WO2007135278A2 - Compositions comprenant de la levure probiotique vivante ou revivifiable et des parois de levures - Google Patents

Compositions comprenant de la levure probiotique vivante ou revivifiable et des parois de levures Download PDF

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Eric Auclair
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Lesaffre Et Compagnie
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    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Definitions

  • the subject of the present invention is a probiotic or premix composition
  • a probiotic or premix composition comprising living or revivifiable probiotic microorganisms and yeast walls and / or deactivated yeasts, the presence of deactivated yeast and / or yeast walls making it possible, in particular, for the stabilization of microorganisms.
  • This composition or premix can be used for the preparation of granules which will be intended for animal feed.
  • probiotics refers to living microorganisms, which when ingested in sufficient quantity exert a positive effect on the host organism by improving the properties of its intestinal flora beyond the traditional nutritional effects. They are an alternative to the use of antibiotics in animal feed. It is most often bacteria or yeast present either in food or in food supplements.
  • probiotics There are four main types of probiotics: lactic ferments (lactobacilli and cockles), bifidobacteria of human or animal origin, - various yeasts including Saccharomyces yeasts, other sporulating bacteria, including Bacillus subtillis and cereus.
  • Micro-organisms killed by heat do not meet the definition of probiotics, although some therapeutic effects may have been attributed to them.
  • probiotics also refers to foods containing such microorganisms.
  • Probiotics are increasingly used in both food and feed, especially as a substitute for antibiotics, particularly given a return to a healthier, more natural and more environmentally friendly diet.
  • these microorganisms are generally added to a granulated feed via a premix also containing vitamins, trace elements and amino acids.
  • probiotic microorganisms into the granules is not easy, however, because probiotic microorganisms are most often destroyed during the granulation process.
  • This step of the manufacture of the granules is carried out in the presence of steam at temperatures between 60 ° C. and 100 ° C. and at pressures ranging from 0.5 to 3.5 bars; temperature and humidity conditions in which microorganisms are usually destroyed.
  • probiotic microorganisms may exhibit improved stability in premixes over time by mixing with yeast walls and / or deactivated yeasts in place of other premix carriers. traditionally used such as wheat flour where calcium carbonate. This stability improved over time thus making them more resistant to granulation.
  • yeast walls in the field of pharmacology and agri-food has already been described. These walls are used as an excipient in the manufacture of pharmaceutical tablets, especially as a binder with disintegrating properties (Ozeki et al., AAPS PharmSciTech, 2003; 4 (3): E41) or as a component of a coating product ( EP 1 159 882, Yuasa et al Int J Pharm, 2002, Apr 26, 237 (1-2): 15-22). To the knowledge of the Applicant Company, however, the possibility of using them to improve the stability of living or revivable micro-organisms has not yet been considered.
  • the subject of the invention is therefore a probiotic or premix composition
  • a probiotic or premix composition comprising: from 0.5% to 75% of live or revivable probiotic microorganisms (a) chosen from the group comprising probiotic yeasts, probiotic bacteria of the type selected lactic ferments among lactobacilli, and bifidobacteria with the exception of bacilli, and mixtures thereof,
  • a nutritional supplement notably comprising vitamins, and / or trace elements, and / or amino acids, and / or other additives intended for animal feed, the percentages being expressed by dry weight relative to the total weight of the composition.
  • the term "revivable” or “viable” microorganisms means microorganisms which, in the presence of a nutritive medium, recover their capacity to divide and form colonies.
  • probiotic yeast may be mentioned probiotic yeasts chosen from the group comprising yeasts of the genus Saccharomyces, preferably from the species Saccharomyces cerevisiae, or from the genus Kluyveromyces such as Kluyveromyces marxianus and their mixtures.
  • strains of Saccharomyces cerevisiae are the strain Saccharomyces cerevisiae Sc47 deposited with NCYC under the number 47, the Saccharomyces cerevisiae strain deposited with the Pasteur collection (CNCM) under the number 1-1077, the strain Saccharomyces cerevisiae deposited with the Pasteur collection (CNCM) under the number 1-1079, the Saccharomyces cerevisiae strain deposited with the MUCL collection under the number 39 885, the strain Saccharomyces cerevisiae deposited with the CBS collection under the number 39 493.94, the strain Kluyveromyces marxianus deposited from the MUCL collection under number 39434, and their mixtures.
  • composition according to the present invention comprises yeasts corresponding to the strain Saccaharomyces cerevisiae Sc47 deposited with NCYC under the number 47.
  • said probiotic or premix composition comprises: from 0.5 to 75%, preferably 5 to 30%, of living or revivable yeasts,
  • composition is particularly suitable for feeding monogastric animals.
  • the yeast walls for their part, can be chosen from all kinds of food grade yeasts, for example, Saccaharomyces cerevisiae. Specifically, the yeast comes from yeast walls marketed under the brands PRONARDY ®, SAFMANNAN ®, or BIOMOS ® by Prodessa companies respectively Biospringer and Alltech.
  • the yeast walls may be obtained according to the processes known to those skilled in the art, more particularly the yeast cell autolysis followed by the separation by physical means of the insoluble part, containing the walls, of the soluble part. .
  • the deactivated yeasts are considered to be yeasts devoid of any ferment power. Any type of deactivated yeast can be used as long as it is food grade, for example Saccharomyces. They are obtained according to the methods known to those skilled in the art, and more particularly by heat treatments.
  • deactivated yeasts have a solids content of greater than 95%.
  • the origin of the yeasts may be the same or different.
  • the probiotic composition of the invention has a very satisfactory homogeneity.
  • the presence of the yeast walls and / or deactivated yeasts in the composition or premix according to the invention makes it possible to stabilize the probiotic microorganisms by reducing the water content of the microorganisms probiotics and stabilization of this water content over time.
  • This water content increases, however, strongly when using a conventional premix carrier as described in the prior art and comprising in particular a wheat flour or a calcium carbonate.
  • the use of carbonate can cause problems of abrasiveness and segregation.
  • the variation in the dry matter content of the probiotic microorganisms, V A , measured according to the following Test A is positive.
  • the dry matter content of the probiotic microorganisms is measured by the ISO 1741 method. MS 0 value.
  • the variation in the solids content of the probiotic microorganisms V is greater than 0.5%, preferably greater than 1%.
  • the composition or premix according to the invention further comprises a nutritional supplement comprising in particular vitamins and / or trace elements and / or amino acids and / or other additives for animal feed.
  • the vitamins included in the composition are chosen from the group comprising: vitamin A, vitamin D3, vitamin E, vitamins B1, B2, B5, B6, B12, C, PP, biotin, folic acid, choline, vitamin K3, pantothenic acid, and their mixtures.
  • the trace elements used in the composition may be food grade mineral salts. They are selected from the group consisting of: copper, zinc, iron, manganese, iodine, selenium, and mixtures thereof.
  • the amino acids used in the composition are chosen from the group comprising: methionine, lysine, L-threonine, tryptophan, and mixtures thereof.
  • the probiotic or premix composition described above can be incorporated directly into animal feed.
  • the composition according to the invention is incorporated into the feed at a rate of 5.10 7 to 5.10 10 CFU (Colony Forming Unit) of probiotic microorganisms per kg of complete feed, preferably from 5.10 8 to 1.10 10 CFU per kg of complete feed.
  • the probiotic microorganism of the composition according to the invention is the yeast Saccharomyces cerevisiae Sc47 marketed by the company Lesaffre under the brand BIOSAF ®
  • the composition according to the invention will be incorporated into the animal feed so as to have 2.5 to 8.10 9 CFU of Saccharomyces cerevisiae Sc47 per kg of complete feed.
  • the probiotic composition described above can also be used in probiotic granules intended in particular for animal feed.
  • the invention relates to probiotic granules which comprise: the probiotic or premix composition described above, and
  • the granules of the invention consist of one per thousand by weight of probiotic microorganisms.
  • the nutritional mixture is a mixture conventionally used by a person skilled in the art for the preparation of granules intended for animal feed, its composition depends on the animal species in question but conventionally includes vegetable flours such as for example wheat flour and or soybean or rapeseed meal and / or beet pulp and / or molasses and / or urea, in proportions well known to those skilled in the art. Premix is then incorporated into raw materials (foods) whose nature and quantities depend on the animal species.
  • This nutritional mixture is optionally enriched with vitamins and / or trace elements and / or amino acids and / or other additives for animal feed which are described above in relation to the probiotic composition of the invention.
  • the granules of the invention are prepared by a process comprising the following steps:
  • compositions or premix preparation of a probiotic composition or premix according to the invention, incorporation of said composition or premix into a nutritional mixture adapted to the animal species in question, preferably after a latency period of at least 14 days;
  • composition or the premix containing the probiotic microorganisms is left to rest for at least 15 days, preferably for at least 1 month before being incorporated into the nutritional mixture.
  • the granules obtained according to the process of the invention have a very satisfactory survival rate of probiotic microorganisms.
  • the survival rate of the probiotic microorganisms at granulation can be measured by the ratio S which corresponds to the ratio between the number of CFU after granulation (CFU ap ) and the number of CFU before granulation (CFU av ) multiplied by one hundred.
  • the survival rate of the microorganisms in the granules according to the present invention is such that the value of the ratio S is greater than or equal to 20%, preferably greater than or equal to 50% and more preferably still greater than or equal to 70%.
  • the invention also relates to a method for improving the stability of probiotic granules comprising the preparation of a probiotic composition or a premix comprising probiotic microorganisms and yeast walls and / or deactivated yeasts, and optionally a complement nutritional composition comprising especially vitamins, and / or trace elements, and / or amino acids, and / or other additives for animal feed, this composition being incorporated into the nutritional mixture before the step of granulation by injection of steam and pressing.
  • the resistance to the granulation temperature resides in particular in increasing or maintaining the dry matter content of the probiotic microorganism present in the composition according to the invention.
  • the granules of the invention, or obtained according to the processes of the invention are intended for use in animal feed.
  • the invention allows a controlled supply of probiotic micro-organisms, since the quantity of live probiotic microorganisms ultimately in the animal feed represents at least 20% of the amount used for the manufacture of the composition according to the invention. or that of the granules.
  • Probiotic yeasts are those marketed under the brand BIOSAF ® (in the following examples only the term
  • BIOSAF ® will be used).
  • the product BIOSAF ® is a concentrate of live cells of yeasts Saccharomyces cerevisiae strain
  • BIOSAF ® NCYC - 47. This product is intended exclusively for animal feed, it is in the form of microgranules and has a thermal stability up to 80 ° C.
  • the yeast walls used consist of walls of Sacchromyces cerevisiae and prepared by autolysis followed by centrifugation.
  • the deactivated yeasts used consist of Saccharomyces cervisiae walls and prepared by heat treatment.
  • premixes The various mixtures (premix 1 to 3), the composition of which is given in Table 2 below, are prepared manually:
  • the percentages are calculated by weight of the total weight of premixes.
  • the premix 3 corresponds to a composition used in the composition of granules of the prior art.
  • the Biosaf is stored in a silo up to 5 to 6 meters.
  • the yeasts are transported 50 meters to the mixer via a vertical pneumatic conveyor (dense phase transfer) of 10 cm in diameter.
  • An air inlet (previously treated, dried and cooled) allows the product to be pushed through the conveyor by a succession of air plugs and product plugs.
  • a weighing bucket controls the weight of the product before entering the coulter mixer where the mixture is introduced simultaneously.
  • the mixer used is a coulter mixer, its rotational speed is 120 rpm, and the mixing time is 60 seconds.
  • the final premix is then directed to bag or bulk packaging.
  • composition of the premixes made industrially is given in the table below:
  • the rate of dry matter in the premixes according to the invention remains stable in the premix Ibis (14% of walls yeast), but increases by 0.3% after one month of contact in the premix 5 (44% of yeast walls).
  • BIOSAF ® The effect of yeast walls on the humidity of BIOSAF ® is less important when the mixture is prepared under industrial conditions, however there is no decrease in the dry matter of BIOSAF ® as observed with the premix carriers classics (wheat-based for example).
  • Granulation tests were carried out on a fixed flat disc die laboratory press (KAHL.14-175 press of 3 kW, having a diameter and a channel thickness respectively of 4 and 20 mm (ie a compression ratio of 5). ).
  • the conditioner (INRA, France) with 32 rotating blades is 544 mm long and has a volume of 3.75 1.
  • the 2.2 kW motor is controlled by a speed regulator that regulates the flow.
  • the temperatures are set at the level of the conditioner (at 80 and 90 ° C.).
  • a first batch of granules was prepared with a steam injection temperature of 80 ° C., and a second batch at a steam injection temperature of 90 ° C.
  • the premixes were used immediately after their preparation.
  • composition of the granules is given below:
  • % strength or survival rate amount of revivable cells in the granules (in CFU / g) X 100 / amount of revivable cells in the granulation composition just before granulation (in CFU / g).
  • Example 4 granules were prepared using the premixes 3bis and 5 whose composition is given in Example 3. However, these premixes had been prepared one month before granulation.
  • the granules according to the invention have a resistance to granulation and therefore a survival rate six times higher.

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Abstract

La présente invention a pour objet une composition probiotique ou prémix comprenant des micro-organismes probiotiques vivants ou revivif iables, des parois de levures et/ou des levures désactivées, et éventuellement, un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et /ou des acides aminés, et /ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale. Elle concerne également des granulés comprenant ladite composition et destinés à l'alimentation animale ainsi qu'un procédé de préparation desdits granulés.

Description

COMPOSITIONS DE MICRO-ORGANISMES PROBIOTIQUES, GRANULES LES CONTENANT, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEURS UTILISATIONS .
La présente invention a pour objet une composition probiotique ou prémix comprenant des micro-organismes probiotiques vivants ou revivifiables et des parois de levures et/ou des levures désactivées, la présence des parois de levures et/ou de levures désactivées permettant notamment la stabilisation des micro-organismes probiotiques. Cette composition ou prémix peut être utilisé pour la préparation de granulés qui seront destinés à l'alimentation animale.
Le terme « probiotiques » désigne des micro-organismes vivants, qui lorsqu'ils sont ingérés en quantité suffisante exercent un effet positif sur l'organisme hôte en améliorant les propriétés de sa flore intestinale au-delà des effets nutritionnels traditionnels. Ils constituent une alternative à l'emploi des antibiotiques dans l'alimentation animale. Il s'agit le plus souvent de bactéries ou de levures présentes soit dans les aliments soit dans les compléments alimentaires.
Il existe quatre grands types de probiotiques : les ferments lactiques (les lactobacilles et les coques) , les bifidobactéries d'origine humaine ou animale, - les différentes levures dont les levures de type Saccharomyces, les autres bactéries sporulées, dont Bacillus subtillis et cereus.
Les micro-organismes tués par la chaleur ne répondent pas à la définition des probiotiques, même si certains effets thérapeutiques ont pu leur être attribués.
Par extension, le terme « probiotiques » désigne également les aliments contenant de tels micro-organismes. Les probiotiques sont de plus en plus utilisés tant en alimentation humaine qu'en alimentation animale, notamment comme substitut aux antibiotiques compte tenu notamment d'un retour à une alimentation plus saine, plus naturelle et plus respectueuse de l'environnement. En nutrition animale, ces micro-organismes sont en général ajoutés dans un aliment granulé par l'intermédiaire d'un prémix contenant également des vitamines, des oligo-éléments et des acides aminés.
L'introduction des micro-organismes probiotiques dans les granulés n'est cependant pas aisée, en effet, les microorganismes probiotiques sont le plus souvent détruits au cours du processus de granulation. Cette étape de la fabrication des granulés est effectuée en présence de vapeur à des températures comprises entre 6O0C et 1000C et sous des pressions allant de 0,5 à 3,5 bars; température et conditions d'humidité dans lesquelles les micro-organismes sont généralement détruits.
Dans la demande de brevet EP 0 694 610, la résistance à la granulation de levures de l'espèce Phaffia rhodozyma qui produisent un colorant, 1 ' astaxanthine, et sont utilisées dans l'alimentation piscicole pour donner la couleur rouge aux saumons et truites d'élevage, a été améliorée par séchage en présence d'un sucre comme le glucose.
Cependant, il ne s'agissait pas là de levures probiotiques qui doivent rester vivantes jusqu'à leur ingestion par les animaux afin de remplir leurs fonctions.
De façon surprenante et inattendue, les inventeurs ont trouvé que des micro-organismes probiotiques pouvaient présenter une stabilité améliorée dans les prémix au cours du temps par mélange avec des parois de levures et/ou des levures désactivées en lieu et place des autres supports de prémix traditionnellement utilisés tels la farine de blé où le carbonate de calcium. Cette stabilité améliorée au cours du temps les rendant alors plus résistants à la granulation.
L'utilisation de parois de levures dans le domaine de la pharmacologie et de 1 ' agroalimentaire a déjà été décrite. Ces parois sont utilisées en tant qu'excipient dans la fabrication de comprimés pharmaceutiques, notamment comme agent liant à propriétés désintégrantes (Ozeki et al. AAPS PharmSciTech, 2003 ;4 (3) :E41) ou encore comme composant de produit d'enrobage (EP 1 159 882, Yuasa et al. Int J. Pharm. , 2002, Apr 26;237 (1-2) : 15-22). A la connaissance de la Société Demanderesse, la possibilité de les utiliser pour améliorer la stabilité de micro-organismes vivants ou revivifiables n'a cependant pas à ce jour été envisagée.
Il existe donc un réel besoin en micro-organismes probiotiques qui soient stables au cours du temps de telle sorte que l'effet escompté sur la santé de l'animal qui les ingère soit réel .
L'invention a donc pour objet une composition probiotique ou prémix comprenant : - de 0,5 à 75 % de micro-organismes probiotiques vivants ou revivifiables (a) choisis dans le groupe comprenant les levures probiotiques, les bactéries probiotiques de type ferments lactiques choisis parmi les lactobacilles, et bifidobactéries à l'exception des bacillis, et leurs mélanges,
- de 10 à 95% d'un composé (b) choisi parmi les parois de levures et les levures désactivées, et
- de 0 à 95 %, d'un complément nutritionnel (c) comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et/ou des acides aminés, et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale, les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition.
Dans la présente invention, on entend par microorganismes « revivifiables » ou « viables » des micro- organismes qui, en présence d'un milieu nutritif retrouvent leur capacité à se diviser et former des colonies .
A titre d'exemple, de levure probiotique on peut citer les levures probiotiques choisies dans le groupe comprenant les levures du genre Saccharomyces, de préférence de l'espèce Saccharomyces cerevisiae, ou du genre kluyveromyces telle que la Kluyveromyces marxianus et leurs mélanges.
Des exemples préférés de souches de Saccharomyces cerevisiae sont la souche Saccharomyces cerevisiae Sc47 déposée auprès du NCYC sous le numéro 47, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro 1-1077, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro 1-1079, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39 885, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection CBS sous le numéro 39 493.94, la souche Kluyveromyces marxianus déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39434, et leurs mélanges.
De façon tout à fait préférentielle la composition selon la présente invention comprend des levures correspondant à la souche Saccaharomyces cerevisiae Sc47 déposée auprès du NCYC sous le numéro 47.
Ainsi, selon un mode de réalisation tout à fait particulier, ladite composition probiotique ou prémix comprend : - de 0,5 à 75 %, de préférence 5 à 30 % de levures vivantes ou revivifiables,
- de 10 à 80%, de préférence 25 à 50 % de parois de levures et/ou de levures désactivées, - de 0 à 95 %, de préférence 5 à 80 % de complément nutritionnel , les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition. Cette composition est particulièrement adaptée à l'alimentation des animaux monogastriques.
Les parois de levures, quant à elles, peuvent être choisies parmi toutes sortes de levures de qualité alimentaire, par exemple, Saccaharomyces cerevisiae. Plus particulièrement, les parois de levure proviennent des levures commercialisées sous les marques PRONARDY®, SAFMANNAN®, ou encore BIOMOS® par respectivement les sociétés Prodessa, Biospringer et Alltech.
Les parois de levures peuvent être obtenues selon les procédés connus de l'homme du métier, on citera plus particulièrement l'autolyse des cellules de levures suivie de la séparation par des moyens physiques de la partie insoluble, contenant les parois, de la partie soluble.
Dans le cadre de la présente invention, les levures désactivées sont considérées comme étant des levures dénuées de tout pouvoir ferment. N'importe quel type de levures désactivées peut être utilisé pour autant qu'il soit de qualité alimentaire, par exemple les Saccharomyces . Elles sont obtenues selon les procédés connus de l'homme du métier, et plus particulièrement par des traitements thermiques.
Selon un mode de réalisation tout à fait avantageux de l'invention, les levures désactivées ont un taux de matière sèche supérieure à 95%.
Lorsqu'un mélange de levures désactivées et de parois de levures est utilisé, l'origine des levures peut être identique ou différente.
La composition probiotique de l'invention présente une homogénéité très satisfaisante. Sans vouloir être liés par aucune théorie, la présence des parois de levure et/ou des levures désactivées dans la composition ou prémix selon l'invention permet de stabiliser les micro-organismes probiotiques, par une diminution de la teneur en eau des micro-organismes probiotiques et une stabilisation de cette teneur en eau au cours du temps. Cette teneur en eau augmente par contre fortement lorsqu'on utilise un support de prémix classique tel que décrit dans l'art antérieur et comprenant notamment une farine de blé ou un carbonate de calcium. De plus, l'usage du carbonate peut engendrer des problèmes d'abrasivité et de ségrégation.
Ainsi selon un mode de réalisation particulier, la variation du taux de matière sèche des micro-organismes probiotiques, VA, mesurée selon le Test A suivant est positive. Test A :
Au temps T0, c'est-à-dire avant le mélange des microorganismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des raicro- organismes probiotiques est mesurée par la méthode ISO 1741. On obtient une valeur MS0.
Au temps T= 14 jours, c'est-à-dire 14 jours après le mélange des micro-organismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des micro-organismes probiotiques est mesurée. On obtient une valeur MST. On calcule alors V = [(MSx - MS0) /MS0] x 100.
De façon préférée, la variation du taux de matière sèche des micro-organismes probiotiques V est supérieure à 0,5%, de préférence supérieure à 1%.
Selon un mode de réalisation particulier, la composition ou prémix selon l'invention comprend en outre un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines et/ou des oligoéléments et/ou des acides aminés et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale.
Les vitamines entrant dans la composition sont choisies dans le groupe comprenant : la vitamine A, la vitamine D3 , la vitamine E, les vitamines Bl, B2, B5, B6, B12, C, PP, la biotine, l'acide folique, la choline, la vitamine K3 , de l'acide panthoténique, et leurs mélanges.
Les oligoéléments entrant dans la composition peuvent être des sels minéraux de qualité alimentaire. Ils sont choisis dans le groupe comprenant : le cuivre, le zinc, le fer, le manganèse, l'iode, le sélénium, et leurs mélanges.
Les acides aminés entrant dans la composition sont choisis dans le groupe comprenant : la méthionine, la lysine, la L-thréonine, le tryptophane, et leurs mélanges. La composition probiotique ou prémix décrite précédemment peut être incorporée directement dans les aliments pour animaux. De façon générale, la composition selon l'invention est incorporée aux aliments à raison de 5.107 à 5.1010 CFU (Colony Forming Unit) de micro-organismes probiotiques par kg d'aliment complet, de préférence de 5.108 à 1.1010 CFU par kg d'aliment complet.
Par exemple, quand le micro-organisme probiotique de la composition selon l'invention est la levure Saccharomyces cerevisiae Sc47 commercialisée par la Société Lesaffre sous la marque BIOSAF®, la composition selon l'invention sera incorporée à l'alimentation animale de façon à avoir 2,5 à 8.109 CFU de Saccharomyces cerevisiae Sc47 par kg d'aliment complet .
La composition probiotique décrite ci-dessus peut également être utilisée dans des granulés probiotiques destinés notamment à l'alimentation animale.
Ainsi, selon un autre mode de réalisation, l'invention porte sur des granulés probiotiques qui comprennent : - la composition probiotique ou prémix décrite ci-dessus, et
- un mélange nutritionnel adapté à l'espèce animale visée. De manière générale, les granulés de l'invention sont constitués de un pour mille en poids de micro-organismes probiotiques.
Le mélange nutritionnel est un mélange classiquement utilisé par l'homme du métier pour la préparation de granulés destinés à l'alimentation animale, sa composition dépend de l'espèce animale visée mais comprend classiquement des farines végétales comme par exemple la farine de blé et/ou des tourteaux de soja ou de colza et/ou de la pulpe de betterave et/ou la mélasse et/ou de l'urée, dans des proportions bien connues de l'homme du métier. Le Prémix est ensuite incorporé à des matières premières (aliments) dont la nature et les quantités dépendent des espèces animales.
Ce mélange nutritionnel est éventuellement enrichi en vitamines et/ou oligoéléments et/ou acides aminés et/ou autres additifs destinés à l'alimentation animale qui sont décrits ci-dessus en relation avec la composition probiotique de l'invention.
Les granulés de l'invention sont préparés par un procédé comprenant les étapes suivantes :
- préparation d'une composition ou d'un prémix probiotique selon 1 ' invention, - incorporation ladite composition ou prémix à un mélange nutritionnel adapté à l'espèce animale visée, de préférence après un temps de latence d'au moins 14 jours ;
- injection de vapeur d'eau à une température comprise entre 600C et 1000C sous des pressions allant de 0,5 à 3,5 bars dans le mélange obtenu précédemment et pressage.
De façon avantageuse, la composition ou le prémix contenant les micro-organismes probiotiques est laissé au repos pendant au mois 15 jours, de préférence pendant au moins 1 mois avant d'être incorporé au mélange nutritionnel .
Les granulés obtenus selon le procédé de l'invention présentent un taux de survie des micro-organismes probiotiques très satisfaisant.
Selon un mode de réalisation particulier, le taux de survie des micro-organismes probiotiques à la granulation peut être mesuré par le rapport S qui correspond au ratio entre le nombre de CFU après granulation (CFUap) et le nombre de CFU avant granulation (CFUav) multiplié par cent. Le taux de survie des micro-organismes dans les granulés selon la présente invention est tel que la valeur du rapport S est supérieure ou égale à 20 %, de préférence supérieure ou égale à 50 % et plus préférentiellement encore supérieure ou égale à 70 %.
L'invention porte également sur un procédé pour améliorer la stabilité de granulés probiotiques comprenant la préparation d'une composition probiotique ou d'un prémix comprenant des micro-organismes probiotiques et des parois de levures et/ou des levures désactivées, et éventuellement un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et/ou des acides aminés, et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale, cette composition étant incorporée au mélange nutritionnel avant l'étape de granulation par injection de vapeur et pressage.
Comme mentionné précédemment, il s'est avéré que la résistance à la température de granulation réside notamment dans l'augmentation ou le maintien de la teneur en matière sèche du micro-organisme probiotique présent dans la composition selon l'invention.
Les granulés de l'invention, ou obtenus selon les procédés de l'invention sont destinés à être utilisés dans l'alimentation animale. L'invention permet un apport en micro-organismes probiotiques contrôlé, étant donné que la quantité de microorganismes probiotiques vivants au final dans l'aliment pour animal représente au moins de 20 % de la quantité utilisée pour la fabrication de la composition selon l'invention ou de celle des granulés.
La présente invention sera plus précisément décrite et illustrée dans les exemples et figures à suivre. Il est bien entendu que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.
EXEMPLES :
Exemple 1 : matériel utilisé
Les exemples de la présente invention sont réalisés avec le matériel suivant :
Les levures probiotiques sont celles commercialisée sous la marque BIOSAF® (dans la suite des exemples seul le terme
BIOSAF® sera employé) . Le produit BIOSAF® est un concentré de cellules vivantes de levures Saccharomyces cerevisiae souche
Sc47, 1.1010 CFU/g de BIOSAF® (NCYC - 47). Ce produit est destiné exclusivement à l'alimentation animale, il se présente sous la forme de microgranules et présente une stabilité thermique jusqu'à 8O0C.
Les parois de levure utilisées sont constituées de parois de Sacchromyces cerevisiae et préparées par autolyse suivie de centrifugation. Les levures désactivées utilisées sont constituées de parois de Saccharomyces cervisiae et préparées par traitement thermique.
Les caractéristiques physiques sont données dans le tableau 1 ci-dessous :
Figure imgf000012_0001
Exemple 2 :
2.1 Préparation des prémix On prépare manuellement les différents mélanges (prémix 1 à 3} dont la composition est donnée dans le tableau 2 ci- dessous :
Figure imgf000013_0001
Les pourcentages sont calculés en poids du poids total de prémix.
Le prémix 3 correspond à une composition entrant dans la composition de granulés de l'art antérieur.
2.2 - Evolution du taux de matière sèche
Le taux de matière sèche du BIOSAF présent dans chacun des prémix 1 à 3 a été mesuré suivant la norme officielle ISO 1741 aux temps T= 1 jour, 2 jours, 7 jours et 14 jours. Les résultats obtenus sont représentés sur la Figure 1. La variation de la teneur en matière sèche selon le Test A est donnée dans le tableau ci -dessous : V = [(MST - MS0) /MS0] x 100
Prémîx / Temps de 1 jour 2 jours 7 jours 14 jours contact
Prémix 1 + 0,1% + 0,5% + 0,6% + 0,7%
Prémix 2 + 0,4% + 0,5% + 0,8% + 1,2%
Prémix 3 - 0,9% - 0,9% - 1,0% - 1,2% II est important de noter que le temps de contact entre le BIOSAF® et les autres composés du prémix joue un rôle primordial, puisqu'il correspond à la mise en équilibre des humidités des produits. Si le facteur temps est défavorable à un mélange BIOSAF® - farine de blé, il doit être au minimum de 14 jours dans le cas de support à base de parois de levures et/ou de levures désactivées.
Exemple 3
Des études antérieures ont montrées que le procédé de mélange peut endommager le produit BIOSAF®, le rendant plus apte à capter l'humidité ambiante. Il était donc indispensable de fabriquer les prémix parois de levures - BIOSAF® dans des conditions industrielles pour confirmer l'effet positif desdites parois de levures.
3.1 Préparation de prémix selon un procédé industriel :
Le Biosaf est stocké dans un silo haut de 5 à 6 mètres. Lors d'une fabrication, les levures sont transportées sur 50 mètres vers la mélangeuse via un transporteur pneumatique vertical (transfert en phase dense) de 10 cm de diamètre. Une arrivée d'air (préalablement traité, séché et refroidi), permet de pousser le produit à travers le transporteur par une succession de bouchons d'air et de bouchons de produit. En sortie du transporteur, une benne peseuse contrôle le poids du produit avant d'entrer dans la mélangeuse à socs où est introduit simultanément le mélange. La mélangeuse utilisée est une mélangeuse à socs, sa vitesse de rotation est de 120 tours/min, et la durée du mélange est de 60 secondes. Le prémix final est alors dirigé vers un conditionnement en sacs ou en vrac.
La composition des prémix réalisés industriellement est donnée dans le tableau ci-après :
Figure imgf000015_0001
3.2 - Evolution du taux de matière sèche
L'évolution du taux de matière sèche de BIOSAF® en fonction du temps de ces différents prémix a été mesurée comme dans l'exemple 2.
De la même façon que pour des prémix réalisés de façon manuelle, le taux de matière sèche de BIOSAF® diminue dans le prémix comprenant de la farine de blé (prémix 3bis) : il passe de 93% à 91,7%.
Le taux de matière sèche dans les prémix selon l'invention reste stable dans le prémix Ibis (14% de parois de levures), mais augmente de 0 ,3% après un mois de contact dans le prémix 5 (44% de parois de levures) .
L'effet des parois de levures sur l'humidité de BIOSAF® est moins important lorsque le mélange est préparé dans des conditions industrielles, néanmoins il n'y a pas une baisse de la matière sèche de BIOSAF® comme observée avec les supports de prémix classiques (à base de blé par exemple) .
Exemple 4 :
4.1 Préparation de granulés.
Des essais de granulation ont été réalisés sur une presse de laboratoire à filière discoïdale plate fixe (Presse KAHL.14 - 175 de 3 kW, ayant un diamètre et une épaisseur des canaux respectivement de 4 et 20mm (soit un taux de compression de 5) ) . Le conditionneur (INRA, Nantes, France) à 32 pales rotatives est long de 544 mm et possède un volume 3.75 1. Le moteur de 2.2 kW est contrôlé par un régulateur de vitesse qui règle le débit. Les températures sont fixées au niveau du conditionneur (à 80 et 900C) .
Deux lots de granulés ont été préparés dans les conditions définies ci-dessus. Un premier lot de granulés a été préparé avec une température d'injection de vapeur d'eau de 800C, et un second lot à une température d'injection de vapeur d'eau de 9O0C.
Les prémix ont été utilisés immédiatement après leur préparation.
La composition des granulés est donnée ci-après :
Figure imgf000017_0001
4.2. Etude de la résistance à la granulation Pour chacun des lots de granulés, le taux de survie du BIOSAF® a été mesuré. Les résultats sont donnés ci-après :
Figure imgf000017_0002
Modes de calcul :
% résistance ou taux de survie = quantité de cellules revivifîables dans les granulés (en CFU/g) X 100 / quantité de cellules revivifîables dans la composition de granulation juste avant granulation (en CFU/g).
Les résultats montrent un taux de survie très bas attestant d'une très faible résistance à la granulation du BIOSAF® incorporé au prémix 3bis (granulés 1) par rapport à des lots de BIOSAF® incorporés dans le prémix 5 selon l'invention (granulés 2) .
Exemple 5 i
De la même façon que dans l'exemple 4, des granulés ont été préparés à l'aide des prémix 3bis et 5 dont la composition est donnée dans l'exemple 3. Cependant, ces prémix avaient été préparés un mois avant la granulation.
Figure imgf000018_0001
4.2. Etude de la résistance à la granulation
Pour chacun des lots de granulés, la résistance à la granulation a été évaluée par détermination du taux de survie du BIOSAF®. Les résultats sont présentés ci-après
Figure imgf000018_0002
II en ressort que les granulés conformes à l'invention ont une résistance à la granulation et donc un taux de survie six fois plus important.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition probiotique ou prémix comprenant :
- de 0,5 à 75 % de micro-organismes probiotiques vivants ou revivifiables (a) choisis dans le groupe comprenant les levures probiotiques, les bactéries probiotiques de type ferments lactiques choisis parmi les lactobacilles, et bifidobactéries à l'exception des bacillis, et leurs mélanges, - de 10 à 95% d'un composé (b) choisi parmi les parois de levures et les levures désactivées, et
- de 0 à 95 %, d'un complément nutritionnel (c) comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et/ou des acides aminés, et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale, les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition.
2. Composition probiotique selon la revendication 1, comprenant de préférence :
- de 5 à 30 % de micro-organismes vivants ou revivifiables
(a),
- de 15 à 80 % et plus préférentiellement encore de 25 à 75 % de parois de levures et/ou de levures désactivées (b) , - de 5 à 80% de complément nutritionnel (c) , les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2 , caractérisée en ce que les levures probiotiques sont choisies dans le groupe comprenant les levures du genre Saccharomyces, de préférence de l'espèce Saccharomyces cerevisiae, ou du genre Kluyveromyces, de préférence de l'espèce Kluyveromyces marxianus et leurs mélanges .
4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que les levures correspondent aux souches choisies dans le groupe comprenant la souche Saccaharomyces cerevisiae Sc47 déposée auprès du NCYC sous le numéro 47, la souche Saccaharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro 1-1077, la souche Saccaharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro 1-1079, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39 885, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection CBS sous le numéro 39 493.94, la souche Kluyveromyces marxianus déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39434, et leurs mélanges.
5. Composition probiotique selon l'une des revendications 1 à 4 , comprenant : - de 0,5 à 75 %, de préférence 5 à 30 % de levures vivantes ou revivifiables,
- de 10 à 80%, de préférence 25 à 50 % de parois de levures et/ou de levures désactivées,
- de 0 à 95 %, de préférence 5 à 80 % de complément nutritionnel, les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition.
6. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que les parois de levures et/ou les levures désactivées sont choisies parmi les Saccaharomyces.
7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle la variation de la teneur en matière sèche des micro-organismes probiotiques mesurée selon un Test A est positive, suivant le Test A1 au temps T0, c'est-à-dire avant le mélange des micro-organismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des micro-organismes probiotiques est mesurée par la méthode ISO 1741, on obtient une valeur MS0, au temps T= 14 jours, c'est-à-dire 14 jours après le mélange des micro- organismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des microorganismes probiotiques est mesurée, on obtient une valeur MST, on calcule alors la variation = [ (MST - MS0) /MS0] x 100.
8. Granulé probiotique comprenant :
- une composition probiotique ou prémix selon l'une quelconque des revendications 1 à 7,
- un mélange nutritionnel adapté à l'alimentation animale visée.
9. Granulé selon la revendication 8 dans lequel le taux de survie S des microorganismes probiotiques est supérieur ou égal à 20%, de préférence supérieur ou égal à 50% et plus particulièrement supérieur ou égal à 70%.
10. Procédé de préparation de granulés comprenant les étapes suivantes :
- préparation d'une composition probiotique ou prémix selon l'une des revendications 1 à 7,
- incorporation de la composition probiotique ou prémix à un mélange nutritionnel adapté à l'alimentation animale visée, de préférence après un temps de latence d'au moins 14 jours,
- injection de vapeur d'eau à une température comprise entre 600C et 1000C sous des pressions allant de 0,5 à 3,5 bars dans le mélange obtenu à l'étape précédente et pressage.
11. Procédé pour améliorer la stabilité de granulés probiotiques comprenant la préparation d'une composition probiotique ou prémix selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, comprenant des micro-organismes probiotiques et des parois de levures et/ou des levures désactivées, et éventuellement un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et/ou des acides aminés, et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale, cette composition étant incorporée à un mélange nutritionnel adapté à l'espèce animale visée avant l'étape de granulation par injection de vapeur et pressage.
12. Utilisation d'une composition probiotique ou prémix selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour l'alimentation animale.
13. Utilisation de granulés selon la revendication 8 ou 9 ou préparés par le procédé de la revendication 10, pour l'alimentation animale.
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