WO2005095604A1

WO2005095604A1 - Ｒｆｒｐトランスジェニック動物

Info

Publication number: WO2005095604A1
Application number: PCT/JP2005/006896
Authority: WO
Inventors: Hisao Kasuga; Kunio Matsuoka; Kimihiko Iwachidou
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Company Limited
Priority date: 2004-04-02
Filing date: 2005-04-01
Publication date: 2005-10-13

Description

明細書

RFRPトランスジエニック動物

技術分野

本発明は RFRP遺伝子導入非ヒト哺乳動物およびそれを用いる医薬のスクリ一ユング方法などに関するものである。背景技術

ォーファン G蛋白質共役型受容体 OT 7TO 22とそれに結合する C末端が L PL RF amide様、 LPL RS amide様、 LPQ R amide様または LP L R Lamide様のペプチド（RFRP_ 1、 RFRP— 2、 RFRP- 3) が報告されている (WO 00 29441号) 。

OT7T022と RFRP— 1、 RFRP— 2、 R F R P— 3がプロラクチン分泌に関与していることが報告されている (WOO 1/66134号）。

RFRP- 1に対応する NP S Fや RFRP— 3に対応する N P V Fが O T 7 T 022に結合し、抗ォピオイドに関与していることが記載されている（The Journal of Biological Chemistry, vol.276, No.40， p36961-36969, 2001) 。また、 OT 7 T 022のノックアウト動物が報告されている（WO04Z14 414号）。

しかし、 RFRPおよび QT7T022の生体内における機能および作用機序については、さらに解明すべき点が数多く残されている。発明の開示

新たな遺伝子導入 (トランスジエニック) 動物は、いろレ、ろな疾患の予防や治療に役立つ新たな医薬品の開発を可能にする。

したがって、本発明の分野では、ヒト RFRP遺伝子導入非ヒト動物（以下、トランスジヱニック動物と称することもある）を見出し、摂食亢進症、インスリン抵抗性、性機能障害などの疾患モデル動物を大量に生産する方法の開発が望まれていた。

本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、外来性の RFRPを発現させた新規なトランスジェニックマウスを作製したところ、 (1) 非トランスジヱニック動物に比べて、摂食量が減少している、（2) 非トランスジエニック動物に比べて、飲水量が減少している、（3) 非トランスジェニック動物に比べて、尿量が減少している、（4) 非トランスジエニック動物に比べて、侵害刺激に対して敏感になっている、（5) 非トランスジヱニック動物に比べて、血漿中のコルチコステロン値が低い、（6) 非トランスジヱニック動物に比べて、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値が低い、（7) 非トランスジエニック動物に比べて、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値が低い、（8) 非トランスジエニック動物に比べて、血圧が高い、（9) 非トランスジエニック動物に比べて、自発行動量が低下している、（10) 非トランスジヱニック動物に比べて、ストレス感受性が増大し'ているなどの表現型を示すことを見出した。本発明者は、これらの知見を基づいて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。 ·

すなわち、本発明は、

[ 1 ] 外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子を組み込んだ D N Aを有する非ヒト哺乳動物またはその生体の一部、

[2] 非ヒト哺乳動物がラットである上記 [1] 記載の動物またはその生体の一部、

[3] 外来性 R FRP遺伝子が配列番号： 1で表されるァミノ酸配列と同一または実寳的に同一のアミノ酸配列を有する RFRPをコードする遺伝子である上記

[1] または [2] 記載の動物またはその生体の一部、

[4] 外来性 R FRP遺伝子が配列番号： 9で表されるァミノ酸配列からなるラット RFRPをコードする遺伝子である上記 [1] または [2] 記載の動物またはその生体の一部、

[5] 少なくとも次の 1つの表現型を有する上記 [1] 〜 [ J のいずれかに記載の動物またはその生体の一部；

(1) 非トランスジェニック動物に比ベて、摂食量が減少している、

(2) 非トランスジェニック動物に比 ^ベて、飲水量が減少している、

(3) 非トランスジェニック動物に比ベて、尿量が減少している、

(4) 非トランスジェニック動物に比ベて、侵害刺激に対して敏感になっている、

(5) 非トランスジヱニック動物に比ベて、血漿中のコルチ： 2ステロン値が低い、

(6) 非トランスジェニック動物に比ベて、血漿中の黄体形虎ホルモン（LH) 値が低い、

(7) 非トランスジヱニック動物 (こ比べて、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値が低い、

(8) 非トランスジエニック動物に比べて、血圧が高い、

[6] 次の（1) および/または（2) の表現型を有する上 IS [1] 〜 [5] のいずれかに記載の動物またはその生体の一部；

(1) 非トランスジェエック動物に比べて、自発行動量が低 Tしている、

(2) 非トランスジエニック動物に比べて、ストレス感受性が増大している、 [7] 上記 [1] 記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、 RF

RPァゴニスト活性または RFRPアンタゴニスト活性を検定することを特徴とする RFRPァゴニストまたは RFRPアンタゴニストのスクリ一ユング方法、 [8] 上記 [5] 記載の動物またはその生体の一部に試験 fヒ合物を適用し、 (1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホノレモン（FSH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善効果を検定することを特敦とする、（1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4〕侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、. (7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FS H) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善薬のスクリーニング方法、

[9] 上記 [6] 記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、 (1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善果を検定することを特徴とする、（1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善薬のスクリーユング方法、

[10] 上記 [5] 記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、

(I) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4 ) 侵害刺激に^する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、. (7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善効果を検定することを特徴とする、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下: S体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍または視床下部性無月凝の予防 - 治療薬のスクリーニング方法、

[I I] 上記 [6] 記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、 (1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善効を検定することを特徴とする、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬のスクリ一-ング方法、

[12] RFRPァゴニストまたはアンタゴニストをスクリーニング一するための上記 [1] 記載の動物またはその生体の一部の使用、

[13] (1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン (F SH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善薬をスクリーニング 1~るための上記 [5] 記載の動物またはその生体の一部の使用、

[14] (1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大 ^改善薬をスクリーニングするための上記 [6] 記載の動物またはその生体の一 ¾5の使用、 [1 5] 拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢' it副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍または視床下部性無月経の予防 ·治療薬をスクリーニングするための上記 [5] 記載の動物またはその生体の一部の使用、

[1 6] 精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬をスクリーニングするための上記 [6] 記載の動物またはその生体の一部の使用、

[1 ] 外来性 RFRP遺伝子またはその変異遺伝子を導入した受精卵、

[18] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カノレシゥム血症、低カリウム血症、シ-ーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中ォ区性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神凝系の疾患の予防 ·治療剤、

[1 9] ポリペプチドが配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表されるァミノ酸配列からなるポリペプチドである上記 [1 8] 記載の剤、 [ 2 0 ] 部分ペプチドが、

( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるァミノ酸配列の第 5 6番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Val) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3 番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) または第 8 4番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Ser) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

(i i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目 (Phe) 、第 1 1 5番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番.目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6 番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目 (Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Lys) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3番目（Met) 〜第 9

2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met ) 〜第 9 2番目（Phe ) または第 8 4番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

( V ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1

2番目（Leu) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 3

1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 1 5番目 (Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6番目（Asn) 〜第 1 3 1 番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(vi i) 配列番号： 7または配列番号 I 0で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 2番目（Asp) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目（Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(viii) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8 番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目

(Phe) 、第 1 2 0番目.（Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目 (Leu) 〜第 1 2 5番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(ix) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4 番目（Phe) 、第 7 2番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目 (Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

( X ) 配列番号： 1 1で表わされるァミノ酸配列の第 1 1 8番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 2 O番目 (Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目（Leu) 〜第 1 2 5番目 (Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(xi ) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるぺプチド (該欠失したアミノ酸配列は少なぐとも 5個のアミノ酸からなる）、

(xi i ) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミ Z酸が付加したアミノ酸配列からなるぺプチド、

(xi i i ) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミ Z酸が挿入されたァミノ酸配列からなるぺプチド、

(xiv) 上記（ i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が他のァミノ酸で置換されたァミノ酸配列からなるぺプチド、または

(XV) 上記（xi) 〜（xiv) の欠失 ·付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたァミノ酸配列からなるペプチドである上記 [ 1 8 ] 記載の剤、 [ 2 1 ] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコードする D N A を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、'不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナ一症侯群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[ 2 2 ] D N Aが配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表されるァミノ酸配列からなるポリぺプチドをコードする D N Aである上記 [ 2 1 ] 記載の剤、

[ 2 3 ] D N Aが、

(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(ii i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目 (Phe) 、第 1 1 5番目 (Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6 番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目 (Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Lys) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met ) 〜第 9 2番目（Phe) または第 8 4番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

( V ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Leu) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 1 5番目

(Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6番目（Asn) 〜第 1 3 1 番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、、

(vi i) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 2番目（Asp) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目（Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(vi ii) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8 番目（Phe ) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目

(Phe) 、第 1 2 0番目（Ser) 〜第 1 2 5番.目 (Phe ) または第 1 2 1番目 (Leu) 〜第 1 2 5番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(ix) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4 番目（Phe) 、第 7 2番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目 (Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

( X ) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（p_ro) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 2 0番目 (Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) またば第 1 2 1番目（Leu) 〜第 1 2 5番目 (Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

(xi) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜5個のアミノ酸が欠失したァミノ酸配列からなるぺプチド（該欠失したァミノ酸配列は少なくとも 5個のアミノ酸からなる）、

(xii) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるぺプチド、

(xiii) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が挿入されたァミノ酸配列からなるぺプチド、

(xiv) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が他のァミノ酸で置換されたァミノ酸配列からなるぺプチド、または

(XV) 上記（xi) 〜（xiv) .の欠失付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるぺプチド、

をコードする DNAである上記 [21] 記載の剤、

[24] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコードする D N A を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、タナ一症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神およぴ行動障害または神経系の疾患の診断剤、 [ 2 5 ] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩に対する抗体を含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[ 2 6 ] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドもしくはその部分べプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩に対する抗体を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カノレシゥム血症、' 低カリウム血症、シヱーグレン症候群、クッシング病、タツシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の診断剤、

[ 2 7 ] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分べプチドをコードする D N A に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D N Aを含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、 - 低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[ 2 8 ] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低力リウム血症、シ: —ダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神おょぴ行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、 '

[ 2 9 ] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[ 3 0 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[31] OT7T022が配列番号： 13または配列番号： 15で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質である上記 [30] 記載の剤、

[32] 配列番号： 13で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT7T022またはその部分ぺプチドをコードする DNAを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低力リウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[33] DN Aが配列番号： 13または配列番号： 15で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質 OT 7 T 022またはその部分ペプチドをコードする DNAである上記 [32] 記載の剤、

[34] 配列番号： 13で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT7T 022またはその部分ぺプチドをコードする DNAを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低力リウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体 JS瘍、 CRH産生腫瘍、ァノレドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドス'テロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の診断剤、

[ 3 5 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[ 3 6 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低力リウム血症、シヱーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、ァ'ジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の診断剤、

[ 3 7 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプチドをコ一ドする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D N Aを含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[ 3 8 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対するァゴニス.トを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シヱーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防■治療剤、

[ 3 9 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分べプチドまたはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、 '

[ 4 0 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分べプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤、

[ 4 1 ] 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防■治療剤、

[ 4 2 ] 哺乳動物に対して、

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリべプチドもしくはその部分べプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩、

(ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドをコ一ドする D N A、 ( iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を増加させるィ匕合物またはその塩、

( iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩、

( V ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ペプチドをコードする D N A、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ぺプチドまたはその塩に対するァゴニスト、または

(vii) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻.、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H 産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾ一ル抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃■十二指腸潰瘍、過敏 f生腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多囊胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神およぴ行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療方法、

[ 4 3 ] 哺乳動物に対して、

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩に対する抗体、 (ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコードする D N Aに申目補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D NA、

(iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、

(iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分べプチドまたはその塩に対する抗体、

( V ) 配列番号： 1 3で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター翠白質 Ο Τ 7 Τ 0 2 2またはその部分べプチドをコードする D Ν Αに相補的な塩基配列またはその一部を含有するァンチセンス D NA、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または

(vii) 配列番号、： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の了ミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 Τ 0 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする拒食症、神経†生食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低ァノレドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療方法、

[ 4 4 ] 過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症悸群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤を製造するための

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩、 ■

(ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配歹 ijを含有するポリべプチドまたはその部分ぺプチドをコ一ドする D N A、

(iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸酉己列を含有するポリべプチドまたはその部分べプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、

(iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 Τ 0 2 2、その部分べプチドまたはその塩、，

( V ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸酉己列を含有するレセプター蛋白質 Ο Τ 7 Τ 0 2 2またはその部分ぺプチドをコードする D N A、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質〇T 7 Τ 0 2 2、その部分べプチドまたはその塩に対するァゴニスト、または

(vii) 酉己列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T O 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用、

[ 4 5 ] 拒食症、神経性食思不振症、脱'水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低ァノレドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、気分 [感情] 障害、ストレス関連障害または錘体外路系疾患の予防 ·治療剤を製造するための

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分べプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩に対する抗体、

(ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコ一ドする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部含有するァンチセンス D N A、

(iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分べプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、

(iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ぺプチドまたはその塩に対する抗体、 ' ( V ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ペプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D N A、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に对するアンタゴニスト、または

(vii) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配歹 Uを含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用、

[46] 配歹 tj番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同.一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩、および（または）配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質 OT 7T022、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする（1) 摂食量、（2) 飲水量、（3) 尿量、（4) 侵害刺激に対する過敏性、

(5) 血漿中のコルチコステロン値、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値または（8) 血圧の調節薬のスクリーニング方法、

[47] 配列番号： 1で表される：ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分べプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるいはその塩、および（または）配列番号： 13で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質 OT 7T 022、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする（1) 自発行動量または（2) ストレス感受性の調節薬のスクリーニング方法、

[48] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステ^^あるいはその塩、および（または）配列番号： 13で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質〇Τ 7 TO 22、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CR H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃，十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低ァルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬のスクリーニング方法、

[49] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステノレあるいはその塩、および（または）配列番号： 13で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質 OT7T 022、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる（1) 摂食量、（2) 飲水量、（3) 尿量、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値、 (7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値または（8) 血圧の調節薬のスクリーニング用キット、

[50] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのァミドまたはそのエステノレあるいはその塩、および（または）配列番号： 13で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質 ΟΤ7Τ 022、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる（1). 自発行動量または（2) ストレス感受性の調節薬のスクリーニング用キット、および

[51] 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分べプチドまたはそのアミドまたはそのエステ/レあるいはその塩、および（または）配列番号： 13で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、 'アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神籙性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧'中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、'低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬のスクリーユング用キットなどを提供するものである。

本発明の遺伝子導入動物は、野生型（非トランスジエニック）動物に比べて、摂食量 ·飲水量の'减少、尿量の減少、対侵害刺激過敏性、血漿中コルチコステロン値の上昇、血漿中黄体形成ホルモン（L H) 値'卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の低下、高血圧、自発行動量の低下、対ストレス過敏性などの表現型を示すので、拒食症、精神および行動障害、神経系の疾患などの各種疾患の予防薬 ·治療薬の評価、 R F R P遺伝子異常患者の遺伝子治療用実験などに用いることができ、また、本発明の遺伝子導入動物から採取した細胞などを培養して、 R F R Pァゴニストまたはアンタゴニス 1、の評価に用いることができる等の効果を奏する。発明を実施するための最良の形態

本発明の「外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子を組み込んだ D NAを有する非ヒト哺乳動物」（以下、本発明の遺伝子導入動物と略記する場合がある）は、非ヒト哺乳動物の受精卵や、未受精卵、精子およびその前駆細胞（始原生殖細胞、卵原細胞、母細胞、卵細胞、精原細胞、精母細胞、精細胞等）などに、好ましくは受精卵の胚発生の初期段階（さらに好ましくは 8細胞期以前）において、リン酸カルシクム共沈殿法、電気穿孔（エレクト口ポレーシヨン）法、リポフエクシヨン法、凝集法、顕微注入（マイクロインジェクション）法、遺伝子銃（パーティクルガン）法、 D E A E—デキストラン法などの遺伝子導入法によって、目的とする外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子を目的とする細胞などに導入することにより作出される。また、該遺伝子導入法により、非ヒト哺乳動物の体細胞、組截、臓器などに目的とする D N Aを導入し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さらに、この細胞を上述の胚（もしくは生殖）細胞と公知の細胞融合法を用いて融合させることにより遺伝子導入動物を作出することもできる。あるいは、ノックアウト動物を作製する場合と同様に、非ヒト哺乳動物の胚性幹糸田胞（E S細胞）に上記の遺伝子導入法を用いて目的とする D N Aを導入し、予め該 D N Aが安定に組み込まれたクローンを選択した後に、該 E S細胞を胚盤胞に&入するかあるいは E S細胞塊と 8細胞期胚とを凝集させてキメラマウスを作製し、生殖系列に導入遺伝子が伝達されたものを選択することによっても遺伝子導入動物を得ることが可能である。

また、このようにして作製された遺伝子導入動物の生体の一部（例えば、（i) 外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子を組み込んだ D N Aを有する細胞、組織、臓器など、（ii)これらに由来する細胞または組織を培養し、必要に応じ、継代したものなど、（iii)該遺伝子導入動物から単離し得る各種タンパク質または D NAなど）も、本発明の「外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子を組み込んだ D NAを有する非ヒト哺乳動物の生体の一部」として、本発明の「外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子を組み込んだ D N Aを有する非ヒト哺乳動物」と同様の目的に用いることが出来る。

遺伝子導入動物の生の一部である組織としては、脂肪組織、脳組織（例、偏桃、大脳皮質、海馬、視床下部、延髄、小脳など）、下垂体、副腎、膝臓、脾臓、小腸、精巣、筋肉などが好ましい。

遺伝子導入動物の生体の一部である細胞としては、脂肪細胞、神経細胞、免疫 .細胞（例、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、単球、 T細胞、 B細胞など）、上皮細胞、内皮細月包、表皮系細胞、筋細胞などが好ましい。

本発明で対象とし得る「非ヒト哺乳動物」としては、ゥシ、ブタ、ヒッジ、ャギ、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モノレモット、ノヽムスター、ラット、マウスなどが挙げられる。好ましくは、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モノレモット、ハムスター、マウスまたはラットであり、なかでも攀歯目（R o d e n t i a ) が好ましく、とりわけマウス（W i s t a r , S Dなど）、特に W i s t a r系統のマウスが疾患モデル動物として最も好ましい対象動物である。他に鳥類動物として、ニヮトリなども本発明で対象とする「非ヒト哺乳動物」と同様の目的に用いることが出来る。

R F R Pとしては、配列番号： 1で表わされるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド（以下、 R F R Pと称する場合がある）またはその部分ペプチドが用いられ、ヒトゃ温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニヮ卜リ、ゥサギ、ブタ、ヒッジ、ゥシ、サルなど）の細胞（例えば、網膜細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膝臓 ]3細胞、骨髄細胞、メサンギゥム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋糸田胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、 T 細胞、 B細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくは癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位 (例、網膜、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、勝臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など、または血球系の細胞もしくはその培養細胞（例えば、 MEL， Ml, CTL L- 2, HT- 2, WEH I一 3， HL— 60, J OSK- 1, K562, ML — 1, MOLT- 3, MOLT— 4, MOLT— 10， CCRF— CEM, TA LL一 1， J u r k a t , CCRT-HSB- 2, KE— 37， S KW_ 3， H UT- 78, HUT— 102， H 9 , U 937, THP— 1, HE L, J K- 1 , CMK, KO- 812, MEG— 0 1など）に由来するポリペプチドであってもよく、合成ポリペプチドであってもよい。

配列番号： 1で表わされるァミノ酸配列と実質的に同一のァミノ酸配列としては、'配列番号： 1で表わされるァミノ酸配列と約 70 %以上、好ましくは約 8 0%以上、より好ましくは約 90°ふ以上、さらに好ましくは約 95%以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。例えば、配列番号： 1で表わされるァミノ酸配列と実質的に同一のァミノ酸配列としては、配列番号： 1で表わされるァミノ酸配列の第 22〜 180番目のァミノ酸配列を有するァミノ酸配列などがあげられる。

アミノ酸配列の相同性は、相同' I生計算アルゴリズム NCB I BLAST (N a t i o n a 1 C e n t e r f o r B i o t e c hn o l o g y I n f o rma t i o n B a s i c L o c a l A l i g nme n t S e a r c h To o l) を用い、以下の条件（期待値 = 10 ；ギヤップを許す；マトリクス -BLOSUM62 ；フィルタリング =OFF) にて計算することができる。より具体的には、配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列として、例えば、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表されるァミノ酸配列などがあげられる。

本発明に用いられる RFRPは、具体的には、前記の配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるポリべプチドまたは配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列など）を有し、配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるポリペプチドと実質的に同質の活性などを有するポリペプチドである。

実質的に同質とは、プロラクチン分 f必促進活性などが性質的に（例、生理化学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。従って、プロラクチン分泌促進活性が同等（例、約 0 . 1〜： 1 0 0倍、好ましくは約 0 . 5〜 1 0倍、より好ましくは 0 . 5〜2倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、ポリべプチドの分子量などの量的要素は異なっていてもよい。

プロラクチン分泌促進活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができるが、例えば、 WO 0 1 / 6 6 1 3 4号の実施例 1に従つて測定することができる。

また、 R F R Pとしては、例えば、（i)配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表わされるァミノ酸配列中の 1〜2 0個（好ましくは、 1〜1 5個、さらに好ましくは、 1〜5個、より好ましくは、 1〜3個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（i i)配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列に 1〜2 0個（好ましくは、 1〜1 5個、 - さらに好ましくは、 1〜5個、より好ましくは、 1〜3個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（iii)配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表わされるァミノ酸配列に 1〜 2 0個（好ましくは、 1〜1 5個、さらに好ましくは、 1〜5個、より好ましくは、：!〜 3個）のアミノ酸が挿入されたァミノ酸配列、（iv)配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列中の 1〜2 0個（好ましくは、 1〜1 5個、さらに好ましくは、 1〜5個、より好ましくは、 1〜3個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたァミノ酸配列、または（V)それら失■付加 ·揷入 ·置換を組み合わせたァミノ酸配列を有するポリペプチドも含まれる。

上記のようにアミノ酸配列が欠失、付カロ、揷入または置換されている場合、その欠失、付加、揷入または置換の位は特に限定されない。

本明細書におけるポリぺプチドは、ぺプチド標記の慣例に従って左端が N末端 (ァミノ末端）、右端が C末端（カルボキシル末端）である。配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRPをはじめとする RFRPは、 C末端がカルボキシル基 (-COOH) 、カルボキシレ一ト（一 COO一）、アミド (一 CONH₂ ) またはエステル（一 COOR) の何れであってもよい。

ここでエステルにおける Rとしては、 f列えば、メチル、ェチル、 η—プロピル、イソプロピルもしくは η—ブチルなどの C i 一 6 アルキル基、例えば、シクロぺンチル、シク口へキシルなどの C₃ ― ₈ シク口アルキル基、例えば、フエニル、 a—ナフチルなどの C₆ 一！ ₂ 了リール基、例えば、ベンジル、フエネチルなどのフエ-ルー d 一 ₂ ァルキル基もしく〖ま α—ナフチルメチノレなどの α—ナフチノレ一一 ₂ アルキル基などの C₇ _ ！ ₄ ァラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるビバロイルォキシメチ /レ基などが用いられる。

RFRPが C末端以外にカルボキシル基 (またはカルボキシレート) を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明でいう RFRPの範囲に含まれる。この場合のエステノレとしては、例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。

さらに、 RFRPには、 N末端のアミノ酸残基 (例、メチォニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、ァセチル基などの一 ₆ アルカノィルなどの _ ₆ ァシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成する N末端のグルタミル基がピ口グルタミン酸化したもの、分子内のァミノ酸の側鎖上の置換基（例えば一 OH、 _SH、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グァニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、ァセチル基などの C】 ― _β アルカノィル基などの C_t 一 ₆ ァシル基など) で保護されているもの、あるいは糠鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。以下、これらのポリペプチドを含めて RFRPと略称することもある。

本発明で用いられる R F R Pの具体例としては、例えば、配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRP、酉 S列番号： 3で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRP、配列番号： 5で表わされるァミノ酸配列からなるゥシ RFRP、配列番号.： 7で表わされるアミノ酸配列からなるラット RFRP、配列番号： 9で表わされるァミノ酸配列からなるラット RFRP、配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列からなるマウス RFRPなどが用いられ、なかでも配列番号： 9で表わされるァミノ酸配列からなるラット R F R Pが好ましい。

RFRPの部分ペプチド（以下、 RFRP部分ペプチドと称する場合がある）としては、前記した RFRPの部分ペプチドであって、 OT7T022 (WOO 0Z29441号）に結合する能力等を有するものであれば、いかなるものでもよい。

また、 RFRP部分ペプチドは、そのアミノ酸配列中の 1 ~ 5個（好ましくは、 1〜3個）のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に 1〜 5個（好ましくは、 1〜3個）のアミノ酸が付加し、まこは、そのアミノ酸配列に 1〜5個 (好ましくは、 1〜3個）のアミノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸配列中の 1〜5個（好ましくは、 1〜3個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたァミノ酸配列からなるものであってもよく、または、それら欠失 .付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるものであってもよい。

また、 RFRP部分ペプチドは C末端が力/レポキシル基 (-COOH) 、カルボキシレート（一 COO— ) 、アミド（― C〇NH₂ ) またはエステル（一 C〇 OR) (Rは上記と同意義を示す）のいずれであってもよい。なかでも、 C末端がアミド（一 CONH₂ ) であるものが好ましい。

RFRP部分ペプチドが C末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはェステル化されているものも本発明でいう RFRP部分ペプチドに含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。

さらに、 RFRP部分ペプチドには、前記した RFRPと同様に、 N末端のァミノ酸残基（例、メチォニン残基）のァミノ基が保護基で保護されているもの、 N端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ぺプチドなどの複合ぺプチドなども含まれる。以下、これらの部分べプチドも含めて RFRP部分べプチドと略称することもある。

RFRP部分ペプチドとして好ましくは、 RFamide、 RSamideまたは RL amide構造を有するペプチド、より好ましくは、 R F amideまたは R S amide構造を有するペプチド、特に好ましくは、 RFamideを有するペプチドが挙げられる。

R F amide構造とは、ペプチドの C末端が Arginine (アルギニン） - Phenylalanine (フエ二ルァラニン） - NH₂構造になっていることをいい、 R S amide構造とは、ペプチドの C末端が Arginine (アルギニン） -Serine (セリン） - NH₂構造になっていることをいい、 RLamide構造とは、ペプチドの C末端が Arginine (アルギニン） -Leucine (ロイシン） -丽 ₂構造になっていることを意味する。

RFRP部分ぺプチドの中でも、例えば、

(i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 88番目 (Leu) 〜第 92番目（Phe) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列の N末端側に、それぞれ配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 87番目（Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 8 7個のアミノ酸が付カ卩していてもよいアミノ酸配列からなるヒト RFRP— 1、

(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるァミノ酸配列の第 101番目（Ser) 〜第 1 12番目（Ser) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列の

N末端側に、それぞれ配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 100番目（Arg) のアミノ酸酉 3列の C末端から数えて：!〜 1 00個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸酉己列からなるヒト RFR P— 2、

(iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 27 番目（Leu) 〜第 1 3 1番目（Phe) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列 - の N未端側に、それぞれ配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 1 26番目（Asn) のアミノ酉矣配列の C末端から数えて 1〜126個のアミノ酸が付カ卩していてもよいアミノ酸配列からなるヒト RF RP— 3、

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 88番目（Leu) 〜第 92番目（Phe) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列の N末端側に、配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 87番目（Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜87個のアミノ酸が付カ卩していてもよいアミノ酸配歹からなるゥシ RFRP_ 1、

(ν)'配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 ' 2番目（Leu) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸酉己列の N末端側に、配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 1 00番目（Arg) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜100個のアミノ酸が付加していてもよいァミノ酸配列からなるゥシ RFRP_2、

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目（Phe) のァミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸野己列の N末端側に、配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 1 26番目（Asn) 'のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 1 26個のァミノ酸が付加していてもょレ、アミノ酸配列からなるゥシ RFRP— 3、

(vii) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるァミノ酸配列の第 90番目（Leu) 〜第 94番目（Phe) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列の N 末端側 tこ、配列番号： 7または 9で表わされるァミノ酸 ϊ己列の第 1番目（Met) 〜第 89番目（Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜89個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるラット RFR P- 1、

(viii) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるァミノ酸配列の第 121 番目（Leu) 〜第 125番目（Phe) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列の N末側に、配列番号： 7または 9で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 (Met) 〜第 120番目（Ser) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 120個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるラット RFRP— 3、

(ix) SE列番号： 1 1で表わされるァミノ酸配列の第 9 Ο番目（Leu) 〜第 94 番目（Phe) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列の N末端側に、配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 89番目（Asn) のアミノ酸配歹『Jの C末端から数えて 1〜89個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列らなるマウス RFRP— 1、

(X) 酉己列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 12 1番目（Leu) 〜第 1 25番目（Phe) のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列の N末端側に、配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1番目（Met) 〜第 120番目（Ser) のアミ 7酸配列の C末端から数えて 1〜120個のアミノ酸が付加していてもよいアミ Z酸配列からなるマウス RFRP— 3、

(xi) ±i記（ i ) 〜（X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が欠失しこァミノ酸配列からなるぺプチド (該欠失したァミノ酸配列は少なくとも

5個の： rミノ酸からなる）、

(xii) _h記（ i ) 〜（X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が付加しこァミノ酸配列からなるぺプチド、

( iii) ' 上記（i) 〜（X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が揷入さ; Τυたァミノ酸配列からなるぺプチド、

(xiv) 上記（ i ) 〜（X) のペプチドめアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、または

(xv) 上記（xi) 〜（xiv) の欠失 ·付加 ·揷入 ·置換を組み合わせたァミノ酸配 IJからなるぺプチドなどが用いられる。

これらの RFRP部分ペプチドの中でも、 ' ( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 56番目 (Ser) 〜第 92番目（Phe) 、第 70番目（Val) 〜第 92番目（Phe) 、第 73 番目（Met) 〜第 92番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) または第 84番目（Ser) 〜第 92番目（Phe) のアミノ酸配列からなるヒト R F R P ― 1、

(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 01番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Ser) のアミノ酸配列からなるヒ卜 R F R P— 2、

(iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 10 1 番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 04番目（Ala) 〜第 1 3 1番目

(Phe) 、第 1 1 5番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 24番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 25番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 26 番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) または第 1 27番目（Leu) 〜第 1 3 1番目 (Phe) のアミノ酸配列からなるヒト RFRP_3、

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 58番目（Ser) 〜第 92番目（Phe) 、第 70番目（Lys) 〜第 92番目（Phe) 、第 73番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) または第 8 4番目 (Ser) 〜第 92番目（Phe) のアミノ酸配列からなるゥシ R F R P— 1、 (-v) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Leu) のアミノ酸配列からなるゥシ RFRP— 2、

(^i) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 04番目（Ala) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 1 5番目 (Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 '4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6番目（Asn) 〜第 1 3 1 番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目（Phe) のアミノ酸配列からなるゥシ RFRP— 3、

(vii) 配列番号： Ίまたは配列番号： 9で表わされるァミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 94番目（Phe) 、第 7 2番目（Asp) 〜第 94番目（Phe) 、第 7

5番目（Met) 〜第 94番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 94番目（Phe) または第 84番目（Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるラット R F RP— 1、

(viii) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるァミノ酸配列の第 1 1 8 番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目

(Phe) 、第 1 2 0番目（Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目 (Leu) 〜第 1 2 5番目（Phe) のアミノ酸配列からなるラット R F R P— 3、

(ix) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 94 番目（Phe) 、第 72番目（Val) 〜第 94番目（Phe) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目 (Pro) 〜第 94番目（Phe) のアミノ酸配列からなるマウス R F R P— 1、 ( X ) 配列番号： 1 1で表わされるァミノ酸配列の第 1 1 8番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第: L 2 0番目 (Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目（Leu) 〜第 1 2 5番目 (Phe) のアミノ酸配列力らなるマウス RFRP— 3、

(xi) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個の: Tミノ酸が欠失したアミノ酸配列らなる欠失型ペプチド（該欠失型ペプチドは少なくとも 5個のアミノ酸からなる）、

(xii) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のミノ酸が付加したアミノ酸配列力らなる付加型ぺプチド、

(xiii) 上記（i ) 〜（X) のペプチドめアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が揷入されたァミノ酸配列からなる挿入型ぺプチド、

(xiv) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたァミノ酸配列からる置換型ぺプチド、または

(XV) 上記（xi) 〜（xiv) の欠失 ·付加 ·揷入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドなどが好ましく用いられ、なかでも上記したラット; RFR P— 1が好ましい。

特にこれらのペプチドのアミド体（好ましくは、これらペプチドの C末端の力ルポキシル基（一 COOH) がアミド化された（一 CONH₂ ) ペプチド）が好ましい。

RFRPまたは： FRP部分ペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸 (例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としてま、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酉変、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。

RFRPもしく fまその塩または RFRP部分べプチドもしくはその塩は、 WO 00/29441号、 WO 01/661 34号などに記載の方法に従って製造することができる。

外来性 R FRP遺伝子とは、遺伝子導入対象動物が有する内在性の遺伝子とは異なる遺伝子であり、具体的には前記の哺乳動物から単離 ·精製した RFRP遺伝子または合成した R F R P遺伝子などが用いられる。

外来性 R F R P遺伝子の変異遺伝子としては、本発明の外来性 R F R P遺伝子に変異（例えば、突然変異、部位特異的突然変異など）が生じたもの、具体的には、塩基の付加、久損、他の塩基への置換などが生じた遺伝子が挙げられる。より具体的には、該塩基の付加、欠損、他め塩基への置換の結果、 RFRPを構成するアミノ酸配列において、 1ないし 3 0個、好ましくは.:！ないし 1 0個、さらに好ましくは 1ないし 5個、より好ましくは 1または 2個のアミノ酸に置換、付加または欠損が生じるように変異させることが好ましく、 R F R Pの機能を失わない変異であれば何れの変異であってもよい。

外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子としては、前述した R F'R Pをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノム D NA、ゲノム D N Aライブラリー、前記した細胞 ·組織由来の c D NA 前記した細胞 ·組織由来の c D NAライブラリー、合成 D NAのいずれでもよい, ライブラリーに使用するベクターは、バタテリオファージ、プラスミド、コスミ、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞 .組織より total R N Aまたは m R N A画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 R T— P C R法と略称する）によって増幅することもできる。

より具体的には、外来性 R F R P遺伝子またはその変異遺伝子としては、例えば、配列番号： 2、配列番号： 4、配歹 U番号： 6、配列番号： 8、配列番号： 1 0または配列番号： 1 2で表わされる；^基配列を含有する遺伝子、または配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6、配列番号： 8、配列番号： 1 0または配列番号： 1 2で表わされる塩基配列とノ、ィストリンジェントな条件下でハイプリダイズする塩基配列を有し、配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表されるァミノ酸配列からなる R F R Pと実質的に同質の活性を有するポリぺプチドをコ一ドする遺伝子などであれば何れのものでもよい。

配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6、配列番号： 8、配列番号： 1 0 または配列番号： 1 2で表わされる塩基配列どハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできる遺伝子としては、例えば、それぞれ配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6、配列番号： 8、配列番号： 1 0または配列番号： 1 2で表わされる塩基配列と約 70%以上、好ましくは約 80%以上、より好ましくは約 90%以上、さらに好ましくは約 95 %以上の相同性を有する塩基配列を含有する DN Aなどが用いられる。

塩基配列の相同性は、相同性計算ァ /レゴリズム N C B I BLAST (Na t l o n a 1 C e n t e r i o r B i o t e c h n o l o g y I n f o r ma t i o n B a s i c L o c a 1 A l i g nme n t S e a r c h T o o l ) を用い、以下の条件（期待値- 1 0 ；ギヤップを許す；フィルタリング =ON ；マッチスコア = 1 ；ミスマッチスコア =ー 3) にて計算することがでさる。

ハイブリダィゼーシヨンは、自体公矢口の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー ·クローニング， (Molecular Cloning) 2nd (J. Sarabrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に言己載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライプラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジヱントな条件に従って行なうことができる。

ハイストリンジェントな条件とは、 ί列えば、ナトリウム濃度が約 19〜 40 m M、好ましくは約 1 9〜 20 mMで、温度が約 50〜 70 、.好ましくは約 60 〜 65 °Cの条件を示す。特に、ナトリクム濃度が約 1 9 mMで温度が約 65 の場合が最も好ましい。

より具体的には、配列番号： 1で表 bされるァミノ酸配列からなるヒト RFR Pをコードする DNAとしては、配列眷号： 2で表わされる塩基配列からなる D NAなどが用いられる。また、配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRPをコードする DNAとしては、配列番号： 4で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。配歹番号： 5で表わされるアミノ酸配列からなるゥシ RFRPをコードする DNAとしては、配列番号： 6で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。配列番号： 7で表わされるアミノ酸配列からなるラット RFRPをユードする Aとしては、配列番号： 8で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。配列番号： 9で表わされるァミノ酸配列からなるラット RFRPをコードする DNAとしては、配列番号： 10で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列からなるマウス RFRP をコードする DNAとしては、配列番号： 12で表わされる塩基配列からなる D N Aなどが用いられる。

RFRP部分べプチドをコ一ドする外来十生遺伝子またはその変異遺伝子としては、前述した RFRP部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノム DNA、ゲノム DNAライブラリ一、'前記した細胞 .組織由来の c DNA、前記した細胞 .組織由来の c DNAラィプラリー、合成 DNAのいずれでもよい。

RFRP部分ぺプチドをコ一ドする遺伝子またはその変異遺伝子としては、例えば、配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6、配列番号： 8、配列番号： 10または配列番号： 12で表わされる塩基配列を含有する DNAの部分塩基配列を有する DNA、または配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6、配列番号： 8、配列番号： 10または配列番号： 12で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1 , で表されるアミノ酸配列からなる RFRP と実質的に同質の活性を有するポリぺプチドをコ一ドする遺伝子の部分塩基配列を有する遺伝子などが用いられる。配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6、配列番号： 8、配列番号： 10 または配列番号： 12で表わされる塩基配とハイブリダイズできる遺伝子は、前記と同意義を示す。

塩基配列の相同性は、前記した相同性計ァルゴリズム NCB I BLAST を用い、同様の条件にて計算することができる。

ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジヱントな条件は前記と同様のものが用いられる。

また、 R F R P部分ペプチドをコードする遺伝としてより具体的には、前記した具体的な R F R P部分ぺプチドをコードする遣伝子などが用いられる。例えば、 ·

( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 5 6番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Val) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3 番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) または第 8 4番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のアミ ,酸配列からなるヒト R F R P 一 1をコードする遺伝子としては、それぞれ配列番号： 2または配列番号： 4で表わされる塩基配列の第 1 6 6番目〜第 2 7 6番目、第 2 0 8番目〜第 2 7 6番目、第 2 1 7番目〜第 2 7 6番目、、第 2 4 1番目〜第 2 7 6番目または第 2 5 0 番目〜第 2 7 6番目の塩基配列からなる遺伝子、

(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わさるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Ser) のアミノ酸配列カらなるヒト R F R P— 2をコ一ドする遺伝子としては、それぞれ配列番号： 2 ¾たは配列番号： 4で表わされる塩基配列の第 3 0 1番目〜第 3 3 6番目の塩基酉己列からなる遺伝子、

(iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目

(Phe) 、第 1 1 5番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第: L 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6 番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目

(Phe) のアミノ酸配列からなるヒト R F R P— 3 をコードする遺伝子としては、それぞれ配列番号： 2または配列番号： 4で表わされる塩基配列の第 3 0 1番目〜第 3 9 3番目、第 3 1 0番目〜第 3 9 3番目、 3 4 3番目〜第 3 9 3番目、第 3 7 0番目〜第 3 9 3番目、第 3 7 3番目〜第 3 9 3番目、第 3 7 6番目〜第 3 9 3番目または第 3 7 9番目〜第 3 9 3番目の; ϋ基配列からなる遺伝子、 (iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸酉 3列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Lys) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 S 2番目（Phe) または第 8 4番目

(Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のアミノ酸配歹からなるゥシ R F R P— 1をコードする遺伝子としては、配列番号： 6で表わされる塩基配列の第 1 7 2番目〜第 2 7 6番目、第 2 0 8番目〜第 2 7 6番目、窮 2 1 7番目〜第 2 7 6番目、第 2 4 1番目〜第 2 7 6番目または第 2 5 0番目一第 2 7 6番目の塩基配列からなる遺伝子、

( V ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸酉 3列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2蕃目（Leu) のアミノ酸配列からなるゥ、ン R F R P— 2をコードする遺伝子としては、配列番号： 6で表わされ塩基配歹 Uの第 3 0 1番目〜第 3 3 6番目の塩基配列からなる遺伝子、

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸己列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 1 5番目 (Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4 目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6番目（Asn) 〜第 1 3 1 番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目（Phe) のアミノ酸配列からなるゥシ R F R P— 3をコードする遺伝子としては、配列番号： 6で表わされる塩基配列の第 3 0 1番目〜第 3 9 3番目、第 3 1 0番目〜第 3 9 3番目、第 3 4 3番目〜第 3 9 3番目、第 3 7 0番目〜第 3 9 3番目、第 3 7 3番目〜第 3 9 3番目、第 3 7 6番目〜第 3 9 3番目まこは第 3 7 9番目〜第 3 9 3番目の塩基配列からなる遺伝子、 '

(vii) 配列番号： 7または 9で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 2番目（Asp) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 5番目 (Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目 CVal) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目（Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるラット R F R P— 1をコードする遺伝子としては、それぞれ配列番号： 8または 1 0で表わされる塩基配列の第 1 72番目〜第 282番目、第 214番目〜第 282番目、第 22 3番目〜第 282番目、第 247番目〜第 282番目または第 250番目〜第 2

82番目の塩基配列からなる遺伝子、

(viii) 配列番号： 7または 9で表わざれるアミノ酸配列の第 1 1 8番目 (Phe) 〜第 125番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 25番目（Phe) 、第 1 20審目（Ser) 〜第 1 25番目（Phe) または第 1 2 1番目（Leu) 〜第 1 25番目（Phe) のアミノ酸配列からなるラット RFRP— 3をコードする遺伝子としては、それぞれ配列番号： 8または 1 0で表わされる塩基配列の第 352 番目〜第 375番目、第 355番目〜第 375番目、第 3 58番目〜第 375番目または第 361番目〜第 375番目の塩基配列からなる伝子

(ix) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 58番目（Ser) 〜第 94 番目（Phe) 、第 72番目（Val) 〜第 94番目（Phe) 、窮 75番目（Met) 〜第

94番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 94番目（Phe) または第 84番目 (Pro) 〜第 94番目（Phe) のアミノ酸配歹からなるマウス R F R P— 1をコードする遺伝子としては、配列番号： 1 2で表わされる塩基酉己列の第 1 Ί 2番目〜第 282番目、第 214番目〜第 282番目、第 223番目〜第 282番目、第 247番目〜第 282番目または第 250番目〜第 282 目の塩基配列からなる遺伝子、

(X) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目（Phe) 〜第 1

25番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 25番目（Phe) 、第 1 20番目 (Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目（Leu) 〜第 1 2 5番目 (Phe) のアミノ酸配列からなるマウス RFRP— 3をコードする遺伝子としては、配列番号： 1 2で表わされる塩基配列の第 352番目〜第 375番目、第 3 56番目〜第 375番目、第 358番目〜第 375番目または第 36 1番目〜第

375番目の塩基配列からなる遺伝子などが用いられる。 RFRPまたはその部分べプチドを完全にコードする遺伝子のクローユングは WO00Z29441号、 WO 01/66134号などに記載のお法に従って行うことができる。 -'

また、 R F R Pまたはその部分ぺプチドをコードする遺伝子から R F R Pまたはその部分べプチドを製造する場合、 WO 00/29441号、 01/66 134号などに記載の方法に従って行うことができる。

RFRPもしくはその部分ペプチド、およびこれらをコードする遺伝子は、自体公知の方法で標識化されていてもよく、具体的にはアイソトープラベル化されたもの、蛍光標識されたもの（例えば、フルォレセインなどによら蛍光標識）、ビォチン化されたものまたは酵素標識されたものなどがあげられ 5。

本発明における外来性 RFRP遺伝子またはその変異遺伝子ひス下、単に RF RP遺伝子と称することもある）は、導入または発現の対象とすら非ヒト哺乳動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来のものであってもいが、異種の哺乳動物由来のものであることが好ましい。該遺伝子を対象動物 (こ導入させるにあたっては、当該遺伝子を対象となる動物の細胞で発現させうるァ "プロモーターの下流に連結した遺伝子コンストラクト（例、ベクターなど）として用いるのが一般に有利である。具体的には、，ヒトの RFRP遺伝子を導入させ場合、ヒト R F RP遺伝子と相同性が高い RFRP遺伝子を有する各種哺乳動 (ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど (好ましくはラットなど））に由来し、ヒトの RFRP遺伝子を発現させうる各種プロ一ターの下流に、該遺伝子を連結したベクターを、対象となる非ヒト哺乳動物 (^受精卵（例えばラット受精卵）へマイクロインジェクションすることによって、目的とするヒト R F R P遺伝子を高発現する遺伝子導入非ヒト哺乳動物を作出できる。

RFRP遺伝子の発現ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミド、酵母由来のプラスミド、 λファージなどのバクテリオファージ. モ口ニー白血病ウイノレスなどのレトロウィルス、ワクシニアウイノレスまたはバキュロウィルスなどの動物ウィルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミ "Kなどが好ましく用いられ、特に大腸菌由来のプラスミドが好ましい。

外来性 RFRP遺伝子の遺伝子発現調節を行うプロモーターとしては、例えば、ウイノレス（サイトメガロウイノレス、モロ-一白血病ゥイノレス、 J Cゥイノレス、乳癌ウィルスなど）に由来する遺伝子のプロモーター、各種哺乳動物（ヒト、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）および鳥類 (ニヮトリなど）に由来する遺伝子（例えば、ァノレブミン、エンドセリン、ォステオカルシン、筋クレアチンキナーゼ、 I型および I I型コラーゲン、サイタリック AMP依存蛋白キナーゼ β Iサブュュット、心房ナトリゥム利尿性因子、ドーパミン i3—水酸化酵素、ニュー!？フィラメント軽鎖、メタ口チォネイン Iおよび I I A、メタ口プロティナーゼ 1組織インヒビター、平滑筋 α;ァクチン、ポリペプチド鎖伸長因子 1 α (E F l—ひ）、 j3ァクチン、 αおよび j8ミオシン重鎖、ミオシン軽鎖 1および 2、ミエリン塩基性蛋白、血清ァミロイ： F Ρコンポーネント、レニンなど）のプロモーターなどが挙げられ、なかでもニヮトリ βァクチンプロモーターを含む C AGプロモーターなどを用いることがでさる。

さらに好ましくは、目的とする疾患モデルに応じて、標的組織で外来性 RF R P遺伝子を特異的もしくは高発現させ得るプロモーター（例： Ff臓で高発現可能な血清アミロイド Pコンポーネント (SAP) 、アルブミン、トランスフェリン、アンチト口ンビン I I I、 a 1一アンチトリプシンなどの遺伝子プロモーター；心臓で高発現可能なひおよび |3ミオシン重鎖、ミオシン軽鎖 1：!¾よび 2などの遺伝子プロモーター；腎臓で高発現可能な PTH/PTH r P受容体などの遺伝子プロモーター；副腎で高発現可能な AC TH受容体などの遺伝子プロモーター；消化管で高発現可能な脂肪酸結合タンパク質などの遺伝子プロモーター；脳で高発現可能なミエリン塩基性蛋白、グリア線維性酸性蛋白などの遺伝子プロモータ一等）を適宜選択することができる。例'えば、本発明の遺伝子導入動物が腎疾患モデルである場合、腎臓で高発現可能なプロモーターを用いることが好しい。上記ベクターは、遺伝子導入動物において、目的とするメッセンジャー R N A の転写を終結する配列（ポリ A、一般にターミネータ一と呼ばれる）を; Tしていることが好ましく、例えば、ウィルス由来、各種哺乳動物および鳥類由おの各遺伝子の配列を用いて遺伝子発現を操作することが出来る。好ましくは、、ミアンウィルスの S V 4 0ターミネータ一などが用いられる。 _tその他、目的の ¾：伝子をさらに高発現させる目的で、各遺伝子のスプライシングシグナル、ェンノ、ンサ一領域、真核遺伝子のイントロンの一部を、プロモーター領域の 5，上流、プロモ一ター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の 3 ' 下流に連結することも目的により可能である。

また、上記のベクターは、導入遺伝子が安定に組み込まれたクローンを選択するための選択マーカー遺伝子（例：ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性などの薬剤耐性遺伝子）をさらに含むことが好ましい。さらに、相同組換えにより宿主染色体の特定の部位に導入遺伝子を糸且み込むこと（即ち、ノックイン動物の作製）を意図する場合には、上記のべクターは、ランダムな挿入を排除するために、標的部位と相同な D NA配列の外側に単純へルぺスウィルス由来チミジンキナーゼ遺伝子やジフテリァ毒素遺伝子をネガティブ選択マーカー遺伝子としてさらに含むことが好ましい。これらの実施餱様については後で詳述する。

R F R Pの翻訳領域は、ヒトゃ各種非ヒト哺乳動物（ゥサギ、ィヌ、ネ-コ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）の肝臓、腎臓、繊維芽細胞などに由来する D N Aおよぴ市販の各種ゲノム D NAライプラリーに由来するゲノム D NAの全てあるいは一部を原料として用い、あるいはヒトゃ各種非ヒト哺乳動物の脳、肝臓、腎臓、繊維芽細胞などの臓器あるいは細胞に由来する R N Aから公知の方法により調製された相補 D NAを原料として用いて、取得することが出来る。また、上記の細胞あるいは組織などから得られた R F R Pの翻訳領竑を用レヽて、点突然変異誘発法などにより変異した翻訳領域を作製することもできる _Q これらは何れも遺伝子導入動物に利用可能な材料である。

以上の翻訳領域は、導入動物において発現しうる遺伝子コンストラクト（ィ列、ベクターなど）として前記のプロモーターの下流（好ましくは、転写終結部ィ立の上流）に連結させる通常の遺伝子工学的手法により、 RFRP遺伝子を組み 3Λんだ D N Aを作製することができる。

具体的には、 CMVェンハンサー、ニヮトリァクチンプロモーターを含発現調節領域、およびゥサギ βグロビンポリ Α付加シグナルを含む領塽を有するプラスミド p CXN2に、ラット RFRP遺伝子を挿入した p CXN2—R a t RF am i d e 5 (後述する実施例 1) などが用いられる。

好ましい一実施態様においては、、上記のようにして得られる外来性 R F R Pをコードする DNAを含む発現ベクターは、マイクロインジェクション法により対象となる非ヒト'哺乳動物の初期胚に導入される。

対象非ヒト哺乳動物の初期胚は、同種の非ヒト哺乳動物の雌雄を交配させ" T得られる体内受精卵を採取するか、あるいは同種の非ヒト哺乳動物の雌雄からそれぞれ採取した卵と精子を体外受精させることにより得ることができる。

用いる非ヒト哺乳動物の齢や飼育条件等は動物種によつてそれぞれ異なる、例えばマウス (好ましくは C 57 B L/6 J系統 (B 6) などの近交系マウス、 B 6と他の近交系とのなど）を用いる場合は、雌が約 4〜約 6週齢、雄？^約 2〜約 8月齢程度のものが好ましく、また、約 12時間明期条件（例えば 7 ： 0 0- 19 ： 00) で約 1週間飼育したものが好ましい。

体内受精は自然交配によってもよいが、性周期の調節と 1個体から多数のネ]期胚を得ることを目的として、雌非ヒト哺乳動物に性腺刺激ホルモンを投与し" 過剰排卵を誘起した後、雄非ヒト哺乳動物と交配させる方法が好ましい。雌非ト哺乳動物の排卵誘発法としては、例えば初めに卵胞刺激ホルモン（妊馬血清'卜生性腺刺激ホルモン、一般に PMSGと略する）、次いで黄体形成ホルモン（ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、一般に hC.Gと略する）を、例えば腹腔内注射などにより投与する方法が好ましいが、好ましいホルモンの投与量、投与間隔は非ヒト Pfr 乳動物の種類によりそれぞれ異なる。例えば、非ヒト哺乳動物がマウス（好ましくは C 57BLZ6 J系統（B 6) などの近交系マウス、 B 6と他の近交系との Ftなど）の場合は、通常、卵胞刺激ホルモン投与後、約 48時間後に黄体形成ホルモンを投与し、直ちに雄マウスと交配させることにより受精卵を得る方法が好ましく、卵胞刺激ホルモンの投与量は約 20〜約 50 I UZ個体、好ましくは約 30 I U/個体、黄体形成ホルモンの投与量は約 0〜約 10 I U/個体、好ましくは約 5 I U/個体である。

一定時間経過後、膣栓の検査等により交配を確認した雌非ヒト哺乳動物の腹月空を開き、卵管から受精卵を取り出レて培地（例： Ml 6培地、修正 Whitten培地、 BWW培地、 M2培地、 WM— HEPES培地、 B WW— HE P E S培地等）中で洗って卵丘細胞を除き、微小滴培養法等により 5%炭酸ガス Z 95%大気下で DNA顕微注入まで培養する。直ちに顕微注入を行わない場合、採取した受精卵を緩慢法または超急速法等で凍結保存することも可能である。

一方、体外受精の場合は、採卵用雌非ヒト哺乳動物（体内受精の場合と同様のものが好ましく用いられる）に上記と同様に卵胞刺激ホルモンおよび黄形成ホルモンを投与して排卵を誘発させた後、卵子を採取して受精用培地（例： TYH 培地中で体外受精時まで微小滴培養法等により 5%炭酸ガス / 95%大気下で培養する。他方、同種の雄非ヒト哺乳動物（体内受精の場合と同様のものが好ましく用いられる）から精巣上体尾部を取り出し、精子塊を採取して受精用培地中で前培養する。前培養終了後の精子を卵子を含む受精用培地に添加し、微小滴培養法等により 5%炭酸ガス / 95%大気下で培養した後、 2個の前核を有する受精卵を顕微鏡下で選抜する。直ちに DN Aの顕©：注入を行わない場合は、得られた受精卵を緩慢法または超急速法等で凍結保存することも可能である。

受精卵への DNAの顕微注入は、マイクロマニピュレーター等の公知の装置を用いて常法に従って実施することができる。簡潔に言えば、胚培養用培地の微小滴中に入れた受精卵をホ一ルディングピぺットで吸引して固定し、インジェクシヨンピペットを用いて D N A溶液を雄性もしくは雌性前核、好ましくは雄性前核内に直接注入する。導入遺伝子は C s C 1密度勾配超遠心等で高度に精製したものを用いることが好ましい。また、導入遺伝子は制限酵素を用いてベクター部分を切断し、直鎖状に ύておくことが好ましい。

DN Α導入後の受精卵は胚培養用培地中で微小滴培養法等により 5%炭酸ガス /95%大気下で 1細胞期〜胚盤胞期まで培養した後、偽妊娠させた受胚用雌非ヒト哺乳動物の卵管または子宮内に移植される。受胚用雌非ヒト哺乳動物は移植される初期胚が由来する動物と同種のものであればよく、例えば、マウス初期胚を移植する場合は、 I CR系の雌マウス（好ましくは約 8〜約 10週齢）などが好ましく用いられる。受胚用雌非ヒト哺乳動物を偽妊娠状態にする方法としては、例えば、同種の精管切除（結紮）雄非ヒト哺乳動物（例えば、マウスの場合、 I CR系の雄マウス (好ましくは約 2月齢以上) ) と交配させて、膣栓の存在が確認されたものを選択する方法が知られている。

受胚用雌は自然排卵のものを用いてもよいし、あるいは精管切除（結紮）雄との交配に先立って、黄体形成ホルモン放出ホルモン（一般に LHRHと略する）もしくはその類縁体を投与し、受精能を誘起させたものを用いてもよい。 LHR H類縁体としては、例えば、 [3, 5- Dil - Tyr⁵]- LH- RH、 [Gin⁸ ]- LH- RH、 [D-Ala⁶]- LH- RH、 [des- Gly¹⁰]- LH- RH、 [D- His(Bzl)⁶]- LH- RHおよびそれらの Ethylamideなどが挙げられる。 L H R Hもしくはその類縁体の投与量、ならびにその投与後に雄非ヒト哺乳動物と交配させる時期は、非ヒト哺乳動物の種類によりそれぞれ異なる。例えば、非ヒト哺乳動物がマウス (好ましくは I C R系のマウスなど) の場合には、通常、 LHRHもしくはその類縁体を投与した後、約 4日目に雄マウスと交配させることが好ましく、 LHRHあるいはその類縁体の投与量は、通常、約 10〜 60 _g /個体、好ましくは約 40 M g Z個体である。通常、移植される初期胚が 8細胞期胚以後の場合は受胚用雌の子宮に、それより前（例えば、 1細胞期〜 4細胞期胚）であれば卵管に胚移植される。受胚用雌は、移植胚の発生段階に応じて偽妊娠からある日数が経過したものが適宜使用される。例えばマウスの場合、 2細胞期胚を移植するには偽妊娠後約 0 . 5日の雌マウスが、胚盤胞期胚を移植するには偽妊娠後約 2 . 5日の雌マウスが好ましレ、。受胚用雌を麻酔（好ましくは Avertin等が使用される）後、切開して卵巣を引き出し、胚培養用培地に懸濁した初期胚（約 5〜約 1 0個）を胚移植用ピペットを用いて、卵管腹腔口もしくは子宮角の卵管接合部付近に注入する。

移植胚が首尾よく着床し受胚雌が妊娠すれば、自然分娩もしくは帝王切開により仔非ヒト哺乳動物が得られる。自然分娩した受胚雌にはそのまま哺乳を継続させればよく、帝王切開により出産レた場合は、産仔は別途用意した哺乳用雌（例えばマウスの場合、通常に交配 ·分娩した雌マウス（好ましくは I C R系統の雌マウス等）に哺乳させることができる。

受精卵細胞段階における外来性 R F R Pをコードする遺伝子の導入は、導入遺伝子が対象非ヒト哺乳動物の生殖系列細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。導入遺伝子が染色体 D NAに組み込まれているか否かは、例えば、産仔の尾部より分離抽出した染色体 D N Aをサザンハイプリダイゼーシヨンまたは P C R法によりスクリーユングすることにより検定することができる。上記のようにして得られる仔非ヒト哺乳動物（F。）の生殖系列細胞において外来性 R F R Pをコードする遺伝子が存在することは、その後代（F J の動物全てが、その生殖系列細胞おょぴ体細胞のすべてに外来性 R F R Pをコードする遺伝子が存在することを意味する。

通常、 F。動物は相同染色体の一方にのみ導入遺伝子を有するヘテロ接合体として得られる。また、個々の F。個体は相同組換えによらない限り異なる染色体上にランダムに挿入される。相同染色体の両方に外来性 R F R Pをコードする遺伝子を有するホモ接合体を得るためには、 F。動物と非トランスジヱニック動物とを交雑して動物を作出し、相同染色体の一方にのみ導入遺伝子を有するへテロ接合体の兄妹同士を交雑すればよい。 1遺伝子座にのみ導入遺伝子が組み込まれていれば、得られる F₂動物の 1/4がホモ接合体となる。

別の好ましい一実施態様においては、外来性 R F R Pをコードする遺伝子を含む発現ベクターは、エレクト口ポレーシヨン法等の公知の遺伝子導入法により対象となる非ヒト哺乳動物の胚性幹細胞（ E S細胞）に導入される。

E S細胞は胚盤胞期胚の内部細胞塊（I CM) に由来し、インビトロで未分化状態を保ったまま培養維持できる細胞をいう。 I CMの細胞は胚節を経て将来、胚体を形成する細胞であり、生殖細胞を含むすべての組織の基になる幹細胞である。 E S細胞としては、既に樹立された細胞株ものを用いてもよく、また、 Evansと Kaufmanの方法（ネイチヤー（Nature) 第 292卷、 154頁、 1981年）に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウス ES細胞の場合、現在、一般的には 129系マウス由来の E S細胞が使用されているが、従来より機能解析によく用いられている純系で遺伝的背景が明らかな E S細胞を取得するなどの目的で、例えば、 C 57 B L/6系統マウスや C 57 B L/6系統と DB A/2系統と交雑した BDF 系統マウス (C 57 B L/6系統と DBA/2系統との Fi) から樹立される' E S細胞なども良好に用いることができる。 B D F i系統マウスは、採卵数が多く、かつ卵が丈夫であるという利点に加えて、 C 57BLZ6系統マゥスを背景に持つので、これ由来の E S細胞は疾患モデルマゥスを作出したとき、 C 57 B L/6系統マウスと戻し交雑することでその遗伝的背景を C 57 B L/ 6系統マウスに代えることが可能である点で有利に用い得る。

E S細胞の調製は、例えば以下のようにして行うことができる。交配後の雌非ヒト哺乳動物 [例えばマウス (好ましくは C 57 B L/6 J系統 (B 6) などの近交系マウス、 B 6と他の近交系との F ,など) を用いる場合は、約 2ヶ月齢以上の雄マウスと交配させた約 8〜約 10週齢程度の雌マウス（妊娠約 3. 5日）が好ましく用いられる] の子宮から胚盤胞期胚を採取して（あるいは 8細胞期以前の初期胚を卵管から採取した後、胚培養用培地中で上記と同様にして胚盤胞期まで培養してもよい）、適当なフィーダ一細胞（例えばマウスの場合、マウス胎仔から調製される初代繊維芽細胞が望ましい）層上で培養すると、胚盤胞の一部の細胞が集合して将来胚に分化する I CMを形成する。この内部細胞塊をトリプシン処理して単細胞を解離させ、適切な細胞密度を保ち、培地交換を行いながら、解離と継代を繰り返すことにより E S細胞が得られる。

E S細胞は雌雄いずれを用いてもよいが、通常雄の E S細胞の方が生殖系列キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行うことが望ましい。 E S細胞の雌雄の判定方法としては、例えば、 P C R法により Y染色体上の性決定領域の遺伝子を増幅、検出する方法が、その 1例としてあげる；とができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析をするのに約 1 0 ⁶個の細胞数を要していたのに対して、 1コロニー程度の E S細胞数（約 5 0個）で済むので、培養初期における E S細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行うことが可能であり、早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減できる。'

また、第二次セレクションとして、例えば、 G—バンディング法による核型分析等により行うことができる。得られる E S細胞の核型は 1 0 0 %正常であることが望ましいが、細胞株樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、 E S細胞への遺伝子導入の後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が 2 n = 4 0である細胞）に再びクローニングすることが可能である。

このようにして得られる E S細胞株は、未分化幹細胞の性質を維持するために注意深く継代培養することが必要である。例えば、 S T〇繊維芽細胞のような適当なフィーダ一細胞上で、分化抑制因子として知られる L I F ( 1〜1 0 , 0 0 O U/m 1 ) 存在下に炭酸ガス培養器内 (好ましくは、 5 %炭酸ガス/" 9 5 %空気または 5 %酸素/ 5 %炭酸ガスノ 9 0 %空気) で約 3 7 °Cで培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン/ E D T A溶液（通常 0 . 0 0 1 〜 0. 5 %トリプシン Z 0. 1-5 mM E D T A、好ましくは約 0.1 %トリプシン /ImM EDTA) 処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダ一細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常 1〜3日毎に行う力 S、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその培養糸田胞は放棄することが望まれる。

E S細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細月包集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔M. J. Evans及び M. H. Kaufman, ネイチヤー（Nature) 第 292卷、 154頁、 1981年； G. R. Martin プロシーディングス ·ォブ ·ナショナノレ ·アカデミー ·ォブ ·サイエンス ·ユーエスエー (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. ) 第 78卷、 7634頁、 1981年； T. C. Doetschman ら、ジャーナノレ · 才プ ·ェンプリォロジー ' アンド 'ェクスペリメンタル .モルフォロジ一、第 87卷、 27頁、 1985年〕、本発明の外来性 RFRPをコードする遺伝子を導入された E S細胞を分化させて得られる外来性 RFRP発現非ヒト哺乳動物細胞は、インビトロにおける外来性 R FRPの細胞生物学的検討において有用である。

E S細胞への遺伝子導入には、リン酸カルシウム共沈殿法、電気穿孔（エレクトロポレーシヨン）法、リポフエクシヨン法、レトロウイルス感染法、凝集法、顕微注入（マイクロインジェクション）法、遺伝子銃（パーティクルガン）法、 DEAE—デキストラン法などのいずれも用いることができるが、簡便に多数の細胞を処理できること等の点からエレクト口ポレーション法が一般的に選択されている。エレクトロポレーシヨンには通常の動物細胞への遺伝子導入に使用されている条件をそのまま用いればよく、例えば、対数増殖期にある E S細胞をトリプシン処理して単一細胞に分散させた後、 10⁶〜10⁸細胞/ m lとなるように培地に懸濁してキュベットに移し、外来性 RFRPをコードする DNAを含むベクタ一を 1 0〜： 1 00〃 g添加し、 200〜600 V/ c mの電気パルスを印カロすることにより行うことができる。

導入遺伝子が組み込まれた E S細胞は、単一細胞をフィーダ一細胞上で培養して得られるコロニーから分離抽出した染色体 D N Aをサザンハイブリダイゼーションまたは P C R法によりスクリーニングすることによつても検定することができる力 E S細胞を用いるトランスジエニック系の最大の長所は、薬剤耐性遺伝子やレポーター遺伝子の発現を指標として細胞段階で形質転換体を選択できることである。したがって、ここで使用される導入ベクターは、外来性 R F R Pをコ一ドする遺伝子を含む発現カセットに加えて、薬剤耐性遺伝子（例：ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ I I ( n p t I I ) 遺伝子、ハイグロマイシンホスホランスフェラーゼ（h p t ) 遺伝子など）やレポーター遺伝子（例： β —ガラタトシダーゼ（ 1 a c Ζ ) 遺伝子、クロラムフエニコールァセチルトランスフエラーゼ（c a t ) 遺伝子など）等の選択マーカー遺伝子をさらに含むことが望ましレ、。例えば、選択マーカー遺伝子として n p t I I遺伝子を含むベクターを用いた場合、遺伝子導入処理後の E S細胞を G 4 1 8などのネオマイシン系抗生物質を含有する培地中で培養し、出現した耐性コ口ニーをそれぞれ培養プレートに移してトリプシン処理、培地交換を繰り返した後、一部を培養用として残し、残りを P C Rもしくはサザンハイブリダィゼーションにかけて導入遗伝子の存在を確認する。

導入遺伝子の組込みが確認された E S細胞を同種の非ヒト哺乳動物由来の胚内に戻すと、宿主胚の I C Mに組み込まれてキメラ胚が形成される。これを仮親 (受 JJ丕用雌）に移植してさらに発生を続けさせることにより、キメラトランスジエニック動物が得られる。キメラ動物の中で E S細胞が将来卵や精子に分化する始原生殖細胞の形成に寄与した場合には、生殖系列キメラが得られることとなり、これを交配することにより導入遺伝子が遺伝的に固定された遺伝子導入動物を作出することができる。

キメラ胚の作製方法としては、桑実胚期までの初期胚同士を接着させて集合させる方法（集合キメラ法）と、胚盤胞の割腔内に細胞を顕微注入する方法（注入キメラ法）と力あるが、 E S細胞によるキメラ胚の作製においては従来より後者が広く行なわれているが、最近では、 8細胞期胚の透明帯内への E S細胞の注入により集合キメラを作る方法や、マイクロマニピュレーターが不要で操作が容易な方法として、 E S細胞塊と透明帯を除去した 8細胞期胚とを共培養して凝集させることによつて集合キメラを作製する方法も行われている。

いずれの場合も、宿主胚は受精卵への遺伝子導入における採卵用雌として使用され得る非ヒ卜哺乳動物から同様にして採取することができるが、例えばマウスの場合、キメラマウス形成への E S細胞の寄与率を毛色（コートカラー）で判定し #るように、 E S細胞の由来する系統とは毛色の異なる系統のマウスから宿主胚を採取することが好ましい。例えば、 E S細胞が 1 29系統マウス（毛色：ァグーチ）由来であれば、採卵用雌として C 57 B L/6系統マウス (毛色：ブラック）や I CR系統マウス（毛色：アルビノ）を用い、 ES細胞が C 57BL/ 6系統もしく〖ま DB Fi系統マウス（毛色：プラック）由来や TT 2細胞（C 5 7 B L/6系統と C B A系統との (毛色：ァグーチ）由来）であれば、採卵用雌として I CR系統マウスや BALBZc系統マウス（毛色：アルビノ）を用いることができる。

また、生殖系列キメラ形成能は E S細胞と宿主胚との組み合わせに大きく依存するので、生殖系列キメラ形成能の高い組み合わせを選択することがより好ましい。例えばマウスの場合、 1 29系統由来の E S細胞に対しては C 57 B L/6 系統由来の宿主胚等を用いることが好ましく、 C 57 B L/6系統由来の E S細胞に対しては B A L B/ c系統由来の宿主胚等が好ましい。

採卵用雌マクスは約 4〜 6週齢程度が好ましく、交配用の雄マウスとしては約 2〜約 8ヶ月齢程度の同系統のものが好ましい。交配は自然交配によってもよいが、好ましくは性腺刺激ホルモン (卵胞刺激ホルモン、次いで黄体形成ホルモン）を投与して過剰排卵を誘起した後に行なわれる。胚盤注入法による場合は、胚盤胞期胚（例えばマウスの場合、交配後約 3 . 5 日）を採卵用雌の子宮から採取し（あるいは 4細胞期以前の初期胚を卵管から採取した後、上述の胚培養用培地中で胚盤胞期まで培養してもよい）、マイクロマ -ピュレーターを用いて胚盤胞の割腔内に外来性 R F R Pをコードする D NAが導入された E S細胞（約 1 0〜約 1 5個）を注入した後、偽妊娠させた受胚用雌非ヒト哺乳動物の子宫内に移植する。受胚用雌非ヒト哺乳動物は受精卵への遺伝子導入における受胚用雌として使用され得る非ヒト哺乳動物を同様に用いることができる。

共培養法による場合は、例えば 8細胞期胚（および桑実胚）（例えばマウスの場合、交配後約 2 . 5日）を採卵用雌の卵管および子宮から採取して（あるいは 4細胞期以前の初期胚を卵管から採取した後、上述の胚培養用培地中で 8細胞期または桑実胚期まで培養してもよい）酸性タイロード液中で透明帯を溶解した後、ミネラルオイルを重層した胚培養用培地の微小滴中に外来性 R F R Pをコードする D NAが導入された E S細胞塊（細胞数約 1 0〜約 1 5個）を入れ、さらに上記 8細胞期胚（または桑実胚）（好ましくは 2個または 3個）を入れて一晩共培養する。得られた桑実胚または胚盤胞を記と同様にして受胚用雌非ヒト哺乳動物の子宫内に移植する。 .

移植胚が首尾よく着床し受胚雌が妊娠すれば、自然分娩もしくは帝王切開によりキメラ非ヒト哺乳動物が得られる。自然分娩した受胚雌にはそのまま哺乳を継続させればよく、帝王切開により出産した場合は、産仔は別途用意した哺乳用雌 (通常に交配 '分娩した雌非ヒト哺乳動物）に哺乳させることができる。

生殖系列キメラの選択は、まず E S細胞の雌雄が予め判別されている場合は E S細胞と同じ性別のキメラマウスを選択し（通常は雄性 E S細胞が使用されるので、雄キメラマウスが選択される）、次いで毛色等の表現型から E S細胞の寄与率が高いキメラマウス (例えば、 5 0 %以上）を選択する。例えば、 1 2 9系マウス由来の雄性 E S細胞である D 3細胞と C 5 7 B L / 6系統マウス由来の宿主胚とのキメラ胚から得られるキメラマウスの場合、ァグーチの毛色の占める割合の高い雄マウスを選択するのが好ましレ、。選択されたキメラ非ヒト哺乳動物が生殖系列キメラであるか否かの確認は、適当な系統の同種動物との交雑により得られる動物の表現型に基づいて行うことができる。例えば、上記キメラマウスの場合、了グーチはプラックに対して優性であるので、雌 C 57BL/6系統マウスと交雑すると、選^された雄マウスが生殖系列キメラであれば得られる F の毛色はァグーチとなる。

上記のようにして得られる外来性 R F R Pをコードする遺伝子が導入された生殖系列キメラ非ヒト哺乳動物（フアウンダー）は、通常、相同染色体の一方にのみ導入遺伝子を有するヘテロ接合体として得られる。また、個々のフアウンダーは相同組換えによらない限り異なる染色体上にランダムに揷入される。相同染色体の両方に外来性 RFR Pをコードする遺伝子を有するホモ接合体を得るためには、上記のようにして得られる動物のうち相同染色体の一方にのみ導入遺伝子を有するヘテロ接合体の兄妹同士を交雑すればよい。ヘテロ接合体の選択は、例えば F t動物の尾部より分離抽出した染色体 D N Aをサザンハイプリダイゼーシヨンまたは PCR法によりスクリーニングすることにより検定することができる。 1遺伝子座にのみ導入遺伝子が組み込まれていれば、得られる F₂動物の 1 /4がホモ接合体となる。

本発明の遺伝子導入動物は、外来性 R FRPに対する試験化合物の作用を定量的に測定可能な程度に外来性 R FRPの発現量が確保される限り、内因性 R F R Pの発現については特に制限はない。しかしながら、本発明の遺伝子導入動物を外来性 R F R Pだけでなく内因性 R FRPにも作用し得る薬剤の評価にも使用する場合は、内因性 RFRPの発現を不活性化することが望ましい。内因性 RFR Pの発現が不活性化された本発明の遺伝子導入動物は、公知の方法（例えば、 Lee S. S.ら、モレキュラー 'アンド 'セノレーラー 'バイオロジー (Mol. Cell. Biol.) 、第 15巻、第 3012頁、 1995年を参照）により選択される R F R P遺伝子がノックァゥトされた ES細胞、あるいは該 E S細胞から上記の方法に従って作出される RFRPノックァゥト動物由来の初期胚もしくは E S細胞に、上記の方法に従って外来性 RFRPをコードする遺伝子を導入することによって得ることができる。 RFRP遺伝子をノックアウトする具体的な手段としては、対象非ヒト哺乳動物由来の RFRP遺伝子を常法に従って単離し、例えば、そのエタソン部分に他の DNA断片（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子等の薬剤耐性遺伝子、 l a c Z (i3—ガラクトシダーゼ遺伝子）、 c a t (クロラムフエニコーノレァセチトランスフェラーゼ遺伝子）等のレポーター遺伝子等）を挿入することによりェクソンの機能を破壊するカゝ（この場合、前述のように導入遺伝子の組込みは薬剤耐性やレポーター遺伝子の発現を指標として選択され得る）、 C r e— 1 0 X P系や F 1 p - f r t系を用いて RFRP遺伝子の全部または一部を切り出して該遺伝子を欠失させる力、、タンパク質コード領域内へ終止コドンを挿入して完全なタンパク質の翻訳を不能にするか、あるいは転写領域内部へ遺伝子の転写を終結させる D N A配列（例えば、ポリ A付加シグナルなど） 'を挿入して、完全な mRN Aの合成を不能にすることによって、結果的に遺伝子を不活性化するように構築した DN A配列を有する DN A鎖（以下、ターゲッティングベクターと略記する）を、相同組換えにより対象非ヒト哺乳動物の R F R P遺伝子座に組み込ませる方法が好ましく挙げられる。

通常、哺乳動物における遺伝子組換えは大部分が非相同的であり、導入された DNAは染色体の任意の位置にランダムに挿入される。したがって、薬剤耐性やレポ一ター遺伝子の発現を検出するなどの選択によっては相同組換えにより標的となる内因性 R FRP遺伝子にターゲッティングされたク口ーンのみを効率よく選択することができず、選択さたすベてのクローンについてサザン法もしくは P CR法による組み込み部位の確認が必要となる。そこで、ターゲッティングべクタ一の標的配列に相同な領域の外側に、例えば、ガンシクロビル感受性を付与する単純へルぺスウィルス由来チミジンキナーゼ (HS V- t k) 遺伝子を連結しておけば、該ベクターがランダムに挿入された細胞は HSV— t k遺伝子を有するため、ガンシクロビル含有培地では生育できないが、相同組換えにより内因性 RFRP遺伝子座にターゲッティングされた細胞は HSV— t k遺伝子を有しないので、ガンシクロビル耐性となり選択される。あるいは、 HSV— t k遺伝子の代わりに、例えばジフテリア毒素遺伝子を連結すれば、該ベクターがランダムに挿入された細胞ほ自身の産生する該毒素によつて死滅するので、薬剤非存在下で相同組換え体を選択することもできる。

あるいは、内因性 R F R Pの発現が不活性化された本発明の遺伝子導入動物は、相同組換えを用いた遺伝子ターゲッティングにより外来性 RFRP遺伝子をコードする DNAで内因性 RFRP遺伝子を置換したノックイン動物であってもよい。ノックイン動物はノックァゥト動物と基本的に同様の手法に従って作製することができる。 RFRPの ORFは第 1ェクソンから第 5ェクソンに存在するので、例えば、対象非ヒト哺乳動物由来の RFRP遺伝子のこれらの領域を適当な制限酵素を用いて切除し、代わりに外来性 RFR P遺伝子の対応する領域を揷入することにより得られる DNAを含むターゲテイングベクターを、上記の方法に従つて対象非ヒト哺乳動物由来の E S細胞に導入し、相同組換えにより該動物の内因性 R F R P遺伝子座に外来性 R F R Pをコードする遺伝子が組み込まれた E S細胞クローンを選択すればよい。クローン選択は PC R法やサザン法を用いて行うこともできる力例えば、ターゲッティングベクターの RFRP遺伝子の 3 ' 非翻訳領域などにネォマィシン耐性遺伝子等のポジティプ選択用マーカ一遺伝子を揷入し、さらに標的配列と相同な領域の外側に HS V— t k遺伝子やジフテリァ毒素遺伝子等のネガティブ選択用マーカー遺伝子を挿入すれば、薬剤耐性を指標にして相同組換え体を選択することができる。

また、ポジティブ選択用マーカー遺伝子が導入された外来性 R FRPの発現を妨げる場合があるので、ポジティブ選択用マーカー遺伝子の両端に 1 0 X P配列もしくは f r t配列を配したターゲッティングベクターを用い、相同組換え体選択後の適当な時期に C r eもしくは F 1 pリコンビナーゼまたは該リコンビナーゼ発現ベクター (例：アデノウィルスベクターなど) を作用させることにより、ポジティブ選択用マーカー遺伝子を切り出すことが好ましい。あるいは、 C r e — 1 o X P系や F 1 - f r t系を用いる代わり tこ、ポジティブ選択用マーカー遺伝子の両端に標的配列と相同な配列を同方向に繰り返して配置し、該配列間での遺伝子内組換えを利用してポジティブ選択用マーカー遺伝子を切り出してもよレヽ。

また、本発明の遺伝子導入動物は、外来性 RFRP遺伝子またはその変異遺伝子を糸且み込んだ D N Aを有し、かつ R F R Pの活 f生調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以上の他の遺伝子改変を有する疾患モデルであつてもよレヽ。 .

「RFRPの活性調節が関与する疾患」とは、 RFRP活性の異常に起因する、もしくは結果的に RFRP活性の異常を生じる疾患だけでなく、 RFRP活十生を調節することにより予防 ·治療効果が得られ得る疾患をも含めた概念として巴握されるべきである。

例えば、 RFRPを活性化することにより予防 ·治療可能な疾患としては、卵機能低下症、精嚢発育不全、骨粗鬆症、更年期障害、乳汁分泌不全、甲状腺機肯低下、腎不全、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、 3台児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神經痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、畐 ij腎皮質刺激ホルモン産生下垂月重瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫 ¾、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 · + 二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナ一症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病ェピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡目民障害等）など] 、神経系の疾患などが挙げられる。

R F R Pを阻害することにより予防 ·治療可能な疾患としては、高プロラクチン血症、下垂体腺腫瘍、間脳腫瘍、月経異常、ストレス、自己免疫疾患、プロラグチノ一マ、不妊症、インポテンス、無月経症、 ¥L汁漏症、末端肥大症、キアリ · フロンメル (Chiari-Frommel ) 症候群、ァノレゴンッ -デル ' カスティ口 ( Argonz-del Castilo ) 症候群、フォーべス - アルブライト（ Forbes - Albright) 症候群、乳癌、リンパ腫、シーハン症候群、精子形成異常、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、高血氐、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [WH O (世界保健機構）が策定する「疾病及び関連保健問題の国際統計分類第 10版（ICD- 10) 」の F00- F99に属する疾患；好ましくは気分 [感情] 障害（同分類の F30- F39) のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害 (同分類の F40- F48に属する疾患；例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）等] 、神経系の疾患 [国際疾病分類（ICD- 10) の G00- G99に属する疾患；好ましくは錘体外路障害および異常行動 (G20-G26) 、より好ましくは続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等] などが挙げられる。

「他の遺伝子改変」とは、外来性 R F R Pをコードする遺伝子が導入される以外の遺伝子改変を意味し、自然突然変異により内因†生遺伝子が改変された自然発症疾患モデル動物、他の遺伝子をさらに導入された卜ランスジエニック動物、内因性遺伝子を不活化されたノックァゥト動物（挿入突然変異等による遺伝子破壊のほカアンチセンス DNAや中和抗体をコードする DN Aの導入により遺伝子発現が検出不可能もしくは無視し得る程度にまで低下したトランスジヱニック動物を含む）、変異内因性遺伝子が導入されたドミナントネガティブ変異体などが含まれる。したがって、内因性 RFRP遺伝子の改変もまた、本発明における「他の遺伝子改変」に該当する。

「R F R Pの活性調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以上の他の遺伝子改変を有する疾患モデル」としては、例えば、高脂血症もしくは動脈硬化症モデルとして WHHLゥサギ（低比重リポタンパクレセプター ( L D L R ) に変異を有する； Watanabe Y. 、ァテロースクレローシス (Atherosclerosis) 、第 36卷、第 261頁、 1980年）、 SHLM (apoE欠損変異を有する自然発症マウス； Matsushima Y. ら、マンマリアン ' ゲノム（Mamm, Genome ) 、第 10卷、第 352頁、 1999年）、 L D L Rノックアウトマウス (Ishibashi S.ら、ジャーナノレ ·ォヴ ·クリ二カル ·インヴエスティゲーション (J. Clin. Invest. ) 、第 92卷、第 883頁、 1993年）、 a p o Eノックアウトマウス（Piedrahita J. A.ら、プロシーディングズ ·ォヴ ·ナショナノレ■ァカデミ一 '才ヴ'サイエンス 'ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 、第 89卷. 第 4471頁、 1992年）、ヒト a p o B導入マウス（Callow M.J.ら、プロシーディングズ ·ォヴ ·ナショナル ·ァカデミ一 ·ォヴ ·サイエンス · ユーエスエー (Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 、第 91卷、第 2130頁、 1994年）等が、虚血性心疾患モデルとして C D 5 5 CD 5 9ダプノレトランスジエニックマウス (Cowan P.J.ら、 Xenotransplantation 第 5卷、第 184- 90頁、 1998年）等が、皮膚炎モデノレとして interleukin 1トランスジエニックマウス (Groves R. W. ら、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA第 9 2卷、 11874頁、 1995年）等が、免疫不全モデルとして CD 1 9ノックアウトマウス（Spielman J.ら、 Immunity、第 3卷、 39頁、 1995 年）等が、低血糖モデノレとして S P C 2ノックアウトマウス（Furuta M. ら、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 第 94卷、 6 646頁、 1997年）等が、脂肪肝モデルとして o b/o bマウス（Herberg L.及び Coleman D. L.、メグボリズム (Metabolism) 、第 26卷、第 59頁、 1977年）、 KKマウス（Nakamura M.及び Yamada K.、ダイアベトロジァ（Diabetologia) 、第 3卷、第 212頁、 1967年）、 F L Sマウス (Soga M. ら、ラボラトリー 'ォヴ ·アニマル ·サイエンス (Lab. Anitn. Sci. ) 、第 49卷、第 269頁、 1999年）、糖尿病モデルとして N〇 Dマウス (Makino S，ら、ェクスペリメンタル .アニマル（Exp. Anim. ) 、第 29卷、第 1頁 1980年）、 B Bラット（Crisa L.ら、ダイアビーテイス ·メタボリズム . レヴュ一 (Diabetes Metab. Rev. ) 、第 8巻、第 4頁、 1992年）、 o b/o bマウス、 d b/d bマクス (Hummel L. ら、サイエンス (Science) 、第 153卷、第 1127頁、 1966年）、 1Kマウス、 GKラット（Goto Y. ら、トウホク ' ジャーナル ' ォヴ.ェクスペリメンタル .メデイン (Tohoku J. Exp. Med.) 、第 119卷、第 85 頁、 1976年）、 Zucker fattyラット（Zucker し M.ら、ァニュアル. ヴ■ニュ一ヨーク ·ァ力デミ一'ォヴ 'サイエンス (Ann. NY Acad. Sci.) 、第 131卷、第 447頁、 1965年）、 O L E T Fラット（Kawano K. ら、ダイァビーティス (Diabetes) 、第 41卷、第 1422頁、 1992年）等が、肥満モデルとして o bZo b マウス、 db Zdbマウス、 KKマウス、 Zucker fattyラット、 OLETFラット等が、ァノレツハイマー病モデルとして変異アミロイド前駆体タンパグ質遺伝子導入マウス等が、貧血†生低酸素症モデルとして beta SAD (beta S - Antilles - D Punjab) トヲンスジエニックマウス（Trudel M.ら、 EMB0 J.、第 10卷、 3157頁、 1991年) 等が、性腺障害モデルとして Steroidogenic factor 1ノックアウトマウス（Zhao L.ら、 Development^ 第卷、 147頁、 2001年）等が、肝臓モデルとして p 53ノックァゥトマウス (Kemp C.J. Molecular Carcinogenesis, 第 12卷' 132頁、 1995年）等が、乳癌モデルとして c一 n e u トランスジェニゾクマウス (Rao G. Ν.'ら、 Breast Cancer Res. Treat. , 第 48卷、 265頁、 1998年）等が、子宫内膜炎モデルとして perforin, Fas - ligandダブルノックァゥトマウス (Spielraan J. ら、 J. Immunol. , 第 161巻、 7063頁、 1998年）、不安 ' うつモデルとして 5 HT— 1 A受容体ノックアウトマウス（Parks C.L.ら、 Proc. Na l. Acad. Sci. USA, 第 95卷、 10734-9頁、 1998年）、セロトニントランスポーター

(5 -HTT) ノックアウトマウス (Bengel D.ら、 Mol. Pharmacol. , 第 53卷、 ⁶⁴⁹- ⁵⁵頁、 19⁹⁸年）等が挙げ'られる。

これらの「他の遺伝子改変を有する」疾患モデル非ヒト哺乳動物は、例えぼ、、米国の Jackson研究所'などから購入可能であるか、あるいは周知の遺伝子改変技術をいて容易に作出することができる。

本発明の遺伝子導入動物は、「RFRPの活性調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以 _hの他の遺伝子改変」に加えて、同一もしくは他の疾患モデルを作製し得る非遺伝的処理を施されていてもよい。「非遺伝 ¾7処理」とは対象非ヒト哺乳動物における遗伝子改変を生じさせない処理を意味する。このような処理としては、例えば、高脂肪食負荷処理、糖負荷処理、飢餓処理、血管結紮/再灌流、薬物投与、ス卜レス負荷等が挙げられる。

外来性 RFRPをコードする遺伝子を導入された非ヒト哺乳動物に、 RFR P の活性調節が関与する疾患と同一ちしくは類似の病態を生じさせる 1以上のの遺伝子改変を導入する方法は特に制限はなく、例えば、外来性 RFRPをコードする遺伝子を導入された非ヒト哺？ L動物と、 RFRPの活性調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以上の他の遺伝子改変を有する同種の疾患モデル非ヒト哺乳動物とを交維する方法； RFRPの活个生調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以上の他の遺伝子改変を有する疾患モデル非ヒト哺乳動物の初期胚ゃ E S細胞に、上述の方法により外来性 RFR P をコードする遺伝子を導入してトヲンスジエニック動物を得る方法；外来性 R F RPをコードする遺伝子を導入された非ヒト哺乳動物の初期胚ゃ E S細胞に、上述の方法により、あるいはノック Tゥト技術により、 R F R Pの活性調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以上の他の遺伝子改変を導入する方法等が挙げられる。また、 LFR の活性調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以上の他 O遺伝子改変が外来遺伝子やドミナント変異遺伝子の導入による場合、野生型非ヒト哺乳動物の初期胚ゃ ES細胞に、該外来遺伝子等と外来性 R F R Pをコードする遺伝子とを同時にもしくは順次導入してトランスジエニック動物を得てもよレヽ。さらに、 RFRPの活性調節が関与する疾患と同一もしくは類似の病態を生じさせる 1以上の他の遺伝子改変が内因性遺伝子の破壌による場合は、外来性 RF RPをコードする遺伝子を破壌すべき内因性遺伝子にターゲッティングされ得るようにデザインして野生型非ヒト哺乳動物の E S細胞に導入してもよい。この湯合、ターゲッティングベクターは、内因性 R FRP遺伝子を破壊されるべき内性遺伝子に置換する以外は、上記のノックイン動物の作製に関して例示したも oが好ましく使用され得る。

外来性 RFRPをコードする遺伝子を寧入された非ヒト哺乳動物と、 RFRP の活性調節が関与する疾患と同一もしく ίよ類似の病態を生じさせる 1以上の他の遺伝子改変を有する同種の疾患モデル非ヒト哺乳動物とを交雑する場合、ホモ接合体同士を交雑することが望ましい。例えば、外来性 RFRPをコードする遺伝子が 1遺伝子座に組み込まれたホモ接合^:と、 a p o Eホモ欠損高脂血症（動脈硬化）モデルとを交雑して得られる F_tは两遺伝子についてヘテロである。この同士を兄妹交配して得られる F₂個体 ( 1/16は外来性 RFRPホモ導入 · a p o Eホモ欠損となる。

さらに、本発明は、前記した本発明の; it伝子導入動物に、他の

( i ) (1) 摂食量の減少、（2) 飲水の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値の低下または（8) 血圧上昇、（9) 自発行動量の低下、（10) ストレス感受性の増大などの病態モデル動物または

(ii) 拒食症、神経性食思不振症、脱水定状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾ一ノレ血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機 ¾不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感†青] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発'性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患（病態）モデル動物を ¾配することこよって得られる動物またはその生体の一都を提供する。

他の疾患（病態）モデル動物を ¾配することによって得られる動物は、周知の技術を用いて容易に作出することができる。

上記のようにして得られる本発明の遺伝子導入動物は、内因性 RFRPに加えて（あるいはそれに代えて) 外来性 R FIR Pを発現するので、外来性 RFRPに対してァゴニスト活性またはアンタゴニスト活 1"生を有するが、内因性 RFRPに対しては活性を有しない外来性 RFRP特異的ァゴニストまたはアンタゴニストについて、その薬効をインビボで評価することを可能にする。

本発明の遺伝子導入動物は、例えば、

(1) 非トランスジェエック動物に比べて、摂食量が減少している、

(2) 非トランスジエニック動物に比べて、飲水量が減少している、

(3) 非トランスジエニック動物に比べて、尿量が減少している、

(4) 非トランスジュニック動物に比べて、侵害刺激（例、機械刺激、熱刺激）に対して敏感になっている、

(5) 非トランスジエニック動物に比べて、血漿中のコルチコステロン値が低レ、、 (6) 非トランスジヱニック動物に比べて、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値が低い、 (7) 非トランスジヱニック動物に比べて、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値が低い、

(8) 非トランスジェニック動物に比べて、血圧が高、、

(9) 非トランスジエニック動物に比べて、自発行動 Λが低下している、

(10) 非トランスジエニック動物に比べて、ストレス感受性が増大している、などの表現型を示し、'例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コノレチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、'視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソード'を伴う疾患（例、、うつ病、反復性う ~ 病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害 (PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患を発症している。 '

本発明の遺伝子導入動物は、上記のような極めてユークな特徴を有しているので、以下に示す有用な用途を有している。

本発明の遺伝子導入動物は、外来性 RFRP遺伝子高発現させられているので、 RFRPァゴニストまたは RFRPアンタゴニスト、主に RFRPアンタゴ二ストの評価のために用いることができる。本明細書こおいて「ァゴ二スト」は、薬理学的分類におけるフルァゴニストとパーシャルァゴニストの両方を包含し、「アンタゴニスト」は、薬理学的分類におけるニュートラルアンタゴニストとィンバースァゴニストの両方を包含する概念として、それぞれ用いられる。また、パーシャルァゴ-ストは、その濃度や内因性リガンド濃度、併用薬物の作用およびその濃度などの種々の要因によって異なる作用を示 I得る（例えば、フルァゴ -スト活性を示す薬物（内因性リガンドを含めて）との共存下においては、該薬物の作用を一部阻害する）ので、ある特定の条件下^!おいては、パーシャルァゴ二ストもまた、本明細書中に記載されるアンタゴニトと同様の用途に使用され得ることに留意すべきである。

具体的には、本発明は、本発明の遺伝子導入動物 ί 、 ( 1 ) 摂食量、飲水量、尿量、侵害刺激に対する過敏性、血漿中のコルチコ入テロン値、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値、血圧、自発行動量、ストレス感受性の調節薬のスクリーニングや〔2 ) 過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経、尿崩症、多飲症、高カルシゥム血症、低カリウム血症、シエーダレン哮候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾーノレ抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、 ffr神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患、（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（ICD- 10の F50- F59 に分類される疾患；例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類さ Lる疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの予防 ·治療薬のスクリ一エングに使用することができる。

すなわち、本発明は、

(i)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験ィ匕合物を適用し、 R F RPァゴニスト活性または RFRPアンタゴニスト活性を検定することを特徴とする RFRPァゴニトまたはアンタゴニストのスクリーニング方法、

(ii)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、 (1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善効果を検定することを特徴とする、（1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善薬（例、 RFRPアンタゴニスト）のスクリー二ング方法、

(iia)本発明の遗伝子導入動物またはその生体の一部に^:験化合物を適用し、

(1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善効果を検定することを特徴とする、（1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善薬 (例、 RFRPアンタゴニスト) のスクリーニング方法

(iii)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に t験化合物を適用し、 (1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の滅少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低、 (6) 血漿中の黄体形成ホルモン (LH) 値の低下、 (7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン (FSH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善効果を検定すること、あるいは（9) 拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、ァジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経などの疾患の改善効果を検定することを特徴とする、上記疾患の予防 ·治療薬（例、 RFR Pアンタゴニスト）のスクリーニング方法、

(iiia)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、 (1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善効果を検定すること、あるいは（3) 精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、 , うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気夯変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害 (PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫†生障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患の改善効果を検定することを特徴とする、記疾患の予防 ·治療薬 (例、 RFRPアンタゴニスト) のスクリーニング方法、

(iv)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験化合物を遊用し、 (1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、' (5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血驟中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値の低下または（8) 血圧上昇などの作用を検定することを特徴とする、（1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下または（8) 血圧上昇などの作用を有する物質（例、 RFRPァゴニスト）のスクリーニング方法、

(iva)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験化合物を遊用し、 (1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大などの作用を検定することを特徴とする、（1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大などの作用を有する物質（例、 RFRPァゴェスト）のスクリーニング方法、 (V)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シヱーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰 ¾、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群などの疾患の改善効果を検定することを特徴とする、上記疾患の予防 ·治療薬（ !!、 RFRP ァゴニスト）のスクリーユング方法、

(va)本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病ェピソ一" Kを伴う疾患 (例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に i連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾, などの疾患の改善効果を検定することを特徴とする、上記疾患の予防 ·治療薬（例、 RFR Pァゴニスト）のスクリーニング方法などを提供する。

RFRPァゴュストまたは RFRPアンタゴニストの候捕化合物 W；、 RFRP との結合実験（WO 00/29441号）により選定することができる。

具体的には、本発明のスクリーニング方法では、 '本発明の遺伝子導入動物に試験化合物を投与する。

試験化合物としては、例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性 ί匕合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってよい。試験化合物は塩を形成していてもよく、試験化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェシ酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。

R F R Pァゴニスト活性としては、（ 1 ) 摂食量の減少、（ 2 ) 飲水量の減少、 (3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏反応、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FStJ) 値の低下、（8) 血圧上昇、（9) 自発行動量の低下または（10) ストレス感受性の増大などの作用や、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂 , 食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患などの疾患の改善作用が挙げられる。

RFRPアンタゴニスト活性としては、（1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏反応、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、 (7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下、（8) 血圧上昇、（9) 自発行動量の低下または（10) ストレス感受性の増大などの作用の改善作用 (すなわち、（1) 摂食量の上昇、（2) 飲水量の上昇、（3) 尿量の上昇、 (4) 侵害刺激に対する鈍麻、（5) 血漿中のコルチコステロン値の上昇、 (6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の上昇、 (7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（F H) 値の上昇または（8) 血圧低下、（9) 自発行動量の増加または（10) ストレス感受性の低下などの作用）や、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、 ί氐アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分

[感情] 障害のうち、うつ病ェピードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パ一キンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患の改善作用が挙げられる。

本発明の遺伝子導入動物が本来的に有する R F R Ρによる上記作用の変動は無視してよい。

このようにして選択された RFRPァゴニストは、例えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高力レシゥム血症、低カリウム血症、シヱーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生 ^重瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患などの疾患に対する安全で低毒性な予防 ·治療剤、摂食量減少剤、飲水量減少剤、尿量減少剤、侵害刺激に対する過敏性の上昇剤、血漿中のコルチコステロン値の低下剤、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の低下剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の低下剤、血圧上昇剤、自¾行動抑制剤、ストレス感受性増進剤として使用することができる。

一方、 R F R Pアンタゴニストは、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、月巴満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患に対する安全で低毒性な予防 - 治療剤、摂食量上昇剤、飲水量上昇剤、尿量上昇剤、侵害刺激に対する過敏性の低下剤、血漿中のコルチコステロン値の上昇剤、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の上昇剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の上昇剤、血圧低下剤、自発行動促進剤、抗ストレス剤として使用することができる。

選択された R F R Pァゴニストまたは R F R Pアンタゴ-ストは、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射^の形で非経口的に使用できる。例えば、予防 ·治療用医薬として選択された物質を生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、べヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。

錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、了ラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシゥムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、ァカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。

注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、プドウ糖やその他の補助薬を含む等張液 (例えば、 D—ソルビトール、 D—マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、ェタノールなど) 、ポリアルコール (例えば、プロピレンダリコール、ポリエチレングリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート 8 0 ^{T M}、 H C O— 5 0など）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが挙げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニゥム、塩酸プロ力インなど）、安定剤 (例えば、ヒド血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤 (例えば、ベンジルアルコール、フエノ一ノレなど) 、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。

また、選択された物質が DN Aである場合、当該 DNAを単独あるいはレトロウィクレスベクター、アデノウィルスベクタ一、アデノウィルスァソシエーテツドウィルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温血動物に投与することができる。当該 DNAは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによつて投与できる。

このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは非ヒト温血動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ゥサギ、トリ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ゥマ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して投与することができる, 選択された物質の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、排尿障害の治療目的で RFRPアンタゴニストを経口投与する場合、一般的に成人（体重 6 O k gとして）においては、一日につき RFRP アンタゴニストを約 0. 1〜： L 00mg、好ましくは約 1. 0〜50mg、より好ましくは約 1. 0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、 RFRP アンタゴニストの 1回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが；例えば、排尿障害の治療目的で RFRPアンタゴニストを注射剤の形で成人（体重 6 O k gとして）に投与する場合、一日につき約 0. 01〜30mg程度、好ましくは約 0. 1〜2 Omg程度、より好ましくは約 0. l〜10mg程度を患部に注射することにより投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 60 k g当たりに換算した量を投与することができる。 '

本発明の遺伝子導入動物は、外来性 RFRP遺伝子が高発現している場合、 (1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏反応、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FS H) 値の低下、（8) 血圧上昇、（9) 自発行動量の増加または（10) ストレス感受性の低下などの表現型を示し、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症^ 排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール ik症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分

[感情] 障害のうち、 'うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫个生障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続努性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患を発症している。

したがって、本発明の遺伝子導入動物は、上記疾患の予防.治療薬の評価のために用いることができる。

すなわち、本発明は、本発明の遺伝子導入動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、上記疾患の改善効果を検定することを特徴とする、上記疾患の予防 · 治療薬のスクリ一二ング方法を提供する。

具体的には、本発明のスクリーニング方法では、本発明の遺伝子導入動物に試験化合物を投与する。試験化合物は前記と同様のものが用いられる。

本発明のスクリーニング方法において、試験化合物の投与により、（1 ) 摂食量の減少、（2 ) 飲水量の減少、（3 ) 尿量の減少、（4 ) 侵害刺激に対する過敏反応、（5 ) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6 ) 血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の低下、（7 ) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の低下、 ( 8 ) 血圧上昇、（9 ) 自発行動量の増加または（1 0 ) ストレス感受性の低下などの作用が改善された場合や、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症侯群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患が改善された場合、その試験化合物はこれら疾患の予防 ·治療用の物質として選択することができる。

選択された物質は、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、ェリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、予防 ·治療用医薬として選択された物質を生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、べヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによつて製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。

錠剤、力プセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシゥムのような潤滑剤、ショ糠、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、ァカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。

注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、プドウ糖やその他の補助薬を含む等張液 (例えば、 D—ソルビトール、 D—マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、ェタノールなど）、ポリアノレコーノレ (例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート 8 0 ^{T M}、 H C 〇一 5 0など）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが挙げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩 ί液など）、無痛 f匕剤（例えば、塩化ベンザルコニゥム、塩酸プロ力インなど）、安定剤 (例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フエノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。

また、選択された物質が D NAである場合、当該 D NAを単独あるいはレトロウィルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウィルスァソシェ一テツドウィルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温血動物に投与することができる。当該 D NAは、そのままで、あるいは摂取促進のための捕助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲノレカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。

このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは非ヒト温血動物 (例えば、ラット、マウス、モルモット、ゥサギ、トリ、ヒッジ、プタ、ゥシ、ゥマ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して投与することができる。予防 ·治療薬として選択された物質の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、排尿障害の治療目的で経口投与する場合、一般的に成人 (体重 6 O k gとして）においては、一日につき当該物質を約 0 . 1〜： L 0 O m g、好ましくは約 1 . 0〜ち O m g、より好ましくは約 1 . 0〜2 Omg投与する。非経口的に投与する場合は、当該物質の 1回投与量は投与対象、対象疾患などによつても異なるが、例えば、 .排尿障害の治療目的で注射剤の形で成人（体重 60 k gとして）に投与する場合、一日につき当該物質を約 0. 01 〜3 Omg程度、好ましくは約 0. 1〜2 Omg程度、より好ましくは約 0. 1 〜1 Omg程度を患部に注射することにより投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 60 k g当たりに換算した量を投与することができる。

本発明の遺伝子導入動物を、糸且織培養のための細胞源として使用することも可能である。また例えば、本発明の遺伝子導入マウスの組織中の DNAもしくは R NAを直接分析するか、あるいは遺伝子により発現されたタンパク組織を分析することにより、核内レセプターの複雑な作用の転写因子との関連性について解析することもできる。あるい fま、遺伝子を有する組織の細胞を、標準組織培養技術により培養し、これらを使用して、例えば脂肪組織を形成する細胞などの一般に培養が困難な組織に由来する細胞の機能を研究することもできる。さらに、その細胞を用いることにより、例えば細胞の機能を高めるような薬剤の選択も可能である。また、高発現細胞株があれば、そこから、 RFRPを大量に単離精製すること、ならびにその抗体を作製することも可能である。 '

RFRPもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、 RFRP部分ぺプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対するレセプター蛋白質 OT 7 T 022 (以下、 OT 7 T 022と略記する）としては、例えば、配列番号： 13で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質が用いられる。

〇T 7 TO 22は、例え、哺乳動物（例えば、ヒト、モルモット、ラット、マウス、ゥサギ、プタ、ヒッジ、ゥシ、サルなど）のあらゆる細胞 (例えば、脾細胞、神経細胞、グリア細包、膝臓 ;3細胞、骨髄細胞、メサンギゥム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、 T細胞、 B細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細 ^包、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）や血球系の細胞、またはそれらの細胞が存在するあらゆる糸且織、例えば、脳、月の各部位（例、嗅球、扁頭核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、視床下核、大脳皮質、延髄、小脳、後頭葉、前頭葉、側頭葉、被殻、尾状核、脳染、黒質）、脊髄、下垂体、胃、脾臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、末梢血球、前立腺、睾丸、精巣、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など（特に、月 ¾ や脳の各部位）に由来する蛋白質であってもよく、また合成蛋白質であってもよい。 ' 、

配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列と約 50%以上、好ましくは約 70 %以上、より好ましくは約 80 %以上、さらに好ましくは約 90 % 以上、最も好ましくは約 95%以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。

配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質としては、例えば、配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列からなる OT 7 TO 22と実質的に同質の活性を有するレセプター蛋白質などが好ましく、具体的には、配列番号： 1 3または配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質などがあげられる。

ァミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST (N a t i o n a 丄し e n t e r f o r B i o t e c hn o l o g y I n f o rma t i o n B a s i c L o c a l A l i g nme n t S e a r c h T o o l ) を用い、以下の条件（期特値 = 1 0 ；ギヤップを許す；マトリク ^ = BLOSUM62 ；フィルタリング -OFF) にて計算することができる。実質的に同質の活性としては、例えば、リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの活性が性質的に同質であることを示す。したがって、リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などの活性が同等（例、約 0. 01〜 1 00倍、好ましくは約 0. 5〜 20倍、より好ましくは約 0. 5'〜2倍）であること力好ましいが、これらの活性の程度や蛋白質の分子量などの量的要素は異なつてレ、てもよい。

リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などの活生の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができるが、例えば、後述するリガンドの決定方法やスク V一二ング方法に従って測定することができる。

また、 OT 7T022としては、，（i)配歹【J番号： 1 3または配列番号： 1 5で表わされるアミノ酸配列中の 1または 2個以上（好ましくは、 1〜30個程度、より好ましくは 1〜10個程度、さらに好ましくは数個（1または 2個））のァミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（ii)配列番号： 1 3または配列番号： 1 5で表わされるアミノ酸配列に 1または 2個以上（好ましくは、 1〜30個程度、より好ましくは 1〜10個程度、さらに好ましくは数個（1または 2個））のァミノ酸が付加したアミノ酸配列、（iii)配列番号： 1 3または配列番号： 1 5で表わされるアミノ酸配列中の 1または 2個以上（好ましくは、 1〜30個程度、より好ましくは 1〜10個程度、さらに好ましくは数個（1または 2個））のァミノ酸が他のァミノ酸で置換されたァミノ酸配歹【J、または（iv)それら欠失 ·付加 ·置換を組み合わせたァミノ酸配列からなるレセプター蛋白質なども用いられる。本明細書における〇T 7 Τ 022は、ぺプチド標記の慣例に従って左端が Ν末端 (ァミノ末端) 、右端が C末端 (カルボキシル末端) である。配列番号： 1 3 で表わされるアミノ酸配列からなる ΟΤ 7 Τ 022をはじめとする ΟΤ 7 Τ 02 2は、 C末端が力ルボキシル基 (-COOH) 、カルボキシレート（一 C〇〇一）. アミド (-CONH₂ ) またはエステル（一 C〇〇R) のいずれであってもよい _c ここでュステルにおける Rとしては、例えば、メチル、ェチル、 n—プロピルイソプロピルもしくは n—プチルなどの ― ₆ アルキル基、例えば、シクロべンチル、シクロへキシルなどの C ₃ 一 ₈ シクロアルキル基、例えば、フエニル、 α—ナフチルなどの C₆ ― _l 2 ァリール基、例えば、ベンジル、フエネチルなどのフエニノレー C_t ― ₂ ァノレキル基もしくは α—ナフチルメチノレなどのひ一ナフチノレ— _ ₂ アルキル基などの C ₇ ― _{1 4} ァラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるビバロイルォキシメチル基などが用いられる。

OT 7 T 022が C末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステ/レ化されているものも〇T 7 T 022の範囲に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。

さらに、 ΟΤ 7 TO 22には、上記した OT 7 T 022において、 N末端のメチォニン残基のァミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、ァセチルなどの C₂ — ₆ アルカノィル基などの C _ ₆ ァシル基など）で保護されているもの、 N端側が生体內で切断され生成したグルタミル基がピ口ダルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、一 OH、 _SH、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グァニジノ基など）が適当な保護基（例えば.、ホルミノレ基、ァセチルなどの C₂ _ ₆ アルカノィル基などの _ ₆ ァシル基など）で保護されてレ、るもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糠蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。

OT 7 022の具体例としては、例えば、配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列力らなるラット OT 7 TO 22、配列番号： 15で表されるァミノ酸配列からなるヒト OT 7T022などが用いられる。

OT 7 T 022の部分ぺプチドとしては、前記した〇T 7 Τ 022の部分ぺプチドであれば何れのものであってもよいが、例えば、 ΟΤ7Τ 022蛋白質分子のうち、糸田胞膜の外に露出している部位であって、レセプター結合活性を有するものなどが用いられる。

具体的には、配列番号： 1 3または配列番号： 1 5で表わされるアミノ酸配列からなる OT 7TO 22の部分ペプチドとしては、疎水や生プロット解析において細胞外領域（親水性（Hydrophilic) 部位）であると分析された部分を含むぺプチドである。また、疎水性（Hydrophobic) 部位を一部に含むペプチドも同様に用いることができる。'個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得るが、複数のドメインを同時に含む部分のぺプチドでも良い。

OT 7 T 022の部分ぺプチドのァミノ酸の数は、前記した OT 7 T 022の構成ァミノ酸配列のうち少なくとも 20個以上、好ましくは 50個以上、より好ましくは 1 00個以上のアミノ酸配列からなるペプチドなどが好ましい。

また、 OT 7T022の部分べプチドは、上記ァミノ酸配列中の 1または 2個以上（好ましくは、 1〜10個程度、さらに好ましくは数個（1または 2個））のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に 1または 2個以上（好ましくは、 1〜20個程度、より好ましくは 1〜10個程度、さらに好ましくは数個 (1または 2個））のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列中の 1または 2個以上（好ましくは、 1〜1 0個程度、より好ましくは数個（1または 2 個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。

また、 OT 7 T 022の部分ぺプチドは C末端がカルボキシル基 (-COO H) 、カルボキシレ一ト (_CO〇—）、アミド（一 CONH₂ ) またはエステル（一 C〇OR) (Rは上記と同意義を示す）のいずれであってもよい。

OT 7 T 022の部分ぺプチドが C末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート) を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも OT 7 TO 22の範囲に含まれる。この場合のエステルとしては, 例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。

さらに、 OT 7 T 022の部分ぺプチドには、前記した OT 7 T 022と同様に、 N末端のメチォニン残基のァミノ基が保護基で保護されているもの、 N端側が生 ίφ:内で切断され生成したダルタミル基がピ口ダルタミン酸化したもの、分子内のァミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ぺプチドなども含まれる。

ΟΤ 7 Τ 022またはその部分べプチドの塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、'酢酸、ギ酸、プロビオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。

ΟΤ 7 Τ 022またはその塩、および ΟΤ 7 TO 22を発現する細胞またはその細胞膜画分は、 WO 00ノ 29441号、 WO 01/661 34号などに記载の方に従って製造することができる。

OT 7 T 022をコードするポリヌクレオチドとしては、 OT 7T022をコードする塩基配列（0 または1 、好ましくは DNA) を含有するものであればいかなるものであってもよい。該ポリヌクレオチドとしては、 OT7T0 22をコードするDNA、 mRNA等のRNAでぁり、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖 DNA、二本鎖 RNAまたは DN A： R N Aのハイプリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖（即ち、コ一ド鎖）であっても、アンチセンス鎖（即ち、非コード鎖）であってもよい。

OT 7T022をコードするポリヌクレオチドを用いて、例えば、公知の実験医学增刊「新 PC Rとその応用」 15(7)、 1997記載の方法またはそれに準じた方法により、 OT 7 T 022の mRNAを定量することができる。

OT 7 T 022をコードする DNAとしては、ゲノム DNA、ゲノム DNAラィブラリ一、前記した細胞 ·組織由来の c DNA、前記した細包■糸且織由来の c DNAライブラリー、合成 DNAのいずれでもよい。ライプラリーに使用するべクタ一は、バタテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、 f 記した細胞 ·組織より totalRNAまたは： mRNA 画分を調製したものを用レヽて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 R T- P C R法と略称する）によって増幅することもできる。具体的には、 OT 7 T 02 2をコードする DNAとしては、例えば、配列番号： 14、配列番号： 16または配列番号： 1 7で表わされる塩基配列を含有する DNA、または配列番号： 14、配列番号： 1 6または配列番号： 1 7で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイプリダイズする;^基配列を有し、配列番号： 1 3まこは配列番号： 1 5で表されるァミノ酸配列からなる OT 7T022と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有するレセフ。ター蛋白質をコードする DN Aであれば何れのものでもよい。、

配列番号： 14、配列番： 1 6または配列番号： 1 7で表わされる塩基配列とハイプリダイズできる D N" Aとしては、例えば、配列番号： 14、配歹 1J番号： 1 6または配列番号： 17で表わされる塩基配列と約 70%以上、好ましくは約 80 %以上、より好ましくは約 90 %以上、最も好ましくは約 95 %以丄の相同性を有する塩基配列を含有する D N Aなどが用いられる。

塩基配列の相同性は、相同生計算ァルゴリズム NCB I BLAST (Na t l o n a 1 C e n t e r f o r B i o t e c nn o l o g y I DQ f o r ma t i o n B a s i c L o c a l A l i g nme n t S e r c h To o l ) を用い、以下の条件（期待値 = 10 ；ギャップを許す；フィノレタリング =ON；マッチスコア = 1 ；ミスマッチスコア =— 3) にて計算することがでさる。

ハイブリダィゼーシヨンは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方、法、例えば、モレキュラー ·クロー： =·ンク (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジヱン ' トな条件に従って行なうことができる。

該ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリゥム濃度が約 19〜 40 mM、好ましくは約 19〜 20 mMで、温度が約 50〜 70 °C、好ましくは糸勺 6 0〜 65 °Cの条件を示す。特に、ナトリゥム濃度が約 19 mMで温度が約 6 5 °C の場合が最も好ましい。

より具体的には、配歹番号： 13で表わされるァミノ酸配列からなるラット O T7T022をコードする DNAとしては、配列番号： 14で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。配列番号： 15で表わされるアミノ酸酉 S列かなるヒト〇T 7 T 0 22をコードする DNAとしては、配列番号： 1 6または配列番号： 17で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。

ΟΤ7Τ022の部分ペプチドをコードする DNAとしては、前述した ΟΤ 7 TO 22の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノム DNA、ゲノム DNAライブラリー、前言己した細胞 ·組織由来の c D NA、前記した細胞 ·組織由来の c DNAライブラリ一、合成 DNAのいずれでもよい。ライプラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞 ·組維より mRN A画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 R T - P C R法と略称する）によって増幅することもできる。

具体的には、〇T 7 T 022の部分ペプチドをコードする DNAとしては、例えば、（1) 配列番号： 14、配列番号： 16または配列番号： 17で表わされる塩基配列を有する DN Αの部分塩基配列を有する DNA、または（2) 配歹 [[番号： 14、配列番号： 1 6または配列番号： 17で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号： 1 3 または配列番号： 15で表わされるアミノ酸配列からなる〇T 7 TO 22と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活'卜生またはシグナル情報伝達作用など）を有するレセプター蛋白質をコ一ドする DI Aの部分塩基配列を有する DNAなどが用いられる。

OT 7 T 022またはその部分ペプチドをコードする DNAから OT 7T 0 2 2またはその部分ペプチドを製造する場合、 WO 0 OZ2 944 1号、 WO 0 1 /6 6 1 34号などに記載の方法に従って行うことができる。

RFRP、その部分ぺプチド、もしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体は、自体公知の方法、例えば WO O 0/2 944 1号、 W 00 1/6 6 1 34号などに記載の方法に従って製造し、使用することができる。

OT 7 T 022、その部分べプチドまたはその塩に対する抗体は、自体公知の方法、例えば WO 0072 9441、号、 WO 0 1/6 6 1 3 4号などに記載の方法に従って製造し、使用することがでさる。

RFRPをコードする DNAとして W；、 WO O 0/2 944 1号、 WOO 1/ 6 6 1 34号などに記載の DNAと同様のものが用いられる。

RFRPまたは OT 7T 0 22をコードする DNAの塩基配列の一部、または該 D N Aと相補的な塩基配列の一部を含有してなるポリヌクレオチドとは、上記した RFRPまたは OT 7 T 022のき分ぺプチドをコ一ドする DN Aを包含するだけではなく、 RN Aをも包含する意味で用いられる。

本発明に従えば、 RFRP遺伝子または OT 7 T 0 2 2遺伝子の複製または発現を阻害することのできるアンチセンス ·ポリヌクレオチド (核酸) を、クローンィ匕した、あるいは決定された RFRPまたは OT 7 T 02 2をコードする DN Aの塩基配列情報に基づき設計し、合成しうる。そうしたポリヌクレオチド（核酸）は、 RFRP遺伝子または OT 7T 0 2 2遺伝子の RN Aとハイブリダィズすることができ、該 RNAの合成また ί 機能を阻害することができる力、あるいは RFRP関連 RNAまたは ΟΤ 7ΤΟ 2 2関連 R N Aとの相互作用を介して R FRP遺伝子または OT 7 T 022遺 ί云子の発現を調節 ·制御することができる。 RFRP関連 RNAまたは OT 7 T 022関連 RN Αの選択された配列に相補的なポリヌクレオチド、および RFR P関連 RNAまたは〇T 7T 022関連 RN Aと特異的にハイプリダイズすることができるポリヌクレオチドは、生体内および生体外で R F R P遺伝子または O T 7 T 022遺伝子の発現を調節 ·制御するのに有用であり、また病気などの'冶療または診断に有用である。用語「対応する」とは、遺伝子を含めたヌクレチド、塩基配列または核酸の特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意味する。ヌクレオチド、塩基配列または核酸とペプチド（蛋白質）との間で「対応する」とは、ヌクレオチド（核酸）の配列またはその相補体から静導される指令にあるペプチド（蛋白質）のァミノ酸を通常指している。 OT 7 T 022遺伝子の 5，端ヘアピンループ、 5，端 6—ベースペア · リピート、 5 端非翻訳領域、ポリべプチド翻訳開始コドン、蛋白質コード領域、 ORF翻訳開烚コドン、 3，端非翻訳領域、 3' 端パリンドローム領域、および 3，端ヘアピンループは好ましい対象領域として選択しうる力 RFRP遺伝子または OT 7 T 022遺伝子内の如何なる領域も対象として選択しうる。

目的核酸と、対象領域の少なくとも一部に相補的でハイブリダィズすることができるポリヌクレオチドとの関係は、対象物と「アンチセンス」であるということができる。ァンチセンス ·ポリヌクレオチドは、 2—デォキシー D—リポースを含有しているポリデォキシリボヌクレオチド、 D—リボースを含有しているポリリボヌクレオチド、プリンまたはピリミジン塩基の N—グリコシドであるその他のタイプのポリヌクレオチド、あるいは非ヌクレオチド骨格を有するその他のポリマー（例えば、市販の蛋白質核酸および合成配列特異的な核酸ポリマー）または特殊な結合を含有するその他のポリマー (但し、該ポリマーは DNAや RN A中に見出されるような塩基のペアリングゃ塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含有する) などが挙げられる。それらは、 2本鎖 DNA、 1本鎖 D NA、 2本鎖 RNA、 1本鎖 RNA、さらに DNA： RNAハイプリッドであることができ、さらに非修飾ポリヌクレオチド (また ί· 非修飾オリゴヌクレオチド）、さらには公知の修飾の付加されたもの、例えば当該分野で知られた標識のあるもの、キャップの付いたもの、メチルイ匕されたもの、 1個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、分子内ヌクレオチド修飾のされたもの、例えば非荷電結合 (例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホルァミデート、力ルバメートなど）を持つもの、電荷を有する結合または硫黄含有結合 (例えば、ホスホロチォエート、ホスホロジチォエートなど）を持つもの、例えば蛋白質 (ヌクレアーゼ、ヌクレアーゼ 'インヒビター、トキシン、抗体、シダナルぺプチド、ポリ一 Lーリジンなど) や糖 (例えば、モノサッカライドなど)' などの側鎖基を有しているもの、インターカレント化合物（例えば、アタリジン、プソラレンなど) を持つもの、キレート化合物 (例えば、金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化性の金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された結合を持つもの（例えば、（¾ァノマー型の核酸など）であつてもよい。ここで「ヌクレオシド」、「ヌクレオチド」および「核酸」とは、プリンおよびピリミジン塩基を含有するのみでなく、ィ彦飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、ァシル化されたプリンおよピリミジン、あるいはその他の複素環を含むものであってよい。修飾されたヌクレオチドぉよぴ修飾されたヌクレオチドはまた糠部分が修飾されていてよく、ィ列えば、 1個以上の水酸基がハロゲンや、脂肪族基などで置換されていたり、あるいはエーテル、ァミンなどの官能基に変換されていてよい。

本発明のアンチセンス 'ポリヌクレオチド (核酸) は、 R NA、 D NA、あるいは修飾された核酸（R NA、 D NA) である。修飾された核酸の具体例としては核酸の硫黄誘導体ゃチォホスフェート誘導体、そしてポリヌクレオシドアミドやオリゴヌクレオシドアミドの分解に抵抗性のものが举げられるが、それに限定されるものではない。本発明のアンチセシス核酸は次のような方針で好ましく設計されうる。すなわち、細胞内でのアンチセンス核酸をより安定なものにする、ァンチセンス核酸の細胞透過性をより高める、目標とするセンス鎖に対する親和性をより大きなものにする、そしてもし毒性があるならァンチセンス核酸の毒性をより小さなものにする。

こうした修飾は当該分野で数多く知られており、例えば J. Kawakami et al. , Pharm Tech Japan, Vol. 8, pp. 247, 1992； Vol. 8, pp. 395， 1992； S. T. Crooke et al. ed.， Antisense Research and Applications, CRC Press, 1993 などに開示されている。

本発明のアンチセンス核酸は、変化せしめられたり、修飾された糖、塩基、結合を含有していて良く、リボゾーム、ミクロスフエアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療により適用されたり、付加された形態で与えられることができうる。こうして付加形態で用いられるものとしては、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリ力チオン体、細 B包膜との相互作用を高めたり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例えば、ホスホリピド、コレステロールなど）といった疎水性のものが挙げられる。付; するに好ましい脂質としては、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリルクロ口ホルメート、コール酸など）が挙げられる。こうしたものは、核酸の 3，端あるいは 5 ' 端に付着させることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介して付着させることができうる。その他の基としては、核酸の 3 ' if あるいは 5，端に特異的に配置されたキャップ用の基で、ェキソヌクレアーゼ、 R N a s eなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げられる。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレングリコール、テトラエチレンク"リコールなどのグリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基力³挙げられるが、それに限定されるものではない。

アンチセンス核酸の阻害活性は、本発明の形質転換体、本猪明の生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいは G蛋白質共役型レセプター蛋白質の生体内や生体外の翻訳系を用いて調べることができる。該核酸それ自体公口の各種の方法で細胞に適用できる。

RFRPまたは〇T 7T 022をコードするポリヌクレチドに対する s i R NA (以下、本発明の s i RNA) は、 RFRPまたは O T 7 T 022をコードする RNAの一部とそれに相補的な RNAを含有する二重鎖 RNAである。

s i RNAは、公知の方法（例、 Nature, 411卷， 494頁， 2001年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。

RFRPまたは OT7T022をコードする R N Aの一 ¾5を含有するリボザィムは、公知の方法（例、 TRENDS in Molecular Medicine, 7卷， 221頁， 2001年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。例えば、公知のリボザィムの配列の一部を RF R Pまこは O T 7 T 022をコードする RN Aの一部に置換することによって製造することができる。 RFR Pまたは〇T 7 Τ 022をコードする RNAの一部としてま、公知のリボザィムによって切断され得るコンセンサス配列 NUX (式中、 Nfますべての塩基を、 X は G以外の塩基を示す）の近傍の配列などが挙げられる。

(i)RFRP、その部分ペプチド、もしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩（以下、 RFRPと略記する）、（ii)RFRPをコードする DNA、 (iii)RFRPに対する抗体、 (iv) RFRPをコードする D N Aに対するアンチセンス DNA、（v)OT 7T022、その部分ペプチドまたはその塩（QT 7T 022と略記する) 、（vi) ΟΤ 7 Τ 022をコードする D NA、 (vii) ΟΤ 7 T 022に対する抗体、 (viii)OT 7 T 022をコードする！ D Ν Αに対するアンチセンス DNAは、以下のような用途を有している。

(1) RF R Pの機能不全に関連する疾患の予防 ·治療剤

a) RFRP, b) R F R Pをコードする D N A、 c) 〇T 7 TO 22または d) OT 7T022をコードする DNAを、 RFR Pまた (ま〇T 7 Τ 022の機能不全に関連する疾患の予防 ·治療薬などの医薬として使用することができる。例えば、生体内において RFRPまたは OT 7 Τ 022が減少しているために、 RFRPまたは ΟΤ 7 TO 22の機能が期待できない患者がいる場合に、 a) R FRPを該患者に投与し該 RFRPの量を補充したり、 b) (ィ） RF RPをコ一ドする DNAまたは OT 7T 0.22をコードする D N Aを該患者に投与し発現させることによって、あるいは（口）対象となる細胞に RFRPをコードする D NAまたは OT 7T022をコードする DNAを揷入し発現させた後に、該細胞を該患者に移植することなどによって、患者の体内における RFRPまたは OT 7 T 022の量を増加させ、 RFRPまたは OT 7 T 022の機能を充に発揮させることができる。すなわち、 RFRPをコードする DNAまたは 0 T 7 T 0 22をコードする DNAは、安全で低毒性な RFRPまたは OT 7T 0 22の機能不全に関連する疾患の予防 ·治療剤として有用である。

具体的には、 a) RFRP, b) RFRPをコードする DNA、 c) OT 7 T 022または(1) OT 7 Τ 022をコードする DNAは、例えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先:^性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症ィ侯群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および-行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患等の予防 ·治療剤、摂食量減少剤、飲水量減少剤、尿量減少剤、侵害刺激に対する過敏性の上昇剤、血漿中のコルチコステロン値の低下剤、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値低下剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下剤、血圧上昇剤、自発行動抑制剤、ストレス感受性増進剤として使用することができる。 RFRPまたは OT 7T022を上記予防 ·.治療剤として使用する場合 ί 、常套手段に従って製剤化することができる。

一方、 RFRPをコードする DNAまたは ΟΤ7Τ022をコードする Ι ΝΑ を上記予防 ·治療として使用する場合は、これら DN Αを単独あるいはレ卜口ゥィルスベクター、アデノウィルスべクター、アデノウイルスァソシエーテドウィルスべクタ一などの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実；することができる。 DNAは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。例えば、 a) RFRP, b) RFRPをコードする DNA、 c) OT 7 T 02 2または d) OT 7 T 022をコードする DNAは、必要に応じて糖衣を； Sfeした錠剤、力プセル剤、ェリキシル剤、マイクロ力プセル剤などとして経口的こ、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、また it懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、 a) RFRP, b ) R FRPをコードする DNA、 c) OT7T022または d) OT 7 T 022 をコードする DNAを生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、べヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求さる単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶' セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサグ力リンのような甘味剤、ペパーミント、ァカモノ油またはチェリーのような香? fe剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの T料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌 i_成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やそのの補助薬を含む等張液（例えば、 D—ソルビトール、 D—マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノーノレ）、ポリアノレコール (例、プロピレングリコーノレ、ポリエチレングリコール）、 +非ィオン性界面活性剤（例、ポリソルベート 80^{T M} 、 HCO- 5 0) などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解捕助剤である安息香酸べンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。

また、上記予防 '治療剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニゥム、塩酸プロカインなど) 、安定剤 (例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤 (例えば、ベンジルアルコール、フエノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトゃ哺乳動物 (例えば、ラット、マウス、ゥサギ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して投与することができる。

RFRPの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、一日につき約 0. 1〜： L 0 Omg、好ましくは約 1. 0〜50mg、より好ましくは約 1. 0〜20mgである。非経口的に投与する場合は、その 1 回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、 —日につき約 0. 01〜3 Omg程度、好ましくは約 0. l〜20mg程度、より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 60 k g当たりに換算した量を投与することができる。

DNAの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、一日につき約 0. 1〜： 100mg、好ましくは約 1. 0〜5 Omg、より好ましくは約 1. 0〜2 Omgである。非経口的に投与する場合は、その 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、一日にっき約 0. 01〜3 Omg程度、好ましくは約 0. l〜20mg程度、より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 60 k g当たりに換算した量を投与することができる。

(2) 遺伝子診断剤、

RFRPをコードする DNA、 OT 7 T 022をコードする DNA、またはこれら DN Aに対するアンチセンス DN Aは、プローブとして使用することにより、ヒトまたは哺乳動物 (例えば、ラット、マウス、ゥサギ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど）における RFRPまたは OT 7T022をコードする D NAまたはmRNAの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該 DNAまたは mRNAの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該 DNAまたは mRNAの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有用である。

DN Aまたはアンチセンス DN Aを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションゃ PCR—S SCP法 (ゲノミックス (Genomics) ，第 5卷， 874〜 879頁（1989年）、プロシージングズ · ォブ ·ザ ·ナショナノレ ·アカデミー ·ォプ ·サイェンシィズ .ォブ ·ユーエスェ一 (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America) ，第 86卷， 2766〜 2770頁（1989年））などにより実施することができる。

例えば、ノーザンハイブリダィゼーションにより RFRPまたは〇T 7 Τ 02 2の発現低下または発現過剰が検出された場合は、例えば、 R F R Pまたは O T 7 T O 2 2の機能不全または過剰発現に関連する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。

R F R Pまたは O T 7 T 0 2 2の機能不全または過剰発現に関連する疾患としては、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾ一ル血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、過食症、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、 .副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾーノレ抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）およびうつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極†生感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの疾患や、摂食量、飲水量、尿量、侵害刺激に対する過敏性、血漿中のコルチコステロン値、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値、血漿中の卵胞刺激ホルモン ( F S H) 値、血圧、自発行動量、ストレス感受性などの異常症状が挙げられる。特に、 R F R Pまたは O T 7 T 0 2 2の機能不全に関連する疾患としては、例えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シェ一ダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾ —ル抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、'低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患などの疾患や、摂食量上昇、飲水量上昇、尿量上昇、侵害刺激に対する過敏性の低下、血漿中のコルチコステロン値の上昇、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の上昇、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の上昇、血圧低下、自発行動量増加、ストレス感受性低下などの症状が挙げられる。

—方、 R F R Pまたは〇T 7 T O 2 2の過剰発現に関連する疾患としては、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等) など] などの疾患や、摂食量減少、飲水量減少、尿量減少、侵害刺激に対する過敏性の上昇、血漿中のコルチコステロン値の減少、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の減少、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の減少、血圧上昇、自発行動量低下、ストレス感受性增大などの症状が挙げられる。

(3) RFRPまたは OT 7 T 022の発現量を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬

RFRPまたは OT 7 T 022をコードする DNAは、プロープとして用いることにより、 RFRPまたは OT 7 TO 22の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリー-ングに用いることができる。

すなわち、本発明は、例えば、（i) 非ヒト哺乳動物の a) 血液、 b) 特定の臓器、 c) 臓器から単離した組織もしくは細胞、または（ii) 形質転換体等に含まれる RFRPまたは OT 7 T 022の mRNA量を測定することによる、 RF RPまたは OT7TO 22の発現晕を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。

1 1 ?または0丁7丁022の mRNA量の測定は具体的には以下のようにして行なう。

( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、'ラット、ゥサギ、ヒッジ、プタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど、より具体的には免疫不全モデルラット、マウス、ゥサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、月、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた細胞に含まれる RFRPまたは OT7TO 22の mRNAは、例えば、通常の方法により細胞等から mRNAを抽出し、例えば、 Ta qMa n PCR などの手法を用いることにより定量することができ、自体公知の手段によりノーザンプロットを行うことにより解析することもできる。

(ii) RFRPまたは〇T 7 T 022を発現する形質転換体を W〇 00/29

441号または WO 01X66134号に記載の方法に従い作製し、該形質転換体に含まれる RFRPまたは〇T 7 Τ 022の mR Ν Αを同様にして定量、解析することができる。

RFRPまたは OT 7T022の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーユングは、

( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（ 30分前〜 24時間前、好ましくは.30分前〜 12時間前、より好ましくは 1時間前〜 6時間前）もしくは一定時間後（ 30 分後〜 3日後、好ましくは 1時間後〜 2日後、より好ましくは 1時間後〜 24時間後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投与し、投与後一定時間経過後（ 30分後〜 3日後、好ましくは 1時間後〜 2日後、より好ましく ίま 1時間後〜 24時間後）、鉀胞に含まれる R FRPまたは ΟΤ7Τ022 の mRNA量を定量、角军析することにより行なうことができ、

(ii) 形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、一定 3寺間培養後（1日後〜 7日後、好ましくは 1日後〜 3日後、より好ましくは 2日後〜 3日後）、該形質転換体に含まれる RFRPまたは OT 7T022の m RNA量を定量、解析することにより行なうことができる。

試験化合物としては、例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよレヽ。

試験化合物は塩を形成していてもよく、試験化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え ί 、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との诲、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、 RFR Pまたは OT 7TO 22の発現量を変化させる作用を有する化合物またはその塩であり、具体的には、（ィ） RFRPまたは OT7T022の発現量を増加させることにより、 OT 7T022を介する細胞刺激活性（例えば、ァラキドン酸遊離、ァセチルコリン遊離、細胞内 C a ² +遊離、細胞内 c AMP生成、細胞内 c AMP生成抑制、細胞内 c GMP生成、イノシトーノレリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞內蛋白質のリン酸化、 c一 f o sの活性化、 pHの低下などを促進する活性または抑制する活性など）を増強させる化合物またはその塩、（口） RFR Pの発現量を減少させることにより、該細胞刺激活性を減弱させる化合物またはその塩である。 ₅

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物としては、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。

該化合物の塩としては、前記した RFRPの塩と同様のものが用いられる。上記スクリ一ユング方法で得られる RFRPまたは〇T 7 Τ 022の発現量を増加させる化合物またはその塩は、例えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性)！症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患等に対する安全で低毒性な予防 ·治療剤、摂食量減少剤、飲水量減少剤、尿量減少剤、侵害刺激に対する過敏性の上昇剤、血漿中のコルチコステロン値の低下剤、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の低下剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の低下剤、血圧上昇剤、自発行動抑制剤、ストレス感受性増進剤として用いることができる。

上記スクリーユング方法で得られる R F R Pまたは O T 7 T O 2 2の発現量を減少させる化合物またはその塩は、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、臂不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月铎、精神および行動障害 [例えば、気分 [感 -情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の变 1"生疾患等）など] 等に対する安全で低毒性な予防 ·治療剤、摂食量上昇剤、飲水量上昇剤、尿量上昇剤、侵害刺激に対する過敏性の低下剤、血漿中のコルチコステロン値の上昇剤、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の上昇剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の上昇剤、血圧低下剤、自発行動促進剤、抗ストレス剤などとして用いることができる。

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記した R F R Pを含有する予防 ·治療剤と同様に製造することができる。

得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトゃ哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ゥサギ、ヒッジ、ブタ、' ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して投与することができる。

該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、一日につき RFRPまたは〇T 7T022の発現量を増加させる化合物またはその塩を約 0. 1〜10 Omg、好ましくは約 1. 0〜5 0mg、より好ましくは 0〜20mgである。非経口的に投与する場合は、その 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なる力例えば、注射剤の形では通常例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、一日につき RFRPまたは O—T 7 T 022の発現量を増加させる化合物またはの塩を約 0. 01〜3 Omg程度、好ましくは約 0. l〜20mg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 0 m g程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 60 k g当たりに換算した量を投与することができる。

(4) 抗体を用いる診断方法

RFRPまたは OT 7 T 022に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記する）は、 RFRPまたは〇T 7T022を特異的に認識することができるので、被検液中の RFRPまたは ΟΤ 7 Τ 022の検出や中和に使用することができる。すなわち、本発明は、

(i) 本発明の抗体と、被検液および標識化された RFRPまたは OT7TO 2 2とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化された RFRPまたは OT 7

TO 22の割合を測定することを特徴とする被検液中の RFRPまたは OT 7T 022の定量法、および

(ii) 被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体およぴ標識化された本発明の別の抗体とを同時あるいは產続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中の RFRPまたは OT7T022の定量法を提供する。 ' 上記（ii) の定量法においては、一方の抗体が RFRPまたは〇T 7 T 022 の Ν.端部を認識する抗体で、他方の抗体が RFRPまたは ΟΤ 7 Τ 022の C端部に反応する抗体であることが望ましい。

また、 RFRPまたは ΟΤ 7Τ0 22に対するモノクローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体）を用いて RFRPまたは OT 7 T 022の定量を行うことができるほカヽ組織染色等による検出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子の F(a ）₂、 F a b'、あるいは F a b画分を用いてもよレヽ。

本発明の抗体を用いる RFRPまたは〇T 7 T 022の定量法は、特に制限され¾べきものではなく、被測定液中の抗原量（例えば、 RFRP量または ΟΤ 7 TO 22量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体一抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、ィムノメトリック法およびサンドィツチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。 '

標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例えば、 ^{2 5} I〕、 ^{3 1} I〕、〔³ H〕、 C^{1 4} C] などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、 j3—ガラクトシダーゼ、 β一ダルコシダーゼ、アル力リフォスファターゼ、パーォキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フルォ'' レスカミン、フルォレツセンイソチ才シァネートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ノレミノ一ノレ、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗体あるレ、は抗原と標識剤との結合にビォチンーアビジン系を用いることもできる。抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物理吸着を用いてもよく、また通常酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。担体としては、ァガロース、デキストラン、セノレロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいはガラス等があげられる。

サンドィッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ（1次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ（2次反応）たのち、不溶ィ匕担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の R F R P量を定量することができる。 1次反応と 2次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行なってもよレヽし時間をずらして行なってもよレ、。標識化剤おょぴ不溶化の方法は前記 φそれらに準じることができる。また、サンドィツチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも 1種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で 2 種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。

本発明のサンドィツチ法による R F R Pまたは Ο Τ 7 Τ 0 2 2の測定法においては、 1次反応と 2次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、 R F R Ρまたは〇Τ 7 Τ 0 2 2の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、 1次反応および 2次反応に用いられる抗体は、例えば、 2次反応で用いられる抗体が、 R F R Pまたは Ο Τ 7 Τ 0 2 2の C端部を認識する場合、 1次反応で用いられる抗体は、好ましくは C端部以外、例えば N端部を認識する抗体が用いられる。

本発明のモノクローナル抗体をサンドィッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、ィムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原（F ) と、抗体と結合した標識抗原（B ) とを分離し (B Z F分離）、 B， Fいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、 B / F分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第 2抗体などを用いる液相法、および、第 1抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第 1抗体【ま可溶性のものを用い第 2抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。

ィムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離する力あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相匕抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。

また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。，被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。

これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて R F R Pまたは O T 7 T 0 2 2の測定系を構築すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。

例えば、入江寛編「ラジオイムノアツセィ」（講談社、昭和 4 9年発行）、入江寛編「続ラジオィムノアツセィ」（講談社、昭和 5 4年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和 5 3年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第 2版）（医学書院、昭和 5 7年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第 3版）（医学書院、昭和 6 2年発行）、「Method_S in ENZYMOLOGY j Vol. 70 (Immunochemi cal Techniciues (Part A) )、同書 Vol. 73 (Immunochemical Techniques (Part B) )、同書 Vol. 74 (Immunochemical Techniques (Part C) )、同書 Vol. 84 (Immunochemical Techniques (Part D ： Selected Immunoassays) ) 同書. Vol. 92 (Immunochemical Techniques (Part E ： Monoclona丄 Antibodies and General Immunoassay Methods) )、同書 Vol. 121 (Immunochemical Techniques (Part I ： Hybri doma Technology and Monoclonal Antibodies)) (以上、アカデミックプレスネ： h発行）などを参照することができる。

以丄のようにして、本発明の抗体を用いることによって、 RFRPまたは OT 7 T O 2 2を感度良く定量することができる。

さらには、本発明の抗体を用いて RFRPまたは OT 7T 0 2 2の濃度を定量することによって、 RFRPまたは OT 7T02 2の濃度の減少が検出された場合、 ί列えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高ルシゥム血症、低力リウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸 ?t瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢月包卵巣症候群、ターナー症候群などの疾患や、摂食量減少、飲水量減少、尿量減少、侵害刺激に対する過敏性の上昇、血漿中のコルチコステロン値の低下、血槳中の黄体形成ホルモン (LH) 値の低下、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下、血圧上昇などの症状である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。また、 RFRPまたは OT 7 T0 2 2の濃度の増加が検出された場合には、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、 '腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体月重瘍、視床下部性無月経などの疾患や、摂食量上昇、飲水量上昇、尿量上昇、侵害刺激に対する過敏性の低下、血漿中のコルチコステロン値の上昇、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の上昇、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の上昇、血圧低下などの症状である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。

( 5 ) R F R Pと O T 7 T 0 2 2との結合性またはシグナノレ伝達を変化させるィ匕合物またはその塩 (ァゴニスト、アンタゴニストなど) のスクリーニング方法、および R F R Pと O T 7 T 0 2 2との結合性またはシグナノレ伝達を変化させるィ匕合物またはその塩を含有する医薬

O T 7 T 0 2 2を用いるか、または組換え型 O T 7 T O 2 2の発現系を構築し、該発現系を用いたレセプター結合アツセィ系を用いることによって、例えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、タツシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生" F垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 · 十二指腸潰瘍、過敏个生腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、ネ申経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、 f垂体機能低下症、頭畫咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）およびうつ病エピソードを伴う疾患（例、う.つ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害 (例、外傷後ストレス障害 (PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動 (例、続発性パーキンソン症候群、他に分鎮される疾患におけるノ、。一キンソン症候群、基底核のその他の'変性疾患等) など] などの予防 ·治療薬や摂食量、飲水量、尿量、侵害刺激に対する過敏性、血漿中のコルチコステロン値、血漿中の黄体形成ホルン（LH) 値、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値、血圧、自発行動量、ストレス感受性などの調整薬として有用な R IF RP と OT 7 T 0 2 2との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物（例えば、ペプチド、蛋白質、非べプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など）またはその塩を効率よくスクリー二ングすることができる。

このような化合物には、（ィ） OT 7 T 0 2 2を介して細胞刺激活性（f列えば、ァラキドン酸遊離、ァセチルコリン遊離、細胞内 C a ² +遊離、細胞内 c AMP 生成、細胞内 c AMP生成抑讳 lj、細胞内 c GMP生成、イノシトールリン酉愛産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、 c— f o sの活性化、 p Hの低下などを促進する活性または抑制する性など）を有する化合物（いわゆる、 OT 7 T O 2 2ァゴニスト）、（口） OT 7 T 0 2 2を介する細胞刺激活性を阻害する化合物（いわゆる、 OT 7 T 0 2 2アンタゴニスト）、 (ノヽ) R F R Pと OT 7 T 0 2 2との結合力を増強する化合物、または（二） RFR Pと OT 7 T 0 2 2 との結合力を減少させる化合物などが含まれる。

すなわち、本発明は、

( 1 ) RFRPおよび（また ίま） ΟΤ 7 Τ Ο 2 2を用いることを特徴とする摂食量、飲水量、尿量、侵害刺激に対する過敏性、血漿中のコルチコステロン値、血漿中の黄体形成ホルモン（L li) 値、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値、血圧、自発行動量またはストレス感受性などの調節薬のスクリーニング方法、

(2) RFR Pおよび（また ίま） ΟΤ 7 Τ 0 2 2を用いることを特徴とする過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、昌 U腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRti産生腫瘍、アルドステロン産生腫 ¾¾、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経个生食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過毎戈性腸症候群、低血圧中枢性早激症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール JtfiL症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジゾン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頃蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動摩害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）およびうつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連摩害 (例、外傷後ストレス障害 (PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）、生理的障害おょぴ身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路摩害および異常行動（例、続性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などの予防 ·治療薬のスクリーユング方法、

(3) ( i ) RFRPと OT7T022とを接触させた場合と（ii) RFRPと OT7T022および試験化合物とを接触させた場合との比較を行なうことを特徴とする摂食量、飲水量、尿量、侵害刺激に対する過敏性、血漿中のコルチコステロン値、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値、血漿中の卵胞刺激ホルモン (FSH) 値、血圧、自^ §行動量またはストレス感受性の調節薬のスクリーニング方法、

(4) ( i ) RFRPと〇T 7T022とを接触させた場合と（ii) RFRPと OT 7 T 022および試験化合物とを接触させた場合との比較を行なうことを特徴とする過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体 B重瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、 ·排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下逮体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）およびうつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極†生感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）、生理的.障害および身体的要因に関連した行動症候群 (例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性ノ、 °一キンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] の予防 '治療薬のスクリーニング方法を提供する。

上記の改善薬や予防 ·治療薬は、 RFRPと OT 7T022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩である。

本発明のスクリーニング方法にお! _/、ては、（ i) と (ϋ) の場合における、例えば、 O T 7 T 022に対する R FRPの結合量、細胞刺激活性などを測定して、比較することを特徴とする。

より具体的には、本発明は、 '

a) 標識した RFRPを、〇T 7 ΊΓ 022に接触させた場合と、標識した RF RPおよび試験化合物を ΟΤ 7Τ 0 22に接触させた場合における、標識した R FRPの ΟΤ 7Τ022に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする R FRPと ΟΤ7Τ022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリ一二ング方法、 ' b) 標識した RFRPを、〇T 7 TO 22を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、標識した RFRPおよび試験化合物を OT7T022を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識した R F R Pの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーユング方法、

c) 標識した RFRPを、 OT 7 T 022をコードする DNAを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した OT 7T022に接触させた場合と、標識した RFRPおよび試験化合物を〇T 7 Τ 022をコードする DN A 'を含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した OT 7 T 0 22に接触させた場合における、標識した RFRPの OT 7 T 022に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする RFRPと〇T 7 TO 22との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリ一二ング方法、 d) RFRPを活性化する化合物またはその塩（例えば、 RFRPなど）を O T 7T022を含有する細胞に接触させた場合と、 RFRPを活性化する化合物またはその塩おょぴ試験化合物を OT 7 TO 22を含有する細胞に接触させた場合における、 OT 7 T 022を介した細胞刺激舌性を測定し、比較することを特徴とする RFRPと OT7T022との結合性たはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーユング方法、おび

e) RFRPを活性化する化合物またはその（例えば、 R F R Pなど）を O T7T022をコードする DNAを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した O T 7 T 022に接触させ广こ場合と、 RFRPを活性化する化合物またはその塩および試験化合物を OT 7 T 022をコードする DNAを含有する形質転換体を培養することによって細胞 H奠上に発現した OT 7 T 022に接触させた場合における、レセプターを介する^ 0胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とする RFRPと OT 7 TO 22と O結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング; ^法を提供する。

本発明のスクリ^ニング方法では、 RFRPの代わりに、 RFRPと OT7T 022との結合性を変化させる化合物またはその塩を用いることもできる。この RFRPと OT7T022との結合性を変化させる化合物またはその塩は、 RF R Pを用いて本発明のスクーニング方法を実施することによって得ることができる。

本発明のスクリーニング方法の具体的な説明以下にする。

まず、本発明のスクリーニング方法に用いる OT 7 T 022としては、 OT 7 TO 22を含有する哺乳動物の臓器の細胞膜画分が好適である。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて大量現させたヒト由来の OT 7T022などが適している。

OT 7 T 022を製造するには、 WOO 0,29441号または WOO 1/6 6134号に記載の方法が用いられるが、〇T T022をコードする DNAを哺乳細胞や昆虫細胞で発現することにより行なことが好ましい。目的とする蛋白質部分をコードする DNA断片には相補 DN が用いられるが、必ずしもこれに制約されるものではない。例えば、遺伝子断や合成 DN Αを用いてもよい。 OT 7 T 022をコードする DN A断片を宿主 |¾物細胞に導入し、それらを効率よく発現させるためには、該 DNA断片を昆虫宿主とするバキュロウィルスに属する核多角体炳ウィルス（nuclear polyhedrosi s virus； N P V) のホリへ卜リンプロモーター、 S V 40由来のプロモータ · ~、レトロゥイノレスのプロモータ一、メタ口チォネインプロモーター、ヒトヒー卜ショックプロモーター、サイトメガロウィルスプロモータ一、 SRaプロモーーなどの下流に組.み込むのが好ましい。発現したレセプターの量と質の検査はれ自体公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Nambi, P. ら、ザ .ジヤーナノレ ·ォブ ·バイオロジカル.ケミストリー（J. Biol. Chem. ) , 267卷， 19555〜19559頁， 1992年〕に記載の方法に従って行なうことができる。

したがって、本発明のスクリーニング方法において、 OT 7T022を含有するものとしては、それ自体公知の方法に従って精製した〇T 7 Τ 022であってもよいし、 ΟΤ 7 Τ 022を含有する細胞を用いてもよく、また ΟΤ 7Τ022 を含有する細胞の膜画分を用いてもよい。

本発明のスクリーユング方法において、〇Τ 7Τ022を含有する細胞を用いる場合、該細胞をダルタルアルデヒド、ホマリンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従つて行なうことができる。

ΟΤ 7 Τ 022を含有する細胞としては、 ΟΤ 7 TO 22を発現した宿主細胞をいう力該宿主細胞としては、大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。、

細胞膜画分としては、細胞を破碎した後、それ自体公^の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、 Potter— Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ヮーングブレンダーゃポリトロン（Kinematica社製）のよる破碎、超音波による破、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることにる破碎などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を ®速（500〜 3000 r pm) で短時間（通常、約 1〜10分）遠心し、上清さらに高速（1 500 0〜30000 r pm) で通常 30分〜 2時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現した OT 7T 022と細胞白来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。

OT 7T022を含有する細胞や膜画分中の OT 7 T D 22の量は、 1細胞当たり 10³ 〜 10⁸分子であるのが好ましく、 10⁵〜； L 0⁷分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりの ΟΤ Γ TO 22結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。

RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を化させる化合物またはその塩をスクリーニングする上記の a) 〜c) を実施するためには、例えば、適当な OT 7 T 022画分と、標識した RFRPが必要でおる。 - OT7T022画分としては、天然型の OT7T022画分力、またはそれと同等の活性を有する組換え型 OT7T022画分などが望まし、。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性、シグナル情報伝達作用どを示す。

標識した RFRPとしては、標識した RFRP、標識した R F R Pアナログ化合物などが用いられる。例えば〔³ H〕、 ^{2 5} I〕、 C^{1 4} C] , 〔^{3 5} S3' などで標識された RFRPなどが用いられる。

具体的には、 RFRPと OT7T022との結合性またはシダ、ナル伝達を変化させる化合物のスクリーニングを行なうには、まず OT 7 T 02 2を含有する細胞または細胞の膜画分を、スクリーユングに適したバッファーに懸濁することにより〇T 7 T 022標品を調製する。バッファーには、 ρΗ4〜： L O (望ましくは ρ Η6〜8) のリン酸バッファー、トリス一塩酸バッファーどの R F R Ρと ΟΤ 7 Τ 022との結合を阻害しないバッファーであればいずでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、 CHAPS、 Twe e n— 8 0^{T M} (花王一ァトラス社) 、ジギトニン、デォキシコレートなどの界面活性斉 IJをバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによる〇T 7 Τ 02 2や RFRPの分解を抑える目的で PMS F、ロイぺプチン、 E—64 (ペプチド研究所製）、ぺプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。 0.01〜1 Om 1の該レセプター溶液に、一定量（5000〜 500000 c p m) の標識した RFRPを添カ卩し、同時に 10— ⁴ M〜l 0 - ¹ 。 Mの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（NSB) を知るために大過剰の未標識の RFRPを加えた反応チューブも用意する。反応は約 0〜50°C、望ましくは約 4〜37でで、約 20分〜 24時間、望ましくは約 30分〜 3時間行う。反応後、ガラス繊維瀘紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンターまたは γ—カウンターで計滔』する。拮抗する物質がない場合のカウント（B。）から非特異的結合量（NSB) を引いたカウント（B。一 NSB) を 100%とした時、特異的結合量（B— NSB) 力 S、例えば、 50%以下になる試験化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。

RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩をスクリーニングする上記の d) 〜e) の方法を実施するためには、例えば、 OT 7 T 022を介する細胞刺激活性を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができる。

具体的には、まず、 OT 7 T 022を含有する細胞をマルチウエルブレート等に培養する。スクリーニングを行なうにあたっては前もつて新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファ一に交換し、試験化合物などを添加して一定時間ィンキュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする質（例えば、ァラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアツセィを行なってもよい。また、 c AMP産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出することができる。細胞刺激活性を測定してスクリ一二ングを行なうには、適当な OT 7 T 022 を発現した細胞が必要である。 OT 7 T 022を発現した細胞として fま、天然型の OT7T022を有する細胞株、上記の組換え型 OT 7 T 022を発現した細胞株などが望ましい。

試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。

また、試験化合物としては、 OT7T022の活性部位の原子座標おょぴリガンド結合ボケットの位置に基づいて、リガンド結合ボケットに結合するように設計された化合物が好ましく用いられる。 OT 7 T 022の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置の測定は、公知の方法あるいはそれに準じる方法を用いて行うことができる。

RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング用キットは、 RFRP、 OT 7T022を含有する細胞またはその細胞膜画分を含有するものなどである。

本発明のスクリー-ング用キットの例としては、次のものが挙げられる。

1. スクリーニング用試薬

a) 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液

Hanks' Balanced Salt Solution (ギブコネ土製）に、 0. ◦ 5 %のゥシ血清ァノレプミン（シダマ社製) を加えたも。

孔径 0. 4 5 μ mのフィルターで濾過滅菌し、 4°Cで保存するか、あるいは用時調製しても良い。

b) OT 7 T 022標品

OT 7 T 022を発現させた CHO細胞を、 12穴プレートに 5 X 10⁵個/ 穴で継代し、 37°C、 5%C0₂ 、 95%a i rで 2日間培養したもの。

c) 標識 RFRP

市販の〔³ H〕、 ^{2 5} I〕、 ⁴ C〕、〔^{3 5} S〕などで標識した RF RP

水溶液の状態のものを 4°Cあるいは— 20°Cにて保存し、用時に測定用緩衝液にて 1 //Mに希釈する。

d) RFRP標準液

RFRPを 0. 1 %ゥシ血清アルプミン (シグマ社製) を含む P B Sで 1 mM となるように溶角军し、一 20 °Cで保存する。

2. 測定法

a) 12穴糸且織培養用プレートにて培養した OT 7 T 022発現 CHO細胞を、測定用緩衝液 1 m 1で 2回洗浄した後、 490 1の測定用緩衝液を各穴に加える。 .

b) 10— ³ 〜： 10— ^{1 0} Mの試験化合物溶液を 5 μ 1加えた後、標識 R F R Ρを 5 μ 1カロえ、室温にて 1時間反応させる。非特異的結合量を知るためには^: 験化合物の代わりに 10— ³ Μの RFRPを 5 1加えておく。

c ) 反応液を除去し、 1 m 1の洗浄用緩衝液で 3回洗浄する。細胞に結合した標識 R FRPを 0.2N NaOH- l%SDSで溶解し、 4 m 1の液体シンチレーター A (和光純薬製）と混合する。

d) 液体シンチレーシヨンカウンター (ベックマン社製) を用いて放射活性を測定し、 Percent Maximum Binding (PMB) を次の式で求める。

PMB= [ (B-NS B) (B。一 NSB) ] X 100

PMB ： Percent Maximum Binding

B ：検体を加えた時の値

NS B ： Non-specific Binding (非特異的結合量)

B。：最大結合量

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物としては、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。

上記スクリーニング方法で得られる化合物の塩としては、前記した RFRPの塩と同様の塩が用いられる。

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、 RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル f云達を変化させる作用を有する化合物またはその塩であり、具体的には、 (ィ) 〇 T 7T022を介して細胞刺激活性を有する化合物またはその塩 (いわゆる、〇 T 7T022ァゴニス卜）、 (口）該細胞刺激活性を有しない化合物またはその塩（いわゆる、 OT7T022アンタゴ-スト）、（ハ） RFRPと OT 7T0 22との結合力を増強する化合物またはその塩、または（二） RFRPと OT 7 TO 22との結合力を減少させる化合物またはその塩である。

OT 7 T 022ァゴニストである力アンタゴニストであるかの具体的な評価方法は以下の（i ) および（ii) に従えばよい。

( i ) 例えば、前記 a) 〜c) のスクリーニング方法で示されるパインディング*アツセィを行い、 RFRPと OT 7T022との結合性を変化させる (特に、結合を阻害する）化合物またはその塩を得た後、該化合物またはその塩が上記した OT 7T022を介する細胞刺激活性を有しているか否かを測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は OT 7 TO 22ァゴニストであり、該活性を有しない化合物またはその塩は ς»τ 7 Τ 022アンタゴュストである。

(ii) (a) 試験化合物を OT 7T022を含有する細胞に接触させ、上記 OT 7TO 22を介した細胞刺激活性を測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は OT 7 T 022ァゴニストである。

(b) OT 7 TO 22を活性化する化合物（例えば、 RFRPなど）を OT 7T 022を含有する細胞に接触させた場合と、 OT 7 T 022を活性化する化合物および試験化合物を OT 7 TO 22を含有する細胞に接触させた場合における、 OT 7T022を介した細胞刺激活性を測定し、比較する。 OT 7T022を活性化する化合物による細胞刺激活性を減少させ得る化合物またはその塩は O T 7 T 022アンタゴ-ストである。

OT 7 T 022ァゴニストは、 RFRPが有する生理活性と同様の作用を有しており安全で低毒性な医薬として有用である。

OT 7 T 022アンタゴニストは、 RFRPが有する生理活性を抑制することができるので、 RFRPの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。

RFRPと OT 7T022との結合力を増強する化合物またはその塩は、 RF R Pが有する生理活性を増強することができるので、安全で低毒性な医薬として有用である。

RFRPと OT7T022との結合力を減少させる化合物またはその塩は、 R FRPが有する生理活性を減少させることができるので、 R F R Pの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。

具体的には、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる OT 7 T 022ァゴニストおよび RFRPと OT 7 T 022との結合力を増強する化合物またはその塩は、例えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体寧瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患等に対する予防 ·治療剤、摂食量減少剤、飲水量減少剤、尿量減少剤、侵害刺激に対する過敏性の上昇剤、血漿中のコルチコステロン値の低下剤、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下剤、血圧上昇剤、自発行動抑制剤、ストレス感受性増進剤として有用である。

一方、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる〇T 7 Τ 022アンタゴニストおよび RFRPと OT 7T022との結合力を減少させる化合物またはその塩は、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] 等に対する予防 ·治療剤、摂食量上昇剤、飲水量上昇剤、尿量上昇剤、侵害刺激に対する過敏性の低下剤、血漿中のコルチコステロン値の上昇剤、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の上昇剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の上昇剤、血圧低下剤、自発行動促進剤、抗ストレス剤などとして有用である。

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩を上記の医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記した R F R Pを含有する予防.治療剤と同様に製造することができる。

得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトゃ哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ゥサギ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して投与することができる。

該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、一日につき O T 7 T O 2 2ァゴュストを約 0 . 1〜1 0 0 m g、好ましくは約 1 . 0〜5 0 m g、より好ましくは約 1 . 0〜2 0 m gである。非経口的に投与する場合は、その 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、一日につき〇T 7 T 0 2 2ァゴニストを約 0. 0 1〜3 Omg程度、好ましくは約 0. 1〜2 Omg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 0 m g程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。

(6) 細胞膜における OT 7 T O 2 2の量を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬

OT 7 T 0 2 2に対する抗体は、 OT 7 T 0 2 2を特異的に認識することができるので、細胞膜における OT 7 T 0 2 2の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーユングに用いることができる。

すなわち、本発明は、例えば、

'( i ) 非ヒト哺乳動物の a ) 血液、 b) 特定の臓器、 c) 臓器から単離した組織もしくは細胞等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれる O T 7 T 0 2 2を定量することによる、細胞膜における〇T 7 T O 2 2の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、

(ii) OT 7 T 0 2 2を発現する形質転換体等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれる OT 7 T 0 2 2を定量することによる、細胞膜における OT 7 T 0 2 2の量を変化させる化合物またはその塩のスクリ一二ング方法、

(iii) 非ヒト哺乳動物の a ) 血液、 b ) 特定の臓器、 c ) 臓器から単離した組織もしくは細胞等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜における QT 7 T 0 2 2の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。

(iv) OT 7 T 0 2 2を発現する形質転換体等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜における OT 7 T 0 2 2の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。細胞膜画分に含まれる OT 7 T 0 2 2め定量は具体的には以下のようにして行なう。

( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ゥサギ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど、より具体的には免疫不全ラット、マウス、ゥサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、例えば、適当な緩衝液（例えば、トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、へぺス緩衝液など）等に懸濁し、臓器、組織あるいは細胞を破壊し、界面活性剤（例えば、トリトン X 1 0 0 ^{τ M}、ツイーン 2 0 τ ^Mなど）などを用い、さらに遠心分離や濾過、ラム分画などの手法を用いて細胞膜画分を得る。

細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、 Potter— Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングプレンダーゃポリトロン（Kinematica社製）のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細レ、ノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分面法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（5 0 0〜 3 0 0 0 r p m) で短時間（通常、約 1分〜 1 0分）遠心し、上清をさらに高速（1 5 0 0 0〜3 0 0 0 0 r p m) で通常 3 0分〜 2時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現した O T 7 T 0 2 2と細胞由来のリン脂質ゃ膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。

細胞膜画分に含まれる〇T 7 T O 2 2は、例えば、本発明の抗体を用いたサンドィツチ免疫測定法、ウェスタンブロット解析などにより定量することができる。かかるサンドィッチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なうことができ、ウェスタンブロットは自体公知の手段により行なうことができる。

(ii) O T 7 T 0 2 2を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、細胞膜画分に含まれる O T 7 T O 2 2を定量することができる。

細胞膜における O T 7 T O 2 2の量を変化させる化合物またはその塩のスクリ一-ングま、

( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（3 0分前〜 2 4時間前、好ましくは 3 0分前〜 1 2時間前、より好ましくは 1時間前〜 6時間前）もしくは一定時間後（3 0 分後〜 3曰後、好ましくは 1時間後〜 2日後、より好ましくは 1時間後〜 2 4時聞後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投与し、投与後一定時間経過後（ 3 0分後〜 3日後、好ましくは 1時間後〜 2日後、より好ましくは 1時間後〜 2 4時間後）、細胞膜における〇 T 7 T 0 2 2の量を定量することにより行なうことができ、

(ii) 开さ質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、一定時間培養後（1日後〜 7日後、好ましくは 1日後〜 3日後、より好ましくは 2日後〜 3日後）、細胞膜における R F R Pの量を定量することにより行なうことができる。

細胞膜画分に含まれる O T 7 T 0 2 2の確認は具体的には以下のようにして行なう。

(iii) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ゥサギ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど、より具体的には免疫不全モデルラット、マウス、ゥサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、常法に従い組織切片とし、本発明の抗体を用いて免疫染色を行う。細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合レ、を定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することにより、定量的または定性的に、細胞膜における〇T 7 TO 22の量を確認することができる。

(iv) OT 7T022を発現する形質転換体等を用いて同様の手段をとることにより確認することもできる。

試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物は、細胞膜における OT 7T022の量を変化させる作用を有する化合物であり、具体的には、（ィ）細胞膜における OT7TO 22の量を増加させることにより、 OT 7T022を介する細胞刺激活性を増強させる化合物、（口）細胞膜における OT 7 T 022の量を減少させることにより、該細胞刺激活性を減弱させる化合物である。

上記スクリ一二ング方法で得られる化合物の塩としては、前記した RFRPの塩と同様の塩が用いられる。

細胞膜における O T 7TO 22の量を増加させることにより、細胞刺激活性を増強させるィ匕合物またはその塩は、例えば、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シ： ^一ダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホ /レモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患等に対する安全で低毒性な予防 ·治療剤、摂食量減少剤、飲水量減少剤、尿量減少剤、侵害刺激に対する過敏性の上昇剤、血漿中のコルチコステロン値の低下剤、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の低下剤、血圧上昇剤、自発行動抑制剤、ストレス感受性増進剤などとして有用である。

細胞膜における O T 7 T 0 2 2の量を減少させることにより、細胞刺激活性を減弱させる化合物またはその塩は、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢 f生副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、'気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] 等に対する安全で低毒性な予防 ·治療剤、摂食量上昇剤、飲水量上昇剤、尿量上昇剤、侵害刺激に対する過敏性の低下剤、血漿中のコルチコステロン値の上昇剤、血漿中の黄体形成ホルモン（L H) 値の上昇剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S H) 値の上昇剤、血圧低下剤、自発行動促進剤、抗ストレス斉 ϋなどとして有用である。

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記した R F R Ρを含有する予防 ·治療剤と同様に製造することができる。

該化合物またはその:^の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、細胞膜における OT 7 T 022の量を増加させる化合物またはその塩を一日につき約 0. 1〜1 0 Omg、好ましくは約 1. 0〜50 m g、より好ましくは約 1. 0〜20mgである。非経口的に投与する場合は、その 1回投与量は投与対象、对象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、頻尿患者（体重 6 O k gとして）においては、細胞膜における OT 7 TO 22の量を増加させる化合物またはその塩を一日にっき約 0. 01〜30m g程度、好ましくは約 0. l〜20mg程度、より好ましくは約 0. 1〜10 m g程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。

(7) RFRPまたは OT 7 T 022に対する抗体を含有してなる医薬

RFRPまたは〇T 7T 022 対する抗体（特に、中和抗体）は、 RFRP または ΟΤ 7 TO 22が関与するシグナル伝達、例えば、 OT 7 TO 22を介する細胞刺激活性を不活性ィ匕することができる。

したがって、 RFRPまたは OT 7 TO 22に対する抗体は、例えば、拒食症神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感 If] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫' I"生障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害おょぴ異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等) など] 等に対する予防 ·治療剤、摂食量上昇剤、飲水量上昇剤、尿量上昇剤、侵害刺激に対する過敏性の低下剤、血漿中のコルチコステロン値の上昇剤、血漿中の黄体形成ホルモン (LH) 値の上昇剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の上昇剤、血圧低下剤、自発行動促進剤、抗ストレス剤などとして用いることができる。

上記製剤は、前記した RFRPを含有する医薬と同様にして製造し、使用することができる。

(8) アンチセンス DNAまたは s i RNAを含有してなる医薬

' RFRPをコードする DN Aに対するアンチセンス DN Aまたは OT 7 T 02 2をコードする DNAに対するアンチセンス DNA (以下、アンチセンス DNA と略記する）または本発明の s i RNAは、例えば、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] 等に対する予防 ·治療剤、摂食量上昇剤、飲水量上昇剤、尿量上昇剤、侵害刺激に対する過敏性の低下剤、血漿中のコルチコステロン値の上昇剤、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の上昇剤、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の上昇剤、血圧低下剤、自発行動促進剤、抗ストレス剤などとして用いることができる。

例えば、該アンチセンス DNAまたは s i RNAを用いる場合、該アンチセンス DNAまたは s i RNAを単独あるいはレト口ウィルスベクター、アデノウイノレスベクター、アデノウィルスァソシエーテツドウイノレスベクターなどの適当なベクターに揷入した後、常套手段に従って実施することができる。該アンチセンス DNAまたは s i RNAは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテ一テルのようなカテーテルによって投与できる。

さらに、該アンチセンス DNAは、組織や細胞における RFRPまたは OT 7 TO 22をコードする DNAの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。

(9) 各種薬物の作用メカニズムの解明方法

OT 7T022を用いることによって、各種薬物が OT 7 TO 22を介して薬理効果を発揮している力否かを確認することができる。

十なわち、本発明は、 ·

(1) OT 7T 022を用いる^とを特徴とする、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシゥム血症、低カリウム血症、シヱーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コノレチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十ニ旨腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性または慢性副腎皮質機食低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精ネ申および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）およびうつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続性パーキンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] などに対する予防 ·治療薬や摂食量、飲水量、尿量、侵害刺激に対する過敏性、血漿中のコルチコステロン値、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値、血圧、自発行動量、ストレス感受性などの調整薬が O T 7T0 22に結合することを確認する方法、

(2) OT 7T022を用いることを特徴とする、過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシゥム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、ァノレドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、躁病エピソードを伴う疾患（例、躁病、双極性感情障害等）、生理的障害および身体的要因に関連した行動症候群（例、摂食障害、非器質性睡眠障害等）など] 、神経系の疾患等に対する予防 ·治療薬や摂食量減少薬、飲水量減少薬、尿量減少薬、侵害刺激に対する過敏性の上昇薬、血漿中のコルチコステロン値の低下薬、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下薬、血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下薬、血圧上昇薬、自発行動抑制薬、ストレス感受性増進薬が OT 7 TO 22に対するァゴニストであることを確認する方法、 .

(3) OT 7T 022を用いることを特徴とする、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低ァ /レドステロン症、低コルチゾ一ル血症、続発性または慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥、?箭、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、' 下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神おょぴ行動障害 [例えば、気分 [感情] 障害のうち、うつ病エピソードを伴う疾患（例、うつ病、反復性うつ病性障害、気分循環症、気分変調症、双極性感情障害等）、ストレス関連障害（例、外傷後ストレス障害（PTSD) 、社会恐怖症、パニック障害、全般性不安障害、強迫性障害等）など] 、神経系の疾患 [例えば、錘体外路障害および異常行動（例、続発性ノ一キンソン症候群、他に分類される疾患におけるパーキンソン症候群、基底核のその他の変性疾患等）など] 等に対する予防 ·、台療薬ゃ摂食量上昇薬、飲水量上昇薬、尿量上昇薬、侵害刺激に対する過敏性の低下薬、血漿中のコルチコステロン値の上昇薬、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の上昇薬、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値の上昇薬、血圧低下薬、自発行動促進薬、抗ストレス薬などが OT 7 T 022に対するアンタゴニストであることを確認する方法、

(4) 各薬を OT 7 T 022に接触させた場合における、各薬と OT 7 TO 2 '2との！^合量を測定することを特徴とする上記（1) 〜（3) 記載のスクリー二ング方を提供する。

この碓認方法は、前記した RFRPと OT 7TO 22 との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法において、試験化合物に代えて、上記の薬物を使用することによって実施することができる。

また、本発明の確認方法用キットは、前記した R F R Pと OT 7T022との結合性を変化させる化合物のスクリーニング用キットにおいて、試験化合物に代えて、上記の薬物を含有するものである。

このように、本発明の確認方法を用いることによって、市販または開発途中の各種薬物が OT 7 TO 22を介して薬理効果を発揮していることを確認することができる。

本発明の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。

〔配列番号： 1〕 . RFR Pのアミノ酸配列（ヒト型）を示す。

〔配列番号： 2〕

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DNA の塩基 e列を示す。

〔配列番号： 3〕

RFR Pのアミノ酸配列（ヒト型）を示す。

〔配列番号： 4〕

配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DNA の塩基配列を示す。

〔配列番号： 5〕

RFR Pのァミノ酸配列（ゥシ型）を'示す。

〔配列番号： 6〕

配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DNA の塩基配列を示す。

〔配列番号： 7〕

RFR Pのアミノ酸配列（ラット型）を示す（リクローニング前）。

〔配列番号： 8〕

配列番号： 7で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DNA の塩基配歹 Kを示す。

〔配列番号： 9〕

RFR Pのアミノ酸配列 (ラット型）を示す (リクローニング後) 。

〔配列番号： 10〕

配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DNA の塩基配』を示す。

〔配列番号： 1 1〕

RF R Pのァミノ酸配列 (マウス型) を示す。〔配列番号： 12〕

配列番号： 11で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DN Aの塩基配列を示す。 ―

〔配列番号： 13〕

ラット由来 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 r OT 7T022のァミノ酸配列を示す。

〔配列番号： 14〕

ラット由来 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 r OT 7 TO 22をコードする c DN Aの塩基配列を示す。

〔配列番号： 15〕

ヒト由来 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 h〇T 7 Τ 022をコードするアミノ酸配列を示す。

〔配列番号： 16〕

配列番号： 15で表されるァミノ酸配列を有する hOT7T022をコードする DNAの塩基配列を示す。

〔配列番号： 17〕

配列番号： 15で表されるァミノ酸配列を有する hOT7T022をコードする D N Aの塩基配列を示す。

〔配列番号： 18〕 .

後述の実施例 1で行われた： P CR法に用いられたプライマーの塩基配列を示す。〔配列番号： 19〕

後述の実施例 1で行われた P C R法に用いられたプライマーの塩基配列を示す。〔配列番号： 20〕

後述の実施例 2で行われた； P C R法に用いられたプライマ一の塩基配歹を示す。〔配列番号： 21〕

後述の実施例 2で行われた P C R法に用いられたプライマーの塩基配列を示す。〔配列番号： 22〕

後述の実施例 2で行われた P_C R法に用いられたプローブの塩基配列を示す。本願明細書において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、 IUPAC—IUB Commission on Bioch.emical Nomenclatureによる略"^あるいは当亥分野におり o 慣用略号に基づくものであり、その例を次に挙げる。

DNA ：デォキシリボ核酸

c DNA ：相補的デォキシリボ核酸

A ：アデニン

T ：チミン

G ：グァニン

C ：シトシン、

RNA ：リボ核酸

mRNA ：メッセンジャーリボ核酸

d ATP ：デォキシアデノシン三リン酸

d TTP ：デォキシチミジン三リン酸

d GTP ：デォキシグアノシン三リン酸

d CTP ：デォキシシチジン三リン酸

ATP ：アデノシン三リン酸

EDTA ：エチレンジァミン四酢酸

SDS ：ドデシル硫酸ナトリウム

G 1 y ：ダリシン

A 1 a ：ァラニン

V a 1 ：ノリン

L e u ：ロイシン

I 1 e ：ィソロイシン

S e r ：セリン Th r ：スレオニン

C y s ：システィン

Me t ：メチォニン

G 1 u ：グルタミン酸

A s p ：ァスパラギン酸

L y s • 11 ヽヽ、ノ

A r g ：アルギニン

H i s ：ヒスチジン

P h e ：フエニノレアラニン

T y r ：チロシン

T r p ：トリブトファン

P r o ：プロリン

A s n ：ァスパラギン

G 1 n ：グルタミン

p G 1 u ：ピログノレタミン酸

Me ：メチル基

E t ：ェチル基

B u ：プチル基

P h ：フエニル基

TC ：チアゾリジン一 4 ( _) 一カルボキサミド基また、本明細書中で繁用される置換基、 ^：護基および試薬を下記する。

T o s ： p―トノレエンスノレフ一二ノレ

CHO ：ホノレミノレ

B z 1 ：ベンジル

CLBzl ： 2 , 6—ジクロ口べ Zジル B o m ：ペンジノレオキシメチノレ

Z ：ベンジルォキシカル二ノレ

C 1一 Z ： 2—クロ口べンジルキシカルボェノレ

B r - Z ： 2—ブロモベンジルキシカノレボニル

B o c ： t—ブトキシカルポ二ノレ

DNP ：ジニトロフエノ一ノレ

T r t ：トリチル

B um ： t—プトキシメチノレ

Fmo c ： N— 9—フノレオレニノレメトキシカルボ二ノレ

HOB t ： 1—ヒドロキシベンズトリアゾール

HOOB t : 3, 4—ジヒドロー 3—ヒドロキシ一 4一ォキソ一 1 , 2，

3—ベンゾトリ了ジン

HONB ：卜ヒドロキシ- 5-ノルボルネン- 2， 3 -ジカルボキシイミド

DC C ： N, N' ージシクロへキシノレカノレボジイミド

以下に実施例を挙げて本発明をより具体に説明するが、本発明がこれらに限定されないことは言うまでもない。実施例 1 RFRP トランスジエニックラゾト（T gラット）作製

CAG発現ュュット [前記 CAGプロモーター（p CAG) およびゥサギグロビンポリ A付加シグナル (G p A) からなる] を含むプラスミド p C XN 2 [本プラスミドは大阪大学大学院医学系研究科宫崎純一教授より分与された (Miyazaki et al. Gene 1989 79： 269-77) コを制限酵素 E c o R I処理して、ニヮトリ ]3ァクチンプロモーターの下流にラットの c DNA (配列番号： 1 0) を連結できるようにした。尚、 CAG発現ユニットは組換えアデノウイルス産生用コスミドぺクタ一 AxCAwtit ( Adenovirus Expression Vector Kit (DualVersion)； TaKaRa Code 6170に添付）から、「実験医学」， 21(7)： 931 - 936 (2003) に記載の方法によりプラスミドベクターにリクローニングすることができる。ラットの c DNAは、ラット t o t a 1 RNAを鎵型として用い、 5， -CCGAATTCGCCACCATGGAAATTATTTCATCAAAG- 3，（酉 3列番号： 1 8) および 5， - CCGAATTCTCACAGCTTCATAGCCCCTTG- 3，（配列番号： 1 9) の p r i me r s e tを用いて PCR反応によって得た。 P CRは 94で · 2分処理後、 94°C - 3 0秒、 5 5°C ' l分、 6 8 °C · 2分を 3 5回反復後、 6 8 · 2分処理により行つた。 PCRにより得られた RFRP c DNA 制限酵素 E c o R I処理後、タカララィゲーションキットを用いて上記 E c o RL I処理した p CXN 2に連結し、プラスミド p CXN2—R a t RF am i d e 5を作製した。作製したプラスミドは、 PCRおよびシークェンサ一による増幅産物の塩基配列決定により c DNAの挿入を確認した。この p CAG— RFR_ P— Gp Aの発現カセットを含むプラスミドを常法に従って大腸菌コンビテン卜セル JM1 0 9に導入し、得られた形質転換体（E s c h e r i c h i a c o l i JM1 0 9/p CXN 2— R a t RF a m i d e 5；本菌株は、 2004年 6月 28日から、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（IP0D ; 〒305- 8566 日本国茨城県つくば巿東 1-1- 1 中央第 6) に、 FERM B P- 1 004 6の受託番号を付されて寄託されている。）を培養してプラスミドの大量調製を行った。大量に得られたプラスミドを制限酵素 B a mH I、 S a l Iおび P v u Iを用いて切断し、ァガロースゲル電気泳動を行って分離した 3. 1 I b pの断片をァガロースゲルから切り出し、常法による分離精製後、インジェクション実験に用いた。

採卵用雌ラット（W i s t a r系統、 9〜： 1 3週齢）に 5 I Uの PMSGを腹腔内投与し、 1 2時間明期 Z1 2時間暗期の飼育宣で 2 間飼育後、 5 I Uの h CGを腹腔内投与して雄ラット（Wi s t a r系、 1 5〜2 0週齢）と交配させた。別途、自然発情している受胚用雌ラット（ϋ s t a r系統、 9〜20週齢）を精管結紮雄ラット（W i s t a r系統、 1 5〜20週齢）と交配させた。翌日、膣栓形成により交尾を確認した採卵用雌ラットの腹腔を開いて卵管を取り出し、 HER培地中、実体顕微鏡下にピンセットで受精卵をり出した。卵丘細胞がとれた受精卵をピぺットで吸い上げ、ミネラルオイルで覆われた HER培地のドロップ中に入れて、インジェクションするまでの間 37。C、 5% C〇₂下で 2時間培養した。

受精卵をミネラルオイルで覆われた PB Sに 18%の非働ィ匕した FC Sを添カロした培地のドロップ中に入れてホールディングピぺットで吸引固定した。ィンジェクシヨン断片 1/10 Tris塩酸、 EDTA溶液（0. 3〜1. 0 g/m l ) をインジェクシヨンピぺットに吸引し、実体顕微鏡下にインジェクションピぺットを受精卵の雄性前核に突き刺し、インジェクション断片を注入しブこ。インジ工クション終了後、受精卵をミネラルオイルで覆われた HER培地のドロップ中に入れて、受胚用雌への移植までの間 37 °C 5% C〇 ₂下で培養し。

受胚用雌ラットは移植に用いる日より 4日前の 13時にコンセラール (武田薬品工業株式会社製） 40 μ 1を投与し、移植前日の 17時に精管結さつ雄ラットと同居させて交配を行った。移植当日午前 9時、受胚用雌ラットの膣栓形成により偽妊娠状態を確認した受胚用雌ラットをネンブタール 4 Oxng/k g体重の濃度投与して麻酔後、後背部を切開して脂肪塊をピンセットで报まんで引き出し、クレンメで固定した。実体顕微鏡下に卵巣嚢をピンセットで引き裂き、各卵管当たり 10〜15個の受精卵をトランスファーピぺットによって卵管開口部に注入した。卵巣と卵管を体内に戻して切り口を縫合した後、 123寺間明期 /12時間暗期の飼育室で飼育を続けた。胚移植から約 21日後に仔ラット（F。）が産まれた。仔ラットへの導入 DNAの伝達は、尾部を 1 cm程度、サミで切り取り、該組織抽出液から常法により DNAを単離して PCR法により確認した。

D I Gプローブを用いたサザン解析により遺伝子導入を確認した。 P C R陽性個体 N 0. 70は、 14コピー、 No. 93個体は 7コピーの導入遺伝子が確認された。

導入 DNAの伝達が確認された F。個体は、生殖可能になった段階で Wi s t a r系統ラットと交配させて産仔（Ft ) を得た。上記と同様に導入遺伝子の伝達を確認し、導入 DNAを有するェ個体同士を（兄妹）交酉己させ、導入遺伝子のホモ接合体を得た。実施例 2 RFRP発現の確認

ホモ接合体の各臓器を摘出し、 I s o g e ii (二ツボンジーン社製）を用いて t o t a l RNAを定法により抽出した。各臓器の RNA レベルの遺伝子発現はリアルタイム PGR (T a qMa n P CR) によって評価した。すなわち t o t a 1 RNAは所定のキット（アプライドパーキンエルマ一社製）を用いて c DNAを作製した。つぎに所定のキット (アプライドパーキンュルマー社製) にプライマー 5 ，一 GCCCCATTTTCA.CAGCAA (配列番号： 2 0 ) ， 5 ，一 CCCCCAATCTTTGAGTTCTTGA (配列番号： 2 1) ，プローブとして 5，（FAM) - ATTACCAGCTGAGAGGAATCCCAAAAGG - (TAMRA) (配列番号： 22 ) を添加した PCR反応液を調製した。 P r i sm 7700 S e q u e n c e D e t e c t o r (アプライドパーキンエルマ一社製）を用いて上言己 PCR反応溶液を 5 0°C · 2分および 95°C · 10分間各 1回反応後、 95°C · 1 5秒、 57 °C■ 8 0秒 40回反復し、反応させた。その結果、全脳、視床下部、主要臓器において R F R P遺伝子の高発現を確認した。その発現程度は N 0 n T gラットに比べて顕著に高発現であった。

抗ラット RFRP— 1抗体を用いてラット脳、視床下部組織抽出物に含まれている RFRP— 1のぺプチド発現を下記のとおり E I A法によって評価した。ラット各組織 1 gを 1 Om lの沸騰した超純水に入れて 15分^煮沸した後、氷冷した。次にそれに酢酸 0. 7m 1を添加し、ポリトロンによって 1 2000 r p m、 3分間ホモジナイズした。 1 5000 r pm ' 5分間の遠心操作を行って、その上清を得た。分取した上清に T F Aを最終濃度 0. 05 ^Q/₀となるように添加し、メタノール、 0. 1 % T F A溶液で平衡化した S e p— P a k P l u s C I 8カラムに入れた。カラムは 50%CH₃CN— 0. 1%TFA溶践を注いで溶出し、溶出面分はサーバントを用いて乾固させた。以上の画分を 2. 56m g組織 Ζ β 1となるように DMSOにて溶解した。 DM S O溶液 5 μ 1を 1 / 1

0 B l o c k a c eで 20倍希釈した。ラットの RFRP— 1は a n t i— r a t RFRP— I N a n d a n t i - r a t 1 ?1 ?ーじ抗{本を用ぃてサンドィツチ E I Aを行った。まず、 1 F 3 モノクローナル抗体を 96穴マイクロプレートの 0. 1M c a r b o n a t e b u f f e r ( 10 O 1 ) pH9. 5中に 10 g/m 1を入れた。このプレートは P B S—Tで浄した。各サンプルは B u f f e r Α (100 1 ) に溶解させ、各ゥエルに乗せた。続いて 4°C . 24時間インキュベーション後、マイクロプレートを PB S—丁で？先浄し、 HRP— c o n j u g at e d a n t i— r a t RFRP— I N F a bを各ゥエルに添カ卩した。再ぴ 4°C . 16時間インキュベーション後、マイクロプレートを PB S— Tで洗浄し、 TMB mi c r owe l l p e r o x

1 d a s e s y s t e mを用いて HR P活性を測定した。その結果、 RFRP 一 1の発現が確認された。実施例 3 体重変化

T gラットホモ接合体の体重変化を調べた。 T gラットホモ接合体の {ぉ重は N o n T gラットに比べて有意に少なく、推移した。 T gラットホモ接合体 6週齢および 9週齢の摂食量は N o n T gラットに比べて有意に少なかつこ。 T g ラットホモ接合体 6週齢おょぴ 9週齢の摂水量は N o n Tgラットに];匕べて軽度の減少がみられた。 Tgラットホモ接合体の尿量も同時に調べた。そ O結果、 T gラットの尿量は N o n T gラットの尿量よりも有意に低値であつこ。実施例 4 侵害刺激に対する反応

T gラットホモ接合体を用いて侵害刺激に対する反応の評価を下記のとおり行つた。ラット、マウス等で侵害刺激に対する反応を評価方法（Wi l s o n S G, Mo g i l J S. B e h a v B r a i n R e s 1 25 : 65— 7 3, 2001) のなかで機械侵害刺激に対する反応を調べるためにランダルセリット試験（後肢加圧法とも呼ぶ）、熱侵害刺激に対する反応を調べるためホットプレート試験を行った。

ランダルセリット試験は下記のとおり行つた。ランダルセリット式鎮痛効果測定装置（Ug o B a s i l e社製 7200型）を用いて測定を行った。ラットを保定後、小さい台座上にラットの後肢を乗せ、肢表面に円錐形の圧子で重みがかかるようセットし、ペダルスィッチを踏んで力を増加させてゆき、ラットが肢を離そうとした時のディスプレイ上に示された数値を加圧重量として評価した ₀ その結果、 No n T gラットに比べて T gラットにおいては少ない加重に対して反応した。 Tgラットでは圧刺激に対する感受性が増加していることがわかつた。

ホットプレート試験は市販のホットプレート式鎮痛効果測定装置を用いて行つた。最初、 55°Cに熱したホットプレート上に直径 1 5 cm高さ 20 cmのガラス製円筒を置き、ラットをその円筒内にいれ、ラットが後肢を舐めるあるいは跳躍などの行動が現れるまでの時間を測定した。その結果、 No n T gラットに比べて T gラットホモ接合体においては後肢を舐めるあるいは跳躍時間が有意に短縮した。 T gラットでは熱刺激に対しても感受性亢進が明らかになった。 T g ラッ 1、ホモ接合体を用いて 52 °C湯の入った水槽に尾先端から 3 cmのところまで浸漬して尾が水槽から出るまでの時間を熱侵害刺激に対する応答性として評価した（t a i 1 i mm e r s i o n t e s t) 。実験の最大時間は 20秒とした。その結果、 T gラットの反応時間は N o n T gラットに比べて有意に短かった。 T gラットでは熱刺激に対する感受性が増加していることがわかった。実施例 5 血漿ホルモンの定量 ' ホモ接合体の採血を行い、血漿中のコルチコステロン値、黄体形成ホルモン (LH) 値、卵胞刺激ホルモン (FSH) 値をそれぞれラットマウス用コルチコステロン〔^{1 2 5} I〕 R I Aキット（I CN B i o c h em i c a l s I n c . 製）、ラット黄体形成ホルモン（LH) C^{1 2 5} I ] A s s a y S y s t e m ^Am e r s h a m B i o s c i e n c e s社製) 、ラット卵胞刺激ホルモン（F SH) 測定 ^{2 5} I〕 As s a y Sy s t em (Ame r s h a m B i o s c i e n c e s社製）によって測定した。その結果、血漿コルチコステロン値、 LH値および F SH値はそれぞれ No n Tgラットに比べて有意に低値を示した。実施例 6 飲水量、尿量、

T gラットホモ接合体を 9週齢時および 18週齢時にそれぞれ尿採取用代謝ケージ（オークス社製）に入れて 24時間の飲水量および 24時間尿量を測定した _σ Tgラットホモ接合体の飲水量および尿量はいずれの週齢においても N o n T gラットに比べて有意に少なかった。実施例 Ί 血圧

T gラットホモ接合体を 12週齢時および 2' 8週齢時にマウス、ラット用非観血式自動血圧計（ソフトロン社製、 BP— 98E) を用いて血圧測定を行った。その結果、 12週齢時および 28週齢時の T gラットホモ接合体の収縮期血圧は No n T gラットに比べて軽度の上昇がみられた。実施例 8 行動解析

(1) 6週齢雄 T gラットおよび N 0 n T gラットを用いてオープンフィールドテストを行った。実験に使用する動物を解析室の環境に馴化させた。次にォープンブイールド装-置 (90 c m径、床面.を 1 9区画分割したもの) にラットを 1 匹ずつ真中の区画に頭を同じ方向にして静かに置いた。 1個体あたり 3分間の行動を観察し、行動潜時、移動（枠線を横断する回数）、探索行動（立ちあがり）などを記録した。その結果、 T gラットのオープンフィールド内における移動は N o n Tgラットよりも低い傾向を示した。 T gラットの探索（立ち上がり）行動は No n Tgラットよりも有意に低値を示した。

(2) 同じ動物を 7週齢において、 48時間水分制限を行った後、オープンフィ一ルドテストを行った。その結果、 Tgラットのオープンフィールド内における移動は N o n Tgラットよりも有意に低値を示した。 T gラットの探索（立ち上がり）行動は N o n Tgラットよりも有意に低値を示した。

48時間水分制限後の血漿コルチコステロン値はコルチコステロン ^{2 5} I〕 R I Aキット（I CN B i o c h em i c a l s I n c. 製）、血漿アルギニンバソプレツシン（AVP) 値の測定は AVP R I Aミツビシ（三菱化学株式会社製）をそれぞれ用いて行った。その結果、 Tgラットの血漿コルチコステロン値および血漿 A VP値は No n Tgラットよりも有意に高値を示した。

(3) 7週齢雄 Tgラットおよび No n T gラットを用いて反復拘束ストレス実験を行った。実験開始後、毎朝体重測定後、午前中 1時間、ラット 1匹ごとに拘束器に入れて拘束ストレス負荷を行った。実験開始時、 T gラットおよび N o n T gラットの体重差はみられなかったが、拘束ストレス開始後 1日目から T gラットおよび No n Tgラットの体重はともに減少し、拘束ストレス負荷開始 7日目においては T gラットの体重は N o n Tgラットよりも有意に減少した。以後の体重差は大きくなつた。産業上の利用可能性

本発明の遺伝子導入動物は、拒食症などの疾患の予防薬 ·治療薬の評価、 RF R P遺伝子異常患者の遺伝子治療用実験などに用いることができ、本発明の遺伝子導入動物から採取した細胞などを培養し、 R F R Pァゴニストまたはァンタゴ二ストの評価に用いることができる。本出願は、日本で出願された特願 2004— 1 10457 (出願日： 2004 年 4月 2日）を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。

Claims

請求の範囲

1. 外来性 RFRP遺伝子またはその変異遺伝子を組み込んだ DN Aを有する非ヒト哺乳動物またはその生体の一部。

2. 非ヒト哺乳動物がラットである請求項 1記載の動物またはその生体の一部。

3. 外来性 RFRP遺伝子が配列番号： 1で表されるァミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列を有する RFRPをコードする遺伝子である請求項 1または 2記載の動物またはその生体の一部。

4. 外来性 R FRP遺伝子が配列番号： 9で表されるァミノ酸配列からなるラット RFRPをコードする遺伝子である請求項 1または 2記載の動物またはその生体の一部。

5. 少なくとも次の 1つの表現型を有する請求項 1〜4のいずれかに記載の動物またはその生体の一部；

(2) 非トランスジェニック動物に比ベて、飲水量が減少している、

(4) トランスジェニック動物に比ベて、侵害刺激に対して敏感になっている、

(5) トランスジェニック動物に比ベて、血獎中のコノレチコステロン値が低い、

(6) 非トランスジ工ニック動物に比ベて、血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値が低い、

(7) 非トランスジヱニック動物に比べて、血漿中の卵胞刺激ホルモン（F S Η) 値が低い、

(8) 非トランスジエニック動物に比べて、血圧が高い。

6. 次の（1) および/または（2) の表現型を有する請求項 1〜5のいずれかに記載の動物またはその生体の一部；

(1) 非トランスジエニック動物に比べて、自発行動量が低下している、

(2) 非トランスジエニック動物に比べて、ストレス感受性が増大している、

7. 請求項 1記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、 RFRP ァゴニスト活性または RFRPアンタゴニス 1、活性を検定することを特徴とする RFRPァゴニストまたは RFRPアンタゴニストのスクリーニング方法。

8. 請求項 5記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、 '（1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善効果を検定することを特徴とする、（1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、 (5) 血漿中のコノレチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン

(LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下または

(8) 血圧上昇の改善薬のスクリーニング方法。

9. 請求項 6記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、（1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善効果を検定することを特徴とする、（1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善薬のスクリーニング方法。

10. 請求項 5記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、（1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善効果を検定することを特徴とする、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍または視床下部性無月経の予防 ·治療薬のスクリ一-ング方法。

1 1. 請求項 6記載の動物またはその生体の一部に試験化合物を適用し、（1) 自発行動量の減少または（ 2 ) ストレス感受性の増大の改善効果を検定することを特徴とする、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬のスクリ一二ング方法。

1 2. RFRPァゴニストまたはアンタゴニストをスクリーユングするための請求項 1記載の動物またはその生体の一部の使用。

13. (1) 摂食量の減少、（2) 飲水量の減少、（3) 尿量の減少、（4) 侵害刺激に対する過敏性、（5) 血漿中のコルチコステロン値の低下、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値の低下、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（F SH) 値の低下または（8) 血圧上昇の改善薬をスクリーニングするための請求項 5記載の動物またはその生体の一部の使用。

14. (1) 自発行動量の減少または（2) ストレス感受性の増大の改善薬をスクリーニングするための請求項 6記載の動物またはその生体の一部の使用。

1 5. 拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機肯低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍または視床下部性無月経の予防 ·治療薬をスクリーユングするための請求項 5記載の動物またはその生体の一部の使用。

1 6. 精神おょぴ行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬をスクリ一二ングするための請求項 6記載の動物またはその生体の一部の使用。

1 7. 外来性 RFRP遺伝子またはその変異遺伝子を導入した受精卵。

1 8. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたそのァミドまたそのエステルあるいはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シェ一ダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

1 9 . ポリぺプチドが配列番号： 1、配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、酉 3列番号： 9または配列番号： 1 1で表されるァミノ酸配列からなるポリべプチドである請求項 1 8記載の剤。

2 0 . 部分ぺプチドが、

( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 5 6番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Val) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3 番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) または第 8 4番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、 (ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるァミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(ii i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目

(Phe) 、第 1 1 5番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6 番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目 (Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Lys) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met ) 〜第 9 2番目（Phe ) または第 8 4番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のアミノ酸己列からなるペプチド、 ( v ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Leu) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 1 5番目 (Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6番目（Asn) 〜第 1 3 1 番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目（Phe) のアミノ酸配列からなるぺプチド、

(vii) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 2番目（Asp) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7

5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe)、、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目（Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(vi i i) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8 番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目 (Phe) 、第 1 2 0番目（Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目 (Leu) 〜第 1 2 5番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(ix) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4 番目（Phe) 、第 7 2番目（Val) 〜第 9 4番目（P'he) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目 (Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、 '

( x ) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 2 0番目

(Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目（Leu) 〜第 1 2 5番目 (Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

(xi) 上記 ( i ) 〜 ( x ) のペプチドのアミノ酸配列中め 1〜 5個のアミノ酸が欠失したァミノ酸配列からなるぺプチド '(該欠失したァミノ酸配列は少なくとも 5個のアミノ酸からなる）、

(xii) 上記（i ) 〜 ( x ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が付加したァミノ酸配列からなるぺプチド、

(xii i) 上記（i ) 〜（X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が揷入されたァミノ酸配列からなるぺプチド、

(xiv) 上記（i ) 〜 ( x ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が他のァミノ酸で置換されたァミノ酸配列からなるぺプチド、または

( v) 上記（xi) 〜（xiv) の欠失 ·付加 ·揷入，置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるぺプチドである請求項 1 8記載の剤。

2 1 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドをコ一ドする D NAを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生 S重瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾ一ル抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

2 2 . D N Aが配列番号： 1、'配列番号： 3、配列番号： 5、配列番号： 7、配列番号： 9または配列番号： 1 1で表されるァミノ酸配列からなるポリぺプチドをコードする D NAである請求項 2 1記載の剤。

2 3 . D NAが、

( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるァミノ酸配列の第 5 6番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 0番目（Val) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 7 3 番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe) または第 8 4番目（Ser) 〜第 9 2番目（Phe) ' のァミノ酸配列からなるぺプチド、 (i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目（Ser) 〜第 1 1 2番目（Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(i i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 ◦ 1 番目（Ser) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 0 4番目（Ala) 〜第 1 3 1番目 (Phe) 、第 1 1 5番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 4番目（Val) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 5番目（Pro) 〜第 1 3 1番目（Phe) 、第 1 2 6 番目（Asn) 〜第 1 3 1番目（Phe) または第 1 2 7番目（Leu) 〜第 1 3 1番目 (Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

2番目（Phe) 、第 8 1番目（Met) 〜第 9 2番目（Phe ) または第 8 4番目 (Ser) 〜第 9 2番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(vi i) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 2番目（Asp) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目（Pro) 〜第 9 4番目（Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、 (vi i i) 配列番号： 7または配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8 番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、 '第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目 (Phe) 、第 1 2 0番目（Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目 (Leu) 〜第 1 2 5番目（Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

(ix) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目（Ser) 〜第 94 番目（Phe) 、第 7 2番目（Val) 〜第 94番目（Phe) 、第 7 5番目（Met) 〜第 9 4番目（Phe) 、第 8 3番目（Val) 〜第 9 4番目（Phe) または第 8 4番目 (Pro) 〜第 94番目（Phe) のァミノ酸配列からなるぺプチド、

( X ) 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目（Phe) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 1 9番目（Pro) 〜第 1 2 5番目（Phe) 、第 1 2 0番目 (Ser) 〜第 1 2 5番目（Phe) または第 1 2 1番目（Leu) 〜第 1 2 5番目 (Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、

(xi) 上記（i ) 〜（X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸が欠失したァミノ酸配列からなるぺプチド（該欠失したアミノ酸配列は少なくとも 5個のアミノ酸からなる）、

(xiii) 上記（i ) ~ (X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が ' 挿入されたァミノ酸配列からなるぺプチド、

(XV) 上記（xi) 〜（xiv) の欠失 ·付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチド、

をコードする DN Aである請求項 2 1記載の剤。

24. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一'もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドをコ一ドする DNAを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、髙カルシウム血症、低カリウム血症、シエーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患、の診断剤。

2 5 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩に対する抗体を含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏度、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、街床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

2 6 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩に対する抗体を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鲍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、タツシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ーナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低ルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下塞体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の診断剤。

2 7 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコードする D N Aに目補的な塩基 3 またはその一部を含有するァンチセンス D N Aを含有してなる巨食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精申おょぴ行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

2 8 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を増加させる f匕合物またはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリゥム血症、シーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、ァノレドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性」腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞

^r 巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防-

'冶療剤。

2 9 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を減少させるィヒ合物またはその塩を含有してなる拒食症、神経' [^食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頃蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。 '

30. 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7 TO 2 2、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシクム血症、低カリウム血症、シヱーダレン症候群、クッシング病、クッシング症侯群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、.アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

3 1. OT 7T022が配列番号： 1 3または配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質である請求項 30記載の剤。

32. 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7 TO 2 2またはその部分ペプチドをコードする DNAを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、髙カルシウム血症、低カリゥム血症、シェ一ダレン症候群、クッシング病、クゾシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 CRH産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 - 治療剤。 '

3 3 . D NAが配列番号： 1 3または配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ペプチドをコードする D N Aである請求項 3 2記載の剤。

3 4 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T◦ 2 2またはその部分ぺプチドをコードする D N Aを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリゥム血症、シユーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過每痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月魅、精神および行動障害または神経系の疾患の診断剤。

3 5 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、臂不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

3 6 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍昧、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低力リウム血症、シーグレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産^:下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、 ^発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢 t生早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ダーナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性畐 IJ腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、'腎不全、心全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神おょぴ行動障害または神経系の疾患の診断剤。

3 7 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含^"するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分べプチドをコードする D M Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D NAを含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、 "垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

3 8 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対するァゴニストを含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シヱーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール ffi抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療剤。

3 9 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴ-ストを含有してなる拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低ァノレドステロン症、低コチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、臂不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頃 S重、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または枏経系の疾患の予防■治療剤。、

4 0 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 Ο Τ 7 T O 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシゥム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クゾシンク" 症候群、副腎皮質刺激ホ/レモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、 ί£血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療斉 IJ。

4 1 . 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる拒食症、神経†fe食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 '治療剤。

4 2 . 哺乳動物に対して、

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸己列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしく ίまその部分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、

(ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸面己列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコードする D N A、 (iii) 配列番号： 1で表されるアミノ驗配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドまた【まその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、

(iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 Τ 0 2 2、その部分べプチドまたはその塩、

( V ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇Τ 7 Τ 0 2 2またはその部分ぺプチドをコードする D NA、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対するァゴニスト、または

(vii) 配列番号： 1 3で表されるアミ /酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 Τ 0 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低'カリウム血症、シエーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H 産生腫瘍、アルドステロン産生 3重瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療方法。

4 3 . 哺乳動物に対して、

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチ " もしくはその部分ペプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩に対する抗体、

(ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドをコードする D N Aに. 相補的な塩基配列またはその一 15を含有するアンチセンス D NA、

(iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、

( V ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D NA、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または

(vii) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分べプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、垂体 S重瘍、視床下部性無月経、気分 [感情] 障害、ストレス関連障害または錘体外路系疾患の予防 ·治療方法。

4 4 . 過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シェ一ダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、ァノレドステロン症、原発性コルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多囊胞卵巣症候群、ターナー症候群、精神おょぴ行動障害または神経系の疾患の予防 -治療剤を製造するための

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、

(ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコードする D N A、 (iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその 13分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、

(iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 ΤΓ 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩、

( V ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 ;2またはその部分ペプチドをコードする D NA、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対するァゴェスト、または

(vii) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用。

4 5 . 拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、'低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発 '卜 4もしくは慢性副腎皮質機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、肥満、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療斉 ijを製造するための

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリべプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのァミドまたはそのエステルあるレ、はその塩に対する抗体、

(ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分ぺプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するァンチセンス D N A、

(iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一しくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、

(iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、

( V ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7 TO 22またはその部分べプチドをコードする DNAに相補的な塩基配列またはその一部を"^有するアンチセンス DNA、

(vi) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7 TO 22、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または

(νϋ) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7T 022またはその部分ぺプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用。

46. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分べプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、および（または）配列潘号： 13で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7T022、その部分ペプチドまたはその塩を月いることを特徴とする（1) 摂食量、（2) 飲水量、（3) 尿量、（4) 侵害琍激に対する過敏性、

(5) 血漿中のコルチコステロン値、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LH) 値、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値または（8) 血圧の調節薬のスクリーユング方法。

47. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくま実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはその部分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、および（または）配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7Τ022、その部分べプチドまたはその塩を用いることを特徴とする（1) 自発行動量または（2) ストレス感受性の調節薬のスクリーニング方法。

48. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくほその部分ぺプチドまたはそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、.および（または）配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有 f "るレセプター蛋白質 OT 7 TO 22、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする過食症、肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、 ί 経痛、神経炎、尿崩症、多飲症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シーダレン症候群、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体:腫瘍、 CRH 産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性ュルチゾール抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、拒食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、. 痛み、低アルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮霞機能低下症、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、垂体機能低下症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および行動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬のスクリ一二ング方法。

49. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 0t!に同一のアミノ酸配列を含有するポリべプチドもしくはその部分ぺプチドまた f そのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、および（または）配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプタ一蛋白質 OT7T022、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる（1) 摂食量、（2) 飲水量、 (3) 尿量、（4) 侵害刺激に対する過敏 fe、 (5) 血漿中のコルチコステロン値、（6) 血漿中の黄体形成ホルモン（LEO 値、（7) 血漿中の卵胞刺激ホルモン（FSH) 値または（8) 血圧の調節案のスクリ一二ング用キット。

50. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはその部分ぺプチドまた itそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、およ ' （または）配列番号： 1 3で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有るレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる（1 ) 自発行動量または（2 ) ストレス感受性の調節薬のスクリーユング后キット。

5 1 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質勺に同一のアミノ酸配列を含有するポリぺプチドもしくはその部分ぺプチドまたほそのアミドまたはそのエステルあるいはその塩、および（または）配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 1~るレセプター蛋白質 Ο Τ 7 T O 2 2、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる過食症、. 肥満、糖尿病、頻尿、痛覚障害、無痛症、痛覚鈍麻、神経痛、神炎、尿崩症、多欽症、高カルシウム血症、低カリウム血症、シエーダレン症候洋、クッシング病、クッシング症候群、副腎皮質刺激ホルモン産生下垂体腫瘍、 C R H産生腫瘍、アルドステロン産生腫瘍、アルドステロン症、原発性コルチゾーノレ抵抗症、先天性副腎酵素欠乏症、神経性食欲不振症、不眠、胃 ·十二指腸潰瘍、過敏性腸症候群、低血圧中枢性早熟症、多嚢胞卵巣症候群、ターナー症候群、挺食症、神経性食思不振症、脱水症状、排尿障害、過敏症、感覚過敏、痛み、低：ルドステロン症、低コルチゾール血症、続発性もしくは慢性副腎皮質機能低下疟、アジソン病、副腎機能不全、不妊症、高血圧、腎不全、心不全、下垂体機能低症、頭蓋咽頭腫、黄体機能不全、下垂体腫瘍、視床下部性無月経、精神および: ί亍動障害または神経系の疾患の予防 ·治療薬のスクリーニング用キット。