WO2006028428A1 - Souche de aerococcus viridans n°167k a activite antimicrobienne et medicament viabak fabrique sur la base de celle-ci - Google Patents

Souche de aerococcus viridans n°167k a activite antimicrobienne et medicament viabak fabrique sur la base de celle-ci Download PDF

Info

Publication number
WO2006028428A1
WO2006028428A1 PCT/UA2005/000003 UA2005000003W WO2006028428A1 WO 2006028428 A1 WO2006028428 A1 WO 2006028428A1 UA 2005000003 W UA2005000003 W UA 2005000003W WO 2006028428 A1 WO2006028428 A1 WO 2006028428A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
viridaps
strain
imv
bioconcentrate
aerococci
Prior art date
Application number
PCT/UA2005/000003
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Nikolaiy Dmitrievich Serebryakov
Yuriy Nikolaevich Zirchuk
Svetlana Grigorievna Shulga
Nina Nikolaevna Kulchenko
Yuliya Vladimirovna Baranova
Original Assignee
Obschestvo S Ogranichennoiy Otvetstvennostyu 'viridans'
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Obschestvo S Ogranichennoiy Otvetstvennostyu 'viridans' filed Critical Obschestvo S Ogranichennoiy Otvetstvennostyu 'viridans'
Publication of WO2006028428A1 publication Critical patent/WO2006028428A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Definitions

  • the invention relates to medicine and biotechnology, in particular to new strains of probiotic microorganisms and medicines based on them.
  • Bacteriotherapy and bacterioprophylaxis of infections of various etiologies and localizations, as well as pathological processes of non-infectious origin, are becoming increasingly important due to the increasing understanding of the role of normal microflora for the human body in the processes of non-specific resistance to infections, in the formation of immune responses, the antagonistic role of microflora, and participation in regulation metabolic processes, as well as in connection with the identification of their antidotes, antioxidant, anticarcinogenic roles in macroorgan kite.
  • lactobacterin The main factor in the effectiveness of bifidumbacterin is antagonistic activity due to strong acid formation, lysozyme production.
  • the mechanism of action of lactobacterin is close to bifidumbacterin and is also predetermined by strong acid formation. This drug is most effective for treatment of acute and chronic intestinal infections, correction of dysbiosis.
  • the closest strain to the proposed is the strain Aerosossus viridaps N ° 167 (reg. IMV number B-7041), isolated from breast milk.
  • IMV number B-7041 Aerosossus viridaps N ° 167
  • the basis of the invention is the task to obtain a more productive strain of Aerosossus viridaps (through the use of analytical selection methods) with high adhesive properties and a wide spectrum of antagonistic action.
  • the problem was solved by obtaining a new strain of Aerosossus viridaps N ° 167K, isolated by analytical selection from a strain of Aerosossus viridaps Ne 167 (b. IMV B-7041) and deposited in the collection of the Institute of Microbiology and Virology (IMV) HAH of Ukraine under the number IIB B -7069.
  • the strain is identified by Bergi's “Short Bacterial Identifier”.
  • the aforementioned strain acquires such cultural-morphological and physiological-biochemical properties that ensure its high performance in the treatment and prevention of diseases of the mucous membranes and skin integuments.
  • the cell wall • consists of two electron-dense and one less dense intermediate layer.
  • the thickness of the cytoplasmic membrane is 200-400A.
  • the cytoplasm of cells is heterogeneous. It is filled with small granules, polyribosomes concentrated around the mesosomes or nuclear formations.
  • Colonies of aerococci on solid nutrient agar are round, 0.5-1.0 mm in diameter, translucent, white or gray, sometimes bead-like.
  • colonies of aerococci are large, surrounded by a green zone, possibly as a result of the action of lactate oxidase.
  • Growth in nutrient broth is accompanied by homogeneous turbidity, which has a tendency to become a granular precipitate.
  • the growth of aerococci depends on the presence of biotin, pantothenic and nicotinic acids in the medium.
  • the strain does not require B vitamins for its growth: thiamine, riboflavin, pyridoxine, folic and flavonic acids.
  • Tween-80 replaces the need for biotin.
  • Exogenous purines are necessary for the growth of aerococci. Guanine and xanthine are interchangeable with adenine. The strain has no need for exogenous pyrimidines. The need for amino acids is variable.
  • Aerococci Catalase activity of aerococci may have non-hemic nature. Aerococci contain an enzyme that protects them from superoxide radicals - superoxide dismutase, which cofactor is manganese. In terms of oxygen resistance, aerococci take the second place after S. faesalis and are in front of E. coli.
  • the cell wall of aerococci contains glucose, galactose, galactosamine and does not contain rhamnose, glycerol or ribitol.
  • the same content of G + C pairs in the DNA of aerococci and pediococci was determined, equal to 41-43%.
  • the content of G + C pairs in the DNA of aerococci ranged from 39.5-42.0%.
  • the content of G + C pairs is 39.9- 42.0%, from cow - 39.5-41.6%.
  • the antagonistic activity of the strain Aerosossus viridaps 167K is checked against 9 test strains - Starculosusus aureus 209p, Proteus vulgaris 401, Proteus selepelibella helium 1046, Salmopella turhimurium 5710, Vibrio Nag p 6078 - by the stroke method on a solid nutrient medium in Petri dishes.
  • the culture vial is diluted with 0.9% sodium solution chloride, based on the content of 2-8 8 aerococci in lml and seeded with a stroke along the diameter of the cup with MPA, which contains 1% glucose and 0.4 mg / ml potassium iodide.
  • MPA which contains 1% glucose and 0.4 mg / ml potassium iodide.
  • Zones of growth inhibition of test strains should be no less than 7 mm for Pseudomopas aegagipos 1312 and no less than 15 mm for all other cultures, compared with 5 mm and 10 mm of the prototype.
  • Oxidase activity The indicator of oxidase activity, which is determined by the ability of aerococci to change the color of starch in the composition of a nutrient medium with potassium iodide, correlates with the antagonistic activity of the stam.
  • the diameter of the blue starch around the stroke Aerosossus viridaps 167K (b. IMV B-7069) is not less than 30 mm.
  • Metabolism products of A. viridaps 167K are substances that are necessary in the process of performing the phagocytic function - hydrogen peroxide, superoxide dismutase, lysozyme-like substances, toxic forms of oxygen, as well as hydroxyl radicals.
  • the activity of neutrophilic granulocytes was evaluated by phagocytic activity and phagocytosis completion index - killing, which most fully characterizes the functional ability of neutrophilic phagocytes due to the formation of toxic oxygen forms by granulocytes, as well as a hydroxyl radical.
  • Superoxide dismutase binds this oxygen with hydrogen, forming hydrogen peroxide.
  • the processes of peroxidation lead to damage to the membranes of microorganisms, determining their death.
  • Another object of this invention is the therapeutic agent Viabac (Viabac), containing a therapeutically effective amount of lyophilized vegetative cells of strain A. viridaps 167K (b. IMV B-7069) as part of a bioconcentrate.
  • a bioconcentrate is mainly introduced into the composition together with one or more carriers (a variety of therapeutic, flavoring, nutritional supplements and excipients).
  • carriers a variety of therapeutic, flavoring, nutritional supplements and excipients.
  • Lists of components suitable for this purpose are well known to those skilled in the art, as are methods for mixing them.
  • they can be milk sugar, fruit pectin, polyvinylpyrrolidone, cellulose derivatives, magnesium stearate, vitamins, fruit powders, and the like.
  • the bioconcentrate in accordance with this invention may be formulated as capsules, tablets or other oral medical forms.
  • it can be used in the form of ointments, therapeutic and prophylactic toothpastes, etc.
  • Example 1 Obtaining lyophilized bioconcentrate A. viridaps 167K (b.n. IMV B-7069) (hereinafter bioconcentrate).
  • composition of the medium for culturing the strain is as follows: microbiological agar GOST 17206-84 22g; glucose GOST 6038-79 40g; dry enzymatic peptone for bacteriological purposes GOST 13805-76 South; distilled water GOST 6709-72 ll.
  • Colonies with a diameter of 0.5-2.0 mm in the form of flat, colorless discs grow on a nutrient medium. After incubation, the microbial mass is washed off under aseptic conditions by adding an aqueous stabilizer solution. Bacterioscopic and bacteriological control of the collected microbial suspension is carried out and lyophilized. .
  • the dried suspension is crushed and packaged in a sterile container and sealed.
  • BI r of the bioconcentrate is placed up to 5x10 10 viable cells.
  • the resulting bioconcentrate is a mixture of freeze-dried living vegetative bacteria cells; a stabilizer, for example gelatin and sucrose; dry components of the nutrient medium and biologically active substances that are produced by the strain.
  • the obtained bioconcentrate can be used on its own or as part of a therapeutic agent for the prevention and treatment of a variety of painful conditions.
  • A. viridaps 167K (b. IMV B-7069)
  • this medium additionally contains Tween-80 and nicotinic acid.
  • Correction of the pH of the solution is carried out using 10% ammonia and adjusted to a value of 6.2-6.4.
  • Example 2 The use of A. viridaps 167K bioconcentrate (b. IMV B-7069) to obtain a therapeutic agent in tablet form.
  • the obtained tablets can be coated with a pharmaceutically suitable film coating or used to obtain a powder or microgranules with which gelatin capsules can be filled.
  • Example 3 Clinical use of A. viridaps 167K (b. IMV B-7069).
  • A. viridaps 167K bioconcentrate (b. IMV B-7069) positively affected the microflora of the stomach, small and large intestines of experimental animals.
  • the microflora in animals that received the studied bioconcentrate as a biologically active feed additive significantly differed from those in the control, which allows us to conclude that it has a beneficial effect on quantitative and qualitative composition of the microflora of the gastrointestinal tract.
  • bioconcentrate A. viridaps 167K (b.IMV B-7069) for the treatment of dental infections.
  • the treatment of acute and chronic periodontitis in the acute stage was as follows. In the first attendance, carious voids were revealed, mechanical and drug treatment of root canals was carried out. At the last stage, the root canals were washed with a solution of bioconcentrate. The tooth was left open with the goal of outflow of exudate. Three days later, in the absence of symptoms of inflammation, turunds with a bioconcentrate solution were left in the canals under an airtight dressing. After 2-3 days, in the absence of inflammation, filling was performed.
  • A. viridaps 167K bioconcentrate (b.IMV B-7069) for the treatment of infections of the skin.
  • Bioconcentrate A. viridaps 167K (b. IMV B-7069) was used in the department of neonatal pathology in the treatment of infants with diaper rash of the third degree with necrotic changes. After irrigation of the affected areas with a bioconcentrate solution, rapid healing was noted with further epithelization without the use of stereotyped treatment methods.
  • the duration of treatment was seven days, that is, two times faster than using traditional methods.
  • A. viridaps 167K (b. IMV B-7069) in gynecology also gave good results. Patients aged 4 to 17 years with intravaginal yeast, chlamydial and trichomonas infections were prescribed douching with a bioconcentrate solution twice a day. After course of treatment, the vast majority of results were satisfactory - smears of the second and third degree of purity.
  • Strain A. viridaps 167K (b. IMV B-7069), as well as the therapeutic agent Viabak (Viabac) based on lyophilized vegetative cells of strain A. viridaps 167K (b. IMV B-7069), exhibits antimicrobial activity and is effective for the treatment of infectious lesions of different localization.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

ШТАММ АЕRОСОССUS VIRIDANS JM67K, КОТОРЫЙ
ПРОЯВЛЯЕТ ПРОТИВОМИКРОБНУЮ АКТИВНОСТЬ, И
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ "ВИАБАК"
Изобретение относится к медицине и биотехнологии, в частности к новым штаммам микроорганизмов-пробиотиков и медицинских препаратов на их основе.
Бактериотерапия и бактериопрофилактика инфекций разнообразной этиологии и локализации, а также патологические процессы неинфекционного происхождения, приобретают все большую актуальность в связи с возрастанием понимания роли нормальной микрофлоры для организма человека в процессах неспецифичной резистентности к инфекциям, в формировании иммунных ответов, антагонистической роли микрофлоры, участия в регуляции метаболических процессов, а также в связи с выявлением их антидотии, антиоксидантной, антиканцерогенной роли в макроорганизме.
На сегодня существует большое количество биопрепаратов для внутреннего применения, которые . как активный агент содержат известные штаммы микроорганизмов, например, такие как бифидум-, лакто- и колибактерин.
Основным фактором эффективности бифидумбактерина является антагонистическая активность, обусловленная сильным кислотообразованием, продуцированием лизоцима. Механизм действия лактобактерина близкий к бифидумбактерину и также предопределяется сильным кислотообразованием. Этот препарат наиболее действенный при лечении острых и хронических кишечных инфекций, коррекции дисбактериозов.
Поскольку названные препараты содержат штаммы- представители исключительно индигенной микрофлоры кишечника, которые осуществляют свое антагонистическое действие и антагонистическую способность колонизации только для слизистых оболочек кишечника, область их применения узкая и ограничивается лечением и профилактическим влиянием при инфекциях кишечника. В основу группы изобретений, которая заявляется, поставлена задача расширить ассортимент биологических препаратов, которые содержат лиофилизированные жизнеспособные клетки бактерий и носитель и отличаются более широким спектром действия. Указанную задачу решает штамм Аеrососсus viridапs N° 167K
[Депозитарий Института микробиологии и вирусологи HAH Укpaины,yл. Заболотного, 154, Kиeв-143, 03143;20 июня 2002 г.; регистрационный номер-Аеrососсus viridапs IMB В -7069, сокращенно - р.н. ИМВ B-7069] для изготовления врачебных препаратов, косметических средств и биоактивных добавок.
Наиболее близким штаммом к предложенному является штамм Аеrососсus viridапs N° 167 (рег. номер ИМВ B-7041), выделенный из грудного молока. Однако использование этого штамма не всегда эффективно из-за недостаточной технологичности и умеренной биологической активности.
В основу изобретения поставлена задача получить более продуктивный штамм Аеrососсus viridапs (путем использования методов аналитической селекции) с высокими адгезивными свойствами и широким спектром антагонистического действия.
Поставленная задача решена путем получения нового штамма Аеrососсus viridапs N° 167K, выделенного методами аналитической селекции из штамма Аеrососсus viridапs Ne 167 (р.н. ИМВ B-7041) и депонированного в коллекции Института микробиологии и вирусологи (ИМВ) HAH Украины под номером ИМВ B-7069. Штамм идентифицирован по «Kpaткoмy определителю бaктepий» Берги.
В результате селекционной работы вышеупомянутый штамм приобретает такие культурально-морфологические и физиолого- биохимические свойства, которые и обеспечивают его высокую производительность при лечении и профилактике заболеваний слизистых оболочек и кожных покровов.
Культурально-морфологические свойства штамма. Грамположительные кокки, недвижимые, 1-2 мкм в диаметре, которые располагаются парами или нерегулярными сосредоточениями. Клеточная стенка • состоит из двух электронноплотных и одного менее плотного промежуточного пласта. Толщина цитоплазматической мембраны 200-400A. Цитоплазма клеток имеет гетерогенный характер. Она заполненная мелкими гранулами, полирибосомами, сконцентрированными вокруг мезосом или ядерных образований.
Колонии аэрококков на плотном питательном агаре круглые, 0,5-1,0 мм в диаметре, полупрозрачные, белые или серые, иногда бусинкоподобные. На кровяном агаре колонии аэрококков имеют большие размеры, окруженные зоной позеленения, возможно, в результате действия лактат-оксидазы. Рост в питательном бульоне сопровождается гомогенным помутнением, которое имеет тенденцию превращаться в зернистый осадок.
Рост аэрококков зависит от наличия в среде биотина, пантотеновой и никотиновой кислот. Штамм не требует для своего роста витаминов группы "В": тиамина, рибофлавина, пиридоксина, фолиевой и флавоновой кислот. Tween-80 заменяет потребность в биотине.
Для роста аэрококков необходимы экзогенные пурины. Гуанин и ксантин взаимозаменяемые с аденином. Штамм не имеет потребности в экзогенных пиримидинах. Потребность в аминокислотах вариабельна.
Потребность для роста в биотине, никотиновой, пантотеновой кислотах, пуринах и независимость от наличия в среде витаминов группы "В", отличает аэрококки от других грамположительных кокков, например, педиококков, которые требуют фолиевую кислоту, или стрептококков - потребность в тиамине.
Биохимическая активность.
При культивировании на молоке с 1,0% метиленовым синим не восстанавливают последний, подкисляют молоко при отсутствии свертывания, желатин не разрежают, аргинин, крахмал, эскулин не гидролизуют. Аэрококки продуцируют кислоту, но не газ, при культивировании на средах с глюкозой, мальтозой, лактозой, манитолом, сахарозой. Ацетоин не образовывают, рафинозу не сбриживают, каталазу не продуцируют, коагулазу не образовывают. При культивировании в глюкозном (1%) бульоне - конечное рН 5,1-5,8 и рост микроаэрофильный. При аэробном росте продуцируют пероксид водорода.
Каталазная активность аэрококков может иметь негеминовый характер. Аэрококки содержат фермент, который защищает их от супероксидных радикалов - супероксидную дисмутазу, кофактором которой является марганец. По кислородостойкости аэрококки занимают второе место после S.fаесаlis и находятся перед Е.соϊi.
Максимальная продукция перекиси водорода культурами аэрококков отмечается в ранний период логарифмической фазы культуры. У аэрококков - сильных продуцентов пероксида водорода, стационарная фаза развития культуры непродолжительная. Отмечается их высокая чувствительность к антибиотикам.
Химический состав.
Клеточная стенка аэрококков содержит глюкозу, галактозу, галактозамин и не содержит рамнозу, глицерол или рибитол. Определено одинаковое содержание Г+Ц пар в ДНК аэрококков и педиококков, равный 41-43%. Содержание Г+Ц пар в ДНК аэрококков колебался в границах 39,5-42,0%. У аэрококков, выделенных из грудного молока, содержимое Г+Ц пар - 39,9- 42,0%, из коровьего - 39,5-41,6%. Биологические свойства
Антагонистическую активность штамма Аеrососсus viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) проверяют по отношению 9 тест- штаммов - Stарhуlососсus аurеus 209p, Рrоtеus vulgаiϊs 401, Рrоtеus mirаbilis H 2091, Кlеbsiеllа рпеumопiае 320, Рsеudоmопаs аеrugiпоsа 1312, Shigеllа sошiеi, Shigеllа flехпеri 1046, Sаlmопеllа tурhimurium 5710, Vibriо Nаg р 6078 - методом штриха на плотной питательной среде в чашках Петри.
Ампулу с культурой разводят 0,9% раствором натрия хлорида, из расчета содержимого 2-Ю8 аэрококков в lмл и засевают штрихом по диаметру чашки с МПА, который содержит 1 % глюкозы и 0,4 мг/мл калия йодида. После инкубации посевов в термостате при температуре (36±1)°C на протяжении 48 часов перпендикулярно выросшей культуре аэрококков подсевают петлей Генле культуру тест-штаммов. После 24-х часов инкубации при температуре (36±1)°C зоны задержки роста тест-культуры измеряют от края штриха к началу роста тест-культуры.
Зоны угнетения роста тест-штаммов должны быть не меньше чем 7 мм для Рsеudоmопаs аегаgiпоsа 1312 и не меньше чем 15 мм для всех других культур, в сравнении с 5 мм и 10 мм прототипа.
Оксидазная активность. С антагонистической активностью штама коррелирует показатель оксидазной активности, который определяют по способности аэрококков изменять окраску крахмала в составе питательной среды с йодидом калия. Диаметр посинения крахмала вокруг штриха Аеrососсus viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) составляет не меньше 30 мм.
Способность к адгезии iп vitrо изучали на переживающей культуре эпителиоцитов кишечника кроликов и белых беспородных мышей по общепринятой методике. После часовой инкубации при 37° С культуры эпителиоцитов вместе с аэрококками штаммов Аеrососсus viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) и Аеrососсus viridапs 167 (р.н. ИМВ B-7041) готовили препараты для электронной микроскопии. Степень адгезии оценивали по мазкам, окрашенным 1% раствором тулоидинового синего. При этом определяли количество клеток, которые находятся в состоянии контакта с аэрококками, и интактных. Результаты приведены в таблице. Таблица 1
Адсорбционная способность штаммов Аеrососсus viridапs 167K
(р.н. ИМВ B-7069) и Аеrососсus viridапs 167( р.н. ИМВ B-7041) к энтероцитам кроликов и белых мышей
Figure imgf000008_0001
В соответствии с приведенными данными оба штамма аэрококков одинаково активно адсорбировались на энтероцитах как кролика, так и мыши, но заявленный штамм демонстрировал более высокую эффективность в сравнении с прототипом.
Влияние на фагоцитарную активность полиморфноядерных нейтрофилов периферической крови. Продуктами метаболизма А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) являются вещества, необходимые в процессе осуществления фагоцитарной функции - перекись водорода, супероксиддисмутаза, лизоцимоподобные вещества, токсичные формы кислорода, а также гидроксильные радикалы.
Активность нейтрофильных гранулоцитов оценивали по фагоцитарной активностьи и индексом завершения фагоцитоза - килингом, что наиболее полно характеризует функциональную способность нейтрофильных фагоцитов за счет образования гранулоцитами токсичных форм кислорода, а также гидроксильного радикала. Супероксиддисмутаза связывает этот кислород с водородом, образовывая перекись водорода. Процессы перекисного окисления ведут к повреждению мембран микроорганизмов, предопределяя их гибель.
Проведены две серии опытов iп vitrо с целью выяснения влияния ферментного комплекса А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) на фагоцитарную функцию полиморфноядерных нейтрофилов. Результаты представлены в таблицах.
Таблица 2
Влияние ферментного комплекса А. viridапs 167K
(р.н. ИМВ B-7069) в дозе 0,01 мл на фагоцитарную активность полиморфноядерных нейтрофилов в эксперименте iп vitrо (M ±m)
Figure imgf000009_0001
Примечание: *p<0,05;
ФА - фагоцитарная активность;
ФЧ - фагоцитарное число;
ФИ - фагоцитарный индекс;
ИЗФ - отношение ФЧ через 30 мин и ФЧ через 2 часа. Как свидетельствуют приведенные данные, в 4 из 5-ти проведенных опытов отмеченное статистически достоверное повышение индекса завершения фагоцитоза при добавлении 0,01 мл ферментного комплекса А. viridапs ИМВ B-7069.
Таблица 3
Влияние ферментного комплекса А. viridапs 167K
(р.н. ИМВ B-7069) в дозе 0,02 мл на фагоцитарную активность полиморфноядерных нейтрофилов в эксперименте iп vitrо (M ±m)
Figure imgf000010_0001
Примечание: *p<0,05;
ФА - фагоцитарная активность;
ФЧ - фагоцитарное число;
ФИ - фагоцитарный индекс;
ИЗФ - отношение ФЧ через 30 мин и ФЧ через 2 часа.
Сравнивая данные, приведенные в таблицах 2 и 3, можно сделать вывод о дозозависимом стимулирующем влиянии ферментного комплекса А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) на важнейшую, конечную стадию фагоцитоза - килинг. Доза 0,01 мл стимулирует килинг, не угнетая функции адгезии и поглощения.
Еще одним объектом данного изобретения является лечебное средство Виабак (Viаbас), содержащее терапевтически эффективное количество лиофилизованых вегетативных клеток штамма А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) в составе биоконцентрата. Согласно с обычной фармацевтической практикой, биоконцентрат преимущественно вводят в состав композиции совместно с одним или несколькими носителями (разнообразные лечебные, вкусовые, пищевые добавки и наполнители). Перечни пригодных для этой цели компонентов хорошо известны осведомленным специалистам, как и способы их смешивания. В частности, ими могут быть молочный сахар, фруктовый пектин, поливинилпиролидон, производные целлюлозы, стеарат магния, витамины, фруктовые порошки и т.п.
Для перорального употребления биоконцентрат в соответствии с этим изобретением может быть введен в состав капсул, таблеток или других пероральных врачебных форм. Для внешнего применения он может использоваться в виде мазей, лечебно- профилактических зубных паст и т.п.
Приведенные дальше примеры иллюстрируют изобретение, но никаким образом не ограничивают его.
Пример 1. Получение лиофилизированного биоконцентрата А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) (в дальнейшем биоконцентрат).
Оптимальный рост аэрококков наблюдается через 24 часа при (36 ± I)0C на мясо-пептонном агаре.
Состав среды для культивирования штамма следующий: агар микробиологичний ГОСТ 17206-84 22г; глюкоза ГОСТ 6038-79 40г; пептон сухой ферментативный для бактериологического назначения ГОСТ 13805-76 Юг; вода дистиллированная ГОСТ 6709-72 lл.
Для приготавливания среды дистиллированную воду смешивают с пептоном и агаром. Смесь выдерживают 20-30 минут при комнатной температуре для набухания агара и кипятят 15-20 минут до его полного расплавления. Далее 30%- ным раствором уксусной кислоты устанавливают pH=3,8. После часового отстаивания среду декантируют через ватно-марлевый фильтр и добавляют глюкозу, после чего стерилизуют при температуре (ПО ± I)0C на протяжении 30 минут.
На питательной среде вырастают колонии диаметром 0,5-2,0 мм в виде плоских бесцветных дисков. После инкубации микробную массу смывают в асептических условиях путем добавления водного раствора стабилизатора. Проводят бактериоскопический и бактериологический контроль собранной микробной суспензии и лиофилизируют ее. .
Высушенную суспензию измельчают и расфасовывают в стерильную тару и герметизируют.
B I r биоконцентрата помещается до 5x1010 жизнеспособных клеток.
Полученный биоконцентрат представляет собой смесь лиофильно высушенных живых вегетативных клеток бактерии; стабилизатора, например желатины и сахарозы; сухих компонентов питательной среды и биологически активных веществ, которые продуцируются штаммом.
В дальнейшем полученный биоконцентрат может использоваться сам по себе или в составе лечебного средства для профилактики и лечения разнообразных болезненных состояний.
Для культивирования А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) также можно использовать жидкую питательную среду, в частности МПБ с азото-амиачной добавкой (не менее чем 12 масс. 0Io). Хороший урожай культуры получают, если эта среда дополнительно содержит Tween-80 и никотиновую кислоту. Коррекцию рН раствора осуществляют с помощью 10%-нoгo аммиака и доводят до значения 6,2-6,4.
Для промышленного производства наиболее привлекательным для выращивания А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) является использование грибного отвара, что объясняется его умеренной ценой и промышленно значащим выходом готового продукта. Это в конечном счете отразится на удешевлении лечебного средства на основе А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) .
Пример 2. Использование биоконцентрата А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) для получения лечебного средства в форме таблетки.
Смешивают 20,0 г глюкозы, 20,0 г яблочного пектина и 32,0 г лактозы. Полученную смесь увлажняют раствором ячменно- солодового экстракта (4,5 г экстракта и 1,2 г воды), гранулируют, подсушивают, снова гранулируют, прибавляют Ir биоконцентрата, полученного в Примере 1, 1,3 г аскорбиновой кислоты и 0,9 г стеарата кальция. Смесь тщательно перемешивают и таблетируют, получая приятные на вкус таблетки, которые содержат 4,2 х 108 клеток А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) .
В дальнейшем полученные таблетки можно покрыть фармацевтично пригодным пленочным покрытием или использовать для получения порошка или микрогранул, которыми можно заполнить желатиновые капсулы.
Пример 3. Клиническое применение А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) .
3.1. Для оценки лечебных свойств А. viridапs 167K
(р.н. ИМВ B-7069) проведен эксперимент с моделированием дисбактериоза у крыс. Исследование, количественного и качественного состава микрофлоры желудка, тонкого и толстого кишечника крыс проводили общепризнанными методами.
В результате применения биоконцентрата А. viridапs 167K
(р.н. ИМВ B-7069) в составе корма отмечены восстановление нормального ценоза кишечника подопытных крыс, уменьшение количества условнопатогенных бактерий в толстой кишке, кишечная палочка с неизменными ферментативными свойствами высеивалась в 105-106, энтерококки в 106, практически отсутствовали гемолитические формы бактерий, спорообразующие формы бактерий высеивались как у контрольных животных, так и у тех, которые получали обычный корм (таблица 4). •
Таким образом, биоконцентрат А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) положительно влиял на показатели микрофлоры желудка, тонкого и толстого кишечника подопытных животных. Показатели микрофлоры у животных, которые получали исследуемый биоконцентрат как биологически активную добавку к корму существенным образом отличались от таких же в контроле, что позволяет сделать вывод о его благоприятном действии на количественный и качественный состав микрофлоры желудочно- кишечного тракта.
Таблица 4
Показатели состава микрофлоры у крыс из расчета на Ir фекалий после 6 месяцев эксперимента
Figure imgf000015_0001
Примечание;
* и ** разность статистически достоверная при p>0,05
* между животными, которые получают спецкорм и интактными животными
** между животными, которые получают спецкорм и спецкорм с Б АД.
3.2. Применение биоконцентрата А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) для лечения стоматологических инфекций.
При лечении зубов с хроническим периодонтитом в стадии ремиссии после медикаментозной и механической обработки корневых каналов и раскрытия верхушечных отверстий в корневых каналах оставляли турунды с раствором биоконцентрата [2 дозы биoкoнцeнтpaт2 (4,2 х 108 клеток), 2 мл дистиллированной воды, 0,5 мл димексида] под герметичной повязкой. Через двое суток при отсутствии клинических симптомов корневые каналы пломбировали пастоподобными материалами.
Лечение острых и хронических периодонтитов в стадии обострения проходило следующим образом. В первую посещаемость раскрывались кариозные пустоты, проводилась механическая и медикаментозная обработка корневых каналов. На последнем этапе корневые каналы промывались раствором биоконцентрата. Зуб оставляли открытым с целью оттока эксудата. Через трое суток при отсутствии симптомов воспаления в каналах оставляли турунды с раствором биоконцентрата под герметичной повязкой. Через 2-3 суток при отсутствии воспаления проводили пломбирование.
Проведенные исследования показали высокую эффективность биоконцентрата при лечении периодонтитов зубов: 138 зубов с хроническим периодонтитом в стадии ремиссии были вылечены за две посещаемости, 150 зубов с острым и хроническим периодонтитом в стадии обострения были вылечены за три посещения и лишь 12 зубов, рентгенограмма которых показала наличие гранулемы величиной с 0,5 на 0,5 см, были вылечены после четырех посещений.
3.3. Применение биоконцентрата А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) для лечения инфекций кожных покровов.
Биоконцентрат А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) использовался в отделении патологии новорожденных при лечении грудных детей с опрелостями третьей степени с некротическими изменениями. После орошения пораженных участков раствором биоконцентрата отмечалось быстрое заживление с дальнейшей эпителизацией без применения стереотипных методов лечения.
Продолжительность лечения составила семь суток, то есть в два раза быстрее, чем при использовании традиционных методов.
3.4. Лечение дисбактериозов.
Больным на дисбактериоз, вызванный такими возбудителями, как Stарh. аurеus, Сitrоbасtеr, Кlеbsiеllа + Рrоtеуs vulgаris, Еtеrоbасtеr назначались препараты А. viridапs 167K
(р.н. ИМВ B-7069) для внутреннего применения в количествах, которые зависели от тяжести состояния больного. Во всех случаях положительный эффект от такого лечения наступал уже на вторые сутки.
3.5. Лечение острой дизентерии, эшерихиоза и сальмонеллеза.
Больным на фоне традиционной терапии с целью купирувания повреждений слизистой толстой кишки и дисбиоза кишечника назначались препараты А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069). Препараты вводили внутренне и ректально в дозах, которые зависели от тяжести течения болезни. Результаты положительные.
3.6. Использование А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) в гинекологии также дало хорошие результаты. Больным в возрасте от 4 до 17 лет с внутревагинальными дрожжевыми, хламидиозными и трихомонадными инфекциями назначали спринцевание раствором биоконцентрата дважды в день. После курса лечения в подавляющем большинстве результаты были удовлетворительными - мазки второй и третьей степени чистоты.
Штамм А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069), как и лечебное средство Виабак (Viаbас) на основе лиофилизированных вегетативных клеток штамма А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069), проявляет антимикробную активность и является эффективным для лечения инфекционных поражений разной локализации.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Штамм А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069), который проявляет противомикробную активность.
2. Лечебное средство Виабак (Viаbас), отличающееся тем, что содержит терапевтически эффективное количество лиофилизированных вегетативных клеток А. viridапs 167K (р.н. ИМВ B-7069) и фармацевтично приемлемый носитель.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
PCT/UA2005/000003 2004-09-10 2005-01-17 Souche de aerococcus viridans n°167k a activite antimicrobienne et medicament viabak fabrique sur la base de celle-ci WO2006028428A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA20040907406 2004-09-10
UA20040907406A UA72065C2 (en) 2004-09-10 2004-09-10 Strain aerococcus viridans 167k imb b-7069 with antibacterial activity and "viabac" preparation comprising this strain

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006028428A1 true WO2006028428A1 (fr) 2006-03-16

Family

ID=34618247

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/UA2005/000003 WO2006028428A1 (fr) 2004-09-10 2005-01-17 Souche de aerococcus viridans n°167k a activite antimicrobienne et medicament viabak fabrique sur la base de celle-ci

Country Status (3)

Country Link
RU (1) RU2292390C2 (ru)
UA (1) UA72065C2 (ru)
WO (1) WO2006028428A1 (ru)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3686396A (en) * 1963-09-19 1972-08-22 Rhone Poulenc Sa The antibiotic 11837 r.p. and process for its manufacture using streptomyces viridans
US4275161A (en) * 1978-07-20 1981-06-23 Toyo Jozo Kabushiki Kaisha Process for the manufacture of L-α-glycerophosphate oxidase
SU1406156A1 (ru) * 1986-07-16 1988-06-30 Днепропетровский медицинский институт Штамм бактерий AeRococcUS VIRIDaNS дл получени клонов с оксидазной и редуктазной активностью
JPH04211017A (ja) * 1990-02-16 1992-08-03 Lab Om Sa 皮膚炎治療薬

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3686396A (en) * 1963-09-19 1972-08-22 Rhone Poulenc Sa The antibiotic 11837 r.p. and process for its manufacture using streptomyces viridans
US4275161A (en) * 1978-07-20 1981-06-23 Toyo Jozo Kabushiki Kaisha Process for the manufacture of L-α-glycerophosphate oxidase
SU1406156A1 (ru) * 1986-07-16 1988-06-30 Днепропетровский медицинский институт Штамм бактерий AeRococcUS VIRIDaNS дл получени клонов с оксидазной и редуктазной активностью
JPH04211017A (ja) * 1990-02-16 1992-08-03 Lab Om Sa 皮膚炎治療薬

Also Published As

Publication number Publication date
RU2005102681A (ru) 2006-07-10
RU2292390C2 (ru) 2007-01-27
UA72065C2 (en) 2005-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11083761B2 (en) High potency stable formulations of vaginal Lactobacillus
CN110777087B (zh) 一种约氏乳杆菌及其应用
CN104306981B (zh) 抗幽门螺杆菌活性抗菌肽胃黏膜纳米粒给药系统制备方法
US11628192B2 (en) Bacteroides fragilis for relieving endotoxin infection and application thereof
CN111084831A (zh) 一种抑制阴道致病菌的抑菌组合物及其应用
CN113832062A (zh) 一种副干酪乳杆菌lc86及其在预防或治疗龋齿和牙周炎上的应用
WO2013029297A1 (zh) 广藿香醇在制备抗幽门螺旋杆菌的药物中的应用
JP2961182B2 (ja) クロストリジウム・ディフィシル下痢症および偽膜性大腸炎の予防ならびに治療用医薬組成物
CN117143783B (zh) 一种唾液联合乳杆菌vb330及其应用
RU2264453C2 (ru) Биопрепарат &#34;ирилис&#34; ветеринарного назначения
CN111905058A (zh) 一种用于皮肤黏膜护理和伤口修复的药物组合物及其制备方法
RU2292390C2 (ru) ШТАММ Aerococcus viridans N167K, КОТОРЫЙ ПРОЯВЛЯЕТ ПРОТИВОМИКРОБНУЮ АКТИВНОСТЬ, И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
US11419905B2 (en) Bacteroides ovatus for relieving endotoxin infection and application thereof
CN114164157A (zh) 用以抑制发炎缓解牙龈肿痛改善口腔菌群平衡的唾液乳杆菌菌株zk-88
KR20180070484A (ko) 안정성이 증진된 유산균 및 이의 제조방법
CN114432227A (zh) 一种含益生菌的口腔护理液
JP3390613B2 (ja) ビフィズス因子の活性増強・安定化剤
WO2006115430A1 (fr) Preparation biologique irilis a base de bacteries du genre bacillus contenant bacillus subtilis et bacillus licheniformis
RU2454238C1 (ru) Биопрепарат балис для профилактики и лечения инфекционных болезней
CN117402794B (zh) 一种加氏乳杆菌及其应用
CN103233059A (zh) 一种预防与消除优秀冰雪运动员体外细胞培养念珠菌污染的方法
RU46935U1 (ru) Лечебно-профилактический препарат биосептин
CN116479056A (zh) 一种肽素、肽素精华物及在治疗皮肤烧、烫伤药物方面的应用
CN117070413A (zh) 一株副干酪乳杆菌by5及其应用
CN103536561A (zh) 注射用舒巴坦钠组合物冻干粉针

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase