫瘍マーカーを含む、薬剤組成物である。ここで、免疫刺激量とは、癌の処理のために所望する免疫反応を惹起することが可能な抗原の量をいい、当業者によって良く知られた方法で決定されるものである。この形態によると、しゝゎゆる癌ワクチン療法として知られている、当業者に良〈知られた方法を用いて癌の処理が行われる。上記薬剤組成物は、上記抗体或いは腫瘍マーカーを有効成分として含み、薬剤として許容される希釈剤、担体、賦形剤などをさらに含んでよい。上記薬剤組成物は、大腸癌の処理に用いられる潜在的な治療剤として特定されうる。或いは、上記薬剤組成物は、大腸癌の処理に用いられる治療剤として適用されうる。

実施例

以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。

[実施例 1 ： N B S法によるタンパク質発現解析]

大腸癌患者より正常組織（すなわち大腸粘膜上皮組織の非癌部）および癌組織（すなわち大腸粘膜上皮組織の癌部）を採取した。それぞれの組織を可溶化バッファー A(50 mM Tris-HCI(pH8.0),100 mM NaCI, 10 mM EDTA, プロテアーゼインヒビター (ァプロチニン, PMSF, ロイペプシン)水溶液)中でホモジナイズし、 100000 XG (4°C, 1時間)で i¾S心した後、その上澄み液を可溶性画分として得た。次に、遠心で得られた沈殿に可溶化バッファ -B(9Mゥレア、 2w/v% CHAPS、 10 mM EDTA、プロテア一ゼインヒビタ一(ァプロチニン， PMSF, ロイペプシン)水溶液))中で再度ホモジナイズし、 100000 xG (4°C, 1時間)で超遠心した後、その上澄み液を不溶性画分として得た。これら可溶性、および不溶性画分の抽出蛋白質をそれぞれ NBS試薬によリ処理を行い、蛋白質の発現解析を行った。 NBS試薬処理に関しては、 ¹³C NBS Stable Isotope Labelin g Kit-N (島津製作所)の推奨プロ卜コルに従い、安定同位体標識を行った。具体的には、正常組織から抽出された蛋白質を¹² CNBS(Light NBS)でラベル化し、癌組織から抽出された蛋白質を ¹³CNBS(Heavy NBS)でラベル化した。得られたそれぞれのラベル化蛋白質を混合し、キッ卜の推奨プロ卜コルに従い、脱塩■還元■アルキル化、およびトリプシン消化を行った。次に、同キットのプロ卜コルに従い、ラベル化ペプチドを濃縮した。濃縮したラベル化べプチドに関しては、引き続いて C18カラムを用いた〃 HPLCによる分離を行い、 MSプレートに塗布した。このようにして準備したサンプルに関して質量分析装置 Axim a-CFR plus (島津製作所製)を用いて測定し、各蛋白質の相対定量解析を行った。ペアピークを示したべプチド断片についてタンデム質量分析装置 Axima-QIT (島津製作所製）によって MS/MS解析を行い、タンパク質の同定を行った。このような手法により、最終的に臨床検体 2 4症例に対して同様の解析を行った。解析の結果、全検体数の 5 0 %以上の検体において、癌繊におけるタンパク質の発現量が増加或いは減少しているタンパク質を同定した。増加或いは減少の度合いとしては、次の量を基準にした。すなわち、癌部において、非癌部におけるより存在量が増加したペプチドについては、癌部における存在量が、非癌部における存在量よりも 5 0%以上大きいもの (すなわち癌部における存在量が、非癌部における存在量の 1 5 0%以上のもの）を選出した。また、癌部において、非癌部におけるより存在量が減少したペプチドについては、非癌部における存在量が、癌部における存在量よりも 5 0«½以上大きいもの（癌部における存在量が、非癌部における存在量の 6 6 %よリ少ないもの）を選出した。その結果、下記表 1〜表 8に示すタンパク質を同定した。表中、「Meanj、「SEMj 、及び「SDJ は、それぞれ、各臨床検体において測定した相対比(％) (すなわち非癌部における蛋白質の発現量を 100(%)とした時の癌部の発現量 (比))の平均値、標準誤差、及び標準偏差値を示す。表 1〜表 3は、非癌部におけるよりも、癌部におけるタンパク質の発現量が増加するタンパク質（Up-regulated proteins)のリストである。例えば、 2 4検体中 1 6検体において発現量が上昇した 6-phosphogluconolactonase (発現量平均値：非癌部に対して約 2 · 1 6倍）などのタンパク質を同定した。表 4は、癌部において特異的に検出された（All or None) タンパク質のリストである。表 1〜表 4における「150%≤J は、癌部における存在量が'、非癌部における存在量の 1 5 0%以上であった検体数を示す。

表 1

N3

表 2

表 3

I>

表 4

表 5〜表 7は、非癌部におけるよりも、癌部におけるタンパク質の発現量が減少するタンパク質（Down-regulated proteins) のリストである。例えば、 2 4検体中 1 5検体において発現量力《減少する Carbonic Anhydrase Form B (発現量平均値：非癌部に対して 0. 1 1倍）などのタンパク質を同定した。表 8は、非癌部において特異的に検出された（All or None) タンパク質のリス卜である。表 5〜表 8における Γ<66%」は、癌部における存在量が、非癌部における存在量の 6 60/6よリ少なかった検体数を示す。

表 5

表 6

00

表 7

CD

表 8

GO O

下記実施例 2及び 3においては、上記 N B S法によって、非癌部におけるよリ癌部において増加を示したタンパク質のうち、 ZYX (Zyxin)、 RAN (RAN, member RAS oncogene f ami I y )、 RCN1 (Ret i GU I oca I b i n)、 AHCY (S-adenosy I homocyste i ne hydro I ase)、 SGALS1 (Ga I ect i nl )、及び VIM (Vimentin) の 6種のタンパク質について、生体組織のウェスタンブロッティング解析と生体組織の免疫組織化学染色によるバリデーション解析とを行った。

[実施例 2：ゥエスタンブロッ亍ィング解析]

大腸癌患者 (5症例)より採取した正常組織（すなわち大腸粘膜上皮組織の非癌部）および癌組織（すなわち大腸粘膜上皮組織の癌部）を用意した。それぞれの組織を可溶化バッファー八(50 11 1> | 3-1101 ( 118. 0)，100 |^ 01， 10 mM EDTA, プロテアーゼインヒビター (ァプロチニン， PMSF, ロイペプシン)水溶液)中でホモジナイズし、 100000 X G (4°C， 1時間）で超遠心した後、その上澄み液を可溶性画分として得た。次に、遠心で得られた沈殿に可溶化バッファー B (9Mゥレア、 2 % CHAPS, 10 mM EDTA. プロテア一ゼインヒビター (アブ口チニン， P SF, ロイペプシン)水溶液)）中で再度ホモジナイズし、 100000 x 6 (4°C， 1時間）で超遠心した後、その上澄み液を不溶性画分として得た。

これら蛋白質抽出溶液のうち、可溶性画分を pati ent 1〜5の番号を付し、それぞれを ZYX、 RAN、 RGNU 及び AHCYの解析に用い、不溶性画分を pati ent 6~10の番号を付し、それぞれ SGALS1及び VIMの解析に用いた。各抽出液は、 12. 5 %ァクリルアミド（SGALS1の解析に用いるサンプルのみ 15 %ァクリルアミド） SDS-PAGEゲルにより分離し、その後、ニトロセルロース膜への転写を行った。転写されたサンプルに対して、各蛋白質に対する一次抗体 (後 5©をロードし、常温 2時間インキュベーションした。反応後、ニトロセルロース膜を PBS (Phosphate Buffered Sal ine) ノッファーにより洗浄後、二次抗体 (後溶液を添加し、 1 時間反応させた。抗体と反応した後、 ECL発色溶液を添加することによって各バンドを検出させた。なお、本実施例で用いた抗体は以下の通リである。

—次抗体：

マウス抗ヒト ZYXポリクローナル抗体（抗体希釈率 1/500)

マウス抗ヒト RANモノクローナル抗体（抗体希釈率 1/2000)

マウス抗ヒト AHGYポリクローナル抗体（抗体希釈率 1 /1000)

ゥサギ抗ヒト RCN1モノクローナル抗体（抗体希釈率 1/1000)

ゥサギ抗ヒト SGAL1ポリクローナル抗体（抗体希釈率 1/1000)

ゥサギ抗ヒ卜 VIMポリクロ一ナル抗体（抗体希釈率 1/1000)

二次抗体：

西洋わさびペルォキシダーゼコンジユゲー卜-匕ッジ抗マウス IgG抗体（抗体希釈率 1/400)

西洋わさびペルォキシダーゼコンジュゲート-口パ抗ゥサギ IgG抗体（抗体希釈率 1/400) 図 1は、上記のウェスタンプロッティングによって得られた電気泳動図を示す。図 1中、 Nは非癌部由来識、 Tは癌部由来試料であることを示す。

図 1が示すように、 6種類の各蛋白質ともに、 5症例全ての癌部において発現が亢進していることが確認された。すなわち、上記実施例 1に示す N B S法による定量結果において、非癌部におけるよリ癌部において発現; it進を示したタンパク質は、ゥ Iスタンプロッテイングによる定量結果においても、実際にそのような発現亢進を示していた。このように、 N B S法による定量結果と、ウェスタンブロッテイングによる定量結果とは、良い相関を示している。従って、これらの分子が大腸癌に関連するタンパク質であることが確かに確認された。

このことから、 N B S法による定量結果において癌部より非癌部において発現増加を示したタンパク質、すなわち非癌部より癌部において発現抑制を示したタンパク質も同樹こ、ウェスタンブロッテイングによる定量結果において、そのような発現傾向が示されることが容易に推定される。

[実施例 3 _:免疫組織化学染色法による解析]

大腸癌患者 (10症例)より採取した、正常組織（すなわち大腸粘膜上皮組織の非癌部）および癌組織（すなわち大腸粘膜上皮組織の癌部）それぞれのパラフィン包埋切片 (4 μιη)を用意した。抗体としては、上記ウェスタンブロッテイング解析に用いたものと同様のものを用いた。

パラフィン切片と一次抗体とを一時間室温にて反応させ、 PBSバッファ一で洗浄後、さらにストレブ卜アビジン-ビォチンペルォキシダーゼコンプレックスと反応させた。 ¾的に、組織切片と発色溶液（3， 3' -ジァミノベンザィダインテトラヒドロクロリド、 0. 01%過酸化ペルォキシダ一ゼ、 0. 05 Μ卜リス水溶液 (ρΗ 7· 6) )とを 3分間反応させることにより、組織染色を行った。その結果を、図 2に示す。

図 2において、（Α)は、 ΖΥΧ、（Β)は RA 、（G)は RGN1、（D)は AHCY、（E)は SGALS1、及び (F) は VIMについての免疫組織化学染色結果を示し、 Tは癌部における染色結果、 Nは非癌部における染色結果を示す。

図 2が示すように、全症例において、 6種類の蛋白質の全てが、癌部における癌細胞 (もしくは、癌細胞を取リ巻く間質細胞)での蛋白質の発現が亢進していることを確認した。すなわち、上記実施例 1に示す N B S法による定量結果において、非癌部におけるより癌部において発現亢進を示したタンパク質は、免疫組織化学染色法による解析結果においても、実際にそのような発現亢進を示していた。このように、 N B S法による定量結果と、免疫組織化学染色法による解析結果とは、良い相関を示している。従って、これらの分子が大腸癌に関連するタンパク質であることが確かに確認された。

このことから、 N B S法による定量結果において癌部より非癌部において発現増加を示したタンパク質、すなわち非癌部より癌部において発現抑制を示したタンパク質も同様に、免疫組織化学染色法による解析結果において、そのような発現傾向が示されることが容易に推定される。

以上のことから、請求の範囲第 1項に記載のタンパク質は、非癌組織におけるよリも大腸癌組織においてより多く発現し、請求の範囲第 3項に記載のタンパク質は、非癌組織におけるよりも大腸癌組織におし、て少なく発現するものである。そして、これらのタンパク質は、大腸癌の腫瘍マーカ一として使用できることが明らかである。これらのタンパク質を大腸癌の腫瘍マーカーとし、大腸癌の罹患が不明な検体について、大腸癌の罹患の識別を行う際は、上記実施例 1 ~ 3に記載の手法を用いることができる。

上記実施例においては、本発明の範囲における具体的な形態について示したが、本発明は、これらに限定されることなく他のいろいろな形態で実施することができる。このため、上記実施例はあらゆる点で単なる例示に過ぎず、 P艮定的に解釈してはならない。さらに、請求の範囲の均等範囲に属する変更は、すべて本発明の範囲内である。

Claims

請求の範囲

1 . 6-phosphogluconolactonase、 Alphal acid glyco protein Alpha-actinin 1、 Apurinic endonuclease、 Calumenin、 Chaperonir Clathrin heavy chain 1 Clathrin light polypeptide A、 c-myc binding protein^ Complement factor H、 Cysteine rich intestinal protein 1 F-box protein 40、 Fibrinogen gamma, Fk506 Binding Protein Fkbp Mutant R42kH87V COMPLEX WITH Immunosuppressant Fk506、 Guanine nucleotide binding protein (G protein), beta polypeptide 2-like 1、 Heat shock 70kD protein 9B、 Heparan sulfate proteoglycan 2、 HLA-C、 hypothetical protein FLJ38663、 L-plastin polypeptide、 MBC2、 Migration inhibitory factor-related protein 14 variant E、 Mitogen inducible gene、 Proteasome subunit p58、 RAB18, member RAS oncogene family ^ RAB22A、 Radixiru RAN, member RAS oncogene family, Rhodanese;thiosulfate sulfurtransferase、 Ribosomal protein L13、 Ribosomal protein L27a、 Ribosomal protein L4、 Ribosomal protein S18、 Ribosomal protein S29、 Ribosome binding protein 1、 S adenosylhomocysteine hydrolase、 Solute carrier family 25 (mitochondrial carrier; adenine nucleotide translocator), member 5、 Solute carrier family 3(activator of dibasic and neutral amino acid transport), member 2、 Splicing factor 3B， subunit 3、 Splicing factor, arginine/serine-rich 3 (SRp20)、U5 snRNP-specific protein, 116 kD、 Ubiquitin isopeptidase T、 Vitronectin、 XTP3 transactivatied protein A、 Galectin 1、 Reticulocalbin 1、 Vimentin、 ESP-2 (zyxin) ; Protein tyrosine phosphatase receptor type C、 Protein tyrosine phosphatase, receptor type, alpha、 orosomucoid 2、 Tumor rejection antigen 1、 glycyl-tRNA synthetase、 TLS protein、 Ribonuclease RNase A family 3、及び heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2力、らなる群から選ばれる少なくとも 1種のタンパク質を含む、大腸癌マーカー。

2. ADP-ribosylation factor-like 10C、 aldehyde dehydrogenase2、 Alpha-actinin 4 、 Annexin A2 isoform 2、 ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial F0 complex, s ubunit d isoform a、 ATP-binding cassette transporter family A member 12、 Calnexir Carbonic Anhydrase Form B、 Carbonyl reductase 1、 Cathepsin S、 cysteine rich protei n 1、 Dynein light chain 1、 Endoplasmic-reticulum-lumenal protein 28、 Enoyl coenzyme hydrase'short chain"!、 Eukaryotic translation elongation factor 2、 Filamin B、 gelsolin i soform a、 Glucosamine-fructose-6-phosphate aminotransferase、 GTP-binding protein R ab3B、 Haptoglobin^ Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2、 Hydroxymethylglutar yl-CoA synthase, mitochondriak Isocitrate dehydrogenase 1、 Lymphocyte cytosolic prat ein 1、 Major vault protein _N MGC 15429 protein _s MHC class I antigen _s Myosin, heavy polypeptide 14、 Myozenin 3、 NADH Ubiquinone oxidoreductase subunit B13、 Normal mucosa of esophagus specific 1、 Olfactomedin 4、 phosphoenolpyruvate calboxykinase 2、 Phosphoglycerate mutase 1、 Proline arginine-rich end leucine-rich repeat protein p recursor、 Protein kinase C and casein kinase substrate in neurons 2、 Protein P97、 P yridoxine 5'-phosphate oxidase^ Raf kinase inhibitor protein^ Ras associated protein R ab5B、 Retinoblastoma binding protein 4、 succinate dehydrogenase complex.subunit A, ,flavoprotein Thioredoxin domain containing 5、 TNRC15 protein； Collagen, type XI V, alpha 1、及び Desmoglein 2からなる群から選ばれるタンパク質を含む大腸癌マーカ一

3. 6-phosphogluconolactonase、 Alphal acid glyco proteir Alpha-actinin 1、 Ap urinic endonuclease、 Calumenin、 Chaperanir Clathrin heavy chain 1、 Clathrin light p olypeptide A、 c-myc binding proteiru Complement factor H、 Cysteine rich intestinal pr otein 1、 F-box protein 40、 Fibrinogen gamma、 Fk506 Binding Protein Fkbp Mutant R 42kH87V COMPLEX WITH Immunosuppressant Fk506、 Guanine nucleotide binding pr otein (G protein), beta polypeptide 2-like 1、 Heat shock 70kD protein 9B、 Heparan su yyyps, ADPュaao 2.os frlike Ioc aldehde dea_lationhdnse2 Alhaainro ein 4---

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qppP)p p,p,,eccotein 116 k Ubiuitin isoetidase T vitronectin XTF 120 U5 snF?NPsitir 10-- pg (pg),,，,,cb 3B subunit 3 slicir- faclor arinine/seiineュ ch 3s ot memer 2 slicin farp_- yp( )，,a 3aclator of dibasc and neutral amino acid transebe 5 Solute carrier fmilivi- mmr

y ( y;.utaeail 25mitochondrial canier adenine nucleotide translocatordolase Sole crrir fmr

-yy p,,,toooarotein S29¾ibosomelDindinDroein 1 S adenoslhomcsteine h S18 Ribsml-_..

p - p p,,ot3 ribosomalrotein RiosomalDrotein L4 RiCTOSOmalrotein 5 omalrein 111--_

gy;,,, /S ocene famil Rhodanesethiosulfate sulfuiasferase Rluos RAN memluer RAnolrni

gy,,,bnt RAB18 memCTer RAS oncoene famil R22A Radnroteasome suuiABixi P- y pgg,tootorelatedroten≤ variattoeubeC2iation inhibir farin m Min indcile en B Mr_- gyyp _pypp p p,,S,otattcan 2 HLAC hheticalDrotein FLJ38663 Llstinoletide M Ifaeroeol_-—- 、 Annexin A2 isoform 2、 ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial F0 complex, s ubunit d isoform a、 ATP-binding cassette transporter family A member 12、 Calnexin、 Carbonic Anhydrase Form B、 Carbonyl reductase 1、 Cathepsin S、 cysteine rich protei n 1、 Dynein light chain 1、 Endoplasmic-reticulum-Iumenal protein 28、 Enoyl coenzyme hydrase,short chain 1 _s Eukaryotic translation elongation factor 2、 Filamin B、 gelsolin i soform a、 Glucosamine-fructose-6-phosphate aminotransferase^ GTP-binding protein R ab3B、 Haptoglobin^ Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2、 Hydroxymethylglutar yl-CoA synthase, mitochondriaU Isocitrate dehydrogenase 1、 Lymphocyte cytosolic prat ein 1、 Major vault protein^ MGC15429 protein^ MHC class I antigen、 Myosin, heavy polypeptide 14、 Myozenin 3、 NADH Ubiquinone oxidoreductase subunit B13、 Normal mucosa of esophagus specific 1、 Olfactomedin 4、 phosphoenolpyruvate calboxykinase 2、 Phosphoglycerate mutase 1、 Proline arginine-rich end leucine-rich repeat protein p recursor、 Protein kinase C and casein kinase substrate in neurons 2、 Protein P97、 P yridoxine 5-phosphate oxidase^ Raf kinase inhibitor protein、 Ras associated protein R ab5B、 Retinoblastoma binding protein 4、 succinate dehydrogenase complex, subunit A, ，flavoprotein、 Thioredoxin domain containing 5、 TNRC15 protein； Collagen, type XI V， alpha 1、及び Desmoglein 2からなる群から選ばれるタンパク質を大腸癌マーカーとして使用することによって、大腸癌の罹患を識別する方法。 6. 前記タンパク質の、大腸癌の罹患を識別すべき対象となる個人に由来する試料中におけるレベルを測定し、

得られた測定値レベルと、前記タンパク質の正常レベルとを比較し、

得られた測定値レベルが、前記正常レベルよリも減少していることを、前記対象となる個人が大腸癌に罹患している可能性が高いことの指標の 1つとする、請求の範囲第 5項に記載の大腸癌の罹患を識別する方法。