WO2005115468A1

WO2005115468A1 - 新規創薬ターゲットならびにこれに作用する医薬

Info

Publication number: WO2005115468A1
Application number: PCT/JP2005/010105
Authority: WO
Inventors: Akito Tanaka; Akira Yamazaki; Akinobu Nakanishi; Mikio Takeuchi; Masayuki Haramura
Original assignee: Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd.
Priority date: 2004-05-26
Filing date: 2005-05-26
Publication date: 2005-12-08
Also published as: JPWO2005115468A1; EP1754492A1; JP4468361B2; US20090239916A1

Abstract

　本発明は、MFP-2又はその機能的断片と特異的に結合する化合物を有効成分として含有する医薬組成物ならびに該化合物のスクリーニング方法を提供し、当該化合物やそれを含む医薬組成物は抗炎症剤や抗アレルギー剤として非常に有用である。

Description

新タゲットならびにこれに作用する医薬術分野

、新規なタゲットに関する。よりしは、チア、イタその導体のアギ剤の有効性を担考えられるタゲット子に関する。はまた、タゲット子に特異に結合する化合物に関する。ヒトゲノム列が解読されるのに伴、研究ゲノム、創タゲット・と移行してる。そ中で、・アギとして用されてきたびその導体、あるはイタびその導体効性を担考えられるタゲットもそのである。

これまで、 ) S S ( ステイド・痛剤， S e a a a a d s) に分類されるのとしてほ主に位での子のスタあるはのきを抑制し、気道縮を抑制する作用療薬ア 2 76 z e e s c 972 22 (4) 724 732)、ならびにその制ののとして X 2の制が示されてきた ( えば C C z c ドイツ 82 3 (9) ０92 95 )。

また、アギして知られるイタは抗原応に伴起こるスト胞らのスタ SRS 等の化質の離を抑制する ( ア 2０ 4 3０ ) 用を有すること等が知られてるが、これまでそのメカズムに関しては、ホス激によるスタ等の分阻害する ( O S Co J a e，， 969 223 2 2) ・ 97

) 等報告から、ウムチヤネに関与するタク質の関 ( えば a z e ・ P o c e e d s O f e a o a c a d e O S c e s S 984 8 2 ) 684 68 5 ) 細胞タク質のン化酵素の ( えば e O a de S C S 98０ 2 7 4426) 8 82 ) 等が報告されてる。

しかし、多大な努力にもかわらずこれらの薬品が直接用しその性を説明できるタゲットの未解決な問題であた。そのため、これらの合物の果を超える化合物をスクグする効率的な方法の発のもあり、これらの合物を超える医薬品困難を極めてきた。

般的 S Sがクオキゲナゼ害を用の質とするに対し、このタイプのなる有効な抗症のが解明されれば、胃腸の刻な作用のあるクオキゲナゼのによるを、あるき換わる果の結びことが期待されるこらその真のメカズムの明が待たれてた。また、アギ剤にても同様な解明が待たれてた。

びその導体、イタびその導体による・アギ剤の効性を担と考えられるタゲットを、ゲットを用て患、アギの患の療に有用な合物スクグ法ならびにスクングによて得られる化合物を提供するこを目的とする。

明の

らは、上記題を解決す究し、イタが通して特異に結合するタク質の探索を行た。その果、 P 2 c o a o e 2 アクセッョ o P7 ０523) 呼ばれるタク質がインタに特異に結合するこを見出し、タク質がこれらの導体・アギ用を説明するのに十分なタゲットであることを確認し、さらにかるタゲットあるはタゲットを発現する細胞を用て、炎症患、アギ患の療に有用な合物のスクグ法を開発して明を完成するに至た。

下記のである。

2のアノ列を有するタクと特異に結合する化合物を有効成分として有する医薬。

2 2のアノ列におて又は2 上のアノ酸を欠、置換しは付加してなるアノ列を有し、 ( ) 化合物及び又は式 (2) 物と結合すると徴を有するタクと特異に結合する化合物を有効成分として有する医薬。

3 患及びアギ患らなるより選択される患のである、又は 2 載の。

(4) P 2 特異に結合する物を有効成分として有する医薬。 (5) P 2の現を制御する化合物を有効成分として有する医薬。 (6) P 2の性を制御する化合物を有効成分として有する医薬。 7 患及びアギ患らなるより選択される患のである、上記 4 ) のずれに記載の。

8) 患及びアギ患からなるより選択される患の療に有用な物をスクグする為の方法であて、以下の程を含む方法

( ) P 2又はその能的片を試験合物に接触させる工程、 (2) 合物が、 P 2又はその能的片に特異に結合する否を判定する工程、

(3) 2) の程におて P 2又はその能的片に特異に結合する合物を選択する。

(9 患及びアギ患からなるよ選択される患の療に有用な合物をスクグする為の方法であて、以下程を含む方法

( ) 2のアノ列を有するタクはその能的片を試験合物に接触させる工程、

2) 合物が、タクはその能的片に特異に結合する否かを判定する工程、

(3) 2) の程におてタクはその能的片に特異に結合する物を選択する工程。

０患及びアギ患からなるより選択される患の療に有用な合物をスクグする為の方法であて、以下の程を含む方法

( ) 2のアノ列におて又は2 上のアノ酸を欠、置換付加してなるアノ列を有し、 ) 化合物及又は式 (2) 化合物と結合する徴を有するタクはその能的片を試験物に接触させる工程、

(2) 合物がタンクはその能的片に特異に結合する否かを判定する工程、

) (2) の程におてタクはその能的片に特異に結合する合物を選択する工程。

( B 8 ( のずれに記載のスクグ法によて得られる炎症患及びアギ患からなるよ選択される患の療に有用な。

2) 1) 又は一般 (1 )で表される化合物はその上容され得る

( 、、 O、、 S、又はS であり

、 R 、 S、 C 2C 2 であり

R は、 O OR 、 R 又は R R であ

は、置換されててもよ飽和もしは不飽和、置換されててもよアキ、置換されててもよアノ、置換されててもよ、置換されててもよアドゲ子であ

R 、 R 、 R 、同一異なて、それぞれ換されててもよ飽和もしほ飽和のであ

が R R の合、 R R が一緒になて素原子ともに環を形成してもよ、

、 ( ) (2) で表される化合物を除。

3 2) 載の合物はその上容され得る塩を有効成分として有する医薬。

4 患及びアギ患からなるよ選択される患の

ある、上記 ( 3 載の。

面の単な説明

、 P 2のラット、ウス、ヒトのの程度を示す図である 2は、 P 2のラット、ウス、ヒトの同性の度を示す図である ( )。

2は、合物の P 2 合の異性を調た結果を示す図である。

P 2 特異に結合する化合物を固定化した上にほ目の定化理で速やに P 2が結合する。

明の細な説明

P 2 f c o a e 2) は f c o a be a o d a e 2 e o o a アクセッョン o P7０523) Pe o o a c o a e e e 2

2 、 b c a o ( 、 7 e a d s e o d de d o e a s e 4

S ) 上、アクセッション o P97852) 等のラット来のタクとしても報告れてる。また、タク質はウスにおては、 d o s e o d 7 b e a de d o e a s e アクセッョ Qg 3) 2 P 7 b a S 上、アクセッョ P5 66 ) 等として、ヒト来のタクとしては、 2 P、 7 b e S 4 ( 上、アクセッョ P5 659) 等として報告されてる。 P 2は多のされな多種の名を有するタク質である。造的にほ近にS O C de d o e e d ドメイが、 C a C e de d a a s eドメイ S e O ドメイ類ドメイを有してることから多の用を有してることが推測されてる。、 2 CO ヒドラタゼ 3 CO デヒドゲナゼ性を示し、の化に関与すること等が知られてる。

よ具体的には配列 2のアノ列で表わされる 73 個のアノ酸らなるタク (アクセッョン P7０523) が例示されるが、イタ、チア、それらの導体、あるはこれらの合物と同様なメカムによ用、抗アギ用を示す化合物と特異に結合する、タゲット子として作用する限、配 2 アノ列におて、又は2 上のアノ酸を欠、置換付加してなるアノ列を有するタンク質であてもよ。て、で若干なるアノ列を示す P 2であるが ( )、ずれの種の P 2も明におて使用することのできる P 2である。えば 2のアノラット来であるが、配列 4 のアノ列で表される P 2も本願明の P 2に包含される。よ具体的には、明におて使用するこのできる P 2としては、 ) 化合物及又は式 (2) 化合物結合する

と特徴を有するタク質であれば必ずしも配列 2のアノ列のみで表わされる必要はな、配列 2のアノ列を有するタク、配列 2のアノ列におて、又は2 上のアノ酸を欠、置換付加してなアノ列を有するタク質であてもよ。より具体的には配列 2のアノ 6 上、 7 上、 8０上、好ましは9０上、特に好ましは95 上の相同性を有するアノで表わされるタク質であ、配列 2のアノ、 4 アノ上、好ましは7 アノ上、特に好ましは０アノ上の連続したアノ酸を含むタク (ポ ) であることがそまし。

明細書中、同性ほ二の間の配の度を意味するものである。は容易に算出することができる。の

の同を測定する方法は数多知られてお、同性 ( 一性とも言われる) なる用語は、当業者には周知である。のの同を測定するのに用る一般的な方法には、 J・ ( ・)， d e e Co e s c a e c P e s s S a e o ( 994) Ca O a

S J e a 48 73 ( 988) 等に開示されてるものが挙げられるが、これらに限定されるものではな。同性を測するためのまし方法としては、試験する二の間の最も大きな適合関係分を得るよに設計したものが挙げられる。このよな方法は、ピタプグラムとして組み立てられてるものが挙げられる。のの同性を定するためのましピタプグラムとしては、 GCG

プグラムッケジ ( e e e ， J・ e a ・

c d s Re s e a c 2 ( ) 387 98 )) S P S 等が挙げられるが、これらに限定されるものでな、野で公法を使用することができる。

さらに、明におてはイタ、チア等の連の・アギ剤に共通するタゲットであ得るならば、 ( ) 物及び又は式 (2) 物と結合すると徴を有する範囲内で P 2の片であてもよ、以下このよ片を P 2の能的とも。よ度を高める為には式 ) 物及び (2) 化合物の方に結合することが望まし。

ずれの、特段のことわのな限り本明における P 包含される。

明におて使用し得る P 2である、又はその能的片であるのにほ式 ) 化合物及び又は式 (2) 物、好まし式 ( ) 物及び (2) 物の方を使用するが、これらの合物は既に知られた化合物であり業的に入能である、、既知術に従て製造することもできる。

に結合するとは、アストあるはアタストに対する特異受容体、基に対する酵素、そして例えば 5０6 ガド) に対する 5 6 タクタゲット ) や、ステイドホに対するステイホ容体 ( de x a a a S o と c o c c d e c e o )、抗がん a O に対する C等の関係に例示されるものであり、 d a等の数値として、競合によ確認することができる。にて後述するが、具体的数値として表わす以外に電気の覚的段によ確認することもできる。

P 2 ( 2のアノ列を有するタク、配列 2のアノ列を有し、 ( ) 化合物及び又は式 (2) 化合物と結合する、と徴を有するタク ) びその能的片に特異に結合する物を有効成分として有する医薬を提供する。る化合物は新規なあるアギ剤のタゲットである P 2 結合することにより P 2の現を制御、又はその性を制御することによて、用及び又は抗アギ用を示す。ほ、外因性あるは性の性あるは性であ、急性患の合には発熱、発赤、、痛及び害の5 を伴。えば域の術後ならびに外傷の・症、ある、腰痛、候群、骨盤症、傷、乳房積、帯状、、、精巣上、前症、智、抜歯の・症、又は急性上気道の挙げられる。アギ

としては、例えば管支息、アギ炎、アトピ皮膚炎の挙げられる。

さらに、 P 2が、剤及びアギの規のタゲットとなり得ると明におて見出された知見によれば、直接結合しなても直接的あるは間接的に作用して結果的に P 2の現や性を制する物もまた患及びアギ患の療に有用であるとえる P 2の現や性を制御する化合物 ) としてほ、例えば、

2をドする P 2をドするが入されたクタ、 P 2タクが挙げられる。

P 2又はその能的片に結合し得る、イタあるは様に各種物に対して優れた用及び又は抗アギ用を有し、従ての、抗アギアギとして有用である象となるにては上記した通である)。明に有効成分としてめられる化合物としては具体的に一般 ) 又は一般 ) で表される化合物はその上容され得る塩が例示される。

( 、 X は、 O、 R 、 S、又はS であり

O R 、 S、 C 2C 2 C C であ

R は、 O OR 、 R R R であ

R 、置換されててもよ飽和もしは不飽和の化水素、置換されててもよアキ、置換れててもよアノ、置換されててもよ、置換されててもよアドゲ子であり

R 、 R 、 R 、同一なて、それぞれ換されててもよ飽和もしは不飽和の化水素であ

R が R R の合、 R R が一緒になて合素原子ともに環を形成してもよ

、 ( ) 2) で表される化合物を除。

和もしは不飽和の化水素とは、例えば、炭素数０のまたは化水素示し、具体的には、例えばアキ、ア、アキが挙げられる。これらの中で特にアキ基が好ましアキして、例えばメチ、チ、プピ、イソプピ・、イソ、 s e C 、 e 、チ、イソチ、ネオチ、、イソ等の炭素数０アキが挙げられる。アとしては、例えば、

、ア、イソプ、ブテ、 2 、 3 、、 s e C 等の炭素数2 ０のが挙げられる。アキとしては、例えば、プピ、プギ等の炭素数2 のアキが挙げられる。

換されててもよ飽和もしほ飽和の化水素のとしては、特に限定されなが、例えば、飽和もしは不飽和の化水素 ( ) 和もしは不飽和の ( ) 、ゲ ( ) 、アノ、ト、水酸基、置換されててもよ ( ) 、置換アド ( ) 、置換されててもよ低級アキ ( ) 、置換されててもよキ、置換されててもよアノ ) 、置換されててもよアキが挙げられる。これらの、上に化学的に容され範囲におて置換される。ただし、置換基の数が2 上の場一またはなててもよ。

アキとは、炭素数 6の分岐アキ墓を意味し具体的には、メトキ、トキ、プポキ、イソプポキ、トキ、イソトキ、 s e C トキ、 e トキ、チオキ、イソオキ、 e チオキ、ネオチオキ、 2 チオキ、 3 チオキ、

オキ、 2 オキが挙げられる。

換されててもよアキのとしては、特に限定されなが例えば、飽和もしは不飽和の化水素 ) 、飽和もしは不飽和の

( ) 、ゲ ( ) 、アノ、、水酸、置換されててもよカボ ) 、置換アド ( ) 、置換されててもよ低級アキ ) 、置換されててもよキ、置換されててもよアノ ( ) 、置換されててもよアキが挙げられる。これらの、アキ上に化学的に容される範囲におて置換されるただし、置換基の数が2 上の場同一またはなててもよ。

換されててもよアノしては、低級アキ ( )、低級イ ( えば、アセ、プピオ等の炭素数 6のアカイ ) 等で換されててもよアノが挙げられる。

換されててもよカボとしては、低級アキ )、低級アカイ ( えば、アセ、プピオ等炭素数

6のアカイ ) 等で換されててもよが挙げられる。

換されててもよアドしては、換のアド、置換アドアドアド、具体的には低級アキ

) で換されたアド挙げられる。

ゲしてはフッ、塩素、、素が挙げられる。 R 素原子と一緒になて成してもよ環としては、和もしほ飽和 ) の素原子を含有するものが挙げられ、、ゲ ( )、、置換アド ( )、置換されててもよ低級アキ ( ) 等で換されててもよ。

和もしは不飽和のとは、例えば素原子を 2 5～6 式の、窒素原子を 2 と酸素原子を個もしは子を

5～6 式の、酸素原子を個もし子を 5 式の・素原子～4個を含み、 6 5または6 縮合した式のが挙げられ、具体的にほ、例えば、ピジ、チ、オキ、

。、チア、イソ、オキリ、イソ、、、、、プ、ピラリ、オ等が挙げられる。、飽和もしは不飽和の化水素 ( ) 、飽和もしは不飽和の ( ) 、ゲ ( ) 、アノ、ト、オキ、置換されててもよカボ ( ) 、置換アド ( ) ・換されててもよ低級アキ ( ) 、置換されててもよアノ ) 、置換されててもよアキ ( ) 等置換されててもよ、これらの、上に化学的に容される範囲におて置換される。墓の数が2 上の場同一またはなててもよ。

アキしては、例えば、炭素数 6の、またほ。状のアキ基を示し、具体的にほメチ、チ、プピ、イソプ、、イソ、 s e C 、 e 、ペチ、、クプピ、クチ等が挙げられる。換されててもよ低級アキにおけるとしては、カボ、置換アド

同義) 、アノ、水酸基、ゲ ) 等が挙げられる。

アキしては例えば素原子をはさんで6 式のえば

) が挙げられ、具体的には、例えば、キ等が挙げられる。

、飽和もしは不飽和の化水素 ) 、飽和もしは不飽和の

( ) 、ゲ ) 、アノ、ト、置換されててもよカボ ( ) 、置換アド ( ) 、置換されててもよ低級アキ ( ) 、置換されててもよアノ ) 、置換されててもよアキ ) 等の置換されててもよ、これらの、上に化学的に容される範囲におて置換される。墓の数が2 上の場同一またはなててもよ。さらに、飽和もしは不飽和の環化水素 ( ) あるは和もしは不飽和の ) 合してを形成しててもよ。としては、イデン、タ、オイ、ナト、・アトラセ、イド、イソイド、ラ、オ、イドジ、ク、、イソイダゾ、ン、、サ、ラジ等が挙げられ。

和もしは不飽和の化水素とは、炭素数3 8のしは不飽和の化水素、具体的には、例え、化水素、が挙げられる。

化水素としては、例えば3 個炭素原子ら成される式または縮合環式の、具体的にほクアキ、クア

およびこれらと素数6 4のア ( えば、ゼ等) 等との2 また 3 が挙げられる。クアキとしては、例えばクプピ、ク、クチ、ク等の炭素数3 6 のクアキ、クアとしては、例えばクペ、ク、クテ、ク等素数3 6 のクアが挙げられる。

化水素としては、例えば6 8個の炭素原子ら成される化水素、縮合環式化水素が挙げられ、具体的には、、、 2 、 2 イデ、 2 アス等の炭素数6 4のア基が挙げられる。

化水素、飽和もしは不飽和の化水素 ( ) 、飽和もしほ飽和の ) 、ゲ ) 、アノ、ト、オキ、置換されててもよカボ ) 、置換アド ) 換されててもよ低級アキ ( ) 、置換されててもよアノ ( ) 、置換されててもよアキ ( ) 等の置換されててもよ、これらの、化水素上に化学的に容れる範囲におて置換される。ただし、置換基の数が2 上の場同一またはなててもよ。

明の ) または一般 (1 ) で表わされる化合物は、そのあるは置換の類に墓徴を利用し、の法を適用して製造することができる。えばアキ、ア、アノ、ノ、ゲン、元、酸化、縮合が挙げられ、通常分野で用られる反応または方法が利用できる。

明の 1) または一般 (1 ) で表わされる化合物 P 2 はその能的片に結合し得る化合物は、ヒトを含め、サ、ウ、、ヒツジ、イヌ、ネ、ウサギ、ウス、ラッ、ットなどの物に対して優れた用、抗アギ用を有し、従て患及びアギ患らなるよ選択される患の療に有用である。

明で用る、 P 2 特異に結合し、用及び又は抗アギ用を発揮する化合物 ( 下、本明化合物ともする) は、医薬上容され得る塩を形成しててもよ、としては、例えば無機酸塩えば、塩酸塩、酸塩、化水素酸塩、 )、有機酸塩えば、酸塩、トフオ酸塩、ク塩、イ塩、塩、プピオ塩、ク塩、酒石酸塩、乳酸塩、ウ塩、メタスホ塩、 P トスホ ) 等が挙げられる。

、明化合物はそののであてもよ。

明化合物を患及びアギ患らなるよ選択される患の療薬として使用する場合に、一般的な剤して調製され、経口

P的に投与される。

に投与する場合、通常分野で用られる態で投与することができる。に投与する場合には、局所 ( )、直腸、注射の態で投与することができる。

口剤は直腸としてほ、例えばカプセ、剤、、散剤、ドップカ、座、が挙げられる。しては、例えば、無菌

が挙げられる。としては、例えば、クム、、ョン、常のッチ、クス ) 等が挙げられる。

記の当分野で通常われてる手法によ、薬学的に容される

もに製され得る。学的に容される、しては、、結合剤、香料、、増、着色、安定、乳化剤、分散剤、懸濁腐剤が挙げられる。

学的に容されるとしては、例えば、炭酸グネウム、ステアウム、タク、砂糖、ラクトス、クチ、キストリ、、ゼラチ、トラガト、メチセス、ナウムメチセス、ワックス、オタ等が挙げられる。

さらに、必要に応じて通常のを施した剤、例えば、テイグ、フイムテイグあるは、多層することができる。、薬学的に容される剤の剤と共にされる。としてほ、タク、ラクトス、が挙げられる。ドップは水性性の剤と一種はそれ以上の薬学的に容される散剤、懸濁、解剤共にできる。カプセは、有効成分となる化合物を学的に容されると共に中に充することによ製造できる。合物は学的に容されると共に混合し、又は賦なしでカプセの中に充填することができる。カ剤も同様の法で造できる。明を座として調製する場合、植物 (ひまし油、オブ、ピナッツ ) ( セ、白色リ等)、ウ類、部分合成もしはグセステ等の墓と共に通常用られる手法によ製される。

剤としては、、懸濁、乳剤が挙げられる。えば、溶液、水一プピグリが挙げられる。、水を含んでも良、ボチグプピグの液の形で造することもできる。

口投与に適切な、有効成分となる化合物を水に加え、着色、香料、安定化剤、甘味、解剤、増必要に応じて造するこができる。また経口投与に適切な、合物を分散剤とともに水に加え、にすることによても製造できる。しては、例えば、薬学的に容される天然合成ガム、ジ、メチセス、ナトウムメチセスはのが挙げられる。

としてほ、上記の剤及び、クム、アゾ、スプ、粉剤ョ、が挙げられる。記の、有効成分となる化合物と学的に容される希釈剤及びとを混合することによて製造できる。膏及びクムは、例えば、水性油性の剤に増剤及び又はゲ剤を加えて製する。剤としては、例えば、水、ライ、植物が挙げられる。としては、例えばイ、ステアアウム、ステアア、プロピグ、ポチグ、ン、水素、が挙げられる。には、必要に応じて、ヒドキ息香酸メチ、ヒドキ息香酸プピ、クゾ、ザウムクド等の防腐剤、細菌を添加することもできる。

ショは、水性油性の剤に、一種類はそれ以上の薬学的に容される安定、懸濁、乳化剤、拡散剤、増、着色、香料加えるこができる。

、投与使用する化合物の類、患者の、年齢、体重、投与によて異な、それらに応じて定する。

はまた、 P 2又はその能的語の上述の ) 特異に結合し得る否かを指標として、炎症患、アギの患の療に有用な物のスクグをことができる。ここで P 2又はその能的、精製あるは製のタクボ ) 又はその ( 能的) としてることもできるし、細胞で発現した状態で使用することもできる。 P 2又はその ( 能的) 、 ( ) それらを産生する細胞の組織を原料して単離する方法、 2) 化学的に合成する方法は (3) 伝子組え技術によ P 2又はその能的) 片を発現するよに作された細胞らする方法の法を適ることによて取得することができる。

明の P 2又はその能的) 片の、例えば下のよにしてことができる。すなわち P 2又はその能的) 片を発現して、あるは適当な地中で P 2又はその能的) 片を発現してる細胞を養して得られる物からの法で出、精製される。

出、精製の目的の在するに応じての法が用られる体的には次よにして行なわれる。まず、組織あるはをそのまま遠心の法に付して組織もしは細胞あるは回収する。に所望するタク質が積されてる場合には、収した細胞を適当なに懸濁して、さらにを適当な度で加えて膜を可溶化する。としてはナトウム S S)、メチアウムイド (C ) 等が挙げられるが、これらは強力なタンク作用を有するので、タク質が生物性を持よに畳まれるためには、例えば O X ０等の穏やかなイオを用ることが好まし。で得られる出液を、必要ならばの、一般に用られる方法を適み合わせることによてタクはその能的片を単離する。、の解度を利用する方法、透、限外過、ゲ過、 S S P G 等の分量の差を利用する方法、イオトグラィ等の荷電を利用する方法、アィティクトグラィ等の特を利用する方法、逆クトグラィ等疎性の差を利用する法、の点の差を利用する方法が挙げられる。より具体的には、例えば、減圧縮、凍結燥、常用のによる出、整、陰イオイオ脂、非イオの用のによる、再結晶の用の法によて分離、精製することができる。

学合成による明の P 2又はその ( 能的) 片の、例えば 2に示されるアノ報を基に、プを用て合成あるは成することによ行ことができる。

また、遺伝子組え技術によ P 2又はその能的) 片を発現するよに作された細胞ら取得する場合には、具体的には以下のよにして。まず、 P 2又はその能的片をドする遺伝子を機能的に含有するクタを調製する。

P 2又はその能的片をドする遺伝子はかなる方法で得られるものであてもよ。えば、 R から調製される相補 (c )、ノックライラら調製されるノック、化学的に合成される、 R 又はを型としてPCR法によ増幅さて得られる

これらの法を適当に組み合わせて構築される等が含まれる。えば

アクセッョ o X94978) に示される基配列、特に 28～2232で示される基配列から実質的になるの一部を含む、配列 3 (アクセッョ o X87 76) に示される基配列、特に 49～2259で示される基配列ら実質的になるの一部を含む、配列 5 (アクセッョ o X89998) に示される基配、特に 3～222０で示される基配ら実質的になるの一部を含む等が例示される。、上記の意の基を置換、欠させるえばイビ然変異発、部位然変異 ) を利用することもできる。

ここで、質的になるとは、上記定のからなるに加えて、スリジな条件明では、塩基配におて 6 上、好ましは 8０上、より好ましほ 9 上の相同性を有するがイ得る条件を、ストジはイイズ洗浄の際の温度、塩化させるこによ調節することができる) におて、上記の基配らなるイブ得る基配列らなるを意味する。ストリジな条件ほ、所望する相同性やオリクオの等をもとに分野で利用されてる計算式に当てはめて出することができる。、 42 Cでのイダイゼョ、 XS SC、 O・ S Sを含むによる42Cでの理や、 65Cでのイダイ。ゼョ、 0・ XSSC、・ S Sを含むによる 65 Cでのが例示される。

られたを胞及び又は真胞の種ので複製自律できるプラスクタファクタ等に適当な制限位を利用して入することによて P 2又はその能的片をドする遺伝子 2０機能的に含有する発現クタを得ることができる。

ここで能的にとは、そのクタに適合する宿主伝子 ( ) が転写され、それにドされるタク質が生され得るよに伝子が配置されてることを意味する。ましは、プタ域、開始ド、 P 2又はその能的片をドする遺伝子、終止ドタネタ域が連続的に配列された発現力セットを有するクタである。換体択のためには選択カ伝子をさらに含有することが好まし。

えば胞を形質換する場合、動物ウイス、例えばS 4 RS 、等のプタリアデグナが制限位、好ましほチクグ位を介して連結したプラスに、 S 2 e。

V2 d 等のプラス来のカ伝子ネオイ伝子、 ) を入したプラスが使用できる。

使用する発現クタに適合し、形質換され得るものであれば特に限定されず、明の術分野におて通常用される天然は人工的にされたの利用できる。体的には、大腸、の、菌類、動物が例示される。ましは、特にラット、ムスタ C O 等)、ウス ( OP、、 C 27 S 2 ０ S 3等)、サ C S C S 3 C S 7 CV 、 e ) ヒト ( e a、 2 、、 a a a J ) が挙げられる。

クタの胞の従来の法を用てことができる。えば、胞に導入する場合、ウム沈澱、プトプラスト合法、イクイジクョ、クポョ、ソムが挙げられる。

P 2又はその能的上記のご調製される発現クタを含む形質換体をすることによても製造することができる。、宿主換体) 育に必要な、無機もしは有機を含んでることが好まし。しては、例えばス、キスト、可溶性デプ、ョ、窒素としては、例えばアウム、酸塩、アノ、スチ・リカ、プト、カゼイ、キス、大豆粕、馬鈴薯出液が例示れる。また所望によ他の栄 ( えば、無機カウム、リ水素ナトウム、塩化グネウム等)、ビタ類、抗生物質テトラサイク、ネオイ、カナイ、ア等) 含んでてもよ。

当分野におて知られてる方法によ行われる。タク質の発現が可能な条件であて、例え度、地のタ質が大量に生産されるよに択される。

えば、宿主が動物である場合、地としては例えば 5 2

CS) を含む ( )、ダッイグ ( 、 RP 4０地、 99 用ることができる。地のは 6～8であることが好まし、 3 ～4 oCで 5～2 われ、必要により通気やこともできる。

明の P 2又はその能的上記によ得られる物ら、前述の P 2又はその能的片を発現してる細胞あるは組織らの

・・同様にして採取するこができる。

して得られた P 2又はその能的、試験合物と

分野で実施されてる結合験に準じてことができる。体的には P 2 その能的片、あるは試験合物のずれをに固定化し P 2又はその能的片を固定化した場合に泣合物を含有する液を試験物を固に固定した場合にほ P 2又はその能的片を含有するタクあるは細胞出液出液などのタク ) を、に接触さる。カラムバッチが利用できる。

合物が P 2又はその能的片に特異に結合するか否かを判定する工程は、試験合物 P 2又はその能的とを接触せる工程をどのにして行たによて得るが、例えば合物が固定化された ( えばビ ) を充填してなるを用た場合、続 P はその能的片を含有する ) の加により、両者の間に特異な親和がある場合には P 2 子が固上に結合する ( な親和な場合には結合しな。合した P 2又はその能的片を緩衝性を変える、あるは過剰の合物をさらに加える等の処理によて上ら解離さ、そのしたり、あるは上の試合物と結合した状態でそのままによて出してしたりすることもできる。方法としては具体的には電気、免疫学的反応を用たブッティ

、クトグラィ、ススペクトラム、アノケス、

R等公の法により、またこれらの法を組み合わせて実施する。 P 2又はその能的片が固上にされるかあるはの通り画に含まれる否、あるはその測定することによて、試験合物が P 2に特異に結合し得るか否を判定し、結合する化合物を選択する。

また、程は自動化されててもよ。えば2 で得られたの子のデタを直接み取り、既存のデタスに基て分子のを行こも可能である。

さらに、 P 2 はその能的片を細胞で発現した状態で使用する場合には、の種のうリグ術を駆使して P 2又はその能的試験合物の合の、結合の度を測定することもできる。

明のスクリング法における P 2又はその能的試験合物とのにはこのよ態様も含まれる。試験合物との使用する細胞や P 2又はその能的片のでの現状況の因により定される。また、 P 2又はその能的片が細胞で発現してるかは抗体用て認しておことが好まし。以下、実施により明をさらに詳細に説明するが、はこれらのによりなんら限定されるものではな。また、用る合物やに言及しな限、商業的に入手能であるか、また知のに基て調製することができる。

イタ定化の

( ) 3 ビス 2 カボキク 5 オキ ) 2 イドオキプの

3 ビス 2 カボキク 5 オキ ) 2 イドオキプのナトウムイタ ) を 5 溶解た。酸を加えを3とする。出した白色、水、タノ、テでした。， 3 ビス 2 カボキクロ 5 オキ ) 2 イドオキプロの 6０O 、収率66 ) を得た。

R ( S d ) 6 4 3 (4 d) 4 36 ( )5 32 S) 6 86 (2 S) 7 (2 d) 7 7 (2 d) 7 7 (2 )

(2) 3 ビス (2 カボキクモ 5 オキ ) 2 イドオキプ定化の

3 ビス (2 カボキシク 5 オキ ) 2 イドオキプの定化

3 ビス (2 カボキク 5 オキ ) 2 イドプ 8 7 ・０4 O ) のト ( ・ 5 ) のト ( 5 275 ) を加えた。 3 、 7 o

０Cで間加熱した。 3 ビス 2 カボキク 5 オキ ) 2 イドオキプの

O O S e A a o 4 1，アノ a a a b e a 0 1 ソプピチア (2・ 1，・０ 2 ) のト

０ 2 に加え室温で終夜させた。次に O O の行た。アセト、メチホムアド、水、メチホムアドの順にそれぞれ5 ずした。ドリ応で残存アノ墓を測定し

算すると43 であた。酸水素ナトリウム溶液、水、メチホムアドでそれぞれ5 ずした。

2) ステア酸及びキヤピグ

O O 脂、ステアン (6 5 0・ 23 1) (3 メチアノプピ ) 3 チ (4 7 1， 0・０27 1) ンゾトアゾ 3 6 0・０27 1) のメチホムアド ( ) 終夜さた。 O O 脂をで5 した。ド応で残存アノ基を測定し算すると 99 であた。 O O 無水 (2 4 ) 8 ) を加えた。反応さた後、で5 した。ド応で残存アノ基が観測できななることで確認した。この時の反算する 99 であた。後に O O 脂を2 タノ溶液で5 した。

2 定化の

( ) O O の

36 ， O・ O ) をクメタにし、室温にてした。ク ( 2 ， O・ 2 O )、 ( メチアノ) ジ 4 )、トチア ( 3 2 ， O・ 2 1) を加え、室温にて3 した。られたボ酸を O O a ) 6 ０ 4 6０

) の5 加え、水溶性 W 2 は 1 1 、 OB ( 7 8 32 ) にて合した。昼夜温にて、に 5 脂を洗浄、ンド験を行た結果、約97 にて目的の合物を得た。 2 5 加え 3０温にて残のアノ基をチ基にてビグ。 2０タノにて脂を洗浄、目的の OYO 得た。

3

( ) ラットライセ

ラットの 2 ) を混合 25 s C 8 ００ 5 e e 2０ 3００ CC 2 1

カメトナトリウム) 混ぜ、ジネトを作成し、 9，０で間遠心離した。上取り、 5００で更に 3 間遠心離した。して得られたライセして使用した。なお・はすて4 Cあるは氷上で行た。

(2)

～2で調製した合物が固定化された定化脂及び実施 3 ( ) で調製したラットライセ用、下記に示す順で結合験を行た

1) ライセト ) を4Cで間、静かにした。その、遠心作を行、の澄みを注意深集した。そして、澄み液を再びッな合物 ( ０ 1) 混合した。この、分離した化合物脂を目のとして4 にて静に保存してお。間ほどかにした後に、遠心作を行、上澄み液を除去した。

して2 目の験で得られた化合物目で得られた樹脂とをそれぞれに 5 程度寧に洗浄、上に結合するタク外を来る限り除た。して得られた合物 25 S S用 o a d b f e ( a a a Ca 3０566 22 s a e f e S w 2

(2 e C a p O e a O ) (2X) S S P ) を加え、 25 Cでした。して得られたサプ液を市販のS S ( oRa d e a d Ge J S S C a O 6 3 ) で分離し、そのS S を解析した ( 2)。目で得られた結合上に結合するタク質を含むサプ液の電 ( 2 、便宜 ) )、 2 目で得られた結合上に結合するタンを含むサプ液の電 ( 2 、便宜上 ( ) ) とを較した。

果、イタを固定した樹脂に共通して P 2が結合ししもその、化合物との目の験で著に確認、 2 目の結験ではされなこら特異な結合であるこが示された。また、 S Sゲ上の対ドを切り出し、通常用られてるプト ( 、菊池紀、細胞学、 2 5) 52 2０ 2)) にトリプによる e d e s を行、その、消化

片を O a s s S e c e を用たe 析によて、対象白質が P 2であることを確認した。なお、白質ソトはを使用した。

4 a c eによる P 2 イタとの d

イタ定化チップの

a C O e S ０5) を、ガラス入れた (25 O 、 75 ) に、 3 してした。次に、 Q およびタノでチップを洗浄、アノデカチオ酸塩 dO， 423) のタノ 5 ) 中に浸して一晩した。これをメチド ( P) で a d dP G a ( ) P O ( ) ソプピチア (P 。０ ) を含む P 液中に入れ、 6 して反応した。 Pで、 ) O ( ) SC 溶性

) を含む eC ) 液中で5・ 5 応した。さらに、 2０ C 3 さ、O Cを行た。さらに eC でした後、金上に7０ 1のイタ定化反応０5 イタ、 5 O ・ 5は SC ) を添加し、一晩するこによイタを固定化した。アセキピグをするために再び ) OB ) WSC O ) を含む eC 液中で5・ 5 応を行てピグを行て完成させた。

なお、対照デタは、上記インタ定化反応液との程をスキップチップを同様の法で作製したチップを用るこによて得た。 P 2

P 2 o e G W S を用てトクタを作製し、・ CO ( S 7) を用て S a タクして発現した T (Q G ) 、アイオサイス， S e e 2００ 3 ) を行 7０上の純度を得た。製した P 2はッァ (25

aC ) でッァ換をして定に用た。

d

値の測 a c o e 3００を用て行た。以下のりである ( a e は e c o e 2０ d S S c a O e 6 s e c P 2 25 5 6 25 )

デタ定後、解析ソトウア ( COR 、 e v a e 4・ ) を用て対照の差を取、 b a f

にて解析して d値を算出した。０・ 64 であた。

記のこらイタ P 2の特異な結合であることが証明された。上の利用能性

一般的な S Sがクオキゲナゼ害を作用の質するのに対して、本願明のスクング法によって得られる化合物、あるは本願明の合物及び合物を含む異なる作用機によて用ならびにアギ用を示す。て胃腸害など刻な作用のあるクオキゲナゼによる果を補、あるき換わる医薬の供が可能なる。出願は、日本で出願された 2 566 4を基礎としておりそれらの本明細書に全てされるものである。

Claims

求の

・ 2のアノ列を有するタク特異に結合する化合物を有効成分として有する医薬。 2・ 2のアノ列におて又は2 上のアノ酸を欠、置換しは付加してなるアノ列を有し ) 化合物及び又は式 (2) 化合物と結合する、と徴を有するタクと特異に結合する化合物を有効成分として有する医薬。

3 患及びアギ患らなるより選択される患のである又は2 載の。 4 P 2 特異に結合する化合物を有効成分として有する医薬。 5・ P 2の現を制御する化合物を有効成分して有する医薬。 6・ P 2の性を制御する化合物を有効成分して有する医薬。 7・患及びアギ患らなるよ選択される患のである 4～6のずれか項に記載の。 8・患及びアギ患らなるよ選択される患の療に有用な物をスクグする為方法であて、以下の程を含む方法

) P 2又はその能的片を試験合物に接触させる工程、

(2) 合物が、 P 2又はその能的片に特異に結合する否を判定する工程、

(3) (2) の程におて P 2又はその能的片に特異に結合する合物を選択する工程。 9・患及びアギ患らなるより選択される患の療に有用な合物をスクグする為の方法であて、以下の程を含む方法

2) 合物が、タクその能的片に特異に結合するかかを判定する、

3) 2) の程におてタクはそ能的片に特異に結合する合物を選択する工程。・患及びアギ患からなるよ選択される患の療に有用合物をスクリングする為の方法であて、以下の程を含む方法

( ) 2のアノ列におて又は2 上のアノ酸を欠、置換付加してなるアノ列を有し、 ( ) 化合物及び又は式 (2) 化合物と結合する、と徴を有するタクはその能的片を試験合物に接触る工程、

( ) 合物がタクはその能的片に特異に結合する否かを判定する工程、

(3) (2) の程におてタクはその能的片に特異に結合する合物を選択する工程。

・ 8 のずれ項に記載のスクグ法によて得られる炎症患及アギ患らなるより選択される患療に有用な合物。 2・ ( ) 又は般 (1 )で表される化合物はその上容され

( 、、 O、 R 、 S、又はSO であり

xは、 R 、 S C C C であり

は、 O OR 、 R 又は R R であ

R 、置換されててもよ飽和もしは不飽和の化水素、置換されててもよアキ、置換されててもよアノ、置換されててもよカボ、置換されててもよアドゲ子であり

R R R 、同一異なて、それぞれ換されててもよ飽和もしは不飽和のであ

R R R の合、 R R が一緒になて素原子とともに環を形成してもよ )、

、 ( ) 2) で表される化合物を除。

・ 2 載の合物はその上容され得る塩を有効成分として有する医薬。

・患及びアギ患からなるより選択される患である、請求 3 載の。