WO2006011510A1 - 試料採取具 - Google Patents

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WO2006011510A1
WO2006011510A1 PCT/JP2005/013729 JP2005013729W WO2006011510A1 WO 2006011510 A1 WO2006011510 A1 WO 2006011510A1 JP 2005013729 W JP2005013729 W JP 2005013729W WO 2006011510 A1 WO2006011510 A1 WO 2006011510A1
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WO
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sampling
gel
sample
collection
spot
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PCT/JP2005/013729
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English (en)
French (fr)
Inventor
Takashi Usui
Original Assignee
Nikkyo Technos Co., Ltd.
Eisai R & D Management Co., Ltd.
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Publication date
Application filed by Nikkyo Technos Co., Ltd., Eisai R & D Management Co., Ltd. filed Critical Nikkyo Technos Co., Ltd.
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
    • G01N27/44739—Collecting the separated zones, e.g. blotting to a membrane or punching of gel spots
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/02—Devices for withdrawing samples
    • G01N1/04—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting
    • G01N1/08—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting involving an extracting tool, e.g. core bit

Definitions

  • the present invention relates to a sample collecting tool for collecting a micro site containing a biomolecule from a carrier such as a gel.
  • proteome analysis is attracting attention.
  • proteomic analysis comprehensive analysis of proteins contained in cells constituting a living body is performed, and in recent years, protein separation by electrophoresis and protein profiling using mass spectrometry are frequently performed.
  • a biological sample prepared for electrophoresis is separated into bands one-dimensionally or two-dimensionally on a polyatrylamide gel, followed by staining and image analysis. And cut out the bands or spots of each protein based on the results.
  • a sample containing a digested peptide fragment as a specimen sample for mass spectrometry is collected using a solution reagent or the like. Then, mass analysis of the peptide fragment was performed, and the theoretical mass spectrum of the peptide fragment predicted from the database was compared with the pattern of the actually measured mass spectrum using a search engine for protein identification. Identify the previous protein.
  • Non-patent literature 1 Pro Phoenix Co., Ltd. website [Searched on June 30, 2004], Ing LTRL: http://www.prophoenix.co.jp/ contents 25.ntm
  • Non-Patent Document 2 Shimadzu Corporation website [Search June 30, 2004], Internet ⁇ Net ⁇ URL: http://www.shimadzu.co.jp/news/press/ 020715.html>
  • the present invention has been made in view of intensive circumstances, and it is possible to easily and reproducibly cut out a target minute site containing a biomolecule from a carrier such as a gel.
  • the purpose is to provide a sampling tool that can increase the recovery rate of the target substance from the plant.
  • a sample collecting tool includes a substantially cylindrical body, a collecting unit from which a sample is collected, and an open end opened from the collecting unit toward the tip.
  • the body part and the collection part are connected via a through hole having a diameter smaller than the outermost diameter of the collection part.
  • the sample collecting tool has a substantially cylindrical body, an open end that opens to the tip, and is connected to communicate with the body.
  • a sampling portion having a diameter smaller than the outermost diameter of the sampling portion at a connecting portion (communication portion) between the trunk portion and the sampling portion.
  • a through hole is formed.
  • the distal end of the collecting part connected to the trunk part through the through hole is an open end, for example, a gel or the like containing a biomolecule such as a protein.
  • a gel or the like containing a biomolecule such as a protein.
  • the carrier sample filled in the collection part is separated from the surrounding site force.
  • the gel in the corresponding part can be simplified by pulling the sample-collecting tool away from the gel while securely holding the gel in the sampling part. It is cut out.
  • the means for making the inside of the body part negative is not particularly limited.
  • a pipette cylinder or the like capable of sucking air in the body part may be attached to the other end of the body part.
  • the opening size and the opening shape of the open end are set in advance so as to match the band width and spot size of the biomolecule in the gel as the carrier sample, for example, it is intended. It may be possible to prevent cutting out of the extra portion of the carrier other than the band or spot.
  • the sample collecting tool according to the present invention has a so-called two-stage structure in which the body portion and the collecting portion are connected to each other, and the through force provided in the connecting portion (communication portion) between them is also provided. Since it has a diameter smaller than the outermost diameter of the sampling part, it is easy to prevent a carrier sample such as a cut gel from moving and flowing from the sampling part to the trunk part.
  • the sampling is performed when the inside of the body portion is under negative pressure.
  • the carrier sample filled in the internal space of the part is hardly sucked into the body part. Therefore, it is preferable to form the connection part between the body part and the collection part so that the carrier sample does not flow into the body part from the collection part by adjusting the shape and diameter of the through hole.
  • the size and number of the through-holes can be set as appropriate so that the carrier sample does not easily flow into the barrel according to the type and properties of the carrier sample, the pressure in the barrel during negative pressure, and the like.
  • the sampling part has a substantially cup shape
  • the trunk part has one end smaller than the outer diameter of the sampling part and is connected to the bottom wall of the sampling part. More preferred to have been Yes.
  • the cross-sectional shape of the sampling part is not limited, and may be, for example, a square, a polygon, or a circle. More specifically, a material having a rectangular cross section can be mentioned.
  • the sampling part since the sampling part has a box-type structure, the carrier sample is held as it is, and the cut carrier sample is discharged (discharged) by the sampling part force. ). Furthermore, since the sampling part has a simple shape as described above, it is easy to form the combing force to match the size, shape and volume of the band or spot on the carrier. Furthermore, it is easy to miniaturize the sampling tool by forming the body part into a 'tapered' shape so that one end side is thinner than the other end side, and a narrow band or minute spot is cut out. The operability and operability are improved.
  • the body portion has a notch portion or a notch portion formed on the peripheral wall.
  • the notch or the notch is fixed to a gripping tool or the like that can be locked or fitted with them.
  • the body part and thus the sampling tool can be turned in the circumferential direction so that the orientation can always be constant.
  • the sampling part does not rotate in the circumferential direction, even when the sampling part is non-circular in cross section, its orientation with respect to the target band or spot on the carrier can be kept constant, and the sampling target Can be cut out more reliably.
  • the sample collection tool since the sample collection tool is fixed, the overall operability and handling when the sample collection tool is attached to a pipette cylinder etc. is improved.
  • the thickness force of the peripheral wall of the sampling part is 0.2 mm or less. From the viewpoint of easily imparting strength, 0.05 to 0.2 mm is more preferable.
  • sample collecting device is particularly useful when the sample is a gel (in the form of a gel).
  • a target band or spot which is a micro site
  • a carrier sample such as a gel containing biomolecules.
  • It also becomes possible to increase the recovery rate of substances.
  • it is possible to suppress variations in measured values in subsequent analysis processing, and to provide highly reliable analysis evaluation.
  • the body part and the collection part are connected through a through-hole having a diameter smaller than the outermost diameter of the collection part, it is easy to suck a carrier sample such as a gel from the collection part into the body part. Can be prevented.
  • FIGS. 1A to 1D are schematic views showing a preferred embodiment of a sample collecting tool according to the present invention, which are a front view, a top view, a bottom view, and a side view, respectively.
  • the chip 1 (sample collecting tool) is obtained by providing a rectangular cup-shaped sampling portion 20 at one end 10a of the barrel 10 having a substantially cylindrical shape.
  • the body portion 10 is composed of a base portion 11, a middle portion 12, and a tip portion 13. Each of the body portions 10 is tapered so that the diameter gradually decreases from the other end 10b to the one end 10a. Yes.
  • the base portion 11 has a diameter larger than that of the middle portion 12, and for example, a pipette (not shown) is detachably fitted thereto.
  • the base 11 is provided with a stagger 14 slightly closer to the inside from the other end 10b, to which the tip of the pipette abuts. Further, two notches 15 and 15 are formed on the end periphery of the base portion 11 on the middle portion 12 side so as to face each other.
  • the middle portion 12 is a portion that connects the base portion 11 and the distal end portion 13 and has a diameter smaller than that of the base portion 11 and is relatively long.
  • the tip portion 13 is formed in a relatively short length so as to taper at a steeper angle than the base portion 11 and the middle portion 12.
  • the tip portion 13 and the sampling portion 20 are separated by a bottom wall 21 (upper wall in the figure) of the sampling portion 20! / Speak, but the bottom wall 21 has a pore H (through hole) drilled. Thereby, the internal space of the trunk portion 10 and the internal space of the sampling portion 20 communicate with each other.
  • the opening size of the open end 20a of the collection unit 20 is not particularly limited, but it is desirable to set the size to match the size of the band or spot of a biological sample such as a protein to be described later. .
  • a biological sample such as a protein to be described later.
  • one side of the cross section is about 1 to 2 mm.
  • the thickness of the peripheral wall of the sampling part 20 is not particularly limited, but if a suitable strength is ensured, a specific dimension that is preferably as thin as possible is, for example, about 0.05 to 0.2 mm. . In this way, when the sample to be collected is a carrier sample such as a gel, the gel is easily sheared sharply by the peripheral wall that does not crush the gel.
  • the diameter of the pores H provided in the collecting part 20 is not particularly limited, but when the inside of the body part 10 is set to a negative pressure as described later, the gel filled in the collecting part 20 is contained in the body part 10. It is desirable to make it so that it is not sucked into.
  • Specific diameters of the pores H include, for example, about 0.1 to 1. Omm.
  • a sheet-like gel that is formed on a predetermined substrate and that has been subjected to electrophoresis and then has a protein band or spot identified by staining and image analysis is prepared.
  • the tip 1 is attached to the pipette, and the sampling part 20 of the tip 1 is pressed from above the target protein band or spot so as to pierce the gel.
  • it is preferably fixed to a gripping tool or the like (not shown) that can be locked or fitted to the notch 15.
  • the sampling part 20 can always be in a constant orientation in the circumferential direction simply by locking or fitting the notch part 15 to the gripping tool.
  • the collection unit 20 When the collection unit 20 is pressed against the target protein band or spot, the internal space of the collection unit 20 is filled with the gel at that site. At this time, since the peripheral wall of the collection unit 20 pierces the gel and cuts the gel, the gel filled in the collection unit 20 is separated from the surrounding region. Next, the pipette is operated in this state, and the air in the body part 10 is sucked to make the inside negative pressure. Then, the body 10 and the collection unit 20 communicate with each other through the pores H, so that the gel filled in the collection unit 20 is pulled toward the body 10 and is securely held in the chip 1.
  • the gel in the collection unit 20 is pulled away from the substrate, and the target protein spot is cut out from the gel sheet.
  • the gel may be held more securely by further sucking air in the body portion 10.
  • the gel cut out in this manner is easily discharged from the collection part 20 to the outside by making the inside of the body part 10 positive by pipetting.
  • the gel is collected by pressing the chip 1 against the target protein band or spot without transferring the gel sheet to another location such as the substrate cover.
  • the band or spot can be cut out very simply by filling the inside, pipetting and pulling it out as it is.
  • the barrel portion 10 and the sampling portion 20 have a two-stage structure, the gel in the sampling portion 20 hardly flows into the barrel portion 10 as will be described later.
  • the cut-out gel can be easily discharged (discharged) from the collection unit 20.
  • the amount of gel to be cut out is determined by the internal volume of the collection unit 20, and is always a constant amount, and therefore the reproducibility of the cut out amount is extremely excellent. Furthermore, by setting the opening size shape of the open end 20a of the sampling part 20 to substantially match the size and shape of the protein band or spot, unnecessary gel other than the target band or spot can be sampled at the same time. Can be prevented. As a result, the recovery rate of the target substance from the band or spot can be sufficiently increased.
  • the body part 10 and the collection part 20 are communicated with each other through the pores H, it becomes easier to prevent the gel filled in the collection part 20 from being sucked into the body part 10 side. . Therefore, the gel containing the cut-out band and spot part is more securely held in the collection part 20. And all of them can be easily discharged to the outside of the sampling unit 20.
  • the gel retainability is extremely excellent as described above, for example, a chemical solution or a solution such as a reagent is previously sucked into the body 10 before cutting out the gel, and then the gel is cut out and collected. If held in the part 20, the cut out gel together with the chemical solution or solution can be discharged together from the collection part 20 into the same container or the like.
  • the solution is collected in the barrel 10 and the gel is reliably collected in the collection unit 20 by performing a suction operation with a pipette equipped with the tip 1. Can do.
  • the solution and gel can be discharged together in the same container etc. by the pipette discharging operation. Even in such a case, the recovery rate of the gel can be sufficiently increased.
  • the collection part 20 has a cup shape, that is, a box-shaped structure, it is easy to hold the gel in a state of being cut off. This also makes it possible to discharge the cut carrier 20 very easily. Since the sampling part 20 has a simple shape, it is easy to form, and it is easy to match the size, shape and volume of the protein band and spot. Since the body 10 is tapered so that one end 10a is thinner than the other end 10b, chip 1 can be easily miniaturized and handled when cutting out minute protein bands and spots. And operability can be improved.
  • the tip 1 when the notch 15 is locked or fitted to the gripping tool, the tip 1 does not rotate in the circumferential direction, so that the sampling part is always pressed against the gel in a fixed orientation.
  • the present invention is not limited to the above-described embodiment, and various modifications can be made without changing the gist thereof.
  • the body 10 of the chip 1 may have a rectangular tube shape, and the sampling unit 20 may have a cup shape with a circular cross section.
  • the body 10 does not necessarily have to be tapered.
  • the notch 15 may be provided at only one place, or may be provided at three or more places.
  • the notch 15 may be a narrower notch, that is, a notch.
  • applicable cutting targets are not limited to protein bands and spots, but may be DNA bands, for example! /. Industrial applicability
  • the sample collection tool includes the body portion and the collection portion connected via the through-hole, so that a target band or spot is obtained from a carrier sample such as a gel containing biomolecules. It can function as a so-called 'gel picker' that can be cut out easily and reproducibly, and the recovery rate of the target substance from the gel can be increased. Therefore, it can be widely used for analysis of carriers containing biomolecules and sample preparation therefor.
  • FIG. 1] (A) to (D) are schematic views showing a preferred embodiment of a sampling tool according to the present invention.

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Description

明 細 書
試料採取具
技術分野
[0001] 本発明は、ゲル等の担体から生体分子を含む微小部位を採取するための試料採 取具に関する。
背景技術
[0002] ポストゲノム時代の重要な研究として、プロテオーム解析が注目されて 、る。プロテ オーム解析では、生体を構成する細胞内に含まれるタンパク質の網羅的な解析が行 われ、近年、電気泳動によるタンパク質分離、及び質量分析を用いたタンパク質プロ フアイリングが頻繁に行われて 、る。
[0003] 代表的な解析手順としては、まず、電気泳動用に調製した生体試料を、ポリアタリ ルアミドゲル上に一次元的にバンドに分離させ又は二次元的にスポットに分離させ、 染色、画像解析を行い、その結果に基づいて各タンパク質のバンド又はスポットの切 り出しを行う。次に、切り出した試料に対してゲル内タンパク質酵素消化を施した後、 溶液試薬等を用い、質量分析用の被検体試料としての消化ペプチド断片を含むサ ンプルを回収する。それから、ペプチド断片の質量分析を実施し、データベースから 予想されるペプチド断片の理論上の質量スペクトルと、実測された質量スペクトルの ノ ターンとを、タンパク質同定用検索エンジンを用いて比較照合し、消化前のタンパ ク質を同定する。
[0004] ここで、ゲノレから目的のバンドやスポットを得るには、力ミソリやメスの刃を用いて手 動で切り抜く方法 (例えば、非特許文献 1参照)、質量分析用自動前処理装置を用い る方法 (例えば、非特許文献 2参照)等が挙げられる。
[0005] また、従来から、 DNA等のポリヌクレオチド解析では、電気泳動によりゲル上に一 次元的にバンドに分離させ、各バンドの切り出しを行い、そうして得られた試料が種 々の解析に用いられて 、る。
非特許文献 1：株式会社プロフェニックス社ホームページ [平成 16年 6月 30日検索] 、イング ~~ ット LTRL： http://www.prophoenix.co.jp/ contents 25.ntm 非特許文献 2 :株式会社島津製作所ホームページ [平成 16年 6月 30日検索]、インタ ~~ネット < URL： http://www.shimadzu.co.jp/ news/ press/ 020715.html >
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0006] しかし、力ミソリやメスの刃を用いて手動でゲルを切り抜く方法は手間が掛かり、殊に 、保持板上に一定の厚さを有して一層に形成されたゲルを、ー且、切り抜き易い例え ば柔軟なシート上に移し替えて力 切り抜く必要がある場合には、操作が一層煩雑と なってしまう。また、それば力りではなぐクロスコンタミネーシヨンを防ぐために、その 都度力ミソリやメスの刃を清浄する必要がある。
[0007] さらに、バンドやスポットからの目的物質の回収率を高めるには、所望な部位周辺 の余分なゲルを極力排除する必要がある力 力ミソリやメスの刃を用いて手動で微小 な部位のみを切り抜くことは非常に困難である。さらに、操作者の技能によっては再 現性を十分に確保できないといった問題もある。一方、非特許文献 2に掲載されてい るような前処理装置は大掛力りで高価であり、バンドやスポットの切り出しを行うのによ り安価で簡便な方法が切望されていた。特に、試料数が少なかったり、目的のバンド やスポットの数量が少ないような場合にその傾向が顕著であった。
[0008] そこで、本発明は、力かる事情に鑑みてなされたものであり、ゲル等の担体から生 体分子が含まれる目的の微小部位を簡易に且つ再現性よく切り出すことができ、ゲ ルからの目的物質の回収率をも高めることが可能な試料採取具を提供することを目 的とする。
課題を解決するための手段
[0009] 上記課題を解決するために、本発明による試料採取具は、略筒状を成す胴部と、 試料が採取される採取部と、その採取部から先端に向かって開放された開放端とを 備えており、胴部と採取部とが、採取部の最外径よりも小さい径を有する貫通孔を介 して接続されたものである。
[0010] 換言すれば、本発明による試料採取具は、略筒状を成す胴部と、先端に向カゝつて 開放された開放端を有しており且つ胴部と連通するように接続された採取部とを備え 、その胴部と採取部との接続部位 (連通部）に、採取部の最外径よりも径が小さい貫 通孔が形成されたものである。
[0011] このように構成された試料採取具においては、胴部に貫通孔を介して接続された採 取部の先端が開放端とされ、例えばタンパク質等の生体分子が含まれるゲル等の担 体内のバンド又はスポットに採取部を埋め込むように押し当てることにより、採取部に よりゲル等の担体が切断されて採取部の内部空間に試料としての担体が充填される
。このとき、採取部の周壁が担体に言わば突き刺さるので、採取部内に充填された担 体試料はその周囲の部位力 分離される。この状態のまま、貫通孔によって採取部と 連通された胴部内を負圧にすれば、採取部内のゲルを確実に保持しつつ、試料採 取具をゲルから引き離すことによって当該部位のゲルが簡易に切り出される。なお、 胴部内を負圧にする手段は特に制限されず、例えば、胴部内の空気を吸引できるよ うなピペットゃシリンダ等を胴部の他方端に取り付ければよい。
[0012] このとき、開放端の開口寸法及び開口形状を、例えば、担体試料であるゲルにおけ る生体分子のバンド幅やスポットの大きさと合致するように予め設定しておけば、目的 とするバンドやスポット以外の余計な部分の担体を一緒に切り出してしまうことが抑止 され得る。
[0013] また、本発明による試料採取具は、胴部と採取部とが連結された言わば二段構造 を有しており、し力も、両者の接続部位 (連通部）に設けられた貫通孔カ 採取部の 最外径よりも小さい径を有するので、切り出したゲル等の担体試料が、採取部から胴 部へ移動 ·流入してしまうことを防止し易 、。
[0014] すなわち、胴部と採取部との接続部位に、採取部の最外径よりも径カ 、さい貫通孔 が設けられているので、胴部の内部が負圧とされたときに採取部の内部空間に充填 された担体試料が、胴部内にまで吸引され難くなる。よって、貫通孔の形状や径等を 調節する等して、胴部と前記採取部との接続部位を、担体試料が採取部から胴部内 に流入しないように形成すると好適である。この場合、貫通孔の大きさや数は、担体 試料の種類や性状、負圧時の胴部内の圧力等に応じて、担体試料が胴部内へ流動 し難 、ように適宜設定することができる。
[0015] より具体的には、採取部は、略カップ状を成しており、胴部は、その一方端が採取 部の外径よりも小さい径を有して採取部の底壁に接続されたものであると更に好まし い。なお、採取部の断面形状は限定されず、例えば方形でも多角形でもよく円形でも よい。更に具体的には、断面矩形状を成すものを挙げることができる。
[0016] このようにすれば、採取部が箱型構造とされるので、担体試料が切り取られたその ままの状態で保持され、またそれにより、切り取った担体試料を採取部力 より排出（ 吐出）し易くなる。さらに、このように採取部が簡易な形状なので成形し易ぐし力も担 体上のバンドやスポットの寸法、形状、容積に合致させ易くなる。またさらに、胴部を 一方端側が他方端側よりも細くなるように 、わゆる'先細り '状に形成して試料採取具 を小型化し易くなり、幅が細いバンドや微小なスポットを切り出し対象とするときの取 扱性及び操作性が向上される。
[0017] さらに、胴部は、周壁に切欠部又は切込部が形成されたものであるとより好ましい。
このような構成にすれば、試料採取具をゲル等の担体試料に押し当てるときに、切欠 部又は切込部を、それらと例えば係止又は嵌合可能な把持具等に固定することによ り、胴部ひ 、ては試料採取具を周方向にぉ 、て常に一定の向きとすることができる。
[0018] よって、採取部が周方向に回動しないので、採取部が断面非円形の場合であって も、担体上の目的のバンドやスポットに対するその配向を一定ィ匕でき、採取対象であ る微小部位をより確実に切り出し得る。また、試料採取具が固定されるので、試料採 取具をピペットゃシリンダ等に取り付けたときの全体の操作性及び取扱性が向上され る。
[0019] また、より具体的には、ゲル等の担体試料を鋭利にせん断できる観点から、採取部 の周壁の厚さ力 0. 2mm以下であるとより好ましぐさらに、採取部に必要な強度を 付与し易い観点から、 0. 05-0. 2mmであると更に好ましい。
[0020] またさらに、本発明による試料採取具は、試料がゲル (状のもの）であるときに特に 有用である。
発明の効果
[0021] 本発明の試料採取具によれば、生体分子が含まれるゲル等の担体試料から微小 部位である目的のバンドやスポットを簡易に且つ再現性よく切り出すことができ、担体 試料からの目的物質の回収率をも高めることが可能となる。また、その結果、その後 の分析処理における測定値のばらつきを抑えることができ、信頼性の高い解析評価 を実現できる。さらに、胴部と採取部とが、採取部の最外径よりも小径の貫通孔を介し て接続されるので、ゲル等の担体試料を採取部から胴部内へ吸 、込んでしまうことを 簡易に防止できる。
発明を実施するための最良の形態
[0022] 以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。なお、以下の実施の形態は 、本発明を説明するための例示であり、本発明をその実施の形態にのみ限定する趣 旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすること ができる。また、上下左右等の位置関係は、特に断らない限り、図面に示す位置関係 に基づくものとする。さらに、図面の寸法比率は、図示の比率に限られるものではな い。
[0023] 図 1 (A)〜 (D)は、本発明による試料採取具の好適な一実施形態を示す模式図で あり、それぞれ正面図、上面図、下面図、及び側面図である。チップ 1 (試料採取具） は、略円筒状を成す胴部 10の一方端 10aに方形カップ状の採取部 20が設けられた ものである。胴部 10は、基部 11、中位部 12、及び先端部 13から成っており、それぞ れ他方端 10bから一方端 10aに向力つて径が徐々に小さくなるように先細りに形成さ れている。基部 11は、中位部 12よりも太径とされており、例えばピペット（図示せず） が着脱自在に嵌合するようになつている。基部 11には、他方端 10bからやや内部寄 りにストツバ 14が設けられており、そこにピペットの先端が当接する。また、基部 11に おける中位部 12側の端周には、二つの切欠部 15, 15が互いに対向する位置に形 成されている。
[0024] 中位部 12は、基部 11と先端部 13とを連絡する部位であり、基部 11よりも径が細く 且つ比較的長尺とされている。先端部 13は、基部 11及び中位部 12よりも急角度で 先細りとなるように比較的短尺に形成されている。先端部 13と採取部 20とは、採取部 20の底壁 21 (図示上壁)で隔てられて!/ヽるが、底壁 21には細孔 H (貫通孔）が穿設 されており、これにより胴部 10の内部空間と採取部 20の内部空間とが連通している。
[0025] 採取部 20の開放端 20aの開口寸法は特に制限されないが、例えば後述するタン ノ ク質等の生体試料のバンドやスポットの大きさに合致するような寸法にすることが望 ましい。具体的な寸法としては、例えば、断面の一辺が l〜2mm程度が挙げられる。 また、採取部 20の周壁の厚さも特に制限されないが、適度の強度が担保されれば、 極力薄い方が好ましぐ具体的な寸法としては、例えば 0. 05-0. 2mm程度が挙げ られる。こうすれば、採取される試料がゲル等の担体試料であるときに、そのゲルを潰 してしまうことなぐ周壁によってゲルを鋭利にせん断し易くなる。さらに、採取部 20に 設けられた細孔 Hの径も特に制限されないが、後述するように胴部 10内を負圧にし たときに、採取部 20内に充填されたゲルが胴部 10内に吸い込まれない程度にする ことが望ましい。具体的な細孔 Hの径寸法としては、例えば 0. 1〜1. Omm程度が挙 げられる。
[0026] このチップ 1を用いて、電気泳動によってポリアクリルアミドゲル (担体;試料）上に分 離されたタンパク質の切り出しを行う手順の一例について説明する。なお、電気泳動 には、一次元電気泳動及び二次元電気泳動が代表的なものとして多用されているが 、チップ 1は、いずれの場合にも適用することができる。
[0027] まず、所定の基板上に形成されており、且つ、電気泳動が施された後、染色、画像 解析によってタンパク質バンド又はスポットが特定されたシート状のゲル (試料)を用 意する。次いで、チップ 1をピペットに装着し、目的のタンパク質バンド又はスポットの 上方から、チップ 1の採取部 20をゲルに突き刺すように押し当てる。この際、切欠部 1 5に係止又は嵌合可能な把持具等（図示せず）に固定することが好ましい。こうすれ ば、切欠部 15をその把持具に係止又は嵌合させるだけで、採取部 20を周方向にお いて常に一定の向きとすることができる。
[0028] こうして採取部 20を目的のタンパク質バンド又はスポットの部位に押し当てると、採 取部 20の内部空間にその部位のゲルが充填される。このとき、採取部 20の周壁がゲ ルに突き刺さりゲルを切り分けるので、採取部 20内に充填されたゲルはその周囲の 部位から分離される。次に、この状態でピペットを操作し、胴部 10内の空気を吸引し てその内部を負圧にする。そうすると、胴部 10と採取部 20とが細孔 Hによって連通し ているので、採取部 20内に充填されたゲルは胴部 10側に引っ張られて、チップ 1中 に確実に保持される。
[0029] そして、その状態のまま、チップ 1を上方に引き抜くことにより、採取部 20内のゲル が基板から引き離され、ゲルシートから目的のタンパク質スポットが切り出される。この とき、胴部 10内の空気を更に吸引してゲルをより確実に保持するようにしてもよい。そ うして切り出されたゲルは、ピペット操作によって胴部 10内を正圧にすることにより、 採取部 20から簡便に外部へ排出される。
[0030] このように構成されたチップ 1によれば、ゲルシートを基板カゝら別の場所に移載する ことなく、チップ 1を目的のタンパク質バンド又はスポットに押し当ててゲルを採取部 2 0内に充填させ、ピペット操作を行ってそのまま引き抜くだけで極めて簡便にバンド又 はスポットの切り出しを行うことができる。また、胴部 10と採取部 20との二段構造とし たので、後述するように採取部 20内のゲルが胴部 10に流入し難い。また、それにより 、切り出したゲルを採取部 20から簡易に排出（吐出）させ易 、。
[0031] ここで、従来のピペットチップをチップ 1の代わりに使用することも考えられる。しかし 、従来のピペットチップを、ゲル上のバンド又はスポットに押し当ててゲルの一部を採 取できたとしても、ピペットチップの先端でゲルを切り出す必要があるので、切り出し 操作を確実に行い難ぐまた、ゲルへの押し当て方やピペットチップ内の吸引の程度 又はタイミングによってゲルの切り出しにムラが出たりして、所望のバンド又はスポット を精度よく且つ再現性よく採取するのは困難である。
[0032] また、従来のピペットチップはチップ 1のような二段構造を有していないので、採取さ れたゲルがピペットチップ内を流動し易い欠点がある。こうなると、採取したゲルをピ ペットチップ力も排出するのも困難となってしまう。これに対し、上述の如ぐ本発明の チップ 1を用いればこれらの問題は解決される。
[0033] また、チップ 1では、切り出されるゲルの量は採取部 20の内容積によって決まり、常 に一定量であるので、切り出し量の再現性に極めて優れている。さらに、採取部 20の 開放端 20aの開口寸法形状を、タンパク質バンド又はスポットの大きさ及び形状と略 合致するようにしておくことにより、 目的のバンドやスポット以外の不要なゲルを同時 に採取してしまうことを防止できる。その結果、バンドやスポットからの目的物質の回 収率を十分に高めることができる。
[0034] またさらに、胴部 10と採取部 20とを細孔 Hで連通するようにしたので、採取部 20内 に充填されたゲルが胴部 10側へ吸い込まれることをより防止し易くなる。よって、切り 出されたバンドやスポット部位を含むゲルを採取部 20内に一層確実に保持しておく ことができ、且つ、その全てを採取部 20の外部へより排出させ易くなる。
[0035] さらにまた、このようにゲルの保持性に極めて優れるので、例えば、ゲルの切り出し 前に胴部 10内に試薬等の薬液や溶液を予め吸入しておき、その後、ゲルを切り出し て採取部 20に保持させれば、その薬液や溶液と共に、切り出したゲルを採取部 20か ら同一の容器等に一緒に排出させることができる。或いは、ゲルが溶液中に存在する ような場合でも、チップ 1を装着したピペットで吸引操作をすることにより、胴部 10内に 溶液を回収すると共に採取部 20内にゲルを確実に回収することができる。そして、ピ ペットの排出操作によって、同一の容器等に溶液とゲルを一緒に排出させることがで きる。このような場合でも、ゲルの回収率を十分に高めることが可能となる。
[0036] さらにまた、採取部 20がカップ状を成し、言わば箱型構造とされているので、ゲルを 切り取られたままの状態で保持し易い。またそれにより、切り取った担体を採取部 20 力も極めて簡易に排出させることができる。カロえて、採取部 20が単純な形状であるの で成形し易ぐまた、タンパク質バンドやスポットの寸法、形状、容積に合致させ易い 。カロえて、胴部 10を一方端 10a側が他方端 10b側よりも細くなるように先細り状に形 成したので、チップ 1を小型化し易くなり、微小なタンパク質バンドやスポットを切り出 す際の取扱性及び操作性を向上できる。
[0037] さらにまた、切欠部 15を把持具に係止又は嵌合させるようにした場合には、チップ 1が周方向に回動しないので、採取部を常に一定の配向でゲルに押し当てることが でき、バンド幅やスポットサイズが小さくなる程有用である。カロえて、チップ 1が固定さ れるので、チップ 1をピペットゃシリンダ等に取り付けたときの全体の操作性及び取扱 性を向上させることができる。
[0038] なお、本発明は上述した実施形態に限定されるものではなぐその要旨を変更しな い限度において様々な変形が可能である。例えば、チップ 1の胴部 10は角筒状であ つてもよく、採取部 20は断面が円形のカップ状であってもよい。また、胴部 10は必ず しも先細り状になっていなくてもよい。さらに、切欠部 15は、なくともよぐ一箇所のみ に設けてもよいし、三箇所以上設けても構わない。またさらに、切欠部 15は、より幅の 狭い切欠であってもよぐつまり切込部としてもよい。さらにまた、適用できる切り出し 対象はタンパク質バンドやスポットに限られず、例えば DNAのバンドであってもよ!/、。 産業上の利用可能性
[0039] 以上説明した通り、本発明による試料採取具は、貫通孔を介して接続された胴部と 採取部とを備えるので、生体分子が含まれるゲル等の担体試料から目的のバンドや スポットを簡易に且つ再現性よく切り出すことができるいわゆる 'ゲルピッカー'として 機能し、ゲルからの目的物質の回収率をも高めることが可能となる。よって、生体分 子を含む担体の分析及びそのための試料調製に広く利用できる。
図面の簡単な説明
[0040] [図 1] (A)〜(D)は、本発明による試料採取具の好適な一実施形態を示す模
式図であり、それぞれ正面図、上面図、下面図、及び側面図である。

Claims

請求の範囲
[1] 略筒状を成す胴部と、
試料が採取される採取部と、
前記採取部力 先端に向力つて開放された開放端と、を備えており、
前記胴部と前記採取部とが、該採取部の最外径よりも小さ!/ヽ径を有する貫通孔を 介して接続されたものである、
試料採取具。
[2] 前記胴部と前記採取部との接続部位は、前記試料が該採取部から該胴部内に流 入しな 、ように形成されたものである、
請求項 1記載の試料採取具。
[3] 前記採取部は、略カップ状を成しており、
前記胴部は、該胴部の一方端が前記採取部の外径よりも小さい径を有して該採取 部の底壁に接続されたものである、
請求項 1又は 2に記載の試料採取具。
[4] 前記胴部は、周壁に切欠部又は切込部が形成されたものである、
請求項 1〜3のいずれか一項に記載の試料採取具。
[5] 前記採取部は、断面矩形状を成すものである、
請求項 1〜4の 、ずれか一項に記載の試料採取具。
[6] 前記採取部の周壁の厚さが 0. 2mm以下である、
請求項 1〜5のいずれか一項に記載の試料採取具。
[7] 前記採取部に採取される前記試料がゲルである、
請求項 1〜6のいずれか一項に記載の試料採取具。
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